ヒトＴ２Ｒ受容体を特異的に活性化する苦味リガンドの同定およびヒト苦味モジュレータを同定するための関連アッセイ
【課題】 Ｔ２Ｒメンバーが苦味を制御することおよび胃腸機能におけるそれらの可能な役割の理解にかかわらず、ヒト苦味Ｔ２Ｒ味覚受容体を活性化する特異的リガンドを同定する必要性が存在する。異なるＴ２Ｒ、特にヒトＴ２Ｒの結合特性についてさらなる理解を深めることは、所望の味覚調節特性を有する、すなわち、特異的苦味化合物の味覚を遮断または抑制する化合物を選択するその使用をさらに促進するために、非常に有益であろう。
【解決手段】 本発明は、Ｔ２Ｒ味覚受容体ファミリーにおける特異的ヒト味覚受容体が、特定の苦味化合物に応答する、という発見に関する。また、本発明は、同一苦味リガンドとの機能的アッセイにおける、特異的ｈＴ２Ｒ９対立遺伝子およびそれらの異種の活性の発見にも関する。本発明は、特異的苦味リガンドおよび関連する化合物による、これらの味覚受容体の活性化を調節するリガンドを同定するためのアッセイにおける、これらのＴ２Ｒ受容体の使用にも関する。これらの化合物は、Ｔ２Ｒ関連の苦味を改変する（遮断する）ために、食物、飲料、化粧品、および医薬品において添加物として使用、および／またはそれらから除去され得る。また、Ｔ２Ｒリガンドは、Ｔ２Ｒ関連の胃腸および代謝機能を治療および調節する、ならびに胃腸および代謝疾患、例えば摂食障害、食物過敏、食物吸収、肥満、糖尿病、クローン病、セリアック病等を治療するための治療薬として使用され得る。
【解決手段】 本発明は、Ｔ２Ｒ味覚受容体ファミリーにおける特異的ヒト味覚受容体が、特定の苦味化合物に応答する、という発見に関する。また、本発明は、同一苦味リガンドとの機能的アッセイにおける、特異的ｈＴ２Ｒ９対立遺伝子およびそれらの異種の活性の発見にも関する。本発明は、特異的苦味リガンドおよび関連する化合物による、これらの味覚受容体の活性化を調節するリガンドを同定するためのアッセイにおける、これらのＴ２Ｒ受容体の使用にも関する。これらの化合物は、Ｔ２Ｒ関連の苦味を改変する（遮断する）ために、食物、飲料、化粧品、および医薬品において添加物として使用、および／またはそれらから除去され得る。また、Ｔ２Ｒリガンドは、Ｔ２Ｒ関連の胃腸および代謝機能を治療および調節する、ならびに胃腸および代謝疾患、例えば摂食障害、食物過敏、食物吸収、肥満、糖尿病、クローン病、セリアック病等を治療するための治療薬として使用され得る。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ｈＴ２Ｒｌ、ｈＴ２Ｒ３、ｈＴ２Ｒ４、ｈＴ２Ｒ５、ｈＴ２Ｒ７、ｈＴ２Ｒ８、ｈＴ２Ｒ９、ｈＴ２Ｒ１０、ｈＴ２Ｒ１３、ｈＴ２Ｒ１４、ｈＴ２Ｒ１６、ｈＴ２Ｒ４４、ｈＴ２Ｒ４４、ｈＴ２Ｒ５０、ｈＴ２Ｒ５４、ｈＴ２Ｒ５５、ｈＴ２Ｒ６１、ｈＴ２Ｒ６４、ｈＴ２Ｒ６５、ｈＴ２Ｒ６７、ｈＴ２Ｒ７１、ｈＴ２Ｒ７５、およびｈＴ２Ｒ７６から選択されるヒトＴ２Ｒ苦味受容体を調節する化合物を同定するアッセイであって、前記苦味受容体は、アセサルフェームＫ、アセトアミノフェン、２−アセチルピラジン、アロイン、アミノ−２−ノルボルナン−カルボン酸、アミグダリン、アンドログラフォリド、アルブチン、アリストロキン酸、アトロピン、ブルシン、４−ベンジルピペリジン、カフェイン、クロラムフェニコール、クロロキン、シンコニン、シプロフロキサシン、クラリスロマイシン、クリンダマイシン、シクロヘキシミド、シクロオクタノン、安息香酸デナトニウム、デキサメタゾン、塩酸ジルチアゼム、ジイソブチルアミン、ジメチルビグアナイド、２，６−ジメチルピペリジン、ドキセピン、マレイン酸エナラプリル、エドロホニウム、エノキサシン、（−）エピカテキン、（−）エリスロマイシン、エチルピラジン、ファモチジン、ガバペンチン、ギンゴライドＡ、ゴイトリン、グアイアコールグリセリルエーテル、塩酸ラベタロール、リナマリン、ロメフロキサシン、（−）ルピニン、Ｎ−メチルチオ尿素、１−メチル−２−キノリノン、メチルプレドニゾロン、ニトロフタレン、ニトロサッカリン、オフロキサシン、オレウロペイン（ｏｌｅｕｒｏｐｅｉｎ）、オメプラゾール、塩化オキシブチニン、オキシフェノニウムＨＢｒ、ペプチド−ＬＰＦＮＱＬ（配列番号５１）、ペプチド−ＬＰＦＳＱＬ（配列番号５２）、ペプチド−ＹＱＥＰＶＬＧＰＶＲＧＰＦＰＩＩＶ（配列番号５７）、ペプチド−ＰＶＬＧＰＶＲＧＰＦＰＩＩＶ（配列番号５８）、ペプチド−ＰＶＲＧＰＦＰＩＩＶ（配列番号５５）、ペプチド−ＲＧＰＦＰＩＩＶ（配列番号５６）、Ｎ−エチル−Ｎ´−フェニル尿素、２−ピコリン、ピクリン酸、ピレンゼピン二塩酸塩、フェニルチオカルバミド、プレドニゾン、プロカインアミド、６−ｎ−プロピル−２−チオウラシル、クァシン、キナクリン、キニーネ、ラニチジン、サッカリン、Ｄ−（−）−サリシン、硫酸スパルテイン５水和物、オクタ酢酸スクロース、ストリキニーネ、スルファメトキサゾール、テオブロミン、チオアセトアニリド、チオカルバニリド、トラゾリン、トリル尿素、トラピジル（ｔｒａｐｉｄｉｌ）、トリメトプリム、およびＬ−トリプトファンから選択される少なくとも１つの苦味リガンド、または構造上関連する化合物に特異的に応答し、
ｉ．ｈＴ２Ｒ１、ｈＴ２Ｒ４、ｈＴ２Ｒ５、ｈＴ２Ｒ７、ｈＴ２Ｒ８、ｈＴ２Ｒ９、ｈＴ２Ｒ１０、ｈＴ２Ｒ１３、ｈＴ２Ｒ１４、ｈＴ２Ｒ１６、ｈＴ２Ｒ４４、ｈＴ２Ｒ５０、ｈＴ２Ｒ５１、ｈＴ２Ｒ５４、ｈＴ２Ｒ５５、ｈＴ２Ｒ６１、ｈＴ２Ｒ６４、ｈＴ２Ｒ６５、ｈＴ２Ｒ６７、ｈＴ２Ｒ７１、ｈＴ２Ｒ７５、およびｈＴ２Ｒ７６ポリペプチドのうちの少なくとも１つであって、それぞれ、（１）配列番号４、６、８、１０、１２、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、および４８に含まれるポリペプチド配列を有する、および／または（２）それぞれ、配列番号３、５、７、９、１１、１３、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、および４７に含まれる核酸配列でコードされる、および／または（３）ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で、（２）における配列にハイブリダイズする核酸配列によりコードされる、および／または（４）（１）における配列への少なくとも９０％の配列同一性を保有するポリペプチド配列を有するｈＴ２Ｒポリペプチド、または前記苦味リガンドもしくは構造上関連する化合物のうちの少なくとも１つにより活性化される、（１）、（２）、（３）、もしくは（４）のうちのいずれかのフラグメントもしくはキメラの、活性化を誘発するために、前記苦味化合物のうちの少なくとも１つへのその効果のために化合物をスクリーニングするステップと、
ｉｉ． 前記苦味化合物または構造上関連する化合物のうちの少なくとも１つによる前記受容体の活性化へのその効果に基づいて、前記化合物が、苦味を調節するかどうかを判定するステップと、
ｉｉｉ． 前記苦味化合物のうちの少なくとも１つにより前記ヒト苦味受容体の活性化を調節する場合、潜在的な苦味モジュレータとして前記化合物を同定するステップと、を含む、アッセイ。
【請求項２】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ１ポリペプチドである、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項３】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ４ポリペプチドである、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項４】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ５ポリペプチドである、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項５】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ７ポリペプチドである、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項６】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ８ポリペプチドである、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項７】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ９ポリペプチドである、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項８】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ１０ポリペプチドである、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項９】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ１３ポリペプチドである、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項１０】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ１４ポリペプチドである、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項１１】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ１６ポリペプチドである、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項１２】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ４４ポリペプチドである、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項１３】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ５０ポリペプチドである、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項１４】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ５１ポリペプチドである、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項１５】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ５４ポリペプチドである、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項１６】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ５５である、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項１７】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ６１である、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項１８】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ６４ポリペプチドである、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項１９】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ６５ポリペプチドである、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項２０】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ６７ポリペプチドである、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項２１】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ７１である、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項２２】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ７５ポリペプチドである、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項２３】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ７６ポリペプチドである、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項２４】
前記味覚受容体は、細胞膜上に発現される、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項２５】
前記味覚受容体は、単離細胞膜上に発現される、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項２６】
前記味覚受容体は、無傷細胞上に発現される、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項２７】
前記味覚受容体は、真核細胞上に発現される、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項２８】
前記味覚受容体は、両生類、哺乳類または昆虫細胞によって発現される、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項２９】
前記味覚受容体は、ＨＥＫ２９３、ＢＨＫ、Ｃ０Ｓ、ＨＥＫ２９３Ｔ、ＣＨＯ、およびアフリカツメガエル卵母細胞から選択される細胞上に発現される、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項３０】
蛍光定量アッセイである、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項３１】
結合アッセイである、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項３２】
細胞内イオン濃度へのその効果をアッセイすることによって、前記化合物への効果を検出する、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項３３】
細胞内ナトリウムまたはカルシウムへの前記化合物の効果を検出する、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項３４】
細胞膜電位への前記化合物の効果を検出する、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項３５】
前記味覚受容体の転写への前記化合物の効果を検出する、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項３６】
前記化合物は、前記苦味リガンドのうちの１つと前記味覚受容体の相互作用を遮断するその能力に基づいて選択される、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項３７】
細胞内ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰまたはＩＰ３への前記化合物の効果を検出する、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項３８】
前記味覚受容体は、前記味覚受容体の細胞外ドメインまたは膜貫通領域を含む、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項３９】
前記アッセイは、カルシウムに特異的な蛍光色素を使用して、カルシウムの変化を検出する、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項４０】
前記アッセイは、Ｆｌｕｏ−３、Ｆｌｕｏ−４、およびＦｕｒａ−２から選択される色素を使用して、細胞内カルシウムの変化を検出する、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項４１】
前記味覚受容体は、溶液中にある、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項４２】
分光学的特性、流力特性または溶解度の変化を検出する結合アッセイである、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項４３】
Ｇタンパク質との前記味覚受容体の複合への、前記化合物の効果を検出する、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項４４】
トランスデューシン、ガストデューシン、Ｇα１５、Ｇα１６、またはそれらのキメラから選択されるＧタンパク質との前記味覚受容体の複合への前記化合物の効果を検出する、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項４５】
蛍光偏光アッセイである、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項４６】
前記味覚受容体は、固相基質に接着される、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項４７】
ハイスループットアッセイである、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項４８】
前記味覚受容体は、ＨＥＫ−２９３細胞によって発現される、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項４９】
前記味覚受容体はｈＴ２Ｒ１であり、前記アッセイは、クロラムフェニコール、クロロキン、シクロオクタノン、デキサメタゾン、塩酸ジルチアゼム、プレドニゾン、キニーネ、スルファメトキサゾール、チオアセトアニリド、チオカルバニリド、ギンゴライドＡ、ロメフロキサシン、Ｎ−メチルチオ尿素、メチルプレドニゾロン、ニトロサッカリン、オレウロペイン（ｏｌｅｕｒｏｐｅｉｎ）、オメプラゾール、塩化オキシブチニン、オキシフェノニウムＨＢｒ、ペプチド−ＬＰＦＮＱＬ（配列番号５１）、ペプチド−ＬＰＦＳＱＬ（配列番号５２）、ペプチド−ＹＱＥＰＶＬＧＰＶＲＧＰＦＰＩＩＶ（配列番号５７）、ペプチド−ＰＶＬＧＰＶＲＧＰＦＰＩＩＶ（配列番号５４）、ペプチド−ＲＧＰＦＰＩＩＶ（配列番号５６）、およびピクリン酸、ならびに構造上関連する化合物から選択される苦味リガンドとのｈＴ２Ｒｌの相互作用を抑制または遮断する化合物をスクリーニングする、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項５０】
前記味覚受容体は、ｈＴ２Ｒ４であり、前記アッセイは、４−ベンジルピペリジン、クロロキン、塩酸ジルチアゼム、ジイソブチルアミン、２，６−ジメチルピペリジン、ドキセピン、マレイン酸エナラプリル、ファモチジン、ガバペンチン、グアイアコールグリセリルエーテル、塩酸ラベタロール、（−）ルピニン、１−メチル−２−キノリノン、メチルプレドニゾロン、オレウロペイン（ｏｌｅｕｒｏｐｅｉｎ）、オメプラゾール、塩化オキシブチニン、オキシフェノニウムＨＢｒ、ピレンゼピン二塩酸塩、プロカインアミド、キニーネ、ラニチジン、ストリキニーネ、テオブロミン、トラゾリン、およびトリメトプリム、ならびに構造上関連する化合物から選択される苦味リガンドとのｈＴ２Ｒ４の相互作用を抑制または遮断する化合物をスクリーニングする、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項５１】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ５であり、前記アッセイは、ジメチルビグアナイド、１−メチル−２−キノリノン、塩化オキシブチニン、オキシフェノニウムＨＢｒ、および２−ピコリン、ならびに構造上関連する化合物から選択される少なくとも１つの苦味リガンドとのｈＴ２Ｒ５の相互作用を遮断または抑制する化合物をスクリーニングする、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項５２】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ７であり、前記アッセイは、２−アセチルピラジン、クロロキン、エチルピラジン、１−メチル−２−キノリノン、塩化オキシブチニン、オキシフェノニウムＨＢｒ、２−ピコリン、ピレンゼピン二塩酸塩、キニーネ、ストリキニーネ、およびトリメトプリム、ならびに構造上関連する化合物から選択される苦味リガンドとのｈＴ２Ｒ７の相互作用を抑制または遮断する化合物をスクリーニングする、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項５３】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ８であり、前記アッセイは、アセサルフェームＫ、２−アセチルピラジン、アロイン、アンドログラフォリド、アトロピン、クロラムフェニコール、シクロヘキシミド、シクロオクタノン、安息香酸デナトニウム、デキサメタゾン、塩酸ジルチアゼム、マレイン酸エナラプリル、（−）エリスロマイシン、エチルピラジン、ファモチジン、ガバペンチン、ギンゴライドＡ、ゴイトリン、グアイアコールグリセリルエーテル、ロメフロキサシン、１−メチル−２−キノリノン、メチルプレドニゾロン、ニトロフタレン、ニトロサッカリン、オレウロペイン（ｏｌｅｕｒｏｐｅｉｎ）、塩化オキシブチニン、オキシフェノニウムＨＢｒ、Ｎ´−エチル−Ｎ´−フェニル尿素、２−ピコリン、ピクリン酸、ピレンゼピン二塩酸塩、プロカインアミド、クァシン、ラニチジン、サッカリン、オクタ酢酸スクロース、ストリキニーネ、トラピジル（ｔｒａｐｉｄｉｌ）、およびトリメトプリム、ならびに構造上関連する化合物から選択される少なくとも１つの苦味リガンドとのｈＴ２Ｒ８の相互作用を遮断または抑制する化合物をスクリーニングする、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項５４】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ９であり、前記アッセイは、エチルピラジン、オフロキサシン、ならびに構造上関連する化合物から選択される苦味リガンドとの前記ｈＴ２Ｒ９の相互作用を遮断または抑制する化合物をスクリーニングする、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項５５】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ１０であり、前記アッセイは、２−アセチルピラジン、アンドログラフォリド、アトロピン、ブルシン、４−ベンジルピペリジン、カフェイン、クロラムフェニコール、クロロキン、シンコニン、クラリスロマイシン、クリンダマイシン、シクロヘキシミド、シクロオクタノン、安息香酸デナトニウム、デキサメタゾン、塩酸ジルチアゼム、ジイソブチルアミン、２，６−ジメチルピペリジン、ドキセピン、エドロホニウム、エリスロマイシン、エチルピラジン、ファモチジン、ガバペンチン、ギンゴライドＡ．、ゴイトリン、グアイアコールグリセリルエーテル、ルピニン、１−メチル−２−キノリノン、メチルプレドニゾロン、オレウロペイン（ｏｌｅｕｒｏｐｅｉｎ）、オメプラゾール、塩化オキシブチニン、オキシフェノニウムＨＢｒ、プレドニゾン、プロカインアミド、クァシン、キナクリン、キニーネ、ラニチジン、硫酸スパルテイン５水和物、オクタ酢酸スクロース、ストリキニーネ、トラゾリン、トリル尿素、トラピジル（ｔｒａｐｉｄｉｌ）、およびトリメトプリム、ならびに構造上関連する化合物から選択される苦味リガンドとの前記ｈＴ２Ｒ１０の相互作用を遮断または抑制する化合物をスクリーニングする、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項５６】
前記ｈＴ２ＲはｈＴ２Ｒ１３であり、前記アッセイは、２−アセチルピラジン、アトロピン、クラリスロマイシン、安息香酸デナトニウム、ドキセピン、エチルピラジン、オレウロペイン（ｏｌｅｕｒｏｐｅｉｎ）、オキシフェノニウムＨＢｒ、およびキナクリン、ならびに構造上関連する化合物から選択される少なくとも１つの苦味リガンドとのｈＴ２Ｒ１３の相互作用を遮断または抑制する化合物をスクリーニングする、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項５７】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ１４であり、前記アッセイは、２−アセチルピラジン、アリストロキン酸、シクロオクタノン、デキサメタゾン、塩酸ジルチアゼム、２，６−ジメチルピペリジン、エリスロマイシン、エチルピラジン、ゴイトリン、グアイアコールグリセリルエーテル、１−メチル−２−キノリノン、メチルプレドニゾロン、ニトロフタレン、ニトロサッカリン、オレウロペイン（ｏｌｅｕｒｏｐｅｉｎ）、オメプラゾール、塩化オキシブチニン、Ｎ´−エチル−Ｎ´−フェニル尿素、２−ピコリン、ピクリン酸、キニーネ、ストリキニーネ、テオブロミン、トリル尿素、およびトラピジル（ｔｒａｐｉｄｉｌ）、ならびに構造上関連する化合物から選択される少なくとも１つの苦味リガンドとの前記ｈＴ２Ｒ１４の相互作用を遮断または抑制する化合物をスクリーニングする、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項５８】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ１６であり、前記アッセイは、２−アセチルピラジン、アミグダリン、アルブチン、リナマリン、およびＤ−（−）−サリシン、ならびに構造上関連する化合物から選択される少なくとも１つの苦味リガンドとの前記ｈＴ２Ｒ１６の相互作用を遮断または抑制する化合物をスクリーニングする、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項５９】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ４４であり、前記アッセイは、エチルピラジンおよび２−アセチルピラジン、ならびに構造上関連する化合物から選択される少なくとも１つの苦味リガンドとの前記ｈＴ２Ｒ４４の相互作用を遮断または抑制する化合物をスクリーニングする、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項６０】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ５０であり、前記アッセイは、２−アセチルピラジン、およびエチルピラジン、ならびに構造上関連する化合物から選択される少なくとも１つの苦味リガンドとのｈＴ２Ｒ５０の相互作用を遮断または抑制する化合物をスクリーニングする、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項６１】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ５１であり、前記アッセイは、クラリスロマイシン、エチルピラジン、ゴイトリン、ｎ−メチルチオ尿素、塩化オキシブチニン、Ｎ´−エチル−Ｎ´−フェニル尿素、２−ピコリン、フェニルチオカルバミド、６−ｎ−プロピル−２−チオウラシル、チオアセトアニリド、およびトリメトプリム、ならびに構造上関連する化合物から選択される少なくとも１つの苦味リガンドとの前記ｈＴ２Ｒ５１の相互作用を遮断または抑制する化合物をスクリーニングする、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項６２】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ５４であり、前記アッセイは、アセトアミノフェン、クロロキン、クラリスロマイシン、安息香酸デナトニウム、エピカテキン、エリスロマイシン、塩酸ラベタロール、１−メチル−２−キノリノン、オレウロペイン（ｏｌｅｕｒｏｐｅｉｎ）、オメプラゾール、塩化オキシブチニン、オキシフェノニウムＨＢｒ、ピレンゼピン二塩酸塩、プロカインアミド、ラニチジン、ストリキニーネ、トリメトプリム、およびＬ−トリプトファン、ならびに構造上関連する化合物から選択される少なくとも１つの苦味リガンドとのｈＴ２Ｒ５４の相互作用を遮断または抑制する化合物をスクリーニングする、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項６３】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ５５であり、前記アッセイは、ドキセピン、リナマリン、塩化オキシブチニン、キニーネ、およびストリキニーネ、ならびに構造上関連する化合物から選択される少なくとも１つの苦味リガンドとのｈＴ２Ｒ５５の相互作用を遮断または抑制する化合物をスクリーニングする、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項６４】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ６１であり、前記アッセイは、アセサルフェームＫ、アロイン、アリストロキン酸、カフェイン、クロラムフェニコール、クロロキン、安息香酸デナトニウム、ニトロサッカリン、塩化オキシブチニン、オキシフェノニウム臭化水素酸塩、ペプチド−ＬＰＦＮＱＬ（配列番号５１）、ペプチド−ＬＰＦＳＱＬ（配列番号５２）、ピクリン酸、サッカリン、およびストリキニーネ、ならびに構造上関連する化合物から選択される少なくとも１つの苦味リガンドとのｈＴ２Ｒ６１の相互作用を遮断または抑制する化合物をスクリーニングする、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項６５】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ６４であり、前記アッセイは、アセサルフェームＫ、アミノ−２−ノルボルナン−カルボン酸、アリストロキン酸、ガバペンチン、リナマリン、ロメフロキサシン、塩化オキシブチニン、オキシフェノニウムＨＢｒ、キニーネ、ラニチジン、サッカリン、ストリキニーネ、およびＬ−トリプトファン、ならびに構造上関連する化合物から選択される少なくとも１つの苦味リガンドとのｈＴ２Ｒ６４の相互作用を遮断または抑制する化合物をスクリーニングする、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項６６】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ６５であり、前記アッセイは、２−アセチルピラジン、エチルピラジン、および１−メチル−２−キノリノン、ならびに構造上関連する化合物から選択される苦味リガンドとのｈＴ２Ｒ６５の相互作用を抑制または遮断する化合物をスクリーニングする、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項６７】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ６７であり、前記アッセイは、２−アセチルピラジン、アンドログラフォリド、エチルピラジン、および塩化オキシブチニン、ならびに構造上関連する化合物から選択される少なくとも１つの苦味リガンドとのｈＴ２Ｒ６７の相互作用を遮断または抑制する化合物をスクリーニングする、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項６８】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ７１であり、前記アッセイは、ニトロサッカリンおよびピクリン酸、ならびに構造上関連する化合物から選択される少なくとも１つの苦味リガンドとのｈＴ２Ｒ７１の相互作用を遮断または抑制する化合物をスクリーニングする、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項６９】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ７５であり、前記アッセイは、アンドログラフォリド、アトロピン、ブルシン、４−ベンジルピペリジン、カフェイン、クロラムフェニコール、クロロキン、シンコニン、シプロフロキサシン、安息香酸デナトニウム、デキサメタゾン、ドキセピン、マレイン酸エナラプリル、エノキサシン、エリスロマイシン、エチルピラジン、ギンゴライドＡ、ゴイトリン、塩酸ラベタロール、ロメフロキサシン、（−）ルピニン、１−メチル−２−キノリノン、メチルプレドニゾロン、オフロキサシン、オメプラゾール、塩化オキシブチニン、オキシフェノニウム臭化水素酸塩、ピレンゼピン二塩酸塩、プレドニゾン、プロカインアミド、クァシン、キニーネ、ラニチジン、硫酸スパルテイン５水和物、ストリキニーネ、スルファメトキサゾール、トラゾリン、トラピジル（ｔｒａｐｉｄｉｌ）、およびトリメトプリム、ならびに構造上関連する化合物から選択される少なくとも１つの苦味リガンドとのｈＴ２Ｒ７５の相互作用を遮断または抑制する化合物をスクリーニングする、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項７０】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ７６であり、前記アッセイは、ブルシン、および構造上関連する化合物から選択される苦味リガンドとのｈＴ２Ｒ７６の相互作用を遮断または抑制する化合物をスクリーニングする、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項７１】
ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で、配列番号３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７のいずれかに含まれるＤＮＡ配列、または配列番号４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、および４８のいずれかに含まれるポリペプチド配列に特異的にハイブリダイズする核酸配列を有するＴ２Ｒポリペプチドを発現する、単離味覚または胃腸細胞。
【請求項７２】
前記細胞は、配列番号１３または１５に含まれる、ｈＴ２Ｒ９ＶまたはｈＴ２Ｒ９ＡのＤＮＡ配列を含む、請求項７１に記載の単離味覚または胃腸細胞。
【請求項７３】
ヒトＴ２Ｒを調節する化合物を同定する方法であって、請求項７１または７２に記載の味覚または胃腸細胞を、潜在的Ｔ２Ｒ調節化合物と接触させるステップと、前記化合物がそこに発現したＴ２Ｒの活性と特異的に結合するおよび／または調節するかどうか、および／または別の化合物による前記ヒトＴ２Ｒの特異的結合または活性化に影響するかどうかを検出するステップと、を含む、方法。
【請求項７４】
Ｔ２Ｒ９ＡまたはＴ２Ｒ９Ｖ表現型を有する個人をスクリーニングする方法であって、個人の遺伝子検査を行うステップと、前記個人が、配列番号１５に含まれるｈＴ２Ｒ９Ａ配列、または配列番号１３に含まれるｈＴ２Ｒ９Ｖ配列を含むかどうかを判定するステップと、を含む方法。
【請求項７５】
配列番号１５または１３に記載のＴ２Ｒ９ＡまたはＴ２Ｒ９Ｖ配列を発現する細胞を、推定Ｔ２Ｒ９ＡまたはＴ２Ｒ９Ｖ調節化合物と接触させるステップと、前記Ｔ２Ｒ９ＡまたはＴ２Ｒ９Ｖの活性を調節する化合物を検出するステップと、を含む、スクリーニングアッセイ。
【請求項７６】
Ｔ２Ｒ９ハプロタイプの発現と関連する差異を検出する方法であって、ｈＴ２Ｒ９Ａと特異的に結合および／またはそれを活性化するが、ｈＴ２Ｒ９Ｖには特異的に結合および／またはそれを活性化しない、または、その逆の化合物を同定するステップを含む、方法。
【請求項７７】
ｈＴ２Ｒ９ＡあるいはｈＴ２Ｒ９Ｖのいずれかを発現する細胞を接触させるステップと、前記ｈＴ２Ｒ９配列のいずれかを特異的に活性化する化合物を同定するステップと、生体内でその効果を判定するステップと、を含む、Ｔ２Ｒリガンドスクリーニングアッセイ。
【請求項７８】
舌または胃腸系における細胞により現された、Ｔ２Ｒの効果を含む、味覚および／または胃腸もしくは消化機能への前記リガンドの効果を検査するステップをさらに含む、請求項７７に記載のアッセイ。
【請求項７９】
前記細胞は、腸管内分泌細胞である、請求項７８に記載のアッセイ。
【請求項１】
ｈＴ２Ｒｌ、ｈＴ２Ｒ３、ｈＴ２Ｒ４、ｈＴ２Ｒ５、ｈＴ２Ｒ７、ｈＴ２Ｒ８、ｈＴ２Ｒ９、ｈＴ２Ｒ１０、ｈＴ２Ｒ１３、ｈＴ２Ｒ１４、ｈＴ２Ｒ１６、ｈＴ２Ｒ４４、ｈＴ２Ｒ４４、ｈＴ２Ｒ５０、ｈＴ２Ｒ５４、ｈＴ２Ｒ５５、ｈＴ２Ｒ６１、ｈＴ２Ｒ６４、ｈＴ２Ｒ６５、ｈＴ２Ｒ６７、ｈＴ２Ｒ７１、ｈＴ２Ｒ７５、およびｈＴ２Ｒ７６から選択されるヒトＴ２Ｒ苦味受容体を調節する化合物を同定するアッセイであって、前記苦味受容体は、アセサルフェームＫ、アセトアミノフェン、２−アセチルピラジン、アロイン、アミノ−２−ノルボルナン−カルボン酸、アミグダリン、アンドログラフォリド、アルブチン、アリストロキン酸、アトロピン、ブルシン、４−ベンジルピペリジン、カフェイン、クロラムフェニコール、クロロキン、シンコニン、シプロフロキサシン、クラリスロマイシン、クリンダマイシン、シクロヘキシミド、シクロオクタノン、安息香酸デナトニウム、デキサメタゾン、塩酸ジルチアゼム、ジイソブチルアミン、ジメチルビグアナイド、２，６−ジメチルピペリジン、ドキセピン、マレイン酸エナラプリル、エドロホニウム、エノキサシン、（−）エピカテキン、（−）エリスロマイシン、エチルピラジン、ファモチジン、ガバペンチン、ギンゴライドＡ、ゴイトリン、グアイアコールグリセリルエーテル、塩酸ラベタロール、リナマリン、ロメフロキサシン、（−）ルピニン、Ｎ−メチルチオ尿素、１−メチル−２−キノリノン、メチルプレドニゾロン、ニトロフタレン、ニトロサッカリン、オフロキサシン、オレウロペイン（ｏｌｅｕｒｏｐｅｉｎ）、オメプラゾール、塩化オキシブチニン、オキシフェノニウムＨＢｒ、ペプチド−ＬＰＦＮＱＬ（配列番号５１）、ペプチド−ＬＰＦＳＱＬ（配列番号５２）、ペプチド−ＹＱＥＰＶＬＧＰＶＲＧＰＦＰＩＩＶ（配列番号５７）、ペプチド−ＰＶＬＧＰＶＲＧＰＦＰＩＩＶ（配列番号５８）、ペプチド−ＰＶＲＧＰＦＰＩＩＶ（配列番号５５）、ペプチド−ＲＧＰＦＰＩＩＶ（配列番号５６）、Ｎ−エチル−Ｎ´−フェニル尿素、２−ピコリン、ピクリン酸、ピレンゼピン二塩酸塩、フェニルチオカルバミド、プレドニゾン、プロカインアミド、６−ｎ−プロピル−２−チオウラシル、クァシン、キナクリン、キニーネ、ラニチジン、サッカリン、Ｄ−（−）−サリシン、硫酸スパルテイン５水和物、オクタ酢酸スクロース、ストリキニーネ、スルファメトキサゾール、テオブロミン、チオアセトアニリド、チオカルバニリド、トラゾリン、トリル尿素、トラピジル（ｔｒａｐｉｄｉｌ）、トリメトプリム、およびＬ−トリプトファンから選択される少なくとも１つの苦味リガンド、または構造上関連する化合物に特異的に応答し、
ｉ．ｈＴ２Ｒ１、ｈＴ２Ｒ４、ｈＴ２Ｒ５、ｈＴ２Ｒ７、ｈＴ２Ｒ８、ｈＴ２Ｒ９、ｈＴ２Ｒ１０、ｈＴ２Ｒ１３、ｈＴ２Ｒ１４、ｈＴ２Ｒ１６、ｈＴ２Ｒ４４、ｈＴ２Ｒ５０、ｈＴ２Ｒ５１、ｈＴ２Ｒ５４、ｈＴ２Ｒ５５、ｈＴ２Ｒ６１、ｈＴ２Ｒ６４、ｈＴ２Ｒ６５、ｈＴ２Ｒ６７、ｈＴ２Ｒ７１、ｈＴ２Ｒ７５、およびｈＴ２Ｒ７６ポリペプチドのうちの少なくとも１つであって、それぞれ、（１）配列番号４、６、８、１０、１２、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、および４８に含まれるポリペプチド配列を有する、および／または（２）それぞれ、配列番号３、５、７、９、１１、１３、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、および４７に含まれる核酸配列でコードされる、および／または（３）ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で、（２）における配列にハイブリダイズする核酸配列によりコードされる、および／または（４）（１）における配列への少なくとも９０％の配列同一性を保有するポリペプチド配列を有するｈＴ２Ｒポリペプチド、または前記苦味リガンドもしくは構造上関連する化合物のうちの少なくとも１つにより活性化される、（１）、（２）、（３）、もしくは（４）のうちのいずれかのフラグメントもしくはキメラの、活性化を誘発するために、前記苦味化合物のうちの少なくとも１つへのその効果のために化合物をスクリーニングするステップと、
ｉｉ． 前記苦味化合物または構造上関連する化合物のうちの少なくとも１つによる前記受容体の活性化へのその効果に基づいて、前記化合物が、苦味を調節するかどうかを判定するステップと、
ｉｉｉ． 前記苦味化合物のうちの少なくとも１つにより前記ヒト苦味受容体の活性化を調節する場合、潜在的な苦味モジュレータとして前記化合物を同定するステップと、を含む、アッセイ。
【請求項２】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ１ポリペプチドである、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項３】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ４ポリペプチドである、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項４】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ５ポリペプチドである、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項５】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ７ポリペプチドである、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項６】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ８ポリペプチドである、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項７】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ９ポリペプチドである、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項８】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ１０ポリペプチドである、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項９】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ１３ポリペプチドである、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項１０】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ１４ポリペプチドである、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項１１】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ１６ポリペプチドである、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項１２】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ４４ポリペプチドである、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項１３】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ５０ポリペプチドである、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項１４】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ５１ポリペプチドである、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項１５】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ５４ポリペプチドである、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項１６】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ５５である、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項１７】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ６１である、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項１８】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ６４ポリペプチドである、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項１９】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ６５ポリペプチドである、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項２０】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ６７ポリペプチドである、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項２１】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ７１である、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項２２】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ７５ポリペプチドである、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項２３】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ７６ポリペプチドである、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項２４】
前記味覚受容体は、細胞膜上に発現される、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項２５】
前記味覚受容体は、単離細胞膜上に発現される、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項２６】
前記味覚受容体は、無傷細胞上に発現される、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項２７】
前記味覚受容体は、真核細胞上に発現される、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項２８】
前記味覚受容体は、両生類、哺乳類または昆虫細胞によって発現される、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項２９】
前記味覚受容体は、ＨＥＫ２９３、ＢＨＫ、Ｃ０Ｓ、ＨＥＫ２９３Ｔ、ＣＨＯ、およびアフリカツメガエル卵母細胞から選択される細胞上に発現される、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項３０】
蛍光定量アッセイである、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項３１】
結合アッセイである、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項３２】
細胞内イオン濃度へのその効果をアッセイすることによって、前記化合物への効果を検出する、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項３３】
細胞内ナトリウムまたはカルシウムへの前記化合物の効果を検出する、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項３４】
細胞膜電位への前記化合物の効果を検出する、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項３５】
前記味覚受容体の転写への前記化合物の効果を検出する、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項３６】
前記化合物は、前記苦味リガンドのうちの１つと前記味覚受容体の相互作用を遮断するその能力に基づいて選択される、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項３７】
細胞内ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰまたはＩＰ３への前記化合物の効果を検出する、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項３８】
前記味覚受容体は、前記味覚受容体の細胞外ドメインまたは膜貫通領域を含む、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項３９】
前記アッセイは、カルシウムに特異的な蛍光色素を使用して、カルシウムの変化を検出する、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項４０】
前記アッセイは、Ｆｌｕｏ−３、Ｆｌｕｏ−４、およびＦｕｒａ−２から選択される色素を使用して、細胞内カルシウムの変化を検出する、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項４１】
前記味覚受容体は、溶液中にある、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項４２】
分光学的特性、流力特性または溶解度の変化を検出する結合アッセイである、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項４３】
Ｇタンパク質との前記味覚受容体の複合への、前記化合物の効果を検出する、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項４４】
トランスデューシン、ガストデューシン、Ｇα１５、Ｇα１６、またはそれらのキメラから選択されるＧタンパク質との前記味覚受容体の複合への前記化合物の効果を検出する、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項４５】
蛍光偏光アッセイである、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項４６】
前記味覚受容体は、固相基質に接着される、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項４７】
ハイスループットアッセイである、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項４８】
前記味覚受容体は、ＨＥＫ−２９３細胞によって発現される、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項４９】
前記味覚受容体はｈＴ２Ｒ１であり、前記アッセイは、クロラムフェニコール、クロロキン、シクロオクタノン、デキサメタゾン、塩酸ジルチアゼム、プレドニゾン、キニーネ、スルファメトキサゾール、チオアセトアニリド、チオカルバニリド、ギンゴライドＡ、ロメフロキサシン、Ｎ−メチルチオ尿素、メチルプレドニゾロン、ニトロサッカリン、オレウロペイン（ｏｌｅｕｒｏｐｅｉｎ）、オメプラゾール、塩化オキシブチニン、オキシフェノニウムＨＢｒ、ペプチド−ＬＰＦＮＱＬ（配列番号５１）、ペプチド−ＬＰＦＳＱＬ（配列番号５２）、ペプチド−ＹＱＥＰＶＬＧＰＶＲＧＰＦＰＩＩＶ（配列番号５７）、ペプチド−ＰＶＬＧＰＶＲＧＰＦＰＩＩＶ（配列番号５４）、ペプチド−ＲＧＰＦＰＩＩＶ（配列番号５６）、およびピクリン酸、ならびに構造上関連する化合物から選択される苦味リガンドとのｈＴ２Ｒｌの相互作用を抑制または遮断する化合物をスクリーニングする、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項５０】
前記味覚受容体は、ｈＴ２Ｒ４であり、前記アッセイは、４−ベンジルピペリジン、クロロキン、塩酸ジルチアゼム、ジイソブチルアミン、２，６−ジメチルピペリジン、ドキセピン、マレイン酸エナラプリル、ファモチジン、ガバペンチン、グアイアコールグリセリルエーテル、塩酸ラベタロール、（−）ルピニン、１−メチル−２−キノリノン、メチルプレドニゾロン、オレウロペイン（ｏｌｅｕｒｏｐｅｉｎ）、オメプラゾール、塩化オキシブチニン、オキシフェノニウムＨＢｒ、ピレンゼピン二塩酸塩、プロカインアミド、キニーネ、ラニチジン、ストリキニーネ、テオブロミン、トラゾリン、およびトリメトプリム、ならびに構造上関連する化合物から選択される苦味リガンドとのｈＴ２Ｒ４の相互作用を抑制または遮断する化合物をスクリーニングする、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項５１】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ５であり、前記アッセイは、ジメチルビグアナイド、１−メチル−２−キノリノン、塩化オキシブチニン、オキシフェノニウムＨＢｒ、および２−ピコリン、ならびに構造上関連する化合物から選択される少なくとも１つの苦味リガンドとのｈＴ２Ｒ５の相互作用を遮断または抑制する化合物をスクリーニングする、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項５２】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ７であり、前記アッセイは、２−アセチルピラジン、クロロキン、エチルピラジン、１−メチル−２−キノリノン、塩化オキシブチニン、オキシフェノニウムＨＢｒ、２−ピコリン、ピレンゼピン二塩酸塩、キニーネ、ストリキニーネ、およびトリメトプリム、ならびに構造上関連する化合物から選択される苦味リガンドとのｈＴ２Ｒ７の相互作用を抑制または遮断する化合物をスクリーニングする、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項５３】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ８であり、前記アッセイは、アセサルフェームＫ、２−アセチルピラジン、アロイン、アンドログラフォリド、アトロピン、クロラムフェニコール、シクロヘキシミド、シクロオクタノン、安息香酸デナトニウム、デキサメタゾン、塩酸ジルチアゼム、マレイン酸エナラプリル、（−）エリスロマイシン、エチルピラジン、ファモチジン、ガバペンチン、ギンゴライドＡ、ゴイトリン、グアイアコールグリセリルエーテル、ロメフロキサシン、１−メチル−２−キノリノン、メチルプレドニゾロン、ニトロフタレン、ニトロサッカリン、オレウロペイン（ｏｌｅｕｒｏｐｅｉｎ）、塩化オキシブチニン、オキシフェノニウムＨＢｒ、Ｎ´−エチル−Ｎ´−フェニル尿素、２−ピコリン、ピクリン酸、ピレンゼピン二塩酸塩、プロカインアミド、クァシン、ラニチジン、サッカリン、オクタ酢酸スクロース、ストリキニーネ、トラピジル（ｔｒａｐｉｄｉｌ）、およびトリメトプリム、ならびに構造上関連する化合物から選択される少なくとも１つの苦味リガンドとのｈＴ２Ｒ８の相互作用を遮断または抑制する化合物をスクリーニングする、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項５４】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ９であり、前記アッセイは、エチルピラジン、オフロキサシン、ならびに構造上関連する化合物から選択される苦味リガンドとの前記ｈＴ２Ｒ９の相互作用を遮断または抑制する化合物をスクリーニングする、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項５５】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ１０であり、前記アッセイは、２−アセチルピラジン、アンドログラフォリド、アトロピン、ブルシン、４−ベンジルピペリジン、カフェイン、クロラムフェニコール、クロロキン、シンコニン、クラリスロマイシン、クリンダマイシン、シクロヘキシミド、シクロオクタノン、安息香酸デナトニウム、デキサメタゾン、塩酸ジルチアゼム、ジイソブチルアミン、２，６−ジメチルピペリジン、ドキセピン、エドロホニウム、エリスロマイシン、エチルピラジン、ファモチジン、ガバペンチン、ギンゴライドＡ．、ゴイトリン、グアイアコールグリセリルエーテル、ルピニン、１−メチル−２−キノリノン、メチルプレドニゾロン、オレウロペイン（ｏｌｅｕｒｏｐｅｉｎ）、オメプラゾール、塩化オキシブチニン、オキシフェノニウムＨＢｒ、プレドニゾン、プロカインアミド、クァシン、キナクリン、キニーネ、ラニチジン、硫酸スパルテイン５水和物、オクタ酢酸スクロース、ストリキニーネ、トラゾリン、トリル尿素、トラピジル（ｔｒａｐｉｄｉｌ）、およびトリメトプリム、ならびに構造上関連する化合物から選択される苦味リガンドとの前記ｈＴ２Ｒ１０の相互作用を遮断または抑制する化合物をスクリーニングする、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項５６】
前記ｈＴ２ＲはｈＴ２Ｒ１３であり、前記アッセイは、２−アセチルピラジン、アトロピン、クラリスロマイシン、安息香酸デナトニウム、ドキセピン、エチルピラジン、オレウロペイン（ｏｌｅｕｒｏｐｅｉｎ）、オキシフェノニウムＨＢｒ、およびキナクリン、ならびに構造上関連する化合物から選択される少なくとも１つの苦味リガンドとのｈＴ２Ｒ１３の相互作用を遮断または抑制する化合物をスクリーニングする、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項５７】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ１４であり、前記アッセイは、２−アセチルピラジン、アリストロキン酸、シクロオクタノン、デキサメタゾン、塩酸ジルチアゼム、２，６−ジメチルピペリジン、エリスロマイシン、エチルピラジン、ゴイトリン、グアイアコールグリセリルエーテル、１−メチル−２−キノリノン、メチルプレドニゾロン、ニトロフタレン、ニトロサッカリン、オレウロペイン（ｏｌｅｕｒｏｐｅｉｎ）、オメプラゾール、塩化オキシブチニン、Ｎ´−エチル−Ｎ´−フェニル尿素、２−ピコリン、ピクリン酸、キニーネ、ストリキニーネ、テオブロミン、トリル尿素、およびトラピジル（ｔｒａｐｉｄｉｌ）、ならびに構造上関連する化合物から選択される少なくとも１つの苦味リガンドとの前記ｈＴ２Ｒ１４の相互作用を遮断または抑制する化合物をスクリーニングする、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項５８】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ１６であり、前記アッセイは、２−アセチルピラジン、アミグダリン、アルブチン、リナマリン、およびＤ−（−）−サリシン、ならびに構造上関連する化合物から選択される少なくとも１つの苦味リガンドとの前記ｈＴ２Ｒ１６の相互作用を遮断または抑制する化合物をスクリーニングする、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項５９】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ４４であり、前記アッセイは、エチルピラジンおよび２−アセチルピラジン、ならびに構造上関連する化合物から選択される少なくとも１つの苦味リガンドとの前記ｈＴ２Ｒ４４の相互作用を遮断または抑制する化合物をスクリーニングする、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項６０】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ５０であり、前記アッセイは、２−アセチルピラジン、およびエチルピラジン、ならびに構造上関連する化合物から選択される少なくとも１つの苦味リガンドとのｈＴ２Ｒ５０の相互作用を遮断または抑制する化合物をスクリーニングする、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項６１】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ５１であり、前記アッセイは、クラリスロマイシン、エチルピラジン、ゴイトリン、ｎ−メチルチオ尿素、塩化オキシブチニン、Ｎ´−エチル−Ｎ´−フェニル尿素、２−ピコリン、フェニルチオカルバミド、６−ｎ−プロピル−２−チオウラシル、チオアセトアニリド、およびトリメトプリム、ならびに構造上関連する化合物から選択される少なくとも１つの苦味リガンドとの前記ｈＴ２Ｒ５１の相互作用を遮断または抑制する化合物をスクリーニングする、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項６２】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ５４であり、前記アッセイは、アセトアミノフェン、クロロキン、クラリスロマイシン、安息香酸デナトニウム、エピカテキン、エリスロマイシン、塩酸ラベタロール、１−メチル−２−キノリノン、オレウロペイン（ｏｌｅｕｒｏｐｅｉｎ）、オメプラゾール、塩化オキシブチニン、オキシフェノニウムＨＢｒ、ピレンゼピン二塩酸塩、プロカインアミド、ラニチジン、ストリキニーネ、トリメトプリム、およびＬ−トリプトファン、ならびに構造上関連する化合物から選択される少なくとも１つの苦味リガンドとのｈＴ２Ｒ５４の相互作用を遮断または抑制する化合物をスクリーニングする、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項６３】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ５５であり、前記アッセイは、ドキセピン、リナマリン、塩化オキシブチニン、キニーネ、およびストリキニーネ、ならびに構造上関連する化合物から選択される少なくとも１つの苦味リガンドとのｈＴ２Ｒ５５の相互作用を遮断または抑制する化合物をスクリーニングする、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項６４】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ６１であり、前記アッセイは、アセサルフェームＫ、アロイン、アリストロキン酸、カフェイン、クロラムフェニコール、クロロキン、安息香酸デナトニウム、ニトロサッカリン、塩化オキシブチニン、オキシフェノニウム臭化水素酸塩、ペプチド−ＬＰＦＮＱＬ（配列番号５１）、ペプチド−ＬＰＦＳＱＬ（配列番号５２）、ピクリン酸、サッカリン、およびストリキニーネ、ならびに構造上関連する化合物から選択される少なくとも１つの苦味リガンドとのｈＴ２Ｒ６１の相互作用を遮断または抑制する化合物をスクリーニングする、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項６５】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ６４であり、前記アッセイは、アセサルフェームＫ、アミノ−２−ノルボルナン−カルボン酸、アリストロキン酸、ガバペンチン、リナマリン、ロメフロキサシン、塩化オキシブチニン、オキシフェノニウムＨＢｒ、キニーネ、ラニチジン、サッカリン、ストリキニーネ、およびＬ−トリプトファン、ならびに構造上関連する化合物から選択される少なくとも１つの苦味リガンドとのｈＴ２Ｒ６４の相互作用を遮断または抑制する化合物をスクリーニングする、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項６６】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ６５であり、前記アッセイは、２−アセチルピラジン、エチルピラジン、および１−メチル−２−キノリノン、ならびに構造上関連する化合物から選択される苦味リガンドとのｈＴ２Ｒ６５の相互作用を抑制または遮断する化合物をスクリーニングする、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項６７】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ６７であり、前記アッセイは、２−アセチルピラジン、アンドログラフォリド、エチルピラジン、および塩化オキシブチニン、ならびに構造上関連する化合物から選択される少なくとも１つの苦味リガンドとのｈＴ２Ｒ６７の相互作用を遮断または抑制する化合物をスクリーニングする、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項６８】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ７１であり、前記アッセイは、ニトロサッカリンおよびピクリン酸、ならびに構造上関連する化合物から選択される少なくとも１つの苦味リガンドとのｈＴ２Ｒ７１の相互作用を遮断または抑制する化合物をスクリーニングする、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項６９】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ７５であり、前記アッセイは、アンドログラフォリド、アトロピン、ブルシン、４−ベンジルピペリジン、カフェイン、クロラムフェニコール、クロロキン、シンコニン、シプロフロキサシン、安息香酸デナトニウム、デキサメタゾン、ドキセピン、マレイン酸エナラプリル、エノキサシン、エリスロマイシン、エチルピラジン、ギンゴライドＡ、ゴイトリン、塩酸ラベタロール、ロメフロキサシン、（−）ルピニン、１−メチル−２−キノリノン、メチルプレドニゾロン、オフロキサシン、オメプラゾール、塩化オキシブチニン、オキシフェノニウム臭化水素酸塩、ピレンゼピン二塩酸塩、プレドニゾン、プロカインアミド、クァシン、キニーネ、ラニチジン、硫酸スパルテイン５水和物、ストリキニーネ、スルファメトキサゾール、トラゾリン、トラピジル（ｔｒａｐｉｄｉｌ）、およびトリメトプリム、ならびに構造上関連する化合物から選択される少なくとも１つの苦味リガンドとのｈＴ２Ｒ７５の相互作用を遮断または抑制する化合物をスクリーニングする、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項７０】
前記ｈＴ２Ｒは、ｈＴ２Ｒ７６であり、前記アッセイは、ブルシン、および構造上関連する化合物から選択される苦味リガンドとのｈＴ２Ｒ７６の相互作用を遮断または抑制する化合物をスクリーニングする、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項７１】
ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で、配列番号３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７のいずれかに含まれるＤＮＡ配列、または配列番号４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、および４８のいずれかに含まれるポリペプチド配列に特異的にハイブリダイズする核酸配列を有するＴ２Ｒポリペプチドを発現する、単離味覚または胃腸細胞。
【請求項７２】
前記細胞は、配列番号１３または１５に含まれる、ｈＴ２Ｒ９ＶまたはｈＴ２Ｒ９ＡのＤＮＡ配列を含む、請求項７１に記載の単離味覚または胃腸細胞。
【請求項７３】
ヒトＴ２Ｒを調節する化合物を同定する方法であって、請求項７１または７２に記載の味覚または胃腸細胞を、潜在的Ｔ２Ｒ調節化合物と接触させるステップと、前記化合物がそこに発現したＴ２Ｒの活性と特異的に結合するおよび／または調節するかどうか、および／または別の化合物による前記ヒトＴ２Ｒの特異的結合または活性化に影響するかどうかを検出するステップと、を含む、方法。
【請求項７４】
Ｔ２Ｒ９ＡまたはＴ２Ｒ９Ｖ表現型を有する個人をスクリーニングする方法であって、個人の遺伝子検査を行うステップと、前記個人が、配列番号１５に含まれるｈＴ２Ｒ９Ａ配列、または配列番号１３に含まれるｈＴ２Ｒ９Ｖ配列を含むかどうかを判定するステップと、を含む方法。
【請求項７５】
配列番号１５または１３に記載のＴ２Ｒ９ＡまたはＴ２Ｒ９Ｖ配列を発現する細胞を、推定Ｔ２Ｒ９ＡまたはＴ２Ｒ９Ｖ調節化合物と接触させるステップと、前記Ｔ２Ｒ９ＡまたはＴ２Ｒ９Ｖの活性を調節する化合物を検出するステップと、を含む、スクリーニングアッセイ。
【請求項７６】
Ｔ２Ｒ９ハプロタイプの発現と関連する差異を検出する方法であって、ｈＴ２Ｒ９Ａと特異的に結合および／またはそれを活性化するが、ｈＴ２Ｒ９Ｖには特異的に結合および／またはそれを活性化しない、または、その逆の化合物を同定するステップを含む、方法。
【請求項７７】
ｈＴ２Ｒ９ＡあるいはｈＴ２Ｒ９Ｖのいずれかを発現する細胞を接触させるステップと、前記ｈＴ２Ｒ９配列のいずれかを特異的に活性化する化合物を同定するステップと、生体内でその効果を判定するステップと、を含む、Ｔ２Ｒリガンドスクリーニングアッセイ。
【請求項７８】
舌または胃腸系における細胞により現された、Ｔ２Ｒの効果を含む、味覚および／または胃腸もしくは消化機能への前記リガンドの効果を検査するステップをさらに含む、請求項７７に記載のアッセイ。
【請求項７９】
前記細胞は、腸管内分泌細胞である、請求項７８に記載のアッセイ。
【図１】
【図２−１】
【図２−２】
【図２−３】
【図３−１】
【図３−２】
【図４】
【図５】
【図２−１】
【図２−２】
【図２−３】
【図３−１】
【図３−２】
【図４】
【図５】
【公表番号】特表２０１０−５０８０４１（Ｐ２０１０−５０８０４１Ａ）
【公表日】平成２２年３月１８日（２０１０．３．１８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５３５３４５（Ｐ２００９−５３５３４５）
【出願日】平成１９年１１月１日（２００７．１１．１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０２３２３０
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０５７４７０
【国際公開日】平成２０年５月１５日（２００８．５．１５）
【出願人】（５０７２６７９２０）セノミクス・インコーポレーテッド (7)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年３月１８日（２０１０．３．１８）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年１１月１日（２００７．１１．１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０２３２３０
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０５７４７０
【国際公開日】平成２０年５月１５日（２００８．５．１５）
【出願人】（５０７２６７９２０）セノミクス・インコーポレーテッド (7)
【Ｆターム（参考）】
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