本開示は、プロガストリンモノクローナル抗体、そのフラグメント、プロガストリンモノクローナル抗体を含む組成物、ならびにプロガストリンモノクローナル抗体及びその組成物を作製及び使用する方法に向けられる。本開示は、プロガストリンモノクローナル抗体及びプロガストリンモノクローナル抗体又はそのフラグメントを含む組成物を用いて結腸直腸癌を処置する方法に向けられる。本開示は、結腸直腸癌を診断する方法及び結腸直腸癌に苦しむ被験者において抗癌治療の効力をモニタリングする方法を含む、プロガストリンの検出を含む方法にさらに向けられる。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトプロガストリン（ｈＰＧ）に特異的に結合する、モノクローナル抗体。
【請求項２】
ｈＰＧのＮ末端領域に特異的に結合する、請求項１記載のモノクローナル抗体。
【請求項３】
配列番号２５に相当するアミノ酸配列を有するペプチド抗原を含む免疫原を使用して入手可能である、請求項２記載のモノクローナル抗体。
【請求項４】
ｈＰＧと、４３Ｂ９Ｇ１１、ＷＥ５Ｈ２Ｇ７、６Ｂ５Ｂ１１Ｃ１０、２０Ｄ２Ｃ３Ｇ２、１Ｅ９Ａ４Ａ４、１Ｅ９Ｄ９Ｂ６、１Ｃ８Ｄ１０Ｆ５、１Ａ７Ｃ３Ｆ１１、１Ｂ３Ｂ４Ｆ１１、及び１Ｃ１１Ｆ５Ｅ８からなる群より選択されるハイブリドーマから入手可能な参照抗ｈＰＧモノクローナル抗体との結合について競合する、請求項２記載のモノクローナル抗体。
【請求項５】
４３Ｂ９Ｇ１１、ＷＥ５Ｈ２Ｇ７、６Ｂ５Ｂ１１Ｃ１０、２０Ｄ２Ｃ３Ｇ２、１Ｅ９Ａ４Ａ４、１Ｅ９Ｄ９Ｂ６、１Ｃ８Ｄ１０Ｆ５、１Ａ７Ｃ３Ｆ１１、１Ｂ３Ｂ４Ｆ１１、及び１Ｃ１１Ｆ５Ｅ８からなる群より選択されるハイブリドーマから入手可能なモノクローナル抗体のＶ_Ｌ及びＶ_Ｈ ＣＤＲに配列において相当するＶ_Ｌ及びＶ_ＨのＣＤＲを含む、請求項２記載のモノクローナル抗体。
【請求項６】
Ｖ_Ｌ及びＶ_Ｈ ＣＤＲ配列の以下の群：
【表３０】


の１つより選択される配列を有するＶ_Ｌ及びＶ_Ｈ ＣＤＲを含む、請求項２記載のモノクローナル抗体。
【請求項７】
ヒト化されている、請求項１〜６のいずれか一項記載のモノクローナル抗体。
【請求項８】
Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌ配列の以下の群：
【表３１】


の１つより選択される配列を有するＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ鎖を含む、請求項７記載のモノクローナル抗体。
【請求項９】
ｈＰＧのＣ末端領域に特異的に結合する、請求項１記載のモノクローナル抗体。
【請求項１０】
配列番号２７に相当するアミノ酸配列を有するペプチド抗原を含む免疫原を使用して入手可能である、請求項９記載のモノクローナル抗体。
【請求項１１】
ｈＰＧと、１Ｂ４Ａ１１Ｄ１１、１Ｂ６Ａ１１Ｆ２、１Ｂ１１Ｅ４Ｂ１１、１Ｃ１０Ｄ３Ｂ９、１Ｄ８Ｆ５Ｂ３、１Ｅ１Ｃ７Ｂ４、２Ｂ４Ｃ８Ｃ８、２Ｂ１１Ｅ６Ｇ４、２Ｃ６Ｃ３Ｃ７、２Ｈ９Ｆ４Ｂ７、１Ｆ１１Ｆ５Ｅ１０、１Ｆ１１Ｆ５Ｇ９、及び１Ａ１１Ｆ２Ｃ９からなる群より選択されるハイブリドーマから入手可能な参照抗ｈＰＧモノクローナル抗体との結合について競合する、請求項９記載のモノクローナル抗体。
【請求項１２】
１Ｂ４Ａ１１Ｄ１１、１Ｂ６Ａ１１Ｆ２、１Ｂ１１Ｅ４Ｂ１１、１Ｃ１０Ｄ３Ｂ９、１Ｄ８Ｆ５Ｂ３、１Ｅ１Ｃ７Ｂ４、２Ｂ４Ｃ８Ｃ８、２Ｂ１１Ｅ６Ｇ４、２Ｃ６Ｃ３Ｃ７、２Ｈ９Ｆ４Ｂ７、１Ｆ１１Ｆ５Ｅ１０、１Ｆ１１Ｆ５Ｇ９、及び１Ａ１１Ｆ２Ｃ９からなる群より選択されるハイブリドーマから入手可能なモノクローナル抗体のＶ_Ｌ及びＶ_Ｈ ＣＤＲに配列において相当するＶ_Ｌ及びＶ_Ｈ ＣＤＲを含む、請求項９記載のモノクローナル抗体。
【請求項１３】
Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌ ＣＤＲ配列の以下の群：
【表３２】


の１つより選択される配列を有するＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ ＣＤＲを含む、請求項９のモノクローナル抗体。
【請求項１４】
ヒト化されている、請求項９〜１３のいずれか一項記載のモノクローナル抗体。
【請求項１５】
Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌ配列の以下の群：
【表３３】


の１つより選択される配列を有するＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ鎖を含む、請求項１４記載のモノクローナル抗体。
【請求項１６】
約１pM〜約７nMの範囲内の親和性を有する、請求項１〜１５のいずれか一項記載のモノクローナル抗体。
【請求項１７】
配列番号２８、２９、３０、３１、及び３２からなる群より選択される配列に相当するアミノ酸配列を含むエピトープに結合する、請求項１〜８のいずれか一項記載のモノクローナル抗体。
【請求項１８】
配列番号３３、３４、３５、及び３６からなる群より選択される配列に相当するアミノ酸配列を含むエピトープに結合する、請求項１、及び９〜１５のいずれか一項記載のモノクローナル抗体。
【請求項１９】
ｈＰＧと、抗ｈＰＧ ＭＡｂ１、抗ｈＰＧ ＭＡｂ２、抗ｈＰＧ ＭＡｂ３、抗ｈＰＧ ＭＡｂ４、抗ｈＰＧ ＭＡｂ１５、抗ｈＰＧ ＭＡｂ１６、抗ｈＰＧ ＭＡｂ１７、抗ｈＰＧ ＭＡｂ１８、抗ｈＰＧ ＭＡｂ１９、及び抗ｈＰＧ ＭＡｂ２０からなる群より選択される参照抗体との結合について競合する、請求項１〜８のいずれか一項記載のモノクローナル抗体。
【請求項２０】
ｈＰＧと、抗ｈＰＧ ＭＡｂ５、抗ｈＰＧ ＭＡｂ６、抗ｈＰＧ ＭＡｂ７、抗ｈＰＧ ＭＡｂ８、抗ｈＰＧ ＭＡｂ９、抗ｈＰＧ ＭＡｂ１０、抗ｈＰＧ ＭＡｂ１１、抗ｈＰＧ ＭＡｂ１２、抗ｈＰＧ ＭＡｂ１３、抗ｈＰＧ ＭＡｂ１４、抗ｈＰＧ ＭＡｂ２１、抗ｈＰＧ ＭＡｂ２２、及び抗ｈＰＧ ＭＡｂ２３からなる群より選択される参照抗体との結合について競合する、請求項１、及び９〜１５のいずれか一項記載のモノクローナル抗体。
【請求項２１】
ＬＳ１７４Ｔ細胞を用いて行ったインビトロアッセイにおいてｈＰＧ活性を中和する、請求項１記載のモノクローナル抗体。
【請求項２２】
請求項１〜２１のいずれか一項記載のモノクローナル抗体ならびに賦形剤、担体、及び／又は希釈剤を含む、組成物。
【請求項２３】
医薬的使用のために製剤化される、請求項２２記載の組成物。
【請求項２４】
請求項１〜１５のいずれか一項記載の抗ｈＰＧモノクローナル抗体についての可変軽鎖（ＶＬ）をコードする、ポリヌクレオチド。
【請求項２５】
請求項１〜１５のいずれか一項記載の抗ｈＰＧモノクローナル抗体についての可変重鎖（ＶＨ）をコードする、ポリヌクレオチド。
【請求項２６】
請求項１記載の抗ｈＰＧモノクローナル抗体についての可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）をコードするポリヌクレオチドを含む、発現ベクター。
【請求項２７】
請求項１記載の抗ｈＰＧモノクローナル抗体についての可変重鎖（Ｖ_Ｈ）をコードするポリヌクレオチドを含む、発現ベクター。
【請求項２８】
請求項１〜２１のいずれか一項記載の抗ｈＰＧモノクローナル抗体を発現させるために適したポリヌクレオチドの対を用いて形質転換した宿主細胞。
【請求項２９】
請求項１〜２１のいずれか一項記載の抗ｈＰＧモノクローナル抗体を分泌することが可能なハイブリドーマ。
【請求項３０】
以下：
【表３４】


からなる群より選択される、請求項２９記載のハイブリドーマ。
【請求項３１】
以下：
【表３５】


からなる群より選択される、請求項２９記載のハイブリドーマ。
【請求項３２】
１Ｂ４Ａ１１Ｄ１１、１Ｂ６Ａ１１Ｆ２、１Ｂ１１Ｅ４Ｂ１１、２Ｂ４Ｃ８Ｃ８、２Ｂ１１Ｅ６Ｇ４、及び１Ｅ９Ａ４Ａ４からなる群より選択される、請求項２９記載のハイブリドーマ。
【請求項３３】
抗ｈＰＧモノクローナル抗体を得る方法であって、以下：
（ａ）請求項２９記載のハイブリドーマを適した条件下で培養すること、及び
（ｂ）培養培地又はハイブリドーマ細胞から抗ｈＰＧモノクローナル抗体を回収すること
を含む、方法。
【請求項３４】
被験体に、結腸直腸癌を処置するために効果的なヒト化中和抗ｈＰＧモノクローナル抗体の量を投与することを含む、結腸直腸癌を処置する方法。
【請求項３５】
中和抗ｈＰＧモノクローナル抗体が、
【表３６】


からなる群より選択されるハイブリドーマから入手可能な抗ｈＰＧモノクローナル抗体との結合について競合する、請求項３４記載の方法。
【請求項３６】
中和抗ｈＰＧモノクローナル抗体が、
【表３７】


からなる群より選択される抗ｈＰＧモノクローナル抗体のＣＤＲに配列において相当するＣＤＲを有する、請求項３４記載の方法。
【請求項３７】
中和抗ｈＰＧモノクローナル抗体に結腸直腸腫瘍細胞を曝露させることを含む、結腸直腸腫瘍細胞の増殖を阻害する方法。
【請求項３８】
中和抗ｈＰＧモノクローナル抗体が、
【表３８】


からなる群より選択されるハイブリドーマから入手可能な抗ｈＰＧモノクローナル抗体との結合について競合する、請求項３７記載の方法。
【請求項３９】
中和抗ｈＰＧモノクローナル抗体が、
【表３９】


からなる群より選択される抗ｈＰＧモノクローナル抗体のＣＤＲに配列において相当するＣＤＲを有する、請求項３７記載の方法。
【請求項４０】
インビトロで行われる、請求項３７記載の方法。
【請求項４１】
インビボで行われる、請求項３７記載の方法。
【請求項４２】
請求項２記載のＮ末端抗ｈＰＧモノクローナル抗体及びｈＰＧのＣ末端領域に特異的に結合する抗体を含む、ｈＰＧを検出するために有用なキット。
【請求項４３】
ｈＰＧのＣ末端領域に特異的に結合する抗体がポリクローナル抗体である、請求項４２記載のキット。
【請求項４４】
請求項９記載のＣ末端抗ｈＰＧモノクローナル抗体及びｈＰＧのＮ末端領域に特異的に結合する抗体を含む、ｈＰＧを検出するために有用なキット。
【請求項４５】
ｈＰＧのＮ末端領域に特異的に結合する抗体がポリクローナル抗体である、請求項４４記載のキット。
【請求項４６】
請求項１〜１５のいずれか一項記載の少なくとも１つのモノクローナル抗体を使用して、被験者からの血清サンプル中のプロガストリンの量を定量化すること含み、それにおいて約２０〜４００pMの範囲のプロガストリンの量が結腸直腸癌を示す、被験体において結腸直腸癌を診断する方法。
【請求項４７】
請求項１〜１５のいずれか一項記載の少なくとも１つのモノクローナル抗体を使用して、結腸直腸癌を伴う患者からの血清サンプル中のプロガストリンの量を定量化すること含み、それにおいて約２０〜４００pMの範囲のプロガストリンの量が抗ｈＰＧ治療についての適切性を示す、抗ｈＰＧ治療のために適した患者を選択する方法。
【請求項４８】
請求項１〜１５のいずれか一項記載の少なくとも１つのモノクローナル抗体を使用して、時間の関数として、結腸直腸癌のための処置を受けている被験者の血中プロガストリンレベルを定量化することを含み、そこで被験者の血清中プロガストリンレベルにおける時間依存的な減少が処置が効果的であることを示す、結腸直腸癌処置の有効性をモニタリングする方法。
【請求項４９】
プロガストリン依存性シグナル伝達を阻害するために効果的な中和抗ＰＧモノクローナル抗体の量を用いてｈＰＧを分泌する細胞を曝露することを含む、細胞中のプロガストリン依存性シグナル伝達カスケードを阻害する方法。

【図２Ａ】

【図２Ｂ】

【図２Ｃ】

【図２Ｄ】

【図２Ｅ】

【図２Ｆ】

【図２Ｇ】

【図２Ｈ】

【図２Ｉ】

【図２Ｊ】

【図２Ｋ】

【図２Ｌ】

【図５Ｂ】

【図５Ｃ】

【図８】

【図１】

【図３Ａ】

【図３Ｂ】

【図３Ｃ】

【図４】

【図５Ａ】

【図６】

【図７Ａ】

【図７Ｂ】

【図７Ｃ】

【図７Ｄ】

【図７Ｅ】

【図７Ｆ】

【図７Ｇ】

【図７Ｈ】

【図７Ｉ】

【図９Ａ】

【図９Ｂ】

【公表番号】特表２０１３−５０７１３８（Ｐ２０１３−５０７１３８Ａ）
【公表日】平成２５年３月４日（２０１３．３．４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５３３５３１（Ｐ２０１２−５３３５３１）
【出願日】平成２２年１０月１５日（２０１０．１０．１５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２０１０／００６３２９
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０４５０８０
【国際公開日】平成２３年４月２１日（２０１１．４．２１）
【出願人】（５１２０９７８８０）
【氏名又は名称原語表記】ＢＩＯＲＥＡＬＩＴＥＳ
【出願人】（５９１１００５９６）アンスティチュ　ナショナル　ドゥ　ラ　サンテ　エ　ドゥ　ラ　ルシェルシュ　メディカル (59)
【出願人】（５９５０４０７４４）サントル・ナショナル・ドゥ・ラ・ルシェルシュ・シャンティフィク (88)
【氏名又は名称原語表記】ＣＥＮＴＲＥ　ＮＡＴＩＯＮＡＬ　ＤＥ　ＬＡ　ＲＥＣＨＥＲＣＨＥ　ＳＣＩＥＮＴＩＦＩＱＵＥ
【Ｆターム（参考）】