ビバリルジンの製造方法
本発明は、収束的５断片合成を介しての、ビバリルジン、即ち、次式の２０量体ペプチドの製造方法、およびその幾つかのペプチド中間体に関する：
Ｈ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＨ （Ｉ）
Ｈ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＨ （Ｉ）
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
本発明はビバリルジン、即ち、次式の２０量体ペプチドの新規な収束合成に関する：
Ｈ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＨ （Ｉ）
本発明は更に、ビバリルジンの合成における中間体としての、幾つかの保護されたペプチドに関する。
【０００２】
トロンビンによるタンパク質分解プロセッシングは、凝血の制御における中枢をなしている。潜在的な臨床的トロンビンペプチド阻害剤であるヒルジンは、６５のアミノ酸からなっている。しかし、より短いペプチドセグメントもまた、生命を脅かす病状である血栓症の治療に有効であることが示されている。
【０００３】
米国特許第５，１９６，４０４号は、中でも、これらのより短いペプチドの一つ、即ち、強力なトロンビン阻害剤であるビバリルジンを開示している。ビバリルジンはまた、ヒルログ−８、エフルダン、アンジオマックス（登録商標）またはヒルログ（Hirulog；登録商標）としても知られており、式Ｉに与えられたアミノ酸配列を有している。ＷＯ９８／５０５６３は、ビバリルジンを含む種々のペプチドの、組換え技術による調製方法を開示している。この方法は、該ペプチドを融合タンパク質の一部として発現させ、続いてこの融合ペプチドから、アシル受容体により該ペプチドを放出させることを含んでいる。
【０００４】
オカムラ等（Okayama et al. Chem. Pharm. Bull. 1996, 44, 1344-1350）およびスタインメッツァー等（Steinmetzer et al. Eur. J. Biochem. 1999, 265, 598-605）は、種々のヒルログのＷａｎｇ樹脂上での固相合成を案出した。Ｗａｎｇ樹脂は、濃トリフルオロ酢酸を用いる該樹脂からのペプチドの開裂を必要とする。ビバリルジンの調製のための同様の固相合成アプローチにおいて、ＷＯ９１／０２７５０は、単一のＢｏｃ保護されたアミノ酸をＢｏｃ−Ｌ−ロイシン−ｏ−ジビニルベンゼン樹脂に結合させ、続いてＨＦ／ｐ−クレゾール／硫酸エチルメチルを使用して同時脱保護および脱離を行い、その後に凍結乾燥および精製を行う逐次的アプローチを開示している。両者の場合、樹脂からのペプチドの開裂には攻撃的な酸性条件が必要とされ、これは同時に全般的な脱保護を生じさせ、アミノ酸残基との望ましくない副反応を生じて、生成物の純度に悪影響を及ぼし易い。更に、固相合成においては、取込みミス、一つのアミノ酸の二重ヒット、および／またはラセミ化により屡々副反応が生じ、目的のペプチドに非常に類似した構造を有する副生成物が生じる。従って、精製が厄介であり、収率の低下をもたらす。特に、より長いペプチドは、未だ固相支持体に結合している間に不規則なコンホメーションを取る傾向があり、これは成長している鎖に追加のアミノ酸を結合させるのを更に困難にする。従って、この問題はペプチドの長さが長くなるに伴って増大する。
【０００５】
ＷＯ２００７／０３３３８３は、固相合成、または固相合成および溶液合成の組合せ（混合アプローチ）に基づくビバリルジンの製造方法を開示している。一実施形態において、ビバリルジンペプチド配列は、酸に過度に不安定な樹脂上で調製される。もう一つの実施形態において、ビバリルジンは、側鎖保護されたＮ末端ペプチド断片と側鎖保護されたＣ末端ペプチド断片をカップリングさせ、続いて強酸性条件を用いて脱保護することにより調製される。この場合、前記Ｎ末端断片および前記Ｃ末端断片の前駆体（即ち、ペプチド配列マイナスＬｅｕ)は、両者共に固相合成により調製される。この戦略の一つの欠点は、かなりのＤ−Ｔｙｒ１９−ビバリルジンが形成されることである。この不純物は除去するのが難しく、従って、精製された生成物を得るためには余計な努力およびコストを必要とし、また収率が低下する。加えて、ＷＯ２００７／０３３３８３の実施例で得られた精製ピバリルジンの量は数グラムの範囲にしか過ぎず、このアプローチは良好な純度をもったビバリルジンの大規模製造には適さないことを示している。
【発明の概要】
【０００６】
本発明の目的は、線型固相合成の既知の欠点を克服し、工業的規模での製造に適したより効率的なビバリルジンの合成を提供することである。この目的は、請求項１に従う方法、請求項１９のペプチド断片、および請求項２９に従うこれらペプチド断片の使用によって達成された。好ましい実施形態は、従属請求項２〜１８および２０〜２８の主題を構成する。
【０００７】
本発明は、収束的アプローチに従う方法、即ち、個々の断片を別々に合成し、次いで溶液相中でカップリングさせて望ましいペプチドを構築する方法に関する。収束合成の困難な問題は、収束合成の既知の欠点を克服するための、適切な断片およびそれらのカップリング順序を見つけることである。これらの欠点は、カップリングおよび単離の際の溶解度の問題、並びに、固相合成と比較したときの低い反応速度、およびカップリングの際の遙かに高いＣ末端断片のラセミ化のリスクである。ビバリルジンは２０のアミノ酸残基からなっているので、莫大な数の可能な断片およびカップリング順序が存在する。加えて、ビバリルジンは７つのアミノ酸残基、即ち、−Ａｒｇ３−、−Ａｓｎ９−、−Ａｓｐ１１−、−Ｇｌｕ１３−、−Ｇｌｕ１４−、−Ｇｌｕ１７−および−Ｇｌｕ１８−を含んでおり、これらの全てが適切な保護および脱保護を必要とする反応性側鎖を有している。同じことが、一つの断片のＮ末端およびＣ末端の適切な保護および脱保護にも適用され、従って本発明の目的を達成する経路を見出すための困難な問題が増大される。
【０００８】
驚くべきことに、出願人は、以下で定義する［（１＋２）＋（３＋｛４＋５｝）］戦略によって、式Ｉのビバリルジンを有利に構築できることを見出した。数字１，２および５は、式Ｖ，ＶＩおよびＸの三つのペプチド断片を表し、数字３は式ＸＩＩＩのアスパラギン酸誘導体を表し、数字４は式ＸＩのフェニルアラニン誘導体を表している。本発明は、式Ｉのビバリルジンの溶液相での製造方法に関し、該方法は下記の工程を含んでいる：
（ａ）次式の任意に側鎖保護されたペプチドを、
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＯＨ（配列番号４） （Ｖ），
ここでのＰ１は保護基である
次式の任意に側鎖保護されたペプチドと反応させて、
Ｈ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＰ２（配列番号５）（ＶＩ）
ここでのＰ２は保護基である
次式の任意に側鎖保護されたペプチドを製造する工程と、
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＰ２（配列番号２） （ＶＩＩ）
ここでのＰ１およびＰ２は上記で定義した通りである；
（ｂ）工程（ａ）で製造されたペプチドのＰ２を除去して、次式の任意に側鎖保護されたペプチドを製造する工程と、
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＨ（配列番号２） （ＩＩ）
ここでのＰ１は上記で定義した通りである；
（ｃ）次式の側鎖保護されたペプチドを、
Ｈ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号８） （Ｘ），
ここでのＰ３は保護基である；
次式のフェニルアラニンと反応させて、
Ｐ４−Ｐｈｅ１２−ＯＨ （ＸＩ）
ここでのＰ４は保護基である
次式の側鎖保護されたペプチドを製造する工程と、
Ｐ４−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号９） （ＸＩＩ）
ここでのＰ３およびＰ４は上記で定義した通りである；
（ｄ）工程（ｃ）で製造したペプチドのＰ４を除去して、対応するＮ末端が脱保護された式ＸＩＩＩの側鎖保護されたペプチドを製造する工程と；
（ｅ）工程（ｄ）で製造された式ＸＩＩのペプチドを、次式の側鎖保護されたアスパラギン酸と反応させて、
Ｐ５−Ａｓｐ１１−ＯＨ （ＸＩＩＩ）
ここでのＰ５は保護基である
次式の側鎖保護されたペプチドを製造する工程と、
Ｐ５−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号３） （ＸＩＶ）
ここでのＰ３およびＰ５は上記で定義した通りである；
（ｆ）工程（ｅ）で製造されたペプチドのＰ５を除去して、次式の側鎖保護されたペプチドを製造する工程と、
Ｈ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号３） （ＩＩＩ）
ここでのＰ３は上記で定義した通りである；
（ｇ）工程（ｂ）で製造された式ＩＩの任意に側鎖保護されたペプチドを、工程（ｆ）で製造された式ＩＩＩの側鎖保護されたペプチドと反応させて、次式の側鎖保護されたペプチドを製造する工程と、
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号１） （ＩＶ）
ここでのＰ１およびＰ３は上記で定義した通りである；
（ｈ）工程（ｇ）で製造されたペプチドのＰ１，Ｐ３および側鎖保護基を除去して、式Ｉのビバリルジンを製造する工程。
【０００９】
本発明の方法は、収束的断片合成を介したビバリルジンの非常に効率的な合成を可能にし、これは工業的規模での製造に容易に適合させることができる。
【００１０】
Ｃ末端保護基Ｐ２（ペプチドＶＩについて）およびＰ３（ペプチドＸについて）は、他の保護基の直交性に準じた如何なる保護基であってもよい。適切な例は、メチル（Ｍｅ）またはエチル（Ｅｔ）のような鹸化により除去可能なＣ末端保護基、或いは接触水素化により除去可能なＣ末端保護基である。
【００１１】
本発明の方法の一実施形態では、工程（ａ）において、保護基Ｐ１は接触水素化に対して安定な保護基であり、また保護基Ｐ２は接触水素化により除去可能で且つ任意の側鎖保護基に対して直交性の保護基であり；工程（ｃ）において、保護基Ｐ３は接触水素化により除去可能な保護基であり、また保護基Ｐ４は、式Ｘのペプチドの側鎖保護基に対して、およびＰ３に対して直交性の保護基であり；工程（ｅ）において、保護基Ｐ５は式ＸＩＩおよびＸＩＩＩのペプチド／アミノ酸の側鎖保護基に対して、およびＰ３に対して直交性の保護基であり、以下の工程を含んでなる溶液相プロセスを提供する：
（ａ）次式の任意に側鎖保護されたペプチドを、
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＯＨ（配列番号４） （Ｖ）
ここでのＰ１は接触水素化に対して安定な保護基である
次式の任意に側鎖保護されたペプチドと反応させて、
Ｈ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＰ２（配列番号５）（ＶＩ）
ここでのＰ２は接触水素化により除去可能で、勝つ任意の側鎖保護基に対して直交性の保護基である
次式の任意に側鎖保護されたペプチドを製造する工程、
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＰ２（配列番号２） （ＶＩＩ）
ここでのＰ１およびＰ２は上記で定義した通りである：
（ｂ）工程（ａ）で製造されたペプチドのＰ２を除去して、次式の任意に側鎖保護されたペプチドを製造する工程、
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＨ（配列番号２） （ＩＩ）
ここでのＰ１は上記で定義した通りである：
（ｃ）次式の側鎖保護されたペプチドを、
Ｈ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号８） （Ｘ）
ここでのＰ３は接触水素化により除去可能な保護基である
次式のフェニルアラニンと反応させて、
Ｐ４−Ｐｈｅ１２−ＯＨ （ＸＩ）
ここでのＰ４は式Ｘのペプチドの側鎖保護基に対して、およびＰ３に対して直交性の保護基である
次式の側鎖保護されたペプチドを製造する工程、
Ｐ４−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号９） （ＸＩＩ）
ここでのＰ３およびＰ４は上記で定義した通りである；
（ｄ）工程（ｃ）で製造されたペプチドのＰ４を除去して、対応するＮ末端が脱保護された、式ＸＩＩの側鎖保護されたペプチドを製造する工程；
（ｅ）工程（ｄ）で製造された式ＸＩＩのペプチドを、次式の側鎖保護されたアスパラギン酸と反応させて、
Ｐ５−Ａｓｐ１１−ＯＨ （ＸＩＩＩ）
ここでのＰ５は式ＸＩＩおよびＸＩＩＩのペプチド／アミノ酸の側鎖保護基に対して、およびＰ３に対して直交性の保護基である
次式の側鎖保護されたペプチドを製造する工程、
Ｐ５−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号３） （ＸＩＶ）
ここでのＰ３およびＰ５は上記で定義した通りである；
（ｆ）工程（ｅ）で製造されたペプチドのＰ５を除去して、次式の側鎖保護されたペプチドを製造する工程、
Ｈ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号３） （ＩＩＩ）
ここでのＰ３は上記で定義した通りである；
（ｇ）工程（ｂ）で製造された式ＩＩの任意に側鎖保護されたペプチドを、工程（ｆ）で製造された式ＩＩＩの側鎖保護されたペプチドと反応させて、次式の側鎖保護されたペプチドを製造する工程、
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号１） （ＩＶ），
ここでのＰ１およびＰ３は上記で定義した通りである；
（ｈ）工程（ｇ）で製造されたペプチドのＰ１，Ｐ３および側鎖保護基を除去して、次式のビバリルジンを製造する工程、
Ｈ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＨ（配列番号１） （Ｉ）。
【００１２】
ここにおいて、および以下において、二つの異なる保護基の挙動を特徴づける属性としての「直交性」の用語は、一つの保護基が、他の保護基には影響しない一定の方法により開裂可能であることを意味すると理解されるべきものである。例えば、「側鎖保護基に対して直交性である保護基」とは、側鎖保護基に影響しない一定の方法により開裂可能である保護基を意味する。
【００１３】
この戦略の利点は、それが商業的規模で適用でき、従って、Ｄ−Ｐｈｅ１２−ビバリルジン、Ｄ−Ｔｙｒ１９−ビバリルジン、またはＡｓｐ９−ビバリルジンのような厄介な不純物の形成を伴うことなく、バッチ当たりキログラム単位の量で、優れた純度を備えたビバリルジンの製造を可能にする。例えば、保護された断片Ａｓｐ−Ｐｈｅ１２を式Ｘの保護されたペプチド断片にカップリングさせるとき、５％のＤ−Ｐｈｅ１２−ビバリルジンが形成されるが、その形成は本発明に従う方法によって予想外に抑制することができる。本発明による方法において適用される接触水素化は、他の脱保護方法とは異なり、非常にクリーンな反応であるという利点を有しており、カルボカチオンの形成を含まないので、カルボカチオンと目的ペプチドとの間の反応から生じるような望ましくない副生成物は形成されない。比較のために言えば、ＷＯ２００７／０３３３８３に開示された経路では、保護はｔｅｒｔ−ブチル（ｔＢｕ；ｔｅｒｔ−ブチルエーテルとして、またはｔｅｒｔ−ブチルエステルとして）を用いて達成されるが、これは加酸分解（例えば塩酸またはトリフルオロ酢酸を用いて）によってのみ開裂可能な保護基である。この加酸分解はｔｅｒｔ−ブチル化チロシンのような副生成物の形成を含んでおり、該副生成物は、その物理化学的性質が最終生成物と類似しているため、最終生成物において除去するのが困難である。加酸分解のもう一つの欠点は、トリフルオロ酢酸のような大量の強酸を取り扱うことが、特に商業的規模においては、製造および環境の両方に関して安全性の問題を生じることである。更なる比較のために言えば、鹸化により除去可能なＣ末端保護基、例えばＥｔは、式ＶＩおよび式ＶＩＩのペプチドのためのＰ２として使用され、その塩基性条件下での除去はアスパラギン酸残基（−Ａｓｎ９−）およびアルギニン残基（−Ａｒｇ３−）の実質的な分解を誘起する。たとえ、鹸化が酸でも塩基でもなく、サブチリシン酵素を用いた鹸化のように、酵素反応の更に温和なアプローチで達成されるとしても、アスパラギン残基の分解により生じるＡｓｐ９−ビバリルジンの実質的な形成が観察される。
【００１４】
本発明の一つの反応工程の前、最中および後に、全てのペプチド断片、並びに全てのカップリング生成物は、該分子の物理化学的性質および／または反応条件に応じて、そのままの状態で、または適切な塩の形態で存在してよい。適切な塩は、例えばトリエチルアミン（ＴＥＡ）、ジシクロヘキシルアミン（ＤＣＨＡ）、塩酸（ＨＣｌ）およびトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を用いて形成された塩である。
【００１５】
工程（ｈ）において、Ｐ１、Ｐ３および側鎖保護基は、爾後にまたは同時に除去されてよい。
【００１６】
好ましくは、工程（ｈ）においては、最初にＰ３および側鎖保護基が同時に除去され、その後にＰ１が除去される。典型的には、工程（ａ）〜（ｇ）の各工程の後に得られるペプチド断片は、次の工程を受ける前に単離される。出願人は驚くべきことに、工程（ｈ）では、Ｐ３および側鎖保護基を同時に除去した後に得られたペプチドの単離は、同様の収量を得ながら且つ純度に対して負の影響を伴わずに、Ｐ１を除去する前には省略できることを見出した。通常は、その後の脱保護工程においても反応して目的のペプチドの純度を低下させる副生成物を除去するために単離工程が必須とされるので、これは驚くべきことである。通常、単離は生成物のロスを伴うので、この発見は全体のプロセスのためのコストおよび時間に対して積極的な影響を有し、典型的には、Ｐ１を脱保護されたペプチドのより高い収量をもたらす。従って、本発明による方法のより好ましい実施形態においては、工程（ｈ）において、Ｐ３および側鎖保護基を同時に除去した後に得られるペプチドは、Ｐ１を除去する前には単離されない。
【００１７】
接触水素化に対して安定である普通に知られた如何なる保護基も、Ｐ１として使用されてよい。適切な例は、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、２−（ビフェニル−４−イル）プロパ−２−イルオキシカルボニル（Ｂｐｏｃ）、２−（３，５−ジメトキシフェニル）プロパ−２−イルオキシカルボニル（Ｄｄｚ）、フルオレン−９−イルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、アダマンチル−１−オキシカルボニル（Ａｄｃ）、ｔｅｒｔ−アミルオキシカルボニル（Ａｏｃ）、ジフェニルホスフィニル（Ｄｐｐ）、２−（メチルスルホニル）エトキシカルボニル（Ｍｓｃ）およびフタロイル（Ｐｈｔ）である。好ましくは、Ｐ１はＢｏｃ、Ｂｐｏｃ、Ｄｄｚ、ＦｍｏｃまたはＭｓｃであり、より好ましくは、Ｐ１はＢｏｃである。保護基Ｐ４およびＰ５としては、それぞれ、式ＩＩの断片の側鎖保護基およびＰ３に対して直交性であり（Ｐ４について）、式ＸＩＩＩのアミノ酸および式ＸＩＶの断片の側鎖保護基およびＰ３に対し直交性の（Ｐ５について）、普通に知られた適切な如何なる保護基も使用されてよい。好ましくは、Ｐ４およびＰ５は接触水素化に対して安定であり、且つ側鎖保護基に対して、およびＰ３に対して直交性である。例えば、適切な保護基はＢｏｃ、Ｂｐｏｃ、Ｄｄｚ、Ｆｍｏｃ、Ａｄｃ、Ａｏｃ、Ｄｐｐ、ＭｓｃおよびＰｈｔである。好ましくは、Ｐ４および／またはＰ５は、Ｂｏｃ、Ｂｐｏｃ、Ｄｄｚ、ＦｍｏｃまたはＭｓｃであり、より好ましくは、Ｐ４および／またはＰ５はＢｏｃである。本発明の方法の好ましい実施形態において、Ｐ１、Ｐ４およびＰ５の少なくとも一つはＢｏｃ、Ｂｐｏｃ、Ｄｄｚ、ＦｍｏｃまたはＭｓｃであり；好ましくは、Ｐ１、Ｐ４およびＰ５の少なくとも一つはＢｏｃである。
【００１８】
保護基Ｐ３としては、接触水素化により除去可能な普通に知られた如何なる保護基が使用されてもよい。適切な例は、ベンジル（Ｂｚｌ）、ベンジルオキシメチル（Ｂｏｍ）、フェナシル（Ｐａｃ）、４−ニトロベンジル（ＯＮｂｚ）、４−ピリジルメチル（Ｐｉｃ）、および４−スルホベンジルである。好ましくは、Ｐ３はＢｚｌ、Ｂｏｍ、Ｐａｃ、ＯＮｂｚ、Ｐｉｃまたは４−スルホベンジルであり、但し、Ｐ４またはＰ５がＢｏｃ、ＢｐｏｃまたはＤｄｚであれば、Ｐ３はＢｏｍではない。より好ましくは、Ｐ３はＢｚｌである。保護基Ｂｏｍは酸感受性であり、また保護基Ｂｏｃ、ＢｐｏｃおよびＤｄｚは酸によって開裂可能である。即ち、Ｂｏｍは、Ｂｏｃ、ＢｐｏｃまたはＤｄｚに対して直交性ではない。ここにおいておよび以下において、この属性は、Ｂｏｍと保護基Ｂｏｃ、ＢｐｏｃおよびＤｄｚの一つとの同時使用を排除する。
【００１９】
保護基Ｐ２としては、接触水素化により除去可能で、且つ側鎖保護の場合には、同時に該側鎖保護基に対して直交性であるような、普通の如何なる既知の保護基を使用してもよい。適切な例は、Ｂｏｍ、Ｐａｃ、ＯＮｂｚ、Ｐｉｃおよび４−スルホベンジルである。好ましくは、Ｐ２はＢｚｌ、Ｂｏｍ、Ｐａｃ、ＯＮｂｚ、Ｐｉｃまたは４−スルホベンジルであり；より好ましくは、Ｐ２はＢｚｌである。
【００２０】
好ましい実施形態において、Ｐ２およびＰ３の少なくとも一方は、Ｂｚｌ、Ｂｏｍ、Ｐａｃ、ＯＮｂｚ、Ｐｉｃまたは４−スルホベンジルである。但し、Ｐ４またはＰ５がＢｏｃ、ＢｐｏｃまたはＤｄｚであれば、Ｐ３はＢｏｍではない。好ましくは、Ｐ２およびＰ３の少なくとも一方はＢｚｌである。
【００２１】
好ましい実施形態において、Ｐ１、Ｐ４およびＰ５の少なくとも一つはＢｏｃ、Ｂｐｏｃ、Ｄｄｚ、ＦｍｏｃまたはＭｓｃであり；またＰ２およびＰ３の少なくとも一方はＢｚｌ、Ｂｏｍ、Ｐａｃ、ＯＮｂｚ、Ｐｉｃ、または４−スルホベンジルである。但し、Ｐ４またはＰ５がＢｏｃ、ＢｐｏｃまたはＤｄｚであれば、Ｐ３はＢｏｍではない。好ましくは、Ｐ１、Ｐ４およびＰ５の少なくとも一つはＢｏｃであり、Ｐ２およびＰ３の少なくとも一方はＢｚｌである。
【００２２】
好ましくは、本発明による方法において、式ＩＩＩ、ＩＶ、ＸおよびＸＩＩ〜ＸＩＶの側鎖保護されたペプチド／アミノ酸は、Ｂｚｌ、Ｂｏｍ、Ｐａｃ、ＯＮｂｚ、Ｐｉｃおよび４−スルホベンジルからなる群から選択される少なくとも一つの側鎖保護基を用いて保護される。但し、Ｐ４またはＰ５がＢｏｃ、ＢｐｏｃまたはＤｄｚであれば、側鎖保護基は何れもＢｏｍではない。
【００２３】
特に、本発明による方法において、式ＩＩＩ、ＩＶ、Ｘ、およびＸＩＩ〜ＸＩＶの側鎖保護されたペプチド／アミノ酸は、側鎖保護基としての少なくとも一つのＢｚｌで保護される。
【００２４】
典型的には、式Ｖのペプチドは、望ましくない副反応を回避するために、ニトロのような適切な側鎖保護基を用いて、アルギニン残基において側鎖保護される。典型的には、式ＶＩのペプチドは、望ましくない副反応を回避するために、特にＦｍｏｃでのＮ末端保護については、アスパラギン残基において適切な側鎖保護基で側鎖保護される。特に、ＦｍｏｃでのＮ末端保護の場合において、適切な例はトリチル（Ｔｒｔ）である。
【００２５】
驚くべきことに、出願人は、式ＶおよびＶＩのペプチドについては側鎖保護を省略でき、これにより、それらのアセンブリー、並びにそれらのカップリング生成物（即ち、式ＶＩＩのペプチド）におけるＣ末端脱保護の両方が容易になることを見出した。この発見は、Ｃ末端保護および側鎖保護の間の直交性を無視して、経路をより単純にすることを可能にする。もう一つの利点は、対応する未保護の出発物質が保護されたものよりも購入が安価なことであり、これは大規模製造のために特に重要である。好ましくは、本発明による方法において、工程（ａ）では、式ＶおよびＶＩの任意に側鎖保護されたペプチドの少なくとも一方は側鎖が未保護である。両方のペプチドが側鎖未保護の場合、工程（ａ）および（ｂ）における式ＶＩＩおよびＩＩの得られるペプチドもまた、同様に側鎖が未保護である。
【００２６】
より好ましくは、本発明による方法では、
工程（ａ）において、式ＶおよびＶＩの両方のペプチドが側鎖未保護である；
工程（ｃ）において、式Ｘのペプチドは、Ｂｚｌ、Ｂｏｍ、Ｐａｃ、ＯＮｂｚ、Ｐｉｃおよび４−スルホベンジルからなる群から選択される少なくとも一つの側鎖保護基、好ましくはＢｚｌで保護される。但し、Ｐ４またはＰ５がＢｏｃ、ＢｐｏｃまたはＤｄｚであれば、側鎖保護基は何れもＢｏｍではない；
工程（ｅ）において、式ＸＩＩＩのアスパラギン酸誘導体は、Ｂｚｌ、Ｂｏｍ、Ｐａｃ、ＯＮｂｚ、Ｐｉｃおよび４−スルホベンジルからなる群から選択される側鎖保護基、好ましくはＢｚｌで保護される。但し、Ｐ４またはＰ５がＢｏｃ、Ｂｐｏｃ、またはＤｄｚであれば、側鎖保護基は何れもＢｏｍではない。
【００２７】
更に好ましくは、本発明による方法では、工程（ａ）において、式ＶおよびＶＩの両方のペプチドが側鎖保護され、また工程（ｃ）および（ｅ）の両方において、少なくとも一つの側鎖保護基がＢｚｌである。
【００２８】
本発明による方法の最も好ましい実施形態では、工程（ｃ）において、式Ｘのペプチドは、四つのグルタミン酸およびチロシンの側鎖を保護する五つの側鎖保護基で側鎖保護されて、次式のペプチドを与える：
Ｈ−Ｇｌｕ（ＯＰ６）−Ｇｌｕ（ＯＰ７）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＰ８）−Ｇｌｕ（ＯＰ９）−Ｔｙｒ（Ｐ１０）−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号８） （Ｘｂ）
ここで、Ｐ３は接触水素化により除去可能な保護基であり、好ましくは、Ｐ３はＢｚｌ、Ｂｏｍ、Ｐａｃ、ＯＮｂｚ、Ｐｉｃまたは４−スルホベンジルであり、より好ましくは、Ｐ３はＢｚｌであり；
またＰ６〜Ｐ１０の各々は、Ｂｚｌ、Ｂｏｍ、Ｐａｃ、ＯＮｂｚ、Ｐｉｃおよび４−スルホベンジルからなる群から独立に選択され、好ましくは、Ｐ６〜Ｐ１０の各々はＢｚｌである；また、工程（ｅ）において、側鎖保護された式ＸＩＩＩのアスパラギン酸は
Ｐ５−Ａｓｐ（ＯＰ１１）１１−ＯＨ，
である：
ここで、Ｐ５は式ＸＩＩおよびＸＩＩＩのペプチド／アミノ酸の側鎖保護基に対して直交性の保護基であり、好ましくは、Ｐ５は接触水素化に対して安定で、側鎖保護基に対しておよびＰ３に対して直交性である；より好ましくは、Ｐ５はＢｏｃ、Ｂｐｏｃ、Ｄｄｚ、ＦｍｏｃまたはＭｓｃであり、最も好ましくは、Ｐ５はＢｏｃである；また、Ｐ１１はＢｚｌ、Ｂｏｍ、Ｐａｃ、ＯＮｂｚ、Ｐｉｃおよび４-スルホベンジルからなる群から選択され、好ましくは、Ｐ１１はＢｚｌである。
【００２９】
ここにおいて、および以下において、Ｃ末端および側鎖の両方について、略語「ＯＰ（数字）」はエステル（側鎖およびＣ末端の両方のカルボン酸との反応の後）を示すのに対して、略語「Ｐ（数字）」はエーテルを示す。例えば、「ＯＢｚｌ」はベンジルエステル（側鎖またはＣ末端のカルボキシ基との反応の後）を示すのに対して、略語「Ｂｚｌ」はベンジルエーテル（例えばチロシンのフェノール性水酸基との反応の後）を示す。
【００３０】
好ましくは、本発明による方法において、Ｐ１、Ｐ４およびＰ５はＢｏｃであり；Ｐ２、Ｐ３、Ｐ６、Ｐ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１０およびＰ１１はＢｚｌである。
【００３１】
より好ましくは、Ｐ１、Ｐ４およびＰ５はＢｏｃであり、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ６、Ｐ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１０およびＰ１１はＢｚｌであり、また式ＶおよびＶＩのペプチドは側鎖未保護であり、以下の工程を含んでなる溶液相での方法を与える：
（ａ）Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＯＨ（配列番号４）を、
Ｈ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＢｚｌ（配列番号５）
と反応させて、
Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＢｚｌ（配列番号２）
を製造する工程；
（ｂ）工程（ａ）で製造されたペプチドのＢｚｌを除去して、
Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＨ（配列番号２）
を製造する工程；
（ｃ）Ｈ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号８）
を、
Ｂｏｃ−Ｐｈｅ１２−ＯＨ
と反応させて、
Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号９）
を製造する工程
（ｄ）工程（ｃ）で製造されたペプチドのＢｏｃを除去して、Ｎ末端が脱保護された対応するペプチドを製造する工程；
（ｅ）工程（ｄ）で製造されたペプチドを、
Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）１１−ＯＨ
と反応させて、
Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）１１−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号３）
を製造する工程；
（ｆ）工程（ｅ）で製造されたペプチドのＢｏｃを除去して、
Ｈ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）１１−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号３）
を製造する工程；
（ｇ）工程（ｂ）で製造されたペプチドを、工程（ｆ）で製造されたペプチドと反応させて、
Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号１）
を製造する工程；
（ｈ）工程（ｇ）で製造されたペプチドのＢｏｃ、Ｃ末端を保護するＢｚｌ、および側鎖を保護する全てのＢｚｌを除去して、式Ｉのビバリルジンを製造する工程。
【００３２】
この好ましい実施形態は非常に単純であり、複雑な保護基戦略を必要としない。
【００３３】
好ましくは、工程（ｈ）においては、最初にＣ末端を保護するＢｚｌおよび全ての側鎖を保護するＢｚｌを同時に除去して、次式のＮ末端がＢｏｃで保護されたビバリルジンを得、
Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＨ（配列番号１）、
その後にＢｏｃが除去される。
【００３４】
好ましくは、Ｃ末端を保護するＢｚｌおよび側鎖を保護する全てのＢｚｌを同時に除去した後に得られるＮ末端がＢｏｃで保護されたビバルリジンは、Ｂｏｃを除去する前に単離されない。
【００３５】
Ｃ末端保護基Ｐ２、Ｐ３、並びに側鎖保護基Ｐ６〜Ｐ１１は、それらが接触水素化によって除去可能な場合、当業者に知られた何れかの接触水素化方法によって除去することができる。水素化は、元素状水素によって、或いは蟻酸、蟻酸アンモニウム、１，３−シクロヘキサジエン、１，４−シクロヘキサジエン、またはｔｅｒｔ−ＢｕＮＨ２・ＢＨ３等のボラン付加物のような適切な水素供与体の使用によって達成されてよい。適切な水素化触媒は、例えば貴金属をベースにする水素化触媒、特に、白金族金属として知られる金属、即ち、ロジウム、ルテニウム、パラジウム、オスミウム、イリジウム、およびプラチナである。水素化触媒は、木炭のような支持体上にあるのが好都合である。必要な活性に応じて、水素化触媒はその活性を低下させるように「触媒毒入り」、特に硫化されてよい。必要に応じて、水素化をサポートするために適切な助触媒を添加してよい。このような助触媒は、酸化バナジウム（Ｖ２Ｏ５）、メタバナジン酸アンモニウム（ＮＨ４ＶＯ３）、またはモリブデン酸ナトリウム（Ｎａ２ＭｏＯ４）のような、バナジウム化合物またはモリブデン化合物であってよい。
【００３６】
特に好ましい実施形態において、触媒は、製造コストおよび環境の両方に対して積極的な効果を有するようにリサイクルされる。触媒のリサイクルのために、触媒をリサイクルさせるのに適した何等かの処理が適用されてよい。
【００３７】
好ましくは、除去工程（ｂ）および（ｈ）の少なくとも一方は、水素ガスおよびパラジウム／炭素（palladium on charcoal）を用いて溶媒中で行われる。溶媒としては、反応物質を溶解できる何れかの不活性な液体溶媒が使用されてよい。適用可能な溶媒には、クロロベンゼンおよびトリフルオロトルエンのようなハロゲン化芳香族炭化水素；ジクロロメタンおよびジクロロエタンのような水素化炭化水素；メタノール、エタノール、２−プロパノール、ブタノールおよびベンジルアルコールのようなアルコール；２，２，２−トリフルオロエタノールのようなハロゲン化アルコール；酢酸のようなカルボン酸；酢酸エチル、酢酸メチルおよびバレロラクトンのようなカルボン酸のエステルおよびラクトン；Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）またはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）のようなヘテロ原子を含有する有機溶媒が含まれる。これら溶媒は単独で、溶媒混合物として、または水との混合物として使用することができる。ペプチド断片の溶解度によっては、ニートの水を使用してもよい。従って、工程（ｂ）において、除去は溶媒としてのニートの水の中で達成されてよい。好ましい溶媒は、ＤＭＦ、アセトン、酢酸、アセトンと水の混合物、および酢酸と水の混合物からなる群から選択される。
【００３８】
好ましい実施形態において、除去工程（ｂ）は、ＤＭＦ、アセトン、水、および、アセトンと水の混合物からなる群から選択される溶媒、特にＤＭＦ中で行われる。より好ましくは、除去工程はＤＭＦ中で行われる。驚くべきことに、除去工程（ｂ）で使用される溶媒は、最終ビバリルジンの不純物プロファイルに対して影響を有することが分かった。ＤＭＦは、例えばアセトンと水の混合物に比較して有利であり、−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−（配列番号２）の二重組込みの後に形成される不純物を抑制できることが観察された。
【００３９】
もう一つの好ましい実施形態において、除去工程（ｈ）は、酢酸または酢酸と水の混合物、特に酢酸と水の混合物中で実施される。
【００４０】
除去工程（ｂ）および（ｈ）の水素化プロセスは、大気圧または超大気圧において行われてよい。典型的な圧力は、１〜１００バールである。有利には、１〜７０バール、特に２〜１０バールが用いられる。
【００４１】
除去工程（ｂ）および（ｈ）の水素化反応は、低音または高温で行ってよい。例示的な温度範囲は−２０℃〜７０℃である。好ましい温度は０℃〜６０℃であり、最も好ましいのは１０℃〜４０℃の範囲である。
【００４２】
本発明の方法のカップリング工程（ａ）、（ｃ）、（ｅ）および（ｇ）は溶液相で行われ、またペプチド合成技術で既知の反応条件を用いて行うことができる。それぞれの側鎖が脱保護され、または側鎖が保護されたペプチド断片／アミノ酸誘導体のカップリングは、インサイチューのカップリング試薬、例えば、ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ−トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウム・ヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ）、ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ−トリス（ピロリジノ）ホスホニウム・ヘキサフルオロホスフェート（ＰｙＢＯＰ）、Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム・ヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）、Ｏ−（６-クロロベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム・ヘキサフルオロホスフェート（ＨＣＴＵ）、Ｏ−（６−クロロベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム・テトラフルオロボレート（ＴＣＴＵ）、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム・ヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム・テトラフルオロボレート（ＴＡＴＵ）、Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム・テトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ）、およびＯ−［シアノ（エトキシカルボニル）メチレンアミノ］−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム・テトラフルオロボレート（ＴＯＴＵ）のようなホスホニウムカップリング試薬もしくはウロニウムカップリング試薬、またはジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、および水溶性カルボジイミド（ＷＳＣＤＩ）、例えば１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）のようなカルボジイミドカップリング試薬を、任意に塩酸塩のような塩として使用して達成することができる。他のカップリング技術は、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＨＯＳｕ）およびｐ−ニトロフェノール（ＨＯＮｐ）エステルのような、予め形成された活性エステル；Ｎ−カルボキシ酸無水物（ＮＣＡｓ）のような予め形成された対称性酸無水物および非対称性酸無水物、並びにフッ化アシルまたは塩化アシルのような酸ハロゲン化物を使用する。好ましいカップリング試薬はカルボジイミドカップリング試薬であり、最も好ましいのはＤＩＣまたはＥＤＣ、適切にはＥＤＣ・ＨＣｌのようなＥＤＣである。
【００４３】
カップリング工程（ａ）（ｃ）（ｅ）および（ｇ）の反応混合物は、有利には塩基、好ましくは三級アミン塩基を含んでよく、これらはカルボキシ成分を脱プロトン化し、アミン成分の対イオンを中和し、従ってインサイチューの反応を容易にする。適切な塩基は、例えば、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）またはトリエチルアミン（ＴＥＡ）のようなトリアルキルアミン；Ｎ，Ｎ−ジエチルアニリンのようなＮ，Ｎ−ジアルキルアニリン；２，４，６−トリメチルピリジンのような２，４，６−トリアルキルピリジン；Ｎ−メチルモルホリンのようなＮ−アルキルモルホリンである。特に、該反応混合物は、有利には塩基としてＴＥＡ又はＤＩＰＥＡを含んでいる。
【００４４】
カップリング工程（ａ）（ｃ）（ｅ）および（ｇ）の反応混合物は、望ましくない副反応の抑制における積極的効果の故に、添加物として補助的な求核試薬を更に含有することができる。如何なる既知の補助的求核試薬を使用してもよい。適切な補助的求核試薬の例は、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＨＯＳｕ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＨＯＳｕ）、Ｎ−ヒドロキシ−３，４−ジヒドロ−４−オキソ−１，２，３−ベンゾトリアジン（ＨＯＯＢｔ）、および１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール（ＨＯＡｔ）である。好ましくは、該カップリング工程の反応混合物は、追加的にＨＯＢｔを含有する。
【００４５】
好ましい実施形態において、カップリング工程（ａ）（ｃ）（ｅ）および（ｇ）の反応混合物は、ＤＩＣ／ＨＯＢｔ／ＴＥＡ、ＥＤＣ／ＨＯＢｔ／ＤＩＰＥＡ、およびＥＤＣ／ＨＯＢｔ／ＴＥＡからなる群から選択される。
【００４６】
カップリング工程（ａ）（ｃ）（ｅ）および（ｇ）の溶媒としては、反応物を溶解できる如何なる不活性液体溶媒を使用してもよい。適用可能なカップリング溶媒は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジオキサン、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、１−メチル−２−ピロリドン（ＮＭＰ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセタミド（ＤＭＡ）、またはそれらの混合物のような水混和性溶媒；又はジクロロメタン（ＤＣＭ）、酢酸エチル、またはそれらの混合物；および水混和性溶媒および水非混和性溶媒の何れか適切な混合物（水との混合物を含む）である。
【００４７】
工程（ｄ）、（ｆ）および（ｈ）のＮ末端の脱保護は、ペプチド合成の技術において既知の反応条件を使用して実施することができ、保護基Ｐ１、Ｐ４およびＰ５の性質に依存する。保護基がＢｏｃである場合に、脱保護は、適切には酸、好ましくはトリフルオロ酢酸によって達成され、これらは無溶媒で、或いはトルエン、ＴＨＦまたはトルエンとＴＨＦの混合物のような不活性溶媒との混合物として適用されてよい。保護基がＦｍｏｃである場合、Ｎ末端の脱保護は、塩基、好ましくはピペリジンまたはジエチルアミンのような二級アミンとの反応によって達成することができる。典型的には、Ｎ末端の脱保護は溶媒中で行われ、該溶媒は、ジクロロメタンのような塩素化炭化水素；ジメチルホルムアミドまたは１−メチル−２−ピロリドンのようなアルキル化アミンおよびラクタム；トルエンのような芳香族炭化水素；ＴＨＦのようなエーテル、またはそれらの何れかの混合物のような、反応物を妨害しない何れかの溶媒であることができる。好ましくは、Ｎ末端のＢｏｃ基の脱保護はトルエン中において、或いは、フェノール、トルエンおよびＴＨＦの混合物中において行われる。
【００４８】
工程（ｈ）の後に得られる粗製ビバリルジンは、分取ＨＰＬＣまたは向流分配法のような従来の方法によって精製してよい。精製工程は反復されてよい。工程（ａ）〜（ｇ）ののちに得られるペプチド断片についても同じことが言える。
【００４９】
式Ｉの最終的なビバリルジンは、沈殿、またはリョフィリゼーションとしても知られる凍結乾燥のような、ペプチド化学で既知の単離方法に従って単離することができる。
【００５０】
式ＶおよびＶＩの任意に側鎖保護されたペプチド、および式Ｘの側鎖保護されたペプチドは、従来のペプチド合成方法、例えば溶液相合成（同義語：均一相ペプチド合成、ＨＰＰＳと略称される）、固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）、または混合合成（同義語：混合相ペプチド合成、ＭＰＰＳと略称される）と呼ばれるＳＰＰＳおよびＨＰＰＳの組合せを使用して調製することができる。
【００５１】
本発明による方法の一実施形態において、式Ｖの任意に側鎖保護されたペプチド、式ＶＩの任意に側鎖保護されたペプチド、および式Ｘの側鎖保護されたペプチドからなる群から選択される少なくとも一つのペプチドは、先行プロセスにおいて溶液相合成により調製される。好ましくは、これらのペプチドは対応するジペプチド、即ち、配列パターン−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−、−Ａｒｇ３−Ｐｒｏ−、−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−、−Ｇｌｙ７−Ｇｌｙ−、−Ａｓｎ９−Ｇｌｙ−、−Ｇｌｕ１３−Ｇｌｕ−、−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−、−Ｇｌｕ１７−Ｇｌｕ−、または−Ｔｙｒ１９−Ｌｅｕ−で出発して組み立てられる。Ｎ末端、Ｃ末端および側鎖の保護基、並びに反応条件は当業者に既知のものの何れであってもよく、好ましくは上記で述べたのと同一または類似のものである。
【００５２】
特に、次式の任意に側鎖保護されたペプチドＶ、好ましくは側鎖未保護のペプチドＶａの溶液相における製造方法は、以下の工程（ａ）〜（ｃ）を含んでなるものである：
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＯＨ（配列番号４） （Ｖ），
ここで、Ｐ１は保護基であり、好ましくは、Ｐ１は接触水素化に対して安定な保護基であり、より好ましくは、Ｐ１はＢｏｃ、Ｂｐｏｃ、Ｄｄｚ、ＦｍｏｃまたはＭｓｃであり、最も好ましくは、Ｐ１はＢｏｃである；
（ａ）任意に側鎖保護された次式のジペプチド、好ましくは側鎖未保護のジペプチドＸＶＩａのＰ１２を除去する工程、
Ｐ１２−Ａｒｇ−Ｐｒｏ４−ＯＰ１３ （ＸＶＩ），
ここで、Ｐ１２は保護基であり、好ましくは、Ｐ１２は側鎖保護基およびＰ１３に対して直交性の保護基であり、より好ましくは、Ｐ１２は接触水素化に対して安定で且つ側鎖保護基およびＰ１３に対して直交性の保護基であり、更に好ましくは、Ｐ１２はＢｏｃ、Ｂｐｏｃ、Ｄｄｚ、Ｆｍｏｃ、またはＭｓｃであり、最も好ましくは、Ｐ１２はＢｏｃであり；また
Ｐ１３は、Ｂｚｌ、メチル（Ｍｅ）またはエチル（Ｅｔ）のような保護基であり、好ましくは、Ｐ１３は接触水素化により除去可能で且つ側鎖保護基に対して直交性の保護基であり、より好ましくは、Ｐ１３はＢｚｌ、Ｂｏｍ、Ｐａｃ、ＯＮｂｚ、Ｐｉｃまたは４−スルホベンジルであり、最も好ましくはＰ１３はＢｚｌである；但し、Ｐ１２がＢｏｃ、ＢｐｏｃまたはＤｄｚであれば、Ｐ１３はＢｏｍではない：
（ｂ）Ｎ末端を脱保護され任意に側鎖保護されたジペプチド、好ましくは工程（ａ）で製造された側鎖未保護のジペプチドを、次式の任意に側鎖保護されたジペプチド、好ましくは側鎖未保護のジペプチドＸＶＩＩａと反応させて、
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−ＯＷ （ＸＶＩＩ）
ここで、Ｐ１は上記で定義した通りであり、Ｗは水素または五フッ化フェニル（Ｐｆｐ）である
次式の任意に側鎖保護されたペプチドＸＶ、好ましくは側鎖未保護のペプチドＸＶａを製造する工程、
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＯＰ１３（配列番号４） （ＸＶ），
ここで、Ｐ１およびＰ１３は上記で定義した通りである；
（ｃ）工程（ｂ）で製造された任意に側鎖保護されたペプチド、好ましくは側鎖未保護のペプチドＸＶａのＰ１３を除去して、式Ｖの任意に側鎖保護されたペプチド、好ましくは側鎖未保護のペプチドＶａを製造する工程。
【００５３】
また特に、次式の任意に側鎖保護されたペプチドＶＩ、好ましくは側鎖未保護のペプチドＶＩａの溶液相における製造方法は、以下の工程（ａ）〜（ｃ）を含んでなるものである：
Ｈ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＰ２（配列番号５）
（ＶＩ），
ここで、Ｐ２は保護基であり、好ましくは、Ｐ２は接触水素化により除去可能で且つ任意の側鎖保護基に対して直交性の保護基であり、より好ましくは、Ｐ２はＢｚｌ、Ｂｏｍ、Ｐａｃ、ＯＮｂｚ、Ｐｉｃ、または４−スルホベンジルであり、最も好ましくは、Ｐ２はＢｚｌである；
（ａ）次式の任意に側鎖保護されたジペプチドＸＶＩＩＩ、好ましくは側鎖未保護のジペプチドＸＶＩＩＩａのＰ１４を除去する工程、
Ｐ１４−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＰ２ （ＸＶＩＩＩ），
ここで、Ｐ１４は保護基であり、好ましくは、Ｐ１４は側鎖保護基およびＰ２に対して直交性の保護基であり、より好ましくは、Ｐ１４は接触水素化に対して安定で且つ側鎖保護基およびＰ２に対して直交性の保護基であり、更に好ましくは、Ｐ１４はＢｏｃ、Ｂｐｏｃ、Ｄｄｚ、ＦｍｏｃまたはＭｓｃであり、最も好ましくは、Ｐ１４はＢｏｃである；
但し、Ｐ１４がＢｏｃ、ＢｐｏｃまたはＤｄｚであれば、Ｐ２はＢｏｍではない；
（ｂ）工程（ａ）で製造された、Ｎ末端を脱保護され且つ任意に側鎖保護されたジペプチド、好ましくは側鎖未保護のジペプチドを、次式のテトラグリシンＩＸＸと反応させて、
Ｐ１５−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−ＯＨ（配列番号１０） （ＩＸＸ），
ここで、Ｐ１５は保護基であり、好ましくは、Ｐ１５は式ＸＸのペプチドの側鎖保護基に対して直交性の保護基であり、より好ましくは、Ｐ１５は接触水素化に対して安定で且つ式ＸＸのペプチドの側鎖保護基に対して直交性の保護基であり、更に好ましくは、Ｐ１５はＢｏｃ、Ｂｐｏｃ、Ｄｄｚ、ＦｍｏｃまたはＭｓｃであり、最も好ましくは、Ｐ１５はＢｏｃである；
次式の任意に側鎖保護されたペプチドＸＸ、好ましくは側鎖未保護のペプチドＸＸａを製造する工程、
Ｐ１５−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＰ２
(配列番号５） （ＸＸ）
こでで、Ｐ２およびＰ１５は上記で定義した通りである；
但し、Ｐ１５がＢｏｃ，ＢｐｏｃまたはＤｄｚであれば、Ｐ２はＢｏｍではない；および
（ｃ）工程（ｂ）で製造された、任意に側鎖保護された式ＸＸのペプチド、好ましくは側鎖未保護のペプチドＸＸａのＰ１５を除去して、式ＶＩの任意に側鎖保護されたペプチド、好ましくは側鎖未保護のペプチドＶＩａを製造する工程。
【００５４】
更に特記すれば、次式の側鎖保護されたペプチドＸ、好ましくは次式のペプチドＸｂの溶液相における製造方法は、以下の工程（ａ）〜（ｃ）を含んでなるものである：
Ｈ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号８） （Ｘ），
Ｈ−Ｇｌｕ（ＯＰ６）−Ｇｌｕ（ＯＰ７）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＰ８）−Ｇｌｕ（ＯＰ９）−Ｔｙｒ（Ｐ１０）−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号８） （Ｘｂ），
ここで、Ｐ３は保護基であり、好ましくは、Ｐ３は接触水素化により除去可能な保護基であり、より好ましくは、Ｐ３はＢｚｌ、Ｂｏｍ、Ｐａｃ、ＯＮｂｚ、Ｐｉｃまたは４−スルホベンジルであり、最も好ましくは、Ｐ３はＢｚｌであり；
Ｐ６〜Ｐ１０の各々は、Ｂｚｌ、Ｂｏｍ、Ｐａｃ、ＯＮｂｚ、Ｐｉｃまたは４−スルホベンジルからなる群から独立に選択される：
（ａ）次式の側鎖保護されたペプチドＶＩＩＩ、好ましくは次式のペプチドＶＩＩＩｂのＰ１６を除去する工程、
Ｐ１６−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号６） （ＶＩＩＩ），
Ｐ１６−ＧＬＵ（ＯＰ８）−ＧＬＵ（ＯＰ９）−ＴＹＲ（Ｐ１０）−ＬＥＵ２０−ＯＰ３（配列番号６） （ＶＩＩＩＢ）
ここで、Ｐ３およびＰ８〜Ｐ１０は上記で定義した通りであり、また
Ｐ１６は保護基であり、好ましくは、Ｐ１６は側鎖保護基およびＰ３に対して直交性の保護基であり、より好ましくは、Ｐ１６は接触水素化に対して安定で且つ側鎖保護基およびＰ３に対して直交性の保護基であり、更に好ましくは、Ｐ１６はＢｏｃ、Ｂｐｏｃ、Ｄｄｚ、ＦｍｏｃまたはＭｓｃであり、最も好ましくは、Ｐ１６はＢｏｃである；
但し、Ｐ１６がＢｏｃ、ＢｐｏｃまたはＤｄｚであれば、Ｐ３はＢｏｍではない；
（ｂ）工程（ａ）で製造された、Ｎ末端が脱保護され且つ側鎖保護された式ＶＩＩＩのペプチド、好ましくは、対応するペプチドＶＩＩＩｂを、次式の側鎖保護されたペプチドＩＸ、好ましくは次式のペプチドＩＸｂと反応させて、
Ｐ１７−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−ＯＨ（配列番号７） （ＩＸ）、
Ｐ１７−Ｇｌｕ（ＯＰ６）−Ｇｌｕ（ＯＰ７）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−ＯＨ（配列番号７） （ＩＸｂ）
ここで、Ｐ６およびＰ７は上記で定義した通りであり、
Ｐ１７は保護基であり、好ましくは、Ｐ１７は側鎖保護基に対して直交性の保護基であり、より好ましくは、Ｐ１７は接触水素化に対して安定で且つ側鎖保護基に対して直交性の保護基であり、更に好ましくは、Ｐ１７はＢｏｃ、Ｂｐｏｃ、Ｄｄｚ、ＦｍｏｃまたはＭｓｃであり、最も好ましくは、Ｐ１７はＢｏｃである；
次式の側鎖保護されたペプチドＸＸＩ、好ましくは次式のペプチドＸＸＩを製造する工程、
Ｐ１７−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号８） （ＸＸＩ）
Ｐ１７−Ｇｌｕ（ＯＰ６）−Ｇｌｕ（ＯＰ７）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＰ８）−Ｇｌｕ（ＯＰ９）−Ｔｙｒ（Ｐ１０）−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号８） （ＸＸＩｂ），
ここで、Ｐ３、Ｐ６〜Ｐ１０およびＰ１７は上記で定義した通りである；
但し、Ｐ１７がＢｏｃ、ＢｐｏｃまたはＤｄｚであるならば、Ｐ３またはＰ６〜Ｐ１０の何れかはＢｏｍではない；および
（ｃ）工程（ｂ）で製造された、式ＸＸＩの側鎖保護されたペプチド、好ましくは対応するペプチドＸＸＩｂのＰ１７を除去して、式Ｘの側鎖保護されたペプチド、好ましくはペプチドＸｂを製造する工程。
【００５５】
本発明による方法の更なる実施形態において、式Ｖの任意に側鎖保護されたペプチド、式ＶＩの任意に側鎖保護されたペプチド、および式Ｘの側鎖保護されたペプチドからなる群から選択された少なくとも一つのペプチドは、先行するプロセスにおいて固相合成により調製される。それにより、ＳＰＰＳビルディングブロックおよびＳＰＰＳ条件を含む何れかの普通に知られたＳＰＰＳ方法が用いられてよい。当業者に知られ、且つ保護されたペプチドの調製を可能にする全ての樹脂を適用することができる。ここで、樹脂は広義に解釈されるべきである。従って、「樹脂」の用語は、例えば固体支持体単独、またはリンカーに直接連結された固体支持体（任意に両者の間にハンドルを備える）を意味するように理解されるべきである。該樹脂は、不溶性または可溶性であってよい。可溶性ポリマーのポリエチレングリコール（可溶性ＰＥＧポリマー）は、可溶性樹脂の固体支持体の一例であり、従って単一のビルディングブロックのアセンブリー後には可溶性のペプチド−樹脂を形成する。好ましい樹脂は、トリチルまたはブロモベンズヒドリルを備えたポリスチレンをベースとする樹脂である。トリチル樹脂の例は、塩化２−クロロトリチル樹脂（ＣＴＣ樹脂）、塩化トリチル樹脂、塩化４−メチルトリチル樹脂、および塩化４−メトキシトリチル樹脂である。好ましくは、ＣＴＣ樹脂は前記ペプチド断片の合成に適用される。
【００５６】
本発明のもう一つの目的は、本発明の方法において中間体として有用なペプチドを提供することである。特に、これらペプチドの一つは、下記からなる群から選択されるペプチドである：
（ｉ）次式の任意に側鎖保護されたペプチド
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＯＨ（配列番号４） （Ｖ）
ここで、Ｐ１は保護基であり、好ましくは、Ｐ１は接触水素化に対して安定な保護基であり、より好ましくは、Ｐ１はＢｏｃ、Ｂｐｏｃ、Ｄｄｚ、ＦｍｏｃまたはＭｓｃであり、最も好ましくは、Ｐ１はＢｏｃであり、また
前記ペプチドはアルギニン残基において、ニトロのような適切な側鎖保護基で任意に側鎖保護される；
（ｉｉ）次式の任意に側鎖保護されたペプチド
Ｈ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＰ２（配列番号５） （ＶＩ）
ここで、Ｐ２は保護基であり、好ましくは、Ｐ２は接触水素化により除去可能で且つ前記任意の側鎖保護基に対して直交性の保護基であり、より好ましくは、Ｐ２はＢｚｌ、Ｂｏｍ、Ｐａｃ、ＯＮｂｚ、Ｐｉｃ、または４−スルホベンジルであり、最も好ましくは、Ｐ２はＢｚｌであり、また
前記ペプチドは、アスパラギン残基において、トリチル（Ｔｒｔ）のような適切な側鎖保護基で任意に側鎖保護される；
（ｉｉｉ）次式の任意に側鎖保護されたペプチド
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＰ２（配列番号２） （ＶＩＩ）
ここで、Ｐ１、Ｐ２および任意の側鎖保護基、並びにＰ１、Ｐ２および任意の側鎖保護基の好ましい意味は、上記で定義した通りである；
（ｉｖ）次式の側鎖保護されたペプチド
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＨ（配列番号２） （ＩＩａ）
ここで、Ｐ１および側鎖保護基、並びにＰ１および任意の側鎖保護基の好ましい意味は、上記で定義した通りであるが、
Ｐｂｆがペンタメチルジヒドロベンゾフランスルホニルであり、Ｔｒｔはトリチルであるとして、Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｇｌｙ１０−ＯＨは除く；このペプチドは、ＣＴＣ樹脂上での固相合成の生成物として、ＷＯ２００７／０３３３８３に開示されている；対照的に、本発明によるＩＩａの側鎖保護されたペプチドは異なる方法、即ち、溶液相合成によって形成される；
（ｖ）次式の側鎖未保護のペプチド
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＨ（配列番号２） （ＩＩｂ）
ここで、Ｐ１、並びにＰ１の好ましい意味は、上記で定義した通りである；
（ｖｉ）次式の側鎖保護されたペプチド
Ｈ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号８） （Ｘ）
ここで、Ｐ３は保護基であり、好ましくは、Ｐ３は接触水素化により除去可能な保護基であり、より好ましくは、Ｐ３はＢｚｌ、Ｂｏｍ、Ｐａｃ、ＯＮｂｚ、Ｐｉｃ、または４−スルホベンジルであり、最も好ましくは、Ｐ３はＢｚｌであり、また
側鎖保護基は、少なくとも一つの適切な側鎖保護基であり、好ましくはＢｚｌ、Ｂｏｍ、Ｐａｃ、ＯＮｂｚ、Ｐｉｃ、および４−スルホベンジルからなる群から選択され、より好ましくはＢｚｌである；
（ｖｉｉ）次式の側鎖保護されたペプチド
Ｐ４−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号９） （ＸＩＩ）
ここで、Ｐ３および側鎖保護基、並びにＰ３および任意の側鎖保護基の好ましい意味は上記で定義した通りであり、また
Ｐ４は保護基であり、好ましくは、Ｐ４は式Ｘのペプチドの側鎖保護基に対しておよびＰ３に対して直交性の保護基であり、より好ましくは、Ｐ４はＢｏｃ、Ｂｐｏｃ、Ｄｄｚ、ＦｍｏｃまたはＭｓｃであり、最も好ましくは、Ｐ４はＢｏｃであり、
但し、Ｐ４がＢｏｃ、Ｂｐｏｃ、またはＤｄｚであるならば、Ｐ３はＢｏｍではなく、またはＰ４は水素である；
（ｖｉｉｉ）次式の側鎖保護されたペプチド
Ｐ５−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号３） （ＸＩＶ）
ここで、Ｐ３および側鎖保護基、並びにＰ３および側鎖保護基の好ましい意味は上記で定義した通りであり、また
Ｐ５は保護基であり、好ましくは、Ｐ５は式ＸＩＩおよびＸＩＩＩのペプチド／アミノ酸の側鎖保護基に対して、およびＰ３に対して直交性の保護基であり、より好ましくは、Ｐ５はＢｏｃ、Ｂｐｏｃ、Ｄｄｚ、ＦｍｏｃまたはＭｓｃであり、最も好ましくは、Ｐ５はＢｏｃである；但し、Ｐ５がＢｏｃ、Ｂｐｏｃ、またはＤｄｚであるならば、Ｐ３はＢｏｃではないが、
Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｌｅｕ２０−ＯｔＢｕは除かれ、ここでのｔＢｕはｔｅｒｔ−ブチルである。このペプチドは、前駆体ペプチド（即ち、ペプチド配列マイナスＬｅｕ）とＨ−Ｌｅｕ−ＯｔＢｕとの間の反応生成物として、ＷＯ２００７／０３３３８３に開示されている。該ＷＯ２００７／０３３３８３に開示された前駆体ペプチドは、ＣＴＣ樹脂上での固相合成によって、先行する工程において既に形成されている。Ｈ−Ｌｅｕ−ＯｔＢｕとの反応の後、該開示されたペプチドは、次の工程を続ける前に単離されることはない。対照的に、本発明による式ＸＩＶの側鎖保護されたペプチドは異なった方法、即ち、溶液相合成によって形成され、これはその形成後に単離される。
【００５７】
（ｉｘ）次式の側鎖保護されたペプチド
Ｈ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号３） （ＩＩＩ）
ここで、Ｐ３および側鎖保護基、並びにＰ３および側鎖保護基の好ましい意味は、上記で定義した通りであるが、
Ｈ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｌｅｕ２０−ＯｔＢｕは除かれ、このペプチドはＷＯ２００７／０３３３８３に開示されている。それは、上記で述べたＮ末端が脱保護されたペプチドである。従って、上記で説明したように、その形成方法は本発明による式ＩＩＩの側鎖保護されたペプチドとは異なっている；および
（ｘ）次式の側鎖保護されたペプチド
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号１） （ＩＶ）
ここで、Ｐ１、Ｐ３および側鎖保護基、並びにＰ１、Ｐ３および任意の側鎖保護基の好ましい意味は上記で定義した通りであるが、
Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｇｌｙ１０−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｌｅｕ２０−ＯｔＢｕを除く。このペプチドは、ＷＯ２００７／０３３３８３において、両者とも上記で説明したＢｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｇｌｙ１０−ＯＨと、Ｈ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｌｅｕ２０−ＯｔＢｕをカップリングさせた後の生成物として開示されている。従って、そのカップリング生成物に向かう方法は、本発明による式ＩＶの側鎖保護されたペプチドに向かう方法とは異なっている。
【００５８】
好ましい実施形態において、式Ｖのペプチドは側鎖保護され、且つ次式のものであり、
Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＯＨ（配列番号４）
これはビバリルジンのアミノ酸位１〜４の配列を含んでなるものである。
【００５９】
もう一つの好ましい実施形態において、式ＶＩのペプチドは側鎖を脱保護され、且つ次式のものであり、
Ｈ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＢｚｌ（配列番号５）
これはビバリルジンのアミノ酸位５〜１０の配列を含んでなるものである。
【００６０】
もう一つの好ましい実施形態において、式ＶＩＩのペプチドは側鎖を脱保護され、且つ次式のものであり、
Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＢｚｌ（配列番号２）
これはビバリルジンのアミノ酸位１〜１０の配列を含んでなるものである。
【００６１】
もう一つの好ましい実施形態において、式ＩＩｂの側鎖を脱保護されたペプチドは次式のものであり、
Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＨ（配列番号２）
これはビバリルジンのアミノ酸位１〜１０の配列を含んでなるものである。
【００６２】
もう一つの好ましい実施形態において、式Ｘの側鎖保護されたペプチドは次式のものであり、
Ｈ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号８）
これはビバリルジンのアミノ酸位１３〜２０の配列を含んでなるものである。
【００６３】
もう一つの好ましい実施形態において、式ＸＩＩの側鎖保護されたペプチドは次式のものであり、
Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号９）、または
Ｈ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号９），
これらは両者とも、ビバリルジンのアミノ酸位１２〜２０の配列を含んでなるものである。
【００６４】
もう一つの好ましい実施形態において、式ＸＩＶの側鎖保護されたペプチドは次式のものであり、
Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号３），
これはビバリルジンのアミノ酸位１１〜２０の配列を含んでなるものである。
【００６５】
もう一つの好ましい実施形態において、式ＩＩＩの側鎖保護されたペプチドは次式のものであり、
Ｈ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号３），
これはビバリルジンのアミノ酸位１１〜２０の配列を含んでなるものである。
【００６６】
もう一つの好ましい実施形態において、式ＩＶの側鎖保護されたペプチドは次式のものであり、
Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号１），
これはビバリルジンのアミノ酸位１〜２０の配列を含んでなるものである。
【００６７】
もう一つの側面において、本発明は、次式のビバリルジン
Ｈ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＨ（配列番号１） （Ｉ）
の合成における中間体としての、下記からなる群から選択されるペプチドの使用に関する：
（ｉ）次式の任意に側鎖保護されたペプチド
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＯＨ（配列番号４） （Ｖ），
ここで、Ｐ１は保護基であり、好ましくは、Ｐ１は接触水素化に対して安定な保護基であり、より好ましくは、Ｐ１はＢｏｃ、Ｂｐｏｃ、Ｄｄｚ、ＦｍｏｃまたはＭｓｃであり、最も好ましくは、Ｐ１はＢｏｃであり、また
前記ペプチドはアルギニン残基において、ニトロのような適切な側鎖保護基で任意に側鎖保護され、
好ましくは、ペプチドＶは側鎖未保護であり、且つ次式のものである。
【００６８】
Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＯＨ（配列番号４）；
（ｉｉ）次式の任意に側鎖保護されたペプチド
Ｈ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＰ２（配列番号５） （ＶＩ），
ここで、Ｐ２は保護基であり、好ましくは、Ｐ２は接触水素化により除去可能で且つ前記任意の側鎖保護基に対して直交性の保護基であり、より好ましくは、Ｐ２はＢｚｌ、Ｂｏｍ、Ｐａｃ、ＯＮｂｚ、Ｐｉｃ、または４−スルホベンジルであり、最も好ましくは、Ｐ２はＢｚｌであり、また
前記ペプチドは、アスパラギン残基において、トリチル（Ｔｒｔ）のような適切な側鎖保護基で任意に側鎖保護され、
好ましくは、ペプチドＶＩは側鎖未保護であり、且つ次式のものである
Ｈ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＢｚｌ（配列番号５）；
（ｉｉｉ）次式の任意に側鎖保護されたペプチド
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＰ２（配列番号２） （ＶＩＩ）
ここで、Ｐ１、Ｐ２および任意の側鎖保護基、並びにＰ１、Ｐ２および任意の側鎖保護基の好ましい意味は、上記で定義した通りである；
好ましくは、ペプチドＶＩＩは側鎖未保護であり、且つ次式のものである；
Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＢｚｌ（配列番号２）；
（ｉｖ）次式の側鎖保護されたペプチド
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＨ（配列番号２） （ＩＩａ），
ここで、Ｐ１および側鎖保護基、並びにＰ１および任意の側鎖保護基の好ましい意味は、上記で定義した通りであるが、
Ｐｂｆがペンタメチルジヒドロベンゾフランスルホニルであり、Ｔｒｔはトリチルであるとして、Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｇｌｙ１０−ＯＨは除く。このペプチドは、ＣＴＣ樹脂上での固相合成の生成物として、ＷＯ２００７／０３３３８３に開示されている。対照的に、本発明によるＩＩａの側鎖保護されたペプチドは異なる方法、即ち、溶液相合成によって形成される；
（ｖ）次式の側鎖未保護のペプチド
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＨ（配列番号２） （ＩＩｂ）
ここで、Ｐ１、並びにＰ１の好ましい意味は、上記で定義した通りであり、
好ましくは、式ＩＩｂの側鎖未保護のペプチドは次式のものである
Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＨ（配列番号２）；
（ｖｉ）次式の側鎖保護されたペプチド
Ｈ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号８） （Ｘ）
ここで、Ｐ３は保護基であり、好ましくは、Ｐ３は接触水素化により除去可能な保護基であり、より好ましくは、Ｐ３はＢｚｌ、Ｂｏｍ、Ｐａｃ、ＯＮｂｚ、Ｐｉｃ、または４−スルホベンジルであり、最も好ましくは、Ｐ３はＢｚｌであり、また
側鎖保護基は、好ましくはＢｚｌ、Ｂｏｍ、Ｐａｃ、ＯＮｂｚ、Ｐｉｃ、および４−スルホベンジルからなる群から選択され、より好ましくはＢｚｌであり、
好ましくは、式Ｘの側鎖保護されたペプチドは次式のものである
Ｈ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号８）；
（ｖｉｉ）次式の側鎖保護されたペプチド
Ｐ４−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号９） （ＸＩＩ），
ここで、Ｐ３および側鎖保護基、並びにＰ３および任意の側鎖保護基の好ましい意味は上記で定義した通りであり、また
Ｐ４は保護基であり、好ましくは、Ｐ４は式Ｘのペプチドの側鎖保護基に対しておよびＰ３に対して直交性の保護基であり、より好ましくは、Ｐ４はＢｏｃ、Ｂｐｏｃ、Ｄｄｚ、ＦｍｏｃまたはＭｓｃであり、最も好ましくは、Ｐ４はＢｏｃであり、
但し、Ｐ４がＢｏｃ、Ｂｐｏｃ、またはＤｄｚであるならば、Ｐ３はＢｏｍではなく、またはＰ４は水素である；
好ましくは、式ＸＩＩの側鎖保護されたペプチドは次式のものである
Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号９），または
Ｈ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号９）；
（ｖｉｉｉ）次式の側鎖保護されたペプチド
Ｐ５−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号３） （ＸＩＶ）
ここで、Ｐ３および側鎖保護基、並びにＰ３および側鎖保護基の好ましい意味は上記で定義した通りであり、また
Ｐ５は保護基であり、好ましくは、Ｐ５は式ＸＩＩおよびＸＩＩＩのペプチド／アミノ酸の側鎖保護基に対して、およびＰ３に対して直交性の保護基であり、より好ましくは、Ｐ５はＢｏｃ、Ｂｐｏｃ、Ｄｄｚ、ＦｍｏｃまたはＭｓｃであり、最も好ましくは、Ｐ５はＢｏｃである；但し、Ｐ５がＢｏｃ、Ｂｐｏｃ、またはＤｄｚであるならば、Ｐ３はＢｏｃではないが、
Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｌｅｕ２０−ＯｔＢｕを除き、ここでのｔＢｕはｔｅｒｔ−ブチルである。このペプチドは、前駆体ペプチド（即ち、ペプチド配列マイナスＬｅｕ）とＨ−Ｌｅｕ−ＯｔＢｕとの間の反応生成物として、ＷＯ２００７／０３３３８３に開示されている。該ＷＯ２００７／０３３３８３に開示された前駆体ペプチドは、ＣＴＣ樹脂上での固相合成によって、先行する工程において既に形成されている。Ｈ−Ｌｅｕ−ＯｔＢｕとの反応の後、該開示されたペプチドは、次の工程を続ける前に単離されることはない。対照的に、本発明による式ＸＩＶの側鎖保護されたペプチドは異なった方法、即ち、溶液相合成によって形成され、これはその形成後に単離される；
好ましくは、式ＸＩＶの側鎖保護されたペプチドは次式のものである
Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−-Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号３）；
（ｉｘ）次式の側鎖保護されたペプチド
Ｈ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号３） （ＩＩＩ）
ここで、Ｐ３および側鎖保護基、並びにＰ３および側鎖保護基の好ましい意味は上記で定義した通りであるが、
Ｈ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｌｅｕ２０−ＯｔＢｕは除く。このペプチドは、ＷＯ２００７／０３３３８３に開示されている。それは、上記で述べたＮ末端が脱保護されたペプチドである。従って、上記で説明したように、その形成方法は本発明による式ＩＩＩの側鎖保護されたペプチドとは異なっている；
好ましくは、式ＩＩＩの側鎖保護されたペプチドは次式のものである
Ｈ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号３）；
および
（ｘ）次式の側鎖保護されたペプチド
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号１） （ＩＶ）
ここで、Ｐ１、Ｐ３および側鎖保護基、並びにＰ１、Ｐ３および任意の側鎖保護基の好ましい意味は上記で定義した通りであるが、
Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｇｌｙ１０−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｌｅｕ２０−ＯｔＢｕは除く。このペプチドは、ＷＯ２００７／０３３３８３において、両者とも上記で説明したＢｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｇｌｙ１０−ＯＨと、Ｈ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｌｅｕ２０−ＯｔＢｕをカップリングさせた後の生成物として開示されている。従って、そのカップリング生成物に向かう方法は、本発明による式ＩＶの側鎖保護されたペプチドに向かう方法とは異なっている；
好ましくは、式ＩＶの側鎖保護されたペプチドは次式のものである
Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号１）。
【００６９】
本発明はまた、式Ｉのビバリルジンの製造方法に関し、該方法は下記の工程を含んでなるものである：
（ａ）次式のペプチドを、
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＨ（配列番号２） （ＩＩｃ）
ここでのＰ１は保護基である；
次式のペプチドと反応させて、
Ｈ−Ａｓｐ（ＯＰ１１）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＰ６）−Ｇｌｕ（ＯＰ７）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＰ８）−Ｇｌｕ（ＯＰ９）−Ｔｙｒ（Ｐ１０）−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号３） （ＩＩＩｃ）
ここでのＰ３およびＰ６〜Ｐ１１の各々はＢｚｌである；
次式のペプチドを得る工程
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−Ａｓｐ（ＯＰ１１）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＰ６）−Ｇｌｕ（ＯＰ７）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＰ８）−Ｇｌｕ（ＯＰ９）−Ｔｙｒ（Ｐ１０）−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号１） （ＩＶｃ），
ここでのＰ１、Ｐ３およびＰ６〜Ｐ１１は上記で定義した通りである；
（ｂ）工程（ａ）で製造されたペプチドの側鎖保護基およびＣ末端保護基Ｐ３およびＰ６〜Ｐ１１を除去する工程；
（ｃ）工程（ｂ）で製造されたペプチドのＮ末端保護基Ｐ１を除去して、式Ｉのビバリルジンを得る工程。
【００７０】
本発明の方法は、収束的断片合成を介してのビバリルジンの非常に効率的な合成を可能にするものであり、これは工業的規模での製造に対して容易に適合させることができる。更に、ビバリルジンを調製するためのこの経路は非常に簡単であり、且つ複雑な保護基戦略を必要としない。加えて、種々のビルディングブロック（断片）は、アセンブリーの際のラセミ化を回避または最小化するように選択される。
【００７１】
本発明の反応の前、最中および後に、全ての断片並びに全てのカップリング生成物は、該分子の物理化学的性質および／または反応条件に応じて、そのままの状態で存在してもよく、または適切な塩の形態で存在してもよい。適切な対イオンは、例えば、トリエチルアミン（ＴＥＡ）、ジシクロヘキシルアミン（ＤＣＨＡ）、塩酸（ＨＣｌ）およびトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）の塩形態である。
【００７２】
保護基Ｐ１としては、接触水素化に対して安定な如何なる保護基も使用することができ、例えば、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、フルオレン−９−イルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、２−（３，５−ジメトキシフェニルｌ）プロパ−２−イルオキシカルボニル（Ｄｄｚ）、アダマンチル−１−オキシカルボニル（Ａｄｃ）、ｔｅｒｔ−アミルオキシカルボニル（Ａｏｃ）、ジフェニルホスフィニル（Ｄｐｐ）、２−（メチルスルホニル）エトキシカルボニル（Ｍｓｃ）、およびフタロイル（Ｐｈｔ）である。好ましくは、保護基Ｐ１はＢｏｃ、ＦｍｏｃまたはＤｄｚである。
【００７３】
好ましくは、保護基Ｐ３およびＰ６〜Ｐ１１はベンジル（Ｂｚｌ）である。ここでは、および以下では、「ＯＢｚｌ」の略語はベンジルエステル（側鎖およびＣ末端の両方のカルボン酸との反応後）を示すのに対して、「Ｂｚｌ」の略語はベンジルエーテル（例えばチロシンのフェノール性水酸基との反応後）を示す。
【００７４】
工程（ａ）〜（ｃ）は、ペプチド合成の技術において知られた標準の反応条件を使用して実施することができる。
【００７５】
カップリングおよび脱保護工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）は、好ましくは溶液中で行われる。
【００７６】
カップリング工程（ａ）については、ＤＭＦが溶媒として好ましく使用される。第一の脱保護工程（ｂ）は、好ましくは酢酸および／または水の中で行われる一方、第二の脱保護工程（ｃ）は、好ましくはトルエン中で行われる。
【００７７】
好ましい実施形態において、カップリング工程（ａ）は、ＨＯＢｔ、ＥＤＣ・ＨＣｌ、およびＴＥＡの組合せを用いて達成される。
【００７８】
好ましい実施形態において、第一の脱保護工程（ｂ）は、水素ガスおよびパラジウム／炭素（palladium on charcoal）を用いて実施される。
【００７９】
好ましい実施形態において、第二の脱保護工程（ｃ）はＴＦＡを用いて行われる。
【００８０】
工程（ｃ）の後に得られた粗生成物は、従来の方法によって、例えば、分取ＨＰＬＣ、向流分配法またはその均等物を用いて精製することができる。工程（ａ）および（ｂ）の後に得られる中間体についても、もし精製が必要であれば、同じことが言える。
【００８１】
保護されたペプチド断片ＩＩｃおよびＩＩＩｃは、従来のペプチド合成法、例えば溶液相合成（ＨＰＰＳ）または固相合成（ＳＰＰＳ）を使用して調製することができる。ＳＰＰＳの場合、当業者に既知で且つ保護されたペプチドの調製を可能にする全ての樹脂を適用することができる。ここでの樹脂は広義に解釈されるべきである。従って、「樹脂」の用語は、例えば固体支持体単独、またはリンカーに直接連結されて両者の間に任意にハンドルを備えた固体支持体を意味するように理解されるべきである。該樹脂は不溶性でもよく、または可溶性でもよい。可溶性ポリマーであるポリエチレングリコールは可溶性樹脂の固体支持体の一例である。好ましい樹脂は、トリチルまたはブロモベンズヒドリルを備えたポリスチレンをベースと樹脂である。トリチル樹脂の例は、塩化２−クロロトリチル樹脂（ＣＴＣ樹脂）、塩化トリチル樹脂、塩化４−メチルトリチル樹脂、および塩化４−メトキシトリチル樹脂である。好ましくは、ＣＴＣ樹脂は遊離のカルボキシル官能基を含む断片の合成のために適用される。
【００８２】
好ましい実施形態において、保護されたペプチド断片ＩＩｃおよびＩＩＩｃは、溶液相合成を使用して調製される。
【００８３】
本発明のもう一つの目的は、本発明の方法における中間体として有用な、保護されたペプチドを提供することである。特に、これらペプチドの一つは式ＩＶｃの保護されたペプチドであり、ここでのＰ１は保護基であり、好ましくは、Ｐ１はＢｏｃまたはＨであり、Ｐ３およびＰ６〜Ｐ１１はＢｚｌである。
【００８４】
本発明の方法における中間体として特に有用なもう一つのペプチドは、式ＩＩｃのＮ末端が保護されたペプチドであり、ここでのＰ１は保護基であり、好ましくは、Ｐ１はＢｏｃである。
【００８５】
更なる側面において、本発明はまた、Ｎ末端が保護された次式のペプチドの製造方法であって、
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＨ（配列番号２） （ＩＩｃ）
ここで、Ｐ１はＢｏｃである
以下の工程を含んでなる方法に関する：
（ａ）次式のペプチドのＣ末端保護基を除去して、
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＯＰ１３（配列番号４） （Ｖｃ）
ここで、Ｐ１はＢｏｃであり、Ｐ１３はＢｚｌ、メチル（Ｍｅ）およびエチル（Ｅｔ）のような保護基であり、好ましくは、Ｐ１３はＢｚｌである；
Ｎ末端が保護され、且つＣ末端は脱保護されてＰ１３がＨである式Ｖｃのペプチドを得る工程；
（ｂ）次式のペプチドのＮ末端保護基を除去して、
Ｐ１５−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＢｚｌ（配列番号５） （ＶＩｃ）
ここで、Ｐ１５はＢｏｃである
Ｃ末端が保護され、且つＮ末端は脱保護されてＰ１５がＨである式ＶＩｃのペプチドを得る工程；
（ｃ）工程（ａ）で製造されたＰ１３がＨである式Ｖｃのペプチドを、工程（ｂ）で製造されたＰ１５がＨである式ＶＩｃのペプチドと反応させて、次式のペプチドを得る工程
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＢｚｌ（配列番号２） （ＶＩＩｃ），
ここで、Ｐ１はＢｏｃである；および
（ｄ）工程（ｃ）で製造されたペプチドのＣ末端保護基を除去して、式ＩＩｃのＮ末端が保護されたペプチドを得る工程。
【００８６】
工程（ａ）〜（ｃ）は、ペプチド合成の技術において既知の標準の反応条件を使用して実施することができる。
【００８７】
カップリングおよび脱保護工程（ａ）、（ｂ）、（ｃ）および（ｄ）は、好ましくは溶液中で行われる。
【００８８】
カップリング工程（ｃ）においては、ＤＭＦが溶媒として好ましく使用される。第一の脱保護工程（ａ）は、好ましくはアセトン中で行われるのに対して、第二の脱保護工程（ｂ）は、好ましくはトルエンおよび／またはＴＨＦ中で行われる。第三の脱保護工程（ｄ）は、好ましくは、ＤＭＦ、アセトン、水、およびアセトンと水の混合物からなる群から選択された溶媒中で行われる。
【００８９】
好ましい実施形態において、第一の脱保護工程（ａ）は、水素ガスおよびパラジウム／炭素（palladium on charcoal）を用いて行われる。
【００９０】
好ましい実施形態において、第二の脱保護工程（ｂ）はＴＦＡを用いて行われる。
【００９１】
好ましい実施形態において、カップリング工程（ｃ）は、ＨＯＢｔ、ＤＩＣおよびＴＥＡの組合せを用いて達成される。
【００９２】
好ましい実施形態において、第三の脱保護工程（ｄ）は、水素ガスおよびパラジウム／炭素（palladium on charcoal）を用いて行われる。
【００９３】
工程（ｄ）の後に得られた粗生成物は、従来の方法によって、例えば、分取ＨＰＬＣ、向流分配法またはその均等物を用いて精製することができる。工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）の後に得られる中間体についても、もし精製が必要であれば同じことが言える。
【００９４】
保護されたペプチド断片ＶｃおよびＶＩｃは、従来のペプチド合成法、例えば溶液相合成（ＨＰＰＳ）または固相合成（ＳＰＰＳ）を使用して調製することができる。ＳＰＰＳの場合、当業者に既知で且つ保護されたペプチドの調製を可能にする全ての樹脂を適用することができる。ここでの樹脂は広義に解釈されるべきである。従って、「樹脂」の用語は、例えば固体支持体単独、またはリンカーに直接連結され且つ両者の間に任意にハンドルを備えた固体支持体を意味するように理解されるべきである。該樹脂は不溶性でもよく、または可溶性でもよい。可溶性ポリマーであるポリエチレングリコールは可溶性樹脂の固体支持体の一例であり、従って可溶性のペプチド−樹脂接合体を導く。好ましい樹脂は、トリチルまたはブロモベンズヒドリルを備えたポリスチレンをベースと樹脂である。トリチル樹脂の例は、塩化２−クロロトリチル樹脂（ＣＴＣ樹脂）、塩化トリチル樹脂、塩化４−メチルトリチル樹脂、および塩化４−メトキシトリチル樹脂である。好ましくは、ＣＴＣ樹脂は遊離のカルボキシル官能基を含む断片の合成のために適用される。
【００９５】
好ましい実施形態において、保護されたペプチド断片ＶｃおよびＶＩｃは、溶液相合成を使用して調製される。
【００９６】
本発明のもう一つの目的は、式ＩＩｃのＮ末端を保護されたペプチドの製造のための本発明の方法における中間体として有用な、保護されたペプチドを提供することである。特に、これらペプチドの一つは、Ｃ末端およびＮ末端を保護された式Ｖｃのペプチドであり、ここでのＰ１３は保護基、好ましくはＢｚｌである。これらペプチドのもう一つは、Ｎ末端を保護されると共に遊離のＣ末端を備えた式Ｖｃのペプチドである。
【００９７】
本発明の方法における中間体として特に有用なもう一つのペプチドは、式ＶＩｃのＣ末端が保護されたペプチドであり、ここでのＰ１５はＢｏｃであり、またはＰ１５はＨである。
【００９８】
本発明の方法における中間体として特に有用なもう一つのペプチドは、Ｃ末端およびＮ末端が保護された式ＩＩｃのペプチドであり、ここでのＰ１は保護基であり、好ましくは、Ｐ１はＢｏｃである。
【００９９】
ビバリルジンの製造のための方法における中間体として特に有用なもう一つのペプチドは、式ＩＩＩｃの保護されたペプチドであり、ここでのＰ３およびＰ６〜Ｐ１１はＢｚｌである。
【０１００】
更なる側面において、本発明はまた、次式の保護されたペプチドの製造方法であって、
Ｈ−Ａｓｐ（ＯＰ１１）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＰ６）−Ｇｌｕ（ＯＰ７）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＰ８）−Ｇｌｕ（ＯＰ９）−Ｔｙｒ（Ｐ１０）−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号３） （ＩＩＩｃ）
ここで、Ｐ３およびＰ６〜Ｐ１１はＢｚｌである；
以下の工程を含んでなる方法に関する：
（ａ）次式のペプチドのＮ末端保護基を除去して、
Ｐ１６−Ｇｌｕ（ＯＰ８）−Ｇｌｕ（ＯＰ９）−Ｔｙｒ（Ｐ１０）−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号６） （ＶＩＩＩｃ）
ここで、Ｐ３およびＰ８〜Ｐ１０はＢｚｌであり、Ｐ１６はＢｏｃである；
Ｃ末端が保護され、Ｎ末端が脱保護されてＰ１６がＨである式ＶＩＩＩｃのペプチドを得る工程；
（ｂ）工程（ａ）で製造された、Ｐ１６がＨで、Ｐ３およびＰ８〜Ｐ１０がＢｚｌである式ＶＩＩＩｃのペプチドを、次式のペプチドと反応させて、
Ｐ１７−Ｇｌｕ（ＯＰ６）−Ｇｌｕ（ＯＰ７）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−ＯＨ（配列番号７） （ＩＸｃ）
ここで、Ｐ１７はＢｏｃであり、Ｐ６およびＰ７はＢｚｌである；
次式のペプチドを得る工程、
Ｐ１７−Ｇｌｕ（ＯＰ６）−Ｇｌｕ（ＯＰ７）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＰ８）−Ｇｌｕ（ＯＰ９）−Ｔｙｒ（Ｐ１０）−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号８） （Ｘｃ），
ここで、Ｐ１７はＢｏｃであり、Ｐ３およびＰ６〜Ｐ１０はＢｚｌである；
（ｃ）Ｐ３およびＰ６〜Ｐ１０がＢｚｌであり、Ｐ１７がＢｏｃである、工程（ｂ）で製造された式ＸｃのペプチドのＮ末端保護基を除去して、Ｃ末端が保護され、Ｎ末端が脱保護された、Ｐ３およびＰ６〜Ｐ１０がＢｚｌであり、且つＰ１７がＨである式Ｘｃのペプチドを得る工程；
（ｄ）Ｐ１７がＨであり、Ｐ３およびＰ６〜Ｐ１０がＢｚｌである工程（ｃ）で製造された式Ｘｃのペプチドを、次式の保護されたアミノ酸と反応させて、
Ｂｏｃ−Ｐｈｅ１２−ＯＨ （ＸＩ）
次式のペプチドを得る工程
Ｐ４−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＰ６）−Ｇｌｕ（ＯＰ７）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＰ８）−Ｇｌｕ（ＯＰ９）−Ｔｙｒ（Ｐ１０）−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号９）
（ＸＩＩｃ），
ここで、Ｐ３およびＰ６〜Ｐ１０はＢｚｌであり、Ｐ４はＢｏｃである；
（ｅ）工程（ｄ）で製造された、Ｐ３およびＰ６〜Ｐ１０がＢｚｌであり、Ｐ４がＢｏｃである式ＸＩＩｃのペプチドのＮ末端保護基を除去して、Ｐ３およびＰ６〜Ｐ１０がＢｚｌであり、Ｐ４がＨであるＣ末端が保護されてＮ末端が脱保護された式ＸＩＩｃのペプチドを得る工程；
（ｆ）Ｐ４がＨであり、Ｐ３およびＰ６〜Ｐ１０がＢｚｌである工程（ｅ）で製造された式ＸＩＩｃのペプチドを、次式の保護されたアミノ酸と反応させて、
Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＯＰ１１）１１−ＯＨ （ＸＩＩＩｃ）
ここで、Ｐ１１はＢｚｌである；
次式のペプチドを得る工程；
Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＯＰ１１）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＰ６）−Ｇｌｕ（ＯＰ７）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＰ８）−Ｇｌｕ（ＯＰ９）−Ｔｙｒ（Ｐ１０）−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号３） （ＸＩＶｃ）
ここで、Ｐ３およびＰ６〜Ｐ１１はＢｚｌである；
（ｇ）工程（ｆ）で製造されたペプチドのＮ末端保護基を除去して、式ＩＩＩｃのＣ末端が保護されたペプチドを得る工程。
【０１０１】
工程（ａ）〜（ｇ）は、ペプチド合成の技術において既知の標準的な反応条件を使用して実施することができる。
【０１０２】
カップリングおよび脱保護工程（ａ）〜（ｇ）は、好ましくは溶液中で行われる。
【０１０３】
カップリング工程（ｂ）、（ｄ）および（ｆ）については、ＤＭＦが溶媒として好ましく使用される。脱保護工程（ａ）、（ｃ）、（ｅ）および（ｇ）は、溶媒としてのトルエンおよびＴＨＦの混合物中において好ましく行われる。
【０１０４】
好ましい実施形態において、カップリング工程（ｂ）、（ｄ）および（ｆ）は、工程（ｂ）についてはＨＯＢｔ、ＥＤＣ・ＨＣｌ、および塩基ＴＥＡの組合せを用いて、工程（ｄ）および（ｆ）についてはそれぞれＤＩＰＥＡを用いて達成される。もう一つの好ましい実施形態において、脱保護工程（ａ）、（ｃ）、（ｅ）および（ｇ）は、ＥＦＡおよびフェノールの使用により行われる。
【０１０５】
工程（ｇ）の後に得られた粗生成物は、従来の方法によって、例えば、分取ＨＰＬＣ、向流分配法またはその均等物を用いて精製することができる。工程（ａ）〜（ｆ）の後に得られる中間体についても、もし精製が必要であれば同じことが言える。
【０１０６】
保護されたペプチド断片ＶＩＩＩｃ、ＩＸｃ、ＸＩ、およびＸＩＩＩｃは、従来のペプチド合成法、例えば溶液相合成（ＨＰＰＳ）または固相合成（ＳＰＰＳ）を使用して調製することができる。ＳＰＰＳの場合、当業者に既知で且つ保護されたペプチドの調製を可能にする全ての樹脂を適用することができる。ここでの樹脂は広義に解釈されるべきである。従って、「樹脂」の用語は、例えば固体支持体単独、またはリンカーに直接連結されて両者の間に任意にハンドルを備えた固体支持体を意味するように理解されるべきである。該樹脂は不溶性でもよく、または可溶性でもよい。可溶性ポリマーであるポリエチレングリコールは可溶性樹脂の固体支持体の一例である。好ましい樹脂は、トリチルまたはブロモベンズヒドリルを備えたポリスチレンをベースと樹脂である。トリチル樹脂の例は、塩化２−クロロトリチル樹脂（ＣＴＣ樹脂）、塩化トリチル樹脂、塩化４−メチルトリチル樹脂、および塩化４−メトキシトリチル樹脂である。好ましくは、ＣＴＣ樹脂は遊離のカルボキシル官能基を含む断片の合成のために適用される。
【０１０７】
好ましい実施形態において、保護されたペプチド断片ＶＩＩＩｃ、ＩＸｃ、ＸＩ、およびＸＩＩＩｃは、溶液相合成を使用して調製される。
【０１０８】
本発明のもう一つの目的は、Ｃ末端が保護された式ＩＩＩｃのペプチドの製造のために、本発明の方法における中間体として有用な保護されたペプチドを提供することである。特に、これらペプチドの一つは式ＸＩＶｃの保護されたペプチドであり、ここでのＰ３およびＰ６〜Ｐ１１はＢｚｌである。
【０１０９】
本発明の方法における中間体として特に有用なもう一つのペプチドは、式ＸＩＩｃの側鎖保護されたペプチドであり、ここでのＰ３およびＰ６〜Ｐ１０はＢｚｌであり、Ｐ４はＢｏｃ保護基であるか、またはＰ４はＨである。
【０１１０】
本発明の方法における中間体として特に有用なもう一つのペプチドは、式Ｘｃの保護されたペプチドであり、ここでのＰ３およびＰ６〜Ｐ１０はＢｚｌであり、Ｐ１７はＢｏｃ保護基であるか、またはＰ１７はＨである。
【０１１１】
本発明の方法における中間体として特に有用なもう一つのペプチドは、式ＩＸｃの保護されたペプチドであり、ここでのＰ６およびＰ７はＢｚｌであり、またＰ１７は好ましくはＢｏｃである。
【０１１２】
本発明の方法における中間体として特に有用なもう一つのペプチドは、式ＶＩＩＩｃの保護されたペプチドであり、ここでのＰ３およびＰ８〜Ｐ１０はＢｚｌであり、Ｐ１６はＢｏｃ保護基であるか、またはＰ１６はＨである。
【０１１３】
更なる側面において、本発明はまた、ビバリルジンの合成における中間体としての、上記ペプチドの何れかの使用に関する。
【実施例】
【０１１４】
以下の非限定的な例によって、本発明の代表的な実施形態を詳細に例証する。
【０１１５】
＜略語＞：
Ｂｏｃ ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル
Ｂｚｌ ベンジル
ＤＣＣ １，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド
ＤＣＨＡ ジシクロヘキシルアミン
ＤＣＵ ジシクロヘキシル尿素
ＤＩＣ ジイソプロピルカルボジイミド
ＤＩＰＥＡ Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＥＤＣ・ＨＣｌ １−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド
塩酸塩
ｅｑｕｉｖ． 当量
ＨＯＢｔ １−ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＭＴＢＥ メチル・ｔｅｒｔ−ブチルエーテル
ＮＭＭ Ｎ−メチルモルホリン
ＨＯＰｆｐ ペンタフルオロフェノール
ＯＰｆｐ ペンタフルオロフェニルエステル
ＨＯＳｕ Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド
Ｓｕ Ｎ−スクシンイミジル
ＴＥＡ トリエチルアミン
ＴＦＡ トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ テトラヒドロフラン
実施例１：Ｈ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＢｚｌ・ＴＦＡの調製
Ｂｏｃ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−ＯＢｚｌ（９０．２０ｋｇ；Hexagon Labs Inc., USA）を、２０℃において、ＴＦＡ（９０Ｌ）、トルエン（３８８Ｌ）およびＴＨＦ（４５Ｌ）の混合物に加えた。ＴＦＡ（１９８Ｌ）を、≦２２℃において該混合物に徐々に添加した。反応を２０℃で完了させた。開裂の完了はＨＰＬＣによりモニターした。
【０１１６】
次いで、ＴＨＦを徐々に添加し、反応混合物を真空中で蒸発させた。トルエンおよびＴＨＦの混合物を用いて３回の共沸蒸留を行った。Ｈ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＢｚｌ・ＴＦＡが油状残渣として得られ、これを酢酸エチルで希釈した。該溶液を、次の化学工程において直接使用した（実施例３参照）。収率：１００％、純度（ＨＰＬＣによる）：９９．３％。
【０１１７】
実施例２：Ｂｏｃ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−ＯＨ・ＴＥＡ（配列番号１０）
の調製
ＴＥＡ（７３．１Ｌ）を、２０℃において、アセトン（７８．４４Ｌ）およびプロセス水（４９１Ｌ）の混合物中で、Ｂｏｃ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−ＯＥｔ（配列番号１０）［９８．１１ｋｇ；Bonora et al, Gazzetta Chimica Italiana 1980, 110,
503−510、Ｂｏｃ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−ＯＨ（Senn Chemicals, Switzerland)およびＨ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−ＯＥｔ・ＨＣｌ（Senn Chemicals, Switzerland）から類似の方法で調製した］の懸濁液に徐々に加えた。この反応を２０℃において完了させた。鹸化の完了はＨＰＬＣでモニターした。該溶液を真空中で蒸発させ、残渣の容積をプロセス水で４５６Ｌに調節した。このＢｏｃ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−ＯＨ・ＴＥＡ（配列番号１０）の溶液を、次の化学工程において直接使用した（実施例３参照）。収率：１００％、純度（ＨＰＬＣによる）：９９．６％。
【０１１８】
実施例３：Ｂｏｃ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＢｚｌ
（配列番号５）の調製
酢酸エチル中のＨ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＢｚｌ・ＴＦＡ（５７３Ｌ，実施例１参照）の溶液のｐＨを、０℃において、ＴＥＡを用いて６〜６．５に調節した。実施例２で得られたＢｏｃ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−ＯＨ（配列番号１０）の溶液を０℃に冷却して加え、続いてＨＯＢｔ（２８．５２ｋｇ）およびＥＤＣ・ＨＣｌ（６９．８１ｋｇ）を添加した。０℃において、ＴＥＡ（１２１Ｌ）を用いてｐＨを６〜６．５に調節した。該反応混合物を、室温に達するまで加温した。
【０１１９】
カップリングが完了したときに（約１０時間後、ＨＰＬＣにより示される）、ＮａＣｌを反応混合物に加えた。該懸濁液を冷却および濾過して固体残渣を得、これをＮａＣｌ水溶液で数回洗浄し、次いで冷却した。得られた固体を真空中で乾燥して、純度９７．９％（ＨＰＬＣによる）を有する１３０．１５ｋｇ（１００％）のＢｏｃ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＢｚｌ（配列番号５）を得た。
【０１２０】
実施例４：Ｈ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＢｚｌ・ＴＦＡ（配列番号５）の調製
Ｂｏｃ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＢｚｌ（配列番号５）（１３１．２０ｋｇ、実施例３参照）を、≦２２℃の温度において、ＴＦＡ（１３１Ｌ）、トルエン（５２５Ｌ）およびＴＨＦ（１０５Ｌ）の混合物に徐々に加えた。この反応混合物に、≦２２℃においてＴＦＡ（２８９Ｌ）を徐々に加えた。２０℃において、約１．５時間以内に反応を完了させた（ＨＰＬＣによりモニターした）。
【０１２１】
反応混合物を真空中で濃縮し、残渣をジイソプロピルエーテル中に投入した。得られた懸濁液を濾過して固体を得、これをジイソプロピルエーテルで数回洗浄し、次いで真空中で乾燥して、純度９７．５％（ＨＰＬＣによる）を有する１３０．９９ｋｇのＨ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＢｚｌ・ＴＦＡ（配列番号５）を得た。
【０１２２】
実施例５：Ｈ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌ・２ＨＣｌの調製
酢酸（３８０Ｌ）中の塩酸（１Ｍ）を、≦２２℃において、酢酸（１９０Ｌ）およびＴＨＦ（１９Ｌ）中のＢｏｃ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌ・ＨＣｌ（９５．００ｋｇ；Hexagon Labs Inc., USA）の懸濁液に徐々に添加した。開裂の完了（約１時間後）をＨＰＬＣによりモニターした。
【０１２３】
反応混合物を真空中で蒸発させた。共沸蒸留を最初は酢酸と共に行い、次いでＤＭＦと共に行った。Ｈ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌ・２ＨＣｌが油状残渣として得られ、これをＤＭＦで希釈して約３８０Ｌの容積を得た。得られた溶液を、次の化学工程において直接使用した（実施例７参照）。収率：１００％、純度（ＨＰＬＣによる）：９６％。
【０１２４】
実施例６：Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−ＯＰｆｐの調製
酢酸エチル（１０Ｌ）中のＨＯＰｆｐ（１７．７８ｋｇ）の溶液を、≦２４℃において、酢酸エチル（１８３Ｌ）中のＢｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−ＯＨ（３３．３３ｋｇ；Bachem AG, Switzerland）の懸濁液に添加した。酢酸エチル（８３．３Ｌ）中のＤＣＣ（２１．４４ｋｇ）の溶液を、−６℃において徐々に反応混合物に加えた。次いで、該混合物を室温にまで加温した。カップリングの完了（約２時間）をＨＰＬＣによりモニターした。
【０１２５】
ＤＣＵ塩を濾過により除去し、酢酸エチルで洗浄した。約８０Ｌの残渣容積に到達するまで、濾液を真空中で蒸発させた。トルエンと共に、数回の共沸蒸留を行った。油状残渣を石油エーテル中で沈殿させた。固体を濾過し、石油エーテルで洗浄し、真空中で乾燥させて、純度９９．３％（ＨＰＬＣによる）を有する２６．３ｋｇ（５４％）のＢｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−ＯＰｆｐを得た。
【０１２６】
実施例７：Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌ・ＨＣｌ（配列番号４）の調製
Ｈ−Ａｒｇ３−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌ・２ＨＣｌ（１０３．００ｋｇ；５６１Ｌ溶液；実施例５参照）の溶液を、２０℃においてＤＭＦ（３６０Ｌ）で希釈した。ＤＭＦ（８２Ｌ）を５５℃未満の真空中で蒸発させた。次いで、Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−ＯＰｆｐ（１２１．５４ｋｇ；実施例６参照）を、２０℃において、Ｈ−Ａｒｇ３−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌ・２ＨＣｌの溶液に加えた。得られた混合物のｐＨを、０℃においてＴＥＡ（５８Ｌ）で６．５に調節した。該反応は、ＨＰＬＣモニタリングで示される通り、０℃において約２０時間で完了した。
【０１２７】
得られた懸濁液の固体画分を濾別し、ＤＭＦで洗浄した。濾液を、残渣容積が約３８５Ｌになるまで真空中で濃縮した。脱イオン水、ＮａＣｌおよび酢酸エチルの混合物を添加した。相を分離し、有機相を水性ＮａＨＣＯ３、塩水中のＨＣｌ溶液、および最後に塩水で連続的に洗浄した。有機相を真空中で濃縮して油状残渣を得、これをトルエンとの共沸蒸留により乾燥し、ジイソプロピルエーテル中において２０℃で沈殿させた。得られた懸濁液を濾過して固体を得、これをジイソプロピルエーテルで数回洗浄し、真空中で乾燥して、９６％の純度（ＨＰＬＣによる）を有する１０６ｋｇのＢｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌ・ＨＣｌ（配列番号４）を得た。
【０１２８】
実施例８：Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌ・ＨＣｌ（配列番号４）の調製
アセトン（６７Ｌ）中のＢｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌ・ＨＣｌ（配列番号４）（３３．５８ｋｇ，実施例７参照）の溶液のｐＨを、２０℃においてＴＦＡ／ＴＨＦ（５０／５０、ｖ／ｖ、０．０３Ｌ）の混合物を用いて４に調節した。得られた混合物を、アセトン（１７Ｌ）中のパラジウム／炭素（palladium on charcoal；３．３ｋｇ）の懸濁液に加えた。約３バールの水素圧において、２０℃で少なくとも２時間の水素化を行った。水素化の完了はＨＰＬＣによりモニターした。
【０１２９】
この反応混合物をセルロースカートリッジ上で濾過した。濾過ケーキをアセトンで数回洗浄した。合体させた濾液を真空中で濃縮した。得られた油状残渣を、アセトンおよびトルエンの混合物を使用した共沸蒸留により乾燥した。該油状残渣を酢酸エチルで希釈して、ジイソプロピルエーテルの中に投入した。得られた懸濁液を濾過し、沈殿物をジイソプロピルエーテルで数回洗浄し、真空中で乾燥して、純度９９．４％（ＨＰＬＣによる）を有する３１．４ｋｇのＢｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＯＨ（配列番号４）を得た。
【０１３０】
実施例９：Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＢｚｌ（配列番号２）の調製
ＤＭＦ（５０４Ｌ）および脱イオン水（２５Ｌ）中のＨ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＢｚｌ・ＴＦＡ（配列番号５）（２５．２０ｋｇ，実施例４参照）の溶液のｐＨを、≦２２℃において、ＴＥＡ（９Ｌ）を用いて６．５〜７に調節した。Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＯＨ（配列番号４）（２５．４６ｋｇ、実施例８参照）およびＨＯＢｔ（１．０２ｋｇ）を、≦２２℃において徐々に加えた。ＤＩＣ（９．５Ｌ）を、≦１２℃において反応混合物に添加した。得られた混合物のｐＨを、≦１２℃においてＴＥＡ（０．３Ｌ）を用いて７〜７．５に調節した。１０℃において１０日間で、ＨＰＬＣおよびＴＬＣによりモニターしながら該反応を完了させた。
【０１３１】
反応混合物を真空中で濃縮して油状残渣を得、これを酢酸エチルおよびジイソプロピルエーテルの混合物中で沈殿させた。上清液を数回除去し、同容量のジイソプロピルエーテルで置換した。該混合物を濾過して固体を得、これをジイソプロピルエーテルで３回洗浄し、真空中で乾燥して、８３．４％（ＨＰＬＣによる）の純度を有する３０．５０ｋｇ（７６％）のＢｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＢｚｌ（配列番号２）を得た。
【０１３２】
実施例１０：Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＨ（配列番号２）の調製
アセトン（４３Ｌ）および脱イオン水（９Ｌ）の混合物中のＢｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＢｚｌ（配列番号２）（２３．４３ｋｇの正味ペプチド重量、実施例９参照）を、パラジウム／炭素（０．７５ｋｇ）のアセトン（３Ｌ）中懸濁液に加えた。約３バールの水素圧において、２０℃で１１時間の水素化を行った。水素化の完了はＨＰＬＣによってモニターした。
【０１３３】
脱イオン水（３６Ｌ）を反応混合物に添加し、得られた混合物をセルロースカートリッジ上で濾過した。この濾過ケーキを、脱イオン水およびアセトンの２：８混合物で数回洗浄した。合体させた濾液を真空中で濾過した。得られた濾過を、ＤＭＦおよびトルエンの混合物を用いた共沸蒸留により乾燥して、８０％の純度（ＨＰＬＣによる）を有する２１．５ｋｇのＢｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＨ（配列番号２）を得た。
【０１３４】
実施例１１：Ｂｏｃ−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌの調製
Ｈ−Ｌｅｕ−ＯＢｚｌ・ｐ−トシレート（２２．２ｋｇ；Bachem AG, Switzerland）を、酢酸エチル（１０８Ｌ）中に懸濁させ、次いでＴＥＡ（約７．１Ｌ）を室温で加えた。Ｂｏｃ−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−ＯＨ（２０ｋｇ；Senn Chemicals, Switzerland）およびＨＯＢｔ（７．３ｋｇ）を固体として加えた。ＤＭＦ（４０Ｌ）中のＤＣＣ（１２．２ｋｇ）の溶液を、−６℃において該混合物に加えた。反応の完了はＴＬＣおよびＨＰＬＣによりモニターした。
【０１３５】
形成されたＤＣＵを濾過により除去した。濾液を、ＫＨＳＯ４水溶液および塩水；ＫＨＳＯ４水溶液；ＮａＨＣＯ３水溶液で、および塩水で連続的に洗浄した。有機相を真空中で蒸発させた。その残渣を酢酸エチル中に溶解し、次いで石油エーテル中で沈殿させた。固体を濾過し、石油エーテルで洗浄し、真空中で乾燥させた。母液を真空中で濃縮し、石油エーテル中で沈殿させた後に、二回目の収穫を得た。固体を濾過し、石油エーテルで洗浄し、真空中で乾燥した。これら二つの収穫物を混合して、９７％の純度（ＨＰＬＣによる）を有する２５．９ｋｇ（８４％）のＢｏｃ−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌを得た。
【０１３６】
実施例１２：Ｈ−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ・ＴＦＡの調製
ＴＥＡ（８３Ｌ）を、２０℃において、Ｂｏｃ−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（２５．９ｋｇ、実施例１１参照）、フェノール（１．３ｋｇ）、トルエン（１０４Ｌ）およびＴＨＦ（２１Ｌ）の混合物に徐々に添加した。反応を２０℃において完了させた。開裂の完了はＨＰＬＣによりモニターした。
【０１３７】
反応混合物を真空中で蒸発させた。トルエンおよびＴＨＦの混合物を用いて共沸蒸留を行った。次いで、酢酸エチルおよび石油エーテルを残渣に加えた。固体を濾過し、酢酸エチルおよび石油エーテルの混合物で洗浄し、次いで石油エーテルで洗浄し、最後に真空中で乾燥して、９８％の純度（ＨＰＬＣによる）を有する２３．７ｋｇ（８９％）のＨ−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ・ＴＦＡを得た。
【０１３８】
実施例１３：Ｂｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号６）の調製
Ｂｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−ＯＳｕ（４２．９０ｋｇ、Senn Chemicals, Switzerland）を、Ｈ−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ−ＯＢｚｌ・ＴＦＡ（２３．７ｋｇ、実施例１２参照）のＤＭＦ（８０Ｌ）中溶液に加えた。反応混合物のｐＨを、０℃において、ＤＩＰＥＡを使用して徐々に７〜７．５に調節した。該混合物の反応を、２０℃において完了させた。カップリングの完了はＨＰＬＣによりモニターされた。
【０１３９】
反応混合物を真空中で蒸発させ、油状残渣をプロセス水中に投入した。固体を濾過し、プロセス水で洗浄し、アセトニトリルおよびプロセス水の混合物中で再度スラリー化し、最簿に真空中で乾燥して、９２％の純度（ＨＰＬＣによる）を有する４０．３ｋｇのＢｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号６）を得た。
【０１４０】
実施例１４：Ｈ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ・ＴＦＡ（配列番号６）の調製
Ｂｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号６）（１１７．４５ｋｇ、実施例１３参照）を、１５℃において、ＴＦＡ（１１７Ｌ）、フェノール（５．８７ｋｇ）、トルエン（４７０Ｌ）およびＴＨＦ（９４Ｌ）の混合物に徐々に加えた。該混合物に、≦１７℃において追加のＴＦＡ（２８２Ｌ）を徐々に添加した。この反応を、１５℃において完了させた。開裂の完了（３時間）はＨＰＬＣによりモニターした。
【０１４１】
反応混合物を、真空中において３５℃未満で蒸発させた。残留するＴＦＡを、トルエン／ＴＨＦの混合物を用いて共沸蒸留し、次いでトルエンを用いて共沸蒸留した。油状残渣にＭＴＢＥ（８２５Ｌ）を加えた。次いで、石油エーテルを添加して懸濁液を得た。冷却した後、固体を濾過し、石油エーテルで数回洗浄した。石油エーテル中に再懸濁させ、濾過した後、固体を石油エーテルで洗浄した。この手順を一度繰り返した。次いで、固体を真空中で乾燥して、９６％の純度（ＨＰＬＣによる）を有する１１４．８６ｋｇ（９６％）のＨ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ・ＴＦＡ（配列番号６）を得た。
【０１４２】
実施例１５：Ｂｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−ＯＨ・ＤＣＨＡ（配列番号７）の調製
Ｂｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−ＯＳｕ（６２ｋｇ、Senn Chemicals, Switzerland）を、Ｈ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−ＯＨ・ＴＦＡ（３６ｋｇ、Bachem AG, Switzerland）のＤＭＦ（４３３Ｌ）中の溶液に徐々に加えた。ｐＨを、０℃においてＤＩＰＥＡを用いて７〜７．５に調節した。反応の完了をＨＰＬＣによりモニターした。
【０１４３】
反応混合物を真空中で蒸発させ、油状残渣を酢酸エチルで希釈した。この混合物をＫＨＳＯ４水溶液および塩水で洗浄した。有機相を真空中で蒸発し、油状残渣をトルエンとの共沸蒸留により乾燥させた。油状残渣をトルエンで希釈し、ｐＨをＤＣＨＡで７〜７．５に調節した。次いで、石油エーテルを該混合物に添加した。こうして得られた固体を濾過し、石油エーテルで洗浄し、真空中で乾燥して、８９％の純度（ＨＰＬＣによる）を有する１０２ｋｇのＢｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−ＯＨ・ＤＣＨＡ（配列番号７）を得た。
【０１４４】
実施例１６：Ｂｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号８）の調製
Ｂｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−ＯＨ・ＤＣＨＡ（配列番号７）（９８．８８ｋｇ、実施例１５参照）およびＨＯＢｔ（１３．８２ｋｇ）を、≦２４℃において、Ｈ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ・ＴＦＡ（配列番号６）（１１０．３９ｋｇ、正味のペプチド重量、実施例１４参照）のＤＭＦ（４５１Ｌ）中溶液に徐々に加えた。該混合物に、ＥＤＣ・ＨＣｌ（２２．９９ｋｇ）を−６℃において小量ずつ加えた。反応混合物のｐＨを、−６℃においてＴＥＡ（１２Ｌ）で６．５〜７に調節した。ＨＰＬＣでモニターしながら、カップリングを１０℃において１６時間で完了させた。
【０１４５】
塩を濾過により除去した。濾液を真空中で蒸発させた。油状残渣（４７０Ｌ）を、ＮａＨＣＯ３溶液中で沈殿させた。固体を濾過し、プロセス水で数回洗浄した。プロセス水中に再懸濁させた後、アセトニトリルを加えた。次いで、該懸濁液を冷却した。固体を濾過し、水で洗浄し、真空中で乾燥して、９０％の純度（ＨＰＬＣによる）を有する１６０．３４ｋｇ（８８％）のＢｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号８）を得た。
【０１４６】
実施例１７：Ｈ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ・ＴＦＡ（配列番号８）の調製
Ｂｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号８）（７２．２４ｋｇ、実施例１６参照）を、≦１５℃において、ＴＦＡ（７２Ｌ）、トルエン（２８９Ｌ）およびＴＨＦ（６Ｌ）の混合物に加えた。該混合物に、≦２２℃において追加のＴＦＡ（１５９Ｌ）を徐々に添加した。２０℃において２．５時間で、この反応を完了させた（ＨＰＬＣによりモニターした）。反応混合物を真空中で蒸発させた。残留ＴＦＡを、トルエンおよびＴＨＦの混合物を用いた数回の共沸蒸留により除去した。油状残渣をトルエンで希釈し、ジイソプロピルエーテルの中に投入した。固体を濾過し、ジイソプロピルエーテルで数回洗浄した。アセトニトリルおよびジイソプロピルエーテルの混合物中に再懸濁させた後、次に固体を濾過し、ジイソプロピルエーテルで数回洗浄し、最後に真空中で乾燥して、８８．９％の純度（ＨＰＬＣによる）を有する６１．７ｋｇ（８７％）のＨ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ・ＴＦＡ（配列番号８）を得た。
【０１４７】
実施例１８：Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号９）の調製
Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ（１０．０３ｋｇ；Senn Chemicals AG, Switzerland）およびＨＯＢｔ（４．９５ｋｇ）を、≦２４℃において、Ｈ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ・ＴＦＡ（配列番号８）（６１．６３ｋｇ、実施例１７参照）のＤＭＦ（２６４Ｌ）中溶液に徐々に加えた。ＥＤＣ・ＨＣｌ（８．５３ｋｇ）を、−５℃において徐々に加えた。反応混合物のｐＨを、−５℃において、ＤＩＰＥＡ（４７．５Ｌ）を用いて徐々に６．５〜７に調節した。カップリングは１０℃において２３時間で完了させた（ＨＰＬＣによりモニターした）。
【０１４８】
反応混合物を真空中で蒸発させた。油状残渣をＮａＨＣＯ３溶液中に懸濁させた。固体を濾過し、プロセス水で数回洗浄し、真空中で乾燥して、８７．９％の純度（ＨＰＬＣによる）を有する６７．６４ｋｇ（９５％）のＢｏｃ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号９）を得た。
【０１４９】
実施例１９：Ｈ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ・ＴＦＡ（配列番号９）の調製
Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号９）（６７．６６ｋｇ、実施例１８参照）を、１５℃において、ＴＦＡ（６８Ｌ）、フェノール（３．３８ｋｇ）、トルエン（２７１Ｌ）およびＴＨＦ（５４Ｌ）の混合物に少しずつ加えた。この混合物に、追加のＴＦＡ（１４９）を１５℃において加えた。開裂の完了（４．３時間）はＨＰＬＣによってモニターした。
【０１５０】
反応混合物を真空中で蒸発させた。残留ＴＦＡを、トルエンおよびＴＨＦの混合物を用いた数回の共沸蒸留により除去した。油状の残渣をトルエンで希釈し、ジイソプロピルエーテルの中に投入した。固体を濾過し、ジイソプロピルエーテルで数回洗浄し、真空中で乾燥して、８６．６％の純度（ＨＰＬＣによる）を有する６７．２５ｋｇ（９９％）のＨ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ・ＴＦＡ（配列番号９）を得た。
【０１５１】
実施例２０：Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号３）の調製
Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）１１−ＯＨ（２０．２２ｋｇ）（Senn Chemicals AG, Switzerland）およびＨＯＢｔ（８．４２ｋｇ）を、≦２０℃において、Ｈ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ・ＴＦＡ（配列番号９）（６０．４６ｋｇ正味ペプチド重量、実施例１９参照）のＤＭＦ（３７０Ｌ）中溶液に小量ずつ加えた。この反応混合物に、−５℃において、ＥＤＣ・ＨＣｌ（１３．３８ｋｇ）を徐々に加えた。得られた混合物のｐＨを、−５℃において、ＤＩＰＥＡ（２７Ｌ）で徐々に６．５〜７に調節した。次いで、１０℃で３５時間、カップリング反応を完了させた（ＨＰＬＣによりモニターした)。
【０１５２】
次いで、反応混合物を真空中で濃縮した。得られた油状残渣を、ＮａＨＣＯ３水溶液に徐々に添加した。得られた懸濁液を濾過し、脱イオン水の中に再懸濁させた。濾過し、脱イオン水で数回およびアセトニトリルと脱イオン水の混合物で１回の洗浄を行った後、得られた固体を真空中で乾燥させて、８１．４％の純度（ＨＰＬＣによる）を有する６４ｋｇ（９６％）のＢｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号３）を得た。
【０１５３】
実施例２１：Ｈ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ・ＴＦＡ（配列番号３）の調製
Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号３）（６４．００ｋｇ、実施例２０参照）を、１５℃未満の温度で小量ずつ、ＴＦＡ（６４Ｌ）、フェノール（３．２ｋｇ）、トルエン（２６５Ｌ）およびＴＨＦ（５１Ｌ）の混合物に加えた。この反応混合物に、≦１５℃において追加のＴＦＡ（１４１Ｌ）を徐々に加えた。開裂は、１５℃において４．８時間で行われた（ＨＰＬＣによりモニターした）。反応混合物を真空中で濃縮した。得られた油状残渣を、２０℃での沈殿のためにジイソプロピルエーテルに加えた。得られた懸濁液を濾過し、ジイソプロピルエーテル中に再懸濁させ、再度濾過した。固体をジイソプロピルエーテルで洗浄し、真空中で乾燥して、７７．６％の純度（ＨＰＬＣによる）を有する６１．４ｋｇ（正味のペプチド重量）（９５％）のＨ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ・ＴＦＡ（配列番号３）を得た。
【０１５４】
実施例２２：Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号１）の調製
Ｈ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ・ＴＦＡ（配列番号３）（１０４．４０ｋｇ、実施例２１参照）およびＨＯＢｔ（８．４２ｋｇ）を、Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＨ（配列番号２）（６５．４７ｋｇ、実施例１０参照）のＤＭＦ（３４５Ｌ）中溶液に、≦２４℃において少しずつ加えた。ＥＤＣ・ＨＣｌ（１２．４６ｋｇ）を−５℃において徐々に加えた。−５℃においてＴＥＡ（１６．５Ｌ）を用い、反応混合物のｐＨを徐々に６．５〜７に調節した。−５℃において２２時間でカップリングを完了させた（ＨＰＬＣによりモニターした）。
【０１５５】
反応混合物を脱イオン水で徐々に希釈した。得られた懸濁液を濾過し、脱イオン水で洗浄し、真空中で乾燥して、８１．４％の純度（ＨＰＬＣによる）を有する７２ｋｇ（５０％）のＢｏｃ−Ｄ−１Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号１）を得た。
【０１５６】
実施例２３：Ｈ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＨ・２ＴＦＡ（ビバリルジン）（配列番号１）の調製
Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号１）（１５．００ｋｇ、実施例２２参照）の酢酸（５３Ｌ）中の懸濁液を、パラジウム／炭素（palladium on charcoal、１．１３ｋｇ）および酢酸（５Ｌ）の混合物に加えた。３バールの水素圧の下に、≦３７℃において水素化を行った（ＨＰＬＣによりモニターした）。
【０１５７】
完了（５時間）した後、反応混合物を冷却し、脱イオン水および酢酸で希釈した。得られた混合物をセルロースカートリッジ上で濾過し、これを酢酸およびプロセス水の混合物で数回溶出させた。濾液を真空中で濃縮した。得られた残渣を、カールフィッシャー滴定により、その水含量について試験した（水含量＜５．０％）。
【０１５８】
次いで、油状残渣にトルエンを加え、続いてＴＦＡを添加した。開裂の完了（１時間後）はＨＰＬＣによりモニターした。
【０１５９】
反応混合物を真空中で濃縮した。得られた油状残渣を、沈殿のためにジイソプロピルエーテルに加えた。得られた懸濁液を濾過して固体を得、これをジイソプロピルエーテルで数回洗浄し、真空中で乾燥して、６５％の粗製ビバリルジンの純度（ＨＰＬＣに夜）を有する８．４１ｋｇ（正味ペプチド重量）（７８％）の粗製Ｈ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−-Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−Ｈ・２ＴＦＡ（ビバリルジン）（配列番号１）を得た。Ｄ−Ｐｈｅ１２−ビバリルジン不純物はＨＰＬＣにより検出されなかった。即ち、１２位におけるラセミ化は起きなかった。
【０１６０】
この粗製ペプチドを、Ｃ１８逆相静止相上での分取ＨＰＬＣによって精製した。第一の工程において、粗製ビバルリジンは、酢酸アンモニウム／水／アセトニトリルを用いた勾配溶出によって精製され、第二の工程では、トリフルオロ酢酸／水／アセトニトリルを用いた勾配溶出によって生成された。純粋な生成物を含有する溶出画分を濃縮し、凍結乾燥して、９９％の純度（ＨＰＬＣによる）を持った白色粉末として、５．８９ｋｇ（７０％粗製ペプチド中のビバリルジン含量に基づく）のＨ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−-Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−Ｈ・２ＴＦＡ（ビバリルジン）（配列番号１）を得、またＤ−Ｔｙｒ１９−ビバリルジンは検出されず、検出された他の不純物の各々は０．２％以下（ＨＰＬＣによる）であった。
【背景技術】
【０００１】
本発明はビバリルジン、即ち、次式の２０量体ペプチドの新規な収束合成に関する：
Ｈ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＨ （Ｉ）
本発明は更に、ビバリルジンの合成における中間体としての、幾つかの保護されたペプチドに関する。
【０００２】
トロンビンによるタンパク質分解プロセッシングは、凝血の制御における中枢をなしている。潜在的な臨床的トロンビンペプチド阻害剤であるヒルジンは、６５のアミノ酸からなっている。しかし、より短いペプチドセグメントもまた、生命を脅かす病状である血栓症の治療に有効であることが示されている。
【０００３】
米国特許第５，１９６，４０４号は、中でも、これらのより短いペプチドの一つ、即ち、強力なトロンビン阻害剤であるビバリルジンを開示している。ビバリルジンはまた、ヒルログ−８、エフルダン、アンジオマックス（登録商標）またはヒルログ（Hirulog；登録商標）としても知られており、式Ｉに与えられたアミノ酸配列を有している。ＷＯ９８／５０５６３は、ビバリルジンを含む種々のペプチドの、組換え技術による調製方法を開示している。この方法は、該ペプチドを融合タンパク質の一部として発現させ、続いてこの融合ペプチドから、アシル受容体により該ペプチドを放出させることを含んでいる。
【０００４】
オカムラ等（Okayama et al. Chem. Pharm. Bull. 1996, 44, 1344-1350）およびスタインメッツァー等（Steinmetzer et al. Eur. J. Biochem. 1999, 265, 598-605）は、種々のヒルログのＷａｎｇ樹脂上での固相合成を案出した。Ｗａｎｇ樹脂は、濃トリフルオロ酢酸を用いる該樹脂からのペプチドの開裂を必要とする。ビバリルジンの調製のための同様の固相合成アプローチにおいて、ＷＯ９１／０２７５０は、単一のＢｏｃ保護されたアミノ酸をＢｏｃ−Ｌ−ロイシン−ｏ−ジビニルベンゼン樹脂に結合させ、続いてＨＦ／ｐ−クレゾール／硫酸エチルメチルを使用して同時脱保護および脱離を行い、その後に凍結乾燥および精製を行う逐次的アプローチを開示している。両者の場合、樹脂からのペプチドの開裂には攻撃的な酸性条件が必要とされ、これは同時に全般的な脱保護を生じさせ、アミノ酸残基との望ましくない副反応を生じて、生成物の純度に悪影響を及ぼし易い。更に、固相合成においては、取込みミス、一つのアミノ酸の二重ヒット、および／またはラセミ化により屡々副反応が生じ、目的のペプチドに非常に類似した構造を有する副生成物が生じる。従って、精製が厄介であり、収率の低下をもたらす。特に、より長いペプチドは、未だ固相支持体に結合している間に不規則なコンホメーションを取る傾向があり、これは成長している鎖に追加のアミノ酸を結合させるのを更に困難にする。従って、この問題はペプチドの長さが長くなるに伴って増大する。
【０００５】
ＷＯ２００７／０３３３８３は、固相合成、または固相合成および溶液合成の組合せ（混合アプローチ）に基づくビバリルジンの製造方法を開示している。一実施形態において、ビバリルジンペプチド配列は、酸に過度に不安定な樹脂上で調製される。もう一つの実施形態において、ビバリルジンは、側鎖保護されたＮ末端ペプチド断片と側鎖保護されたＣ末端ペプチド断片をカップリングさせ、続いて強酸性条件を用いて脱保護することにより調製される。この場合、前記Ｎ末端断片および前記Ｃ末端断片の前駆体（即ち、ペプチド配列マイナスＬｅｕ)は、両者共に固相合成により調製される。この戦略の一つの欠点は、かなりのＤ−Ｔｙｒ１９−ビバリルジンが形成されることである。この不純物は除去するのが難しく、従って、精製された生成物を得るためには余計な努力およびコストを必要とし、また収率が低下する。加えて、ＷＯ２００７／０３３３８３の実施例で得られた精製ピバリルジンの量は数グラムの範囲にしか過ぎず、このアプローチは良好な純度をもったビバリルジンの大規模製造には適さないことを示している。
【発明の概要】
【０００６】
本発明の目的は、線型固相合成の既知の欠点を克服し、工業的規模での製造に適したより効率的なビバリルジンの合成を提供することである。この目的は、請求項１に従う方法、請求項１９のペプチド断片、および請求項２９に従うこれらペプチド断片の使用によって達成された。好ましい実施形態は、従属請求項２〜１８および２０〜２８の主題を構成する。
【０００７】
本発明は、収束的アプローチに従う方法、即ち、個々の断片を別々に合成し、次いで溶液相中でカップリングさせて望ましいペプチドを構築する方法に関する。収束合成の困難な問題は、収束合成の既知の欠点を克服するための、適切な断片およびそれらのカップリング順序を見つけることである。これらの欠点は、カップリングおよび単離の際の溶解度の問題、並びに、固相合成と比較したときの低い反応速度、およびカップリングの際の遙かに高いＣ末端断片のラセミ化のリスクである。ビバリルジンは２０のアミノ酸残基からなっているので、莫大な数の可能な断片およびカップリング順序が存在する。加えて、ビバリルジンは７つのアミノ酸残基、即ち、−Ａｒｇ３−、−Ａｓｎ９−、−Ａｓｐ１１−、−Ｇｌｕ１３−、−Ｇｌｕ１４−、−Ｇｌｕ１７−および−Ｇｌｕ１８−を含んでおり、これらの全てが適切な保護および脱保護を必要とする反応性側鎖を有している。同じことが、一つの断片のＮ末端およびＣ末端の適切な保護および脱保護にも適用され、従って本発明の目的を達成する経路を見出すための困難な問題が増大される。
【０００８】
驚くべきことに、出願人は、以下で定義する［（１＋２）＋（３＋｛４＋５｝）］戦略によって、式Ｉのビバリルジンを有利に構築できることを見出した。数字１，２および５は、式Ｖ，ＶＩおよびＸの三つのペプチド断片を表し、数字３は式ＸＩＩＩのアスパラギン酸誘導体を表し、数字４は式ＸＩのフェニルアラニン誘導体を表している。本発明は、式Ｉのビバリルジンの溶液相での製造方法に関し、該方法は下記の工程を含んでいる：
（ａ）次式の任意に側鎖保護されたペプチドを、
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＯＨ（配列番号４） （Ｖ），
ここでのＰ１は保護基である
次式の任意に側鎖保護されたペプチドと反応させて、
Ｈ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＰ２（配列番号５）（ＶＩ）
ここでのＰ２は保護基である
次式の任意に側鎖保護されたペプチドを製造する工程と、
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＰ２（配列番号２） （ＶＩＩ）
ここでのＰ１およびＰ２は上記で定義した通りである；
（ｂ）工程（ａ）で製造されたペプチドのＰ２を除去して、次式の任意に側鎖保護されたペプチドを製造する工程と、
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＨ（配列番号２） （ＩＩ）
ここでのＰ１は上記で定義した通りである；
（ｃ）次式の側鎖保護されたペプチドを、
Ｈ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号８） （Ｘ），
ここでのＰ３は保護基である；
次式のフェニルアラニンと反応させて、
Ｐ４−Ｐｈｅ１２−ＯＨ （ＸＩ）
ここでのＰ４は保護基である
次式の側鎖保護されたペプチドを製造する工程と、
Ｐ４−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号９） （ＸＩＩ）
ここでのＰ３およびＰ４は上記で定義した通りである；
（ｄ）工程（ｃ）で製造したペプチドのＰ４を除去して、対応するＮ末端が脱保護された式ＸＩＩＩの側鎖保護されたペプチドを製造する工程と；
（ｅ）工程（ｄ）で製造された式ＸＩＩのペプチドを、次式の側鎖保護されたアスパラギン酸と反応させて、
Ｐ５−Ａｓｐ１１−ＯＨ （ＸＩＩＩ）
ここでのＰ５は保護基である
次式の側鎖保護されたペプチドを製造する工程と、
Ｐ５−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号３） （ＸＩＶ）
ここでのＰ３およびＰ５は上記で定義した通りである；
（ｆ）工程（ｅ）で製造されたペプチドのＰ５を除去して、次式の側鎖保護されたペプチドを製造する工程と、
Ｈ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号３） （ＩＩＩ）
ここでのＰ３は上記で定義した通りである；
（ｇ）工程（ｂ）で製造された式ＩＩの任意に側鎖保護されたペプチドを、工程（ｆ）で製造された式ＩＩＩの側鎖保護されたペプチドと反応させて、次式の側鎖保護されたペプチドを製造する工程と、
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号１） （ＩＶ）
ここでのＰ１およびＰ３は上記で定義した通りである；
（ｈ）工程（ｇ）で製造されたペプチドのＰ１，Ｐ３および側鎖保護基を除去して、式Ｉのビバリルジンを製造する工程。
【０００９】
本発明の方法は、収束的断片合成を介したビバリルジンの非常に効率的な合成を可能にし、これは工業的規模での製造に容易に適合させることができる。
【００１０】
Ｃ末端保護基Ｐ２（ペプチドＶＩについて）およびＰ３（ペプチドＸについて）は、他の保護基の直交性に準じた如何なる保護基であってもよい。適切な例は、メチル（Ｍｅ）またはエチル（Ｅｔ）のような鹸化により除去可能なＣ末端保護基、或いは接触水素化により除去可能なＣ末端保護基である。
【００１１】
本発明の方法の一実施形態では、工程（ａ）において、保護基Ｐ１は接触水素化に対して安定な保護基であり、また保護基Ｐ２は接触水素化により除去可能で且つ任意の側鎖保護基に対して直交性の保護基であり；工程（ｃ）において、保護基Ｐ３は接触水素化により除去可能な保護基であり、また保護基Ｐ４は、式Ｘのペプチドの側鎖保護基に対して、およびＰ３に対して直交性の保護基であり；工程（ｅ）において、保護基Ｐ５は式ＸＩＩおよびＸＩＩＩのペプチド／アミノ酸の側鎖保護基に対して、およびＰ３に対して直交性の保護基であり、以下の工程を含んでなる溶液相プロセスを提供する：
（ａ）次式の任意に側鎖保護されたペプチドを、
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＯＨ（配列番号４） （Ｖ）
ここでのＰ１は接触水素化に対して安定な保護基である
次式の任意に側鎖保護されたペプチドと反応させて、
Ｈ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＰ２（配列番号５）（ＶＩ）
ここでのＰ２は接触水素化により除去可能で、勝つ任意の側鎖保護基に対して直交性の保護基である
次式の任意に側鎖保護されたペプチドを製造する工程、
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＰ２（配列番号２） （ＶＩＩ）
ここでのＰ１およびＰ２は上記で定義した通りである：
（ｂ）工程（ａ）で製造されたペプチドのＰ２を除去して、次式の任意に側鎖保護されたペプチドを製造する工程、
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＨ（配列番号２） （ＩＩ）
ここでのＰ１は上記で定義した通りである：
（ｃ）次式の側鎖保護されたペプチドを、
Ｈ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号８） （Ｘ）
ここでのＰ３は接触水素化により除去可能な保護基である
次式のフェニルアラニンと反応させて、
Ｐ４−Ｐｈｅ１２−ＯＨ （ＸＩ）
ここでのＰ４は式Ｘのペプチドの側鎖保護基に対して、およびＰ３に対して直交性の保護基である
次式の側鎖保護されたペプチドを製造する工程、
Ｐ４−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号９） （ＸＩＩ）
ここでのＰ３およびＰ４は上記で定義した通りである；
（ｄ）工程（ｃ）で製造されたペプチドのＰ４を除去して、対応するＮ末端が脱保護された、式ＸＩＩの側鎖保護されたペプチドを製造する工程；
（ｅ）工程（ｄ）で製造された式ＸＩＩのペプチドを、次式の側鎖保護されたアスパラギン酸と反応させて、
Ｐ５−Ａｓｐ１１−ＯＨ （ＸＩＩＩ）
ここでのＰ５は式ＸＩＩおよびＸＩＩＩのペプチド／アミノ酸の側鎖保護基に対して、およびＰ３に対して直交性の保護基である
次式の側鎖保護されたペプチドを製造する工程、
Ｐ５−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号３） （ＸＩＶ）
ここでのＰ３およびＰ５は上記で定義した通りである；
（ｆ）工程（ｅ）で製造されたペプチドのＰ５を除去して、次式の側鎖保護されたペプチドを製造する工程、
Ｈ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号３） （ＩＩＩ）
ここでのＰ３は上記で定義した通りである；
（ｇ）工程（ｂ）で製造された式ＩＩの任意に側鎖保護されたペプチドを、工程（ｆ）で製造された式ＩＩＩの側鎖保護されたペプチドと反応させて、次式の側鎖保護されたペプチドを製造する工程、
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号１） （ＩＶ），
ここでのＰ１およびＰ３は上記で定義した通りである；
（ｈ）工程（ｇ）で製造されたペプチドのＰ１，Ｐ３および側鎖保護基を除去して、次式のビバリルジンを製造する工程、
Ｈ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＨ（配列番号１） （Ｉ）。
【００１２】
ここにおいて、および以下において、二つの異なる保護基の挙動を特徴づける属性としての「直交性」の用語は、一つの保護基が、他の保護基には影響しない一定の方法により開裂可能であることを意味すると理解されるべきものである。例えば、「側鎖保護基に対して直交性である保護基」とは、側鎖保護基に影響しない一定の方法により開裂可能である保護基を意味する。
【００１３】
この戦略の利点は、それが商業的規模で適用でき、従って、Ｄ−Ｐｈｅ１２−ビバリルジン、Ｄ−Ｔｙｒ１９−ビバリルジン、またはＡｓｐ９−ビバリルジンのような厄介な不純物の形成を伴うことなく、バッチ当たりキログラム単位の量で、優れた純度を備えたビバリルジンの製造を可能にする。例えば、保護された断片Ａｓｐ−Ｐｈｅ１２を式Ｘの保護されたペプチド断片にカップリングさせるとき、５％のＤ−Ｐｈｅ１２−ビバリルジンが形成されるが、その形成は本発明に従う方法によって予想外に抑制することができる。本発明による方法において適用される接触水素化は、他の脱保護方法とは異なり、非常にクリーンな反応であるという利点を有しており、カルボカチオンの形成を含まないので、カルボカチオンと目的ペプチドとの間の反応から生じるような望ましくない副生成物は形成されない。比較のために言えば、ＷＯ２００７／０３３３８３に開示された経路では、保護はｔｅｒｔ−ブチル（ｔＢｕ；ｔｅｒｔ−ブチルエーテルとして、またはｔｅｒｔ−ブチルエステルとして）を用いて達成されるが、これは加酸分解（例えば塩酸またはトリフルオロ酢酸を用いて）によってのみ開裂可能な保護基である。この加酸分解はｔｅｒｔ−ブチル化チロシンのような副生成物の形成を含んでおり、該副生成物は、その物理化学的性質が最終生成物と類似しているため、最終生成物において除去するのが困難である。加酸分解のもう一つの欠点は、トリフルオロ酢酸のような大量の強酸を取り扱うことが、特に商業的規模においては、製造および環境の両方に関して安全性の問題を生じることである。更なる比較のために言えば、鹸化により除去可能なＣ末端保護基、例えばＥｔは、式ＶＩおよび式ＶＩＩのペプチドのためのＰ２として使用され、その塩基性条件下での除去はアスパラギン酸残基（−Ａｓｎ９−）およびアルギニン残基（−Ａｒｇ３−）の実質的な分解を誘起する。たとえ、鹸化が酸でも塩基でもなく、サブチリシン酵素を用いた鹸化のように、酵素反応の更に温和なアプローチで達成されるとしても、アスパラギン残基の分解により生じるＡｓｐ９−ビバリルジンの実質的な形成が観察される。
【００１４】
本発明の一つの反応工程の前、最中および後に、全てのペプチド断片、並びに全てのカップリング生成物は、該分子の物理化学的性質および／または反応条件に応じて、そのままの状態で、または適切な塩の形態で存在してよい。適切な塩は、例えばトリエチルアミン（ＴＥＡ）、ジシクロヘキシルアミン（ＤＣＨＡ）、塩酸（ＨＣｌ）およびトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を用いて形成された塩である。
【００１５】
工程（ｈ）において、Ｐ１、Ｐ３および側鎖保護基は、爾後にまたは同時に除去されてよい。
【００１６】
好ましくは、工程（ｈ）においては、最初にＰ３および側鎖保護基が同時に除去され、その後にＰ１が除去される。典型的には、工程（ａ）〜（ｇ）の各工程の後に得られるペプチド断片は、次の工程を受ける前に単離される。出願人は驚くべきことに、工程（ｈ）では、Ｐ３および側鎖保護基を同時に除去した後に得られたペプチドの単離は、同様の収量を得ながら且つ純度に対して負の影響を伴わずに、Ｐ１を除去する前には省略できることを見出した。通常は、その後の脱保護工程においても反応して目的のペプチドの純度を低下させる副生成物を除去するために単離工程が必須とされるので、これは驚くべきことである。通常、単離は生成物のロスを伴うので、この発見は全体のプロセスのためのコストおよび時間に対して積極的な影響を有し、典型的には、Ｐ１を脱保護されたペプチドのより高い収量をもたらす。従って、本発明による方法のより好ましい実施形態においては、工程（ｈ）において、Ｐ３および側鎖保護基を同時に除去した後に得られるペプチドは、Ｐ１を除去する前には単離されない。
【００１７】
接触水素化に対して安定である普通に知られた如何なる保護基も、Ｐ１として使用されてよい。適切な例は、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、２−（ビフェニル−４−イル）プロパ−２−イルオキシカルボニル（Ｂｐｏｃ）、２−（３，５−ジメトキシフェニル）プロパ−２−イルオキシカルボニル（Ｄｄｚ）、フルオレン−９−イルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、アダマンチル−１−オキシカルボニル（Ａｄｃ）、ｔｅｒｔ−アミルオキシカルボニル（Ａｏｃ）、ジフェニルホスフィニル（Ｄｐｐ）、２−（メチルスルホニル）エトキシカルボニル（Ｍｓｃ）およびフタロイル（Ｐｈｔ）である。好ましくは、Ｐ１はＢｏｃ、Ｂｐｏｃ、Ｄｄｚ、ＦｍｏｃまたはＭｓｃであり、より好ましくは、Ｐ１はＢｏｃである。保護基Ｐ４およびＰ５としては、それぞれ、式ＩＩの断片の側鎖保護基およびＰ３に対して直交性であり（Ｐ４について）、式ＸＩＩＩのアミノ酸および式ＸＩＶの断片の側鎖保護基およびＰ３に対し直交性の（Ｐ５について）、普通に知られた適切な如何なる保護基も使用されてよい。好ましくは、Ｐ４およびＰ５は接触水素化に対して安定であり、且つ側鎖保護基に対して、およびＰ３に対して直交性である。例えば、適切な保護基はＢｏｃ、Ｂｐｏｃ、Ｄｄｚ、Ｆｍｏｃ、Ａｄｃ、Ａｏｃ、Ｄｐｐ、ＭｓｃおよびＰｈｔである。好ましくは、Ｐ４および／またはＰ５は、Ｂｏｃ、Ｂｐｏｃ、Ｄｄｚ、ＦｍｏｃまたはＭｓｃであり、より好ましくは、Ｐ４および／またはＰ５はＢｏｃである。本発明の方法の好ましい実施形態において、Ｐ１、Ｐ４およびＰ５の少なくとも一つはＢｏｃ、Ｂｐｏｃ、Ｄｄｚ、ＦｍｏｃまたはＭｓｃであり；好ましくは、Ｐ１、Ｐ４およびＰ５の少なくとも一つはＢｏｃである。
【００１８】
保護基Ｐ３としては、接触水素化により除去可能な普通に知られた如何なる保護基が使用されてもよい。適切な例は、ベンジル（Ｂｚｌ）、ベンジルオキシメチル（Ｂｏｍ）、フェナシル（Ｐａｃ）、４−ニトロベンジル（ＯＮｂｚ）、４−ピリジルメチル（Ｐｉｃ）、および４−スルホベンジルである。好ましくは、Ｐ３はＢｚｌ、Ｂｏｍ、Ｐａｃ、ＯＮｂｚ、Ｐｉｃまたは４−スルホベンジルであり、但し、Ｐ４またはＰ５がＢｏｃ、ＢｐｏｃまたはＤｄｚであれば、Ｐ３はＢｏｍではない。より好ましくは、Ｐ３はＢｚｌである。保護基Ｂｏｍは酸感受性であり、また保護基Ｂｏｃ、ＢｐｏｃおよびＤｄｚは酸によって開裂可能である。即ち、Ｂｏｍは、Ｂｏｃ、ＢｐｏｃまたはＤｄｚに対して直交性ではない。ここにおいておよび以下において、この属性は、Ｂｏｍと保護基Ｂｏｃ、ＢｐｏｃおよびＤｄｚの一つとの同時使用を排除する。
【００１９】
保護基Ｐ２としては、接触水素化により除去可能で、且つ側鎖保護の場合には、同時に該側鎖保護基に対して直交性であるような、普通の如何なる既知の保護基を使用してもよい。適切な例は、Ｂｏｍ、Ｐａｃ、ＯＮｂｚ、Ｐｉｃおよび４−スルホベンジルである。好ましくは、Ｐ２はＢｚｌ、Ｂｏｍ、Ｐａｃ、ＯＮｂｚ、Ｐｉｃまたは４−スルホベンジルであり；より好ましくは、Ｐ２はＢｚｌである。
【００２０】
好ましい実施形態において、Ｐ２およびＰ３の少なくとも一方は、Ｂｚｌ、Ｂｏｍ、Ｐａｃ、ＯＮｂｚ、Ｐｉｃまたは４−スルホベンジルである。但し、Ｐ４またはＰ５がＢｏｃ、ＢｐｏｃまたはＤｄｚであれば、Ｐ３はＢｏｍではない。好ましくは、Ｐ２およびＰ３の少なくとも一方はＢｚｌである。
【００２１】
好ましい実施形態において、Ｐ１、Ｐ４およびＰ５の少なくとも一つはＢｏｃ、Ｂｐｏｃ、Ｄｄｚ、ＦｍｏｃまたはＭｓｃであり；またＰ２およびＰ３の少なくとも一方はＢｚｌ、Ｂｏｍ、Ｐａｃ、ＯＮｂｚ、Ｐｉｃ、または４−スルホベンジルである。但し、Ｐ４またはＰ５がＢｏｃ、ＢｐｏｃまたはＤｄｚであれば、Ｐ３はＢｏｍではない。好ましくは、Ｐ１、Ｐ４およびＰ５の少なくとも一つはＢｏｃであり、Ｐ２およびＰ３の少なくとも一方はＢｚｌである。
【００２２】
好ましくは、本発明による方法において、式ＩＩＩ、ＩＶ、ＸおよびＸＩＩ〜ＸＩＶの側鎖保護されたペプチド／アミノ酸は、Ｂｚｌ、Ｂｏｍ、Ｐａｃ、ＯＮｂｚ、Ｐｉｃおよび４−スルホベンジルからなる群から選択される少なくとも一つの側鎖保護基を用いて保護される。但し、Ｐ４またはＰ５がＢｏｃ、ＢｐｏｃまたはＤｄｚであれば、側鎖保護基は何れもＢｏｍではない。
【００２３】
特に、本発明による方法において、式ＩＩＩ、ＩＶ、Ｘ、およびＸＩＩ〜ＸＩＶの側鎖保護されたペプチド／アミノ酸は、側鎖保護基としての少なくとも一つのＢｚｌで保護される。
【００２４】
典型的には、式Ｖのペプチドは、望ましくない副反応を回避するために、ニトロのような適切な側鎖保護基を用いて、アルギニン残基において側鎖保護される。典型的には、式ＶＩのペプチドは、望ましくない副反応を回避するために、特にＦｍｏｃでのＮ末端保護については、アスパラギン残基において適切な側鎖保護基で側鎖保護される。特に、ＦｍｏｃでのＮ末端保護の場合において、適切な例はトリチル（Ｔｒｔ）である。
【００２５】
驚くべきことに、出願人は、式ＶおよびＶＩのペプチドについては側鎖保護を省略でき、これにより、それらのアセンブリー、並びにそれらのカップリング生成物（即ち、式ＶＩＩのペプチド）におけるＣ末端脱保護の両方が容易になることを見出した。この発見は、Ｃ末端保護および側鎖保護の間の直交性を無視して、経路をより単純にすることを可能にする。もう一つの利点は、対応する未保護の出発物質が保護されたものよりも購入が安価なことであり、これは大規模製造のために特に重要である。好ましくは、本発明による方法において、工程（ａ）では、式ＶおよびＶＩの任意に側鎖保護されたペプチドの少なくとも一方は側鎖が未保護である。両方のペプチドが側鎖未保護の場合、工程（ａ）および（ｂ）における式ＶＩＩおよびＩＩの得られるペプチドもまた、同様に側鎖が未保護である。
【００２６】
より好ましくは、本発明による方法では、
工程（ａ）において、式ＶおよびＶＩの両方のペプチドが側鎖未保護である；
工程（ｃ）において、式Ｘのペプチドは、Ｂｚｌ、Ｂｏｍ、Ｐａｃ、ＯＮｂｚ、Ｐｉｃおよび４−スルホベンジルからなる群から選択される少なくとも一つの側鎖保護基、好ましくはＢｚｌで保護される。但し、Ｐ４またはＰ５がＢｏｃ、ＢｐｏｃまたはＤｄｚであれば、側鎖保護基は何れもＢｏｍではない；
工程（ｅ）において、式ＸＩＩＩのアスパラギン酸誘導体は、Ｂｚｌ、Ｂｏｍ、Ｐａｃ、ＯＮｂｚ、Ｐｉｃおよび４−スルホベンジルからなる群から選択される側鎖保護基、好ましくはＢｚｌで保護される。但し、Ｐ４またはＰ５がＢｏｃ、Ｂｐｏｃ、またはＤｄｚであれば、側鎖保護基は何れもＢｏｍではない。
【００２７】
更に好ましくは、本発明による方法では、工程（ａ）において、式ＶおよびＶＩの両方のペプチドが側鎖保護され、また工程（ｃ）および（ｅ）の両方において、少なくとも一つの側鎖保護基がＢｚｌである。
【００２８】
本発明による方法の最も好ましい実施形態では、工程（ｃ）において、式Ｘのペプチドは、四つのグルタミン酸およびチロシンの側鎖を保護する五つの側鎖保護基で側鎖保護されて、次式のペプチドを与える：
Ｈ−Ｇｌｕ（ＯＰ６）−Ｇｌｕ（ＯＰ７）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＰ８）−Ｇｌｕ（ＯＰ９）−Ｔｙｒ（Ｐ１０）−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号８） （Ｘｂ）
ここで、Ｐ３は接触水素化により除去可能な保護基であり、好ましくは、Ｐ３はＢｚｌ、Ｂｏｍ、Ｐａｃ、ＯＮｂｚ、Ｐｉｃまたは４−スルホベンジルであり、より好ましくは、Ｐ３はＢｚｌであり；
またＰ６〜Ｐ１０の各々は、Ｂｚｌ、Ｂｏｍ、Ｐａｃ、ＯＮｂｚ、Ｐｉｃおよび４−スルホベンジルからなる群から独立に選択され、好ましくは、Ｐ６〜Ｐ１０の各々はＢｚｌである；また、工程（ｅ）において、側鎖保護された式ＸＩＩＩのアスパラギン酸は
Ｐ５−Ａｓｐ（ＯＰ１１）１１−ＯＨ，
である：
ここで、Ｐ５は式ＸＩＩおよびＸＩＩＩのペプチド／アミノ酸の側鎖保護基に対して直交性の保護基であり、好ましくは、Ｐ５は接触水素化に対して安定で、側鎖保護基に対しておよびＰ３に対して直交性である；より好ましくは、Ｐ５はＢｏｃ、Ｂｐｏｃ、Ｄｄｚ、ＦｍｏｃまたはＭｓｃであり、最も好ましくは、Ｐ５はＢｏｃである；また、Ｐ１１はＢｚｌ、Ｂｏｍ、Ｐａｃ、ＯＮｂｚ、Ｐｉｃおよび４-スルホベンジルからなる群から選択され、好ましくは、Ｐ１１はＢｚｌである。
【００２９】
ここにおいて、および以下において、Ｃ末端および側鎖の両方について、略語「ＯＰ（数字）」はエステル（側鎖およびＣ末端の両方のカルボン酸との反応の後）を示すのに対して、略語「Ｐ（数字）」はエーテルを示す。例えば、「ＯＢｚｌ」はベンジルエステル（側鎖またはＣ末端のカルボキシ基との反応の後）を示すのに対して、略語「Ｂｚｌ」はベンジルエーテル（例えばチロシンのフェノール性水酸基との反応の後）を示す。
【００３０】
好ましくは、本発明による方法において、Ｐ１、Ｐ４およびＰ５はＢｏｃであり；Ｐ２、Ｐ３、Ｐ６、Ｐ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１０およびＰ１１はＢｚｌである。
【００３１】
より好ましくは、Ｐ１、Ｐ４およびＰ５はＢｏｃであり、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ６、Ｐ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１０およびＰ１１はＢｚｌであり、また式ＶおよびＶＩのペプチドは側鎖未保護であり、以下の工程を含んでなる溶液相での方法を与える：
（ａ）Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＯＨ（配列番号４）を、
Ｈ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＢｚｌ（配列番号５）
と反応させて、
Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＢｚｌ（配列番号２）
を製造する工程；
（ｂ）工程（ａ）で製造されたペプチドのＢｚｌを除去して、
Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＨ（配列番号２）
を製造する工程；
（ｃ）Ｈ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号８）
を、
Ｂｏｃ−Ｐｈｅ１２−ＯＨ
と反応させて、
Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号９）
を製造する工程
（ｄ）工程（ｃ）で製造されたペプチドのＢｏｃを除去して、Ｎ末端が脱保護された対応するペプチドを製造する工程；
（ｅ）工程（ｄ）で製造されたペプチドを、
Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）１１−ＯＨ
と反応させて、
Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）１１−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号３）
を製造する工程；
（ｆ）工程（ｅ）で製造されたペプチドのＢｏｃを除去して、
Ｈ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）１１−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号３）
を製造する工程；
（ｇ）工程（ｂ）で製造されたペプチドを、工程（ｆ）で製造されたペプチドと反応させて、
Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号１）
を製造する工程；
（ｈ）工程（ｇ）で製造されたペプチドのＢｏｃ、Ｃ末端を保護するＢｚｌ、および側鎖を保護する全てのＢｚｌを除去して、式Ｉのビバリルジンを製造する工程。
【００３２】
この好ましい実施形態は非常に単純であり、複雑な保護基戦略を必要としない。
【００３３】
好ましくは、工程（ｈ）においては、最初にＣ末端を保護するＢｚｌおよび全ての側鎖を保護するＢｚｌを同時に除去して、次式のＮ末端がＢｏｃで保護されたビバリルジンを得、
Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＨ（配列番号１）、
その後にＢｏｃが除去される。
【００３４】
好ましくは、Ｃ末端を保護するＢｚｌおよび側鎖を保護する全てのＢｚｌを同時に除去した後に得られるＮ末端がＢｏｃで保護されたビバルリジンは、Ｂｏｃを除去する前に単離されない。
【００３５】
Ｃ末端保護基Ｐ２、Ｐ３、並びに側鎖保護基Ｐ６〜Ｐ１１は、それらが接触水素化によって除去可能な場合、当業者に知られた何れかの接触水素化方法によって除去することができる。水素化は、元素状水素によって、或いは蟻酸、蟻酸アンモニウム、１，３−シクロヘキサジエン、１，４−シクロヘキサジエン、またはｔｅｒｔ−ＢｕＮＨ２・ＢＨ３等のボラン付加物のような適切な水素供与体の使用によって達成されてよい。適切な水素化触媒は、例えば貴金属をベースにする水素化触媒、特に、白金族金属として知られる金属、即ち、ロジウム、ルテニウム、パラジウム、オスミウム、イリジウム、およびプラチナである。水素化触媒は、木炭のような支持体上にあるのが好都合である。必要な活性に応じて、水素化触媒はその活性を低下させるように「触媒毒入り」、特に硫化されてよい。必要に応じて、水素化をサポートするために適切な助触媒を添加してよい。このような助触媒は、酸化バナジウム（Ｖ２Ｏ５）、メタバナジン酸アンモニウム（ＮＨ４ＶＯ３）、またはモリブデン酸ナトリウム（Ｎａ２ＭｏＯ４）のような、バナジウム化合物またはモリブデン化合物であってよい。
【００３６】
特に好ましい実施形態において、触媒は、製造コストおよび環境の両方に対して積極的な効果を有するようにリサイクルされる。触媒のリサイクルのために、触媒をリサイクルさせるのに適した何等かの処理が適用されてよい。
【００３７】
好ましくは、除去工程（ｂ）および（ｈ）の少なくとも一方は、水素ガスおよびパラジウム／炭素（palladium on charcoal）を用いて溶媒中で行われる。溶媒としては、反応物質を溶解できる何れかの不活性な液体溶媒が使用されてよい。適用可能な溶媒には、クロロベンゼンおよびトリフルオロトルエンのようなハロゲン化芳香族炭化水素；ジクロロメタンおよびジクロロエタンのような水素化炭化水素；メタノール、エタノール、２−プロパノール、ブタノールおよびベンジルアルコールのようなアルコール；２，２，２−トリフルオロエタノールのようなハロゲン化アルコール；酢酸のようなカルボン酸；酢酸エチル、酢酸メチルおよびバレロラクトンのようなカルボン酸のエステルおよびラクトン；Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）またはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）のようなヘテロ原子を含有する有機溶媒が含まれる。これら溶媒は単独で、溶媒混合物として、または水との混合物として使用することができる。ペプチド断片の溶解度によっては、ニートの水を使用してもよい。従って、工程（ｂ）において、除去は溶媒としてのニートの水の中で達成されてよい。好ましい溶媒は、ＤＭＦ、アセトン、酢酸、アセトンと水の混合物、および酢酸と水の混合物からなる群から選択される。
【００３８】
好ましい実施形態において、除去工程（ｂ）は、ＤＭＦ、アセトン、水、および、アセトンと水の混合物からなる群から選択される溶媒、特にＤＭＦ中で行われる。より好ましくは、除去工程はＤＭＦ中で行われる。驚くべきことに、除去工程（ｂ）で使用される溶媒は、最終ビバリルジンの不純物プロファイルに対して影響を有することが分かった。ＤＭＦは、例えばアセトンと水の混合物に比較して有利であり、−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−（配列番号２）の二重組込みの後に形成される不純物を抑制できることが観察された。
【００３９】
もう一つの好ましい実施形態において、除去工程（ｈ）は、酢酸または酢酸と水の混合物、特に酢酸と水の混合物中で実施される。
【００４０】
除去工程（ｂ）および（ｈ）の水素化プロセスは、大気圧または超大気圧において行われてよい。典型的な圧力は、１〜１００バールである。有利には、１〜７０バール、特に２〜１０バールが用いられる。
【００４１】
除去工程（ｂ）および（ｈ）の水素化反応は、低音または高温で行ってよい。例示的な温度範囲は−２０℃〜７０℃である。好ましい温度は０℃〜６０℃であり、最も好ましいのは１０℃〜４０℃の範囲である。
【００４２】
本発明の方法のカップリング工程（ａ）、（ｃ）、（ｅ）および（ｇ）は溶液相で行われ、またペプチド合成技術で既知の反応条件を用いて行うことができる。それぞれの側鎖が脱保護され、または側鎖が保護されたペプチド断片／アミノ酸誘導体のカップリングは、インサイチューのカップリング試薬、例えば、ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ−トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウム・ヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ）、ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ−トリス（ピロリジノ）ホスホニウム・ヘキサフルオロホスフェート（ＰｙＢＯＰ）、Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム・ヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）、Ｏ−（６-クロロベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム・ヘキサフルオロホスフェート（ＨＣＴＵ）、Ｏ−（６−クロロベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム・テトラフルオロボレート（ＴＣＴＵ）、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム・ヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム・テトラフルオロボレート（ＴＡＴＵ）、Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム・テトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ）、およびＯ−［シアノ（エトキシカルボニル）メチレンアミノ］−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム・テトラフルオロボレート（ＴＯＴＵ）のようなホスホニウムカップリング試薬もしくはウロニウムカップリング試薬、またはジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、および水溶性カルボジイミド（ＷＳＣＤＩ）、例えば１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）のようなカルボジイミドカップリング試薬を、任意に塩酸塩のような塩として使用して達成することができる。他のカップリング技術は、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＨＯＳｕ）およびｐ−ニトロフェノール（ＨＯＮｐ）エステルのような、予め形成された活性エステル；Ｎ−カルボキシ酸無水物（ＮＣＡｓ）のような予め形成された対称性酸無水物および非対称性酸無水物、並びにフッ化アシルまたは塩化アシルのような酸ハロゲン化物を使用する。好ましいカップリング試薬はカルボジイミドカップリング試薬であり、最も好ましいのはＤＩＣまたはＥＤＣ、適切にはＥＤＣ・ＨＣｌのようなＥＤＣである。
【００４３】
カップリング工程（ａ）（ｃ）（ｅ）および（ｇ）の反応混合物は、有利には塩基、好ましくは三級アミン塩基を含んでよく、これらはカルボキシ成分を脱プロトン化し、アミン成分の対イオンを中和し、従ってインサイチューの反応を容易にする。適切な塩基は、例えば、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）またはトリエチルアミン（ＴＥＡ）のようなトリアルキルアミン；Ｎ，Ｎ−ジエチルアニリンのようなＮ，Ｎ−ジアルキルアニリン；２，４，６−トリメチルピリジンのような２，４，６−トリアルキルピリジン；Ｎ−メチルモルホリンのようなＮ−アルキルモルホリンである。特に、該反応混合物は、有利には塩基としてＴＥＡ又はＤＩＰＥＡを含んでいる。
【００４４】
カップリング工程（ａ）（ｃ）（ｅ）および（ｇ）の反応混合物は、望ましくない副反応の抑制における積極的効果の故に、添加物として補助的な求核試薬を更に含有することができる。如何なる既知の補助的求核試薬を使用してもよい。適切な補助的求核試薬の例は、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＨＯＳｕ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＨＯＳｕ）、Ｎ−ヒドロキシ−３，４−ジヒドロ−４−オキソ−１，２，３−ベンゾトリアジン（ＨＯＯＢｔ）、および１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール（ＨＯＡｔ）である。好ましくは、該カップリング工程の反応混合物は、追加的にＨＯＢｔを含有する。
【００４５】
好ましい実施形態において、カップリング工程（ａ）（ｃ）（ｅ）および（ｇ）の反応混合物は、ＤＩＣ／ＨＯＢｔ／ＴＥＡ、ＥＤＣ／ＨＯＢｔ／ＤＩＰＥＡ、およびＥＤＣ／ＨＯＢｔ／ＴＥＡからなる群から選択される。
【００４６】
カップリング工程（ａ）（ｃ）（ｅ）および（ｇ）の溶媒としては、反応物を溶解できる如何なる不活性液体溶媒を使用してもよい。適用可能なカップリング溶媒は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジオキサン、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、１−メチル−２−ピロリドン（ＮＭＰ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセタミド（ＤＭＡ）、またはそれらの混合物のような水混和性溶媒；又はジクロロメタン（ＤＣＭ）、酢酸エチル、またはそれらの混合物；および水混和性溶媒および水非混和性溶媒の何れか適切な混合物（水との混合物を含む）である。
【００４７】
工程（ｄ）、（ｆ）および（ｈ）のＮ末端の脱保護は、ペプチド合成の技術において既知の反応条件を使用して実施することができ、保護基Ｐ１、Ｐ４およびＰ５の性質に依存する。保護基がＢｏｃである場合に、脱保護は、適切には酸、好ましくはトリフルオロ酢酸によって達成され、これらは無溶媒で、或いはトルエン、ＴＨＦまたはトルエンとＴＨＦの混合物のような不活性溶媒との混合物として適用されてよい。保護基がＦｍｏｃである場合、Ｎ末端の脱保護は、塩基、好ましくはピペリジンまたはジエチルアミンのような二級アミンとの反応によって達成することができる。典型的には、Ｎ末端の脱保護は溶媒中で行われ、該溶媒は、ジクロロメタンのような塩素化炭化水素；ジメチルホルムアミドまたは１−メチル−２−ピロリドンのようなアルキル化アミンおよびラクタム；トルエンのような芳香族炭化水素；ＴＨＦのようなエーテル、またはそれらの何れかの混合物のような、反応物を妨害しない何れかの溶媒であることができる。好ましくは、Ｎ末端のＢｏｃ基の脱保護はトルエン中において、或いは、フェノール、トルエンおよびＴＨＦの混合物中において行われる。
【００４８】
工程（ｈ）の後に得られる粗製ビバリルジンは、分取ＨＰＬＣまたは向流分配法のような従来の方法によって精製してよい。精製工程は反復されてよい。工程（ａ）〜（ｇ）ののちに得られるペプチド断片についても同じことが言える。
【００４９】
式Ｉの最終的なビバリルジンは、沈殿、またはリョフィリゼーションとしても知られる凍結乾燥のような、ペプチド化学で既知の単離方法に従って単離することができる。
【００５０】
式ＶおよびＶＩの任意に側鎖保護されたペプチド、および式Ｘの側鎖保護されたペプチドは、従来のペプチド合成方法、例えば溶液相合成（同義語：均一相ペプチド合成、ＨＰＰＳと略称される）、固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）、または混合合成（同義語：混合相ペプチド合成、ＭＰＰＳと略称される）と呼ばれるＳＰＰＳおよびＨＰＰＳの組合せを使用して調製することができる。
【００５１】
本発明による方法の一実施形態において、式Ｖの任意に側鎖保護されたペプチド、式ＶＩの任意に側鎖保護されたペプチド、および式Ｘの側鎖保護されたペプチドからなる群から選択される少なくとも一つのペプチドは、先行プロセスにおいて溶液相合成により調製される。好ましくは、これらのペプチドは対応するジペプチド、即ち、配列パターン−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−、−Ａｒｇ３−Ｐｒｏ−、−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−、−Ｇｌｙ７−Ｇｌｙ−、−Ａｓｎ９−Ｇｌｙ−、−Ｇｌｕ１３−Ｇｌｕ−、−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−、−Ｇｌｕ１７−Ｇｌｕ−、または−Ｔｙｒ１９−Ｌｅｕ−で出発して組み立てられる。Ｎ末端、Ｃ末端および側鎖の保護基、並びに反応条件は当業者に既知のものの何れであってもよく、好ましくは上記で述べたのと同一または類似のものである。
【００５２】
特に、次式の任意に側鎖保護されたペプチドＶ、好ましくは側鎖未保護のペプチドＶａの溶液相における製造方法は、以下の工程（ａ）〜（ｃ）を含んでなるものである：
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＯＨ（配列番号４） （Ｖ），
ここで、Ｐ１は保護基であり、好ましくは、Ｐ１は接触水素化に対して安定な保護基であり、より好ましくは、Ｐ１はＢｏｃ、Ｂｐｏｃ、Ｄｄｚ、ＦｍｏｃまたはＭｓｃであり、最も好ましくは、Ｐ１はＢｏｃである；
（ａ）任意に側鎖保護された次式のジペプチド、好ましくは側鎖未保護のジペプチドＸＶＩａのＰ１２を除去する工程、
Ｐ１２−Ａｒｇ−Ｐｒｏ４−ＯＰ１３ （ＸＶＩ），
ここで、Ｐ１２は保護基であり、好ましくは、Ｐ１２は側鎖保護基およびＰ１３に対して直交性の保護基であり、より好ましくは、Ｐ１２は接触水素化に対して安定で且つ側鎖保護基およびＰ１３に対して直交性の保護基であり、更に好ましくは、Ｐ１２はＢｏｃ、Ｂｐｏｃ、Ｄｄｚ、Ｆｍｏｃ、またはＭｓｃであり、最も好ましくは、Ｐ１２はＢｏｃであり；また
Ｐ１３は、Ｂｚｌ、メチル（Ｍｅ）またはエチル（Ｅｔ）のような保護基であり、好ましくは、Ｐ１３は接触水素化により除去可能で且つ側鎖保護基に対して直交性の保護基であり、より好ましくは、Ｐ１３はＢｚｌ、Ｂｏｍ、Ｐａｃ、ＯＮｂｚ、Ｐｉｃまたは４−スルホベンジルであり、最も好ましくはＰ１３はＢｚｌである；但し、Ｐ１２がＢｏｃ、ＢｐｏｃまたはＤｄｚであれば、Ｐ１３はＢｏｍではない：
（ｂ）Ｎ末端を脱保護され任意に側鎖保護されたジペプチド、好ましくは工程（ａ）で製造された側鎖未保護のジペプチドを、次式の任意に側鎖保護されたジペプチド、好ましくは側鎖未保護のジペプチドＸＶＩＩａと反応させて、
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−ＯＷ （ＸＶＩＩ）
ここで、Ｐ１は上記で定義した通りであり、Ｗは水素または五フッ化フェニル（Ｐｆｐ）である
次式の任意に側鎖保護されたペプチドＸＶ、好ましくは側鎖未保護のペプチドＸＶａを製造する工程、
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＯＰ１３（配列番号４） （ＸＶ），
ここで、Ｐ１およびＰ１３は上記で定義した通りである；
（ｃ）工程（ｂ）で製造された任意に側鎖保護されたペプチド、好ましくは側鎖未保護のペプチドＸＶａのＰ１３を除去して、式Ｖの任意に側鎖保護されたペプチド、好ましくは側鎖未保護のペプチドＶａを製造する工程。
【００５３】
また特に、次式の任意に側鎖保護されたペプチドＶＩ、好ましくは側鎖未保護のペプチドＶＩａの溶液相における製造方法は、以下の工程（ａ）〜（ｃ）を含んでなるものである：
Ｈ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＰ２（配列番号５）
（ＶＩ），
ここで、Ｐ２は保護基であり、好ましくは、Ｐ２は接触水素化により除去可能で且つ任意の側鎖保護基に対して直交性の保護基であり、より好ましくは、Ｐ２はＢｚｌ、Ｂｏｍ、Ｐａｃ、ＯＮｂｚ、Ｐｉｃ、または４−スルホベンジルであり、最も好ましくは、Ｐ２はＢｚｌである；
（ａ）次式の任意に側鎖保護されたジペプチドＸＶＩＩＩ、好ましくは側鎖未保護のジペプチドＸＶＩＩＩａのＰ１４を除去する工程、
Ｐ１４−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＰ２ （ＸＶＩＩＩ），
ここで、Ｐ１４は保護基であり、好ましくは、Ｐ１４は側鎖保護基およびＰ２に対して直交性の保護基であり、より好ましくは、Ｐ１４は接触水素化に対して安定で且つ側鎖保護基およびＰ２に対して直交性の保護基であり、更に好ましくは、Ｐ１４はＢｏｃ、Ｂｐｏｃ、Ｄｄｚ、ＦｍｏｃまたはＭｓｃであり、最も好ましくは、Ｐ１４はＢｏｃである；
但し、Ｐ１４がＢｏｃ、ＢｐｏｃまたはＤｄｚであれば、Ｐ２はＢｏｍではない；
（ｂ）工程（ａ）で製造された、Ｎ末端を脱保護され且つ任意に側鎖保護されたジペプチド、好ましくは側鎖未保護のジペプチドを、次式のテトラグリシンＩＸＸと反応させて、
Ｐ１５−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−ＯＨ（配列番号１０） （ＩＸＸ），
ここで、Ｐ１５は保護基であり、好ましくは、Ｐ１５は式ＸＸのペプチドの側鎖保護基に対して直交性の保護基であり、より好ましくは、Ｐ１５は接触水素化に対して安定で且つ式ＸＸのペプチドの側鎖保護基に対して直交性の保護基であり、更に好ましくは、Ｐ１５はＢｏｃ、Ｂｐｏｃ、Ｄｄｚ、ＦｍｏｃまたはＭｓｃであり、最も好ましくは、Ｐ１５はＢｏｃである；
次式の任意に側鎖保護されたペプチドＸＸ、好ましくは側鎖未保護のペプチドＸＸａを製造する工程、
Ｐ１５−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＰ２
(配列番号５） （ＸＸ）
こでで、Ｐ２およびＰ１５は上記で定義した通りである；
但し、Ｐ１５がＢｏｃ，ＢｐｏｃまたはＤｄｚであれば、Ｐ２はＢｏｍではない；および
（ｃ）工程（ｂ）で製造された、任意に側鎖保護された式ＸＸのペプチド、好ましくは側鎖未保護のペプチドＸＸａのＰ１５を除去して、式ＶＩの任意に側鎖保護されたペプチド、好ましくは側鎖未保護のペプチドＶＩａを製造する工程。
【００５４】
更に特記すれば、次式の側鎖保護されたペプチドＸ、好ましくは次式のペプチドＸｂの溶液相における製造方法は、以下の工程（ａ）〜（ｃ）を含んでなるものである：
Ｈ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号８） （Ｘ），
Ｈ−Ｇｌｕ（ＯＰ６）−Ｇｌｕ（ＯＰ７）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＰ８）−Ｇｌｕ（ＯＰ９）−Ｔｙｒ（Ｐ１０）−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号８） （Ｘｂ），
ここで、Ｐ３は保護基であり、好ましくは、Ｐ３は接触水素化により除去可能な保護基であり、より好ましくは、Ｐ３はＢｚｌ、Ｂｏｍ、Ｐａｃ、ＯＮｂｚ、Ｐｉｃまたは４−スルホベンジルであり、最も好ましくは、Ｐ３はＢｚｌであり；
Ｐ６〜Ｐ１０の各々は、Ｂｚｌ、Ｂｏｍ、Ｐａｃ、ＯＮｂｚ、Ｐｉｃまたは４−スルホベンジルからなる群から独立に選択される：
（ａ）次式の側鎖保護されたペプチドＶＩＩＩ、好ましくは次式のペプチドＶＩＩＩｂのＰ１６を除去する工程、
Ｐ１６−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号６） （ＶＩＩＩ），
Ｐ１６−ＧＬＵ（ＯＰ８）−ＧＬＵ（ＯＰ９）−ＴＹＲ（Ｐ１０）−ＬＥＵ２０−ＯＰ３（配列番号６） （ＶＩＩＩＢ）
ここで、Ｐ３およびＰ８〜Ｐ１０は上記で定義した通りであり、また
Ｐ１６は保護基であり、好ましくは、Ｐ１６は側鎖保護基およびＰ３に対して直交性の保護基であり、より好ましくは、Ｐ１６は接触水素化に対して安定で且つ側鎖保護基およびＰ３に対して直交性の保護基であり、更に好ましくは、Ｐ１６はＢｏｃ、Ｂｐｏｃ、Ｄｄｚ、ＦｍｏｃまたはＭｓｃであり、最も好ましくは、Ｐ１６はＢｏｃである；
但し、Ｐ１６がＢｏｃ、ＢｐｏｃまたはＤｄｚであれば、Ｐ３はＢｏｍではない；
（ｂ）工程（ａ）で製造された、Ｎ末端が脱保護され且つ側鎖保護された式ＶＩＩＩのペプチド、好ましくは、対応するペプチドＶＩＩＩｂを、次式の側鎖保護されたペプチドＩＸ、好ましくは次式のペプチドＩＸｂと反応させて、
Ｐ１７−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−ＯＨ（配列番号７） （ＩＸ）、
Ｐ１７−Ｇｌｕ（ＯＰ６）−Ｇｌｕ（ＯＰ７）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−ＯＨ（配列番号７） （ＩＸｂ）
ここで、Ｐ６およびＰ７は上記で定義した通りであり、
Ｐ１７は保護基であり、好ましくは、Ｐ１７は側鎖保護基に対して直交性の保護基であり、より好ましくは、Ｐ１７は接触水素化に対して安定で且つ側鎖保護基に対して直交性の保護基であり、更に好ましくは、Ｐ１７はＢｏｃ、Ｂｐｏｃ、Ｄｄｚ、ＦｍｏｃまたはＭｓｃであり、最も好ましくは、Ｐ１７はＢｏｃである；
次式の側鎖保護されたペプチドＸＸＩ、好ましくは次式のペプチドＸＸＩを製造する工程、
Ｐ１７−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号８） （ＸＸＩ）
Ｐ１７−Ｇｌｕ（ＯＰ６）−Ｇｌｕ（ＯＰ７）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＰ８）−Ｇｌｕ（ＯＰ９）−Ｔｙｒ（Ｐ１０）−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号８） （ＸＸＩｂ），
ここで、Ｐ３、Ｐ６〜Ｐ１０およびＰ１７は上記で定義した通りである；
但し、Ｐ１７がＢｏｃ、ＢｐｏｃまたはＤｄｚであるならば、Ｐ３またはＰ６〜Ｐ１０の何れかはＢｏｍではない；および
（ｃ）工程（ｂ）で製造された、式ＸＸＩの側鎖保護されたペプチド、好ましくは対応するペプチドＸＸＩｂのＰ１７を除去して、式Ｘの側鎖保護されたペプチド、好ましくはペプチドＸｂを製造する工程。
【００５５】
本発明による方法の更なる実施形態において、式Ｖの任意に側鎖保護されたペプチド、式ＶＩの任意に側鎖保護されたペプチド、および式Ｘの側鎖保護されたペプチドからなる群から選択された少なくとも一つのペプチドは、先行するプロセスにおいて固相合成により調製される。それにより、ＳＰＰＳビルディングブロックおよびＳＰＰＳ条件を含む何れかの普通に知られたＳＰＰＳ方法が用いられてよい。当業者に知られ、且つ保護されたペプチドの調製を可能にする全ての樹脂を適用することができる。ここで、樹脂は広義に解釈されるべきである。従って、「樹脂」の用語は、例えば固体支持体単独、またはリンカーに直接連結された固体支持体（任意に両者の間にハンドルを備える）を意味するように理解されるべきである。該樹脂は、不溶性または可溶性であってよい。可溶性ポリマーのポリエチレングリコール（可溶性ＰＥＧポリマー）は、可溶性樹脂の固体支持体の一例であり、従って単一のビルディングブロックのアセンブリー後には可溶性のペプチド−樹脂を形成する。好ましい樹脂は、トリチルまたはブロモベンズヒドリルを備えたポリスチレンをベースとする樹脂である。トリチル樹脂の例は、塩化２−クロロトリチル樹脂（ＣＴＣ樹脂）、塩化トリチル樹脂、塩化４−メチルトリチル樹脂、および塩化４−メトキシトリチル樹脂である。好ましくは、ＣＴＣ樹脂は前記ペプチド断片の合成に適用される。
【００５６】
本発明のもう一つの目的は、本発明の方法において中間体として有用なペプチドを提供することである。特に、これらペプチドの一つは、下記からなる群から選択されるペプチドである：
（ｉ）次式の任意に側鎖保護されたペプチド
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＯＨ（配列番号４） （Ｖ）
ここで、Ｐ１は保護基であり、好ましくは、Ｐ１は接触水素化に対して安定な保護基であり、より好ましくは、Ｐ１はＢｏｃ、Ｂｐｏｃ、Ｄｄｚ、ＦｍｏｃまたはＭｓｃであり、最も好ましくは、Ｐ１はＢｏｃであり、また
前記ペプチドはアルギニン残基において、ニトロのような適切な側鎖保護基で任意に側鎖保護される；
（ｉｉ）次式の任意に側鎖保護されたペプチド
Ｈ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＰ２（配列番号５） （ＶＩ）
ここで、Ｐ２は保護基であり、好ましくは、Ｐ２は接触水素化により除去可能で且つ前記任意の側鎖保護基に対して直交性の保護基であり、より好ましくは、Ｐ２はＢｚｌ、Ｂｏｍ、Ｐａｃ、ＯＮｂｚ、Ｐｉｃ、または４−スルホベンジルであり、最も好ましくは、Ｐ２はＢｚｌであり、また
前記ペプチドは、アスパラギン残基において、トリチル（Ｔｒｔ）のような適切な側鎖保護基で任意に側鎖保護される；
（ｉｉｉ）次式の任意に側鎖保護されたペプチド
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＰ２（配列番号２） （ＶＩＩ）
ここで、Ｐ１、Ｐ２および任意の側鎖保護基、並びにＰ１、Ｐ２および任意の側鎖保護基の好ましい意味は、上記で定義した通りである；
（ｉｖ）次式の側鎖保護されたペプチド
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＨ（配列番号２） （ＩＩａ）
ここで、Ｐ１および側鎖保護基、並びにＰ１および任意の側鎖保護基の好ましい意味は、上記で定義した通りであるが、
Ｐｂｆがペンタメチルジヒドロベンゾフランスルホニルであり、Ｔｒｔはトリチルであるとして、Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｇｌｙ１０−ＯＨは除く；このペプチドは、ＣＴＣ樹脂上での固相合成の生成物として、ＷＯ２００７／０３３３８３に開示されている；対照的に、本発明によるＩＩａの側鎖保護されたペプチドは異なる方法、即ち、溶液相合成によって形成される；
（ｖ）次式の側鎖未保護のペプチド
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＨ（配列番号２） （ＩＩｂ）
ここで、Ｐ１、並びにＰ１の好ましい意味は、上記で定義した通りである；
（ｖｉ）次式の側鎖保護されたペプチド
Ｈ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号８） （Ｘ）
ここで、Ｐ３は保護基であり、好ましくは、Ｐ３は接触水素化により除去可能な保護基であり、より好ましくは、Ｐ３はＢｚｌ、Ｂｏｍ、Ｐａｃ、ＯＮｂｚ、Ｐｉｃ、または４−スルホベンジルであり、最も好ましくは、Ｐ３はＢｚｌであり、また
側鎖保護基は、少なくとも一つの適切な側鎖保護基であり、好ましくはＢｚｌ、Ｂｏｍ、Ｐａｃ、ＯＮｂｚ、Ｐｉｃ、および４−スルホベンジルからなる群から選択され、より好ましくはＢｚｌである；
（ｖｉｉ）次式の側鎖保護されたペプチド
Ｐ４−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号９） （ＸＩＩ）
ここで、Ｐ３および側鎖保護基、並びにＰ３および任意の側鎖保護基の好ましい意味は上記で定義した通りであり、また
Ｐ４は保護基であり、好ましくは、Ｐ４は式Ｘのペプチドの側鎖保護基に対しておよびＰ３に対して直交性の保護基であり、より好ましくは、Ｐ４はＢｏｃ、Ｂｐｏｃ、Ｄｄｚ、ＦｍｏｃまたはＭｓｃであり、最も好ましくは、Ｐ４はＢｏｃであり、
但し、Ｐ４がＢｏｃ、Ｂｐｏｃ、またはＤｄｚであるならば、Ｐ３はＢｏｍではなく、またはＰ４は水素である；
（ｖｉｉｉ）次式の側鎖保護されたペプチド
Ｐ５−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号３） （ＸＩＶ）
ここで、Ｐ３および側鎖保護基、並びにＰ３および側鎖保護基の好ましい意味は上記で定義した通りであり、また
Ｐ５は保護基であり、好ましくは、Ｐ５は式ＸＩＩおよびＸＩＩＩのペプチド／アミノ酸の側鎖保護基に対して、およびＰ３に対して直交性の保護基であり、より好ましくは、Ｐ５はＢｏｃ、Ｂｐｏｃ、Ｄｄｚ、ＦｍｏｃまたはＭｓｃであり、最も好ましくは、Ｐ５はＢｏｃである；但し、Ｐ５がＢｏｃ、Ｂｐｏｃ、またはＤｄｚであるならば、Ｐ３はＢｏｃではないが、
Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｌｅｕ２０−ＯｔＢｕは除かれ、ここでのｔＢｕはｔｅｒｔ−ブチルである。このペプチドは、前駆体ペプチド（即ち、ペプチド配列マイナスＬｅｕ）とＨ−Ｌｅｕ−ＯｔＢｕとの間の反応生成物として、ＷＯ２００７／０３３３８３に開示されている。該ＷＯ２００７／０３３３８３に開示された前駆体ペプチドは、ＣＴＣ樹脂上での固相合成によって、先行する工程において既に形成されている。Ｈ−Ｌｅｕ−ＯｔＢｕとの反応の後、該開示されたペプチドは、次の工程を続ける前に単離されることはない。対照的に、本発明による式ＸＩＶの側鎖保護されたペプチドは異なった方法、即ち、溶液相合成によって形成され、これはその形成後に単離される。
【００５７】
（ｉｘ）次式の側鎖保護されたペプチド
Ｈ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号３） （ＩＩＩ）
ここで、Ｐ３および側鎖保護基、並びにＰ３および側鎖保護基の好ましい意味は、上記で定義した通りであるが、
Ｈ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｌｅｕ２０−ＯｔＢｕは除かれ、このペプチドはＷＯ２００７／０３３３８３に開示されている。それは、上記で述べたＮ末端が脱保護されたペプチドである。従って、上記で説明したように、その形成方法は本発明による式ＩＩＩの側鎖保護されたペプチドとは異なっている；および
（ｘ）次式の側鎖保護されたペプチド
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号１） （ＩＶ）
ここで、Ｐ１、Ｐ３および側鎖保護基、並びにＰ１、Ｐ３および任意の側鎖保護基の好ましい意味は上記で定義した通りであるが、
Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｇｌｙ１０−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｌｅｕ２０−ＯｔＢｕを除く。このペプチドは、ＷＯ２００７／０３３３８３において、両者とも上記で説明したＢｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｇｌｙ１０−ＯＨと、Ｈ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｌｅｕ２０−ＯｔＢｕをカップリングさせた後の生成物として開示されている。従って、そのカップリング生成物に向かう方法は、本発明による式ＩＶの側鎖保護されたペプチドに向かう方法とは異なっている。
【００５８】
好ましい実施形態において、式Ｖのペプチドは側鎖保護され、且つ次式のものであり、
Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＯＨ（配列番号４）
これはビバリルジンのアミノ酸位１〜４の配列を含んでなるものである。
【００５９】
もう一つの好ましい実施形態において、式ＶＩのペプチドは側鎖を脱保護され、且つ次式のものであり、
Ｈ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＢｚｌ（配列番号５）
これはビバリルジンのアミノ酸位５〜１０の配列を含んでなるものである。
【００６０】
もう一つの好ましい実施形態において、式ＶＩＩのペプチドは側鎖を脱保護され、且つ次式のものであり、
Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＢｚｌ（配列番号２）
これはビバリルジンのアミノ酸位１〜１０の配列を含んでなるものである。
【００６１】
もう一つの好ましい実施形態において、式ＩＩｂの側鎖を脱保護されたペプチドは次式のものであり、
Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＨ（配列番号２）
これはビバリルジンのアミノ酸位１〜１０の配列を含んでなるものである。
【００６２】
もう一つの好ましい実施形態において、式Ｘの側鎖保護されたペプチドは次式のものであり、
Ｈ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号８）
これはビバリルジンのアミノ酸位１３〜２０の配列を含んでなるものである。
【００６３】
もう一つの好ましい実施形態において、式ＸＩＩの側鎖保護されたペプチドは次式のものであり、
Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号９）、または
Ｈ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号９），
これらは両者とも、ビバリルジンのアミノ酸位１２〜２０の配列を含んでなるものである。
【００６４】
もう一つの好ましい実施形態において、式ＸＩＶの側鎖保護されたペプチドは次式のものであり、
Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号３），
これはビバリルジンのアミノ酸位１１〜２０の配列を含んでなるものである。
【００６５】
もう一つの好ましい実施形態において、式ＩＩＩの側鎖保護されたペプチドは次式のものであり、
Ｈ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号３），
これはビバリルジンのアミノ酸位１１〜２０の配列を含んでなるものである。
【００６６】
もう一つの好ましい実施形態において、式ＩＶの側鎖保護されたペプチドは次式のものであり、
Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号１），
これはビバリルジンのアミノ酸位１〜２０の配列を含んでなるものである。
【００６７】
もう一つの側面において、本発明は、次式のビバリルジン
Ｈ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＨ（配列番号１） （Ｉ）
の合成における中間体としての、下記からなる群から選択されるペプチドの使用に関する：
（ｉ）次式の任意に側鎖保護されたペプチド
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＯＨ（配列番号４） （Ｖ），
ここで、Ｐ１は保護基であり、好ましくは、Ｐ１は接触水素化に対して安定な保護基であり、より好ましくは、Ｐ１はＢｏｃ、Ｂｐｏｃ、Ｄｄｚ、ＦｍｏｃまたはＭｓｃであり、最も好ましくは、Ｐ１はＢｏｃであり、また
前記ペプチドはアルギニン残基において、ニトロのような適切な側鎖保護基で任意に側鎖保護され、
好ましくは、ペプチドＶは側鎖未保護であり、且つ次式のものである。
【００６８】
Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＯＨ（配列番号４）；
（ｉｉ）次式の任意に側鎖保護されたペプチド
Ｈ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＰ２（配列番号５） （ＶＩ），
ここで、Ｐ２は保護基であり、好ましくは、Ｐ２は接触水素化により除去可能で且つ前記任意の側鎖保護基に対して直交性の保護基であり、より好ましくは、Ｐ２はＢｚｌ、Ｂｏｍ、Ｐａｃ、ＯＮｂｚ、Ｐｉｃ、または４−スルホベンジルであり、最も好ましくは、Ｐ２はＢｚｌであり、また
前記ペプチドは、アスパラギン残基において、トリチル（Ｔｒｔ）のような適切な側鎖保護基で任意に側鎖保護され、
好ましくは、ペプチドＶＩは側鎖未保護であり、且つ次式のものである
Ｈ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＢｚｌ（配列番号５）；
（ｉｉｉ）次式の任意に側鎖保護されたペプチド
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＰ２（配列番号２） （ＶＩＩ）
ここで、Ｐ１、Ｐ２および任意の側鎖保護基、並びにＰ１、Ｐ２および任意の側鎖保護基の好ましい意味は、上記で定義した通りである；
好ましくは、ペプチドＶＩＩは側鎖未保護であり、且つ次式のものである；
Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＢｚｌ（配列番号２）；
（ｉｖ）次式の側鎖保護されたペプチド
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＨ（配列番号２） （ＩＩａ），
ここで、Ｐ１および側鎖保護基、並びにＰ１および任意の側鎖保護基の好ましい意味は、上記で定義した通りであるが、
Ｐｂｆがペンタメチルジヒドロベンゾフランスルホニルであり、Ｔｒｔはトリチルであるとして、Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｇｌｙ１０−ＯＨは除く。このペプチドは、ＣＴＣ樹脂上での固相合成の生成物として、ＷＯ２００７／０３３３８３に開示されている。対照的に、本発明によるＩＩａの側鎖保護されたペプチドは異なる方法、即ち、溶液相合成によって形成される；
（ｖ）次式の側鎖未保護のペプチド
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＨ（配列番号２） （ＩＩｂ）
ここで、Ｐ１、並びにＰ１の好ましい意味は、上記で定義した通りであり、
好ましくは、式ＩＩｂの側鎖未保護のペプチドは次式のものである
Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＨ（配列番号２）；
（ｖｉ）次式の側鎖保護されたペプチド
Ｈ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号８） （Ｘ）
ここで、Ｐ３は保護基であり、好ましくは、Ｐ３は接触水素化により除去可能な保護基であり、より好ましくは、Ｐ３はＢｚｌ、Ｂｏｍ、Ｐａｃ、ＯＮｂｚ、Ｐｉｃ、または４−スルホベンジルであり、最も好ましくは、Ｐ３はＢｚｌであり、また
側鎖保護基は、好ましくはＢｚｌ、Ｂｏｍ、Ｐａｃ、ＯＮｂｚ、Ｐｉｃ、および４−スルホベンジルからなる群から選択され、より好ましくはＢｚｌであり、
好ましくは、式Ｘの側鎖保護されたペプチドは次式のものである
Ｈ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号８）；
（ｖｉｉ）次式の側鎖保護されたペプチド
Ｐ４−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号９） （ＸＩＩ），
ここで、Ｐ３および側鎖保護基、並びにＰ３および任意の側鎖保護基の好ましい意味は上記で定義した通りであり、また
Ｐ４は保護基であり、好ましくは、Ｐ４は式Ｘのペプチドの側鎖保護基に対しておよびＰ３に対して直交性の保護基であり、より好ましくは、Ｐ４はＢｏｃ、Ｂｐｏｃ、Ｄｄｚ、ＦｍｏｃまたはＭｓｃであり、最も好ましくは、Ｐ４はＢｏｃであり、
但し、Ｐ４がＢｏｃ、Ｂｐｏｃ、またはＤｄｚであるならば、Ｐ３はＢｏｍではなく、またはＰ４は水素である；
好ましくは、式ＸＩＩの側鎖保護されたペプチドは次式のものである
Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号９），または
Ｈ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号９）；
（ｖｉｉｉ）次式の側鎖保護されたペプチド
Ｐ５−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号３） （ＸＩＶ）
ここで、Ｐ３および側鎖保護基、並びにＰ３および側鎖保護基の好ましい意味は上記で定義した通りであり、また
Ｐ５は保護基であり、好ましくは、Ｐ５は式ＸＩＩおよびＸＩＩＩのペプチド／アミノ酸の側鎖保護基に対して、およびＰ３に対して直交性の保護基であり、より好ましくは、Ｐ５はＢｏｃ、Ｂｐｏｃ、Ｄｄｚ、ＦｍｏｃまたはＭｓｃであり、最も好ましくは、Ｐ５はＢｏｃである；但し、Ｐ５がＢｏｃ、Ｂｐｏｃ、またはＤｄｚであるならば、Ｐ３はＢｏｃではないが、
Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｌｅｕ２０−ＯｔＢｕを除き、ここでのｔＢｕはｔｅｒｔ−ブチルである。このペプチドは、前駆体ペプチド（即ち、ペプチド配列マイナスＬｅｕ）とＨ−Ｌｅｕ−ＯｔＢｕとの間の反応生成物として、ＷＯ２００７／０３３３８３に開示されている。該ＷＯ２００７／０３３３８３に開示された前駆体ペプチドは、ＣＴＣ樹脂上での固相合成によって、先行する工程において既に形成されている。Ｈ−Ｌｅｕ−ＯｔＢｕとの反応の後、該開示されたペプチドは、次の工程を続ける前に単離されることはない。対照的に、本発明による式ＸＩＶの側鎖保護されたペプチドは異なった方法、即ち、溶液相合成によって形成され、これはその形成後に単離される；
好ましくは、式ＸＩＶの側鎖保護されたペプチドは次式のものである
Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−-Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号３）；
（ｉｘ）次式の側鎖保護されたペプチド
Ｈ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号３） （ＩＩＩ）
ここで、Ｐ３および側鎖保護基、並びにＰ３および側鎖保護基の好ましい意味は上記で定義した通りであるが、
Ｈ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｌｅｕ２０−ＯｔＢｕは除く。このペプチドは、ＷＯ２００７／０３３３８３に開示されている。それは、上記で述べたＮ末端が脱保護されたペプチドである。従って、上記で説明したように、その形成方法は本発明による式ＩＩＩの側鎖保護されたペプチドとは異なっている；
好ましくは、式ＩＩＩの側鎖保護されたペプチドは次式のものである
Ｈ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号３）；
および
（ｘ）次式の側鎖保護されたペプチド
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号１） （ＩＶ）
ここで、Ｐ１、Ｐ３および側鎖保護基、並びにＰ１、Ｐ３および任意の側鎖保護基の好ましい意味は上記で定義した通りであるが、
Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｇｌｙ１０−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｌｅｕ２０−ＯｔＢｕは除く。このペプチドは、ＷＯ２００７／０３３３８３において、両者とも上記で説明したＢｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｇｌｙ１０−ＯＨと、Ｈ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｌｅｕ２０−ＯｔＢｕをカップリングさせた後の生成物として開示されている。従って、そのカップリング生成物に向かう方法は、本発明による式ＩＶの側鎖保護されたペプチドに向かう方法とは異なっている；
好ましくは、式ＩＶの側鎖保護されたペプチドは次式のものである
Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号１）。
【００６９】
本発明はまた、式Ｉのビバリルジンの製造方法に関し、該方法は下記の工程を含んでなるものである：
（ａ）次式のペプチドを、
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＨ（配列番号２） （ＩＩｃ）
ここでのＰ１は保護基である；
次式のペプチドと反応させて、
Ｈ−Ａｓｐ（ＯＰ１１）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＰ６）−Ｇｌｕ（ＯＰ７）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＰ８）−Ｇｌｕ（ＯＰ９）−Ｔｙｒ（Ｐ１０）−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号３） （ＩＩＩｃ）
ここでのＰ３およびＰ６〜Ｐ１１の各々はＢｚｌである；
次式のペプチドを得る工程
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−Ａｓｐ（ＯＰ１１）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＰ６）−Ｇｌｕ（ＯＰ７）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＰ８）−Ｇｌｕ（ＯＰ９）−Ｔｙｒ（Ｐ１０）−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号１） （ＩＶｃ），
ここでのＰ１、Ｐ３およびＰ６〜Ｐ１１は上記で定義した通りである；
（ｂ）工程（ａ）で製造されたペプチドの側鎖保護基およびＣ末端保護基Ｐ３およびＰ６〜Ｐ１１を除去する工程；
（ｃ）工程（ｂ）で製造されたペプチドのＮ末端保護基Ｐ１を除去して、式Ｉのビバリルジンを得る工程。
【００７０】
本発明の方法は、収束的断片合成を介してのビバリルジンの非常に効率的な合成を可能にするものであり、これは工業的規模での製造に対して容易に適合させることができる。更に、ビバリルジンを調製するためのこの経路は非常に簡単であり、且つ複雑な保護基戦略を必要としない。加えて、種々のビルディングブロック（断片）は、アセンブリーの際のラセミ化を回避または最小化するように選択される。
【００７１】
本発明の反応の前、最中および後に、全ての断片並びに全てのカップリング生成物は、該分子の物理化学的性質および／または反応条件に応じて、そのままの状態で存在してもよく、または適切な塩の形態で存在してもよい。適切な対イオンは、例えば、トリエチルアミン（ＴＥＡ）、ジシクロヘキシルアミン（ＤＣＨＡ）、塩酸（ＨＣｌ）およびトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）の塩形態である。
【００７２】
保護基Ｐ１としては、接触水素化に対して安定な如何なる保護基も使用することができ、例えば、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、フルオレン−９−イルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、２−（３，５−ジメトキシフェニルｌ）プロパ−２−イルオキシカルボニル（Ｄｄｚ）、アダマンチル−１−オキシカルボニル（Ａｄｃ）、ｔｅｒｔ−アミルオキシカルボニル（Ａｏｃ）、ジフェニルホスフィニル（Ｄｐｐ）、２−（メチルスルホニル）エトキシカルボニル（Ｍｓｃ）、およびフタロイル（Ｐｈｔ）である。好ましくは、保護基Ｐ１はＢｏｃ、ＦｍｏｃまたはＤｄｚである。
【００７３】
好ましくは、保護基Ｐ３およびＰ６〜Ｐ１１はベンジル（Ｂｚｌ）である。ここでは、および以下では、「ＯＢｚｌ」の略語はベンジルエステル（側鎖およびＣ末端の両方のカルボン酸との反応後）を示すのに対して、「Ｂｚｌ」の略語はベンジルエーテル（例えばチロシンのフェノール性水酸基との反応後）を示す。
【００７４】
工程（ａ）〜（ｃ）は、ペプチド合成の技術において知られた標準の反応条件を使用して実施することができる。
【００７５】
カップリングおよび脱保護工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）は、好ましくは溶液中で行われる。
【００７６】
カップリング工程（ａ）については、ＤＭＦが溶媒として好ましく使用される。第一の脱保護工程（ｂ）は、好ましくは酢酸および／または水の中で行われる一方、第二の脱保護工程（ｃ）は、好ましくはトルエン中で行われる。
【００７７】
好ましい実施形態において、カップリング工程（ａ）は、ＨＯＢｔ、ＥＤＣ・ＨＣｌ、およびＴＥＡの組合せを用いて達成される。
【００７８】
好ましい実施形態において、第一の脱保護工程（ｂ）は、水素ガスおよびパラジウム／炭素（palladium on charcoal）を用いて実施される。
【００７９】
好ましい実施形態において、第二の脱保護工程（ｃ）はＴＦＡを用いて行われる。
【００８０】
工程（ｃ）の後に得られた粗生成物は、従来の方法によって、例えば、分取ＨＰＬＣ、向流分配法またはその均等物を用いて精製することができる。工程（ａ）および（ｂ）の後に得られる中間体についても、もし精製が必要であれば、同じことが言える。
【００８１】
保護されたペプチド断片ＩＩｃおよびＩＩＩｃは、従来のペプチド合成法、例えば溶液相合成（ＨＰＰＳ）または固相合成（ＳＰＰＳ）を使用して調製することができる。ＳＰＰＳの場合、当業者に既知で且つ保護されたペプチドの調製を可能にする全ての樹脂を適用することができる。ここでの樹脂は広義に解釈されるべきである。従って、「樹脂」の用語は、例えば固体支持体単独、またはリンカーに直接連結されて両者の間に任意にハンドルを備えた固体支持体を意味するように理解されるべきである。該樹脂は不溶性でもよく、または可溶性でもよい。可溶性ポリマーであるポリエチレングリコールは可溶性樹脂の固体支持体の一例である。好ましい樹脂は、トリチルまたはブロモベンズヒドリルを備えたポリスチレンをベースと樹脂である。トリチル樹脂の例は、塩化２−クロロトリチル樹脂（ＣＴＣ樹脂）、塩化トリチル樹脂、塩化４−メチルトリチル樹脂、および塩化４−メトキシトリチル樹脂である。好ましくは、ＣＴＣ樹脂は遊離のカルボキシル官能基を含む断片の合成のために適用される。
【００８２】
好ましい実施形態において、保護されたペプチド断片ＩＩｃおよびＩＩＩｃは、溶液相合成を使用して調製される。
【００８３】
本発明のもう一つの目的は、本発明の方法における中間体として有用な、保護されたペプチドを提供することである。特に、これらペプチドの一つは式ＩＶｃの保護されたペプチドであり、ここでのＰ１は保護基であり、好ましくは、Ｐ１はＢｏｃまたはＨであり、Ｐ３およびＰ６〜Ｐ１１はＢｚｌである。
【００８４】
本発明の方法における中間体として特に有用なもう一つのペプチドは、式ＩＩｃのＮ末端が保護されたペプチドであり、ここでのＰ１は保護基であり、好ましくは、Ｐ１はＢｏｃである。
【００８５】
更なる側面において、本発明はまた、Ｎ末端が保護された次式のペプチドの製造方法であって、
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＨ（配列番号２） （ＩＩｃ）
ここで、Ｐ１はＢｏｃである
以下の工程を含んでなる方法に関する：
（ａ）次式のペプチドのＣ末端保護基を除去して、
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＯＰ１３（配列番号４） （Ｖｃ）
ここで、Ｐ１はＢｏｃであり、Ｐ１３はＢｚｌ、メチル（Ｍｅ）およびエチル（Ｅｔ）のような保護基であり、好ましくは、Ｐ１３はＢｚｌである；
Ｎ末端が保護され、且つＣ末端は脱保護されてＰ１３がＨである式Ｖｃのペプチドを得る工程；
（ｂ）次式のペプチドのＮ末端保護基を除去して、
Ｐ１５−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＢｚｌ（配列番号５） （ＶＩｃ）
ここで、Ｐ１５はＢｏｃである
Ｃ末端が保護され、且つＮ末端は脱保護されてＰ１５がＨである式ＶＩｃのペプチドを得る工程；
（ｃ）工程（ａ）で製造されたＰ１３がＨである式Ｖｃのペプチドを、工程（ｂ）で製造されたＰ１５がＨである式ＶＩｃのペプチドと反応させて、次式のペプチドを得る工程
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＢｚｌ（配列番号２） （ＶＩＩｃ），
ここで、Ｐ１はＢｏｃである；および
（ｄ）工程（ｃ）で製造されたペプチドのＣ末端保護基を除去して、式ＩＩｃのＮ末端が保護されたペプチドを得る工程。
【００８６】
工程（ａ）〜（ｃ）は、ペプチド合成の技術において既知の標準の反応条件を使用して実施することができる。
【００８７】
カップリングおよび脱保護工程（ａ）、（ｂ）、（ｃ）および（ｄ）は、好ましくは溶液中で行われる。
【００８８】
カップリング工程（ｃ）においては、ＤＭＦが溶媒として好ましく使用される。第一の脱保護工程（ａ）は、好ましくはアセトン中で行われるのに対して、第二の脱保護工程（ｂ）は、好ましくはトルエンおよび／またはＴＨＦ中で行われる。第三の脱保護工程（ｄ）は、好ましくは、ＤＭＦ、アセトン、水、およびアセトンと水の混合物からなる群から選択された溶媒中で行われる。
【００８９】
好ましい実施形態において、第一の脱保護工程（ａ）は、水素ガスおよびパラジウム／炭素（palladium on charcoal）を用いて行われる。
【００９０】
好ましい実施形態において、第二の脱保護工程（ｂ）はＴＦＡを用いて行われる。
【００９１】
好ましい実施形態において、カップリング工程（ｃ）は、ＨＯＢｔ、ＤＩＣおよびＴＥＡの組合せを用いて達成される。
【００９２】
好ましい実施形態において、第三の脱保護工程（ｄ）は、水素ガスおよびパラジウム／炭素（palladium on charcoal）を用いて行われる。
【００９３】
工程（ｄ）の後に得られた粗生成物は、従来の方法によって、例えば、分取ＨＰＬＣ、向流分配法またはその均等物を用いて精製することができる。工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）の後に得られる中間体についても、もし精製が必要であれば同じことが言える。
【００９４】
保護されたペプチド断片ＶｃおよびＶＩｃは、従来のペプチド合成法、例えば溶液相合成（ＨＰＰＳ）または固相合成（ＳＰＰＳ）を使用して調製することができる。ＳＰＰＳの場合、当業者に既知で且つ保護されたペプチドの調製を可能にする全ての樹脂を適用することができる。ここでの樹脂は広義に解釈されるべきである。従って、「樹脂」の用語は、例えば固体支持体単独、またはリンカーに直接連結され且つ両者の間に任意にハンドルを備えた固体支持体を意味するように理解されるべきである。該樹脂は不溶性でもよく、または可溶性でもよい。可溶性ポリマーであるポリエチレングリコールは可溶性樹脂の固体支持体の一例であり、従って可溶性のペプチド−樹脂接合体を導く。好ましい樹脂は、トリチルまたはブロモベンズヒドリルを備えたポリスチレンをベースと樹脂である。トリチル樹脂の例は、塩化２−クロロトリチル樹脂（ＣＴＣ樹脂）、塩化トリチル樹脂、塩化４−メチルトリチル樹脂、および塩化４−メトキシトリチル樹脂である。好ましくは、ＣＴＣ樹脂は遊離のカルボキシル官能基を含む断片の合成のために適用される。
【００９５】
好ましい実施形態において、保護されたペプチド断片ＶｃおよびＶＩｃは、溶液相合成を使用して調製される。
【００９６】
本発明のもう一つの目的は、式ＩＩｃのＮ末端を保護されたペプチドの製造のための本発明の方法における中間体として有用な、保護されたペプチドを提供することである。特に、これらペプチドの一つは、Ｃ末端およびＮ末端を保護された式Ｖｃのペプチドであり、ここでのＰ１３は保護基、好ましくはＢｚｌである。これらペプチドのもう一つは、Ｎ末端を保護されると共に遊離のＣ末端を備えた式Ｖｃのペプチドである。
【００９７】
本発明の方法における中間体として特に有用なもう一つのペプチドは、式ＶＩｃのＣ末端が保護されたペプチドであり、ここでのＰ１５はＢｏｃであり、またはＰ１５はＨである。
【００９８】
本発明の方法における中間体として特に有用なもう一つのペプチドは、Ｃ末端およびＮ末端が保護された式ＩＩｃのペプチドであり、ここでのＰ１は保護基であり、好ましくは、Ｐ１はＢｏｃである。
【００９９】
ビバリルジンの製造のための方法における中間体として特に有用なもう一つのペプチドは、式ＩＩＩｃの保護されたペプチドであり、ここでのＰ３およびＰ６〜Ｐ１１はＢｚｌである。
【０１００】
更なる側面において、本発明はまた、次式の保護されたペプチドの製造方法であって、
Ｈ−Ａｓｐ（ＯＰ１１）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＰ６）−Ｇｌｕ（ＯＰ７）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＰ８）−Ｇｌｕ（ＯＰ９）−Ｔｙｒ（Ｐ１０）−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号３） （ＩＩＩｃ）
ここで、Ｐ３およびＰ６〜Ｐ１１はＢｚｌである；
以下の工程を含んでなる方法に関する：
（ａ）次式のペプチドのＮ末端保護基を除去して、
Ｐ１６−Ｇｌｕ（ＯＰ８）−Ｇｌｕ（ＯＰ９）−Ｔｙｒ（Ｐ１０）−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号６） （ＶＩＩＩｃ）
ここで、Ｐ３およびＰ８〜Ｐ１０はＢｚｌであり、Ｐ１６はＢｏｃである；
Ｃ末端が保護され、Ｎ末端が脱保護されてＰ１６がＨである式ＶＩＩＩｃのペプチドを得る工程；
（ｂ）工程（ａ）で製造された、Ｐ１６がＨで、Ｐ３およびＰ８〜Ｐ１０がＢｚｌである式ＶＩＩＩｃのペプチドを、次式のペプチドと反応させて、
Ｐ１７−Ｇｌｕ（ＯＰ６）−Ｇｌｕ（ＯＰ７）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−ＯＨ（配列番号７） （ＩＸｃ）
ここで、Ｐ１７はＢｏｃであり、Ｐ６およびＰ７はＢｚｌである；
次式のペプチドを得る工程、
Ｐ１７−Ｇｌｕ（ＯＰ６）−Ｇｌｕ（ＯＰ７）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＰ８）−Ｇｌｕ（ＯＰ９）−Ｔｙｒ（Ｐ１０）−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号８） （Ｘｃ），
ここで、Ｐ１７はＢｏｃであり、Ｐ３およびＰ６〜Ｐ１０はＢｚｌである；
（ｃ）Ｐ３およびＰ６〜Ｐ１０がＢｚｌであり、Ｐ１７がＢｏｃである、工程（ｂ）で製造された式ＸｃのペプチドのＮ末端保護基を除去して、Ｃ末端が保護され、Ｎ末端が脱保護された、Ｐ３およびＰ６〜Ｐ１０がＢｚｌであり、且つＰ１７がＨである式Ｘｃのペプチドを得る工程；
（ｄ）Ｐ１７がＨであり、Ｐ３およびＰ６〜Ｐ１０がＢｚｌである工程（ｃ）で製造された式Ｘｃのペプチドを、次式の保護されたアミノ酸と反応させて、
Ｂｏｃ−Ｐｈｅ１２−ＯＨ （ＸＩ）
次式のペプチドを得る工程
Ｐ４−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＰ６）−Ｇｌｕ（ＯＰ７）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＰ８）−Ｇｌｕ（ＯＰ９）−Ｔｙｒ（Ｐ１０）−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号９）
（ＸＩＩｃ），
ここで、Ｐ３およびＰ６〜Ｐ１０はＢｚｌであり、Ｐ４はＢｏｃである；
（ｅ）工程（ｄ）で製造された、Ｐ３およびＰ６〜Ｐ１０がＢｚｌであり、Ｐ４がＢｏｃである式ＸＩＩｃのペプチドのＮ末端保護基を除去して、Ｐ３およびＰ６〜Ｐ１０がＢｚｌであり、Ｐ４がＨであるＣ末端が保護されてＮ末端が脱保護された式ＸＩＩｃのペプチドを得る工程；
（ｆ）Ｐ４がＨであり、Ｐ３およびＰ６〜Ｐ１０がＢｚｌである工程（ｅ）で製造された式ＸＩＩｃのペプチドを、次式の保護されたアミノ酸と反応させて、
Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＯＰ１１）１１−ＯＨ （ＸＩＩＩｃ）
ここで、Ｐ１１はＢｚｌである；
次式のペプチドを得る工程；
Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＯＰ１１）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＰ６）−Ｇｌｕ（ＯＰ７）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＰ８）−Ｇｌｕ（ＯＰ９）−Ｔｙｒ（Ｐ１０）−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号３） （ＸＩＶｃ）
ここで、Ｐ３およびＰ６〜Ｐ１１はＢｚｌである；
（ｇ）工程（ｆ）で製造されたペプチドのＮ末端保護基を除去して、式ＩＩＩｃのＣ末端が保護されたペプチドを得る工程。
【０１０１】
工程（ａ）〜（ｇ）は、ペプチド合成の技術において既知の標準的な反応条件を使用して実施することができる。
【０１０２】
カップリングおよび脱保護工程（ａ）〜（ｇ）は、好ましくは溶液中で行われる。
【０１０３】
カップリング工程（ｂ）、（ｄ）および（ｆ）については、ＤＭＦが溶媒として好ましく使用される。脱保護工程（ａ）、（ｃ）、（ｅ）および（ｇ）は、溶媒としてのトルエンおよびＴＨＦの混合物中において好ましく行われる。
【０１０４】
好ましい実施形態において、カップリング工程（ｂ）、（ｄ）および（ｆ）は、工程（ｂ）についてはＨＯＢｔ、ＥＤＣ・ＨＣｌ、および塩基ＴＥＡの組合せを用いて、工程（ｄ）および（ｆ）についてはそれぞれＤＩＰＥＡを用いて達成される。もう一つの好ましい実施形態において、脱保護工程（ａ）、（ｃ）、（ｅ）および（ｇ）は、ＥＦＡおよびフェノールの使用により行われる。
【０１０５】
工程（ｇ）の後に得られた粗生成物は、従来の方法によって、例えば、分取ＨＰＬＣ、向流分配法またはその均等物を用いて精製することができる。工程（ａ）〜（ｆ）の後に得られる中間体についても、もし精製が必要であれば同じことが言える。
【０１０６】
保護されたペプチド断片ＶＩＩＩｃ、ＩＸｃ、ＸＩ、およびＸＩＩＩｃは、従来のペプチド合成法、例えば溶液相合成（ＨＰＰＳ）または固相合成（ＳＰＰＳ）を使用して調製することができる。ＳＰＰＳの場合、当業者に既知で且つ保護されたペプチドの調製を可能にする全ての樹脂を適用することができる。ここでの樹脂は広義に解釈されるべきである。従って、「樹脂」の用語は、例えば固体支持体単独、またはリンカーに直接連結されて両者の間に任意にハンドルを備えた固体支持体を意味するように理解されるべきである。該樹脂は不溶性でもよく、または可溶性でもよい。可溶性ポリマーであるポリエチレングリコールは可溶性樹脂の固体支持体の一例である。好ましい樹脂は、トリチルまたはブロモベンズヒドリルを備えたポリスチレンをベースと樹脂である。トリチル樹脂の例は、塩化２−クロロトリチル樹脂（ＣＴＣ樹脂）、塩化トリチル樹脂、塩化４−メチルトリチル樹脂、および塩化４−メトキシトリチル樹脂である。好ましくは、ＣＴＣ樹脂は遊離のカルボキシル官能基を含む断片の合成のために適用される。
【０１０７】
好ましい実施形態において、保護されたペプチド断片ＶＩＩＩｃ、ＩＸｃ、ＸＩ、およびＸＩＩＩｃは、溶液相合成を使用して調製される。
【０１０８】
本発明のもう一つの目的は、Ｃ末端が保護された式ＩＩＩｃのペプチドの製造のために、本発明の方法における中間体として有用な保護されたペプチドを提供することである。特に、これらペプチドの一つは式ＸＩＶｃの保護されたペプチドであり、ここでのＰ３およびＰ６〜Ｐ１１はＢｚｌである。
【０１０９】
本発明の方法における中間体として特に有用なもう一つのペプチドは、式ＸＩＩｃの側鎖保護されたペプチドであり、ここでのＰ３およびＰ６〜Ｐ１０はＢｚｌであり、Ｐ４はＢｏｃ保護基であるか、またはＰ４はＨである。
【０１１０】
本発明の方法における中間体として特に有用なもう一つのペプチドは、式Ｘｃの保護されたペプチドであり、ここでのＰ３およびＰ６〜Ｐ１０はＢｚｌであり、Ｐ１７はＢｏｃ保護基であるか、またはＰ１７はＨである。
【０１１１】
本発明の方法における中間体として特に有用なもう一つのペプチドは、式ＩＸｃの保護されたペプチドであり、ここでのＰ６およびＰ７はＢｚｌであり、またＰ１７は好ましくはＢｏｃである。
【０１１２】
本発明の方法における中間体として特に有用なもう一つのペプチドは、式ＶＩＩＩｃの保護されたペプチドであり、ここでのＰ３およびＰ８〜Ｐ１０はＢｚｌであり、Ｐ１６はＢｏｃ保護基であるか、またはＰ１６はＨである。
【０１１３】
更なる側面において、本発明はまた、ビバリルジンの合成における中間体としての、上記ペプチドの何れかの使用に関する。
【実施例】
【０１１４】
以下の非限定的な例によって、本発明の代表的な実施形態を詳細に例証する。
【０１１５】
＜略語＞：
Ｂｏｃ ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル
Ｂｚｌ ベンジル
ＤＣＣ １，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド
ＤＣＨＡ ジシクロヘキシルアミン
ＤＣＵ ジシクロヘキシル尿素
ＤＩＣ ジイソプロピルカルボジイミド
ＤＩＰＥＡ Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＥＤＣ・ＨＣｌ １−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド
塩酸塩
ｅｑｕｉｖ． 当量
ＨＯＢｔ １−ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＭＴＢＥ メチル・ｔｅｒｔ−ブチルエーテル
ＮＭＭ Ｎ−メチルモルホリン
ＨＯＰｆｐ ペンタフルオロフェノール
ＯＰｆｐ ペンタフルオロフェニルエステル
ＨＯＳｕ Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド
Ｓｕ Ｎ−スクシンイミジル
ＴＥＡ トリエチルアミン
ＴＦＡ トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ テトラヒドロフラン
実施例１：Ｈ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＢｚｌ・ＴＦＡの調製
Ｂｏｃ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−ＯＢｚｌ（９０．２０ｋｇ；Hexagon Labs Inc., USA）を、２０℃において、ＴＦＡ（９０Ｌ）、トルエン（３８８Ｌ）およびＴＨＦ（４５Ｌ）の混合物に加えた。ＴＦＡ（１９８Ｌ）を、≦２２℃において該混合物に徐々に添加した。反応を２０℃で完了させた。開裂の完了はＨＰＬＣによりモニターした。
【０１１６】
次いで、ＴＨＦを徐々に添加し、反応混合物を真空中で蒸発させた。トルエンおよびＴＨＦの混合物を用いて３回の共沸蒸留を行った。Ｈ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＢｚｌ・ＴＦＡが油状残渣として得られ、これを酢酸エチルで希釈した。該溶液を、次の化学工程において直接使用した（実施例３参照）。収率：１００％、純度（ＨＰＬＣによる）：９９．３％。
【０１１７】
実施例２：Ｂｏｃ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−ＯＨ・ＴＥＡ（配列番号１０）
の調製
ＴＥＡ（７３．１Ｌ）を、２０℃において、アセトン（７８．４４Ｌ）およびプロセス水（４９１Ｌ）の混合物中で、Ｂｏｃ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−ＯＥｔ（配列番号１０）［９８．１１ｋｇ；Bonora et al, Gazzetta Chimica Italiana 1980, 110,
503−510、Ｂｏｃ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−ＯＨ（Senn Chemicals, Switzerland)およびＨ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−ＯＥｔ・ＨＣｌ（Senn Chemicals, Switzerland）から類似の方法で調製した］の懸濁液に徐々に加えた。この反応を２０℃において完了させた。鹸化の完了はＨＰＬＣでモニターした。該溶液を真空中で蒸発させ、残渣の容積をプロセス水で４５６Ｌに調節した。このＢｏｃ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−ＯＨ・ＴＥＡ（配列番号１０）の溶液を、次の化学工程において直接使用した（実施例３参照）。収率：１００％、純度（ＨＰＬＣによる）：９９．６％。
【０１１８】
実施例３：Ｂｏｃ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＢｚｌ
（配列番号５）の調製
酢酸エチル中のＨ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＢｚｌ・ＴＦＡ（５７３Ｌ，実施例１参照）の溶液のｐＨを、０℃において、ＴＥＡを用いて６〜６．５に調節した。実施例２で得られたＢｏｃ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−ＯＨ（配列番号１０）の溶液を０℃に冷却して加え、続いてＨＯＢｔ（２８．５２ｋｇ）およびＥＤＣ・ＨＣｌ（６９．８１ｋｇ）を添加した。０℃において、ＴＥＡ（１２１Ｌ）を用いてｐＨを６〜６．５に調節した。該反応混合物を、室温に達するまで加温した。
【０１１９】
カップリングが完了したときに（約１０時間後、ＨＰＬＣにより示される）、ＮａＣｌを反応混合物に加えた。該懸濁液を冷却および濾過して固体残渣を得、これをＮａＣｌ水溶液で数回洗浄し、次いで冷却した。得られた固体を真空中で乾燥して、純度９７．９％（ＨＰＬＣによる）を有する１３０．１５ｋｇ（１００％）のＢｏｃ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＢｚｌ（配列番号５）を得た。
【０１２０】
実施例４：Ｈ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＢｚｌ・ＴＦＡ（配列番号５）の調製
Ｂｏｃ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＢｚｌ（配列番号５）（１３１．２０ｋｇ、実施例３参照）を、≦２２℃の温度において、ＴＦＡ（１３１Ｌ）、トルエン（５２５Ｌ）およびＴＨＦ（１０５Ｌ）の混合物に徐々に加えた。この反応混合物に、≦２２℃においてＴＦＡ（２８９Ｌ）を徐々に加えた。２０℃において、約１．５時間以内に反応を完了させた（ＨＰＬＣによりモニターした）。
【０１２１】
反応混合物を真空中で濃縮し、残渣をジイソプロピルエーテル中に投入した。得られた懸濁液を濾過して固体を得、これをジイソプロピルエーテルで数回洗浄し、次いで真空中で乾燥して、純度９７．５％（ＨＰＬＣによる）を有する１３０．９９ｋｇのＨ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＢｚｌ・ＴＦＡ（配列番号５）を得た。
【０１２２】
実施例５：Ｈ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌ・２ＨＣｌの調製
酢酸（３８０Ｌ）中の塩酸（１Ｍ）を、≦２２℃において、酢酸（１９０Ｌ）およびＴＨＦ（１９Ｌ）中のＢｏｃ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌ・ＨＣｌ（９５．００ｋｇ；Hexagon Labs Inc., USA）の懸濁液に徐々に添加した。開裂の完了（約１時間後）をＨＰＬＣによりモニターした。
【０１２３】
反応混合物を真空中で蒸発させた。共沸蒸留を最初は酢酸と共に行い、次いでＤＭＦと共に行った。Ｈ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌ・２ＨＣｌが油状残渣として得られ、これをＤＭＦで希釈して約３８０Ｌの容積を得た。得られた溶液を、次の化学工程において直接使用した（実施例７参照）。収率：１００％、純度（ＨＰＬＣによる）：９６％。
【０１２４】
実施例６：Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−ＯＰｆｐの調製
酢酸エチル（１０Ｌ）中のＨＯＰｆｐ（１７．７８ｋｇ）の溶液を、≦２４℃において、酢酸エチル（１８３Ｌ）中のＢｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−ＯＨ（３３．３３ｋｇ；Bachem AG, Switzerland）の懸濁液に添加した。酢酸エチル（８３．３Ｌ）中のＤＣＣ（２１．４４ｋｇ）の溶液を、−６℃において徐々に反応混合物に加えた。次いで、該混合物を室温にまで加温した。カップリングの完了（約２時間）をＨＰＬＣによりモニターした。
【０１２５】
ＤＣＵ塩を濾過により除去し、酢酸エチルで洗浄した。約８０Ｌの残渣容積に到達するまで、濾液を真空中で蒸発させた。トルエンと共に、数回の共沸蒸留を行った。油状残渣を石油エーテル中で沈殿させた。固体を濾過し、石油エーテルで洗浄し、真空中で乾燥させて、純度９９．３％（ＨＰＬＣによる）を有する２６．３ｋｇ（５４％）のＢｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−ＯＰｆｐを得た。
【０１２６】
実施例７：Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌ・ＨＣｌ（配列番号４）の調製
Ｈ−Ａｒｇ３−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌ・２ＨＣｌ（１０３．００ｋｇ；５６１Ｌ溶液；実施例５参照）の溶液を、２０℃においてＤＭＦ（３６０Ｌ）で希釈した。ＤＭＦ（８２Ｌ）を５５℃未満の真空中で蒸発させた。次いで、Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−ＯＰｆｐ（１２１．５４ｋｇ；実施例６参照）を、２０℃において、Ｈ−Ａｒｇ３−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌ・２ＨＣｌの溶液に加えた。得られた混合物のｐＨを、０℃においてＴＥＡ（５８Ｌ）で６．５に調節した。該反応は、ＨＰＬＣモニタリングで示される通り、０℃において約２０時間で完了した。
【０１２７】
得られた懸濁液の固体画分を濾別し、ＤＭＦで洗浄した。濾液を、残渣容積が約３８５Ｌになるまで真空中で濃縮した。脱イオン水、ＮａＣｌおよび酢酸エチルの混合物を添加した。相を分離し、有機相を水性ＮａＨＣＯ３、塩水中のＨＣｌ溶液、および最後に塩水で連続的に洗浄した。有機相を真空中で濃縮して油状残渣を得、これをトルエンとの共沸蒸留により乾燥し、ジイソプロピルエーテル中において２０℃で沈殿させた。得られた懸濁液を濾過して固体を得、これをジイソプロピルエーテルで数回洗浄し、真空中で乾燥して、９６％の純度（ＨＰＬＣによる）を有する１０６ｋｇのＢｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌ・ＨＣｌ（配列番号４）を得た。
【０１２８】
実施例８：Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌ・ＨＣｌ（配列番号４）の調製
アセトン（６７Ｌ）中のＢｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌ・ＨＣｌ（配列番号４）（３３．５８ｋｇ，実施例７参照）の溶液のｐＨを、２０℃においてＴＦＡ／ＴＨＦ（５０／５０、ｖ／ｖ、０．０３Ｌ）の混合物を用いて４に調節した。得られた混合物を、アセトン（１７Ｌ）中のパラジウム／炭素（palladium on charcoal；３．３ｋｇ）の懸濁液に加えた。約３バールの水素圧において、２０℃で少なくとも２時間の水素化を行った。水素化の完了はＨＰＬＣによりモニターした。
【０１２９】
この反応混合物をセルロースカートリッジ上で濾過した。濾過ケーキをアセトンで数回洗浄した。合体させた濾液を真空中で濃縮した。得られた油状残渣を、アセトンおよびトルエンの混合物を使用した共沸蒸留により乾燥した。該油状残渣を酢酸エチルで希釈して、ジイソプロピルエーテルの中に投入した。得られた懸濁液を濾過し、沈殿物をジイソプロピルエーテルで数回洗浄し、真空中で乾燥して、純度９９．４％（ＨＰＬＣによる）を有する３１．４ｋｇのＢｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＯＨ（配列番号４）を得た。
【０１３０】
実施例９：Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＢｚｌ（配列番号２）の調製
ＤＭＦ（５０４Ｌ）および脱イオン水（２５Ｌ）中のＨ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＢｚｌ・ＴＦＡ（配列番号５）（２５．２０ｋｇ，実施例４参照）の溶液のｐＨを、≦２２℃において、ＴＥＡ（９Ｌ）を用いて６．５〜７に調節した。Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＯＨ（配列番号４）（２５．４６ｋｇ、実施例８参照）およびＨＯＢｔ（１．０２ｋｇ）を、≦２２℃において徐々に加えた。ＤＩＣ（９．５Ｌ）を、≦１２℃において反応混合物に添加した。得られた混合物のｐＨを、≦１２℃においてＴＥＡ（０．３Ｌ）を用いて７〜７．５に調節した。１０℃において１０日間で、ＨＰＬＣおよびＴＬＣによりモニターしながら該反応を完了させた。
【０１３１】
反応混合物を真空中で濃縮して油状残渣を得、これを酢酸エチルおよびジイソプロピルエーテルの混合物中で沈殿させた。上清液を数回除去し、同容量のジイソプロピルエーテルで置換した。該混合物を濾過して固体を得、これをジイソプロピルエーテルで３回洗浄し、真空中で乾燥して、８３．４％（ＨＰＬＣによる）の純度を有する３０．５０ｋｇ（７６％）のＢｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＢｚｌ（配列番号２）を得た。
【０１３２】
実施例１０：Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＨ（配列番号２）の調製
アセトン（４３Ｌ）および脱イオン水（９Ｌ）の混合物中のＢｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＢｚｌ（配列番号２）（２３．４３ｋｇの正味ペプチド重量、実施例９参照）を、パラジウム／炭素（０．７５ｋｇ）のアセトン（３Ｌ）中懸濁液に加えた。約３バールの水素圧において、２０℃で１１時間の水素化を行った。水素化の完了はＨＰＬＣによってモニターした。
【０１３３】
脱イオン水（３６Ｌ）を反応混合物に添加し、得られた混合物をセルロースカートリッジ上で濾過した。この濾過ケーキを、脱イオン水およびアセトンの２：８混合物で数回洗浄した。合体させた濾液を真空中で濾過した。得られた濾過を、ＤＭＦおよびトルエンの混合物を用いた共沸蒸留により乾燥して、８０％の純度（ＨＰＬＣによる）を有する２１．５ｋｇのＢｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＨ（配列番号２）を得た。
【０１３４】
実施例１１：Ｂｏｃ−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌの調製
Ｈ−Ｌｅｕ−ＯＢｚｌ・ｐ−トシレート（２２．２ｋｇ；Bachem AG, Switzerland）を、酢酸エチル（１０８Ｌ）中に懸濁させ、次いでＴＥＡ（約７．１Ｌ）を室温で加えた。Ｂｏｃ−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−ＯＨ（２０ｋｇ；Senn Chemicals, Switzerland）およびＨＯＢｔ（７．３ｋｇ）を固体として加えた。ＤＭＦ（４０Ｌ）中のＤＣＣ（１２．２ｋｇ）の溶液を、−６℃において該混合物に加えた。反応の完了はＴＬＣおよびＨＰＬＣによりモニターした。
【０１３５】
形成されたＤＣＵを濾過により除去した。濾液を、ＫＨＳＯ４水溶液および塩水；ＫＨＳＯ４水溶液；ＮａＨＣＯ３水溶液で、および塩水で連続的に洗浄した。有機相を真空中で蒸発させた。その残渣を酢酸エチル中に溶解し、次いで石油エーテル中で沈殿させた。固体を濾過し、石油エーテルで洗浄し、真空中で乾燥させた。母液を真空中で濃縮し、石油エーテル中で沈殿させた後に、二回目の収穫を得た。固体を濾過し、石油エーテルで洗浄し、真空中で乾燥した。これら二つの収穫物を混合して、９７％の純度（ＨＰＬＣによる）を有する２５．９ｋｇ（８４％）のＢｏｃ−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌを得た。
【０１３６】
実施例１２：Ｈ−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ・ＴＦＡの調製
ＴＥＡ（８３Ｌ）を、２０℃において、Ｂｏｃ−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（２５．９ｋｇ、実施例１１参照）、フェノール（１．３ｋｇ）、トルエン（１０４Ｌ）およびＴＨＦ（２１Ｌ）の混合物に徐々に添加した。反応を２０℃において完了させた。開裂の完了はＨＰＬＣによりモニターした。
【０１３７】
反応混合物を真空中で蒸発させた。トルエンおよびＴＨＦの混合物を用いて共沸蒸留を行った。次いで、酢酸エチルおよび石油エーテルを残渣に加えた。固体を濾過し、酢酸エチルおよび石油エーテルの混合物で洗浄し、次いで石油エーテルで洗浄し、最後に真空中で乾燥して、９８％の純度（ＨＰＬＣによる）を有する２３．７ｋｇ（８９％）のＨ−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ・ＴＦＡを得た。
【０１３８】
実施例１３：Ｂｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号６）の調製
Ｂｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−ＯＳｕ（４２．９０ｋｇ、Senn Chemicals, Switzerland）を、Ｈ−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ−ＯＢｚｌ・ＴＦＡ（２３．７ｋｇ、実施例１２参照）のＤＭＦ（８０Ｌ）中溶液に加えた。反応混合物のｐＨを、０℃において、ＤＩＰＥＡを使用して徐々に７〜７．５に調節した。該混合物の反応を、２０℃において完了させた。カップリングの完了はＨＰＬＣによりモニターされた。
【０１３９】
反応混合物を真空中で蒸発させ、油状残渣をプロセス水中に投入した。固体を濾過し、プロセス水で洗浄し、アセトニトリルおよびプロセス水の混合物中で再度スラリー化し、最簿に真空中で乾燥して、９２％の純度（ＨＰＬＣによる）を有する４０．３ｋｇのＢｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号６）を得た。
【０１４０】
実施例１４：Ｈ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ・ＴＦＡ（配列番号６）の調製
Ｂｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号６）（１１７．４５ｋｇ、実施例１３参照）を、１５℃において、ＴＦＡ（１１７Ｌ）、フェノール（５．８７ｋｇ）、トルエン（４７０Ｌ）およびＴＨＦ（９４Ｌ）の混合物に徐々に加えた。該混合物に、≦１７℃において追加のＴＦＡ（２８２Ｌ）を徐々に添加した。この反応を、１５℃において完了させた。開裂の完了（３時間）はＨＰＬＣによりモニターした。
【０１４１】
反応混合物を、真空中において３５℃未満で蒸発させた。残留するＴＦＡを、トルエン／ＴＨＦの混合物を用いて共沸蒸留し、次いでトルエンを用いて共沸蒸留した。油状残渣にＭＴＢＥ（８２５Ｌ）を加えた。次いで、石油エーテルを添加して懸濁液を得た。冷却した後、固体を濾過し、石油エーテルで数回洗浄した。石油エーテル中に再懸濁させ、濾過した後、固体を石油エーテルで洗浄した。この手順を一度繰り返した。次いで、固体を真空中で乾燥して、９６％の純度（ＨＰＬＣによる）を有する１１４．８６ｋｇ（９６％）のＨ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ・ＴＦＡ（配列番号６）を得た。
【０１４２】
実施例１５：Ｂｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−ＯＨ・ＤＣＨＡ（配列番号７）の調製
Ｂｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−ＯＳｕ（６２ｋｇ、Senn Chemicals, Switzerland）を、Ｈ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−ＯＨ・ＴＦＡ（３６ｋｇ、Bachem AG, Switzerland）のＤＭＦ（４３３Ｌ）中の溶液に徐々に加えた。ｐＨを、０℃においてＤＩＰＥＡを用いて７〜７．５に調節した。反応の完了をＨＰＬＣによりモニターした。
【０１４３】
反応混合物を真空中で蒸発させ、油状残渣を酢酸エチルで希釈した。この混合物をＫＨＳＯ４水溶液および塩水で洗浄した。有機相を真空中で蒸発し、油状残渣をトルエンとの共沸蒸留により乾燥させた。油状残渣をトルエンで希釈し、ｐＨをＤＣＨＡで７〜７．５に調節した。次いで、石油エーテルを該混合物に添加した。こうして得られた固体を濾過し、石油エーテルで洗浄し、真空中で乾燥して、８９％の純度（ＨＰＬＣによる）を有する１０２ｋｇのＢｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−ＯＨ・ＤＣＨＡ（配列番号７）を得た。
【０１４４】
実施例１６：Ｂｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号８）の調製
Ｂｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−ＯＨ・ＤＣＨＡ（配列番号７）（９８．８８ｋｇ、実施例１５参照）およびＨＯＢｔ（１３．８２ｋｇ）を、≦２４℃において、Ｈ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ・ＴＦＡ（配列番号６）（１１０．３９ｋｇ、正味のペプチド重量、実施例１４参照）のＤＭＦ（４５１Ｌ）中溶液に徐々に加えた。該混合物に、ＥＤＣ・ＨＣｌ（２２．９９ｋｇ）を−６℃において小量ずつ加えた。反応混合物のｐＨを、−６℃においてＴＥＡ（１２Ｌ）で６．５〜７に調節した。ＨＰＬＣでモニターしながら、カップリングを１０℃において１６時間で完了させた。
【０１４５】
塩を濾過により除去した。濾液を真空中で蒸発させた。油状残渣（４７０Ｌ）を、ＮａＨＣＯ３溶液中で沈殿させた。固体を濾過し、プロセス水で数回洗浄した。プロセス水中に再懸濁させた後、アセトニトリルを加えた。次いで、該懸濁液を冷却した。固体を濾過し、水で洗浄し、真空中で乾燥して、９０％の純度（ＨＰＬＣによる）を有する１６０．３４ｋｇ（８８％）のＢｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号８）を得た。
【０１４６】
実施例１７：Ｈ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ・ＴＦＡ（配列番号８）の調製
Ｂｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号８）（７２．２４ｋｇ、実施例１６参照）を、≦１５℃において、ＴＦＡ（７２Ｌ）、トルエン（２８９Ｌ）およびＴＨＦ（６Ｌ）の混合物に加えた。該混合物に、≦２２℃において追加のＴＦＡ（１５９Ｌ）を徐々に添加した。２０℃において２．５時間で、この反応を完了させた（ＨＰＬＣによりモニターした）。反応混合物を真空中で蒸発させた。残留ＴＦＡを、トルエンおよびＴＨＦの混合物を用いた数回の共沸蒸留により除去した。油状残渣をトルエンで希釈し、ジイソプロピルエーテルの中に投入した。固体を濾過し、ジイソプロピルエーテルで数回洗浄した。アセトニトリルおよびジイソプロピルエーテルの混合物中に再懸濁させた後、次に固体を濾過し、ジイソプロピルエーテルで数回洗浄し、最後に真空中で乾燥して、８８．９％の純度（ＨＰＬＣによる）を有する６１．７ｋｇ（８７％）のＨ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ・ＴＦＡ（配列番号８）を得た。
【０１４７】
実施例１８：Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号９）の調製
Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ（１０．０３ｋｇ；Senn Chemicals AG, Switzerland）およびＨＯＢｔ（４．９５ｋｇ）を、≦２４℃において、Ｈ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ・ＴＦＡ（配列番号８）（６１．６３ｋｇ、実施例１７参照）のＤＭＦ（２６４Ｌ）中溶液に徐々に加えた。ＥＤＣ・ＨＣｌ（８．５３ｋｇ）を、−５℃において徐々に加えた。反応混合物のｐＨを、−５℃において、ＤＩＰＥＡ（４７．５Ｌ）を用いて徐々に６．５〜７に調節した。カップリングは１０℃において２３時間で完了させた（ＨＰＬＣによりモニターした）。
【０１４８】
反応混合物を真空中で蒸発させた。油状残渣をＮａＨＣＯ３溶液中に懸濁させた。固体を濾過し、プロセス水で数回洗浄し、真空中で乾燥して、８７．９％の純度（ＨＰＬＣによる）を有する６７．６４ｋｇ（９５％）のＢｏｃ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号９）を得た。
【０１４９】
実施例１９：Ｈ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ・ＴＦＡ（配列番号９）の調製
Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号９）（６７．６６ｋｇ、実施例１８参照）を、１５℃において、ＴＦＡ（６８Ｌ）、フェノール（３．３８ｋｇ）、トルエン（２７１Ｌ）およびＴＨＦ（５４Ｌ）の混合物に少しずつ加えた。この混合物に、追加のＴＦＡ（１４９）を１５℃において加えた。開裂の完了（４．３時間）はＨＰＬＣによってモニターした。
【０１５０】
反応混合物を真空中で蒸発させた。残留ＴＦＡを、トルエンおよびＴＨＦの混合物を用いた数回の共沸蒸留により除去した。油状の残渣をトルエンで希釈し、ジイソプロピルエーテルの中に投入した。固体を濾過し、ジイソプロピルエーテルで数回洗浄し、真空中で乾燥して、８６．６％の純度（ＨＰＬＣによる）を有する６７．２５ｋｇ（９９％）のＨ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ・ＴＦＡ（配列番号９）を得た。
【０１５１】
実施例２０：Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号３）の調製
Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）１１−ＯＨ（２０．２２ｋｇ）（Senn Chemicals AG, Switzerland）およびＨＯＢｔ（８．４２ｋｇ）を、≦２０℃において、Ｈ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ・ＴＦＡ（配列番号９）（６０．４６ｋｇ正味ペプチド重量、実施例１９参照）のＤＭＦ（３７０Ｌ）中溶液に小量ずつ加えた。この反応混合物に、−５℃において、ＥＤＣ・ＨＣｌ（１３．３８ｋｇ）を徐々に加えた。得られた混合物のｐＨを、−５℃において、ＤＩＰＥＡ（２７Ｌ）で徐々に６．５〜７に調節した。次いで、１０℃で３５時間、カップリング反応を完了させた（ＨＰＬＣによりモニターした)。
【０１５２】
次いで、反応混合物を真空中で濃縮した。得られた油状残渣を、ＮａＨＣＯ３水溶液に徐々に添加した。得られた懸濁液を濾過し、脱イオン水の中に再懸濁させた。濾過し、脱イオン水で数回およびアセトニトリルと脱イオン水の混合物で１回の洗浄を行った後、得られた固体を真空中で乾燥させて、８１．４％の純度（ＨＰＬＣによる）を有する６４ｋｇ（９６％）のＢｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号３）を得た。
【０１５３】
実施例２１：Ｈ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ・ＴＦＡ（配列番号３）の調製
Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号３）（６４．００ｋｇ、実施例２０参照）を、１５℃未満の温度で小量ずつ、ＴＦＡ（６４Ｌ）、フェノール（３．２ｋｇ）、トルエン（２６５Ｌ）およびＴＨＦ（５１Ｌ）の混合物に加えた。この反応混合物に、≦１５℃において追加のＴＦＡ（１４１Ｌ）を徐々に加えた。開裂は、１５℃において４．８時間で行われた（ＨＰＬＣによりモニターした）。反応混合物を真空中で濃縮した。得られた油状残渣を、２０℃での沈殿のためにジイソプロピルエーテルに加えた。得られた懸濁液を濾過し、ジイソプロピルエーテル中に再懸濁させ、再度濾過した。固体をジイソプロピルエーテルで洗浄し、真空中で乾燥して、７７．６％の純度（ＨＰＬＣによる）を有する６１．４ｋｇ（正味のペプチド重量）（９５％）のＨ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ・ＴＦＡ（配列番号３）を得た。
【０１５４】
実施例２２：Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号１）の調製
Ｈ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ・ＴＦＡ（配列番号３）（１０４．４０ｋｇ、実施例２１参照）およびＨＯＢｔ（８．４２ｋｇ）を、Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＨ（配列番号２）（６５．４７ｋｇ、実施例１０参照）のＤＭＦ（３４５Ｌ）中溶液に、≦２４℃において少しずつ加えた。ＥＤＣ・ＨＣｌ（１２．４６ｋｇ）を−５℃において徐々に加えた。−５℃においてＴＥＡ（１６．５Ｌ）を用い、反応混合物のｐＨを徐々に６．５〜７に調節した。−５℃において２２時間でカップリングを完了させた（ＨＰＬＣによりモニターした）。
【０１５５】
反応混合物を脱イオン水で徐々に希釈した。得られた懸濁液を濾過し、脱イオン水で洗浄し、真空中で乾燥して、８１．４％の純度（ＨＰＬＣによる）を有する７２ｋｇ（５０％）のＢｏｃ−Ｄ−１Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号１）を得た。
【０１５６】
実施例２３：Ｈ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＨ・２ＴＦＡ（ビバリルジン）（配列番号１）の調製
Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号１）（１５．００ｋｇ、実施例２２参照）の酢酸（５３Ｌ）中の懸濁液を、パラジウム／炭素（palladium on charcoal、１．１３ｋｇ）および酢酸（５Ｌ）の混合物に加えた。３バールの水素圧の下に、≦３７℃において水素化を行った（ＨＰＬＣによりモニターした）。
【０１５７】
完了（５時間）した後、反応混合物を冷却し、脱イオン水および酢酸で希釈した。得られた混合物をセルロースカートリッジ上で濾過し、これを酢酸およびプロセス水の混合物で数回溶出させた。濾液を真空中で濃縮した。得られた残渣を、カールフィッシャー滴定により、その水含量について試験した（水含量＜５．０％）。
【０１５８】
次いで、油状残渣にトルエンを加え、続いてＴＦＡを添加した。開裂の完了（１時間後）はＨＰＬＣによりモニターした。
【０１５９】
反応混合物を真空中で濃縮した。得られた油状残渣を、沈殿のためにジイソプロピルエーテルに加えた。得られた懸濁液を濾過して固体を得、これをジイソプロピルエーテルで数回洗浄し、真空中で乾燥して、６５％の粗製ビバリルジンの純度（ＨＰＬＣに夜）を有する８．４１ｋｇ（正味ペプチド重量）（７８％）の粗製Ｈ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−-Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−Ｈ・２ＴＦＡ（ビバリルジン）（配列番号１）を得た。Ｄ−Ｐｈｅ１２−ビバリルジン不純物はＨＰＬＣにより検出されなかった。即ち、１２位におけるラセミ化は起きなかった。
【０１６０】
この粗製ペプチドを、Ｃ１８逆相静止相上での分取ＨＰＬＣによって精製した。第一の工程において、粗製ビバルリジンは、酢酸アンモニウム／水／アセトニトリルを用いた勾配溶出によって精製され、第二の工程では、トリフルオロ酢酸／水／アセトニトリルを用いた勾配溶出によって生成された。純粋な生成物を含有する溶出画分を濃縮し、凍結乾燥して、９９％の純度（ＨＰＬＣによる）を持った白色粉末として、５．８９ｋｇ（７０％粗製ペプチド中のビバリルジン含量に基づく）のＨ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−-Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−Ｈ・２ＴＦＡ（ビバリルジン）（配列番号１）を得、またＤ−Ｔｙｒ１９−ビバリルジンは検出されず、検出された他の不純物の各々は０．２％以下（ＨＰＬＣによる）であった。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
次式のビバリルジンを溶液相で製造する方法であって：
Ｈ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＨ（配列番号１） （Ｉ）
（ａ）次式の任意に側鎖保護されたペプチドを、
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＯＨ（配列番号４） （Ｖ）、
ここでのＰ１は、接触水素化に対して安定な保護基である
次式の任意に側鎖保護されたペプチドと反応させて、
Ｈ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＰ２（配列番号５）（ＶＩ）
ここでのＰ２は、接触水素化により除去可能であり、且つ任意の側鎖保護基に対して直交性の保護基である
次式の任意に側鎖保護されたペプチドを製造する工程と、
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＰ２（配列番号２） （ＶＩＩ）
ここでのＰ１およびＰ２は上記で定義した通りである；
（ｂ）工程（ａ）で製造されたペプチドのＰ２を除去して、次式の任意に側鎖保護されたペプチドを製造する工程と、
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＨ（配列番号２） （ＩＩ）
ここでのＰ１は上記で定義した通りである；
（ｃ）次式の側鎖保護されたペプチドを、
Ｈ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号８） （Ｘ）
ここでのＰ３は、接触水素化により除去可能な保護基である
次式のフェニルアラニンと反応させて、
Ｐ４−Ｐｈｅ１２−ＯＨ （ＸＩ）
ここでのＰ４は、式Ｘのペプチドの側鎖保護基およびＰ３に対して直交性の保護基である
次式の側鎖保護されたペプチドを製造する工程と、
Ｐ４−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号９） （ＸＩＩ）、
ここでのＰ３およびＰ４は上記で定義した通りである；
（ｄ）工程（ｃ）で製造したペプチドのＰ４を除去して、対応するＮ末端が脱保護された式ＸＩＩの側鎖保護されたペプチドを製造する工程と；
（ｅ）工程（ｄ）で製造された式ＸＩＩのペプチドを、次式の側鎖保護されたアスパラギン酸と反応させて、
Ｐ５−Ａｓｐ１１−ＯＨ （ＸＩＩＩ）
ここでのＰ５は、式ＸＩＩおよびＸＩＩＩのペプチド／アミノ酸の側鎖保護基およびＰ３に対して直交性の保護基である
次式の側鎖保護されたペプチドを製造する工程と、
Ｐ５−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号３） （ＸＩＶ）
ここでのＰ３およびＰ５は上記で定義した通りである；
（ｆ）工程（ｅ）で製造されたペプチドのＰ５を除去して、次式の側鎖保護されたペプチドを製造する工程と、
Ｈ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号３） （ＩＩＩ）
ここでのＰ３は上記で定義した通りである；
（ｇ）工程（ｂ）で製造された式ＩＩの任意に側鎖保護されたペプチドを、工程（ｆ）で製造された式ＩＩＩの側鎖保護されたペプチドと反応させて、次式の側鎖保護されたペプチドを製造する工程と、
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−-Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号１） （ＩＶ）、
ここでのＰ１およびＰ３は上記で定義した通りである；
（ｈ）工程（ｇ）で製造されたペプチドのＰ１、Ｐ３および側鎖保護基を除去して、式Ｉのビバリルジンを製造する工程
を含んでなる方法。
【請求項２】
請求項１に記載の方法であって、Ｐ１、Ｐ４およびＰ５の少なくとも一つが、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、２−（ビフェニル−４−イル）プロパ−２−イルオキシカルボニル（Ｂｐｏｃ）、２−（３、５ジメトキシフェニルｌ）プロパ−２−イルオキシカルボニル（Ｄｄｚ）、フルオレン−９−イルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）または２−（メチルスルホニル）エトキシカルボニル（Ｍｓｃ）である方法。
【請求項３】
請求項２に記載の方法であって、Ｐ１、Ｐ４およびＰ５の少なくとも一つがＢｏｃである方法。
【請求項４】
請求項１〜３の何れか１項に記載の方法であって、Ｐ２およびＰ３の少なくとも一つがベンジル（Ｂｚｌ）、ベンジルオキシメチル（Ｂｏｍ）、フェナシル（Ｐａｃ）、４−ニトロベンジル（ＯＮｂｚ）、４-ピリジルメチル（Ｐｉｃ）、または４−スルホベンジルであり、但し、Ｐ４またはＰ５がＢｏｃ、ＢｐｏｃまたはＤｄｚであるならばＰ３はＢｏｍではない方法。
【請求項５】
請求項４に記載の方法であって、Ｐ２およびＰ３の少なくとも一つがＢｚｌである方法。
【請求項６】
請求項１〜５の何れか１項に記載の方法であって、式ＩＩＩ、ＩＶ、ＸおよびＸＩＩ〜ＸＩＶの側鎖保護されたペプチド／アミノ酸は、ベンジル（Ｂｚｌ）、ベンジルオキシメチル（Ｂｏｍ）、フェナシル（Ｐａｃ）、４−ニトロベンジル（ＯＮｂｚ）、４−ピリジルメチル（Ｐｉｃ）、および４−スルホベンジルからなる群から選択される少なくとも一つの側鎖保護基で保護され、但し、Ｐ４またはＰ５がＢｏｃ、ＢｐｏｃまたはＤｄｚであるならば側鎖保護基はＢｏｍではない方法。
【請求項７】
請求項６に記載の方法であって、式ＩＩＩ、ＩＶ、ＸおよびＸＩＩ〜ＸＩＶの側鎖保護されたペプチド／アミノ酸は、少なくとも一つのＢｚｌで保護される方法。
【請求項８】
請求項１〜７の何れか１項に記載の方法であって、工程（ａ）において、式Ｖおよび式ＶＩの任意に側鎖保護されたペプチドの少なくとも一つは側鎖保護されていない方法。
【請求項９】
請求項１〜８の何れか１項に記載の方法であって、工程（ｃ）において、式Ｘのペプチドは次式のものである方法：
Ｈ−Ｇｌｕ（ＯＰ６）−Ｇｌｕ（ＯＰ７）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＰ８）−Ｇｌｕ（ＯＰ９）−Ｔｙｒ（Ｐ１０）−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号８） （Ｘｂ）
ここで、
Ｐ３は接触水素化により除去可能な保護基であり、Ｐ６〜Ｐ１０の各々はＢｚｌ、Ｂｏｍ、Ｐａｃ、ＯＮｂｚ、Ｐｉｃおよび４−スルホベンジルからなる群から独立に選択され、
また工程（ｅ）において、式ＸＩＩＩの側鎖保護されたアスパラギン酸は
Ｐ５−Ａｓｐ（ＯＰ１１）１１−ＯＨ
であり、
ここで、
Ｐ５は、式ＸＩＩおよびＸＩＩＩのペプチド／アミノ酸の側鎖保護基およびＰ３に対して直交性であり、
またＰ１１はＢｚｌ、Ｂｏｍ、Ｐａｃ、ＯＮｂｚ、Ｐｉｃおよび４−スルホベンジルからなる群から独立に選択される。
【請求項１０】
請求項９に記載の方法であって、Ｐ３は、Ｂｚｌ、Ｂｏｍ、Ｐａｃ、ＯＮｂｚ、Ｐｉｃまたは４−スルホベンジルであり、Ｐ６〜Ｐ１０の各々は独立に、Ｂｚｌ、Ｂｏｍ、Ｐａｃ、ＯＮｂｚ、Ｐｉｃまたは４−スルホベンジルであり、Ｐ５は、Ｂｏｃ、Ｂｐｏｃ、Ｄｄｚ、ＦｍｏｃまたはＭｓｃであり、Ｐ１１は、Ｂｚｌ、Ｂｏｍ、Ｐａｃ、ＯＮｂｚ、Ｐｉｃまたは４−スルホベンジルである方法。
【請求項１１】
請求項１０に記載の方法であって、Ｐ３はＢｚｌであり、Ｐ６〜Ｐ１０の各々はＢｚｌであり、Ｐ５はＢｏｃであり、Ｐ１１はＢｚｌである方法。
【請求項１２】
請求項９〜１１の何れか１項に記載の方法であって、Ｐ１、Ｐ４およびＰ５はＢｏｃであり、またＰ２、Ｐ３、Ｐ６、Ｐ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１０およびＰ１１はＢｚｌである方法。
【請求項１３】
請求項１〜１２の何れか１項に記載の方法であって、工程（ｈ）において、最初にＰ３および側鎖保護基が同時に除去され、Ｐ１はその後に除去される方法。
【請求項１４】
請求項１３に記載の方法であって、Ｐ３および側鎖保護基の同時除去の後に得られたペプチドは、Ｐ１を除去する前に単離されない方法。
【請求項１５】
請求項１〜１４の何れか１項に記載の方法であって、除去工程（ｂ）および（ｈ）の少なくとも一つは、水素ガスおよび活性炭上のパラジウムを用いて溶媒中で行われる方法。
【請求項１６】
請求項１５に記載の方法であって、前記溶媒は、Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミド、アセトン、アセトンと水の混合物、酢酸、および酢酸と水の混合物からなる群から選択される方法。
【請求項１７】
請求項１〜１６の何れか１項に記載の方法であって、式Ｖの任意に側鎖保護されたペプチド、式ＶＩの任意に側鎖保護されたペプチド、および式Ｘの側鎖保護されたペプチドからなる群から選択される少なくとも一つのペプチドは、先行プロセスにおいて溶液相合成により調製される方法。
【請求項１８】
請求項１〜１６の何れか１項に記載の方法であって、式Ｖの任意に側鎖保護されたペプ
チド、式ＶＩの任意に側鎖保護されたペプチド、および式Ｘの側鎖保護されたペプチドからなる群から選択される少なくとも一つのペプチドは、先行プロセスにおいて固相合成により調製される方法。
【請求項１９】
下記からなる群から選択されるペプチド：
（ｉ）次式の任意に側鎖保護されたペプチド
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＯＨ
（配列番号４） （Ｖ）、
ここでのＰ１は接触水素化に対して安定な保護基である；
（ｉｉ）次式の任意に側鎖保護されたペプチド
Ｈ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＰ２
（配列番号５） （ＶＩ）
ここでのＰ２は接触水素化により除去可能であり、且つ任意の側鎖保護基に対して直交性の保護基である；
（ｉｉｉ）次式の任意に側鎖保護されたペプチド
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＰ２（配列番号２） （ＶＩＩ）
ここでのＰ１およびＰ２は上記で定義した通りである；
（ｉｖ）次式の側鎖保護されたペプチド
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＨ（配列番号２） （ＩＩａ）
ここでのＰ１は、Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｇｌｙ１０−ＯＨを除き、上記で定義した通りである；
（ｖ）次式の側鎖保護されていないペプチド
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＨ（配列番号２） （ＩＩｂ）
ここでのＰ１は上記で定義した通りである；
（ｖｉ）次式の側鎖保護されたペプチド
Ｈ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号８） （Ｘ）、
ここでのＰ３は、接触水素化により除去可能な保護基である；
（ｖｉｉ）次式の側鎖保護されたペプチド
Ｐ４−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号９） （ＸＩＩ）
ここでのＰ３は上記で定義した通りであり、またＰ４は式Ｘのペプチドの側鎖保護基およびＰ３に対して直交性の保護基であるか、またはＰ４は水素である；
（ｖｉｉｉ）次式の側鎖保護されたペプチド
Ｐ５−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号３） （ＸＩＶ）
ここでのＰ５は、式ＸＩＩおよびＸＩＩＩのペプチド／アミノ酸の側鎖保護基およびＰ３に対して直交性の保護基であり、Ｐ３は、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｌｅｕ２０−ＯｔＢｕを除き、上記で定義した通りである；
（ｉｘ）次式の側鎖保護されたペプチド
Ｈ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号３） （ＩＩＩ）
ここでのＰ３は、Ｈ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｌｅｕ２０−ＯｔＢｕを除き、上記で定義した通りである；および
（ｘ）次式の側鎖保護されたペプチド
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号１） （ＩＶ）
ここでのＰ１およびＰ３は、Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｇｌｙ１０−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｌｅｕ２０−ＯｔＢｕを除き、上記で定義した通りである。
【請求項２０】
請求項１９に記載のペプチドであって、前記式Ｖの任意に側鎖保護されたペプチドは、Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＯＨ（配列番号４）であるペプチド。
【請求項２１】
請求項１９に記載のペプチドであって、前記式ＶＩの任意に側鎖保護されたペプチドは、Ｈ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＢｚｌ（配列番号５）であるペプチド。
【請求項２２】
請求項１９に記載のペプチドであって、前記式ＶＩＩの任意に側鎖保護されたペプチドは、Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＢｚｌ（配列番号２）であるペプチド。
【請求項２３】
請求項１９に記載のペプチドであって、前記式ＩＩｂの側鎖保護されたペプチドは、Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＨ（配列番号２）であるペプチド。
【請求項２４】
請求項１９に記載のペプチドであって、前記式Ｘの側鎖保護されたペプチドは、Ｈ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号８）であるペプチド。
【請求項２５】
請求項１９に記載のペプチドであって、前記式ＸＩＩの側鎖保護されたペプチドは、
Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号９）、または
Ｈ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号９）
であるペプチド。
【請求項２６】
請求項１９に記載のペプチドであって、前記式ＸＩＶの側鎖保護されたペプチドは、Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号３）であるペプチド。
【請求項２７】
請求項１９に記載のペプチドであって、前記式ＩＩＩの側鎖保護されたペプチドは、Ｈ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号３）であるペプチド。
【請求項２８】
請求項１９に記載のペプチドであって、前記式ＩＶの側鎖保護されたペプチドは、Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号１）であるペプチド。
【請求項２９】
ビバリルジンの合成における中間体としての、請求項１９〜２８の何れか１項に記載のペプチドの使用。
【請求項１】
次式のビバリルジンを溶液相で製造する方法であって：
Ｈ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＨ（配列番号１） （Ｉ）
（ａ）次式の任意に側鎖保護されたペプチドを、
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＯＨ（配列番号４） （Ｖ）、
ここでのＰ１は、接触水素化に対して安定な保護基である
次式の任意に側鎖保護されたペプチドと反応させて、
Ｈ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＰ２（配列番号５）（ＶＩ）
ここでのＰ２は、接触水素化により除去可能であり、且つ任意の側鎖保護基に対して直交性の保護基である
次式の任意に側鎖保護されたペプチドを製造する工程と、
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＰ２（配列番号２） （ＶＩＩ）
ここでのＰ１およびＰ２は上記で定義した通りである；
（ｂ）工程（ａ）で製造されたペプチドのＰ２を除去して、次式の任意に側鎖保護されたペプチドを製造する工程と、
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＨ（配列番号２） （ＩＩ）
ここでのＰ１は上記で定義した通りである；
（ｃ）次式の側鎖保護されたペプチドを、
Ｈ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号８） （Ｘ）
ここでのＰ３は、接触水素化により除去可能な保護基である
次式のフェニルアラニンと反応させて、
Ｐ４−Ｐｈｅ１２−ＯＨ （ＸＩ）
ここでのＰ４は、式Ｘのペプチドの側鎖保護基およびＰ３に対して直交性の保護基である
次式の側鎖保護されたペプチドを製造する工程と、
Ｐ４−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号９） （ＸＩＩ）、
ここでのＰ３およびＰ４は上記で定義した通りである；
（ｄ）工程（ｃ）で製造したペプチドのＰ４を除去して、対応するＮ末端が脱保護された式ＸＩＩの側鎖保護されたペプチドを製造する工程と；
（ｅ）工程（ｄ）で製造された式ＸＩＩのペプチドを、次式の側鎖保護されたアスパラギン酸と反応させて、
Ｐ５−Ａｓｐ１１−ＯＨ （ＸＩＩＩ）
ここでのＰ５は、式ＸＩＩおよびＸＩＩＩのペプチド／アミノ酸の側鎖保護基およびＰ３に対して直交性の保護基である
次式の側鎖保護されたペプチドを製造する工程と、
Ｐ５−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号３） （ＸＩＶ）
ここでのＰ３およびＰ５は上記で定義した通りである；
（ｆ）工程（ｅ）で製造されたペプチドのＰ５を除去して、次式の側鎖保護されたペプチドを製造する工程と、
Ｈ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号３） （ＩＩＩ）
ここでのＰ３は上記で定義した通りである；
（ｇ）工程（ｂ）で製造された式ＩＩの任意に側鎖保護されたペプチドを、工程（ｆ）で製造された式ＩＩＩの側鎖保護されたペプチドと反応させて、次式の側鎖保護されたペプチドを製造する工程と、
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−-Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号１） （ＩＶ）、
ここでのＰ１およびＰ３は上記で定義した通りである；
（ｈ）工程（ｇ）で製造されたペプチドのＰ１、Ｐ３および側鎖保護基を除去して、式Ｉのビバリルジンを製造する工程
を含んでなる方法。
【請求項２】
請求項１に記載の方法であって、Ｐ１、Ｐ４およびＰ５の少なくとも一つが、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、２−（ビフェニル−４−イル）プロパ−２−イルオキシカルボニル（Ｂｐｏｃ）、２−（３、５ジメトキシフェニルｌ）プロパ−２−イルオキシカルボニル（Ｄｄｚ）、フルオレン−９−イルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）または２−（メチルスルホニル）エトキシカルボニル（Ｍｓｃ）である方法。
【請求項３】
請求項２に記載の方法であって、Ｐ１、Ｐ４およびＰ５の少なくとも一つがＢｏｃである方法。
【請求項４】
請求項１〜３の何れか１項に記載の方法であって、Ｐ２およびＰ３の少なくとも一つがベンジル（Ｂｚｌ）、ベンジルオキシメチル（Ｂｏｍ）、フェナシル（Ｐａｃ）、４−ニトロベンジル（ＯＮｂｚ）、４-ピリジルメチル（Ｐｉｃ）、または４−スルホベンジルであり、但し、Ｐ４またはＰ５がＢｏｃ、ＢｐｏｃまたはＤｄｚであるならばＰ３はＢｏｍではない方法。
【請求項５】
請求項４に記載の方法であって、Ｐ２およびＰ３の少なくとも一つがＢｚｌである方法。
【請求項６】
請求項１〜５の何れか１項に記載の方法であって、式ＩＩＩ、ＩＶ、ＸおよびＸＩＩ〜ＸＩＶの側鎖保護されたペプチド／アミノ酸は、ベンジル（Ｂｚｌ）、ベンジルオキシメチル（Ｂｏｍ）、フェナシル（Ｐａｃ）、４−ニトロベンジル（ＯＮｂｚ）、４−ピリジルメチル（Ｐｉｃ）、および４−スルホベンジルからなる群から選択される少なくとも一つの側鎖保護基で保護され、但し、Ｐ４またはＰ５がＢｏｃ、ＢｐｏｃまたはＤｄｚであるならば側鎖保護基はＢｏｍではない方法。
【請求項７】
請求項６に記載の方法であって、式ＩＩＩ、ＩＶ、ＸおよびＸＩＩ〜ＸＩＶの側鎖保護されたペプチド／アミノ酸は、少なくとも一つのＢｚｌで保護される方法。
【請求項８】
請求項１〜７の何れか１項に記載の方法であって、工程（ａ）において、式Ｖおよび式ＶＩの任意に側鎖保護されたペプチドの少なくとも一つは側鎖保護されていない方法。
【請求項９】
請求項１〜８の何れか１項に記載の方法であって、工程（ｃ）において、式Ｘのペプチドは次式のものである方法：
Ｈ−Ｇｌｕ（ＯＰ６）−Ｇｌｕ（ＯＰ７）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＰ８）−Ｇｌｕ（ＯＰ９）−Ｔｙｒ（Ｐ１０）−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号８） （Ｘｂ）
ここで、
Ｐ３は接触水素化により除去可能な保護基であり、Ｐ６〜Ｐ１０の各々はＢｚｌ、Ｂｏｍ、Ｐａｃ、ＯＮｂｚ、Ｐｉｃおよび４−スルホベンジルからなる群から独立に選択され、
また工程（ｅ）において、式ＸＩＩＩの側鎖保護されたアスパラギン酸は
Ｐ５−Ａｓｐ（ＯＰ１１）１１−ＯＨ
であり、
ここで、
Ｐ５は、式ＸＩＩおよびＸＩＩＩのペプチド／アミノ酸の側鎖保護基およびＰ３に対して直交性であり、
またＰ１１はＢｚｌ、Ｂｏｍ、Ｐａｃ、ＯＮｂｚ、Ｐｉｃおよび４−スルホベンジルからなる群から独立に選択される。
【請求項１０】
請求項９に記載の方法であって、Ｐ３は、Ｂｚｌ、Ｂｏｍ、Ｐａｃ、ＯＮｂｚ、Ｐｉｃまたは４−スルホベンジルであり、Ｐ６〜Ｐ１０の各々は独立に、Ｂｚｌ、Ｂｏｍ、Ｐａｃ、ＯＮｂｚ、Ｐｉｃまたは４−スルホベンジルであり、Ｐ５は、Ｂｏｃ、Ｂｐｏｃ、Ｄｄｚ、ＦｍｏｃまたはＭｓｃであり、Ｐ１１は、Ｂｚｌ、Ｂｏｍ、Ｐａｃ、ＯＮｂｚ、Ｐｉｃまたは４−スルホベンジルである方法。
【請求項１１】
請求項１０に記載の方法であって、Ｐ３はＢｚｌであり、Ｐ６〜Ｐ１０の各々はＢｚｌであり、Ｐ５はＢｏｃであり、Ｐ１１はＢｚｌである方法。
【請求項１２】
請求項９〜１１の何れか１項に記載の方法であって、Ｐ１、Ｐ４およびＰ５はＢｏｃであり、またＰ２、Ｐ３、Ｐ６、Ｐ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１０およびＰ１１はＢｚｌである方法。
【請求項１３】
請求項１〜１２の何れか１項に記載の方法であって、工程（ｈ）において、最初にＰ３および側鎖保護基が同時に除去され、Ｐ１はその後に除去される方法。
【請求項１４】
請求項１３に記載の方法であって、Ｐ３および側鎖保護基の同時除去の後に得られたペプチドは、Ｐ１を除去する前に単離されない方法。
【請求項１５】
請求項１〜１４の何れか１項に記載の方法であって、除去工程（ｂ）および（ｈ）の少なくとも一つは、水素ガスおよび活性炭上のパラジウムを用いて溶媒中で行われる方法。
【請求項１６】
請求項１５に記載の方法であって、前記溶媒は、Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミド、アセトン、アセトンと水の混合物、酢酸、および酢酸と水の混合物からなる群から選択される方法。
【請求項１７】
請求項１〜１６の何れか１項に記載の方法であって、式Ｖの任意に側鎖保護されたペプチド、式ＶＩの任意に側鎖保護されたペプチド、および式Ｘの側鎖保護されたペプチドからなる群から選択される少なくとも一つのペプチドは、先行プロセスにおいて溶液相合成により調製される方法。
【請求項１８】
請求項１〜１６の何れか１項に記載の方法であって、式Ｖの任意に側鎖保護されたペプ
チド、式ＶＩの任意に側鎖保護されたペプチド、および式Ｘの側鎖保護されたペプチドからなる群から選択される少なくとも一つのペプチドは、先行プロセスにおいて固相合成により調製される方法。
【請求項１９】
下記からなる群から選択されるペプチド：
（ｉ）次式の任意に側鎖保護されたペプチド
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＯＨ
（配列番号４） （Ｖ）、
ここでのＰ１は接触水素化に対して安定な保護基である；
（ｉｉ）次式の任意に側鎖保護されたペプチド
Ｈ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＰ２
（配列番号５） （ＶＩ）
ここでのＰ２は接触水素化により除去可能であり、且つ任意の側鎖保護基に対して直交性の保護基である；
（ｉｉｉ）次式の任意に側鎖保護されたペプチド
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＰ２（配列番号２） （ＶＩＩ）
ここでのＰ１およびＰ２は上記で定義した通りである；
（ｉｖ）次式の側鎖保護されたペプチド
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＨ（配列番号２） （ＩＩａ）
ここでのＰ１は、Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｇｌｙ１０−ＯＨを除き、上記で定義した通りである；
（ｖ）次式の側鎖保護されていないペプチド
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＨ（配列番号２） （ＩＩｂ）
ここでのＰ１は上記で定義した通りである；
（ｖｉ）次式の側鎖保護されたペプチド
Ｈ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号８） （Ｘ）、
ここでのＰ３は、接触水素化により除去可能な保護基である；
（ｖｉｉ）次式の側鎖保護されたペプチド
Ｐ４−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号９） （ＸＩＩ）
ここでのＰ３は上記で定義した通りであり、またＰ４は式Ｘのペプチドの側鎖保護基およびＰ３に対して直交性の保護基であるか、またはＰ４は水素である；
（ｖｉｉｉ）次式の側鎖保護されたペプチド
Ｐ５−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号３） （ＸＩＶ）
ここでのＰ５は、式ＸＩＩおよびＸＩＩＩのペプチド／アミノ酸の側鎖保護基およびＰ３に対して直交性の保護基であり、Ｐ３は、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｌｅｕ２０−ＯｔＢｕを除き、上記で定義した通りである；
（ｉｘ）次式の側鎖保護されたペプチド
Ｈ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号３） （ＩＩＩ）
ここでのＰ３は、Ｈ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｌｅｕ２０−ＯｔＢｕを除き、上記で定義した通りである；および
（ｘ）次式の側鎖保護されたペプチド
Ｐ１−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ２０−ＯＰ３（配列番号１） （ＩＶ）
ここでのＰ１およびＰ３は、Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｇｌｙ１０−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｌｅｕ２０−ＯｔＢｕを除き、上記で定義した通りである。
【請求項２０】
請求項１９に記載のペプチドであって、前記式Ｖの任意に側鎖保護されたペプチドは、Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＯＨ（配列番号４）であるペプチド。
【請求項２１】
請求項１９に記載のペプチドであって、前記式ＶＩの任意に側鎖保護されたペプチドは、Ｈ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＢｚｌ（配列番号５）であるペプチド。
【請求項２２】
請求項１９に記載のペプチドであって、前記式ＶＩＩの任意に側鎖保護されたペプチドは、Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＢｚｌ（配列番号２）であるペプチド。
【請求項２３】
請求項１９に記載のペプチドであって、前記式ＩＩｂの側鎖保護されたペプチドは、Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−ＯＨ（配列番号２）であるペプチド。
【請求項２４】
請求項１９に記載のペプチドであって、前記式Ｘの側鎖保護されたペプチドは、Ｈ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号８）であるペプチド。
【請求項２５】
請求項１９に記載のペプチドであって、前記式ＸＩＩの側鎖保護されたペプチドは、
Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号９）、または
Ｈ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号９）
であるペプチド。
【請求項２６】
請求項１９に記載のペプチドであって、前記式ＸＩＶの側鎖保護されたペプチドは、Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号３）であるペプチド。
【請求項２７】
請求項１９に記載のペプチドであって、前記式ＩＩＩの側鎖保護されたペプチドは、Ｈ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号３）であるペプチド。
【請求項２８】
請求項１９に記載のペプチドであって、前記式ＩＶの側鎖保護されたペプチドは、Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ５−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ１０−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｉｌｅ１５−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ２０−ＯＢｚｌ（配列番号１）であるペプチド。
【請求項２９】
ビバリルジンの合成における中間体としての、請求項１９〜２８の何れか１項に記載のペプチドの使用。
【公表番号】特表２０１２−５１４０１５（Ｐ２０１２−５１４０１５Ａ）
【公表日】平成２４年６月２１日（２０１２．６．２１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５４３９８５（Ｐ２０１１−５４３９８５）
【出願日】平成２１年１２月１７日（２００９．１２．１７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００９／００９０８０
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０７５９８３
【国際公開日】平成２２年７月８日（２０１０．７．８）
【出願人】（５１１１５８６５０）ロンザ・ブレーヌ・エスエー (1)
【氏名又は名称原語表記】ＬＯＮＺＡ ＢＲＡＩＮＥ ＳＡ
【住所又は居所原語表記】Ｃｈａｕｓｓｅｅ ｄｅ Ｔｕｂｉｚｅ ２９７， Ｂ−１４２０ Ｂｒａｉｎｅ−ｌ’Ａｌｌｅｕｄ， Ｂｅｌｇｉｕｍ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２４年６月２１日（２０１２．６．２１）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年１２月１７日（２００９．１２．１７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００９／００９０８０
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０７５９８３
【国際公開日】平成２２年７月８日（２０１０．７．８）
【出願人】（５１１１５８６５０）ロンザ・ブレーヌ・エスエー (1)
【氏名又は名称原語表記】ＬＯＮＺＡ ＢＲＡＩＮＥ ＳＡ
【住所又は居所原語表記】Ｃｈａｕｓｓｅｅ ｄｅ Ｔｕｂｉｚｅ ２９７， Ｂ−１４２０ Ｂｒａｉｎｅ−ｌ’Ａｌｌｅｕｄ， Ｂｅｌｇｉｕｍ
【Ｆターム（参考）】
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