【課題】胃癌細胞または結腸直腸癌細胞の増殖機構に関与する新規タンパク質、これらのタンパク質をコードする遺伝子、さらにはこれらを産生して胃癌または結腸直腸癌の診断および治療に用いるための方法を提供する。
【解決手段】対応する非癌組織と比較して、結腸直腸癌においてその発現が顕著に上昇している新規ヒト遺伝子RNF43、CXADRL1およびGCUD1、これらの遺伝子によってコードされるポリペプチド。細胞増殖性疾患の診断に用いることができ、かつ疾患に対する薬剤を開発するための標的分子として用いることができる。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下からなる群より選択される、実質的に純粋なポリペプチド：
（a）配列番号：2、4、または6のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（b）配列番号：2、4、または6のアミノ酸配列からなるタンパク質と同等な生物学的活性を有する、1つまたは複数のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および/または付加された配列番号：2、4、または6のアミノ酸配列を含むポリペプチド；ならびに
（c）配列番号：2、4、または6のいずれか1つのアミノ酸配列からなるポリペプチドと同等な生物学的活性を有する、配列番号：1、3、または5のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド。
【請求項２】
請求項1記載のポリペプチドをコードする、単離されたポリヌクレオチド。
【請求項３】
請求項2記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
【請求項４】
請求項2記載のポリヌクレオチドまたは請求項3記載のベクターを保有する宿主細胞。
【請求項５】
以下の段階を含む、請求項1記載のポリペプチドを産生するための方法：
（a）請求項4記載の宿主細胞を培養する段階；
（b）宿主細胞にポリペプチドを発現させる段階；および
（c）発現したポリペプチドを収集する段階。
【請求項６】
請求項1記載のポリペプチドと結合する抗体。
【請求項７】
請求項2記載のポリヌクレオチドまたはその相補鎖に対して相補的であって、少なくとも15ヌクレオチドを含むポリヌクレオチド。
【請求項８】
請求項2記載のポリヌクレオチドに対するアンチセンスポリヌクレオチドまたは低分子干渉RNA。
【請求項９】
配列番号：23、25、27、29、または31のヌクレオチド配列を含むヌクレオチドからなる群より選択される、請求項8記載のアンチセンスポリヌクレオチド。
【請求項１０】
そのセンス鎖が、配列番号：112、113、および114のヌクレオチド配列を含むヌクレオチドからなる群より選択される、請求項8記載の低分子干渉RNA。
【請求項１１】
以下の段階を含む、細胞増殖性疾患の診断のための方法：
（a）標本の生物試料における、配列番号：2、4、または6のアミノ酸配列をコードする遺伝子の発現レベルを検出する段階；および
（b）その発現レベルの上昇を疾患と関連づける段階。
【請求項１２】
発現レベルが、以下の段階からなる群より選択される方法のいずれか1つによって検出される、請求項11記載の方法：
（a）配列番号：2、4、または6のアミノ酸配列をコードするmRNAを検出する段階；
（b）配列番号：2、4、または6のアミノ酸配列を含むタンパク質を検出する段階；および
（c）配列番号：2、4、または6のアミノ酸配列を含むタンパク質の生物学的活性を検出する段階。
【請求項１３】
以下の段階を含む、細胞増殖性疾患を治療するための化合物のスクリーニング方法：
（a）被験化合物を、
（1）配列番号：2、4、または6のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
（2）配列番号：2、4、または6のアミノ酸配列からなるタンパク質と同等な生物学的活性を有する、1つまたは複数のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および/または付加された配列番号：2、4、または6のアミノ酸配列を含むポリペプチド、および
（3）配列番号：2、4、または6のアミノ酸配列からなるポリペプチドと同等な生物学的活性を有する、配列番号：1、3、または5のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド、
からなる群より選択されるポリペプチドと接触させる段階；
（b）ポリペプチドと被験化合物との結合活性を検出する段階；ならびに
（c）ポリペプチドと結合する化合物を選択する段階。
【請求項１４】
以下の段階を含む、細胞増殖性疾患を治療するための化合物のスクリーニング方法：
（a）候補化合物を、配列番号：1、3、または5のヌクレオチド配列を含む1つまたは複数のポリヌクレオチドを発現する細胞と接触させる段階；および
（b）配列番号：1、3、または5のヌクレオチド配列を含む1つまたは複数のポリヌクレオチドの発現レベルを、被験化合物の非存在下で検出される発現レベルと比較して低下させる化合物を選択する段階。
【請求項１５】
以下の段階を含む、細胞増殖性疾患を治療するための化合物のスクリーニング方法：
（a）被験化合物を、
（1）配列番号：2、4、または6のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
（2）配列番号：2、4、または6のアミノ酸配列からなるタンパク質と同等な生物学的活性を有する、1つまたは複数のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および/または付加された配列番号：2、4、または6のアミノ酸配列を含むポリペプチド、および
（3）配列番号：2、4、または6のアミノ酸配列からなるポリペプチドと同等な生物学的活性を有する、配列番号：1、3、または5のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド、
からなる群より選択されるポリペプチドと接触させる段階；
（b）段階（a）のポリペプチドの生物学的活性を検出する段階；ならびに
（c）被験化合物の非存在下で検出される生物学的活性と比較してポリペプチドの生物学的活性を抑制する化合物を選択する段階。
【請求項１６】
生物学的活性が細胞増殖活性である、請求項15記載の方法。
【請求項１７】
以下の段階を含む、細胞増殖性疾患を治療するための化合物のスクリーニング方法：
（a）被験化合物の存在下で
（1）配列番号：2のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
（2）配列番号：2のアミノ酸配列からなるタンパク質と同等な生物学的活性を有する、1つまたは複数のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および/または付加された配列番号：2のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
（3）配列番号：2のアミノ酸配列からなるポリペプチドと同等な生物学的活性を有する、配列番号：1のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド、
からなる群より選択されるポリペプチドを、AIP1と接触させる段階；
（b）ポリペプチドとAIP1との結合を検出する段階；ならびに
（c）ポリペプチドとAIP1との結合を阻害する被験化合物を選択する段階。
【請求項１８】
以下の段階を含む、細胞増殖性疾患を治療するための化合物のスクリーニング方法：
（a）被験化合物の存在下で
（1）配列番号：6のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
（2）配列番号：6のアミノ酸配列からなるタンパク質と同等な生物学的活性を有する、1つまたは複数のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および/または付加された配列番号：6のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
（3）配列番号：6のアミノ酸配列からなるポリペプチドと同等な生物学的活性を有する、配列番号：5のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド、
からなる群より選択されるポリペプチドを、NOTCH2またはSTRINと接触させる段階；
（b）ポリペプチドとNOTCH2またはSTRINとの結合を検出する段階；ならびに
（c）ポリペプチドとNOTCH2またはSTRINとの結合を阻害する被験化合物を選択する段階。
【請求項１９】
以下の段階を含む、細胞増殖性疾患を治療するための化合物のスクリーニング方法：
a）候補化合物を、1つまたは複数のマーカー遺伝子の転写調節領域および転写調節領域の制御下で発現されるレポーター遺伝子を含むベクターが導入された細胞と接触させる段階、この際、1つまたは複数のマーカー遺伝子は配列番号：1、3、および5からなる群より選択されるヌクレオチド配列のいずれか1つを含む；
b）該レポーター遺伝子の活性を測定する段階；ならびに
c）該レポーター遺伝子の発現レベルを対照と比較して低下させる化合物を選択する段階。
【請求項２０】
細胞増殖性疾患が癌である、請求項11〜19のいずれか一項記載の方法。
【請求項２１】
以下からなる群より選択されるポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに対するアンチセンスポリヌクレオチドまたは低分子干渉RNAの薬学的有効量を有効成分として含み、かつ薬学的に許容される担体を含む、細胞増殖性疾患を治療するための組成物：
（a）配列番号：2、4、または6のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（b）配列番号：2、4、または6のアミノ酸配列からなるタンパク質と同等な生物学的活性を有する、1つまたは複数のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および/または付加された配列番号：2、4、または6のアミノ酸配列を含むポリペプチド；ならびに
（c）配列番号：2、4、または6のアミノ酸配列からなるポリペプチドと同等な生物学的活性を有する、配列番号：1、3、または5のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド。
【請求項２２】
以下からなる群より選択されるポリペプチドに対する抗体の薬学的有効量を有効成分として含み、かつ薬学的に許容される担体を含む、細胞増殖性疾患を治療するための組成物：
（a）配列番号：2、4、または6のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（b）配列番号：2、4、または6のアミノ酸配列からなるタンパク質と同等な生物学的活性を有する、1つまたは複数のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および/または付加された配列番号：2、4、または6のアミノ酸配列を含むポリペプチド；ならびに
（c）配列番号：2、4、または6のアミノ酸配列からなるポリペプチドと同等な生物学的活性を有する、配列番号：1、3、または5のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド。
【請求項２３】
請求項13〜19のいずれか一項記載の方法によって選択された化合物の薬学的有効量を有効成分として含み、かつ薬学的に許容される担体を含む、細胞増殖性疾患を治療するための組成物。
【請求項２４】
細胞増殖性疾患が癌である、請求項21〜23のいずれか一項記載の組成物。
【請求項２５】
以下からなる群より選択されるポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに対するアンチセンスポリヌクレオチドまたは低分子干渉RNAの薬学的有効量を投与する段階を含む、細胞増殖性疾患を治療するための方法：
（1）配列番号：2、4、または6のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（2）配列番号：2、4、または6のアミノ酸配列からなるタンパク質と同等な生物学的活性を有する、1つまたは複数のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および/または付加された配列番号：2、4、または6のアミノ酸配列を含むポリペプチド；ならびに
（3）配列番号：2、4、または6のアミノ酸配列からなるポリペプチドと同等な生物学的活性を有する、配列番号：1、3、または5のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド。
【請求項２６】
以下からなる群より選択されるポリペプチドに対する抗体の薬学的有効量を投与する段階を含む、細胞増殖性疾患を治療するための方法：
（a）配列番号：2、4、または6のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（b）配列番号：2、4、または6のアミノ酸配列からなるタンパク質と同等な生物学的活性を有する、1つまたは複数のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および/または付加された配列番号：2、4、または6のアミノ酸配列を含むポリペプチド；ならびに
（c）配列番号：2、4、または6のアミノ酸配列からなるポリペプチドと同等な生物学的活性を有する、配列番号：1、3、または5のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド。
【請求項２７】
請求項13〜19のいずれか一項記載の方法によって選択された化合物の薬学的有効量を投与する段階を含む、細胞増殖性疾患を治療するための方法。
【請求項２８】
細胞増殖性疾患が癌である、請求項25〜27のいずれか一項記載の方法。
【請求項２９】
（a）〜（c）からなる群より選択されるポリペプチド、またはそのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの薬学的有効量を投与する段階を含む、癌の治療または予防のための方法：
（a）配列番号：2、4、または6のアミノ酸配列を含むポリペプチドまたはその断片；
（b）配列番号：2、4、または6のアミノ酸配列からなるタンパク質と同等な生物学的活性を有する、1つまたは複数のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および/または付加された配列番号：2、4、または6のアミノ酸配列を含むポリペプチド、またはその断片；ならびに
（c）配列番号：2、4、または6のアミノ酸配列からなるポリペプチドと同等な生物学的活性を有する、配列番号：1、3、または5のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド、またはその断片。
【請求項３０】
ポリペプチドが、配列番号：80、97、108、124、および164のアミノ酸配列を含むポリペプチドの群より選択される、請求項29記載の癌の治療または予防のための方法。
【請求項３１】
（a）〜（c）からなる群より選択されるポリペプチドを抗原提示細胞と接触させる段階、またはそのポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、またはそのポリヌクレオチドを含むベクターを抗原提示細胞に導入する段階を含む、抗腫瘍免疫を誘導するための方法：
（a）配列番号：2、4、または6のアミノ酸配列を含むポリペプチド、またはその断片；
（b）配列番号：2、4、または6のアミノ酸配列からなるタンパク質と同等な生物学的活性を有する、1つまたは複数のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および/または付加された配列番号：2、4、または6のアミノ酸配列を含むポリペプチド、またはその断片；ならびに
（c）配列番号：2、4、または6のアミノ酸配列からなるポリペプチドと同等な生物学的活性を有する、配列番号：1、3、または5のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド、またはその断片。
【請求項３２】
ポリペプチドが、配列番号：80、97、108、124、および164のアミノ酸配列を含むポリペプチドの群より選択される、請求項31記載の抗腫瘍免疫を誘導するための方法。
【請求項３３】
対象に対して抗原提示細胞を投与する段階をさらに含む、請求項31記載の抗腫瘍免疫を誘導するための方法。
【請求項３４】
（a）〜（c）の群より選択されるポリペプチド、またはそのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの薬学的有効量を有効成分として含み、かつ薬学的に許容される担体を含む、癌の治療または予防のための薬学的組成物：
（a）配列番号：2、4、または6のアミノ酸配列を含むポリペプチド、またはその断片；
（b）配列番号：2、4、または6のアミノ酸配列からなるタンパク質と同等な生物学的活性を有する、1つまたは複数のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および/または付加された配列番号：2、4、または6のアミノ酸配列を含むポリペプチド、またはその断片；ならびに
（c）配列番号：2、4、または6のアミノ酸配列からなるポリペプチドと同等な生物学的活性を有する、配列番号：1、3、または5のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド、またはその断片。
【請求項３５】
配列番号：80、97、108、124、および164の群より選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチドの薬学的有効量を含む、請求項34記載の薬学的組成物。
【請求項３６】
ポリヌクレオチドが発現ベクター中に組み入れられている、請求項34記載の薬学的組成物。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１５】

【図１６】

【図１７】

【図１８】

【図１９】

【図２０】

【図２１】

【図２２】

【図２３】

【図２４】

【図２５】

【図２６】

【図２７】

【図２８】

【図２９】

【図３０】

【図３１】

【図３２】

【図３３】

【図３４】

【図３５】

【図３６】

【図３７】

【図３８Ａ】

【図３８Ｂ】

【図３９Ａ】

【図３９Ｂ】

【図４０Ａ】

【図４０Ｂ】

【図４１】

【公開番号】特開２０１２−１９７９１（Ｐ２０１２−１９７９１Ａ）
【公開日】平成２４年２月２日（２０１２．２．２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−１７８６７３（Ｐ２０１１−１７８６７３）
【出願日】平成２３年８月１８日（２０１１．８．１８）
【分割の表示】特願２００９−７８５５９（Ｐ２００９−７８５５９）の分割
【原出願日】平成１５年６月３日（２００３．６．３）
【出願人】（５０２２４０１１３）オンコセラピー・サイエンス株式会社 (142)
【Ｆターム（参考）】