ヒトＩＬ−２１受容体に対する抗体および該抗体の使用
本出願は、ヒト・インターロイキン−２１受容体（ＩＬ−２１Ｒ）に特異的に結合するヒト抗体および抗原結合断片を提供する。抗体は、ＩＬ−２１Ｒ活性のアンタゴニストとして作用し、それによって免疫応答一般を調節し、そして特にＩＬ−２１Ｒに仲介されるものを調節することも可能である。開示する組成物および方法を、例えば炎症性障害、自己免疫疾患、アレルギー、移植拒絶、癌、および他の免疫系障害の診断、治療または防止に用いることも可能である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
優先権情報
［０００１］本出願は、米国仮特許出願第６０／４５４，３３６号、２００３年３月１４日出願に優先権を請求する。
【０００２】
技術分野
［０００２］本発明は、インターロイキン−２１（ＩＬ−２１）受容体、特にヒトＩＬ−２１受容体に結合する、抗体、例えばヒト抗体、およびその抗原結合ドメイン、並びにＩＬ−２１受容体に仲介される免疫応答を制御する際のその使用に関する。本明細書に開示する抗体は、免疫障害、例えば自己免疫障害を診断し、防止し、そして／または治療するのに有用である。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
［０００３］抗原は免疫応答を開始し、そしてリンパ球の２つの最大集団：Ｔ細胞およびＢ細胞を活性化する。抗原と遭遇すると、Ｔ細胞は増殖し、そしてエフェクター細胞に分化し、一方、Ｂ細胞は増殖し、そして抗体分泌形質細胞に分化する。リンパ球の増殖および分化は、細胞外タンパク質に制御される。これらのタンパク質のいくつかは、リンパ球および他の細胞種に分泌される小タンパク質（＜３０ｋＤａ）であり、サイトカインと呼ばれる。
【０００４】
［０００４］インターロイキン−２１（ＩＬ−２１）は、最近発見されたサイトカインであり、ＩＬ−２、ＩＬ−４およびＩＬ−１５と密接に関連する（Ｐａｒｒｉｓｈ−Ｎｏｖａｋら（２０００）Ｎａｔｕｒｅ ４０８：５７−６３）。ヒトＩＬ−２１は、約１５ｋＤａの分子量を有し、１３１アミノ酸からなり、そしてマウスＩＬ−２１と約５７％の同一性を共有する。ＩＬ−２１は、主に、活性化ＣＤ４＋ Ｔ細胞に産生される。
【０００５】
［０００５］ＩＬ−２１受容体（ＩＬ−２１Ｒ）は、膜貫通ＩＬ−２１結合タンパク質であり、クラスＩサイトカイン受容体ファミリーに属する。ヒトＩＬ−２１ＲおよびマウスＩＬ−２１Ｒはどちらも、本明細書に援用されるＷＯ０１／８５７９２に記載されている。ヒトＩＬ−２１Ｒの予測されるサイズは約５２９アミノ酸である。ＩＬ−２１Ｒは、ＩＬ−２受容体β鎖およびＩＬ−４受容体α鎖に高い配列相同性を示す（Ｏｚａｋｉら（２０００）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９７：１１４３９−１１４４４）。ヒトおよびマウスのＩＬ−２１Ｒアミノ酸配列は、約６２％の同一性を共有する。リガンド結合に際して、ＩＬ−２１Ｒは、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１３およびＩＬ−１５の受容体に共有される、共通のガンマ・サイトカイン受容体鎖（γｃ）と会合する（Ｏｚａｋｉら（２０００）上記；Ａｓａｏら（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６７：１−５）。
【０００６】
［０００６］ＩＬ−２１Ｒは、主に、Ｂ細胞、Ｔ細胞、およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞などのリンパ組織で発現される。ＩＬ−２１Ｒがリンパ系に広く分布していることから、ＩＬ−２１が免疫制御に役割を果たしていることが示唆される。実際、ｉｎ ｖｉｔｒｏ研究によって、ＩＬ−２１が、Ｂ細胞、ＣＤ４＋ Ｔ細胞およびＣＤ８＋ Ｔ細胞、並びにＮＫ細胞の機能を有意に調節することが示されてきている（Ｐａｒｒｉｓｈ−Ｎｏｖａｋら（２０００）上記；Ｋａｓａｉａｎ，Ｍ．Ｔ．ら（２００２）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．１６：５５９−５６９）。ＩＬ−２１およびＩＬ−２１Ｒは、マクロファージの活性および滑膜細胞を調節するのにも重要であることもまた、示されてきている。例えば、ＩＬ−２１は、抗ＣＤ４０抗体で刺激されたＢ細胞の増殖を増大させ、そして抗ＩｇＭおよびＩＬ−４で刺激されたＢ細胞の増殖を抑制する。ＩＬ−２１は、Ｔ細胞およびヒトＮＫ細胞の増殖および細胞溶解活性を増大させる。ＩＬ−２１は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、および滑膜細胞に分泌される、サイトカイン、ケモカイン、またはその組み合わせの発現もまた、仲介する。Ｂ細胞、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、および滑膜細胞は、ＩＬ−２１に依存しているため、ＩＬ−２１ＲへのＩＬ−２１の結合を改変すると、特定の免疫応答が影響を受ける可能性もある。こうした操作によって、免疫系障害、例えば自己免疫疾患障害、炎症性障害、アレルギー、移植拒絶、癌、免疫不全、および他の障害を治療する手段が提供される。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
発明の概要
［０００７］本出願は、ＩＬ−２１受容体（「ＩＬ−２１Ｒ」）、特にヒトＩＬ−２１受容体に、高親和性および高特異性で結合する抗体を提供する。１つの態様において、抗体は、ＩＬ−２１Ｒ活性を減少させるか、阻害するか、または該活性に拮抗する。こうした抗体を用いて、ＩＬ−２１Ｒ活性に拮抗することによって、免疫応答または免疫細胞関連障害を制御することも可能である。他の態様において、抗ＩＬ−２１Ｒ抗体を診断に用いるか、あるいはＩＬ−２１Ｒ発現細胞に療法剤または細胞傷害剤を搬送するターゲティング抗体として用いることも可能である。したがって、本発明の抗ＩＬ−２１Ｒ抗体は、免疫細胞関連病変（例えば：Ｔ細胞（ＣＤ８＋ Ｔ細胞、ＣＤ４＋ Ｔ細胞）、ＮＫ細胞、Ｂ細胞、マクロファージおよび巨核球の少なくとも１つの活性と関連する病変、移植拒絶および自己免疫障害を含む）を診断し、そして治療するのに有用である。
【０００８】
［０００８］したがって、１つの側面において、本発明は、ＩＬ−２１Ｒ、特にヒトＩＬ−２１Ｒに結合する単離抗体を特徴とする。抗ＩＬ−２１Ｒ抗体は、以下の特徴の少なくとも１つを有することも可能である：（１）モノクローナル抗体または単一特異性抗体である；（２）ヒト抗体またはｉｎ ｖｉｔｒｏ生成抗体である；（３）ＩＬ−２１Ｒ、特にヒトＩＬ−２１Ｒの細胞外ドメインに、少なくとも１０６Ｍ−１の親和性定数（Ｋａ）で結合する；および（４）ＩＬ−２１ＲへのＩＬ−２１の結合を、例えば実施例９に記載する、細胞に基づくアッセイで測定した際、ＩｇＧとして、１０ｎＭ以下のＩＣ５０で阻害するか、またはＩＬ−２１Ｒへの抗体の結合を、例えば実施例１１に記載するエピトープ結合アッセイで測定した際、１０ｎＭ以下のＩＣ５０で阻害する。
【０００９】
［０００９］本発明の抗体の限定されない具体例は、本明細書において、「ＭＵＦ」、「ＭＵＦ−生殖系列」、「ＭＵ１１」、「１８Ｇ４」、「１８Ａ５」、「１９Ｆ５」、「ＣＰ５Ｇ２」および「Ｒ１８」と称される。本発明の抗体は、ＩＬ−２１Ｒの細胞外ドメイン、例えば配列番号４３（ヒトＩＬ−２１Ｒ）のほぼアミノ酸２０〜２３５、あるいは該配列に少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれより同一である配列に、特異的に結合可能である。他の態様において、抗体は、ＩＬ−２１Ｒの断片、例えば配列番号４３に示すアミノ酸配列に隣接する少なくとも１０、２０、５０、７５、１００、１５０、または２００アミノ酸の断片、あるいは該配列に少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれより同一である配列に、特異的に結合する。他の態様において、抗体は、ＩＬ−２１Ｒの細胞外ドメインに結合し、そしてそのターゲット・エピトープへの「ＭＵＦ」、「ＭＵＦ−生殖系列」、「ＭＵ１１」、「１８Ｇ４」、「１８Ａ５」、「１９Ｆ５」、「ＣＰ５Ｇ２」または「Ｒ１８」の結合を競合的に阻害する。さらに他の態様において、抗体は、ＩＬ−２１Ｒの細胞外ドメインに結合し、そしてＩＬ−２１ＲへのＩＬ−２１の結合を競合的に阻害する。本発明の抗体による、受容体へのＩＬ−２１の結合のこうした阻害は、本明細書に提供する１以上のアッセイによって測定可能である。
【００１０】
［００１０］１つの態様において、本発明の抗体には、「ＭＵＦ」、「ＭＵＦ−生殖系列」、「ＭＵ１１」、「１８Ｇ４」、「１８Ａ５」、「１９Ｆ５」、「ＣＰ５Ｇ２」または「Ｒ１８」のｓｃＦｖ断片のＶＨドメイン、ＶＬドメイン、またはその組み合わせが含まれる。例えば、抗体には、表１Ａおよび表１Ｂに示すアミノ酸配列（ＶＨに関しては配列番号１、１９、４７、６５、８３、１０１、１１９または１３７、そしてＶＬに関しては配列番号２、２０、４８、６６、８４、１０２，１２０または１３８）、または該配列に実質的に同一な配列（例えば該配列に少なくとも約８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれより同一であるか、あるいは配列番号１、２、１９、２０、４７、４８、６５、６６、８３、８４、１０１、１０２、１１９、１２０、１３７または１３８と、１、２、５、１０または１５アミノ酸残基以下が異なる配列）を有するＶＨドメインおよび／またはＶＬドメインが含まれる。別の態様において、抗体には、表１Ａおよび表１Ｂに示すヌクレオチド配列（ＶＨに関しては配列番号１０、２８、５６、７４、９２、１１０、１２８、または１４６、そしてＶＬに関しては配列番号１１、２９、５７、７５、９３、１１１、１２９、または１４７）、または該配列に実質的に同一な配列（例えば該配列に少なくとも約８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれより同一であるか、あるいは配列番号１０、１１、２８、２９、５６、５７、７４、７５、９２、９３、１１０、１１１、１２８、１２９、１４６または１４７と、３、６、１５、３０または４５ヌクレオチド以下が異なる配列）を有する核酸にコードされるＶＨドメインおよび／またはＶＬドメインが含まれる。典型的には、ｓｃＦｖ断片中のＶＨドメインおよびＶＬドメインは、リンカー配列によって連結されている。
【００１１】
［００１１］他の態様において、抗体には、表１Ａおよび表１Ｂに示すアミノ酸配列（配列番号３、２１、４９、６７、８５、１０３、１２１、または１３９）、または該配列に実質的に同一な配列（例えば該配列に少なくとも約８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれより同一であるか、あるいは配列番号３、２１、４９、６７、８５、１０３、１２１、または１３９と、１、２、５、１０、１５、２０、３０、または３５アミノ酸残基以下が異なる配列）を有するｓｃＦｖドメインが含まれる。別の態様において、抗体には、表１Ａおよび表１Ｂに示すヌクレオチド配列（配列番号１２、３０、５８、７６、９４、１１２、１３０、または１４８）、または該配列に実質的に同一な配列（例えば該配列に少なくとも約８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれより同一であるか、あるいは配列番号１２、３０、５８、７６、９４、１１２、１３０、または１４８と、３、６、１５、３０、４５、６０、９０または１０５ヌクレオチド以下が異なる配列）を有する核酸にコードされるｓｃＦｖドメインが含まれる。さらに他の態様において、抗体は、これらのＶＨドメインおよびＶＬドメインの相補性決定領域（ＣＤＲ）を少なくとも１つ含む。例えば、抗体には、表１Ａおよび表１Ｂに示すアミノ酸配列（配列番号４、５、６、２２、２３、２４、５０、５１、５２、６８、６９、７０、８６、８７、８８、１０４、１０５、１０６、１２２、１２３、１２４、１４０、１４１、または１４２）、または該配列に実質的に相同な配列（例えば該配列に少なくとも約８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれより同一である配列）を有する、ＶＨドメインの１つ、２つ、または３つのＣＤＲ（すなわちＨ１、Ｈ２、およびＨ３）が含まれることも可能である。いくつかの態様において、配列番号４、５、６、２２、２３、２４、５０、５１、５２、６８、６９、７０、８６、８７、８８、１０４、１０５、１０６、１２２、１２３、１２４、１４０、１４１、または１４２に示す、Ｈ１、Ｈ２、またはＨ３アミノ酸配列に実質的に相同な配列には、１以上のアミノ酸置換、例えば１以上の保存的アミノ酸置換が含まれる。別の態様において、抗体には、表１Ａおよび表１Ｂに示すアミノ酸配列（配列番号７、８、９、２５、２６、２７、５３、５４、５５、７１、７２、７３、８９、９０、９１、１０７、１０８、１０９、１２５、１２６、１２７、１４３、１４４、または１４５）、または該配列に実質的に同一な配列（例えば該配列に少なくとも約８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれより同一である配列）を有する、ＶＬドメインの１つ、２つ、または３つのＣＤＲ（すなわちＬ１、Ｌ２、およびＬ３）が含まれることも可能である。いくつかの態様において、配列番号７、８、９、２５、２６、２７、５３、５４、５５、７１、７２、７３、８９、９０、９１、１０７、１０８、１０９、１２５、１２６、１２７、１４３、１４４、または１４５に示す、Ｌ１、Ｌ２、またはＬ３アミノ酸配列に実質的に相同な配列には、１以上のアミノ酸置換、例えば１以上の保存的アミノ酸置換が含まれる。
【００１２】
［００１２］さらなる態様において、抗体は、表１Ａおよび表１Ｂに示すアミノ酸配列（配列番号６、２４、５２、７０、８８、１０６、１２４、または１４２）、または該配列に実質的に同一な配列（例えば該配列に少なくとも約８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれより同一である配列）を有し、１以上のアミノ酸置換、例えば１以上の保存的アミノ酸置換を含む、ＭＵＦ、ＭＵ１１、ＭＵＦ−生殖系列、１８Ｇ４、１８Ａ５、１９Ｆ５、ＣＰ５Ｇ２、またはＲ１８のＶＨドメインのＣＤＲを含む。本発明記載の抗体は、Ｈ３などの単一ＣＤＲ、またはＨ１、Ｈ２およびＨ３の組み合わせいずれかを含む、重鎖可変領域いずれかを含むことも可能である。例えば、いくつかの態様において、抗体には、ＣＤＲ２（Ｈ２）と組み合わせてＣＤＲ（Ｈ３）が含まれることも可能である。他の態様において、抗体には、ＣＤＲ１（Ｈ１）と組み合わせてＣＤＲ３（Ｈ３）が、またはＨ１ ＣＤＲおよびＨ２ ＣＤＲが含まれることも可能である。しかし、好ましくは、抗体には、配列番号６、２４、５２、７０、８８、１０６、１２４、１４２、およびそのアミノ酸置換、例えば１以上の保存的アミノ酸置換のいずれかに示すＣＤＲ３（Ｈ３）を含む重鎖可変領域が、単独で、あるいはＨ１およびＨ２の一方または両方と組み合わせて、含まれる。
【００１３】
［００１３］同様に、いくつかの態様において、抗体は、ＭＵＦ、ＭＵ１１、ＭＵＦ−生殖系列、１８Ｇ４、１８Ａ５、１９Ｆ５、ＣＰ５Ｇ２、またはＲ１８のＶＬドメインのＣＤＲ、例えば表１Ａおよび表１Ｂに示すアミノ酸配列（配列番号９、２７、５５、７３、９１、１０９、１２７、または１４５）、または該配列に実質的に同一な配列（例えば該配列に少なくとも約８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれより同一である配列）を有し、１以上のアミノ酸置換、例えば１以上の保存的アミノ酸置換を含む、Ｌ３ ＣＤＲを含む。本発明記載の抗体は、Ｌ３などの単一ＣＤＲ、またはＬ１、Ｌ２およびＬ３の組み合わせいずれかを含む、軽鎖可変領域いずれかを含むことも可能である。例えば、いくつかの態様において、抗体には、Ｌ２と組み合わせてＬ３が含まれることも可能である。他の態様において、抗体には、Ｌ１と組み合わせてＬ３が含まれることも可能である。さらに別の態様において、抗体には、Ｌ１ ＣＤＲおよびＬ２ ＣＤＲの組み合わせが含まれることも可能である。しかし、好ましくは、抗体には、配列番号９、２７、５５、７３、９１、１０９、１２７、１４５、およびそのアミノ酸置換、例えば１以上の保存的アミノ酸置換のいずれかに示すＬ３を含む軽鎖可変領域が、単独で、あるいはＬ１およびＬ２の一方または両方と組み合わせて、含まれる。
【００１４】
［００１４］いくつかの態様において、本発明の抗体は、配列番号１、１９、４７、６５、８３、１０１、１１９または１３７に示すアミノ酸配列に少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれより同一であるＶＨドメイン、および配列番号２、２０、４８、６６、８４、１０２、１２０または１３８に示すアミノ酸配列に少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または９９％より同一であるＶＬドメインが含まれる抗体と、ＩＬ−２１Ｒ結合に関して競合する。特定の態様において、抗体は、配列番号６、２４、５２、７０、８８、１０６、１２４、１４２、およびそのアミノ酸置換、例えばその１以上の保存的アミノ酸置換から選択される少なくとも１つの重鎖ＣＤＲを含む重鎖可変領域が含まれる抗体と、ＩＬ−２１Ｒ結合に関して競合する。特定の態様において、本発明記載の抗体は、配列番号９、２７、５５、７３、９１、１０９、１２７、１４５、およびそのアミノ酸置換、例えばその１以上の保存的アミノ酸置換から選択される少なくとも１つの軽鎖ＣＤＲを含む軽鎖可変領域が含まれる抗体と、ＩＬ−２１Ｒ結合、例えばヒトＩＬ−２１Ｒ結合に関して競合する。本発明の抗体が、ＩＬ−２１Ｒ、例えばヒトＩＬ−２１Ｒへの結合に関して競合する抗体には、配列番号６、２４、５２、７０、８８、１０６、１２４、および１４２から選択される重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号９、２７、５５、７３、９１、１０９、１２７、および１４５から選択される軽鎖ＣＤＲ両方が含まれることも可能である。いくつかの態様において、本発明記載の抗体には、ＭＵＦに関しては配列番号４、５、６；ＭＵ１１に関しては配列番号２２、２３、２４；１８Ｇ４に関しては配列番号５０、５１、５２；１８Ａ５に関しては配列番号６８、６９、７０；ＭＵＦ−生殖系列に関しては配列番号８６、８７、８８；１９Ｆ５に関しては配列番号１０４、１０５、１０６；ＣＰ５Ｇ２に関しては配列番号１２２、１２３、１２４；およびＲ１８に関しては配列番号１４０、１４１、１４２から選択される１より多い重鎖ＣＤＲ、並びに／あるいはＭＵＦに関しては配列番号７、８、９；ＭＵ１１に関しては配列番号２５、２６、２７；１８Ｇ４に関しては配列番号５３、５４、５５；１８Ａ５に関しては配列番号７１、７２、７３；ＭＵＦ−生殖系列に関しては配列番号８９、９０、９１；１９Ｆ５に関しては配列番号１０７、１０８、１０９；ＣＰ５Ｇ２に関しては配列番号１２５、１２６、１２７；およびＲ１８に関しては配列番号１４３、１４４、１４５から選択される１以上の軽鎖可変領域ＣＤＲが含まれる。
【００１５】
［００１５］さらに他の態様において、本発明記載の抗体は、ＩＬ−２１、例えばヒトＩＬ−２１と、ＩＬ−２１Ｒ、例えばヒトＩＬ−２１Ｒへの結合に関して競合する。
［００１６］本発明の抗体は、全長である（例えば少なくとも１つの全長重鎖および少なくとも１つの全長軽鎖を含む）ことも可能であるし、または抗原結合断片のみ（例えばＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖまたは一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ））を含むことも可能である。抗体には：カッパ、ラムダ、アルファ、ガンマ、デルタ、イプシロンおよびミュー定常領域遺伝子のいずれかから選択される、定常領域、またはその部分が含まれることも可能である。例えば、多様なアイソタイプの重鎖定常領域が使用可能であり、これらには：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、およびＩｇＥが含まれる。軽鎖定常領域は、カッパまたはラムダから選択されることも可能である。抗体は、ＩｇＧであることも可能であるし、あるいはＩｇＧ１κまたはＩｇＧ１λであることも可能である。
【００１６】
［００１７］本明細書記載の抗ＩＬ−２１Ｒ抗体は、誘導体化されることも、または別の機能分子（例えば別のペプチドまたはタンパク質（例えばＦａｂ断片））に連結されることも可能である。例えば、本発明の抗体を、少なくとも１つの他の分子実体、例えばとりわけ、別の抗体（例えば二重特異性抗体または多重特異性抗体）、毒素、放射性同位体、細胞傷害剤または細胞分裂停止剤に（例えば化学的カップリング、遺伝子融合、非共有会合または他のものによって）機能するように連結することも可能である。
【００１７】
［００１８］別の側面において、本発明は、少なくとも１つの抗ＩＬ−２１Ｒ抗体および薬学的に許容しうるキャリアーを含有する薬剤組成物を特徴とする。薬剤組成物には、少なくとも１つの抗ＩＬ−２１Ｒ抗体および少なくとも１つの療法剤（例えば、本明細書により詳細に記載するような、サイトカインおよび増殖因子阻害剤、免疫抑制剤、抗炎症剤、代謝阻害剤、酵素阻害剤、細胞傷害剤、細胞分裂停止剤、またはその併用）の併用がさらに含まれることも可能である。抗ＩＬ−２１Ｒ抗体および療法剤の併用もまた、本発明の範囲内である。本発明の組成物および併用を用いて、ＩＬ−２１依存性免疫細胞、例えばＢ細胞、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、および滑膜細胞を制御することも可能である。
【００１８】
［００１９］別の側面において、本発明は、免疫細胞関連疾患に罹患した被験者を治療する方法を特徴とする。該方法は、免疫細胞の少なくとも１つのＩＬ−２１Ｒ活性を阻害するのに十分な量の抗ＩＬ−２１Ｒ抗体を被験者に投与し、それによって免疫細胞関連疾患を治療することを含む。
【００１９】
［００２０］抗ＩＬ−２１Ｒ抗体を、単独で、または本明細書に記載するような他の療法剤と併用して、被験者に投与することも可能である。被験者は、免疫細胞関連病変（例えば：Ｔ細胞、ＮＫ細胞、Ｂ細胞、マクロファージおよび巨核球の少なくとも１つの異常な活性と関連する病変）に罹患した哺乳動物であることも可能である。被験者はヒトであることも可能である。例えば、該方法を用いて、移植拒絶および自己免疫疾患などの免疫細胞関連障害に罹患した被験者を治療することも可能である。自己免疫疾患には、糖尿病（Ｉ型）、関節炎（関節リウマチ、若年性関節リウマチ、骨関節炎、乾癬性関節炎、および強直性脊椎炎を含む）、多発性硬化症、重症筋無力症、脈管炎、全身性エリテマトーデス、自己免疫甲状腺炎、皮膚炎（アトピー性皮膚炎および湿疹様皮膚炎を含む）、乾癬、強皮症、喘息、アレルギー、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、およびクローン病が含まれることも可能である。本発明の抗ＩＬ−２１Ｒ抗体を用いた、関節炎障害（例えば、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、骨関節炎、乾癬性関節炎、および強直性脊椎炎の少なくとも１つから選択される障害）の治療は、本発明の態様である。
【００２０】
［００２１］別の側面において、本発明は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで、試料中のＩＬ−２１Ｒの存在を検出する方法を提供する。試料には、血清、血漿、組織および生検などの生物学的試料が含まれることも可能である。本方法を用いて、本明細書に記載するような免疫細胞関連障害などの障害を診断することも可能である。該方法は：（１）試料または対照試料を抗ＩＬ−２１Ｒ抗体と接触させ、そして（２）抗ＩＬ−２１Ｒ抗体および試料または対照試料間の複合体形成を検出することを含み、ここで、対照試料に比較して、試料中の複合体形成に統計的に有意な変化があれば、試料中にＩＬ−２１Ｒが存在する指標となる。
【００２１】
［００２２］別の側面において、本発明は、ｉｎ ｖｉｖｏで、ＩＬ−２１Ｒの存在を検出する方法（例えば被験者におけるｉｎ ｖｉｖｏ画像化）を提供する。該方法を用いて、障害、例えば本明細書に記載するような免疫細胞関連障害を診断することも可能である。該方法は：（１）ＩＬ−２１Ｒへの抗体の結合を可能にする条件下で、抗ＩＬ−２１Ｒ抗体を、被験者または対照被験者に投与し、そして（２）抗体およびＩＬ−２１Ｒ間の複合体形成を検出することを含み、ここで、対照、例えば対照被験者に比較して、被験者における複合体形成に統計的に有意な変化があれば、ＩＬ−２１Ｒが存在する指標となる。
【００２２】
［００２３］本発明記載の抗体を、検出可能な物質で直接または間接的に標識して、結合抗体または非結合抗体の検出を容易にすることも可能である。適切な検出可能物質には、多様な酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質および放射性物質が含まれる。
【００２３】
［００２４］別の側面において、本発明は、ｉｎ ｖｉｖｏで、剤、例えば療法剤または細胞傷害剤を、ＩＬ−２１Ｒ発現細胞に搬送するかまたはターゲティングする方法を提供する。該方法は、ＩＬ−２１Ｒへの抗体の結合を可能にする条件下で、抗ＩＬ−２１Ｒ抗体を被験者に投与することを含む。抗体を、第二の療法部分、例えば毒素にカップリングすることも可能である。
【００２４】
［００２５］本開示は、ＭＵＦ、ＭＵＦ−生殖系列、ＭＵ１１、１８Ｇ４、１８Ａ５、１９Ｆ５、ＣＰ５Ｇ２およびＲ１８のＶＨドメインおよびＶＬドメイン由来の核酸配列を提供する。ＭＵＦ、ＭＵＦ−生殖系列、ＭＵ１１、１８Ｇ４、１８Ａ５、１９Ｆ５、ＣＰ５Ｇ２およびＲ１８由来の少なくとも１つのＣＤＲを含む核酸配列もまた提供する。本開示はまた、こうした核酸を含むベクターおよび宿主細胞も提供する。
【００２５】
［００２６］本開示は、ＭＵＦ、ＭＵＦ−生殖系列、ＭＵ１１、１８Ｇ４、１８Ａ５、１９Ｆ５、ＣＰ５Ｇ２およびＲ１８のＶＨドメインまたはＶＬドメイン由来のドメインのすべてまたは部分を含む、新規ＶＨドメインおよびＶＬドメイン、並びに機能する抗体を産生する方法をさらに提供する。
【００２６】
［００２７］本開示のさらなる側面は、部分的に本説明に示され、そして部分的に本説明から明らかであるか、または本発明を実施することによって、確認可能である。本発明は請求項に示され、そして特に指摘され、そして本開示は、請求項の範囲を限定すると見なしてはならない。以下の詳細な説明には、本発明の多様な態様の典型的な描写が含まれ、これは請求される発明を制限しない。付随する図は、本明細書の一部を構成し、そして説明とともに、態様を例示するためにのみ働き、そして本発明を制限しない。
【課題を解決するための手段】
【００２７】
詳細な説明
定義
［００４１］本発明をより容易に理解することが可能であるように、まず、特定の用語を定義する。さらなる定義を、詳細な説明全体に示す。
【００２８】
［００４２］「抗体」は、免疫グロブリンまたはその断片を指し、そして抗原結合部位を含むポリペプチドいずれかを含む。該用語は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、単一特異性抗体、多重特異性抗体、非特異的抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、一本鎖抗体、キメラ抗体、合成抗体、組換え抗体、ハイブリッド抗体、突然変異抗体、移植抗体、およびｉｎ ｖｉｔｒｏ生成抗体に限定されない。語「損なわれていない（ｉｎｔａｃｔ）」が先行しない限り、用語「抗体」には、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆｄ、ｄＡｂ、および抗原結合機能を保持する他の抗体断片などの抗体断片が含まれる。典型的には、こうした断片は、抗原結合ドメインを含むであろう。
【００２９】
［００４３］用語「抗原結合ドメイン」および「抗原結合断片」は、抗体および抗原間の特異的結合に関与するアミノ酸を含む抗体分子の一部を指す。抗体に特異的に認識されそして結合される抗原部分は、「エピトープ」と呼ばれる。抗原結合ドメインは、抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）および抗体重鎖可変領域（ＶＨ）を含むことも可能である；しかしながら、両方を含む必要はない。例えば、Ｆｄ断片は、２つのＶＨ領域を有し、そしてしばしば、損なわれていない抗原結合ドメインのいくつかの抗原結合機能を保持する。抗体の抗原結合断片の例には（１）ＶＬドメイン、ＶＨドメイン、ＣＬドメインおよびＣＨ１ドメインからなる一価断片である、Ｆａｂ断片；（２）ヒンジ領域のジスルフィド架橋に連結される２つのＦａｂ断片を含む二価断片である、Ｆ（ａｂ’）２断片；（３）２つのＶＨドメインおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；（４）抗体の単一アームのＶＬドメインおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片；（５）ＶＨドメインからなるｄＡｂ断片（Ｗａｒｄら（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４−５４６）；および（６）単離相補性決定領域（ＣＤＲ）が含まれる。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメイン、ＶＬおよびＶＨは、別個の遺伝子にコードされているが、組換え法を用い、ＶＬ領域およびＶＨ領域が対形成して一価分子を形成する単一のタンパク質鎖として作成することを可能にする合成リンカーによって、これらを連結することも可能である（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる；例えば、Ｂｉｒｄら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３−４２６；およびＨｕｓｔｏｎら（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９−５８８３を参照されたい）。当業者に知られる慣用的技術を用いてこれらの抗体断片を得て、そして損なわれていない抗体の場合と同じ方式で、有用性に関してスクリーニングする。
【００３０】
［００４４］用語「有効量」は、ＩＬ−２１Ｒ活性を制御して、臨床的症状を改善するか、または望ましい生物学的結果、例えばＴ細胞および／またはＢ細胞活性の減少、自己免疫の抑制、移植拒絶の抑制などを達成するのに十分である、投薬量または量を指す。
【００３１】
［００４５］用語「ヒト抗体」には、Ｋａｂａｔら（Ｋａｂａｔら（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版，米国保健社会福祉局，ＮＩＨ刊行物第９１−３２４２号を参照されたい）に記載されるようなヒト生殖系列免疫グロブリン配列に実質的に対応する可変領域および定常領域を有する抗体が含まれる。本発明のヒト抗体には、例えばＣＤＲ、そして特にＣＤＲ３内に、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列にコードされないアミノ酸残基（例えばｉｎ ｖｉｔｒｏのランダム突然変異誘発または部位特異的突然変異誘発によって、あるいはｉｎ ｖｉｖｏで体細胞突然変異によって導入された突然変異）が含まれることも可能である。ヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列にコードされないアミノ酸残基で置き換えられた、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、またはそれより多い位を有することも可能である。
【００３２】
［００４６］用語「ＩＬ−２１Ｒ活性」は、細胞上のＩＬ−２１ＲにＩＬ−２１が結合した結果、開始されるかまたは中断される、少なくとも１つの細胞プロセスを指す。ＩＬ−２１Ｒ活性には、限定されるわけではないが：（１）ＩＬ−２１（例えばヒトＩＬ−２１）結合；（２）シグナル伝達分子（例えばγｃおよび／またはＪＡＫ−１）との会合；（３）ＳＴＡＴタンパク質（例えばＳＴＡＴ５、ＳＴＡＴ３、またはその組み合わせ）のリン酸化の刺激；（４）ＳＴＡＴタンパク質の活性化；および（５）免疫細胞の増殖、分化、エフェクター細胞機能、細胞溶解活性、サイトカイン分泌、生存、またはその組み合わせの調節が含まれる。免疫細胞には、ＣＤ８＋ Ｔ細胞およびＣＤ４＋ Ｔ細胞、ＮＫ細胞、Ｂ細胞、マクロファージ、および巨核球が含まれることも可能である。例えば、実施例８および９に記載するように、Ｔ細胞増殖アッセイを用いて、ＩＬ−２１Ｒ活性をｉｎ ｖｉｔｒｏで測定することも可能である。例えば、実施例１２に記載するように、免疫応答または障害の進行をスコア付けすることによって、ＩＬ−２１Ｒ活性をｉｎ ｖｉｖｏで測定することもまた可能である。
【００３３】
［００４７］句、ＩＬ−２１Ｒ活性およびその同族を「阻害する」またはこれらに「拮抗する」は、抗ＩＬ−２１Ｒ抗体の結合による、ＩＬ−２１Ｒの少なくとも１つの活性の減少、阻害、または別の方式の削減を指し、ここで、減少は、同抗体の非存在下でのＩＬ−２１Ｒの活性に比較したものである。実施例７、８、９および１１に記載するように、活性を測定することも可能である。阻害または拮抗は、必ずしも、ＩＬ−２１Ｒポリペプチド生物学的活性の完全な除去を示さない。活性の減少は、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、またはそれより多いことも可能である。
【００３４】
［００４８］用語「インターロイキン−２１受容体」または「ＩＬ−２１Ｒ」は、ＮＩＬＲとしても知られる、クラスＩサイトカイン受容体を指す（ＷＯ０１／８５７９２；Ｐａｒｒｉｓｈ−Ｎｏｖａｋら（２０００）Ｎａｔｕｒｅ ４０８：５７−６３；Ｏｚａｋｉら（２０００）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９７：１１４３９−１１４４４４）。リガンド結合に際して、ＩＬ−２１Ｒは共通γサイトカイン受容体鎖（γｃ）と相互作用し（Ａｓａｏら（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６７：１−５）、そしてＳＴＡＴ１およびＳＴＡＴ３（Ａｓａｏら（２００１）上記）またはＳＴＡＴ５（Ｏｚａｋｉら（２０００）上記）のリン酸化を誘導する。ＩＬ−２１Ｒは、リンパ系組織に広い分布を示す。用語「ＩＬ−２１Ｒ」は、ＩＬ−２１に結合可能な受容体（哺乳動物のものであることも可能）を指し、そして以下の特徴の少なくとも１つを有する：（１）天然存在哺乳動物ＩＬ−２１Ｒポリペプチドまたはその断片のアミノ酸配列、例えば配列番号４３（ヒト）または配列番号４５（ネズミ）に示すアミノ酸配列またはその断片；（２）配列番号４３（ヒト）または配列番号４５（ネズミ）に示すアミノ酸配列またはその断片に、実質的に同一である、例えば少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一である、アミノ酸配列；（３）天然存在哺乳動物ＩＬ−２１Ｒヌクレオチド配列またはその断片（例えば配列番号４４（ヒト）もしくは配列番号４６（ネズミ）またはその断片）がコードする、アミノ酸配列；（４）配列番号４４（ヒト）または配列番号４６（ネズミ）に示すヌクレオチド配列またはその断片に、実質的に同一である、例えば少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一であるヌクレオチド配列がコードする、アミノ酸配列；（５）天然存在ＩＬ−２１Ｒヌクレオチド配列またはその断片、例えば配列番号４４（ヒト）もしくは配列番号４６（ネズミ）またはその断片に縮重しているヌクレオチド配列がコードする、アミノ酸配列；あるいは（６）ストリンジェントな条件下、例えば非常にストリンジェントな条件下で、前述のヌクレオチドの１つにハイブリダイズするヌクレオチド配列。ＩＬ−２１Ｒは、哺乳動物起源、例えばヒトまたはマウスのＩＬ−２１に結合することも可能である（Ｐａｒｒｉｓｈ−Ｎｏｖａｋら（２０００）上記）。
【００３５】
［００４９］本明細書において、「ｉｎ ｖｉｔｒｏ生成抗体」は、可変領域のすべてまたは一部（例えば少なくとも１つのＣＤＲ）が、非免疫細胞選択（例えばｉｎ ｖｉｔｒｏファージディスプレイ、タンパク質チップ、または抗原に結合する能力に関して候補配列を試験可能である他の方法いずれか）で生成される抗体を指す。この用語は、免疫細胞において、ゲノム再編成によって生成された配列を排除する。
【００３６】
［００５０］用語「単離」は、天然環境から実質的に遊離している分子を指す。例えば、単離タンパク質は、該タンパク質が由来する細胞または組織供給源由来の細胞成分または他のタンパク質を実質的に含まない。該用語はまた、単離タンパク質が、薬剤組成物用に十分に純粋であるか；または少なくとも７０〜８０％（ｗ／ｗ）純粋であるか；または少なくとも８０〜９０％（ｗ／ｗ）純粋であるか；または少なくとも９０〜９５％純粋であるか；または少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％（ｗ／ｗ）純粋である調製物も指す。
【００３７】
［００５１］ヒトＩＬ−２１Ｒのヌクレオチド配列および予測されるアミノ酸配列を、それぞれ、配列番号４４および配列番号４３に示す。ヒトＩＬ−２１Ｒアミノ酸配列（配列番号４３）の解析によって、以下の構造特徴が明らかになった：リーダー配列（配列番号４３のほぼアミノ酸１〜１９）；ＷＳＸＷＳモチーフ（配列番号４３のほぼアミノ酸２１３〜２１７）；膜貫通ドメイン（配列番号４３のほぼアミノ酸２３６〜２５２）；細胞外ドメイン（配列番号４３のほぼアミノ酸１〜２３５および成熟ＩＬ−２１Ｒ配列のほぼ２０〜２３５）；および配列番号４３のほぼアミノ酸２５３〜５３８の細胞内ドメイン。成熟ヒトＩＬ−２１Ｒは、配列番号４３のアミノ酸２０〜５３８の配列を有すると考えられる。
【００３８】
［００５２］用語「レパートリー」は、免疫グロブリンをコードする配列に完全にまたは部分的に由来するヌクレオチド配列の遺伝的に多様なコレクションを指す。配列は、重鎖のＶセグメント、Ｄセグメント、およびＪセグメント、並びに軽鎖のＶセグメントおよびＪセグメントのｉｎ ｖｉｖｏ再編成によって生成されることも可能である。あるいは、配列は、再編成が生じる反応、例えばｉｎ ｖｉｔｒｏ刺激で、細胞から生成されることも可能である。あるいは、配列の一部またはすべては、ＤＮＡスプライシング、ヌクレオチド合成、突然変異誘発、および他の方法によって得られることも可能であり、例えば米国特許５，５６５，３３２を参照されたい。
【００３９】
［００５３］用語「特異的結合」、「選択的結合」、および「選択的に結合する」は、生理学的条件下で、２つの分子が比較的安定な複合体を形成することを指す。選択的結合は、通常、低親和性で、中程度から高い結合能の非特異的結合と区別されるように、高親和性および低いか中程度の結合能を持つことに特徴付けられる。典型的には、親和性定数Ｋａが１０６Ｍ−１より高い場合、結合は特異的であるかまたは選択的であると見なされる。必要であれば、結合条件を変化させることによって、選択的結合に実質的に影響を及ぼすことなく、非特異的結合を減少させることも可能である。当業者が、日常的技術を用いて、抗体濃度、溶液のイオン強度、温度、結合を可能にする時間、ブロッキング剤（例えば血清アルブミン、牛乳カゼイン）の濃度などの適切な結合条件を最適にすることも可能である。実施例１〜１１に実例となる条件を示すが、一般の当業者に知られる他の条件が、本発明の範囲内に属する。
【００４０】
［００５４］本明細書において、用語「ストリンジェント」は、ハイブリダイゼーションおよび洗浄の条件を記載する。ストリンジェントな条件は、当業者に知られ、そしてＣｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，ニューヨーク（１９８９），６．３．１−６．３．６に見出されることも可能である。水性の方法および非水性の方法が該参考文献に記載され、そしてどちらを使用することも可能である。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件の一例は、６×塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）中、約４５℃でのハイブリダイゼーション、その後、０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中、約５０℃での少なくとも１回の洗浄である。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件の第二の例は、６×ＳＳＣ中、約４５℃でのハイブリダイゼーション、その後、０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中、５５℃での少なくとも１回の洗浄である。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件の別の例は、６×ＳＳＣ中、約４５℃でのハイブリダイゼーション、その後、０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中、６０℃での少なくとも１回の洗浄である。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件のさらなる例は、６×ＳＳＣ中、約４５℃でのハイブリダイゼーション、その後、０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中、６５℃での少なくとも１回の洗浄である。非常にストリンジェントな条件には、０．５Ｍリン酸ナトリウム、７％ＳＤＳ中、６５℃でのハイブリダイゼーション、その後、０．２×ＳＳＣ、１％ＳＤＳ中、６５℃での少なくとも１回の洗浄が含まれる。
【００４１】
［００５５］句「実質的に示すように」、「実質的に同一な」または「実質的に相同な」は、相当するアミノ酸またはヌクレオチド配列（例えばＣＤＲ（単数または複数）、ＶＨドメインまたはＶＬドメイン）が、示す配列に比較して、同一であるか、または実質的でない相違（保存的アミノ酸置換を通じたもの）を有するであろうことを意味する。実質的でない相違には、明記する領域の５アミノ酸配列中、１または２の置換など、重要でないアミノ酸変化が含まれる。抗体の場合、第二の抗体は、第一の抗体と同じ特異性を有し、そして第一の抗体の少なくとも５０％の親和性を有する。
【００４２】
［００５６］本明細書に開示する配列と実質的に同一であるかまたは相同である（例えば少なくとも約８５％配列同一性を有する）配列もまた、本出願の一部である。いくつかの態様において、配列同一性は、約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれより高いことも可能である。あるいは、核酸セグメントが、選択的ハイブリダイゼーション条件（例えば非常にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件）下で、該鎖の相補体にハイブリダイズする場合、実質的同一性または相同性が存在する。核酸は、全細胞中、細胞溶解物中、または部分的に精製された型もしくは実質的に純粋な型で存在することも可能である。
【００４３】
［００５７］標準的並列アルゴリズム、例えばＡｌｔｓｈｕｌら（（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．，２１５：４０３−４１０）に記載されるような基本的局所並列ツール（ＢＬＡＳＴ）；Ｎｅｅｄｌｅｍａｎら（（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，４８：４４４−４５３）のアルゴリズム；またはＭｅｙｅｒｓら（（１９８８）Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．，４：１１−１７）のアルゴリズムによって、同一性パーセントを決定することも可能である。パラメーターセットは、ギャップペナルティ１２、ギャップ伸長ペナルティ４、およびフレームシフトギャップペナルティ５を伴うＢｌｏｓｕｍ ６２スコアリングマトリックスであることも可能である。２つのアミノ酸配列またはヌクレオチド配列間の同一性パーセントはまた、Ｅ．ＭｅｙｅｒｓおよびＷ．Ｍｉｌｌｅｒ（（１９８９）ＣＡＢＩＯＳ，４：１１−１７）のアルゴリズムを用いて決定可能であり、このアルゴリズムは、ＰＡＭ１２０荷重残基表、ギャップ長ペナルティ１２およびギャップペナルティ４を用いたＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に取り込まれている。
【００４４】
［００５８］用語「療法剤」は、医学的障害を治療するか、または該障害の治療を補助する物質である。本明細書において、療法剤は、抗ＩＬ−２１Ｒ抗体とともに被験者に投与すると、療法剤または抗ＩＬ−２１Ｒ抗体単独での投与と比較して、よりよい治療を提供する物質を指す。これらの療法剤には、限定されるわけではないが、抗ＩＬ−２１Ｒ抗体のＩＬ−２１Ｒ活性を補完する方式で、免疫細胞または免疫応答を調節する物質が含まれることも可能である。療法剤の限定されない例および使用を、本明細書に記載する。
【００４５】
［００５９］本明細書において、抗ＩＬ−２１Ｒ抗体の「療法的有効量」は、被験者（例えばヒト患者）に単一用量または多数用量を投与した際、障害または再発する障害の少なくとも１つの症状を治療するか、防止するか、治癒させるか、遅延させるか、その重症度を減少させるか、改善するか、あるいはこうした治療の非存在下で予期される生存を超えて、被験者の生存を延長させるのに有効な、抗体の量を指す。
【００４６】
［００６０］用語「治療」は、療法的手段または防止的手段を指す。医学的障害を有するか、または最終的に該障害を獲得しうる被験者に、障害または再発する障害の１以上の症状を防止するか、治癒させるか、遅延させるか、その重症度を減少させるか、または改善するため、あるいはこうした治療の非存在下で予期される生存を超えて、被験者の生存を延長させるため、治療を投与することも可能である。
【００４７】
抗ＩＬ−２１Ｒ抗体
［００６１］本開示は、新規抗原結合断片を含む、新規抗ＩＬ−２１Ｒ抗体を提供する。
【００４８】
［００６２］一般的に、例えば、伝統的なハイブリドーマ技術（ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５−４９９）、組換えＤＮＡ法（米国特許４，８１６，５６７）、または抗体ライブラリーを用いたファージディスプレイ（Ｃｌａｃｋｓｏｎら（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８；Ｍａｒｋｓら（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１−５９７）を用いて、抗体を作成することも可能である。さらなる抗体産生技術には、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｈａｒｌｏｗら監修，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，１９８８を参照されたい。本発明は、いかなる特定の供給源、産生法、または抗体の他の特別な性質にも限定されない。
【００４９】
［００６３］損なわれていない抗体は、免疫グロブリン（Ｉｇ）であり、そしてこれらは典型的には、２つの軽鎖（各〜２５ｋＤａ）および２つの重鎖（各〜５０ｋＤａ）で構成される四量体グリコシル化タンパク質である。軽鎖は２つのアイソタイプ（λおよびκ）に分類され、そして重鎖は５つのアイソタイプ（Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、およびＭ）に分類される。いくつかの重鎖アイソタイプは、さらに、アイソタイプ・サブクラス、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４に分類される。
【００５０】
［００６４］異なる抗体のドメインおよび三次元構造が当該技術分野に知られる（Ｈａｒｌｏｗら、上記）。簡潔には、軽鎖は、定常ドメイン（ＣＬ）およびＮ末端可変ドメイン（ＶＬ）で構成される。重鎖は、３または４の定常ドメイン（ＣＨ）、ヒンジ領域、およびＮ末端可変ドメイン（ＶＨ）で構成される。ＶＨドメインに隣接したＣＨは、ＣＨ１と称される。ＶＨドメインおよびＶＬドメインは、フレームワーク（ＦＲ）領域と呼ばれる、保存された４つの領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、およびＦＲ４）を含有し、このフレームワーク領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変配列の３つの領域の足場を形成する。ＣＤＲ（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）は、抗原に特異的に結合する抗体アミノ酸の大部分を含有する。重鎖ＣＤＲは、Ｈ１、Ｈ２およびＨ３と称され、一方、軽鎖ＣＤＲは、Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３と称される。
【００５１】
［００６５］Ｆａｂ断片（抗原結合断片（Ｆｒａｇｍｅｎｔ ａｎｔｉｇｅｎ−ｂｉｎｄｉｎｇ））は、定常領域間のジスルフィド結合によって共有連結された、ＶＨ−ＣＨ１ドメインおよびＶＬ−ＣＬドメインからなる。ＦＶ断片は、より小さく、そして非共有的に連結されたＶＨドメインおよびＶＬドメインからなる。非共有的ドメインが解離する傾向を克服するため、一本鎖ＦＶ断片（ｓｃＦＶ）を構築することも可能である。ｓｃＦｖは、（１）ＶＬのＮ末端にＶＨのＣ末端を、または（２）ＶＨのＮ末端にＶＬのＣ末端を連結する、柔軟なポリペプチドを含有する。１５量体（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３ペプチドをリンカーとして使用可能であるが、他のリンカーが当該技術分野に知られる。
【００５２】
［００６６］可変領域をコードする多数の生殖系列遺伝子および多様な体細胞事象（ｓｏｍａｔｉｃ ｅｖｅｎｔ）を使用することによって、抗体多様性を生成する。体細胞事象には、全長ＶＨ領域を作成する、可変遺伝子セグメントおよび多様性（Ｄ）遺伝子セグメントおよび連結（Ｊ）遺伝子セグメントの組換え、並びに全長ＶＬ領域を作成する、可変遺伝子セグメントおよび連結遺伝子セグメントの組換えが含まれる。ＣＤＲ３（Ｈ３）は、抗体配列内の分子多様性の最大の供給源である。Ｈ３は、例えば、２アミノ酸残基程度に短いことも、また２６アミノ酸より大きいことも可能である。最小抗原結合断片はＦｖであり、これはＶＨドメインおよびＶＬドメインからなる。
【００５３】
［００６７］本明細書に開示するものと同一かまたは類似のＣＤＲ配列を有する抗体および組成物は、独立に生成されている可能性が低い。組み立て、そして体細胞突然変異された後、抗体遺伝子の配列は非常に多様であり、そしてこれらの多様な遺伝子は、１０１０の異なる抗体分子をコードすると概算される（Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｇｅｎｅｓ，第２版，Ｊｏｎｉｏら監修，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，カリフォルニア州サンディエゴ，１９９５）。
【００５４】
［００６８］本開示は、ヒト免疫グロブリン遺伝子ライブラリー由来の新規ＣＤＲを提供する。ＣＤＲを所持する構造は、一般的に抗体重鎖または軽鎖、あるいはその一部であり、この場合、ＣＤＲは天然存在ＣＤＲ領域に位置する。可変ドメインの構造および位置は、Ｋａｂａｔら，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第９１−３２４２号，米国保健社会福祉局刊行物，メリーランド州ベセスダ（１９９１）に記載されるように決定可能である。
【００５５】
［００６９］ｓｃＦＶ断片、ＶＨドメインおよびＶＬドメイン、並びにＣＤＲを含む、本発明の抗ＩＬ−２１Ｒ抗体の具体例のＤＮＡ配列およびアミノ酸（ＡＡ）配列を配列表に示し、そして表１Ａおよび表１Ｂに列挙する。抗体の特定の態様を、ＭＵＦ、ＭＵＦ−生殖系列、ＭＵ１１、１８Ｇ４、１８Ａ５、１９Ｆ５、ＣＰ５Ｇ２およびＲ１８と特定する。抗体のＶＨドメインおよびＶＬドメイン中のＣＤＲの位置を表２に列挙する。
【００５６】
表１Ａ：ＶＨドメインおよびＶＬドメイン、ＦＶ、並びにＣＤＲのＡＡ配列およびＤＮＡ配列
【００５７】
【表１】
【００５８】
表１Ｂ：ＶＨドメインおよびＶＬドメイン、ＦＶ、並びにＣＤＲのＡＡ配列およびＤＮＡ配列
【００５９】
【表２】
【００６０】
表２：ＡＡ配列内のＣＤＲの位置
【００６１】
【表３】
【００６２】
［００７０］本発明の抗ＩＬ−２１Ｒ抗体は、場合によって、抗体定常領域またはその部分を含むことも可能である。例えば、ＶＬドメインのＣ末端に、ＣκまたはＣλなどの軽鎖定常ドメインが付着することも可能である。同様に、ＶＨドメインまたはその一部に、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭ、並びにアイソタイプ・サブクラスいずれかなどの重鎖のすべてまたは一部が付着することも可能である。定常領域は当該技術分野に知られる（例えば、Ｋａｂａｔら，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第９１−３２４２号，米国保健社会福祉局刊行物，メリーランド州ベセスダ（１９９１）を参照されたい）。
【００６３】
［００７１］典型的な態様において、ＭＵＦは、ヒトＩｇＧ１λの重鎖および軽鎖の定常ドメインを含み、そしてＭＵ１１は、ヒトＩｇＧ１κの重鎖および軽鎖の定常ドメインを含む。これらの抗体において、ＶＨドメイン外部の重鎖の配列は同一である。λ軽鎖のＣ末端断片のＤＮＡ配列およびアミノ酸配列を、それぞれ、配列番号４０および配列番号３９に示す。κ鎖のＣ末端断片のＤＮＡ配列およびアミノ酸配列を、それぞれ、配列番号４２および配列番号４１に示す。ＩｇＧ１重鎖のＣ末端断片のＤＮＡ配列およびアミノ酸配列を、それぞれ、配列番号３８および配列番号３７に示す。
【００６４】
［００７２］特定の態様は、ＭＵＦ、ＭＵＦ−生殖系列、ＭＵ１１、１８Ｇ４、１８Ａ５、１９Ｆ５、ＣＰ５Ｇ２、またはＲ１８由来のＦＶ断片のＶＨドメイン、ＶＬドメイン、またはその組み合わせを含む。さらなる態様は、ＶＨドメインおよびＶＬドメイン由来の１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたは６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。ＣＤＲ配列を配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、または１４５に示す抗体が、本発明の範囲内に含まれる。例えば、１つの態様において、抗体は、ＭＵＦ、ＭＵＦ−生殖系列、ＭＵ１１、１８Ｇ４、１８Ａ５、１９Ｆ５、ＣＰ５Ｇ２、またはＲ１８のＶＨドメインのＣＤＲ３（Ｈ３）断片を含む。
【００６５】
［００７３］特定の態様において、ＶＨドメインおよび／またはＶＬドメインを生殖系列化する（ｇｅｒｍｌｉｎｅｄ）ことも可能であり、すなわち、慣用的分子生物学技術を用いて、これらのドメインのフレームワーク領域（ＦＲ）を突然変異させて、生殖系列細胞に産生されるものとマッチさせる。他の態様において、ＦＲ配列は、コンセンサス生殖系列配列と異なったままである。
【００６６】
［００７４］１つの態様において、本発明は、生殖系列化ＭＵＦのアミノ酸配列および核酸配列を提供する。生殖系列化ＭＵＦのＶＨドメインのアミノ酸配列を、配列番号８３および８５に示す。生殖系列化ＭＵＦのＶＬドメインのアミノ酸配列を、配列番号８４および８５に示す。生殖系列化ＭＵＦのＶＨドメインの核酸配列を、配列番号９２および９４に示し、そして生殖系列化ＶＬドメインの核酸配列を、配列番号９３および９４に示す。ＶＢＡＳＥデータベース（ＭＲＣ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、英国）に対してアミノ酸配列および核酸配列の並列を行うことによって、ＶＨドメインおよびＶＬドメインの生殖系列配列を同定することも可能である。いくつかの態様において、ＶＢＡＳＥデータベース中の最も近いマッチと一致するように、ｓｃＦｖのＦＲ領域を突然変異させ、そしてＣＤＲ部分を損なわれていないままにする。
【００６７】
［００７５］特定の態様において、本発明の抗体は、ヒトＩＬ−２１Ｒの細胞外ドメイン中のエピトープと特異的に反応する。予測される細胞外ドメインは、配列番号４３のほぼアミノ酸２０〜ほぼアミノ酸２３５の配列からなる。さらなる態様において、抗ＩＬ−２１Ｒ抗体は、ＩＬ−２１ＲへのＩＬ−２１の結合をブロッキングする。他の態様において、抗ＩＬ−２１Ｒ抗体は、マウスＩＬ−２１Ｒの細胞外ドメイン中のエピトープと特異的に反応する。ネズミＩＬ−２１Ｒの細胞外ドメインは、配列番号４５のほぼアミノ酸２０〜ほぼアミノ酸２３６の配列からなる。マウスＩＬ−２１Ｒの細胞外ドメインは、ヒトの対応物と、約６５％同一である。
【００６８】
［００７６］本発明の抗体が、他のタンパク質、例えばＩＬ−２１Ｒ細胞外ドメインのすべてまたは一部を含む組換えタンパク質と結合可能であることが意図される。
［００７７］一般の当業者は、開示される抗体を用いて、ＩＬ−２１Ｒと幾分異なるタンパク質を検出し、測定し、そして／または阻害することも可能であることを認識するであろう。例えば、これらのタンパク質は、ＩＬ−２１Ｒの相同体であることも可能である。抗ＩＬ−２１Ｒ抗体は、配列番号４３に示す配列の少なくとも１００、８０、６０、４０、または２０の隣接アミノ酸の配列いずれかに、少なくとも約６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれより同一である配列を含むタンパク質に結合すると予測される。
【００６９】
［００７８］配列相同性解析に加えて、エピトープ・マッピング（例えばＥｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，Ｍｏｒｒｉｓ監修，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，１９９６を参照されたい）、並びに二次構造および三次構造解析を行って、本明細書に開示する抗体、および抗原とのその複合体によって想定される、特定の３Ｄ構造を同定することも可能である。こうした方法には、限定されるわけではないが、Ｘ線結晶学（Ｅｎｇｓｔｏｍ（１９７４）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．，１１：７−１３）および本発明の抗体のバーチャル表示のコンピュータモデリング（Ｆｌｅｔｔｅｒｉｃｋら（１９８６）Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒａｐｈｉｃｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｏｄｅｌｉｎｇ， Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ中，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，ニューヨーク州コールドスプリングハーバー）が含まれる。
【００７０】
［００７９］本開示は、抗ＩＬ−２１Ｒ抗体を得る方法であって、表１Ａおよび表１ＢのＶＨおよび／またはＶＬ配列（単数または複数）が改変された抗体を生成することを含む、前記方法を提供する。こうした抗体を、当該技術分野に知られる技術を用いて、当業者によって得ることも可能である。例えば、アミノ酸置換、欠失、または付加を、ＦＲ領域および／またはＣＤＲ領域に導入することも可能である。ＦＲ変化は、通常、抗体の安定性および免疫原性を改善するように設計され、一方、ＣＤＲ変化は、典型的には、抗原に対する抗体親和性を増加させるように設計される。ＣＤＲ配列を改変し、そしてターゲットに対する抗体親和性を測定することによって、親和性を増加させる変化を試験することも可能である（Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，第２版，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ監修，１９９５を参照されたい）。
【００７１】
［００８０］ＣＤＲ配列が、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、または１４５に示すものと実質的には異ならない抗体が、本発明の範囲内に含まれる。典型的には、これは、類似の荷電、疎水性、または立体化学特性を有するアミノ酸とアミノ酸の置換を伴う。ＣＤＲ領域とは対照的に、ＦＲ領域では、抗体の結合特性に不都合に影響を及ぼさない限り、より劇的な置換を作成することも可能である。置換を作成して、抗体を生殖系列化するか、または抗原結合部位を安定化することもまた、可能である。
【００７２】
［００８１］保存的修飾は、こうした修飾を作成しようとする分子のものと類似の機能的特性および化学的特性を有する分子を生じるであろう。対照的に、（１）置換領域の分子主鎖の構造、例えばシートまたはらせんコンホメーションとしての構造、（２）ターゲット部位での分子の荷電または疎水性、あるいは（３）分子のサイズ、を維持することに対する影響が有意に異なる、アミノ酸配列中の置換を選択することによって、分子の機能的特性および／または化学的特性に実質的な修飾を達成することも可能である。
【００７３】
［００８２］例えば、「保存的アミノ酸置換」は、その位のアミノ酸残基の極性または荷電に、ほとんどまたはまったく影響がないような、天然アミノ酸残基の非天然アミノ酸残基での置換を伴うことも可能である。さらに、「アラニン・スキャニング突然変異誘発」に関して先に記載されている（例えばＭａｃＬｅｎｎａｎら，１９９８，Ａｃｔａ Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｓｃａｎｄ．Ｓｕｐｐｌ．６４３：５５−６７；Ｓａｓａｋｉら，１９９８，Ａｄｖ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．３５：１−２４を参照されたい）ように、ポリペプチド中の天然残基いずれかをアラニンで置換することもまた可能である。
【００７４】
［００８３］こうした置換が望ましい時点で、当業者が望ましいアミノ酸置換（保存的であれ非保存的であれ）を決定することも可能である。例えば、アミノ酸置換を用いて、分子配列の重要な残基を同定するか、あるいは本明細書に記載する分子の親和性を増加させるかまたは減少させることも可能である。典型的なアミノ酸置換を表３に示す。
【００７５】
表３：アミノ酸置換
【００７６】
【表４】
【００７７】
［００８４］特定の態様において、保存的アミノ酸置換はまた、典型的には、生物学的系における合成によるよりも、化学的ペプチド合成によって取り込まれる非天然存在アミノ酸残基も含む。
【００７８】
［００８５］１つの態様において、変異体ＶＨドメインを作成する方法は、少なくとも１つのアミノ酸を、開示するＶＨドメイン中に付加するか、該ドメインから欠失させるか、または該ドメイン中で置換するか、あるいは開示するＶＨドメインと少なくとも１つのＶＬドメインを合わせ、そしてＩＬ−２１Ｒ結合またはＩＬ−２１Ｒ活性調節に関して、変異体ＶＨドメインを試験することを含む。
【００７９】
［００８６］変異体ＶＬドメインを作成する類似の方法は、少なくとも１つのアミノ酸を、開示するＶＬドメイン中に付加するか、該ドメインから欠失させるか、または該ドメイン中で置換するか、あるいは開示されるＶＬドメインと少なくとも１つのＶＨドメインを合わせ、そしてＩＬ−２１Ｒ結合またはＩＬ−２１Ｒ活性調節に関して、変異体ＶＬドメインを試験することを含む。
【００８０】
［００８７］本開示のさらなる側面は、ＩＬ−２１Ｒに結合する抗原結合断片を調製する方法を提供する。該方法は：
（ａ）ＣＤＲ１、２または３の１以上を欠くか、あるいは置き換えられる予定のＣＤＲ１、２または３を含有する、ＶＨドメインをコードする核酸の出発レパートリーを提供し；
（ｂ）出発レパートリーのＣＤＲ１、２または３領域に、ＶＨ ＣＤＲ１、２または３に関して本明細書に実質的に示すようなアミノ酸配列をコードする核酸を挿入するか、あるいは出発レパートリーの該領域を、該核酸で置き換えて、産物レパートリーを得て；
（ｃ）産物レパートリーの核酸を発現させ；
（ｄ）ＩＬ−２１Ｒに結合する特異的抗原結合断片を選択し；そして
（ｅ）特異的抗原結合断片またはそれをコードする核酸を回収する
ことを含む。
【００８１】
［００８８］本発明のＶＬ ＣＤＲ１、２または３を、ＣＤＲ１、２または３を欠くか、あるいは置き換えられる予定のＣＤＲ１、２または３を含有するＶＬドメインをコードする核酸のレパートリーと組み合わせる類似の方法も提供する。
【００８２】
［００８９］組換えＤＮＡ方法論を用いて、開示するＣＤＲ配列を、それぞれのＣＤＲを欠くＶＨドメインまたはＶＬドメインのレパートリーに導入することも可能である（Ｍａｒｋｓら（ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（１９９２）１０：７７９−７８３））。例えば、可変ドメインの５’端に隣接するプライマーおよび第三のＦＲに対するプライマーを用いて、ＣＤＲ３を欠く可変ドメイン配列のレパートリーを生成することも可能である。このレパートリーを、開示する抗体のＣＤＲ３と組み合わせることも可能である。類似の技術を用いて、開示するＣＤＲ配列の部分を、他の抗体由来のＣＤＲ配列の部分とシャッフルして、ＩＬ−２１Ｒに結合する抗原結合断片のレパートリーを提供することも可能である。いずれのレパートリーも、ＩＬ−２１Ｒに結合する適切な抗原結合断片を選択可能であるように、ファージディスプレイ（ＷＯ ９２／０１０４７に記載される）などの宿主系で発現させることも可能である。
【００８３】
［００９０］さらなる代替法は、開示するＶＨ配列またはＶＬ配列のランダム突然変異誘発を用いて、ＩＬ−２１Ｒになお結合可能な変異体ＶＨドメインまたはＶＬドメインを生成する。変異性ＰＣＲを用いた技術がＧｒａｍら（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ． Ｕ．Ｓ．Ａ．（１９９２）８９：３５７６−３５８０）に記載される。
【００８４】
［００９１］別の方法は、開示するＶＨ配列またはＶＬ配列の直接突然変異誘発を用いる。こうした技術は、Ｂａｒｂａｓら（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．（１９９４）９１：３８０９−３８１３）およびＳｃｈｉｅｒら（Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．（１９９６）２６３：５５１−５６７）に開示される。
【００８５】
［００９２］可変ドメインの部分は、本明細書に実質的に示すような少なくとも１つのＣＤＲ領域、および場合によって、本明細書に示すようなＶＨドメインまたはＶＬドメイン由来の介在フレームワーク領域を含むであろう。該部分は、ＦＲ１のＣ末端側半分および／またはＦＲ４のＮ末端側半分を含むことも可能である。可変ドメインのＮ末端またはＣ末端のさらなる残基は、天然存在抗体に見られる残基と同じでなくてもよい。例えば、組換えＤＮＡ技術によって抗体を構築すると、しばしば、リンカーの使用に由来するＮ末端残基またはＣ末端残基が導入される。いくつかのリンカーを用いて、可変ドメインを他の可変ドメイン（例えばディアボディ（ｄｉａｂｏｄｉｅｓ））、定常ドメイン、またはタンパク質性標識に連結することも可能である。
【００８６】
［００９３］実施例に例示する態様は、ＶＨドメインおよびＶＬドメインの「マッチした」対を含むが、当業者は、代替態様が、ＶＬドメインまたはＶＨドメインのいずれか由来の単一ＣＤＲのみを含有する抗原結合断片を含むことも可能であることを認識するであろう。一本鎖の特異的抗原結合ドメインのいずれか１つを用いて、例えば、ＩＬ−２１Ｒに結合可能な、２ドメインの特異的抗原結合断片を形成可能な相補ドメインに関してスクリーニングすることも可能である。ＷＯ ９２／０１０４７に開示する、いわゆる階層的二重コンビナトリアル・アプローチを用いたファージディスプレイ・スクリーニング法によって、スクリーニングを達成することも可能である。このアプローチでは、Ｈ鎖またはＬ鎖クローンいずれかを含有する個々のコロニーを用いて、もう一方の鎖（ＬまたはＨ）をコードするクローンの完全ライブラリーを感染させ、そして生じた二本鎖の特異的抗原結合ドメインを、記載するようなファージディスプレイ技術にしたがって選択する。
【００８７】
［００９４］いくつかの代替態様において、抗ＩＬ−２１Ｒ抗体を化学的架橋または組換え法によって、タンパク質（例えばアルブミン）に連結することも可能である。開示する抗体を、米国特許第４，６４０，８３５号；第４，４９６，６８９号；第４，３０１，１４４号；第４，６７０，４１７号；第４，７９１，１９２号；または第４，１７９，３３７号に示される方式で、多様な非タンパク質性ポリマー（例えばポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、またはポリオキシアルキレン）に連結することもまた可能である。ポリマーへの共有コンジュゲート化によって、抗体を化学的に修飾し、例えば血液循環中の半減期を増加させることも可能である。典型的なポリマーおよび付着法が、米国特許第４，７６６，１０６号；第４，１７９，３３７号；第４，４９５，２８５号；および第４，６０９，５４６号に示される。
【００８８】
［００９５］開示する抗体を修飾して、グリコシル化を改変することも可能であり；すなわち少なくとも１つの炭水化物部分を欠失させるかまたは抗体に付加することも可能である。アミノ酸配列を変化させて、当該技術分野に周知のグリコシル化コンセンサス部位を欠失させるかまたは生成することによって、グリコシル化部位の欠失または付加を達成することも可能である。炭水化物部分を付加する別の手段は、抗体のアミノ酸残基への配糖体の化学的または酵素的カップリングである（ＷＯ８７／０５３３０およびＡｐｌｉｎら（１９８１）ＣＲＣ Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２２：２５９−３０６を参照されたい）。炭水化物部分の除去を、化学的または酵素的に達成することもまた可能である（Ｈａｋｉｍｕｄｄｉｎら（１９８７）Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．，２５９：５２；Ｅｄｇｅら（１９８１）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１１８：１３１；Ｔｈｏｔａｋｕｒａら（１９８７）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．，１３８：３５０を参照されたい）。
【００８９】
［００９６］抗体定常領域を改変する方法が、当該技術分野に知られる。抗体の定常部の少なくとも１つのアミノ酸残基を、異なる残基で置き換えることによって、機能改変（例えば細胞上のＦｃＲまたは補体のＣ１構成要素などのエフェクターリガンドに対する親和性改変）を有する抗体を産生することも可能である（例えば、その内容がすべて本明細書に援用されるＥＰ ３８８，１５１ Ａ１、ＵＳ ５，６２４，８２１およびＵＳ ５，６４８，２６０を参照されたい）。ネズミまたは他の種の抗体に適用した場合、類似の機能を減少させるかまたは除去するであろう、類似の種類の改変を記載することも可能である。
【００９０】
［００９７］例えば、ＦｃＲ（例えばＦｃガンマＲ１）またはＣ１ｑに対する抗体（例えばＩｇＧ、例えばヒトＩｇＧ）のＦｃ領域の親和性を改変することが可能である。少なくとも１つの明記される残基を、側鎖上に適切な官能性を有する少なくとも１つの残基で置き換えるか、あるいはグルタミン酸またはアスパラギン酸などの荷電官能基を導入するか、あるいはおそらくフェニルアラニン、チロシン、トリプトファンまたはアラニンなどの芳香族非極性残基を導入することによって、親和性を改変することも可能である（例えばＵＳ ５，６２４，８２１を参照されたい）。
【００９１】
［００９８］例えば、ＩｇＧ定常領域の残基２９７（アスパラギン）をアラニンで置き換えると、エフェクター細胞の補充が有意に阻害されるが、Ｃ１ｑに対する親和性はわずかに減少する（約３倍弱くなる）だけである（例えばＵＳ ５，６２４，８２１を参照されたい）。重鎖中の残基の番号付けは、ＥＵインデックスのものである（Ｋａｂａｔら、１９９１、上記を参照されたい）。この改変は、グリコシル化部位を破壊し、そしてＦｃ受容体結合には、炭水化物の存在が必要であると考えられる。グリコシル化部位を破壊する、この部位での他の置換はいずれも、溶解活性に同様の減少を引き起こすと考えられる。他のアミノ酸置換、例えば残基３１８（Ｇｌｕ）、３２０（Ｌｙｓ）および３２２（Ｌｙｓ）のいずれか１つのＡｌａへの変化が、ＩｇＧ抗体のＦｃ領域へのＣ１ｑの結合を消滅させることもまた知られる（例えばＵＳ ５，６２４，８２１を参照されたい）。
【００９２】
［００９９］Ｆｃ受容体との相互作用が減少した修飾抗体を産生することも可能である。例えば、ヒトＦｃガンマＲ１受容体に結合するヒトＩｇＧ３において、Ｌｅｕ２３５をＧｌｕに変化させると、受容体との相互作用が破壊されることが示されている。抗体のヒンジ連結領域中の隣接部位または近接部位で突然変異させる（例えば残基２３４、２３６または２３７をＡｌａで置換する）と、やはり、ＦｃガンマＲ１受容体への抗体親和性に影響を及ぼすことも可能である。重鎖中の残基の番号付けは、ＥＵインデックスに基づく（Ｋａｂａｔら、１９９１、上記を参照されたい）。
【００９３】
［０１００］抗体の溶解活性を改変するさらなる方法、例えばＣＨ２ドメインのＮ末端領域中の少なくとも１つのアミノ酸を改変させることによる方法が、ＭｏｒｇａｎらによるＷＯ ９４／２９３５１およびＵＳ ５，６２４，８２１に記載され、これら文献のすべての内容は、本明細書に明確に援用される。
【００９４】
［０１０１］本発明の抗体を、検出可能標識または機能標識でタグ付けすることも可能である。これらの標識には、放射標識（例えば１３１Ｉまたは９９Ｔｃ）、酵素標識（例えば西洋ワサビ（ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ）ペルオキシダーゼまたはアルカリホスファターゼ）、および他の化学部分（例えばビオチン）が含まれる。
【００９５】
［０１０２］当業者は、上述の修飾は、まったく包括的でなく、そして本開示の解説に鑑みて、当業者には多くの他の修飾が明らかであることを認識するであろう。
【００９６】
核酸、クローニングおよび発現系
［０１０３］本開示は、開示する抗体をコードする単離核酸を提供する。核酸は、ＤＮＡまたはＲＮＡを含むことも可能であり、そしてこれらは合成（完全または部分的）または組換え（完全または部分的）であることも可能である。本明細書に示すようなヌクレオチド配列への言及は、明記する配列を含むＤＮＡ分子、およびＵがＴに対して置換された、明記する配列を含むＲＮＡ分子を含む。
【００９７】
［０１０４］やはり提供するのは、本明細書に開示するような、１つ、２つ、または３つのＣＤＲの、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、またはその組み合わせのコード配列、あるいは該配列に実質的に同一な配列（例えば該配列に少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれより同一であるか、あるいはストリンジェントな条件下で、開示する配列にハイブリダイズ可能な配列）を含む核酸である。
【００９８】
［０１０５］１つの態様において、単離核酸は、配列番号４、５、６、７、８、９、２２、２３、２４、２５、２６、２７、５０、５１、５２、５３、５４、５５、６８、６９、７０、７１、７２、７３、８６、８７、８８、８９、９０、９１、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４および１４５のアミノ酸配列から選択される、少なくとも１つのＣＤＲを有する抗ＩＬ−２１Ｒ抗体の重鎖および軽鎖の可変領域をコードするヌクレオチド配列、あるいは本明細書に記載する配列と１または２アミノ酸異なるＣＤＲをコードする配列を有する。いくつかの態様において、ＣＤＲのアミノ酸配列には、配列番号４、５、６、７、８、９、２２、２３、２４、２５、２６、２７、５０、５１、５２、５３、５４、５５、６８、６９、７０、７１、７２、７３、８６、８７、８８、８９、９０、９１、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４および１４５に示す配列中に、１以上のアミノ酸の保存的アミノ酸置換が含まれる。
【００９９】
［０１０６］核酸は、軽鎖または重鎖の可変領域のみをコードすることも可能であるし、あるいは対応する可変領域に機能可能であるように連結された抗体軽鎖または重鎖の定常領域もまたコードすることも可能である。１つの態様において、軽鎖可変領域（ＶＬ）を、カッパまたはラムダの定常領域から選択される定常領域に連結する。軽鎖定常領域はまた、ヒト・カッパ型またはラムダ型であることも可能である。別の態様において、重鎖可変領域（ＶＨ）を、ＩｇＧ（例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、およびＩｇＥから選択される抗体アイソタイプの重鎖定常領域に連結する。重鎖定常領域は、ＩｇＧ（例えばＩｇＧ１）アイソタイプであることも可能である。
【０１００】
［０１０７］本発明の核酸組成物は、しばしば、修飾制限部位等を除いて（ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡまたはその混合物の）天然配列中にあるが、標準的技術にしたがって突然変異されて、遺伝子配列を提供することも可能である。コード配列では、これらの突然変異は、望ましいようにアミノ酸配列に影響を及ぼすことも可能である。特に、天然Ｖ、Ｄ、Ｊ、定常領域、スイッチおよび本明細書に記載する他のこうした配列に実質的に同一であるか、またはこれらに由来するヌクレオチド配列が意図される（ここで「由来する」は、配列が別の配列と同一であるか、または別の配列から修飾されていることを示す）。
【０１０１】
［０１０８］１つの態様において、核酸は、提供する配列のものと異なる（例えば置換、挿入、または欠失によって異なる）（例えば以下のとおり：少なくとも１ヌクレオチドであるが、１０、２０、３０、または４０ヌクレオチド未満；少なくとも１ヌクレオチドであるが、対象核酸中のヌクレオチドの１％、５％、１０％または２０％未満）。この解析に必要であるならば、配列を最大相同に並列しなければならない。欠失または挿入、あるいはミスマッチのため、「ループ」アウトした配列は、相違と見なされる。相違は、非必須残基（単数または複数）をコードするヌクレオチド（単数または複数）の箇所であることも可能であるし、また相違は保存的置換（単数または複数）であることも可能である。本開示はまた、本明細書に記載するような核酸を少なくとも１つ含む、プラスミド、ベクター、転写カセットまたは発現カセットの形の核酸構築物も提供する。
【０１０２】
［０１０９］本開示は、本明細書に記載する核酸構築物を少なくとも１つ含む宿主細胞をさらに提供する。本明細書に記載する配列を含む核酸（単数または複数）から、コードされるタンパク質（単数または複数）を作成する方法もまた、提供する。該方法は、宿主細胞が核酸からタンパク質を発現するように、適切な条件下で、宿主細胞を培養することを含む。発現および産生に続いて、適切な技術いずれかを用いて、ＶＨドメインまたはＶＬドメイン、あるいは特異的結合メンバーを単離し、そして／または精製し、次いで、適切なように使用することも可能である。
【０１０３】
［０１１０］抗原結合断片、ＶＨドメインおよび／またはＶＬドメイン、並びにコード核酸分子およびベクターを、天然環境から、実質的に純粋な型または均質な型で、あるいは核酸の場合、必要な機能を持つポリペプチドをコードする配列以外の起源の核酸または遺伝子を含まずに、または実質的に含まずに、単離し、そして／または精製することも可能である。
【０１０４】
［０１１１］多様な宿主細胞において、ポリペプチドをクローニングし、そして発現させる系が当該技術分野に知られる。抗体を産生するのに適した細胞が、例えば、Ｆｅｒｎａｎｄｅｚら（１９９９）Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ監修に記載される。簡潔には、適切な宿主細胞には、哺乳動物細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母細胞、または原核細胞、例えば大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）が含まれる。当該技術分野において、異種ポリペプチド発現に利用可能な哺乳動物細胞には、リンパ球性細胞株（例えばＮＳＯ）、ＨＥＫ２９３細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＣＯＳ細胞、ＨｅＬａ細胞、ベビーハムスター腎臓細胞、卵母細胞、およびトランスジェニック動物由来の細胞、例えば乳腺上皮細胞が含まれる。１つの態様において、ＭＵＦ抗体およびＭＵ１１抗体をＨＥＫ２９３細胞またはＣＨＯ細胞で発現させる。他の態様において、本発明の抗体をコードする核酸を、組織特異的プロモーター（例えば乳腺特異的プロモーター）の調節下に置き、そしてトランスジェニック動物において、抗体を産生する。例えば、抗体を、トランスジェニック動物、例えばトランスジェニック・ウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、ヤギまたはげっ歯類のミルクに分泌させる。プロモーター配列、ターミネーター配列、ポリアデニル化配列、エンハンサー配列、マーカー遺伝子、および他の配列を含む、適切な制御配列を含有するように、適切なベクターを選択するかまたは構築することも可能である。ベクターはまた、プラスミドまたはウイルス主鎖を含有することも可能である。詳細に関しては、Ｓａｍｂｒｏｏｋら， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，第２版，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ（１９８９）を参照されたい。ＤＮＡの操作、調製、突然変異誘発、配列決定、およびトランスフェクションを含む、ベクターとともに用いる多くの確立された技術が、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，第２版，Ａｕｓｕｂｅｌら監修，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ（１９９２）に記載される。
【０１０５】
［０１１２］本開示のさらなる側面は、宿主細胞に核酸を導入する方法を提供する。真核細胞の場合、適切なトランスフェクション技術には、リン酸カルシウム、ＤＥＡＥ−デキストラン、エレクトロポレーション、リポソーム仲介トランスフェクション、およびレトロウイルスまたは他のウイルス、例えばワクシニアまたはバキュロウイルスを用いた形質導入が含まれることも可能である。細菌細胞の場合、適切な技術には、塩化カルシウム形質転換、エレクトロポレーション、およびバクテリオファージを用いたトランスフェクションが含まれることも可能である。ＤＮＡ導入に続いて選択法（例えば薬剤耐性）を行って、核酸を含有する細胞を選択することも可能である。
【０１０６】
生物学的寄託
［０１１３］ＭＵＦ重鎖および軽鎖を含有するベクターで形質転換したＣＨＯ細胞、並びにＭＵ１１重鎖および軽鎖を含有するベクターで形質転換したＣＨＯ細胞は、それぞれ、寄託指定番号ＰＴＡ−５０３１およびＰＴＡ−５０３０の元に、アメリカン・ティシュー・カルチャー・コレクション（ＡＴＣＣ）に２００３年３月５日に寄託された。寄託施設の住所は、１０８０１ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｌｖｄ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ ２０１１０，Ｕ．Ｓ．Ａ．である。
【０１０７】
抗ＩＬ−２１Ｒ抗体の使用
［０１１４］ＩＬ−２１Ｒに対するアンタゴニストとして作用する抗ＩＬ−２１Ｒ抗体を用いて、少なくとも１つのＩＬ−２１Ｒ仲介免疫応答、例えばＴ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、または滑膜細胞の細胞増殖、サイトカイン分泌、ケモカイン分泌、および細胞溶解活性の１以上を制御することも可能である。したがって、本発明の抗体を用いて、免疫細胞または造血細胞（例えば骨髄細胞系譜、リンパ細胞系譜、または赤血球細胞系譜の細胞、あるいはその前駆体細胞）の活性（例えば増殖、分化、および／または生存）を阻害することも可能であり、そしてしたがって、該抗体を用いて、多様な免疫障害および過剰増殖障害を治療することも可能である。治療可能な免疫障害の限定されない例には、限定されるわけではないが、移植拒絶、移植片対宿主疾患、アレルギー（例えばアトピー性アレルギー）および自己免疫疾患が含まれる。自己免疫疾患には、糖尿病、関節炎性障害（関節リウマチ、若年性関節リウマチ、骨関節炎、乾癬性関節炎、および強直性脊椎炎を含む）、脊椎関節症、多発性硬化症、脳脊髄炎、重症筋無力症、全身性エリテマトーデス、皮膚エリテマトーデス、自己免疫甲状腺炎、皮膚炎（アトピー性皮膚炎および湿疹様皮膚炎を含む）、乾癬、シェーグレン症候群、ＩＢＤ（クローン病および潰瘍性大腸炎を含む）、喘息（内因性喘息およびアレルギー性喘息を含む）、強皮症および脈管炎が含まれることも可能である。
【０１０８】
［０１１５］多発性硬化症は、炎症およびミエリン鞘の欠損によって特徴付けられる中枢神経系の疾患であり、ミエリン鞘は、神経を絶縁し、そして適切な神経機能に必要な脂肪性物質である。ＩＬ−２１に依存する免疫応答から生じる炎症を、本発明の抗体および組成物で治療することも可能である。多発性硬化症の実験自己免疫脳炎（ＥＡＥ）マウスモデル（Ｔｕｏｈｙら（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９８８）１４１：１１２６−１１３０）、Ｓｏｂｅｌら（Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９８４）１３２：２３９３−２４０１）、およびＴｒａｕｇｏｔｔ（Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９８９）１１９：１１４−１２９））において、ＥＡＥ誘導前に（そして引き続き）、ＭＵ１１注射でマウスを処置すると、疾患の開始が非常に遅延される。本発明の抗体を同様に用いて、ヒトにおける多発性硬化症を治療することも可能である。
【０１０９】
［０１１６］関節炎は、関節における炎症によって特徴付けられる疾患である。関節リウマチ（ＲＡ）が関節炎の最も頻繁な型であり、結合組織、および関節を裏打ちする膜である滑膜の炎症を伴う。炎症滑膜は、しばしば関節に浸潤し、そして関節軟骨および骨を損傷する。研究によって、滑膜細胞およびマクロファージをＩＬ−２１で処理すると、これらの細胞が炎症と関連するサイトカインおよびケモカインを分泌するよう誘導されることが示されている。関節リウマチのマウスモデル、コラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）（Ｃｏｕｒｔｅｎａｙら（Ｎａｔｕｒｅ（１９８０）２８３：６６６−６２８）およびＷｉｌｌｉａｍｓら（Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９５）８４：４３３−４３９））において、ＣＩＡ誘導に続いて（そして引き続き）、マウスをＩＬ−２１で処置すると、疾患が悪化する。炎症性サイトカインおよびケモカイン分泌の増加、並びにより重要なことに、ＩＬ−２１に依存する免疫応答から生じる疾患の増加を、本発明の抗体で治療することも可能である。同様に、本発明の抗体および組成物を用いて、ヒトにおいて、ＲＡまたは他の関節炎疾患を治療することも可能である。
【０１１０】
［０１１７］移植拒絶は、ドナー由来の組織が、宿主の免疫細胞に、特異的に「攻撃」される免疫学的現象である。主な「攻撃性」細胞は、Ｔ細胞であり、Ｔ細胞のＴ細胞受容体は、ドナーのＭＨＣ分子を「外来（ｆｏｒｅｉｇｎ）」と認識する。この認識によってＴ細胞が活性化され、Ｔ細胞は増殖し、そして多様なサイトカインおよび細胞溶解性タンパク質を分泌し、最終的に、これらが移植片を破壊する。移植拒絶のｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイである混合リンパ球反応（ＭＬＲ）において、ＩＬ−２１を補充した場合、Ｔ細胞がより強く増殖する。ＭＬＲおよび移植モデルは、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，第２版，Ｃｏｌｉｇａｎら監修，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，１９９４；Ｋａｓａｉａｎら（Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（２００２）１６：５５９−５６９）；Ｆｕｌｍｅｒら（Ａｍ．Ｊ．Ａｎａｔ．（１９６３）１１３：２７３−２８５）、およびＬｅｎｓｃｈｏｗら（Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９９２）２５７：７８９−７９２）に記載されている。本発明の抗体および組成物を用いて、ＭＬＲを減少させ、そしてＩＬ−２１に依存する、ヒトにおける移植拒絶および関連疾患（例えば移植片対宿主疾患）を治療することも可能である。
【０１１１】
［０１１８］全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）は、ＤＮＡ、核抗原、およびリボ核タンパク質に対する抗体を含む自己抗体の存在に特徴付けられる、自己免疫疾患である。これらの自己抗体は、組織および臓器損傷と関連する。ＳＬＥの原因は未知であるが、自己抗体が発生することから、自己応答性Ｔ細胞またはＢ細胞の阻害が不適切であることが示唆される。本発明の抗体および組成物を用いて、自己応答性Ｔ細胞およびＢ細胞のＩＬ−２１仲介活性を阻害し、そしてＮＺＢ×ＮＺＷマウス（ＳＬＥのマウスモデル）におけるＳＬＥまたは関連疾患（Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ Ｄｅｆｅｃｔｓ ｉｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌｓ，Ｇｅｒｓｈｗｉｎら監修，Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，１９８１）あるいはヒトにおけるＳＬＥまたは関連疾患を治療することも可能である。
【０１１２】
［０１１９］本発明の抗体を用いて、ＩＬ−２１応答性細胞およびＩＬ−２１Ｒ応答性細胞の異常な活性と関連する過剰増殖障害を治療することもまた可能である。こうした細胞の例には、造血起源の腫瘍性細胞、例えば骨髄細胞系譜、リンパ細胞系譜または赤血球細胞系譜から生じる細胞、あるいはその前駆体細胞が含まれる。こうした腫瘍性障害の例には、白血病性癌、並びに血液の腫瘍、骨髄の腫瘍（例えば骨髄腫）、およびリンパ組織の腫瘍（例えばリンパ腫）が含まれる。特定の態様において、本発明は、限定されるわけではないが、急性前骨髄白血病（ＡＰＭＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）および慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）を含む、多様な白血病性癌の治療に関する（Ｖａｉｃｋｕｓ，Ｌ．（１９９１）Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．ｉｎ Ｏｎｃｏｌ．／Ｈｅｍｏｔｏｌ．１１：２６７−９７に概説される）。本発明の方法によって治療可能なリンパ系悪性腫瘍の例には、限定されるわけではないが、急性リンパ芽球白血病（Ｂ細胞系譜ＡＬＬおよびＴ細胞系譜ＡＬＬを含む、ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、前リンパ球性白血病（ＰＬＬ）、有毛細胞白血病（ＨＬＬ）、およびバルデンストレーム・マクログロブリン血症（ＷＭ）が含まれる。本発明によって治療可能な悪性リンパ腫のさらなる型には、限定されるわけではないが、非ホジキンリンパ腫、末梢Ｔ細胞リンパ腫、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫（ＡＴＬ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）、大型顆粒リンパ球性白血病（ＬＧＦ）、ホジキンリンパ腫、およびその変型が含まれる。
【０１１３】
併用療法
［０１２０］１つの態様において、少なくとも１つの抗ＩＬ−２１Ｒ抗体および少なくとも１つの療法剤を含む薬剤組成物を、併用療法で投与する。該療法は、免疫障害および炎症性障害などの病的状態または障害を治療するのに有用である。用語「併用して」は、この背景において、抗体組成物および療法剤を、同時にまたは連続していずれかで、実質的に同時期に投与することを意味する。連続して投与した場合、第二の化合物投与の開始時に、２つの化合物の第一のものは、治療部位で、なお有効濃度で検出可能であることも可能である。
【０１１４】
［０１２１］例えば、併用療法には、少なくとも１つのさらなる療法剤と同時配合され、そして／または同時投与される、少なくとも１つの抗ＩＬ−２１Ｒ抗体が含まれることも可能である。さらなる剤には、以下により詳細に記載するような、少なくとも１つのサイトカイン阻害剤、増殖因子阻害剤、免疫抑制剤、抗炎症剤、代謝阻害剤、酵素阻害剤、細胞傷害剤、および細胞分裂停止剤が含まれることも可能である。こうした併用療法は、より低い投薬量で投与された療法剤を好適に利用し、したがって多様な単剤療法に関与する、ありうる毒性または合併症を回避することも可能である。さらに、本明細書に開示する療法剤は、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒ経路と異なる経路に作用して、そしてしたがって、抗ＩＬ−２１Ｒ抗体の効果を増進し、そして／またはこうした効果と同調すると予期される。
【０１１５】
［０１２２］抗ＩＬ−２１Ｒ抗体と併用する療法剤は、自己免疫およびそれに続く炎症応答の異なる段階で干渉する剤であることも可能である。１つの態様において、本明細書に記載する少なくとも１つの抗ＩＬ−２１Ｒ抗体を、少なくとも１つのサイトカインおよび／または増殖因子アンタゴニストと同時配合し、そして／または同時投与することも可能である。アンタゴニストには、可溶性受容体、ペプチド阻害剤、小分子、リガンド融合体、抗体（サイトカインもしくは増殖因子またはその受容体あるいは他の細胞表面分子に結合する）、および「抗炎症サイトカイン」およびそのアゴニストが含まれることも可能である。
【０１１６】
［０１２３］本明細書に記載する抗ＩＬ−２１Ｒ抗体と併用可能な剤の限定されない例には、限定されるわけではないが、少なくとも１つのインターロイキン（例えばＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、およびＩＬ−２２）；サイトカイン（例えばＴＮＦα、ＬＴ、ＥＭＡＰ−ＩＩ、およびＧＭ−ＣＳＦ）；および増殖因子（例えばＦＧＦおよびＰＤＧＦ）のアンタゴニストが含まれる。該剤にはまた、限定されるわけではないが、インターロイキン、サイトカイン、および増殖因子の少なくとも１つの受容体のアンタゴニストが含まれることも可能である。抗ＩＬ−２１Ｒ抗体を、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０（Ｂ７．１）、ＣＤ８６（Ｂ７．２）、ＣＤ９０などの細胞表面分子、またはそのリガンド（例えばＣＤ１５４（ｇｐ３９、ＣＤ４０Ｌ））、あるいはＬＦＡ−１／ＩＣＡＭ−１およびＶＬＡ−４／ＶＣＡＭ−１（Ｙｕｓｕｆ−Ｍａｋａｇｉａｎｓａｒら（２００２）Ｍｅｄ Ｒｅｓ Ｒｅｖ ２２（２）：１４６−６７）に対する阻害剤（例えば抗体）と併用することもまた可能である。本明細書に記載する抗ＩＬ−２１Ｒ抗体と併用可能なアンタゴニストには、ＩＬ−１、ＩＬ−１２、ＴＮＦα、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２２、およびその受容体のアンタゴニストが含まれることも可能である。
【０１１７】
［０１２４］これらの剤の例には、ＩＬ−１２アンタゴニスト（ＩＬ−１２に結合する抗体など（例えばＷＯ ００／５６７７２、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ／ＢＡＳＦを参照されたい））；ＩＬ−１２受容体阻害剤（ＩＬ−１２受容体に対する抗体など）；および可溶性ＩＬ−１２受容体およびその断片が含まれる。ＩＬ−１５アンタゴニストの例には、ＩＬ−１５またはその受容体に対する抗体、ＩＬ−１５受容体の可溶性断片、およびＩＬ−１５結合タンパク質が含まれる。ＩＬ−１８アンタゴニストの例には、ＩＬ−１８に対する抗体、ＩＬ−１８受容体の可溶性断片、およびＩＬ−１８結合タンパク質（ＩＬ−１８ＢＰ、Ｍａｌｌｅｔら（２００１）Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．２８）が含まれる。ＩＬ−１アンタゴニストの例には、インターロイキン−１変換酵素（ＩＣＥ）阻害剤（Ｖｘ７４０など）、ＩＬ−１アンタゴニスト（例えばＩＬ−１ＲＡ（ＡＮＩＫＩＮＲＡ、ＡＭＧＥＮ））、ｓＩＬ−１ＲＩＩ（Ｉｍｍｕｎｅｘ）、および抗ＩＬ−１受容体抗体が含まれる。
【０１１８】
［０１２５］ＴＮＦアンタゴニストの例には、ＴＮＦ（例えばヒトＴＮＦα）に対する抗体、例えばＤ２Ｅ７（ヒト抗ＴＮＦα抗体、Ｕ．Ｓ．６，２５８，５６２、ＨｕｍｉｒａＴＭ、ＢＡＳＦ）；ＣＤＰ−５７１／ＣＤＰ−８７０／ＢＡＹ−１０−３３５６（ヒト化抗ＴＮＦα抗体、Ｃｅｌｌｔｅｃｈ／Ｐｈａｒｍａｃｉａ）；ｃＡ２（キメラ抗ＴＮＦα抗体、レミケードＴＭ、Ｃｅｎｔｏｃｏｒ）；および抗ＴＮＦ抗体断片（例えばＣＰＤ８７０）が含まれる。他の例には、可溶性ＴＮＦ受容体（例えばヒトｐ５５またはｐ７５）断片および誘導体、例えばｐ５５ ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ（５５ｋＤ ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質、レネルセプトＴＭ）および７５ｋｄ ＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５ｋＤ ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質、エンブレルＴＭ、Ｉｍｍｕｎｅｘ、例えばＡｒｔｈｒｉｔｉｓ ＆ Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９４）Ｖｏｌ．３７，Ｓ２９５；Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｍｅｄ．（１９９６）Ｖｏｌ．４４，２３５Ａ）が含まれる。さらなる例には、酵素アンタゴニスト（例えばＴＮＦα変換酵素阻害剤（ＴＡＣＥ）、例えばアルファ−スルホニルヒドロキサム酸誘導体（ＷＯ ０１／５５１１２）またはＮ−ヒドロキシホルムアミド阻害剤（ＧＷ ３３３３、−００５、または−０２２））およびＴＮＦ−ｂｐ／ｓ−ＴＮＦＲ（可溶性ＴＮＦ結合タンパク質、例えばＡｒｔｈｒｉｔｉｓ ＆ Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（補遺），Ｓ２８４；およびＡｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｈｅａｒｔ Ｃｉｒｃ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．（１９９５）Ｖｏｌ．２６８，ｐｐ．３７−４２を参照されたい）が含まれる。ＴＮＦアンタゴニストは、７５ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧなどの可溶性ＴＮＦ受容体（例えばヒトｐ５５またはｐ７５）断片および誘導体；およびＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤であることも可能である。
【０１１９】
［０１２６］他の態様において、本明細書に記載する抗ＩＬ−２１Ｒ抗体を、以下の少なくとも１つと併用投与することも可能である：ＩＬ−１３アンタゴニスト、例えば可溶性ＩＬ−１３受容体および／または抗ＩＬ−１３抗体；およびＩＬ−２アンタゴニスト、例えばＩＬ−２融合タンパク質（例えばＤＡＢ４８６−ＩＬ−２および／またはＤＡＢ３８９−ＩＬ−２、Ｓｅｒａｇｅｎ、例えばＡｒｔｈｒｉｔｉｓ ＆ Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９３）Ｖｏｌ．３６，１２２３を参照されたい）および抗ＩＬ−２Ｒ抗体（例えば抗Ｔａｃ（ヒト化抗体、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｓｉｇｎ Ｌａｂｓ、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９９０ Ｍａｒ １；５０（５）：１４９５−５０２を参照されたい））。別の併用には、ＩＤＥＣ−ＣＥ９．１／ＳＢ ２１０３９６（抗ＣＤ４抗体、ＩＤＥＣ／ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）などの非枯渇性抗ＣＤ４阻害剤と併用する抗ＩＬ−２１Ｒ抗体が含まれる。さらに他の併用には、ＣＤ８０（Ｂ７．１）およびＣＤ８６（Ｂ７．２）同時刺激経路アンタゴニスト（抗体、可溶性受容体、またはアンタゴニスト性リガンド）；Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド（ＰＳＧＬ）；並びに抗炎症性サイトカインおよびそのアゴニスト（例えば抗体）と併用する抗ＩＬ−２１Ｒ抗体が含まれる。抗炎症性サイトカインには、ＩＬ−４（ＤＮＡＸ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ）；ＩＬ−１０（ＳＣＨ ５２０００、組換えＩＬ−１０、ＤＮＡＸ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ）；ＩＬ−１３；およびＴＧＦが含まれることも可能である。
【０１２０】
［０１２７］他の態様において、少なくとも１つの抗ＩＬ−２１Ｒ抗体を、少なくとも１つの抗炎症性薬剤、免疫抑制剤、代謝阻害剤、および酵素阻害剤と同時配合し、そして／または同時投与することも可能である。本明細書に記載するＩＬ−２１アンタゴニストと併用可能な薬剤または阻害剤の限定されない例には、限定されるわけではないが：非ステロイド性抗炎症性薬剤（ＮＳＡＩＤ）（例えばイブプロフェン、テニダップ（例えばＡｒｔｈｒｉｔｉｓ ＆ Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（補遺），Ｓ２８０）、ナプロキセン（例えばＮｅｕｒｏ Ｒｅｐｏｒｔ（１９９６）Ｖｏｌ．７，ｐｐ．１２０９−１２１３）、メロキシカム、ピロキシカム、ジクロフェナク、およびインドメタシン）；スルファサラジン（例えばＡｒｔｈｒｉｔｉｓ ＆ Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ，９（補遺），Ｓ２８１）；コルチコステロイド（プレドニゾロンなど）；サイトカイン抑制性抗炎症性薬剤（ＣＳＡＩＤ）；およびヌクレオチド生合成の阻害剤（例えばプリン生合成の阻害剤（例えばメトトレキセートなどの葉酸アンタゴニスト）およびピリミジン生合成の阻害剤（例えばレフルノミドなどのジヒドロオロト酸デヒドロゲナーゼ（ＤＨＯＤＨ）阻害剤（例えばＡｒｔｈｒｉｔｉｓ ＆ Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９， Ｎｏ．９（補遺），Ｓ１３１；Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（１９９６）Ｖｏｌ．４５，ｐｐ．１０３−１０７を参照されたい）））の少なくとも１つが含まれる。ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストと併用する療法剤には、ＮＳＡＩＤ、ＣＳＡＩＤ、ＤＨＯＤＨ阻害剤（レフルノミドなど）、および葉酸アンタゴニスト（メトトレキセートなど）が含まれることも可能である。
【０１２１】
［０１２８］さらなる阻害剤の例には：コルチコステロイド（経口、吸入、および局所注射）；免疫抑制剤（シクロスポリンおよびタクロリムス（ＦＫ−５０６）など）；ｍＴＯＲ阻害剤（シロリムス（ラパマイシン）またはラパマイシン誘導体（例えばＣＣＩ−７７９などのエステル・ラパマイシン誘導体（Ｅｌｉｔ．Ｌ．（２００２）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｒｕｇｓ ３（８）：１２４９−５３；Ｈｕａｎｇ，Ｓ．ら（２００２）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｒｕｇｓ ３（２）：２９５−３０４）））；ＴＮＦαおよびＩＬ−１などの炎症促進性サイトカインのシグナル伝達に干渉する剤（例えばＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８またはＭＡＰキナーゼ阻害剤）；ＣＯＸ２阻害剤（例えばセレコキシブおよびその変異体（ＭＫ−９６６）、例えばＡｒｔｈｒｉｔｉｓ ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（補遺），Ｓ８１を参照されたい）；ホスホジエステル阻害剤（Ｒ９７３４０１など、例えばＡｒｔｈｒｉｔｉｓ ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（補遺），Ｓ２８２を参照されたい）；ホスホリパーゼ阻害剤（例えばトリフルオロメチルケトン類似体（Ｕ．Ｓ．６，３５０，８９２）などの細胞質ゾル・ホスホリパーゼ２（ｃＰＬＡ２）阻害剤）；血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）阻害剤；ＶＥＧＦ受容体阻害剤；および血管形成阻害剤の少なくとも１つが含まれる。抗ＩＬ−２１Ｒ抗体と併用する療法剤には：免疫抑制剤（シクロスポリンおよびタクロリムス（ＦＫ−５０６）など）；およびｍＴＯＲ阻害剤（シロリムス（ラパマイシン）またはラパマイシン誘導体（例えばＣＣＩ−７７９などのエステル・ラパマイシン誘導体）など）；ＣＯＸ２阻害剤（セレコキシブおよびその変異体など）；およびホスホリパーゼ阻害剤（細胞質ゾル・ホスホリパーゼ２（ｃＰＬＡ２）阻害剤など（例えばトリフルオロメチルケトン類似体））が含まれることも可能である。
【０１２２】
［０１２９］少なくとも１つの抗ＩＬ−２１Ｒ抗体と同時投与し、そして／または同時配合することも可能な療法剤の例には、限定されるわけではないが：ＴＮＦアンタゴニスト（抗ＴＮＦ抗体など）；ＴＮＦ受容体（例えばヒトｐ５５およびｐ７５）の可溶性断片およびその誘導体（ｐ５５ ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ（５５ｋＤ ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質、レネルセプトＴＭ）および７５ｋｄ ＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５ｋＤ ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質、エンブレルＴＭ）など）；ＴＮＦ酵素アンタゴニスト（ＴＡＣＥ阻害剤など）；ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、およびＩＬ−２２のアンタゴニスト；Ｔ細胞およびＢ細胞枯渇剤（抗ＣＤ４抗体または抗ＣＤ２２抗体など）；小分子阻害剤（メトトレキセートおよびレフルノミドなど）；シロリムス（ラパマイシン）およびその類似体（ＣＣＩ−７７９など）；Ｃｏｘ−２およびｃＰＬＡ２阻害剤；ｐ３８、ＴＰＬ−２、Ｍｋ−２およびＮＦκＢ阻害剤；ＲＡＧＥおよび可溶性ＲＡＧＥ；Ｐ−セレクチンおよびＰＳＧＬ−１阻害剤（抗体および小分子阻害剤など）；並びにエストロゲン受容体ベータ（ＥＲＢ）アゴニスト、およびＥＲＢ−ＮＦκｂアンタゴニストの少なくとも１つが含まれる。少なくとも１つの抗ＩＬ−２１Ｒ抗体と同時投与し、そして／または同時配合することも可能な療法剤には：７５ｋｄ ＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５ｋＤ ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質、エンブレルＴＭ）などのＴＮＦ受容体（例えばヒトｐ５５およびｐ７５）の可溶性断片；メトトレキセート；レフルノミド；並びにシロリムス（ラパマイシン）およびその類似体（ＣＣＩ−７７９など）の少なくとも１つが含まれる。
【０１２３】
［０１３０］本明細書に開示する抗ＩＬ−２１Ｒ抗体を、他の療法剤と併用して、以下にさらに詳細に論じるように、特定の免疫障害を治療することも可能である。
［０１３１］抗ＩＬ−２１Ｒ抗体と併用可能な、関節炎障害（例えば関節リウマチ、炎症性関節炎、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、骨関節炎および乾癬性関節炎）を治療する剤の限定されない例には：ＴＮＦアンタゴニスト（抗ＴＮＦ抗体など）；ＴＮＦ受容体（例えばヒトｐ５５およびｐ７５）の可溶性断片およびその誘導体（ｐ５５ ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ（５５ｋＤ ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質、レネルセプトＴＭ）および７５ｋｄ ＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５ｋＤ ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質、エンブレルＴＭ）など）；ＴＮＦ酵素アンタゴニスト（ＴＡＣＥ阻害剤など）；ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、およびＩＬ−２２のアンタゴニスト；Ｔ細胞およびＢ細胞枯渇剤（抗ＣＤ４抗体または抗ＣＤ２２抗体など）；小分子阻害剤（メトトレキセートおよびレフルノミドなど）；シロリムス（ラパマイシン）およびその類似体（例えばＣＣＩ−７７９）；Ｃｏｘ−２およびｃＰＬＡ２阻害剤；ＮＳＡＩＤ；ｐ３８、ＴＰＬ−２、Ｍｋ−２、およびＮＦκＢ阻害剤；ＲＡＧＥまたは可溶性ＲＡＧＥ；Ｐ−セレクチンまたはＰＳＧＬ−１阻害剤（小分子阻害剤および抗体など）；エストロゲン受容体ベータ（ＥＲＢ）アゴニスト、およびＥＲＢ−ＮＦκｂアンタゴニストの少なくとも１つが含まれる。少なくとも１つのＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストと同時投与し、そして／または同時配合することも可能な療法剤には：７５ｋｄ ＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５ｋＤ ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質、エンブレルＴＭ）などのＴＮＦ受容体（例えばヒトｐ５５およびｐ７５）の可溶性断片；メトトレキセート；レフルノミド；並びにシロリムス（ラパマイシン）またはその類似体（例えばＣＣＩ−７７９）の少なくとも１つが含まれることも可能である。
【０１２４】
［０１３２］抗ＩＬ−２１Ｒ抗体と併用可能な、多発性硬化症を治療する剤の限定されない例には、インターフェロン−β（例えばＩＦＮβ−１ａおよびＩＦＮβ−１ｂ）、コパキソン、コルチコステロイド、ＩＬ−１阻害剤、ＴＮＦ阻害剤、ＣＤ４０リガンドに対する抗体、ＣＤ８０に対する抗体、およびＩＬ−１２アンタゴニストが含まれる。
【０１２５】
［０１３３］抗ＩＬ−２１Ｒ抗体と併用可能な、炎症性腸疾患またはクローン病を治療する剤の限定されない例には、ブデノシド；上皮増殖因子；コルチコステロイド；シクロスポリン；スルファサラジン；アミノサリチル酸；６−メルカプトプリン；アザチオプリン；メトロニダゾール；リポキシゲナーゼ阻害剤；メサラミン；オルサラジン；バルサラジド；酸化防止剤；トロンボキサン阻害剤；ＩＬ−１受容体アンタゴニスト；抗ＩＬ−１モノクローナル抗体；抗ＩＬ−６モノクローナル抗体；増殖因子；エラスターゼ阻害剤；ピリジニル−イミダゾール化合物；本明細書に記載するようなＴＮＦアンタゴニスト；ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、および／またはＴＧＦβまたはそれらのアゴニスト（例えばアゴニスト抗体）；ＩＬ−１１；グルクロニドまたはデキストランにコンジュゲート化した、プレドニゾロン、デキサメタゾンまたはブデソニドのプロドラッグ；ＩＣＡＭ−１アンチセンス・ホスホロチオエート・オリゴデオキシヌクレオチド（ＩＳＩＳ２３０２；Ｉｓｉｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）；可溶性補体受容体１（ＴＰ１０；Ｔ Ｃｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．）；徐放メサラジン；メトトレキセート；血小板活性化因子（ＰＡＦ）のアンタゴニスト；シプロフロキサシン；およびリグノカインが含まれる。
【０１２６】
［０１３４］他の態様において、免疫応答、例えば移植拒絶または移植片対宿主疾患を制御するのに関与する他のターゲットに向けられる少なくとも１つの抗体と、抗ＩＬ−２１Ｒ抗体を併用することも可能である。本発明のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストと併用可能な、免疫応答を治療する剤の限定されない例には、以下が含まれる：限定されるわけではないが、ＣＤ２５（ＩＬ−２受容体α）、ＣＤ１１ａ（ＬＦＡ−１）、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ−１）、ＣＤ４、ＣＤ４５、ＣＤ２８／ＣＴＬＡ４、ＣＤ８０（Ｂ７−１）、ＣＤ８６（Ｂ７−２）を含む細胞表面分子に対する抗体、またはその組み合わせ。別の態様において、抗ＩＬ−２１Ｒ抗体を、シクロスポリンＡまたはＦＫ５０６などの一般的な免疫抑制剤の少なくとも１つと併用する。
【０１２７】
［０１３５］本発明の別の側面は、したがって、他の療法剤と抗ＩＬ−２１Ｒ抗体の併用投与を行うためのキットに関する。１つの態様において、該キットは、薬剤キャリアー中で配合された少なくとも１つの抗ＩＬ−２１Ｒ抗体、および１以上の別個の薬剤調製物中に適切であるように配合された、少なくとも１つの療法剤を含む。
【０１２８】
診断使用
［０１３６］本発明記載の抗体を用いて、生物学的試料中のＩＬ−２１Ｒの存在を検出することもまた可能である。これらのタンパク質の存在またはレベルを、医学的状態と相関させることによって、当業者は、関連する医学的状態を診断することも可能である。例えば、刺激されたＴ細胞は、ＩＬ−２１Ｒの発現を増加させ、そして関節に異常に高濃度のＩＬ−２１Ｒを発現するＴ細胞があることは、関節の炎症、および関節炎の可能性の指標となることも可能である。本発明の抗体によって診断可能な典型的な医学的状態には、多発性硬化症、関節リウマチ、および移植拒絶が含まれる。
【０１２９】
［０１３７］抗体に基づく検出法が当該技術分野に周知であり、そしてこれには、ＥＬＩＳＡ、ラジオイムノアッセイ、イムノブロット、ウェスタンブロット、フローサイトメトリー、免疫蛍光、免疫沈降、および他の関連技術が含まれる。ＩＬ−２１Ｒを検出するこれらの方法の少なくとも１つを取り込む診断キットにおいて、抗体を提供することも可能である。キットは、他の構成要素、パッケージング、使用説明書、またはタンパク質の検出およびキットの使用を補助する他の材料を含有することも可能である。
【０１３０】
［０１３８］抗体を、リガンド基（例えばビオチン）、蛍光団（ｆｌｕｏｒｏｐｈｏｒｅ）および発色団、放射性同位体、高電子密度試薬、または酵素を含む、検出可能マーカーで修飾することも可能である。酵素は活性によって検出される。例えば西洋ワサビ・ペルオキシダーゼは、テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）を、分光光度計で定量化可能な青い色素に変換する能力によって、検出される。他の適切な結合パートナーには、当該技術分野に知られる、ビオチンおよびアビジン、ＩｇＧおよびプロテインＡ、および他の受容体−リガンド対が含まれる。
【０１３１】
［０１３９］抗体を、少なくとも１つの他の分子、例えばとりわけ、別の抗体（例えば二重特異性抗体または多重特異性抗体）、毒素、放射性同位体、細胞傷害剤または細胞分裂停止剤に（例えば化学的カップリング、遺伝子融合、非共有会合または他のものによって）機能するように連結することもまた可能である。他の順列および可能性は当業者に明らかであり、そしてこれらは、本発明の範囲内の同等物と見なされる。
【０１３２】
薬剤組成物および投与法
［０１４０］本発明の特定の態様には、開示する抗体を含む組成物が含まれる。組成物は、薬剤使用および患者への投与に適していることも可能である。組成物は、本発明の抗体および薬剤賦形剤を含む。本明細書において、「薬剤賦形剤」には、薬剤投与に適合する、溶媒、分散媒体、コーティング、抗細菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤等が含まれる。薬学的活性物質のためのこれらの剤の使用が当該技術分野に周知である。組成物はまた、補助的、付加的または増進される療法機能を提供する他の活性化合物を含有することも可能である。薬剤組成物はまた、投与のための使用説明書とともに、容器、パック、またはディスペンサー中に含まれることも可能である。
【０１３３】
［０１４１］本発明の薬剤組成物を、意図する投与経路に適合するように配合する。投与を達成する方法は、一般の当業者に知られる。局所投与または経口投与可能であるか、あるいは粘膜を渡る伝播が可能でありうる組成物を生成可能であることもありうる。例えば、投与は、静脈内、腹腔内、筋内、腔内、皮下、または経皮であることも可能である。
【０１３４】
［０１４２］皮内または皮下適用に用いる溶液または懸濁物には、典型的には、以下の構成要素の少なくとも１つが含まれる：水、生理食塩水、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、または他の合成溶媒などの無菌希釈剤；ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗細菌剤；アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウムなどの酸化防止剤；エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）などのキレート剤；酢酸、クエン酸、またはリン酸などの緩衝剤；および塩化ナトリウムまたはデキストロースなどの等張化剤。酸または塩基でｐＨを調整することも可能である。こうした調製物を、アンプル、使い捨てシリンジ、または多用量バイアルに封入することも可能である。
【０１３５】
［０１４３］静脈内投与に用いる溶液または懸濁物には、生理学的食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬＴＭ（ＢＡＳＦ、ニュージャージー州パーシッパニー）、エタノール、またはポリオールなどのキャリアーが含まれる。すべての場合で、組成物は無菌であり、そして注入が容易であるように液体でなければならない。しばしば、レシチンまたは界面活性剤を用いて、適切な流動性を得ることも可能である。組成物はまた、製造および保存の条件下で安定でなければならない。抗細菌剤および抗真菌剤、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサール等を用いて、微生物の防止を達成することも可能である。多くの場合で、等張剤（糖）、多価アルコール（マンニトールおよびソルビトール）、または塩化ナトリウムを組成物に含むことも可能である。吸収を遅延させる剤、例えばモノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを添加することによって、組成物の緩慢吸収を達成することも可能である。
【０１３６】
［０１４４］経口組成物には、不活性希釈剤または食用キャリアーが含まれる。組成物をゼラチン中に封入するか、または圧縮して錠剤にすることも可能である。経口投与の目的のため、錠剤、トローチ、またはカプセルに、抗体を賦形剤とともに取り込んでそして入れることも可能である。薬学的に適合する結合剤または佐剤成分を組成物中に含むことも可能である。錠剤、トローチ、およびカプセルは（１）微結晶性セルロース、トラガカントガムまたはゼラチンなどの結合剤；（２）デンプンまたはラクトースなどの賦形剤；（３）アルギン酸、プリモゲル、またはコーンスターチなどの崩壊剤；（４）ステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤；（５）コロイド性二酸化ケイ素などの流動促進剤；または（６）甘味料もしくは香料を含有することも可能である。
【０１３７】
［０１４５］組成物を経粘膜経路または経皮経路で投与することもまた可能である。例えば、Ｆｃ部分を含む抗体は、腸、口、または肺の粘膜を横断することも可能でありうる（Ｆｃ受容体を介して）。ロゼンジ、鼻スプレー、吸入剤、または座薬の使用によって、経粘膜投与を達成することも可能である。当該技術分野に知られる軟膏（ｏｉｎｔｍｅｎｔ、ｓａｌｖｅ）、ゲル、またはクリームを含有する組成物の使用によって、経皮投与もまた達成可能である。経粘膜投与または経皮投与のため、浸透させようとするバリアに適した浸透剤を用いる。吸入投与では、噴霧剤（例えば液体またはガス）または噴霧器を含有する加圧容器またはディスペンサーからエアロゾルスプレー中で抗体を搬送する。
【０１３８】
［０１４６］特定の態様において、体からの迅速な排除から抗体を保護するキャリアーを用いて、本発明の抗体を調製する。生体分解性ポリマー（例えばエチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、ポリ乳酸）をしばしば用いる。こうした配合物を調製する方法が当業者に知られる。リポソーム懸濁物を薬学的に許容しうるキャリアーとして用いることもまた可能である。当該技術分野に知られる、確立された方法にしたがって、リポソームを調製することも可能である（米国特許第４，５２２，８１１号）。
【０１３９】
［０１４７］記載するように、療法的有効量の本発明の抗体または抗体組成物を投与する。療法的有効量は、被験者の年齢、状態、性別、および医学的状態の重症度によって多様でありうる。臨床徴候に基づいて、医師が適切な投薬量を決定することも可能である。抗体または組成物を多量（ｂｏｌｕｓ）用量で投与して、最長の時間に渡って、抗体の循環レベルを最大にすることも可能である。多量用量後、連続注入もまた使用可能である。
【０１４０】
［０１４８］本明細書において、用語「被験者」は、ヒトおよび非ヒト動物を含むよう意図される。被験者は、ＩＬ−２１Ｒを発現する細胞、例えば癌細胞または免疫細胞に特徴付けられる障害を有するヒト患者を含むことも可能である。用語、本発明の「非ヒト動物」には、すべての脊椎動物、例えば非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ウシ、ニワトリ、両生類、爬虫類などが含まれる。
【０１４１】
［０１４９］被験者に投与可能な投薬量範囲の例は：１μｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ〜１００μｇ／ｋｇ、１００μｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇ、５００μｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇから選択されることも可能である。
【０１４２】
［０１５０］調剤の投与および均一性を容易にするため、組成物を、投薬単位型で配合することが好適である可能性もある。本明細書において、投薬単位型は、患者に適した、物理的に別個の単位を指す。各投薬単位は、キャリアーと組み合わせて、療法効果を生じると計算された、あらかじめ決定された量の抗体を含有する。投薬単位は、抗体の特性および達成しようとする特定の療法効果に応じる。
【０１４３】
［０１５１］細胞培養または実験動物における標準的薬学的方法によって、例えばＬＤ５０（集団の５０％に致死的である用量）およびＥＤ５０（集団の５０％に療法的に有効である用量）を決定して、組成物の毒性および療法有効性を決定することも可能である。毒性効果および療法効果の間の用量比が療法指数であり、そしてＬＤ５０／ＥＤ５０の比として表すことも可能である。大きい療法指数を示す抗体は、より毒性でなく、そして／または療法的により有効であることも可能である。
【０１４４】
［０１５２］細胞培養アッセイおよび動物研究から得られるデータを用いて、ヒトにおける投薬量範囲を配合することも可能である。これらの化合物の投薬量は、血中に循環する抗体濃度の範囲内にあることも可能であり、これには、ほとんどまたはまったく毒性を伴わないＥＤ５０が含まれる。投薬量は、使用する調剤組成物および投与経路に応じて、この範囲内で多様であることも可能である。本発明で用いる抗体いずれに関しても、細胞培養アッセイを用いて、療法的有効用量をまず概算することも可能である。動物モデルにおいて、用量を配合して、ＩＣ５０（すなわち症状の最大の阻害の半分を達成する抗体濃度）を含む循環血漿濃度範囲を達成することも可能である。特定の投薬量いずれの効果も、適切なバイオアッセイによって監視可能である。適切なバイオアッセイの例には、ＤＮＡ複製アッセイ、転写に基づくアッセイ、ＩＬ−２１Ｒ／ＩＬ−２１結合アッセイ、および他の免疫学的アッセイが含まれる。
【０１４５】
［０１５３］以下の実施例は、いかなる点でも、本発明の範囲を限定しない。一般の当業者は、本発明の精神または範囲を改変することなく実行可能な、多くの修飾および変型を認識するであろう。こうした修飾および変型が本発明の範囲内に含まれる。本出願全体に渡って引用される、すべての参考文献、特許および刊行特許出願の全内容が、本明細書に援用される。
【実施例】
【０１４６】
実施例１：ＭＵＦおよびＭＵ１１抗ＩＬ−２１Ｒ ｓｃＦｖの選択
［０１５４］Ｖａｕｇｈａｎら（（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．，１４：３０９−３１４）に記載される１．３８×１０１０ライブラリーの拡大型である、ｓｃＦｖファージミド・ライブラリーを用いて、ヒトＩＬ−２１Ｒに特異的な抗体を選択した。マイクロタイタープレートのウェルを、可溶性ＩＬ−２１Ｒ融合タンパク質または対照融合タンパク質（リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中、５〜２０μｇ／ｍｌ）でコーティングし、そして４℃で一晩インキュベーションした。ウェルをＰＢＳ中で洗浄し、次いでＭＰＢＳ（ＰＢＳ中３％粉乳）中、３７℃で１時間ブロッキングした。ＭＰＢＳ中で１時間ブロッキングした精製ファージ（１０１２形質導入単位）を、対照融合タンパク質でコーティングしたウェルに添加し、そして１時間インキュベーションした。次いで、非結合ファージをＩＬ−２１Ｒ融合タンパク質ウェルに移し、そして１時間インキュベーションした。ウェルをＰＢＳＴ（ＰＢＳ中、０．１％ ｖ／ｖ Ｔｗｅｅｎ２０）で５回洗浄し、次いでＰＢＳで５回洗浄した。結合したファージ粒子を溶出し、そして指数関数的に増殖している大腸菌ＴＧ１を感染させるのに用いた。感染した細胞を２ＴＹブロス中、３７℃で１時間増殖させ、次いで２ＴＹＡＧプレート上にストリークし、そして３０℃で一晩インキュベーションした。翌日、１５％グリセロールを加えた１０ｍｌの２ＴＹブロス中にコロニーを移し、そして−７０℃で保存した。後に、この最初の周期の選択由来のコロニーを融解し、そしてヘルパーファージに重複感染させて、第二周期の選択のため、ｓｃＦｖ抗体を発現するファージをレスキュー（生成）した。
【０１４７】
実施例２：Ｒ１８および１９Ｆ５抗ＩＬ−２１Ｒ ｓｃＦｖの選択
［０１５５］溶液中のビオチン化ヒトＩＬ−２１Ｒ融合タンパク質（ｂｉｏ．ｈＩＬ２１Ｒ）（Ｗｙｅｔｈ、ニュージャージー州ギラルダファーム）２００ｎＭを用いて、抗ＩＬ−２１Ｒ ｓｃＦｖ（Ｒ１８）を単離した。実施例１に上述するように、精製ｓｃＦｖファージ（１０１２ｔｕ）をＭＰＢＳおよび１２５μｇ／ｍｌ対照融合タンパク質でブロッキングした。ブロッキングしたファージに、ビオチン化したＩＬ−２１Ｒ融合タンパク質を最終濃度２００ｎＭまで添加し、そして室温で１時間インキュベーションした。１ｍｌの３％ ＭＰＢＳ中、室温で９０分間ブロッキングしておいた、７５μｌのＤｙｎａｌ Ｍ２８０ストレプトアビジン磁気ビーズ（Ｄｙｎａｌ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｉｎｃ．、ニューヨーク州レークサクセス）に、ファージ／抗原を添加した。混合物を混合しながら、室温で１５分間インキュベーションした。磁気ラックを用いてビーズを捕捉し、そして１ｍｌのＰＢＳＴ中で５回、次いでＰＢＳ中で３回洗浄した。０．２Ｍリン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ７．０中の１０μｇ／ｍｌトリプシン５００μｌを用いて、結合したファージを溶出し、そして３７℃で３０分間インキュベーションした。溶出したファージを用いて、上述のように、指数関数的に増殖している大腸菌ＴＧ−１細胞１０ｍｌを感染させた。３周期の選択の後、ｓｃＦｖクローンを単離した。
【０１４８】
［０１５６］指数関数的に増殖している培養物に１ｍＭ ＩＰＴＧを添加し、そして３０℃で一晩インキュベーションすることによって、ｓｃＦｖ産生を誘導した。ヒトＩＬ−２１−ＦＬＡＧタグ付きタンパク質へのヒトＩＬ−２１Ｒ融合タンパク質の結合を阻害する能力に関して、未精製ｓｃＦｖ含有周辺質抽出物（Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓら（１９９３）ＥＭＢＯ Ｊ．，１２：７２５−７３４）をスクリーニングした。簡潔には、抗ＦＬＡＧ抗体をプラスチック上に固定し、そしてＦＬＡＧ−タグ付きヒトＩＬ−２１タンパク質を捕捉するのに用いた。ヒトＩＬ−２１Ｒ融合タンパク質に対するユーロピウム標識抗体を用いて、ヒトＩＬ−２１Ｒ融合タンパク質の結合を検出し、そしてＤＥＬＦＩＡ試薬キット（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、マサチューセッツ州ボストン）を用いて、時間分解蛍光を検出した。精製ｓｃＦｖ Ｒ１８クローンは、ＩＬ−２１−ＦＬＡＧタグ付きタンパク質へのＩＬ−２１Ｒ融合タンパク質結合の阻害に関して、７７０ｎＭのＩＣ５０値を示した。
【０１４９】
［０１５７］第三周期の選択において、５０ｎＭのヒトＩＬ−２１Ｒ融合タンパク質を用いたことを除いて、Ｒ１８に関して用いたような選択法によって、抗ＩＬ−２１Ｒクローン１９Ｆ５を単離した。
【０１５０】
実施例３：１８Ａ５および１８Ｇ４抗ＩＬ−２１Ｒ ｓｃＦｖの選択
［０１５８］ＩＬ−２１Ｒ発現細胞株および溶液中のＩＬ−２１Ｒ融合タンパク質上で選択することによって、抗ＩＬ−２１Ｒ ｓｃＦｖである１８Ａ５、１８Ｇ４を単離した。標準的組織培養法を用いて、細胞表面上にヒトＩＬ−２１Ｒを発現するトランスフェクションｈＢａｆ３Ｍｕ−１細胞（Ｗｙｅｔｈ、ニュージャージー州ギラルダファーム）を培養した。１×１０８未トランスフェクションＢａｆ３細胞で、精製ｓｃＦｖファージ（１０１２ｔｕ）を、ＭＰＢＳ中、室温で１時間ブロッキングした。
【０１５１】
［０１５９］ＭＰＢＳ中で１時間プレインキュベーションしておいた１×１０７ｈＢａｆ３Ｍｕ−１細胞に、ブロッキングしたファージを添加した。この後、混合しながら室温で１時間インキュベーションした。続いて、ｈＢａｆ３Ｍｕ−１細胞をＰＢＳＴ中で６回洗浄した。０．２Ｍリン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ７．０中、１０μｇ／ｍｌのトリプシンを用いて、特異的に結合したファージを細胞から溶出し、そして振盪しながら３７℃で３０分間インキュベーションした。溶出したファージ上清を用いて、上述のように大腸菌ＴＧ−１細胞を感染させた。
【０１５２】
［０１６０］第二周期の選択のためのｓｃＦｖ発現ファージを上述のように産生した。ＭＰＢＳおよび１２５μｇ／ｍｌ対照融合タンパク質を用いて、ファージをブロッキングした。１ｍｌのＭＰＢＳ／０．１％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ２０中で５回、その後、ＰＢＳ中で３回、ビーズを洗浄したことを除いて、Ｒ１８に関して記載するような選択法にしたがって、ビオチン化したヒトＩＬ−２１Ｒ融合タンパク質（Ｗｙｅｔｈ）を用い、溶液中で選択を行った。
【０１５３】
［０１６１］次いで、上述のように、ｈＢａｆ３Ｍｕ−１細胞を用いた選択法を用いて、ｓｃＦｖ抗体発現ファージ粒子をさらに選択した。
【０１５４】
実施例４：ＣＰ５Ｇ２抗ＩＬ−２１Ｒ ｓｃＦｖの選択
［０１６２］ヘキサヒスチジンおよびＦｌａｇアフィニティータグでタグ付けしたネズミＩＬ−２１Ｒ（ｈＩＬ２１Ｒ．Ｈｉｓ．Ｆｌａｇ）（Ｗｙｅｔｈ、ニュージャージー州ギラルダファーム）上の選択によって、クローンＣＰ５Ｇ２を単離した。３０μｌの抗Ｆｌａｇアガロースビーズを加えたＭＰＢＳで、精製ｓｃＦｖファージ（１０１２ｔｕ）を、室温で１時間ブロッキングした。ＭＰＢＳ中、最終濃度２５ｎＭのｈＩＬ−２１Ｒ．Ｈｉｓ．Ｆｌａｇを、ブロッキングしたファージに添加し、そして室温で１時間インキュベーションした。次いで、ＭＰＢＳ中、室温で２時間ブロッキングし、ＰＢＳ中で３回洗浄しておいた１００μｌの抗Ｆｌａｇアガロースビーズに、ライブラリー／抗原混合物を添加し、そして混合しながらさらに３０分間インキュベーションした。ＰＢＳＴで４回、次いでＰＢＳで４回、ビーズを洗浄し、そして上述のように、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ、ｐＨ８．０、１ｍＭ ＣａＣｌ２中の０．５μｇ／ｍｌトリプシンで、ビーズからファージを溶出した。遠心分離を用いて、ビーズを収集した。溶出したファージを用いて、上述のように、１０ｍｌの大腸菌ＴＧ−１細胞を感染させた。やはり上述のように、第二周期の可溶性選択を行った。
【０１５５】
［０１６３］１００μｌの２ＴＹＡＧを含有する９６ウェルプレートにコロニーを摘み取った。用いた緩衝液が、２０％（ｗ／ｖ）スクロース、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、１ｍＭ ＥＤＴＡであったことを除いて、上述のように未精製ｓｃＦｖ含有周辺質抽出物を産生した。９６ウェルマイクロタイタープレートアッセイにおいて、プラスチック上に固定したネズミＩＬ−２１Ｒタンパク質に対する、１６ｎｇ／ｍｌのビオチン化したネズミＩＬ−２１（ｂｉｏ．ｍＩＬ２１）の結合を阻害する能力に関して、未精製ｓｃＦｖ含有抽出物をスクリーニングした。ユーロピウム標識ストレプトアビジンを用いて、ｂｉｏ．ｍＩＬ２１の結合を検出し、そしてＤＥＬＦＩＡ試薬キット（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、マサチューセッツ州ボストン）を用いて、ＴＲＦを検出した。
【０１５６】
［１６４］精製ＣＰ５Ｇ２ ｓｃＦｖは、ＩＬ−２１ＲへのＩＬ−２１結合の阻害に関して、上記アッセイにおいて、５９０ｎＭのＩＣ５０値を示した。
【０１５７】
実施例５：ＭＵＦおよびＭＵ１１ファージクローン由来のｓｃＦｖの同定
［０１６５］ＩＬ−２１Ｒに対するｓｃＦｖの特異性を確認するため、ＩＬ−２１Ｒ融合タンパク質に対して、ファージＥＬＩＳＡを行った。第二の選択由来の個々のＴＧ１細胞コロニーを、１００μｌの２ＴＹＡＧ培地を含有するマイクロタイターウェルに移した。Ｍ１３Ｋ０７ヘルパーファージ（１０ｍｏｉ）を、指数関数的に増殖しているＴＧ１培養物に添加し、そして試料を３７℃で１時間インキュベーションした。プレートを遠心分離し、そして上清を除去し、次いで、残ったペレットを１００μｌの２ＴＹＡＧに懸濁し、そして振盪しながら３０℃で一晩インキュベーションした。翌日、プレートを遠心分離し、そしてファージ上清を新たなマイクロタイタープレートウェルに移した。ＥＬＩＳＡ前にファージをＭＰＢＳ中でブロッキングした。
【０１５８】
［０１６６］マイクロタイタープレートのウェルをＩＬ−２１Ｒ融合タンパク質または対照融合タンパク質（０．５〜２．５μｇ／ｍｌ）でコーティングし、そして４℃で一晩インキュベーションした。翌日、融合タンパク質溶液を除去し、そしてウェルをＭＰＢＳ中で１時間ブロッキングした。ウェルをＰＢＳで洗浄し、次いで、５０μｌのブロッキングしたファージを添加した。プレートを１時間インキュベーションし、次いでＰＢＳＴで３回、そしてＰＢＳで３回洗浄した。抗Ｍ１３−ＨＲＰコンジュゲート（Ｐｈａｒｍａｃｉａ、ニュージャージー州ピーパック）をウェルに添加し、そして試料を１時間インキュベーションした。ＰＢＳＴで３回、そしてＰＢＳで３回、ウェルを洗浄した。ＴＭＢをウェルに添加し、そして発色するまで試料をインキュベーションした。２５μｌの０．５Ｍ Ｈ２ＳＯ４で反応を停止した。マイクロタイタープレート読取装置を用いて、４５０ｎｍで吸光度を読み取ることによって、色シグナルを測定した。２つのファージクローンが、ＩＬ−２１Ｒ融合タンパク質に特異的結合を示し、そして対照融合タンパク質には特異的結合を示さず、そしてこれらのクローンを、本出願において、ＭＵＦおよびＭＵ１１ファージクローンと称する。
【０１５９】
［０１６７］ＭＵＦおよびＭＵ１１ファージクローンを含有する個々のＴＧ−１コロニーを、２ＴＹＡＧプレート上にストリークし、そして３０℃で一晩インキュベーションした。ｐＣＡＮＴＡＢ６ベクター特異的オリゴを用いて、ＰＣＲによってファージのＶＨ領域およびＶＬ領域を増幅し、そして配列決定した。データベース検索によって、ＭＵＦファージクローンのＶＬ領域がラムダ鎖から生じ、そしてＭＵ１１ファージクローンのＶＬ領域がカッパ鎖から生じたことが明らかになった。
【０１６０】
実施例６：ｓｃＦｖのＩｇＧへの変換
［０１６８］クローン特異的プライマーを用いたＰＣＲによって、ＭＵＦおよびＭＵ１１ファージクローン由来のＶＨ領域およびＶＬ領域を増幅した。ＰＣＲ産物を制限酵素で消化し、そしてヒトＩｇＧ１重鎖定常ドメイン（Ｔａｋａｈａｓｈｉら（１９８２）Ｃｅｌｌ ２９，６７１）またはヒト・ラムダ軽鎖定常ドメインまたはヒト・カッパ軽鎖定常ドメイン（Ｈｉｅｔｅｒら（１９８２）Ｎａｔｕｒｅ ２９４：５３６）を含有する適切なベクター（実施例２を参照されたい）にサブクローニングした。４つの構築物が、本出願において、ＭＵＦ重鎖、ＭＵＦ軽鎖、ＭＵ１１重鎖、およびＭＵ１１軽鎖と称するポリペプチドをコードする。
【０１６１】
［０１６９］ＭＵＦ重鎖、ＭＵＦ軽鎖、ＭＵ１１重鎖、およびＭＵ１１軽鎖を含有するベクターを調製し、配列決定し、そして標準的技術を用いて、ＨＥＫ２９３細胞またはＣＨＯ細胞をトランスフェクションするのに用いた。ＭＵＦ重鎖および軽鎖を発現する細胞は、ＭＵＦ抗体を産生し、該抗体は本出願において「ＭＵＦ」と称され、そしてＭＵ１１重鎖および軽鎖を発現する細胞は、ＭＵ１１抗体を産生し、該抗体は本出願において「ＭＵ１１」と称される。プロテインＡ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）を用いて、分泌された抗体を精製し、次いでＰＢＳで透析した。
【０１６２】
［０１７０］抗体の結合特異性を以下のように決定した：ＥＬＩＳＡプレートを２．５μｇ／ｍｌのＩＬ−２１Ｒ融合タンパク質で一晩コーティングした。プレートをＰＢＳＢ（ＰＢＳ＋１％ウシ血清アルブミン）で洗浄し、次いで多様な濃度のＭＵＦまたはＭＵ１１と、２５℃で２時間インキュベーションした。プレートを洗浄し、次いで、飽和量のＨＲＰコンジュゲート化ヤギ抗ヒト抗体を添加した。プレートを２５℃で１時間インキュベーションし、次いでＰＢＳＢで洗浄し、そしてＴＭＢを用いて発色させた。ＥＬＩＳＡによって得た結果の例を図１Ａに示す。
【０１６３】
［０１７１］細胞表面染色によって、抗体の結合特異性をさらに確認した。ヒトＩＬ−２１Ｒ形質導入ＴＦ−１細胞を、精製またはビオチン化ＭＵＦまたはＭＵ１１（１ｍｇ／ｍｌ）と結合させた。細胞を氷上で３０分間インキュベーションし、ＰＢＳＢで洗浄し、次いでＰＥ−コンジュゲート化抗ヒトＩｇＧ抗体またはＰＥ−コンジュゲート化アビジンを含有する溶液中に懸濁した。細胞を氷上で３０分間インキュベーションし、洗浄し、次いでＦＡＣＳｃａｎ上で解析した。結果を図１Ｂに示す。精製マウスＢ細胞をＭＵＦで同様に染色し、そして結果を図１Ｃに示す。
【０１６４】
実施例７：ＭＵＦはＩＬ−２１ＲへのＩＬ−２１の結合をブロッキングする
［０１７２］阻害アッセイを行って、抗体がＩＬ−２１ＲへのＩＬ−２１の結合をブロッキングする能力を評価した。実施例３に記載したものに以下の修飾を加えて、ＥＬＩＳＡを行った。ＭＵＦまたはＭＵ１１と２５℃で２時間インキュベーションした後、ビオチン・コンジュゲート化ＩＬ−２１（１μｇ／ｍｌ）を添加し、そして試料を２５℃で１時間インキュベーションした。洗浄後、飽和量のアビジン−ＨＲＰを添加し、そして試料を２５℃でさらに１時間インキュベーションした。ウェルをＰＢＳＢで洗浄し、そしてＴＭＢを用いて試料を発色させた。結果を図２に示す。これらの条件下で、ＭＵＦはＩＬ−２１ＲへのＩＬ−２１の結合をブロッキングし、一方、ＭＵ１１はブロッキングしなかった。これらのデータによって、ＭＵＦおよびＭＵ１１はＩＬ−２１Ｒの異なるエピトープを認識することが示唆される。
【０１６５】
実施例８：ＭＵＦおよびＭＵ１１はＴ細胞応答を減少させる
［０１７３］増殖アッセイを行って、ＩＬ−２１が仲介するＴ細胞増殖を抗体がブロッキングする能力を評価した。ヒトＣＤ４＋ Ｔ細胞（５×１０４細胞／ウェル）をＰＨＡ（植物性血球凝集素）およびヒトＩＬ−２１で刺激した。ＣＯＳ細胞培地（ＣＯＳ ＣＭ）中のＩＬ−２１を多様な濃度で異なる試料に添加した。示した試料中で、ＭＵＦ、ＭＵ１１、またはヒトＩｇＧ１アイソタイプ対照を添加した。７２時間後、３Ｈ−チミジンを添加し、そしてＬＫＢ １２０５液体シンチレーションカウンターを用いて、取り込まれた放射能によって、細胞増殖を測定した。図３Ａに示すように、ＩＬ−２１は、ＰＨＡ刺激したＴ細胞の増殖を増加させた。ＭＵＦを添加すると、約１：５００〜１：１０，０００の間の範囲で、ＩＬ−２１が増殖を増加させる能力がブロッキングされた。ＭＵＦブロッキングは、より高い用量のＩＬ−２１で克服された。ＭＵ１１またはアイソタイプ対照抗体を添加しても、ＩＬ−２１が増大させるヒトＴ細胞の増殖には、有意な影響はなかった。
【０１６６】
［０１７４］図３Ｂでは、ＰＬＰ特異的マウスＣＤ４＋ Ｔ細胞株をＰＬＰペプチド（１μｇ／ｍｌ）およびＳＪＬマウス脾臓細胞で刺激した。ＣＯＳ細胞培地中のＩＬ−２１（ＣＯＳ ＩＬ−２１）をＸ軸上に示すように力価決定した（ｔｉｔｅｒｅｄ）。「Ｃｏｓ偽」はＩＬ−２１を含まないＣＯＳ培地である。示した試料において、ＭＵ１１（１μｇ／ｍｌ）を添加した。７２時間後、３Ｈ−チミジンを添加し、そして取り込まれた放射能によって増殖を測定した。図３Ｂに示すように、ＩＬ−２１は、刺激したマウスＴ細胞の増殖を増加させた。ＭＵ１１を添加すると、ＩＬ−２１がマウスＣＤ４＋ Ｔ細胞の増殖を増加させる能力がブロッキングされた。これらのデータによって、ＭＵ１１が非競合阻害剤として作用することが示唆される：非競合阻害剤は、受容体へのＩＬ−２１結合をブロッキングしなくても、ＩＬ−２１が増殖を増加させる能力をブロッキングする。
【０１６７】
［０１７５］図３Ｃにおいて、精製ＣＤ８＋マウスＴ細胞を、抗ＣＤ３抗体でコーティングしたトシル−ビーズ（Ｄｙｎａｌ、ニューヨーク州グレートネック）で刺激した。ＣＯＳ細胞培地中のＩＬ−２１（ＣＯＳ ｓ／ｎ）をＸ軸に示すように力価決定した。「抗体なし」と示した試料を対照として用いた。示した試料において、示した濃度のＭＵ１１を添加した。７２時間後、３Ｈ−チミジンを添加し、そして取り込まれた放射能によって増殖を測定した。図３Ｃに示すように、ＭＵ１１の添加によって、用量依存方式で、ＩＬ−２１がＣＤ８＋ Ｔ細胞の増殖を増加させる能力がブロッキングされた。
【０１６８】
実施例９：ｓｃＦｖおよびＩｇＧによる細胞増殖の阻害
［０１７６］ＩＬ−２１Ｒ拮抗に関する、細胞に基づくアッセイにおいて、本発明の抗体を試験した。１つのこうした実験において、ＩＬ−２１ＲへのＩＬ−２１結合をブロッキングすることによって、細胞増殖を阻害する強度に関する、細胞に基づくアッセイ中、実施例１〜３に記載するように単離された、多様なｓｃＦｖファージクローンを試験した。ヒトＩＬ２１Ｒを発現しているｈＢａｆ３Ｍｕ−１細胞懸濁物をこうしたアッセイに用いた。ｈＢａｆ３Ｍｕ−１細胞（Ｗｙｅｔｈ）を洗浄して、増殖培地から微量のネズミＩＬ−３を除去し、そして１０％ウシ胎児血清を含み、ＩＬ−３を含まない、増殖ＲＰＭＩ Ｇｌｕｔａｍａｘ中、３７℃、５％ＣＯ２インキュベーター中で２時間インキュベーションした。約１０，０００〜２０，０００のＢａｆ３Ｍｕ−１細胞を９６ウェル組織培養プレートの各ウェルに添加し、そして次いで、ｓｃＦｖまたはＩｇＧと３７℃で３０分間インキュベーションした。次いで、５ｎｇ／ｍｌの濃度にＩＬ−２１（Ｗｙｅｔｈ、ニュージャージー州ギラルダファーム）を添加し、そして細胞を２４時間インキュベーションした。次いで、０．１ｍＣｉ／ウェルの３Ｈチミジンで細胞を３７℃で一晩、パルス標識し、そして続いて採取して、細胞増殖の指標として、チミジン取り込みを測定した。代替プロトコルにおいて、ＩＬ−２１を０．３ｎｇ／ｍｌの濃度に添加し、そして細胞を４８時間インキュベーションした。次いで、細胞を室温に温め、そして１５ｍｌ／ウェルのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ、ウィスコンシン州）を添加した。混合し、そして１０分間インキュベーションした後、細胞増殖または生存度の指標として、Ｗａｌｌａｃ ＭｉｃｒｏＢｅｔａ １４５０ ＴｒｉＬｕｘカウンター（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、マサチューセッツ州ボストン）上で、発光を測定した。
【０１６９】
［０１７７］ＩＬ−２１の対数濃度に対して、細胞増殖の測定値、例えばチミジン取り込みをプロッティングすることによって、各ｓｃＦｖのＩＣ５０値（すなわち５０％競合に必要な抗体濃度）を決定することも可能である。典型的には、ＩＣ５０がより低ければ、抗体のＩＬ−２１Ｒに対する親和性はより高い。図４に示す１つの実験において、ＭＵＦは、ｓｃＦｖとして２６８ｎＭ、そしてＩｇＧとして３ｎＭのＩＣ５０で、ＩＬ−２１に対する細胞応答を阻害した。以下の表４に要約するように、続いて、他のｓｃＦｖクローンのＩＣ５０値を、ＭＵＦのものと比較した。
【０１７０】
表４：多様なｓｃＦｖのＩＣ５０値
【０１７１】
【表５】
【０１７２】
実施例１０：ＭＵＦ生殖系列化
［０１７８］ｓｃＦｖクローンの配列データを用いて、ＶＢＡＳＥを用い、ＭＵＦクローンの重鎖および軽鎖に関して、最も近い生殖系列配列を同定した。適切な突然変異誘発プライマーとともに、標準的部位特異的突然変異誘発技術を用いて、突然変異を作成した。配列解析によって、ｓｃＦｖ配列の突然変異を確認した。ＭＵＦの生殖系列化ｓｃＦｖおよびＶＨドメインおよびＶＬドメインの配列を、それぞれ、配列番号８５、８３および８４に示す。
【０１７３】
［０１７９］続いて、本明細書に記載するアッセイにおいて、ＩＬ−２１が誘導するｈＢａｆ３Ｍｕ−１細胞株増殖をブロッキングする能力に関して、ＭＵＦ ｓｃＦｖ生殖系列化配列をアッセイした。非生殖系列化ＭＵＦ ｓｃＦｖに比較して、生殖系列化ＭＵＦがＢａｆ３Ｍｕ−１細胞増殖をブロッキングする強度には、有意な相違はなかった。
【０１７４】
実施例１１：エピトープ競合アッセイ
［０１８０］ＭＵＦと同一エピトープまたは異なるエピトープに結合するか決定するため、エピトープ競合アッセイにおいて、ｓｃＦｖクローン１８Ａ５、１９Ｆ５および１８Ｇ４をさらに試験した。多様なクローンに関して上述するように、ｓｃＦｖ含有周辺質抽出物を調製した。用いた最終緩衝液は、５０ｍＭ ＭＯＰＳ、ｐＨ７．４、０．５ｍＭ ＥＤＴＡ、０．５Ｍソルビトールであった。９６ウェルマイクロタイタープレートアッセイにおいて、プラスチック上に固定したＭｕＦ ＩｇＧタンパク質へのビオチン化ヒトＩＬ−２１Ｒ融合タンパク質（ｂｉｏ．ｈＩＬ２１Ｒ）の結合を阻害する能力に関して、ｓｃＦｖ含有未精製周辺質抽出物をスクリーニングした。ユーロピウム標識ストレプトアビジンを用いて、ｂｉｏ．ｈＩＬ２１Ｒの結合を検出し、そしてＤＥＬＦＩＡ試薬キット（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を用いて、ＴＲＦを検出した。本明細書に記載するエピトープ競合アッセイにおいて、陽性クローンを用いた。
【０１７５】
［０１８１］エピトープ競合アッセイにおいて、多様なクローンに関して得たＩＣ５０値を表５に要約する。
表５：エピトープ競合アッセイ
【０１７６】
【表６】
【０１７７】
実施例１２：関節炎の治療
［０１８２］ＩＬ−２１を用いて、関節を裏打ちする膜である滑膜由来の細胞に対する、その影響を研究した。関節手術を受けた関節リウマチ患者の滑膜組織から、ヒト線維芽細胞様滑膜細胞（ＨＦＬＳ）（Ｃｅｌｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ（カリフォルニア州サンディエゴ））を単離した。ＨＦＬＳ細胞をヒトＩＬ−２１とともに４８時間培養し、そして上清を除去し、そしてＥＬＩＳＡによって、ケモカインＭＣＰ−１（単球化学誘引タンパク質またはＣＣＬ１１）、ＧＲＯ（増殖制御発癌遺伝子またはＣＸＣリガンド１）、Ｉ−３０９（ＣＣＬ１）、ＴＡＲＣ（胸腺および活性化制御ケモカイン）、エオタキシン、ＭＤＣ（マクロファージ由来ケモカインまたはＣＣＬ２２）、ＬＹＭＰＨ（リンホタクチンまたはＸＣＬ１）、ＳＤＦ−１Ｂ（間質由来因子−１ＢまたはＣＸＣリガンド１２）、ＩＰ−１０（ＣＸＣリガンド１０）、Ｉ−ＴＡＣ（Ｔ細胞誘引ケモカインまたはＣＸＣリガンド１１）、ＭＧ（インターフェロンに誘導されるモノカインまたはＣＸＣリガンド９）、ＭＰ３Ｂ（マクロファージ阻害タンパク質）、並びにサイトカインＩＦＮ−α、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６およびＩＬ−８に関して試験した。これらのケモカインおよびサイトカインは、いくつかの活性を通じて炎症を促進することが当該技術分野に知られ、そしてＩＬ−２１に引き起こされる、関節中での濃度増加は、炎症およびＲＡを悪化させる。
【０１７８】
［０１８３］図５Ａ〜５Ｄに示すように、ＩＬ−２１は、ケモカインＭＣＰ−１、ＧＲＯ、１−３０９、ＴＡＲＣ、エオタキシン、ＭＤＣ、ＬＹＭＰＨ、ＳＤＦ−１Ｂ、ＩＰ−１０、Ｉ−ＴＡＣ、ＭＧ、ＭＰ３Ｂ、並びにサイトカインＩＦＮ−α、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、およびＩＬ−８のＨＦＬＳ分泌を何度も増加させた。ＩＬ−２１を用いて、ＣＩＡ（コラーゲン誘導関節炎）の臨床的進行を制御した。ＣＩＡは、関節リウマチを研究するための、標準的マウスおよびラットモデルであり、例えばＨｏｌｍｄａｈｌら（２００２）Ａｇｅｉｎｇ Ｒｅｓ．Ｒｅｖ．，１：１３５を参照されたい。第０日、マウスに、完全フロイントアジュバント中の１００μｇのＩＩ型コラーゲンを注射し、そして第２１日、不完全フロイントアジュバント中の１００μｇのＩＩ型コラーゲンでマウスを追加免疫した。第２１日から、マウスにまた、１μｇのＩＬ−２１を毎日注射し、そして毎日、疾患に関してマウスを調べた。臨床的徴候を以下のようにスコア付けした：０＝腫脹なし、１＝１または２の腫脹した指または腫脹した足首、２＝２より多い腫脹した指または軽度の足腫脹、３＝甚大な足腫脹、および４＝足の強直。図５Ｅに示すように、コラーゲン注射後、ＰＢＳを注射したマウスは、次第に疾患を発展させた。コラーゲン注射後、ＩＬ−２１を注射したマウスは、次第により重度の疾患を発展させた。ＩＬ−２１での処置は、特異的にＣＩＡを悪化させたため、抗ＩＬ−２１Ｒ抗体での処置は、ＣＩＡを抑制するかまたは遅延させると予期される。したがって、このモデルはＲＡの治療有効性を予測するため、抗ＩＬ−２１Ｒ抗体での治療はまた、ヒトにおけるＲＡも抑制するかまたは遅延させると予期される。
【０１７９】
実施例１３：移植拒絶の治療
［０１８４］移植拒絶は、ドナー由来の組織が、宿主の免疫細胞に特異的に「攻撃」される免疫学的現象である。ｉｎ ｖｉｔｒｏで移植拒絶を研究する１つのアッセイは、混合リンパ球反応（ＭＬＲ）である。ＭＬＲアッセイにおいて、「ドナー」細胞および「宿主」細胞をｉｎ ｖｉｔｒｏで混合し、そして宿主細胞は活性化され、そして増殖する。第３日〜第５日の間、３Ｈ−チミジンを添加し、そして液体シンチレーションカウンターを用いて、取り込まれた放射活性によって増殖を測定する。
【０１８０】
［０１８５］図６において、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス脾臓細胞（５００，０００）および照射ＢＤＦ１マウス脾臓細胞（５００，０００）を、マイクロタイタープレートウェルにおいて、２００μｌの培地中に懸濁した。３つの複製ウェルに異なる量のマウスＩＬ−２１を補った。第４日、３Ｈ−チミジンを添加し、そして第５日、ＬＫＢ １２０５液体シンチレーションカウンターを用いて、取り込まれた放射能を測定した。試料「０」および「偽」は、ＩＬ−２１を含まない培養物を示す。ＩＬ−２１の非存在下で、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ細胞は、中程度に増殖した（〜６０００ｒａｄ）。ＩＬ−２１の存在下で、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ細胞は、より強く増殖した（〜２８，０００〜３８，０００ｒａｄ）。ＩＬ−２１での処理によって、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ細胞（「宿主」またはアロ反応性細胞）の増殖が増大し、これによって、ＩＬ−２１がＭＬＲを仲介することが示唆される。したがって、抗ＩＬ−２１Ｒ抗体を添加するかまたは該抗体で処置すると、ＭＬＲおよび移植拒絶および関連疾患（例えば移植片対宿主疾患）が抑制されるかまたは遅延されると予期される。
【０１８１】
［０１８６］本明細書は、本明細書内に引用される参考文献の解説を踏まえると、最も完全に理解され、こうした文献はすべて、完全に本明細書に援用される。本明細書内の態様は、本発明の態様の例示を提供し、そして本発明の範囲を限定すると見なしてはならない。当業者は、請求される発明に、多くの他の態様が含まれ、そして本明細書および実施例は例示にすぎないと見なされ、本発明の真の範囲および精神は、請求項に示されると意図されることを認識する。
【図面の簡単な説明】
【０１８２】
【図１Ａ】［００２８］図１Ａは、ＭＵ１１がヒトＩＬ−２１Ｒに特異的に結合することを示すＥＬＩＳＡの結果を示す。
【図１Ｂ】［００２９］図１Ｂは、ＭＵＦおよびＭＵ１１がどちらも、ヒトＩＬ−２１Ｒの表面に結合することを示す、ＦＡＣＳによって解析した結合アッセイの結果を示す。
【図１Ｃ】［００３０］図１Ｃは、ＭＵＦがマウスＢ細胞上のＩＬ−２１Ｒに結合することを示す、ＦＡＣＳによって解析した結合アッセイの結果を示す。
【図２】［００３１］図２は、ＭＵＦが、ヒトＩＬ−２１ＲへのヒトＩＬ−２１の結合を阻害することを示す、ＥＬＩＳＡの結果を示す。
【図３Ａ】［００３２］図３Ａは、ＭＵＦを添加すると、ＩＬ−２１がヒトＣＤ４＋ Ｔ細胞の増殖を増加させる能力がブロッキングされることを示す、細胞増殖アッセイの結果を示す。
【図３Ｂ】［００３３］図３Ｂは、ＣＯＳ細胞培地において、ＩＬ−２１がマウスＣＤ４＋ Ｔ細胞の増殖を増加させる能力を、ＭＵ１１がブロッキングすることを示す、細胞増殖アッセイの結果を示す。
【図３Ｃ】［００３４］図３Ｃは、ＣＯＳ細胞培地において、ＩＬ−２１がマウスＣＤ８＋ Ｔ細胞の増殖を増加させる能力を、ＭＵ１１が用量依存方式でブロッキングすることを示す、細胞増殖アッセイの結果を示す。
【図４】［００３５］図４は、ＩＬ−２１Ｒを発現するＢａｆ３Ｍｕ−１細胞の増殖をＩＬ−２１が増加させる能力を、ＭＵＦ ｓｃＦｖおよびＭＵＦ ＩｇＧ両方がブロッキングすることを示す、細胞増殖アッセイの結果を示す。
【図５Ａ】［００３６］図５Ａは、関節炎患者から単離した、ヒト線維芽細胞様滑膜細胞にＩＬ−２１を添加すると、ケモカインＭＣＰ−１およびＧＲＯ分泌の増加が導かれることを示す。
【図５Ｂ】［００３７］図５Ｂは、関節炎患者から単離した、ヒト線維芽細胞様滑膜細胞にＩＬ−２１を添加すると、ケモカイン１−３０９、ＴＡＲＣ、エオタキシン、ＭＤＣ、Ｌｙｍｐｈ、ＳＤＦＩＢ、ＩＰ−１０、Ｉ−ＴＡＣ、ＭＧおよびＭＰ３Ｂ分泌の増加が導かれることを示す。
【図５Ｃ】［００３８］図５Ｃは、関節炎患者から単離した、ヒト線維芽細胞様滑膜細胞にＩＬ−２１を添加すると、サイトカインＩＦＮ−アルファおよびＴＮＦアルファ（図５Ｃ）分泌の増加が導かれることを示す。
【図５Ｄ】５Ｄは、関節炎患者から単離した、ヒト線維芽細胞様滑膜細胞にＩＬ−２１を添加すると、ＩＬ−６およびＩＬ８（図５Ｄ）分泌の増加が導かれることを示す。
【図５Ｅ】［００３９］図５Ｅは、ＣＩＡの指標によって測定した際、ＩＬ−２１が、関節炎モデルマウスにおけるコラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）を悪化させることを示す。
【図６】［００４０］図６は、移植拒絶のｉｎ ｖｉｔｒｏモデル、混合リンパ球反応において、ＩＬ−２１がＣ５７ＢＬ／６Ｊ細胞の増殖を増加させることを示す。
【技術分野】
【０００１】
優先権情報
［０００１］本出願は、米国仮特許出願第６０／４５４，３３６号、２００３年３月１４日出願に優先権を請求する。
【０００２】
技術分野
［０００２］本発明は、インターロイキン−２１（ＩＬ−２１）受容体、特にヒトＩＬ−２１受容体に結合する、抗体、例えばヒト抗体、およびその抗原結合ドメイン、並びにＩＬ−２１受容体に仲介される免疫応答を制御する際のその使用に関する。本明細書に開示する抗体は、免疫障害、例えば自己免疫障害を診断し、防止し、そして／または治療するのに有用である。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
［０００３］抗原は免疫応答を開始し、そしてリンパ球の２つの最大集団：Ｔ細胞およびＢ細胞を活性化する。抗原と遭遇すると、Ｔ細胞は増殖し、そしてエフェクター細胞に分化し、一方、Ｂ細胞は増殖し、そして抗体分泌形質細胞に分化する。リンパ球の増殖および分化は、細胞外タンパク質に制御される。これらのタンパク質のいくつかは、リンパ球および他の細胞種に分泌される小タンパク質（＜３０ｋＤａ）であり、サイトカインと呼ばれる。
【０００４】
［０００４］インターロイキン−２１（ＩＬ−２１）は、最近発見されたサイトカインであり、ＩＬ−２、ＩＬ−４およびＩＬ−１５と密接に関連する（Ｐａｒｒｉｓｈ−Ｎｏｖａｋら（２０００）Ｎａｔｕｒｅ ４０８：５７−６３）。ヒトＩＬ−２１は、約１５ｋＤａの分子量を有し、１３１アミノ酸からなり、そしてマウスＩＬ−２１と約５７％の同一性を共有する。ＩＬ−２１は、主に、活性化ＣＤ４＋ Ｔ細胞に産生される。
【０００５】
［０００５］ＩＬ−２１受容体（ＩＬ−２１Ｒ）は、膜貫通ＩＬ−２１結合タンパク質であり、クラスＩサイトカイン受容体ファミリーに属する。ヒトＩＬ−２１ＲおよびマウスＩＬ−２１Ｒはどちらも、本明細書に援用されるＷＯ０１／８５７９２に記載されている。ヒトＩＬ−２１Ｒの予測されるサイズは約５２９アミノ酸である。ＩＬ−２１Ｒは、ＩＬ−２受容体β鎖およびＩＬ−４受容体α鎖に高い配列相同性を示す（Ｏｚａｋｉら（２０００）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９７：１１４３９−１１４４４）。ヒトおよびマウスのＩＬ−２１Ｒアミノ酸配列は、約６２％の同一性を共有する。リガンド結合に際して、ＩＬ−２１Ｒは、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１３およびＩＬ−１５の受容体に共有される、共通のガンマ・サイトカイン受容体鎖（γｃ）と会合する（Ｏｚａｋｉら（２０００）上記；Ａｓａｏら（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６７：１−５）。
【０００６】
［０００６］ＩＬ−２１Ｒは、主に、Ｂ細胞、Ｔ細胞、およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞などのリンパ組織で発現される。ＩＬ−２１Ｒがリンパ系に広く分布していることから、ＩＬ−２１が免疫制御に役割を果たしていることが示唆される。実際、ｉｎ ｖｉｔｒｏ研究によって、ＩＬ−２１が、Ｂ細胞、ＣＤ４＋ Ｔ細胞およびＣＤ８＋ Ｔ細胞、並びにＮＫ細胞の機能を有意に調節することが示されてきている（Ｐａｒｒｉｓｈ−Ｎｏｖａｋら（２０００）上記；Ｋａｓａｉａｎ，Ｍ．Ｔ．ら（２００２）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．１６：５５９−５６９）。ＩＬ−２１およびＩＬ−２１Ｒは、マクロファージの活性および滑膜細胞を調節するのにも重要であることもまた、示されてきている。例えば、ＩＬ−２１は、抗ＣＤ４０抗体で刺激されたＢ細胞の増殖を増大させ、そして抗ＩｇＭおよびＩＬ−４で刺激されたＢ細胞の増殖を抑制する。ＩＬ−２１は、Ｔ細胞およびヒトＮＫ細胞の増殖および細胞溶解活性を増大させる。ＩＬ−２１は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、および滑膜細胞に分泌される、サイトカイン、ケモカイン、またはその組み合わせの発現もまた、仲介する。Ｂ細胞、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、および滑膜細胞は、ＩＬ−２１に依存しているため、ＩＬ−２１ＲへのＩＬ−２１の結合を改変すると、特定の免疫応答が影響を受ける可能性もある。こうした操作によって、免疫系障害、例えば自己免疫疾患障害、炎症性障害、アレルギー、移植拒絶、癌、免疫不全、および他の障害を治療する手段が提供される。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
発明の概要
［０００７］本出願は、ＩＬ−２１受容体（「ＩＬ−２１Ｒ」）、特にヒトＩＬ−２１受容体に、高親和性および高特異性で結合する抗体を提供する。１つの態様において、抗体は、ＩＬ−２１Ｒ活性を減少させるか、阻害するか、または該活性に拮抗する。こうした抗体を用いて、ＩＬ−２１Ｒ活性に拮抗することによって、免疫応答または免疫細胞関連障害を制御することも可能である。他の態様において、抗ＩＬ−２１Ｒ抗体を診断に用いるか、あるいはＩＬ−２１Ｒ発現細胞に療法剤または細胞傷害剤を搬送するターゲティング抗体として用いることも可能である。したがって、本発明の抗ＩＬ−２１Ｒ抗体は、免疫細胞関連病変（例えば：Ｔ細胞（ＣＤ８＋ Ｔ細胞、ＣＤ４＋ Ｔ細胞）、ＮＫ細胞、Ｂ細胞、マクロファージおよび巨核球の少なくとも１つの活性と関連する病変、移植拒絶および自己免疫障害を含む）を診断し、そして治療するのに有用である。
【０００８】
［０００８］したがって、１つの側面において、本発明は、ＩＬ−２１Ｒ、特にヒトＩＬ−２１Ｒに結合する単離抗体を特徴とする。抗ＩＬ−２１Ｒ抗体は、以下の特徴の少なくとも１つを有することも可能である：（１）モノクローナル抗体または単一特異性抗体である；（２）ヒト抗体またはｉｎ ｖｉｔｒｏ生成抗体である；（３）ＩＬ−２１Ｒ、特にヒトＩＬ−２１Ｒの細胞外ドメインに、少なくとも１０６Ｍ−１の親和性定数（Ｋａ）で結合する；および（４）ＩＬ−２１ＲへのＩＬ−２１の結合を、例えば実施例９に記載する、細胞に基づくアッセイで測定した際、ＩｇＧとして、１０ｎＭ以下のＩＣ５０で阻害するか、またはＩＬ−２１Ｒへの抗体の結合を、例えば実施例１１に記載するエピトープ結合アッセイで測定した際、１０ｎＭ以下のＩＣ５０で阻害する。
【０００９】
［０００９］本発明の抗体の限定されない具体例は、本明細書において、「ＭＵＦ」、「ＭＵＦ−生殖系列」、「ＭＵ１１」、「１８Ｇ４」、「１８Ａ５」、「１９Ｆ５」、「ＣＰ５Ｇ２」および「Ｒ１８」と称される。本発明の抗体は、ＩＬ−２１Ｒの細胞外ドメイン、例えば配列番号４３（ヒトＩＬ−２１Ｒ）のほぼアミノ酸２０〜２３５、あるいは該配列に少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれより同一である配列に、特異的に結合可能である。他の態様において、抗体は、ＩＬ−２１Ｒの断片、例えば配列番号４３に示すアミノ酸配列に隣接する少なくとも１０、２０、５０、７５、１００、１５０、または２００アミノ酸の断片、あるいは該配列に少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれより同一である配列に、特異的に結合する。他の態様において、抗体は、ＩＬ−２１Ｒの細胞外ドメインに結合し、そしてそのターゲット・エピトープへの「ＭＵＦ」、「ＭＵＦ−生殖系列」、「ＭＵ１１」、「１８Ｇ４」、「１８Ａ５」、「１９Ｆ５」、「ＣＰ５Ｇ２」または「Ｒ１８」の結合を競合的に阻害する。さらに他の態様において、抗体は、ＩＬ−２１Ｒの細胞外ドメインに結合し、そしてＩＬ−２１ＲへのＩＬ−２１の結合を競合的に阻害する。本発明の抗体による、受容体へのＩＬ−２１の結合のこうした阻害は、本明細書に提供する１以上のアッセイによって測定可能である。
【００１０】
［００１０］１つの態様において、本発明の抗体には、「ＭＵＦ」、「ＭＵＦ−生殖系列」、「ＭＵ１１」、「１８Ｇ４」、「１８Ａ５」、「１９Ｆ５」、「ＣＰ５Ｇ２」または「Ｒ１８」のｓｃＦｖ断片のＶＨドメイン、ＶＬドメイン、またはその組み合わせが含まれる。例えば、抗体には、表１Ａおよび表１Ｂに示すアミノ酸配列（ＶＨに関しては配列番号１、１９、４７、６５、８３、１０１、１１９または１３７、そしてＶＬに関しては配列番号２、２０、４８、６６、８４、１０２，１２０または１３８）、または該配列に実質的に同一な配列（例えば該配列に少なくとも約８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれより同一であるか、あるいは配列番号１、２、１９、２０、４７、４８、６５、６６、８３、８４、１０１、１０２、１１９、１２０、１３７または１３８と、１、２、５、１０または１５アミノ酸残基以下が異なる配列）を有するＶＨドメインおよび／またはＶＬドメインが含まれる。別の態様において、抗体には、表１Ａおよび表１Ｂに示すヌクレオチド配列（ＶＨに関しては配列番号１０、２８、５６、７４、９２、１１０、１２８、または１４６、そしてＶＬに関しては配列番号１１、２９、５７、７５、９３、１１１、１２９、または１４７）、または該配列に実質的に同一な配列（例えば該配列に少なくとも約８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれより同一であるか、あるいは配列番号１０、１１、２８、２９、５６、５７、７４、７５、９２、９３、１１０、１１１、１２８、１２９、１４６または１４７と、３、６、１５、３０または４５ヌクレオチド以下が異なる配列）を有する核酸にコードされるＶＨドメインおよび／またはＶＬドメインが含まれる。典型的には、ｓｃＦｖ断片中のＶＨドメインおよびＶＬドメインは、リンカー配列によって連結されている。
【００１１】
［００１１］他の態様において、抗体には、表１Ａおよび表１Ｂに示すアミノ酸配列（配列番号３、２１、４９、６７、８５、１０３、１２１、または１３９）、または該配列に実質的に同一な配列（例えば該配列に少なくとも約８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれより同一であるか、あるいは配列番号３、２１、４９、６７、８５、１０３、１２１、または１３９と、１、２、５、１０、１５、２０、３０、または３５アミノ酸残基以下が異なる配列）を有するｓｃＦｖドメインが含まれる。別の態様において、抗体には、表１Ａおよび表１Ｂに示すヌクレオチド配列（配列番号１２、３０、５８、７６、９４、１１２、１３０、または１４８）、または該配列に実質的に同一な配列（例えば該配列に少なくとも約８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれより同一であるか、あるいは配列番号１２、３０、５８、７６、９４、１１２、１３０、または１４８と、３、６、１５、３０、４５、６０、９０または１０５ヌクレオチド以下が異なる配列）を有する核酸にコードされるｓｃＦｖドメインが含まれる。さらに他の態様において、抗体は、これらのＶＨドメインおよびＶＬドメインの相補性決定領域（ＣＤＲ）を少なくとも１つ含む。例えば、抗体には、表１Ａおよび表１Ｂに示すアミノ酸配列（配列番号４、５、６、２２、２３、２４、５０、５１、５２、６８、６９、７０、８６、８７、８８、１０４、１０５、１０６、１２２、１２３、１２４、１４０、１４１、または１４２）、または該配列に実質的に相同な配列（例えば該配列に少なくとも約８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれより同一である配列）を有する、ＶＨドメインの１つ、２つ、または３つのＣＤＲ（すなわちＨ１、Ｈ２、およびＨ３）が含まれることも可能である。いくつかの態様において、配列番号４、５、６、２２、２３、２４、５０、５１、５２、６８、６９、７０、８６、８７、８８、１０４、１０５、１０６、１２２、１２３、１２４、１４０、１４１、または１４２に示す、Ｈ１、Ｈ２、またはＨ３アミノ酸配列に実質的に相同な配列には、１以上のアミノ酸置換、例えば１以上の保存的アミノ酸置換が含まれる。別の態様において、抗体には、表１Ａおよび表１Ｂに示すアミノ酸配列（配列番号７、８、９、２５、２６、２７、５３、５４、５５、７１、７２、７３、８９、９０、９１、１０７、１０８、１０９、１２５、１２６、１２７、１４３、１４４、または１４５）、または該配列に実質的に同一な配列（例えば該配列に少なくとも約８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれより同一である配列）を有する、ＶＬドメインの１つ、２つ、または３つのＣＤＲ（すなわちＬ１、Ｌ２、およびＬ３）が含まれることも可能である。いくつかの態様において、配列番号７、８、９、２５、２６、２７、５３、５４、５５、７１、７２、７３、８９、９０、９１、１０７、１０８、１０９、１２５、１２６、１２７、１４３、１４４、または１４５に示す、Ｌ１、Ｌ２、またはＬ３アミノ酸配列に実質的に相同な配列には、１以上のアミノ酸置換、例えば１以上の保存的アミノ酸置換が含まれる。
【００１２】
［００１２］さらなる態様において、抗体は、表１Ａおよび表１Ｂに示すアミノ酸配列（配列番号６、２４、５２、７０、８８、１０６、１２４、または１４２）、または該配列に実質的に同一な配列（例えば該配列に少なくとも約８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれより同一である配列）を有し、１以上のアミノ酸置換、例えば１以上の保存的アミノ酸置換を含む、ＭＵＦ、ＭＵ１１、ＭＵＦ−生殖系列、１８Ｇ４、１８Ａ５、１９Ｆ５、ＣＰ５Ｇ２、またはＲ１８のＶＨドメインのＣＤＲを含む。本発明記載の抗体は、Ｈ３などの単一ＣＤＲ、またはＨ１、Ｈ２およびＨ３の組み合わせいずれかを含む、重鎖可変領域いずれかを含むことも可能である。例えば、いくつかの態様において、抗体には、ＣＤＲ２（Ｈ２）と組み合わせてＣＤＲ（Ｈ３）が含まれることも可能である。他の態様において、抗体には、ＣＤＲ１（Ｈ１）と組み合わせてＣＤＲ３（Ｈ３）が、またはＨ１ ＣＤＲおよびＨ２ ＣＤＲが含まれることも可能である。しかし、好ましくは、抗体には、配列番号６、２４、５２、７０、８８、１０６、１２４、１４２、およびそのアミノ酸置換、例えば１以上の保存的アミノ酸置換のいずれかに示すＣＤＲ３（Ｈ３）を含む重鎖可変領域が、単独で、あるいはＨ１およびＨ２の一方または両方と組み合わせて、含まれる。
【００１３】
［００１３］同様に、いくつかの態様において、抗体は、ＭＵＦ、ＭＵ１１、ＭＵＦ−生殖系列、１８Ｇ４、１８Ａ５、１９Ｆ５、ＣＰ５Ｇ２、またはＲ１８のＶＬドメインのＣＤＲ、例えば表１Ａおよび表１Ｂに示すアミノ酸配列（配列番号９、２７、５５、７３、９１、１０９、１２７、または１４５）、または該配列に実質的に同一な配列（例えば該配列に少なくとも約８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれより同一である配列）を有し、１以上のアミノ酸置換、例えば１以上の保存的アミノ酸置換を含む、Ｌ３ ＣＤＲを含む。本発明記載の抗体は、Ｌ３などの単一ＣＤＲ、またはＬ１、Ｌ２およびＬ３の組み合わせいずれかを含む、軽鎖可変領域いずれかを含むことも可能である。例えば、いくつかの態様において、抗体には、Ｌ２と組み合わせてＬ３が含まれることも可能である。他の態様において、抗体には、Ｌ１と組み合わせてＬ３が含まれることも可能である。さらに別の態様において、抗体には、Ｌ１ ＣＤＲおよびＬ２ ＣＤＲの組み合わせが含まれることも可能である。しかし、好ましくは、抗体には、配列番号９、２７、５５、７３、９１、１０９、１２７、１４５、およびそのアミノ酸置換、例えば１以上の保存的アミノ酸置換のいずれかに示すＬ３を含む軽鎖可変領域が、単独で、あるいはＬ１およびＬ２の一方または両方と組み合わせて、含まれる。
【００１４】
［００１４］いくつかの態様において、本発明の抗体は、配列番号１、１９、４７、６５、８３、１０１、１１９または１３７に示すアミノ酸配列に少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれより同一であるＶＨドメイン、および配列番号２、２０、４８、６６、８４、１０２、１２０または１３８に示すアミノ酸配列に少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または９９％より同一であるＶＬドメインが含まれる抗体と、ＩＬ−２１Ｒ結合に関して競合する。特定の態様において、抗体は、配列番号６、２４、５２、７０、８８、１０６、１２４、１４２、およびそのアミノ酸置換、例えばその１以上の保存的アミノ酸置換から選択される少なくとも１つの重鎖ＣＤＲを含む重鎖可変領域が含まれる抗体と、ＩＬ−２１Ｒ結合に関して競合する。特定の態様において、本発明記載の抗体は、配列番号９、２７、５５、７３、９１、１０９、１２７、１４５、およびそのアミノ酸置換、例えばその１以上の保存的アミノ酸置換から選択される少なくとも１つの軽鎖ＣＤＲを含む軽鎖可変領域が含まれる抗体と、ＩＬ−２１Ｒ結合、例えばヒトＩＬ−２１Ｒ結合に関して競合する。本発明の抗体が、ＩＬ−２１Ｒ、例えばヒトＩＬ−２１Ｒへの結合に関して競合する抗体には、配列番号６、２４、５２、７０、８８、１０６、１２４、および１４２から選択される重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号９、２７、５５、７３、９１、１０９、１２７、および１４５から選択される軽鎖ＣＤＲ両方が含まれることも可能である。いくつかの態様において、本発明記載の抗体には、ＭＵＦに関しては配列番号４、５、６；ＭＵ１１に関しては配列番号２２、２３、２４；１８Ｇ４に関しては配列番号５０、５１、５２；１８Ａ５に関しては配列番号６８、６９、７０；ＭＵＦ−生殖系列に関しては配列番号８６、８７、８８；１９Ｆ５に関しては配列番号１０４、１０５、１０６；ＣＰ５Ｇ２に関しては配列番号１２２、１２３、１２４；およびＲ１８に関しては配列番号１４０、１４１、１４２から選択される１より多い重鎖ＣＤＲ、並びに／あるいはＭＵＦに関しては配列番号７、８、９；ＭＵ１１に関しては配列番号２５、２６、２７；１８Ｇ４に関しては配列番号５３、５４、５５；１８Ａ５に関しては配列番号７１、７２、７３；ＭＵＦ−生殖系列に関しては配列番号８９、９０、９１；１９Ｆ５に関しては配列番号１０７、１０８、１０９；ＣＰ５Ｇ２に関しては配列番号１２５、１２６、１２７；およびＲ１８に関しては配列番号１４３、１４４、１４５から選択される１以上の軽鎖可変領域ＣＤＲが含まれる。
【００１５】
［００１５］さらに他の態様において、本発明記載の抗体は、ＩＬ−２１、例えばヒトＩＬ−２１と、ＩＬ−２１Ｒ、例えばヒトＩＬ−２１Ｒへの結合に関して競合する。
［００１６］本発明の抗体は、全長である（例えば少なくとも１つの全長重鎖および少なくとも１つの全長軽鎖を含む）ことも可能であるし、または抗原結合断片のみ（例えばＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖまたは一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ））を含むことも可能である。抗体には：カッパ、ラムダ、アルファ、ガンマ、デルタ、イプシロンおよびミュー定常領域遺伝子のいずれかから選択される、定常領域、またはその部分が含まれることも可能である。例えば、多様なアイソタイプの重鎖定常領域が使用可能であり、これらには：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、およびＩｇＥが含まれる。軽鎖定常領域は、カッパまたはラムダから選択されることも可能である。抗体は、ＩｇＧであることも可能であるし、あるいはＩｇＧ１κまたはＩｇＧ１λであることも可能である。
【００１６】
［００１７］本明細書記載の抗ＩＬ−２１Ｒ抗体は、誘導体化されることも、または別の機能分子（例えば別のペプチドまたはタンパク質（例えばＦａｂ断片））に連結されることも可能である。例えば、本発明の抗体を、少なくとも１つの他の分子実体、例えばとりわけ、別の抗体（例えば二重特異性抗体または多重特異性抗体）、毒素、放射性同位体、細胞傷害剤または細胞分裂停止剤に（例えば化学的カップリング、遺伝子融合、非共有会合または他のものによって）機能するように連結することも可能である。
【００１７】
［００１８］別の側面において、本発明は、少なくとも１つの抗ＩＬ−２１Ｒ抗体および薬学的に許容しうるキャリアーを含有する薬剤組成物を特徴とする。薬剤組成物には、少なくとも１つの抗ＩＬ−２１Ｒ抗体および少なくとも１つの療法剤（例えば、本明細書により詳細に記載するような、サイトカインおよび増殖因子阻害剤、免疫抑制剤、抗炎症剤、代謝阻害剤、酵素阻害剤、細胞傷害剤、細胞分裂停止剤、またはその併用）の併用がさらに含まれることも可能である。抗ＩＬ−２１Ｒ抗体および療法剤の併用もまた、本発明の範囲内である。本発明の組成物および併用を用いて、ＩＬ−２１依存性免疫細胞、例えばＢ細胞、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、および滑膜細胞を制御することも可能である。
【００１８】
［００１９］別の側面において、本発明は、免疫細胞関連疾患に罹患した被験者を治療する方法を特徴とする。該方法は、免疫細胞の少なくとも１つのＩＬ−２１Ｒ活性を阻害するのに十分な量の抗ＩＬ−２１Ｒ抗体を被験者に投与し、それによって免疫細胞関連疾患を治療することを含む。
【００１９】
［００２０］抗ＩＬ−２１Ｒ抗体を、単独で、または本明細書に記載するような他の療法剤と併用して、被験者に投与することも可能である。被験者は、免疫細胞関連病変（例えば：Ｔ細胞、ＮＫ細胞、Ｂ細胞、マクロファージおよび巨核球の少なくとも１つの異常な活性と関連する病変）に罹患した哺乳動物であることも可能である。被験者はヒトであることも可能である。例えば、該方法を用いて、移植拒絶および自己免疫疾患などの免疫細胞関連障害に罹患した被験者を治療することも可能である。自己免疫疾患には、糖尿病（Ｉ型）、関節炎（関節リウマチ、若年性関節リウマチ、骨関節炎、乾癬性関節炎、および強直性脊椎炎を含む）、多発性硬化症、重症筋無力症、脈管炎、全身性エリテマトーデス、自己免疫甲状腺炎、皮膚炎（アトピー性皮膚炎および湿疹様皮膚炎を含む）、乾癬、強皮症、喘息、アレルギー、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、およびクローン病が含まれることも可能である。本発明の抗ＩＬ−２１Ｒ抗体を用いた、関節炎障害（例えば、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、骨関節炎、乾癬性関節炎、および強直性脊椎炎の少なくとも１つから選択される障害）の治療は、本発明の態様である。
【００２０】
［００２１］別の側面において、本発明は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで、試料中のＩＬ−２１Ｒの存在を検出する方法を提供する。試料には、血清、血漿、組織および生検などの生物学的試料が含まれることも可能である。本方法を用いて、本明細書に記載するような免疫細胞関連障害などの障害を診断することも可能である。該方法は：（１）試料または対照試料を抗ＩＬ−２１Ｒ抗体と接触させ、そして（２）抗ＩＬ−２１Ｒ抗体および試料または対照試料間の複合体形成を検出することを含み、ここで、対照試料に比較して、試料中の複合体形成に統計的に有意な変化があれば、試料中にＩＬ−２１Ｒが存在する指標となる。
【００２１】
［００２２］別の側面において、本発明は、ｉｎ ｖｉｖｏで、ＩＬ−２１Ｒの存在を検出する方法（例えば被験者におけるｉｎ ｖｉｖｏ画像化）を提供する。該方法を用いて、障害、例えば本明細書に記載するような免疫細胞関連障害を診断することも可能である。該方法は：（１）ＩＬ−２１Ｒへの抗体の結合を可能にする条件下で、抗ＩＬ−２１Ｒ抗体を、被験者または対照被験者に投与し、そして（２）抗体およびＩＬ−２１Ｒ間の複合体形成を検出することを含み、ここで、対照、例えば対照被験者に比較して、被験者における複合体形成に統計的に有意な変化があれば、ＩＬ−２１Ｒが存在する指標となる。
【００２２】
［００２３］本発明記載の抗体を、検出可能な物質で直接または間接的に標識して、結合抗体または非結合抗体の検出を容易にすることも可能である。適切な検出可能物質には、多様な酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質および放射性物質が含まれる。
【００２３】
［００２４］別の側面において、本発明は、ｉｎ ｖｉｖｏで、剤、例えば療法剤または細胞傷害剤を、ＩＬ−２１Ｒ発現細胞に搬送するかまたはターゲティングする方法を提供する。該方法は、ＩＬ−２１Ｒへの抗体の結合を可能にする条件下で、抗ＩＬ−２１Ｒ抗体を被験者に投与することを含む。抗体を、第二の療法部分、例えば毒素にカップリングすることも可能である。
【００２４】
［００２５］本開示は、ＭＵＦ、ＭＵＦ−生殖系列、ＭＵ１１、１８Ｇ４、１８Ａ５、１９Ｆ５、ＣＰ５Ｇ２およびＲ１８のＶＨドメインおよびＶＬドメイン由来の核酸配列を提供する。ＭＵＦ、ＭＵＦ−生殖系列、ＭＵ１１、１８Ｇ４、１８Ａ５、１９Ｆ５、ＣＰ５Ｇ２およびＲ１８由来の少なくとも１つのＣＤＲを含む核酸配列もまた提供する。本開示はまた、こうした核酸を含むベクターおよび宿主細胞も提供する。
【００２５】
［００２６］本開示は、ＭＵＦ、ＭＵＦ−生殖系列、ＭＵ１１、１８Ｇ４、１８Ａ５、１９Ｆ５、ＣＰ５Ｇ２およびＲ１８のＶＨドメインまたはＶＬドメイン由来のドメインのすべてまたは部分を含む、新規ＶＨドメインおよびＶＬドメイン、並びに機能する抗体を産生する方法をさらに提供する。
【００２６】
［００２７］本開示のさらなる側面は、部分的に本説明に示され、そして部分的に本説明から明らかであるか、または本発明を実施することによって、確認可能である。本発明は請求項に示され、そして特に指摘され、そして本開示は、請求項の範囲を限定すると見なしてはならない。以下の詳細な説明には、本発明の多様な態様の典型的な描写が含まれ、これは請求される発明を制限しない。付随する図は、本明細書の一部を構成し、そして説明とともに、態様を例示するためにのみ働き、そして本発明を制限しない。
【課題を解決するための手段】
【００２７】
詳細な説明
定義
［００４１］本発明をより容易に理解することが可能であるように、まず、特定の用語を定義する。さらなる定義を、詳細な説明全体に示す。
【００２８】
［００４２］「抗体」は、免疫グロブリンまたはその断片を指し、そして抗原結合部位を含むポリペプチドいずれかを含む。該用語は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、単一特異性抗体、多重特異性抗体、非特異的抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、一本鎖抗体、キメラ抗体、合成抗体、組換え抗体、ハイブリッド抗体、突然変異抗体、移植抗体、およびｉｎ ｖｉｔｒｏ生成抗体に限定されない。語「損なわれていない（ｉｎｔａｃｔ）」が先行しない限り、用語「抗体」には、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆｄ、ｄＡｂ、および抗原結合機能を保持する他の抗体断片などの抗体断片が含まれる。典型的には、こうした断片は、抗原結合ドメインを含むであろう。
【００２９】
［００４３］用語「抗原結合ドメイン」および「抗原結合断片」は、抗体および抗原間の特異的結合に関与するアミノ酸を含む抗体分子の一部を指す。抗体に特異的に認識されそして結合される抗原部分は、「エピトープ」と呼ばれる。抗原結合ドメインは、抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）および抗体重鎖可変領域（ＶＨ）を含むことも可能である；しかしながら、両方を含む必要はない。例えば、Ｆｄ断片は、２つのＶＨ領域を有し、そしてしばしば、損なわれていない抗原結合ドメインのいくつかの抗原結合機能を保持する。抗体の抗原結合断片の例には（１）ＶＬドメイン、ＶＨドメイン、ＣＬドメインおよびＣＨ１ドメインからなる一価断片である、Ｆａｂ断片；（２）ヒンジ領域のジスルフィド架橋に連結される２つのＦａｂ断片を含む二価断片である、Ｆ（ａｂ’）２断片；（３）２つのＶＨドメインおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；（４）抗体の単一アームのＶＬドメインおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片；（５）ＶＨドメインからなるｄＡｂ断片（Ｗａｒｄら（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４−５４６）；および（６）単離相補性決定領域（ＣＤＲ）が含まれる。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメイン、ＶＬおよびＶＨは、別個の遺伝子にコードされているが、組換え法を用い、ＶＬ領域およびＶＨ領域が対形成して一価分子を形成する単一のタンパク質鎖として作成することを可能にする合成リンカーによって、これらを連結することも可能である（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる；例えば、Ｂｉｒｄら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３−４２６；およびＨｕｓｔｏｎら（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９−５８８３を参照されたい）。当業者に知られる慣用的技術を用いてこれらの抗体断片を得て、そして損なわれていない抗体の場合と同じ方式で、有用性に関してスクリーニングする。
【００３０】
［００４４］用語「有効量」は、ＩＬ−２１Ｒ活性を制御して、臨床的症状を改善するか、または望ましい生物学的結果、例えばＴ細胞および／またはＢ細胞活性の減少、自己免疫の抑制、移植拒絶の抑制などを達成するのに十分である、投薬量または量を指す。
【００３１】
［００４５］用語「ヒト抗体」には、Ｋａｂａｔら（Ｋａｂａｔら（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版，米国保健社会福祉局，ＮＩＨ刊行物第９１−３２４２号を参照されたい）に記載されるようなヒト生殖系列免疫グロブリン配列に実質的に対応する可変領域および定常領域を有する抗体が含まれる。本発明のヒト抗体には、例えばＣＤＲ、そして特にＣＤＲ３内に、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列にコードされないアミノ酸残基（例えばｉｎ ｖｉｔｒｏのランダム突然変異誘発または部位特異的突然変異誘発によって、あるいはｉｎ ｖｉｖｏで体細胞突然変異によって導入された突然変異）が含まれることも可能である。ヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列にコードされないアミノ酸残基で置き換えられた、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、またはそれより多い位を有することも可能である。
【００３２】
［００４６］用語「ＩＬ−２１Ｒ活性」は、細胞上のＩＬ−２１ＲにＩＬ−２１が結合した結果、開始されるかまたは中断される、少なくとも１つの細胞プロセスを指す。ＩＬ−２１Ｒ活性には、限定されるわけではないが：（１）ＩＬ−２１（例えばヒトＩＬ−２１）結合；（２）シグナル伝達分子（例えばγｃおよび／またはＪＡＫ−１）との会合；（３）ＳＴＡＴタンパク質（例えばＳＴＡＴ５、ＳＴＡＴ３、またはその組み合わせ）のリン酸化の刺激；（４）ＳＴＡＴタンパク質の活性化；および（５）免疫細胞の増殖、分化、エフェクター細胞機能、細胞溶解活性、サイトカイン分泌、生存、またはその組み合わせの調節が含まれる。免疫細胞には、ＣＤ８＋ Ｔ細胞およびＣＤ４＋ Ｔ細胞、ＮＫ細胞、Ｂ細胞、マクロファージ、および巨核球が含まれることも可能である。例えば、実施例８および９に記載するように、Ｔ細胞増殖アッセイを用いて、ＩＬ−２１Ｒ活性をｉｎ ｖｉｔｒｏで測定することも可能である。例えば、実施例１２に記載するように、免疫応答または障害の進行をスコア付けすることによって、ＩＬ−２１Ｒ活性をｉｎ ｖｉｖｏで測定することもまた可能である。
【００３３】
［００４７］句、ＩＬ−２１Ｒ活性およびその同族を「阻害する」またはこれらに「拮抗する」は、抗ＩＬ−２１Ｒ抗体の結合による、ＩＬ−２１Ｒの少なくとも１つの活性の減少、阻害、または別の方式の削減を指し、ここで、減少は、同抗体の非存在下でのＩＬ−２１Ｒの活性に比較したものである。実施例７、８、９および１１に記載するように、活性を測定することも可能である。阻害または拮抗は、必ずしも、ＩＬ−２１Ｒポリペプチド生物学的活性の完全な除去を示さない。活性の減少は、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、またはそれより多いことも可能である。
【００３４】
［００４８］用語「インターロイキン−２１受容体」または「ＩＬ−２１Ｒ」は、ＮＩＬＲとしても知られる、クラスＩサイトカイン受容体を指す（ＷＯ０１／８５７９２；Ｐａｒｒｉｓｈ−Ｎｏｖａｋら（２０００）Ｎａｔｕｒｅ ４０８：５７−６３；Ｏｚａｋｉら（２０００）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９７：１１４３９−１１４４４４）。リガンド結合に際して、ＩＬ−２１Ｒは共通γサイトカイン受容体鎖（γｃ）と相互作用し（Ａｓａｏら（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６７：１−５）、そしてＳＴＡＴ１およびＳＴＡＴ３（Ａｓａｏら（２００１）上記）またはＳＴＡＴ５（Ｏｚａｋｉら（２０００）上記）のリン酸化を誘導する。ＩＬ−２１Ｒは、リンパ系組織に広い分布を示す。用語「ＩＬ−２１Ｒ」は、ＩＬ−２１に結合可能な受容体（哺乳動物のものであることも可能）を指し、そして以下の特徴の少なくとも１つを有する：（１）天然存在哺乳動物ＩＬ−２１Ｒポリペプチドまたはその断片のアミノ酸配列、例えば配列番号４３（ヒト）または配列番号４５（ネズミ）に示すアミノ酸配列またはその断片；（２）配列番号４３（ヒト）または配列番号４５（ネズミ）に示すアミノ酸配列またはその断片に、実質的に同一である、例えば少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一である、アミノ酸配列；（３）天然存在哺乳動物ＩＬ−２１Ｒヌクレオチド配列またはその断片（例えば配列番号４４（ヒト）もしくは配列番号４６（ネズミ）またはその断片）がコードする、アミノ酸配列；（４）配列番号４４（ヒト）または配列番号４６（ネズミ）に示すヌクレオチド配列またはその断片に、実質的に同一である、例えば少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一であるヌクレオチド配列がコードする、アミノ酸配列；（５）天然存在ＩＬ−２１Ｒヌクレオチド配列またはその断片、例えば配列番号４４（ヒト）もしくは配列番号４６（ネズミ）またはその断片に縮重しているヌクレオチド配列がコードする、アミノ酸配列；あるいは（６）ストリンジェントな条件下、例えば非常にストリンジェントな条件下で、前述のヌクレオチドの１つにハイブリダイズするヌクレオチド配列。ＩＬ−２１Ｒは、哺乳動物起源、例えばヒトまたはマウスのＩＬ−２１に結合することも可能である（Ｐａｒｒｉｓｈ−Ｎｏｖａｋら（２０００）上記）。
【００３５】
［００４９］本明細書において、「ｉｎ ｖｉｔｒｏ生成抗体」は、可変領域のすべてまたは一部（例えば少なくとも１つのＣＤＲ）が、非免疫細胞選択（例えばｉｎ ｖｉｔｒｏファージディスプレイ、タンパク質チップ、または抗原に結合する能力に関して候補配列を試験可能である他の方法いずれか）で生成される抗体を指す。この用語は、免疫細胞において、ゲノム再編成によって生成された配列を排除する。
【００３６】
［００５０］用語「単離」は、天然環境から実質的に遊離している分子を指す。例えば、単離タンパク質は、該タンパク質が由来する細胞または組織供給源由来の細胞成分または他のタンパク質を実質的に含まない。該用語はまた、単離タンパク質が、薬剤組成物用に十分に純粋であるか；または少なくとも７０〜８０％（ｗ／ｗ）純粋であるか；または少なくとも８０〜９０％（ｗ／ｗ）純粋であるか；または少なくとも９０〜９５％純粋であるか；または少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％（ｗ／ｗ）純粋である調製物も指す。
【００３７】
［００５１］ヒトＩＬ−２１Ｒのヌクレオチド配列および予測されるアミノ酸配列を、それぞれ、配列番号４４および配列番号４３に示す。ヒトＩＬ−２１Ｒアミノ酸配列（配列番号４３）の解析によって、以下の構造特徴が明らかになった：リーダー配列（配列番号４３のほぼアミノ酸１〜１９）；ＷＳＸＷＳモチーフ（配列番号４３のほぼアミノ酸２１３〜２１７）；膜貫通ドメイン（配列番号４３のほぼアミノ酸２３６〜２５２）；細胞外ドメイン（配列番号４３のほぼアミノ酸１〜２３５および成熟ＩＬ−２１Ｒ配列のほぼ２０〜２３５）；および配列番号４３のほぼアミノ酸２５３〜５３８の細胞内ドメイン。成熟ヒトＩＬ−２１Ｒは、配列番号４３のアミノ酸２０〜５３８の配列を有すると考えられる。
【００３８】
［００５２］用語「レパートリー」は、免疫グロブリンをコードする配列に完全にまたは部分的に由来するヌクレオチド配列の遺伝的に多様なコレクションを指す。配列は、重鎖のＶセグメント、Ｄセグメント、およびＪセグメント、並びに軽鎖のＶセグメントおよびＪセグメントのｉｎ ｖｉｖｏ再編成によって生成されることも可能である。あるいは、配列は、再編成が生じる反応、例えばｉｎ ｖｉｔｒｏ刺激で、細胞から生成されることも可能である。あるいは、配列の一部またはすべては、ＤＮＡスプライシング、ヌクレオチド合成、突然変異誘発、および他の方法によって得られることも可能であり、例えば米国特許５，５６５，３３２を参照されたい。
【００３９】
［００５３］用語「特異的結合」、「選択的結合」、および「選択的に結合する」は、生理学的条件下で、２つの分子が比較的安定な複合体を形成することを指す。選択的結合は、通常、低親和性で、中程度から高い結合能の非特異的結合と区別されるように、高親和性および低いか中程度の結合能を持つことに特徴付けられる。典型的には、親和性定数Ｋａが１０６Ｍ−１より高い場合、結合は特異的であるかまたは選択的であると見なされる。必要であれば、結合条件を変化させることによって、選択的結合に実質的に影響を及ぼすことなく、非特異的結合を減少させることも可能である。当業者が、日常的技術を用いて、抗体濃度、溶液のイオン強度、温度、結合を可能にする時間、ブロッキング剤（例えば血清アルブミン、牛乳カゼイン）の濃度などの適切な結合条件を最適にすることも可能である。実施例１〜１１に実例となる条件を示すが、一般の当業者に知られる他の条件が、本発明の範囲内に属する。
【００４０】
［００５４］本明細書において、用語「ストリンジェント」は、ハイブリダイゼーションおよび洗浄の条件を記載する。ストリンジェントな条件は、当業者に知られ、そしてＣｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，ニューヨーク（１９８９），６．３．１−６．３．６に見出されることも可能である。水性の方法および非水性の方法が該参考文献に記載され、そしてどちらを使用することも可能である。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件の一例は、６×塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）中、約４５℃でのハイブリダイゼーション、その後、０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中、約５０℃での少なくとも１回の洗浄である。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件の第二の例は、６×ＳＳＣ中、約４５℃でのハイブリダイゼーション、その後、０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中、５５℃での少なくとも１回の洗浄である。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件の別の例は、６×ＳＳＣ中、約４５℃でのハイブリダイゼーション、その後、０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中、６０℃での少なくとも１回の洗浄である。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件のさらなる例は、６×ＳＳＣ中、約４５℃でのハイブリダイゼーション、その後、０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中、６５℃での少なくとも１回の洗浄である。非常にストリンジェントな条件には、０．５Ｍリン酸ナトリウム、７％ＳＤＳ中、６５℃でのハイブリダイゼーション、その後、０．２×ＳＳＣ、１％ＳＤＳ中、６５℃での少なくとも１回の洗浄が含まれる。
【００４１】
［００５５］句「実質的に示すように」、「実質的に同一な」または「実質的に相同な」は、相当するアミノ酸またはヌクレオチド配列（例えばＣＤＲ（単数または複数）、ＶＨドメインまたはＶＬドメイン）が、示す配列に比較して、同一であるか、または実質的でない相違（保存的アミノ酸置換を通じたもの）を有するであろうことを意味する。実質的でない相違には、明記する領域の５アミノ酸配列中、１または２の置換など、重要でないアミノ酸変化が含まれる。抗体の場合、第二の抗体は、第一の抗体と同じ特異性を有し、そして第一の抗体の少なくとも５０％の親和性を有する。
【００４２】
［００５６］本明細書に開示する配列と実質的に同一であるかまたは相同である（例えば少なくとも約８５％配列同一性を有する）配列もまた、本出願の一部である。いくつかの態様において、配列同一性は、約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれより高いことも可能である。あるいは、核酸セグメントが、選択的ハイブリダイゼーション条件（例えば非常にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件）下で、該鎖の相補体にハイブリダイズする場合、実質的同一性または相同性が存在する。核酸は、全細胞中、細胞溶解物中、または部分的に精製された型もしくは実質的に純粋な型で存在することも可能である。
【００４３】
［００５７］標準的並列アルゴリズム、例えばＡｌｔｓｈｕｌら（（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．，２１５：４０３−４１０）に記載されるような基本的局所並列ツール（ＢＬＡＳＴ）；Ｎｅｅｄｌｅｍａｎら（（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，４８：４４４−４５３）のアルゴリズム；またはＭｅｙｅｒｓら（（１９８８）Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．，４：１１−１７）のアルゴリズムによって、同一性パーセントを決定することも可能である。パラメーターセットは、ギャップペナルティ１２、ギャップ伸長ペナルティ４、およびフレームシフトギャップペナルティ５を伴うＢｌｏｓｕｍ ６２スコアリングマトリックスであることも可能である。２つのアミノ酸配列またはヌクレオチド配列間の同一性パーセントはまた、Ｅ．ＭｅｙｅｒｓおよびＷ．Ｍｉｌｌｅｒ（（１９８９）ＣＡＢＩＯＳ，４：１１−１７）のアルゴリズムを用いて決定可能であり、このアルゴリズムは、ＰＡＭ１２０荷重残基表、ギャップ長ペナルティ１２およびギャップペナルティ４を用いたＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に取り込まれている。
【００４４】
［００５８］用語「療法剤」は、医学的障害を治療するか、または該障害の治療を補助する物質である。本明細書において、療法剤は、抗ＩＬ−２１Ｒ抗体とともに被験者に投与すると、療法剤または抗ＩＬ−２１Ｒ抗体単独での投与と比較して、よりよい治療を提供する物質を指す。これらの療法剤には、限定されるわけではないが、抗ＩＬ−２１Ｒ抗体のＩＬ−２１Ｒ活性を補完する方式で、免疫細胞または免疫応答を調節する物質が含まれることも可能である。療法剤の限定されない例および使用を、本明細書に記載する。
【００４５】
［００５９］本明細書において、抗ＩＬ−２１Ｒ抗体の「療法的有効量」は、被験者（例えばヒト患者）に単一用量または多数用量を投与した際、障害または再発する障害の少なくとも１つの症状を治療するか、防止するか、治癒させるか、遅延させるか、その重症度を減少させるか、改善するか、あるいはこうした治療の非存在下で予期される生存を超えて、被験者の生存を延長させるのに有効な、抗体の量を指す。
【００４６】
［００６０］用語「治療」は、療法的手段または防止的手段を指す。医学的障害を有するか、または最終的に該障害を獲得しうる被験者に、障害または再発する障害の１以上の症状を防止するか、治癒させるか、遅延させるか、その重症度を減少させるか、または改善するため、あるいはこうした治療の非存在下で予期される生存を超えて、被験者の生存を延長させるため、治療を投与することも可能である。
【００４７】
抗ＩＬ−２１Ｒ抗体
［００６１］本開示は、新規抗原結合断片を含む、新規抗ＩＬ−２１Ｒ抗体を提供する。
【００４８】
［００６２］一般的に、例えば、伝統的なハイブリドーマ技術（ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５−４９９）、組換えＤＮＡ法（米国特許４，８１６，５６７）、または抗体ライブラリーを用いたファージディスプレイ（Ｃｌａｃｋｓｏｎら（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８；Ｍａｒｋｓら（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１−５９７）を用いて、抗体を作成することも可能である。さらなる抗体産生技術には、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｈａｒｌｏｗら監修，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，１９８８を参照されたい。本発明は、いかなる特定の供給源、産生法、または抗体の他の特別な性質にも限定されない。
【００４９】
［００６３］損なわれていない抗体は、免疫グロブリン（Ｉｇ）であり、そしてこれらは典型的には、２つの軽鎖（各〜２５ｋＤａ）および２つの重鎖（各〜５０ｋＤａ）で構成される四量体グリコシル化タンパク質である。軽鎖は２つのアイソタイプ（λおよびκ）に分類され、そして重鎖は５つのアイソタイプ（Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、およびＭ）に分類される。いくつかの重鎖アイソタイプは、さらに、アイソタイプ・サブクラス、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４に分類される。
【００５０】
［００６４］異なる抗体のドメインおよび三次元構造が当該技術分野に知られる（Ｈａｒｌｏｗら、上記）。簡潔には、軽鎖は、定常ドメイン（ＣＬ）およびＮ末端可変ドメイン（ＶＬ）で構成される。重鎖は、３または４の定常ドメイン（ＣＨ）、ヒンジ領域、およびＮ末端可変ドメイン（ＶＨ）で構成される。ＶＨドメインに隣接したＣＨは、ＣＨ１と称される。ＶＨドメインおよびＶＬドメインは、フレームワーク（ＦＲ）領域と呼ばれる、保存された４つの領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、およびＦＲ４）を含有し、このフレームワーク領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変配列の３つの領域の足場を形成する。ＣＤＲ（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）は、抗原に特異的に結合する抗体アミノ酸の大部分を含有する。重鎖ＣＤＲは、Ｈ１、Ｈ２およびＨ３と称され、一方、軽鎖ＣＤＲは、Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３と称される。
【００５１】
［００６５］Ｆａｂ断片（抗原結合断片（Ｆｒａｇｍｅｎｔ ａｎｔｉｇｅｎ−ｂｉｎｄｉｎｇ））は、定常領域間のジスルフィド結合によって共有連結された、ＶＨ−ＣＨ１ドメインおよびＶＬ−ＣＬドメインからなる。ＦＶ断片は、より小さく、そして非共有的に連結されたＶＨドメインおよびＶＬドメインからなる。非共有的ドメインが解離する傾向を克服するため、一本鎖ＦＶ断片（ｓｃＦＶ）を構築することも可能である。ｓｃＦｖは、（１）ＶＬのＮ末端にＶＨのＣ末端を、または（２）ＶＨのＮ末端にＶＬのＣ末端を連結する、柔軟なポリペプチドを含有する。１５量体（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３ペプチドをリンカーとして使用可能であるが、他のリンカーが当該技術分野に知られる。
【００５２】
［００６６］可変領域をコードする多数の生殖系列遺伝子および多様な体細胞事象（ｓｏｍａｔｉｃ ｅｖｅｎｔ）を使用することによって、抗体多様性を生成する。体細胞事象には、全長ＶＨ領域を作成する、可変遺伝子セグメントおよび多様性（Ｄ）遺伝子セグメントおよび連結（Ｊ）遺伝子セグメントの組換え、並びに全長ＶＬ領域を作成する、可変遺伝子セグメントおよび連結遺伝子セグメントの組換えが含まれる。ＣＤＲ３（Ｈ３）は、抗体配列内の分子多様性の最大の供給源である。Ｈ３は、例えば、２アミノ酸残基程度に短いことも、また２６アミノ酸より大きいことも可能である。最小抗原結合断片はＦｖであり、これはＶＨドメインおよびＶＬドメインからなる。
【００５３】
［００６７］本明細書に開示するものと同一かまたは類似のＣＤＲ配列を有する抗体および組成物は、独立に生成されている可能性が低い。組み立て、そして体細胞突然変異された後、抗体遺伝子の配列は非常に多様であり、そしてこれらの多様な遺伝子は、１０１０の異なる抗体分子をコードすると概算される（Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｇｅｎｅｓ，第２版，Ｊｏｎｉｏら監修，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，カリフォルニア州サンディエゴ，１９９５）。
【００５４】
［００６８］本開示は、ヒト免疫グロブリン遺伝子ライブラリー由来の新規ＣＤＲを提供する。ＣＤＲを所持する構造は、一般的に抗体重鎖または軽鎖、あるいはその一部であり、この場合、ＣＤＲは天然存在ＣＤＲ領域に位置する。可変ドメインの構造および位置は、Ｋａｂａｔら，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第９１−３２４２号，米国保健社会福祉局刊行物，メリーランド州ベセスダ（１９９１）に記載されるように決定可能である。
【００５５】
［００６９］ｓｃＦＶ断片、ＶＨドメインおよびＶＬドメイン、並びにＣＤＲを含む、本発明の抗ＩＬ−２１Ｒ抗体の具体例のＤＮＡ配列およびアミノ酸（ＡＡ）配列を配列表に示し、そして表１Ａおよび表１Ｂに列挙する。抗体の特定の態様を、ＭＵＦ、ＭＵＦ−生殖系列、ＭＵ１１、１８Ｇ４、１８Ａ５、１９Ｆ５、ＣＰ５Ｇ２およびＲ１８と特定する。抗体のＶＨドメインおよびＶＬドメイン中のＣＤＲの位置を表２に列挙する。
【００５６】
表１Ａ：ＶＨドメインおよびＶＬドメイン、ＦＶ、並びにＣＤＲのＡＡ配列およびＤＮＡ配列
【００５７】
【表１】
【００５８】
表１Ｂ：ＶＨドメインおよびＶＬドメイン、ＦＶ、並びにＣＤＲのＡＡ配列およびＤＮＡ配列
【００５９】
【表２】
【００６０】
表２：ＡＡ配列内のＣＤＲの位置
【００６１】
【表３】
【００６２】
［００７０］本発明の抗ＩＬ−２１Ｒ抗体は、場合によって、抗体定常領域またはその部分を含むことも可能である。例えば、ＶＬドメインのＣ末端に、ＣκまたはＣλなどの軽鎖定常ドメインが付着することも可能である。同様に、ＶＨドメインまたはその一部に、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭ、並びにアイソタイプ・サブクラスいずれかなどの重鎖のすべてまたは一部が付着することも可能である。定常領域は当該技術分野に知られる（例えば、Ｋａｂａｔら，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第９１−３２４２号，米国保健社会福祉局刊行物，メリーランド州ベセスダ（１９９１）を参照されたい）。
【００６３】
［００７１］典型的な態様において、ＭＵＦは、ヒトＩｇＧ１λの重鎖および軽鎖の定常ドメインを含み、そしてＭＵ１１は、ヒトＩｇＧ１κの重鎖および軽鎖の定常ドメインを含む。これらの抗体において、ＶＨドメイン外部の重鎖の配列は同一である。λ軽鎖のＣ末端断片のＤＮＡ配列およびアミノ酸配列を、それぞれ、配列番号４０および配列番号３９に示す。κ鎖のＣ末端断片のＤＮＡ配列およびアミノ酸配列を、それぞれ、配列番号４２および配列番号４１に示す。ＩｇＧ１重鎖のＣ末端断片のＤＮＡ配列およびアミノ酸配列を、それぞれ、配列番号３８および配列番号３７に示す。
【００６４】
［００７２］特定の態様は、ＭＵＦ、ＭＵＦ−生殖系列、ＭＵ１１、１８Ｇ４、１８Ａ５、１９Ｆ５、ＣＰ５Ｇ２、またはＲ１８由来のＦＶ断片のＶＨドメイン、ＶＬドメイン、またはその組み合わせを含む。さらなる態様は、ＶＨドメインおよびＶＬドメイン由来の１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたは６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。ＣＤＲ配列を配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、または１４５に示す抗体が、本発明の範囲内に含まれる。例えば、１つの態様において、抗体は、ＭＵＦ、ＭＵＦ−生殖系列、ＭＵ１１、１８Ｇ４、１８Ａ５、１９Ｆ５、ＣＰ５Ｇ２、またはＲ１８のＶＨドメインのＣＤＲ３（Ｈ３）断片を含む。
【００６５】
［００７３］特定の態様において、ＶＨドメインおよび／またはＶＬドメインを生殖系列化する（ｇｅｒｍｌｉｎｅｄ）ことも可能であり、すなわち、慣用的分子生物学技術を用いて、これらのドメインのフレームワーク領域（ＦＲ）を突然変異させて、生殖系列細胞に産生されるものとマッチさせる。他の態様において、ＦＲ配列は、コンセンサス生殖系列配列と異なったままである。
【００６６】
［００７４］１つの態様において、本発明は、生殖系列化ＭＵＦのアミノ酸配列および核酸配列を提供する。生殖系列化ＭＵＦのＶＨドメインのアミノ酸配列を、配列番号８３および８５に示す。生殖系列化ＭＵＦのＶＬドメインのアミノ酸配列を、配列番号８４および８５に示す。生殖系列化ＭＵＦのＶＨドメインの核酸配列を、配列番号９２および９４に示し、そして生殖系列化ＶＬドメインの核酸配列を、配列番号９３および９４に示す。ＶＢＡＳＥデータベース（ＭＲＣ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、英国）に対してアミノ酸配列および核酸配列の並列を行うことによって、ＶＨドメインおよびＶＬドメインの生殖系列配列を同定することも可能である。いくつかの態様において、ＶＢＡＳＥデータベース中の最も近いマッチと一致するように、ｓｃＦｖのＦＲ領域を突然変異させ、そしてＣＤＲ部分を損なわれていないままにする。
【００６７】
［００７５］特定の態様において、本発明の抗体は、ヒトＩＬ−２１Ｒの細胞外ドメイン中のエピトープと特異的に反応する。予測される細胞外ドメインは、配列番号４３のほぼアミノ酸２０〜ほぼアミノ酸２３５の配列からなる。さらなる態様において、抗ＩＬ−２１Ｒ抗体は、ＩＬ−２１ＲへのＩＬ−２１の結合をブロッキングする。他の態様において、抗ＩＬ−２１Ｒ抗体は、マウスＩＬ−２１Ｒの細胞外ドメイン中のエピトープと特異的に反応する。ネズミＩＬ−２１Ｒの細胞外ドメインは、配列番号４５のほぼアミノ酸２０〜ほぼアミノ酸２３６の配列からなる。マウスＩＬ−２１Ｒの細胞外ドメインは、ヒトの対応物と、約６５％同一である。
【００６８】
［００７６］本発明の抗体が、他のタンパク質、例えばＩＬ−２１Ｒ細胞外ドメインのすべてまたは一部を含む組換えタンパク質と結合可能であることが意図される。
［００７７］一般の当業者は、開示される抗体を用いて、ＩＬ−２１Ｒと幾分異なるタンパク質を検出し、測定し、そして／または阻害することも可能であることを認識するであろう。例えば、これらのタンパク質は、ＩＬ−２１Ｒの相同体であることも可能である。抗ＩＬ−２１Ｒ抗体は、配列番号４３に示す配列の少なくとも１００、８０、６０、４０、または２０の隣接アミノ酸の配列いずれかに、少なくとも約６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれより同一である配列を含むタンパク質に結合すると予測される。
【００６９】
［００７８］配列相同性解析に加えて、エピトープ・マッピング（例えばＥｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，Ｍｏｒｒｉｓ監修，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，１９９６を参照されたい）、並びに二次構造および三次構造解析を行って、本明細書に開示する抗体、および抗原とのその複合体によって想定される、特定の３Ｄ構造を同定することも可能である。こうした方法には、限定されるわけではないが、Ｘ線結晶学（Ｅｎｇｓｔｏｍ（１９７４）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．，１１：７−１３）および本発明の抗体のバーチャル表示のコンピュータモデリング（Ｆｌｅｔｔｅｒｉｃｋら（１９８６）Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒａｐｈｉｃｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｏｄｅｌｉｎｇ， Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ中，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，ニューヨーク州コールドスプリングハーバー）が含まれる。
【００７０】
［００７９］本開示は、抗ＩＬ−２１Ｒ抗体を得る方法であって、表１Ａおよび表１ＢのＶＨおよび／またはＶＬ配列（単数または複数）が改変された抗体を生成することを含む、前記方法を提供する。こうした抗体を、当該技術分野に知られる技術を用いて、当業者によって得ることも可能である。例えば、アミノ酸置換、欠失、または付加を、ＦＲ領域および／またはＣＤＲ領域に導入することも可能である。ＦＲ変化は、通常、抗体の安定性および免疫原性を改善するように設計され、一方、ＣＤＲ変化は、典型的には、抗原に対する抗体親和性を増加させるように設計される。ＣＤＲ配列を改変し、そしてターゲットに対する抗体親和性を測定することによって、親和性を増加させる変化を試験することも可能である（Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，第２版，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ監修，１９９５を参照されたい）。
【００７１】
［００８０］ＣＤＲ配列が、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、または１４５に示すものと実質的には異ならない抗体が、本発明の範囲内に含まれる。典型的には、これは、類似の荷電、疎水性、または立体化学特性を有するアミノ酸とアミノ酸の置換を伴う。ＣＤＲ領域とは対照的に、ＦＲ領域では、抗体の結合特性に不都合に影響を及ぼさない限り、より劇的な置換を作成することも可能である。置換を作成して、抗体を生殖系列化するか、または抗原結合部位を安定化することもまた、可能である。
【００７２】
［００８１］保存的修飾は、こうした修飾を作成しようとする分子のものと類似の機能的特性および化学的特性を有する分子を生じるであろう。対照的に、（１）置換領域の分子主鎖の構造、例えばシートまたはらせんコンホメーションとしての構造、（２）ターゲット部位での分子の荷電または疎水性、あるいは（３）分子のサイズ、を維持することに対する影響が有意に異なる、アミノ酸配列中の置換を選択することによって、分子の機能的特性および／または化学的特性に実質的な修飾を達成することも可能である。
【００７３】
［００８２］例えば、「保存的アミノ酸置換」は、その位のアミノ酸残基の極性または荷電に、ほとんどまたはまったく影響がないような、天然アミノ酸残基の非天然アミノ酸残基での置換を伴うことも可能である。さらに、「アラニン・スキャニング突然変異誘発」に関して先に記載されている（例えばＭａｃＬｅｎｎａｎら，１９９８，Ａｃｔａ Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｓｃａｎｄ．Ｓｕｐｐｌ．６４３：５５−６７；Ｓａｓａｋｉら，１９９８，Ａｄｖ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．３５：１−２４を参照されたい）ように、ポリペプチド中の天然残基いずれかをアラニンで置換することもまた可能である。
【００７４】
［００８３］こうした置換が望ましい時点で、当業者が望ましいアミノ酸置換（保存的であれ非保存的であれ）を決定することも可能である。例えば、アミノ酸置換を用いて、分子配列の重要な残基を同定するか、あるいは本明細書に記載する分子の親和性を増加させるかまたは減少させることも可能である。典型的なアミノ酸置換を表３に示す。
【００７５】
表３：アミノ酸置換
【００７６】
【表４】
【００７７】
［００８４］特定の態様において、保存的アミノ酸置換はまた、典型的には、生物学的系における合成によるよりも、化学的ペプチド合成によって取り込まれる非天然存在アミノ酸残基も含む。
【００７８】
［００８５］１つの態様において、変異体ＶＨドメインを作成する方法は、少なくとも１つのアミノ酸を、開示するＶＨドメイン中に付加するか、該ドメインから欠失させるか、または該ドメイン中で置換するか、あるいは開示するＶＨドメインと少なくとも１つのＶＬドメインを合わせ、そしてＩＬ−２１Ｒ結合またはＩＬ−２１Ｒ活性調節に関して、変異体ＶＨドメインを試験することを含む。
【００７９】
［００８６］変異体ＶＬドメインを作成する類似の方法は、少なくとも１つのアミノ酸を、開示するＶＬドメイン中に付加するか、該ドメインから欠失させるか、または該ドメイン中で置換するか、あるいは開示されるＶＬドメインと少なくとも１つのＶＨドメインを合わせ、そしてＩＬ−２１Ｒ結合またはＩＬ−２１Ｒ活性調節に関して、変異体ＶＬドメインを試験することを含む。
【００８０】
［００８７］本開示のさらなる側面は、ＩＬ−２１Ｒに結合する抗原結合断片を調製する方法を提供する。該方法は：
（ａ）ＣＤＲ１、２または３の１以上を欠くか、あるいは置き換えられる予定のＣＤＲ１、２または３を含有する、ＶＨドメインをコードする核酸の出発レパートリーを提供し；
（ｂ）出発レパートリーのＣＤＲ１、２または３領域に、ＶＨ ＣＤＲ１、２または３に関して本明細書に実質的に示すようなアミノ酸配列をコードする核酸を挿入するか、あるいは出発レパートリーの該領域を、該核酸で置き換えて、産物レパートリーを得て；
（ｃ）産物レパートリーの核酸を発現させ；
（ｄ）ＩＬ−２１Ｒに結合する特異的抗原結合断片を選択し；そして
（ｅ）特異的抗原結合断片またはそれをコードする核酸を回収する
ことを含む。
【００８１】
［００８８］本発明のＶＬ ＣＤＲ１、２または３を、ＣＤＲ１、２または３を欠くか、あるいは置き換えられる予定のＣＤＲ１、２または３を含有するＶＬドメインをコードする核酸のレパートリーと組み合わせる類似の方法も提供する。
【００８２】
［００８９］組換えＤＮＡ方法論を用いて、開示するＣＤＲ配列を、それぞれのＣＤＲを欠くＶＨドメインまたはＶＬドメインのレパートリーに導入することも可能である（Ｍａｒｋｓら（ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（１９９２）１０：７７９−７８３））。例えば、可変ドメインの５’端に隣接するプライマーおよび第三のＦＲに対するプライマーを用いて、ＣＤＲ３を欠く可変ドメイン配列のレパートリーを生成することも可能である。このレパートリーを、開示する抗体のＣＤＲ３と組み合わせることも可能である。類似の技術を用いて、開示するＣＤＲ配列の部分を、他の抗体由来のＣＤＲ配列の部分とシャッフルして、ＩＬ−２１Ｒに結合する抗原結合断片のレパートリーを提供することも可能である。いずれのレパートリーも、ＩＬ−２１Ｒに結合する適切な抗原結合断片を選択可能であるように、ファージディスプレイ（ＷＯ ９２／０１０４７に記載される）などの宿主系で発現させることも可能である。
【００８３】
［００９０］さらなる代替法は、開示するＶＨ配列またはＶＬ配列のランダム突然変異誘発を用いて、ＩＬ−２１Ｒになお結合可能な変異体ＶＨドメインまたはＶＬドメインを生成する。変異性ＰＣＲを用いた技術がＧｒａｍら（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ． Ｕ．Ｓ．Ａ．（１９９２）８９：３５７６−３５８０）に記載される。
【００８４】
［００９１］別の方法は、開示するＶＨ配列またはＶＬ配列の直接突然変異誘発を用いる。こうした技術は、Ｂａｒｂａｓら（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．（１９９４）９１：３８０９−３８１３）およびＳｃｈｉｅｒら（Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．（１９９６）２６３：５５１−５６７）に開示される。
【００８５】
［００９２］可変ドメインの部分は、本明細書に実質的に示すような少なくとも１つのＣＤＲ領域、および場合によって、本明細書に示すようなＶＨドメインまたはＶＬドメイン由来の介在フレームワーク領域を含むであろう。該部分は、ＦＲ１のＣ末端側半分および／またはＦＲ４のＮ末端側半分を含むことも可能である。可変ドメインのＮ末端またはＣ末端のさらなる残基は、天然存在抗体に見られる残基と同じでなくてもよい。例えば、組換えＤＮＡ技術によって抗体を構築すると、しばしば、リンカーの使用に由来するＮ末端残基またはＣ末端残基が導入される。いくつかのリンカーを用いて、可変ドメインを他の可変ドメイン（例えばディアボディ（ｄｉａｂｏｄｉｅｓ））、定常ドメイン、またはタンパク質性標識に連結することも可能である。
【００８６】
［００９３］実施例に例示する態様は、ＶＨドメインおよびＶＬドメインの「マッチした」対を含むが、当業者は、代替態様が、ＶＬドメインまたはＶＨドメインのいずれか由来の単一ＣＤＲのみを含有する抗原結合断片を含むことも可能であることを認識するであろう。一本鎖の特異的抗原結合ドメインのいずれか１つを用いて、例えば、ＩＬ−２１Ｒに結合可能な、２ドメインの特異的抗原結合断片を形成可能な相補ドメインに関してスクリーニングすることも可能である。ＷＯ ９２／０１０４７に開示する、いわゆる階層的二重コンビナトリアル・アプローチを用いたファージディスプレイ・スクリーニング法によって、スクリーニングを達成することも可能である。このアプローチでは、Ｈ鎖またはＬ鎖クローンいずれかを含有する個々のコロニーを用いて、もう一方の鎖（ＬまたはＨ）をコードするクローンの完全ライブラリーを感染させ、そして生じた二本鎖の特異的抗原結合ドメインを、記載するようなファージディスプレイ技術にしたがって選択する。
【００８７】
［００９４］いくつかの代替態様において、抗ＩＬ−２１Ｒ抗体を化学的架橋または組換え法によって、タンパク質（例えばアルブミン）に連結することも可能である。開示する抗体を、米国特許第４，６４０，８３５号；第４，４９６，６８９号；第４，３０１，１４４号；第４，６７０，４１７号；第４，７９１，１９２号；または第４，１７９，３３７号に示される方式で、多様な非タンパク質性ポリマー（例えばポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、またはポリオキシアルキレン）に連結することもまた可能である。ポリマーへの共有コンジュゲート化によって、抗体を化学的に修飾し、例えば血液循環中の半減期を増加させることも可能である。典型的なポリマーおよび付着法が、米国特許第４，７６６，１０６号；第４，１７９，３３７号；第４，４９５，２８５号；および第４，６０９，５４６号に示される。
【００８８】
［００９５］開示する抗体を修飾して、グリコシル化を改変することも可能であり；すなわち少なくとも１つの炭水化物部分を欠失させるかまたは抗体に付加することも可能である。アミノ酸配列を変化させて、当該技術分野に周知のグリコシル化コンセンサス部位を欠失させるかまたは生成することによって、グリコシル化部位の欠失または付加を達成することも可能である。炭水化物部分を付加する別の手段は、抗体のアミノ酸残基への配糖体の化学的または酵素的カップリングである（ＷＯ８７／０５３３０およびＡｐｌｉｎら（１９８１）ＣＲＣ Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２２：２５９−３０６を参照されたい）。炭水化物部分の除去を、化学的または酵素的に達成することもまた可能である（Ｈａｋｉｍｕｄｄｉｎら（１９８７）Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．，２５９：５２；Ｅｄｇｅら（１９８１）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１１８：１３１；Ｔｈｏｔａｋｕｒａら（１９８７）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．，１３８：３５０を参照されたい）。
【００８９】
［００９６］抗体定常領域を改変する方法が、当該技術分野に知られる。抗体の定常部の少なくとも１つのアミノ酸残基を、異なる残基で置き換えることによって、機能改変（例えば細胞上のＦｃＲまたは補体のＣ１構成要素などのエフェクターリガンドに対する親和性改変）を有する抗体を産生することも可能である（例えば、その内容がすべて本明細書に援用されるＥＰ ３８８，１５１ Ａ１、ＵＳ ５，６２４，８２１およびＵＳ ５，６４８，２６０を参照されたい）。ネズミまたは他の種の抗体に適用した場合、類似の機能を減少させるかまたは除去するであろう、類似の種類の改変を記載することも可能である。
【００９０】
［００９７］例えば、ＦｃＲ（例えばＦｃガンマＲ１）またはＣ１ｑに対する抗体（例えばＩｇＧ、例えばヒトＩｇＧ）のＦｃ領域の親和性を改変することが可能である。少なくとも１つの明記される残基を、側鎖上に適切な官能性を有する少なくとも１つの残基で置き換えるか、あるいはグルタミン酸またはアスパラギン酸などの荷電官能基を導入するか、あるいはおそらくフェニルアラニン、チロシン、トリプトファンまたはアラニンなどの芳香族非極性残基を導入することによって、親和性を改変することも可能である（例えばＵＳ ５，６２４，８２１を参照されたい）。
【００９１】
［００９８］例えば、ＩｇＧ定常領域の残基２９７（アスパラギン）をアラニンで置き換えると、エフェクター細胞の補充が有意に阻害されるが、Ｃ１ｑに対する親和性はわずかに減少する（約３倍弱くなる）だけである（例えばＵＳ ５，６２４，８２１を参照されたい）。重鎖中の残基の番号付けは、ＥＵインデックスのものである（Ｋａｂａｔら、１９９１、上記を参照されたい）。この改変は、グリコシル化部位を破壊し、そしてＦｃ受容体結合には、炭水化物の存在が必要であると考えられる。グリコシル化部位を破壊する、この部位での他の置換はいずれも、溶解活性に同様の減少を引き起こすと考えられる。他のアミノ酸置換、例えば残基３１８（Ｇｌｕ）、３２０（Ｌｙｓ）および３２２（Ｌｙｓ）のいずれか１つのＡｌａへの変化が、ＩｇＧ抗体のＦｃ領域へのＣ１ｑの結合を消滅させることもまた知られる（例えばＵＳ ５，６２４，８２１を参照されたい）。
【００９２】
［００９９］Ｆｃ受容体との相互作用が減少した修飾抗体を産生することも可能である。例えば、ヒトＦｃガンマＲ１受容体に結合するヒトＩｇＧ３において、Ｌｅｕ２３５をＧｌｕに変化させると、受容体との相互作用が破壊されることが示されている。抗体のヒンジ連結領域中の隣接部位または近接部位で突然変異させる（例えば残基２３４、２３６または２３７をＡｌａで置換する）と、やはり、ＦｃガンマＲ１受容体への抗体親和性に影響を及ぼすことも可能である。重鎖中の残基の番号付けは、ＥＵインデックスに基づく（Ｋａｂａｔら、１９９１、上記を参照されたい）。
【００９３】
［０１００］抗体の溶解活性を改変するさらなる方法、例えばＣＨ２ドメインのＮ末端領域中の少なくとも１つのアミノ酸を改変させることによる方法が、ＭｏｒｇａｎらによるＷＯ ９４／２９３５１およびＵＳ ５，６２４，８２１に記載され、これら文献のすべての内容は、本明細書に明確に援用される。
【００９４】
［０１０１］本発明の抗体を、検出可能標識または機能標識でタグ付けすることも可能である。これらの標識には、放射標識（例えば１３１Ｉまたは９９Ｔｃ）、酵素標識（例えば西洋ワサビ（ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ）ペルオキシダーゼまたはアルカリホスファターゼ）、および他の化学部分（例えばビオチン）が含まれる。
【００９５】
［０１０２］当業者は、上述の修飾は、まったく包括的でなく、そして本開示の解説に鑑みて、当業者には多くの他の修飾が明らかであることを認識するであろう。
【００９６】
核酸、クローニングおよび発現系
［０１０３］本開示は、開示する抗体をコードする単離核酸を提供する。核酸は、ＤＮＡまたはＲＮＡを含むことも可能であり、そしてこれらは合成（完全または部分的）または組換え（完全または部分的）であることも可能である。本明細書に示すようなヌクレオチド配列への言及は、明記する配列を含むＤＮＡ分子、およびＵがＴに対して置換された、明記する配列を含むＲＮＡ分子を含む。
【００９７】
［０１０４］やはり提供するのは、本明細書に開示するような、１つ、２つ、または３つのＣＤＲの、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、またはその組み合わせのコード配列、あるいは該配列に実質的に同一な配列（例えば該配列に少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれより同一であるか、あるいはストリンジェントな条件下で、開示する配列にハイブリダイズ可能な配列）を含む核酸である。
【００９８】
［０１０５］１つの態様において、単離核酸は、配列番号４、５、６、７、８、９、２２、２３、２４、２５、２６、２７、５０、５１、５２、５３、５４、５５、６８、６９、７０、７１、７２、７３、８６、８７、８８、８９、９０、９１、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４および１４５のアミノ酸配列から選択される、少なくとも１つのＣＤＲを有する抗ＩＬ−２１Ｒ抗体の重鎖および軽鎖の可変領域をコードするヌクレオチド配列、あるいは本明細書に記載する配列と１または２アミノ酸異なるＣＤＲをコードする配列を有する。いくつかの態様において、ＣＤＲのアミノ酸配列には、配列番号４、５、６、７、８、９、２２、２３、２４、２５、２６、２７、５０、５１、５２、５３、５４、５５、６８、６９、７０、７１、７２、７３、８６、８７、８８、８９、９０、９１、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４および１４５に示す配列中に、１以上のアミノ酸の保存的アミノ酸置換が含まれる。
【００９９】
［０１０６］核酸は、軽鎖または重鎖の可変領域のみをコードすることも可能であるし、あるいは対応する可変領域に機能可能であるように連結された抗体軽鎖または重鎖の定常領域もまたコードすることも可能である。１つの態様において、軽鎖可変領域（ＶＬ）を、カッパまたはラムダの定常領域から選択される定常領域に連結する。軽鎖定常領域はまた、ヒト・カッパ型またはラムダ型であることも可能である。別の態様において、重鎖可変領域（ＶＨ）を、ＩｇＧ（例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、およびＩｇＥから選択される抗体アイソタイプの重鎖定常領域に連結する。重鎖定常領域は、ＩｇＧ（例えばＩｇＧ１）アイソタイプであることも可能である。
【０１００】
［０１０７］本発明の核酸組成物は、しばしば、修飾制限部位等を除いて（ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡまたはその混合物の）天然配列中にあるが、標準的技術にしたがって突然変異されて、遺伝子配列を提供することも可能である。コード配列では、これらの突然変異は、望ましいようにアミノ酸配列に影響を及ぼすことも可能である。特に、天然Ｖ、Ｄ、Ｊ、定常領域、スイッチおよび本明細書に記載する他のこうした配列に実質的に同一であるか、またはこれらに由来するヌクレオチド配列が意図される（ここで「由来する」は、配列が別の配列と同一であるか、または別の配列から修飾されていることを示す）。
【０１０１】
［０１０８］１つの態様において、核酸は、提供する配列のものと異なる（例えば置換、挿入、または欠失によって異なる）（例えば以下のとおり：少なくとも１ヌクレオチドであるが、１０、２０、３０、または４０ヌクレオチド未満；少なくとも１ヌクレオチドであるが、対象核酸中のヌクレオチドの１％、５％、１０％または２０％未満）。この解析に必要であるならば、配列を最大相同に並列しなければならない。欠失または挿入、あるいはミスマッチのため、「ループ」アウトした配列は、相違と見なされる。相違は、非必須残基（単数または複数）をコードするヌクレオチド（単数または複数）の箇所であることも可能であるし、また相違は保存的置換（単数または複数）であることも可能である。本開示はまた、本明細書に記載するような核酸を少なくとも１つ含む、プラスミド、ベクター、転写カセットまたは発現カセットの形の核酸構築物も提供する。
【０１０２】
［０１０９］本開示は、本明細書に記載する核酸構築物を少なくとも１つ含む宿主細胞をさらに提供する。本明細書に記載する配列を含む核酸（単数または複数）から、コードされるタンパク質（単数または複数）を作成する方法もまた、提供する。該方法は、宿主細胞が核酸からタンパク質を発現するように、適切な条件下で、宿主細胞を培養することを含む。発現および産生に続いて、適切な技術いずれかを用いて、ＶＨドメインまたはＶＬドメイン、あるいは特異的結合メンバーを単離し、そして／または精製し、次いで、適切なように使用することも可能である。
【０１０３】
［０１１０］抗原結合断片、ＶＨドメインおよび／またはＶＬドメイン、並びにコード核酸分子およびベクターを、天然環境から、実質的に純粋な型または均質な型で、あるいは核酸の場合、必要な機能を持つポリペプチドをコードする配列以外の起源の核酸または遺伝子を含まずに、または実質的に含まずに、単離し、そして／または精製することも可能である。
【０１０４】
［０１１１］多様な宿主細胞において、ポリペプチドをクローニングし、そして発現させる系が当該技術分野に知られる。抗体を産生するのに適した細胞が、例えば、Ｆｅｒｎａｎｄｅｚら（１９９９）Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ監修に記載される。簡潔には、適切な宿主細胞には、哺乳動物細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母細胞、または原核細胞、例えば大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）が含まれる。当該技術分野において、異種ポリペプチド発現に利用可能な哺乳動物細胞には、リンパ球性細胞株（例えばＮＳＯ）、ＨＥＫ２９３細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＣＯＳ細胞、ＨｅＬａ細胞、ベビーハムスター腎臓細胞、卵母細胞、およびトランスジェニック動物由来の細胞、例えば乳腺上皮細胞が含まれる。１つの態様において、ＭＵＦ抗体およびＭＵ１１抗体をＨＥＫ２９３細胞またはＣＨＯ細胞で発現させる。他の態様において、本発明の抗体をコードする核酸を、組織特異的プロモーター（例えば乳腺特異的プロモーター）の調節下に置き、そしてトランスジェニック動物において、抗体を産生する。例えば、抗体を、トランスジェニック動物、例えばトランスジェニック・ウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、ヤギまたはげっ歯類のミルクに分泌させる。プロモーター配列、ターミネーター配列、ポリアデニル化配列、エンハンサー配列、マーカー遺伝子、および他の配列を含む、適切な制御配列を含有するように、適切なベクターを選択するかまたは構築することも可能である。ベクターはまた、プラスミドまたはウイルス主鎖を含有することも可能である。詳細に関しては、Ｓａｍｂｒｏｏｋら， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，第２版，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ（１９８９）を参照されたい。ＤＮＡの操作、調製、突然変異誘発、配列決定、およびトランスフェクションを含む、ベクターとともに用いる多くの確立された技術が、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，第２版，Ａｕｓｕｂｅｌら監修，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ（１９９２）に記載される。
【０１０５】
［０１１２］本開示のさらなる側面は、宿主細胞に核酸を導入する方法を提供する。真核細胞の場合、適切なトランスフェクション技術には、リン酸カルシウム、ＤＥＡＥ−デキストラン、エレクトロポレーション、リポソーム仲介トランスフェクション、およびレトロウイルスまたは他のウイルス、例えばワクシニアまたはバキュロウイルスを用いた形質導入が含まれることも可能である。細菌細胞の場合、適切な技術には、塩化カルシウム形質転換、エレクトロポレーション、およびバクテリオファージを用いたトランスフェクションが含まれることも可能である。ＤＮＡ導入に続いて選択法（例えば薬剤耐性）を行って、核酸を含有する細胞を選択することも可能である。
【０１０６】
生物学的寄託
［０１１３］ＭＵＦ重鎖および軽鎖を含有するベクターで形質転換したＣＨＯ細胞、並びにＭＵ１１重鎖および軽鎖を含有するベクターで形質転換したＣＨＯ細胞は、それぞれ、寄託指定番号ＰＴＡ−５０３１およびＰＴＡ−５０３０の元に、アメリカン・ティシュー・カルチャー・コレクション（ＡＴＣＣ）に２００３年３月５日に寄託された。寄託施設の住所は、１０８０１ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｌｖｄ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ ２０１１０，Ｕ．Ｓ．Ａ．である。
【０１０７】
抗ＩＬ−２１Ｒ抗体の使用
［０１１４］ＩＬ−２１Ｒに対するアンタゴニストとして作用する抗ＩＬ−２１Ｒ抗体を用いて、少なくとも１つのＩＬ−２１Ｒ仲介免疫応答、例えばＴ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、または滑膜細胞の細胞増殖、サイトカイン分泌、ケモカイン分泌、および細胞溶解活性の１以上を制御することも可能である。したがって、本発明の抗体を用いて、免疫細胞または造血細胞（例えば骨髄細胞系譜、リンパ細胞系譜、または赤血球細胞系譜の細胞、あるいはその前駆体細胞）の活性（例えば増殖、分化、および／または生存）を阻害することも可能であり、そしてしたがって、該抗体を用いて、多様な免疫障害および過剰増殖障害を治療することも可能である。治療可能な免疫障害の限定されない例には、限定されるわけではないが、移植拒絶、移植片対宿主疾患、アレルギー（例えばアトピー性アレルギー）および自己免疫疾患が含まれる。自己免疫疾患には、糖尿病、関節炎性障害（関節リウマチ、若年性関節リウマチ、骨関節炎、乾癬性関節炎、および強直性脊椎炎を含む）、脊椎関節症、多発性硬化症、脳脊髄炎、重症筋無力症、全身性エリテマトーデス、皮膚エリテマトーデス、自己免疫甲状腺炎、皮膚炎（アトピー性皮膚炎および湿疹様皮膚炎を含む）、乾癬、シェーグレン症候群、ＩＢＤ（クローン病および潰瘍性大腸炎を含む）、喘息（内因性喘息およびアレルギー性喘息を含む）、強皮症および脈管炎が含まれることも可能である。
【０１０８】
［０１１５］多発性硬化症は、炎症およびミエリン鞘の欠損によって特徴付けられる中枢神経系の疾患であり、ミエリン鞘は、神経を絶縁し、そして適切な神経機能に必要な脂肪性物質である。ＩＬ−２１に依存する免疫応答から生じる炎症を、本発明の抗体および組成物で治療することも可能である。多発性硬化症の実験自己免疫脳炎（ＥＡＥ）マウスモデル（Ｔｕｏｈｙら（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９８８）１４１：１１２６−１１３０）、Ｓｏｂｅｌら（Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９８４）１３２：２３９３−２４０１）、およびＴｒａｕｇｏｔｔ（Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９８９）１１９：１１４−１２９））において、ＥＡＥ誘導前に（そして引き続き）、ＭＵ１１注射でマウスを処置すると、疾患の開始が非常に遅延される。本発明の抗体を同様に用いて、ヒトにおける多発性硬化症を治療することも可能である。
【０１０９】
［０１１６］関節炎は、関節における炎症によって特徴付けられる疾患である。関節リウマチ（ＲＡ）が関節炎の最も頻繁な型であり、結合組織、および関節を裏打ちする膜である滑膜の炎症を伴う。炎症滑膜は、しばしば関節に浸潤し、そして関節軟骨および骨を損傷する。研究によって、滑膜細胞およびマクロファージをＩＬ−２１で処理すると、これらの細胞が炎症と関連するサイトカインおよびケモカインを分泌するよう誘導されることが示されている。関節リウマチのマウスモデル、コラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）（Ｃｏｕｒｔｅｎａｙら（Ｎａｔｕｒｅ（１９８０）２８３：６６６−６２８）およびＷｉｌｌｉａｍｓら（Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９５）８４：４３３−４３９））において、ＣＩＡ誘導に続いて（そして引き続き）、マウスをＩＬ−２１で処置すると、疾患が悪化する。炎症性サイトカインおよびケモカイン分泌の増加、並びにより重要なことに、ＩＬ−２１に依存する免疫応答から生じる疾患の増加を、本発明の抗体で治療することも可能である。同様に、本発明の抗体および組成物を用いて、ヒトにおいて、ＲＡまたは他の関節炎疾患を治療することも可能である。
【０１１０】
［０１１７］移植拒絶は、ドナー由来の組織が、宿主の免疫細胞に、特異的に「攻撃」される免疫学的現象である。主な「攻撃性」細胞は、Ｔ細胞であり、Ｔ細胞のＴ細胞受容体は、ドナーのＭＨＣ分子を「外来（ｆｏｒｅｉｇｎ）」と認識する。この認識によってＴ細胞が活性化され、Ｔ細胞は増殖し、そして多様なサイトカインおよび細胞溶解性タンパク質を分泌し、最終的に、これらが移植片を破壊する。移植拒絶のｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイである混合リンパ球反応（ＭＬＲ）において、ＩＬ−２１を補充した場合、Ｔ細胞がより強く増殖する。ＭＬＲおよび移植モデルは、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，第２版，Ｃｏｌｉｇａｎら監修，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，１９９４；Ｋａｓａｉａｎら（Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（２００２）１６：５５９−５６９）；Ｆｕｌｍｅｒら（Ａｍ．Ｊ．Ａｎａｔ．（１９６３）１１３：２７３−２８５）、およびＬｅｎｓｃｈｏｗら（Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９９２）２５７：７８９−７９２）に記載されている。本発明の抗体および組成物を用いて、ＭＬＲを減少させ、そしてＩＬ−２１に依存する、ヒトにおける移植拒絶および関連疾患（例えば移植片対宿主疾患）を治療することも可能である。
【０１１１】
［０１１８］全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）は、ＤＮＡ、核抗原、およびリボ核タンパク質に対する抗体を含む自己抗体の存在に特徴付けられる、自己免疫疾患である。これらの自己抗体は、組織および臓器損傷と関連する。ＳＬＥの原因は未知であるが、自己抗体が発生することから、自己応答性Ｔ細胞またはＢ細胞の阻害が不適切であることが示唆される。本発明の抗体および組成物を用いて、自己応答性Ｔ細胞およびＢ細胞のＩＬ−２１仲介活性を阻害し、そしてＮＺＢ×ＮＺＷマウス（ＳＬＥのマウスモデル）におけるＳＬＥまたは関連疾患（Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ Ｄｅｆｅｃｔｓ ｉｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌｓ，Ｇｅｒｓｈｗｉｎら監修，Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，１９８１）あるいはヒトにおけるＳＬＥまたは関連疾患を治療することも可能である。
【０１１２】
［０１１９］本発明の抗体を用いて、ＩＬ−２１応答性細胞およびＩＬ−２１Ｒ応答性細胞の異常な活性と関連する過剰増殖障害を治療することもまた可能である。こうした細胞の例には、造血起源の腫瘍性細胞、例えば骨髄細胞系譜、リンパ細胞系譜または赤血球細胞系譜から生じる細胞、あるいはその前駆体細胞が含まれる。こうした腫瘍性障害の例には、白血病性癌、並びに血液の腫瘍、骨髄の腫瘍（例えば骨髄腫）、およびリンパ組織の腫瘍（例えばリンパ腫）が含まれる。特定の態様において、本発明は、限定されるわけではないが、急性前骨髄白血病（ＡＰＭＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）および慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）を含む、多様な白血病性癌の治療に関する（Ｖａｉｃｋｕｓ，Ｌ．（１９９１）Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．ｉｎ Ｏｎｃｏｌ．／Ｈｅｍｏｔｏｌ．１１：２６７−９７に概説される）。本発明の方法によって治療可能なリンパ系悪性腫瘍の例には、限定されるわけではないが、急性リンパ芽球白血病（Ｂ細胞系譜ＡＬＬおよびＴ細胞系譜ＡＬＬを含む、ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、前リンパ球性白血病（ＰＬＬ）、有毛細胞白血病（ＨＬＬ）、およびバルデンストレーム・マクログロブリン血症（ＷＭ）が含まれる。本発明によって治療可能な悪性リンパ腫のさらなる型には、限定されるわけではないが、非ホジキンリンパ腫、末梢Ｔ細胞リンパ腫、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫（ＡＴＬ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）、大型顆粒リンパ球性白血病（ＬＧＦ）、ホジキンリンパ腫、およびその変型が含まれる。
【０１１３】
併用療法
［０１２０］１つの態様において、少なくとも１つの抗ＩＬ−２１Ｒ抗体および少なくとも１つの療法剤を含む薬剤組成物を、併用療法で投与する。該療法は、免疫障害および炎症性障害などの病的状態または障害を治療するのに有用である。用語「併用して」は、この背景において、抗体組成物および療法剤を、同時にまたは連続していずれかで、実質的に同時期に投与することを意味する。連続して投与した場合、第二の化合物投与の開始時に、２つの化合物の第一のものは、治療部位で、なお有効濃度で検出可能であることも可能である。
【０１１４】
［０１２１］例えば、併用療法には、少なくとも１つのさらなる療法剤と同時配合され、そして／または同時投与される、少なくとも１つの抗ＩＬ−２１Ｒ抗体が含まれることも可能である。さらなる剤には、以下により詳細に記載するような、少なくとも１つのサイトカイン阻害剤、増殖因子阻害剤、免疫抑制剤、抗炎症剤、代謝阻害剤、酵素阻害剤、細胞傷害剤、および細胞分裂停止剤が含まれることも可能である。こうした併用療法は、より低い投薬量で投与された療法剤を好適に利用し、したがって多様な単剤療法に関与する、ありうる毒性または合併症を回避することも可能である。さらに、本明細書に開示する療法剤は、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒ経路と異なる経路に作用して、そしてしたがって、抗ＩＬ−２１Ｒ抗体の効果を増進し、そして／またはこうした効果と同調すると予期される。
【０１１５】
［０１２２］抗ＩＬ−２１Ｒ抗体と併用する療法剤は、自己免疫およびそれに続く炎症応答の異なる段階で干渉する剤であることも可能である。１つの態様において、本明細書に記載する少なくとも１つの抗ＩＬ−２１Ｒ抗体を、少なくとも１つのサイトカインおよび／または増殖因子アンタゴニストと同時配合し、そして／または同時投与することも可能である。アンタゴニストには、可溶性受容体、ペプチド阻害剤、小分子、リガンド融合体、抗体（サイトカインもしくは増殖因子またはその受容体あるいは他の細胞表面分子に結合する）、および「抗炎症サイトカイン」およびそのアゴニストが含まれることも可能である。
【０１１６】
［０１２３］本明細書に記載する抗ＩＬ−２１Ｒ抗体と併用可能な剤の限定されない例には、限定されるわけではないが、少なくとも１つのインターロイキン（例えばＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、およびＩＬ−２２）；サイトカイン（例えばＴＮＦα、ＬＴ、ＥＭＡＰ−ＩＩ、およびＧＭ−ＣＳＦ）；および増殖因子（例えばＦＧＦおよびＰＤＧＦ）のアンタゴニストが含まれる。該剤にはまた、限定されるわけではないが、インターロイキン、サイトカイン、および増殖因子の少なくとも１つの受容体のアンタゴニストが含まれることも可能である。抗ＩＬ−２１Ｒ抗体を、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０（Ｂ７．１）、ＣＤ８６（Ｂ７．２）、ＣＤ９０などの細胞表面分子、またはそのリガンド（例えばＣＤ１５４（ｇｐ３９、ＣＤ４０Ｌ））、あるいはＬＦＡ−１／ＩＣＡＭ−１およびＶＬＡ−４／ＶＣＡＭ−１（Ｙｕｓｕｆ−Ｍａｋａｇｉａｎｓａｒら（２００２）Ｍｅｄ Ｒｅｓ Ｒｅｖ ２２（２）：１４６−６７）に対する阻害剤（例えば抗体）と併用することもまた可能である。本明細書に記載する抗ＩＬ−２１Ｒ抗体と併用可能なアンタゴニストには、ＩＬ−１、ＩＬ−１２、ＴＮＦα、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２２、およびその受容体のアンタゴニストが含まれることも可能である。
【０１１７】
［０１２４］これらの剤の例には、ＩＬ−１２アンタゴニスト（ＩＬ−１２に結合する抗体など（例えばＷＯ ００／５６７７２、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ／ＢＡＳＦを参照されたい））；ＩＬ−１２受容体阻害剤（ＩＬ−１２受容体に対する抗体など）；および可溶性ＩＬ−１２受容体およびその断片が含まれる。ＩＬ−１５アンタゴニストの例には、ＩＬ−１５またはその受容体に対する抗体、ＩＬ−１５受容体の可溶性断片、およびＩＬ−１５結合タンパク質が含まれる。ＩＬ−１８アンタゴニストの例には、ＩＬ−１８に対する抗体、ＩＬ−１８受容体の可溶性断片、およびＩＬ−１８結合タンパク質（ＩＬ−１８ＢＰ、Ｍａｌｌｅｔら（２００１）Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．２８）が含まれる。ＩＬ−１アンタゴニストの例には、インターロイキン−１変換酵素（ＩＣＥ）阻害剤（Ｖｘ７４０など）、ＩＬ−１アンタゴニスト（例えばＩＬ−１ＲＡ（ＡＮＩＫＩＮＲＡ、ＡＭＧＥＮ））、ｓＩＬ−１ＲＩＩ（Ｉｍｍｕｎｅｘ）、および抗ＩＬ−１受容体抗体が含まれる。
【０１１８】
［０１２５］ＴＮＦアンタゴニストの例には、ＴＮＦ（例えばヒトＴＮＦα）に対する抗体、例えばＤ２Ｅ７（ヒト抗ＴＮＦα抗体、Ｕ．Ｓ．６，２５８，５６２、ＨｕｍｉｒａＴＭ、ＢＡＳＦ）；ＣＤＰ−５７１／ＣＤＰ−８７０／ＢＡＹ−１０−３３５６（ヒト化抗ＴＮＦα抗体、Ｃｅｌｌｔｅｃｈ／Ｐｈａｒｍａｃｉａ）；ｃＡ２（キメラ抗ＴＮＦα抗体、レミケードＴＭ、Ｃｅｎｔｏｃｏｒ）；および抗ＴＮＦ抗体断片（例えばＣＰＤ８７０）が含まれる。他の例には、可溶性ＴＮＦ受容体（例えばヒトｐ５５またはｐ７５）断片および誘導体、例えばｐ５５ ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ（５５ｋＤ ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質、レネルセプトＴＭ）および７５ｋｄ ＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５ｋＤ ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質、エンブレルＴＭ、Ｉｍｍｕｎｅｘ、例えばＡｒｔｈｒｉｔｉｓ ＆ Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９４）Ｖｏｌ．３７，Ｓ２９５；Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｍｅｄ．（１９９６）Ｖｏｌ．４４，２３５Ａ）が含まれる。さらなる例には、酵素アンタゴニスト（例えばＴＮＦα変換酵素阻害剤（ＴＡＣＥ）、例えばアルファ−スルホニルヒドロキサム酸誘導体（ＷＯ ０１／５５１１２）またはＮ−ヒドロキシホルムアミド阻害剤（ＧＷ ３３３３、−００５、または−０２２））およびＴＮＦ−ｂｐ／ｓ−ＴＮＦＲ（可溶性ＴＮＦ結合タンパク質、例えばＡｒｔｈｒｉｔｉｓ ＆ Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（補遺），Ｓ２８４；およびＡｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｈｅａｒｔ Ｃｉｒｃ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．（１９９５）Ｖｏｌ．２６８，ｐｐ．３７−４２を参照されたい）が含まれる。ＴＮＦアンタゴニストは、７５ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧなどの可溶性ＴＮＦ受容体（例えばヒトｐ５５またはｐ７５）断片および誘導体；およびＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤であることも可能である。
【０１１９】
［０１２６］他の態様において、本明細書に記載する抗ＩＬ−２１Ｒ抗体を、以下の少なくとも１つと併用投与することも可能である：ＩＬ−１３アンタゴニスト、例えば可溶性ＩＬ−１３受容体および／または抗ＩＬ−１３抗体；およびＩＬ−２アンタゴニスト、例えばＩＬ−２融合タンパク質（例えばＤＡＢ４８６−ＩＬ−２および／またはＤＡＢ３８９−ＩＬ−２、Ｓｅｒａｇｅｎ、例えばＡｒｔｈｒｉｔｉｓ ＆ Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９３）Ｖｏｌ．３６，１２２３を参照されたい）および抗ＩＬ−２Ｒ抗体（例えば抗Ｔａｃ（ヒト化抗体、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｓｉｇｎ Ｌａｂｓ、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９９０ Ｍａｒ １；５０（５）：１４９５−５０２を参照されたい））。別の併用には、ＩＤＥＣ−ＣＥ９．１／ＳＢ ２１０３９６（抗ＣＤ４抗体、ＩＤＥＣ／ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）などの非枯渇性抗ＣＤ４阻害剤と併用する抗ＩＬ−２１Ｒ抗体が含まれる。さらに他の併用には、ＣＤ８０（Ｂ７．１）およびＣＤ８６（Ｂ７．２）同時刺激経路アンタゴニスト（抗体、可溶性受容体、またはアンタゴニスト性リガンド）；Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド（ＰＳＧＬ）；並びに抗炎症性サイトカインおよびそのアゴニスト（例えば抗体）と併用する抗ＩＬ−２１Ｒ抗体が含まれる。抗炎症性サイトカインには、ＩＬ−４（ＤＮＡＸ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ）；ＩＬ−１０（ＳＣＨ ５２０００、組換えＩＬ−１０、ＤＮＡＸ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ）；ＩＬ−１３；およびＴＧＦが含まれることも可能である。
【０１２０】
［０１２７］他の態様において、少なくとも１つの抗ＩＬ−２１Ｒ抗体を、少なくとも１つの抗炎症性薬剤、免疫抑制剤、代謝阻害剤、および酵素阻害剤と同時配合し、そして／または同時投与することも可能である。本明細書に記載するＩＬ−２１アンタゴニストと併用可能な薬剤または阻害剤の限定されない例には、限定されるわけではないが：非ステロイド性抗炎症性薬剤（ＮＳＡＩＤ）（例えばイブプロフェン、テニダップ（例えばＡｒｔｈｒｉｔｉｓ ＆ Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（補遺），Ｓ２８０）、ナプロキセン（例えばＮｅｕｒｏ Ｒｅｐｏｒｔ（１９９６）Ｖｏｌ．７，ｐｐ．１２０９−１２１３）、メロキシカム、ピロキシカム、ジクロフェナク、およびインドメタシン）；スルファサラジン（例えばＡｒｔｈｒｉｔｉｓ ＆ Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ，９（補遺），Ｓ２８１）；コルチコステロイド（プレドニゾロンなど）；サイトカイン抑制性抗炎症性薬剤（ＣＳＡＩＤ）；およびヌクレオチド生合成の阻害剤（例えばプリン生合成の阻害剤（例えばメトトレキセートなどの葉酸アンタゴニスト）およびピリミジン生合成の阻害剤（例えばレフルノミドなどのジヒドロオロト酸デヒドロゲナーゼ（ＤＨＯＤＨ）阻害剤（例えばＡｒｔｈｒｉｔｉｓ ＆ Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９， Ｎｏ．９（補遺），Ｓ１３１；Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（１９９６）Ｖｏｌ．４５，ｐｐ．１０３−１０７を参照されたい）））の少なくとも１つが含まれる。ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストと併用する療法剤には、ＮＳＡＩＤ、ＣＳＡＩＤ、ＤＨＯＤＨ阻害剤（レフルノミドなど）、および葉酸アンタゴニスト（メトトレキセートなど）が含まれることも可能である。
【０１２１】
［０１２８］さらなる阻害剤の例には：コルチコステロイド（経口、吸入、および局所注射）；免疫抑制剤（シクロスポリンおよびタクロリムス（ＦＫ−５０６）など）；ｍＴＯＲ阻害剤（シロリムス（ラパマイシン）またはラパマイシン誘導体（例えばＣＣＩ−７７９などのエステル・ラパマイシン誘導体（Ｅｌｉｔ．Ｌ．（２００２）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｒｕｇｓ ３（８）：１２４９−５３；Ｈｕａｎｇ，Ｓ．ら（２００２）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｒｕｇｓ ３（２）：２９５−３０４）））；ＴＮＦαおよびＩＬ−１などの炎症促進性サイトカインのシグナル伝達に干渉する剤（例えばＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８またはＭＡＰキナーゼ阻害剤）；ＣＯＸ２阻害剤（例えばセレコキシブおよびその変異体（ＭＫ−９６６）、例えばＡｒｔｈｒｉｔｉｓ ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（補遺），Ｓ８１を参照されたい）；ホスホジエステル阻害剤（Ｒ９７３４０１など、例えばＡｒｔｈｒｉｔｉｓ ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（補遺），Ｓ２８２を参照されたい）；ホスホリパーゼ阻害剤（例えばトリフルオロメチルケトン類似体（Ｕ．Ｓ．６，３５０，８９２）などの細胞質ゾル・ホスホリパーゼ２（ｃＰＬＡ２）阻害剤）；血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）阻害剤；ＶＥＧＦ受容体阻害剤；および血管形成阻害剤の少なくとも１つが含まれる。抗ＩＬ−２１Ｒ抗体と併用する療法剤には：免疫抑制剤（シクロスポリンおよびタクロリムス（ＦＫ−５０６）など）；およびｍＴＯＲ阻害剤（シロリムス（ラパマイシン）またはラパマイシン誘導体（例えばＣＣＩ−７７９などのエステル・ラパマイシン誘導体）など）；ＣＯＸ２阻害剤（セレコキシブおよびその変異体など）；およびホスホリパーゼ阻害剤（細胞質ゾル・ホスホリパーゼ２（ｃＰＬＡ２）阻害剤など（例えばトリフルオロメチルケトン類似体））が含まれることも可能である。
【０１２２】
［０１２９］少なくとも１つの抗ＩＬ−２１Ｒ抗体と同時投与し、そして／または同時配合することも可能な療法剤の例には、限定されるわけではないが：ＴＮＦアンタゴニスト（抗ＴＮＦ抗体など）；ＴＮＦ受容体（例えばヒトｐ５５およびｐ７５）の可溶性断片およびその誘導体（ｐ５５ ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ（５５ｋＤ ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質、レネルセプトＴＭ）および７５ｋｄ ＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５ｋＤ ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質、エンブレルＴＭ）など）；ＴＮＦ酵素アンタゴニスト（ＴＡＣＥ阻害剤など）；ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、およびＩＬ−２２のアンタゴニスト；Ｔ細胞およびＢ細胞枯渇剤（抗ＣＤ４抗体または抗ＣＤ２２抗体など）；小分子阻害剤（メトトレキセートおよびレフルノミドなど）；シロリムス（ラパマイシン）およびその類似体（ＣＣＩ−７７９など）；Ｃｏｘ−２およびｃＰＬＡ２阻害剤；ｐ３８、ＴＰＬ−２、Ｍｋ−２およびＮＦκＢ阻害剤；ＲＡＧＥおよび可溶性ＲＡＧＥ；Ｐ−セレクチンおよびＰＳＧＬ−１阻害剤（抗体および小分子阻害剤など）；並びにエストロゲン受容体ベータ（ＥＲＢ）アゴニスト、およびＥＲＢ−ＮＦκｂアンタゴニストの少なくとも１つが含まれる。少なくとも１つの抗ＩＬ−２１Ｒ抗体と同時投与し、そして／または同時配合することも可能な療法剤には：７５ｋｄ ＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５ｋＤ ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質、エンブレルＴＭ）などのＴＮＦ受容体（例えばヒトｐ５５およびｐ７５）の可溶性断片；メトトレキセート；レフルノミド；並びにシロリムス（ラパマイシン）およびその類似体（ＣＣＩ−７７９など）の少なくとも１つが含まれる。
【０１２３】
［０１３０］本明細書に開示する抗ＩＬ−２１Ｒ抗体を、他の療法剤と併用して、以下にさらに詳細に論じるように、特定の免疫障害を治療することも可能である。
［０１３１］抗ＩＬ−２１Ｒ抗体と併用可能な、関節炎障害（例えば関節リウマチ、炎症性関節炎、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、骨関節炎および乾癬性関節炎）を治療する剤の限定されない例には：ＴＮＦアンタゴニスト（抗ＴＮＦ抗体など）；ＴＮＦ受容体（例えばヒトｐ５５およびｐ７５）の可溶性断片およびその誘導体（ｐ５５ ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ（５５ｋＤ ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質、レネルセプトＴＭ）および７５ｋｄ ＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５ｋＤ ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質、エンブレルＴＭ）など）；ＴＮＦ酵素アンタゴニスト（ＴＡＣＥ阻害剤など）；ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、およびＩＬ−２２のアンタゴニスト；Ｔ細胞およびＢ細胞枯渇剤（抗ＣＤ４抗体または抗ＣＤ２２抗体など）；小分子阻害剤（メトトレキセートおよびレフルノミドなど）；シロリムス（ラパマイシン）およびその類似体（例えばＣＣＩ−７７９）；Ｃｏｘ−２およびｃＰＬＡ２阻害剤；ＮＳＡＩＤ；ｐ３８、ＴＰＬ−２、Ｍｋ−２、およびＮＦκＢ阻害剤；ＲＡＧＥまたは可溶性ＲＡＧＥ；Ｐ−セレクチンまたはＰＳＧＬ−１阻害剤（小分子阻害剤および抗体など）；エストロゲン受容体ベータ（ＥＲＢ）アゴニスト、およびＥＲＢ−ＮＦκｂアンタゴニストの少なくとも１つが含まれる。少なくとも１つのＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストと同時投与し、そして／または同時配合することも可能な療法剤には：７５ｋｄ ＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５ｋＤ ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質、エンブレルＴＭ）などのＴＮＦ受容体（例えばヒトｐ５５およびｐ７５）の可溶性断片；メトトレキセート；レフルノミド；並びにシロリムス（ラパマイシン）またはその類似体（例えばＣＣＩ−７７９）の少なくとも１つが含まれることも可能である。
【０１２４】
［０１３２］抗ＩＬ−２１Ｒ抗体と併用可能な、多発性硬化症を治療する剤の限定されない例には、インターフェロン−β（例えばＩＦＮβ−１ａおよびＩＦＮβ−１ｂ）、コパキソン、コルチコステロイド、ＩＬ−１阻害剤、ＴＮＦ阻害剤、ＣＤ４０リガンドに対する抗体、ＣＤ８０に対する抗体、およびＩＬ−１２アンタゴニストが含まれる。
【０１２５】
［０１３３］抗ＩＬ−２１Ｒ抗体と併用可能な、炎症性腸疾患またはクローン病を治療する剤の限定されない例には、ブデノシド；上皮増殖因子；コルチコステロイド；シクロスポリン；スルファサラジン；アミノサリチル酸；６−メルカプトプリン；アザチオプリン；メトロニダゾール；リポキシゲナーゼ阻害剤；メサラミン；オルサラジン；バルサラジド；酸化防止剤；トロンボキサン阻害剤；ＩＬ−１受容体アンタゴニスト；抗ＩＬ−１モノクローナル抗体；抗ＩＬ−６モノクローナル抗体；増殖因子；エラスターゼ阻害剤；ピリジニル−イミダゾール化合物；本明細書に記載するようなＴＮＦアンタゴニスト；ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、および／またはＴＧＦβまたはそれらのアゴニスト（例えばアゴニスト抗体）；ＩＬ−１１；グルクロニドまたはデキストランにコンジュゲート化した、プレドニゾロン、デキサメタゾンまたはブデソニドのプロドラッグ；ＩＣＡＭ−１アンチセンス・ホスホロチオエート・オリゴデオキシヌクレオチド（ＩＳＩＳ２３０２；Ｉｓｉｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）；可溶性補体受容体１（ＴＰ１０；Ｔ Ｃｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．）；徐放メサラジン；メトトレキセート；血小板活性化因子（ＰＡＦ）のアンタゴニスト；シプロフロキサシン；およびリグノカインが含まれる。
【０１２６】
［０１３４］他の態様において、免疫応答、例えば移植拒絶または移植片対宿主疾患を制御するのに関与する他のターゲットに向けられる少なくとも１つの抗体と、抗ＩＬ−２１Ｒ抗体を併用することも可能である。本発明のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストと併用可能な、免疫応答を治療する剤の限定されない例には、以下が含まれる：限定されるわけではないが、ＣＤ２５（ＩＬ−２受容体α）、ＣＤ１１ａ（ＬＦＡ−１）、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ−１）、ＣＤ４、ＣＤ４５、ＣＤ２８／ＣＴＬＡ４、ＣＤ８０（Ｂ７−１）、ＣＤ８６（Ｂ７−２）を含む細胞表面分子に対する抗体、またはその組み合わせ。別の態様において、抗ＩＬ−２１Ｒ抗体を、シクロスポリンＡまたはＦＫ５０６などの一般的な免疫抑制剤の少なくとも１つと併用する。
【０１２７】
［０１３５］本発明の別の側面は、したがって、他の療法剤と抗ＩＬ−２１Ｒ抗体の併用投与を行うためのキットに関する。１つの態様において、該キットは、薬剤キャリアー中で配合された少なくとも１つの抗ＩＬ−２１Ｒ抗体、および１以上の別個の薬剤調製物中に適切であるように配合された、少なくとも１つの療法剤を含む。
【０１２８】
診断使用
［０１３６］本発明記載の抗体を用いて、生物学的試料中のＩＬ−２１Ｒの存在を検出することもまた可能である。これらのタンパク質の存在またはレベルを、医学的状態と相関させることによって、当業者は、関連する医学的状態を診断することも可能である。例えば、刺激されたＴ細胞は、ＩＬ−２１Ｒの発現を増加させ、そして関節に異常に高濃度のＩＬ−２１Ｒを発現するＴ細胞があることは、関節の炎症、および関節炎の可能性の指標となることも可能である。本発明の抗体によって診断可能な典型的な医学的状態には、多発性硬化症、関節リウマチ、および移植拒絶が含まれる。
【０１２９】
［０１３７］抗体に基づく検出法が当該技術分野に周知であり、そしてこれには、ＥＬＩＳＡ、ラジオイムノアッセイ、イムノブロット、ウェスタンブロット、フローサイトメトリー、免疫蛍光、免疫沈降、および他の関連技術が含まれる。ＩＬ−２１Ｒを検出するこれらの方法の少なくとも１つを取り込む診断キットにおいて、抗体を提供することも可能である。キットは、他の構成要素、パッケージング、使用説明書、またはタンパク質の検出およびキットの使用を補助する他の材料を含有することも可能である。
【０１３０】
［０１３８］抗体を、リガンド基（例えばビオチン）、蛍光団（ｆｌｕｏｒｏｐｈｏｒｅ）および発色団、放射性同位体、高電子密度試薬、または酵素を含む、検出可能マーカーで修飾することも可能である。酵素は活性によって検出される。例えば西洋ワサビ・ペルオキシダーゼは、テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）を、分光光度計で定量化可能な青い色素に変換する能力によって、検出される。他の適切な結合パートナーには、当該技術分野に知られる、ビオチンおよびアビジン、ＩｇＧおよびプロテインＡ、および他の受容体−リガンド対が含まれる。
【０１３１】
［０１３９］抗体を、少なくとも１つの他の分子、例えばとりわけ、別の抗体（例えば二重特異性抗体または多重特異性抗体）、毒素、放射性同位体、細胞傷害剤または細胞分裂停止剤に（例えば化学的カップリング、遺伝子融合、非共有会合または他のものによって）機能するように連結することもまた可能である。他の順列および可能性は当業者に明らかであり、そしてこれらは、本発明の範囲内の同等物と見なされる。
【０１３２】
薬剤組成物および投与法
［０１４０］本発明の特定の態様には、開示する抗体を含む組成物が含まれる。組成物は、薬剤使用および患者への投与に適していることも可能である。組成物は、本発明の抗体および薬剤賦形剤を含む。本明細書において、「薬剤賦形剤」には、薬剤投与に適合する、溶媒、分散媒体、コーティング、抗細菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤等が含まれる。薬学的活性物質のためのこれらの剤の使用が当該技術分野に周知である。組成物はまた、補助的、付加的または増進される療法機能を提供する他の活性化合物を含有することも可能である。薬剤組成物はまた、投与のための使用説明書とともに、容器、パック、またはディスペンサー中に含まれることも可能である。
【０１３３】
［０１４１］本発明の薬剤組成物を、意図する投与経路に適合するように配合する。投与を達成する方法は、一般の当業者に知られる。局所投与または経口投与可能であるか、あるいは粘膜を渡る伝播が可能でありうる組成物を生成可能であることもありうる。例えば、投与は、静脈内、腹腔内、筋内、腔内、皮下、または経皮であることも可能である。
【０１３４】
［０１４２］皮内または皮下適用に用いる溶液または懸濁物には、典型的には、以下の構成要素の少なくとも１つが含まれる：水、生理食塩水、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、または他の合成溶媒などの無菌希釈剤；ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗細菌剤；アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウムなどの酸化防止剤；エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）などのキレート剤；酢酸、クエン酸、またはリン酸などの緩衝剤；および塩化ナトリウムまたはデキストロースなどの等張化剤。酸または塩基でｐＨを調整することも可能である。こうした調製物を、アンプル、使い捨てシリンジ、または多用量バイアルに封入することも可能である。
【０１３５】
［０１４３］静脈内投与に用いる溶液または懸濁物には、生理学的食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬＴＭ（ＢＡＳＦ、ニュージャージー州パーシッパニー）、エタノール、またはポリオールなどのキャリアーが含まれる。すべての場合で、組成物は無菌であり、そして注入が容易であるように液体でなければならない。しばしば、レシチンまたは界面活性剤を用いて、適切な流動性を得ることも可能である。組成物はまた、製造および保存の条件下で安定でなければならない。抗細菌剤および抗真菌剤、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサール等を用いて、微生物の防止を達成することも可能である。多くの場合で、等張剤（糖）、多価アルコール（マンニトールおよびソルビトール）、または塩化ナトリウムを組成物に含むことも可能である。吸収を遅延させる剤、例えばモノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを添加することによって、組成物の緩慢吸収を達成することも可能である。
【０１３６】
［０１４４］経口組成物には、不活性希釈剤または食用キャリアーが含まれる。組成物をゼラチン中に封入するか、または圧縮して錠剤にすることも可能である。経口投与の目的のため、錠剤、トローチ、またはカプセルに、抗体を賦形剤とともに取り込んでそして入れることも可能である。薬学的に適合する結合剤または佐剤成分を組成物中に含むことも可能である。錠剤、トローチ、およびカプセルは（１）微結晶性セルロース、トラガカントガムまたはゼラチンなどの結合剤；（２）デンプンまたはラクトースなどの賦形剤；（３）アルギン酸、プリモゲル、またはコーンスターチなどの崩壊剤；（４）ステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤；（５）コロイド性二酸化ケイ素などの流動促進剤；または（６）甘味料もしくは香料を含有することも可能である。
【０１３７】
［０１４５］組成物を経粘膜経路または経皮経路で投与することもまた可能である。例えば、Ｆｃ部分を含む抗体は、腸、口、または肺の粘膜を横断することも可能でありうる（Ｆｃ受容体を介して）。ロゼンジ、鼻スプレー、吸入剤、または座薬の使用によって、経粘膜投与を達成することも可能である。当該技術分野に知られる軟膏（ｏｉｎｔｍｅｎｔ、ｓａｌｖｅ）、ゲル、またはクリームを含有する組成物の使用によって、経皮投与もまた達成可能である。経粘膜投与または経皮投与のため、浸透させようとするバリアに適した浸透剤を用いる。吸入投与では、噴霧剤（例えば液体またはガス）または噴霧器を含有する加圧容器またはディスペンサーからエアロゾルスプレー中で抗体を搬送する。
【０１３８】
［０１４６］特定の態様において、体からの迅速な排除から抗体を保護するキャリアーを用いて、本発明の抗体を調製する。生体分解性ポリマー（例えばエチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、ポリ乳酸）をしばしば用いる。こうした配合物を調製する方法が当業者に知られる。リポソーム懸濁物を薬学的に許容しうるキャリアーとして用いることもまた可能である。当該技術分野に知られる、確立された方法にしたがって、リポソームを調製することも可能である（米国特許第４，５２２，８１１号）。
【０１３９】
［０１４７］記載するように、療法的有効量の本発明の抗体または抗体組成物を投与する。療法的有効量は、被験者の年齢、状態、性別、および医学的状態の重症度によって多様でありうる。臨床徴候に基づいて、医師が適切な投薬量を決定することも可能である。抗体または組成物を多量（ｂｏｌｕｓ）用量で投与して、最長の時間に渡って、抗体の循環レベルを最大にすることも可能である。多量用量後、連続注入もまた使用可能である。
【０１４０】
［０１４８］本明細書において、用語「被験者」は、ヒトおよび非ヒト動物を含むよう意図される。被験者は、ＩＬ−２１Ｒを発現する細胞、例えば癌細胞または免疫細胞に特徴付けられる障害を有するヒト患者を含むことも可能である。用語、本発明の「非ヒト動物」には、すべての脊椎動物、例えば非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ウシ、ニワトリ、両生類、爬虫類などが含まれる。
【０１４１】
［０１４９］被験者に投与可能な投薬量範囲の例は：１μｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ〜１００μｇ／ｋｇ、１００μｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇ、５００μｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇから選択されることも可能である。
【０１４２】
［０１５０］調剤の投与および均一性を容易にするため、組成物を、投薬単位型で配合することが好適である可能性もある。本明細書において、投薬単位型は、患者に適した、物理的に別個の単位を指す。各投薬単位は、キャリアーと組み合わせて、療法効果を生じると計算された、あらかじめ決定された量の抗体を含有する。投薬単位は、抗体の特性および達成しようとする特定の療法効果に応じる。
【０１４３】
［０１５１］細胞培養または実験動物における標準的薬学的方法によって、例えばＬＤ５０（集団の５０％に致死的である用量）およびＥＤ５０（集団の５０％に療法的に有効である用量）を決定して、組成物の毒性および療法有効性を決定することも可能である。毒性効果および療法効果の間の用量比が療法指数であり、そしてＬＤ５０／ＥＤ５０の比として表すことも可能である。大きい療法指数を示す抗体は、より毒性でなく、そして／または療法的により有効であることも可能である。
【０１４４】
［０１５２］細胞培養アッセイおよび動物研究から得られるデータを用いて、ヒトにおける投薬量範囲を配合することも可能である。これらの化合物の投薬量は、血中に循環する抗体濃度の範囲内にあることも可能であり、これには、ほとんどまたはまったく毒性を伴わないＥＤ５０が含まれる。投薬量は、使用する調剤組成物および投与経路に応じて、この範囲内で多様であることも可能である。本発明で用いる抗体いずれに関しても、細胞培養アッセイを用いて、療法的有効用量をまず概算することも可能である。動物モデルにおいて、用量を配合して、ＩＣ５０（すなわち症状の最大の阻害の半分を達成する抗体濃度）を含む循環血漿濃度範囲を達成することも可能である。特定の投薬量いずれの効果も、適切なバイオアッセイによって監視可能である。適切なバイオアッセイの例には、ＤＮＡ複製アッセイ、転写に基づくアッセイ、ＩＬ−２１Ｒ／ＩＬ−２１結合アッセイ、および他の免疫学的アッセイが含まれる。
【０１４５】
［０１５３］以下の実施例は、いかなる点でも、本発明の範囲を限定しない。一般の当業者は、本発明の精神または範囲を改変することなく実行可能な、多くの修飾および変型を認識するであろう。こうした修飾および変型が本発明の範囲内に含まれる。本出願全体に渡って引用される、すべての参考文献、特許および刊行特許出願の全内容が、本明細書に援用される。
【実施例】
【０１４６】
実施例１：ＭＵＦおよびＭＵ１１抗ＩＬ−２１Ｒ ｓｃＦｖの選択
［０１５４］Ｖａｕｇｈａｎら（（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．，１４：３０９−３１４）に記載される１．３８×１０１０ライブラリーの拡大型である、ｓｃＦｖファージミド・ライブラリーを用いて、ヒトＩＬ−２１Ｒに特異的な抗体を選択した。マイクロタイタープレートのウェルを、可溶性ＩＬ−２１Ｒ融合タンパク質または対照融合タンパク質（リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中、５〜２０μｇ／ｍｌ）でコーティングし、そして４℃で一晩インキュベーションした。ウェルをＰＢＳ中で洗浄し、次いでＭＰＢＳ（ＰＢＳ中３％粉乳）中、３７℃で１時間ブロッキングした。ＭＰＢＳ中で１時間ブロッキングした精製ファージ（１０１２形質導入単位）を、対照融合タンパク質でコーティングしたウェルに添加し、そして１時間インキュベーションした。次いで、非結合ファージをＩＬ−２１Ｒ融合タンパク質ウェルに移し、そして１時間インキュベーションした。ウェルをＰＢＳＴ（ＰＢＳ中、０．１％ ｖ／ｖ Ｔｗｅｅｎ２０）で５回洗浄し、次いでＰＢＳで５回洗浄した。結合したファージ粒子を溶出し、そして指数関数的に増殖している大腸菌ＴＧ１を感染させるのに用いた。感染した細胞を２ＴＹブロス中、３７℃で１時間増殖させ、次いで２ＴＹＡＧプレート上にストリークし、そして３０℃で一晩インキュベーションした。翌日、１５％グリセロールを加えた１０ｍｌの２ＴＹブロス中にコロニーを移し、そして−７０℃で保存した。後に、この最初の周期の選択由来のコロニーを融解し、そしてヘルパーファージに重複感染させて、第二周期の選択のため、ｓｃＦｖ抗体を発現するファージをレスキュー（生成）した。
【０１４７】
実施例２：Ｒ１８および１９Ｆ５抗ＩＬ−２１Ｒ ｓｃＦｖの選択
［０１５５］溶液中のビオチン化ヒトＩＬ−２１Ｒ融合タンパク質（ｂｉｏ．ｈＩＬ２１Ｒ）（Ｗｙｅｔｈ、ニュージャージー州ギラルダファーム）２００ｎＭを用いて、抗ＩＬ−２１Ｒ ｓｃＦｖ（Ｒ１８）を単離した。実施例１に上述するように、精製ｓｃＦｖファージ（１０１２ｔｕ）をＭＰＢＳおよび１２５μｇ／ｍｌ対照融合タンパク質でブロッキングした。ブロッキングしたファージに、ビオチン化したＩＬ−２１Ｒ融合タンパク質を最終濃度２００ｎＭまで添加し、そして室温で１時間インキュベーションした。１ｍｌの３％ ＭＰＢＳ中、室温で９０分間ブロッキングしておいた、７５μｌのＤｙｎａｌ Ｍ２８０ストレプトアビジン磁気ビーズ（Ｄｙｎａｌ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｉｎｃ．、ニューヨーク州レークサクセス）に、ファージ／抗原を添加した。混合物を混合しながら、室温で１５分間インキュベーションした。磁気ラックを用いてビーズを捕捉し、そして１ｍｌのＰＢＳＴ中で５回、次いでＰＢＳ中で３回洗浄した。０．２Ｍリン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ７．０中の１０μｇ／ｍｌトリプシン５００μｌを用いて、結合したファージを溶出し、そして３７℃で３０分間インキュベーションした。溶出したファージを用いて、上述のように、指数関数的に増殖している大腸菌ＴＧ−１細胞１０ｍｌを感染させた。３周期の選択の後、ｓｃＦｖクローンを単離した。
【０１４８】
［０１５６］指数関数的に増殖している培養物に１ｍＭ ＩＰＴＧを添加し、そして３０℃で一晩インキュベーションすることによって、ｓｃＦｖ産生を誘導した。ヒトＩＬ−２１−ＦＬＡＧタグ付きタンパク質へのヒトＩＬ−２１Ｒ融合タンパク質の結合を阻害する能力に関して、未精製ｓｃＦｖ含有周辺質抽出物（Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓら（１９９３）ＥＭＢＯ Ｊ．，１２：７２５−７３４）をスクリーニングした。簡潔には、抗ＦＬＡＧ抗体をプラスチック上に固定し、そしてＦＬＡＧ−タグ付きヒトＩＬ−２１タンパク質を捕捉するのに用いた。ヒトＩＬ−２１Ｒ融合タンパク質に対するユーロピウム標識抗体を用いて、ヒトＩＬ−２１Ｒ融合タンパク質の結合を検出し、そしてＤＥＬＦＩＡ試薬キット（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、マサチューセッツ州ボストン）を用いて、時間分解蛍光を検出した。精製ｓｃＦｖ Ｒ１８クローンは、ＩＬ−２１−ＦＬＡＧタグ付きタンパク質へのＩＬ−２１Ｒ融合タンパク質結合の阻害に関して、７７０ｎＭのＩＣ５０値を示した。
【０１４９】
［０１５７］第三周期の選択において、５０ｎＭのヒトＩＬ−２１Ｒ融合タンパク質を用いたことを除いて、Ｒ１８に関して用いたような選択法によって、抗ＩＬ−２１Ｒクローン１９Ｆ５を単離した。
【０１５０】
実施例３：１８Ａ５および１８Ｇ４抗ＩＬ−２１Ｒ ｓｃＦｖの選択
［０１５８］ＩＬ−２１Ｒ発現細胞株および溶液中のＩＬ−２１Ｒ融合タンパク質上で選択することによって、抗ＩＬ−２１Ｒ ｓｃＦｖである１８Ａ５、１８Ｇ４を単離した。標準的組織培養法を用いて、細胞表面上にヒトＩＬ−２１Ｒを発現するトランスフェクションｈＢａｆ３Ｍｕ−１細胞（Ｗｙｅｔｈ、ニュージャージー州ギラルダファーム）を培養した。１×１０８未トランスフェクションＢａｆ３細胞で、精製ｓｃＦｖファージ（１０１２ｔｕ）を、ＭＰＢＳ中、室温で１時間ブロッキングした。
【０１５１】
［０１５９］ＭＰＢＳ中で１時間プレインキュベーションしておいた１×１０７ｈＢａｆ３Ｍｕ−１細胞に、ブロッキングしたファージを添加した。この後、混合しながら室温で１時間インキュベーションした。続いて、ｈＢａｆ３Ｍｕ−１細胞をＰＢＳＴ中で６回洗浄した。０．２Ｍリン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ７．０中、１０μｇ／ｍｌのトリプシンを用いて、特異的に結合したファージを細胞から溶出し、そして振盪しながら３７℃で３０分間インキュベーションした。溶出したファージ上清を用いて、上述のように大腸菌ＴＧ−１細胞を感染させた。
【０１５２】
［０１６０］第二周期の選択のためのｓｃＦｖ発現ファージを上述のように産生した。ＭＰＢＳおよび１２５μｇ／ｍｌ対照融合タンパク質を用いて、ファージをブロッキングした。１ｍｌのＭＰＢＳ／０．１％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ２０中で５回、その後、ＰＢＳ中で３回、ビーズを洗浄したことを除いて、Ｒ１８に関して記載するような選択法にしたがって、ビオチン化したヒトＩＬ−２１Ｒ融合タンパク質（Ｗｙｅｔｈ）を用い、溶液中で選択を行った。
【０１５３】
［０１６１］次いで、上述のように、ｈＢａｆ３Ｍｕ−１細胞を用いた選択法を用いて、ｓｃＦｖ抗体発現ファージ粒子をさらに選択した。
【０１５４】
実施例４：ＣＰ５Ｇ２抗ＩＬ−２１Ｒ ｓｃＦｖの選択
［０１６２］ヘキサヒスチジンおよびＦｌａｇアフィニティータグでタグ付けしたネズミＩＬ−２１Ｒ（ｈＩＬ２１Ｒ．Ｈｉｓ．Ｆｌａｇ）（Ｗｙｅｔｈ、ニュージャージー州ギラルダファーム）上の選択によって、クローンＣＰ５Ｇ２を単離した。３０μｌの抗Ｆｌａｇアガロースビーズを加えたＭＰＢＳで、精製ｓｃＦｖファージ（１０１２ｔｕ）を、室温で１時間ブロッキングした。ＭＰＢＳ中、最終濃度２５ｎＭのｈＩＬ−２１Ｒ．Ｈｉｓ．Ｆｌａｇを、ブロッキングしたファージに添加し、そして室温で１時間インキュベーションした。次いで、ＭＰＢＳ中、室温で２時間ブロッキングし、ＰＢＳ中で３回洗浄しておいた１００μｌの抗Ｆｌａｇアガロースビーズに、ライブラリー／抗原混合物を添加し、そして混合しながらさらに３０分間インキュベーションした。ＰＢＳＴで４回、次いでＰＢＳで４回、ビーズを洗浄し、そして上述のように、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ、ｐＨ８．０、１ｍＭ ＣａＣｌ２中の０．５μｇ／ｍｌトリプシンで、ビーズからファージを溶出した。遠心分離を用いて、ビーズを収集した。溶出したファージを用いて、上述のように、１０ｍｌの大腸菌ＴＧ−１細胞を感染させた。やはり上述のように、第二周期の可溶性選択を行った。
【０１５５】
［０１６３］１００μｌの２ＴＹＡＧを含有する９６ウェルプレートにコロニーを摘み取った。用いた緩衝液が、２０％（ｗ／ｖ）スクロース、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、１ｍＭ ＥＤＴＡであったことを除いて、上述のように未精製ｓｃＦｖ含有周辺質抽出物を産生した。９６ウェルマイクロタイタープレートアッセイにおいて、プラスチック上に固定したネズミＩＬ−２１Ｒタンパク質に対する、１６ｎｇ／ｍｌのビオチン化したネズミＩＬ−２１（ｂｉｏ．ｍＩＬ２１）の結合を阻害する能力に関して、未精製ｓｃＦｖ含有抽出物をスクリーニングした。ユーロピウム標識ストレプトアビジンを用いて、ｂｉｏ．ｍＩＬ２１の結合を検出し、そしてＤＥＬＦＩＡ試薬キット（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、マサチューセッツ州ボストン）を用いて、ＴＲＦを検出した。
【０１５６】
［１６４］精製ＣＰ５Ｇ２ ｓｃＦｖは、ＩＬ−２１ＲへのＩＬ−２１結合の阻害に関して、上記アッセイにおいて、５９０ｎＭのＩＣ５０値を示した。
【０１５７】
実施例５：ＭＵＦおよびＭＵ１１ファージクローン由来のｓｃＦｖの同定
［０１６５］ＩＬ−２１Ｒに対するｓｃＦｖの特異性を確認するため、ＩＬ−２１Ｒ融合タンパク質に対して、ファージＥＬＩＳＡを行った。第二の選択由来の個々のＴＧ１細胞コロニーを、１００μｌの２ＴＹＡＧ培地を含有するマイクロタイターウェルに移した。Ｍ１３Ｋ０７ヘルパーファージ（１０ｍｏｉ）を、指数関数的に増殖しているＴＧ１培養物に添加し、そして試料を３７℃で１時間インキュベーションした。プレートを遠心分離し、そして上清を除去し、次いで、残ったペレットを１００μｌの２ＴＹＡＧに懸濁し、そして振盪しながら３０℃で一晩インキュベーションした。翌日、プレートを遠心分離し、そしてファージ上清を新たなマイクロタイタープレートウェルに移した。ＥＬＩＳＡ前にファージをＭＰＢＳ中でブロッキングした。
【０１５８】
［０１６６］マイクロタイタープレートのウェルをＩＬ−２１Ｒ融合タンパク質または対照融合タンパク質（０．５〜２．５μｇ／ｍｌ）でコーティングし、そして４℃で一晩インキュベーションした。翌日、融合タンパク質溶液を除去し、そしてウェルをＭＰＢＳ中で１時間ブロッキングした。ウェルをＰＢＳで洗浄し、次いで、５０μｌのブロッキングしたファージを添加した。プレートを１時間インキュベーションし、次いでＰＢＳＴで３回、そしてＰＢＳで３回洗浄した。抗Ｍ１３−ＨＲＰコンジュゲート（Ｐｈａｒｍａｃｉａ、ニュージャージー州ピーパック）をウェルに添加し、そして試料を１時間インキュベーションした。ＰＢＳＴで３回、そしてＰＢＳで３回、ウェルを洗浄した。ＴＭＢをウェルに添加し、そして発色するまで試料をインキュベーションした。２５μｌの０．５Ｍ Ｈ２ＳＯ４で反応を停止した。マイクロタイタープレート読取装置を用いて、４５０ｎｍで吸光度を読み取ることによって、色シグナルを測定した。２つのファージクローンが、ＩＬ−２１Ｒ融合タンパク質に特異的結合を示し、そして対照融合タンパク質には特異的結合を示さず、そしてこれらのクローンを、本出願において、ＭＵＦおよびＭＵ１１ファージクローンと称する。
【０１５９】
［０１６７］ＭＵＦおよびＭＵ１１ファージクローンを含有する個々のＴＧ−１コロニーを、２ＴＹＡＧプレート上にストリークし、そして３０℃で一晩インキュベーションした。ｐＣＡＮＴＡＢ６ベクター特異的オリゴを用いて、ＰＣＲによってファージのＶＨ領域およびＶＬ領域を増幅し、そして配列決定した。データベース検索によって、ＭＵＦファージクローンのＶＬ領域がラムダ鎖から生じ、そしてＭＵ１１ファージクローンのＶＬ領域がカッパ鎖から生じたことが明らかになった。
【０１６０】
実施例６：ｓｃＦｖのＩｇＧへの変換
［０１６８］クローン特異的プライマーを用いたＰＣＲによって、ＭＵＦおよびＭＵ１１ファージクローン由来のＶＨ領域およびＶＬ領域を増幅した。ＰＣＲ産物を制限酵素で消化し、そしてヒトＩｇＧ１重鎖定常ドメイン（Ｔａｋａｈａｓｈｉら（１９８２）Ｃｅｌｌ ２９，６７１）またはヒト・ラムダ軽鎖定常ドメインまたはヒト・カッパ軽鎖定常ドメイン（Ｈｉｅｔｅｒら（１９８２）Ｎａｔｕｒｅ ２９４：５３６）を含有する適切なベクター（実施例２を参照されたい）にサブクローニングした。４つの構築物が、本出願において、ＭＵＦ重鎖、ＭＵＦ軽鎖、ＭＵ１１重鎖、およびＭＵ１１軽鎖と称するポリペプチドをコードする。
【０１６１】
［０１６９］ＭＵＦ重鎖、ＭＵＦ軽鎖、ＭＵ１１重鎖、およびＭＵ１１軽鎖を含有するベクターを調製し、配列決定し、そして標準的技術を用いて、ＨＥＫ２９３細胞またはＣＨＯ細胞をトランスフェクションするのに用いた。ＭＵＦ重鎖および軽鎖を発現する細胞は、ＭＵＦ抗体を産生し、該抗体は本出願において「ＭＵＦ」と称され、そしてＭＵ１１重鎖および軽鎖を発現する細胞は、ＭＵ１１抗体を産生し、該抗体は本出願において「ＭＵ１１」と称される。プロテインＡ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）を用いて、分泌された抗体を精製し、次いでＰＢＳで透析した。
【０１６２】
［０１７０］抗体の結合特異性を以下のように決定した：ＥＬＩＳＡプレートを２．５μｇ／ｍｌのＩＬ−２１Ｒ融合タンパク質で一晩コーティングした。プレートをＰＢＳＢ（ＰＢＳ＋１％ウシ血清アルブミン）で洗浄し、次いで多様な濃度のＭＵＦまたはＭＵ１１と、２５℃で２時間インキュベーションした。プレートを洗浄し、次いで、飽和量のＨＲＰコンジュゲート化ヤギ抗ヒト抗体を添加した。プレートを２５℃で１時間インキュベーションし、次いでＰＢＳＢで洗浄し、そしてＴＭＢを用いて発色させた。ＥＬＩＳＡによって得た結果の例を図１Ａに示す。
【０１６３】
［０１７１］細胞表面染色によって、抗体の結合特異性をさらに確認した。ヒトＩＬ−２１Ｒ形質導入ＴＦ−１細胞を、精製またはビオチン化ＭＵＦまたはＭＵ１１（１ｍｇ／ｍｌ）と結合させた。細胞を氷上で３０分間インキュベーションし、ＰＢＳＢで洗浄し、次いでＰＥ−コンジュゲート化抗ヒトＩｇＧ抗体またはＰＥ−コンジュゲート化アビジンを含有する溶液中に懸濁した。細胞を氷上で３０分間インキュベーションし、洗浄し、次いでＦＡＣＳｃａｎ上で解析した。結果を図１Ｂに示す。精製マウスＢ細胞をＭＵＦで同様に染色し、そして結果を図１Ｃに示す。
【０１６４】
実施例７：ＭＵＦはＩＬ−２１ＲへのＩＬ−２１の結合をブロッキングする
［０１７２］阻害アッセイを行って、抗体がＩＬ−２１ＲへのＩＬ−２１の結合をブロッキングする能力を評価した。実施例３に記載したものに以下の修飾を加えて、ＥＬＩＳＡを行った。ＭＵＦまたはＭＵ１１と２５℃で２時間インキュベーションした後、ビオチン・コンジュゲート化ＩＬ−２１（１μｇ／ｍｌ）を添加し、そして試料を２５℃で１時間インキュベーションした。洗浄後、飽和量のアビジン−ＨＲＰを添加し、そして試料を２５℃でさらに１時間インキュベーションした。ウェルをＰＢＳＢで洗浄し、そしてＴＭＢを用いて試料を発色させた。結果を図２に示す。これらの条件下で、ＭＵＦはＩＬ−２１ＲへのＩＬ−２１の結合をブロッキングし、一方、ＭＵ１１はブロッキングしなかった。これらのデータによって、ＭＵＦおよびＭＵ１１はＩＬ−２１Ｒの異なるエピトープを認識することが示唆される。
【０１６５】
実施例８：ＭＵＦおよびＭＵ１１はＴ細胞応答を減少させる
［０１７３］増殖アッセイを行って、ＩＬ−２１が仲介するＴ細胞増殖を抗体がブロッキングする能力を評価した。ヒトＣＤ４＋ Ｔ細胞（５×１０４細胞／ウェル）をＰＨＡ（植物性血球凝集素）およびヒトＩＬ−２１で刺激した。ＣＯＳ細胞培地（ＣＯＳ ＣＭ）中のＩＬ−２１を多様な濃度で異なる試料に添加した。示した試料中で、ＭＵＦ、ＭＵ１１、またはヒトＩｇＧ１アイソタイプ対照を添加した。７２時間後、３Ｈ−チミジンを添加し、そしてＬＫＢ １２０５液体シンチレーションカウンターを用いて、取り込まれた放射能によって、細胞増殖を測定した。図３Ａに示すように、ＩＬ−２１は、ＰＨＡ刺激したＴ細胞の増殖を増加させた。ＭＵＦを添加すると、約１：５００〜１：１０，０００の間の範囲で、ＩＬ−２１が増殖を増加させる能力がブロッキングされた。ＭＵＦブロッキングは、より高い用量のＩＬ−２１で克服された。ＭＵ１１またはアイソタイプ対照抗体を添加しても、ＩＬ−２１が増大させるヒトＴ細胞の増殖には、有意な影響はなかった。
【０１６６】
［０１７４］図３Ｂでは、ＰＬＰ特異的マウスＣＤ４＋ Ｔ細胞株をＰＬＰペプチド（１μｇ／ｍｌ）およびＳＪＬマウス脾臓細胞で刺激した。ＣＯＳ細胞培地中のＩＬ−２１（ＣＯＳ ＩＬ−２１）をＸ軸上に示すように力価決定した（ｔｉｔｅｒｅｄ）。「Ｃｏｓ偽」はＩＬ−２１を含まないＣＯＳ培地である。示した試料において、ＭＵ１１（１μｇ／ｍｌ）を添加した。７２時間後、３Ｈ−チミジンを添加し、そして取り込まれた放射能によって増殖を測定した。図３Ｂに示すように、ＩＬ−２１は、刺激したマウスＴ細胞の増殖を増加させた。ＭＵ１１を添加すると、ＩＬ−２１がマウスＣＤ４＋ Ｔ細胞の増殖を増加させる能力がブロッキングされた。これらのデータによって、ＭＵ１１が非競合阻害剤として作用することが示唆される：非競合阻害剤は、受容体へのＩＬ−２１結合をブロッキングしなくても、ＩＬ−２１が増殖を増加させる能力をブロッキングする。
【０１６７】
［０１７５］図３Ｃにおいて、精製ＣＤ８＋マウスＴ細胞を、抗ＣＤ３抗体でコーティングしたトシル−ビーズ（Ｄｙｎａｌ、ニューヨーク州グレートネック）で刺激した。ＣＯＳ細胞培地中のＩＬ−２１（ＣＯＳ ｓ／ｎ）をＸ軸に示すように力価決定した。「抗体なし」と示した試料を対照として用いた。示した試料において、示した濃度のＭＵ１１を添加した。７２時間後、３Ｈ−チミジンを添加し、そして取り込まれた放射能によって増殖を測定した。図３Ｃに示すように、ＭＵ１１の添加によって、用量依存方式で、ＩＬ−２１がＣＤ８＋ Ｔ細胞の増殖を増加させる能力がブロッキングされた。
【０１６８】
実施例９：ｓｃＦｖおよびＩｇＧによる細胞増殖の阻害
［０１７６］ＩＬ−２１Ｒ拮抗に関する、細胞に基づくアッセイにおいて、本発明の抗体を試験した。１つのこうした実験において、ＩＬ−２１ＲへのＩＬ−２１結合をブロッキングすることによって、細胞増殖を阻害する強度に関する、細胞に基づくアッセイ中、実施例１〜３に記載するように単離された、多様なｓｃＦｖファージクローンを試験した。ヒトＩＬ２１Ｒを発現しているｈＢａｆ３Ｍｕ−１細胞懸濁物をこうしたアッセイに用いた。ｈＢａｆ３Ｍｕ−１細胞（Ｗｙｅｔｈ）を洗浄して、増殖培地から微量のネズミＩＬ−３を除去し、そして１０％ウシ胎児血清を含み、ＩＬ−３を含まない、増殖ＲＰＭＩ Ｇｌｕｔａｍａｘ中、３７℃、５％ＣＯ２インキュベーター中で２時間インキュベーションした。約１０，０００〜２０，０００のＢａｆ３Ｍｕ−１細胞を９６ウェル組織培養プレートの各ウェルに添加し、そして次いで、ｓｃＦｖまたはＩｇＧと３７℃で３０分間インキュベーションした。次いで、５ｎｇ／ｍｌの濃度にＩＬ−２１（Ｗｙｅｔｈ、ニュージャージー州ギラルダファーム）を添加し、そして細胞を２４時間インキュベーションした。次いで、０．１ｍＣｉ／ウェルの３Ｈチミジンで細胞を３７℃で一晩、パルス標識し、そして続いて採取して、細胞増殖の指標として、チミジン取り込みを測定した。代替プロトコルにおいて、ＩＬ−２１を０．３ｎｇ／ｍｌの濃度に添加し、そして細胞を４８時間インキュベーションした。次いで、細胞を室温に温め、そして１５ｍｌ／ウェルのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ、ウィスコンシン州）を添加した。混合し、そして１０分間インキュベーションした後、細胞増殖または生存度の指標として、Ｗａｌｌａｃ ＭｉｃｒｏＢｅｔａ １４５０ ＴｒｉＬｕｘカウンター（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、マサチューセッツ州ボストン）上で、発光を測定した。
【０１６９】
［０１７７］ＩＬ−２１の対数濃度に対して、細胞増殖の測定値、例えばチミジン取り込みをプロッティングすることによって、各ｓｃＦｖのＩＣ５０値（すなわち５０％競合に必要な抗体濃度）を決定することも可能である。典型的には、ＩＣ５０がより低ければ、抗体のＩＬ−２１Ｒに対する親和性はより高い。図４に示す１つの実験において、ＭＵＦは、ｓｃＦｖとして２６８ｎＭ、そしてＩｇＧとして３ｎＭのＩＣ５０で、ＩＬ−２１に対する細胞応答を阻害した。以下の表４に要約するように、続いて、他のｓｃＦｖクローンのＩＣ５０値を、ＭＵＦのものと比較した。
【０１７０】
表４：多様なｓｃＦｖのＩＣ５０値
【０１７１】
【表５】
【０１７２】
実施例１０：ＭＵＦ生殖系列化
［０１７８］ｓｃＦｖクローンの配列データを用いて、ＶＢＡＳＥを用い、ＭＵＦクローンの重鎖および軽鎖に関して、最も近い生殖系列配列を同定した。適切な突然変異誘発プライマーとともに、標準的部位特異的突然変異誘発技術を用いて、突然変異を作成した。配列解析によって、ｓｃＦｖ配列の突然変異を確認した。ＭＵＦの生殖系列化ｓｃＦｖおよびＶＨドメインおよびＶＬドメインの配列を、それぞれ、配列番号８５、８３および８４に示す。
【０１７３】
［０１７９］続いて、本明細書に記載するアッセイにおいて、ＩＬ−２１が誘導するｈＢａｆ３Ｍｕ−１細胞株増殖をブロッキングする能力に関して、ＭＵＦ ｓｃＦｖ生殖系列化配列をアッセイした。非生殖系列化ＭＵＦ ｓｃＦｖに比較して、生殖系列化ＭＵＦがＢａｆ３Ｍｕ−１細胞増殖をブロッキングする強度には、有意な相違はなかった。
【０１７４】
実施例１１：エピトープ競合アッセイ
［０１８０］ＭＵＦと同一エピトープまたは異なるエピトープに結合するか決定するため、エピトープ競合アッセイにおいて、ｓｃＦｖクローン１８Ａ５、１９Ｆ５および１８Ｇ４をさらに試験した。多様なクローンに関して上述するように、ｓｃＦｖ含有周辺質抽出物を調製した。用いた最終緩衝液は、５０ｍＭ ＭＯＰＳ、ｐＨ７．４、０．５ｍＭ ＥＤＴＡ、０．５Ｍソルビトールであった。９６ウェルマイクロタイタープレートアッセイにおいて、プラスチック上に固定したＭｕＦ ＩｇＧタンパク質へのビオチン化ヒトＩＬ−２１Ｒ融合タンパク質（ｂｉｏ．ｈＩＬ２１Ｒ）の結合を阻害する能力に関して、ｓｃＦｖ含有未精製周辺質抽出物をスクリーニングした。ユーロピウム標識ストレプトアビジンを用いて、ｂｉｏ．ｈＩＬ２１Ｒの結合を検出し、そしてＤＥＬＦＩＡ試薬キット（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を用いて、ＴＲＦを検出した。本明細書に記載するエピトープ競合アッセイにおいて、陽性クローンを用いた。
【０１７５】
［０１８１］エピトープ競合アッセイにおいて、多様なクローンに関して得たＩＣ５０値を表５に要約する。
表５：エピトープ競合アッセイ
【０１７６】
【表６】
【０１７７】
実施例１２：関節炎の治療
［０１８２］ＩＬ−２１を用いて、関節を裏打ちする膜である滑膜由来の細胞に対する、その影響を研究した。関節手術を受けた関節リウマチ患者の滑膜組織から、ヒト線維芽細胞様滑膜細胞（ＨＦＬＳ）（Ｃｅｌｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ（カリフォルニア州サンディエゴ））を単離した。ＨＦＬＳ細胞をヒトＩＬ−２１とともに４８時間培養し、そして上清を除去し、そしてＥＬＩＳＡによって、ケモカインＭＣＰ−１（単球化学誘引タンパク質またはＣＣＬ１１）、ＧＲＯ（増殖制御発癌遺伝子またはＣＸＣリガンド１）、Ｉ−３０９（ＣＣＬ１）、ＴＡＲＣ（胸腺および活性化制御ケモカイン）、エオタキシン、ＭＤＣ（マクロファージ由来ケモカインまたはＣＣＬ２２）、ＬＹＭＰＨ（リンホタクチンまたはＸＣＬ１）、ＳＤＦ−１Ｂ（間質由来因子−１ＢまたはＣＸＣリガンド１２）、ＩＰ−１０（ＣＸＣリガンド１０）、Ｉ−ＴＡＣ（Ｔ細胞誘引ケモカインまたはＣＸＣリガンド１１）、ＭＧ（インターフェロンに誘導されるモノカインまたはＣＸＣリガンド９）、ＭＰ３Ｂ（マクロファージ阻害タンパク質）、並びにサイトカインＩＦＮ−α、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６およびＩＬ−８に関して試験した。これらのケモカインおよびサイトカインは、いくつかの活性を通じて炎症を促進することが当該技術分野に知られ、そしてＩＬ−２１に引き起こされる、関節中での濃度増加は、炎症およびＲＡを悪化させる。
【０１７８】
［０１８３］図５Ａ〜５Ｄに示すように、ＩＬ−２１は、ケモカインＭＣＰ−１、ＧＲＯ、１−３０９、ＴＡＲＣ、エオタキシン、ＭＤＣ、ＬＹＭＰＨ、ＳＤＦ−１Ｂ、ＩＰ−１０、Ｉ−ＴＡＣ、ＭＧ、ＭＰ３Ｂ、並びにサイトカインＩＦＮ−α、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、およびＩＬ−８のＨＦＬＳ分泌を何度も増加させた。ＩＬ−２１を用いて、ＣＩＡ（コラーゲン誘導関節炎）の臨床的進行を制御した。ＣＩＡは、関節リウマチを研究するための、標準的マウスおよびラットモデルであり、例えばＨｏｌｍｄａｈｌら（２００２）Ａｇｅｉｎｇ Ｒｅｓ．Ｒｅｖ．，１：１３５を参照されたい。第０日、マウスに、完全フロイントアジュバント中の１００μｇのＩＩ型コラーゲンを注射し、そして第２１日、不完全フロイントアジュバント中の１００μｇのＩＩ型コラーゲンでマウスを追加免疫した。第２１日から、マウスにまた、１μｇのＩＬ−２１を毎日注射し、そして毎日、疾患に関してマウスを調べた。臨床的徴候を以下のようにスコア付けした：０＝腫脹なし、１＝１または２の腫脹した指または腫脹した足首、２＝２より多い腫脹した指または軽度の足腫脹、３＝甚大な足腫脹、および４＝足の強直。図５Ｅに示すように、コラーゲン注射後、ＰＢＳを注射したマウスは、次第に疾患を発展させた。コラーゲン注射後、ＩＬ−２１を注射したマウスは、次第により重度の疾患を発展させた。ＩＬ−２１での処置は、特異的にＣＩＡを悪化させたため、抗ＩＬ−２１Ｒ抗体での処置は、ＣＩＡを抑制するかまたは遅延させると予期される。したがって、このモデルはＲＡの治療有効性を予測するため、抗ＩＬ−２１Ｒ抗体での治療はまた、ヒトにおけるＲＡも抑制するかまたは遅延させると予期される。
【０１７９】
実施例１３：移植拒絶の治療
［０１８４］移植拒絶は、ドナー由来の組織が、宿主の免疫細胞に特異的に「攻撃」される免疫学的現象である。ｉｎ ｖｉｔｒｏで移植拒絶を研究する１つのアッセイは、混合リンパ球反応（ＭＬＲ）である。ＭＬＲアッセイにおいて、「ドナー」細胞および「宿主」細胞をｉｎ ｖｉｔｒｏで混合し、そして宿主細胞は活性化され、そして増殖する。第３日〜第５日の間、３Ｈ−チミジンを添加し、そして液体シンチレーションカウンターを用いて、取り込まれた放射活性によって増殖を測定する。
【０１８０】
［０１８５］図６において、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス脾臓細胞（５００，０００）および照射ＢＤＦ１マウス脾臓細胞（５００，０００）を、マイクロタイタープレートウェルにおいて、２００μｌの培地中に懸濁した。３つの複製ウェルに異なる量のマウスＩＬ−２１を補った。第４日、３Ｈ−チミジンを添加し、そして第５日、ＬＫＢ １２０５液体シンチレーションカウンターを用いて、取り込まれた放射能を測定した。試料「０」および「偽」は、ＩＬ−２１を含まない培養物を示す。ＩＬ−２１の非存在下で、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ細胞は、中程度に増殖した（〜６０００ｒａｄ）。ＩＬ−２１の存在下で、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ細胞は、より強く増殖した（〜２８，０００〜３８，０００ｒａｄ）。ＩＬ−２１での処理によって、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ細胞（「宿主」またはアロ反応性細胞）の増殖が増大し、これによって、ＩＬ−２１がＭＬＲを仲介することが示唆される。したがって、抗ＩＬ−２１Ｒ抗体を添加するかまたは該抗体で処置すると、ＭＬＲおよび移植拒絶および関連疾患（例えば移植片対宿主疾患）が抑制されるかまたは遅延されると予期される。
【０１８１】
［０１８６］本明細書は、本明細書内に引用される参考文献の解説を踏まえると、最も完全に理解され、こうした文献はすべて、完全に本明細書に援用される。本明細書内の態様は、本発明の態様の例示を提供し、そして本発明の範囲を限定すると見なしてはならない。当業者は、請求される発明に、多くの他の態様が含まれ、そして本明細書および実施例は例示にすぎないと見なされ、本発明の真の範囲および精神は、請求項に示されると意図されることを認識する。
【図面の簡単な説明】
【０１８２】
【図１Ａ】［００２８］図１Ａは、ＭＵ１１がヒトＩＬ−２１Ｒに特異的に結合することを示すＥＬＩＳＡの結果を示す。
【図１Ｂ】［００２９］図１Ｂは、ＭＵＦおよびＭＵ１１がどちらも、ヒトＩＬ−２１Ｒの表面に結合することを示す、ＦＡＣＳによって解析した結合アッセイの結果を示す。
【図１Ｃ】［００３０］図１Ｃは、ＭＵＦがマウスＢ細胞上のＩＬ−２１Ｒに結合することを示す、ＦＡＣＳによって解析した結合アッセイの結果を示す。
【図２】［００３１］図２は、ＭＵＦが、ヒトＩＬ−２１ＲへのヒトＩＬ−２１の結合を阻害することを示す、ＥＬＩＳＡの結果を示す。
【図３Ａ】［００３２］図３Ａは、ＭＵＦを添加すると、ＩＬ−２１がヒトＣＤ４＋ Ｔ細胞の増殖を増加させる能力がブロッキングされることを示す、細胞増殖アッセイの結果を示す。
【図３Ｂ】［００３３］図３Ｂは、ＣＯＳ細胞培地において、ＩＬ−２１がマウスＣＤ４＋ Ｔ細胞の増殖を増加させる能力を、ＭＵ１１がブロッキングすることを示す、細胞増殖アッセイの結果を示す。
【図３Ｃ】［００３４］図３Ｃは、ＣＯＳ細胞培地において、ＩＬ−２１がマウスＣＤ８＋ Ｔ細胞の増殖を増加させる能力を、ＭＵ１１が用量依存方式でブロッキングすることを示す、細胞増殖アッセイの結果を示す。
【図４】［００３５］図４は、ＩＬ−２１Ｒを発現するＢａｆ３Ｍｕ−１細胞の増殖をＩＬ−２１が増加させる能力を、ＭＵＦ ｓｃＦｖおよびＭＵＦ ＩｇＧ両方がブロッキングすることを示す、細胞増殖アッセイの結果を示す。
【図５Ａ】［００３６］図５Ａは、関節炎患者から単離した、ヒト線維芽細胞様滑膜細胞にＩＬ−２１を添加すると、ケモカインＭＣＰ−１およびＧＲＯ分泌の増加が導かれることを示す。
【図５Ｂ】［００３７］図５Ｂは、関節炎患者から単離した、ヒト線維芽細胞様滑膜細胞にＩＬ−２１を添加すると、ケモカイン１−３０９、ＴＡＲＣ、エオタキシン、ＭＤＣ、Ｌｙｍｐｈ、ＳＤＦＩＢ、ＩＰ−１０、Ｉ−ＴＡＣ、ＭＧおよびＭＰ３Ｂ分泌の増加が導かれることを示す。
【図５Ｃ】［００３８］図５Ｃは、関節炎患者から単離した、ヒト線維芽細胞様滑膜細胞にＩＬ−２１を添加すると、サイトカインＩＦＮ−アルファおよびＴＮＦアルファ（図５Ｃ）分泌の増加が導かれることを示す。
【図５Ｄ】５Ｄは、関節炎患者から単離した、ヒト線維芽細胞様滑膜細胞にＩＬ−２１を添加すると、ＩＬ−６およびＩＬ８（図５Ｄ）分泌の増加が導かれることを示す。
【図５Ｅ】［００３９］図５Ｅは、ＣＩＡの指標によって測定した際、ＩＬ−２１が、関節炎モデルマウスにおけるコラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）を悪化させることを示す。
【図６】［００４０］図６は、移植拒絶のｉｎ ｖｉｔｒｏモデル、混合リンパ球反応において、ＩＬ−２１がＣ５７ＢＬ／６Ｊ細胞の増殖を増加させることを示す。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１、２、３、１９、２０、２１、４７、４８、４９、６５、６６、６７、８３、８４、８５、１０１、１０２、１０３、１１９、１２０、１２１、１３７、１３８および１３９から選択されるアミノ酸配列に少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む単離抗体であって、ＩＬ−２１受容体に選択的に結合する、前記抗体。
【請求項２】
配列番号１０、１１、１２、２８、２９、３０、５６、５７、５８、７４、７５、７６、９２、９３、９４、１１０、１１１、１１２、１２８、１２９、１３０、１４６、１４７、および１４８から選択されるヌクレオチド配列に少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列にコードされる単離抗体であって、ＩＬ−２１受容体に選択的に結合する、前記抗体。
【請求項３】
配列番号１、１９、４７、６５、８３、１０１、１１９および１３７から選択されるアミノ酸配列に少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有するＶＨドメイン、並びに配列番号２、２０、４８、６６、８４、１０２、１２０および１３８から選択されるアミノ酸配列に少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有するＶＬドメインを含む単離抗体であって、ＩＬ−２１受容体に選択的に結合する、前記抗体。
【請求項４】
配列番号４、５、６、２２、２３、２４；５０、５１、５２、６８、６９、７０、８６、８７、８８、１０４、１０５、１０６、１２２、１２３、１２４、１４０、１４１、１４２およびその保存的アミノ酸置換から選択される１以上のＣＤＲを含むＶＨドメインを含む単離抗体であって、ＩＬ−２１受容体に選択的に結合する、前記抗体。
【請求項５】
配列番号７、８、９、２５、２６、２７、５３、５４、５５、７１、７２、７３、８９、９０、９１、１０７、１０８、１０９、１２５、１２６、１２７、１４３、１４４、１４５およびその保存的アミノ酸置換から選択される１以上のＣＤＲを含むＶＬドメインを含む単離抗体であって、ＩＬ−２１受容体に選択的に結合する、前記抗体。
【請求項６】
配列番号１、２、３、１９、２０、２１、４７、４８、４９、６５、６６、６７、８３、８４、８５、１０１、１０２、１０３、１１９、１２０、１２１、１３７、１３８および１３９から選択されるアミノ酸配列を含む抗体と、ＩＬ−２１受容体への結合に関して競合する、単離抗体。
【請求項７】
配列番号１、２、３、１９、２０、２１、４７、４８、４９、６５、６６、６７、８３、８４、８５、１０１、１０２、１０３、１１９、１２０、１２１、１３７、１３８および１３９から選択されるアミノ酸配列を含む抗体と同一の、ＩＬ−２１受容体上のエピトープに結合する、単離抗体。
【請求項８】
配列番号４３に示す少なくとも１００の隣接アミノ酸を含む配列に少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列に選択的に結合する、請求項１、２、３、４、５、６または７の抗体。
【請求項９】
ヒトＩＬ−２１受容体の細胞外ドメインに選択的に結合する、請求項１、２、３、４、５、６または７の抗体。
【請求項１０】
ＩＬ−２１受容体へのＩＬ−２１の結合を阻害する、請求項１、２、３、４、５、６または７の抗体。
【請求項１１】
ヒトである、請求項１、２、３、４、５、６または７の抗体。
【請求項１２】
ＩｇＧ１抗体である、請求項１、２、３、４、５、６または７の抗体。
【請求項１３】
ＩｇＧ１λまたはＩｇＧ１κである、請求項１２の抗体。
【請求項１４】
ＡＴＣＣ寄託指定番号ＰＴＡ−５０３０またはＰＴＡ−５０３１を有する宿主細胞によって発現される単離抗体。
【請求項１５】
請求項１、２、３、４、５、６または７の抗体を含む薬剤組成物。
【請求項１６】
請求項１、２、３、４、５、６または７の抗体をコードする単離核酸。
【請求項１７】
請求項１６の核酸を含む発現ベクター。
【請求項１８】
請求項１７のベクターで形質転換された宿主細胞。
【請求項１９】
細菌、哺乳動物細胞、酵母細胞、植物細胞、または昆虫細胞である、請求項１８の宿主細胞。
【請求項２０】
ＡＴＣＣ寄託指定番号ＰＴＡ−５０３０またはＰＴＡ−５０３１を有する宿主細胞。
【請求項２１】
ＩＬ−２１受容体に結合する抗体を産生する方法であって、抗体の発現を可能にする条件下で、請求項２０の宿主細胞を培養し、そして細胞培養物から該抗体を単離することを含む、前記方法。
【請求項２２】
ＩＬ−２１受容体に選択的に結合する抗体または抗原結合断片を生成する方法であって：
（ａ）置き換えられる予定のＣＤＲ１、２または３を含むか、あるいはＣＤＲ１、２または３コード領域を欠くか、いずれかの可変ドメインをコードする核酸のレパートリーを提供し；
（ｂ）レパートリー中のＣＤＲ１、２または３領域に、ドナー核酸を挿入して、可変ドメインをコードする核酸の産物レパートリーを提供するように、実質的に配列番号４、５、６、７、８、９、２２、２３、２４、２５、２６、２７、５０、５１、５２、５３、５４、５５、６８、６９、７０、７１、７２、７３、８６、８７、８８、８９、９０、９１、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４または１４５に実質的に示すアミノ酸配列をコードするドナー核酸を、レパートリーと合わせ；
（ｃ）前記産物レパートリーの核酸を発現し；
（ｄ）ＩＬ−２１受容体に特異的な抗原結合断片を選択し；そして
（ｅ）抗原結合断片または抗原結合断片をコードする核酸を回収する
ことを含む、前記方法。
【請求項２３】
請求項２２の方法によって産生される抗体。
【請求項２４】
生殖系列化（ｇｅｒｍｌｉｎｉｎｇ）工程をさらに含む、請求項２２の方法。
【請求項２５】
請求項１、２、３、４、５、６、７または２３の抗体と細胞を接触させ、それによって免疫応答を制御することを含む、免疫応答を制御する方法。
【請求項２６】
細胞が白血球または滑膜細胞である、請求項２５の方法。
【請求項２７】
白血球がＴ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、またはマクロファージである、請求項２６の方法。
【請求項２８】
免疫応答が、細胞増殖、細胞溶解活性、サイトカイン分泌、またはケモカイン分泌を含む、請求項２５の方法。
【請求項２９】
被験者において、免疫細胞関連障害を治療するかまたは防止する方法であって、被験者における免疫細胞活性を阻害するかまたは減少させるのに十分な量の請求項１、２、３、４、５、６、７または２３の抗体を被験者に投与して、それによって該障害を治療するかまたは防止する、前記方法。
【請求項３０】
免疫細胞関連障害が、多発性硬化症、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、若年性関節リウマチ、骨関節炎、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、移植拒絶、炎症性腸疾患、乾癬およびクローン病から選択される、請求項２９の方法。
【請求項３１】
免疫細胞関連障害が、関節リウマチ、炎症性腸疾患、クローン病および乾癬から選択される、請求項３０の方法。
【請求項３２】
サイトカイン阻害剤、増殖因子阻害剤、免疫抑制剤、抗炎症剤、代謝阻害剤、酵素阻害剤、細胞傷害剤および細胞分裂停止剤から選択される別の療法剤を被験者に投与することをさらに含む、請求項２９の方法。
【請求項３３】
療法剤が、ＴＮＦアンタゴニスト、ＩＬ−１２アンタゴニスト、ＩＬ−１５アンタゴニスト、ＩＬ−１７アンタゴニスト、ＩＬ−１８アンタゴニスト、ＩＬ−２２アンタゴニスト、Ｔ細胞枯渇剤、Ｂ細胞枯渇剤、メトトレキセート、レフルノミド、ラパマイシン、またはその類似体、Ｃｏｘ−２阻害剤、ｃＰＬＡ２阻害剤、ＮＳＡＩＤ、およびｐ３８阻害剤から選択される、請求項３２の方法。
【請求項３４】
被験者において、過剰増殖障害を治療するかまたは防止する方法であって、被験者におけるＩＬ−２１応答性細胞および／またはＩＬ−２１受容体応答性細胞の過剰増殖を阻害するかまたは減少させるのに十分な量の請求項１、２、３、４、５、６、７または２３の抗体を被験者に投与して、そして該障害を抗体が治療するかまたは防止するのを可能にする、前記方法。
【請求項３５】
被験者が哺乳動物である、請求項３４の方法。
【請求項３６】
被験者がヒトである、請求項３４の方法。
【請求項３７】
抗体を１μｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ〜１００μｇ／ｋｇ、１００μｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇ、および５００μｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇから選択される範囲で投与する、請求項２９、３０または３３の方法。
【請求項３８】
請求項１、２、３、４、５、６、７または２３の抗体を含む診断キット。
【請求項１】
配列番号１、２、３、１９、２０、２１、４７、４８、４９、６５、６６、６７、８３、８４、８５、１０１、１０２、１０３、１１９、１２０、１２１、１３７、１３８および１３９から選択されるアミノ酸配列に少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む単離抗体であって、ＩＬ−２１受容体に選択的に結合する、前記抗体。
【請求項２】
配列番号１０、１１、１２、２８、２９、３０、５６、５７、５８、７４、７５、７６、９２、９３、９４、１１０、１１１、１１２、１２８、１２９、１３０、１４６、１４７、および１４８から選択されるヌクレオチド配列に少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列にコードされる単離抗体であって、ＩＬ−２１受容体に選択的に結合する、前記抗体。
【請求項３】
配列番号１、１９、４７、６５、８３、１０１、１１９および１３７から選択されるアミノ酸配列に少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有するＶＨドメイン、並びに配列番号２、２０、４８、６６、８４、１０２、１２０および１３８から選択されるアミノ酸配列に少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有するＶＬドメインを含む単離抗体であって、ＩＬ−２１受容体に選択的に結合する、前記抗体。
【請求項４】
配列番号４、５、６、２２、２３、２４；５０、５１、５２、６８、６９、７０、８６、８７、８８、１０４、１０５、１０６、１２２、１２３、１２４、１４０、１４１、１４２およびその保存的アミノ酸置換から選択される１以上のＣＤＲを含むＶＨドメインを含む単離抗体であって、ＩＬ−２１受容体に選択的に結合する、前記抗体。
【請求項５】
配列番号７、８、９、２５、２６、２７、５３、５４、５５、７１、７２、７３、８９、９０、９１、１０７、１０８、１０９、１２５、１２６、１２７、１４３、１４４、１４５およびその保存的アミノ酸置換から選択される１以上のＣＤＲを含むＶＬドメインを含む単離抗体であって、ＩＬ−２１受容体に選択的に結合する、前記抗体。
【請求項６】
配列番号１、２、３、１９、２０、２１、４７、４８、４９、６５、６６、６７、８３、８４、８５、１０１、１０２、１０３、１１９、１２０、１２１、１３７、１３８および１３９から選択されるアミノ酸配列を含む抗体と、ＩＬ−２１受容体への結合に関して競合する、単離抗体。
【請求項７】
配列番号１、２、３、１９、２０、２１、４７、４８、４９、６５、６６、６７、８３、８４、８５、１０１、１０２、１０３、１１９、１２０、１２１、１３７、１３８および１３９から選択されるアミノ酸配列を含む抗体と同一の、ＩＬ−２１受容体上のエピトープに結合する、単離抗体。
【請求項８】
配列番号４３に示す少なくとも１００の隣接アミノ酸を含む配列に少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列に選択的に結合する、請求項１、２、３、４、５、６または７の抗体。
【請求項９】
ヒトＩＬ−２１受容体の細胞外ドメインに選択的に結合する、請求項１、２、３、４、５、６または７の抗体。
【請求項１０】
ＩＬ−２１受容体へのＩＬ−２１の結合を阻害する、請求項１、２、３、４、５、６または７の抗体。
【請求項１１】
ヒトである、請求項１、２、３、４、５、６または７の抗体。
【請求項１２】
ＩｇＧ１抗体である、請求項１、２、３、４、５、６または７の抗体。
【請求項１３】
ＩｇＧ１λまたはＩｇＧ１κである、請求項１２の抗体。
【請求項１４】
ＡＴＣＣ寄託指定番号ＰＴＡ−５０３０またはＰＴＡ−５０３１を有する宿主細胞によって発現される単離抗体。
【請求項１５】
請求項１、２、３、４、５、６または７の抗体を含む薬剤組成物。
【請求項１６】
請求項１、２、３、４、５、６または７の抗体をコードする単離核酸。
【請求項１７】
請求項１６の核酸を含む発現ベクター。
【請求項１８】
請求項１７のベクターで形質転換された宿主細胞。
【請求項１９】
細菌、哺乳動物細胞、酵母細胞、植物細胞、または昆虫細胞である、請求項１８の宿主細胞。
【請求項２０】
ＡＴＣＣ寄託指定番号ＰＴＡ−５０３０またはＰＴＡ−５０３１を有する宿主細胞。
【請求項２１】
ＩＬ−２１受容体に結合する抗体を産生する方法であって、抗体の発現を可能にする条件下で、請求項２０の宿主細胞を培養し、そして細胞培養物から該抗体を単離することを含む、前記方法。
【請求項２２】
ＩＬ−２１受容体に選択的に結合する抗体または抗原結合断片を生成する方法であって：
（ａ）置き換えられる予定のＣＤＲ１、２または３を含むか、あるいはＣＤＲ１、２または３コード領域を欠くか、いずれかの可変ドメインをコードする核酸のレパートリーを提供し；
（ｂ）レパートリー中のＣＤＲ１、２または３領域に、ドナー核酸を挿入して、可変ドメインをコードする核酸の産物レパートリーを提供するように、実質的に配列番号４、５、６、７、８、９、２２、２３、２４、２５、２６、２７、５０、５１、５２、５３、５４、５５、６８、６９、７０、７１、７２、７３、８６、８７、８８、８９、９０、９１、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４または１４５に実質的に示すアミノ酸配列をコードするドナー核酸を、レパートリーと合わせ；
（ｃ）前記産物レパートリーの核酸を発現し；
（ｄ）ＩＬ−２１受容体に特異的な抗原結合断片を選択し；そして
（ｅ）抗原結合断片または抗原結合断片をコードする核酸を回収する
ことを含む、前記方法。
【請求項２３】
請求項２２の方法によって産生される抗体。
【請求項２４】
生殖系列化（ｇｅｒｍｌｉｎｉｎｇ）工程をさらに含む、請求項２２の方法。
【請求項２５】
請求項１、２、３、４、５、６、７または２３の抗体と細胞を接触させ、それによって免疫応答を制御することを含む、免疫応答を制御する方法。
【請求項２６】
細胞が白血球または滑膜細胞である、請求項２５の方法。
【請求項２７】
白血球がＴ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、またはマクロファージである、請求項２６の方法。
【請求項２８】
免疫応答が、細胞増殖、細胞溶解活性、サイトカイン分泌、またはケモカイン分泌を含む、請求項２５の方法。
【請求項２９】
被験者において、免疫細胞関連障害を治療するかまたは防止する方法であって、被験者における免疫細胞活性を阻害するかまたは減少させるのに十分な量の請求項１、２、３、４、５、６、７または２３の抗体を被験者に投与して、それによって該障害を治療するかまたは防止する、前記方法。
【請求項３０】
免疫細胞関連障害が、多発性硬化症、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、若年性関節リウマチ、骨関節炎、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、移植拒絶、炎症性腸疾患、乾癬およびクローン病から選択される、請求項２９の方法。
【請求項３１】
免疫細胞関連障害が、関節リウマチ、炎症性腸疾患、クローン病および乾癬から選択される、請求項３０の方法。
【請求項３２】
サイトカイン阻害剤、増殖因子阻害剤、免疫抑制剤、抗炎症剤、代謝阻害剤、酵素阻害剤、細胞傷害剤および細胞分裂停止剤から選択される別の療法剤を被験者に投与することをさらに含む、請求項２９の方法。
【請求項３３】
療法剤が、ＴＮＦアンタゴニスト、ＩＬ−１２アンタゴニスト、ＩＬ−１５アンタゴニスト、ＩＬ−１７アンタゴニスト、ＩＬ−１８アンタゴニスト、ＩＬ−２２アンタゴニスト、Ｔ細胞枯渇剤、Ｂ細胞枯渇剤、メトトレキセート、レフルノミド、ラパマイシン、またはその類似体、Ｃｏｘ−２阻害剤、ｃＰＬＡ２阻害剤、ＮＳＡＩＤ、およびｐ３８阻害剤から選択される、請求項３２の方法。
【請求項３４】
被験者において、過剰増殖障害を治療するかまたは防止する方法であって、被験者におけるＩＬ−２１応答性細胞および／またはＩＬ−２１受容体応答性細胞の過剰増殖を阻害するかまたは減少させるのに十分な量の請求項１、２、３、４、５、６、７または２３の抗体を被験者に投与して、そして該障害を抗体が治療するかまたは防止するのを可能にする、前記方法。
【請求項３５】
被験者が哺乳動物である、請求項３４の方法。
【請求項３６】
被験者がヒトである、請求項３４の方法。
【請求項３７】
抗体を１μｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ〜１００μｇ／ｋｇ、１００μｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇ、および５００μｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇから選択される範囲で投与する、請求項２９、３０または３３の方法。
【請求項３８】
請求項１、２、３、４、５、６、７または２３の抗体を含む診断キット。
【図２】
【図４】
【図６】
【図４】
【図６】
【公表番号】特表２００７−５２５１５９（Ｐ２００７−５２５１５９Ａ）
【公表日】平成１９年９月６日（２００７．９．６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５０７０８１（Ｐ２００６−５０７０８１）
【出願日】平成１６年３月１２日（２００４．３．１２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００４／００７４４４
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０８３２４９
【国際公開日】平成１６年９月３０日（２００４．９．３０）
【出願人】（３０２０４２２０９）ワイス (7)
【出願人】（５０５１４８３２４）ケンブリッジ アンティボディー テクノロジー リミテッド (8)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１９年９月６日（２００７．９．６）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年３月１２日（２００４．３．１２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００４／００７４４４
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０８３２４９
【国際公開日】平成１６年９月３０日（２００４．９．３０）
【出願人】（３０２０４２２０９）ワイス (7)
【出願人】（５０５１４８３２４）ケンブリッジ アンティボディー テクノロジー リミテッド (8)
【Ｆターム（参考）】
[ Back to top ]