ヘモグロビンＡ１ｃ測定における校正方法
【課題】分離分析法を用いたヘモグロビンＡ１ｃの測定において、簡便かつ短時間での校正が可能な新たな校正方法の提供。
【解決手段】分離分析法を用いたヘモグロビンＡ１ｃ量の測定において、１種類の校正物質を使用した１点校正を行うことによって、測定値の補正に使用する校正データを得ることを含む校正方法に関する。
【解決手段】分離分析法を用いたヘモグロビンＡ１ｃ量の測定において、１種類の校正物質を使用した１点校正を行うことによって、測定値の補正に使用する校正データを得ることを含む校正方法に関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、分離分析法を用いたヘモグロビンＡ１ｃの測定における校正方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
糖尿病の治療分野において、合併症の発症予防を目的とした厳格な血糖値管理が重要性を増している。その中でも、血糖値の管理指標であるヘモグロビンＡ１ｃ（以下、「ＨｂＡ１ｃ」ともいう）値の正確性及び精密性は、糖尿病治療の質をも左右する大きなファクターとなっている。
【０００３】
ＨｂＡ１ｃ測定装置は、メーカ間差や施設間差が大きく、ＨｂＡ１ｃ値の正確性に問題があったが、ＨｂＡ１ｃ測定方法についての標準化が行われたことによってこれらの問題は大きく改善された（例えば、非特許文献１参照）。また、近年では、諸外国で異なって表記されていたＨｂＡ１ｃ値の統一に向けた指針が発表され、ＨｂＡ１ｃ測定法におけるシステム構成の役割は益々重要性を増している（例えば、非特許文献２参照）。
【０００４】
ＨｂＡ１ｃ量の測定方法としては、例えば、分離分析法、アフィニティ法、免疫法、酵素法等が使用されており、これらの方法を用いたＨｂＡ１ｃ測定用専用機や試薬が実用化されている。その中でも、糖尿病治療分野では分離分析法を用いたＨｂＡ１ｃの測定の有用性が高いといわれている。このため、例えば、ＡＤＡＭＳ Ａ１ｃ ＨＡ−８１７０（商品名、アークレイ製（例えば、非特許文献３参照））や、ＨＬＣ−７２３Ｇ８（商品名、東ソー製（例えば、非特許文献４参照））等といった高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）法のような分離分析法を用いた装置が実用化されている。これらの装置はいずれも、上述した理由によりシステム校正機能が搭載されており、その校正方法としてはＨｂＡ１ｃ値の異なる２種類の校正物質を用いた校正方法（２点校正法）が採用されている（例えば、非特許文献５）。
【０００５】
また、ＨＰＬＣ法以外の分離分析法として、例えば、キャピラリー電気泳動法を用いたＨｂＡ１ｃ測定技術の開発が行われている（例えば、特許文献１及び２）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】国際公開第２００８／０２９６８４号
【特許文献２】国際公開第２００８／０２９６８５号
【０００７】
【非特許文献１】「グリコヘモグロビンの標準化に関する委員会の中間報告」糖尿病，Ｖｏｌ．３７，Ｎｏ．３，ｐ．２３３−２４３，１９９４
【非特許文献２】「ＨｂＡ１ｃ測定におけるＩＦＣＣ値併記に関する指針」臨床化学，Ｖｏｌ．３７，Ｎｏ．４，ｐ．３９３−４０９，２００８
【非特許文献３】「ＡＤＡＭＳ Ａ１ｃ ＨＡ−８１７０によるＨｂＡ１ｃの基礎的検討」医学と薬学，Ｖｏ．５８，Ｎｏ．２，ｐ．３５５−３６１，２００７
【非特許文献４】「東ソー自動グリコヘモグロビン分析計ＨＬＣ−７２３Ｇ８の開発」ＴＯＳＯＨ Ｒｅｓｅａｒｃｈ＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｒｅｖｉｅｗ
【非特許文献５】「自動グリコヘモグロビン分析計 ＨＬＣ−７２３Ｇ８カタログ」（東ソー）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
迅速な測定結果を患者に提示する観点から、測定の簡便化や、短縮が求められている。このため、本発明は、分離分析法を用いたヘモグロビンＡ１ｃの測定において、簡便かつ短時間での校正が可能な新たな校正方法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、分離分析法を用いたヘモグロビンＡ１ｃ量の測定において、１種類の校正物質を使用した１点校正を行うことによって、測定値の補正に使用する校正データを得ることを含む校正方法に関する。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、分離分析法を測定原理とするヘモグロビンＡ１ｃ測定装置において、通常、２点以上で行われている校正を１点のみで行うことから、簡便かつ短時間で校正を行うことができるという効果を奏する。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】図１は、分離指数の算出方法を説明するための概念図である。
【図２】図２は、実施形態における分析装置の構成例を示す機能ブロック図である。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明は、分離分析法を用いたＨｂＡ１ｃ量の測定において、１点のみの校正物質を用いた１点校正であっても、２点以上の校正物質を用いた校正を行った場合と同程度の精度のＨｂＡ１ｃ値が得られるという知見に基づく。
【００１３】
分離分析法を用いたＨｂＡ１ｃ量の測定（測定装置）では、通常、どの方法であっても２点以上の校正物質を用いた校正法を採用している。なぜなら、校正に使用する検量線を１点のみの校正物質を用いて作成した場合、検量線がゼロ点を通らず、２点以上の校正物質を用いて校正しないと十分な精度が得られないと考えられていたからである。具体例として、ＡＤＡＭＳ Ａ１ｃ ＨＡ−８１７０（商品名、アークレイ製）では、ＨｂＡ１ｃ値の表記値が約３５ｍｍｏｌ／ｍｏｌと約９０ｍｍｏｌ／ｍｏｌの２種類の校正物質を用いて、測定装置の校正が実施されている。また、検量線がゼロ点を通らない（検量線のバイアスが生じる）理由としては、測定対象となる安定型ＨｂＡ１ｃと同程度の溶出時間を有する安定型ＨｂＡ１ｃ以外のマイナーコンポーネント（例えば、不安定型ＨｂＡ１ｃ分画、カルバミル化Ｈｂ分画、アセチル化Ｈｂ分画等）の存在や、各装置固有の問題として考えられていた。これらの理由により、当該分野において、分離分析法を用いたＨｂＡ１ｃの測定では２点以上の校正物質を用いた校正法が必須であると考えられており、２点未満の校正物質による校正の可能性について議論すらされていなかった。
【００１４】
これに対し、本発明者は、例えば、測定時間の短縮の点からは、校正点（校正物質）の数は少ない方がよいことから、校正点の数及び測定精度についての検討を行ったところ、分離分析における安定型ＨｂＡ１ｃ（ｓ−ＨｂＡ１ｃ）の分離性能と検量線のバイアスとの関係性を見出した。具体的には、検量線のバイアスは、ｓ−ＨｂＡ１ｃ分画と、ｓ−ＨｂＡ１ｃ分画の前後に分離されるｓ−ＨｂＡ１ｃ以外のＨｂマイナーコンポーネントの相互干渉に依存するものであることを見出した。すなわち、本発明は、ｓ−ＨｂＡ１ｃ以外のＨｂマイナーコンポーネントの影響を排除することによって、今まで不可能であると考えられていた１点校正による校正が可能であるとの知見に基づく。さらに、本発明は、後述する分離指数が所定の範囲となる条件で分離分析を行うことにより、１点校正による校正が可能であるとの知見に基づく。
【００１５】
本発明によれば、分離分析法を用いたＨｂＡ１ｃ量の測定において、校正を１種類の校正物質を使用した１点校正で行うことから、例えば、校正に要する時間を短縮でき、さらにはＨｂＡ１ｃ量の測定時間を短縮できるという効果を奏する。また、本発明によれば、校正に用いる校正物質の種類が１種類でよくなることから、ＨｂＡ１ｃ量の校正及び／又は測定におけるコストパフォーマンスを向上できるという効果を好ましくは奏しうる。
【００１６】
本明細書において「校正データ」とは、分離分析法を用いたＨｂＡ１ｃ量の測定において、測定値の補正に使用するものであって、１種類の校正物質のみを使用した１点校正を行うことにより得るものである。校正データとしては、例えば、検量線が挙げられ、分離分析法を用いて測定した１種類の校正物質のＨｂＡ１ｃ量の測定値と、校正物質の表記値とを用いて作成された検量線が好ましい。
【００１７】
本明細書において「測定値」とは、本発明の校正方法により得られる校正データによって補正を行う前のＨｂＡ１ｃ量の値のことをいい、例えば、分離分析法を用いて試料の測定を行うことにより実際に得られる実測値を含む。本明細書において「測定値の補正」とは、測定値を上記校正データを用いて補正することをいい、例えば、上記校正データを用いて測定値をより正確な値（ＨｂＡ１ｃ量の値）とすることを含む。
【００１８】
本明細書において「１点校正」とは、１種類の校正物質のみを使用して得られる１点の校正点を用いて校正を行うことをいい、好ましくは１種類の校正物質を用いて得られる１つの校正点と原点とを結ぶ検量線を作成することを含み、より好ましくは１種類の校正物質のＨｂＡ１ｃ量を分離分析法を用いて測定し、得られた測定値と、使用した校正物質に表記されているＨｂＡ１ｃ量（表記値）とを用いて検量線を作成することを含む。
【００１９】
本明細書において「ヘモグロビンＡ１ｃ（ＨｂＡ１ｃ）」とは、ヘモグロビンのβ鎖のＮ末にグルコースが結合したものをいい、好ましくは安定型ＨｂＡ１ｃ（ｓ−ＨｂＡ１ｃ）のことをいう。
【００２０】
本明細書において「ヘモグロビンＡ１ｃ量（ＨｂＡ１ｃ量）」とは、試料中又は血液中のＨｂＡ１ｃの濃度をいい、実用的な観点からは、ＨｂＡ１ｃ値を指すことが好ましい。本明細書において「ＨｂＡ１ｃ値」とは、試料又は血液におけるヘモグロビンに対するＨｂＡ１ｃの割合（ＨｂＡ１ｃ濃度／ヘモグロビン濃度）をいい、単位としては、ｍｍｏｌ／ｍｏｌ又は％である。
【００２１】
本明細書において「分離分析法」とは、試料に含まれる分析対象物を個別に分離しながら分析を行う方法であって、例えば、液体クロマトグラフィー法、キャピラリー電気泳動法及びキャピラリー電気クロマトグラフィー法等が挙げられる。液体クロマトグラフィー法としては、例えば、陽イオン交換クロマトグラフィー法、陰イオン交換クロマトグラフィー法、分配クロマトグラフィー法、逆相分配クロマトグラフィー法、アフィニティークロマトグラフィー法、及びゲルろ過クロマトグラフィー法等が挙げられる。キャピラリー電気泳動法としては、例えば、キャピラリーゾーン電気泳動法、キャピラリー等電点電気泳動法、キャピラリー導電クロマトグラフィー法、キャピラリー等速電気泳動法、及びキャピラリーゲル電気泳動法等が挙げられる。
【００２２】
［校正方法］
本発明は、分離分析法を用いたＨｂＡ１ｃ量の測定において、１種類の校正物質を使用した１点校正を行うことによって、測定値の補正に使用する校正データを得ることを含む校正方法に関する。
【００２３】
前記校正データは、検量線であることが好ましい。検量線は、分離分析法を用いて測定した校正物質のＨｂＡ１ｃ量の測定値と、校正物質の表記値とを用いて作成することが好ましく、より好ましくはＨｂＡ１ｃ値が０である物質と１点の校正点（１種類の校正物質）とを用いて検量線を作成することが好ましく、さらに好ましくは校正点（１点）について多重測定を行い、これと検量線上のゼロ点とのあいだで、最小二乗法等で直線回帰させることによって直線の検量線を得ることである。また、多重測定により得られた値の平均値を求め、それを直線で繋ぐことによって作成してもよい。
【００２４】
本発明の校正方法の好ましい実施形態は、校正精度の向上の点から、例えば、以下に定義する分離指数が所定の範囲となる条件で校正物質の分離分析を行うことであり、好ましくは分離指数が０以上０．２以下となる条件で分離分析を行うことであり、より好ましくは０を超え０．２以下、さらに好ましくは０を超え０．１以下、さらにより好ましくは０を越え０．０６以下である。分離指数は、分離分析により得られる分離パターンにおいて、ｓ−ＨｂＡ１ｃ分画とその前又は後に分離される分画との間のボトム高さ（ａ）と、ｓ−ＨｂＡ１ｃ分画のピーク高さ（ｂ）とを用いて下記式によって得られる。
分離指数＝｛ｓ−ＨｂＡ１ｃ分画とその前又は後に分離される分画との間のボトム高さ（ａ）｝／｛ｓ−ＨｂＡ１ｃ分画のピーク高さ（ｂ）｝
【００２５】
また、ボトム高さ（ａ）は、測定対象となるｓ−ＨｂＡ１ｃの分画と一部重複して分離される分画と、ｓ−ＨｂＡ１ｃ分画との間のボトムの高さであることが好ましい。ｓ−ＨｂＡ１ｃ分画とｓ−ＨｂＡ１ｃ分画の前に分離された分画とが一部重複している場合は、ｓ−ＨｂＡ１ｃ分画とｓ−ＨｂＡ１ｃ分画の前に分離された分画との間のボトム高さが好ましい。ｓ−ＨｂＡ１ｃ分画とｓ−ＨｂＡ１ｃ分画の後に分離された分画とが一部重複している場合は、ｓ−ＨｂＡ１ｃ分画とｓ−ＨｂＡ１ｃ分画の後に分離された分画との間のボトム高さが好ましい。また、ｓ−ＨｂＡ１ｃ分画が前後に分離された分画の双方と一部重複する場合は、ｓ−ＨｂＡ１ｃ分画とＨｂＡ１ｃ分画の前に分離された分画との間のボトム高さ及びｓ−ＨｂＡ１ｃ分画とｓ−ＨｂＡ１ｃ分画の後に分離された分画との間のボトム高さのそれぞれを用いて分離指数を求めることが好ましい。
【００２６】
ボトム高さ（ａ）、及びｓ−ＨｂＡ１ｃ分画のピーク高さ（ｂ）は、例えば、図１に示すように測定できる。図１は、液体クロマトグラフィーを用いたＨｂＡ１ｃ量の測定により得られた分離パターンの一例を示すグラフである。図１の例では、分析対象であるｓ−ＨｂＡ１ｃ分画が、ｓ−ＨｂＡ１ｃ分画の前に分離された不安定型ＨｂＡ１ｃ（ｌ−ＨｂＡ１ｃ）分画と一部重複している。このため、図１の例では、ｓ−ＨｂＡ１ｃ分画の前に分離されたｌ−ＨｂＡ１ｃ分画とｓ−ＨｂＡ１ｃ分画との間のボトムの高さをボトム高さ（ａ）とした。ボトム高さ（ａ）は、ｌ−ＨｂＡ１ｃ分画とｓ−ＨｂＡ１ｃ分画との間の最も低い吸光度とベースの吸光度との差を求めることによって算出できる。ｓ−ＨｂＡ１ｃ分画のピーク高さ（ｂ）は、ｓ−ＨｂＡ１ｃ分画の最も高い吸光度とベースの吸光度との差を求めることによって算出できる。
【００２７】
液体クロマトグラフィー法を用いて分離分析を行う場合、例えば、カラム径を細くしたり、カラム長を長くしたり、流速を遅くしたり、ゲル粒径を小さくすること等によって分離精度を向上でき、上記分離精度での分離パターンを得ることができる。キャピラリー電気泳動法を用いて分離分析を行う場合、例えば、キャピラリー長を長くすることによって分離精度を向上できる。
【００２８】
校正に用いる校正物質のＨｂＡ１ｃ値（ＨｂＡ１ｃ濃度／Ｈｂ濃度）は、例えば、１４〜４００ｍｍｏｌ／ｍｏｌ（ＩＦＣＣ値）であることが好ましく、校正精度及び／又は測定精度の向上の点から、より好ましくは１４〜１９０ｍｍｏｌ／ｍｏｌ、さらに好ましくは２５〜１５０ｍｍｏｌ／ｍｏｌである。また、校正に用いる校正物質のＨｂＡ１ｃ値は、例えば、３〜４０％であることが好ましく、校正及び／又は測定精度の向上の点から、より好ましくは３〜２０％、さらに好ましくは４〜１６％である。
【００２９】
ＨｂＡ１ｃ量の測定は、例えば、ＨｂＡ１ｃに対応する波長で吸光度を測定することにより行うことができる。ＨｂＡ１ｃに対応する波長としては、例えば、４１５〜４３０ｎｍの範囲の波長が挙げられる。
【００３０】
［ＨｂＡ１ｃ量の測定方法］
本発明は、その他の態様として、ＨｂＡ１ｃ量を測定する方法であって、分離分析法を用いて試料のＨｂＡ１ｃ量を測定すること、及び前記測定により得られたヘモグロビンＡ１ｃ量を、上述した本発明の校正方法により得られた校正データを用いて補正することを含むＨｂＡ１ｃ量の測定方法に関する。本発明のＨｂＡ１ｃ量の測定方法によれば、本発明の校正方法により得られた校正データを用いてＨｂＡ１ｃ量の測定値の補正を行うことから、例えば、校正に要する時間を短縮することができ、しいては測定時間を短縮することができる。
【００３１】
本発明のＨｂＡ１ｃ量の測定方法は、例えば、ＨｂＡ１ｃに対応する波長で吸光度を測定することを含んでいてもよい。
【００３２】
［分析装置］
本発明は、さらにその他の態様として、分離分析法を用いて試料中のＨｂＡ１ｃを含む成分を分離し、分離させた成分を測定する測定部と、前記測定部において、１種類の校正物質を使用した１点校正を行うことによって、測定値の補正に使用する校正データを得る制御部と、前記制御部により得られる校正データを記録する記録部とを備える分析装置であって、前記制御部は、前記測定部により得られる試料のヘモグロビンＡ１ｃ量を、前記校正データを用いて補正する分析装置に関する。本発明の分析装置によれば、本発明の校正方法により得られた校正データを用いてＨｂＡ１ｃ量の測定値の補正を行うことから、例えば、校正に要する時間を短縮することができ、しいては測定時間を短縮することができる。また好ましくは、校正データとして１点校正により得られた校正データを使用することから、分析精度を向上させることができるという効果を奏しうる。
【００３３】
前記制御部は、分離分析法を用いて測定した前記校正物質のＨｂＡ１ｃ量の測定値と、前記校正物質の表記値とを用いて検量線を作成し、得られた検量線を前記校正データとして使用することが好ましい。
【００３４】
前記測定部は、試料中のＨｂＡ１ｃを含む成分を分離する分離デバイスを備えることが好ましい。
【００３５】
本発明の分析装置は、例えば、校正データを得るために、本発明の校正方法を用いて１点校正されるモードを備えることが好ましい。
【００３６】
［プログラム］
本発明は、さらにその他の態様として、上記の本発明の校正方法による校正処理をコンピュータに実行させる校正プログラムに関する。また、本発明は、さらにその他の態様として、分離分析法を用いて試料中のＨｂＡ１ｃを含む成分を分離し、ＨｂＡ１ｃ量を測定する分析装置を制御するコンピュータに処理を実行させる分析プログラムであって、上記本発明の校正方法により校正データを得る処理と、測定により得られたヘモグロビンＡ１ｃ量を、前記校正データを用いて補正する処理とを、コンピュータに実行させる分析プログラムに関する。より具体的には、本発明の分析プログラムは、上述した分離分析法を用いて測定した１種類の校正物質のＨｂＡ１ｃ量の測定値と、前記校正物質の表記値とを用いて検量線を作成する処理を、コンピュータに実行させる分析プログラムに関する。
【００３７】
分析プログラムは、さらに、前記分析装置により得られる測定データを、前記検量線を用いて補正する処理を、コンピュータに実行させることが好ましい。
【００３８】
［校正用キット］
本発明は、さらにその他の態様として、本発明の校正方法に用いるためのキットであって、前記１点校正のための１種類の校正物質を含む校正用キットに関する。本発明の校正用キットは、本発明の校正方法に用いることができる。
【００３９】
本発明の校正用キットは、校正物質のＨｂＡ１ｃ量として、例えば、ＨｂＡ１ｃ値、又はＨｂＡ１ｃ濃度とＨｂ濃度とが記載された添付文書を含むことが好ましい。添付文書は、該校正物質を用いて上述する校正データの作成方法等が記載されていることが好ましい。これにより、本発明の校正方法を容易に行うことができる。
【００４０】
以下に、本発明の実施の形態について図面を用いて具体的に説明する。但し、以下の説明は一例に過ぎず、本発明はこれに限定されないことはいうまでもない。
【００４１】
図２は、本発明の実施形態における分析装置の構成例を示す機能ブロック図である。図２に示す分析装置１０は、分離分析法を用いた分析装置であり、試料に含まれる成分を分離し、分離した成分の定量を行う。分析装置１０は、記録部３と、制御部１と、測定部２を備える。測定部２は、分離分析法を用いて試料中のＨｂＡ１ｃを含む成分を分離し、分離させた成分を測定する。制御部１は、測定部２により得られる測定データと校正データを用いてＨｂＡ１ｃ量を計算する。記録部３は、校正データを記録する。
【００４２】
図２に示す分析装置１０では、制御部１において１種類の校正物質のみを使用した１点校正を行うことによって校正データを得ている。具体的には、制御部１は、分離分析法を用いて測定した校正物質のＨｂＡ１ｃ量の測定値と、測定に用いた校正物質の表記値とを用いて検量線を作成し、得られた検量線を上記校正データとして使用する。このように１点校正により校正データを得ることから、例えば、校正に要する時間を大幅に短縮できるとともに、簡便に校正データを得ることができる。
【００４３】
校正データは、測定部２において得られる測定データを補正するために用いるものである。このように、校正データと測定データとを用いてＨｂＡ１ｃ量を算出することにより、より精度の高いＨｂＡ１ｃ量を得ることができる。
【００４４】
校正物質の分離分析は、分離分析により得られる分離パターンにおけるｓ−ＨｂＡ１ｃ分画とその前又は後に分離される分画との間のボトム高さ（ａ）と、ｓ−ＨｂＡ１ｃ分画のピーク高さ（ｂ）とによって規定される上述の分離指数（＝（ａ）／（ｂ））が所定の範囲となる条件で行うことが好ましい。分離指数は、例えば、０以上０．２以下が好ましく、より好ましくは０を超え０．２以下、さらに好ましくは０を超え０．１以下、さらにより好ましくは０を越え０．０６以下である。
【００４５】
図２に示す制御部１の機能は、例えば、パーソナルコンピュータ等のＣＰＵを備えた汎用コンピュータあるいは測定装置に内蔵されたマイクロプロセッサが、所定のプログラムを実行することにより実現することができる。記録部３は、コンピュータのプロセッサからアクセス可能なメモリ、ＨＤＤ等の記録装置により構成することができる。分析装置１０は、制御部１、測定部２及び記録部３が一体となった構成であってもよいし、独立した測定部２に汎用コンピュータが接続された構成であってもよい。また、コンピュータを上記制御部１として機能させるためのプログラムまたはプログラムを記録した記録媒体も本発明の実施形態に含まれる。また、コンピュータが実行する分析方法も、本発明の一側面である。ここで、記録媒体は、信号そのもののような、一時的な（non-transitory）メディアは含まない。
【００４６】
以下に、実施例及び参考例を用いて本発明をさらに説明する。但し、本発明は以下の実施例に限定して解釈されない。
【実施例】
【００４７】
まず、下記表１に示す測定条件において、下記の２種類の校正物質を用いてＨｂＡ１ｃ値の測定を行い、得られた２点の校正点から校正用検量線を作成した。
[２点校正用校正物質]
ＡＤＡＭＳ Ａ１ｃＨＡ−８１６０専用キャリブレータ ｌｅｖｅｌ１（ＨｂＡ１ｃ値：３５ｍｍｏｌ／ｍｏｌ）及びＬｅｖｅｌ２（ＨｂＡ１ｃ値：９５ｍｍｏｌ／ｍｏｌ）、アークレイ製）
【００４８】
キャピラリー管としては、内壁にスルホン基を有するシリル化剤が共有結合で固定されて形成された陰極性層を有する溶融シリカ製のキャピラリー管（内径５０μｍ）であって、下記表１に示す異なるキャピラリー長を有する５種類のキャピラリー管を準備した。
【００４９】
ランニングバッファーとしては、１００ｍＭリンゴ酸を含有するアルギニン酸水溶液に、コンドロイチン硫酸濃度が０．５重量％となるように添加したもの（ｐＨ５．５）を準備した。
【００５０】
キャピラリー管に精製水を圧力０．１ＭＰａ（１０００ｍｂａｒ）で２０分間通液し、キャピラリー管を洗浄した後、上記ランニングバッファー（ｐＨ５．５）を圧力０．１ＭＰａ（１０００ｍｂａｒ）で通液し、キャピラリー管内にランニングバッファーを充填した。この状態で、キャピラリー管の陽極側から上記校正物質を注入し、ついでキャピラリー管の両端を１０ｋＶで印加して電気泳動を行い、４１５ｎｍにおける吸光度を測定した（ｎ＝３）。
【００５１】
得られた分離パターンから、ｓ−ＨｂＡ１ｃ分画に相当する面積と、全ヘモグロビンに相当する面積とを算出し、これらを用いて全ヘモグロビンに対するｓ−ＨｂＡ１ｃの割合（ＨｂＡ１ｃ値）を算出した。各校正物質に記載されているＨｂＡ１ｃ値（ｍｍｏｌ／ｍｏｌ）をＹ軸に、得られた各校正物質のＨｂＡ１ｃ値（ｓ−ＨｂＡ１ｃに相当する面積／全ヘモグロビンに相当する面積）をＸ軸として検量線を作成した。得られた検量線のｙ切片を、２点校正時のバイアスとして下記表１に示す。
【００５２】
また、得られた分離パターンから、ｓ−ＨｂＡ１ｃ分画とその前に分離されるｌ−ＨｂＡ１ｃ分画との間のボトム高さ（ａ）と、ｓ−ＨｂＡ１ｃ分画のピーク高さ（ｂ）とを測定し、下記式から分離指数を算出した。その結果を下記表１に示す。
分離指数＝｛ｓ−ＨｂＡ１ｃ分画とｌ−ＨｂＡ１ｃ分画との間のボトム高さ（ａ）｝／｛ｓ−ＨｂＡ１ｃ分画のピーク高さ（ｂ）｝
【００５３】
【表１】
【００５４】
上記表１に示すように、２点校正時のバイアスは分離指数に依存し、分離指数が０．２０以下であれば２点校正時のバイアスが０．１ｍｍｏｌ／ｍｏｌ以下となることが確認できた。
【００５５】
つぎに、下記１点校正用校正物質を用いてＨｂＡ１ｃ値の測定を行い、得られた校正点（１点のみ）と原点とを結んで検量線を作成した（１点校正）。ついで、試料のＨｂＡ１ｃ量の測定を行い、１点校正用校正物質のみを用いて作成した検量線を用いて試料のＨｂＡ１ｃ値を求めた。試料としては、ＩＦＣＣ法ＨｂＡ１ｃ測定用常用参照標準試料 ＪＣＣＲＭ４１１−２ ５ポイント（検査医学標準物質機構製）を使用した。
[１点校正用校正物質]
ＡＤＡＭＳ Ａ１ｃＨＡ−８１６０専用キャリブレータ ｌｅｖｅｌ２（ＨｂＡ１ｃ値：９５ｍｍｏｌ／ｍｏｌ）（アークレイ製）
【００５６】
校正物質及び試料についてのＨｂＡ１ｃ量の測定は、上記と同様の条件で行った。
【００５７】
校正物質の分離パターンから、ｓ−ＨｂＡ１ｃに相当する面積と、全ヘモグロビンに相当する面積とを算出し、これらを用いて全ヘモグロビンに対するｓ−ＨｂＡ１ｃの割合（ＨｂＡ１ｃ値）を算出した。ついで、校正物質に記載されているＨｂＡ１ｃ値（ｍｍｏｌ／ｍｏｌ）と得られた校正物質のＨｂＡ１ｃ値とを用いて、ｙ切片が０となるようにして検量線（１点校正による検量線）を作成した。
【００５８】
つぎに、各試料の分離パターンから、ＨｂＡ１ｃ値（＝（ｓ−ＨｂＡ１ｃに相当する面積）／（全ヘモグロビンに相当する面積））を算出した。得られたＨｂＡ１ｃ値を、１点校正による検量線を用いて校正した。その結果を下記表２に測定結果として示す。下記表２において、誤差は、ＪＣＣＲＭ４１１−２の表記値と測定結果（ＨｂＡ１ｃ値）との差（測定結果（ＨｂＡ１ｃ値）−（ＪＣＣＲＭ４１１−２の表記値））を示す。
【００５９】
【表２】
【００６０】
上記表２に示すように、分離指数が小さくなるとともに、１点校正によって校正した測定値と表記値との誤差が小さくなった。特に、分離指数が０．２０以下であれば、誤差は１ｍｍｏｌ／ｍｏｌ以下となり略無視可能なレベルとなった。
【産業上の利用可能性】
【００６１】
本発明は、例えば、医療分野、臨床検査の分野、糖尿病の治療／予防分野等の様々な分野に有用である。
【符号の説明】
【００６２】
１ 制御部
２ 測定部
３ 記録部
１０ 分析装置
【技術分野】
【０００１】
本発明は、分離分析法を用いたヘモグロビンＡ１ｃの測定における校正方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
糖尿病の治療分野において、合併症の発症予防を目的とした厳格な血糖値管理が重要性を増している。その中でも、血糖値の管理指標であるヘモグロビンＡ１ｃ（以下、「ＨｂＡ１ｃ」ともいう）値の正確性及び精密性は、糖尿病治療の質をも左右する大きなファクターとなっている。
【０００３】
ＨｂＡ１ｃ測定装置は、メーカ間差や施設間差が大きく、ＨｂＡ１ｃ値の正確性に問題があったが、ＨｂＡ１ｃ測定方法についての標準化が行われたことによってこれらの問題は大きく改善された（例えば、非特許文献１参照）。また、近年では、諸外国で異なって表記されていたＨｂＡ１ｃ値の統一に向けた指針が発表され、ＨｂＡ１ｃ測定法におけるシステム構成の役割は益々重要性を増している（例えば、非特許文献２参照）。
【０００４】
ＨｂＡ１ｃ量の測定方法としては、例えば、分離分析法、アフィニティ法、免疫法、酵素法等が使用されており、これらの方法を用いたＨｂＡ１ｃ測定用専用機や試薬が実用化されている。その中でも、糖尿病治療分野では分離分析法を用いたＨｂＡ１ｃの測定の有用性が高いといわれている。このため、例えば、ＡＤＡＭＳ Ａ１ｃ ＨＡ−８１７０（商品名、アークレイ製（例えば、非特許文献３参照））や、ＨＬＣ−７２３Ｇ８（商品名、東ソー製（例えば、非特許文献４参照））等といった高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）法のような分離分析法を用いた装置が実用化されている。これらの装置はいずれも、上述した理由によりシステム校正機能が搭載されており、その校正方法としてはＨｂＡ１ｃ値の異なる２種類の校正物質を用いた校正方法（２点校正法）が採用されている（例えば、非特許文献５）。
【０００５】
また、ＨＰＬＣ法以外の分離分析法として、例えば、キャピラリー電気泳動法を用いたＨｂＡ１ｃ測定技術の開発が行われている（例えば、特許文献１及び２）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】国際公開第２００８／０２９６８４号
【特許文献２】国際公開第２００８／０２９６８５号
【０００７】
【非特許文献１】「グリコヘモグロビンの標準化に関する委員会の中間報告」糖尿病，Ｖｏｌ．３７，Ｎｏ．３，ｐ．２３３−２４３，１９９４
【非特許文献２】「ＨｂＡ１ｃ測定におけるＩＦＣＣ値併記に関する指針」臨床化学，Ｖｏｌ．３７，Ｎｏ．４，ｐ．３９３−４０９，２００８
【非特許文献３】「ＡＤＡＭＳ Ａ１ｃ ＨＡ−８１７０によるＨｂＡ１ｃの基礎的検討」医学と薬学，Ｖｏ．５８，Ｎｏ．２，ｐ．３５５−３６１，２００７
【非特許文献４】「東ソー自動グリコヘモグロビン分析計ＨＬＣ−７２３Ｇ８の開発」ＴＯＳＯＨ Ｒｅｓｅａｒｃｈ＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｒｅｖｉｅｗ
【非特許文献５】「自動グリコヘモグロビン分析計 ＨＬＣ−７２３Ｇ８カタログ」（東ソー）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
迅速な測定結果を患者に提示する観点から、測定の簡便化や、短縮が求められている。このため、本発明は、分離分析法を用いたヘモグロビンＡ１ｃの測定において、簡便かつ短時間での校正が可能な新たな校正方法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、分離分析法を用いたヘモグロビンＡ１ｃ量の測定において、１種類の校正物質を使用した１点校正を行うことによって、測定値の補正に使用する校正データを得ることを含む校正方法に関する。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、分離分析法を測定原理とするヘモグロビンＡ１ｃ測定装置において、通常、２点以上で行われている校正を１点のみで行うことから、簡便かつ短時間で校正を行うことができるという効果を奏する。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】図１は、分離指数の算出方法を説明するための概念図である。
【図２】図２は、実施形態における分析装置の構成例を示す機能ブロック図である。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明は、分離分析法を用いたＨｂＡ１ｃ量の測定において、１点のみの校正物質を用いた１点校正であっても、２点以上の校正物質を用いた校正を行った場合と同程度の精度のＨｂＡ１ｃ値が得られるという知見に基づく。
【００１３】
分離分析法を用いたＨｂＡ１ｃ量の測定（測定装置）では、通常、どの方法であっても２点以上の校正物質を用いた校正法を採用している。なぜなら、校正に使用する検量線を１点のみの校正物質を用いて作成した場合、検量線がゼロ点を通らず、２点以上の校正物質を用いて校正しないと十分な精度が得られないと考えられていたからである。具体例として、ＡＤＡＭＳ Ａ１ｃ ＨＡ−８１７０（商品名、アークレイ製）では、ＨｂＡ１ｃ値の表記値が約３５ｍｍｏｌ／ｍｏｌと約９０ｍｍｏｌ／ｍｏｌの２種類の校正物質を用いて、測定装置の校正が実施されている。また、検量線がゼロ点を通らない（検量線のバイアスが生じる）理由としては、測定対象となる安定型ＨｂＡ１ｃと同程度の溶出時間を有する安定型ＨｂＡ１ｃ以外のマイナーコンポーネント（例えば、不安定型ＨｂＡ１ｃ分画、カルバミル化Ｈｂ分画、アセチル化Ｈｂ分画等）の存在や、各装置固有の問題として考えられていた。これらの理由により、当該分野において、分離分析法を用いたＨｂＡ１ｃの測定では２点以上の校正物質を用いた校正法が必須であると考えられており、２点未満の校正物質による校正の可能性について議論すらされていなかった。
【００１４】
これに対し、本発明者は、例えば、測定時間の短縮の点からは、校正点（校正物質）の数は少ない方がよいことから、校正点の数及び測定精度についての検討を行ったところ、分離分析における安定型ＨｂＡ１ｃ（ｓ−ＨｂＡ１ｃ）の分離性能と検量線のバイアスとの関係性を見出した。具体的には、検量線のバイアスは、ｓ−ＨｂＡ１ｃ分画と、ｓ−ＨｂＡ１ｃ分画の前後に分離されるｓ−ＨｂＡ１ｃ以外のＨｂマイナーコンポーネントの相互干渉に依存するものであることを見出した。すなわち、本発明は、ｓ−ＨｂＡ１ｃ以外のＨｂマイナーコンポーネントの影響を排除することによって、今まで不可能であると考えられていた１点校正による校正が可能であるとの知見に基づく。さらに、本発明は、後述する分離指数が所定の範囲となる条件で分離分析を行うことにより、１点校正による校正が可能であるとの知見に基づく。
【００１５】
本発明によれば、分離分析法を用いたＨｂＡ１ｃ量の測定において、校正を１種類の校正物質を使用した１点校正で行うことから、例えば、校正に要する時間を短縮でき、さらにはＨｂＡ１ｃ量の測定時間を短縮できるという効果を奏する。また、本発明によれば、校正に用いる校正物質の種類が１種類でよくなることから、ＨｂＡ１ｃ量の校正及び／又は測定におけるコストパフォーマンスを向上できるという効果を好ましくは奏しうる。
【００１６】
本明細書において「校正データ」とは、分離分析法を用いたＨｂＡ１ｃ量の測定において、測定値の補正に使用するものであって、１種類の校正物質のみを使用した１点校正を行うことにより得るものである。校正データとしては、例えば、検量線が挙げられ、分離分析法を用いて測定した１種類の校正物質のＨｂＡ１ｃ量の測定値と、校正物質の表記値とを用いて作成された検量線が好ましい。
【００１７】
本明細書において「測定値」とは、本発明の校正方法により得られる校正データによって補正を行う前のＨｂＡ１ｃ量の値のことをいい、例えば、分離分析法を用いて試料の測定を行うことにより実際に得られる実測値を含む。本明細書において「測定値の補正」とは、測定値を上記校正データを用いて補正することをいい、例えば、上記校正データを用いて測定値をより正確な値（ＨｂＡ１ｃ量の値）とすることを含む。
【００１８】
本明細書において「１点校正」とは、１種類の校正物質のみを使用して得られる１点の校正点を用いて校正を行うことをいい、好ましくは１種類の校正物質を用いて得られる１つの校正点と原点とを結ぶ検量線を作成することを含み、より好ましくは１種類の校正物質のＨｂＡ１ｃ量を分離分析法を用いて測定し、得られた測定値と、使用した校正物質に表記されているＨｂＡ１ｃ量（表記値）とを用いて検量線を作成することを含む。
【００１９】
本明細書において「ヘモグロビンＡ１ｃ（ＨｂＡ１ｃ）」とは、ヘモグロビンのβ鎖のＮ末にグルコースが結合したものをいい、好ましくは安定型ＨｂＡ１ｃ（ｓ−ＨｂＡ１ｃ）のことをいう。
【００２０】
本明細書において「ヘモグロビンＡ１ｃ量（ＨｂＡ１ｃ量）」とは、試料中又は血液中のＨｂＡ１ｃの濃度をいい、実用的な観点からは、ＨｂＡ１ｃ値を指すことが好ましい。本明細書において「ＨｂＡ１ｃ値」とは、試料又は血液におけるヘモグロビンに対するＨｂＡ１ｃの割合（ＨｂＡ１ｃ濃度／ヘモグロビン濃度）をいい、単位としては、ｍｍｏｌ／ｍｏｌ又は％である。
【００２１】
本明細書において「分離分析法」とは、試料に含まれる分析対象物を個別に分離しながら分析を行う方法であって、例えば、液体クロマトグラフィー法、キャピラリー電気泳動法及びキャピラリー電気クロマトグラフィー法等が挙げられる。液体クロマトグラフィー法としては、例えば、陽イオン交換クロマトグラフィー法、陰イオン交換クロマトグラフィー法、分配クロマトグラフィー法、逆相分配クロマトグラフィー法、アフィニティークロマトグラフィー法、及びゲルろ過クロマトグラフィー法等が挙げられる。キャピラリー電気泳動法としては、例えば、キャピラリーゾーン電気泳動法、キャピラリー等電点電気泳動法、キャピラリー導電クロマトグラフィー法、キャピラリー等速電気泳動法、及びキャピラリーゲル電気泳動法等が挙げられる。
【００２２】
［校正方法］
本発明は、分離分析法を用いたＨｂＡ１ｃ量の測定において、１種類の校正物質を使用した１点校正を行うことによって、測定値の補正に使用する校正データを得ることを含む校正方法に関する。
【００２３】
前記校正データは、検量線であることが好ましい。検量線は、分離分析法を用いて測定した校正物質のＨｂＡ１ｃ量の測定値と、校正物質の表記値とを用いて作成することが好ましく、より好ましくはＨｂＡ１ｃ値が０である物質と１点の校正点（１種類の校正物質）とを用いて検量線を作成することが好ましく、さらに好ましくは校正点（１点）について多重測定を行い、これと検量線上のゼロ点とのあいだで、最小二乗法等で直線回帰させることによって直線の検量線を得ることである。また、多重測定により得られた値の平均値を求め、それを直線で繋ぐことによって作成してもよい。
【００２４】
本発明の校正方法の好ましい実施形態は、校正精度の向上の点から、例えば、以下に定義する分離指数が所定の範囲となる条件で校正物質の分離分析を行うことであり、好ましくは分離指数が０以上０．２以下となる条件で分離分析を行うことであり、より好ましくは０を超え０．２以下、さらに好ましくは０を超え０．１以下、さらにより好ましくは０を越え０．０６以下である。分離指数は、分離分析により得られる分離パターンにおいて、ｓ−ＨｂＡ１ｃ分画とその前又は後に分離される分画との間のボトム高さ（ａ）と、ｓ−ＨｂＡ１ｃ分画のピーク高さ（ｂ）とを用いて下記式によって得られる。
分離指数＝｛ｓ−ＨｂＡ１ｃ分画とその前又は後に分離される分画との間のボトム高さ（ａ）｝／｛ｓ−ＨｂＡ１ｃ分画のピーク高さ（ｂ）｝
【００２５】
また、ボトム高さ（ａ）は、測定対象となるｓ−ＨｂＡ１ｃの分画と一部重複して分離される分画と、ｓ−ＨｂＡ１ｃ分画との間のボトムの高さであることが好ましい。ｓ−ＨｂＡ１ｃ分画とｓ−ＨｂＡ１ｃ分画の前に分離された分画とが一部重複している場合は、ｓ−ＨｂＡ１ｃ分画とｓ−ＨｂＡ１ｃ分画の前に分離された分画との間のボトム高さが好ましい。ｓ−ＨｂＡ１ｃ分画とｓ−ＨｂＡ１ｃ分画の後に分離された分画とが一部重複している場合は、ｓ−ＨｂＡ１ｃ分画とｓ−ＨｂＡ１ｃ分画の後に分離された分画との間のボトム高さが好ましい。また、ｓ−ＨｂＡ１ｃ分画が前後に分離された分画の双方と一部重複する場合は、ｓ−ＨｂＡ１ｃ分画とＨｂＡ１ｃ分画の前に分離された分画との間のボトム高さ及びｓ−ＨｂＡ１ｃ分画とｓ−ＨｂＡ１ｃ分画の後に分離された分画との間のボトム高さのそれぞれを用いて分離指数を求めることが好ましい。
【００２６】
ボトム高さ（ａ）、及びｓ−ＨｂＡ１ｃ分画のピーク高さ（ｂ）は、例えば、図１に示すように測定できる。図１は、液体クロマトグラフィーを用いたＨｂＡ１ｃ量の測定により得られた分離パターンの一例を示すグラフである。図１の例では、分析対象であるｓ−ＨｂＡ１ｃ分画が、ｓ−ＨｂＡ１ｃ分画の前に分離された不安定型ＨｂＡ１ｃ（ｌ−ＨｂＡ１ｃ）分画と一部重複している。このため、図１の例では、ｓ−ＨｂＡ１ｃ分画の前に分離されたｌ−ＨｂＡ１ｃ分画とｓ−ＨｂＡ１ｃ分画との間のボトムの高さをボトム高さ（ａ）とした。ボトム高さ（ａ）は、ｌ−ＨｂＡ１ｃ分画とｓ−ＨｂＡ１ｃ分画との間の最も低い吸光度とベースの吸光度との差を求めることによって算出できる。ｓ−ＨｂＡ１ｃ分画のピーク高さ（ｂ）は、ｓ−ＨｂＡ１ｃ分画の最も高い吸光度とベースの吸光度との差を求めることによって算出できる。
【００２７】
液体クロマトグラフィー法を用いて分離分析を行う場合、例えば、カラム径を細くしたり、カラム長を長くしたり、流速を遅くしたり、ゲル粒径を小さくすること等によって分離精度を向上でき、上記分離精度での分離パターンを得ることができる。キャピラリー電気泳動法を用いて分離分析を行う場合、例えば、キャピラリー長を長くすることによって分離精度を向上できる。
【００２８】
校正に用いる校正物質のＨｂＡ１ｃ値（ＨｂＡ１ｃ濃度／Ｈｂ濃度）は、例えば、１４〜４００ｍｍｏｌ／ｍｏｌ（ＩＦＣＣ値）であることが好ましく、校正精度及び／又は測定精度の向上の点から、より好ましくは１４〜１９０ｍｍｏｌ／ｍｏｌ、さらに好ましくは２５〜１５０ｍｍｏｌ／ｍｏｌである。また、校正に用いる校正物質のＨｂＡ１ｃ値は、例えば、３〜４０％であることが好ましく、校正及び／又は測定精度の向上の点から、より好ましくは３〜２０％、さらに好ましくは４〜１６％である。
【００２９】
ＨｂＡ１ｃ量の測定は、例えば、ＨｂＡ１ｃに対応する波長で吸光度を測定することにより行うことができる。ＨｂＡ１ｃに対応する波長としては、例えば、４１５〜４３０ｎｍの範囲の波長が挙げられる。
【００３０】
［ＨｂＡ１ｃ量の測定方法］
本発明は、その他の態様として、ＨｂＡ１ｃ量を測定する方法であって、分離分析法を用いて試料のＨｂＡ１ｃ量を測定すること、及び前記測定により得られたヘモグロビンＡ１ｃ量を、上述した本発明の校正方法により得られた校正データを用いて補正することを含むＨｂＡ１ｃ量の測定方法に関する。本発明のＨｂＡ１ｃ量の測定方法によれば、本発明の校正方法により得られた校正データを用いてＨｂＡ１ｃ量の測定値の補正を行うことから、例えば、校正に要する時間を短縮することができ、しいては測定時間を短縮することができる。
【００３１】
本発明のＨｂＡ１ｃ量の測定方法は、例えば、ＨｂＡ１ｃに対応する波長で吸光度を測定することを含んでいてもよい。
【００３２】
［分析装置］
本発明は、さらにその他の態様として、分離分析法を用いて試料中のＨｂＡ１ｃを含む成分を分離し、分離させた成分を測定する測定部と、前記測定部において、１種類の校正物質を使用した１点校正を行うことによって、測定値の補正に使用する校正データを得る制御部と、前記制御部により得られる校正データを記録する記録部とを備える分析装置であって、前記制御部は、前記測定部により得られる試料のヘモグロビンＡ１ｃ量を、前記校正データを用いて補正する分析装置に関する。本発明の分析装置によれば、本発明の校正方法により得られた校正データを用いてＨｂＡ１ｃ量の測定値の補正を行うことから、例えば、校正に要する時間を短縮することができ、しいては測定時間を短縮することができる。また好ましくは、校正データとして１点校正により得られた校正データを使用することから、分析精度を向上させることができるという効果を奏しうる。
【００３３】
前記制御部は、分離分析法を用いて測定した前記校正物質のＨｂＡ１ｃ量の測定値と、前記校正物質の表記値とを用いて検量線を作成し、得られた検量線を前記校正データとして使用することが好ましい。
【００３４】
前記測定部は、試料中のＨｂＡ１ｃを含む成分を分離する分離デバイスを備えることが好ましい。
【００３５】
本発明の分析装置は、例えば、校正データを得るために、本発明の校正方法を用いて１点校正されるモードを備えることが好ましい。
【００３６】
［プログラム］
本発明は、さらにその他の態様として、上記の本発明の校正方法による校正処理をコンピュータに実行させる校正プログラムに関する。また、本発明は、さらにその他の態様として、分離分析法を用いて試料中のＨｂＡ１ｃを含む成分を分離し、ＨｂＡ１ｃ量を測定する分析装置を制御するコンピュータに処理を実行させる分析プログラムであって、上記本発明の校正方法により校正データを得る処理と、測定により得られたヘモグロビンＡ１ｃ量を、前記校正データを用いて補正する処理とを、コンピュータに実行させる分析プログラムに関する。より具体的には、本発明の分析プログラムは、上述した分離分析法を用いて測定した１種類の校正物質のＨｂＡ１ｃ量の測定値と、前記校正物質の表記値とを用いて検量線を作成する処理を、コンピュータに実行させる分析プログラムに関する。
【００３７】
分析プログラムは、さらに、前記分析装置により得られる測定データを、前記検量線を用いて補正する処理を、コンピュータに実行させることが好ましい。
【００３８】
［校正用キット］
本発明は、さらにその他の態様として、本発明の校正方法に用いるためのキットであって、前記１点校正のための１種類の校正物質を含む校正用キットに関する。本発明の校正用キットは、本発明の校正方法に用いることができる。
【００３９】
本発明の校正用キットは、校正物質のＨｂＡ１ｃ量として、例えば、ＨｂＡ１ｃ値、又はＨｂＡ１ｃ濃度とＨｂ濃度とが記載された添付文書を含むことが好ましい。添付文書は、該校正物質を用いて上述する校正データの作成方法等が記載されていることが好ましい。これにより、本発明の校正方法を容易に行うことができる。
【００４０】
以下に、本発明の実施の形態について図面を用いて具体的に説明する。但し、以下の説明は一例に過ぎず、本発明はこれに限定されないことはいうまでもない。
【００４１】
図２は、本発明の実施形態における分析装置の構成例を示す機能ブロック図である。図２に示す分析装置１０は、分離分析法を用いた分析装置であり、試料に含まれる成分を分離し、分離した成分の定量を行う。分析装置１０は、記録部３と、制御部１と、測定部２を備える。測定部２は、分離分析法を用いて試料中のＨｂＡ１ｃを含む成分を分離し、分離させた成分を測定する。制御部１は、測定部２により得られる測定データと校正データを用いてＨｂＡ１ｃ量を計算する。記録部３は、校正データを記録する。
【００４２】
図２に示す分析装置１０では、制御部１において１種類の校正物質のみを使用した１点校正を行うことによって校正データを得ている。具体的には、制御部１は、分離分析法を用いて測定した校正物質のＨｂＡ１ｃ量の測定値と、測定に用いた校正物質の表記値とを用いて検量線を作成し、得られた検量線を上記校正データとして使用する。このように１点校正により校正データを得ることから、例えば、校正に要する時間を大幅に短縮できるとともに、簡便に校正データを得ることができる。
【００４３】
校正データは、測定部２において得られる測定データを補正するために用いるものである。このように、校正データと測定データとを用いてＨｂＡ１ｃ量を算出することにより、より精度の高いＨｂＡ１ｃ量を得ることができる。
【００４４】
校正物質の分離分析は、分離分析により得られる分離パターンにおけるｓ−ＨｂＡ１ｃ分画とその前又は後に分離される分画との間のボトム高さ（ａ）と、ｓ−ＨｂＡ１ｃ分画のピーク高さ（ｂ）とによって規定される上述の分離指数（＝（ａ）／（ｂ））が所定の範囲となる条件で行うことが好ましい。分離指数は、例えば、０以上０．２以下が好ましく、より好ましくは０を超え０．２以下、さらに好ましくは０を超え０．１以下、さらにより好ましくは０を越え０．０６以下である。
【００４５】
図２に示す制御部１の機能は、例えば、パーソナルコンピュータ等のＣＰＵを備えた汎用コンピュータあるいは測定装置に内蔵されたマイクロプロセッサが、所定のプログラムを実行することにより実現することができる。記録部３は、コンピュータのプロセッサからアクセス可能なメモリ、ＨＤＤ等の記録装置により構成することができる。分析装置１０は、制御部１、測定部２及び記録部３が一体となった構成であってもよいし、独立した測定部２に汎用コンピュータが接続された構成であってもよい。また、コンピュータを上記制御部１として機能させるためのプログラムまたはプログラムを記録した記録媒体も本発明の実施形態に含まれる。また、コンピュータが実行する分析方法も、本発明の一側面である。ここで、記録媒体は、信号そのもののような、一時的な（non-transitory）メディアは含まない。
【００４６】
以下に、実施例及び参考例を用いて本発明をさらに説明する。但し、本発明は以下の実施例に限定して解釈されない。
【実施例】
【００４７】
まず、下記表１に示す測定条件において、下記の２種類の校正物質を用いてＨｂＡ１ｃ値の測定を行い、得られた２点の校正点から校正用検量線を作成した。
[２点校正用校正物質]
ＡＤＡＭＳ Ａ１ｃＨＡ−８１６０専用キャリブレータ ｌｅｖｅｌ１（ＨｂＡ１ｃ値：３５ｍｍｏｌ／ｍｏｌ）及びＬｅｖｅｌ２（ＨｂＡ１ｃ値：９５ｍｍｏｌ／ｍｏｌ）、アークレイ製）
【００４８】
キャピラリー管としては、内壁にスルホン基を有するシリル化剤が共有結合で固定されて形成された陰極性層を有する溶融シリカ製のキャピラリー管（内径５０μｍ）であって、下記表１に示す異なるキャピラリー長を有する５種類のキャピラリー管を準備した。
【００４９】
ランニングバッファーとしては、１００ｍＭリンゴ酸を含有するアルギニン酸水溶液に、コンドロイチン硫酸濃度が０．５重量％となるように添加したもの（ｐＨ５．５）を準備した。
【００５０】
キャピラリー管に精製水を圧力０．１ＭＰａ（１０００ｍｂａｒ）で２０分間通液し、キャピラリー管を洗浄した後、上記ランニングバッファー（ｐＨ５．５）を圧力０．１ＭＰａ（１０００ｍｂａｒ）で通液し、キャピラリー管内にランニングバッファーを充填した。この状態で、キャピラリー管の陽極側から上記校正物質を注入し、ついでキャピラリー管の両端を１０ｋＶで印加して電気泳動を行い、４１５ｎｍにおける吸光度を測定した（ｎ＝３）。
【００５１】
得られた分離パターンから、ｓ−ＨｂＡ１ｃ分画に相当する面積と、全ヘモグロビンに相当する面積とを算出し、これらを用いて全ヘモグロビンに対するｓ−ＨｂＡ１ｃの割合（ＨｂＡ１ｃ値）を算出した。各校正物質に記載されているＨｂＡ１ｃ値（ｍｍｏｌ／ｍｏｌ）をＹ軸に、得られた各校正物質のＨｂＡ１ｃ値（ｓ−ＨｂＡ１ｃに相当する面積／全ヘモグロビンに相当する面積）をＸ軸として検量線を作成した。得られた検量線のｙ切片を、２点校正時のバイアスとして下記表１に示す。
【００５２】
また、得られた分離パターンから、ｓ−ＨｂＡ１ｃ分画とその前に分離されるｌ−ＨｂＡ１ｃ分画との間のボトム高さ（ａ）と、ｓ−ＨｂＡ１ｃ分画のピーク高さ（ｂ）とを測定し、下記式から分離指数を算出した。その結果を下記表１に示す。
分離指数＝｛ｓ−ＨｂＡ１ｃ分画とｌ−ＨｂＡ１ｃ分画との間のボトム高さ（ａ）｝／｛ｓ−ＨｂＡ１ｃ分画のピーク高さ（ｂ）｝
【００５３】
【表１】
【００５４】
上記表１に示すように、２点校正時のバイアスは分離指数に依存し、分離指数が０．２０以下であれば２点校正時のバイアスが０．１ｍｍｏｌ／ｍｏｌ以下となることが確認できた。
【００５５】
つぎに、下記１点校正用校正物質を用いてＨｂＡ１ｃ値の測定を行い、得られた校正点（１点のみ）と原点とを結んで検量線を作成した（１点校正）。ついで、試料のＨｂＡ１ｃ量の測定を行い、１点校正用校正物質のみを用いて作成した検量線を用いて試料のＨｂＡ１ｃ値を求めた。試料としては、ＩＦＣＣ法ＨｂＡ１ｃ測定用常用参照標準試料 ＪＣＣＲＭ４１１−２ ５ポイント（検査医学標準物質機構製）を使用した。
[１点校正用校正物質]
ＡＤＡＭＳ Ａ１ｃＨＡ−８１６０専用キャリブレータ ｌｅｖｅｌ２（ＨｂＡ１ｃ値：９５ｍｍｏｌ／ｍｏｌ）（アークレイ製）
【００５６】
校正物質及び試料についてのＨｂＡ１ｃ量の測定は、上記と同様の条件で行った。
【００５７】
校正物質の分離パターンから、ｓ−ＨｂＡ１ｃに相当する面積と、全ヘモグロビンに相当する面積とを算出し、これらを用いて全ヘモグロビンに対するｓ−ＨｂＡ１ｃの割合（ＨｂＡ１ｃ値）を算出した。ついで、校正物質に記載されているＨｂＡ１ｃ値（ｍｍｏｌ／ｍｏｌ）と得られた校正物質のＨｂＡ１ｃ値とを用いて、ｙ切片が０となるようにして検量線（１点校正による検量線）を作成した。
【００５８】
つぎに、各試料の分離パターンから、ＨｂＡ１ｃ値（＝（ｓ−ＨｂＡ１ｃに相当する面積）／（全ヘモグロビンに相当する面積））を算出した。得られたＨｂＡ１ｃ値を、１点校正による検量線を用いて校正した。その結果を下記表２に測定結果として示す。下記表２において、誤差は、ＪＣＣＲＭ４１１−２の表記値と測定結果（ＨｂＡ１ｃ値）との差（測定結果（ＨｂＡ１ｃ値）−（ＪＣＣＲＭ４１１−２の表記値））を示す。
【００５９】
【表２】
【００６０】
上記表２に示すように、分離指数が小さくなるとともに、１点校正によって校正した測定値と表記値との誤差が小さくなった。特に、分離指数が０．２０以下であれば、誤差は１ｍｍｏｌ／ｍｏｌ以下となり略無視可能なレベルとなった。
【産業上の利用可能性】
【００６１】
本発明は、例えば、医療分野、臨床検査の分野、糖尿病の治療／予防分野等の様々な分野に有用である。
【符号の説明】
【００６２】
１ 制御部
２ 測定部
３ 記録部
１０ 分析装置
【特許請求の範囲】
【請求項１】
分離分析法を用いたヘモグロビンＡ１ｃ量の測定において、１種類の校正物質を使用した１点校正を行うことによって、測定値の補正に使用する校正データを得ることを含む、校正方法。
【請求項２】
前記校正データは検量線であり、分離分析法を用いて測定した前記校正物質のヘモグロビンＡ１ｃ量の測定値と、前記校正物質の表記値とを用いて、前記検量線を作成することを含む、請求項１記載の校正方法。
【請求項３】
前記分離分析法により得られる前記校正物質の分離パターンにおいて、安定型ヘモグロビンＡ１ｃ分画とその前又は後に分離される分画との間のボトム高さ（ａ）と、安定型ヘモグロビンＡ１ｃ分画のピーク高さ（ｂ）とにより規定される下記分離指数が、０以上０．２以下である、請求項１又は２に記載の校正方法。
分離指数＝｛安定型ヘモグロビンＡ１ｃ分画とその前又は後に分離される分画との間のボトム高さ（ａ）｝／｛安定型ヘモグロビンＡ１ｃ分画のピーク高さ（ｂ）｝
【請求項４】
前記校正物質は、ヘモグロビンＡ１ｃ値(ヘモグロビンＡ１ｃ濃度／ヘモグロビン濃度)が、１４〜４００ｍｍｏｌ／ｍｏｌ（ＩＦＣＣ値）である、請求項１から３のいずれかに記載の校正方法。
【請求項５】
前記分離分析法が、高速液体クロマトグラフィー法、キャピラリー電気泳動法又はキャピラリー電気クロマトグラフィー法である、請求項１から４のいずれかに記載の校正方法。
【請求項６】
前記高速液体クロマトグラフィー法が、陽イオン交換クロマトグラフィー法、陰イオン交換クロマトグラフィー法、分配クロマトグラフィー法、逆相分配クロマトグラフィー法、アフィニティークロマトグラフィー法、及びゲルろ過クロマトグラフィー法からなる群から選択される、請求項１から５のいずれかに記載の校正方法。
【請求項７】
前記キャピラリー電気泳動法が、キャピラリーゾーン電気泳動法、キャピラリー等電点電気泳動法、キャピラリー動電クロマトグラフィー法、キャピラリー等速電気泳動法、及びキャピラリーゲル電気泳動法からなる群から選択される、請求項１から５のいずれかに記載の校正方法。
【請求項８】
ヘモグロビンＡ１ｃ量を測定する方法であって、
分離分析法を用いて試料のヘモグロビンＡ１ｃ量を測定すること、及び
前記測定により得られたヘモグロビンＡ１ｃ量を、請求項１から７のいずれかに記載の校正方法により得られた校正データを用いて補正することを含む、ヘモグロビンＡ１ｃ量の測定方法。
【請求項９】
分離分析法を用いて試料中のヘモグロビンＡ１ｃを含む成分を分離し、分離させた成分を測定する測定部と、
前記測定部において、１種類の校正物質を使用した１点校正を行うことによって、測定値の補正に使用する校正データを得る制御部と、
前記制御部により得られる校正データを記録する記録部とを備える、分析装置であって、
前記制御部は、前記測定部により得られる試料のヘモグロビンＡ１ｃ量を、前記校正データを用いて補正する、分析装置。
【請求項１０】
請求項１から７のいずれかに記載の校正方法による校正処理をコンピュータに実行させる校正プログラム。
【請求項１１】
分離分析法を用いて試料中のヘモグロビンＡ１ｃを含む成分を分離し、ヘモグロビンＡ１ｃ量を測定する分析装置を制御するコンピュータに処理を実行させる分析プログラムであって、
請求項１から７のいずれかに記載の校正方法により校正データを得る処理と、
測定により得られたヘモグロビンＡ１ｃ量を、前記校正データを用いて補正する処理とを、コンピュータに実行させる分析プログラム。
【請求項１】
分離分析法を用いたヘモグロビンＡ１ｃ量の測定において、１種類の校正物質を使用した１点校正を行うことによって、測定値の補正に使用する校正データを得ることを含む、校正方法。
【請求項２】
前記校正データは検量線であり、分離分析法を用いて測定した前記校正物質のヘモグロビンＡ１ｃ量の測定値と、前記校正物質の表記値とを用いて、前記検量線を作成することを含む、請求項１記載の校正方法。
【請求項３】
前記分離分析法により得られる前記校正物質の分離パターンにおいて、安定型ヘモグロビンＡ１ｃ分画とその前又は後に分離される分画との間のボトム高さ（ａ）と、安定型ヘモグロビンＡ１ｃ分画のピーク高さ（ｂ）とにより規定される下記分離指数が、０以上０．２以下である、請求項１又は２に記載の校正方法。
分離指数＝｛安定型ヘモグロビンＡ１ｃ分画とその前又は後に分離される分画との間のボトム高さ（ａ）｝／｛安定型ヘモグロビンＡ１ｃ分画のピーク高さ（ｂ）｝
【請求項４】
前記校正物質は、ヘモグロビンＡ１ｃ値(ヘモグロビンＡ１ｃ濃度／ヘモグロビン濃度)が、１４〜４００ｍｍｏｌ／ｍｏｌ（ＩＦＣＣ値）である、請求項１から３のいずれかに記載の校正方法。
【請求項５】
前記分離分析法が、高速液体クロマトグラフィー法、キャピラリー電気泳動法又はキャピラリー電気クロマトグラフィー法である、請求項１から４のいずれかに記載の校正方法。
【請求項６】
前記高速液体クロマトグラフィー法が、陽イオン交換クロマトグラフィー法、陰イオン交換クロマトグラフィー法、分配クロマトグラフィー法、逆相分配クロマトグラフィー法、アフィニティークロマトグラフィー法、及びゲルろ過クロマトグラフィー法からなる群から選択される、請求項１から５のいずれかに記載の校正方法。
【請求項７】
前記キャピラリー電気泳動法が、キャピラリーゾーン電気泳動法、キャピラリー等電点電気泳動法、キャピラリー動電クロマトグラフィー法、キャピラリー等速電気泳動法、及びキャピラリーゲル電気泳動法からなる群から選択される、請求項１から５のいずれかに記載の校正方法。
【請求項８】
ヘモグロビンＡ１ｃ量を測定する方法であって、
分離分析法を用いて試料のヘモグロビンＡ１ｃ量を測定すること、及び
前記測定により得られたヘモグロビンＡ１ｃ量を、請求項１から７のいずれかに記載の校正方法により得られた校正データを用いて補正することを含む、ヘモグロビンＡ１ｃ量の測定方法。
【請求項９】
分離分析法を用いて試料中のヘモグロビンＡ１ｃを含む成分を分離し、分離させた成分を測定する測定部と、
前記測定部において、１種類の校正物質を使用した１点校正を行うことによって、測定値の補正に使用する校正データを得る制御部と、
前記制御部により得られる校正データを記録する記録部とを備える、分析装置であって、
前記制御部は、前記測定部により得られる試料のヘモグロビンＡ１ｃ量を、前記校正データを用いて補正する、分析装置。
【請求項１０】
請求項１から７のいずれかに記載の校正方法による校正処理をコンピュータに実行させる校正プログラム。
【請求項１１】
分離分析法を用いて試料中のヘモグロビンＡ１ｃを含む成分を分離し、ヘモグロビンＡ１ｃ量を測定する分析装置を制御するコンピュータに処理を実行させる分析プログラムであって、
請求項１から７のいずれかに記載の校正方法により校正データを得る処理と、
測定により得られたヘモグロビンＡ１ｃ量を、前記校正データを用いて補正する処理とを、コンピュータに実行させる分析プログラム。
【図１】
【図２】
【図２】
【公開番号】特開２０１２−１０８１１８（Ｐ２０１２−１０８１１８Ａ）
【公開日】平成２４年６月７日（２０１２．６．７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−２３３０４４（Ｐ２０１１−２３３０４４）
【出願日】平成２３年１０月２４日（２０１１．１０．２４）
【出願人】（０００１４１８９７）アークレイ株式会社 (288)
【公開日】平成２４年６月７日（２０１２．６．７）
【国際特許分類】
【出願日】平成２３年１０月２４日（２０１１．１０．２４）
【出願人】（０００１４１８９７）アークレイ株式会社 (288)
[ Back to top ]