バシルス・アミロリクエファシエンスの新菌株及びそれを用いた植物病害防除剤
【課題】各種作物の細菌性病害と糸状菌性病害の双方の防除に有効な新規な微生物農薬を提供する。
【解決手段】自然界から分離したバシルス・アミロリクエファシエンスの新菌株である３Ｋ−４株は、農園芸作物の細菌性及び糸状菌性のいずれの植物病害防除にも有効で、かつ各種の施用方法が可能であるため、優れた植物病害防除剤として利用できる。該３Ｋ−４株は、死菌体ではなく生菌体が植物病害防除に有効であり、また、生菌体の生産物ではなく生菌体自体が有効である点でも特徴的である。
【解決手段】自然界から分離したバシルス・アミロリクエファシエンスの新菌株である３Ｋ−４株は、農園芸作物の細菌性及び糸状菌性のいずれの植物病害防除にも有効で、かつ各種の施用方法が可能であるため、優れた植物病害防除剤として利用できる。該３Ｋ−４株は、死菌体ではなく生菌体が植物病害防除に有効であり、また、生菌体の生産物ではなく生菌体自体が有効である点でも特徴的である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は１種の微生物でイネ及び園芸作物の細菌性病害と糸状菌性病害の防除を可能にするバシルス・アミロリクエファシエンスの新菌株、及びそれを利用した病害防除剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
これまでの農業における病害防除は化学農薬を主体とした防除が主流であり、安定的な作物生産を可能としてきた。しかし、一方で化学農薬の長期、連続散布による環境への影響や耐性菌の出現、また既存の化学農薬では十分に防除できない細菌性病害等の難防除病害の問題が懸念されている。このような問題に対して、近年、化学農薬以外での防除方法として、自然界から採取された微生物を利用した生物的防除が注目されている。既にいくつかの微生物農薬が開発・製品化されているが、化学農薬と比べて効果の安定性が劣ったり、防除スペクトラムの幅が狭いという問題がある。また製品の数も十分ではない。そこで、新たなスペクトラムを有し、防除活性の高い新規な微生物農薬が切望されている。
【０００３】
微生物を用いた植物病害防除法としては、フザリウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）属菌、トリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）属菌等の糸状菌を用いたもの、バシルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属細菌、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属細菌、エルビニア（Ｅｒｗｉｎｉａ）属細菌、バークホルデリア（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ）属細菌などの細菌を用いたものが知られており、これらのいくつかは微生物農薬として登録され、使用されている。
【０００４】
このうち、バシルス・アミロリクエファシエンスに属する細菌を用いた植物病害防除剤としては、例えば特許文献１がある。しかし、その有効成分は細菌の生産物であって、細菌自体ではないし、更にまた、その防除対象は糸状菌による病害であり、細菌による病害の防除は記載されていない。更に、糸状菌性病害と細菌性病害を同時に防除できるバシルス・アミロリクエファシエンス菌株はこれまで知られていない。
【特許文献１】特開平１１−２４６３２４号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は上記のような現状に鑑み、１種の微生物でイネ及び園芸作物の糸状菌性病害及び細菌性病害を防除できる新規な菌株を得ることを課題とする。本発明の更なる課題は、上記菌株を有効菌として含有し、微生物農薬として使用できる植物病害防除剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、自然界から多数の菌株を分離し、それらの菌株の病害防除効果を検定した結果、バシルス・アミロリクエファシエンスに属する１菌株が、植物体の成長に悪影響を及ぼすことなく、農園芸作物の糸状菌性病害及び細菌性病害に対して防除効果を有していることを見出し、本発明を完成した。
【０００７】
すなわち本発明は、こうして得られた農園芸作物の糸状菌性病害及び細菌性病害の防除活性能力を有するバシルス・アミロリクエファシエンスの新菌株、その菌株を有効菌として含有する植物病害防除剤、及びそれを用いる病害防除方法に関するものである。
【０００８】
本発明の実施態様を例示すると、次のとおりである。
【０００９】
（１）バシルス・アミロリクエファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）３Ｋ−４菌株。
（２）農園芸作物の細菌性病害と糸状菌性病害の双方の防除に有効で、且つ主要作物に病原性を示さないこと、を特徴とする上記（１）に記載の菌株。
【００１０】
（３）上記（１）又は（２）に記載の菌株を含有し、農園芸作物の細菌性病害と糸状菌性病害の防除に有効で、かつ主要作物に病原性を示さないこと、を特徴とする植物病害防除剤。
（４）該菌株が生菌体菌株であること、を特徴とする上記（３）に記載の植物病害防除剤。
【００１１】
（５）上記（３）又は（４）に記載の植物病害防除剤を植物の茎葉に処理すること、を特徴とする植物病害防除方法。
（６）上記（３）又は（４）に記載の植物病害防除剤を、植物の種子あるいは植物体に浸漬、噴霧、塗布、注入又は粉衣処理の少なくともひとつの処理をすること、を特徴とする植物病害防除方法。
（７）上記（３）又は（４）に記載の植物病害防除剤を、植物を栽培する土壌に灌注、噴霧又は混和処理の少なくともひとつの処理をすること、を特徴とする植物病害防除方法。
【発明の効果】
【００１２】
本発明のバシルス・アミロリクエファシエンス３Ｋ−４株は、農園芸作物の糸状菌性病害及び細菌性病害のいずれに対しても高い防除効果を有し、農園芸作物の数多くの植物病害を防除することができる。したがって本発明のバシルス・アミロリクエファシエンス３Ｋ−４株を含有する植物病害防除剤は、環境に対して安全性が高く、幅広い植物病害の防除に利用できる点で、極めて優れている。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
本発明者らは、非常に広い抗菌スペクトラムを有し、安全性が高いすぐれた微生物農薬、特に殺菌剤を新たに開発する目的で、各種植物、土壌等から各種微生物をスクリーニングした。その結果、キャベツ種子から分離した菌株が作物病害菌を防除する作用にすぐれていること、特にその抗菌スペクトルが広く、糸状菌及び細菌の双方に有効であるという新規にして有用な知見を得た。
【００１４】
このようにして新たに分離した菌株（３Ｋ−４菌株）は、後記する菌学的性質から明らかなように、芽胞を形成する好気性細菌であり、カタラーゼ陽性であり、更に１６ＳｒＤＮＡの５’末端側５００ｂｐの塩基配列に基づく同定の結果、バシルス・アミロリクエファシエンスに属するものと認められたが、抗菌スペクトルが広く、農園芸作物の糸状菌性病害及び細菌性病害のいずれに対しても高い防除効果を示すという卓越した顕著な特徴を示すことから、この菌株（３Ｋ−４）を新規菌株と同定し、バシルス・アミロリクエファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）３Ｋ−４と命名した。
【００１５】
本発明に係る新規菌株３Ｋ−４株は、受託機関、独立行政法人 産業技術総合研究所 特許生物寄託センター（〒３０５−８５６６ 日本国 茨城県つくば市東１丁目１番地１ 中央第６）にＢａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ ３Ｋ−４として寄託されている（受託日：２００８年３月３日）。その受託番号は、ＦＥＲＭ Ｐ−２１５１９である。
【００１６】
バチルス・アミロリクエファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）３Ｋ−４（ＦＥＲＭ Ｐ−２１５１９）の菌学的性質は、次のとおりである。
【００１７】
３Ｋ−４株の細菌学的性質
（１）形態学的性質
形態：桿菌
大きさ：幅０．７〜０．９μｍ 長さ３〜５μｍ
運動性：＋
【００１８】
（２）培養的性質
肉汁寒天平板培養：白色〜クリーム色のコロニーを形成し、表面はしわ状
【００１９】
（３）生理学的性質
グラム染色性：＋
カタラーゼ反応：＋
生育温度
２７℃：＋
４５℃：＋
５０℃：＋
５５℃：−
生育ＮａＣｌ濃度
５％：＋
７％：＋
１０％：＋
【００２０】
Ａｒａｂｉｎｏｓｅからの酸生成：＋
Ｇｌｕｃｏｓｅからの酸生成：＋
Ｌａｃｔｏｓｅからの酸生成：＋
Ｍａｎｎｉｔｏｌからの酸生成：＋
Ｍｅｌｉｂｉｏｓｅからの酸生成：＋
Ｓｕｃｒｏｓｅからの酸生成：＋
Ｄ−ｔｕｒａｎｏｓｅからの酸生成：＋
Ｘｙｌｏｓｅからの酸生成：＋
ＤＮＡの加水分解：−
【００２１】
＜参考文献＞
Ｒｕｉｚ−Ｇａｒｃｉａ Ｃ．， Ｂｅｊａｒ Ｖ．， Ｍａｒｔｉｎｅｚ−Ｃｈｅｃａ Ｆ．， Ｌｌａｍａｓ Ｉ． ａｎｄ Ｑｕｅｓａｄａ Ｅ．， ２００５， Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｖｅｌｅｚｅｎｓｉｓ ｓｐ． ｎｏｖ．， ａ ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｒｉｖｅｒ Ｖｅｌｅｚ ｉｎ Ｍａｌａｇａ， ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｓｐａｉｎ．， Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ａｎｄ Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ， ５５， １９１〜１９５
Ｓｎｅａｔｈ， Ｐ． Ｈ． Ａ．， Ｍａｉｒ， Ｎ． Ｓ．， Ｓｈａｒｐｅ Ｍ． Ｅ．， Ｈｏｌｔ Ｊ．Ｇ． １９８６ Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ， ｖｏｌｕｍｅ２， Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ
Ｗｅｌｋｅｒ， Ｎ． Ｅ． ａｎｄ Ｌ． Ｌ． Ｃａｍｐｂｅｌｌ， １９６７， Ｕｎｒｅｌａｔｅｄｎｅｓｓ ｏｆ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ ａｎｄ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ．， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ， ｖｏｌ ９４， １１２４〜１１３０
【００２２】
本発明に係る３Ｋ−４株の５’末端側１６ＳｒＤＮＡの塩基配列を配列表の配列番号１及び図１に示す。
【００２３】
本発明のバシルス・アミロリクエファシエンス３Ｋ−４株は、ふすまなどの資材培養、固形培地上での静置培養、液体培養等の公知の手段で増殖させることができ、細菌が生存していれば、特に培地の種類、培養条件等に制限されることはなく利用できる。
【００２４】
本発明のバシルス・アミロリクエファシエンス３Ｋ−４株は、細菌が生存していれば、栄養細胞の状態でも、芽胞の状態でも病害防除剤として利用できる。また、培養したまま培地成分が混在していても、蒸留水などで洗浄して細菌細胞以外の不純物を除去した状態でも利用できる。しかし、細菌が死滅した状態では、病害防除効果は得られない。生きた細菌自体が病害防除効果を奏するものである。本発明は、当該細菌の生産物を病害防除に利用するものではない。このように、本発明は、死菌体でもなく生産物でもなく、生きている菌体（生菌体）それ自体を有効成分としている点できわめて特徴的である。
【００２５】
本発明のバシルス・アミロリクエファシエンス３Ｋ−４株は不完全菌類（Ｄｅｕｔｅｒｏｍｙｃｅｔｅｓ）に属する菌類に起因する植物の病害を防除することができる。バシルス・アミロリクエファシエンス３Ｋ−４株が防除することができる病気の原因菌として、具体的には、アルタナリア（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ）属菌、例えばキャベツ黒すす病菌（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｂｌａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）、ニンジン黒斑病菌（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｒａｄｉｃｉｎａ）、ダイコン黒斑病菌（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｂｌａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）、ヒマワリ黒斑病菌（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｚｉｎｎｉａｅ）、フザリウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）属菌、例えばキュウリつる割病菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）をあげることができるが、本発明はこれらの例により限定されるものではない。
【００２６】
本発明のバシルス・アミロリクエファシエンス３Ｋ−４株は、上記糸状菌のほか、細菌類に起因する植物の病害を防除することができる。バシルス・アミロリクエファシエンス３Ｋ−４株が防除することができる病気の原因菌として、具体的には、バークホルデリア（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ）属細菌、例えばイネ苗立枯細菌（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｐｌａｎｔａｒｉｉ）、イネもみ枯細菌（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｇｌｕｍａｅ）、キサントモナス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ）属細菌、例えばカンキツかいよう病菌（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ ｐｖ ｃｉｔｒｉ）、キャベツ黒腐病菌（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ ｐｖ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ）をあげることができるが、本発明はこれらの例により限定されるものではない。
【００２７】
本発明による植物病害防除剤においてバシルス・アミロリクエファシエンス３Ｋ−４株は、芽胞の水懸濁液を単独で用いるほか、不活性な液体または固体の担体で希釈し、必要に応じて界面活性剤、分散剤、その他の補助剤を加えた製剤として用いてもよい。具体的な製剤例としては、粒剤、粉剤、水和剤、懸濁製剤、乳剤等の剤型があげられる。好ましい担体の例としては、タルク、ベントナイト、クレー、カオリン、珪藻土、ホワイトカーボン、バーミキュライト、消石灰、珪砂、硫安、尿素、多孔質な固体担体、水、イソプロピルアルコール、キシレン、シクロヘキサノン、メチルナフタレン、アルキレングリコールなどの液体担体等があげられる。界面活性剤および分散剤としては、例えばジナフチルメタンスルホン酸塩、アルコール硫酸エステル塩、アルキルアリールスルホン酸塩、リグニンスルホン酸塩、ポリオキシエチレングリコールエーテル、ポリオキシエチレンアルキルアリールエーテル、ポリオキシエチレンソルビタンモノアルキレート等があげられる。補助剤としては、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、アラビアゴム、キサンタンガム等、保護剤としてはスキムミルク、スクロース、グルタミン酸、ｐＨ緩衝剤等があげられる。
【００２８】
さらに、本発明の植物病害防除剤は、有効成分として必要に応じて他の殺虫剤、殺菌剤、除草剤、植物成長調整剤、肥料などの成分を含むことができる。また、本発明の植物病害防除剤は、他の微生物農薬、弱毒ウィルス、フェロモン、天敵昆虫等と併用することもできる。また、遺伝子組み換え作物にも使用できる。
【００２９】
本発明の植物病害防除剤は、そのまま直接施用するか、あるいは水などで希釈して施用することができる。植物病害防除剤の施用方法は、特に限定されず、例えば、直接植物に散布する方法、種子や塊茎などに浸漬、噴霧、塗布、注入、粉衣する方法、植物を栽培する土壌に灌注、噴霧、混和する方法、植物や土壌に処理する水や肥料に添加する方法などがあげられる。その他、製剤の施用量は、対象病害、対象作物、施用方法、発生傾向、被害の程度、環境条件、使用する剤型などによって変動するので、適宜調整することが好ましい。
【実施例】
【００３０】
以下、本発明を実施例により具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例により限定されるものではない。
【００３１】
（細菌の分離）
キャベツ黒すす病菌（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）に汚染されたキャベツ種子（品種：早秋、タキイ種苗株式会社製）を細菌用培地（キングＢ培地）と糸状菌用培地（モルツアガー培地）に並べてアルタナリア属菌の発育適温に保った。その結果、ほとんどのキャベツ種子からアルタナリア属菌が両培地に発生したが、中にはアルタナリア属菌が発生せず、細菌または糸状菌が発生した種子が特にキングＢ培地において低率ながら見られた。そこでこれらの発生した菌からアルタナリア属菌に拮抗性のある菌をスクリーニングし、バシルス・アミロリクエファシエンス３Ｋ−４株を分離した。
【００３２】
（実施例１：培養方法）
バシルス・アミロリクエファシエンス３Ｋ−４株をＮＢ培地で振とう培養し（２７℃、７日間、１２５ｒｐｍ）、遠心集菌して蒸留水で洗浄し、再度遠心集菌したものを滅菌水に懸濁した。懸濁液は、４℃で一晩放置し、溶菌（ｌｙｓｉｓ）させて、芽胞懸濁液とした。
【００３３】
（実施例２：水和剤）
バシルス・アミロリクエファシエンス３Ｋ−４菌株をＮＢ液体培地中で培養し、得られた芽胞を蒸留水に懸濁して作成した芽胞懸濁液８重量部、珪藻土４０重量部、クレー５０重量部、ジナフタレンジスルホン酸ナトリウム１重量部及びリグニンスルホン酸ナトリウム１重量部を混合乾燥後、粉砕して水和剤とした。
【００３４】
（実施例３：粒剤）
バシルス・アミロリクエファシエンス３Ｋ−４菌株の芽胞懸濁液６重量部、ラウリルアルコール硫酸エステルのナトリウム塩１重量部、リグニンスルホン酸ナトリウム１重量部、カルボキシメチルセルロース２重量部及びクレー９０重量部を均一に混合粉砕する。この混合物を、押出式造粒機を用いて１４〜３２メッシュの粒状に加工した後、乾燥して粒剤とした。
【００３５】
（実施例４：キャベツ黒すす病防除効果試験）
園芸培土を充填した９ｃｍ×９ｃｍのプラスチック製角鉢にキャベツ種子（品種：早秋）を５粒播種し、ガラス温室内で育苗した。第２葉が完全展開したキャベツに、実施例１および２で得られた芽胞懸濁液或いは水和剤を１０００倍に希釈した菌液を３００Ｌ／１０ａの割合で噴霧した。風乾後、キャベツ黒すす病菌の分生胞子懸濁液（１Ｅ＋０５個／ｍｌ）を噴霧接種し、２４時間湿室（ＲＨ１００％、２５℃、暗条件）に置き、その後は調査までガラス温室内で底面給水により管理した。接種４日後に各ポットの第１葉及び第２葉について表１の基準で調査し、数１より発病度を求めた。試験規模は１区１ポットの３反復で実施し、結果を表２に示した。なお、１Ｅ＋０５は１×１０5を表わす。
【００３６】
【表１】
【００３７】
【数１】
【００３８】
【表２】
【００３９】
結果は表２に示す通り、バシルス・アミロリクエファシエンス３Ｋ−４株の芽胞液及び水和剤は無処理区と比較して明らかにキャベツ黒すす病の発病を抑制しており、その程度は化学農薬のＴＰＮ（クロロタロニル：商品名ダコニール）水和剤と同等の高い効果であった。
【００４０】
（実施例５：ヒマワリ黒斑病防除効果試験）
畑土を充填した９ｃｍ×９ｃｍのプラスチック製角鉢にヒマワリ種子（品種：グッドスマイル）を５粒播種し、ガラス温室内で育苗した。本葉が完全展開したヒマワリに、実施例１で得られた芽胞懸濁液を３００Ｌ／１０ａの割合で噴霧した。風乾後、ヒマワリ黒斑病菌の分生胞子懸濁液（１Ｅ＋０５個／ｍｌ）を噴霧接種し、２４時間湿室（ＲＨ１００％、２５℃、暗条件）に置き、その後は調査までガラス温室内で底面給水により管理した。接種４日後に各ポットの第１葉及び第２葉について表１の基準で調査し、数１より発病度を求めた。試験規模は１区１ポットの３反復で実施し、結果を表３に示した。
【００４１】
【表３】
【００４２】
結果は表３に示す通り、バシルス・アミロリクエファシエンス３Ｋ−４株の芽胞液は無処理区と比較して明らかにヒマワリ黒斑病の発病を抑制していた。
【００４３】
（実施例５：ニンジン黒斑病防除効果試験）
畑土を充填した９ｃｍ×９ｃｍのプラスチック製角鉢にニンジン種子（品種：向陽二号）を５粒播種し、ガラス温室内で育苗した。第４複葉が完全展開したニンジンに、実施例１で得られた芽胞懸濁液を３００Ｌ／１０ａの割合で噴霧した。風乾後、ニンジン黒斑病菌の分生胞子懸濁液（１Ｅ＋０５個／ｍｌ）を噴霧接種し、２４時間湿室（ＲＨ１００％、２５℃、暗条件）に置き、その後は調査までガラス温室内で底面給水により管理した。接種４日後に各ポットの全複葉について表１の基準で調査し、数１より発病度を求めた。試験規模は１区１ポットの３反復で実施し、結果を表４に示した。
【００４４】
【表４】
【００４５】
結果は、表４に示す通り、バシルス・アミロリクエファシエンス３Ｋ−４株の芽胞液は無処理区と比較して明らかにニンジン黒斑病に対して発病抑制効果を示していた。
【００４６】
（実施例６：ダイコン黒斑病防除効果試験）
園芸培土を充填した１２８穴トレーにダイコン種子（品種：ＹＲくらま）を８０粒（８穴×１０列）播種し、ガラス温室内で育苗した。第２葉が完全展開したダイコンに、実施例１で得られた芽胞懸濁液を３００Ｌ／１０ａの割合で噴霧した。風乾後、ダイコン黒斑病菌の分生胞子懸濁液（１Ｅ＋０５個／ｍｌ）を噴霧接種し、２４時間湿室（ＲＨ１００％、２５℃、暗条件）に置き、その後は調査までガラス温室内で底面給水により管理した。接種４日後に各トレーの第１葉及び第２葉について表１の基準で調査し、数１より発病度を求めた。試験規模は１区１６株の３反復で実施し、結果を表５に示した。
【００４７】
【表５】
【００４８】
結果は、表５に示す通り、バシルス・アミロリクエファシエンス３Ｋ−４株の芽胞液は無処理区と比較して明らかにダイコン黒斑病に対して発病抑制効果を示していた。
【００４９】
（実施例７：キュウリつる割病防除効果）
キュウリつる割病汚染畑土壌を充填したプラスチック製角鉢にキュウリ種子（品種：相模斑白）を９粒播種し、実施例１で得られた芽胞液を３Ｌ／ｍ2の割合で灌注処理した。覆土後、ガラス温室内で発芽・生育させた。播種１４日後に発病苗数を調査し、発病率を求めた。試験規模は１区１ポットの３反復で実施し、結果を表６に示した。
【００５０】
【表６】
【００５１】
結果は、表６に示す通り、バシルス・アミロリクエファシエンス３Ｋ−４株の芽胞液は無処理区と比較して明らかにキュウリつる割病に対して発病抑制効果を示していた。
【００５２】
（実施例８：キャベツ黒腐病防除効果試験）
畑土を充填した直径１２ｃｍの素焼鉢にキャベツ種子（品種：四季穫）を播種し、ガラス温室内で育苗した。本葉３葉期に、実施例１で得られた芽胞懸濁液を３００Ｌ／１０ａの割合で噴霧した。風乾後、キャベツ黒腐病菌（１Ｅ＋０５個／ｍｌ）を噴霧接種し、２４時間湿室（ＲＨ１００％、２５℃、暗条件）におき、その後は調査までガラス温室内で底面給水により管理した。接種７日後に各ポットの第１、２葉及び第３葉について表１の基準で調査し、数１より発病度を求めた。試験規模は１区１ポットの３反復で実施し、結果を表７に示した。
【００５３】
【表７】
【００５４】
結果は、表７に示す通り、バシルス・アミロリクエファシエンス３Ｋ−４株の芽胞液は無処理区と比較して明らかにキャベツ黒腐病に対して発病抑制効果を示していた。
【００５５】
（実施例９：カンキツかいよう病防除効果試験）
直径１２ｃｍの素焼鉢に生育させたカンキツ（夏ミカン）を剪定し、新しく展開した葉に、実施例１で得られた芽胞懸濁液を３００Ｌ／１０ａの割合で噴霧した。風乾後、カンキツかいよう病菌（１Ｅ＋０５個／ｍｌ）を噴霧接種し、２４時間湿室（ＲＨ１００％、２５℃、暗条件）におき、その後は調査までガラス温室内で底面給水により管理した。接種２１日後に各ポットの全葉について病斑数を調査し、平均病斑数を求めた。試験規模は１区１ポットの３反復で実施し、結果を表８に示した。
【００５６】
【表８】
【００５７】
結果は表８に示す通り、バシルス・アミロリクエファシエンス３Ｋ−４株の芽胞液は無処理区と比較して明らかにカンキツかいよう病に対して発病抑制効果を示していた。
【００５８】
（実施例１０：イネ苗立枯細菌病防除効果試験）
ＰＤ液体培地で２７℃、５２時間振とう培養して得られたイネ苗立枯細菌病菌（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｐｌａｎｔａｒｉｉ）懸濁液（１Ｅ＋０８ｃｆｕ／ｍｌ）にイネ種籾（品種：黄金晴）を減圧条件下で１時間浸漬接種し、イネ苗立枯細菌病感染籾を作成した。実施例１で得られた芽胞懸濁液に、上記のイネ苗立枯細菌病感染籾を２４時間浸漬した後、浸漬処理液を捨て、３２℃の湿室内に１日保って催芽させた。育苗培土を充填させた径６ｃｍのプラスチックカップに催芽種子を播種し、播種３日後、３０℃の育苗庫内に保ち、更に２５℃の湿室内で１５日間管理した後に、全苗について発病の有無を調査し、発病苗率を求めた。１カップ当たりの播種量は乾籾３ｇ（９０〜１１０粒）、試験は３反復で実施し、結果を表９に示した。
【００５９】
【表９】
【００６０】
結果は、表９に示す通り、バシルス・アミロリクエファシエンス３Ｋ−４株の芽胞液は無処理区と比較して明らかにイネ苗立枯細菌病に対して発病抑制効果を示していた。
【産業上の利用可能性】
【００６１】
本発明は、自然界から分離した微生物を利用しているため環境への影響が小さい上、幅広い植物病害に優れた防除効果を発揮するため、農園芸において広く利用できる。
【図面の簡単な説明】
【００６２】
【図１】バシルス・アミロリクエファシエンス３Ｋ−４株（ＦＥＲＭ Ｐ−２１５１９）の５’末端側１６ＳｒＤＮＡの塩基配列（配列番号１）を示す。
【技術分野】
【０００１】
本発明は１種の微生物でイネ及び園芸作物の細菌性病害と糸状菌性病害の防除を可能にするバシルス・アミロリクエファシエンスの新菌株、及びそれを利用した病害防除剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
これまでの農業における病害防除は化学農薬を主体とした防除が主流であり、安定的な作物生産を可能としてきた。しかし、一方で化学農薬の長期、連続散布による環境への影響や耐性菌の出現、また既存の化学農薬では十分に防除できない細菌性病害等の難防除病害の問題が懸念されている。このような問題に対して、近年、化学農薬以外での防除方法として、自然界から採取された微生物を利用した生物的防除が注目されている。既にいくつかの微生物農薬が開発・製品化されているが、化学農薬と比べて効果の安定性が劣ったり、防除スペクトラムの幅が狭いという問題がある。また製品の数も十分ではない。そこで、新たなスペクトラムを有し、防除活性の高い新規な微生物農薬が切望されている。
【０００３】
微生物を用いた植物病害防除法としては、フザリウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）属菌、トリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）属菌等の糸状菌を用いたもの、バシルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属細菌、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属細菌、エルビニア（Ｅｒｗｉｎｉａ）属細菌、バークホルデリア（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ）属細菌などの細菌を用いたものが知られており、これらのいくつかは微生物農薬として登録され、使用されている。
【０００４】
このうち、バシルス・アミロリクエファシエンスに属する細菌を用いた植物病害防除剤としては、例えば特許文献１がある。しかし、その有効成分は細菌の生産物であって、細菌自体ではないし、更にまた、その防除対象は糸状菌による病害であり、細菌による病害の防除は記載されていない。更に、糸状菌性病害と細菌性病害を同時に防除できるバシルス・アミロリクエファシエンス菌株はこれまで知られていない。
【特許文献１】特開平１１−２４６３２４号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は上記のような現状に鑑み、１種の微生物でイネ及び園芸作物の糸状菌性病害及び細菌性病害を防除できる新規な菌株を得ることを課題とする。本発明の更なる課題は、上記菌株を有効菌として含有し、微生物農薬として使用できる植物病害防除剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、自然界から多数の菌株を分離し、それらの菌株の病害防除効果を検定した結果、バシルス・アミロリクエファシエンスに属する１菌株が、植物体の成長に悪影響を及ぼすことなく、農園芸作物の糸状菌性病害及び細菌性病害に対して防除効果を有していることを見出し、本発明を完成した。
【０００７】
すなわち本発明は、こうして得られた農園芸作物の糸状菌性病害及び細菌性病害の防除活性能力を有するバシルス・アミロリクエファシエンスの新菌株、その菌株を有効菌として含有する植物病害防除剤、及びそれを用いる病害防除方法に関するものである。
【０００８】
本発明の実施態様を例示すると、次のとおりである。
【０００９】
（１）バシルス・アミロリクエファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）３Ｋ−４菌株。
（２）農園芸作物の細菌性病害と糸状菌性病害の双方の防除に有効で、且つ主要作物に病原性を示さないこと、を特徴とする上記（１）に記載の菌株。
【００１０】
（３）上記（１）又は（２）に記載の菌株を含有し、農園芸作物の細菌性病害と糸状菌性病害の防除に有効で、かつ主要作物に病原性を示さないこと、を特徴とする植物病害防除剤。
（４）該菌株が生菌体菌株であること、を特徴とする上記（３）に記載の植物病害防除剤。
【００１１】
（５）上記（３）又は（４）に記載の植物病害防除剤を植物の茎葉に処理すること、を特徴とする植物病害防除方法。
（６）上記（３）又は（４）に記載の植物病害防除剤を、植物の種子あるいは植物体に浸漬、噴霧、塗布、注入又は粉衣処理の少なくともひとつの処理をすること、を特徴とする植物病害防除方法。
（７）上記（３）又は（４）に記載の植物病害防除剤を、植物を栽培する土壌に灌注、噴霧又は混和処理の少なくともひとつの処理をすること、を特徴とする植物病害防除方法。
【発明の効果】
【００１２】
本発明のバシルス・アミロリクエファシエンス３Ｋ−４株は、農園芸作物の糸状菌性病害及び細菌性病害のいずれに対しても高い防除効果を有し、農園芸作物の数多くの植物病害を防除することができる。したがって本発明のバシルス・アミロリクエファシエンス３Ｋ−４株を含有する植物病害防除剤は、環境に対して安全性が高く、幅広い植物病害の防除に利用できる点で、極めて優れている。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
本発明者らは、非常に広い抗菌スペクトラムを有し、安全性が高いすぐれた微生物農薬、特に殺菌剤を新たに開発する目的で、各種植物、土壌等から各種微生物をスクリーニングした。その結果、キャベツ種子から分離した菌株が作物病害菌を防除する作用にすぐれていること、特にその抗菌スペクトルが広く、糸状菌及び細菌の双方に有効であるという新規にして有用な知見を得た。
【００１４】
このようにして新たに分離した菌株（３Ｋ−４菌株）は、後記する菌学的性質から明らかなように、芽胞を形成する好気性細菌であり、カタラーゼ陽性であり、更に１６ＳｒＤＮＡの５’末端側５００ｂｐの塩基配列に基づく同定の結果、バシルス・アミロリクエファシエンスに属するものと認められたが、抗菌スペクトルが広く、農園芸作物の糸状菌性病害及び細菌性病害のいずれに対しても高い防除効果を示すという卓越した顕著な特徴を示すことから、この菌株（３Ｋ−４）を新規菌株と同定し、バシルス・アミロリクエファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）３Ｋ−４と命名した。
【００１５】
本発明に係る新規菌株３Ｋ−４株は、受託機関、独立行政法人 産業技術総合研究所 特許生物寄託センター（〒３０５−８５６６ 日本国 茨城県つくば市東１丁目１番地１ 中央第６）にＢａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ ３Ｋ−４として寄託されている（受託日：２００８年３月３日）。その受託番号は、ＦＥＲＭ Ｐ−２１５１９である。
【００１６】
バチルス・アミロリクエファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）３Ｋ−４（ＦＥＲＭ Ｐ−２１５１９）の菌学的性質は、次のとおりである。
【００１７】
３Ｋ−４株の細菌学的性質
（１）形態学的性質
形態：桿菌
大きさ：幅０．７〜０．９μｍ 長さ３〜５μｍ
運動性：＋
【００１８】
（２）培養的性質
肉汁寒天平板培養：白色〜クリーム色のコロニーを形成し、表面はしわ状
【００１９】
（３）生理学的性質
グラム染色性：＋
カタラーゼ反応：＋
生育温度
２７℃：＋
４５℃：＋
５０℃：＋
５５℃：−
生育ＮａＣｌ濃度
５％：＋
７％：＋
１０％：＋
【００２０】
Ａｒａｂｉｎｏｓｅからの酸生成：＋
Ｇｌｕｃｏｓｅからの酸生成：＋
Ｌａｃｔｏｓｅからの酸生成：＋
Ｍａｎｎｉｔｏｌからの酸生成：＋
Ｍｅｌｉｂｉｏｓｅからの酸生成：＋
Ｓｕｃｒｏｓｅからの酸生成：＋
Ｄ−ｔｕｒａｎｏｓｅからの酸生成：＋
Ｘｙｌｏｓｅからの酸生成：＋
ＤＮＡの加水分解：−
【００２１】
＜参考文献＞
Ｒｕｉｚ−Ｇａｒｃｉａ Ｃ．， Ｂｅｊａｒ Ｖ．， Ｍａｒｔｉｎｅｚ−Ｃｈｅｃａ Ｆ．， Ｌｌａｍａｓ Ｉ． ａｎｄ Ｑｕｅｓａｄａ Ｅ．， ２００５， Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｖｅｌｅｚｅｎｓｉｓ ｓｐ． ｎｏｖ．， ａ ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｒｉｖｅｒ Ｖｅｌｅｚ ｉｎ Ｍａｌａｇａ， ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｓｐａｉｎ．， Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ａｎｄ Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ， ５５， １９１〜１９５
Ｓｎｅａｔｈ， Ｐ． Ｈ． Ａ．， Ｍａｉｒ， Ｎ． Ｓ．， Ｓｈａｒｐｅ Ｍ． Ｅ．， Ｈｏｌｔ Ｊ．Ｇ． １９８６ Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ， ｖｏｌｕｍｅ２， Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ
Ｗｅｌｋｅｒ， Ｎ． Ｅ． ａｎｄ Ｌ． Ｌ． Ｃａｍｐｂｅｌｌ， １９６７， Ｕｎｒｅｌａｔｅｄｎｅｓｓ ｏｆ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ ａｎｄ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ．， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ， ｖｏｌ ９４， １１２４〜１１３０
【００２２】
本発明に係る３Ｋ−４株の５’末端側１６ＳｒＤＮＡの塩基配列を配列表の配列番号１及び図１に示す。
【００２３】
本発明のバシルス・アミロリクエファシエンス３Ｋ−４株は、ふすまなどの資材培養、固形培地上での静置培養、液体培養等の公知の手段で増殖させることができ、細菌が生存していれば、特に培地の種類、培養条件等に制限されることはなく利用できる。
【００２４】
本発明のバシルス・アミロリクエファシエンス３Ｋ−４株は、細菌が生存していれば、栄養細胞の状態でも、芽胞の状態でも病害防除剤として利用できる。また、培養したまま培地成分が混在していても、蒸留水などで洗浄して細菌細胞以外の不純物を除去した状態でも利用できる。しかし、細菌が死滅した状態では、病害防除効果は得られない。生きた細菌自体が病害防除効果を奏するものである。本発明は、当該細菌の生産物を病害防除に利用するものではない。このように、本発明は、死菌体でもなく生産物でもなく、生きている菌体（生菌体）それ自体を有効成分としている点できわめて特徴的である。
【００２５】
本発明のバシルス・アミロリクエファシエンス３Ｋ−４株は不完全菌類（Ｄｅｕｔｅｒｏｍｙｃｅｔｅｓ）に属する菌類に起因する植物の病害を防除することができる。バシルス・アミロリクエファシエンス３Ｋ−４株が防除することができる病気の原因菌として、具体的には、アルタナリア（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ）属菌、例えばキャベツ黒すす病菌（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｂｌａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）、ニンジン黒斑病菌（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｒａｄｉｃｉｎａ）、ダイコン黒斑病菌（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｂｌａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）、ヒマワリ黒斑病菌（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｚｉｎｎｉａｅ）、フザリウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）属菌、例えばキュウリつる割病菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）をあげることができるが、本発明はこれらの例により限定されるものではない。
【００２６】
本発明のバシルス・アミロリクエファシエンス３Ｋ−４株は、上記糸状菌のほか、細菌類に起因する植物の病害を防除することができる。バシルス・アミロリクエファシエンス３Ｋ−４株が防除することができる病気の原因菌として、具体的には、バークホルデリア（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ）属細菌、例えばイネ苗立枯細菌（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｐｌａｎｔａｒｉｉ）、イネもみ枯細菌（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｇｌｕｍａｅ）、キサントモナス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ）属細菌、例えばカンキツかいよう病菌（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ ｐｖ ｃｉｔｒｉ）、キャベツ黒腐病菌（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ ｐｖ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ）をあげることができるが、本発明はこれらの例により限定されるものではない。
【００２７】
本発明による植物病害防除剤においてバシルス・アミロリクエファシエンス３Ｋ−４株は、芽胞の水懸濁液を単独で用いるほか、不活性な液体または固体の担体で希釈し、必要に応じて界面活性剤、分散剤、その他の補助剤を加えた製剤として用いてもよい。具体的な製剤例としては、粒剤、粉剤、水和剤、懸濁製剤、乳剤等の剤型があげられる。好ましい担体の例としては、タルク、ベントナイト、クレー、カオリン、珪藻土、ホワイトカーボン、バーミキュライト、消石灰、珪砂、硫安、尿素、多孔質な固体担体、水、イソプロピルアルコール、キシレン、シクロヘキサノン、メチルナフタレン、アルキレングリコールなどの液体担体等があげられる。界面活性剤および分散剤としては、例えばジナフチルメタンスルホン酸塩、アルコール硫酸エステル塩、アルキルアリールスルホン酸塩、リグニンスルホン酸塩、ポリオキシエチレングリコールエーテル、ポリオキシエチレンアルキルアリールエーテル、ポリオキシエチレンソルビタンモノアルキレート等があげられる。補助剤としては、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、アラビアゴム、キサンタンガム等、保護剤としてはスキムミルク、スクロース、グルタミン酸、ｐＨ緩衝剤等があげられる。
【００２８】
さらに、本発明の植物病害防除剤は、有効成分として必要に応じて他の殺虫剤、殺菌剤、除草剤、植物成長調整剤、肥料などの成分を含むことができる。また、本発明の植物病害防除剤は、他の微生物農薬、弱毒ウィルス、フェロモン、天敵昆虫等と併用することもできる。また、遺伝子組み換え作物にも使用できる。
【００２９】
本発明の植物病害防除剤は、そのまま直接施用するか、あるいは水などで希釈して施用することができる。植物病害防除剤の施用方法は、特に限定されず、例えば、直接植物に散布する方法、種子や塊茎などに浸漬、噴霧、塗布、注入、粉衣する方法、植物を栽培する土壌に灌注、噴霧、混和する方法、植物や土壌に処理する水や肥料に添加する方法などがあげられる。その他、製剤の施用量は、対象病害、対象作物、施用方法、発生傾向、被害の程度、環境条件、使用する剤型などによって変動するので、適宜調整することが好ましい。
【実施例】
【００３０】
以下、本発明を実施例により具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例により限定されるものではない。
【００３１】
（細菌の分離）
キャベツ黒すす病菌（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）に汚染されたキャベツ種子（品種：早秋、タキイ種苗株式会社製）を細菌用培地（キングＢ培地）と糸状菌用培地（モルツアガー培地）に並べてアルタナリア属菌の発育適温に保った。その結果、ほとんどのキャベツ種子からアルタナリア属菌が両培地に発生したが、中にはアルタナリア属菌が発生せず、細菌または糸状菌が発生した種子が特にキングＢ培地において低率ながら見られた。そこでこれらの発生した菌からアルタナリア属菌に拮抗性のある菌をスクリーニングし、バシルス・アミロリクエファシエンス３Ｋ−４株を分離した。
【００３２】
（実施例１：培養方法）
バシルス・アミロリクエファシエンス３Ｋ−４株をＮＢ培地で振とう培養し（２７℃、７日間、１２５ｒｐｍ）、遠心集菌して蒸留水で洗浄し、再度遠心集菌したものを滅菌水に懸濁した。懸濁液は、４℃で一晩放置し、溶菌（ｌｙｓｉｓ）させて、芽胞懸濁液とした。
【００３３】
（実施例２：水和剤）
バシルス・アミロリクエファシエンス３Ｋ−４菌株をＮＢ液体培地中で培養し、得られた芽胞を蒸留水に懸濁して作成した芽胞懸濁液８重量部、珪藻土４０重量部、クレー５０重量部、ジナフタレンジスルホン酸ナトリウム１重量部及びリグニンスルホン酸ナトリウム１重量部を混合乾燥後、粉砕して水和剤とした。
【００３４】
（実施例３：粒剤）
バシルス・アミロリクエファシエンス３Ｋ−４菌株の芽胞懸濁液６重量部、ラウリルアルコール硫酸エステルのナトリウム塩１重量部、リグニンスルホン酸ナトリウム１重量部、カルボキシメチルセルロース２重量部及びクレー９０重量部を均一に混合粉砕する。この混合物を、押出式造粒機を用いて１４〜３２メッシュの粒状に加工した後、乾燥して粒剤とした。
【００３５】
（実施例４：キャベツ黒すす病防除効果試験）
園芸培土を充填した９ｃｍ×９ｃｍのプラスチック製角鉢にキャベツ種子（品種：早秋）を５粒播種し、ガラス温室内で育苗した。第２葉が完全展開したキャベツに、実施例１および２で得られた芽胞懸濁液或いは水和剤を１０００倍に希釈した菌液を３００Ｌ／１０ａの割合で噴霧した。風乾後、キャベツ黒すす病菌の分生胞子懸濁液（１Ｅ＋０５個／ｍｌ）を噴霧接種し、２４時間湿室（ＲＨ１００％、２５℃、暗条件）に置き、その後は調査までガラス温室内で底面給水により管理した。接種４日後に各ポットの第１葉及び第２葉について表１の基準で調査し、数１より発病度を求めた。試験規模は１区１ポットの３反復で実施し、結果を表２に示した。なお、１Ｅ＋０５は１×１０5を表わす。
【００３６】
【表１】
【００３７】
【数１】
【００３８】
【表２】
【００３９】
結果は表２に示す通り、バシルス・アミロリクエファシエンス３Ｋ−４株の芽胞液及び水和剤は無処理区と比較して明らかにキャベツ黒すす病の発病を抑制しており、その程度は化学農薬のＴＰＮ（クロロタロニル：商品名ダコニール）水和剤と同等の高い効果であった。
【００４０】
（実施例５：ヒマワリ黒斑病防除効果試験）
畑土を充填した９ｃｍ×９ｃｍのプラスチック製角鉢にヒマワリ種子（品種：グッドスマイル）を５粒播種し、ガラス温室内で育苗した。本葉が完全展開したヒマワリに、実施例１で得られた芽胞懸濁液を３００Ｌ／１０ａの割合で噴霧した。風乾後、ヒマワリ黒斑病菌の分生胞子懸濁液（１Ｅ＋０５個／ｍｌ）を噴霧接種し、２４時間湿室（ＲＨ１００％、２５℃、暗条件）に置き、その後は調査までガラス温室内で底面給水により管理した。接種４日後に各ポットの第１葉及び第２葉について表１の基準で調査し、数１より発病度を求めた。試験規模は１区１ポットの３反復で実施し、結果を表３に示した。
【００４１】
【表３】
【００４２】
結果は表３に示す通り、バシルス・アミロリクエファシエンス３Ｋ−４株の芽胞液は無処理区と比較して明らかにヒマワリ黒斑病の発病を抑制していた。
【００４３】
（実施例５：ニンジン黒斑病防除効果試験）
畑土を充填した９ｃｍ×９ｃｍのプラスチック製角鉢にニンジン種子（品種：向陽二号）を５粒播種し、ガラス温室内で育苗した。第４複葉が完全展開したニンジンに、実施例１で得られた芽胞懸濁液を３００Ｌ／１０ａの割合で噴霧した。風乾後、ニンジン黒斑病菌の分生胞子懸濁液（１Ｅ＋０５個／ｍｌ）を噴霧接種し、２４時間湿室（ＲＨ１００％、２５℃、暗条件）に置き、その後は調査までガラス温室内で底面給水により管理した。接種４日後に各ポットの全複葉について表１の基準で調査し、数１より発病度を求めた。試験規模は１区１ポットの３反復で実施し、結果を表４に示した。
【００４４】
【表４】
【００４５】
結果は、表４に示す通り、バシルス・アミロリクエファシエンス３Ｋ−４株の芽胞液は無処理区と比較して明らかにニンジン黒斑病に対して発病抑制効果を示していた。
【００４６】
（実施例６：ダイコン黒斑病防除効果試験）
園芸培土を充填した１２８穴トレーにダイコン種子（品種：ＹＲくらま）を８０粒（８穴×１０列）播種し、ガラス温室内で育苗した。第２葉が完全展開したダイコンに、実施例１で得られた芽胞懸濁液を３００Ｌ／１０ａの割合で噴霧した。風乾後、ダイコン黒斑病菌の分生胞子懸濁液（１Ｅ＋０５個／ｍｌ）を噴霧接種し、２４時間湿室（ＲＨ１００％、２５℃、暗条件）に置き、その後は調査までガラス温室内で底面給水により管理した。接種４日後に各トレーの第１葉及び第２葉について表１の基準で調査し、数１より発病度を求めた。試験規模は１区１６株の３反復で実施し、結果を表５に示した。
【００４７】
【表５】
【００４８】
結果は、表５に示す通り、バシルス・アミロリクエファシエンス３Ｋ−４株の芽胞液は無処理区と比較して明らかにダイコン黒斑病に対して発病抑制効果を示していた。
【００４９】
（実施例７：キュウリつる割病防除効果）
キュウリつる割病汚染畑土壌を充填したプラスチック製角鉢にキュウリ種子（品種：相模斑白）を９粒播種し、実施例１で得られた芽胞液を３Ｌ／ｍ2の割合で灌注処理した。覆土後、ガラス温室内で発芽・生育させた。播種１４日後に発病苗数を調査し、発病率を求めた。試験規模は１区１ポットの３反復で実施し、結果を表６に示した。
【００５０】
【表６】
【００５１】
結果は、表６に示す通り、バシルス・アミロリクエファシエンス３Ｋ−４株の芽胞液は無処理区と比較して明らかにキュウリつる割病に対して発病抑制効果を示していた。
【００５２】
（実施例８：キャベツ黒腐病防除効果試験）
畑土を充填した直径１２ｃｍの素焼鉢にキャベツ種子（品種：四季穫）を播種し、ガラス温室内で育苗した。本葉３葉期に、実施例１で得られた芽胞懸濁液を３００Ｌ／１０ａの割合で噴霧した。風乾後、キャベツ黒腐病菌（１Ｅ＋０５個／ｍｌ）を噴霧接種し、２４時間湿室（ＲＨ１００％、２５℃、暗条件）におき、その後は調査までガラス温室内で底面給水により管理した。接種７日後に各ポットの第１、２葉及び第３葉について表１の基準で調査し、数１より発病度を求めた。試験規模は１区１ポットの３反復で実施し、結果を表７に示した。
【００５３】
【表７】
【００５４】
結果は、表７に示す通り、バシルス・アミロリクエファシエンス３Ｋ−４株の芽胞液は無処理区と比較して明らかにキャベツ黒腐病に対して発病抑制効果を示していた。
【００５５】
（実施例９：カンキツかいよう病防除効果試験）
直径１２ｃｍの素焼鉢に生育させたカンキツ（夏ミカン）を剪定し、新しく展開した葉に、実施例１で得られた芽胞懸濁液を３００Ｌ／１０ａの割合で噴霧した。風乾後、カンキツかいよう病菌（１Ｅ＋０５個／ｍｌ）を噴霧接種し、２４時間湿室（ＲＨ１００％、２５℃、暗条件）におき、その後は調査までガラス温室内で底面給水により管理した。接種２１日後に各ポットの全葉について病斑数を調査し、平均病斑数を求めた。試験規模は１区１ポットの３反復で実施し、結果を表８に示した。
【００５６】
【表８】
【００５７】
結果は表８に示す通り、バシルス・アミロリクエファシエンス３Ｋ−４株の芽胞液は無処理区と比較して明らかにカンキツかいよう病に対して発病抑制効果を示していた。
【００５８】
（実施例１０：イネ苗立枯細菌病防除効果試験）
ＰＤ液体培地で２７℃、５２時間振とう培養して得られたイネ苗立枯細菌病菌（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｐｌａｎｔａｒｉｉ）懸濁液（１Ｅ＋０８ｃｆｕ／ｍｌ）にイネ種籾（品種：黄金晴）を減圧条件下で１時間浸漬接種し、イネ苗立枯細菌病感染籾を作成した。実施例１で得られた芽胞懸濁液に、上記のイネ苗立枯細菌病感染籾を２４時間浸漬した後、浸漬処理液を捨て、３２℃の湿室内に１日保って催芽させた。育苗培土を充填させた径６ｃｍのプラスチックカップに催芽種子を播種し、播種３日後、３０℃の育苗庫内に保ち、更に２５℃の湿室内で１５日間管理した後に、全苗について発病の有無を調査し、発病苗率を求めた。１カップ当たりの播種量は乾籾３ｇ（９０〜１１０粒）、試験は３反復で実施し、結果を表９に示した。
【００５９】
【表９】
【００６０】
結果は、表９に示す通り、バシルス・アミロリクエファシエンス３Ｋ−４株の芽胞液は無処理区と比較して明らかにイネ苗立枯細菌病に対して発病抑制効果を示していた。
【産業上の利用可能性】
【００６１】
本発明は、自然界から分離した微生物を利用しているため環境への影響が小さい上、幅広い植物病害に優れた防除効果を発揮するため、農園芸において広く利用できる。
【図面の簡単な説明】
【００６２】
【図１】バシルス・アミロリクエファシエンス３Ｋ−４株（ＦＥＲＭ Ｐ−２１５１９）の５’末端側１６ＳｒＤＮＡの塩基配列（配列番号１）を示す。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
バシルス・アミロリクエファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）３Ｋ−４菌株（ＦＥＲＭ Ｐ−２１５１９）。
【請求項２】
農園芸作物の細菌性病害と糸状菌性病害の防除に有効で、且つ主要作物に病原性を示さないこと、を特徴とする請求項１に記載の菌株。
【請求項３】
請求項１又は２に記載の菌株を含有し、農園芸作物の細菌性病害と糸状菌性病害の防除に有効で、かつ主要作物に病原性を示さないこと、を特徴とする植物病害防除剤。
【請求項４】
該菌株が生菌体菌株であること、を特徴とする請求項３に記載の植物病害防除剤。
【請求項５】
請求項３又は４に記載の植物病害防除剤を植物の茎葉に処理すること、を特徴とする植物病害防除方法。
【請求項６】
請求項３又は４に記載の植物病害防除剤を、植物の種子あるいは植物体に浸漬、噴霧、塗布、注入又は粉衣処理の少なくともひとつの処理をすることを特徴とする植物病害防除方法。
【請求項７】
請求項３又は４に記載の植物病害防除剤を、植物を栽培する土壌に灌注、噴霧又は混和処理することを特徴とする植物病害防除方法。
【請求項１】
バシルス・アミロリクエファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）３Ｋ−４菌株（ＦＥＲＭ Ｐ−２１５１９）。
【請求項２】
農園芸作物の細菌性病害と糸状菌性病害の防除に有効で、且つ主要作物に病原性を示さないこと、を特徴とする請求項１に記載の菌株。
【請求項３】
請求項１又は２に記載の菌株を含有し、農園芸作物の細菌性病害と糸状菌性病害の防除に有効で、かつ主要作物に病原性を示さないこと、を特徴とする植物病害防除剤。
【請求項４】
該菌株が生菌体菌株であること、を特徴とする請求項３に記載の植物病害防除剤。
【請求項５】
請求項３又は４に記載の植物病害防除剤を植物の茎葉に処理すること、を特徴とする植物病害防除方法。
【請求項６】
請求項３又は４に記載の植物病害防除剤を、植物の種子あるいは植物体に浸漬、噴霧、塗布、注入又は粉衣処理の少なくともひとつの処理をすることを特徴とする植物病害防除方法。
【請求項７】
請求項３又は４に記載の植物病害防除剤を、植物を栽培する土壌に灌注、噴霧又は混和処理することを特徴とする植物病害防除方法。
【図１】
【公開番号】特開２００９−２４７３０２（Ｐ２００９−２４７３０２Ａ）
【公開日】平成２１年１０月２９日（２００９．１０．２９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−１０１０６３（Ｐ２００８−１０１０６３）
【出願日】平成２０年４月９日（２００８．４．９）
【出願人】（００００００１６９）クミアイ化学工業株式会社 (86)
【出願人】（３９００２８１３０）タキイ種苗株式会社 (7)
【出願人】（５９４００３１０４）株式会社テイエス植物研究所 (5)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２１年１０月２９日（２００９．１０．２９）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年４月９日（２００８．４．９）
【出願人】（００００００１６９）クミアイ化学工業株式会社 (86)
【出願人】（３９００２８１３０）タキイ種苗株式会社 (7)
【出願人】（５９４００３１０４）株式会社テイエス植物研究所 (5)
【Ｆターム（参考）】
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