ヒトヌクレオリンに対するヒトモノクローナル抗体
本発明は、ヒトヌクレオリンに対するヒトモノクローナル抗体を生成する方法、このような抗体を生成する細胞、ならびに該抗体自体を提供する。また、悪性疾患および非悪性疾患の診断および治療において該抗体を用いる方法であって、それらの表面においてヌクレオリンを発現する細胞が、該疾患の病態生理に寄与する方法も提供される。本発明の一態様では、ヒトヌクレオリンに結合する抗体を分泌する不死化ヒトＢ細胞を生成する方法を提供し、この方法は、ＩｇＭ陽性ヒトＢ細胞の集団を得るステップと、該集団を、該ヒトＢ細胞を不死化させるエプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）、およびＩｇＭからＩｇＧへの免疫グロブリンアイソタイプのクラススイッチを誘導するサイトカイン／増殖因子／シグナル伝達剤カクテルと接触させるステップと、該不死化ならびに免疫グロブリンアイソタイプのクラススイッチを支援する条件下で細胞を培養するステップとを含む。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトヌクレオリンに結合する抗体を分泌する不死化ヒトＢ細胞を生成する方法であって、
（ａ）ＩｇＭ陽性ヒトＢ細胞の集団を得るステップと、
（ｂ）前記集団を、
（ｉ）前記ヒトＢ細胞を不死化させるエプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）、および
（ｉｉ）ＩｇＭからＩｇＧへの免疫グロブリンアイソタイプのクラススイッチを誘導するサイトカイン／増殖因子／シグナル伝達剤カクテル
と接触させるステップと、
（ｃ）前記不死化および前記免疫グロブリンアイソタイプのクラススイッチを支援する条件下で細胞を培養するステップと
を含む、方法。
【請求項２】
（ｄ）ヒトヌクレオリンに対する抗体を発現する不死化ヒトＢ細胞を選択するステップ
をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
選択するステップが、不死化Ｂ細胞の培養培地上清に対して実施されるイムノアッセイを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記サイトカインカクテルが、共起刺激シグナルをヒトＢ細胞に送達する作用物質を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記サイトカインカクテルが、抗ＩｇＭ Ｆ（ａｂ’）２インターロイキン（ＩＬ）−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＩＮＦα、ＢＡＦＦ、可溶性ＣＤ４０Ｌを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記ＩｇＭ陽性ヒトＢ細胞の集団を、末梢血、扁桃腺、骨髄、脾臓、リンパ節、臍帯血、肝臓、アフェレーシス手順、またはバフィコートから得る、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
ステップ（ｄ）の不死化ヒトＢ細胞から、重鎖および／または軽鎖の全体をコードする核酸を単離するステップをさらに含む、請求項２に記載の方法。
【請求項８】
ステップ（ｄ）の不死化ヒトＢ細胞から、重鎖および／または軽鎖の抗原結合領域をコードする核酸を単離するステップをさらに含む、請求項２に記載の方法。
【請求項９】
前記核酸を、重鎖および／または軽鎖のフレームワーク領域をコードする核酸へとクローニングするステップをさらに含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
ステップ（ｂ）が、感染時におけるＥＢＶの濃縮ステップ、遠心分離ステップ、またはこれらの両方をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
ステップ（ｃ）の後に、前記ヒトＢ細胞集団を凍結させるステップをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
ステップ（ｂ）（ｉｉ）の約０〜９６時間後にステップ（ｂ）（ｉｉ）を実施する、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
ステップ（ｂ）（ｉｉ）の約１６〜２０時間後にステップ（ｂ）（ｉｉ）を実施する、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記集団のうちの約５０％〜９９％を、ＥＢＶ感染により不死化させる、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記集団のうちの約９５％〜９９％を、ＥＢＶ感染により不死化させる、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
ステップ（ｄ）を、感染の１〜４週間後に行う、請求項２に記載の方法。
【請求項１７】
ステップ（ｄ）を、感染の２〜３週間後に行う、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
ステップ（ｄ）を、凍結保存した不死化Ｂ細胞を融解させた後に、かつ／または前記不死化Ｂ細胞に由来する凍結保存した培養培地上清を融解させた後に行う、請求項２に記載の方法。
【請求項１９】
前記Ｂ細胞が、抗原ナイーブ細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
前記Ｂ細胞が、抗原経験細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
ヒトヌクレオリンに結合するＩｇＧ抗体を発現する不死化ヒトＢ細胞。
【請求項２２】
配列番号２のタンパク質に結合するＩｇＧ抗体を発現する不死化ヒトＢ細胞。
【請求項２３】
配列番号１によりコードされるタンパク質に結合するＩｇＧ抗体を発現する不死化ヒトＢ細胞。
【請求項２４】
配列番号４を含むタンパク質に結合するＩｇＧ抗体を発現する不死化ヒトＢ細胞。
【請求項２５】
配列番号３によりコードされるタンパク質に結合するＩｇＧ抗体を発現する不死化ヒトＢ細胞。
【請求項２６】
前記ＩｇＧ抗体が、ＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２抗体、ＩｇＧ３抗体、またはＩｇＧ４抗体である、請求項２１から２５に記載の不死化ヒトＢ細胞。
【請求項２７】
前記ＩｇＧ抗体が、ＩｇＧ１抗体である、請求項２１から２５に記載の不死化ヒトＢ細胞。
【請求項２８】
前記ＩｇＧ抗体が、カッパ軽鎖を含む、請求項２１から２５に記載の不死化ヒトＢ細胞。
【請求項２９】
前記ＩｇＧ抗体が、ラムダ軽鎖を含む、請求項２１から２５に記載の不死化ヒトＢ細胞。
【請求項３０】
ＥＢＶにより不死化させた、請求項２１から２５に記載の不死化ヒトＢ細胞。
【請求項３１】
Ｔ−５Ｄ１、Ｖ−３Ｈ１１（３Ｇ５）、Ｔ−２Ｄ３、Ｔ−７Ｇ７（１Ｈ９）、Ｔ−２Ｈ３、Ｔ−９Ｆ９、Ｔ−８Ｇ４、またはＴ−Ｐ１Ｃ６と命名されている、請求項２１に記載の不死化ヒトＢ細胞。
【請求項３２】
受託番号＿＿＿として寄託されている不死化ヒトＢ細胞であって、それぞれ、クローン５Ｄ１、クローン３Ｈ１１（３Ｇ５）、クローン２Ｄ３、クローン７Ｇ７（１Ｈ９）、クローン２Ｈ３、クローン９Ｆ９、クローン８Ｇ４、またはクローンＰ１Ｃ６と命名されており、２０１０年１１月１７日に、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに寄託されている不死化ヒトＢ細胞。
【請求項３３】
請求項２１から２５に記載の細胞により生成される、単離抗体またはその断片。
【請求項３４】
モノクローナル抗体またはその断片である、請求項３３に記載の単離抗体またはその断片。
【請求項３５】
ヒトに対して実質的に非免疫原性である、請求項３３に記載の単離抗体またはその断片。
【請求項３６】
ヒト抗体またはその断片である、請求項３３に記載の単離抗体またはその断片。
【請求項３７】
配列番号４のタンパク質に特異的に結合する、単離ヒトモノクローナル抗体またはその断片。
【請求項３８】
ＭＣＦ−７細胞およびヒトＡＢ血清と共に４８時間にわたりインキュベートすると、前記ＭＣＦ−７細胞の集団のうちの少なくとも２０％を死滅させる、請求項３３から３７に記載の単離抗体またはその断片。
【請求項３９】
ＭＣＦ−７細胞およびヒトＡＢ血清と共に４８時間にわたりインキュベートすると、ＭＶ４−１１細胞の集団のうちの少なくとも２０％を死滅させる、請求項３３から３７に記載の単離抗体またはその断片。
【請求項４０】
ヒトヌクレオリンのＲＮＡ結合ドメインに結合する、請求項３３から３７に記載の単離抗体またはその断片。
【請求項４１】
ヒトヌクレオリンのＲＮＡ結合ドメインを不活化させる、請求項３３から３７に記載の単離抗体またはその断片。
【請求項４２】
癌細胞に対する補体依存性細胞傷害を誘導する、請求項３３から３７に記載の単離抗体またはその断片。
【請求項４３】
癌細胞に対する補体非依存性細胞傷害を誘導する、請求項３３から３７に記載の単離抗体またはその断片。
【請求項４４】
接触時に癌細胞においてアポトーシスを誘導する、請求項３３から３７に記載の単離抗体またはその断片。
【請求項４５】
ＡＭＬ癌細胞、ＣＬＬ癌細胞、または乳癌細胞を阻害するかまたは死滅させる、請求項３３から３７に記載の単離抗体またはその断片。
【請求項４６】
癌細胞におけるＢＣＬ−２レベルを低減する、請求項３３から３７に記載の単離抗体またはその断片。
【請求項４７】
ヒトヌクレオリンタンパク質に特異的に結合する単離抗体またはその断片であって、ＭＣＦ−７細胞およびヒトＡＢ血清と共に４８時間にわたりインキュベートすると、前記ＭＣＦ−７細胞の集団のうちの少なくとも２０％を死滅させる、単離抗体またはその断片。
【請求項４８】
ヒトヌクレオリンタンパク質に特異的に結合する単離抗体またはその断片であって、ＭＣＦ−７細胞およびヒトＡＢ血清と共に４８時間にわたりインキュベートすると、ＭＶ４−１１細胞の集団のうちの少なくとも２０％を死滅させる、単離抗体またはその断片。
【請求項４９】
前記ヒトヌクレオリンのアミノ酸配列が、配列番号２を含む、請求項４７または４８に記載の抗体またはその断片。
【請求項５０】
配列番号２のアミノ酸残基１〜２８３からなるアミノ酸配列に結合する、請求項４７または４８に記載の抗体またはその断片。
【請求項５１】
モノクローナル抗体またはその断片である、請求項４７または４８に記載の抗体またはその断片。
【請求項５２】
ヒトに対して実質的に非免疫原性である、請求項４７または４８に記載の抗体またはその断片。
【請求項５３】
ヒト抗体またはその断片である、請求項４７または４８に記載の抗体またはその断片。
【請求項５４】
ヒトヌクレオリンのＲＮＡ結合ドメインに結合する、請求項４７または４８に記載の抗体またはその断片。
【請求項５５】
ヒトヌクレオリンのＲＮＡ結合ドメインを不活化させる、請求項４７または４８に記載の抗体またはその断片。
【請求項５６】
診断剤または治療剤に連結されている、請求項４７または４８に記載の抗体またはその断片。
【請求項５７】
癌細胞に対する補体依存性細胞傷害を呈示する、請求項４７または４８に記載の抗体またはその断片。
【請求項５８】
癌細胞に対する補体非依存性細胞傷害を呈示する、請求項４７または４８に記載の抗体またはその断片。
【請求項５９】
接触時に癌細胞においてアポトーシスを誘導する、請求項４７または４８に記載の抗体またはその断片。
【請求項６０】
ＡＭＬ癌細胞、ＣＬＬ癌細胞、または乳癌細胞を阻害するかまたは死滅させる、請求項４７または４８に記載の抗体またはその断片。
【請求項６１】
癌細胞におけるＢＣＬ−２レベルを低減する、請求項４７または４８に記載の抗体またはその断片。
【請求項６２】
診断剤に連結されている、請求項４７または４８に記載の抗体またはその断片。
【請求項６３】
前記診断剤が、放射性核種、フルオロフォア、化学発光化合物、蛍光化合物、または酵素である、請求項６２に記載の抗体またはその断片。
【請求項６４】
治療剤に連結されている、請求項４７または４８に記載の抗体またはその断片。
【請求項６５】
前記治療剤が、放射性核種、毒素、または化学療法剤部分である、請求項６４に記載の抗体またはその断片。
【請求項６６】
ヒトヌクレオリンタンパク質に特異的に結合する１または複数の単離抗体またはそれらの断片を含む抗ヌクレオリン組成物であって、ＭＣＦ−７細胞およびヒトＡＢ血清と共に４８時間にわたりインキュベートすると、前記１または複数の抗体が、前記ＭＣＦ−７細胞の集団のうちの少なくとも２０％を死滅させる、抗ヌクレオリン組成物。
【請求項６７】
前記１または複数の単離抗体またはそれらの断片が、モノクローナル抗体またはその断片である、請求項６６に記載の抗ヌクレオリン組成物。
【請求項６８】
前記１または複数の単離抗体またはそれらの断片が、ヒトに対して実質的に非免疫原性である、請求項６６に記載の抗ヌクレオリン組成物。
【請求項６９】
前記１または複数の単離抗体またはそれらの断片が、ヒト抗体またはその断片である、請求項６６に記載の抗ヌクレオリン組成物。
【請求項７０】
前記１または複数の単離抗体またはそれらの断片が、ヒトヌクレオリンのＲＮＡ結合ドメインに結合する、請求項６６に記載の抗ヌクレオリン組成物。
【請求項７１】
前記１または複数の単離抗体またはそれらの断片が、ヒトヌクレオリンのＲＮＡ結合ドメインを不活化させる、請求項６６に記載の抗ヌクレオリン組成物。
【請求項７２】
前記ヒトヌクレオリンのアミノ酸配列が、配列番号２を含む、請求項４７または４８に記載の抗体またはその断片。
【請求項７３】
前記１または複数の単離抗体またはそれらの断片が、配列番号４に結合する、請求項６６に記載の抗ヌクレオリン組成物。
【請求項７４】
放射性核種、フルオロフォア、化学発光化合物、蛍光化合物、酵素、毒素、または化学療法剤をさらに含む、請求項６６に記載の抗ヌクレオリン組成物。
【請求項７５】
前記放射性核種、フルオロフォア、化学発光化合物、蛍光化合物、酵素、毒素、または化学療法剤が、前記１または複数の単離抗体またはそれらの断片にコンジュゲートされている、請求項６６に記載の抗ヌクレオリン組成物。
【請求項７６】
前記ヒトヌクレオリンタンパク質に特異的に結合する２つ以上の単離抗体またはそれらの断片を含み、ＭＣＦ−７細胞およびヒトＡＢ血清と共に４８時間にわたりインキュベートすると、前記１または複数の抗体が、前記ＭＣＦ−７細胞の集団のうちの少なくとも２０％を死滅させる、請求項６６に記載の抗ヌクレオリン組成物。
【請求項７７】
前記ヒトヌクレオリンタンパク質に特異的に結合する３つ以上の単離抗体またはそれらの断片を含み、ＭＣＦ−７細胞およびヒトＡＢ血清と共に４８時間にわたりインキュベートすると、前記１または複数の抗体が、前記ＭＣＦ−７細胞の集団のうちの少なくとも２０％を死滅させる、請求項６６に記載の抗ヌクレオリン組成物。
【請求項７８】
ヌクレオリンをその表面に発現する細胞を阻害するかまたは死滅させる方法であって、前記細胞を、ヒトヌクレオリンに結合する抗体またはその断片と接触させるステップを含み、ＭＣＦ−７細胞およびヒトＡＢ血清と共に４８時間にわたりインキュベートすると、前記抗体またはその断片が、前記ＭＣＦ−７細胞の集団のうちの少なくとも２０％を死滅させる、方法。
【請求項７９】
前記抗体またはその断片が、ヒト抗体またはその断片である、請求項７８に記載の方法。
【請求項８０】
前記抗体またはその断片が、モノクローナル抗体またはその断片である、請求項７８に記載の方法。
【請求項８１】
前記抗体またはその断片が、配列番号２に結合する、請求項７８に記載の方法。
【請求項８２】
前記抗体またはその断片が、配列番号１によりコードされるアミノ酸配列に結合する、請求項７８に記載の方法。
【請求項８３】
前記抗体またはその断片が、配列番号４に結合する、請求項７８に記載の方法。
【請求項８４】
前記抗体またはその断片が、配列番号３によりコードされるアミノ酸配列に結合する、請求項７８に記載の方法。
【請求項８５】
前記細胞が、癌細胞である、請求項７８に記載の方法。
【請求項８６】
前記癌細胞が、肺癌細胞、乳癌細胞、前立腺癌細胞、結腸癌細胞、膵臓癌細胞、腎細胞癌細胞、卵巣癌細胞、白血病細胞、黒色腫細胞、膠芽腫細胞、神経芽腫細胞、肉腫細胞、または胃癌細胞である、請求項７８に記載の方法。
【請求項８７】
前記細胞が、免疫細胞である、請求項７８に記載の方法。
【請求項８８】
前記免疫細胞が、リンパ球、樹状細胞、末梢血単球、マクロファージ、または神経膠細胞である、請求項８７に記載の方法。
【請求項８９】
前記抗体またはその断片が、治療剤に連結されている、請求項７８から８８に記載の方法。
【請求項９０】
前記治療剤が、放射性核種、毒素、または化学療法剤である、請求項８９に記載の方法。
【請求項９１】
前記阻害するかまたは死滅させることが、前記細胞においてアポトーシスを誘導するステップを含む、請求項７８に記載の方法。
【請求項９２】
前記細胞が、ヒト被験体体内に存在し、前記接触させるステップが、前記抗体またはその断片を前記被験体に投与するステップを含む、請求項７８に記載の方法。
【請求項９３】
前記細胞を、少なくとも１つのさらなる阻害剤または治療と接触させるステップをさらに含む、請求項７８に記載の方法。
【請求項９４】
前記さらなる治療が、手術、放射線療法、化学療法、毒素療法、免疫療法、ホルモン療法、抗血管新生療法、もしくは遺伝子療法、または他の生物学的療法のうちの１または複数を含む、請求項９３に記載の方法。
【請求項９５】
前記さらなる阻害剤が、放射性核種、化学療法剤、毒素、免疫療法剤、ホルモン、核酸、またはポリペプチドのうちの１または複数を含む、請求項９３に記載の方法。
【請求項９６】
前記毒素が、ジフテリア毒素、外毒素Ａ鎖、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデクシンＡ鎖、アルファ−サルシン、Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ ｆｏｒｄｉｉタンパク質、ジアンチンタンパク質、ｐｈｙｔｏｌａｃａ ａｍｅｒｉｃａｎａタンパク質、ブタクサ抗ウイルス性タンパク質、ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ阻害剤、クルシン、クロチン、ｓａｐａｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、カリケアマイシン、またはトリコテセン毒素である、請求項９５に記載の方法。
【請求項９７】
前記化学療法剤が、アルキル化剤、アントラサイクリン、細胞骨格破壊剤、エポチロン、トポイソメラーゼＩ阻害剤、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、ヌクレオシド類似体もしくはヌクレオチド類似体、前駆体類似体、ペプチド抗生物質、白金ベースの薬剤、レチノイド、ビンカアルカロイド、またはそれらの誘導体である、請求項９５に記載の方法。
【請求項９８】
前記化学療法剤が、アクチノマイシン−Ｄ、ａｌｌ−ｔｒａｎｓレチノイン酸、アザシチジン、アドリアマイシン、アザチオプリン、ブレオマイシン、カンプトテシン、カルボプラチン、カペシタビン、シスプラチン、クロラムブシル、シクロホスファミド、シタラビン、ダウノルビシン、ドセタキセル、ドキシフルリジン、ドキソルビシン、エピルビシン、エポチロン、エトポシド、フルオロウラシル、５−フルオロウラシル（５ＦＵ）、ゲムシタビン、ヒドロキシウレア、過酸化水素、イダルビシン、イマチニブ、メクロレタミン、メルカプトプリン、メトトレキサート、マイトマイシンＣ、ミトキサントロン、オキサリプラチン、パクリタキセル、ペメトレキセド、テニポシド、チオグアニン、バルルビシン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、またはビノレルビンである、請求項９５に記載の方法。
【請求項９９】
ヌクレオリンをその表面に発現する細胞を検出する方法であって、前記細胞を、前記ヌクレオリンに免疫学的に結合するヒト抗体またはその断片と接触させるステップを含む、方法。
【請求項１００】
前記細胞が、癌細胞、免疫細胞、ヌクレオリンをその表面に発現する血管平滑筋細胞、ヌクレオリンをその表面に発現する内皮細胞、またはウイルスに感染した細胞である、請求項９９に記載の方法。
【請求項１０１】
前記細胞が、ヌクレオリンをその表面に発現する前癌性細胞である、請求項９９に記載の方法。
【請求項１０２】
前記癌細胞が、肺癌細胞、乳癌細胞、前立腺癌細胞、結腸癌細胞、膵臓癌細胞、腎細胞癌細胞、卵巣癌細胞、白血病細胞、黒色腫細胞、膠芽腫細胞、神経芽腫細胞、肉腫細胞、または胃癌細胞からなる群から選択される、請求項９９に記載の方法。
【請求項１０３】
前記免疫細胞が、リンパ球、樹状細胞、末梢血単球、マクロファージ、または神経膠細胞である、請求項９９に記載の方法。
【請求項１０４】
前記細胞が、免疫細胞である、請求項９９に記載の方法。
【請求項１０５】
前記免疫細胞が、活性化免疫細胞である、請求項９９に記載の方法。
【請求項１０６】
前記免疫細胞が、活性化Ｂ細胞である、請求項９９に記載の方法。
【請求項１０７】
前記免疫細胞が、メモリーＢ細胞である、請求項９９に記載の方法。
【請求項１０８】
前記免疫細胞が、活性化Ｔ細胞である、請求項９９に記載の方法。
【請求項１０９】
前記免疫細胞が、活性化ＣＤ４＋Ｔ細胞である、請求項９９に記載の方法。
【請求項１１０】
前記免疫細胞が、活性化ＣＤ８＋Ｔ細胞である、請求項９９に記載の方法。
【請求項１１１】
前記細胞が、血管平滑筋細胞または内皮細胞である、請求項９９に記載の方法。
【請求項１１２】
前記抗体またはその断片が、診断剤に連結されている、請求項９９に記載の方法。
【請求項１１３】
前記診断剤が、放射性核種、フルオロフォア、化学発光化合物、蛍光化合物、量子ドット、ナノ粒子、または酵素である、請求項１１２に記載の方法。
【請求項１１４】
前記細胞が、ヒト被験体体内に存在し、前記接触させるステップが、前記抗体またはその断片を前記被験体に投与するステップを含む、請求項９９に記載の方法。
【請求項１１５】
前記細胞が、単離組織試料中または単離細胞懸濁液中に存在する、請求項９９に記載の方法。
【請求項１１６】
哺乳動物における癌を治療または予防する方法であって、前記哺乳動物に、治療有効量の抗ヌクレオリン剤および薬学的に許容される担体を投与するステップを含み、前記抗ヌクレオリン剤が、抗ヌクレオリン抗体またはその断片を含み、ＭＣＦ−７細胞およびヒトＡＢ血清と共に４８時間にわたりインキュベートすると、前記抗体またはその断片が、前記ＭＣＦ−７細胞の集団のうちの少なくとも２０％を死滅させる、方法。
【請求項１１７】
哺乳動物における癌を治療または予防する方法であって、前記哺乳動物に、治療有効量の抗ヌクレオリン抗体もしくはその断片、毒素、または化学療法剤および薬学的に許容される担体を投与するステップを含み、ＭＣＦ−７細胞およびヒトＡＢ血清と共に４８時間にわたりインキュベートすると、前記抗体またはその断片が、前記ＭＣＦ−７細胞の集団のうちの少なくとも２０％を死滅させる、方法。
【請求項１１８】
哺乳動物における癌を治療または予防する方法であって、前記哺乳動物に、治療有効量の抗ヌクレオリン抗体またはその断片および薬学的に許容される担体を投与するステップと、前記哺乳動物を放射線療法でさらに治療するステップとを含み、ＭＣＦ−７細胞およびヒトＡＢ血清と共に４８時間にわたりインキュベートすると、前記抗体またはその断片が、前記ＭＣＦ−７細胞の集団のうちの少なくとも２０％を死滅させる、方法。
【請求項１１９】
哺乳動物における癌を治療または予防する方法であって、前記哺乳動物に、治療有効量の抗ヌクレオリン剤および薬学的に許容される担体を投与するステップを含み、前記抗ヌクレオリン剤が、配列番号４のタンパク質に特異的に結合する抗ヌクレオリン抗体またはその断片を含む、方法。
【請求項１２０】
哺乳動物における癌を治療または予防する方法であって、前記哺乳動物に、治療有効量の抗ヌクレオリン抗体もしくはその断片、毒素、または化学療法剤および薬学的に許容される担体を投与するステップを含み、前記抗体またはその断片が、配列番号４のタンパク質に特異的に結合する、方法。
【請求項１２１】
哺乳動物における癌を治療または予防する方法であって、前記哺乳動物に、治療有効量の抗ヌクレオリン抗体またはその断片および薬学的に許容される担体を投与するステップと、前記哺乳動物を放射線療法でさらに治療するステップとを含み、前記抗体またはその断片が、配列番号４のタンパク質に特異的に結合する、方法。
【請求項１２２】
前記哺乳動物が、ヒトである、請求項１１６から１２１に記載の方法。
【請求項１２３】
前記抗ヌクレオリン抗体またはその断片が、ヒトに対して実質的に非免疫原性である、請求項１１６から１２１に記載の方法。
【請求項１２４】
前記抗ヌクレオリン抗体またはその断片が、ヒト抗体またはその断片である、請求項１１６から１２１に記載の方法。
【請求項１２５】
前記抗ヌクレオリンモノクローナル抗体またはその断片が、モノクローナル抗体またはその断片である、請求項１１６から１２１に記載の方法。
【請求項１２６】
前記毒素が、ジフテリア毒素、外毒素Ａ鎖、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデクシンＡ鎖、アルファ−サルシン、Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ ｆｏｒｄｉｉタンパク質、ジアンチンタンパク質、ｐｈｙｔｏｌａｃａ ａｍｅｒｉｃａｎａタンパク質、ブタクサ抗ウイルス性タンパク質、ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ阻害剤、クルシン、クロチン、ｓａｐａｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、カリケアマイシン、またはトリコテセン毒素である、請求項１１６から１２１に記載の方法。
【請求項１２７】
前記化学療法剤が、アルキル化剤、アントラサイクリン、細胞骨格破壊剤、エポチロン、トポイソメラーゼＩ阻害剤、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、ヌクレオシド類似体もしくはヌクレオチド類似体、前駆体類似体、ペプチド抗生物質、白金ベースの薬剤、レチノイド、ビンカアルカロイド、またはこれらの誘導体である、請求項１１６から１２１に記載の方法。
【請求項１２８】
前記化学療法剤が、アクチノマイシン−Ｄ、ａｌｌ−ｔｒａｎｓレチノイン酸、アザシチジン、アドリアマイシン、アザチオプリン、ブレオマイシン、カンプトテシン、カルボプラチン、カペシタビン、シスプラチン、クロラムブシル、シクロホスファミド、シタラビン、ダウノルビシン、ドセタキセル、ドキシフルリジン、ドキソルビシン、エピルビシン、エポチロン、エトポシド、フルオロウラシル、５−フルオロウラシル（５ＦＵ）、ゲムシタビン、ヒドロキシウレア、過酸化水素、イダルビシン、イマチニブ、メクロレタミン、メルカプトプリン、メトトレキサート、マイトマイシンＣ、ミトキサントロン、オキサリプラチン、パクリタキセル、ペメトレキセド、テニポシド、チオグアニン、バルルビシン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、またはビノレルビンである、請求項１１６から１２１に記載の方法。
【請求項１２９】
ＭＣＦ−７細胞およびヒトＡＢ血清と共に４８時間にわたりインキュベートすると、前記ＭＣＦ−７細胞の集団のうちの少なくとも５０％を死滅させる、抗ヌクレオリン剤。
【請求項１３０】
ＭＣＦ−７細胞およびＭＣＦ１０Ａ細胞の個別の集団および熱不活化血清と共に７２または９６時間にわたりインキュベートすると、ＭＣＦ１０Ａ細胞より多くのＭＣＦ−７細胞を死滅させる、抗ヌクレオリン剤。
【請求項１３１】
ＭＣＦ−７細胞およびＭＣＦ１０Ａ細胞の個別の集団およびヒトＡＢ血清と共に９６時間にわたりインキュベートすると、ＭＣＦ１０Ａ細胞より多くのＭＣＦ−７細胞を死滅させる、抗ヌクレオリン剤。
【請求項１３２】
配列番号４のタンパク質に特異的に結合し、それらの細胞表面においてヌクレオリンを発現する１または複数の癌細胞を阻害するかまたは死滅させる、抗ヌクレオリン剤。
【請求項１３３】
ヒトに対して実質的に非免疫原性である、請求項１２９から１３２に記載の抗ヌクレオリン剤。
【請求項１３４】
１または複数の前癌性細胞における細胞表面ヌクレオリン発現の増大を検出することにより、被験体が癌を発生させる可能性を決定する方法。
【請求項１３５】
Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、もしくはＦｖ断片；ダイアボディー；直鎖状抗体；単鎖抗体；または抗体断片から形成される多重特異性抗体である、前記請求項のいずれかに記載の抗体。
【請求項１３６】
Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、もしくはＦｖ断片；ダイアボディー；直鎖状抗体；単鎖抗体；または抗体断片から形成される多重特異性抗体である抗体断片の使用を含む、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項１】
ヒトヌクレオリンに結合する抗体を分泌する不死化ヒトＢ細胞を生成する方法であって、
（ａ）ＩｇＭ陽性ヒトＢ細胞の集団を得るステップと、
（ｂ）前記集団を、
（ｉ）前記ヒトＢ細胞を不死化させるエプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）、および
（ｉｉ）ＩｇＭからＩｇＧへの免疫グロブリンアイソタイプのクラススイッチを誘導するサイトカイン／増殖因子／シグナル伝達剤カクテル
と接触させるステップと、
（ｃ）前記不死化および前記免疫グロブリンアイソタイプのクラススイッチを支援する条件下で細胞を培養するステップと
を含む、方法。
【請求項２】
（ｄ）ヒトヌクレオリンに対する抗体を発現する不死化ヒトＢ細胞を選択するステップ
をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
選択するステップが、不死化Ｂ細胞の培養培地上清に対して実施されるイムノアッセイを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記サイトカインカクテルが、共起刺激シグナルをヒトＢ細胞に送達する作用物質を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記サイトカインカクテルが、抗ＩｇＭ Ｆ（ａｂ’）２インターロイキン（ＩＬ）−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＩＮＦα、ＢＡＦＦ、可溶性ＣＤ４０Ｌを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記ＩｇＭ陽性ヒトＢ細胞の集団を、末梢血、扁桃腺、骨髄、脾臓、リンパ節、臍帯血、肝臓、アフェレーシス手順、またはバフィコートから得る、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
ステップ（ｄ）の不死化ヒトＢ細胞から、重鎖および／または軽鎖の全体をコードする核酸を単離するステップをさらに含む、請求項２に記載の方法。
【請求項８】
ステップ（ｄ）の不死化ヒトＢ細胞から、重鎖および／または軽鎖の抗原結合領域をコードする核酸を単離するステップをさらに含む、請求項２に記載の方法。
【請求項９】
前記核酸を、重鎖および／または軽鎖のフレームワーク領域をコードする核酸へとクローニングするステップをさらに含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
ステップ（ｂ）が、感染時におけるＥＢＶの濃縮ステップ、遠心分離ステップ、またはこれらの両方をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
ステップ（ｃ）の後に、前記ヒトＢ細胞集団を凍結させるステップをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
ステップ（ｂ）（ｉｉ）の約０〜９６時間後にステップ（ｂ）（ｉｉ）を実施する、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
ステップ（ｂ）（ｉｉ）の約１６〜２０時間後にステップ（ｂ）（ｉｉ）を実施する、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記集団のうちの約５０％〜９９％を、ＥＢＶ感染により不死化させる、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記集団のうちの約９５％〜９９％を、ＥＢＶ感染により不死化させる、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
ステップ（ｄ）を、感染の１〜４週間後に行う、請求項２に記載の方法。
【請求項１７】
ステップ（ｄ）を、感染の２〜３週間後に行う、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
ステップ（ｄ）を、凍結保存した不死化Ｂ細胞を融解させた後に、かつ／または前記不死化Ｂ細胞に由来する凍結保存した培養培地上清を融解させた後に行う、請求項２に記載の方法。
【請求項１９】
前記Ｂ細胞が、抗原ナイーブ細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
前記Ｂ細胞が、抗原経験細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
ヒトヌクレオリンに結合するＩｇＧ抗体を発現する不死化ヒトＢ細胞。
【請求項２２】
配列番号２のタンパク質に結合するＩｇＧ抗体を発現する不死化ヒトＢ細胞。
【請求項２３】
配列番号１によりコードされるタンパク質に結合するＩｇＧ抗体を発現する不死化ヒトＢ細胞。
【請求項２４】
配列番号４を含むタンパク質に結合するＩｇＧ抗体を発現する不死化ヒトＢ細胞。
【請求項２５】
配列番号３によりコードされるタンパク質に結合するＩｇＧ抗体を発現する不死化ヒトＢ細胞。
【請求項２６】
前記ＩｇＧ抗体が、ＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２抗体、ＩｇＧ３抗体、またはＩｇＧ４抗体である、請求項２１から２５に記載の不死化ヒトＢ細胞。
【請求項２７】
前記ＩｇＧ抗体が、ＩｇＧ１抗体である、請求項２１から２５に記載の不死化ヒトＢ細胞。
【請求項２８】
前記ＩｇＧ抗体が、カッパ軽鎖を含む、請求項２１から２５に記載の不死化ヒトＢ細胞。
【請求項２９】
前記ＩｇＧ抗体が、ラムダ軽鎖を含む、請求項２１から２５に記載の不死化ヒトＢ細胞。
【請求項３０】
ＥＢＶにより不死化させた、請求項２１から２５に記載の不死化ヒトＢ細胞。
【請求項３１】
Ｔ−５Ｄ１、Ｖ−３Ｈ１１（３Ｇ５）、Ｔ−２Ｄ３、Ｔ−７Ｇ７（１Ｈ９）、Ｔ−２Ｈ３、Ｔ−９Ｆ９、Ｔ−８Ｇ４、またはＴ−Ｐ１Ｃ６と命名されている、請求項２１に記載の不死化ヒトＢ細胞。
【請求項３２】
受託番号＿＿＿として寄託されている不死化ヒトＢ細胞であって、それぞれ、クローン５Ｄ１、クローン３Ｈ１１（３Ｇ５）、クローン２Ｄ３、クローン７Ｇ７（１Ｈ９）、クローン２Ｈ３、クローン９Ｆ９、クローン８Ｇ４、またはクローンＰ１Ｃ６と命名されており、２０１０年１１月１７日に、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに寄託されている不死化ヒトＢ細胞。
【請求項３３】
請求項２１から２５に記載の細胞により生成される、単離抗体またはその断片。
【請求項３４】
モノクローナル抗体またはその断片である、請求項３３に記載の単離抗体またはその断片。
【請求項３５】
ヒトに対して実質的に非免疫原性である、請求項３３に記載の単離抗体またはその断片。
【請求項３６】
ヒト抗体またはその断片である、請求項３３に記載の単離抗体またはその断片。
【請求項３７】
配列番号４のタンパク質に特異的に結合する、単離ヒトモノクローナル抗体またはその断片。
【請求項３８】
ＭＣＦ−７細胞およびヒトＡＢ血清と共に４８時間にわたりインキュベートすると、前記ＭＣＦ−７細胞の集団のうちの少なくとも２０％を死滅させる、請求項３３から３７に記載の単離抗体またはその断片。
【請求項３９】
ＭＣＦ−７細胞およびヒトＡＢ血清と共に４８時間にわたりインキュベートすると、ＭＶ４−１１細胞の集団のうちの少なくとも２０％を死滅させる、請求項３３から３７に記載の単離抗体またはその断片。
【請求項４０】
ヒトヌクレオリンのＲＮＡ結合ドメインに結合する、請求項３３から３７に記載の単離抗体またはその断片。
【請求項４１】
ヒトヌクレオリンのＲＮＡ結合ドメインを不活化させる、請求項３３から３７に記載の単離抗体またはその断片。
【請求項４２】
癌細胞に対する補体依存性細胞傷害を誘導する、請求項３３から３７に記載の単離抗体またはその断片。
【請求項４３】
癌細胞に対する補体非依存性細胞傷害を誘導する、請求項３３から３７に記載の単離抗体またはその断片。
【請求項４４】
接触時に癌細胞においてアポトーシスを誘導する、請求項３３から３７に記載の単離抗体またはその断片。
【請求項４５】
ＡＭＬ癌細胞、ＣＬＬ癌細胞、または乳癌細胞を阻害するかまたは死滅させる、請求項３３から３７に記載の単離抗体またはその断片。
【請求項４６】
癌細胞におけるＢＣＬ−２レベルを低減する、請求項３３から３７に記載の単離抗体またはその断片。
【請求項４７】
ヒトヌクレオリンタンパク質に特異的に結合する単離抗体またはその断片であって、ＭＣＦ−７細胞およびヒトＡＢ血清と共に４８時間にわたりインキュベートすると、前記ＭＣＦ−７細胞の集団のうちの少なくとも２０％を死滅させる、単離抗体またはその断片。
【請求項４８】
ヒトヌクレオリンタンパク質に特異的に結合する単離抗体またはその断片であって、ＭＣＦ−７細胞およびヒトＡＢ血清と共に４８時間にわたりインキュベートすると、ＭＶ４−１１細胞の集団のうちの少なくとも２０％を死滅させる、単離抗体またはその断片。
【請求項４９】
前記ヒトヌクレオリンのアミノ酸配列が、配列番号２を含む、請求項４７または４８に記載の抗体またはその断片。
【請求項５０】
配列番号２のアミノ酸残基１〜２８３からなるアミノ酸配列に結合する、請求項４７または４８に記載の抗体またはその断片。
【請求項５１】
モノクローナル抗体またはその断片である、請求項４７または４８に記載の抗体またはその断片。
【請求項５２】
ヒトに対して実質的に非免疫原性である、請求項４７または４８に記載の抗体またはその断片。
【請求項５３】
ヒト抗体またはその断片である、請求項４７または４８に記載の抗体またはその断片。
【請求項５４】
ヒトヌクレオリンのＲＮＡ結合ドメインに結合する、請求項４７または４８に記載の抗体またはその断片。
【請求項５５】
ヒトヌクレオリンのＲＮＡ結合ドメインを不活化させる、請求項４７または４８に記載の抗体またはその断片。
【請求項５６】
診断剤または治療剤に連結されている、請求項４７または４８に記載の抗体またはその断片。
【請求項５７】
癌細胞に対する補体依存性細胞傷害を呈示する、請求項４７または４８に記載の抗体またはその断片。
【請求項５８】
癌細胞に対する補体非依存性細胞傷害を呈示する、請求項４７または４８に記載の抗体またはその断片。
【請求項５９】
接触時に癌細胞においてアポトーシスを誘導する、請求項４７または４８に記載の抗体またはその断片。
【請求項６０】
ＡＭＬ癌細胞、ＣＬＬ癌細胞、または乳癌細胞を阻害するかまたは死滅させる、請求項４７または４８に記載の抗体またはその断片。
【請求項６１】
癌細胞におけるＢＣＬ−２レベルを低減する、請求項４７または４８に記載の抗体またはその断片。
【請求項６２】
診断剤に連結されている、請求項４７または４８に記載の抗体またはその断片。
【請求項６３】
前記診断剤が、放射性核種、フルオロフォア、化学発光化合物、蛍光化合物、または酵素である、請求項６２に記載の抗体またはその断片。
【請求項６４】
治療剤に連結されている、請求項４７または４８に記載の抗体またはその断片。
【請求項６５】
前記治療剤が、放射性核種、毒素、または化学療法剤部分である、請求項６４に記載の抗体またはその断片。
【請求項６６】
ヒトヌクレオリンタンパク質に特異的に結合する１または複数の単離抗体またはそれらの断片を含む抗ヌクレオリン組成物であって、ＭＣＦ−７細胞およびヒトＡＢ血清と共に４８時間にわたりインキュベートすると、前記１または複数の抗体が、前記ＭＣＦ−７細胞の集団のうちの少なくとも２０％を死滅させる、抗ヌクレオリン組成物。
【請求項６７】
前記１または複数の単離抗体またはそれらの断片が、モノクローナル抗体またはその断片である、請求項６６に記載の抗ヌクレオリン組成物。
【請求項６８】
前記１または複数の単離抗体またはそれらの断片が、ヒトに対して実質的に非免疫原性である、請求項６６に記載の抗ヌクレオリン組成物。
【請求項６９】
前記１または複数の単離抗体またはそれらの断片が、ヒト抗体またはその断片である、請求項６６に記載の抗ヌクレオリン組成物。
【請求項７０】
前記１または複数の単離抗体またはそれらの断片が、ヒトヌクレオリンのＲＮＡ結合ドメインに結合する、請求項６６に記載の抗ヌクレオリン組成物。
【請求項７１】
前記１または複数の単離抗体またはそれらの断片が、ヒトヌクレオリンのＲＮＡ結合ドメインを不活化させる、請求項６６に記載の抗ヌクレオリン組成物。
【請求項７２】
前記ヒトヌクレオリンのアミノ酸配列が、配列番号２を含む、請求項４７または４８に記載の抗体またはその断片。
【請求項７３】
前記１または複数の単離抗体またはそれらの断片が、配列番号４に結合する、請求項６６に記載の抗ヌクレオリン組成物。
【請求項７４】
放射性核種、フルオロフォア、化学発光化合物、蛍光化合物、酵素、毒素、または化学療法剤をさらに含む、請求項６６に記載の抗ヌクレオリン組成物。
【請求項７５】
前記放射性核種、フルオロフォア、化学発光化合物、蛍光化合物、酵素、毒素、または化学療法剤が、前記１または複数の単離抗体またはそれらの断片にコンジュゲートされている、請求項６６に記載の抗ヌクレオリン組成物。
【請求項７６】
前記ヒトヌクレオリンタンパク質に特異的に結合する２つ以上の単離抗体またはそれらの断片を含み、ＭＣＦ−７細胞およびヒトＡＢ血清と共に４８時間にわたりインキュベートすると、前記１または複数の抗体が、前記ＭＣＦ−７細胞の集団のうちの少なくとも２０％を死滅させる、請求項６６に記載の抗ヌクレオリン組成物。
【請求項７７】
前記ヒトヌクレオリンタンパク質に特異的に結合する３つ以上の単離抗体またはそれらの断片を含み、ＭＣＦ−７細胞およびヒトＡＢ血清と共に４８時間にわたりインキュベートすると、前記１または複数の抗体が、前記ＭＣＦ−７細胞の集団のうちの少なくとも２０％を死滅させる、請求項６６に記載の抗ヌクレオリン組成物。
【請求項７８】
ヌクレオリンをその表面に発現する細胞を阻害するかまたは死滅させる方法であって、前記細胞を、ヒトヌクレオリンに結合する抗体またはその断片と接触させるステップを含み、ＭＣＦ−７細胞およびヒトＡＢ血清と共に４８時間にわたりインキュベートすると、前記抗体またはその断片が、前記ＭＣＦ−７細胞の集団のうちの少なくとも２０％を死滅させる、方法。
【請求項７９】
前記抗体またはその断片が、ヒト抗体またはその断片である、請求項７８に記載の方法。
【請求項８０】
前記抗体またはその断片が、モノクローナル抗体またはその断片である、請求項７８に記載の方法。
【請求項８１】
前記抗体またはその断片が、配列番号２に結合する、請求項７８に記載の方法。
【請求項８２】
前記抗体またはその断片が、配列番号１によりコードされるアミノ酸配列に結合する、請求項７８に記載の方法。
【請求項８３】
前記抗体またはその断片が、配列番号４に結合する、請求項７８に記載の方法。
【請求項８４】
前記抗体またはその断片が、配列番号３によりコードされるアミノ酸配列に結合する、請求項７８に記載の方法。
【請求項８５】
前記細胞が、癌細胞である、請求項７８に記載の方法。
【請求項８６】
前記癌細胞が、肺癌細胞、乳癌細胞、前立腺癌細胞、結腸癌細胞、膵臓癌細胞、腎細胞癌細胞、卵巣癌細胞、白血病細胞、黒色腫細胞、膠芽腫細胞、神経芽腫細胞、肉腫細胞、または胃癌細胞である、請求項７８に記載の方法。
【請求項８７】
前記細胞が、免疫細胞である、請求項７８に記載の方法。
【請求項８８】
前記免疫細胞が、リンパ球、樹状細胞、末梢血単球、マクロファージ、または神経膠細胞である、請求項８７に記載の方法。
【請求項８９】
前記抗体またはその断片が、治療剤に連結されている、請求項７８から８８に記載の方法。
【請求項９０】
前記治療剤が、放射性核種、毒素、または化学療法剤である、請求項８９に記載の方法。
【請求項９１】
前記阻害するかまたは死滅させることが、前記細胞においてアポトーシスを誘導するステップを含む、請求項７８に記載の方法。
【請求項９２】
前記細胞が、ヒト被験体体内に存在し、前記接触させるステップが、前記抗体またはその断片を前記被験体に投与するステップを含む、請求項７８に記載の方法。
【請求項９３】
前記細胞を、少なくとも１つのさらなる阻害剤または治療と接触させるステップをさらに含む、請求項７８に記載の方法。
【請求項９４】
前記さらなる治療が、手術、放射線療法、化学療法、毒素療法、免疫療法、ホルモン療法、抗血管新生療法、もしくは遺伝子療法、または他の生物学的療法のうちの１または複数を含む、請求項９３に記載の方法。
【請求項９５】
前記さらなる阻害剤が、放射性核種、化学療法剤、毒素、免疫療法剤、ホルモン、核酸、またはポリペプチドのうちの１または複数を含む、請求項９３に記載の方法。
【請求項９６】
前記毒素が、ジフテリア毒素、外毒素Ａ鎖、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデクシンＡ鎖、アルファ−サルシン、Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ ｆｏｒｄｉｉタンパク質、ジアンチンタンパク質、ｐｈｙｔｏｌａｃａ ａｍｅｒｉｃａｎａタンパク質、ブタクサ抗ウイルス性タンパク質、ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ阻害剤、クルシン、クロチン、ｓａｐａｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、カリケアマイシン、またはトリコテセン毒素である、請求項９５に記載の方法。
【請求項９７】
前記化学療法剤が、アルキル化剤、アントラサイクリン、細胞骨格破壊剤、エポチロン、トポイソメラーゼＩ阻害剤、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、ヌクレオシド類似体もしくはヌクレオチド類似体、前駆体類似体、ペプチド抗生物質、白金ベースの薬剤、レチノイド、ビンカアルカロイド、またはそれらの誘導体である、請求項９５に記載の方法。
【請求項９８】
前記化学療法剤が、アクチノマイシン−Ｄ、ａｌｌ−ｔｒａｎｓレチノイン酸、アザシチジン、アドリアマイシン、アザチオプリン、ブレオマイシン、カンプトテシン、カルボプラチン、カペシタビン、シスプラチン、クロラムブシル、シクロホスファミド、シタラビン、ダウノルビシン、ドセタキセル、ドキシフルリジン、ドキソルビシン、エピルビシン、エポチロン、エトポシド、フルオロウラシル、５−フルオロウラシル（５ＦＵ）、ゲムシタビン、ヒドロキシウレア、過酸化水素、イダルビシン、イマチニブ、メクロレタミン、メルカプトプリン、メトトレキサート、マイトマイシンＣ、ミトキサントロン、オキサリプラチン、パクリタキセル、ペメトレキセド、テニポシド、チオグアニン、バルルビシン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、またはビノレルビンである、請求項９５に記載の方法。
【請求項９９】
ヌクレオリンをその表面に発現する細胞を検出する方法であって、前記細胞を、前記ヌクレオリンに免疫学的に結合するヒト抗体またはその断片と接触させるステップを含む、方法。
【請求項１００】
前記細胞が、癌細胞、免疫細胞、ヌクレオリンをその表面に発現する血管平滑筋細胞、ヌクレオリンをその表面に発現する内皮細胞、またはウイルスに感染した細胞である、請求項９９に記載の方法。
【請求項１０１】
前記細胞が、ヌクレオリンをその表面に発現する前癌性細胞である、請求項９９に記載の方法。
【請求項１０２】
前記癌細胞が、肺癌細胞、乳癌細胞、前立腺癌細胞、結腸癌細胞、膵臓癌細胞、腎細胞癌細胞、卵巣癌細胞、白血病細胞、黒色腫細胞、膠芽腫細胞、神経芽腫細胞、肉腫細胞、または胃癌細胞からなる群から選択される、請求項９９に記載の方法。
【請求項１０３】
前記免疫細胞が、リンパ球、樹状細胞、末梢血単球、マクロファージ、または神経膠細胞である、請求項９９に記載の方法。
【請求項１０４】
前記細胞が、免疫細胞である、請求項９９に記載の方法。
【請求項１０５】
前記免疫細胞が、活性化免疫細胞である、請求項９９に記載の方法。
【請求項１０６】
前記免疫細胞が、活性化Ｂ細胞である、請求項９９に記載の方法。
【請求項１０７】
前記免疫細胞が、メモリーＢ細胞である、請求項９９に記載の方法。
【請求項１０８】
前記免疫細胞が、活性化Ｔ細胞である、請求項９９に記載の方法。
【請求項１０９】
前記免疫細胞が、活性化ＣＤ４＋Ｔ細胞である、請求項９９に記載の方法。
【請求項１１０】
前記免疫細胞が、活性化ＣＤ８＋Ｔ細胞である、請求項９９に記載の方法。
【請求項１１１】
前記細胞が、血管平滑筋細胞または内皮細胞である、請求項９９に記載の方法。
【請求項１１２】
前記抗体またはその断片が、診断剤に連結されている、請求項９９に記載の方法。
【請求項１１３】
前記診断剤が、放射性核種、フルオロフォア、化学発光化合物、蛍光化合物、量子ドット、ナノ粒子、または酵素である、請求項１１２に記載の方法。
【請求項１１４】
前記細胞が、ヒト被験体体内に存在し、前記接触させるステップが、前記抗体またはその断片を前記被験体に投与するステップを含む、請求項９９に記載の方法。
【請求項１１５】
前記細胞が、単離組織試料中または単離細胞懸濁液中に存在する、請求項９９に記載の方法。
【請求項１１６】
哺乳動物における癌を治療または予防する方法であって、前記哺乳動物に、治療有効量の抗ヌクレオリン剤および薬学的に許容される担体を投与するステップを含み、前記抗ヌクレオリン剤が、抗ヌクレオリン抗体またはその断片を含み、ＭＣＦ−７細胞およびヒトＡＢ血清と共に４８時間にわたりインキュベートすると、前記抗体またはその断片が、前記ＭＣＦ−７細胞の集団のうちの少なくとも２０％を死滅させる、方法。
【請求項１１７】
哺乳動物における癌を治療または予防する方法であって、前記哺乳動物に、治療有効量の抗ヌクレオリン抗体もしくはその断片、毒素、または化学療法剤および薬学的に許容される担体を投与するステップを含み、ＭＣＦ−７細胞およびヒトＡＢ血清と共に４８時間にわたりインキュベートすると、前記抗体またはその断片が、前記ＭＣＦ−７細胞の集団のうちの少なくとも２０％を死滅させる、方法。
【請求項１１８】
哺乳動物における癌を治療または予防する方法であって、前記哺乳動物に、治療有効量の抗ヌクレオリン抗体またはその断片および薬学的に許容される担体を投与するステップと、前記哺乳動物を放射線療法でさらに治療するステップとを含み、ＭＣＦ−７細胞およびヒトＡＢ血清と共に４８時間にわたりインキュベートすると、前記抗体またはその断片が、前記ＭＣＦ−７細胞の集団のうちの少なくとも２０％を死滅させる、方法。
【請求項１１９】
哺乳動物における癌を治療または予防する方法であって、前記哺乳動物に、治療有効量の抗ヌクレオリン剤および薬学的に許容される担体を投与するステップを含み、前記抗ヌクレオリン剤が、配列番号４のタンパク質に特異的に結合する抗ヌクレオリン抗体またはその断片を含む、方法。
【請求項１２０】
哺乳動物における癌を治療または予防する方法であって、前記哺乳動物に、治療有効量の抗ヌクレオリン抗体もしくはその断片、毒素、または化学療法剤および薬学的に許容される担体を投与するステップを含み、前記抗体またはその断片が、配列番号４のタンパク質に特異的に結合する、方法。
【請求項１２１】
哺乳動物における癌を治療または予防する方法であって、前記哺乳動物に、治療有効量の抗ヌクレオリン抗体またはその断片および薬学的に許容される担体を投与するステップと、前記哺乳動物を放射線療法でさらに治療するステップとを含み、前記抗体またはその断片が、配列番号４のタンパク質に特異的に結合する、方法。
【請求項１２２】
前記哺乳動物が、ヒトである、請求項１１６から１２１に記載の方法。
【請求項１２３】
前記抗ヌクレオリン抗体またはその断片が、ヒトに対して実質的に非免疫原性である、請求項１１６から１２１に記載の方法。
【請求項１２４】
前記抗ヌクレオリン抗体またはその断片が、ヒト抗体またはその断片である、請求項１１６から１２１に記載の方法。
【請求項１２５】
前記抗ヌクレオリンモノクローナル抗体またはその断片が、モノクローナル抗体またはその断片である、請求項１１６から１２１に記載の方法。
【請求項１２６】
前記毒素が、ジフテリア毒素、外毒素Ａ鎖、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデクシンＡ鎖、アルファ−サルシン、Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ ｆｏｒｄｉｉタンパク質、ジアンチンタンパク質、ｐｈｙｔｏｌａｃａ ａｍｅｒｉｃａｎａタンパク質、ブタクサ抗ウイルス性タンパク質、ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ阻害剤、クルシン、クロチン、ｓａｐａｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、カリケアマイシン、またはトリコテセン毒素である、請求項１１６から１２１に記載の方法。
【請求項１２７】
前記化学療法剤が、アルキル化剤、アントラサイクリン、細胞骨格破壊剤、エポチロン、トポイソメラーゼＩ阻害剤、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、ヌクレオシド類似体もしくはヌクレオチド類似体、前駆体類似体、ペプチド抗生物質、白金ベースの薬剤、レチノイド、ビンカアルカロイド、またはこれらの誘導体である、請求項１１６から１２１に記載の方法。
【請求項１２８】
前記化学療法剤が、アクチノマイシン−Ｄ、ａｌｌ−ｔｒａｎｓレチノイン酸、アザシチジン、アドリアマイシン、アザチオプリン、ブレオマイシン、カンプトテシン、カルボプラチン、カペシタビン、シスプラチン、クロラムブシル、シクロホスファミド、シタラビン、ダウノルビシン、ドセタキセル、ドキシフルリジン、ドキソルビシン、エピルビシン、エポチロン、エトポシド、フルオロウラシル、５−フルオロウラシル（５ＦＵ）、ゲムシタビン、ヒドロキシウレア、過酸化水素、イダルビシン、イマチニブ、メクロレタミン、メルカプトプリン、メトトレキサート、マイトマイシンＣ、ミトキサントロン、オキサリプラチン、パクリタキセル、ペメトレキセド、テニポシド、チオグアニン、バルルビシン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、またはビノレルビンである、請求項１１６から１２１に記載の方法。
【請求項１２９】
ＭＣＦ−７細胞およびヒトＡＢ血清と共に４８時間にわたりインキュベートすると、前記ＭＣＦ−７細胞の集団のうちの少なくとも５０％を死滅させる、抗ヌクレオリン剤。
【請求項１３０】
ＭＣＦ−７細胞およびＭＣＦ１０Ａ細胞の個別の集団および熱不活化血清と共に７２または９６時間にわたりインキュベートすると、ＭＣＦ１０Ａ細胞より多くのＭＣＦ−７細胞を死滅させる、抗ヌクレオリン剤。
【請求項１３１】
ＭＣＦ−７細胞およびＭＣＦ１０Ａ細胞の個別の集団およびヒトＡＢ血清と共に９６時間にわたりインキュベートすると、ＭＣＦ１０Ａ細胞より多くのＭＣＦ−７細胞を死滅させる、抗ヌクレオリン剤。
【請求項１３２】
配列番号４のタンパク質に特異的に結合し、それらの細胞表面においてヌクレオリンを発現する１または複数の癌細胞を阻害するかまたは死滅させる、抗ヌクレオリン剤。
【請求項１３３】
ヒトに対して実質的に非免疫原性である、請求項１２９から１３２に記載の抗ヌクレオリン剤。
【請求項１３４】
１または複数の前癌性細胞における細胞表面ヌクレオリン発現の増大を検出することにより、被験体が癌を発生させる可能性を決定する方法。
【請求項１３５】
Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、もしくはＦｖ断片；ダイアボディー；直鎖状抗体；単鎖抗体；または抗体断片から形成される多重特異性抗体である、前記請求項のいずれかに記載の抗体。
【請求項１３６】
Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、もしくはＦｖ断片；ダイアボディー；直鎖状抗体；単鎖抗体；または抗体断片から形成される多重特異性抗体である抗体断片の使用を含む、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【図１】
【図４】
【図５Ｂ】
【図６】
【図１０】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【図３】
【図５Ａ】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４Ａ】
【図１４Ｂ】
【図１４Ｃ】
【図４】
【図５Ｂ】
【図６】
【図１０】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【図３】
【図５Ａ】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４Ａ】
【図１４Ｂ】
【図１４Ｃ】
【公表番号】特表２０１３−５１１２６０（Ｐ２０１３−５１１２６０Ａ）
【公表日】平成２５年４月４日（２０１３．４．４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５３９０８２（Ｐ２０１２−５３９０８２）
【出願日】平成２２年１１月１７日（２０１０．１１．１７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０５７０４６
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０６２９９７
【国際公開日】平成２３年５月２６日（２０１１．５．２６）
【出願人】（５０９０１１８３５）エムユーエスシー ファウンデーション フォー リサーチ ディベロップメント (4)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２５年４月４日（２０１３．４．４）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年１１月１７日（２０１０．１１．１７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０５７０４６
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０６２９９７
【国際公開日】平成２３年５月２６日（２０１１．５．２６）
【出願人】（５０９０１１８３５）エムユーエスシー ファウンデーション フォー リサーチ ディベロップメント (4)
【Ｆターム（参考）】
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