ヒト人工染色体（ＨＡＣ）ベクター
本発明は、ヒト人工染色体（ＨＡＣ）ベクター及びその作製方法に関する。また本発明は、ヒト人工染色体ベクターを用いた外来ＤＮＡの導入方法及び外来ＤＮＡ発現細胞の作製方法に関する。さらに本発明は、タンパク質の製造方法に関する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
長腕遠位及び／又は短腕遠位が削除されたヒト２１番染色体断片又はヒト１４番染色体断片を含むことを特徴とするヒト人工染色体ベクター。
【請求項２】
ヒト２１番染色体断片又はヒト１４番染色体断片が約２〜１６Ｍｂである、請求項１記載のヒト人工染色体ベクター。
【請求項３】
ヒト２１番染色体の長腕遠位が２１ｑ１１領域内で削除されている、請求項１又は２記載のヒト人工染色体ベクター。
【請求項４】
ヒト２１番染色体の長腕遠位がＡＬ１６３２０４において削除されている、請求項３記載のヒト人工染色体ベクター。
【請求項５】
ヒト２１番染色体の短腕遠位が２１ｐ領域内で削除されている、請求項１又は２記載のヒト人工染色体ベクター。
【請求項６】
ヒト２１番染色体の短腕遠位がＡＬ１６３２０１において削除されている、請求項５記載のヒト人工染色体ベクター。
【請求項７】
ヒト１４番染色体の長腕遠位が１４ｑ領域内において削除されている、請求項１又は２記載のヒト人工染色体ベクター。
【請求項８】
ヒト１４番染色体の長腕遠位がＡＬ１５７８５８又はＡＬ５１２３１０において削除されている、請求項７記載のヒト人工染色体ベクター。
【請求項９】
ヒト１４番染色体の短腕遠位が１４ｐ領域内において削除されている、請求項１又は２記載のヒト人工染色体ベクター。
【請求項１０】
ヒト１４番染色体の短腕遠位が、ＯＲ４Ｈ１２、ＯＲ４Ｑ４、ＲＮＲ２、ＯＲ４Ｌ１、ＲＮＵ６Ｃ、ＦＤＰＳＬ３、Ｋ１２Ｔ、Ｃ１４ｏｒｆ５７、ＯＲ６Ｓ１、Ｍ１９５、ＯＲ４Ｋ１４、ＭＧＣ２７１６５、ＬＣＨ、ＯＲ１０Ｇ３、ＯＲ４Ｋ３、ＯＲ４Ｅ２、Ｈ１ＲＮＡ、ＡＴＰ５Ｃ２、ＯＲ１１Ｈ６、及びＯＲ４Ｍ１からなる群より選択される少なくとも１の位置において削除されている、請求項９記載のヒト人工染色体ベクター。
【請求項１１】
ヒト２１番染色体又はヒト１４番染色体の長腕近位及び／又は短腕近位に部位特異的組換え酵素の認識部位が挿入されていることを特徴とする、請求項１〜１０のいずれか１項に記載のヒト人工染色体ベクター。
【請求項１２】
部位特異的組換え酵素がＣｒｅ酵素である、請求項１１記載のヒト人工染色体ベクター。
【請求項１３】
部位特異的組換え酵素の認識部位がｌｏｘＰ配列である、請求項１１又は１２記載のヒト人工染色体ベクター。
【請求項１４】
部位特異的組換え酵素の認識部位がヒト２１番染色体の長腕近位のＡＬ１６３２０３に挿入されている、請求項１１〜１３のいずれか１項に記載のヒト人工染色体ベクター。
【請求項１５】
部位特異的組換え酵素の認識部位がヒト１４番染色体の長腕近位のＡＬ１５７８５８又はＡＬ５１２３１０の前記削除位置よりも近位に挿入されている、請求項１１〜１３のいずれか１項に記載のヒト人工染色体ベクター。
【請求項１６】
部位特異的組換え酵素の認識部位がヒト１４番染色体の短腕近位の１４ｐ１２領域内の前記削除位置よりも近位に挿入されている、請求項１１〜１３のいずれか１項に記載のヒト人工染色体ベクター。
【請求項１７】
長腕遠位及び／又は短腕遠位の削除が人工テロメア配列との置換によるものである、請求項１〜１６のいずれか１項に記載のヒト人工染色体ベクター。
【請求項１８】
ヒト人工染色体ベクターの作製方法であって、以下のステップ：
（ａ）ヒト２１番染色体又はヒト１４番染色体を保持する細胞を得るステップ；
（ｂ）上記ヒト２１番染色体又はヒト１４番染色体の長腕遠位及び／又は短腕遠位を削除するステップ；並びに
（ｃ）上記ヒト２１番染色体又はヒト１４番染色体の長腕近位及び／又は短腕近位に部位特異的組換え酵素の認識部位を挿入するステップ；
を含む、上記作製方法。
【請求項１９】
ステップ（ａ）において、ヒト２１番染色体又はヒト１４番染色体を保持する細胞が相同組換え効率の高いものである、請求項１８記載の作製方法。
【請求項２０】
相同組換え効率の高い細胞がニワトリＤＴ４０細胞由来のものである、請求項１９記載の作製方法。
【請求項２１】
ステップ（ｂ）において、ヒト２１番染色体又はヒト１４番染色体の長腕遠位及び／又は短腕遠位の削除を人工テロメア配列との置換により行うものである、請求項１８〜２０のいずれか１項に記載の作製方法。
【請求項２２】
ステップ（ｂ）において、ヒト２１番染色体の長腕遠位をＡＬ１６３２０４において削除する、請求項１８〜２１のいずれか１項に記載の作製方法。
【請求項２３】
ステップ（ｂ）において、ヒト２１番染色体の短腕遠位をＡＬ１６３２０１において削除する、請求項１８〜２１のいずれか１項に記載の作製方法。
【請求項２４】
ステップ（ｂ）において、ヒト１４番染色体の長腕遠位をＡＬ１５７８５８又はＡＬ５１２３１０において削除する、請求項１８〜２１のいずれか１項に記載の作製方法。
【請求項２５】
ステップ（ｂ）において、ヒト１４番染色体の短腕遠位を、ＯＲ４Ｈ１２、ＯＲ４Ｑ４、ＲＮＲ２、ＯＲ４Ｌ１、ＲＮＵ６Ｃ、ＦＤＰＳＬ３、Ｋ１２Ｔ、Ｃ１４ｏｒｆ５７、ＯＲ６Ｓ１、Ｍ１９５、ＯＲ４Ｋ１４、ＭＧＣ２７１６５、ＬＣＨ、ＯＲ１０Ｇ３、ＯＲ４Ｋ３、ＯＲ４Ｅ２、Ｈ１ＲＮＡ、ＡＴＰ５Ｃ２、ＯＲ１１Ｈ６、及びＯＲ４Ｍ１からなる群より選択される少なくとも１の位置において削除する、請求項１８〜２１のいずれか１項に記載の作製方法。
【請求項２６】
ステップ（ｃ）において、部位特異的組換え酵素がＣｒｅ酵素である、請求項１８〜２５のいずれか１項に記載の作製方法。
【請求項２７】
ステップ（ｃ）において、部位特異的組換え酵素の認識部位がｌｏｘＰ配列である、請求項１８〜２６のいずれか１項に記載の作製方法。
【請求項２８】
部位特異的組換え酵素の認識部位をヒト２１番染色体の長腕近位のＡＬ１６３２０３に挿入する、請求項１８〜２７のいずれか１項に記載の作製方法。
【請求項２９】
部位特異的組換え酵素の認識部位をヒト１４番染色体の長腕近位のＡＬ１５７８５８又はＡＬ５１２３１０の前記削除位置よりも近位に挿入する、請求項１８〜２７のいずれか１項に記載の作製方法。
【請求項３０】
部位特異的組換え酵素の認識部位をヒト１４番染色体の短腕近位の１４ｐ１２領域内の前記削除位置よりも近位に挿入する、請求項１８〜２７のいずれか１項に記載の作製方法。
【請求項３１】
請求項１８〜３０のいずれか１項に記載の作製方法により得られる、ヒト人工染色体ベクター。
【請求項３２】
請求項３１記載のヒト人工染色体ベクターを保持する細胞。
【請求項３３】
請求項１８〜３０のいずれか１項に記載された作製方法において、以下のステップ：
（ｄ）部位特異的組換え酵素の存在下にてヒト２１番染色体又はヒト１４番染色体に外来ＤＮＡを挿入するステップ；
をさらに含むことを特徴とする、外来ＤＮＡを含むヒト人工染色体ベクターの作製方法。
【請求項３４】
請求項３３記載の作製方法により得られる、外来ＤＮＡを含むヒト人工染色体ベクター。
【請求項３５】
請求項３４記載の外来ＤＮＡを含むヒト人工染色体ベクターを保持する細胞。
【請求項３６】
請求項３５記載の細胞を含む医薬組成物。
【請求項３７】
外来ＤＮＡを受容細胞に導入する方法であって、以下のステップ：
（ａ）ヒト２１番染色体又はヒト１４番染色体を保持する供与細胞を得るステップ；
（ｂ）上記ヒト２１番染色体又はヒト１４番染色体の長腕遠位及び／又は短腕遠位を削除するステップ；
（ｃ）上記ヒト２１番染色体又はヒト１４番染色体の長腕近位及び／又は短腕近位に部位特異的組換え酵素の認識部位を挿入するステップ；
（ｄ）部位特異的組換え酵素の存在下にて上記ヒト２１番染色体又はヒト１４番染色体に外来ＤＮＡを挿入するステップ；
（ｅ）上記ヒト２１番染色体又はヒト１４番染色体を保持する供与細胞からミクロセルを調製するステップ；
（ｆ）上記ミクロセルと受容細胞とを融合するステップ；並びに
（ｇ）融合した受容細胞において外来ＤＮＡの導入を確認するステップ；
を含む、上記導入方法。
【請求項３８】
受容細胞が動物細胞である、請求項３７記載の導入方法。
【請求項３９】
動物細胞が哺乳動物細胞である、請求項３８記載の導入方法。
【請求項４０】
受容細胞が多分化能を有する細胞である、請求項３７〜３９のいずれか１項に記載の導入方法。
【請求項４１】
多分化能を有する細胞が胚性幹細胞（ＥＳ細胞）又は間葉系幹細胞若しくは組織幹／前駆細胞である、請求項４０記載の導入方法。
【請求項４２】
外来ＤＮＡを発現する細胞の作製方法であって、以下のステップ：
（ａ）ヒト２１番染色体又はヒト１４番染色体を保持する供与細胞を得るステップ；
（ｂ）上記ヒト２１番染色体又はヒト１４番染色体の長腕遠位及び／又は短腕遠位を削除するステップ；
（ｃ）上記ヒト２１番染色体又はヒト１４番染色体の長腕近位及び／又は短腕近位に部位特異的組換え酵素の認識部位を挿入するステップ；
（ｄ）部位特異的組換え酵素の発現下にて上記ヒト２１番染色体又はヒト１４番染色体に外来ＤＮＡを挿入するステップ；
（ｅ）上記ヒト２１番染色体又はヒト１４番染色体を保持する供与細胞からミクロセルを調製するステップ；
（ｆ）上記ミクロセルと受容細胞とを融合するステップ；並びに
（ｇ）融合した受容細胞において外来ＤＮＡを発現する細胞を選択するステップ；
を含む、上記作製方法。
【請求項４３】
受容細胞が動物細胞である、請求項４２記載の導入方法。
【請求項４４】
動物細胞が哺乳動物細胞である、請求項４３記載の導入方法。
【請求項４５】
受容細胞が多分化能を有する細胞である、請求項４２〜４４のいずれか１項に記載の導入方法。
【請求項４６】
多分化能を有する細胞が胚性幹細胞（ＥＳ細胞）又は間葉系幹細胞若しくは組織幹／前駆細胞である、請求項４０記載の導入方法。
【請求項４７】
タンパク質の製造方法であって、以下のステップ：
（ａ）ヒト２１番染色体又はヒト１４番染色体を保持する供与細胞を得るステップ；
（ｂ）上記ヒト２１番染色体又はヒト１４番染色体の長腕遠位及び／又は短腕遠位を削除するステップ；
（ｃ）上記ヒト２１番染色体又はヒト１４番染色体の長腕近位及び／又は短腕近位に部位特異的組換え酵素の認識部位を挿入するステップ；
（ｄ）部位特異的組換え酵素の発現下にて上記ヒト２１番染色体又はヒト１４番染色体にタンパク質をコードする外来ＤＮＡを挿入するステップ；
（ｅ）上記ヒト２１番染色体又はヒト１４番染色体を保持する供与細胞からミクロセルを調製するステップ；
（ｆ）上記ミクロセルと受容細胞とを融合するステップ；
（ｇ）融合した受容細胞を培地中で培養するステップ；並びに
（ｈ）得られる培養物から上記タンパク質を採取するステップ；
を含む、上記製造方法。
【請求項４８】
タンパク質が、エリスロポイエチン（ＥＰＯ）、トロンボポイエチン（ＴＰＯ）、血液凝固因子、フォンヴィルブランド因子（ｖＷＦ）、ジストロフィン、ドーパミン合成酵素、インスリン、インスリン様増殖因子（ＩＧＦ）、インスリン様増殖因子結合タンパク質（ＩＧＦＢＰ）、抗体、テロメラーゼ、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球・マクロファージコロニー刺激因子、免疫グロブリン、成長ホルモン、インターロイキン２、インターロイキン３、インターロイキン４、インターロイキン５、インターロイキン６、インターロイキン７、インターロイキン８、インターロイキン９、インターロイキン１０、インターロイキン１１、インターロイキン１２、インターロイキン１５、ＣＤ４０リガンド、インターフェロン、アデノシンデアミナーゼ、α−１アンチトリプシン、オルニチントランスカルバミラーゼ、プリンヌクレオチドホスホリラーゼ、成長抑制因子（ＧＩＦ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、白血病阻害因子（ＬＩＦ）、オンコスタチンＭ、Ｆｌｔ３リガンド（Ｆｌｔ３Ｌ）、ストローマ由来因子（ＳＤＦ）、幹細胞増殖因子（ＳＣＦ）、繊維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、血管形成誘導因子（ＶＥＧＦ）、アンジオポイエチン、神経成長因子（ＮＧＦ）、骨形成因子（ＢＭＰ）、アクチビン、トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）、ウイント（Ｗｎｔ）からなる群より選択されるものである、請求項４７記載の製造方法。
【請求項１】
長腕遠位及び／又は短腕遠位が削除されたヒト２１番染色体断片又はヒト１４番染色体断片を含むことを特徴とするヒト人工染色体ベクター。
【請求項２】
ヒト２１番染色体断片又はヒト１４番染色体断片が約２〜１６Ｍｂである、請求項１記載のヒト人工染色体ベクター。
【請求項３】
ヒト２１番染色体の長腕遠位が２１ｑ１１領域内で削除されている、請求項１又は２記載のヒト人工染色体ベクター。
【請求項４】
ヒト２１番染色体の長腕遠位がＡＬ１６３２０４において削除されている、請求項３記載のヒト人工染色体ベクター。
【請求項５】
ヒト２１番染色体の短腕遠位が２１ｐ領域内で削除されている、請求項１又は２記載のヒト人工染色体ベクター。
【請求項６】
ヒト２１番染色体の短腕遠位がＡＬ１６３２０１において削除されている、請求項５記載のヒト人工染色体ベクター。
【請求項７】
ヒト１４番染色体の長腕遠位が１４ｑ領域内において削除されている、請求項１又は２記載のヒト人工染色体ベクター。
【請求項８】
ヒト１４番染色体の長腕遠位がＡＬ１５７８５８又はＡＬ５１２３１０において削除されている、請求項７記載のヒト人工染色体ベクター。
【請求項９】
ヒト１４番染色体の短腕遠位が１４ｐ領域内において削除されている、請求項１又は２記載のヒト人工染色体ベクター。
【請求項１０】
ヒト１４番染色体の短腕遠位が、ＯＲ４Ｈ１２、ＯＲ４Ｑ４、ＲＮＲ２、ＯＲ４Ｌ１、ＲＮＵ６Ｃ、ＦＤＰＳＬ３、Ｋ１２Ｔ、Ｃ１４ｏｒｆ５７、ＯＲ６Ｓ１、Ｍ１９５、ＯＲ４Ｋ１４、ＭＧＣ２７１６５、ＬＣＨ、ＯＲ１０Ｇ３、ＯＲ４Ｋ３、ＯＲ４Ｅ２、Ｈ１ＲＮＡ、ＡＴＰ５Ｃ２、ＯＲ１１Ｈ６、及びＯＲ４Ｍ１からなる群より選択される少なくとも１の位置において削除されている、請求項９記載のヒト人工染色体ベクター。
【請求項１１】
ヒト２１番染色体又はヒト１４番染色体の長腕近位及び／又は短腕近位に部位特異的組換え酵素の認識部位が挿入されていることを特徴とする、請求項１〜１０のいずれか１項に記載のヒト人工染色体ベクター。
【請求項１２】
部位特異的組換え酵素がＣｒｅ酵素である、請求項１１記載のヒト人工染色体ベクター。
【請求項１３】
部位特異的組換え酵素の認識部位がｌｏｘＰ配列である、請求項１１又は１２記載のヒト人工染色体ベクター。
【請求項１４】
部位特異的組換え酵素の認識部位がヒト２１番染色体の長腕近位のＡＬ１６３２０３に挿入されている、請求項１１〜１３のいずれか１項に記載のヒト人工染色体ベクター。
【請求項１５】
部位特異的組換え酵素の認識部位がヒト１４番染色体の長腕近位のＡＬ１５７８５８又はＡＬ５１２３１０の前記削除位置よりも近位に挿入されている、請求項１１〜１３のいずれか１項に記載のヒト人工染色体ベクター。
【請求項１６】
部位特異的組換え酵素の認識部位がヒト１４番染色体の短腕近位の１４ｐ１２領域内の前記削除位置よりも近位に挿入されている、請求項１１〜１３のいずれか１項に記載のヒト人工染色体ベクター。
【請求項１７】
長腕遠位及び／又は短腕遠位の削除が人工テロメア配列との置換によるものである、請求項１〜１６のいずれか１項に記載のヒト人工染色体ベクター。
【請求項１８】
ヒト人工染色体ベクターの作製方法であって、以下のステップ：
（ａ）ヒト２１番染色体又はヒト１４番染色体を保持する細胞を得るステップ；
（ｂ）上記ヒト２１番染色体又はヒト１４番染色体の長腕遠位及び／又は短腕遠位を削除するステップ；並びに
（ｃ）上記ヒト２１番染色体又はヒト１４番染色体の長腕近位及び／又は短腕近位に部位特異的組換え酵素の認識部位を挿入するステップ；
を含む、上記作製方法。
【請求項１９】
ステップ（ａ）において、ヒト２１番染色体又はヒト１４番染色体を保持する細胞が相同組換え効率の高いものである、請求項１８記載の作製方法。
【請求項２０】
相同組換え効率の高い細胞がニワトリＤＴ４０細胞由来のものである、請求項１９記載の作製方法。
【請求項２１】
ステップ（ｂ）において、ヒト２１番染色体又はヒト１４番染色体の長腕遠位及び／又は短腕遠位の削除を人工テロメア配列との置換により行うものである、請求項１８〜２０のいずれか１項に記載の作製方法。
【請求項２２】
ステップ（ｂ）において、ヒト２１番染色体の長腕遠位をＡＬ１６３２０４において削除する、請求項１８〜２１のいずれか１項に記載の作製方法。
【請求項２３】
ステップ（ｂ）において、ヒト２１番染色体の短腕遠位をＡＬ１６３２０１において削除する、請求項１８〜２１のいずれか１項に記載の作製方法。
【請求項２４】
ステップ（ｂ）において、ヒト１４番染色体の長腕遠位をＡＬ１５７８５８又はＡＬ５１２３１０において削除する、請求項１８〜２１のいずれか１項に記載の作製方法。
【請求項２５】
ステップ（ｂ）において、ヒト１４番染色体の短腕遠位を、ＯＲ４Ｈ１２、ＯＲ４Ｑ４、ＲＮＲ２、ＯＲ４Ｌ１、ＲＮＵ６Ｃ、ＦＤＰＳＬ３、Ｋ１２Ｔ、Ｃ１４ｏｒｆ５７、ＯＲ６Ｓ１、Ｍ１９５、ＯＲ４Ｋ１４、ＭＧＣ２７１６５、ＬＣＨ、ＯＲ１０Ｇ３、ＯＲ４Ｋ３、ＯＲ４Ｅ２、Ｈ１ＲＮＡ、ＡＴＰ５Ｃ２、ＯＲ１１Ｈ６、及びＯＲ４Ｍ１からなる群より選択される少なくとも１の位置において削除する、請求項１８〜２１のいずれか１項に記載の作製方法。
【請求項２６】
ステップ（ｃ）において、部位特異的組換え酵素がＣｒｅ酵素である、請求項１８〜２５のいずれか１項に記載の作製方法。
【請求項２７】
ステップ（ｃ）において、部位特異的組換え酵素の認識部位がｌｏｘＰ配列である、請求項１８〜２６のいずれか１項に記載の作製方法。
【請求項２８】
部位特異的組換え酵素の認識部位をヒト２１番染色体の長腕近位のＡＬ１６３２０３に挿入する、請求項１８〜２７のいずれか１項に記載の作製方法。
【請求項２９】
部位特異的組換え酵素の認識部位をヒト１４番染色体の長腕近位のＡＬ１５７８５８又はＡＬ５１２３１０の前記削除位置よりも近位に挿入する、請求項１８〜２７のいずれか１項に記載の作製方法。
【請求項３０】
部位特異的組換え酵素の認識部位をヒト１４番染色体の短腕近位の１４ｐ１２領域内の前記削除位置よりも近位に挿入する、請求項１８〜２７のいずれか１項に記載の作製方法。
【請求項３１】
請求項１８〜３０のいずれか１項に記載の作製方法により得られる、ヒト人工染色体ベクター。
【請求項３２】
請求項３１記載のヒト人工染色体ベクターを保持する細胞。
【請求項３３】
請求項１８〜３０のいずれか１項に記載された作製方法において、以下のステップ：
（ｄ）部位特異的組換え酵素の存在下にてヒト２１番染色体又はヒト１４番染色体に外来ＤＮＡを挿入するステップ；
をさらに含むことを特徴とする、外来ＤＮＡを含むヒト人工染色体ベクターの作製方法。
【請求項３４】
請求項３３記載の作製方法により得られる、外来ＤＮＡを含むヒト人工染色体ベクター。
【請求項３５】
請求項３４記載の外来ＤＮＡを含むヒト人工染色体ベクターを保持する細胞。
【請求項３６】
請求項３５記載の細胞を含む医薬組成物。
【請求項３７】
外来ＤＮＡを受容細胞に導入する方法であって、以下のステップ：
（ａ）ヒト２１番染色体又はヒト１４番染色体を保持する供与細胞を得るステップ；
（ｂ）上記ヒト２１番染色体又はヒト１４番染色体の長腕遠位及び／又は短腕遠位を削除するステップ；
（ｃ）上記ヒト２１番染色体又はヒト１４番染色体の長腕近位及び／又は短腕近位に部位特異的組換え酵素の認識部位を挿入するステップ；
（ｄ）部位特異的組換え酵素の存在下にて上記ヒト２１番染色体又はヒト１４番染色体に外来ＤＮＡを挿入するステップ；
（ｅ）上記ヒト２１番染色体又はヒト１４番染色体を保持する供与細胞からミクロセルを調製するステップ；
（ｆ）上記ミクロセルと受容細胞とを融合するステップ；並びに
（ｇ）融合した受容細胞において外来ＤＮＡの導入を確認するステップ；
を含む、上記導入方法。
【請求項３８】
受容細胞が動物細胞である、請求項３７記載の導入方法。
【請求項３９】
動物細胞が哺乳動物細胞である、請求項３８記載の導入方法。
【請求項４０】
受容細胞が多分化能を有する細胞である、請求項３７〜３９のいずれか１項に記載の導入方法。
【請求項４１】
多分化能を有する細胞が胚性幹細胞（ＥＳ細胞）又は間葉系幹細胞若しくは組織幹／前駆細胞である、請求項４０記載の導入方法。
【請求項４２】
外来ＤＮＡを発現する細胞の作製方法であって、以下のステップ：
（ａ）ヒト２１番染色体又はヒト１４番染色体を保持する供与細胞を得るステップ；
（ｂ）上記ヒト２１番染色体又はヒト１４番染色体の長腕遠位及び／又は短腕遠位を削除するステップ；
（ｃ）上記ヒト２１番染色体又はヒト１４番染色体の長腕近位及び／又は短腕近位に部位特異的組換え酵素の認識部位を挿入するステップ；
（ｄ）部位特異的組換え酵素の発現下にて上記ヒト２１番染色体又はヒト１４番染色体に外来ＤＮＡを挿入するステップ；
（ｅ）上記ヒト２１番染色体又はヒト１４番染色体を保持する供与細胞からミクロセルを調製するステップ；
（ｆ）上記ミクロセルと受容細胞とを融合するステップ；並びに
（ｇ）融合した受容細胞において外来ＤＮＡを発現する細胞を選択するステップ；
を含む、上記作製方法。
【請求項４３】
受容細胞が動物細胞である、請求項４２記載の導入方法。
【請求項４４】
動物細胞が哺乳動物細胞である、請求項４３記載の導入方法。
【請求項４５】
受容細胞が多分化能を有する細胞である、請求項４２〜４４のいずれか１項に記載の導入方法。
【請求項４６】
多分化能を有する細胞が胚性幹細胞（ＥＳ細胞）又は間葉系幹細胞若しくは組織幹／前駆細胞である、請求項４０記載の導入方法。
【請求項４７】
タンパク質の製造方法であって、以下のステップ：
（ａ）ヒト２１番染色体又はヒト１４番染色体を保持する供与細胞を得るステップ；
（ｂ）上記ヒト２１番染色体又はヒト１４番染色体の長腕遠位及び／又は短腕遠位を削除するステップ；
（ｃ）上記ヒト２１番染色体又はヒト１４番染色体の長腕近位及び／又は短腕近位に部位特異的組換え酵素の認識部位を挿入するステップ；
（ｄ）部位特異的組換え酵素の発現下にて上記ヒト２１番染色体又はヒト１４番染色体にタンパク質をコードする外来ＤＮＡを挿入するステップ；
（ｅ）上記ヒト２１番染色体又はヒト１４番染色体を保持する供与細胞からミクロセルを調製するステップ；
（ｆ）上記ミクロセルと受容細胞とを融合するステップ；
（ｇ）融合した受容細胞を培地中で培養するステップ；並びに
（ｈ）得られる培養物から上記タンパク質を採取するステップ；
を含む、上記製造方法。
【請求項４８】
タンパク質が、エリスロポイエチン（ＥＰＯ）、トロンボポイエチン（ＴＰＯ）、血液凝固因子、フォンヴィルブランド因子（ｖＷＦ）、ジストロフィン、ドーパミン合成酵素、インスリン、インスリン様増殖因子（ＩＧＦ）、インスリン様増殖因子結合タンパク質（ＩＧＦＢＰ）、抗体、テロメラーゼ、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球・マクロファージコロニー刺激因子、免疫グロブリン、成長ホルモン、インターロイキン２、インターロイキン３、インターロイキン４、インターロイキン５、インターロイキン６、インターロイキン７、インターロイキン８、インターロイキン９、インターロイキン１０、インターロイキン１１、インターロイキン１２、インターロイキン１５、ＣＤ４０リガンド、インターフェロン、アデノシンデアミナーゼ、α−１アンチトリプシン、オルニチントランスカルバミラーゼ、プリンヌクレオチドホスホリラーゼ、成長抑制因子（ＧＩＦ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、白血病阻害因子（ＬＩＦ）、オンコスタチンＭ、Ｆｌｔ３リガンド（Ｆｌｔ３Ｌ）、ストローマ由来因子（ＳＤＦ）、幹細胞増殖因子（ＳＣＦ）、繊維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、血管形成誘導因子（ＶＥＧＦ）、アンジオポイエチン、神経成長因子（ＮＧＦ）、骨形成因子（ＢＭＰ）、アクチビン、トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）、ウイント（Ｗｎｔ）からなる群より選択されるものである、請求項４７記載の製造方法。
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０３１３８５
【国際公開日】平成１６年４月１５日（２００４．４．１５）
【発行日】平成１８年２月２日（２００６．２．２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００４−５４１２９１（Ｐ２００４−５４１２９１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＪＰ２００３／０１２７３４
【国際出願日】平成１５年１０月３日（２００３．１０．３）
【出願人】（０００２５３５０３）麒麟麦酒株式会社 (247)
【Ｆターム（参考）】
【国際公開日】平成１６年４月１５日（２００４．４．１５）
【発行日】平成１８年２月２日（２００６．２．２）
【国際特許分類】
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＪＰ２００３／０１２７３４
【国際出願日】平成１５年１０月３日（２００３．１０．３）
【出願人】（０００２５３５０３）麒麟麦酒株式会社 (247)
【Ｆターム（参考）】
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