ビオチン残基を含む抗血栓性デュアルインヒビター
【課題】手術の終わりに抗血栓／抗凝血活性を停止出来る抗血栓／抗凝血薬に対する中和剤の提供。
【解決手段】五糖が直接的トロンビン阻害剤に結合した抗血栓性化合物に下記基
を結合または導入した抗血栓性デュアルインヒビターに対するアビジン又はストレプトアビジンを含む中和剤。
【解決手段】五糖が直接的トロンビン阻害剤に結合した抗血栓性化合物に下記基
を結合または導入した抗血栓性デュアルインヒビターに対するアビジン又はストレプトアビジンを含む中和剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ビオチン残基またはビオチン誘導体を含む新しい抗血栓性デュアルインヒビター、これらの調製方法、これらの化合物を活性成分として含有する医薬組成物、ならびに医薬の製造のための前記化合物の使用、に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヘパリンと比較して同様のまたはより優れた抗血栓性を示す合成活性医薬物質の研究における最近の進歩は、例えば国際公開第９９／６５９３４号および国際公開第０１／４２２６２号に記載されているような新しいデュアルインヒビターの設計をもたらした。これらの化合物は一般に、本質的に薬理学的に不活性なスペーサーによってオリゴ糖残基を、直接的トロンビン阻害剤に結合した共役体である。分子内のオリゴ糖残基は、アンチトロンビンＩＩＩ（ＡＴ−ＩＩＩ）介在抗Ｘａ活性を示す。従って、新しい共役体は、抗血栓性および抗凝血性のデュアルアクティビティーを示す。
【０００３】
デュアルインヒビターの新しい分類の優れた例には、五糖が直接的トロンビン阻害剤に結合したコード名Ｏｒｇ４２６７５で示される化合物があるが、この化合物は、以下の構造：
【０００４】
【化１】
を有する。実験的血栓症の研究は、この化合物が強力な抗凝血性および抗血栓性に加えて、血栓結合のトロンビンの活性をも阻害することを実証した。さらに、Ｏｒｇ４２６７５は、閉塞性動脈血栓の血栓溶解に続く、血栓再閉塞の予防において高度に有効であると考えられる。この化合物は、対応する、ＮＡＰＡＰから誘導される非共役型直接的トロンビン阻害剤と比較して１０倍長い半減期を示す。アルガトロバン、ヘパリンおよびフォンダパリヌクスと比較して、Ｏｒｇ４２６７５は、改善された有効性を示した（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ ａｎｄ Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ， Ｖｏｌｕｍｅ １， Ｉｓｓｕｅ ９， Ｐａｇｅ １９４５ ， ２００３）。新しいデュアルインヒビターの臨床的可能性は、大きいと考えられ、従って、臨床試験がすでに開始されている。
【０００５】
予防措置として、抗凝血治療および抗血栓治療の分野内において、用いられる抗凝血薬または抗血栓薬の活性を効果的に中和または最小化することができる解毒薬に対する必要性が存在する。なぜなら、これは、治療中の患者において、いずれかの不慮の原因により出血が引き起こされ得ることはよく知られているからである。さらに、抗血栓治療または抗凝血治療中の患者に外科的な介入が必要とされ得る。また、いくつかの外科的手順の間、血液凝固を防止するために抗凝血薬を高い投与量で用いることができるが、手術の終わりにそれらを中和する必要がある。従って、いかなるときでも抗血栓／抗凝血活性を停止するために中和することができる抗血栓／抗凝血薬を入手するのは、好都合である。米国特許出願公開第２００４／００２４１９７号明細書において、緊急の場合に一定の多糖類の抗血栓活性を、これらの多糖類が少なくとも１つのビオチンまたはビオチン誘導体との共有結合を含有する場合、アビジンを用いて低減することができることが開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】国際公開第９９／６５９３４号
【特許文献２】国際公開第０１／４２２６２号
【特許文献３】米国特許出願公開第２００４／００２４１９７号明細書
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ ａｎｄ Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ， Ｖｏｌｕｍｅ １， Ｉｓｓｕｅ ９， Ｐａｇｅ １９４５ ， ２００３
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、国際公開第９９／６５９３４号および国際公開第０１／４２２６２号に記載されているデュアルインヒビターから誘導される新規の中和可能なデュアルインヒビターに関する。本明細書中では「ＢＴ」（これは、ヘキサヒドロ−２−オキソ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−ペンタン酸から誘導される。好ましくはＤ（＋）−異性体）と呼ぶ基である一定のビオチン「標識」：
【０００９】
【化２】
またはこの類似体を、国際公開第９９／６５９３４号および国際公開第０１／４２２６２号に記載されている化合物の構造中に結合するまたは導入することができ、これにより中和可能なデュアルインヒビターが得られる。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
したがって、本発明は、式（Ｉ）：
【００１１】
【化３】
［式中、オリゴ糖は２から２５単糖単位を含む負荷電のオリゴ糖残基であり、前記荷電は、正荷電の対イオンにより相殺され、前記オリゴ糖残基は、それ自体が（ＡＴ−ＩＩＩ介在性）抗Ｘａ活性を有するオリゴ糖から誘導され；
スペーサーは、１０から７０原子の鎖長を有する、本質的に薬理学的に不活性な屈曲性連結残基であり；
Ａは、残基−ＣＨ［ＮＨ−ＳＯ２−Ｒ１］［ＣＯ−ＮＲ２−ＣＨ（４−ベンズアミジン）−ＣＯ−ＮＲ３Ｒ４］｛式中、Ｒ１は、フェニル、ナフチル、１，２，３，４−テトラヒドロナフチル、（イソ）キノリニル、テトラヒドロ（イソ）キノリニル、３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリニル、クロマニルまたは樟脳基であり、これらの基は（１−８Ｃ）アルキルまたは（１−８Ｃ）アルコキシから選択される１つ以上の置換基で場合により置換されていてよく、Ｒ２およびＲ３は独立してＨまたは（１−８Ｃ）アルキルであり；Ｒ４は（１−８Ｃ）アルキルまたは（３−８Ｃ）シクロアルキルであり；またはＲ３およびＲ４は、それらが結合している窒素原子と一緒に、もう１つのヘテロ原子を場合により含有する非芳香族（４から８）員環を形成し、この環は（１−８Ｃ）アルキルまたはＳＯ２−（１−８Ｃ）アルキルで場合により置換されている。｝である。］
の化合物であり、ここで、前記式Ｉの化合物が、さらに、ビオチン残基またはこの類似体との少なくとも１つの共有結合を含む、前記化合物、またはこれらの薬学的に許容できる塩、プロドラッグまたはこれらの溶媒和物に関する。
【００１２】
本発明の化合物は、デュアルインヒビターであり、これは、非介在性直接的アンチトロンビン（ＩＩａ因子）活性および抗トロンビンＩＩＩ（ＡＴ−ＩＩＩ）介在性抗Ｘａ活性の両方の調整可能な混合プロフィールを有する。本発明の化合物の混合プロフィールは、オリゴ糖残基の性質および直接的トロンビン阻害剤（ＮＡＰＡＰ類似体）の効力を変化させることにより調整することができる。これにより、一連のプロフィールが入手可能である。本発明の化合物は、長い血漿中半減期を有し、その結果、本発明の化合物は従来の文献に報告されているＮＡＰＡＰまたはこの誘導体と比較して延長されたアンチトロンビン活性を有する。また、本発明の化合物は、血小板第４因子（ＰＦ４）の中和作用を免れることができる。低毒性もまた、本発明の化合物の有利な態様である。
【００１３】
本発明の化合物は、トロンビン介在性のおよびトロンビン関連の疾患の治療および予防に対して有用である。これは、凝固カスケードが活性化される、多くのトロンビン状態およびプロトロンビン状態を含み、これらは、深部静脈血栓症、肺塞栓症、血栓性静脈炎、血栓症または塞栓症由来の動脈閉塞、血管形成術または血栓溶解の期間中または期間後の動脈再閉塞、動脈損傷または侵襲的心臓病学的措置後の再狭窄、術後の静脈血栓症または塞栓症、急性または慢性の粥状動脈硬化症、発作、心筋梗塞、癌および転移、ならびに神経変性疾患を含むが、これらに限定されるものではない。本発明の化合物はまた、透析および外科手術において必要なものとして、体外血液回路における抗凝血薬としても用いることができる。本発明の化合物はまた、インビトロでの抗凝血薬としても用いることができる。
【００１４】
本発明の化合物におけるビオチン標識（またはこの類似体）は、特定の解毒薬であるアビジン（Ｔｈｅ Ｍｅｒｃｋ Ｉｎｄｅｘ，Ｔｗｅｌｆｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９６，Ｍ．Ｎ． ９２０，ｐａｇｅｓ１５１−１５２）またはストレプトアビジン（これは、ビオチンに対して大変高い親和性を有し、それぞれの質量が、約６６０００および６００００Ｄａに等しい、２つの四量体タンパク質である。）に速やかに認識され、該特定の解毒薬に結合する。従って非常の場合には、デュアルインヒビターの作用は、アビジンまたはストレプトアビジンを用いて、例えばこれらを含有する医薬溶液の注射によりすばやく中和することができる。高いビオチン親和性を有するアビジンおよびストレプトアビジンの類似体も、同様に用いることができる。得られた不活性な解毒薬−阻害剤複合体は、血液循環から取り除かれる。
【００１５】
本発明による標識として用いることができるビオチン類似体は、例えばヘキサン酸６−ビオチンアミド、ヘキサン酸６−（６−ビオチンアミドヘキサンアミド）および２−ビオチンアミドエタンチオールなどの、Ｐｉｅｒｃｅ社カタログ（１９９９−２０００、６２から８１ページ）に記載されているビオチン類似体から選択できるが、これらに限定されるものではない。このような類似体において、ビオチン残基ＢＴは、前記で定義したように分子の特徴的な部分である。他の類似体は、例えばビオチンアミド結合部位でアルキル化（ここで、アルキルは、（１−４Ｃ）アルキル、好ましくはメチルである。）され、ビオチニダーゼ分割（Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．１１，２０００，５６９−５８３；Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．１１，２０００，５８４−５９８）に対して安定なビオチン類似体、またはＢｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．１２，Ｎｏ．４，２００１，６１６−６２３に記載されているようなビオチンアミド結合のα位に、例えばヒドロキシメチレン、カルボキシレート、またはアセテートを含む他のビオチン類似体である。
好ましいビオチン類似体の残基は、式：−（ＮＨ−ＣＯ）ｎ−（ＣＨ２）ｐ−ＮＲ−ＢＴ（式中、ｎは０または１（特にｎは、０である。）であり、ｐは４または５（特にｐは、４である。）であり、Ｒ＝Ｈまたは（１−４Ｃ）アルキルであり、ＢＴは前記に定義した通りである。）を有する。好ましい実施形態において、ＲはＨである。
【００１６】
対応する非ビオチン化化合物との比較研究において、本発明のデュアルインヒビターへのビオチン標識の導入が、本質的にこれらの直接的トロンビン阻害効力もこれらのアンチトロンビンＩＩＩ（ＡＴ−ＩＩＩ）介在性の抗Ｘａ因子活性も妨害しないことが見いだされた。また、式Ｉの化合物の抗血栓活性は、アビジンまたはストレプトアビジンの投与時に（本質的に）完全に中和される。
【００１７】
いずれかの２から２５単糖単位の負荷電のオリゴ糖残基は、本発明の化合物において使用可能である。適した本発明の化合物は、オリゴ糖が硫酸化オリゴ糖残基である化合物である。好ましくは、オリゴ糖残基は、欧州特許出願公開第０，４５４，２２０号明細書、欧州特許出願公開第０，５２９，７１５号明細書、国際公開第９７／４７６５９号、第９８／０３５５４号、第９９／３６４４３号および第９９／３６４２８号に開示されているオリゴ糖などの、それ自身（ＡＴ−ＩＩＩ介在性）抗Ｘａ活性を有するオリゴ糖から誘導される。さらに好ましいのは、２から１６、特に２から６単糖単位を有するオリゴ糖残基である。最も好ましくは、オリゴ糖は、硫酸化五糖残基である。好ましい五糖残基は、式（ＩＩ）：
【００１８】
【化４】
（式中、Ｒ５は、独立してビオチン残基もしくはこの類似体、ＯＳＯ３−または（１−８Ｃ）アルコキシである。）、
を有する。好ましい五糖残基において、硫酸基の総数は、４、５、６または７である。
【００１９】
好ましい本発明による化合物は、五糖残基が構造：
【００２０】
【化５】
（式中、Ｒ５は、ＯＣＨ３またはＯＳＯ３−である。）
を有する、化合物である。
【００２１】
特に好ましい五糖残基は、
【００２２】
【化６】
である。
【００２３】
さらに好ましい本発明の化合物は、式Ｉ：（式中、Ｒ１は、メチルまたはメトキシから選択される１つ以上の置換基で場合によって置換されていてもよいフェニルまたはナフチルである。）の化合物である。より好ましくは、Ｒ１は、４−メトキシ−２，３，６−トリメチルフェニルである。好ましい化合物において、ＮＲ３Ｒ４は、ピペリジニル基をあらわす。好ましくは、Ｒ２はＨである。
【００２４】
スペーサーは、本質的に薬理学的不活性な屈曲性連結残基であり、好ましくは、該スペーサーは、オリゴ糖残基の酸素を含めないでスペーサーの「主鎖」に沿って数えて１０から５０原子を有する。さらに、好ましいのは、１３から２５原子の長さであり、好ましくは１６から２２原子の長さであり、最も好ましくは１９原子の長さである。
スペーサーの化学的性質は、本発明の化合物の抗血栓活性にとってあまり重要ではない。スペーサーは、環構造および不飽和結合などの（いくらか）強固な要素を含むことができる。高度に屈曲性のスペーサーは、他のものよりも、より適する。適したスペーサーは、当業者により容易に設計され得る。合成上の理由により、より長いスペーサーは、より不適切と考えられるが、それでも、より長いスペーサーは、本発明の化合物において首尾よく適用することができる。好ましいスペーサーは、少なくとも１つの−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）−要素を含む。
【００２５】
本発明による好ましい化合物はビオチン残基またはこの類似体との１つの共有結合を含む。
ビオチン（またはこの類似体）標識は、式Ｉの化合物のあらゆる部分において存在し得る。従って、本発明の実施形態は、（ａ）式Ｉの化合物のオリゴ糖残基が、ビオチン残基またはこの類似体との共有結合を含み、（ｂ）式Ｉの化合物のスペーサーが、ビオチン残基またはこの類似体との共有結合を含み、および（ｃ）式Ｉの化合物の残基Ａがビオチン残基またはこの類似体との共有結合を含む（これは、Ａの定義における水素原子または置換基がビオチン残基により置換されていることを意味する。）、化合物である。
【００２６】
本発明のビオチン化デュアルインヒビターの代表例としては、
【００２７】
【化７】
および
【００２８】
【化８】
ならびにこれらの塩類ばかりでなく、式Ｉの化合物：（式中、スペーサーが、もう１つの部位でオリゴ糖に結合している。）および／またはビオチン（類似体）残基が分子の他の部位に存在する化合物、を挙げることができる。好ましいのは、ナトリウム塩である。
式ＩＩＩの化合物は、本発明の１つの好ましい例である。
【００２９】
式（Ｉ）の化合物の記載において、以下の定義が用いられる。
用語「（１−４Ｃ）アルキルおよび（１−８Ｃ）アルキル」は、各々１から４および１から８の炭素原子を有する分枝したまたは分枝していないアルキル基（例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ヘキシルおよびオクチル）を意味する。メチルおよびエチルは、好ましいアルキル基である。
用語「（１−８Ｃ）アルコキシ」は、アルキル部分が前記で定義した意味を有する、１から８の炭素原子を有するアルコキシ基を意味する。メトキシは、好ましいアルコキシ基である。
用語「（３−８Ｃ）シクロアルキル」は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチルまたはシクロオクチルである３から８の炭素原子を有するシクロアルキル基を意味する。シクロペンチルおよびシクロヘキシルは、好ましいシクロアルキル基である。
スペーサーの長さは、スペーサーに結合しているオリゴ糖残基の酸素原子は数に入れずに、オリゴ糖残基と分子のペプチド部分との間の最も短い鎖に沿って数えたスペーサーの原子数である。
用語「プロドラッグ」は、例えばアミジノ部分のアミノ基が、例えばヒドロキシまたは（１から６Ｃ）アルコキシカルボニル基により保護された本発明の化合物を意味する。
本発明による溶媒和物は、水和物を含む。
【００３０】
ビオチン残基を式Ｉの化合物に結合させる合成方法に関して、化学文献は、利用することができるいくつかの可能性を提供し、これにより、当業者によく知られている一連の保護基が、使用され得る。例えば活性化エステル、マレイミド、ヨードアセチルまたは一級アミン型の反応性基を含むビオチン残基は、好ましくはアミン官能基、またはチオール官能基、またはカルボン酸官能基、またはアルデヒド官能基と反応させるが、該反応は、文献（Ｓａｖａｇｅ ｅｔ ａｌ．，Ａｖｉｄｉｎ−Ｂｉｏｔｉｎ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ａ Ｈａｎｄｂｏｏｋ；Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９２を参照のこと）に記載された条件に従って行われる。
ビオチン残基は、例えば（負荷電の）オリゴ糖残基に直接に結合させることができるし、または場合によりオリゴ糖−スペーサー残基のＮ−（１−４Ｃ）アルキル化アミノ官能基を介してまたは場合によりＮ−（１−４Ｃ）アルキル化アミノ酸残基を介して、場合により式Ｉの化合物のオリゴ糖残基のＮ−（１−４Ｃ）アルキル化アミン官能基に結合させることができる。
【００３１】
本発明のもう１つの態様において、ビオチン残基は、例えば残基Ａに直接に結合させることができ、または場合により連結残基のＮ−（１−４Ｃ）アルキル化アミノ官能基を介してまたは場合によりＮ−（１−４Ｃ）アルキル化アミノ酸残基を介して、場合により式Ｉの化合物の残基ＡのＮ−（１−４Ｃ）アルキル化アミン官能基に結合させることができる。
【００３２】
さらに本発明のもう１つの態様において、ビオチン残基は、例えば第１に残基Ａに直接結合させるか、または場合により式Ｉのスペーサーの一部のＮ−（１−４Ｃ）アルキル化アミノ官能基を介してまたは場合によりＮ−（１−４Ｃ）アルキル化アミノ酸残基を介して場合により式Ｉの化合物の残基ＡのＮ−（１−４Ｃ）アルキル化アミン官能基に結合させ、および第２にオリゴ糖に直接結合させるか、または場合により式Ｉのスペーサーの一部分のＮ−（１−４Ｃ）アルキル化アミノ官能基を介してまたは場合によりＮ−（１−４Ｃ）アルキル化アミノ酸残基を介して場合により式Ｉの化合物の（負荷電の）オリゴ糖のＮ−（１−４Ｃ）アルキル化アミン官能基に結合させることにより、あるいは逆もまた同様にして、段階的に導入することができる。
【００３３】
本発明のもう１つの態様において、場合により、［Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．１２，Ｎｏ．４，２００１，６１６−６２３］に記載されているようなＮ−アルキル化アミノ酸残基またはα−Ｎ−置換（β−）アミノ酸類似体を、当分野で知られている方法を用いペプチド結合により導入することができる。アジド基は、それに続くビオチン残基の導入のために式Ｉの化合物の前駆体中に用いることのできる、適した潜在的なアミン官能基である。
【００３４】
式Ｉの化合物の好ましい調製方法は、残基Ａにおけるベンズアミジン部分が、前駆体、好ましくは１，２，４−オキサジアゾリン−５−オン基の形態であり、ついでこれを脱保護、特に水素化によりベンズアミジンに転換する段階を含む（Ｂｏｌｔｏｎ，Ｒ．Ｅ． ｅｔ ａｌ，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ，Ｖｏｌ３６，Ｎｏ．２５，１９９５，ｐｐ ４４７１−４４７４）。
【００３５】
本発明の化合物はさらに、ＮＡＰＡＰ（またはＮＡＰＡＰ類似体）を、一般に当分野で知られている方法を用いて、グリシン部位において、システインまたはリジンまたはアスパラギン酸で誘導体化し、ついでこの化合物を、（ａ）オリゴ糖−スペーサー残基に結合させ、または（ｂ）スペーサーに結合させ、次にこれをチオール官能基またはカルボン酸官能基で誘導体化し、その後オリゴ糖残基とカップリングさせることによって調製する。この目的のために、例えば文献（例えば、欧州特許出願公開第０，４５４，２２０号明細書および欧州特許出願公開第０，５２９，７１５号明細書であるが、これらの出所に限定されない）に公知のオリゴ糖類または市販のオリゴ糖類などのいずれかの適したオリゴ糖が、使用され得る。オリゴ糖へのスペーサーの結合は、例えば欧州特許出願公開第０，６４９，８５４号明細書に記載されている方法を用いて実施することができる。
【００３６】
本発明の化合物を調製するための上記方法における１つの手順段階であるペプチド結合は、ペプチド断片の結合（または縮合）のための当分野で一般に知られている方法（アジド法、混合酸無水物法、活性エステル法、カルボジイミド法など）により、または好ましくはＴＢＴＵのようなアンモニウム／ウロニウム塩の影響下で、特にＮ−ヒドロキシコハク酸イミド、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾールおよび７−アザ−Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾールのような触媒作用のおよびラセミ化抑制化合物の添加で実施することができる。概要は、Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ ３，Ｅ．Ｇｒｏｓｓ ａｎｄ Ｊ．Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ，ｅｄｓ．（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８１）およびＰｅｐｔｉｄｅｓ：Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｎ．Ｓｅｗａｌｄ ａｎｄ Ｈ．−Ｄ．Ｊａｋｕｂｋｅ（Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，Ｗｅｉｎｈｅｉｍ，２００２）に記載されている。
【００３７】
化合物内に存在するアミン官能基は、Ｎ−保護基による合成手順の間に保護することができるが、このＮ−保護基は、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）基、ベンジルオキシカルボニル（Ｚ）基、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）基またはフタロイル（Ｐｈｔｈ）基のようなα−アミノ基の保護のためにペプチド化学において一般に用いられる基を意味する、またはアジド部分のデマスキングにより導入することができる。アミノ保護基およびそれらを除去するための方法の概要は、上記のＴｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ ３およびＰｅｐｔｉｄｅｓ：Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙに記載されている。
【００３８】
本発明の化合物は、遊離塩基の形態で生じ得、薬学的に許容できる塩の形態で反応混合物から単離することができる。薬学的に許容できる塩類はまた、式（Ｉ）の遊離塩基を、塩化水素、臭化水素、ヨウ化水素、硫酸、リン酸、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、マレイン酸、マロン酸、メタンスルホン酸、フマル酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、アスコルビン酸などの有機または無機酸で処理することにより得ることもできる。
【００３９】
本発明の化合物またはこれらの中間体は、不斉炭素原子を有し、従って、純粋な鏡像異性体、または鏡像異性体の混合物、またはジアステレオマーを含む混合物として得ることができる。純粋な鏡像異性体を得る方法は、当分野において周知であり、これらは、例えば光学活性酸およびラセミ混合物とから得られる塩の結晶化、またはキラルカラムを用いるクロマトグラフィーである。ジアステレオマーに関しては、順相または逆相のカラムを用いることができる。
【００４０】
本発明の化合物は、経腸的にまたは非経口的に投与することができる。これらの化合物およびこれらの組成物の正確な投与量および投与計画は、医薬が投与される予定の個々の患者の必要性、苦痛の程度または医師の必要性および判断によって必然的に決まる。一般に、非経口投与法は、吸収により多く依存する他の投与方法よりも低めの投与量を必要とする。しかしながら、ヒトに対する一日量は、好ましくは０．００１から１００mg／体重kgであり、より好ましくは０．０１から１０mg／体重kgである。
【００４１】
本発明の化合物を用いて製造される医薬は、急性の抗凝固療法におけるアジュバントとしても用いることができる。このような場合、本医薬は、このような症状の治療に有用な他の化合物と共に投与される。
【００４２】
例えば、標準的な参照文献である、Ｇｅｎｎａｒｏ ｅｔ ａｌ．，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１８ｔｈ ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９０，特にＰａｒｔ ８：Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｅを参照のこと）中に記載されているような、薬学的に適した補助剤と混合して、本化合物は、例えばピル、錠剤などの固体の投与単位に圧縮するか、またはカプセルもしくは座剤に加工することができる。薬学的に適した液体を用いて、化合物は、例えば注射製剤として用いるために、または例えば点鼻スプレーなどのスプレーとして用いるために溶液、懸濁液、乳濁液の形態で投与することもできる。
【００４３】
例えば錠剤などの投与量単位を製造するために、充填剤、着色剤、ポリマー結合剤などの通常の添加剤の使用が考えられる。一般に、活性化合物の機能を妨害しないいずれかの薬学的に許容できる添加剤も用いることができる。組成物を共に用いて投与することのできる適した担体は、適した量で用いられるラクトース、デンプン、セルロース誘導体などまたはこれらの混合物を含む。
【図面の簡単な説明】
【００４４】
【図１】本発明のビオチン化化合物ＩＩＩ（「ビオチン」）の１００nmol／kgを皮下投与した後の抗Ｘａ因子または抗ＩＩａ因子活性の測定により決定される平均血漿中濃度を示す図である。また、Ｏｒｇ４２６７５（「オリジナル」）の血漿中濃度は、抗Ｘａ因子活性の測定後に得られる。
【図２】１００nmol／kgの化合物の皮下投与後の平均血漿中濃度±標準誤差を示す図である。ｔ＝２ｈの時点でアビジン（１０mg／kg）を、本発明の化合物ＩＩＩ（「ビオチン」）またはＯｒｇ４２６７５（「オリジナル」）で処理したラットに静脈内投与した。本発明の化合物ＩＩＩの薬物動態学的挙動は、オリジナル化合物の挙動とは対照的に、アビジンの投与により影響を受ける。
【００４５】
本発明は、さらに以下の実施例によって例示される。
【００４６】
（実施例）
使用した略語
Ａｑ．＝水性の
ＡＴＩＩＩ＝アンチトロンビンＩＩＩ
Ｂｏｃ＝ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル
ＤＣＭ＝ジクロロメタン
ＤｉＰＥＡ＝Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ＝Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
Ｅｔ＝エチル
ｆｍｏｃ＝９−フルオレニルメトキシカルボニル
ＮＭＭ＝Ｎ−メチルモルホリン
Ｍｅ＝メチル
ｓａｔ．＝飽和した
ＰＲＰ＝多血小板血漿
ＰＰＰ＝貧血小板血漿
ＲＴ＝室温
ＴＢＴＵ＝テトラフルオロホウ酸２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム
ＴＦＡ＝トリフルオロ酢酸
ＴΗＦ＝テトラヒドロフラン
【実施例１】
【００４７】
図式１
Ｎε−（Ｄ−（＋）−ビオチニル）−Ｎ−｛４−［［４−［［（１Ｒ）−１−［［４−（１，２，４−オキサジアゾール−５−オニル）フェニル］メチル］−２−オキソ−２−（１−ピペリジニル）エチル］アミノ］−３−［［（４−メトキシ−２，３，６−トリメチルフェニル）スルホニル］アミノ］−１，４−（Ｓ）−ジオキソ−ブチル］アミノ］−ブタノイル｝−Ｌ−リジン（３）
国際公開第０１／４２２６２号に記載されているようにして調製された化合物２（０．２０ｇ，０．２７mmol）をＤＣＭ（１０mL）中に溶解した。ＤｉＰＥＡ（０．１４mL，０．８１mmol）を加え、ついでＴＢＴＵ（８６mg，０．２７mmol）を加えた。窒素雰囲気下で１時間撹拌後、化合物１（Ｎε−ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ−ＯＨ，０．２７mmol，Ｆｌｕｋａ）を固体として加えた。ＤＭＦ（５mL）を加えて（Ｎε−ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ−ＯＨを溶解した。混合物を１６時間撹拌し、０．５Ｎ ＨＣｌ溶液中に注いだ。溶液をＤＣＭ（３×）で抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、減圧下（８５０mbar，４５℃）で濃縮した。粗生成物を、シリカカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＡｃＯＨ，９９／０／１→８９／１０／１，ｖ／ｖ／ｖ）で精製した。残ったＡｃＯＨはトルエン中で繰り返し濃縮して除去した。さらに精製をＨＰＬＣクロマトグラフィー（ＡＣＮ／Ｈ２Ｏ／０．１Ｎ ＴＦＡ，２０：７８：３→９５：２：３）で完成させて、純粋な化合物の０．１５ｇ（５３％）を得た。ＴＬＣ：Ｒｆ０．５（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＡｃＯＨ，９０／９／１，ｖ／ｖ／ｖ）。ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ１０８９［Ｍ＋Ｈ］１＋。
ｆｍｏｃ保護中間体（０．１５ｇ，０．１４mmol）をＴＨＦ（５mL）中に溶解し、Ｅｔ２ＮＨ（２mL）を加えた。混合物を４５℃で４５分間撹拌した。溶液を減圧下で濃縮し、トルエン中で濃縮した。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ８５７［Ｍ＋Ｈ］１＋。
Ｎε−脱保護リジン誘導体（０．１４mmol）をＤＭＦ（３mL）中に溶解し、窒素雰囲気下で１時間撹拌しておいたＤ−（＋）−ビオチン（３４mg，１当量）、ＴＢＴＵ（４５mg，１当量）およびＤｉＰＥＡ（６１ｕＬ，２．５当量）のＤＭＦ（４mL）中の溶液に加えた。得られた混合物を１６時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去した。ＥｔＯＡｃ（３０mL）を加え、撹拌した。固形生成物３を濾過により収集し、ＭｅＯＨおよびＥｔＯＡｃで洗浄し、真空中で乾燥した。収量８６mg（５７％）。Ｒｆ０．１５（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ，９／１，ｖ／ｖ）。ＥＳＩ−ＭＳ：１０８３．６［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００４８】
化合物ＩＩＩおよびＩＶの一般的調製方法
カルボン酸誘導体（３３μmol）（すなわち化合物３または１１）を乾燥ＤＭＦ（２×２mL）中で繰り返し濃縮することにより乾燥し、ＤＭＦ（１mL）中に溶解し、Ｎ２雰囲気下、ＴＢＴＵ（１１mg，３３μmol）およびＤｉＰＥＡ（５．７μＬ，３３μmol）の存在下で撹拌した。１時間後、五糖４（３１μmol）を加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌し、イオン交換（Ｍｏｎｏ−Ｑ）クロマトグラフィーで分析した。反応混合物を濃縮（＜５０℃，１５mmHg）した。（粗）生成物（１０mg／mLのＨ２Ｏ／ｔ−ＢｕＯＨ溶液，１／１，ｖ／ｖ）を１０％Ｐｄ／Ｃ（粗生成物に対して等しい重量）上での水素化（Ｈ２）により脱保護した。１６時間後、溶液を脱気し０．４５μM ＨＰＬＣフィルター上で濾過し、減圧下（＜５０℃，１５mmHg）で濃縮した。この共役体をイオン交換クロマトグラフィー（Ｑ−セファロース，緩衝液：Ｈ２Ｏ→２Ｍ ＮａＣｌ）により精製し、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ２５−カラム（Ｈ２Ｏ）で脱塩し、凍結乾燥した。
【００４９】
メチルＯ−２，３−ジ−Ｏ−メチル−４−Ｏ−＜＜＜１２−Ｎ−＜＜Ｎε−（Ｄ−（＋）−ビオチニル）−Ｎ−＜）］−｛４−［［４−［［（１Ｒ）−１−［［４−（アミノイミノメチル）フェニル］メチル］−２−オキソ−２−（１−ピペリジニル）エチル］アミノ］−３−［［（４−メトキシ−２，３，６−トリメチルフェニル）スルホニル］アミノ］−１，４−（Ｓ）−ジオキソ−ブチル］アミノ］−ブタノイル｝−Ｌ−リシル＞＞−１２−アザ−３，６，９−トリオキサ−ドデシル＞＞＞−６−Ｏ−スルホ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１−＞４）−Ｏ−２，３−ジ−Ｏ−メチル−β−Ｄ−グルコピラヌロノシル−（１−＞４）−Ｏ−２，３，６−トリ−Ｏ−スルホ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１−＞４）−Ｏ−２，３−ジ−Ｏ−メチル−α−Ｌ−イドピラヌロノシル−（１−＞４）−３−Ｏ−メチル−２，６−ジ−Ｏ−スルホ−α−Ｄ−グルコピラノシドオクタキスナトリウム塩（ＩＩＩ）
化合物３（８６mg，８１μmol）を化合物４（０．１４ｇ，８０μmol）（国際公開第０１／４２２６２号に記載されているようにして調製した）と一般的手順に従って結合させることにより、化合物ＩＩＩを、調製し精製した。収量０．１４ｇ（６０％）。ＥＳＩ／ＴＯＦ−ＭＳ：８８０．９１［Ｍ−３Ｈ］３−，８８８．５７［Ｍ−３Ｈ＋Ｎａ］３−，６６０．４３［Ｍ−４Ｈ］４−。
１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，６００ＭＨｚ）；４．７１ppmの基準水信号により、４．８０から４．５０ppmの間の信号の信頼できる積分が妨害されている。δ７．６６（ｍ，２Ｈ），７．３０（ｍ，２Ｈ），６．７４（ｍ，１Ｈ），５．３６（ｍ，１Ｈ），５．２５（ｍ，１Ｈ），５．０５（ｍ，１Ｈ），４．９８（ｍ，１Ｈ），４，８４（ｍ，１Ｈ），４．４６（ｍ，２Ｈ），４．３１（ｍ，１Ｈ），４．２７−４．１３（５Ｈ），４．１３−３．９９（５Ｈ），３．９２（ｍ，１Ｈ），３．８８−３．７０（８Ｈ），３．７０−３．０７（４９Ｈ±５），３．０７−２．９２（４Ｈ），２．８５（ｍ，１Ｈ），２．７６（ｍ，１Ｈ），２．６５（ｍ，１Ｈ），２．５１（ｓ，３Ｈ），２．４０（ｓ，３Ｈ），２．３６−２．２２（ｍ，２Ｈ），２．２１−２．１１（ｍ，２Ｈ），２．０８（ｍ，１Ｈ），２．０６−１．９１（４Ｈ），１．８３−１．０３（２０Ｈ±２）。
【００５０】
【化９】
【実施例２】
【００５１】
図式２
１５−Ｎ−（９−フルオレニルメチルオキシカルボニル）−１５−アザ−３，６，９，１２−テトラオキサ−ペンタデカン酸ｔｅｒｔ−ブチル（６）
１５−アミノ−３，６，９，１２−テトラオキサ−ペンタデカン酸ｔｅｒｔ−ブチル（５）（０．５０ｇ，１．４５mmol）をＴＨＦ（７．５mL）およびＨ２Ｏ（５mL）中に溶解した。４Ｎ ＮａＯＨ溶液をｐＨが約９になるまで加えた。カルバミン酸Ｎ−９−フルオレニルメチル−コハク酸イミド（ＦｍｏｃＯＳｕ，０．５４ｇ，１．６０mmol，１．１当量）を少量ずつ加えた。１０分後、更なる４Ｎ ＮａＯＨ溶液を加えて、ｐＨを約９に調節した。３時間後、反応混合物を１Ｎ ＨＣｌ溶液でｐＨ６から７に酸性化した。Ｈ２Ｏを反応混合物に加え、ＥｔＯＡｃで３回抽出した。有機層を食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥した。濾過後、溶媒を減圧下（５０mbar，５０℃）で除去した。粗製油をシリカカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ，１／０→９５／５，ｖ／ｖ）で精製して、化合物６を黄色油（０．６１ｇ，７９％）として得た。Ｒｆ０．６４（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ，９５／５，ｖ／ｖ）。
【００５２】
１５−Ｎ−（９−フルオレニルメチルオキシカルボニル）−１５−アザ−３，６，９，１２−テトラオキサ−ペンタデカン酸塩（７）
化合物６をＤＣＭ（３．５mL）中に溶解し、ＴＦＡ（３．５mL）を窒素雰囲気下で加えた。１．５時間撹拌後、反応混合物を減圧下で濃縮した。その後、過剰のＴＦＡをトルエン中の繰り返し濃縮により除去した。ＤＣＭ／Ｅｔ２Ｏ（１００mL，１／２，ｖ／ｖ）を加え、１Ｎ ＨＣｌで洗浄した。水層をＤＣＭ／Ｅｔ２Ｏ（１００mL，１／２，ｖ／ｖ）で抽出した。加え合わせた有機層を食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥した。濾過後、溶媒を大気圧下（５０℃）で除去した。粗製油をシリカカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＡｃＯＨ，９９／０／１→８９／１０／１，ｖ／ｖ／ｖ）で精製して化合物７を得た。残ったＡｃＯＨを、粗製油状生成物をＤＣＭ／Ｅｔ２Ｏ（１／２，ｖ／ｖ）に溶解し、Ｈ２Ｏ（３回）および食塩水で洗浄し、ついでＭｇＳＯ４で乾燥して除去した。濾過後、溶媒を、大気圧下（５０℃）で除去して化合物７を黄色油（０．３７ｇ，６７％）として得た。Ｒｆ０．３２（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ，８９／１０／１，ｖ／ｖ）。
【００５３】
１５−Ｎ−（９−フルオレニルメチルオキシカルボニル）−１５−アザ−３，６，９，１２−テトラオキサ−ペンタデカノイル−ε−Ｎ−（Ｚ）−Ｌ−リジンｔｅｒｔ−ブチル（８）
化合物７（０．３７mg，０．７７mmol）をＤＣＭ（１８mL）中に溶解した。引き続き、ＤＩＰＥＡ（０．４０μＬ，２．３１mmol，３当量）およびＴＢＴＵ（０．２５ｇ，０．７７mmol）をＮ２雰囲気下で加え、溶液を１０分間撹拌した。ついで、ε−（Ｚ）−Ｌ−Ｌｙｓ−ＯｔＢｕ・ＨＣｌ（０．２９ｇ，０．７７mmol）を加え、混合物をさらに１．５時間撹拌した。反応混合物をＤＣＭで希釈し、Ｈ２Ｏ、０．１Ｎ ＨＣｌ、飽和ＮａＨＣＯ３溶液および食塩水で濯いだ。有機層を乾燥（ＭｇＳＯ４）し、大気圧下で濃縮した。精製をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ，１／０→９／１，ｖ／ｖ）で行って、化合物８を黄色油（０．５１ｇ，８３％）として得た。Ｒｆ０．８５（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ，９／１，ｖ／ｖ）。ＥＳＩ−ＭＳ：７９２．６［Ｍ＋Ｈ］＋，８１４．６［Ｍ＋Ｎａ］＋，７３６．４［Ｍ−ｔＢｕ＋Ｈ］＋。
【００５４】
１５−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−１５−アザ−３，６，９，１２−テトラオキサ−ペンタデカノイル−ε−Ｎ−（Ｚ）−Ｌ−リジンｔｅｒｔ−ブチル（９）
化合物８（０．２６ｇ，０．３２mmol）をＴＨＦ（５mL）中に溶解した。Ｅｔ２Ｎ（１mL）を加え、溶液を２４時間撹拌した。過剰のＥｔ２Ｎおよび溶媒を減圧下（５０℃）で除去した。トルエンを加え、減圧下（５０℃，６５mbar）で除去しＮ−脱保護中間生成物（０．２１ｇ，０．３２mmol）を得た。Ｒｆ０．２３（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ，９／１，ｖ／ｖ）。ＥＳＩ−ＭＳ：５７０．４［Ｍ＋Ｈ］＋，５１４．４［Ｍ−ｔＢｕ＋Ｈ］＋。粗製生成物をＤＣＭ（３mL）中に溶解した。Ｎ２雰囲気中で、Ｅｔ３Ｎ（０．１１mL）を加え、ついでジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート（７３mg，０．３４mmol，１．１当量）を加えた。５時間撹拌後、混合物を０．１Ｎ ＨＣｌ冷（５℃）溶液に加え、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を食塩水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）した。濾過後、溶媒を、減圧下（１８０mbar，５０℃）で除去した。精製をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ，１／０→９５／５，ｖ／ｖ）で行って、９を無色油（０．１７ｇ，８２％）として得た。Ｒｆ０．５（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ，９／１，ｖ／ｖ）。ＥＳＩ−ＭＳ：６７０．６［ＭＨ＋Ｈ］＋，６９２．４［ＭＨ＋Ｎａ］＋，５７０．４［Ｍ−Ｂｏｃ＋Ｈ］＋，５１４．１［Ｍ−Ｂｏｃ−ｔＢｕ＋Ｈ］＋。
【００５５】
１５−アザ−３，６，９，１２−テトラオキサ−ペンタデカノイル−ε−［Ｄ−（＋）−ビオチニル］−Ｌ−リジン（１０）
化合物９（０．２３ｇ，０．３４mmol）をＥｔＯＨ（８mL）およびＨ２Ｏ（１．２mL）中に溶解した。溶液を窒素で５分間フラッシングした後、Ｐｄ／Ｃ１０％（０．１１ｇ）を加えた。水素を溶液に４時間通過させた。窒素を溶液に１０分間フラッシングして全ての水素を除去した。混合物をデカライト上で濾過し、減圧下（１７０mbar，５０℃）で濃縮してＮ−Ｌ−リジン脱保護中間体を無色油（０．１５ｇ，８１％）として得た。Ｒｆ０．０２（ＤＣＭ／ＥｔＯＡｃ，９／１，ｖ／ｖ）。
Ｄ−（＋）−ビオチン（７５mg，０．３１mmol）をＤＣＭ（７mL）中に懸濁した。引き続き、Ｎ２雰囲気下でＤＩＰＥＡ（０．１１mL，０．６２mmol，２当量）およびＴＢＴＵ（０．１０ｇ，０．３１mmol）を加え、溶液を１時間撹拌した。上記のＮ−Ｌ−リジン脱保護中間体のＤＣＭ（３mL）中の溶液を反応混合物に加えた。混合物を１６時間撹拌した。Ｈ２Ｏを加え、ＤＣＭ（３×）で抽出した。有機層を乾燥（ＭｇＳＯ４）し、減圧下（８５０mbar，５０℃）でろ過および濃縮した。精製をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ，１／０→９／１ｖ／ｖ）で行って油（０．１３ｇ，６０％）を得た。Ｒｆ０．４８（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ，９／１，ｖ／ｖ）。ＥＳＩ−ＭＳ：７６２．６［Ｍ＋Ｈ］，７８４．６［Ｍ＋Ｎａ］，６６２．４［Ｍ−Ｂｏｃ＋Ｈ］，６０６．４［Ｍ−Ｂｏｃ−ｔＢｕ＋Ｈ］。油をジオキサン中の乾燥４Ｎ ＨＣｌ溶液（４mL）中に溶解し、撹拌した。１時間後、不溶性の油が出現し、その後溶媒を減圧下（１００mbar，５０℃）で除去し、化合物１０を定量的収率で得た。ＥＳＩ−ＭＳ：６０６．４［Ｍ＋Ｈ］＋，６２８．４［Ｍ＋Ｎａ］＋。
【００５６】
【化１０】
【００５７】
図式３
Ｎε−（Ｄ−（＋）−ビオチニル）−Ｎ−｛｛４−［［４−［［（１Ｒ）−１−［［４−（１，２，４−オキサジアゾール−５−オニル）フェニル］メチル］−２−オキソ−２−（１−ピペリジニル）エチル］アミノ］−３−［［（４−メトキシ−２，３，６−トリメチルフェニル）スルホニル］アミノ］−１，４−（Ｓ）−ジオキソ−ブチル］アミノ］−ブタノイル｝−１５−Ｎ−（１５−アザ−１−オキソ−３，６，９，１２−テトラオキサ−ペンタデシル）｝｝−Ｌ−リジン（１１）
化合物１０（０．１２ｇ，０．２１mmol）を、化合物３の調製で記載したように、化合物２（０．１５ｇ，０．２１mmol）に結合させた。粗製生成物を調製用ＨＰＬＣ（Ｃ１８，ＡＣＮ／Ｈ２Ｏ，０．０１％ＴＦＡ）で精製して、化合物１１を純粋な形態で得た。収量６０mg（２２％）。ＥＳＩ−ＭＳ：１３１６．８［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００５８】
メチルＯ−２，３−ジ−Ｏ−メチル−４−Ｏ−＜＜＜１２−Ｎ−＜＜Ｎε−（Ｄ−（＋）−ビオチニル）−Ｎ−＜［１５−Ｎ−（１５−アザ−１−オキソ−３，６，９，１２−テトラオキサ−ペンタデシル）］−｛４−［［４−［［（１Ｒ）−１−［［４−（アミノイミノメチル）フェニル］メチル］−２−オキソ−２−（１−ピペリジニル）エチル］アミノ］−３−［［（４−メトキシ−２，３，６−トリメチルフェニル）スルホニル］アミノ］−１，４−（Ｓ）−ジオキソ−ブチル］アミノ］−ブタノイル｝＞−Ｌ−リシル＞＞−１２−アザ−３，６，９−トリオキサ−ドデシル＞＞＞−６−Ｏ−スルホ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１−＞４）−Ｏ−２，３−ジ−Ｏ−メチル−β−Ｄ−グルコピラヌロノシル−（１−＞４）−Ｏ−２，３，６−トリ−Ｏ−スルホ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１−＞４）−Ｏ−２，３−ジ−Ｏ−メチル−α−Ｌ−イドピラヌロノシル−（１−＞４）−３−０−メチル−２，６−ジ−０−スルホ−α−Ｄ−グルコピラノシドオクタキスナトリウム塩（ＩＶ）
一般的手順に従って化合物１１を化合物４に結合させ、中間体共役体を脱保護して化合物ＩＶを得た。収量９．２mg（７．６％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，６００ＭＨｚ），４．７０ppmにおける基準水信号により、４．８０から４．５４ppmの間の信号の信頼できる積分が妨害されている。δ７．５９（ｄ，２Ｈ），７．２３（ｄ，２Ｈ），６．６８（ｓ，１Ｈ），５．３２（ｍ，１Ｈ），５．１９（ｍ，１Ｈ），４．９１（ｍ，１Ｈ），４．８５（ｍ，１Ｈ），４．７６（ｍ），４．５３−４．３１（３Ｈ），４．３０−４．０５（９Ｈ），４．０４−３．９０（７Ｈ），３．８９−３．６２（７Ｈ），３．６１−３．４２（４２Ｈ±４），３．４２−３．３１（１８Ｈ±２），３．３１−３．１４（１２Ｈ），３．１４−３．０５（５Ｈ），３．０３−２．９４（３Ｈ），２．９３−２．８４（２Ｈ），２．８１（ｄｄ，１Ｈ），２．７０（ｄｄ，１Ｈ），２．５９（ｄ，１Ｈ），２．４４（ｓ，３Ｈ），２．３４（ｓ，３Ｈ），２．２２−２．０８（４Ｈ），２．０６（ｔ，２Ｈ），１．９６（ｓ，３Ｈ），１．７２−１．０１（１８Ｈ±２）。
ＥＳＩ／ＴＯＦ−ＭＳ：ｍ／ｚ５７４．７２［Ｍ−５Ｈ］５−，ｍ／ｚ７１８．６６［Ｍ−４Ｈ］４−，ｍ／ｚ９５８．５６［Ｍ−３Ｈ］３−。
【００５９】
【化１１】
【実施例３】
【００６０】
薬理学
ヒト血漿中の抗Ｘａ因子活性および抗ＩＩａ因子活性の測定のためのインビトロ試験
ヒト血漿中の試験化合物の抗Ｘａ因子活性および抗ＩＩａ因子活性を、基質として各々Ｓ２２２２またはＳ２２３８（Ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｘ，Ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｃｓ Ｌｔｄ，Ｍｏｌｎｄａｌ，Ｓｗｅｄｅｎ）を用いて、アミド分解活性を測定することにより測定した。手順は、ＴｅｉｅｎおよびＬｉｅにより記載されている方法（Ｔｅｉｅｎ ＡＮ，Ｌｉｅ Ｍ． Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎ ａｍｉｄｏｌｙｔｉｃ ｈｅｐａｒｉｎ ａｓｓａｙ ｍｅｔｈｏｄ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｂｙ ａｄｄｉｎｇ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ａｎｔｉｔｈｒｏｍｂｉｎ ＩＩＩ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｒｅｓ．１９７７，１０：３９９−４１０）に基づいた。両方の活性はＩＣ−５０（Mol／Ｌ）で表してある。
【００６１】
【表１】
【００６２】
３．１ 薬物動態学
Ｏｒｇ ４２６７５の薬物動態学的特性および本発明の化合物ＩＩＩの薬物動態学的特性を、３００から４００ｇの雄のＷｉｓｔａｒラットについて研究した。ラットにＯ２／Ｎ２Ｏ／イソフルランの混合物の吸入により麻酔をかけ、その後右頚静脈にカニューレ処置をした。翌日、１００nmol／kgの投与量でラットに皮下注射処置をした。皮下注射投与後、数回の間隔でサンプル採取を行った。ついで、血液を遠心分離した後血漿を吸い上げて、使用するまで−２０℃で貯蔵した。試験化合物の濃度を、抗Ｘａ活性または抗ＩＩａ活性を各々測定するために、基質としてＳ−２２２２またはＳ−２２３８（Ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｘ， Ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｃｓ Ｌｔｄ， Ｍｏｌｎｄａｌ， Ｓｗｅｄｅｎ）を用いてアミド分解活性について測定した。両方の手順は、Ｔｅｉｅｎ およびＬｉｅの方法（Ｔｅｉｅｎ ＡＮ， Ｌｉｅ Ｍ． Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎ ａｍｉｄｏｌｙｔｉｃ ｈｅｐａｒｉｎ ａｓｓａｙ ｍｅｔｈｏｄ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｂｙ ａｄｄｉｎｇ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ａｎｔｉｔｈｒｏｍｂｉｎ ＩＩＩ． Ｔｈｒｏｍｂ． Ｒｅｓ． １９７７， １０： ３９９−４１０）に基づいた。得られた血漿サンプル中の濃度は、試験化合物自身の原液を用いて作成した検量線に対して測定した。サンプル中の濃度をnmol／mLで表し、速度パラメーターをＷｉｎＮｏｎｌｉｎのノンコンパートメントモデルを用いて算出した（図１参照）。
【００６３】
【表２】
【００６４】
本発明の実験化合物ＩＩＩおよびＯｒｇ４２６７５は、実験データの変動性の範囲内で、ラットにおいて同じ薬物動態学的挙動を示すことが結論づけられる。
【００６５】
３．２ 薬物動態学−中和実験
１００nmol／kgの投与量で本発明の化合物ＩＩＩまたはＯｒｇ４２６７５で、皮下でラットを、処置した。ｔ＝２ｈの時点で血液サンプルを採取し、本発明の化合物ＩＩＩまたはＯｒｇ４２６７５で処置したラットにアビジン（卵白由来，Ｓｉｇｍａ）の１０mg／kgを静脈内投与した。続いて、０．１７、０．５、１、２、３、および７時間の時点で血液をサンプル採取した。血液は薬物動態学実験に記載されているようにして処置し、サンプルの濃度は、（残存する）抗Ｘａ活性または抗ＩＩａ活性を測定することにより測定した（図２参照）。
【００６６】
【表３】
【００６７】
本発明の化合物ＩＩＩの皮下投与（１００nmol／kg）後、（残存する）抗Ｘａ因子活性および抗ＩＩａ因子活性を測定することにより定量される抗血栓性活性は、アビジンの１０mg／kgの静脈内投与により中和できることが結論付けられる。本発明の化合物ＩＩＩのアビジンによる中和は、その血漿中濃度が急速に減少すること、およびアビジンの投与後に本発明の化合物ＩＩＩのＡＵＣｉｎｆが化合物Ｏｒｇ４２６７５と比較して著しく減少することにより反映される。さらにまた、非ビオチン化相当化合物であるＯｒｇ４２６７５の薬物動態学的挙動は、アビジンの添加により影響を受けない。後者により、中和はビオチン標識の存在と関連していること、およびこれはデュアルインヒビターの薬物動態学的挙動に影響を与えないことが確認される。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ビオチン残基またはビオチン誘導体を含む新しい抗血栓性デュアルインヒビター、これらの調製方法、これらの化合物を活性成分として含有する医薬組成物、ならびに医薬の製造のための前記化合物の使用、に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヘパリンと比較して同様のまたはより優れた抗血栓性を示す合成活性医薬物質の研究における最近の進歩は、例えば国際公開第９９／６５９３４号および国際公開第０１／４２２６２号に記載されているような新しいデュアルインヒビターの設計をもたらした。これらの化合物は一般に、本質的に薬理学的に不活性なスペーサーによってオリゴ糖残基を、直接的トロンビン阻害剤に結合した共役体である。分子内のオリゴ糖残基は、アンチトロンビンＩＩＩ（ＡＴ−ＩＩＩ）介在抗Ｘａ活性を示す。従って、新しい共役体は、抗血栓性および抗凝血性のデュアルアクティビティーを示す。
【０００３】
デュアルインヒビターの新しい分類の優れた例には、五糖が直接的トロンビン阻害剤に結合したコード名Ｏｒｇ４２６７５で示される化合物があるが、この化合物は、以下の構造：
【０００４】
【化１】
を有する。実験的血栓症の研究は、この化合物が強力な抗凝血性および抗血栓性に加えて、血栓結合のトロンビンの活性をも阻害することを実証した。さらに、Ｏｒｇ４２６７５は、閉塞性動脈血栓の血栓溶解に続く、血栓再閉塞の予防において高度に有効であると考えられる。この化合物は、対応する、ＮＡＰＡＰから誘導される非共役型直接的トロンビン阻害剤と比較して１０倍長い半減期を示す。アルガトロバン、ヘパリンおよびフォンダパリヌクスと比較して、Ｏｒｇ４２６７５は、改善された有効性を示した（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ ａｎｄ Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ， Ｖｏｌｕｍｅ １， Ｉｓｓｕｅ ９， Ｐａｇｅ １９４５ ， ２００３）。新しいデュアルインヒビターの臨床的可能性は、大きいと考えられ、従って、臨床試験がすでに開始されている。
【０００５】
予防措置として、抗凝血治療および抗血栓治療の分野内において、用いられる抗凝血薬または抗血栓薬の活性を効果的に中和または最小化することができる解毒薬に対する必要性が存在する。なぜなら、これは、治療中の患者において、いずれかの不慮の原因により出血が引き起こされ得ることはよく知られているからである。さらに、抗血栓治療または抗凝血治療中の患者に外科的な介入が必要とされ得る。また、いくつかの外科的手順の間、血液凝固を防止するために抗凝血薬を高い投与量で用いることができるが、手術の終わりにそれらを中和する必要がある。従って、いかなるときでも抗血栓／抗凝血活性を停止するために中和することができる抗血栓／抗凝血薬を入手するのは、好都合である。米国特許出願公開第２００４／００２４１９７号明細書において、緊急の場合に一定の多糖類の抗血栓活性を、これらの多糖類が少なくとも１つのビオチンまたはビオチン誘導体との共有結合を含有する場合、アビジンを用いて低減することができることが開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】国際公開第９９／６５９３４号
【特許文献２】国際公開第０１／４２２６２号
【特許文献３】米国特許出願公開第２００４／００２４１９７号明細書
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ ａｎｄ Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ， Ｖｏｌｕｍｅ １， Ｉｓｓｕｅ ９， Ｐａｇｅ １９４５ ， ２００３
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、国際公開第９９／６５９３４号および国際公開第０１／４２２６２号に記載されているデュアルインヒビターから誘導される新規の中和可能なデュアルインヒビターに関する。本明細書中では「ＢＴ」（これは、ヘキサヒドロ−２−オキソ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−ペンタン酸から誘導される。好ましくはＤ（＋）−異性体）と呼ぶ基である一定のビオチン「標識」：
【０００９】
【化２】
またはこの類似体を、国際公開第９９／６５９３４号および国際公開第０１／４２２６２号に記載されている化合物の構造中に結合するまたは導入することができ、これにより中和可能なデュアルインヒビターが得られる。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
したがって、本発明は、式（Ｉ）：
【００１１】
【化３】
［式中、オリゴ糖は２から２５単糖単位を含む負荷電のオリゴ糖残基であり、前記荷電は、正荷電の対イオンにより相殺され、前記オリゴ糖残基は、それ自体が（ＡＴ−ＩＩＩ介在性）抗Ｘａ活性を有するオリゴ糖から誘導され；
スペーサーは、１０から７０原子の鎖長を有する、本質的に薬理学的に不活性な屈曲性連結残基であり；
Ａは、残基−ＣＨ［ＮＨ−ＳＯ２−Ｒ１］［ＣＯ−ＮＲ２−ＣＨ（４−ベンズアミジン）−ＣＯ−ＮＲ３Ｒ４］｛式中、Ｒ１は、フェニル、ナフチル、１，２，３，４−テトラヒドロナフチル、（イソ）キノリニル、テトラヒドロ（イソ）キノリニル、３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリニル、クロマニルまたは樟脳基であり、これらの基は（１−８Ｃ）アルキルまたは（１−８Ｃ）アルコキシから選択される１つ以上の置換基で場合により置換されていてよく、Ｒ２およびＲ３は独立してＨまたは（１−８Ｃ）アルキルであり；Ｒ４は（１−８Ｃ）アルキルまたは（３−８Ｃ）シクロアルキルであり；またはＲ３およびＲ４は、それらが結合している窒素原子と一緒に、もう１つのヘテロ原子を場合により含有する非芳香族（４から８）員環を形成し、この環は（１−８Ｃ）アルキルまたはＳＯ２−（１−８Ｃ）アルキルで場合により置換されている。｝である。］
の化合物であり、ここで、前記式Ｉの化合物が、さらに、ビオチン残基またはこの類似体との少なくとも１つの共有結合を含む、前記化合物、またはこれらの薬学的に許容できる塩、プロドラッグまたはこれらの溶媒和物に関する。
【００１２】
本発明の化合物は、デュアルインヒビターであり、これは、非介在性直接的アンチトロンビン（ＩＩａ因子）活性および抗トロンビンＩＩＩ（ＡＴ−ＩＩＩ）介在性抗Ｘａ活性の両方の調整可能な混合プロフィールを有する。本発明の化合物の混合プロフィールは、オリゴ糖残基の性質および直接的トロンビン阻害剤（ＮＡＰＡＰ類似体）の効力を変化させることにより調整することができる。これにより、一連のプロフィールが入手可能である。本発明の化合物は、長い血漿中半減期を有し、その結果、本発明の化合物は従来の文献に報告されているＮＡＰＡＰまたはこの誘導体と比較して延長されたアンチトロンビン活性を有する。また、本発明の化合物は、血小板第４因子（ＰＦ４）の中和作用を免れることができる。低毒性もまた、本発明の化合物の有利な態様である。
【００１３】
本発明の化合物は、トロンビン介在性のおよびトロンビン関連の疾患の治療および予防に対して有用である。これは、凝固カスケードが活性化される、多くのトロンビン状態およびプロトロンビン状態を含み、これらは、深部静脈血栓症、肺塞栓症、血栓性静脈炎、血栓症または塞栓症由来の動脈閉塞、血管形成術または血栓溶解の期間中または期間後の動脈再閉塞、動脈損傷または侵襲的心臓病学的措置後の再狭窄、術後の静脈血栓症または塞栓症、急性または慢性の粥状動脈硬化症、発作、心筋梗塞、癌および転移、ならびに神経変性疾患を含むが、これらに限定されるものではない。本発明の化合物はまた、透析および外科手術において必要なものとして、体外血液回路における抗凝血薬としても用いることができる。本発明の化合物はまた、インビトロでの抗凝血薬としても用いることができる。
【００１４】
本発明の化合物におけるビオチン標識（またはこの類似体）は、特定の解毒薬であるアビジン（Ｔｈｅ Ｍｅｒｃｋ Ｉｎｄｅｘ，Ｔｗｅｌｆｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９６，Ｍ．Ｎ． ９２０，ｐａｇｅｓ１５１−１５２）またはストレプトアビジン（これは、ビオチンに対して大変高い親和性を有し、それぞれの質量が、約６６０００および６００００Ｄａに等しい、２つの四量体タンパク質である。）に速やかに認識され、該特定の解毒薬に結合する。従って非常の場合には、デュアルインヒビターの作用は、アビジンまたはストレプトアビジンを用いて、例えばこれらを含有する医薬溶液の注射によりすばやく中和することができる。高いビオチン親和性を有するアビジンおよびストレプトアビジンの類似体も、同様に用いることができる。得られた不活性な解毒薬−阻害剤複合体は、血液循環から取り除かれる。
【００１５】
本発明による標識として用いることができるビオチン類似体は、例えばヘキサン酸６−ビオチンアミド、ヘキサン酸６−（６−ビオチンアミドヘキサンアミド）および２−ビオチンアミドエタンチオールなどの、Ｐｉｅｒｃｅ社カタログ（１９９９−２０００、６２から８１ページ）に記載されているビオチン類似体から選択できるが、これらに限定されるものではない。このような類似体において、ビオチン残基ＢＴは、前記で定義したように分子の特徴的な部分である。他の類似体は、例えばビオチンアミド結合部位でアルキル化（ここで、アルキルは、（１−４Ｃ）アルキル、好ましくはメチルである。）され、ビオチニダーゼ分割（Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．１１，２０００，５６９−５８３；Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．１１，２０００，５８４−５９８）に対して安定なビオチン類似体、またはＢｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．１２，Ｎｏ．４，２００１，６１６−６２３に記載されているようなビオチンアミド結合のα位に、例えばヒドロキシメチレン、カルボキシレート、またはアセテートを含む他のビオチン類似体である。
好ましいビオチン類似体の残基は、式：−（ＮＨ−ＣＯ）ｎ−（ＣＨ２）ｐ−ＮＲ−ＢＴ（式中、ｎは０または１（特にｎは、０である。）であり、ｐは４または５（特にｐは、４である。）であり、Ｒ＝Ｈまたは（１−４Ｃ）アルキルであり、ＢＴは前記に定義した通りである。）を有する。好ましい実施形態において、ＲはＨである。
【００１６】
対応する非ビオチン化化合物との比較研究において、本発明のデュアルインヒビターへのビオチン標識の導入が、本質的にこれらの直接的トロンビン阻害効力もこれらのアンチトロンビンＩＩＩ（ＡＴ−ＩＩＩ）介在性の抗Ｘａ因子活性も妨害しないことが見いだされた。また、式Ｉの化合物の抗血栓活性は、アビジンまたはストレプトアビジンの投与時に（本質的に）完全に中和される。
【００１７】
いずれかの２から２５単糖単位の負荷電のオリゴ糖残基は、本発明の化合物において使用可能である。適した本発明の化合物は、オリゴ糖が硫酸化オリゴ糖残基である化合物である。好ましくは、オリゴ糖残基は、欧州特許出願公開第０，４５４，２２０号明細書、欧州特許出願公開第０，５２９，７１５号明細書、国際公開第９７／４７６５９号、第９８／０３５５４号、第９９／３６４４３号および第９９／３６４２８号に開示されているオリゴ糖などの、それ自身（ＡＴ−ＩＩＩ介在性）抗Ｘａ活性を有するオリゴ糖から誘導される。さらに好ましいのは、２から１６、特に２から６単糖単位を有するオリゴ糖残基である。最も好ましくは、オリゴ糖は、硫酸化五糖残基である。好ましい五糖残基は、式（ＩＩ）：
【００１８】
【化４】
（式中、Ｒ５は、独立してビオチン残基もしくはこの類似体、ＯＳＯ３−または（１−８Ｃ）アルコキシである。）、
を有する。好ましい五糖残基において、硫酸基の総数は、４、５、６または７である。
【００１９】
好ましい本発明による化合物は、五糖残基が構造：
【００２０】
【化５】
（式中、Ｒ５は、ＯＣＨ３またはＯＳＯ３−である。）
を有する、化合物である。
【００２１】
特に好ましい五糖残基は、
【００２２】
【化６】
である。
【００２３】
さらに好ましい本発明の化合物は、式Ｉ：（式中、Ｒ１は、メチルまたはメトキシから選択される１つ以上の置換基で場合によって置換されていてもよいフェニルまたはナフチルである。）の化合物である。より好ましくは、Ｒ１は、４−メトキシ−２，３，６−トリメチルフェニルである。好ましい化合物において、ＮＲ３Ｒ４は、ピペリジニル基をあらわす。好ましくは、Ｒ２はＨである。
【００２４】
スペーサーは、本質的に薬理学的不活性な屈曲性連結残基であり、好ましくは、該スペーサーは、オリゴ糖残基の酸素を含めないでスペーサーの「主鎖」に沿って数えて１０から５０原子を有する。さらに、好ましいのは、１３から２５原子の長さであり、好ましくは１６から２２原子の長さであり、最も好ましくは１９原子の長さである。
スペーサーの化学的性質は、本発明の化合物の抗血栓活性にとってあまり重要ではない。スペーサーは、環構造および不飽和結合などの（いくらか）強固な要素を含むことができる。高度に屈曲性のスペーサーは、他のものよりも、より適する。適したスペーサーは、当業者により容易に設計され得る。合成上の理由により、より長いスペーサーは、より不適切と考えられるが、それでも、より長いスペーサーは、本発明の化合物において首尾よく適用することができる。好ましいスペーサーは、少なくとも１つの−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）−要素を含む。
【００２５】
本発明による好ましい化合物はビオチン残基またはこの類似体との１つの共有結合を含む。
ビオチン（またはこの類似体）標識は、式Ｉの化合物のあらゆる部分において存在し得る。従って、本発明の実施形態は、（ａ）式Ｉの化合物のオリゴ糖残基が、ビオチン残基またはこの類似体との共有結合を含み、（ｂ）式Ｉの化合物のスペーサーが、ビオチン残基またはこの類似体との共有結合を含み、および（ｃ）式Ｉの化合物の残基Ａがビオチン残基またはこの類似体との共有結合を含む（これは、Ａの定義における水素原子または置換基がビオチン残基により置換されていることを意味する。）、化合物である。
【００２６】
本発明のビオチン化デュアルインヒビターの代表例としては、
【００２７】
【化７】
および
【００２８】
【化８】
ならびにこれらの塩類ばかりでなく、式Ｉの化合物：（式中、スペーサーが、もう１つの部位でオリゴ糖に結合している。）および／またはビオチン（類似体）残基が分子の他の部位に存在する化合物、を挙げることができる。好ましいのは、ナトリウム塩である。
式ＩＩＩの化合物は、本発明の１つの好ましい例である。
【００２９】
式（Ｉ）の化合物の記載において、以下の定義が用いられる。
用語「（１−４Ｃ）アルキルおよび（１−８Ｃ）アルキル」は、各々１から４および１から８の炭素原子を有する分枝したまたは分枝していないアルキル基（例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ヘキシルおよびオクチル）を意味する。メチルおよびエチルは、好ましいアルキル基である。
用語「（１−８Ｃ）アルコキシ」は、アルキル部分が前記で定義した意味を有する、１から８の炭素原子を有するアルコキシ基を意味する。メトキシは、好ましいアルコキシ基である。
用語「（３−８Ｃ）シクロアルキル」は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチルまたはシクロオクチルである３から８の炭素原子を有するシクロアルキル基を意味する。シクロペンチルおよびシクロヘキシルは、好ましいシクロアルキル基である。
スペーサーの長さは、スペーサーに結合しているオリゴ糖残基の酸素原子は数に入れずに、オリゴ糖残基と分子のペプチド部分との間の最も短い鎖に沿って数えたスペーサーの原子数である。
用語「プロドラッグ」は、例えばアミジノ部分のアミノ基が、例えばヒドロキシまたは（１から６Ｃ）アルコキシカルボニル基により保護された本発明の化合物を意味する。
本発明による溶媒和物は、水和物を含む。
【００３０】
ビオチン残基を式Ｉの化合物に結合させる合成方法に関して、化学文献は、利用することができるいくつかの可能性を提供し、これにより、当業者によく知られている一連の保護基が、使用され得る。例えば活性化エステル、マレイミド、ヨードアセチルまたは一級アミン型の反応性基を含むビオチン残基は、好ましくはアミン官能基、またはチオール官能基、またはカルボン酸官能基、またはアルデヒド官能基と反応させるが、該反応は、文献（Ｓａｖａｇｅ ｅｔ ａｌ．，Ａｖｉｄｉｎ−Ｂｉｏｔｉｎ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ａ Ｈａｎｄｂｏｏｋ；Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９２を参照のこと）に記載された条件に従って行われる。
ビオチン残基は、例えば（負荷電の）オリゴ糖残基に直接に結合させることができるし、または場合によりオリゴ糖−スペーサー残基のＮ−（１−４Ｃ）アルキル化アミノ官能基を介してまたは場合によりＮ−（１−４Ｃ）アルキル化アミノ酸残基を介して、場合により式Ｉの化合物のオリゴ糖残基のＮ−（１−４Ｃ）アルキル化アミン官能基に結合させることができる。
【００３１】
本発明のもう１つの態様において、ビオチン残基は、例えば残基Ａに直接に結合させることができ、または場合により連結残基のＮ−（１−４Ｃ）アルキル化アミノ官能基を介してまたは場合によりＮ−（１−４Ｃ）アルキル化アミノ酸残基を介して、場合により式Ｉの化合物の残基ＡのＮ−（１−４Ｃ）アルキル化アミン官能基に結合させることができる。
【００３２】
さらに本発明のもう１つの態様において、ビオチン残基は、例えば第１に残基Ａに直接結合させるか、または場合により式Ｉのスペーサーの一部のＮ−（１−４Ｃ）アルキル化アミノ官能基を介してまたは場合によりＮ−（１−４Ｃ）アルキル化アミノ酸残基を介して場合により式Ｉの化合物の残基ＡのＮ−（１−４Ｃ）アルキル化アミン官能基に結合させ、および第２にオリゴ糖に直接結合させるか、または場合により式Ｉのスペーサーの一部分のＮ−（１−４Ｃ）アルキル化アミノ官能基を介してまたは場合によりＮ−（１−４Ｃ）アルキル化アミノ酸残基を介して場合により式Ｉの化合物の（負荷電の）オリゴ糖のＮ−（１−４Ｃ）アルキル化アミン官能基に結合させることにより、あるいは逆もまた同様にして、段階的に導入することができる。
【００３３】
本発明のもう１つの態様において、場合により、［Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．１２，Ｎｏ．４，２００１，６１６−６２３］に記載されているようなＮ−アルキル化アミノ酸残基またはα−Ｎ−置換（β−）アミノ酸類似体を、当分野で知られている方法を用いペプチド結合により導入することができる。アジド基は、それに続くビオチン残基の導入のために式Ｉの化合物の前駆体中に用いることのできる、適した潜在的なアミン官能基である。
【００３４】
式Ｉの化合物の好ましい調製方法は、残基Ａにおけるベンズアミジン部分が、前駆体、好ましくは１，２，４−オキサジアゾリン−５−オン基の形態であり、ついでこれを脱保護、特に水素化によりベンズアミジンに転換する段階を含む（Ｂｏｌｔｏｎ，Ｒ．Ｅ． ｅｔ ａｌ，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ，Ｖｏｌ３６，Ｎｏ．２５，１９９５，ｐｐ ４４７１−４４７４）。
【００３５】
本発明の化合物はさらに、ＮＡＰＡＰ（またはＮＡＰＡＰ類似体）を、一般に当分野で知られている方法を用いて、グリシン部位において、システインまたはリジンまたはアスパラギン酸で誘導体化し、ついでこの化合物を、（ａ）オリゴ糖−スペーサー残基に結合させ、または（ｂ）スペーサーに結合させ、次にこれをチオール官能基またはカルボン酸官能基で誘導体化し、その後オリゴ糖残基とカップリングさせることによって調製する。この目的のために、例えば文献（例えば、欧州特許出願公開第０，４５４，２２０号明細書および欧州特許出願公開第０，５２９，７１５号明細書であるが、これらの出所に限定されない）に公知のオリゴ糖類または市販のオリゴ糖類などのいずれかの適したオリゴ糖が、使用され得る。オリゴ糖へのスペーサーの結合は、例えば欧州特許出願公開第０，６４９，８５４号明細書に記載されている方法を用いて実施することができる。
【００３６】
本発明の化合物を調製するための上記方法における１つの手順段階であるペプチド結合は、ペプチド断片の結合（または縮合）のための当分野で一般に知られている方法（アジド法、混合酸無水物法、活性エステル法、カルボジイミド法など）により、または好ましくはＴＢＴＵのようなアンモニウム／ウロニウム塩の影響下で、特にＮ−ヒドロキシコハク酸イミド、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾールおよび７−アザ−Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾールのような触媒作用のおよびラセミ化抑制化合物の添加で実施することができる。概要は、Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ ３，Ｅ．Ｇｒｏｓｓ ａｎｄ Ｊ．Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ，ｅｄｓ．（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８１）およびＰｅｐｔｉｄｅｓ：Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｎ．Ｓｅｗａｌｄ ａｎｄ Ｈ．−Ｄ．Ｊａｋｕｂｋｅ（Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，Ｗｅｉｎｈｅｉｍ，２００２）に記載されている。
【００３７】
化合物内に存在するアミン官能基は、Ｎ−保護基による合成手順の間に保護することができるが、このＮ−保護基は、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）基、ベンジルオキシカルボニル（Ｚ）基、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）基またはフタロイル（Ｐｈｔｈ）基のようなα−アミノ基の保護のためにペプチド化学において一般に用いられる基を意味する、またはアジド部分のデマスキングにより導入することができる。アミノ保護基およびそれらを除去するための方法の概要は、上記のＴｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ ３およびＰｅｐｔｉｄｅｓ：Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙに記載されている。
【００３８】
本発明の化合物は、遊離塩基の形態で生じ得、薬学的に許容できる塩の形態で反応混合物から単離することができる。薬学的に許容できる塩類はまた、式（Ｉ）の遊離塩基を、塩化水素、臭化水素、ヨウ化水素、硫酸、リン酸、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、マレイン酸、マロン酸、メタンスルホン酸、フマル酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、アスコルビン酸などの有機または無機酸で処理することにより得ることもできる。
【００３９】
本発明の化合物またはこれらの中間体は、不斉炭素原子を有し、従って、純粋な鏡像異性体、または鏡像異性体の混合物、またはジアステレオマーを含む混合物として得ることができる。純粋な鏡像異性体を得る方法は、当分野において周知であり、これらは、例えば光学活性酸およびラセミ混合物とから得られる塩の結晶化、またはキラルカラムを用いるクロマトグラフィーである。ジアステレオマーに関しては、順相または逆相のカラムを用いることができる。
【００４０】
本発明の化合物は、経腸的にまたは非経口的に投与することができる。これらの化合物およびこれらの組成物の正確な投与量および投与計画は、医薬が投与される予定の個々の患者の必要性、苦痛の程度または医師の必要性および判断によって必然的に決まる。一般に、非経口投与法は、吸収により多く依存する他の投与方法よりも低めの投与量を必要とする。しかしながら、ヒトに対する一日量は、好ましくは０．００１から１００mg／体重kgであり、より好ましくは０．０１から１０mg／体重kgである。
【００４１】
本発明の化合物を用いて製造される医薬は、急性の抗凝固療法におけるアジュバントとしても用いることができる。このような場合、本医薬は、このような症状の治療に有用な他の化合物と共に投与される。
【００４２】
例えば、標準的な参照文献である、Ｇｅｎｎａｒｏ ｅｔ ａｌ．，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１８ｔｈ ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９０，特にＰａｒｔ ８：Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｅを参照のこと）中に記載されているような、薬学的に適した補助剤と混合して、本化合物は、例えばピル、錠剤などの固体の投与単位に圧縮するか、またはカプセルもしくは座剤に加工することができる。薬学的に適した液体を用いて、化合物は、例えば注射製剤として用いるために、または例えば点鼻スプレーなどのスプレーとして用いるために溶液、懸濁液、乳濁液の形態で投与することもできる。
【００４３】
例えば錠剤などの投与量単位を製造するために、充填剤、着色剤、ポリマー結合剤などの通常の添加剤の使用が考えられる。一般に、活性化合物の機能を妨害しないいずれかの薬学的に許容できる添加剤も用いることができる。組成物を共に用いて投与することのできる適した担体は、適した量で用いられるラクトース、デンプン、セルロース誘導体などまたはこれらの混合物を含む。
【図面の簡単な説明】
【００４４】
【図１】本発明のビオチン化化合物ＩＩＩ（「ビオチン」）の１００nmol／kgを皮下投与した後の抗Ｘａ因子または抗ＩＩａ因子活性の測定により決定される平均血漿中濃度を示す図である。また、Ｏｒｇ４２６７５（「オリジナル」）の血漿中濃度は、抗Ｘａ因子活性の測定後に得られる。
【図２】１００nmol／kgの化合物の皮下投与後の平均血漿中濃度±標準誤差を示す図である。ｔ＝２ｈの時点でアビジン（１０mg／kg）を、本発明の化合物ＩＩＩ（「ビオチン」）またはＯｒｇ４２６７５（「オリジナル」）で処理したラットに静脈内投与した。本発明の化合物ＩＩＩの薬物動態学的挙動は、オリジナル化合物の挙動とは対照的に、アビジンの投与により影響を受ける。
【００４５】
本発明は、さらに以下の実施例によって例示される。
【００４６】
（実施例）
使用した略語
Ａｑ．＝水性の
ＡＴＩＩＩ＝アンチトロンビンＩＩＩ
Ｂｏｃ＝ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル
ＤＣＭ＝ジクロロメタン
ＤｉＰＥＡ＝Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ＝Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
Ｅｔ＝エチル
ｆｍｏｃ＝９−フルオレニルメトキシカルボニル
ＮＭＭ＝Ｎ−メチルモルホリン
Ｍｅ＝メチル
ｓａｔ．＝飽和した
ＰＲＰ＝多血小板血漿
ＰＰＰ＝貧血小板血漿
ＲＴ＝室温
ＴＢＴＵ＝テトラフルオロホウ酸２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム
ＴＦＡ＝トリフルオロ酢酸
ＴΗＦ＝テトラヒドロフラン
【実施例１】
【００４７】
図式１
Ｎε−（Ｄ−（＋）−ビオチニル）−Ｎ−｛４−［［４−［［（１Ｒ）−１−［［４−（１，２，４−オキサジアゾール−５−オニル）フェニル］メチル］−２−オキソ−２−（１−ピペリジニル）エチル］アミノ］−３−［［（４−メトキシ−２，３，６−トリメチルフェニル）スルホニル］アミノ］−１，４−（Ｓ）−ジオキソ−ブチル］アミノ］−ブタノイル｝−Ｌ−リジン（３）
国際公開第０１／４２２６２号に記載されているようにして調製された化合物２（０．２０ｇ，０．２７mmol）をＤＣＭ（１０mL）中に溶解した。ＤｉＰＥＡ（０．１４mL，０．８１mmol）を加え、ついでＴＢＴＵ（８６mg，０．２７mmol）を加えた。窒素雰囲気下で１時間撹拌後、化合物１（Ｎε−ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ−ＯＨ，０．２７mmol，Ｆｌｕｋａ）を固体として加えた。ＤＭＦ（５mL）を加えて（Ｎε−ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ−ＯＨを溶解した。混合物を１６時間撹拌し、０．５Ｎ ＨＣｌ溶液中に注いだ。溶液をＤＣＭ（３×）で抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、減圧下（８５０mbar，４５℃）で濃縮した。粗生成物を、シリカカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＡｃＯＨ，９９／０／１→８９／１０／１，ｖ／ｖ／ｖ）で精製した。残ったＡｃＯＨはトルエン中で繰り返し濃縮して除去した。さらに精製をＨＰＬＣクロマトグラフィー（ＡＣＮ／Ｈ２Ｏ／０．１Ｎ ＴＦＡ，２０：７８：３→９５：２：３）で完成させて、純粋な化合物の０．１５ｇ（５３％）を得た。ＴＬＣ：Ｒｆ０．５（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＡｃＯＨ，９０／９／１，ｖ／ｖ／ｖ）。ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ１０８９［Ｍ＋Ｈ］１＋。
ｆｍｏｃ保護中間体（０．１５ｇ，０．１４mmol）をＴＨＦ（５mL）中に溶解し、Ｅｔ２ＮＨ（２mL）を加えた。混合物を４５℃で４５分間撹拌した。溶液を減圧下で濃縮し、トルエン中で濃縮した。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ８５７［Ｍ＋Ｈ］１＋。
Ｎε−脱保護リジン誘導体（０．１４mmol）をＤＭＦ（３mL）中に溶解し、窒素雰囲気下で１時間撹拌しておいたＤ−（＋）−ビオチン（３４mg，１当量）、ＴＢＴＵ（４５mg，１当量）およびＤｉＰＥＡ（６１ｕＬ，２．５当量）のＤＭＦ（４mL）中の溶液に加えた。得られた混合物を１６時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去した。ＥｔＯＡｃ（３０mL）を加え、撹拌した。固形生成物３を濾過により収集し、ＭｅＯＨおよびＥｔＯＡｃで洗浄し、真空中で乾燥した。収量８６mg（５７％）。Ｒｆ０．１５（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ，９／１，ｖ／ｖ）。ＥＳＩ−ＭＳ：１０８３．６［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００４８】
化合物ＩＩＩおよびＩＶの一般的調製方法
カルボン酸誘導体（３３μmol）（すなわち化合物３または１１）を乾燥ＤＭＦ（２×２mL）中で繰り返し濃縮することにより乾燥し、ＤＭＦ（１mL）中に溶解し、Ｎ２雰囲気下、ＴＢＴＵ（１１mg，３３μmol）およびＤｉＰＥＡ（５．７μＬ，３３μmol）の存在下で撹拌した。１時間後、五糖４（３１μmol）を加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌し、イオン交換（Ｍｏｎｏ−Ｑ）クロマトグラフィーで分析した。反応混合物を濃縮（＜５０℃，１５mmHg）した。（粗）生成物（１０mg／mLのＨ２Ｏ／ｔ−ＢｕＯＨ溶液，１／１，ｖ／ｖ）を１０％Ｐｄ／Ｃ（粗生成物に対して等しい重量）上での水素化（Ｈ２）により脱保護した。１６時間後、溶液を脱気し０．４５μM ＨＰＬＣフィルター上で濾過し、減圧下（＜５０℃，１５mmHg）で濃縮した。この共役体をイオン交換クロマトグラフィー（Ｑ−セファロース，緩衝液：Ｈ２Ｏ→２Ｍ ＮａＣｌ）により精製し、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ２５−カラム（Ｈ２Ｏ）で脱塩し、凍結乾燥した。
【００４９】
メチルＯ−２，３−ジ−Ｏ−メチル−４−Ｏ−＜＜＜１２−Ｎ−＜＜Ｎε−（Ｄ−（＋）−ビオチニル）−Ｎ−＜）］−｛４−［［４−［［（１Ｒ）−１−［［４−（アミノイミノメチル）フェニル］メチル］−２−オキソ−２−（１−ピペリジニル）エチル］アミノ］−３−［［（４−メトキシ−２，３，６−トリメチルフェニル）スルホニル］アミノ］−１，４−（Ｓ）−ジオキソ−ブチル］アミノ］−ブタノイル｝−Ｌ−リシル＞＞−１２−アザ−３，６，９−トリオキサ−ドデシル＞＞＞−６−Ｏ−スルホ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１−＞４）−Ｏ−２，３−ジ−Ｏ−メチル−β−Ｄ−グルコピラヌロノシル−（１−＞４）−Ｏ−２，３，６−トリ−Ｏ−スルホ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１−＞４）−Ｏ−２，３−ジ−Ｏ−メチル−α−Ｌ−イドピラヌロノシル−（１−＞４）−３−Ｏ−メチル−２，６−ジ−Ｏ−スルホ−α−Ｄ−グルコピラノシドオクタキスナトリウム塩（ＩＩＩ）
化合物３（８６mg，８１μmol）を化合物４（０．１４ｇ，８０μmol）（国際公開第０１／４２２６２号に記載されているようにして調製した）と一般的手順に従って結合させることにより、化合物ＩＩＩを、調製し精製した。収量０．１４ｇ（６０％）。ＥＳＩ／ＴＯＦ−ＭＳ：８８０．９１［Ｍ−３Ｈ］３−，８８８．５７［Ｍ−３Ｈ＋Ｎａ］３−，６６０．４３［Ｍ−４Ｈ］４−。
１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，６００ＭＨｚ）；４．７１ppmの基準水信号により、４．８０から４．５０ppmの間の信号の信頼できる積分が妨害されている。δ７．６６（ｍ，２Ｈ），７．３０（ｍ，２Ｈ），６．７４（ｍ，１Ｈ），５．３６（ｍ，１Ｈ），５．２５（ｍ，１Ｈ），５．０５（ｍ，１Ｈ），４．９８（ｍ，１Ｈ），４，８４（ｍ，１Ｈ），４．４６（ｍ，２Ｈ），４．３１（ｍ，１Ｈ），４．２７−４．１３（５Ｈ），４．１３−３．９９（５Ｈ），３．９２（ｍ，１Ｈ），３．８８−３．７０（８Ｈ），３．７０−３．０７（４９Ｈ±５），３．０７−２．９２（４Ｈ），２．８５（ｍ，１Ｈ），２．７６（ｍ，１Ｈ），２．６５（ｍ，１Ｈ），２．５１（ｓ，３Ｈ），２．４０（ｓ，３Ｈ），２．３６−２．２２（ｍ，２Ｈ），２．２１−２．１１（ｍ，２Ｈ），２．０８（ｍ，１Ｈ），２．０６−１．９１（４Ｈ），１．８３−１．０３（２０Ｈ±２）。
【００５０】
【化９】
【実施例２】
【００５１】
図式２
１５−Ｎ−（９−フルオレニルメチルオキシカルボニル）−１５−アザ−３，６，９，１２−テトラオキサ−ペンタデカン酸ｔｅｒｔ−ブチル（６）
１５−アミノ−３，６，９，１２−テトラオキサ−ペンタデカン酸ｔｅｒｔ−ブチル（５）（０．５０ｇ，１．４５mmol）をＴＨＦ（７．５mL）およびＨ２Ｏ（５mL）中に溶解した。４Ｎ ＮａＯＨ溶液をｐＨが約９になるまで加えた。カルバミン酸Ｎ−９−フルオレニルメチル−コハク酸イミド（ＦｍｏｃＯＳｕ，０．５４ｇ，１．６０mmol，１．１当量）を少量ずつ加えた。１０分後、更なる４Ｎ ＮａＯＨ溶液を加えて、ｐＨを約９に調節した。３時間後、反応混合物を１Ｎ ＨＣｌ溶液でｐＨ６から７に酸性化した。Ｈ２Ｏを反応混合物に加え、ＥｔＯＡｃで３回抽出した。有機層を食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥した。濾過後、溶媒を減圧下（５０mbar，５０℃）で除去した。粗製油をシリカカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ，１／０→９５／５，ｖ／ｖ）で精製して、化合物６を黄色油（０．６１ｇ，７９％）として得た。Ｒｆ０．６４（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ，９５／５，ｖ／ｖ）。
【００５２】
１５−Ｎ−（９−フルオレニルメチルオキシカルボニル）−１５−アザ−３，６，９，１２−テトラオキサ−ペンタデカン酸塩（７）
化合物６をＤＣＭ（３．５mL）中に溶解し、ＴＦＡ（３．５mL）を窒素雰囲気下で加えた。１．５時間撹拌後、反応混合物を減圧下で濃縮した。その後、過剰のＴＦＡをトルエン中の繰り返し濃縮により除去した。ＤＣＭ／Ｅｔ２Ｏ（１００mL，１／２，ｖ／ｖ）を加え、１Ｎ ＨＣｌで洗浄した。水層をＤＣＭ／Ｅｔ２Ｏ（１００mL，１／２，ｖ／ｖ）で抽出した。加え合わせた有機層を食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥した。濾過後、溶媒を大気圧下（５０℃）で除去した。粗製油をシリカカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＡｃＯＨ，９９／０／１→８９／１０／１，ｖ／ｖ／ｖ）で精製して化合物７を得た。残ったＡｃＯＨを、粗製油状生成物をＤＣＭ／Ｅｔ２Ｏ（１／２，ｖ／ｖ）に溶解し、Ｈ２Ｏ（３回）および食塩水で洗浄し、ついでＭｇＳＯ４で乾燥して除去した。濾過後、溶媒を、大気圧下（５０℃）で除去して化合物７を黄色油（０．３７ｇ，６７％）として得た。Ｒｆ０．３２（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ，８９／１０／１，ｖ／ｖ）。
【００５３】
１５−Ｎ−（９−フルオレニルメチルオキシカルボニル）−１５−アザ−３，６，９，１２−テトラオキサ−ペンタデカノイル−ε−Ｎ−（Ｚ）−Ｌ−リジンｔｅｒｔ−ブチル（８）
化合物７（０．３７mg，０．７７mmol）をＤＣＭ（１８mL）中に溶解した。引き続き、ＤＩＰＥＡ（０．４０μＬ，２．３１mmol，３当量）およびＴＢＴＵ（０．２５ｇ，０．７７mmol）をＮ２雰囲気下で加え、溶液を１０分間撹拌した。ついで、ε−（Ｚ）−Ｌ−Ｌｙｓ−ＯｔＢｕ・ＨＣｌ（０．２９ｇ，０．７７mmol）を加え、混合物をさらに１．５時間撹拌した。反応混合物をＤＣＭで希釈し、Ｈ２Ｏ、０．１Ｎ ＨＣｌ、飽和ＮａＨＣＯ３溶液および食塩水で濯いだ。有機層を乾燥（ＭｇＳＯ４）し、大気圧下で濃縮した。精製をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ，１／０→９／１，ｖ／ｖ）で行って、化合物８を黄色油（０．５１ｇ，８３％）として得た。Ｒｆ０．８５（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ，９／１，ｖ／ｖ）。ＥＳＩ−ＭＳ：７９２．６［Ｍ＋Ｈ］＋，８１４．６［Ｍ＋Ｎａ］＋，７３６．４［Ｍ−ｔＢｕ＋Ｈ］＋。
【００５４】
１５−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−１５−アザ−３，６，９，１２−テトラオキサ−ペンタデカノイル−ε−Ｎ−（Ｚ）−Ｌ−リジンｔｅｒｔ−ブチル（９）
化合物８（０．２６ｇ，０．３２mmol）をＴＨＦ（５mL）中に溶解した。Ｅｔ２Ｎ（１mL）を加え、溶液を２４時間撹拌した。過剰のＥｔ２Ｎおよび溶媒を減圧下（５０℃）で除去した。トルエンを加え、減圧下（５０℃，６５mbar）で除去しＮ−脱保護中間生成物（０．２１ｇ，０．３２mmol）を得た。Ｒｆ０．２３（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ，９／１，ｖ／ｖ）。ＥＳＩ−ＭＳ：５７０．４［Ｍ＋Ｈ］＋，５１４．４［Ｍ−ｔＢｕ＋Ｈ］＋。粗製生成物をＤＣＭ（３mL）中に溶解した。Ｎ２雰囲気中で、Ｅｔ３Ｎ（０．１１mL）を加え、ついでジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート（７３mg，０．３４mmol，１．１当量）を加えた。５時間撹拌後、混合物を０．１Ｎ ＨＣｌ冷（５℃）溶液に加え、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を食塩水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）した。濾過後、溶媒を、減圧下（１８０mbar，５０℃）で除去した。精製をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ，１／０→９５／５，ｖ／ｖ）で行って、９を無色油（０．１７ｇ，８２％）として得た。Ｒｆ０．５（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ，９／１，ｖ／ｖ）。ＥＳＩ−ＭＳ：６７０．６［ＭＨ＋Ｈ］＋，６９２．４［ＭＨ＋Ｎａ］＋，５７０．４［Ｍ−Ｂｏｃ＋Ｈ］＋，５１４．１［Ｍ−Ｂｏｃ−ｔＢｕ＋Ｈ］＋。
【００５５】
１５−アザ−３，６，９，１２−テトラオキサ−ペンタデカノイル−ε−［Ｄ−（＋）−ビオチニル］−Ｌ−リジン（１０）
化合物９（０．２３ｇ，０．３４mmol）をＥｔＯＨ（８mL）およびＨ２Ｏ（１．２mL）中に溶解した。溶液を窒素で５分間フラッシングした後、Ｐｄ／Ｃ１０％（０．１１ｇ）を加えた。水素を溶液に４時間通過させた。窒素を溶液に１０分間フラッシングして全ての水素を除去した。混合物をデカライト上で濾過し、減圧下（１７０mbar，５０℃）で濃縮してＮ−Ｌ−リジン脱保護中間体を無色油（０．１５ｇ，８１％）として得た。Ｒｆ０．０２（ＤＣＭ／ＥｔＯＡｃ，９／１，ｖ／ｖ）。
Ｄ−（＋）−ビオチン（７５mg，０．３１mmol）をＤＣＭ（７mL）中に懸濁した。引き続き、Ｎ２雰囲気下でＤＩＰＥＡ（０．１１mL，０．６２mmol，２当量）およびＴＢＴＵ（０．１０ｇ，０．３１mmol）を加え、溶液を１時間撹拌した。上記のＮ−Ｌ−リジン脱保護中間体のＤＣＭ（３mL）中の溶液を反応混合物に加えた。混合物を１６時間撹拌した。Ｈ２Ｏを加え、ＤＣＭ（３×）で抽出した。有機層を乾燥（ＭｇＳＯ４）し、減圧下（８５０mbar，５０℃）でろ過および濃縮した。精製をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ，１／０→９／１ｖ／ｖ）で行って油（０．１３ｇ，６０％）を得た。Ｒｆ０．４８（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ，９／１，ｖ／ｖ）。ＥＳＩ−ＭＳ：７６２．６［Ｍ＋Ｈ］，７８４．６［Ｍ＋Ｎａ］，６６２．４［Ｍ−Ｂｏｃ＋Ｈ］，６０６．４［Ｍ−Ｂｏｃ−ｔＢｕ＋Ｈ］。油をジオキサン中の乾燥４Ｎ ＨＣｌ溶液（４mL）中に溶解し、撹拌した。１時間後、不溶性の油が出現し、その後溶媒を減圧下（１００mbar，５０℃）で除去し、化合物１０を定量的収率で得た。ＥＳＩ−ＭＳ：６０６．４［Ｍ＋Ｈ］＋，６２８．４［Ｍ＋Ｎａ］＋。
【００５６】
【化１０】
【００５７】
図式３
Ｎε−（Ｄ−（＋）−ビオチニル）−Ｎ−｛｛４−［［４−［［（１Ｒ）−１−［［４−（１，２，４−オキサジアゾール−５−オニル）フェニル］メチル］−２−オキソ−２−（１−ピペリジニル）エチル］アミノ］−３−［［（４−メトキシ−２，３，６−トリメチルフェニル）スルホニル］アミノ］−１，４−（Ｓ）−ジオキソ−ブチル］アミノ］−ブタノイル｝−１５−Ｎ−（１５−アザ−１−オキソ−３，６，９，１２−テトラオキサ−ペンタデシル）｝｝−Ｌ−リジン（１１）
化合物１０（０．１２ｇ，０．２１mmol）を、化合物３の調製で記載したように、化合物２（０．１５ｇ，０．２１mmol）に結合させた。粗製生成物を調製用ＨＰＬＣ（Ｃ１８，ＡＣＮ／Ｈ２Ｏ，０．０１％ＴＦＡ）で精製して、化合物１１を純粋な形態で得た。収量６０mg（２２％）。ＥＳＩ−ＭＳ：１３１６．８［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００５８】
メチルＯ−２，３−ジ−Ｏ−メチル−４−Ｏ−＜＜＜１２−Ｎ−＜＜Ｎε−（Ｄ−（＋）−ビオチニル）−Ｎ−＜［１５−Ｎ−（１５−アザ−１−オキソ−３，６，９，１２−テトラオキサ−ペンタデシル）］−｛４−［［４−［［（１Ｒ）−１−［［４−（アミノイミノメチル）フェニル］メチル］−２−オキソ−２−（１−ピペリジニル）エチル］アミノ］−３−［［（４−メトキシ−２，３，６−トリメチルフェニル）スルホニル］アミノ］−１，４−（Ｓ）−ジオキソ−ブチル］アミノ］−ブタノイル｝＞−Ｌ−リシル＞＞−１２−アザ−３，６，９−トリオキサ−ドデシル＞＞＞−６−Ｏ−スルホ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１−＞４）−Ｏ−２，３−ジ−Ｏ−メチル−β−Ｄ−グルコピラヌロノシル−（１−＞４）−Ｏ−２，３，６−トリ−Ｏ−スルホ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１−＞４）−Ｏ−２，３−ジ−Ｏ−メチル−α−Ｌ−イドピラヌロノシル−（１−＞４）−３−０−メチル−２，６−ジ−０−スルホ−α−Ｄ−グルコピラノシドオクタキスナトリウム塩（ＩＶ）
一般的手順に従って化合物１１を化合物４に結合させ、中間体共役体を脱保護して化合物ＩＶを得た。収量９．２mg（７．６％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，６００ＭＨｚ），４．７０ppmにおける基準水信号により、４．８０から４．５４ppmの間の信号の信頼できる積分が妨害されている。δ７．５９（ｄ，２Ｈ），７．２３（ｄ，２Ｈ），６．６８（ｓ，１Ｈ），５．３２（ｍ，１Ｈ），５．１９（ｍ，１Ｈ），４．９１（ｍ，１Ｈ），４．８５（ｍ，１Ｈ），４．７６（ｍ），４．５３−４．３１（３Ｈ），４．３０−４．０５（９Ｈ），４．０４−３．９０（７Ｈ），３．８９−３．６２（７Ｈ），３．６１−３．４２（４２Ｈ±４），３．４２−３．３１（１８Ｈ±２），３．３１−３．１４（１２Ｈ），３．１４−３．０５（５Ｈ），３．０３−２．９４（３Ｈ），２．９３−２．８４（２Ｈ），２．８１（ｄｄ，１Ｈ），２．７０（ｄｄ，１Ｈ），２．５９（ｄ，１Ｈ），２．４４（ｓ，３Ｈ），２．３４（ｓ，３Ｈ），２．２２−２．０８（４Ｈ），２．０６（ｔ，２Ｈ），１．９６（ｓ，３Ｈ），１．７２−１．０１（１８Ｈ±２）。
ＥＳＩ／ＴＯＦ−ＭＳ：ｍ／ｚ５７４．７２［Ｍ−５Ｈ］５−，ｍ／ｚ７１８．６６［Ｍ−４Ｈ］４−，ｍ／ｚ９５８．５６［Ｍ−３Ｈ］３−。
【００５９】
【化１１】
【実施例３】
【００６０】
薬理学
ヒト血漿中の抗Ｘａ因子活性および抗ＩＩａ因子活性の測定のためのインビトロ試験
ヒト血漿中の試験化合物の抗Ｘａ因子活性および抗ＩＩａ因子活性を、基質として各々Ｓ２２２２またはＳ２２３８（Ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｘ，Ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｃｓ Ｌｔｄ，Ｍｏｌｎｄａｌ，Ｓｗｅｄｅｎ）を用いて、アミド分解活性を測定することにより測定した。手順は、ＴｅｉｅｎおよびＬｉｅにより記載されている方法（Ｔｅｉｅｎ ＡＮ，Ｌｉｅ Ｍ． Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎ ａｍｉｄｏｌｙｔｉｃ ｈｅｐａｒｉｎ ａｓｓａｙ ｍｅｔｈｏｄ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｂｙ ａｄｄｉｎｇ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ａｎｔｉｔｈｒｏｍｂｉｎ ＩＩＩ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｒｅｓ．１９７７，１０：３９９−４１０）に基づいた。両方の活性はＩＣ−５０（Mol／Ｌ）で表してある。
【００６１】
【表１】
【００６２】
３．１ 薬物動態学
Ｏｒｇ ４２６７５の薬物動態学的特性および本発明の化合物ＩＩＩの薬物動態学的特性を、３００から４００ｇの雄のＷｉｓｔａｒラットについて研究した。ラットにＯ２／Ｎ２Ｏ／イソフルランの混合物の吸入により麻酔をかけ、その後右頚静脈にカニューレ処置をした。翌日、１００nmol／kgの投与量でラットに皮下注射処置をした。皮下注射投与後、数回の間隔でサンプル採取を行った。ついで、血液を遠心分離した後血漿を吸い上げて、使用するまで−２０℃で貯蔵した。試験化合物の濃度を、抗Ｘａ活性または抗ＩＩａ活性を各々測定するために、基質としてＳ−２２２２またはＳ−２２３８（Ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｘ， Ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｃｓ Ｌｔｄ， Ｍｏｌｎｄａｌ， Ｓｗｅｄｅｎ）を用いてアミド分解活性について測定した。両方の手順は、Ｔｅｉｅｎ およびＬｉｅの方法（Ｔｅｉｅｎ ＡＮ， Ｌｉｅ Ｍ． Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎ ａｍｉｄｏｌｙｔｉｃ ｈｅｐａｒｉｎ ａｓｓａｙ ｍｅｔｈｏｄ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｂｙ ａｄｄｉｎｇ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ａｎｔｉｔｈｒｏｍｂｉｎ ＩＩＩ． Ｔｈｒｏｍｂ． Ｒｅｓ． １９７７， １０： ３９９−４１０）に基づいた。得られた血漿サンプル中の濃度は、試験化合物自身の原液を用いて作成した検量線に対して測定した。サンプル中の濃度をnmol／mLで表し、速度パラメーターをＷｉｎＮｏｎｌｉｎのノンコンパートメントモデルを用いて算出した（図１参照）。
【００６３】
【表２】
【００６４】
本発明の実験化合物ＩＩＩおよびＯｒｇ４２６７５は、実験データの変動性の範囲内で、ラットにおいて同じ薬物動態学的挙動を示すことが結論づけられる。
【００６５】
３．２ 薬物動態学−中和実験
１００nmol／kgの投与量で本発明の化合物ＩＩＩまたはＯｒｇ４２６７５で、皮下でラットを、処置した。ｔ＝２ｈの時点で血液サンプルを採取し、本発明の化合物ＩＩＩまたはＯｒｇ４２６７５で処置したラットにアビジン（卵白由来，Ｓｉｇｍａ）の１０mg／kgを静脈内投与した。続いて、０．１７、０．５、１、２、３、および７時間の時点で血液をサンプル採取した。血液は薬物動態学実験に記載されているようにして処置し、サンプルの濃度は、（残存する）抗Ｘａ活性または抗ＩＩａ活性を測定することにより測定した（図２参照）。
【００６６】
【表３】
【００６７】
本発明の化合物ＩＩＩの皮下投与（１００nmol／kg）後、（残存する）抗Ｘａ因子活性および抗ＩＩａ因子活性を測定することにより定量される抗血栓性活性は、アビジンの１０mg／kgの静脈内投与により中和できることが結論付けられる。本発明の化合物ＩＩＩのアビジンによる中和は、その血漿中濃度が急速に減少すること、およびアビジンの投与後に本発明の化合物ＩＩＩのＡＵＣｉｎｆが化合物Ｏｒｇ４２６７５と比較して著しく減少することにより反映される。さらにまた、非ビオチン化相当化合物であるＯｒｇ４２６７５の薬物動態学的挙動は、アビジンの添加により影響を受けない。後者により、中和はビオチン標識の存在と関連していること、およびこれはデュアルインヒビターの薬物動態学的挙動に影響を与えないことが確認される。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の抗血栓性化合物
【化１】
［式中、オリゴ糖は、２から２５単糖単位を含む負荷電のオリゴ糖残基であり、前記荷電は、正荷電の対イオンにより相殺され、ならびに前記オリゴ糖残基は、それ自体が（ＡＴ−ＩＩＩ介在性）抗Ｘａ活性を有するオリゴ糖から誘導され；
スペーサーは、１０から７０原子の鎖長を有する、本質的に薬理学的に不活性な屈曲性連結残基であり；
Ａは、残基−ＣＨ［ＮＨ−ＳＯ２−Ｒ１］［ＣＯ−ＮＲ２−ＣＨ（４−ベンズアミジン）−ＣＯ−ＮＲ３Ｒ４］｛Ｒ１は、フェニル、ナフチル、１，２，３，４−テトラヒドロナフチル、（イソ）キノリニル、テトラヒドロ（イソ）キノリニル、３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリニル、クロマニルまたは樟脳基であり、これらの基は、（１−８Ｃ）アルキルまたは（１−８Ｃ）アルコキシから選択される１つ以上の置換基で場合により置換されており、ならびにＲ２およびＲ３は、独立してＨまたは（１−８Ｃ）アルキルであり；Ｒ４は、（１−８Ｃ）アルキルまたは（３−８Ｃ）シクロアルキルであり；またはＲ３およびＲ４は、それらが結合している窒素原子と一緒に、もう１つのヘテロ原子を場合により含有する非芳香族（４から８）員環であり、前記環は（１−８Ｃ）アルキルまたはＳＯ２−（１−８Ｃ）アルキルで場合により置換されている｝である。］
であり、ここで、前記式Ｉの化合物が、さらに、ビオチン残基またはこの類似体との少なくとも１つの共有結合を含む、前記化合物、またはこれらの薬学的に許容できる塩、プロドラッグまたはこれらの溶媒和物。
【請求項２】
オリゴ糖残基が、２から１６単糖単位を有する、請求項１の化合物。
【請求項３】
オリゴ糖が、硫酸化五糖残基である、請求項２の化合物。
【請求項４】
オリゴ糖が、式（ＩＩ）：
【化２】
（式中、Ｒ５は、独立してビオチン残基もしくはこの類似体、ＯＳＯ３−または（１−８Ｃ）アルコキシである。）の五糖残基である、請求項３の化合物。
【請求項５】
五糖残基が、構造：
【化３】
（Ｒ５は、ＯＣＨ３またはＯＳＯ３−である。）
を有する、請求項４の化合物。
【請求項６】
五糖残基が、構造：
【化４】
を有する、請求項５の化合物。
【請求項７】
スペーサーが、１０から５０原子の長さ、好ましくは１６から２２、および最も好ましくは１９原子の長さを有する、請求項１から６のいずれか一項の化合物。
【請求項８】
スペーサーが、１６から２２原子の長さを有する、請求項７の化合物。
【請求項９】
スペーサーが、少なくとも１つの−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）−要素を含む、請求項１から８のいずれか一項の化合物。
【請求項１０】
Ｒ１が、メチルまたはメトキシから選択される１つ以上の置換基で場合により置換されるフェニルまたはナフチルである、請求項１から９のいずれか一項の化合物。
【請求項１１】
Ｒ１が、４−メトキシ−２，３，６−トリメチルフェニルである、請求項１０の化合物。
【請求項１２】
ＮＲ３Ｒ４が、ピペリジニル基を表す、請求項１から１１のいずれか一項の化合物。
【請求項１３】
Ｒ２が、Ｈである、請求項１から１２のいずれか一項の化合物。
【請求項１４】
ビオチン残基またはこの類似体との１つの共有結合を含む、請求項１から１３のいずれかの化合物。
【請求項１５】
式Ｉの化合物のオリゴ糖残基が、ビオチン残基またはこの類似体との共有結合を含む、請求項１から４、７から１４のいずれかの化合物。
【請求項１６】
式Ｉの化合物のオリゴ糖残基が、式：−（ＮＨ−ＣＯ）−（ＣＨ２）５−ＮＲ−ＢＴ（式中、ＢＴは残基：
【化５】
であり、Ｒは、Ｈまたは（１−４Ｃ）アルキルである。）のビオチン類似体との１つの共有結合を含む、請求項１５の化合物。
【請求項１７】
式Ｉの化合物のスペーサーが、ビオチン残基またはこの類似体との共有結合を含む、請求項１から１４のいずれかの化合物。
【請求項１８】
式Ｉの化合物のスペーサーが、式：−（ＣＨ２）４−ＮＲ−ＢＴ（式中、ＲおよびＢＴは、前記に定義したとおりである。）のビオチン類似体の残基との１つの共有結合を含む、請求項１７の化合物。
【請求項１９】
【化６】
またはこれらの薬学的に許容できる塩、プロドラッグまたはこれらの溶媒和物である、請求項１８の化合物。
【請求項２０】
ナトリウム塩の形態である、請求項１９の化合物。
【請求項２１】
式Ｉの化合物の残基Ａが、ビオチン残基またはこの類似体との共有結合を含む、請求項１から１４のいずれか一項の化合物。
【請求項２２】
請求項１から２１のいずれか一項の化合物および薬学的に適した補助剤を含む、医薬組成物。
【請求項２３】
残基Ａにおけるベンズアミジン部分が、１，２，４−オキサジアゾリン−５−オン基である前駆体の形態であり、および続いて脱保護によりベンズアミジンに転換される段階を含む、式Ｉの化合物の調製方法。
【請求項２４】
治療において用いるための、請求項１から２１のいずれか一項の化合物。
【請求項２５】
血栓症またはその他のトロンビン関連疾患の治療または予防のための医薬の製造のための、請求項１から２１のいずれか一項の化合物の使用。
【請求項１】
式（Ｉ）の抗血栓性化合物
【化１】
［式中、オリゴ糖は、２から２５単糖単位を含む負荷電のオリゴ糖残基であり、前記荷電は、正荷電の対イオンにより相殺され、ならびに前記オリゴ糖残基は、それ自体が（ＡＴ−ＩＩＩ介在性）抗Ｘａ活性を有するオリゴ糖から誘導され；
スペーサーは、１０から７０原子の鎖長を有する、本質的に薬理学的に不活性な屈曲性連結残基であり；
Ａは、残基−ＣＨ［ＮＨ−ＳＯ２−Ｒ１］［ＣＯ−ＮＲ２−ＣＨ（４−ベンズアミジン）−ＣＯ−ＮＲ３Ｒ４］｛Ｒ１は、フェニル、ナフチル、１，２，３，４−テトラヒドロナフチル、（イソ）キノリニル、テトラヒドロ（イソ）キノリニル、３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリニル、クロマニルまたは樟脳基であり、これらの基は、（１−８Ｃ）アルキルまたは（１−８Ｃ）アルコキシから選択される１つ以上の置換基で場合により置換されており、ならびにＲ２およびＲ３は、独立してＨまたは（１−８Ｃ）アルキルであり；Ｒ４は、（１−８Ｃ）アルキルまたは（３−８Ｃ）シクロアルキルであり；またはＲ３およびＲ４は、それらが結合している窒素原子と一緒に、もう１つのヘテロ原子を場合により含有する非芳香族（４から８）員環であり、前記環は（１−８Ｃ）アルキルまたはＳＯ２−（１−８Ｃ）アルキルで場合により置換されている｝である。］
であり、ここで、前記式Ｉの化合物が、さらに、ビオチン残基またはこの類似体との少なくとも１つの共有結合を含む、前記化合物、またはこれらの薬学的に許容できる塩、プロドラッグまたはこれらの溶媒和物。
【請求項２】
オリゴ糖残基が、２から１６単糖単位を有する、請求項１の化合物。
【請求項３】
オリゴ糖が、硫酸化五糖残基である、請求項２の化合物。
【請求項４】
オリゴ糖が、式（ＩＩ）：
【化２】
（式中、Ｒ５は、独立してビオチン残基もしくはこの類似体、ＯＳＯ３−または（１−８Ｃ）アルコキシである。）の五糖残基である、請求項３の化合物。
【請求項５】
五糖残基が、構造：
【化３】
（Ｒ５は、ＯＣＨ３またはＯＳＯ３−である。）
を有する、請求項４の化合物。
【請求項６】
五糖残基が、構造：
【化４】
を有する、請求項５の化合物。
【請求項７】
スペーサーが、１０から５０原子の長さ、好ましくは１６から２２、および最も好ましくは１９原子の長さを有する、請求項１から６のいずれか一項の化合物。
【請求項８】
スペーサーが、１６から２２原子の長さを有する、請求項７の化合物。
【請求項９】
スペーサーが、少なくとも１つの−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）−要素を含む、請求項１から８のいずれか一項の化合物。
【請求項１０】
Ｒ１が、メチルまたはメトキシから選択される１つ以上の置換基で場合により置換されるフェニルまたはナフチルである、請求項１から９のいずれか一項の化合物。
【請求項１１】
Ｒ１が、４−メトキシ−２，３，６−トリメチルフェニルである、請求項１０の化合物。
【請求項１２】
ＮＲ３Ｒ４が、ピペリジニル基を表す、請求項１から１１のいずれか一項の化合物。
【請求項１３】
Ｒ２が、Ｈである、請求項１から１２のいずれか一項の化合物。
【請求項１４】
ビオチン残基またはこの類似体との１つの共有結合を含む、請求項１から１３のいずれかの化合物。
【請求項１５】
式Ｉの化合物のオリゴ糖残基が、ビオチン残基またはこの類似体との共有結合を含む、請求項１から４、７から１４のいずれかの化合物。
【請求項１６】
式Ｉの化合物のオリゴ糖残基が、式：−（ＮＨ−ＣＯ）−（ＣＨ２）５−ＮＲ−ＢＴ（式中、ＢＴは残基：
【化５】
であり、Ｒは、Ｈまたは（１−４Ｃ）アルキルである。）のビオチン類似体との１つの共有結合を含む、請求項１５の化合物。
【請求項１７】
式Ｉの化合物のスペーサーが、ビオチン残基またはこの類似体との共有結合を含む、請求項１から１４のいずれかの化合物。
【請求項１８】
式Ｉの化合物のスペーサーが、式：−（ＣＨ２）４−ＮＲ−ＢＴ（式中、ＲおよびＢＴは、前記に定義したとおりである。）のビオチン類似体の残基との１つの共有結合を含む、請求項１７の化合物。
【請求項１９】
【化６】
またはこれらの薬学的に許容できる塩、プロドラッグまたはこれらの溶媒和物である、請求項１８の化合物。
【請求項２０】
ナトリウム塩の形態である、請求項１９の化合物。
【請求項２１】
式Ｉの化合物の残基Ａが、ビオチン残基またはこの類似体との共有結合を含む、請求項１から１４のいずれか一項の化合物。
【請求項２２】
請求項１から２１のいずれか一項の化合物および薬学的に適した補助剤を含む、医薬組成物。
【請求項２３】
残基Ａにおけるベンズアミジン部分が、１，２，４−オキサジアゾリン−５−オン基である前駆体の形態であり、および続いて脱保護によりベンズアミジンに転換される段階を含む、式Ｉの化合物の調製方法。
【請求項２４】
治療において用いるための、請求項１から２１のいずれか一項の化合物。
【請求項２５】
血栓症またはその他のトロンビン関連疾患の治療または予防のための医薬の製造のための、請求項１から２１のいずれか一項の化合物の使用。
【図１】
【図２】
【図２】
【公開番号】特開２０１３−３５８５１（Ｐ２０１３−３５８５１Ａ）
【公開日】平成２５年２月２１日（２０１３．２．２１）
【国際特許分類】
【外国語出願】
【出願番号】特願２０１２−２０２３０７（Ｐ２０１２−２０２３０７）
【出願日】平成２４年９月１４日（２０１２．９．１４）
【分割の表示】特願２００７−５４７５０９（Ｐ２００７−５４７５０９）の分割
【原出願日】平成１７年１２月２１日（２００５．１２．２１）
【出願人】（５１２０５９９３６）エム・エス・ディー・オス・ベー・フェー (24)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２５年２月２１日（２０１３．２．２１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−２０２３０７（Ｐ２０１２−２０２３０７）
【出願日】平成２４年９月１４日（２０１２．９．１４）
【分割の表示】特願２００７−５４７５０９（Ｐ２００７−５４７５０９）の分割
【原出願日】平成１７年１２月２１日（２００５．１２．２１）
【出願人】（５１２０５９９３６）エム・エス・ディー・オス・ベー・フェー (24)
【Ｆターム（参考）】
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