ヒスチジン誘導体および疎水基で官能化されたポリグルタミン酸類、ならびに特に治療目的のためのそれらの使用
本発明は、修飾されたポリアミノ酸系の、特に活性物質（ＳＡ）をベクター化するのに適した新規な生分解性材料に関する。前記発明は、また、前記ポリアミノ酸系の新規な医薬、化粧品、食事または植物保護用組成物に関する。発明の目的は、ＳＡをベクター化するのに使用可能であり、かつこの分野のすべての細目、すなわち、生体適合性、生分解性、多くの活性物質と容易に会合するようになる能力、またはそれらを可溶化する能力、および前記活性物質をｉｎ ｖｉｖｏで放出する能力を最適に満たす能力がある新規なポリマー原料を提供することである。該目的は、ヒスチジン誘導体および８〜３０個の炭素原子を含む疎水基で修飾された新規なポリグルタメートに関する本発明によって達成される。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、特に活性成分（principe actif：ＰＡ）（複数可）をベクター化するのに有用な、コポリアミノ酸系新規な生分解性材料に関する。
【０００２】
本発明は、また、これらの修飾されたポリアミノ酸系の新規な医薬、化粧品、健康食品または植物保護用組成物を目標とする。これらの組成物は、ＰＡのベクター化を可能にし、かつエマルジョン、ミセル、粒子、ゲル、インプラントまたはフィルムの形態で好ましくは提供される組成物のタイプでよい。
【０００３】
考慮下のＰＡは、有利には、経口、非経口、経鼻、経膣、眼、皮下、静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内、脳内または口腔内経路などによって動物またはヒトの組織に投与できる生物学的に活性な化合物である。
【０００４】
より詳細には、本発明が関連するＰＡは、限定はされないが、タンパク質、糖タンパク質、ペプチド、多糖、リポ多糖、オリゴまたはポリヌクレオチド、および有機分子である。しかし、化粧品、または除草剤、殺虫剤、殺菌剤などの植物保護用製品も関係する可能性がある。
【背景技術】
【０００５】
活性成分、特に薬剤として活性な成分をベクター化する分野において、多くの場合、
・それらの活性成分を分解（加水分解、酵素による消化など）から保護する必要性、および／または
・治療濃度を規定の時間に亘って維持するために、それらの活性成分の放出速度を制御する必要性、および／または
・それらの活性成分を（それらを保護しながら）作用部位に運搬する必要性が存在する。
【０００６】
これらの目的に向けていくつかのタイプのポリマーが研究され、市販されているものさえある。例えば、ポリ乳酸、ポリ乳酸／グリコール酸、ポリオキシエチレン／オキシプロピレン、ポリアミノ酸または多糖型のポリマーを挙げることができる。これらのポリマーは、例えば、バルクインプラント、ミクロ粒子、ナノ粒子、小胞、ミセルまたはゲルを製造することを可能にする出発材料を構成する。これらのポリマーは、このような系を製造するのに適していなければならないという事実に加えて、それらは、また、生体適合性、非毒性、非免疫原性で、かつ経済的でなければならず、さらに、それらは、身体から容易に排除されることができかつ／または生分解性でなければならない。後者の態様に関して、体内での生分解が非毒性産物を生成することがさらに極めて重要である。
【０００７】
ＰＡベクトル化系を調製するための出発材料として採用されるポリマーに関する従来技術の実例として、いくつかの特許もしくは特許出願または科学論文を以下で言及する。
【０００８】
米国特許第４６５２４４１号には、ホルモンＬＨ−ＲＨを封入したポリ乳酸マイクロカプセルが記載されている。これらのマイクロカプセルは、ホルモン、ホルモンを固定させる物質（ゼラチン）を含む水性内層、油性ポリ乳酸層、および水性外層（ポリビニルアルコール）を含む水中油中水エマルジョンを調製することによって製造される。ＰＡの放出は、皮下注射後に２週間を超える期間に亘って起こり得る。
【０００９】
米国特許第６１５３１９３号には、アドリアマイシンなどの抗癌剤をベクター化(vectorisation)するための、ポリ（オキシエチレン）／ポリ（オキシプロピレン）の両親媒性ミセル系組成物が記載されている。
【００１０】
Ａｋｉｙｏｓｈｉらは、コレステロールをグラフト化(greffage)することによって疎水性にされ、水中でナノ粒子を形成するプルランを記載している（Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ、１９９８年、５４巻、３１３〜３２０頁）。インスリンと可逆的に複合化する能力を有するこれらのナノ粒子は、安定なコロイド状懸濁液を形成する。
【００１１】
米国特許第４３５１３３７号には、活性成分の制御放出のためのインプラントまたはミクロ粒子の形態で使用できる、ロイシン系およびグルタメート系両親媒性コポリアミノ酸が記載されている。活性成分の放出は、ポリマーの分解速度に応じて極めて長期に亘って行なうことができる。
【００１２】
米国特許第４８８８３９８号には、ポリアミノ酸鎖上にランダムに配置されたアルキルオキシカルボニルメチル型のペンダント基を有するポリグルタメートまたはポリアスパルテートおよび任意選択のポリロイシン系ポリマーが記載されている。側鎖基、例えばメトキシカルボニルメチル基でグラフト化されたこれらのポリアミノ酸は、ＰＡを含む長期放出のための生分解性インプラントの形態で使用できる。
【００１３】
米国特許第５９０４９３６号には、安定なコロイド状懸濁液を形成することができ、かつ生物学的に活性なタンパク質と、それらのタンパク質を変性することなしに自発的に会合する能力がある、ポリロイシン／ポリグルタメートのブロックポリマーから得られるナノ粒子が記載されている。次いで、これらタンパク質を、長期に亘って制御された方式でｉｎ ｖｉｖｏで放出できる。
【００１４】
米国特許第５４４９５１３号には、ポリオキシエチレンブロックおよびポリアミノ酸ブロック例えばポリ（Ｌ−アスパラギン酸β−ベンジル）を含む両親媒性ブロックコポリマーが記載されている。これらのポリオキシエチレン／ポリアスパラギン酸ベンジルポリマーは、アドリアマイシンまたはインドメタシンなどの疎水性活性分子を封入する能力があるミセルを形成する。
【００１５】
国際公開第９９／６１５１２号には、疎水基（ポリリジンまたはポリオルニチンに連結されたパルミチン酸）および親水基（ポリオキシエチレン）で官能化されたポリリジンおよびポリオルニチンが記載されている。これらのポリマー、例えば、ポリオキシエチレンおよびパルミトイル鎖でグラフト化されたポリリジンは、コレステロールの存在下で、ドキソルビシンまたはＤＮＡを封入する能力がある小胞を形成する。ポリリジン系のこれらのポリマーは、生理学的媒質中でカチオン性である。
【００１６】
本出願人の米国特許第６６３０１７１号には、安定なコロイド状懸濁液を形成するのに適し、かつ生物学的に活性のあるタンパク質とそれらを変性することなしに自発的に一緒に会合する能力があるブロックまたはランダムのポリ（グルタミン酸ナトリウム）−ポリ（グルタミン酸メチル、エチル、ヘキサデシルまたはドデシル）ポリマーが記載されている。続いて、これらタンパク質を、ｉｎ ｖｉｖｏで長期に亘って制御された方式で放出できる。これらの両親媒性直鎖コポリアミノ酸は、疎水性アルキル側鎖の存在で修飾される。これらのアルキル基は、エステル官能基を介して共有結合でポリマーにグラフト化されている。これらのポリマーは、生理学的媒質中でアニオン性である。
【００１７】
同様の分野で、本出願人は、関連した概念を有するポリグルタメート系ポリマー（アニオン性ポリマー）をいくつかの特許出願で発表した。
【００１８】
国際公開第０３／１０４３０３号には、α−トコフェロールで官能化されたアニオン性ポリアミノ酸が記載されている。
【００１９】
国際公開第２００４／０１３２０６号には、疎水基を含み、これらの基が２つのアミド官能基を含む接合部分を介して、より具体的にはリジンまたはオルニチン型のスペーサーを介してポリマーに連結される、アニオン性ポリアミノ酸が記載されている。
【００２０】
国際公開第２００４／０６０９６８号には、ロイシンおよび／またはイソロイシンおよび／またはバリンおよび／またはフェニルアラニン系の少なくとも１つのオリゴアミノ酸基で官能化されたポリアミノ酸が記載されている。
【００２１】
Ｗ．Ｃ．Ｓｈｅｎの論文「エンドソームにおける担体からの薬物放出モデルとしてのポリ（リジン）およびヒスタミン修飾ポリ（グルタメート）間の酸感受性解離（Acid-sensitive dissociation between poly(lysine) and histamine-modified poly(glutamate) as a model for drug-releasing from carriers in endosomes）」Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ、１０３４（１）巻、１２２〜１２４頁、１９９０年には、４０％のヒスタミンで官能化されたポリグルタメートが記載されている。しかし、疎水化されたポリグルタメート骨格は、記載されていない。さらに、詳述されている該ポリマーは、ｐＨ４〜５で析出し、生理学的ｐＨで可溶性である。ｐＨに敏感なポリリジンとの複合体を形成することを目標にした応用のみが詳述されている。これらの複合体は静電相互作用をベースにしている。具体的には、生理学的ｐＨで、ポリグルタメート−ヒスタミン／ポリリジン複合体が形成され、一方、それは、エンドソーム中のｐＨ値であるｐＨ４〜５で分解する。
【００２２】
さらに最近、Ｋｉｍらは、制御放出学会（Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｓｏｃｉｅｔｙ）第３２回年会、マイアミ、２００５年６月、＃２５４および＃３６１において、イミダゾール誘導体で修飾され、かつ脂肪アミン（Ｃ18ＮＨ2）を保持するポリアスパルテートを発表している。まず、これらのポリマーは、α型とβ型との混合物から構成されるポリアスパルテートをベースにしている。さらに、学会発表＃２５４で、ヒスチジンは酸官能基を介してグラフト化され、その結果、ペンダント基であるアミンを提示するポリマーが得られ、そのため、生理学的ｐＨでカチオン性であり、かつ可溶性であるポリマーが得られる。学会発表＃３６１で、グラフトは、ヒスチジン誘導体ではなく、イミダゾール誘導体、１−（３−アミノプロピルイミダゾール）である。少数の論文には、ヒスチジン誘導体で官能化されたポリリジンが記載されている。Ｍ．Ｂｉｋｒａｍらの論文「非ウイルス性遺伝子送達のための生分解性ポリ（エチレングリコール）−ｃｏ−ポリ（Ｌ−リジン）−ｇ−ヒスチジンマルチブロックコポリマー（Biogradable Poly(ethylene glycol)-co-poly(L-lysine)-g-histidine Multiblock Copolymers for Nonviral Gene Delivery）」Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ、３７巻、１９０３〜１９１６頁、２００４年には、リジンのペンダントアミンを介するＮ−ジメチルヒスチジンのｃｏ−ポリエチレングリコール−ポリリジンへのカップリングが記載されている。これらのポリマーは、遺伝子療法戦略で採用され、かくして、ＤＮＡと組み合わせるのに使用される、ヒスチジンの役割は、細胞へのトランスフェクションを促進することであり、このアミノ酸は、エンドソーム中でカチオン性である。ポリマー／ＤＮＡの分離は、このようにしてエンドソーム中での静電反発によって促進される。これらのポリマーは、中性ｐＨでカチオン性である。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００２３】
したがって、従来技術において、薬剤として活性のある成分のベクター化のために、たとえ、多くの技術的解決策が開発、提供されても、すべての要求に対する回答を得て改善できるように維持することは困難である、より具体的には、本発明は、活性成分と可逆的に一緒に会合する能力があるコロイド状ナノ粒子またはミクロ粒子に変換できる、ベクター化のための生分解性ポリアミノ酸に関する。
【００２４】
この文脈で、本発明の本質的目的の１つは、その水相での溶解性がｐＨによって決まる、新規な直鎖または分枝の両親媒性コポリアミノ酸を提供することである。酸性ｐＨ（ｐＨ＜６）で可溶であり、生理学的ｐＨ（ｐＨ＝７．４）で不溶であるポリマーを開発することが有利である。これらのポリマーは、上述の特許または特許出願に記載のポリマーに関して、治療用タンパク質などの活性成分をベクトル化する見地からみて改善になる。
【００２５】
本発明の別の本質的目的は、ＰＡのベクター化に使用することができ、かつ要求のすべての細目、すなわち特に、
○・安定な水性コロイド状懸濁物を容易にかつ経済的に形成する能力、
・多くの活性成分と容易に一緒に会合する能力、かつ
・これらの活性成分をｉｎ ｖｉｖｏで放出する能力、
○生体適合性、
○生分解性。
○加水分解に対する安定性、
を最高に満足させることを可能にするこれらのポリマーに関する。
【課題を解決するための手段】
【００２６】
中でもこの目的は、グルタミン酸単位（ここで、これらの単位の少なくとも一部は、ヒスチジン誘導体を保持し、かつこれらの単位の少なくとも一部はペンダント性疎水基（ＧＨ）を保持し、該ヒスチジン誘導体およびＧＨはそれぞれ互いに同一または異なる）を含むポリアミノ酸に関する本発明によって達成される。
【００２７】
本発明による各ポリグルタメートは、このように、互いに同一または異なる多数のペンダント性ヒスチジン誘導体およびペンダント性疎水基（groupement hydrophobe：ＧＨ）によって官能化される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２８】
本発明の趣旨の範囲内で、用語「多数の」は、ポリグルタメートが、
*少なくとも１％〜９９％（グルタミン酸に対するモル％）のヒスチジン誘導体、
*分子あたり平均で少なくとも２つのペンダント性ＧＨ、
によって官能化されていることを意味する。本発明によれば、ポリグルタミン酸は、ペンダント性ＧＨに加えて、コポリマー鎖の末端の少なくとも１つに固定されたＧＨを示すことが可能である。
【００２９】
好ましくは、グルタミン酸単位の少なくとも１つの部分がヒスチジン誘導体を保持する場合、前記部分の各単位は、ヒスチジン誘導体を保持し、該ヒスチジン誘導体は、互いに同一であるかまたは異なり、グルタミン酸単位の少なくとも１つの部分がペンダント性疎水基（ＧＨ）を保持する場合、前記部分の各単位は、ペンダント性疎水基（ＧＨ）を保持し、該ＧＨ基は、互いに同一であるかまたは異なる。
【００３０】
好ましくは、ヒスチジン誘導体は、グルタミン酸単位に関してペンダントである。本発明の趣旨の範囲内で、表現「保持する」は、保持される基がペンダントであること、換言すれば、前記基は、グルタミン酸に関して側鎖基であり、それを保持するグルタミン酸単位のε位のカルボニル官能基の置換基であることを意味する。
【００３１】
本発明の好ましい形態によれば、ポリグルタメートは、コポリマー鎖あたり平均して少なくとも３つの疎水基（ＧＨ）を含む。
【００３２】
ポリグルタメートは、また、ヒスチジン誘導体を保持する。これらの基は、好ましくはアミド結合を介してコポリマーに結合される。
【００３３】
「ｐＨに敏感」で、生理学的ｐＨで不溶であり、多数の疎水基で官能化され、かつ安定なコロイド系を形成する能力がある、ポリグルタメートおよびヒスチジン誘導体系ポリマーの新規ファミリーを開発したことは、本出願人の功績である。ｐＨの関数としてポリマーの溶解性を変更する能力は、放出時間を延長することにおいて極めて有効であることが立証できる。生理学的条件下でやはり不溶であるＰＬＡＧＡ型ポリマーは、長期の放出時間を得ることを可能にする。提供される系の利点は、その生分解性のためである。
【００３４】
これらの新規ポリマーは、タンパク質のベクター化に特に十分適していることが判明した。さらに、それらのポリマーは、酵素の存在下で容易に分解して非毒性の異化産物／代謝産物（アミノ酸）を与える。
【００３５】
本発明の趣旨の範囲内および本明細書を通して、１種または複数の活性成分と修飾されたポリグルタメートとの間の関係を記述するのに採用される用語「会合」または「会合する」は、特に、活性成分または活性成分群が、特に疎水性相互作用を介してポリグルタメート（複数可）に結合され、かつ／またはポリグルタメート（複数可）によって封じ込められることを意味する。
【００３６】
有利には、本発明によるポリアミノ酸は、例えば、α−Ｌ−グルタメートまたはα−Ｌ−グルタミン酸のホモポリマーである。
【００３７】
グルタメート単位を官能化するのに使用できるヒスチジン誘導体は、互いに同一であるかまたは異なり、１位がアミンでおよび２位がイミダゾール環によって置換されたエチルに相当する。他の置換基は、これらの２つの位置に存在できる。これらの誘導体は、例えば、ヒスチジンエステル（メチルエステルおよびエチルエステルなど）、ヒスチジノールおよびヒスタミンでもよい。これらの誘導体はまた、例えば、ヒスチジンアミド、ヒスチジンアミドのＮ−モノメチル誘導体、およびヒスチジンアミドのＮ，Ｎ’−ジメチル誘導体でもよい。
【００３８】
好ましい特性によれば、本発明のポリアミノ酸は、ポリマー鎖当たり平均で少なくとも３つの疎水基（ＧＨ）を含む。
【００３９】
有利には、少なくとも１つの疎水基ＧＨは、疎水基ＧＨをポリグルタメート鎖（例えば、ポリグルタメート骨格主鎖）に連結することを可能にする少なくとも１つの間隔をあける接合部分（または単位）（スペーサー）を含む疎水性グラフト中に含められる。この接合部分は、例えば、少なくとも１つの直接的共有結合および／または少なくとも１つのアミド結合および／または少なくとも１つのエステル結合を含むことができる。例えば、接合部分は、特に、ポリグルタメートの構成モノマー単位以外の「アミノ酸」単位、アミノアルコールの誘導体、ポリアミン（例えば、ジアミン）の誘導体、ポリオール（例えば、ジオール）の誘導体、およびヒドロキシ酸の誘導体を含む群に属するタイプでもよい。
【００４０】
ＧＨのポリグルタメート鎖へのグラフト化は、ポリグルタメート鎖に結合できるＧＨ前駆体の使用を含むことができる。
【００４１】
ＧＨの前駆体は、実際には、限定はされないが、アルコールおよびアミンを含む群から選択され、当業者は、これらの化合物を容易に官能化することが可能である。ＧＨのグラフト化は、本発明による修飾ポリアミノ酸の収得方法を説明する際に、以下でより詳細に説明される。
【００４２】
好ましい特性によれば、疎水性グラフトの疎水基ＧＨは、８〜３０個の炭素原子を含む。
【００４３】
これらの疎水基ＧＨは、有利には、
・少なくとも１つの不飽和および／または少なくとも１つのへテロ原子を場合によって含むことができる直鎖または分枝のＣ8〜Ｃ30アルキル、
・少なくとも１つの不飽和および／または少なくとも１つのへテロ原子を場合によって含むことができるＣ8〜Ｃ30のアルキルアリールまたはアリールアルキル、および
・少なくとも１つの不飽和および／または少なくとも１つのへテロ原子を場合によって含むことができるＣ8〜Ｃ30（ポリ）環状化合物、
を含む群から注意深く選択される。
【００４４】
ＧＨと共に疎水性グラフトを形成する接合部分は、二価、三価または四価の接合部分（さらには五価以上）でもよい。二価の接合部分の場合、疎水性グラフトは、１つのみのＧＨ基を含み、一方、三価の接合部分は、疎水性グラフトに二又の性質を付与する、換言すれば、該グラフトは、２つのＧＨ「足」を示す。三価の接合部分としては、とりわけ「アミノ酸」単位、例えば「グルタミン酸」あるいはポリオール残基、例えばグリセロールを挙げることができる。したがって、二又のＧＨを含む疎水性グラフトの２つの有利ではあるが非制限的例が、ジアルキルグリセロールおよびジアルキルグルタメートである。
【００４５】
疎水基ＧＨは、例えば、オクタノール、ドデカノール、テトラデカノール、ヘキサデカノール、オクタデカノール、オレイルアルコール、トコフェロール、およびコレステロールを含む群から選択される基から誘導されることができる。
【００４６】
好ましくは、本発明によるポリグルタメートの骨格は、α−Ｌ−グルタメートおよび／またはα−Ｌ−グルタミン酸単位を含む。
【００４７】
より好ましくは、さらに、本発明によるポリグルタメートは、次の一般式（Ｉ）
【００４８】
【化２】
の中の１つに相当し、式中、
・Ａは、独立に、
ＮＨＲ基（ここで、Ｒは、Ｈ、直鎖Ｃ2〜Ｃ10または分枝Ｃ3〜Ｃ10のアルキル、あるいはベンジルを表す）、
窒素を介して結合した末端アミノ酸単位（その酸官能基（複数可）は、ＮＨＲおよびＯＲの定義にそれぞれ対応するアミンまたはアルコールによって場合によって修飾されている）
を表し、
・Ｂは、次の基、すなわち
−Ｏ−、−ＮＨ−、−Ｎ−（Ｃ1〜Ｃ5）アルキル−、アミノ酸残基（好ましくは天然アミノ酸の）、１〜６個の炭素原子を含むジオール、トリオール、ジアミン、トリアミン、アミノアルコール、またはヒドロキシ酸から好ましくは選択される二価、三価または四価の結合基であり、
・Ｄは、Ｈ、直鎖Ｃ2〜Ｃ10または分枝Ｃ3〜Ｃ10のアシル基、あるいはピログルタメートを表し、
・疎水基（ＧＨ）は、それぞれ、互いに独立に、
・少なくとも１つの不飽和および／または少なくとも１つのへテロ原子（好ましくは、Ｏおよび／またはＮおよび／またはＳ）を場合によって含むことができる直鎖または分枝のＣ8〜Ｃ30アルキル、あるいは
・少なくとも１つの不飽和および／または少なくとも１つのへテロ原子（好ましくは、Ｏおよび／またはＮおよび／またはＳ）を場合によって含むことができるＣ8〜Ｃ30のアルキルアリールまたはアリールアルキル、あるいは
・少なくとも１つの不飽和および／または少なくとも１つのへテロ原子（好ましくは、Ｏおよび／またはＮおよび／またはＳ）を場合によって含むことができるＣ8〜Ｃ30（ポリ）環状化合物
から選択される基を表し、
・Ｒ１は、アミンを介して結合したエタノールアミン、またはＯＸ基を表し、ここで、Ｘは、Ｈまたは、
−ナトリウム、カリウム、カルシウムおよびマグネシウムを含むサブグループから有利に選択される金属カチオン、
−・アミン系カチオン、
・オリゴアミン系カチオン、
・ポリアミン系カチオン（ポリエチレンイミンが特に好ましい）、
・リジン系またはアルギニン系カチオン
を含む部類から有利には選択されるアミノ酸（複数可）系カチオン
を含むサブグループから有利に選択される有機カチオン、ならびに
−ポリリジンおよびオリゴリジンを含むサブグループから有利に選択されるカチオン性ポリアミノ酸
を含む群から好ましくは選択されるカチオン性実体を表し、
・Ｒ２は、アルキルエステル、好ましくはエチルエステル、ＢＧＨエステル、ＣＨ2ＯＨ基（ヒスチジノール）、Ｈ（ヒスタミン）またはＣ（Ｏ）ＮＨ2（ヒスチジンアミド）、Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ3もしくはＣ（Ｏ）Ｎ（ＣＨ3）2基を表し、
・ｍ、ｐおよびｑは、正の整数であり、
・（ｍ）／（ｍ＋ｐ＋ｑ）は、疎水基ＧＨのモルグラフト化度として定義され、１から５０モル％まで変化し、但し、各コポリマー鎖は、平均で少なくとも３つの疎水性グラフトを有し、
・（ｐ）／（ｍ＋ｐ＋ｑ）は、ヒスチジン基のモルグラフト化度として定義され１から９９％まで変化し、
・（ｍ＋ｐ＋ｑ）は、１０から１０００まで、好ましくは３０から５００の間で変化し、
・（ｑ）／（ｍ＋ｐ＋ｑ）は、０から９８モル％まで変化する。
【００４９】
好ましくは、疎水基ＧＨは、ランダムに配置される。
【００５０】
さらに、本発明によるポリグルタメートの疎水単位のモルグラフト化度は、２〜１００％が好ましく、好ましくは５〜５０％であり、但し、各ポリマー鎖は、平均で、少なくとも３つの疎水性グラフトを有する。
【００５１】
本発明によるポリグルタメートの比率（ｐ）／（ｍ＋ｐ＋ｑ）は、それらが、イミダゾール環を含む１〜ほぼ９９モル％の基を含むことができることを意味する。
【００５２】
好ましくは、上述のようなポリアミノ酸は、生理学的ｐＨで析出する能力がある。
【００５３】
本発明によるポリグルタメートの比率（ｑ）／（ｍ＋ｐ＋ｑ）は、それらが、０〜ほぼ９８モル％のカルボキシル官能基、カルボキシレート官能基またはヒドロキシエチルグルタミン官能基を含むことができることを意味する。
【００５４】
本発明の別の注目すべき特性によれば、本発明によるポリマーは、２０００〜２０００００ｇ／モル、好ましくは５０００〜１０００００ｇ／モルであるモル質量を有する。
【００５５】
代替の形態によれば、本発明によるポリグルタメートは、グルタメート単位に結合したポリアルキレン（好ましくはエチレン）グリコール型の少なくとも１つのグラフトを保持できる。
【００５６】
当然、本発明は、前に規定したような修飾されたポリアミノ酸の混合物も包含する。
【００５７】
注目に値する仕方で、本発明のポリグルタメートは、疎水基の性質およびポリグルタメートの重合度に応じて、いくつかの方式で使用される能力がある。本発明が目標とする各種形態中に活性成分を封じ込めるためのポリマーを形成する方法は、当業者に周知である。さらなる詳細については、例えば、これらの少数の特に関連のある参考文献、すなわち、
「Microspheres,Microcapsules and Liposomes；１巻、Preparation and Chemical Applications」Ｒ．Ａｒｓｈａｄｙ編、Ｃｉｔｕｓ Ｂｏｏｋｓ、１９９９年、ＩＳＢＮ：０−９５３２１８７−１−６、
「Sustained-Release Injectable Products」Ｊ．ＳｅｎｉｏｒおよびＭ．Ｒａｄｏｍｓｋｙ編、Ｉｎｔｅｒｐｈａｒｍ Ｐｒｅｓｓ、２０００年、ＩＳＢＮ：１−５７４９１−１０１−５、
「Colloidal Drug Delivery Systems」Ｊ．Ｋｒｅｕｔｅｒ編、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ,Ｉｎｃ．、１９９４年、ＩＳＢＮ：０−８２４７−９２１４−９、
「Handbook of Pharmaceutical Controlled Release Technology」Ｄ．Ｌ．Ｗｉｓｅ編、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、２０００年、ＩＳＢＮ：０−８２４７−０３６９−３、が参照される。
【００５８】
ヒスチジン誘導体で修飾されたこれらのポリグルタメートは、それらが、ｐＨ５未満（例えば酸の存在下）で水中に分散してコロイド状懸濁液または溶液を与えるという事実、およびそれらが、生理学的ｐＨ（７．４）で、塩基を添加することによって、または中性ｐＨの溶液中に分散させることによって析出（沈殿）する事実のため、さらに極めて有利である。そのため、皮下注射中に、注射部位でおそらく析出が発生するであろう。さらに、これらのポリグルタメート（粒子の形態のまたはそうではない）は、タンパク質、ペプチドまたは小分子などの活性成分を容易に会合させる、または封じ込めることができる。好ましい実施は、コポリマーを水中に分散させること、および該溶液を活性成分（ＰＡ）の存在下でインキュベートすることからなる本出願人の米国特許第６６３０１７１号に記載されるものである。続いて、本発明によるポリグルタメートを含むベクター化粒子のコロイド状溶液を、０．２μｍのフィルターを通して濾過し、次いで患者に直接的に注射できる。
【００５９】
本発明による微粒子形態のポリマーが好ましいという事実とは無関係に、中性またはイオン化形態の本発明のコポリマーは、より一般には、単独でか、または液体中、固体中もしくはゲル組成物中および水性媒体中もしくは有機媒体中で使用できる。
【００６０】
修飾されたポリグルタメートの残りのカルボキシル官能基は、ｐＨおよび組成に応じて、中性（ＣＯＯＨ型）であるかまたはイオン化（ＣＯＯ-アニオン）されることを理解されたい。水性溶液中で、対カチオンは、ナトリウム、カルシウムまたはマグネシウムなどの金属カチオン、あるいはトリエタノールアミン、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンなどの有機カチオン、あるいはポリエチレンイミンなどのポリアミンでもよい。
【００６１】
同様に、ヒスチジン誘導体のイミダゾール環は、ｐＨおよび組成に応じて、中性（Ｃ3Ｈ3Ｎ2）またはカチオン性（Ｃ3Ｈ4Ｎ2+）である。
【００６２】
本発明のコポリマーは、例えば、当業者に周知の方法によって得られる。まず、α型のポリアミノ酸を得るのに最も広く使用される技術は、例えば、論文「Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ、１９７６年、１５巻、１８６９頁」およびＨ．Ｒ．Ｋｒｉｃｈｅｌｄｏｒｆによる著作「alpha-Amino acid N-carboxy Anhydrides and related Heterocycles」Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ（１９８７年）に記載のＮ−カルボキシアミノ酸無水物（ＮＣＡ）の重合をベースにしていることを想起すべきである。ホモポリマーまたは疎水基の他の化学官能基に影響を及ぼさないでベンジル基を選択的に加水分解できるので、ＮＣＡ誘導体は、好ましくはＮＣＡ−Ｇｌｕ−Ｏ−Ｂｚ（Ｂｚ＝ベンジル）である。
【００６３】
本発明により使用できるいくつかのポリマー、例えば、変更可能な分子量をもつポリ（α−Ｌ−グルタミン酸）、ポリ（α−Ｄ−グルタミン酸）、ポリ（α−Ｄ，Ｌ−グルタメート）およびポリ（γ−Ｌ−グルタミン酸）型のポリマーが、商業的に入手できる。
【００６４】
好ましくは、本発明のコポリマーは、２つの経路により合成される。最初に、ヒスチジン誘導体（例えば、エチルヒスチジン）およびＢ−ＧＨ基（例えば、ドデシルアミン）を、まず、同時または逐次的にポリ（Ｌ−グルタミン酸）にグラフト化する。この反応は、ＤＭＦ、ＤＭＳＯまたはＮＭＰなどの溶媒中で次のスキームにしたがって起こり得る。
【００６５】
【化３】
【００６６】
上記の機構で、Ｒ１が、アミンを介して結合したエタノールアミンである場合、後者（エタノールアミン）は、合成中にヒスチジン誘導体と同時に導入される。
【００６７】
ポリ（Ｌ−グルタミン酸）は、仏国特許出願公開第Ａ−２８０１２２６号に記載の経路により合成できる。ＨＢ−ＧＨ基がエステル官能基を介して結合される場合には、カルボジイミドを使用する通常のカップリング反応により最初にＢ−ＧＨ基をグラフト化することがより容易であり、その後、ヒスチジン誘導体をグラフト化する。
【００６８】
【化４】
【００６９】
上記の機構で、Ｒ１がアミンを介して結合したエタノールアミンである場合、後者（エタノールアミン）は、合成中にヒスチジン誘導体と同時に導入される。
【００７０】
重合化学および基をカップリングするための反応は、通常のものであり、当業者に周知である（例えば、上述の本出願人の特許または特許出願を参照されたい）。
【００７１】
これらの方法は、実施例の説明を通してより十分に理解されるであろう。
【００７２】
重合度は、モノマーに対する開始剤のモル比で規定されることに注目すべきである。
【００７３】
ＧＨを含む疎水性グラフトとポリマー中の酸官能基とのカップリングは、カップリング剤としてのカルボジイミド、および場合によって、４−ジメチルアミノピリジンなどの触媒の存在下で、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）またはジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）などの適切な溶媒中で、ポリアミノ酸を反応させることによって容易に実施される。カルボジイミドは、例えば、ジシクロヘキシルカルボジイミドまたはジイソプロピルカルボジイミドである。クロロギ酸エステルなどのカップリング剤も、アミド結合を形成するのに使用できる（カップリング剤の例については、例えば、Ｂｏｄａｎｓｚｋｙの著作「Principles of Peptide Synthesis」Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ、１９８４年を参照されたい）。グラフト化度は、構成成分および反応物の化学量論または反応時間によって化学的に制御される。ポリマーのアミノ酸以外のアミノ酸で官能化された疎水性グラフトは、通常のペプチドカップリングによって、または酸触媒を用いる直接縮合によって得られる。これらの技術は、当業者に周知である。
【００７４】
本発明の別の態様によれば、本発明は、前に規定したような少なくとも１種のポリグルタメート、および場合によって、治療、化粧品、健康食品または植物保護用活性成分であることができる少なくとも１種の活性成分を含む、医薬、化粧品、健康食品または植物保護組成物を目標とする。
【００７５】
本発明の有利な取合せによれば、活性成分を、共有化学結合（複数可）以外の１つ以上の結合によって、ヒスチジン誘導体で修飾されたポリアミノ酸（複数可）と会合させる。
【００７６】
１種または複数のＰＡを本発明により修飾されたポリアミノ酸と会合させるための技術は、特に、米国特許第６６３０１７１号中に記載されている。それらの技術は、ベクター化粒子（Particles de Vectorisation：ＰＶ）を含む液体媒質中に少なくとも１種の活性成分を、１種または複数の活性成分（ＰＡ）が充填されたまたは会合したＰＶのコロイド状懸濁液を得るように組み込むことからなる。ＰＶによるＰＡの閉じ込めをもたらすこの組み込みは、次の方式、すなわち、
・ＰＡを水に溶解し、次いで、コロイド状懸濁液の形態または単離されたＰＶ形態（凍結乾燥物または析出物）いずれかのＰＶを添加する、あるいは
・溶液状態、または純粋なもしくは予備製剤化状態のＰＡを、場合によって使用時点で水などの適切な溶媒中に乾燥ＰＶを分散させることによって調製される、ＰＶ粒子のコロイド状懸濁物へ添加する方式で実施できる。
【００７７】
好ましくは、活性成分は、タンパク質、糖タンパク質、１つ以上のポリアルキレングリコール鎖（好ましくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ））に結合したタンパク質「ＰＥＧ化タンパク質」、多糖、リポ糖、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチドまたはペプチドである。
【００７８】
代替の形態によれば、活性成分は、疎水性、親水性または両親媒性の「小」有機分子である。本説明の意味の範囲内では、「小」分子は、特に小さな非タンパク質分子である。
【００７９】
本発明によるポリアミノ酸と会合する能力があるＰＡの例としては、（ナノまたはミクロ）粒子の形態によることなく、
○インスリン、インターフェロン、成長ホルモン、インターロイキン、エリスロポエチンまたはサイトカインなどのタンパク質、
○ロイプロリドまたはシクロスポリンなどのペプチド、
○アントラサイクリン、タキソイドまたはカンプトテシンのファミリーに属するものなどの小分子、および
○これらの混合物
を挙げることができる。
【００８０】
一実施形態によれば、本発明の組成物は、ゲル、溶液、エマルジョン、ミセル、ナノ粒子、ミクロ粒子、インプラント、粉末またはフィルムの形態である。
【００８１】
本発明の特に好ましい形態の１つによれば、活性成分（複数可）が充填されたまたは充填されていない組成物は、ポリアミノ酸のナノ粒子および／またはミクロ粒子および／またはミセルの水相中の安定なコロイド状懸濁液である。
【００８２】
別に実施形態によれば、本発明の組成物は、生体適合性溶媒中の溶液形態であり、皮下または筋肉内であるいは腫瘍中に注射することができる。
【００８３】
本発明による組成物は、それが医薬組成物である場合には、経口、非経口、経鼻、経膣、眼、皮下、静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内、脳内または口腔内で投与できる。
【００８４】
該組成物が、皮下または筋肉内あるいは腫瘍中に注射できる、生体適合性溶媒または生体適合性溶媒混合物中の溶液の形態であることも考慮に入れることができる。
【００８５】
別の実施形態によれば、該組成物は、ｐＨおよび／または浸透圧を調節するために、ならびに／あるいは安定性を改善するために（抗酸化剤）、ならびに／あるいは抗微生物剤として賦形剤を場合によって含むことができる。これらの賦形剤は、当業者に周知である（Ｐ．Ｋ．Ｇｕｐｔａらによる著作「Injectable Drug Development」、Ｉｎｔｅｒｐｈａｒｍａ Ｐｒｅｓｓ、Ｄｅｎｖｅｒ，コロラド州、１９９９年を参照）。
【００８６】
別の代替の形態によれば、本発明による組成物は、それが注射部位に沈積物を形成し得るような方式で製剤化される。該沈着は、例えば、ｉｎ ｖｉｖｏで存在する生理学的タンパク質によって少なくとも部分的にもたらされ得る。
【００８７】
別の代替の形態によれば、本発明による組成物は、該組成物が前に規定した通りの式Ｉのポリアミノ酸を含むことを特徴とする。
【００８８】
好ましくは、この組成物は、生理学的ｐＨで析出する能力がある。
【００８９】
本発明は、また、本発明によるポリアミノ酸、ならびに
・特に、経口、経鼻、経膣、眼、皮下、静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内または脳内投与のための薬剤［これらの薬剤の活性成分は、特に、タンパク質、糖タンパク質、１つ以上のポリアルキレングリコール鎖（例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ））に結合したタンパク質（以後、用語「ＰＥＧ化タンパク質」を使用する）、ペプチド、多糖、リポ糖、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチドおよび疎水性、親水性または両親媒性小有機分子であり得る］、および／または
・栄養分、および／または
・化粧品もしくは植物保護用製品
を調製するのに使用できる活性成分を含む組成物を目標にする。
【００９０】
この方法は、本質的には、上記に規定されたような少なくとも１種のホモポリアミノ酸および／または前述の組成物を利用することからなる。
【００９１】
本発明は、また、本説明に記載されるような組成物を、経口、非経口、経鼻、経膣、眼、皮下、静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内、脳内または口腔内で投与することからなることを本質とする治療方法に関する。
【００９２】
本発明の具体的な代替形態によれば、この治療方法は、前記のような組成物を、生体適合性溶媒中の溶液形態にすること、次いで、その溶液を皮下または筋肉内であるいは腫瘍中に、好ましくはそれが注射部位に沈積物を形成するように注射することからなることを本質とする。
【００９３】
以下、本発明のポリマーの合成、それらポリマーのＰＡベクター化系（安定な水性コロイド状懸濁液）への変換、およびこのような系がタンパク質と一緒に会合して医薬組成物を形成する能力の例証を記載する実施例から、本発明はより十分に理解され、その利点および代替の実施形態が明瞭となろう。
【実施例】
【００９４】
（実施例１）：ポリマー（１）の合成
【化５】
５％のラセミα−トコフェロールでランダムにグラフト化された重合度（ＤＰ）が２２０のポリ（グルタミン酸）６ｇを、８６ｍＬのＤＭＦに８０℃で加熱して溶解する。この溶液を０℃まで冷却し、５．７４ｇのクロロギ酸イソブチルを、次いで４．２６ｇのＮ−メチルモルホリンを添加する。反応媒体を、温度を０℃に維持しながら１５分間撹拌する。同時に、２０．６ｇのヒスチジンエチルエステル二塩酸塩を１．０ＬのＤＭＦに溶解する。続いて２２．５ｍＬのトリエチルアミンを添加し、次いで、得られた溶液を、６０℃で１時間加熱し、その後、０℃まで冷却する。続いてポリマー溶液にヒスチジン溶液を添加する。反応媒体を、０℃で５分間、次いで温度を周囲温度に戻しながら１時間撹拌する。この時間の最後に、反応媒体を、まず１０ｍＬの１Ｎ ＨＣｌを添加して反応を止め、次いで、２．８Ｌの水で希釈してｐＨ２〜３とする。最終ｐＨを３に調節する。続いて、透析濾過装置で該溶液を６００ｍＬまで濃縮し、次いで、１０倍容量の生理食塩水（０．９％ＮａＣｌ）および５倍容量の水に対して洗浄する。続いて、該ポリマー溶液を３３０ｍＬまで濃縮する。そのポリマー濃度は２０ｍｇ／ｍＬであり、すなわち収率は５０％である。加水分解したポリマーをＤ2Ｏ中での1Ｈ−ＮＭＲで測定すると、ヒスチジンエステルの比率は６８％である。Ｍｎ（Ｈ2Ｏ／ＡｃＮ＝６５／５のＧＰＣで測定）は、ＰＥＯ相当値で１１．３ｋｇ／モルである。
【００９５】
（実施例２）：ポリマー（２）の合成
【化６】
５％のラセミα−トコフェロールでランダムにグラフトされた重合度（ＤＰ）が２２０のポリ（グルタミン酸）３．５ｇを、５０ｍＬのＤＭＦに８０℃で加熱して溶解する。この溶液を０℃まで冷却し、３．３５ｇのクロロギ酸イソブチルを、次いで２．４８ｇのＮ−メチルモルホリンを添加する。反応媒体を、温度を０℃に維持しながら１５分間撹拌する。同時に、８．６ｇのヒスタミン二塩酸塩を２１５ｍＬのＤＭＦに溶解する。続いて１３．０ｍＬのトリエチルアミンを添加し、得られた溶液を、４０℃で数分間加熱し、次いで、０℃まで冷却する。続いて、ヒスタミン溶液をポリマー溶液に添加する。反応媒体を、０℃で５分間、次いで温度を周囲温度に戻しながら１時間撹拌する。この時間の最後に、反応媒体を、ｐＨ２〜３で８００ｍＬの水で希釈する。最終ｐＨを３に調節する。続いて、該溶液を透析濾過装置で５００ｍＬまで濃縮し、次いで、１０倍容量の生理食塩水（０．９％ＮａＣｌ）および５倍容量の水に対して透析洗浄する。続いて、該ポリマー溶液を２３０ｍＬまで濃縮する。そのポリマー濃度は１３．７ｍｇ／ｍＬであり、すなわち収率は４９％である。加水分解したポリマーをＤ2Ｏ中での1Ｈ−ＮＭＲで測定すると、ヒスタミンの比率は７７％である。Ｍｎ（Ｈ2Ｏ／ＡｃＮ＝６５／３５のＧＰＣで測定）は、ＰＥＯ相当値で１．５ｋｇ／モルである。
【００９６】
（実施例３）：ポリマー（３）の合成
【化７】
５％のラセミα−トコフェロールでランダムにグラフトされた重合度（ＤＰ）が２２０のポリ（グルタミン酸）５ｇを、６３ｍＬのＮＭＰに８０℃で加熱して溶解する。この溶液を０℃まで冷却し、４．３３ｇのクロロギ酸イソブチルを、次いで３．６７ｍＬのＮ−メチルモルホリンを添加する。反応媒体を、温度を０℃に維持しながら１５分間撹拌する。同時に、４．２８ｇのヒスチジンエチルエステル二塩酸塩を４３ｍＬのＮＭＰに溶解する。続いて、４．４６ｍＬのトリエチルアミンを添加し、得られた溶液を、２０℃で数分間撹拌し、その後、０℃まで冷却する。続いて、ヒスチジン溶液をポリマー溶液に添加する。反応媒体を、０℃で１時間撹拌し、次いで４ｍＬのエタノールアミンを添加し、そして温度を周囲温度まで戻す。反応媒体を２０℃で５時間撹拌し、次いで、それをｐＨ２〜３で４２０ｍＬの水に希釈する。続いて、該溶液を３倍容量の生理食塩水（０．９％ＮａＣｌ）および８倍容量の水に対して透析濾過する。続いて、該ポリマー溶液を５６ｍｇ／ｇのポリマー濃度まで濃縮する。加水分解したポリマーをＤ2Ｏ中での1Ｈ−ＮＭＲで測定すると、グラフト化されたヒスチジンエチルエステルの比率は４０％であり、エタノールアミンのレベルは５５％である。
【００９７】
（実施例４）：ポリマー（４）の合成
【化８】
５％のラセミα−トコフェロールでランダムにグラフト化された重合度（ＤＰ）が２２０のポリ（グルタミン酸）３ｇを、３８ｍＬのＮＭＰに８０℃で加熱して溶解する。この溶液を０℃まで冷却し、２．７４ｇのクロロギ酸イソブチルを、次いで２．２ｍＬのＮ−メチルモルホリンを添加する。反応媒体を、温度を０℃に維持しながら１０分間撹拌する。同時に、８．６５ｇのヒスチジンアミド二塩酸塩を１０８ｍＬのＮＭＰに懸濁する。続いて、１０．６ｍＬのトリエチルアミンを添加し、得られた懸濁液を、２０℃で数分間撹拌し、その後、０℃まで冷却する。続いて、活性化されたポリマー溶液を、ヒスチジンアミド懸濁液に添加する。反応媒体を、０℃で２時間、次いで２０℃で一夜撹拌する。続いて、０．６２ｍＬの３５％ＨＣｌを、その後８３ｍＬの水を添加する。続いて、得られた溶液をｐＨ３〜４で５００ｍＬの水中に注ぎ入れる。続いて、該溶液を８倍容量の生理食塩水（０．９％ＮａＣｌ）および４倍容量の水に対して透析濾過する。続いて、該ポリマー溶液を３００ｍＬまで濃縮する（１８ｍｇ／ｇのポリマー濃度）。Ｄ2Ｏ中での1Ｈ−ＮＭＲで測定すると、グラフト化されたヒスチジンアミドの比率は９５％である。
【００９８】
（比較実施例５）：ヒスチジン誘導体で官能化されていない化合物Ｃ１
比較化合物Ｃ１は、ヒスチジン誘導体で修飾されたポリグルタメートの前駆体（そのアニオン型）、すなわち、５％のラセミα−トコフェロールでランダムにフラフトされたＤＰが２２０のポリグルタメートである。この化合物は、国際公開第０３／１０４３０３号に記載の方法によって得られる。
【００９９】
（実施例６）：ｐＨの関数としての析出性の研究
結果は、本発明のポリマーが、化合物Ｃ１とは対照的に、ほぼ６未満のｐＨ値で可溶であり、ｐＨが６を超えるようになると析出することを示している。
【０１００】
【表１】
【０１０１】
（実施例７）：ゼータ電位の測定
酸性ｐＨでのカチオン的性質および中性ｐＨ超でのアニオン的性質を確認するために、ポリマー１のゼータ電位を、これが可溶であるｐＨ４およびｐＨ８の２つのｐＨ値で測定した。得られた値は、ｐＨ４で＋５３ｍＶ、ｐＨ８で−３７ｍＶである。対照的に、ポリマーＣ１は、中性ｐＨで−７０ｍＶのゼータ電位を有する。
【０１０２】
（実施例８）：治療用タンパク質、ｈＧＨの安定化
ポリマー１を、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）と共に次の比率、ポリマー１：５０ｍｇ／ｇ＋ｈＧＨ：５ｍｇ／ｇ、ｐＨ＝５で製剤した。
【０１０３】
ｈＧＨは、５．４の等電点を有し、本来的にはｐＨ５で不溶である。実際には、製剤は澄明である。したがって、タンパク質は、ポリマー１により溶液中で安定化される。
【０１０４】
この製剤は、中性ｐＨに緩衝化された溶液（ＰＢＳ溶液）中に注入されると、析出する。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、特に活性成分（principe actif：ＰＡ）（複数可）をベクター化するのに有用な、コポリアミノ酸系新規な生分解性材料に関する。
【０００２】
本発明は、また、これらの修飾されたポリアミノ酸系の新規な医薬、化粧品、健康食品または植物保護用組成物を目標とする。これらの組成物は、ＰＡのベクター化を可能にし、かつエマルジョン、ミセル、粒子、ゲル、インプラントまたはフィルムの形態で好ましくは提供される組成物のタイプでよい。
【０００３】
考慮下のＰＡは、有利には、経口、非経口、経鼻、経膣、眼、皮下、静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内、脳内または口腔内経路などによって動物またはヒトの組織に投与できる生物学的に活性な化合物である。
【０００４】
より詳細には、本発明が関連するＰＡは、限定はされないが、タンパク質、糖タンパク質、ペプチド、多糖、リポ多糖、オリゴまたはポリヌクレオチド、および有機分子である。しかし、化粧品、または除草剤、殺虫剤、殺菌剤などの植物保護用製品も関係する可能性がある。
【背景技術】
【０００５】
活性成分、特に薬剤として活性な成分をベクター化する分野において、多くの場合、
・それらの活性成分を分解（加水分解、酵素による消化など）から保護する必要性、および／または
・治療濃度を規定の時間に亘って維持するために、それらの活性成分の放出速度を制御する必要性、および／または
・それらの活性成分を（それらを保護しながら）作用部位に運搬する必要性が存在する。
【０００６】
これらの目的に向けていくつかのタイプのポリマーが研究され、市販されているものさえある。例えば、ポリ乳酸、ポリ乳酸／グリコール酸、ポリオキシエチレン／オキシプロピレン、ポリアミノ酸または多糖型のポリマーを挙げることができる。これらのポリマーは、例えば、バルクインプラント、ミクロ粒子、ナノ粒子、小胞、ミセルまたはゲルを製造することを可能にする出発材料を構成する。これらのポリマーは、このような系を製造するのに適していなければならないという事実に加えて、それらは、また、生体適合性、非毒性、非免疫原性で、かつ経済的でなければならず、さらに、それらは、身体から容易に排除されることができかつ／または生分解性でなければならない。後者の態様に関して、体内での生分解が非毒性産物を生成することがさらに極めて重要である。
【０００７】
ＰＡベクトル化系を調製するための出発材料として採用されるポリマーに関する従来技術の実例として、いくつかの特許もしくは特許出願または科学論文を以下で言及する。
【０００８】
米国特許第４６５２４４１号には、ホルモンＬＨ−ＲＨを封入したポリ乳酸マイクロカプセルが記載されている。これらのマイクロカプセルは、ホルモン、ホルモンを固定させる物質（ゼラチン）を含む水性内層、油性ポリ乳酸層、および水性外層（ポリビニルアルコール）を含む水中油中水エマルジョンを調製することによって製造される。ＰＡの放出は、皮下注射後に２週間を超える期間に亘って起こり得る。
【０００９】
米国特許第６１５３１９３号には、アドリアマイシンなどの抗癌剤をベクター化(vectorisation)するための、ポリ（オキシエチレン）／ポリ（オキシプロピレン）の両親媒性ミセル系組成物が記載されている。
【００１０】
Ａｋｉｙｏｓｈｉらは、コレステロールをグラフト化(greffage)することによって疎水性にされ、水中でナノ粒子を形成するプルランを記載している（Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ、１９９８年、５４巻、３１３〜３２０頁）。インスリンと可逆的に複合化する能力を有するこれらのナノ粒子は、安定なコロイド状懸濁液を形成する。
【００１１】
米国特許第４３５１３３７号には、活性成分の制御放出のためのインプラントまたはミクロ粒子の形態で使用できる、ロイシン系およびグルタメート系両親媒性コポリアミノ酸が記載されている。活性成分の放出は、ポリマーの分解速度に応じて極めて長期に亘って行なうことができる。
【００１２】
米国特許第４８８８３９８号には、ポリアミノ酸鎖上にランダムに配置されたアルキルオキシカルボニルメチル型のペンダント基を有するポリグルタメートまたはポリアスパルテートおよび任意選択のポリロイシン系ポリマーが記載されている。側鎖基、例えばメトキシカルボニルメチル基でグラフト化されたこれらのポリアミノ酸は、ＰＡを含む長期放出のための生分解性インプラントの形態で使用できる。
【００１３】
米国特許第５９０４９３６号には、安定なコロイド状懸濁液を形成することができ、かつ生物学的に活性なタンパク質と、それらのタンパク質を変性することなしに自発的に会合する能力がある、ポリロイシン／ポリグルタメートのブロックポリマーから得られるナノ粒子が記載されている。次いで、これらタンパク質を、長期に亘って制御された方式でｉｎ ｖｉｖｏで放出できる。
【００１４】
米国特許第５４４９５１３号には、ポリオキシエチレンブロックおよびポリアミノ酸ブロック例えばポリ（Ｌ−アスパラギン酸β−ベンジル）を含む両親媒性ブロックコポリマーが記載されている。これらのポリオキシエチレン／ポリアスパラギン酸ベンジルポリマーは、アドリアマイシンまたはインドメタシンなどの疎水性活性分子を封入する能力があるミセルを形成する。
【００１５】
国際公開第９９／６１５１２号には、疎水基（ポリリジンまたはポリオルニチンに連結されたパルミチン酸）および親水基（ポリオキシエチレン）で官能化されたポリリジンおよびポリオルニチンが記載されている。これらのポリマー、例えば、ポリオキシエチレンおよびパルミトイル鎖でグラフト化されたポリリジンは、コレステロールの存在下で、ドキソルビシンまたはＤＮＡを封入する能力がある小胞を形成する。ポリリジン系のこれらのポリマーは、生理学的媒質中でカチオン性である。
【００１６】
本出願人の米国特許第６６３０１７１号には、安定なコロイド状懸濁液を形成するのに適し、かつ生物学的に活性のあるタンパク質とそれらを変性することなしに自発的に一緒に会合する能力があるブロックまたはランダムのポリ（グルタミン酸ナトリウム）−ポリ（グルタミン酸メチル、エチル、ヘキサデシルまたはドデシル）ポリマーが記載されている。続いて、これらタンパク質を、ｉｎ ｖｉｖｏで長期に亘って制御された方式で放出できる。これらの両親媒性直鎖コポリアミノ酸は、疎水性アルキル側鎖の存在で修飾される。これらのアルキル基は、エステル官能基を介して共有結合でポリマーにグラフト化されている。これらのポリマーは、生理学的媒質中でアニオン性である。
【００１７】
同様の分野で、本出願人は、関連した概念を有するポリグルタメート系ポリマー（アニオン性ポリマー）をいくつかの特許出願で発表した。
【００１８】
国際公開第０３／１０４３０３号には、α−トコフェロールで官能化されたアニオン性ポリアミノ酸が記載されている。
【００１９】
国際公開第２００４／０１３２０６号には、疎水基を含み、これらの基が２つのアミド官能基を含む接合部分を介して、より具体的にはリジンまたはオルニチン型のスペーサーを介してポリマーに連結される、アニオン性ポリアミノ酸が記載されている。
【００２０】
国際公開第２００４／０６０９６８号には、ロイシンおよび／またはイソロイシンおよび／またはバリンおよび／またはフェニルアラニン系の少なくとも１つのオリゴアミノ酸基で官能化されたポリアミノ酸が記載されている。
【００２１】
Ｗ．Ｃ．Ｓｈｅｎの論文「エンドソームにおける担体からの薬物放出モデルとしてのポリ（リジン）およびヒスタミン修飾ポリ（グルタメート）間の酸感受性解離（Acid-sensitive dissociation between poly(lysine) and histamine-modified poly(glutamate) as a model for drug-releasing from carriers in endosomes）」Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ、１０３４（１）巻、１２２〜１２４頁、１９９０年には、４０％のヒスタミンで官能化されたポリグルタメートが記載されている。しかし、疎水化されたポリグルタメート骨格は、記載されていない。さらに、詳述されている該ポリマーは、ｐＨ４〜５で析出し、生理学的ｐＨで可溶性である。ｐＨに敏感なポリリジンとの複合体を形成することを目標にした応用のみが詳述されている。これらの複合体は静電相互作用をベースにしている。具体的には、生理学的ｐＨで、ポリグルタメート−ヒスタミン／ポリリジン複合体が形成され、一方、それは、エンドソーム中のｐＨ値であるｐＨ４〜５で分解する。
【００２２】
さらに最近、Ｋｉｍらは、制御放出学会（Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｓｏｃｉｅｔｙ）第３２回年会、マイアミ、２００５年６月、＃２５４および＃３６１において、イミダゾール誘導体で修飾され、かつ脂肪アミン（Ｃ18ＮＨ2）を保持するポリアスパルテートを発表している。まず、これらのポリマーは、α型とβ型との混合物から構成されるポリアスパルテートをベースにしている。さらに、学会発表＃２５４で、ヒスチジンは酸官能基を介してグラフト化され、その結果、ペンダント基であるアミンを提示するポリマーが得られ、そのため、生理学的ｐＨでカチオン性であり、かつ可溶性であるポリマーが得られる。学会発表＃３６１で、グラフトは、ヒスチジン誘導体ではなく、イミダゾール誘導体、１−（３−アミノプロピルイミダゾール）である。少数の論文には、ヒスチジン誘導体で官能化されたポリリジンが記載されている。Ｍ．Ｂｉｋｒａｍらの論文「非ウイルス性遺伝子送達のための生分解性ポリ（エチレングリコール）−ｃｏ−ポリ（Ｌ−リジン）−ｇ−ヒスチジンマルチブロックコポリマー（Biogradable Poly(ethylene glycol)-co-poly(L-lysine)-g-histidine Multiblock Copolymers for Nonviral Gene Delivery）」Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ、３７巻、１９０３〜１９１６頁、２００４年には、リジンのペンダントアミンを介するＮ−ジメチルヒスチジンのｃｏ−ポリエチレングリコール−ポリリジンへのカップリングが記載されている。これらのポリマーは、遺伝子療法戦略で採用され、かくして、ＤＮＡと組み合わせるのに使用される、ヒスチジンの役割は、細胞へのトランスフェクションを促進することであり、このアミノ酸は、エンドソーム中でカチオン性である。ポリマー／ＤＮＡの分離は、このようにしてエンドソーム中での静電反発によって促進される。これらのポリマーは、中性ｐＨでカチオン性である。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００２３】
したがって、従来技術において、薬剤として活性のある成分のベクター化のために、たとえ、多くの技術的解決策が開発、提供されても、すべての要求に対する回答を得て改善できるように維持することは困難である、より具体的には、本発明は、活性成分と可逆的に一緒に会合する能力があるコロイド状ナノ粒子またはミクロ粒子に変換できる、ベクター化のための生分解性ポリアミノ酸に関する。
【００２４】
この文脈で、本発明の本質的目的の１つは、その水相での溶解性がｐＨによって決まる、新規な直鎖または分枝の両親媒性コポリアミノ酸を提供することである。酸性ｐＨ（ｐＨ＜６）で可溶であり、生理学的ｐＨ（ｐＨ＝７．４）で不溶であるポリマーを開発することが有利である。これらのポリマーは、上述の特許または特許出願に記載のポリマーに関して、治療用タンパク質などの活性成分をベクトル化する見地からみて改善になる。
【００２５】
本発明の別の本質的目的は、ＰＡのベクター化に使用することができ、かつ要求のすべての細目、すなわち特に、
○・安定な水性コロイド状懸濁物を容易にかつ経済的に形成する能力、
・多くの活性成分と容易に一緒に会合する能力、かつ
・これらの活性成分をｉｎ ｖｉｖｏで放出する能力、
○生体適合性、
○生分解性。
○加水分解に対する安定性、
を最高に満足させることを可能にするこれらのポリマーに関する。
【課題を解決するための手段】
【００２６】
中でもこの目的は、グルタミン酸単位（ここで、これらの単位の少なくとも一部は、ヒスチジン誘導体を保持し、かつこれらの単位の少なくとも一部はペンダント性疎水基（ＧＨ）を保持し、該ヒスチジン誘導体およびＧＨはそれぞれ互いに同一または異なる）を含むポリアミノ酸に関する本発明によって達成される。
【００２７】
本発明による各ポリグルタメートは、このように、互いに同一または異なる多数のペンダント性ヒスチジン誘導体およびペンダント性疎水基（groupement hydrophobe：ＧＨ）によって官能化される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２８】
本発明の趣旨の範囲内で、用語「多数の」は、ポリグルタメートが、
*少なくとも１％〜９９％（グルタミン酸に対するモル％）のヒスチジン誘導体、
*分子あたり平均で少なくとも２つのペンダント性ＧＨ、
によって官能化されていることを意味する。本発明によれば、ポリグルタミン酸は、ペンダント性ＧＨに加えて、コポリマー鎖の末端の少なくとも１つに固定されたＧＨを示すことが可能である。
【００２９】
好ましくは、グルタミン酸単位の少なくとも１つの部分がヒスチジン誘導体を保持する場合、前記部分の各単位は、ヒスチジン誘導体を保持し、該ヒスチジン誘導体は、互いに同一であるかまたは異なり、グルタミン酸単位の少なくとも１つの部分がペンダント性疎水基（ＧＨ）を保持する場合、前記部分の各単位は、ペンダント性疎水基（ＧＨ）を保持し、該ＧＨ基は、互いに同一であるかまたは異なる。
【００３０】
好ましくは、ヒスチジン誘導体は、グルタミン酸単位に関してペンダントである。本発明の趣旨の範囲内で、表現「保持する」は、保持される基がペンダントであること、換言すれば、前記基は、グルタミン酸に関して側鎖基であり、それを保持するグルタミン酸単位のε位のカルボニル官能基の置換基であることを意味する。
【００３１】
本発明の好ましい形態によれば、ポリグルタメートは、コポリマー鎖あたり平均して少なくとも３つの疎水基（ＧＨ）を含む。
【００３２】
ポリグルタメートは、また、ヒスチジン誘導体を保持する。これらの基は、好ましくはアミド結合を介してコポリマーに結合される。
【００３３】
「ｐＨに敏感」で、生理学的ｐＨで不溶であり、多数の疎水基で官能化され、かつ安定なコロイド系を形成する能力がある、ポリグルタメートおよびヒスチジン誘導体系ポリマーの新規ファミリーを開発したことは、本出願人の功績である。ｐＨの関数としてポリマーの溶解性を変更する能力は、放出時間を延長することにおいて極めて有効であることが立証できる。生理学的条件下でやはり不溶であるＰＬＡＧＡ型ポリマーは、長期の放出時間を得ることを可能にする。提供される系の利点は、その生分解性のためである。
【００３４】
これらの新規ポリマーは、タンパク質のベクター化に特に十分適していることが判明した。さらに、それらのポリマーは、酵素の存在下で容易に分解して非毒性の異化産物／代謝産物（アミノ酸）を与える。
【００３５】
本発明の趣旨の範囲内および本明細書を通して、１種または複数の活性成分と修飾されたポリグルタメートとの間の関係を記述するのに採用される用語「会合」または「会合する」は、特に、活性成分または活性成分群が、特に疎水性相互作用を介してポリグルタメート（複数可）に結合され、かつ／またはポリグルタメート（複数可）によって封じ込められることを意味する。
【００３６】
有利には、本発明によるポリアミノ酸は、例えば、α−Ｌ−グルタメートまたはα−Ｌ−グルタミン酸のホモポリマーである。
【００３７】
グルタメート単位を官能化するのに使用できるヒスチジン誘導体は、互いに同一であるかまたは異なり、１位がアミンでおよび２位がイミダゾール環によって置換されたエチルに相当する。他の置換基は、これらの２つの位置に存在できる。これらの誘導体は、例えば、ヒスチジンエステル（メチルエステルおよびエチルエステルなど）、ヒスチジノールおよびヒスタミンでもよい。これらの誘導体はまた、例えば、ヒスチジンアミド、ヒスチジンアミドのＮ−モノメチル誘導体、およびヒスチジンアミドのＮ，Ｎ’−ジメチル誘導体でもよい。
【００３８】
好ましい特性によれば、本発明のポリアミノ酸は、ポリマー鎖当たり平均で少なくとも３つの疎水基（ＧＨ）を含む。
【００３９】
有利には、少なくとも１つの疎水基ＧＨは、疎水基ＧＨをポリグルタメート鎖（例えば、ポリグルタメート骨格主鎖）に連結することを可能にする少なくとも１つの間隔をあける接合部分（または単位）（スペーサー）を含む疎水性グラフト中に含められる。この接合部分は、例えば、少なくとも１つの直接的共有結合および／または少なくとも１つのアミド結合および／または少なくとも１つのエステル結合を含むことができる。例えば、接合部分は、特に、ポリグルタメートの構成モノマー単位以外の「アミノ酸」単位、アミノアルコールの誘導体、ポリアミン（例えば、ジアミン）の誘導体、ポリオール（例えば、ジオール）の誘導体、およびヒドロキシ酸の誘導体を含む群に属するタイプでもよい。
【００４０】
ＧＨのポリグルタメート鎖へのグラフト化は、ポリグルタメート鎖に結合できるＧＨ前駆体の使用を含むことができる。
【００４１】
ＧＨの前駆体は、実際には、限定はされないが、アルコールおよびアミンを含む群から選択され、当業者は、これらの化合物を容易に官能化することが可能である。ＧＨのグラフト化は、本発明による修飾ポリアミノ酸の収得方法を説明する際に、以下でより詳細に説明される。
【００４２】
好ましい特性によれば、疎水性グラフトの疎水基ＧＨは、８〜３０個の炭素原子を含む。
【００４３】
これらの疎水基ＧＨは、有利には、
・少なくとも１つの不飽和および／または少なくとも１つのへテロ原子を場合によって含むことができる直鎖または分枝のＣ8〜Ｃ30アルキル、
・少なくとも１つの不飽和および／または少なくとも１つのへテロ原子を場合によって含むことができるＣ8〜Ｃ30のアルキルアリールまたはアリールアルキル、および
・少なくとも１つの不飽和および／または少なくとも１つのへテロ原子を場合によって含むことができるＣ8〜Ｃ30（ポリ）環状化合物、
を含む群から注意深く選択される。
【００４４】
ＧＨと共に疎水性グラフトを形成する接合部分は、二価、三価または四価の接合部分（さらには五価以上）でもよい。二価の接合部分の場合、疎水性グラフトは、１つのみのＧＨ基を含み、一方、三価の接合部分は、疎水性グラフトに二又の性質を付与する、換言すれば、該グラフトは、２つのＧＨ「足」を示す。三価の接合部分としては、とりわけ「アミノ酸」単位、例えば「グルタミン酸」あるいはポリオール残基、例えばグリセロールを挙げることができる。したがって、二又のＧＨを含む疎水性グラフトの２つの有利ではあるが非制限的例が、ジアルキルグリセロールおよびジアルキルグルタメートである。
【００４５】
疎水基ＧＨは、例えば、オクタノール、ドデカノール、テトラデカノール、ヘキサデカノール、オクタデカノール、オレイルアルコール、トコフェロール、およびコレステロールを含む群から選択される基から誘導されることができる。
【００４６】
好ましくは、本発明によるポリグルタメートの骨格は、α−Ｌ−グルタメートおよび／またはα−Ｌ−グルタミン酸単位を含む。
【００４７】
より好ましくは、さらに、本発明によるポリグルタメートは、次の一般式（Ｉ）
【００４８】
【化２】
の中の１つに相当し、式中、
・Ａは、独立に、
ＮＨＲ基（ここで、Ｒは、Ｈ、直鎖Ｃ2〜Ｃ10または分枝Ｃ3〜Ｃ10のアルキル、あるいはベンジルを表す）、
窒素を介して結合した末端アミノ酸単位（その酸官能基（複数可）は、ＮＨＲおよびＯＲの定義にそれぞれ対応するアミンまたはアルコールによって場合によって修飾されている）
を表し、
・Ｂは、次の基、すなわち
−Ｏ−、−ＮＨ−、−Ｎ−（Ｃ1〜Ｃ5）アルキル−、アミノ酸残基（好ましくは天然アミノ酸の）、１〜６個の炭素原子を含むジオール、トリオール、ジアミン、トリアミン、アミノアルコール、またはヒドロキシ酸から好ましくは選択される二価、三価または四価の結合基であり、
・Ｄは、Ｈ、直鎖Ｃ2〜Ｃ10または分枝Ｃ3〜Ｃ10のアシル基、あるいはピログルタメートを表し、
・疎水基（ＧＨ）は、それぞれ、互いに独立に、
・少なくとも１つの不飽和および／または少なくとも１つのへテロ原子（好ましくは、Ｏおよび／またはＮおよび／またはＳ）を場合によって含むことができる直鎖または分枝のＣ8〜Ｃ30アルキル、あるいは
・少なくとも１つの不飽和および／または少なくとも１つのへテロ原子（好ましくは、Ｏおよび／またはＮおよび／またはＳ）を場合によって含むことができるＣ8〜Ｃ30のアルキルアリールまたはアリールアルキル、あるいは
・少なくとも１つの不飽和および／または少なくとも１つのへテロ原子（好ましくは、Ｏおよび／またはＮおよび／またはＳ）を場合によって含むことができるＣ8〜Ｃ30（ポリ）環状化合物
から選択される基を表し、
・Ｒ１は、アミンを介して結合したエタノールアミン、またはＯＸ基を表し、ここで、Ｘは、Ｈまたは、
−ナトリウム、カリウム、カルシウムおよびマグネシウムを含むサブグループから有利に選択される金属カチオン、
−・アミン系カチオン、
・オリゴアミン系カチオン、
・ポリアミン系カチオン（ポリエチレンイミンが特に好ましい）、
・リジン系またはアルギニン系カチオン
を含む部類から有利には選択されるアミノ酸（複数可）系カチオン
を含むサブグループから有利に選択される有機カチオン、ならびに
−ポリリジンおよびオリゴリジンを含むサブグループから有利に選択されるカチオン性ポリアミノ酸
を含む群から好ましくは選択されるカチオン性実体を表し、
・Ｒ２は、アルキルエステル、好ましくはエチルエステル、ＢＧＨエステル、ＣＨ2ＯＨ基（ヒスチジノール）、Ｈ（ヒスタミン）またはＣ（Ｏ）ＮＨ2（ヒスチジンアミド）、Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ3もしくはＣ（Ｏ）Ｎ（ＣＨ3）2基を表し、
・ｍ、ｐおよびｑは、正の整数であり、
・（ｍ）／（ｍ＋ｐ＋ｑ）は、疎水基ＧＨのモルグラフト化度として定義され、１から５０モル％まで変化し、但し、各コポリマー鎖は、平均で少なくとも３つの疎水性グラフトを有し、
・（ｐ）／（ｍ＋ｐ＋ｑ）は、ヒスチジン基のモルグラフト化度として定義され１から９９％まで変化し、
・（ｍ＋ｐ＋ｑ）は、１０から１０００まで、好ましくは３０から５００の間で変化し、
・（ｑ）／（ｍ＋ｐ＋ｑ）は、０から９８モル％まで変化する。
【００４９】
好ましくは、疎水基ＧＨは、ランダムに配置される。
【００５０】
さらに、本発明によるポリグルタメートの疎水単位のモルグラフト化度は、２〜１００％が好ましく、好ましくは５〜５０％であり、但し、各ポリマー鎖は、平均で、少なくとも３つの疎水性グラフトを有する。
【００５１】
本発明によるポリグルタメートの比率（ｐ）／（ｍ＋ｐ＋ｑ）は、それらが、イミダゾール環を含む１〜ほぼ９９モル％の基を含むことができることを意味する。
【００５２】
好ましくは、上述のようなポリアミノ酸は、生理学的ｐＨで析出する能力がある。
【００５３】
本発明によるポリグルタメートの比率（ｑ）／（ｍ＋ｐ＋ｑ）は、それらが、０〜ほぼ９８モル％のカルボキシル官能基、カルボキシレート官能基またはヒドロキシエチルグルタミン官能基を含むことができることを意味する。
【００５４】
本発明の別の注目すべき特性によれば、本発明によるポリマーは、２０００〜２０００００ｇ／モル、好ましくは５０００〜１０００００ｇ／モルであるモル質量を有する。
【００５５】
代替の形態によれば、本発明によるポリグルタメートは、グルタメート単位に結合したポリアルキレン（好ましくはエチレン）グリコール型の少なくとも１つのグラフトを保持できる。
【００５６】
当然、本発明は、前に規定したような修飾されたポリアミノ酸の混合物も包含する。
【００５７】
注目に値する仕方で、本発明のポリグルタメートは、疎水基の性質およびポリグルタメートの重合度に応じて、いくつかの方式で使用される能力がある。本発明が目標とする各種形態中に活性成分を封じ込めるためのポリマーを形成する方法は、当業者に周知である。さらなる詳細については、例えば、これらの少数の特に関連のある参考文献、すなわち、
「Microspheres,Microcapsules and Liposomes；１巻、Preparation and Chemical Applications」Ｒ．Ａｒｓｈａｄｙ編、Ｃｉｔｕｓ Ｂｏｏｋｓ、１９９９年、ＩＳＢＮ：０−９５３２１８７−１−６、
「Sustained-Release Injectable Products」Ｊ．ＳｅｎｉｏｒおよびＭ．Ｒａｄｏｍｓｋｙ編、Ｉｎｔｅｒｐｈａｒｍ Ｐｒｅｓｓ、２０００年、ＩＳＢＮ：１−５７４９１−１０１−５、
「Colloidal Drug Delivery Systems」Ｊ．Ｋｒｅｕｔｅｒ編、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ,Ｉｎｃ．、１９９４年、ＩＳＢＮ：０−８２４７−９２１４−９、
「Handbook of Pharmaceutical Controlled Release Technology」Ｄ．Ｌ．Ｗｉｓｅ編、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、２０００年、ＩＳＢＮ：０−８２４７−０３６９−３、が参照される。
【００５８】
ヒスチジン誘導体で修飾されたこれらのポリグルタメートは、それらが、ｐＨ５未満（例えば酸の存在下）で水中に分散してコロイド状懸濁液または溶液を与えるという事実、およびそれらが、生理学的ｐＨ（７．４）で、塩基を添加することによって、または中性ｐＨの溶液中に分散させることによって析出（沈殿）する事実のため、さらに極めて有利である。そのため、皮下注射中に、注射部位でおそらく析出が発生するであろう。さらに、これらのポリグルタメート（粒子の形態のまたはそうではない）は、タンパク質、ペプチドまたは小分子などの活性成分を容易に会合させる、または封じ込めることができる。好ましい実施は、コポリマーを水中に分散させること、および該溶液を活性成分（ＰＡ）の存在下でインキュベートすることからなる本出願人の米国特許第６６３０１７１号に記載されるものである。続いて、本発明によるポリグルタメートを含むベクター化粒子のコロイド状溶液を、０．２μｍのフィルターを通して濾過し、次いで患者に直接的に注射できる。
【００５９】
本発明による微粒子形態のポリマーが好ましいという事実とは無関係に、中性またはイオン化形態の本発明のコポリマーは、より一般には、単独でか、または液体中、固体中もしくはゲル組成物中および水性媒体中もしくは有機媒体中で使用できる。
【００６０】
修飾されたポリグルタメートの残りのカルボキシル官能基は、ｐＨおよび組成に応じて、中性（ＣＯＯＨ型）であるかまたはイオン化（ＣＯＯ-アニオン）されることを理解されたい。水性溶液中で、対カチオンは、ナトリウム、カルシウムまたはマグネシウムなどの金属カチオン、あるいはトリエタノールアミン、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンなどの有機カチオン、あるいはポリエチレンイミンなどのポリアミンでもよい。
【００６１】
同様に、ヒスチジン誘導体のイミダゾール環は、ｐＨおよび組成に応じて、中性（Ｃ3Ｈ3Ｎ2）またはカチオン性（Ｃ3Ｈ4Ｎ2+）である。
【００６２】
本発明のコポリマーは、例えば、当業者に周知の方法によって得られる。まず、α型のポリアミノ酸を得るのに最も広く使用される技術は、例えば、論文「Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ、１９７６年、１５巻、１８６９頁」およびＨ．Ｒ．Ｋｒｉｃｈｅｌｄｏｒｆによる著作「alpha-Amino acid N-carboxy Anhydrides and related Heterocycles」Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ（１９８７年）に記載のＮ−カルボキシアミノ酸無水物（ＮＣＡ）の重合をベースにしていることを想起すべきである。ホモポリマーまたは疎水基の他の化学官能基に影響を及ぼさないでベンジル基を選択的に加水分解できるので、ＮＣＡ誘導体は、好ましくはＮＣＡ−Ｇｌｕ−Ｏ−Ｂｚ（Ｂｚ＝ベンジル）である。
【００６３】
本発明により使用できるいくつかのポリマー、例えば、変更可能な分子量をもつポリ（α−Ｌ−グルタミン酸）、ポリ（α−Ｄ−グルタミン酸）、ポリ（α−Ｄ，Ｌ−グルタメート）およびポリ（γ−Ｌ−グルタミン酸）型のポリマーが、商業的に入手できる。
【００６４】
好ましくは、本発明のコポリマーは、２つの経路により合成される。最初に、ヒスチジン誘導体（例えば、エチルヒスチジン）およびＢ−ＧＨ基（例えば、ドデシルアミン）を、まず、同時または逐次的にポリ（Ｌ−グルタミン酸）にグラフト化する。この反応は、ＤＭＦ、ＤＭＳＯまたはＮＭＰなどの溶媒中で次のスキームにしたがって起こり得る。
【００６５】
【化３】
【００６６】
上記の機構で、Ｒ１が、アミンを介して結合したエタノールアミンである場合、後者（エタノールアミン）は、合成中にヒスチジン誘導体と同時に導入される。
【００６７】
ポリ（Ｌ−グルタミン酸）は、仏国特許出願公開第Ａ−２８０１２２６号に記載の経路により合成できる。ＨＢ−ＧＨ基がエステル官能基を介して結合される場合には、カルボジイミドを使用する通常のカップリング反応により最初にＢ−ＧＨ基をグラフト化することがより容易であり、その後、ヒスチジン誘導体をグラフト化する。
【００６８】
【化４】
【００６９】
上記の機構で、Ｒ１がアミンを介して結合したエタノールアミンである場合、後者（エタノールアミン）は、合成中にヒスチジン誘導体と同時に導入される。
【００７０】
重合化学および基をカップリングするための反応は、通常のものであり、当業者に周知である（例えば、上述の本出願人の特許または特許出願を参照されたい）。
【００７１】
これらの方法は、実施例の説明を通してより十分に理解されるであろう。
【００７２】
重合度は、モノマーに対する開始剤のモル比で規定されることに注目すべきである。
【００７３】
ＧＨを含む疎水性グラフトとポリマー中の酸官能基とのカップリングは、カップリング剤としてのカルボジイミド、および場合によって、４−ジメチルアミノピリジンなどの触媒の存在下で、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）またはジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）などの適切な溶媒中で、ポリアミノ酸を反応させることによって容易に実施される。カルボジイミドは、例えば、ジシクロヘキシルカルボジイミドまたはジイソプロピルカルボジイミドである。クロロギ酸エステルなどのカップリング剤も、アミド結合を形成するのに使用できる（カップリング剤の例については、例えば、Ｂｏｄａｎｓｚｋｙの著作「Principles of Peptide Synthesis」Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ、１９８４年を参照されたい）。グラフト化度は、構成成分および反応物の化学量論または反応時間によって化学的に制御される。ポリマーのアミノ酸以外のアミノ酸で官能化された疎水性グラフトは、通常のペプチドカップリングによって、または酸触媒を用いる直接縮合によって得られる。これらの技術は、当業者に周知である。
【００７４】
本発明の別の態様によれば、本発明は、前に規定したような少なくとも１種のポリグルタメート、および場合によって、治療、化粧品、健康食品または植物保護用活性成分であることができる少なくとも１種の活性成分を含む、医薬、化粧品、健康食品または植物保護組成物を目標とする。
【００７５】
本発明の有利な取合せによれば、活性成分を、共有化学結合（複数可）以外の１つ以上の結合によって、ヒスチジン誘導体で修飾されたポリアミノ酸（複数可）と会合させる。
【００７６】
１種または複数のＰＡを本発明により修飾されたポリアミノ酸と会合させるための技術は、特に、米国特許第６６３０１７１号中に記載されている。それらの技術は、ベクター化粒子（Particles de Vectorisation：ＰＶ）を含む液体媒質中に少なくとも１種の活性成分を、１種または複数の活性成分（ＰＡ）が充填されたまたは会合したＰＶのコロイド状懸濁液を得るように組み込むことからなる。ＰＶによるＰＡの閉じ込めをもたらすこの組み込みは、次の方式、すなわち、
・ＰＡを水に溶解し、次いで、コロイド状懸濁液の形態または単離されたＰＶ形態（凍結乾燥物または析出物）いずれかのＰＶを添加する、あるいは
・溶液状態、または純粋なもしくは予備製剤化状態のＰＡを、場合によって使用時点で水などの適切な溶媒中に乾燥ＰＶを分散させることによって調製される、ＰＶ粒子のコロイド状懸濁物へ添加する方式で実施できる。
【００７７】
好ましくは、活性成分は、タンパク質、糖タンパク質、１つ以上のポリアルキレングリコール鎖（好ましくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ））に結合したタンパク質「ＰＥＧ化タンパク質」、多糖、リポ糖、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチドまたはペプチドである。
【００７８】
代替の形態によれば、活性成分は、疎水性、親水性または両親媒性の「小」有機分子である。本説明の意味の範囲内では、「小」分子は、特に小さな非タンパク質分子である。
【００７９】
本発明によるポリアミノ酸と会合する能力があるＰＡの例としては、（ナノまたはミクロ）粒子の形態によることなく、
○インスリン、インターフェロン、成長ホルモン、インターロイキン、エリスロポエチンまたはサイトカインなどのタンパク質、
○ロイプロリドまたはシクロスポリンなどのペプチド、
○アントラサイクリン、タキソイドまたはカンプトテシンのファミリーに属するものなどの小分子、および
○これらの混合物
を挙げることができる。
【００８０】
一実施形態によれば、本発明の組成物は、ゲル、溶液、エマルジョン、ミセル、ナノ粒子、ミクロ粒子、インプラント、粉末またはフィルムの形態である。
【００８１】
本発明の特に好ましい形態の１つによれば、活性成分（複数可）が充填されたまたは充填されていない組成物は、ポリアミノ酸のナノ粒子および／またはミクロ粒子および／またはミセルの水相中の安定なコロイド状懸濁液である。
【００８２】
別に実施形態によれば、本発明の組成物は、生体適合性溶媒中の溶液形態であり、皮下または筋肉内であるいは腫瘍中に注射することができる。
【００８３】
本発明による組成物は、それが医薬組成物である場合には、経口、非経口、経鼻、経膣、眼、皮下、静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内、脳内または口腔内で投与できる。
【００８４】
該組成物が、皮下または筋肉内あるいは腫瘍中に注射できる、生体適合性溶媒または生体適合性溶媒混合物中の溶液の形態であることも考慮に入れることができる。
【００８５】
別の実施形態によれば、該組成物は、ｐＨおよび／または浸透圧を調節するために、ならびに／あるいは安定性を改善するために（抗酸化剤）、ならびに／あるいは抗微生物剤として賦形剤を場合によって含むことができる。これらの賦形剤は、当業者に周知である（Ｐ．Ｋ．Ｇｕｐｔａらによる著作「Injectable Drug Development」、Ｉｎｔｅｒｐｈａｒｍａ Ｐｒｅｓｓ、Ｄｅｎｖｅｒ，コロラド州、１９９９年を参照）。
【００８６】
別の代替の形態によれば、本発明による組成物は、それが注射部位に沈積物を形成し得るような方式で製剤化される。該沈着は、例えば、ｉｎ ｖｉｖｏで存在する生理学的タンパク質によって少なくとも部分的にもたらされ得る。
【００８７】
別の代替の形態によれば、本発明による組成物は、該組成物が前に規定した通りの式Ｉのポリアミノ酸を含むことを特徴とする。
【００８８】
好ましくは、この組成物は、生理学的ｐＨで析出する能力がある。
【００８９】
本発明は、また、本発明によるポリアミノ酸、ならびに
・特に、経口、経鼻、経膣、眼、皮下、静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内または脳内投与のための薬剤［これらの薬剤の活性成分は、特に、タンパク質、糖タンパク質、１つ以上のポリアルキレングリコール鎖（例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ））に結合したタンパク質（以後、用語「ＰＥＧ化タンパク質」を使用する）、ペプチド、多糖、リポ糖、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチドおよび疎水性、親水性または両親媒性小有機分子であり得る］、および／または
・栄養分、および／または
・化粧品もしくは植物保護用製品
を調製するのに使用できる活性成分を含む組成物を目標にする。
【００９０】
この方法は、本質的には、上記に規定されたような少なくとも１種のホモポリアミノ酸および／または前述の組成物を利用することからなる。
【００９１】
本発明は、また、本説明に記載されるような組成物を、経口、非経口、経鼻、経膣、眼、皮下、静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内、脳内または口腔内で投与することからなることを本質とする治療方法に関する。
【００９２】
本発明の具体的な代替形態によれば、この治療方法は、前記のような組成物を、生体適合性溶媒中の溶液形態にすること、次いで、その溶液を皮下または筋肉内であるいは腫瘍中に、好ましくはそれが注射部位に沈積物を形成するように注射することからなることを本質とする。
【００９３】
以下、本発明のポリマーの合成、それらポリマーのＰＡベクター化系（安定な水性コロイド状懸濁液）への変換、およびこのような系がタンパク質と一緒に会合して医薬組成物を形成する能力の例証を記載する実施例から、本発明はより十分に理解され、その利点および代替の実施形態が明瞭となろう。
【実施例】
【００９４】
（実施例１）：ポリマー（１）の合成
【化５】
５％のラセミα−トコフェロールでランダムにグラフト化された重合度（ＤＰ）が２２０のポリ（グルタミン酸）６ｇを、８６ｍＬのＤＭＦに８０℃で加熱して溶解する。この溶液を０℃まで冷却し、５．７４ｇのクロロギ酸イソブチルを、次いで４．２６ｇのＮ−メチルモルホリンを添加する。反応媒体を、温度を０℃に維持しながら１５分間撹拌する。同時に、２０．６ｇのヒスチジンエチルエステル二塩酸塩を１．０ＬのＤＭＦに溶解する。続いて２２．５ｍＬのトリエチルアミンを添加し、次いで、得られた溶液を、６０℃で１時間加熱し、その後、０℃まで冷却する。続いてポリマー溶液にヒスチジン溶液を添加する。反応媒体を、０℃で５分間、次いで温度を周囲温度に戻しながら１時間撹拌する。この時間の最後に、反応媒体を、まず１０ｍＬの１Ｎ ＨＣｌを添加して反応を止め、次いで、２．８Ｌの水で希釈してｐＨ２〜３とする。最終ｐＨを３に調節する。続いて、透析濾過装置で該溶液を６００ｍＬまで濃縮し、次いで、１０倍容量の生理食塩水（０．９％ＮａＣｌ）および５倍容量の水に対して洗浄する。続いて、該ポリマー溶液を３３０ｍＬまで濃縮する。そのポリマー濃度は２０ｍｇ／ｍＬであり、すなわち収率は５０％である。加水分解したポリマーをＤ2Ｏ中での1Ｈ−ＮＭＲで測定すると、ヒスチジンエステルの比率は６８％である。Ｍｎ（Ｈ2Ｏ／ＡｃＮ＝６５／５のＧＰＣで測定）は、ＰＥＯ相当値で１１．３ｋｇ／モルである。
【００９５】
（実施例２）：ポリマー（２）の合成
【化６】
５％のラセミα−トコフェロールでランダムにグラフトされた重合度（ＤＰ）が２２０のポリ（グルタミン酸）３．５ｇを、５０ｍＬのＤＭＦに８０℃で加熱して溶解する。この溶液を０℃まで冷却し、３．３５ｇのクロロギ酸イソブチルを、次いで２．４８ｇのＮ−メチルモルホリンを添加する。反応媒体を、温度を０℃に維持しながら１５分間撹拌する。同時に、８．６ｇのヒスタミン二塩酸塩を２１５ｍＬのＤＭＦに溶解する。続いて１３．０ｍＬのトリエチルアミンを添加し、得られた溶液を、４０℃で数分間加熱し、次いで、０℃まで冷却する。続いて、ヒスタミン溶液をポリマー溶液に添加する。反応媒体を、０℃で５分間、次いで温度を周囲温度に戻しながら１時間撹拌する。この時間の最後に、反応媒体を、ｐＨ２〜３で８００ｍＬの水で希釈する。最終ｐＨを３に調節する。続いて、該溶液を透析濾過装置で５００ｍＬまで濃縮し、次いで、１０倍容量の生理食塩水（０．９％ＮａＣｌ）および５倍容量の水に対して透析洗浄する。続いて、該ポリマー溶液を２３０ｍＬまで濃縮する。そのポリマー濃度は１３．７ｍｇ／ｍＬであり、すなわち収率は４９％である。加水分解したポリマーをＤ2Ｏ中での1Ｈ−ＮＭＲで測定すると、ヒスタミンの比率は７７％である。Ｍｎ（Ｈ2Ｏ／ＡｃＮ＝６５／３５のＧＰＣで測定）は、ＰＥＯ相当値で１．５ｋｇ／モルである。
【００９６】
（実施例３）：ポリマー（３）の合成
【化７】
５％のラセミα−トコフェロールでランダムにグラフトされた重合度（ＤＰ）が２２０のポリ（グルタミン酸）５ｇを、６３ｍＬのＮＭＰに８０℃で加熱して溶解する。この溶液を０℃まで冷却し、４．３３ｇのクロロギ酸イソブチルを、次いで３．６７ｍＬのＮ−メチルモルホリンを添加する。反応媒体を、温度を０℃に維持しながら１５分間撹拌する。同時に、４．２８ｇのヒスチジンエチルエステル二塩酸塩を４３ｍＬのＮＭＰに溶解する。続いて、４．４６ｍＬのトリエチルアミンを添加し、得られた溶液を、２０℃で数分間撹拌し、その後、０℃まで冷却する。続いて、ヒスチジン溶液をポリマー溶液に添加する。反応媒体を、０℃で１時間撹拌し、次いで４ｍＬのエタノールアミンを添加し、そして温度を周囲温度まで戻す。反応媒体を２０℃で５時間撹拌し、次いで、それをｐＨ２〜３で４２０ｍＬの水に希釈する。続いて、該溶液を３倍容量の生理食塩水（０．９％ＮａＣｌ）および８倍容量の水に対して透析濾過する。続いて、該ポリマー溶液を５６ｍｇ／ｇのポリマー濃度まで濃縮する。加水分解したポリマーをＤ2Ｏ中での1Ｈ−ＮＭＲで測定すると、グラフト化されたヒスチジンエチルエステルの比率は４０％であり、エタノールアミンのレベルは５５％である。
【００９７】
（実施例４）：ポリマー（４）の合成
【化８】
５％のラセミα−トコフェロールでランダムにグラフト化された重合度（ＤＰ）が２２０のポリ（グルタミン酸）３ｇを、３８ｍＬのＮＭＰに８０℃で加熱して溶解する。この溶液を０℃まで冷却し、２．７４ｇのクロロギ酸イソブチルを、次いで２．２ｍＬのＮ−メチルモルホリンを添加する。反応媒体を、温度を０℃に維持しながら１０分間撹拌する。同時に、８．６５ｇのヒスチジンアミド二塩酸塩を１０８ｍＬのＮＭＰに懸濁する。続いて、１０．６ｍＬのトリエチルアミンを添加し、得られた懸濁液を、２０℃で数分間撹拌し、その後、０℃まで冷却する。続いて、活性化されたポリマー溶液を、ヒスチジンアミド懸濁液に添加する。反応媒体を、０℃で２時間、次いで２０℃で一夜撹拌する。続いて、０．６２ｍＬの３５％ＨＣｌを、その後８３ｍＬの水を添加する。続いて、得られた溶液をｐＨ３〜４で５００ｍＬの水中に注ぎ入れる。続いて、該溶液を８倍容量の生理食塩水（０．９％ＮａＣｌ）および４倍容量の水に対して透析濾過する。続いて、該ポリマー溶液を３００ｍＬまで濃縮する（１８ｍｇ／ｇのポリマー濃度）。Ｄ2Ｏ中での1Ｈ−ＮＭＲで測定すると、グラフト化されたヒスチジンアミドの比率は９５％である。
【００９８】
（比較実施例５）：ヒスチジン誘導体で官能化されていない化合物Ｃ１
比較化合物Ｃ１は、ヒスチジン誘導体で修飾されたポリグルタメートの前駆体（そのアニオン型）、すなわち、５％のラセミα−トコフェロールでランダムにフラフトされたＤＰが２２０のポリグルタメートである。この化合物は、国際公開第０３／１０４３０３号に記載の方法によって得られる。
【００９９】
（実施例６）：ｐＨの関数としての析出性の研究
結果は、本発明のポリマーが、化合物Ｃ１とは対照的に、ほぼ６未満のｐＨ値で可溶であり、ｐＨが６を超えるようになると析出することを示している。
【０１００】
【表１】
【０１０１】
（実施例７）：ゼータ電位の測定
酸性ｐＨでのカチオン的性質および中性ｐＨ超でのアニオン的性質を確認するために、ポリマー１のゼータ電位を、これが可溶であるｐＨ４およびｐＨ８の２つのｐＨ値で測定した。得られた値は、ｐＨ４で＋５３ｍＶ、ｐＨ８で−３７ｍＶである。対照的に、ポリマーＣ１は、中性ｐＨで−７０ｍＶのゼータ電位を有する。
【０１０２】
（実施例８）：治療用タンパク質、ｈＧＨの安定化
ポリマー１を、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）と共に次の比率、ポリマー１：５０ｍｇ／ｇ＋ｈＧＨ：５ｍｇ／ｇ、ｐＨ＝５で製剤した。
【０１０３】
ｈＧＨは、５．４の等電点を有し、本来的にはｐＨ５で不溶である。実際には、製剤は澄明である。したがって、タンパク質は、ポリマー１により溶液中で安定化される。
【０１０４】
この製剤は、中性ｐＨに緩衝化された溶液（ＰＢＳ溶液）中に注入されると、析出する。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
グルタミン酸単位を含むポリアミノ酸であって、これらの単位の少なくとも一部がヒスチジン誘導体を保持し、かつこれらの単位の少なくとも一部がペンダント疎水基（ＧＨ）を保持し、該ヒスチジン誘導体およびＧＨがそれぞれ互いに同一であるかまたは異なるポリアミノ酸。
【請求項２】
ヒスチジン誘導体を保持する少なくとも一部のグルタミン酸単位に関して、前記部分の各単位はヒスチジン誘導体を保持し、該ヒスチジン誘導体は互いに同一であるかまたは異なり、かつ、ペンダント疎水基（ＧＨ）を保持する少なくとも一部のグルタミン酸単位に関して、前記部分の各単位はペンダント疎水基（ＧＨ）を保持し、該基ＧＨは互いに同一であるかまたは異なる、請求項１に記載のポリアミノ酸。
【請求項３】
ヒスチジン誘導体が、グルタミン酸単位に関してペンダントである、前記請求項のいずれか一項に記載のポリアミノ酸。
【請求項４】
ヒスチジン誘導体が、アミド結合を介してグルタミン酸単位にグラフトされている、前記請求項のいずれか一項に記載のポリアミノ酸。
【請求項５】
α−Ｌ−グルタメートまたはα−Ｌ−グルタミン酸のホモポリマーを含む、請求項１に記載のポリアミノ酸。
【請求項６】
ヒスチジン誘導体が、互いに同一であるかまたは異なり、かつ、次の基、すなわち、ヒスチジンエステル、好ましくはメチルエステルおよびエチルエステル、ヒスチジノールまたはヒスタミンから選択される、前記請求項のいずれか一項に記載のポリアミノ酸。
【請求項７】
ヒスチジン誘導体が、互いに同一であるかまたは異なり、かつ、次の基、すなわち、ヒスチジンアミド、ヒスチジンアミドのＮ−モノメチル誘導体、およびヒスチジンアミドのＮ，Ｎ’−ジメチル誘導体から選択される、請求項１から５のいずれか一項に記載のポリアミノ酸。
【請求項８】
ポリマー鎖当たり平均で少なくとも３つの疎水基（ＧＨ）を含む、前記請求項のいずれか一項に記載のポリアミノ酸。
【請求項９】
疎水基ＧＨが、
・少なくとも１つの不飽和および／または少なくとも１つのへテロ原子を場合によって含むことができる直鎖または分枝のＣ8〜Ｃ30アルキル、
・少なくとも１つの不飽和および／または少なくとも１つのへテロ原子を場合によって含むことができるＣ8〜Ｃ30のアルキルアリールまたはアリールアルキル、および
・少なくとも１つの不飽和および／または少なくとも１つのへテロ原子を場合によって含むことができるＣ8〜Ｃ30（ポリ）環状化合物
を含む群から選択される、請求項８に記載のポリアミノ酸。
【請求項１０】
疎水基ＧＨの少なくとも１つが、オクタノール、ドデカノール、テトラデカノール、ヘキサデカノール、オクタデカノール、オレイルアルコール、トコフェロールおよびコレステロールを含む群から選択される前駆体から出発するグラフト化によって得られる、前記請求項のいずれか一項に記載のポリアミノ酸。
【請求項１１】
次の一般式（Ｉ）
【化１】
［式中、
・Ａは、独立に、
ＮＨＲ基（ここで、Ｒは、Ｈ、直鎖Ｃ2〜Ｃ10または分枝Ｃ3〜Ｃ10のアルキルまたはベンジルを表す）、
窒素を介して結合した末端アミノ酸単位（その酸官能基（複数可）は、ＮＨＲおよびＯＲの定義にそれぞれ対応するアミンまたはアルコールによって場合によって修飾されている）
を表し、
・Ｂは、次の基、すなわち
−Ｏ−、−ＮＨ−、−Ｎ−（Ｃ1〜Ｃ5）アルキル−、アミノ酸残基（好ましくは天然アミノ酸の）、１〜６個の炭素原子を含むジオール、トリオール、ジアミン、トリアミン、アミノアルコールまたはヒドロキシ酸から好ましくは選択される二価、三価または四価の結合基であり、
・Ｄは、Ｈ、直鎖Ｃ2〜Ｃ10または分枝Ｃ3〜Ｃ10のアシル基、あるいはピログルタメートを表し、
・疎水基（ＧＨ）は、それぞれ、互いに独立に、
・少なくとも１つの不飽和および／または少なくとも１つのへテロ原子（好ましくは、Ｏおよび／またはＮおよび／またはＳ）を場合によって含むことができる直鎖または分枝のＣ8〜Ｃ30アルキル、
・少なくとも１つの不飽和および／または少なくとも１つのへテロ原子（好ましくは、Ｏおよび／またはＮおよび／またはＳ）を場合によって含むことができるＣ8〜Ｃ30のアルキルアリールまたはアリールアルキル、あるいは
・少なくとも１つの不飽和および／または少なくとも１つのへテロ原子（好ましくは、Ｏおよび／またはＮおよび／またはＳ）を場合によって含むことができるＣ8〜Ｃ30（ポリ）環状化合物
から選択される基を表し、
・Ｒ１は、アミンを介して結合したエタノールアミン、またはＯＸ基を表し、ここで、Ｘは、Ｈまたは、
ナトリウム、カリウム、カルシウムおよびマグネシウムを含むサブグループから有利には選択される金属カチオン、
・アミン系カチオン、
・オリゴアミン系カチオン、
・ポリアミン系カチオン（ポリエチレンイミンが特に好ましい）、
・リジン系またはアルギニン系カチオンを含む部類から有利には選択されるカチオン系アミノ酸
を含むサブグループから有利には選択される有機カチオン、および
ポリリジンおよびオリゴリジンを含むサブグループから有利には選択されるカチオン性ポリアミノ酸
を含む群から好ましくは選択されるカチオン性実体を表し、
・Ｒ２は、アルキルエステル、好ましくはエチルエステル、ＢＧＨエステル、ＣＨ2ＯＨ基（ヒスチジノール）、Ｈ（ヒスタミン）またはＣ（Ｏ）ＮＨ2（ヒスチジンアミド）、Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ3もしくはＣ（Ｏ）Ｎ（ＣＨ3）2基を表し、
・ｍ、ｐおよびｑは、正の整数であり、
・（ｍ）／（ｍ＋ｐ＋ｑ）は、疎水基ＧＨのモルグラフト化度として定義され、１から５０モル％まで変化し、但し、各コポリマー鎖は、平均で少なくとも３つの疎水性グラフトを有し、
・（ｐ）／（ｍ＋ｐ＋ｑ）は、ヒスチジン基のモルグラフト化度として定義され、１から９９モル％まで変化し、
・（ｍ＋ｐ＋ｑ）は、１０から１０００まで、好ましくは３０から５００の間で変化し、
・（ｑ）／（ｍ＋ｐ＋ｑ）は、０から９８モル％まで変化する］
の１つに相当する、請求項１〜１１のいずれか一項に記載のポリアミノ酸。
【請求項１２】
疎水基ＧＨが、ランダムに配置される、請求項１〜１２のいずれか一項に記載のポリアミノ酸。
【請求項１３】
２０００〜２０００００ｇ／モル、好ましくは５０００〜１０００００ｇ／モルのモル質量を有する、請求項１〜１２のいずれか一項に記載のポリアミノ酸。
【請求項１４】
グルタメート単位に結合しているポリアルキレン（好ましくはエチレン）グリコール型の少なくとも１つのグラフトを保持する、請求項１〜１３のいずれか一項に記載のポリアミノ酸。
【請求項１５】
請求項１〜１４のいずれか一項に記載の、ヒスチジン誘導体で修飾された少なくとも１種のポリグルタメートを含有する、医薬、化粧品、健康食品または植物保護用組成物。
【請求項１６】
少なくとも１種の活性成分を含む、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
活性成分が、ヒスチジン誘導体で修飾されたポリグルタメート（複数可）と、共有化学結合（複数可）以外の１種または複数の結合によって会合している、特に請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
活性成分が、タンパク質、糖タンパク質、１種または複数のポリアルキレングリコール鎖に結合しているタンパク質、多糖、リポ糖、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチドまたはペプチドである、請求項１６または１７に記載の組成物。
【請求項１９】
活性成分が、疎水性、親水性または両親媒性の小有機分子である、請求項１６または１７に記載の組成物。
【請求項２０】
経口、非経口、経鼻、経膣、眼、皮下、静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内、脳内または口腔内で投与できる、請求項１５〜１９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２１】
ゲル、溶液、エマルジョン、ミセル、ナノ粒子、ミクロ粒子、粉末またはフィルムの形態である、請求項１５〜２０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２２】
ヒスチジン誘導体で修飾されたポリグルタメートのナノ粒子および／またはミクロ粒子および／またはミセルの水相中コロイド状懸濁液である、請求項１５〜２１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２３】
生体適合性溶媒溶液の形態であり、皮下または筋肉内であるいは腫瘍中に注射できる、請求項１５〜２２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２４】
注射部位に沈積物を形成する能力がある、請求項２３に記載の組成物。
【請求項２５】
請求項１１に記載のポリアミノ酸を含む、請求項１５〜２４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２６】
生理学的ｐＨで析出する能力がある、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２７】
特に、経口、経鼻、経膣、眼、皮下、静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内または脳内投与のための薬剤の調製方法であって、これらの薬剤の活性成分が、特に、タンパク質、糖タンパク質、１種または複数のポリアルキレングリコール鎖に結合しているタンパク質、ペプチド、多糖、リポ糖、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド、および疎水性、親水性または両親媒性の小有機分子；ならびに／あるいは栄養分；ならびに／あるいは化粧品または植物保護用製品であることが可能であり、請求項１から１４のいずれか一項に記載の少なくとも１種のポリアミノ酸および／または請求項１５から２６のいずれか一項に記載の組成物を採用することから本質的になる調製方法。
【請求項１】
グルタミン酸単位を含むポリアミノ酸であって、これらの単位の少なくとも一部がヒスチジン誘導体を保持し、かつこれらの単位の少なくとも一部がペンダント疎水基（ＧＨ）を保持し、該ヒスチジン誘導体およびＧＨがそれぞれ互いに同一であるかまたは異なるポリアミノ酸。
【請求項２】
ヒスチジン誘導体を保持する少なくとも一部のグルタミン酸単位に関して、前記部分の各単位はヒスチジン誘導体を保持し、該ヒスチジン誘導体は互いに同一であるかまたは異なり、かつ、ペンダント疎水基（ＧＨ）を保持する少なくとも一部のグルタミン酸単位に関して、前記部分の各単位はペンダント疎水基（ＧＨ）を保持し、該基ＧＨは互いに同一であるかまたは異なる、請求項１に記載のポリアミノ酸。
【請求項３】
ヒスチジン誘導体が、グルタミン酸単位に関してペンダントである、前記請求項のいずれか一項に記載のポリアミノ酸。
【請求項４】
ヒスチジン誘導体が、アミド結合を介してグルタミン酸単位にグラフトされている、前記請求項のいずれか一項に記載のポリアミノ酸。
【請求項５】
α−Ｌ−グルタメートまたはα−Ｌ−グルタミン酸のホモポリマーを含む、請求項１に記載のポリアミノ酸。
【請求項６】
ヒスチジン誘導体が、互いに同一であるかまたは異なり、かつ、次の基、すなわち、ヒスチジンエステル、好ましくはメチルエステルおよびエチルエステル、ヒスチジノールまたはヒスタミンから選択される、前記請求項のいずれか一項に記載のポリアミノ酸。
【請求項７】
ヒスチジン誘導体が、互いに同一であるかまたは異なり、かつ、次の基、すなわち、ヒスチジンアミド、ヒスチジンアミドのＮ−モノメチル誘導体、およびヒスチジンアミドのＮ，Ｎ’−ジメチル誘導体から選択される、請求項１から５のいずれか一項に記載のポリアミノ酸。
【請求項８】
ポリマー鎖当たり平均で少なくとも３つの疎水基（ＧＨ）を含む、前記請求項のいずれか一項に記載のポリアミノ酸。
【請求項９】
疎水基ＧＨが、
・少なくとも１つの不飽和および／または少なくとも１つのへテロ原子を場合によって含むことができる直鎖または分枝のＣ8〜Ｃ30アルキル、
・少なくとも１つの不飽和および／または少なくとも１つのへテロ原子を場合によって含むことができるＣ8〜Ｃ30のアルキルアリールまたはアリールアルキル、および
・少なくとも１つの不飽和および／または少なくとも１つのへテロ原子を場合によって含むことができるＣ8〜Ｃ30（ポリ）環状化合物
を含む群から選択される、請求項８に記載のポリアミノ酸。
【請求項１０】
疎水基ＧＨの少なくとも１つが、オクタノール、ドデカノール、テトラデカノール、ヘキサデカノール、オクタデカノール、オレイルアルコール、トコフェロールおよびコレステロールを含む群から選択される前駆体から出発するグラフト化によって得られる、前記請求項のいずれか一項に記載のポリアミノ酸。
【請求項１１】
次の一般式（Ｉ）
【化１】
［式中、
・Ａは、独立に、
ＮＨＲ基（ここで、Ｒは、Ｈ、直鎖Ｃ2〜Ｃ10または分枝Ｃ3〜Ｃ10のアルキルまたはベンジルを表す）、
窒素を介して結合した末端アミノ酸単位（その酸官能基（複数可）は、ＮＨＲおよびＯＲの定義にそれぞれ対応するアミンまたはアルコールによって場合によって修飾されている）
を表し、
・Ｂは、次の基、すなわち
−Ｏ−、−ＮＨ−、−Ｎ−（Ｃ1〜Ｃ5）アルキル−、アミノ酸残基（好ましくは天然アミノ酸の）、１〜６個の炭素原子を含むジオール、トリオール、ジアミン、トリアミン、アミノアルコールまたはヒドロキシ酸から好ましくは選択される二価、三価または四価の結合基であり、
・Ｄは、Ｈ、直鎖Ｃ2〜Ｃ10または分枝Ｃ3〜Ｃ10のアシル基、あるいはピログルタメートを表し、
・疎水基（ＧＨ）は、それぞれ、互いに独立に、
・少なくとも１つの不飽和および／または少なくとも１つのへテロ原子（好ましくは、Ｏおよび／またはＮおよび／またはＳ）を場合によって含むことができる直鎖または分枝のＣ8〜Ｃ30アルキル、
・少なくとも１つの不飽和および／または少なくとも１つのへテロ原子（好ましくは、Ｏおよび／またはＮおよび／またはＳ）を場合によって含むことができるＣ8〜Ｃ30のアルキルアリールまたはアリールアルキル、あるいは
・少なくとも１つの不飽和および／または少なくとも１つのへテロ原子（好ましくは、Ｏおよび／またはＮおよび／またはＳ）を場合によって含むことができるＣ8〜Ｃ30（ポリ）環状化合物
から選択される基を表し、
・Ｒ１は、アミンを介して結合したエタノールアミン、またはＯＸ基を表し、ここで、Ｘは、Ｈまたは、
ナトリウム、カリウム、カルシウムおよびマグネシウムを含むサブグループから有利には選択される金属カチオン、
・アミン系カチオン、
・オリゴアミン系カチオン、
・ポリアミン系カチオン（ポリエチレンイミンが特に好ましい）、
・リジン系またはアルギニン系カチオンを含む部類から有利には選択されるカチオン系アミノ酸
を含むサブグループから有利には選択される有機カチオン、および
ポリリジンおよびオリゴリジンを含むサブグループから有利には選択されるカチオン性ポリアミノ酸
を含む群から好ましくは選択されるカチオン性実体を表し、
・Ｒ２は、アルキルエステル、好ましくはエチルエステル、ＢＧＨエステル、ＣＨ2ＯＨ基（ヒスチジノール）、Ｈ（ヒスタミン）またはＣ（Ｏ）ＮＨ2（ヒスチジンアミド）、Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ3もしくはＣ（Ｏ）Ｎ（ＣＨ3）2基を表し、
・ｍ、ｐおよびｑは、正の整数であり、
・（ｍ）／（ｍ＋ｐ＋ｑ）は、疎水基ＧＨのモルグラフト化度として定義され、１から５０モル％まで変化し、但し、各コポリマー鎖は、平均で少なくとも３つの疎水性グラフトを有し、
・（ｐ）／（ｍ＋ｐ＋ｑ）は、ヒスチジン基のモルグラフト化度として定義され、１から９９モル％まで変化し、
・（ｍ＋ｐ＋ｑ）は、１０から１０００まで、好ましくは３０から５００の間で変化し、
・（ｑ）／（ｍ＋ｐ＋ｑ）は、０から９８モル％まで変化する］
の１つに相当する、請求項１〜１１のいずれか一項に記載のポリアミノ酸。
【請求項１２】
疎水基ＧＨが、ランダムに配置される、請求項１〜１２のいずれか一項に記載のポリアミノ酸。
【請求項１３】
２０００〜２０００００ｇ／モル、好ましくは５０００〜１０００００ｇ／モルのモル質量を有する、請求項１〜１２のいずれか一項に記載のポリアミノ酸。
【請求項１４】
グルタメート単位に結合しているポリアルキレン（好ましくはエチレン）グリコール型の少なくとも１つのグラフトを保持する、請求項１〜１３のいずれか一項に記載のポリアミノ酸。
【請求項１５】
請求項１〜１４のいずれか一項に記載の、ヒスチジン誘導体で修飾された少なくとも１種のポリグルタメートを含有する、医薬、化粧品、健康食品または植物保護用組成物。
【請求項１６】
少なくとも１種の活性成分を含む、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
活性成分が、ヒスチジン誘導体で修飾されたポリグルタメート（複数可）と、共有化学結合（複数可）以外の１種または複数の結合によって会合している、特に請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
活性成分が、タンパク質、糖タンパク質、１種または複数のポリアルキレングリコール鎖に結合しているタンパク質、多糖、リポ糖、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチドまたはペプチドである、請求項１６または１７に記載の組成物。
【請求項１９】
活性成分が、疎水性、親水性または両親媒性の小有機分子である、請求項１６または１７に記載の組成物。
【請求項２０】
経口、非経口、経鼻、経膣、眼、皮下、静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内、脳内または口腔内で投与できる、請求項１５〜１９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２１】
ゲル、溶液、エマルジョン、ミセル、ナノ粒子、ミクロ粒子、粉末またはフィルムの形態である、請求項１５〜２０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２２】
ヒスチジン誘導体で修飾されたポリグルタメートのナノ粒子および／またはミクロ粒子および／またはミセルの水相中コロイド状懸濁液である、請求項１５〜２１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２３】
生体適合性溶媒溶液の形態であり、皮下または筋肉内であるいは腫瘍中に注射できる、請求項１５〜２２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２４】
注射部位に沈積物を形成する能力がある、請求項２３に記載の組成物。
【請求項２５】
請求項１１に記載のポリアミノ酸を含む、請求項１５〜２４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２６】
生理学的ｐＨで析出する能力がある、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２７】
特に、経口、経鼻、経膣、眼、皮下、静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内または脳内投与のための薬剤の調製方法であって、これらの薬剤の活性成分が、特に、タンパク質、糖タンパク質、１種または複数のポリアルキレングリコール鎖に結合しているタンパク質、ペプチド、多糖、リポ糖、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド、および疎水性、親水性または両親媒性の小有機分子；ならびに／あるいは栄養分；ならびに／あるいは化粧品または植物保護用製品であることが可能であり、請求項１から１４のいずれか一項に記載の少なくとも１種のポリアミノ酸および／または請求項１５から２６のいずれか一項に記載の組成物を採用することから本質的になる調製方法。
【公表番号】特表２００９−５１９２１１（Ｐ２００９−５１９２１１Ａ）
【公表日】平成２１年５月１４日（２００９．５．１４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−５３７１４４（Ｐ２００８−５３７１４４）
【出願日】平成１８年１０月３１日（２００６．１０．３１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＦＲ２００６／００２４４３
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０５１９２３
【国際公開日】平成１９年５月１０日（２００７．５．１０）
【出願人】（５０５４３７３２１）フラメル・テクノロジーズ (14)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２１年５月１４日（２００９．５．１４）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年１０月３１日（２００６．１０．３１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＦＲ２００６／００２４４３
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０５１９２３
【国際公開日】平成１９年５月１０日（２００７．５．１０）
【出願人】（５０５４３７３２１）フラメル・テクノロジーズ (14)
【Ｆターム（参考）】
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