本発明は、免疫グロブリンの植物産生であって、免疫グロブリンに結合されたグリカンの少なくとも一部分がフコースを欠く植物産生を提供する。本発明は、このような免疫グロブリンを産生するために用いられる構築物、プラスミド、ベクター、形質転換植物細胞、形質転換植物カルス、形質転換植物組織（例えば葉、種子、塊茎等）および形質転換全植物体、免疫グロブリンの産生方法、開示された方法により産生される免疫グロブリン、ならびにこのような免疫グロブリンの使用も提供する。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
フコースを欠く少なくとも1つの糖ペプチドを含む糖ペプチドプロフィールを有する、植物産生性免疫グロブリン。
【請求項２】
少なくとも1つの糖ペプチドがアスパラギン（Ａｓｎ）残基を含む、請求項１記載の免疫グロブリン。
【請求項３】
免疫グロブリンの植物産生性重鎖（ＨＣ）または軽鎖（ＬＣ）であって、フコースを欠く少なくとも1つの糖ペプチドを含む糖ペプチドプロフィールを有する前記ＨＣまたはＬＣ。
【請求項４】
少なくとも1つの糖ペプチドがＣＨ２領域にアスパラギン（Ａｓｎ）残基を含む、請求項３記載のＨＣ。
【請求項５】
フコースを欠く少なくとも1つのグリカンを含む遊離グリカンプロフィールを有する植物産生性免疫グロブリン。
【請求項６】
アスパラギン（Ａｓｎ）残基を含む、請求項５記載の免疫グロブリン。
【請求項７】
グリカンプロフィールが図１２に提示されたものと同一であるかまたは実質的に同一である、請求項５記載の免疫グロブリン。
【請求項８】
グリカンが、３Ｍａｎ、２ＧｌｃＮＡｃ、１Ｘｙｌ；２Ｍａｎ、２ＧｌｃＮＡｃ、１Ｘｙｌ；３Ｍａｎ、３ＧｌｃＮＡｃ、１Ｘｙｌ；３Ｍａｎ、２ＧｌｃＮＡｃ；３Ｍａｎ、３ＧｌｃＮＡｃ；４Ｍａｎ、２ＧｌｃＮＡｃ；５Ｍａｎ、２ＧｌｃＮＡｃ；および６Ｍａｎ、２ＧｌｃＮＡｃ（ここで、Ｍａｎ＝マンノース、ＧｌｃＮＡｃ＝Ｎ−アセチルグルコサミンおよびＸｙｌ＝キシロース）からなる群から選択される、請求項５記載の免疫グロブリン。
【請求項９】
グリカンが、３Ｍａｎ、２ＧｌｃＮＡｃ、１Ｘｙｌまたは２Ｍａｎ、２ＧｌｃＮＡｃ、１Ｘｙｌ（ここで、Ｍａｎ＝マンノース、ＧｌｃＮＡｃ＝Ｎ−アセチルグルコサミンおよびＸｙｌ＝キシロース）である、請求項５記載の免疫グロブリン。
【請求項１０】
グリカンプロフィールが図１６に提示されたグリカンプロフィールのうちの1つと同一であるかまたは実質的に同一である、請求項５記載の免疫グロブリン。
【請求項１１】
グリカンが、Ｈ２Ｎ２Ｘ；Ｈ３Ｎ２；およびＨ３Ｎ２Ｘ（ここで、Ｈ＝ヘキソース、Ｎ＝ＨｅｘＮＡｃ＝Ｎ−アセチルヘキソースおよびＸ＝キシロース）からなる群から選択される、請求項５記載の免疫グロブリン。
【請求項１２】
グリカンが、Ｎ２Ｈ８；Ｎ２Ｈ３Ｘ；Ｎ２Ｈ３Ｘ；Ｎ２Ｈ４Ｘ；Ｎ２Ｈ５；Ｎ２Ｈ６；Ｎ２Ｈ７；Ｎ２Ｈ８；Ｎ３Ｈ３Ｘ；Ｎ２Ｈ４；およびＮ２Ｈ５（ここで、Ｈ＝ヘキソース、Ｎ＝ＨｅｘＮＡｃ＝Ｎ−アセチルヘキソースおよびＸ＝キシロース）からなる群から選択される、請求項５記載の免疫グロブリン。
【請求項１３】
ヘキソースがマンノースであり、Ｎ−アセチルヘキソースがＮ−アセチルグルコサミンである、請求項１１または請求項１２記載の免疫グロブリン。
【請求項１４】
ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥおよびＩｇＤからなる群から選択される、請求項１または請求項５記載の免疫グロブリン。
【請求項１５】
ＩｇＡまたはＩｇＧである、請求項１４記載の免疫グロブリン。
【請求項１６】
重鎖および軽鎖を有するＩｇＡ抗体である、請求項１４記載の免疫グロブリン。
【請求項１７】
抗単純ヘルペスウイルス抗体である、請求項１６記載の免疫グロブリン。
【請求項１８】
重鎖および軽鎖を有するＩｇＧ抗体である、請求項１４記載の免疫グロブリン。
【請求項１９】
抗二重インテグリン抗体である、請求項１８記載の免疫グロブリン。
【請求項２０】
抗αＶβ３、αＶβ５二重インテグリン抗体である、請求項１９記載の免疫グロブリン。
【請求項２１】
グリカンプロフィールが図１９に提示されたグリカンプロフィールと同一であるかまたは実質的に同一である、請求項５記載の免疫グロブリン。
【請求項２２】
グリカンプロフィールが図２１に提示されたグリカンプロフィールと同一であるかまたは実質的に同一である、請求項５記載の免疫グロブリン。
【請求項２３】
グリカンプロフィールが図２３に提示されたグリカンプロフィールと同一であるかまたは実質的に同一である、請求項５記載の免疫グロブリン。
【請求項２４】
末端フコースを伴わない少なくとも1つの結合グリカンを含む植物産生性免疫グロブリン。
【請求項２５】
ＣＨ２領域にアスパラギン（Ａｓｎ）残基を含む、請求項２４記載の免疫グロブリン。
【請求項２６】
フコースを欠く少なくとも1つのグリカンを含むグリカンプロフィールを有する植物産生性免疫グロブリンであって、当該グリカンプロフィールが、当該免疫グロブリンから酵素的に放出される遊離Ｎ結合グリカンのマトリックス支援レーザー脱離／イオン化飛行時間型質量分光（ＭＳのＭＡＬＤＩ−Ｔ）分析を用いて確定される前記免疫グロブリン。
【請求項２７】
ＩｇＡである、請求項２６記載の免疫グロブリン。
【請求項２８】
抗単純ヘルペスウイルス抗体である、請求項２７記載の免疫グロブリン。
【請求項２９】
ＩｇＧである、請求項２６記載の免疫グロブリン。
【請求項３０】
抗二重インテグリン抗体である、請求項２９記載の免疫グロブリン。
【請求項３１】
抗αＶβ３、αＶβ５二重インテグリン抗体である、請求項３０記載の免疫グロブリン。
【請求項３２】
請求項１または請求項５の免疫グロブリンを含む植物細胞、植物組織、植物カルス、苗、全植物体または種子。
【請求項３３】
単子葉植物のものである、請求項３２記載の植物細胞、植物組織、植物カルスまたは種子。
【請求項３４】
単子葉植物がトウモロコシである、請求項３３記載の植物細胞、植物組織、植物カルスまたは種子。
【請求項３５】
単子葉類である、請求項３２記載の苗または全植物体。
【請求項３６】
単子葉植物がトウモロコシである、請求項３５記載の植物細胞、植物組織、植物カルスまたは種子。
【請求項３７】
免疫グロブリンが種子の内胚乳に位置する、請求項３２記載の種子。
【請求項３８】
ヒト免疫グロブリンである、請求項１または請求項５記載の免疫グロブリン。
【請求項３９】
尾片を欠く重鎖を含む、請求項１または請求項５記載の免疫グロブリン。
【請求項４０】
ＩｇＡ抗体である、請求項３９記載の免疫グロブリン。
【請求項４１】
抗単純ヘルペスウイルス抗体である、請求項３９記載の免疫グロブリン。
【請求項４２】
免疫グロブリンの重鎖が尾片を欠く、請求項３記載の免疫グロブリン。
【請求項４３】
ＩｇＡ抗体である、請求項４２記載の免疫グロブリン。
【請求項４４】
抗単純ヘルペスウイルス抗体である、請求項４３記載の免疫グロブリン。
【請求項４５】
免疫グロブリンを産生するために用いられる植物から単離される、請求項１または請求項５記載の免疫グロブリン。
【請求項４６】
図１２に提示される構造番号１（３Ｍａｎ、２ＧｌｃＮＡｃ、１Ｘｙｌ）（ここで、Ｍａｎ＝マンノース、ＧｌｃＮＡｃ＝Ｎ−アセチルグルコサミンおよびＸｙｌ＝キシロース）を有する少なくとも１つのグリカンを含む単量体抗体組成物。
【請求項４７】
図１２に提示される構造番号２（２Ｍａｎ、２ＧｌｃＮＡｃ、１Ｘｙｌ）（ここで、Ｍａｎ＝マンノース、ＧｌｃＮＡｃ＝Ｎ−アセチルグルコサミンおよびＸｙｌ＝キシロース）を有する少なくとも１つのグリカンを含む単量体抗体組成物。
【請求項４８】
フコースを有する結合グリカンを欠くアミノ酸断片を含む植物産生性免疫グロブリンであって、当該免疫グロブリンが哺乳類産生性である場合、同一アミノ酸断片上にまたは実質的同一アミノ酸断片上にフコースを有する結合グリカンを有する前記免疫グロブリン。
【請求項４９】
特定アミノ酸断片に関するグリカンプロフィールを含む植物産生性免疫グロブリンであって、当該免疫グロブリンが哺乳類産生性である場合、同一アミノ酸配列に関するまたは実質的同一アミノ酸配列に関する同一または実質的同一グリカンプロフィールを有する前記免疫グロブリン。
【請求項５０】
フコースを欠く結合グリカンを有するアミノ酸断片を含む植物産生性免疫グロブリンであって、当該免疫グロブリンが哺乳類産生性である場合、同一アミノ酸断片上にまたは実質的同一アミノ酸断片上にフコースを有する結合グリカンも欠く前記免疫グロブリン。
【請求項５１】
フコースを欠く結合グリカンを含む遊離グリカンプロフィールを有する植物産生性免疫グロブリンであって、当該免疫グロブリンが哺乳類産生性である場合、さらにまたフコースを欠く同一グリカンを含む遊離グリカンプロフィールを有する前記免疫グロブリン。
【請求項５２】
哺乳類産生性免疫グロブリンがＣＨＯ細胞中で産生される、請求項４８、請求項４９、請求項５０または請求項５１記載の免疫グロブリン。
【請求項５３】
植物産生性免疫グロブリンがトウモロコシ細胞中で産生され、そして哺乳類産生性免疫グロブリンがＣＨＯ細胞中で産生される、請求項４８、請求項４９、請求項５０または請求項５１記載の免疫グロブリン。
【請求項５４】
フコースを伴わない少なくとも１つの結合グリカンを有する免疫グロブリンを発現する形質転換植物細胞の産生方法であって、免疫グロブリンの重鎖および軽鎖をコードする核酸配列を含み、各核酸がプロモーターと操作可能的に連結される単一ベクターを植物細胞中に導入することにより、植物細胞を形質転換し、そして形質転換植物細胞を培養して、フコースを伴わない少なくとも１つの結合グリカンを有する免疫グロブリンを発現する植物細胞を産生することを包含する前記方法。
【請求項５５】
形質転換植物細胞から免疫グロブリンを単離することをさらに包含する、請求項５４記載の方法。
【請求項５６】
形質転換植物細胞から形質転換植物体カルスまたは形質転換全植物体を再生することをさらに包含する、請求項５４記載の方法。
【請求項５７】
形質転換植物体カルスまたは形質転換全植物体から免疫グロブリンを単離することをさらに包含する、請求項５６記載の方法。
【請求項５８】
重鎖および軽鎖に関する配列が同一プロモーターと操作可能的に連結される、請求項５４記載の方法。
【請求項５９】
重鎖および軽鎖に関する配列が異なるプロモーターと操作可能的に連結される、請求項５４記載の方法。
【請求項６０】
プロモーターが構成性プロモーターである、請求項５４記載の方法。
【請求項６１】
構成性プロモーターが３５Ｓ ＣａＭＶプロモーターまたはトウモロコシユビキチン−１プロモーターである、請求項６０記載の方法。
【請求項６２】
プロモーターが種子特異的プロモーターである、請求項５４記載の方法。
【請求項６３】
プロモーターが内胚乳特異的プロモーターである、請求項５４記載の方法。
【請求項６４】
ベクターが、ｐＤＡＢ８５０５；ｐＤＡＢ１４７２；ｐＤＡＢ１４７３；ｐＤＡＢ１４７４；およびｐＤＡＢ１４７５からなる群から選択される、請求項５４記載の方法。
【請求項６５】
ｐＤＡＢ８５０５；ｐＤＡＢ１４７２；ｐＤＡＢ１４７３；ｐＤＡＢ１４７４；およびｐＤＡＢ１４７５からなる群から選択されるベクター。
【請求項６６】
植物細胞が、アグロバクテリウム媒介性形質転換法またはWHISKERS^TM形質転換法を用いて形質転換される、請求項５４記載の方法。
【請求項６７】
単離単量体抗単純ヘルペスウイルス抗体の産生方法であって、（ｉ）各々がプロモーターに操作可能的に連結される配列番号１または配列番号５および配列番号９または配列番号１３を有する核酸を植物細胞中に導入して、形質転換植物細胞を産生し；（ｉｉ）形質転換植物細胞を培養して導入核酸を発現し；そして（ｉｉｉ）植物細胞により産生される単量体抗単純ヘルペスウイルス抗体を単離することを包含する前記方法。
【請求項６８】
形質転換植物細胞から形質転換植物を再生することをさらに包含する、請求項６７記載の方法。
【請求項６９】
配列番号１５（ｐＤＡＢ６３５）；配列番号１６（ｐＤＡＢ１６）；配列番号１７（ｐＤＡＢ６３７）；配列番号８４（ｐＤＡＢ３０１４）；および配列番号８５（ｐＤＡＢ８５０５）からなる群から選択される核酸配列を含む核酸分子。
【請求項７０】
配列番号１０または配列番号１４によりコードされるアミノ酸をコードする核酸配列を含む単離核酸分子。
【請求項７１】
配列番号１または配列番号５を含む単離核酸分子。
【請求項７２】
配列番号９または配列番号１３を含む単離核酸分子。
【請求項７３】
配列番号１または配列番号５を含む単離ベクターまたはプラスミド。
【請求項７４】
配列番号２または配列番号６によりコードされるアミノ酸をコードする核酸配列を含む単離核酸分子。
【請求項７５】
配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項１記載の免疫グロブリン。
【請求項７６】
配列番号１４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１記載の免疫グロブリン。
【請求項７７】
配列番号９または配列番号１３を含む単離ベクターまたはプラスミド。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１５】

【図１６Ａ】

【図１６Ｂ】

【図１６Ｃ】

【図１６Ｄ】

【図１６Ｅ】

【図１６Ｆ】

【図１６Ｇ】

【図１７】

【図１８】

【図１９】

【図２０Ａ】

【図２０Ｂ】

【図２１】

【図２２Ａ】

【図２２Ｂ】

【図２２Ｃ】

【図２２Ｄ】

【図２３】

【図２４Ａ】

【図２４Ｂ】

【図２５】

【図２６Ａ】

【図２６Ｂ】

【公表番号】特表２００６−５１７３９２（Ｐ２００６−５１７３９２Ａ）
【公表日】平成１８年７月２７日（２００６．７．２７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００４−５５７３５９（Ｐ２００４−５５７３５９）
【出願日】平成１５年１１月２８日（２００３．１１．２８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００３／０３７９０５
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０５０８３８
【国際公開日】平成１６年６月１７日（２００４．６．１７）
【出願人】（５９０００００２０）ザ　ダウ　ケミカル　カンパニー (24)
【氏名又は名称原語表記】ＴＨＥ　ＤＯＷ　ＣＨＥＭＩＣＡＬ　ＣＯＭＰＡＮＹ
【出願人】（３９００３９１９２）ダウ・アグロサイエンス・エル・エル・シー (20)
【氏名又は名称原語表記】Ｄｏｗ　ＡｇｒｏＳｃｉｅｎｃｅｓ　ＬＬＣ
【Ｆターム（参考）】