プロスタグランジンの精製方法
本発明は、超臨界流体クロマトグラフィーによるプロスタグランジンの精製方法を提供するが、前記方法は、固定相と、二酸化炭素を含む移動相とを使用し、固定相が未変性シリカゲルのとき、プロスタグランジンはルプロスチオールではない。本発明はさらに、前記方法により製造されるプロスタグランジンを提供する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、プロスタグランジンの精製方法を提供する。特に、本発明は、超臨界流体クロマトグラフィー（ｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌ ｆｌｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ、ＳＦＣ）によるプロスタグランジンの精製方法を提供する。
【背景技術】
【０００２】
プロスタグランジンは、原料医薬品（ａｃｔｉｖｅ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ、ＡＰＩ）であって、異性体的または化学的に純粋なプロスタグランジンは薬品の製剤に必要である。しかし、プロスタグランジンの精製は、これに関連する不純物のみならず、多くのプロスタグランジン異性体の類似する化学的性質のために困難がある。
【０００３】
Ｇ．Ｈ．Ｂｒｕｎｎｅｒ等（超臨界流体、６５３−６６８、Ｅ．ＫｉｒａｎおよびＪ．Ｍ．Ｈ．Ｌｅｖｅｌｔ Ｓｅｎｇｅｒｓ（編集者）、Ｋｌｕｗｅｒ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒ、１９９４）は、レプロジン（Ｒｅｐｒｏｄｉｎ）異性体（すなわち、ルプロスチオール異性体）の予備超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）分離を説明している。しかし、異性体は十分に分離されておらず、ハートカットフラクション（ｈｅａｒｔ ｃｕｔ ｆｒａｃｔｉｏｎ）の純度は８０％に過ぎない。したがって、この方法では、純度がＩＣＨクオリティを満たしていないため、商業的に使用することができない。本著者は、ＳＦＣが液体クロマトグラフィーに比べて欠点があることを認める。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかし、本発明者は、ＳＦＣを用いるプロスタグランジンを精製する別の工程を提供することにより、従来技術による問題点を克服した。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
このために、本発明は、超臨界流体クロマトグラフィーによるプロスタグランジンの精製方法を提供するが、前記方法は、固定相と、二酸化炭素を含む移動相とを使用し、固定相が未変性シリカゲルのとき、プロスタグランジンはルプロスチオールではない。例えば、本発明は、天然プロスタグランジンを精製する方法を提供するが、前記方法は、天然プロスタグランジンを固定相を含むカラムに注入するステップと、超臨界二酸化炭素を含む移動相を用いて天然プロスタグランジンをカラムを介して溶離するステップと、精製されたプロスタグランジンを含む画分を収集するステップとを含む。
【図面の簡単な説明】
【０００６】
【図１】実施例１で説明されたように得られた、天然ラタノプロストのＳＦＣ精製注入のクロマトグラムを示す。
【図２】ラタノプロスト異性体の構造を示す。
【図３】実施例２で説明されたように得られた、天然ラタノプロストのＳＦＣ精製注入のクロマトグラムを示す。
【発明を実施するための形態】
【０００７】
「精製」とは、本発明にかかる方法は、化学的および／または異性体的に純粋なプロスタグランジンを生産することを意味する。化学的に純粋な化合物とは、その化合物が関連する化合物、出発物質、中間生成物、および吸収剤が本質的にないものである。異性体的に純粋な化合物とは、その化合物が、化学的構造の異なる同一の化学分子式を有するとされる、関連する化合物が本質的にないものである。
【０００８】
一実施形態において、精製されたプロスタグランジンは、少なくとも約９９％化学的に純粋であり、好ましくは、少なくとも約９９．５％化学的に純粋であり、より好ましくは、少なくとも約９９．８％化学的に純純である。
【０００９】
他の実施形態において、精製されたプロスタグランジンは、少なくとも約９９％異性体的に純粋であり、好ましくは、少なくとも９９．５％異性体的に純粋であり、より好ましくは、少なくとも９９．９％異性体的に純純である。
【００１０】
本発明にかかる方法は、プロスタグランジンは、分析的または予備的スケールで精製することができる。「分析的」とは、合理的な期間、すなわち、一日の期間内に少なくとも約０．１ｍｇの精製されたプロスタグランジン、好ましくは、約１ｍｇの精製されたプロスタグランジンを提供するスケールを意味する。「予備的」とは、好ましい期間、すなわち、一日の期間内に少なくとも約１ｍｇの精製されたプロスタグランジン、好ましくは、約０．１ｇの精製されたプロスタグランジン、最も好ましくは、約１ｇの精製されたプロスタグランジンを提供するスケールを意味する。
【００１１】
好ましくは、プロスタグランジンは、式（Ｉ）の化合物、式（ＩＩ）の化合物、式（ＩＩＩ）の化合物、または式（ＩＶ）の化合物であり、
【化１】
式中、
Ｖは、ＣまたはＯであり、
Ｗは、
【化２】
であり、
Ｘは、ＣＯＮＲ１２Ｒ１３またはＣＯ２Ｒ１２であり、
Ｙは、
【化３】
であり、
Ｚは、Ｃ１−２０−アルキル、Ｃ２−２０−アルキニル、−Ｏ−（Ｃ６−２０−アリール）または−（Ｃ１−２０−アルキル）−（Ｃ６−２０−アリール）であり、ここで、アリール基は、Ｃ１−２０−アルキル、ハロおよびＣ（ハロ）３からなる群より選択された３個の置換基のうちの１個で選択的に置換され、
Ｒ１およびＲ２は、独立してＨまたはＯＨであるか、あるいは共に
【化４】
を形成し、
Ｒ３およびＲ４は、独立してＨまたはＯＨであり、
Ｒ５およびＲ６は、独立してＨまたはＯＨであるか、あるいは共に
【化５】
を形成し、
Ｒ７およびＲ８は、独立してＨ、ＯＨ、ハロまたはＣ１−２０−アルキルであり、
Ｒ９およびＲ１０は、独立してＨまたはＣ１−２０−アルキルであり、ここで、アルキル基は、ＣＯＮＲ１２Ｒ１３、ＣＯ２Ｒ１２またはＣＯ２−Ｍ＋より選択された１個またはそれ以上の置換基で選択的に置換され、
Ｒ１１は、Ｃ１−２０−アルキルまたは−Ｏ−（Ｃ１−２０−アルキル）であり、ここで、アルキル基は、ＣＯＮＲ１２Ｒ１３、ＣＯ２Ｒ１２またはＣＯ２−Ｍ＋より選択された１個またはそれ以上の置換基で選択的に置換され、
Ｒ１２およびＲ１３は、ＨおよびＣ１−２０アルキルからなる群より独立して選択され、
Ｍ＋は、対カチオンであり、
ハロは、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素である。Ｖ＝Ｃのとき、炭素原子は、２個の水素原子を含み、これらのうちの１個または２個は、例えば、ハロおよびＣ１−２０−アルキルより独立して選択可能な置換基からなる基で置換されていてもよい。
【００１２】
「アルキル」は、別の方式で指示されなければ、好ましくは、１〜２０個の炭素原子、より好ましくは、１〜１５個の炭素原子、最も好ましくは、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分岐状または環状の飽和炭化水素構造である。アルキル基の例としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、シクロプロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシルおよびシクロヘキシルがある。炭素原子の数が特定されたアルキル基が指定されれば、アルキル基のすべての幾何学的異性体が含まれていてよい。例えば、「ブチル」は、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｔ−ブチルおよびシクロブチルを含む。
【００１３】
「アルキニル」は、別の方式で指示されなければ、少なくとも１個の
【数６】
基と、好ましくは、２〜２０個の炭素原子、より好ましくは、２〜１５個の炭素原子、最も好ましくは、２〜１０個の炭素原子を有する線状または分岐状の炭化水素構造である。アルキニル基の例としては、エチレン、プロピレン、ｎ−ブチニル、イソブチニルおよびヘキシニルがある。炭素原子の数が特定されたアルキニル基が指定されれば、アルキニル基のすべての幾何学的異性体が含まれていてよい。例えば、「ブチニル」は、ｎ−ブチニルおよびイソブチニルを含む。
【００１４】
「アリール」は、別の方式で指示されなければ、好ましくは、６〜２０個の炭素原子、より好ましくは、６〜１５個の炭素原子、最も好ましくは、６〜１０個の炭素原子を有する芳香族炭化水素である。アリール基の例としては、フェニルおよびナフチルがある。
【００１５】
「ハロ」は、単独でも他の基の部分でもよく、例えば、ハロゲン、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素原子である。
【００１６】
Ｍ＋は、−ＣＯ２−の対カチオン、すなわち、−ＣＯ２−Ｍ＋であり、カルボン酸塩化物、好ましくは、薬学的に許容可能なカルボン酸塩化物である。好ましくは、Ｍ＋は、金属イオンであり、例えば、Ｋ＋またはＮａ＋のようなアルカリ金属イオンである。
【００１７】
好ましくは、Ｗは、
【化７】
である。
【００１８】
好ましくは、Ｘは、ＣＯＮＨ（Ｃ１−１０−アルキル）、ＣＯ２（Ｃ１−１０−アルキル）またはＣＯ２Ｈである。より好ましくは、Ｘは、ＣＯＮＨＥｔ、ＣＯ２Ｍｅ、ＣＯ２ｉｐｒおよびＣＯ２Ｈからなる群より選択される。
【００１９】
好ましくは、Ｚは、Ｃ１−１０−アルキル、Ｃ２−１０−アルキニル、−Ｏ−（Ｃ６−１０−アリール）または−（Ｃ１−１０−アルキル）−（Ｃ６−１０−アリール）であって、アリール基は、Ｃｌおよび−ＣＦ３からなる群より選択された１〜３個の置換基で選択的に置換される。より好ましくは、Ｚは、−（ＣＨ２）５ＣＨ３、
−（ＣＨ２）３ＣＨ３、−ＣＨ２−Ｐｈ、
【化８】
である。
【００２０】
Ｒ１およびＲ２は、独立してＨまたはＯＨであってもよい。好ましくは、Ｒ１およびＲ２のうちの１個がＨのとき、他の１個はＯＨである。より好ましくは、Ｒ１およびＲ２のうちの１個がＨ、他の１個がＯＨのとき、Ｒ１、Ｒ２およびこれらが付着する炭素原子は、下記の立体化学を有する。
【化９】
【００２１】
Ｒ３およびＲ４は、独立してＨまたはＯＨである。好ましくは、Ｒ３およびＲ４のうちの１個がＨのとき、他の１個はＯＨである。より好ましくは、Ｒ３、Ｒ４およびこれらが付着する炭素原子は、下記の立体化学を有する。
【化１０】
【００２２】
Ｒ５およびＲ６は、独立してＨまたはＯＨである。一実施形態において、Ｒ５およびＲ６のうちの１個がＨのとき、他の１個はＯＨである。より好ましくは、Ｒ５およびＲ６のうちの１個がＨ、他の１個がＯＨのとき、Ｒ５、Ｒ６およびこれらが付着する炭素原子は、下記の立体化学を有する。
【化１１】
【００２３】
Ｒ５およびＲ６が共に
【化１２】
を形成し、
Ｒ３およびＲ４のうちの１個はＯＨ、他の１個はＨのとき、互変異性体、すなわち、ヘミアセタールが生成できる。このような互変異性体は、本発明の範囲に含まれるものである。互変異性平衡は、プロスタグランジンルビプロストンによって例示される。
【化１３】
【００２４】
他の実施形態においては、Ｒ５およびＲ６は、両方ともＨである。
【００２５】
好ましくは、Ｒ７およびＲ８は、Ｈ、ＯＨ、ＦまたはＣＨ３からなる群より独立して選択される。一実施形態において、Ｒ７およびＲ８は、両方ともＨである。他の実施形態では、Ｒ７およびＲ８は、両方ともＦである。さらに他の実施形態では、Ｒ７およびＲ８のうちの１個はＣＨ３で、他の１個はＨまたはＯＨである。
【００２６】
好ましくは、Ｒ９およびＲ１０は、独立してＨまたはＣ１−１０−アルキルであって、アルキル基は、ＣＯ２ＨまたはＣＯ２−Ｍ＋より選択される１個または２個以上の置換基で選択的に置換される。より好ましくは、Ｒ９およびＲ１０のうちの１個はＨで、他の１個は−（ＣＨ２）３ＣＯ２Ｈまたは−（ＣＨ２）３ＣＯ２−Ｎａ＋である。
【００２７】
好ましくは、Ｒ１１は、Ｃ１−１０−アルキルまたは−Ｏ−（Ｃ１−１０−アルキル）であって、アルキル基は、ＣＯ２ＨまたはＣＯ２−Ｍ＋より選択される１個または２個以上の置換基で選択的に置換される。より好ましくは、Ｒ１１は、−（ＣＨ２）３ＣＯ２Ｈまたは−Ｏ−ＣＨ２−ＣＯ２Ｈである。
【００２８】
好ましい実施形態において、プロスタグランジンは、以下からなる群より選択される。
【化１４】
【００２９】
好ましくは、プロスタグランジンは、ラタノプロストである。
【００３０】
これとは異なり、仮に固定相が未変性シリカゲルであれば、プロスタグランジンは、ルプロスチオールとなり得る。
【化１５】
【００３１】
一実施形態においては、固定相は、キラル固定相である。好ましくは、キラル固定相は、シリカ上にコーティングまたは固定される、誘導されたアミロースまたはセルロースポリマーまたは他の多糖類である。より好ましくは、キラル固定相は、Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ ＯＤ−Ｈ、ＣｈｉｒａｌＰａＫ ＡＳ−Ｈ、ＣｈｉｒａｌＰａｋ ＩＣ、ＣｈｉｒａｌＰａｋ ＡＤ−Ｈ、Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ ＯＪ−ＨおよびＣｈｉｒａｌｃｅｌ ＯＫ（Ｃｈｉｒａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．とＤａｉｃｅｌ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｌｔｄ．から入手可能な製品）からなる群より選択される。さらに好ましくは、キラル固定相は、ＣｈｉｒａｌＰａｋ ＡＤ−Ｈである。例えば、アミラーゼまたはセルロースポリマーは、１個または２個以上のカルバマート基、特に、３，５−ジメチルフェニルカルバメート、（Ｓ）−アルファ−メチルベンジルカルバメート、４−クロロフェニルカルバメート、４−メチルフェニルカルバメート、フェニルカルバメート、３−クロロ−４−メチルフェニルカルバメート、５−クロロ−２−メチルフェニルカルバメートなどのようなアリールを含むカルバメートおよび／またはアセテート、ベンゾエート（例えば、４−メチルベンゾエート、シンナメートなどのような１個または２個以上のエステル基を有して誘導される。
【００３２】
他の実施形態において、固定相は、非キラル固定相である。好ましくは、非キラル固定相は、プリンストンジオール（Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ Ｄｉｏｌ）、４−エチルピリジン、２−エチルピリジンまたはピリジンウレアからなる群より選択される。
【００３３】
好ましくは、移動相は、少なくとも１種の変性剤をさらに含む。変性剤は、適切な液体溶媒であり得る。適切な変性剤は、少なくとも１種のアルコール、アセトニトリル、酢酸エチル、塩化メチレンおよびそれらの組合せからなる群より選択可能である。好ましくは、少なくとも１種のアルコールは、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノールおよびそれらの組合せからなる群より選択される。変性剤は、固定相と共に使用できることが好ましい。例えば、酢酸エチルと塩化メチレンはＣｈｉｒａｌＰａｋ ＡＤカラムと共に使用することができないが、これは、酢酸エチルと塩化メチレンがＣｈｉｒａｌＰａｋ ＡＤカラムを破壊するからである。
【００３４】
二酸化炭素は容易に除去され、精製されたプロスタグランジンは、溶媒の変性剤中において溶液として提供可能である。したがって、プロスタグランジンが溶解可能な変性剤を選択することが好ましい。
【００３５】
好ましくは、少なくとも１種の変性剤が、超臨界二酸化炭素に（少なくとも）約１％ｖ／ｖまたは約１％ｗ／ｗ程度存在する。より好ましくは、少なくとも１種の変性剤が、超臨界二酸化炭素に（少なくとも）約５％ｖ／ｖまたは約５％ｗ／ｗ程度存在する。二酸化炭素に対する変性剤の割合は、クロマトグラフィー工程中に変化可能である。
【００３６】
適切なクロマトグラフ装置が当業者によく知られている。Ｔｈａｒ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｏｒ ＳＦＣまたはＮｏｖａｓｅｐ Ｓｕｐｅｒｓｅｐ ２０／３０ ＳＦＣのような超臨界流体クロマトグラフィーに適した装置を用いることが好ましい。天然プロスタグランジンを含む天然フィード（ｃｒｕｄｅ ｆｅｅｄ）は、移動相がカラム内に位置する固定相を介して流れる装置内に周期的に注入される。カラムの出口で検出された後、フィードの精製された一部は他のトラップに案内される。二酸化炭素は、精製された一部から除去され、好ましくは、再生される。カラムの出口での検出は、適切な波長でＵＶ吸収を測定することにより行われる。
【００３７】
分析的スケールにおいて、カラム直径は、約２ｍｍ〜約７ｍｍ（好ましくは、約４．６ｍｍ）であることが好適である。カラム長さは、約５ｃｍ〜約５０ｃｍ（好ましくは、約２５ｃｍ）であることが好適である。
【００３８】
予備的スケールにおいて、カラム直径は、約１０ｍｍ〜約２００ｍｍ（好ましくは、約２１ｍｍ）であることが好適である。カラム長さは、約５ｃｍ〜約５０ｃｍ（好ましくは、約２５ｃｍ）であることが好適である。
【００３９】
工程は、約５℃〜約４５℃（好ましくは、約２５℃〜約３５℃）の温度、および例えば、約８０ｂａｒ〜３００ｂａｒ（好ましくは、約１００ｂａｒ〜１５０ｂａｒ）の高圧で行われることが好適である。一般的な流量は、カラムの直径に依存するが、例えば、１ｍＬ／ｍｉｎ〜約５ｋｇ／ｍｉｎで変化可能である。
【００４０】
他の態様によれば、本発明は、上述した方法により製造できるプロスタグランジンを提供する。
【００４１】
以下の実施例は説明のためのものであって、本発明はこれに限定されない。
【００４２】
実施例１−分析的スケール
ＳＦＣ予備パラメータ：
・カラム：Ｃｈｉｒａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤ−Ｈ、４．６×２５０ｍｍ
・カラム温度：３５℃
・システム背圧：１５０Ｂａｒ
・溶離剤：アルコール変性剤のエタノールを有する二酸化炭素（ＣＯ２）
・総流量：３ｍＬ／ｍｉｎ
・グラジエント共溶媒プロファイル：初期条件＝５％エタノール：９５％ＣＯ２、線形的に増加して、１５分で、４５％エタノール：５５％ＣＯ２、２分間、４５％エタノール：５５％ＣＯ２保持、初期条件に戻り、次の注入前に、３分間平衡保持
・検出：２１０ｎｍでのＵＶ
・サンプルの用意：エタノール中において０．１ｇ／ｍＬの溶液を用意し、ラタノプロストを完全に溶解するためにフィード溶液を完全に混合する。
・サンプルの装填：５ｍｇ（エタノール中において０．１ｇ／ｍＬ天然溶液の５０μｌ）
・ラタノプロストの収集：検出されたラタノプロストピークフロント（ｐｅａｋ ｆｒｏｎｔ）（保持時間内において〜９分）から検出されたラタノプロストピークテール（ｐｅａｋ ｔａｉｌ）（保持時間内において〜１０分）まで、ベースライン上約２％からラタノプロストピークを収集（ハートカット）
・天然ラタノプロストのＳＦＣ精製注入のクロマトグラムが図１に示されている
・得られた結果は、エタノールを共溶媒およびＡＤ−Ｈ固定相として使用：
【表１】
【００４３】
実施例２−予備的スケール
ＳＦＣ予備パラメータ：
・カラム：Ｃｈｉｒａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤ−Ｈ、２１×２５０ｍｍ
・カラム温度：２５℃
・システム背圧：１００Ｂａｒ
・溶離剤：アルコール共溶媒変性剤（具体的には、エタノール：メタノール（４：１））を有する二酸化炭素（ＣＯ２）
・総流量：５０ｇ／ｍｉｎ
・共溶媒プロファイル：初期条件＝３６０秒間、１５％共溶媒：８５％ＣＯ２、３６１秒から７２０秒まで、４０％共溶媒：６０％ＣＯ２に変化、７２１秒から９００秒まで初期条件に戻る
・検出：２２０ｎｍでのＵＶ
・天然溶液の用意：エタノール中において０．３ｇ／ｍＬの溶液を用意し、ラタノプロストを完全に溶解するためにフィード溶液を完全に混合する。
・サンプルの装填：エタノール中において〜０．６ｍＬ天然溶液
・ラタノプロストの収集：検出されたラタノプロストピークフロント（保持時間内において〜４１０秒）からピークエンド前の約３０秒（保持時間内において〜５１０秒）まで、ピークスタートベースライン後の約３０秒からラタノプロストピークを収集（ハートカット）
・天然ラタノプロストのＳＦＣ精製注入のクロマトグラムが図３に示されている
・得られた結果は、エタノールを共溶媒および収集された一部のＡＤ−Ｈ固定相として使用：
【表２】
・冷凍温度にて貯蔵されて１１ヶ月後には異性体が検出されず、精製されたラタノプロストは、次の検出水準として決定される異性体含有量決定のための一般的なＨＰＬＣ法にて分析された。
【表３】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、プロスタグランジンの精製方法を提供する。特に、本発明は、超臨界流体クロマトグラフィー（ｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌ ｆｌｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ、ＳＦＣ）によるプロスタグランジンの精製方法を提供する。
【背景技術】
【０００２】
プロスタグランジンは、原料医薬品（ａｃｔｉｖｅ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ、ＡＰＩ）であって、異性体的または化学的に純粋なプロスタグランジンは薬品の製剤に必要である。しかし、プロスタグランジンの精製は、これに関連する不純物のみならず、多くのプロスタグランジン異性体の類似する化学的性質のために困難がある。
【０００３】
Ｇ．Ｈ．Ｂｒｕｎｎｅｒ等（超臨界流体、６５３−６６８、Ｅ．ＫｉｒａｎおよびＪ．Ｍ．Ｈ．Ｌｅｖｅｌｔ Ｓｅｎｇｅｒｓ（編集者）、Ｋｌｕｗｅｒ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒ、１９９４）は、レプロジン（Ｒｅｐｒｏｄｉｎ）異性体（すなわち、ルプロスチオール異性体）の予備超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）分離を説明している。しかし、異性体は十分に分離されておらず、ハートカットフラクション（ｈｅａｒｔ ｃｕｔ ｆｒａｃｔｉｏｎ）の純度は８０％に過ぎない。したがって、この方法では、純度がＩＣＨクオリティを満たしていないため、商業的に使用することができない。本著者は、ＳＦＣが液体クロマトグラフィーに比べて欠点があることを認める。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかし、本発明者は、ＳＦＣを用いるプロスタグランジンを精製する別の工程を提供することにより、従来技術による問題点を克服した。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
このために、本発明は、超臨界流体クロマトグラフィーによるプロスタグランジンの精製方法を提供するが、前記方法は、固定相と、二酸化炭素を含む移動相とを使用し、固定相が未変性シリカゲルのとき、プロスタグランジンはルプロスチオールではない。例えば、本発明は、天然プロスタグランジンを精製する方法を提供するが、前記方法は、天然プロスタグランジンを固定相を含むカラムに注入するステップと、超臨界二酸化炭素を含む移動相を用いて天然プロスタグランジンをカラムを介して溶離するステップと、精製されたプロスタグランジンを含む画分を収集するステップとを含む。
【図面の簡単な説明】
【０００６】
【図１】実施例１で説明されたように得られた、天然ラタノプロストのＳＦＣ精製注入のクロマトグラムを示す。
【図２】ラタノプロスト異性体の構造を示す。
【図３】実施例２で説明されたように得られた、天然ラタノプロストのＳＦＣ精製注入のクロマトグラムを示す。
【発明を実施するための形態】
【０００７】
「精製」とは、本発明にかかる方法は、化学的および／または異性体的に純粋なプロスタグランジンを生産することを意味する。化学的に純粋な化合物とは、その化合物が関連する化合物、出発物質、中間生成物、および吸収剤が本質的にないものである。異性体的に純粋な化合物とは、その化合物が、化学的構造の異なる同一の化学分子式を有するとされる、関連する化合物が本質的にないものである。
【０００８】
一実施形態において、精製されたプロスタグランジンは、少なくとも約９９％化学的に純粋であり、好ましくは、少なくとも約９９．５％化学的に純粋であり、より好ましくは、少なくとも約９９．８％化学的に純純である。
【０００９】
他の実施形態において、精製されたプロスタグランジンは、少なくとも約９９％異性体的に純粋であり、好ましくは、少なくとも９９．５％異性体的に純粋であり、より好ましくは、少なくとも９９．９％異性体的に純純である。
【００１０】
本発明にかかる方法は、プロスタグランジンは、分析的または予備的スケールで精製することができる。「分析的」とは、合理的な期間、すなわち、一日の期間内に少なくとも約０．１ｍｇの精製されたプロスタグランジン、好ましくは、約１ｍｇの精製されたプロスタグランジンを提供するスケールを意味する。「予備的」とは、好ましい期間、すなわち、一日の期間内に少なくとも約１ｍｇの精製されたプロスタグランジン、好ましくは、約０．１ｇの精製されたプロスタグランジン、最も好ましくは、約１ｇの精製されたプロスタグランジンを提供するスケールを意味する。
【００１１】
好ましくは、プロスタグランジンは、式（Ｉ）の化合物、式（ＩＩ）の化合物、式（ＩＩＩ）の化合物、または式（ＩＶ）の化合物であり、
【化１】
式中、
Ｖは、ＣまたはＯであり、
Ｗは、
【化２】
であり、
Ｘは、ＣＯＮＲ１２Ｒ１３またはＣＯ２Ｒ１２であり、
Ｙは、
【化３】
であり、
Ｚは、Ｃ１−２０−アルキル、Ｃ２−２０−アルキニル、−Ｏ−（Ｃ６−２０−アリール）または−（Ｃ１−２０−アルキル）−（Ｃ６−２０−アリール）であり、ここで、アリール基は、Ｃ１−２０−アルキル、ハロおよびＣ（ハロ）３からなる群より選択された３個の置換基のうちの１個で選択的に置換され、
Ｒ１およびＲ２は、独立してＨまたはＯＨであるか、あるいは共に
【化４】
を形成し、
Ｒ３およびＲ４は、独立してＨまたはＯＨであり、
Ｒ５およびＲ６は、独立してＨまたはＯＨであるか、あるいは共に
【化５】
を形成し、
Ｒ７およびＲ８は、独立してＨ、ＯＨ、ハロまたはＣ１−２０−アルキルであり、
Ｒ９およびＲ１０は、独立してＨまたはＣ１−２０−アルキルであり、ここで、アルキル基は、ＣＯＮＲ１２Ｒ１３、ＣＯ２Ｒ１２またはＣＯ２−Ｍ＋より選択された１個またはそれ以上の置換基で選択的に置換され、
Ｒ１１は、Ｃ１−２０−アルキルまたは−Ｏ−（Ｃ１−２０−アルキル）であり、ここで、アルキル基は、ＣＯＮＲ１２Ｒ１３、ＣＯ２Ｒ１２またはＣＯ２−Ｍ＋より選択された１個またはそれ以上の置換基で選択的に置換され、
Ｒ１２およびＲ１３は、ＨおよびＣ１−２０アルキルからなる群より独立して選択され、
Ｍ＋は、対カチオンであり、
ハロは、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素である。Ｖ＝Ｃのとき、炭素原子は、２個の水素原子を含み、これらのうちの１個または２個は、例えば、ハロおよびＣ１−２０−アルキルより独立して選択可能な置換基からなる基で置換されていてもよい。
【００１２】
「アルキル」は、別の方式で指示されなければ、好ましくは、１〜２０個の炭素原子、より好ましくは、１〜１５個の炭素原子、最も好ましくは、１〜１０個の炭素原子を有する線状、分岐状または環状の飽和炭化水素構造である。アルキル基の例としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、シクロプロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシルおよびシクロヘキシルがある。炭素原子の数が特定されたアルキル基が指定されれば、アルキル基のすべての幾何学的異性体が含まれていてよい。例えば、「ブチル」は、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｔ−ブチルおよびシクロブチルを含む。
【００１３】
「アルキニル」は、別の方式で指示されなければ、少なくとも１個の
【数６】
基と、好ましくは、２〜２０個の炭素原子、より好ましくは、２〜１５個の炭素原子、最も好ましくは、２〜１０個の炭素原子を有する線状または分岐状の炭化水素構造である。アルキニル基の例としては、エチレン、プロピレン、ｎ−ブチニル、イソブチニルおよびヘキシニルがある。炭素原子の数が特定されたアルキニル基が指定されれば、アルキニル基のすべての幾何学的異性体が含まれていてよい。例えば、「ブチニル」は、ｎ−ブチニルおよびイソブチニルを含む。
【００１４】
「アリール」は、別の方式で指示されなければ、好ましくは、６〜２０個の炭素原子、より好ましくは、６〜１５個の炭素原子、最も好ましくは、６〜１０個の炭素原子を有する芳香族炭化水素である。アリール基の例としては、フェニルおよびナフチルがある。
【００１５】
「ハロ」は、単独でも他の基の部分でもよく、例えば、ハロゲン、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素原子である。
【００１６】
Ｍ＋は、−ＣＯ２−の対カチオン、すなわち、−ＣＯ２−Ｍ＋であり、カルボン酸塩化物、好ましくは、薬学的に許容可能なカルボン酸塩化物である。好ましくは、Ｍ＋は、金属イオンであり、例えば、Ｋ＋またはＮａ＋のようなアルカリ金属イオンである。
【００１７】
好ましくは、Ｗは、
【化７】
である。
【００１８】
好ましくは、Ｘは、ＣＯＮＨ（Ｃ１−１０−アルキル）、ＣＯ２（Ｃ１−１０−アルキル）またはＣＯ２Ｈである。より好ましくは、Ｘは、ＣＯＮＨＥｔ、ＣＯ２Ｍｅ、ＣＯ２ｉｐｒおよびＣＯ２Ｈからなる群より選択される。
【００１９】
好ましくは、Ｚは、Ｃ１−１０−アルキル、Ｃ２−１０−アルキニル、−Ｏ−（Ｃ６−１０−アリール）または−（Ｃ１−１０−アルキル）−（Ｃ６−１０−アリール）であって、アリール基は、Ｃｌおよび−ＣＦ３からなる群より選択された１〜３個の置換基で選択的に置換される。より好ましくは、Ｚは、−（ＣＨ２）５ＣＨ３、
−（ＣＨ２）３ＣＨ３、−ＣＨ２−Ｐｈ、
【化８】
である。
【００２０】
Ｒ１およびＲ２は、独立してＨまたはＯＨであってもよい。好ましくは、Ｒ１およびＲ２のうちの１個がＨのとき、他の１個はＯＨである。より好ましくは、Ｒ１およびＲ２のうちの１個がＨ、他の１個がＯＨのとき、Ｒ１、Ｒ２およびこれらが付着する炭素原子は、下記の立体化学を有する。
【化９】
【００２１】
Ｒ３およびＲ４は、独立してＨまたはＯＨである。好ましくは、Ｒ３およびＲ４のうちの１個がＨのとき、他の１個はＯＨである。より好ましくは、Ｒ３、Ｒ４およびこれらが付着する炭素原子は、下記の立体化学を有する。
【化１０】
【００２２】
Ｒ５およびＲ６は、独立してＨまたはＯＨである。一実施形態において、Ｒ５およびＲ６のうちの１個がＨのとき、他の１個はＯＨである。より好ましくは、Ｒ５およびＲ６のうちの１個がＨ、他の１個がＯＨのとき、Ｒ５、Ｒ６およびこれらが付着する炭素原子は、下記の立体化学を有する。
【化１１】
【００２３】
Ｒ５およびＲ６が共に
【化１２】
を形成し、
Ｒ３およびＲ４のうちの１個はＯＨ、他の１個はＨのとき、互変異性体、すなわち、ヘミアセタールが生成できる。このような互変異性体は、本発明の範囲に含まれるものである。互変異性平衡は、プロスタグランジンルビプロストンによって例示される。
【化１３】
【００２４】
他の実施形態においては、Ｒ５およびＲ６は、両方ともＨである。
【００２５】
好ましくは、Ｒ７およびＲ８は、Ｈ、ＯＨ、ＦまたはＣＨ３からなる群より独立して選択される。一実施形態において、Ｒ７およびＲ８は、両方ともＨである。他の実施形態では、Ｒ７およびＲ８は、両方ともＦである。さらに他の実施形態では、Ｒ７およびＲ８のうちの１個はＣＨ３で、他の１個はＨまたはＯＨである。
【００２６】
好ましくは、Ｒ９およびＲ１０は、独立してＨまたはＣ１−１０−アルキルであって、アルキル基は、ＣＯ２ＨまたはＣＯ２−Ｍ＋より選択される１個または２個以上の置換基で選択的に置換される。より好ましくは、Ｒ９およびＲ１０のうちの１個はＨで、他の１個は−（ＣＨ２）３ＣＯ２Ｈまたは−（ＣＨ２）３ＣＯ２−Ｎａ＋である。
【００２７】
好ましくは、Ｒ１１は、Ｃ１−１０−アルキルまたは−Ｏ−（Ｃ１−１０−アルキル）であって、アルキル基は、ＣＯ２ＨまたはＣＯ２−Ｍ＋より選択される１個または２個以上の置換基で選択的に置換される。より好ましくは、Ｒ１１は、−（ＣＨ２）３ＣＯ２Ｈまたは−Ｏ−ＣＨ２−ＣＯ２Ｈである。
【００２８】
好ましい実施形態において、プロスタグランジンは、以下からなる群より選択される。
【化１４】
【００２９】
好ましくは、プロスタグランジンは、ラタノプロストである。
【００３０】
これとは異なり、仮に固定相が未変性シリカゲルであれば、プロスタグランジンは、ルプロスチオールとなり得る。
【化１５】
【００３１】
一実施形態においては、固定相は、キラル固定相である。好ましくは、キラル固定相は、シリカ上にコーティングまたは固定される、誘導されたアミロースまたはセルロースポリマーまたは他の多糖類である。より好ましくは、キラル固定相は、Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ ＯＤ−Ｈ、ＣｈｉｒａｌＰａＫ ＡＳ−Ｈ、ＣｈｉｒａｌＰａｋ ＩＣ、ＣｈｉｒａｌＰａｋ ＡＤ−Ｈ、Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ ＯＪ−ＨおよびＣｈｉｒａｌｃｅｌ ＯＫ（Ｃｈｉｒａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．とＤａｉｃｅｌ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｌｔｄ．から入手可能な製品）からなる群より選択される。さらに好ましくは、キラル固定相は、ＣｈｉｒａｌＰａｋ ＡＤ−Ｈである。例えば、アミラーゼまたはセルロースポリマーは、１個または２個以上のカルバマート基、特に、３，５−ジメチルフェニルカルバメート、（Ｓ）−アルファ−メチルベンジルカルバメート、４−クロロフェニルカルバメート、４−メチルフェニルカルバメート、フェニルカルバメート、３−クロロ−４−メチルフェニルカルバメート、５−クロロ−２−メチルフェニルカルバメートなどのようなアリールを含むカルバメートおよび／またはアセテート、ベンゾエート（例えば、４−メチルベンゾエート、シンナメートなどのような１個または２個以上のエステル基を有して誘導される。
【００３２】
他の実施形態において、固定相は、非キラル固定相である。好ましくは、非キラル固定相は、プリンストンジオール（Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ Ｄｉｏｌ）、４−エチルピリジン、２−エチルピリジンまたはピリジンウレアからなる群より選択される。
【００３３】
好ましくは、移動相は、少なくとも１種の変性剤をさらに含む。変性剤は、適切な液体溶媒であり得る。適切な変性剤は、少なくとも１種のアルコール、アセトニトリル、酢酸エチル、塩化メチレンおよびそれらの組合せからなる群より選択可能である。好ましくは、少なくとも１種のアルコールは、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノールおよびそれらの組合せからなる群より選択される。変性剤は、固定相と共に使用できることが好ましい。例えば、酢酸エチルと塩化メチレンはＣｈｉｒａｌＰａｋ ＡＤカラムと共に使用することができないが、これは、酢酸エチルと塩化メチレンがＣｈｉｒａｌＰａｋ ＡＤカラムを破壊するからである。
【００３４】
二酸化炭素は容易に除去され、精製されたプロスタグランジンは、溶媒の変性剤中において溶液として提供可能である。したがって、プロスタグランジンが溶解可能な変性剤を選択することが好ましい。
【００３５】
好ましくは、少なくとも１種の変性剤が、超臨界二酸化炭素に（少なくとも）約１％ｖ／ｖまたは約１％ｗ／ｗ程度存在する。より好ましくは、少なくとも１種の変性剤が、超臨界二酸化炭素に（少なくとも）約５％ｖ／ｖまたは約５％ｗ／ｗ程度存在する。二酸化炭素に対する変性剤の割合は、クロマトグラフィー工程中に変化可能である。
【００３６】
適切なクロマトグラフ装置が当業者によく知られている。Ｔｈａｒ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｏｒ ＳＦＣまたはＮｏｖａｓｅｐ Ｓｕｐｅｒｓｅｐ ２０／３０ ＳＦＣのような超臨界流体クロマトグラフィーに適した装置を用いることが好ましい。天然プロスタグランジンを含む天然フィード（ｃｒｕｄｅ ｆｅｅｄ）は、移動相がカラム内に位置する固定相を介して流れる装置内に周期的に注入される。カラムの出口で検出された後、フィードの精製された一部は他のトラップに案内される。二酸化炭素は、精製された一部から除去され、好ましくは、再生される。カラムの出口での検出は、適切な波長でＵＶ吸収を測定することにより行われる。
【００３７】
分析的スケールにおいて、カラム直径は、約２ｍｍ〜約７ｍｍ（好ましくは、約４．６ｍｍ）であることが好適である。カラム長さは、約５ｃｍ〜約５０ｃｍ（好ましくは、約２５ｃｍ）であることが好適である。
【００３８】
予備的スケールにおいて、カラム直径は、約１０ｍｍ〜約２００ｍｍ（好ましくは、約２１ｍｍ）であることが好適である。カラム長さは、約５ｃｍ〜約５０ｃｍ（好ましくは、約２５ｃｍ）であることが好適である。
【００３９】
工程は、約５℃〜約４５℃（好ましくは、約２５℃〜約３５℃）の温度、および例えば、約８０ｂａｒ〜３００ｂａｒ（好ましくは、約１００ｂａｒ〜１５０ｂａｒ）の高圧で行われることが好適である。一般的な流量は、カラムの直径に依存するが、例えば、１ｍＬ／ｍｉｎ〜約５ｋｇ／ｍｉｎで変化可能である。
【００４０】
他の態様によれば、本発明は、上述した方法により製造できるプロスタグランジンを提供する。
【００４１】
以下の実施例は説明のためのものであって、本発明はこれに限定されない。
【００４２】
実施例１−分析的スケール
ＳＦＣ予備パラメータ：
・カラム：Ｃｈｉｒａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤ−Ｈ、４．６×２５０ｍｍ
・カラム温度：３５℃
・システム背圧：１５０Ｂａｒ
・溶離剤：アルコール変性剤のエタノールを有する二酸化炭素（ＣＯ２）
・総流量：３ｍＬ／ｍｉｎ
・グラジエント共溶媒プロファイル：初期条件＝５％エタノール：９５％ＣＯ２、線形的に増加して、１５分で、４５％エタノール：５５％ＣＯ２、２分間、４５％エタノール：５５％ＣＯ２保持、初期条件に戻り、次の注入前に、３分間平衡保持
・検出：２１０ｎｍでのＵＶ
・サンプルの用意：エタノール中において０．１ｇ／ｍＬの溶液を用意し、ラタノプロストを完全に溶解するためにフィード溶液を完全に混合する。
・サンプルの装填：５ｍｇ（エタノール中において０．１ｇ／ｍＬ天然溶液の５０μｌ）
・ラタノプロストの収集：検出されたラタノプロストピークフロント（ｐｅａｋ ｆｒｏｎｔ）（保持時間内において〜９分）から検出されたラタノプロストピークテール（ｐｅａｋ ｔａｉｌ）（保持時間内において〜１０分）まで、ベースライン上約２％からラタノプロストピークを収集（ハートカット）
・天然ラタノプロストのＳＦＣ精製注入のクロマトグラムが図１に示されている
・得られた結果は、エタノールを共溶媒およびＡＤ−Ｈ固定相として使用：
【表１】
【００４３】
実施例２−予備的スケール
ＳＦＣ予備パラメータ：
・カラム：Ｃｈｉｒａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤ−Ｈ、２１×２５０ｍｍ
・カラム温度：２５℃
・システム背圧：１００Ｂａｒ
・溶離剤：アルコール共溶媒変性剤（具体的には、エタノール：メタノール（４：１））を有する二酸化炭素（ＣＯ２）
・総流量：５０ｇ／ｍｉｎ
・共溶媒プロファイル：初期条件＝３６０秒間、１５％共溶媒：８５％ＣＯ２、３６１秒から７２０秒まで、４０％共溶媒：６０％ＣＯ２に変化、７２１秒から９００秒まで初期条件に戻る
・検出：２２０ｎｍでのＵＶ
・天然溶液の用意：エタノール中において０．３ｇ／ｍＬの溶液を用意し、ラタノプロストを完全に溶解するためにフィード溶液を完全に混合する。
・サンプルの装填：エタノール中において〜０．６ｍＬ天然溶液
・ラタノプロストの収集：検出されたラタノプロストピークフロント（保持時間内において〜４１０秒）からピークエンド前の約３０秒（保持時間内において〜５１０秒）まで、ピークスタートベースライン後の約３０秒からラタノプロストピークを収集（ハートカット）
・天然ラタノプロストのＳＦＣ精製注入のクロマトグラムが図３に示されている
・得られた結果は、エタノールを共溶媒および収集された一部のＡＤ−Ｈ固定相として使用：
【表２】
・冷凍温度にて貯蔵されて１１ヶ月後には異性体が検出されず、精製されたラタノプロストは、次の検出水準として決定される異性体含有量決定のための一般的なＨＰＬＣ法にて分析された。
【表３】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
超臨界流体クロマトグラフィーによるプロスタグランジンの精製方法であって、
固定相と、二酸化炭素を含む移動相とを使用することを含んでなり、
前記固定相が未変性シリカゲルの際に、前記プロスタグランジンがルプロスチオールではないものである、精製方法。
【請求項２】
前記プロスタグランジンが、下記の、式（Ｉ）の化合物、式（ＩＩ）の化合物、式（ＩＩＩ）の化合物、または式（ＩＶ）の化合物である、請求項１に記載の精製方法。
【化１】
〔上記式中、
Ｖは、ＣまたはＯであり、
Ｗは、
【化２】
であり、
Ｘは、ＣＯＮＲ１２Ｒ１３またはＣＯ２Ｒ１２であり、
Ｙは、
【化３】
であり、
Ｚは、Ｃ１−２０−アルキル、Ｃ２−２０−アルキニル、−Ｏ−（Ｃ６−２０−アリール）または−（Ｃ１−２０−アルキル）−（Ｃ６−２０−アリール）であり、ここで、アリール基は、Ｃ１−２０−アルキル、ハロおよびＣ（ハロ）３からなる群より選択された３個の置換基のうちの１個で選択的に置換され、
Ｒ１およびＲ２は、独立してＨまたはＯＨであるか、あるいは共に
【化４】
を形成し、
Ｒ３およびＲ４は、独立してＨまたはＯＨであり、
Ｒ５およびＲ６は、独立してＨまたはＯＨであるか、あるいは共に
【化５】
を形成し、
Ｒ７およびＲ８は、独立してＨ、ＯＨ、ハロまたはＣ１−２０−アルキルであり、
Ｒ９およびＲ１０は、独立してＨまたはＣ１−２０−アルキルであり、ここで、アルキル基は、ＣＯＮＲ１２Ｒ１３、ＣＯ２Ｒ１２またはＣＯ２−Ｍ＋より選択された１個またはそれ以上の置換基で選択的に置換され、
Ｒ１１は、Ｃ１−２０−アルキルまたは−Ｏ−（Ｃ１−２０−アルキル）であり、ここで、アルキル基は、ＣＯＮＲ１２Ｒ１３、ＣＯ２Ｒ１２またはＣＯ２−Ｍ＋より選択された１個またはそれ以上の置換基で選択的に置換され、
Ｒ１２およびＲ１３は、ＨおよびＣ１−２０アルキルからなる群より独立して選択され、
Ｍ＋は、対カチオンであり、
ハロは、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素である。〕
【請求項３】
前記プロスタグランジンが、下記の式で表される化合物からなる群より選択されてなるものである、請求項１に記載の精製方法。
【化６】
【請求項４】
前記プロスタグランジンが、下記式で表される化合物である、請求項１に記載の精製方法。
【化７】
【請求項５】
前記固定相が、キラル固定相である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の精製方法。
【請求項６】
前記キラル固定相が、シリカ上にコーティングまたは固定された、誘導アミロースまたはセルロースポリマーである、請求項５に記載の精製方法。
【請求項７】
前記キラル固定相が、シリカ上の３，５−ジメチルフェニルカルバメート−誘導セルロース、シリカ上の（Ｓ）−アルファ−メチルベンジルカルバメート−誘導アミラーゼ、シリカ上の３，５−ジクロロフェニルカルバメート−誘導セルロース、シリカ上の３，５−ジメチルフェニルカルバメート−誘導アミラーゼ、シリカ上の４−メチルベンゾエート−誘導セルロース、およびシリカ上のシンナメート−誘導セルロースからなる群より選択されてなる、請求項５に記載の精製方法。
【請求項８】
前記固定相が、非キラル固定相である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の精製方法。
【請求項９】
前記非キラル固定相が、プリンストンジオール（Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ Ｄｉｏｌ）、４−エチルピリジン、２−エチルピリジンおよびピリジンウレアからなる群より選択されてなる、請求項８に記載の精製方法。
【請求項１０】
前記移動相が、少なくとも１種の変性剤を含む、請求項１〜９のいずれか１項に記載の精製方法。
【請求項１１】
前記少なくとも１種の変性剤は、少なくとも１種のアルコール、アセトニトリル、酢酸エチル、塩化メチレンおよびそれらの組合せからなる群より選択される、請求項１０に記載の精製方法。
【請求項１２】
前記少なくとも１種の変性剤が、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノールおよびそれらの組合せからなる群より選択されるアルコールを含んでなる、請求項１０に記載の精製方法。
【請求項１３】
前記少なくとも１種の変性剤が、二酸化炭素に対して約１％ｖ／ｖ程度存在する、請求項１０に記載の精製方法。
【請求項１４】
前記少なくとも１種の変性剤が、二酸化炭素に対して約１％ｗ／ｗ程度存在する、請求項１０に記載の精製方法。
【請求項１５】
前記少なくとも１種の変性剤が、二酸化炭素に対して約５％ｖ／ｖ程度存在する、請求項１０に記載の精製方法。
【請求項１６】
前記少なくとも１種の変性剤が、二酸化炭素に対して約５％ｗ／ｗ程度存在する、請求項１０に記載の精製方法。
【請求項１７】
少なくとも９９％の、化学的に純粋な、精製されたプロスタグランジンを提供する、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の精製方法。
【請求項１８】
少なくとも９９％の、異性体的に純粋な、精製されたプロスタグランジンを提供する、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の精製方法。
【請求項１９】
超臨界流体クロマトグラフィーによるラタノプロストの精製精製方法であって、
固定相と、二酸化炭素を含む移動相とを使用することを含んでなる、精製方法。
【請求項２０】
請求項１〜１６のいずれか１項に記載の精製方法により得られた、プロスタグランジン。
【請求項２１】
０．０３％未満のＣ１１−ベータ異性体、０．０３％未満のＣ１５Ｒ−トランス異性体、０．０５％未満のＣ１５Ｓ−トランス異性体、および０．０３％未満のＣ１５Ｓ−シス異性体を含んでなる、ラタノプロスト。
【請求項２２】
１１ヶ月間冷凍温度にて貯蔵された後、０．０３％未満のＣ１１−ベータ異性体、０．０３％未満のＣ１５Ｒ−トランス異性体、０．０５％未満のＣ１５Ｓ−トランス異性体、および０．０３％未満のＣ１５Ｓ−シス異性体を含んでなる、ラタノプロスト。
【請求項２３】
固定相を有するカラムに天然プロスタグランジンを注入し、
超臨界二酸化炭素を含んでなる移動相を用いて、カラムを通して天然プロスタグランジンを溶離し、
精製されたプロスタグランジンを含んでなる画分を収集することを含んでなる、天然プロスタグランジンの精製方法。
【請求項１】
超臨界流体クロマトグラフィーによるプロスタグランジンの精製方法であって、
固定相と、二酸化炭素を含む移動相とを使用することを含んでなり、
前記固定相が未変性シリカゲルの際に、前記プロスタグランジンがルプロスチオールではないものである、精製方法。
【請求項２】
前記プロスタグランジンが、下記の、式（Ｉ）の化合物、式（ＩＩ）の化合物、式（ＩＩＩ）の化合物、または式（ＩＶ）の化合物である、請求項１に記載の精製方法。
【化１】
〔上記式中、
Ｖは、ＣまたはＯであり、
Ｗは、
【化２】
であり、
Ｘは、ＣＯＮＲ１２Ｒ１３またはＣＯ２Ｒ１２であり、
Ｙは、
【化３】
であり、
Ｚは、Ｃ１−２０−アルキル、Ｃ２−２０−アルキニル、−Ｏ−（Ｃ６−２０−アリール）または−（Ｃ１−２０−アルキル）−（Ｃ６−２０−アリール）であり、ここで、アリール基は、Ｃ１−２０−アルキル、ハロおよびＣ（ハロ）３からなる群より選択された３個の置換基のうちの１個で選択的に置換され、
Ｒ１およびＲ２は、独立してＨまたはＯＨであるか、あるいは共に
【化４】
を形成し、
Ｒ３およびＲ４は、独立してＨまたはＯＨであり、
Ｒ５およびＲ６は、独立してＨまたはＯＨであるか、あるいは共に
【化５】
を形成し、
Ｒ７およびＲ８は、独立してＨ、ＯＨ、ハロまたはＣ１−２０−アルキルであり、
Ｒ９およびＲ１０は、独立してＨまたはＣ１−２０−アルキルであり、ここで、アルキル基は、ＣＯＮＲ１２Ｒ１３、ＣＯ２Ｒ１２またはＣＯ２−Ｍ＋より選択された１個またはそれ以上の置換基で選択的に置換され、
Ｒ１１は、Ｃ１−２０−アルキルまたは−Ｏ−（Ｃ１−２０−アルキル）であり、ここで、アルキル基は、ＣＯＮＲ１２Ｒ１３、ＣＯ２Ｒ１２またはＣＯ２−Ｍ＋より選択された１個またはそれ以上の置換基で選択的に置換され、
Ｒ１２およびＲ１３は、ＨおよびＣ１−２０アルキルからなる群より独立して選択され、
Ｍ＋は、対カチオンであり、
ハロは、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素である。〕
【請求項３】
前記プロスタグランジンが、下記の式で表される化合物からなる群より選択されてなるものである、請求項１に記載の精製方法。
【化６】
【請求項４】
前記プロスタグランジンが、下記式で表される化合物である、請求項１に記載の精製方法。
【化７】
【請求項５】
前記固定相が、キラル固定相である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の精製方法。
【請求項６】
前記キラル固定相が、シリカ上にコーティングまたは固定された、誘導アミロースまたはセルロースポリマーである、請求項５に記載の精製方法。
【請求項７】
前記キラル固定相が、シリカ上の３，５−ジメチルフェニルカルバメート−誘導セルロース、シリカ上の（Ｓ）−アルファ−メチルベンジルカルバメート−誘導アミラーゼ、シリカ上の３，５−ジクロロフェニルカルバメート−誘導セルロース、シリカ上の３，５−ジメチルフェニルカルバメート−誘導アミラーゼ、シリカ上の４−メチルベンゾエート−誘導セルロース、およびシリカ上のシンナメート−誘導セルロースからなる群より選択されてなる、請求項５に記載の精製方法。
【請求項８】
前記固定相が、非キラル固定相である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の精製方法。
【請求項９】
前記非キラル固定相が、プリンストンジオール（Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ Ｄｉｏｌ）、４−エチルピリジン、２−エチルピリジンおよびピリジンウレアからなる群より選択されてなる、請求項８に記載の精製方法。
【請求項１０】
前記移動相が、少なくとも１種の変性剤を含む、請求項１〜９のいずれか１項に記載の精製方法。
【請求項１１】
前記少なくとも１種の変性剤は、少なくとも１種のアルコール、アセトニトリル、酢酸エチル、塩化メチレンおよびそれらの組合せからなる群より選択される、請求項１０に記載の精製方法。
【請求項１２】
前記少なくとも１種の変性剤が、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノールおよびそれらの組合せからなる群より選択されるアルコールを含んでなる、請求項１０に記載の精製方法。
【請求項１３】
前記少なくとも１種の変性剤が、二酸化炭素に対して約１％ｖ／ｖ程度存在する、請求項１０に記載の精製方法。
【請求項１４】
前記少なくとも１種の変性剤が、二酸化炭素に対して約１％ｗ／ｗ程度存在する、請求項１０に記載の精製方法。
【請求項１５】
前記少なくとも１種の変性剤が、二酸化炭素に対して約５％ｖ／ｖ程度存在する、請求項１０に記載の精製方法。
【請求項１６】
前記少なくとも１種の変性剤が、二酸化炭素に対して約５％ｗ／ｗ程度存在する、請求項１０に記載の精製方法。
【請求項１７】
少なくとも９９％の、化学的に純粋な、精製されたプロスタグランジンを提供する、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の精製方法。
【請求項１８】
少なくとも９９％の、異性体的に純粋な、精製されたプロスタグランジンを提供する、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の精製方法。
【請求項１９】
超臨界流体クロマトグラフィーによるラタノプロストの精製精製方法であって、
固定相と、二酸化炭素を含む移動相とを使用することを含んでなる、精製方法。
【請求項２０】
請求項１〜１６のいずれか１項に記載の精製方法により得られた、プロスタグランジン。
【請求項２１】
０．０３％未満のＣ１１−ベータ異性体、０．０３％未満のＣ１５Ｒ−トランス異性体、０．０５％未満のＣ１５Ｓ−トランス異性体、および０．０３％未満のＣ１５Ｓ−シス異性体を含んでなる、ラタノプロスト。
【請求項２２】
１１ヶ月間冷凍温度にて貯蔵された後、０．０３％未満のＣ１１−ベータ異性体、０．０３％未満のＣ１５Ｒ−トランス異性体、０．０５％未満のＣ１５Ｓ−トランス異性体、および０．０３％未満のＣ１５Ｓ−シス異性体を含んでなる、ラタノプロスト。
【請求項２３】
固定相を有するカラムに天然プロスタグランジンを注入し、
超臨界二酸化炭素を含んでなる移動相を用いて、カラムを通して天然プロスタグランジンを溶離し、
精製されたプロスタグランジンを含んでなる画分を収集することを含んでなる、天然プロスタグランジンの精製方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図２】
【図３】
【公表番号】特表２０１２−５３０７８３（Ｐ２０１２−５３０７８３Ａ）
【公表日】平成２４年１２月６日（２０１２．１２．６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５１７６４４（Ｐ２０１２−５１７６４４）
【出願日】平成２２年６月２２日（２０１０．６．２２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０３９４５７
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／００５５０５
【国際公開日】平成２３年１月１３日（２０１１．１．１３）
【出願人】（５９０００４７１８）ジョンソン、マッセイ、パブリック、リミテッド、カンパニー (152)
【氏名又は名称原語表記】ＪＯＨＮＳＯＮ ＭＡＴＴＨＥＹ ＰＵＢＬＩＣ ＬＩＭＩＴＥＤ ＣＯＭＰＡＮＹ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２４年１２月６日（２０１２．１２．６）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年６月２２日（２０１０．６．２２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０３９４５７
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／００５５０５
【国際公開日】平成２３年１月１３日（２０１１．１．１３）
【出願人】（５９０００４７１８）ジョンソン、マッセイ、パブリック、リミテッド、カンパニー (152)
【氏名又は名称原語表記】ＪＯＨＮＳＯＮ ＭＡＴＴＨＥＹ ＰＵＢＬＩＣ ＬＩＭＩＴＥＤ ＣＯＭＰＡＮＹ
【Ｆターム（参考）】
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