ホンシメジの人工栽培方法
【課題】安価な培地原料を用いた培養基で良好な子実体形成能を有し、更に発生室移動後の所要日数を短縮できる商業的人工栽培を可能とするホンシメジ菌株を提供すること。
【解決手段】 Lyophyllum shimeji Ｌａ ０１−２０（ＦＥＲＭ Ｐ−１６８４１）、Lyophyllum shimeji Ｌａ ０１−２７（ＦＥＲＭ Ｐ−１７４５５）、及びLyophyllum shimeji Ｌａ ０１−４５（ＦＥＲＭ Ｐ−１７４５７）からなる群より選ばれる菌株の変異株であるホンシメジ菌株であって、押麦と広葉樹鋸屑を乾物重量比で２：１で含有する培養基と比べて、トウモロコシの実と広葉樹鋸屑を乾物重量比で２：１で含有する培養基で良好な子実体形成能を有するホンシメジ菌株。
【解決手段】 Lyophyllum shimeji Ｌａ ０１−２０（ＦＥＲＭ Ｐ−１６８４１）、Lyophyllum shimeji Ｌａ ０１−２７（ＦＥＲＭ Ｐ−１７４５５）、及びLyophyllum shimeji Ｌａ ０１−４５（ＦＥＲＭ Ｐ−１７４５７）からなる群より選ばれる菌株の変異株であるホンシメジ菌株であって、押麦と広葉樹鋸屑を乾物重量比で２：１で含有する培養基と比べて、トウモロコシの実と広葉樹鋸屑を乾物重量比で２：１で含有する培養基で良好な子実体形成能を有するホンシメジ菌株。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ホンシメジ（Lyophyllum shimeji）の菌株及び人工栽培方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ホンシメジは10月中ごろにコナラ林又はコナラ・アカマツ混生林の地上に発生するきのこであり、「香りマツタケ味シメジ」と称されているように、マツタケと並んで我国の食用きのこの中で最高級きのことされている。
【０００３】
近年、エノキタケ、ヒラタケ、ナメコ、ブナシメジ、マイタケ等の食用きのこは主としてオガクズと米糠・フスマなどの栄養源を混合した培養基を用いて栽培を行う人工栽培方法が確立され、１年を通じて季節に関わり無く安定してきのこが収穫できるようになっている。
【０００４】
ホンシメジも極めて美味なきのこであるため人工栽培方法の確立が望まれているが、前述のエノキタケ等が木材腐朽菌であるのに対し、ホンシメジは菌根菌であるため人工栽培は困難であるとされていた。
【０００５】
このホンシメジの人工栽培についても一部で検討されており、例えば特許文献１では麦類を用いたホンシメジの人工栽培方法が開示されており、同発明者らは非特許文献１で麦類を用いた培地でのホンシメジ子実体の発生実験について報告している。
【０００６】
また特許文献２ではピートモスを基材とし、デンプン等を添加した培養基による菌根菌の菌糸培養方法が開示されており、同発明者らは非特許文献２でピートモスを基材とし、デンプン等を添加した培養基でのホンシメジの子実体発生実験を報告している。
【０００７】
しかし特許文献１の発明者らの方法では培地に使用する麦類が高価なため培地コストが高くなる。また特許文献２記載の方法では発生した子実体の収量が低く、いまだ商業生産レベルには至っていない。
【特許文献１】特公平８−４４２７号公報
【特許文献２】特開平６−１５３６９５号公報
【非特許文献１】日本菌学会報、第３９巻、第１３〜２０頁（１９９８）
【非特許文献２】日本菌学会報、第３５巻、第１９２〜１９５頁（１９９４）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明の目的は上記の現状にかんがみ、安価な培地原料を用いた培養基で良好な子実体形成能を有し、更に発生室移動後の所要日数を短縮できる商業的人工栽培を可能とするホンシメジ菌株を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
きのこは一般に、同じ種に属する菌株でありながら、採集された場所の違いにより菌糸の生育及び子実体形成能が著しく異なることが知られている。ホンシメジについても、大麦と鋸屑を用いた培地で、菌株によって子実体発生量が大きく異なることが日本菌学会報、第３９巻、第１３〜２０頁（１９９８）に報告されている。本発明者らは、安価なキビ亜科植物を用いた培地に適合する菌株が、必ず存在するはずであるとの考えに立ち、各地よりホンシメジの菌株の収集を行い鋭意検討した結果、キビ亜科植物の実類を含有する培養基で良好な子実体形成能を有するホンシメジ菌株を見出し、更にこれらの菌株をキビ亜科植物の実類を含有する培養基で栽培することにより、麦類を用いた培養基で栽培した場合よりも発生室への移動から収穫までの日数を短縮できることを見出し、本発明を完成した。
【００１０】
本発明を概説すれば、本発明の第１の発明はホンシメジの菌株に関し、キビ亜科植物の実類を含有する培養基で良好な子実体形成をする菌株であることを特徴とする。本発明の第２の発明はホンシメジの人工栽培方法に関し、上記第１発明の菌株を用いることを特徴とする。本発明の第３の発明はホンシメジの人工栽培方法に関し、前記第１の発明の菌株を、キビ亜科植物の実類を含有する培養基を用いて栽培することを特徴とする。
【００１１】
即ち、本発明は
〔１〕 Lyophyllum shimeji Ｌａ ０１−２０（ＦＥＲＭ Ｐ−１６８４１）、Lyophyllum shimeji Ｌａ ０１−２７（ＦＥＲＭ Ｐ−１７４５５）、及びLyophyllum shimeji Ｌａ ０１−４５（ＦＥＲＭ Ｐ−１７４５７）からなる群より選ばれる菌株の変異株であるホンシメジ菌株であって、押麦と広葉樹鋸屑を乾物重量比で２：１で含有する培養基と比べて、トウモロコシの実と広葉樹鋸屑を乾物重量比で２：１で含有する培養基で良好な子実体形成能を有するホンシメジ菌株、
〔２〕 前記〔１〕記載のホンシメジ菌株を液体培地に接種し、培養することにより得られるホンシメジの人工栽培用液体種菌、
〔３〕 前記〔１〕記載のホンシメジ菌株をトウモロコシの実を含有する固形培養基に接種し、培養することにより得られるホンシメジの人工栽培用培養基、
〔４〕 前記〔１〕記載の菌株をトウモロコシの実を含有する培養基で培養することを特徴とするホンシメジの人工栽培方法、及び
〔５〕 前記〔１〕記載の菌株をトウモロコシの実を含有する培養基で培養することを特徴とするホンシメジの生産方法
に関する。
【発明の効果】
【００１２】
本発明により、安価な培地原料を用いた培養基で良好な子実体が、より短い発生室移動後の所要日数で収穫可能なホンシメジ菌株が提供され、該菌株を用いることにより、ホンシメジの商業的人工栽培が可能になった。特にＬａ０１−２０株、Ｌａ０１−２７株、Ｌａ０１−３７株は発生室へ移動後の所要時日数も短く、商業的人工栽培に好適である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
以下、本発明を具体的に説明する。
本発明においてキビ亜科植物の実類とは、無加工のキビ亜科植物の実又はキビ亜科植物の実の加工物のことを指す。なお、本文記載のキビ亜科植物の実について説明すると、本発明においてキビ亜科植物の実とは学術的には穎果あるいは穀果と呼ばれる果実を指す。１９９６年岩波書店発行、岩波生物学辞典第４版の記載によると穎果とは、果皮が成熟後、乾燥して種子に密着する広義の痩果の一種であり、キビ亜科を含むイネ科やタケ科の植物の果実がこれに当る。
【００１４】
上記のキビ亜科植物の実の例としては、キビ、ヒエ、アワ、サトウキビ、モロコシ、コウリャン、トウモロコシ等の実が挙げられるが、本発明で使用できるキビ亜科植物の実はこれらに限定されることはなく、イネ科キビ亜科に属する植物の実であれば良い。また本発明で使用されるキビ亜科植物の実は、新鮮物であっても乾燥物であっても良い。また２種類以上のキビ亜科植物の実を併用しても良い。更に、本発明においては、キビ亜科植物の実全体を用いても、加工によって分別された実の一部分を使用しても良い。また分別された部分同士を混合しても良く、実全体のものと分別された部分を混合して使用しても良い。
【００１５】
キビ亜科植物の実の加工物としては、キビ亜科植物の実を粉砕したものや粉砕した上で篩分けして粒度調整したもの、あるいは顆粒状やペレット状に成型したもの等が挙げられるが、本発明ではキビ亜科植物の実の加工方法や加工物の形状、粒度等は問わず使用でき、また２種類以上の加工物を併用しても良く、実全体のものと加工物とを併用してもよい。
【００１６】
本発明におけるキビ亜科植物の実類の具体例について、トウモロコシの場合で説明する。トウモロコシの実は尖帽、表皮、胚乳及び胚芽からなり、胚乳は更に角質グルテン質部、角質デンプン質部、粉状質部と呼ばれる部分からなる。本発明ではトウモロコシの実の全体（全粒）でもこれらの一部分だけでも用いることができる。また部分に分けたものを混合して使用しても良い。トウモロコシの実の加工の一例としてドライミリングによる加工について説明するが、本発明で適用される加工方法はこれに限定されるものではない。トウモロコシの実のドライミリングによる加工では、まず精選工程で夾雑物を除去し、次に胚芽を分離しやすくする目的で吸水させる調質を行う。次いで脱胚芽機にかけて胚芽を除去し、ロールミルで粉砕したものを粒度別に篩分けしたのち乾燥することにより、主として角質部からなるコーングリッツと、主として粉状質部からなるコーンフラワーが得られる。これらは篩分けの段階で数段階の粒度に分別される。またドライミリングにおける副産物としては、脱胚芽により除去された胚芽及びこれを乾燥させたドライコーンジャームや表皮の部分からなるコーンファイバー、主として表皮と胚乳の間にあるアリューロン層（糊粉層）と表皮からなるコーンブラン（コーン糠）、更にこれら副産物をすべて合せたホミニーフィードがある。本発明では上記の加工によって得られた産物や副産物のいずれも使用することができ、またこれらを混合して使用しても良い。
【００１７】
以上、本発明のキビ亜科植物の実類についてトウモロコシを例として説明したが、本発明はこの例に限定されるものではない。
【００１８】
次に、菌株の選抜方法について説明する。
【００１９】
１／２ＰＧＹ液体培地（組成：グルコース１．０％、ペプトン０．１％、酵母エキス０．１％、ＫＨ2ＰＯ4 ０．０２５％、ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ０．０２５％）２００ｍｌにホンシメジ各菌株を接種し、２５℃で７〜１４日間、好ましくは１０日間培養し、液体種菌とする。
【００２０】
一方、固形培養基としてキビ亜科植物の実類、好ましくはトウモロコシの実と広葉樹鋸屑を乾物重量比で１：２〜３：１、好ましくは２：１に混合し、培養基の水分が最終的に５５〜６５％、好ましくは６０％になるように水を加えて十分にかくはん・混合したもの、及び押麦と広葉樹鋸屑を乾物重量比で１：２〜３：１、好ましくは２：１（ただし、前記トウモロコシ培地と比率を合せること）に混合し、培養基の水分が最終的に５５〜６５％、好ましくは６０％（ただし、前記トウモロコシ培地と比率を合せること）になるように水を加えて十分にかくはん・混合したものの２種類を調製し、それぞれ４００〜２３００ｍｌ容、好ましくは８５０ｍｌ容又は２３００ｍｌ容のポリプロピレン製の広口培養ビンに詰める。８５０ｍｌビンの場合はビン全体に圧詰めしたのち中央に直径３ｃｍ程度の穴を開け、２３００ｍｌビンの場合は８５０ｍｌビンに詰める分と同重量の培養基を容器の半分程度まで詰めたのち直径約１ｃｍの穴を３個所開ける。容器に打栓したあと、１０１〜１２５℃で３０〜９０分、好ましくは１１８℃で６０分間高圧蒸気殺菌を行い、放冷する。
【００２１】
この固形培養基に上記の液体種菌を８５０ｍｌビンの場合は５〜３０ｍｌ、好ましくは約１５ｍｌ、２３００ｍｌの場合は１０〜１００ｍｌ、好ましくは約５０ｍｌ接種し、暗所にて温度２０〜２５℃、好ましくは２３℃、湿度４０〜７０％、好ましくは６０〜７０％の条件下、６０〜１５０日間、好ましくは１００日間前後菌糸を培養し、培地全体に菌糸をまん延させる。次いで栓を外し、そのままでも良いが、好ましくは菌床面を適当な覆土材、更に好ましくはオートクレーブ滅菌した赤玉土で約２ｃｍ覆土した後、温度１０〜２０℃、好ましくは１５℃、加湿をヒューミアイ１００〔(株)鷺宮製作所製〕の表示値で９０〜１２０％、好ましくは１１５〜１２０％となるように制御した発生室に移動し、１０〜１０００ルクス、好ましくは５０〜５００ルクスの照明下、子実体原基が生じるまでは水濡れを防ぐためビン口を波板で被覆し、子実体原基形成後は波板を取去り、成熟子実体が得られるまで培養を続け、ホンシメジの各菌株における子実体収量、発生室へ移動後の所要日数について調べることによりキビ亜科植物の実類を含有する培養基において、良好な子実体形成能を有するホンシメジ菌株を得ることができる。このようにして得られた結果を表１に示す。
【００２２】
【表１】
【００２３】
表１から明らかなように、供試した菌のうち大部分は押麦培地では発生しないか子実体収量が不十分であるが、Ｌａ ０１−２０、Ｌａ ０１−２７、Ｌａ ０１−３７、Ｌａ ０１−４５、Ｌａ ０１−４６については、安価なトウモロコシ培地で高収量を得ており、キビ亜科植物の実類を含有する培地に適合した優良な品種と言える。なお、日本菌学会報、第３９巻、第１３〜２０頁（１９９８）記載の公知菌株であるＹＧ６Ｌが押麦培地では高収量であるが、トウモロコシ培地では、収量がこれより減じていること、Ｌａ ０１−２６及びＬａ ０１−３８株が、押麦培地のみで発生していることから、トウモロコシ培地への菌株適合性は、押麦培地での栽培試験結果のみからは類推し得ない。
【００２４】
表１で示したホンシメジ菌株のうち、野生から採集したものの採集時の子実体及び胞子、また、発生した各菌株の子実体及び胞子の形態的特徴は以下の通りである。
傘は直径２〜７ｃｍではじめ半球形〜まんじゅう型、後に開いて平らになる。傘表面は初め暗色、次第にねずみ色〜淡灰褐色となり、縁部は初め内側に強く巻く。肉は白色、緻密でありひだは白色〜淡クリーム色でやや垂生する。柄は白色で下方は徳利状にふくらむが生育が充分進んだ子実体ではほとんど上下同大に近くなるものも有る。胞子は球形で径４〜６μｍ。
以上の特徴を今関六也、本郷次雄編著「原色日本新菌類図鑑（Ｉ）」保育社（昭和６２年６月１０日初版発行）の記載と比較すると、これらの菌株はホンシメジであることが明瞭である。
【００２５】
これら供試菌株中、Ｌａ ０１−２０、Ｌａ ０１−２７、Ｌａ ０１−３７、Ｌａ ０１−４５、Ｌａ ０１−４６の５株は、それぞれLyophyllum shimeji Ｌａ ０１−２０、Lyophyllum shimeji Ｌａ ０１−２７、Lyophyllum shimeji Ｌａ ０１−３７、Lyophyllum shimeji Ｌａ ０１−４５、Lyophyllum shimeji Ｌａ ０１−４６と表示され、工業技術院生命工学工業技術研究所にそれぞれＦＥＲＭ Ｐ−１６８４１、ＦＥＲＭ Ｐ−１７４５５、ＦＥＲＭ Ｐ−１７４５６、ＦＥＲＭ Ｐ−１７４５７、ＦＥＲＭ Ｐ−１７４５８として寄託されている。
【００２６】
次に、ホンシメジＬａ ０１−２０株、Ｌａ ０１−２７株、Ｌａ ０１−３７株、Ｌａ ０１−４５株、Ｌａ ０１−４６株の５株の菌学的諸性質を以下に記す。
（１）ホンシメジＬａ ０１−２０株
Ａ． 麦芽エキス寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は３０ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は４６ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は６９ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。菌糸は放射状に伸長する。
Ｂ． バレイショ・ブドウ糖寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は２９ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は４４ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は７０ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。菌糸は放射状に伸長する。裏面の中心部がやや着色。
Ｃ． ツァペック・ドックス寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は８ｍｍ、白色で希薄な菌糸、気菌糸は極めて少ない。
１０日目でコロニー径は１０ｍｍ。
１７日目でコロニー径は１３ｍｍ、白色で希薄な菌糸、樹状に伸長し、気菌糸は極めて少ない。
Ｄ． サブロー寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は１１ｍｍ、白色で希薄な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は１４ｍｍ、白色で希薄な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は２３ｍｍ、周縁部は白色で希薄な菌糸、中心部はやや密でやや着色、気菌糸は少なく、コロニー形はいびつ。
Ｅ． オートミール寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は１９ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は３２ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は５９ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。菌糸は放射状に伸長する。
Ｆ． 合成ムコール寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は１７ｍｍ、白色で希薄な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は２５ｍｍ、白色で希薄な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は４２ｍｍ、白色で希薄な菌糸、気菌糸は少ない。裏面がやや着色する。
Ｇ． ＹｐＳｓ寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は８ｍｍ、白色でマット状の密な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は１０ｍｍ、白色でマット状の密な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は１７ｍｍ、白色でマット状の密な菌糸、気菌糸は少ない。
Ｈ． 砂糖酵母寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は２３ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は３５ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は５８ｍｍ、白色で中心部が密、周縁部が希薄な菌糸、気菌糸は少ない。コロニー中心部にしわを生じる。
Ｉ． フェノールオキシダーゼ検定用培地（２５℃）での生育状態
０．５％没食子酸添加バレイショ・ブドウ糖寒天培地を使用。７日目で全く生育無く、褐変域の径は１８ｍｍ。
Ｊ． 最適生育温度
ＰＧＹ寒天培地に直径６ｍｍの種菌を接種し、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５℃でそれぞれ培養して、１２日後に各コロニー径を測定したところ、最適生育温度は２５℃付近であった。また、３５℃では生育しなかった。
Ｋ． 最適生育ｐＨ
ＰＧＹ液体培地４０ｍｌを１００ｍｌ容の三角フラスコに調製し、殺菌後１規定塩酸又は１規定水酸化ナトリウム溶液で無菌的にｐＨ３．０、３．５、４．０、４．５、５．０、５．５、６．０、６．５、７．０、７．５、８．０、８．５、９．０、９．５、１０．０に調整、直径６ｍｍの種菌を接種し、１５日間静置後、各乾燥重量を測定したところ、最適生育ｐＨは５．５付近であった。また本菌株の生育範囲はｐＨ３．０〜７．５の範囲であった。
【００２７】
（２）ホンシメジＬａ ０１−２７株
Ａ． 麦芽エキス寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は３２ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は４６ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は６９ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。菌糸は放射状に伸長する。
Ｂ． バレイショ・ブドウ糖寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は２７ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は４０ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は７０ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。菌糸は放射状に伸長する。裏面の中心部にわずかにしわを生じる。
Ｃ． ツァペック・ドックス寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は７ｍｍ、白色で希薄な菌糸、気菌糸は極めて少ない。
１０日目でコロニー径は９ｍｍ。
１７日目でコロニー径は１０ｍｍ、白色で希薄な菌糸、樹状に伸長し、気菌糸は極めて少ない。
Ｄ． サブロー寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は１２ｍｍ、白色で希薄な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は１６ｍｍ、白色で希薄な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は３２ｍｍ、周縁部は白色で希薄な菌糸、中心部はやや密でやや着色、気菌糸は少ない。
Ｅ． オートミール寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は２１ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は３３ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は５５ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
Ｆ． 合成ムコール寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は２２ｍｍ、白色で希薄な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は３２ｍｍ、白色で希薄な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は５０ｍｍ、白色で希薄な菌糸、気菌糸は少ない。
Ｇ． ＹｐＳｓ寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は８ｍｍ、白色でマット状の密な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は１０ｍｍ、白色でマット状の密な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は１７ｍｍ、白色でマット状の密な菌糸、中心部やや着色。気菌糸は少ない。
Ｈ． 砂糖酵母寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は２４ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は３６ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は６２ｍｍ、白色で中心部が密、周縁部が希薄な菌糸、気菌糸は少ない。コロニー中心部にしわを生じる。
Ｉ． フェノールオキシダーゼ検定用培地（２５℃）での生育状態
０．５％没食子酸添加バレイショ・ブドウ糖寒天培地を使用。７日目で全く生育無く、褐変域の径は１２ｍｍ。
Ｊ． 最適生育温度
ＰＧＹ寒天培地に直径６ｍｍの種菌を接種し、（１）−Ｊ項記載の各温度でそれぞれ培養して、１２日後に各コロニー径を測定したところ、最適生育温度は２５℃付近であった。また、３５℃では生育しなかった。
Ｋ． 最適生育ｐＨ
ＰＧＹ液体培地４０ｍｌを１００ｍｌ容の三角フラスコに調製し、殺菌後（１）−Ｋ項と同様にｐＨを調整、直径６ｍｍの種菌を接種し、１５日間静置後、各乾燥重量を測定したところ、最適生育ｐＨは５．０付近であった。また本菌株の生育範囲はｐＨ３．０〜８．０の範囲であった。
【００２８】
（３）ホンシメジＬａ ０１−３７株
Ａ． 麦芽エキス寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は２８ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は４０ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は６７ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。菌糸は放射状に伸長する。
Ｂ． バレイショ・ブドウ糖寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は２８ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目コロニー径は４０ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は６６ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。菌糸は放射状に伸長する。
Ｃ．ツァペック・ドックス寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は８ｍｍ、白色で希薄な菌糸、気菌糸は極めて少ない。
１０日目でコロニー径は１０ｍｍ。
１７日目でコロニー径は１３ｍｍ、白色で希薄な菌糸、樹状に伸長し、気菌糸は極めて少ない。
Ｄ． サブロー寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は１９ｍｍ、白色で希薄な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は２７ｍｍ、白色で希薄な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は４０ｍｍ、周縁部は白色で希薄な菌糸、中心部はやや密で着色、気菌糸は少ない。
Ｅ． オートミール寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は２０ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は２９ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は５４ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
Ｆ． 合成ムコール寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は２０ｍｍ、白色で希薄な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は２５ｍｍ、白色で希薄な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は４２ｍｍ、白色で希薄な菌糸、気菌糸は少ない。
Ｇ． ＹｐＳｓ寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は１０ｍｍ、白色でマット状の密な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は１２ｍｍ、白色でマット状の密な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は２１ｍｍ、白色でマット状の密な菌糸、中心部やや着色。気菌糸は少ない。
Ｈ． 砂糖酵母寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は２２ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は３１ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は５６ｍｍ、白色で中心部が密、周縁部が希薄な菌糸、気菌糸は少ない。コロニー中心部にしわを生じる。
Ｉ．フェノールオキシダーゼ検定用培地（２５℃）での生育状態
０．５％没食子酸添加バレイショ・ブドウ糖寒天培地を使用。７日目で全く生育無く、褐変域の径は１２ｍｍ。
Ｊ． 最適生育温度
ＰＧＹ寒天培地に直径６ｍｍの種菌を接種し、（１）−Ｊ項記載の各温度でそれぞれ培養して、１２日後に各コロニー径を測定したところ、最適生育温度は２５℃付近であった。また、３５℃では生育しなかった。
Ｋ． 最適生育ｐＨ
ＰＧＹ液体培地４０ｍｌを１００ｍｌ容の三角フラスコに調製し、殺菌後（１）−Ｋ項と同様にｐＨを調整、直径６ｍｍの種菌を接種し、１５日間静置後、各乾燥重量を測定したところ、最適生育ｐＨは５．５付近であった。また本菌株の生育範囲はｐＨ３．０〜８．０の範囲であった。
【００２９】
（４）ホンシメジＬａ ０１−４５株
Ａ． 麦芽エキス寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は２７ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は４０ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は６９ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。菌糸は放射状に伸長する。
Ｂ． バレイショ・ブドウ糖寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は２４ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は３６ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は６６ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。菌糸は放射状に伸長する。裏面の中心部がやや着色。
Ｃ． ツァペック・ドックス寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は８ｍｍ、白色で希薄な菌糸、気菌糸は極めて少ない。
１０日目でコロニー径は１０ｍｍ。
１７日目でコロニー径は１２ｍｍ、白色で希薄な菌糸、樹状に伸長し、気菌糸は極めて少ない。
Ｄ． サブロー寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は１８ｍｍ、白色で希薄な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は２４ｍｍ、白色で希薄な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は３８ｍｍ、周縁部は白色で希薄な菌糸、中心部は密でやや着色、いびつなコロニーで、気菌糸は少ない。
Ｅ． オートミール寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は１４ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は３０ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は５７ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
Ｆ． 合成ムコール寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は１４ｍｍ、白色で希薄な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は２０ｍｍ、白色で希薄な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は３３ｍｍ、白色で希薄な菌糸、中央部の菌糸は密、気菌糸は少ない。裏面中心部がやや着色。
Ｇ． ＹｐＳｓ寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は１１ｍｍ、白色でマット状の密な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は１６ｍｍ、白色でマット状の密な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は３６ｍｍ、白色でマット状の密な菌糸、気菌糸は少ない。
Ｈ． 砂糖酵母寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は２５ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は３５ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は６３ｍｍ、白色で中心部が密、周縁部が希薄な菌糸、気菌糸は少ない。コロニー中心部にしわを生じる。
Ｉ． フェノールオキシダーゼ検定用培地（２５℃）での生育状態
０．５％没食子酸添加バレイショ・ブドウ糖寒天培地を使用。７日目で全く生育無く褐変域は径２２ｍｍ。
Ｊ． 最適生育温度
ＰＧＹ寒天培地に直径６ｍｍの種菌を接種し、（１）−Ｊ項記載の各温度でそれぞれ培養して、１２日後に各コロニー径を測定したところ、最適生育温度は２５℃付近であった。また、３５℃では生育しなかった。
Ｋ． 最適生育ｐＨ
ＰＧＹ液体培地４０ｍｌを１００ｍｌ容の三角フラスコに調製し、殺菌後（１）−Ｋ項と同様にｐＨを調整、直径６ｍｍの種菌を接種し、１５日間静置後、各乾燥重量を測定したところ、最適生育ｐＨは５．５付近であった。また本菌株の生育範囲はｐＨ３．５〜７．０の範囲であった。
【００３０】
（５）ホンシメジＬａ ０１−４６株
Ａ． 麦芽エキス寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は２９ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は４１ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は５６ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。菌糸は放射状に伸長する。
Ｂ． バレイショ・ブドウ糖寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は２７ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は４０ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は５４ｍｍ、白色で密な菌糸、表面、裏面とも中心部やや着色、気菌糸は少ない。菌糸は放射状に伸長する。
Ｃ． ツァペック・ドックス寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は８ｍｍ、白色で希薄な菌糸、気菌糸は極めて少ない。
１０日目でコロニー径は１１ｍｍ。
１７日目でコロニー径は１２ｍｍ、白色で希薄な菌糸、樹状に伸長し、気菌糸は極めて少ない。
Ｄ． サブロー寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は１７ｍｍ、白色で希薄な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は２５ｍｍ、白色で希薄な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は３６ｍｍ、周縁部は白色で希薄な菌糸、中心部はやや密でやや着色、気菌糸は少ない。
Ｅ． オートミール寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は１７ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は３１ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は４７ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。菌糸は放射状に伸長する。
Ｆ． 合成ムコール寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は２１ｍｍ、白色で希薄な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は２８ｍｍ、白色で希薄な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は３６ｍｍ、白色で希薄な菌糸、気菌糸は少ない。
Ｇ． ＹｐＳｓ寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は８ｍｍ、白色でマット状の密な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は１１ｍｍ、白色でマット状の密な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は１６ｍｍ、白色でマット状の密な菌糸、気菌糸は少ない。
Ｈ． 砂糖酵母寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は２３ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は３２ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は４４ｍｍ、白色で中心部が密、周縁部が希薄な菌糸、気菌糸は少ない。コロニー中心部にしわを生じる。
Ｉ． フェノールオキシダーゼ検定用培地（２５℃）での生育状態
０．５％没食子酸添加バレイショ・ブドウ糖寒天培地を使用。７日目で全く生育無く、褐変域は径１８ｍｍ。
Ｊ． 最適生育温度
ＰＧＹ寒天培地に直径６ｍｍの種菌を接種し、（１）−Ｊ項記載の各温度でそれぞれ培養して、１２日後に各コロニー径を測定したところ、最適生育温 度は２５℃付近であった。また、３５℃では生育しなかった。
Ｋ． 最適生育ｐＨ
ＰＧＹ液体培地４０ｍｌを１００ｍｌ容の三角フラスコに調製し、殺菌後（１）−Ｋ項と同様にｐＨを調整、直径６ｍｍの種菌を接種し、１５日間静置後、各乾燥重量を測定したところ、最適生育ｐＨは５．０付近であった。また本菌株の生育範囲はｐＨ３．０〜７．５の範囲であった。
【００３１】
更にホンシメジＬａ ０１−２０、Ｌａ ０１−２７、Ｌａ ０１−３７、Ｌａ ０１−４５、Ｌａ ０１−４６株と他のホンシメジ菌株との異同について、寒天培地上で対峙培養を行うことにより調べることができる。供試菌株の菌糸をＰＧＹ寒天培地より３ｍｍ×３ｍｍ×３ｍｍのブロックとして切り出し、ＰＧＹ寒天平板培地の中央部に２ｃｍ間隔で対峙して接種し、２５℃、１５日間培養後、両コロニーの境界部に帯線が生じるか否かを判定する。このようにしてホンシメジ菌株２０株を供試して得られた結果を、帯線が生じた場合を＋、生じなかった場合を−として表２に示す。なお、ここで、帯線には着色していない拮抗状態のものも含む。
【００３２】
【表２】
【００３３】
表２に示したように、ホンシメジＬａ ０１−２０、Ｌａ ０１−２７、Ｌａ ０１−３７、Ｌａ ０１−４５、Ｌａ ０１−４６株は、供試したすべての菌株と帯線を形成したことから新しい菌株であることは明白である。
【００３４】
本発明のホンシメジ菌株の栽培方法としては、ビン栽培、袋栽培、箱栽培などを適用することができる。一例としてビン栽培について述べると、その方法とは培地調製、ビン詰め、殺菌、接種、培養、芽出し、生育、収穫の各工程からなる。
【００３５】
次にこれらを具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００３６】
培地調製とは人工栽培に用いる各種基材を計量、かくはんし、加水して水分調整する工程をいう。本発明で用いられるホンシメジの人工栽培用培養基は、キビ亜科植物の実類、鋸屑、及びその他栄養剤の組合せからなる。キビ亜科植物の実類とその他の培地基材の混合比率は、例としてトウモロコシの実の場合で説明すると、トウモロコシの実がその他の基材に対して乾燥重量比で１重量部以上が好ましいが、本発明はこの比率に限定されるものではない。本発明における培地調製をトウモロコシの実で説明したが、本発明はこれに限定されるもではなくキビ亜科植物であればいずれも使用できる。
【００３７】
ビン詰めとは、培養基をビンに詰める工程であり、通常４００〜２３００ｍｌ容の耐熱性広口培養ビンに、調製した培養基を例えば８５０ｍｌビンの場合は５００〜８００ｇ、好ましくは６００〜７５０ｇ圧詰し、中央に１〜３ｃｍ程度の穴を１ないし複数個開け打栓する工程をいう。
【００３８】
殺菌とは、蒸気により培養基中のすべての微生物を死滅させる工程であれば良く、通常常圧殺菌では９８〜１００℃、４〜１２時間、高圧殺菌では１０１〜１２５℃、好ましくは１１８℃、３０〜９０分間行われる。
【００３９】
接種とは、殺菌後放冷された培地に種菌を植え付ける工程であり、通常種菌としてはホンシメジ菌糸をＰＧＹ液体培地、１／２ＰＧＹ液体培地などで２５℃、１０〜１５日間培養したものを用い、１ビン当り約１０〜５０ｍｌ無菌的に植え付ける。また、ここまで説明した工程で得られる液体種菌接種済みの培養基を２５℃で６０〜１５０日間培養し、菌廻りしたものも固体種菌として用いることができ、１ビン当り１５ｇほど無菌的に植え付ける。
【００４０】
培養とは、菌糸を生育、熟成させる工程で、通常接種済みの培養基を温度２０〜２５℃、湿度４０〜７０％において菌糸をまん延させ、更に熟成させる。熟成は省くこともできる。培養工程は、８５０ｍｌビンの場合は通常６０〜１５０日間、好ましくは１００日間前後行われる。
【００４１】
芽出しとは、培養工程を終了した後に栓を外し、子実体原基を形成させる工程で、通常１０〜２０℃、好ましくは１５℃前後、湿度８０％以上、照度１０００ルクス以下で１０〜２０日間行う。この際、菌床面に適当な素材で覆土を施しても良い。覆土素材の例としては、赤玉土、鹿沼土、バーミキュライト、石英、パーライト、ガラスビーズ等の無機鉱物質や畑土、森林土壌、山土等の土壌類が挙げられ、これらは微細粒子であることがより好ましいが、本発明は覆土材の粒径に限定されることはない。あるいは日向土、熱処理して硬質化した赤玉土などの多孔性無機鉱物質や腐葉土、バーク堆肥、ピートモス等の腐植性素材、あるいは針葉樹鋸屑、広葉樹鋸屑、コーンコブ、セルロースパルプ、セルローススポンジ、籾殻、稲ワラ、ミズゴケ等の植物性素材、寒天製造時に副生する寒天残渣等も覆土材の例として挙げられる。これらの覆土材は単独で使用しても良く、また２種類以上を混合して使用しても良い。更に、覆土材をあらかじめ適当な含水率になるように吸水させておいてから使用しても良い。
【００４２】
また栓を外した後、種菌部分と培養基表面をかき取る菌かき操作を行っても良い。更に、栓を外した後又は菌かき後、直ちにビン口まで水を入れて培養基に給水し、３〜５時間後余剰の水を排水する加水操作を加えても良い。また、芽出し工程中は加湿で結露水が発生しやすいため、濡れを防ぐ目的で菌床面を有孔ポリシートや波板等で覆っても良い。
【００４３】
生育とは、子実体原基から成熟子実体を形成させる工程で、通常芽出し工程とほぼ同じ条件で５〜１５日間行う。生育工程では結露水による濡れの影響を受けにくいので、有孔ポリシートや波板等の被覆は施さないほうが好ましい。
【００４４】
以上の工程により成熟子実体を得ることができ、収穫を行って栽培の全工程を終了する。
【００４５】
以上、本発明をビン栽培方法により説明したが、本発明は上記ビン栽培に限定されるものではない。
【００４６】
本発明によって安価な培地原料を用いた培養基で収量性及び形状の良好なホンシメジを商業的に人工栽培することが可能である。本発明に使用する好適なホンシメジ菌株の例としては、ホンシメジＬａ ０１−２０株、ホンシメジＬａ ０１−２７株、ホンシメジＬａ ０１−３７株、ホンシメジＬａ ０１−４５株、ホンシメジＬａ ０１−４６株、これらの変異株、及びこれらの菌株を親株とする菌株と対峙培養によって帯線を形成しない菌株が挙げられるが、本発明はこれらの菌株に限定されるものではなく、これらの菌株と対峙培養によって帯線を形成する菌株であっても、キビ亜科植物の実類を含有する培養基で良好な子実体形成能を有するホンシメジ菌株で自然界からの選抜・分離された菌株や、交配、変異誘導、プロトプラスト処理、細胞融合、遺伝子操作などによって育種され、人工栽培に用いることが可能なホンシメジ菌株であればいずれも本発明に含まれる。
【００４７】
また、本発明によりこれらの菌株をキビ亜科植物の実類を含有する培養基で栽培することにより、麦類を用いた培養基で栽培した場合よりも発生室への移動から収穫までの日数を短縮することが可能となる。
【実施例】
【００４８】
以下に、本発明を実施例により更に具体的に説明するが、本発明は以下の実施例の範囲のみに限定されるものではない。
【００４９】
実施例１
１／２ＰＧＹ液体培地（組成：グルコース１．０％、ペプトン０．１％、酵母エキス０．１％、ＫＨ2ＰＯ4０．０２５％、ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ０．０２５％）２００ｍｌにホンシメジＬａ ０１−２０株の菌糸を接種し、２５℃で１０日間培養し、液体種菌とした。
【００５０】
一方、ポリプロピレン製の広口培養ビン（８５０ｍｌ）に、トウモロコシの実〔(株)イトウ精麦製の飼料用粉砕物より、通常混合される魚粉を省いたもの〕又は押麦〔豊橋糧食工業(株)〕と広葉樹鋸屑〔（有）トモエ物産〕を乾物重量比で２：１に混合し培養基の水分が最終的に６０％になるように水を加えて十分にかくはん・混合したものを圧詰し、中央に直径３ｃｍ程度の穴を開けたのち打栓し、１１８℃で６０分間高圧蒸気殺菌を行い、放冷したものを固形培養基として調製した。
【００５１】
この固形培養基に上記の液体種菌を約１５ｍｌ接種し、暗所にて温度２３℃、湿度６０〜７０％の条件下で１０８日間菌糸を培養し、培地全体に菌糸をまん延させた。次いで栓を外しビン口をオートクレーブ滅菌した赤玉土で覆土した後、温度１５℃、加湿をヒューミアイ１００〔(株)鷺宮製作所製〕の表示値で１１５〜１２０％となるように制御した発生室に移動し、５０〜５００ルクスの照明下、子実体原基が生じるまでは水濡れを防ぐためビン口を波板で被覆し、子実体原基形成後は波板を取去り、発生室移動後トウモロコシ培地は２６日間、押麦培地は２７日間培養を続け、成熟子実体を得た。トウモロコシ培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は１２３．０g、押麦培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は８３．８gであり、収量、発生室移動後の所要日数ともトウモロコシ培地の方が優れていた。
【００５２】
実施例２
ポリプロピレン製の広口培養ビン（２３００ｍｌ）に、トウモロコシの実〔(株)イトウ精麦製の飼料用粉砕物より、通常混合される魚粉を省いたもの〕又は押麦〔豊橋糧食工業(株)〕と広葉樹鋸屑〔（有）トモエ物産〕を乾物重量比で２：１に混合し、培養基の水分が最終的に６０％になるように水を加えて十分にかくはん・混合したものを実施例１で８５０ｍｌビンに詰めた分と同重量を容器の半分程度まで詰めた後、直径約１ｃｍ程度の穴を３個所開け、打栓して１１８℃で６０分間高圧蒸気殺菌を行い、放冷したものを固形培養基として調製した。
【００５３】
この固形培養基に実施例１記載の液体種菌を約５０ｍｌ接種し、暗所にて温度２３℃、湿度６０〜７０％の条件下で８１日間菌糸を培養し、培地全体に菌糸をまん延させた。次いで栓を外しビン口をオートクレーブ滅菌した赤玉土で覆土した後、温度１５℃、加湿をヒューミアイ１００〔(株)鷺宮製作所製〕の表示値で１１５〜１２０％となるように制御した発生室に移動し、５０〜５００ルクスの照明下、子実体原基が生じるまでは水濡れを防ぐためビン口を波板で被覆し、子実体原基形成後は波板を取去り、発生室移動後トウモロコシ培地は２６日間、押麦培地は２９日間培養を続け、成熟子実体を得た。トウモロコシ培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は１５３．０g、押麦培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は９８．５gであり、収量、発生室移動後の所要日数ともトウモロコシ培地の方が優れていた。
【００５４】
実施例３
ポリプロピレン製の広口培養ビン（８００ｍｌナメコ用）に、トウモロコシの実〔(株)イトウ精麦の飼料用粉砕物より、通常混合される魚粉を省いたもの〕又は押麦〔豊橋糧食工業（株）〕と広葉樹鋸屑〔（有）トモエ物産〕を乾物重量比で２：１に混合し、培養基の水分が最終的に６０％になるように水を加えて十分にかくはん・混合したものをビン容積の約半量程度詰めた後、中央に直径１．５ｃｍ程度の穴を開けたのち打栓し、１１８℃で６０分間高圧蒸気殺菌を行い、放冷したものを固形培養基として調製した。
【００５５】
この固形培養基に実施例１に記載の液体種菌を約２０ｍｌ接種し、暗所にて温度２３℃、湿度６０〜７０％の条件下で６３日間菌糸を培養し、培地全体に菌糸をまん延させた。次いで栓を外しビン口をオートクレーブ滅菌した赤玉土で覆土した後、温度１５℃、加湿をヒューミアイ１００〔(株)鷺宮製作所製〕の表示値で１１５〜１２０％となるように制御した発生室に移動し、５０〜５００ルクスの照明下、子実体原基が生じるまでは水濡れを防ぐためビン口を波板で被覆し、子実体原基形成後は波板を取去り、発生室移動後トウモロコシ培地、押麦培地とも２９日間培養を続け、成熟子実体を得た。トウモロコシ培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は１０５．３ｇ、押麦培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は８２．５ｇであり、収量においてトウモロコシ培地の方が優れていた。
【００５６】
実施例４
ポリプロピレン製の広口培養ビン（８００ｍｌナメコ用）に、加熱圧片とうもろこし〔(株)イトウ精麦〕又は押麦〔豊橋糧食工業（株）〕と広葉樹鋸屑〔（有）トモエ物産〕を乾物重量比で２：１に混合し、培養基の水分が最終的に６０％になるように水を加えて十分にかくはん・混合したものをビン容積の約半量程度詰めた後、中央に直径１．５ｃｍ程度の穴を開けたのち打栓し、１１８℃で６０分間高圧蒸気殺菌を行い、放冷したものを固形培養基として調製した。
【００５７】
この固形培養基に実施例１に記載の液体種菌を約２０ｍｌ接種し、暗所にて温度２３℃、湿度６０〜７０％の条件下で６３日間菌糸を培養し、培地全体に菌糸をまん延させた。次いで栓を外しビン口をオートクレーブ滅菌した赤玉土で覆土した後、温度１５℃、加湿をヒューミアイ１００〔(株)鷺宮製作所製〕の表示値で１１５〜１２０％となるように制御した発生室に移動し、５０〜５００ルクスの照明下、子実体原基が生じるまでは水濡れを防ぐためビン口を波板で被覆し、子実体原基形成後は波板を取去り、発生室移動後加熱圧片とうもろこし培地、押麦培地ともに２９日間培養を続け、成熟子実体を得た。加熱圧片とうもろこし培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は８７．５g、押麦培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は８２．５ｇであり、収量において加熱圧片とうもろこし培地の方が優れていた。
【００５８】
実施例５
１／２ＰＧＹ液体培地（組成：グルコース１．０％、ペプトン０．１％、酵母エキス０．１％、ＫＨ2ＰＯ4０．０２５％、ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ０．０２５％）２００ｍｌにホンシメジＬａ ０１−２７株の菌糸を接種し、２５℃で１０日間培養し、液体種菌とした。
【００５９】
一方、ポリプロピレン製の広口培養ビン（８５０ｍｌ）に、トウモロコシの実〔(株)イトウ精麦製の飼料用粉砕物より、通常混合される魚粉を省いたもの〕又は押麦〔豊橋糧食工業(株)〕と広葉樹鋸屑〔（有）トモエ物産〕を乾物重量比で２：１に混合し培養基の水分が最終的に６０％になるように水を加えて十分にかくはん・混合したものを圧詰し、中央に直径３ｃｍ程度の穴を開けたのち打栓し、１１８℃で６０分間高圧蒸気殺菌を行い、放冷したものを固形培養基として調製した。
【００６０】
この固形培養基に上記の液体種菌を約１５ｍｌ接種し、暗所にて温度２３℃、湿度６０〜７０％の条件下で１０９日間菌糸を培養し、培地全体に菌糸をまん延させた。次いで栓を外しビン口をオートクレーブ滅菌した赤玉土で覆土した後、温度１５℃、加湿をヒューミアイ１００〔(株)鷺宮製作所製〕の表示値で１１５〜１２０％となるように制御した発生室に移動し、５０〜５００ルクスの照明下、子実体原基が生じるまでは水濡れを防ぐためビン口を波板で被覆し、子実体原基形成後は波板を取去り、発生室移動後３２日間培養を続け、成熟子実体を得た。トウモロコシ培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は８５．０gであった。押麦培地では子実体の発生は見られず、トウモロコシ培地の方が優れていた。
【００６１】
実施例６
ポリプロピレン製の広口培養ビン（２３００ｍｌ）に、トウモロコシの実〔(株)イトウ精麦製の飼料用粉砕物より、通常混合される魚粉を省いたもの〕又は押麦〔豊橋糧食工業(株)〕と広葉樹鋸屑〔（有）トモエ物産〕を乾物重量比で２：１に混合し、培養基の水分が最終的に６０％になるように水を加えて十分にかくはん・混合したものを実施例５で８５０ｍｌビンに詰めた分と同重量を容器の半分程度まで詰めた後、直径約１ｃｍ程度の穴を３個所開け、打栓して１１８℃で６０分間高圧蒸気殺菌を行い、放冷したものを固形培養基として調製した。
【００６２】
この固形培養基に実施例５記載の液体種菌を約５０ｍｌ接種し、暗所にて温度２３℃、湿度６０〜７０％の条件下で１０９日間菌糸を培養し、培地全体に菌糸をまん延させた。次いで栓を外しビン口をオートクレーブ滅菌した赤玉土で覆土した後、温度１５℃、加湿をヒューミアイ１００〔(株)鷺宮製作所製〕の表示値で１１５〜１２０％となるように制御した発生室に移動し、５０〜５００ルクスの照明下、子実体原基が生じるまでは水濡れを防ぐためビン口を波板で被覆し、子実体原基形成後は波板を取去り、発生室移動後２５日間培養を続け、成熟子実体を得た。トウモロコシ培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は１４５．５gであった。押麦培地では子実体の発生は見られず、トウモロコシ培地の方が優れていた。
【００６３】
実施例７
ポリプロピレン製の広口培養ビン（８００ｍｌナメコ用）に、トウモロコシの実〔(株)イトウ精麦〕の飼料用粉砕物より、通常混合される魚粉を省いたもの〕又は押麦〔豊橋糧食工業（株）〕と広葉樹鋸屑〔（有）トモエ物産〕を乾物重量比で２：１に混合し、培養基の水分が最終的に６０％になるように水を加えて十分にかくはん・混合したものをビン容積の約半量程度詰め、中央に直径１．５ｃｍ程度の穴を開けたのち打栓し、１１８℃で６０分間高圧蒸気殺菌を行い、放冷したものを固形培養基として調製した。
【００６４】
この固形培養基に実施例５に記載の液体種菌を約２０ｍｌ接種し、暗所にて温度２３℃、湿度６０〜７０％の条件下で１１２日間菌糸を培養し、培地全体に菌糸をまん延させた。次いで栓を外しビン口をオートクレーブ滅菌した赤玉土で覆土した後、温度１５℃、加湿をヒューミアイ１００〔(株)鷺宮製作所製〕の表示値で１１５〜１２０％となるように制御した発生室に移動し、５０〜５００ルクスの照明下、子実体原基が生じるまでは水濡れを防ぐためビン口を波板で被覆し、子実体原基形成後は波板を取去り、発生室移動後トウモロコシ培地は２０日間、押麦培地は２２日間培養を続け、成熟子実体を得た。トウモロコシ培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は９４．４g、押麦培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は６９．２ｇであり、収量、発生室移動後の所要日数ともトウモロコシ培地の方が優れていた。
【００６５】
実施例８
ポリプロピレン製の広口培養ビン（８００ｍｌナメコ用）に、加熱圧片とうもろこし〔(株)イトウ精麦〕又は押麦〔豊橋糧食工業（株）〕と広葉樹鋸屑〔（有）トモエ物産〕を乾物重量比で２：１に混合し、培養基の水分が最終的に６０％になるように水を加えて十分にかくはん・混合したものをビン容積の約半量程度詰め、中央に直径１．５ｃｍ程度の穴を開けたのち打栓し、１１８℃で６０分間高圧蒸気殺菌を行い、放冷したものを固形培養基として調製した。
【００６６】
この固形培養基に実施例５に記載の液体種菌を約２０ｍｌ接種し、暗所にて温度２３℃、湿度６０〜７０％の条件下で１１２日間菌糸を培養し、培地全体に菌糸をまん延させた。次いで栓を外しビン口をオートクレーブ滅菌した赤玉土で覆土した後、温度１５℃、加湿をヒューミアイ１００〔(株)鷺宮製作所製〕の表示値で１１５〜１２０％となるように制御した発生室に移動し、５０〜５００ルクスの照明下、子実体原基が生じるまでは水濡れを防ぐためビン口を波板で被覆し、子実体原基形成後は波板を取去り、発生室移動後加熱圧片とうもろこし培地では２１日間、押麦培地では２２日間培養を続け、成熟子実体を得た。加熱圧片とうもろこし培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は７９．３g、押麦培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は６９．２ｇであり、収量、発生室移動後の所要日数とも加熱圧片とうもろこし培地の方が優れていた。
【００６７】
実施例９
１／２ＰＧＹ液体培地（組成：グルコース１．０％、ペプトン０．１％、酵母エキス０．１％、ＫＨ2ＰＯ4０．０２５％、ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ０．０２５％）２００ｍｌにホンシメジＬａ ０１−３７株の菌糸を接種し、２５℃で１０日間培養し、液体種菌とした。
【００６８】
ポリプロピレン製の広口培養ビン（２３００ｍｌ）に、トウモロコシの実〔(株)イトウ精麦製の飼料用粉砕物より、通常混合される魚粉を省いたもの〕又は押麦〔豊橋糧食工業(株)〕と広葉樹鋸屑〔（有）トモエ物産〕を乾物重量比で２：１に混合し、培養基の水分が最終的に６０％になるように水を加えて十分にかくはん・混合したものを実施例１で８５０ｍｌビンに詰めた分と同重量を容器の半分程度まで詰めた後、直径約１ｃｍ程度の穴を３個所開け、打栓して１１８℃で６０分間高圧蒸気殺菌を行い、放冷したものを固形培養基として調製した。
【００６９】
この固形培養基に上記の液体種菌を約５０ｍｌ接種し、暗所にて温度２３℃、湿度６０〜７０％の条件下で８１日間菌糸を培養し、培地全体に菌糸をまん延させた。次いで栓を外しビン口をオートクレーブ滅菌した赤玉土で覆土した後、温度１５℃、加湿をヒューミアイ１００〔(株)鷺宮製作所製〕の表示値で１１５〜１２０％となるように制御した発生室に移動し、５０〜５００ルクスの照明下、子実体原基が生じるまでは水濡れを防ぐためビン口を波板で被覆し、子実体原基形成後は波板を取去り、発生室移動後２７日間培養を続け、成熟子実体を得た。トウモロコシ培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は９０．０gであった。押麦培地では子実体の発生は見られず、トウモロコシ培地の方が優れていた。
【００７０】
実施例１０
ポリプロピレン製の広口培養ビン（８００ｍｌナメコ用）に、トウモロコシの実〔(株)イトウ精麦の飼料用粉砕物より、通常混合される魚粉を省いたもの〕又は押麦〔豊橋糧食工業（株）〕と広葉樹鋸屑〔（有）トモエ物産〕を乾物重量比で２：１に混合し、培養基の水分が最終的に６０％になるように水を加えて十分にかくはん・混合したものをビン容積の約半量程度詰めた後、中央に直径１．５ｃｍ程度の穴を開けたのち打栓し、１１８℃で６０分間高圧蒸気殺菌を行い、放冷したものを固形培養基として調製した。
【００７１】
この固形培養基に実施例９に記載の液体種菌を約２０ｍｌ接種し、暗所にて温度２３℃、湿度６０〜７０％の条件下で１１２日間菌糸を培養し、培地全体に菌糸をまん延させた。次いで栓を外し、ビン口をオートクレーブ滅菌した赤玉土で覆土した後、温度１５℃、加湿をヒューミアイ１００〔(株)鷺宮製作所製〕の表示値で１１５〜１２０％となるように制御した発生室に移動し、５０〜５００ルクスの照明下、子実体原基が生じるまでは水濡れを防ぐためビン口を波板で被覆し、子実体原基形成後は波板を取去り、発生室移動後トウモロコシ培地は２５日間、押麦培地は２６日間培養を続け、成熟子実体を得た。トウモロコシ培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は６５．３g、押麦培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は５６．０ｇであり、収量、発生室移動後の所要日数ともトウモロコシ培地の方が優れていた。
【００７２】
実施例１１
１／２ＰＧＹ液体培地（組成：グルコース１．０％、ペプトン０．１％、酵母エキス０．１％、ＫＨ2ＰＯ4０．０２５％、ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ０．０２５％）２００ｍｌにホンシメジＬａ ０１−４５株の菌糸を接種し、２５℃で１０日間培養し、液体種菌とした。
【００７３】
一方、ポリプロピレン製の広口培養ビン（８５０ｍｌ）に、トウモロコシの実〔(株)イトウ精麦製の飼料用粉砕物より、通常混合される魚粉を省いたもの〕又は押麦〔豊橋糧食工業(株)〕と広葉樹鋸屑〔（有）トモエ物産〕を乾物重量比で２：１に混合し培養基の水分が最終的に６０％になるように水を加えて十分にかくはん・混合したものを圧詰し、中央に直径３ｃｍ程度の穴を開けたのち打栓し、１１８℃で６０分間高圧蒸気殺菌を行い、放冷したものを固形培養基として調製した。
【００７４】
この固形培養基に上記の液体種菌を約１５ｍｌ接種し、暗所にて温度２３℃、湿度６０〜７０％の条件下で１１２日間菌糸を培養し、培地全体に菌糸をまん延させた。次いで栓を外しビン口をオートクレーブ滅菌した赤玉土で覆土した後、温度１５℃、加湿をヒューミアイ１００〔(株)鷺宮製作所製〕の表示値で１１５〜１２０％となるように制御した発生室に移動し、５０〜５００ルクスの照明下、子実体原基が生じるまでは水濡れを防ぐためビン口を波板で被覆し、子実体原基形成後は波板を取去り、発生室移動後３０日間培養を続け、成熟子実体を得た。トウモロコシ培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は７９．０gであった。押麦培地では子実体の発生は見られず、収量、発生室移動後の所要日数ともトウモロコシ培地の方が優れていた。
【００７５】
実施例１２
ポリプロピレン製の広口培養ビン（２３００ｍｌ）に、トウモロコシの実〔(株)イトウ精麦製の飼料用粉砕物より、通常混合される魚粉を省いたもの〕又は押麦〔豊橋糧食工業(株)〕と広葉樹鋸屑〔（有）トモエ物産〕を乾物重量比で２：１に混合し、培養基の水分が最終的に６０％になるように水を加えて十分にかくはん・混合したものを実施例１で８５０ｍｌビンに詰めた分と同重量を容器の半分程度まで詰めた後、直径約１ｃｍ程度の穴を３個所開け、打栓して１１８℃で６０分間高圧蒸気殺菌を行い、放冷したものを固形培養基として調製した。
【００７６】
この固形培養基に実施例１１記載の液体種菌を約５０ｍｌ接種し、暗所にて温度２３℃、湿度６０〜７０％の条件下で８４日間菌糸を培養し、培地全体に菌糸をまん延させた。次いで栓を外しビン口をオートクレーブ滅菌した赤玉土で覆土した後、温度１５℃、加湿をヒューミアイ１００〔(株)鷺宮製作所製〕の表示値で１１５〜１２０％となるように制御した発生室に移動し、５０〜５００ルクスの照明下、子実体原基が生じるまでは水濡れを防ぐためビン口を波板で被覆し、子実体原基形成後は波板を取去り、発生室移動後トウモロコシ培地では３３日間、押麦培地では３９日間培養を続け、成熟子実体を得た。トウモロコシ培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は１１２．０g、押麦培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は４４．０ｇであり、収量、発生室移動後の所要日数ともトウモロコシ培地の方が優れていた。
【００７７】
実施例１３
１／２ＰＧＹ液体培地（組成：グルコース１．０％、ペプトン０．１％、酵母エキス０．１％、ＫＨ2ＰＯ4０．０２５％、ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ０．０２５％）２００ｍｌにホンシメジＬａ ０１−４６株の菌糸を接種し、２５℃で１０日間培養し、液体種菌とした。
【００７８】
一方、ポリプロピレン製の広口培養ビン（８５０ｍｌ）に、トウモロコシの実〔(株)イトウ精麦製の飼料用粉砕物より、通常混合される魚粉を省いたもの〕又は押麦〔豊橋糧食工業(株)〕と広葉樹鋸屑〔（有）トモエ物産〕を乾物重量比で２：１に混合し培養基の水分が最終的に６０％になるように水を加えて十分にかくはん・混合したものを圧詰し、中央に直径３ｃｍ程度の穴を開けたのち打栓し、１１８℃で６０分間高圧蒸気殺菌を行い、放冷したものを固形培養基として調製した。
【００７９】
この固形培養基に上記の液体種菌を約１５ｍｌ接種し、暗所にて温度２３℃、湿度６０〜７０％の条件下で１１２日間菌糸を培養し、培地全体に菌糸をまん延させた。次いで栓を外しビン口をオートクレーブ滅菌した赤玉土で覆土した後、温度１５℃、加湿をヒューミアイ１００〔(株)鷺宮製作所製〕の表示値で１１５〜１２０％となるように制御した発生室に移動し、５０〜５００ルクスの照明下、子実体原基が生じるまでは水濡れを防ぐためビン口を波板で被覆し、子実体原基形成後は波板を取去り、発生室移動後２９日間培養を続け、成熟子実体を得た。トウモロコシ培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は７８．９gであった。押麦培地では子実体の発生は見られず、トウモロコシ培地の方が優れていた。
【００８０】
実施例１４
ポリプロピレン製の広口培養ビン（８００ｍｌナメコ用）に、トウモロコシの実〔(株)イトウ精麦の飼料用粉砕物より、通常混合される魚粉を省いたもの〕又は押麦〔豊橋糧食工業（株）〕と広葉樹鋸屑〔（有）トモエ物産〕を乾物重量比で２：１に混合し、培養基の水分が最終的に６０％になるように水を加えて十分にかくはん・混合したものをビン容積の約半量程度詰めた後、中央に直径１．５ｃｍ程度の穴を開けたのち打栓し、１１８℃で６０分間高圧蒸気殺菌を行い、放冷したものを固形培養基として調製した。
【００８１】
この固形培養基に実施例１３に記載の液体種菌を約２０ｍｌ接種し、暗所にて温度２３℃、湿度６０〜７０％の条件下で１０５日間菌糸を培養し、培地全体に菌糸をまん延させた。次いで栓を外し、ビン口をオートクレーブ滅菌した赤玉土で覆土した後、温度１５℃、加湿をヒューミアイ１００〔(株)鷺宮製作所製〕の表示値で１１５〜１２０％となるように制御した発生室に移動し、５０〜５００ルクスの照明下、子実体原基が生じるまでは水濡れを防ぐためビン口を波板で被覆し、子実体原基形成後は波板を取去り、発生室移動後トウモロコシ培地は２６日間、押麦培地は２９日間培養を続け、成熟子実体を得た。トウモロコシ培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は６２．５g、押麦培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は２７．８ｇであり、収量、発生室移動後の所要日数ともトウモロコシ培地の方が優れていた。
【００８２】
実施例１５
ポリプロピレン製の広口培養ビン（８００ｍｌナメコ用）に、加熱圧片とうもろこし〔(株)イトウ精麦〕又は押麦〔豊橋糧食工業（株）〕と広葉樹鋸屑〔（有）トモエ物産〕を乾物重量比で２：１に混合し、培養基の水分が最終的に６０％になるように水を加えて十分にかくはん・混合したものをビン容積の約半量程度詰め、中央に直径１．５ｃｍ程度の穴を開けたのち打栓し、１１８℃で６０分間高圧蒸気殺菌を行い、放冷したものを固形培養基として調製した。
【００８３】
この固形培養基に実施例１３に記載の液体種菌を約２０ｍｌ接種し、暗所にて温度２３℃、湿度６０〜７０％の条件下で１０５日間菌糸を培養し、培地全体に菌糸をまん延させた。次いで栓を外しビン口をオートクレーブ滅菌した赤玉土で覆土した後、温度１５℃、加湿をヒューミアイ１００〔(株)鷺宮製作所製〕の表示値で１１５〜１２０％となるように制御した発生室に移動し、５０〜５００ルクスの照明下、子実体原基が生じるまでは水濡れを防ぐためビン口を波板で被覆し、子実体原基形成後は波板を取去り、発生室移動後加熱圧片とうもろこし培地は３４日間、押麦培地は２９日間培養を続け、成熟子実体を得た。加熱圧片とうもろこし培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は３５．３g、押麦培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は２７．８ｇであり、収量において加熱圧片とうもろこし培地の方が優れていた。
【００８４】
実施例１６
ポリプロピレン製の広口培養ビン（８００ｍｌナメコ用）に、全粒マイロ〔大阪新興飼料〕又は押麦〔豊橋糧食工業（株）〕と広葉樹鋸屑〔（有）トモエ物産〕を乾物重量比で２：１に混合し、培養基の水分が最終的に６０％になるように水を加えて十分にかくはん・混合したものをビン容積の約半量程度詰め、中央に直径１．５ｃｍ程度の穴を開けたのち打栓し、１１８℃で６０分間高圧蒸気殺菌を行い、放冷したものを固形培養基として調製した。
【００８５】
この固形培養基に実施例１３に記載の液体種菌を約２０ｍｌ接種し、暗所にて温度２３℃、湿度６０〜７０％の条件下で１０５日間菌糸を培養し、培地全体に菌糸をまん延させた。次いで栓を外しビン口をオートクレーブ滅菌した赤玉土で覆土した後、温度１５℃、加湿をヒューミアイ１００〔(株)鷺宮製作所製〕の表示値で１１５〜１２０％となるように制御した発生室に移動し、５０〜５００ルクスの照明下、子実体原基が生じるまでは水濡れを防ぐためビン口を波板で被覆し、子実体原基形成後は波板を取去り、発生室移動後全粒マイロ培地は３０日間、押麦培地は２９日間培養を続け、成熟子実体を得た。全粒マイロ培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は３１．３g、押麦培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は２７．８ｇであり、収量において全粒マイロ培地の方が優れていた。
【００８６】
実施例１７
ポリプロピレン製の広口培養ビン（８００ｍｌナメコ用）に、キビの実〔大阪新興飼料〕又は押麦〔豊橋糧食工業（株）〕と広葉樹鋸屑〔（有）トモエ物産〕を乾物重量比で２：１に混合し、培養基の水分が最終的に６０％になるように水を加えて十分にかくはん・混合したものをビン容積の約半量程度詰め、中央に直径１．５ｃｍ程度の穴を開けたのち打栓し、１１８℃で６０分間高圧蒸気殺菌を行い、放冷したものを固形培養基として調製した。
【００８７】
この固形培養基に実施例１３に記載の液体種菌を約２０ｍｌ接種し、暗所にて温度２３℃、湿度６０〜７０％の条件下で１０５日間菌糸を培養し、培地全体に菌糸をまん延させた。次いで栓を外しビン口をオートクレーブ滅菌した赤玉土で覆土した後、温度１５℃、加湿をヒューミアイ１００〔(株)鷺宮製作所製〕の表示値で１１５〜１２０％となるように制御した発生室に移動し、５０〜５００ルクスの照明下、子実体原基が生じるまでは水濡れを防ぐためビン口を波板で被覆し、子実体原基形成後は波板を取去り、発生室移動後キビ培地は３３日間、押麦培地は２９日間培養を続け、成熟子実体を得た。キビ培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は２９．０g、押麦培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は２７．８ｇであり、収量においてキビ培地の方が優れていた。
【００８８】
実施例１８
ポリプロピレン製の広口培養ビン（８００ｍｌナメコ用）に、アワの実〔大阪新興飼料〕又は押麦〔豊橋糧食工業（株）〕と広葉樹鋸屑〔（有）トモエ物産〕を乾物重量比で２：１に混合し、培養基の水分が最終的に６０％になるように水を加えて十分にかくはん・混合したものをビン容積の約半量程度詰め、中央に直径１．５ｃｍ程度の穴を開けたのち打栓し、１１８℃で６０分間高圧蒸気殺菌を行い、放冷したものを固形培養基として調製した。
【００８９】
この固形培養基に実施例１３に記載の液体種菌を約２０ｍｌ接種し、暗所にて温度２３℃、湿度６０〜７０％の条件下で１０５日間菌糸を培養し、培地全体に菌糸をまん延させた。次いで栓を外しビン口をオートクレーブ滅菌した赤玉土で覆土した後、温度１５℃、加湿をヒューミアイ１００〔(株)鷺宮製作所製〕の表示値で１１５〜１２０％となるように制御した発生室に移動し、５０〜５００ルクスの照明下、子実体原基が生じるまでは水濡れを防ぐためビン口を波板で被覆し、子実体原基形成後は波板を取去り、発生室移動後アワ培地は２７日間、押麦培地は２９日間培養を続け、成熟子実体を得た。アワ培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は４９．３g、押麦培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は２７．８ｇであり、収量、発生室移動後の所要日数ともアワの実培地の方が優れていた。
【００９０】
比較例１
１／２ＰＧＹ液体培地（組成：グルコース１．０％、ペプトン０．１％、酵母エキス０．１％、ＫＨ2ＰＯ4０．０２５％、ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ０．０２５％）２００ｍｌにホンシメジＬａ ０１−２６株の菌糸を接種し、２５℃で１０日間培養し、液体種菌とした。
【００９１】
一方、ポリプロピレン製の広口培養ビン（８５０ｍｌ）に、トウモロコシの実〔(株)イトウ精麦製の飼料用粉砕物より、通常混合される魚粉を省いたもの〕又は押麦〔豊橋糧食工業(株)〕と広葉樹鋸屑〔（有）トモエ物産〕を乾物重量比で２：１に混合し培養基の水分が最終的に６０％になるように水を加えて十分にかくはん・混合したものを圧詰し、中央に直径３ｃｍ程度の穴を開けたのち打栓し、１１８℃で６０分間高圧蒸気殺菌を行い、放冷したものを固形培養基として調製した。
【００９２】
この固形培養基に上記の液体種菌を約１５ｍｌ接種し、暗所にて温度２３℃、湿度６０〜７０％の条件下で１０９日間菌糸を培養し、培地全体に菌糸をまん延させた。次いで栓を外しビン口をオートクレーブ滅菌した赤玉土で覆土した後、温度１５℃、加湿をヒューミアイ１００〔(株)鷺宮製作所製〕の表示値で１１５〜１２０％となるように制御した発生室に移動し、５０〜５００ルクスの照明下、子実体原基が生じるまでは水濡れを防ぐためビン口を波板で被覆し、子実体原基形成後は波板を取去り、発生室移動後２７日間培養を続け、成熟子実体を得た。押麦培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は４２．０gであった。トウモロコシ培地では子実体の発生は見られず、押麦培地の方が優れていた。
【００９３】
比較例２
１／２ＰＧＹ液体培地（組成：グルコース１．０％、ペプトン０．１％、酵母エキス０．１％、ＫＨ2ＰＯ4０．０２５％、ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ０．０２５％）２００ｍｌにホンシメジＬａ ０１−３８株の菌糸を接種し、２５℃で１０日間培養し、液体種菌とした。
【００９４】
一方、ポリプロピレン製の広口培養ビン（８５０ｍｌ）に、トウモロコシの実〔(株)イトウ精麦製の飼料用粉砕物より、通常混合される魚粉を省いたもの〕又は押麦〔豊橋糧食工業(株)〕と広葉樹鋸屑〔（有）トモエ物産〕を乾物重量比で２：１に混合し培養基の水分が最終的に６０％になるように水を加えて十分にかくはん・混合したものを圧詰し、中央に直径３ｃｍ程度の穴を開けたのち打栓し、１１８℃で６０分間高圧蒸気殺菌を行い、放冷したものを固形培養基として調製した。
【００９５】
この固形培養基に上記の液体種菌を約１５ｍｌ接種し、暗所にて温度２３℃、湿度６０〜７０％の条件下で１０９日間菌糸を培養し、培地全体に菌糸をまん延させた。次いで栓を外しビン口をオートクレーブ滅菌した赤玉土で覆土した後、温度１５℃、加湿をヒューミアイ１００〔(株)鷺宮製作所製〕の表示値で１１５〜１２０％となるように制御した発生室に移動し、５０〜５００ルクスの照明下、子実体原基が生じるまでは水濡れを防ぐためビン口を波板で被覆し、子実体原基形成後は波板を取去り、発生室移動後３５日間培養を続け、成熟子実体を得た。押麦培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は７６．０gであった。トウモロコシ培地では子実体の発生は見られず、押麦培地の方が優れていた。
【００９６】
比較例３
１／２ＰＧＹ液体培地（組成：グルコース１．０％、ペプトン０．１％、酵母エキス０．１％、ＫＨ2ＰＯ4０．０２５％、ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ０．０２５％）２００ｍｌにホンシメジＹＧ６Ｌ株の菌糸を接種し、２５℃で１０日間培養し、液体種菌とした。
【００９７】
一方、ポリプロピレン製の広口培養ビン（８５０ｍｌ）に、トウモロコシの実〔(株)イトウ精麦製の飼料用粉砕物より、通常混合される魚粉を省いたもの〕又は押麦〔豊橋糧食工業(株)〕と広葉樹鋸屑〔（有）トモエ物産〕を乾物重量比で２：１に混合し培養基の水分が最終的に６０％になるように水を加えて十分にかくはん・混合したものを圧詰し、中央に直径３ｃｍ程度の穴を開けたのち打栓し、１１８℃で６０分間高圧蒸気殺菌を行い、放冷したものを固形培養基として調製した。
【００９８】
この固形培養基に上記の液体種菌を約１５ｍｌ接種し、暗所にて温度２３℃、湿度６０〜７０％の条件下で１２３日間菌糸を培養し、培地全体に菌糸をまん延させた。次いで栓を外しビン口をオートクレーブ滅菌した赤玉土で覆土した後、温度１５℃、加湿をヒューミアイ１００〔(株)鷺宮製作所製〕の表示値で１１５〜１２０％となるように制御した発生室に移動し、５０〜５００ルクスの照明下、子実体原基が生じるまでは水濡れを防ぐためビン口を波板で被覆し、子実体原基形成後は波板を取去り、発生室移動後トウモロコシ培地では２９日間、押麦培地では３７日間培養を続け、成熟子実体を得た。トウモロコシ培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は３４．３ｇ、トウモロコシ培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は７８．８ｇであり、収量は押麦培地の方が優れていた。
【００９９】
比較例４
ポリプロピレン製の広口培養ビン（２３００ｍｌ）に、トウモロコシの実〔(株)イトウ精麦製の飼料用粉砕物より、通常混合される魚粉を省いたもの〕又は押麦〔豊橋糧食工業(株)〕と広葉樹鋸屑〔（有）トモエ物産〕を乾物重量比で２：１に混合し、培養基の水分が最終的に６０％になるように水を加えて十分にかくはん・混合したものを比較例３で８５０ｍｌビンに詰めた分と同重量を容器の半分程度まで詰めた後、直径約１ｃｍ程度の穴を３個所開け、打栓して１１８℃で６０分間高圧蒸気殺菌を行い、放冷したものを固形培養基として調製した。
【０１００】
この固形培養基に比較例３記載の液体種菌を約５０ｍｌ接種し、暗所にて温度２３℃、湿度６０〜７０％の条件下で７７日間菌糸を培養し、培地全体に菌糸をまん延させた。次いで栓を外しビン口をオートクレーブ滅菌した赤玉土で覆土した後、温度１５℃、加湿をヒューミアイ１００〔(株)鷺宮製作所製〕の表示値で１１５〜１２０％となるように制御した発生室に移動し、５０〜５００ルクスの照明下、子実体原基が生じるまでは水濡れを防ぐためビン口を波板で被覆し、子実体原基形成後は波板を取去り、発生室移動後２８日間培養を続け、成熟子実体を得た。トウモロコシ培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は７４．１ｇ、押麦培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は１４５．１ｇであり、収量は押麦培地の方が優れていた。発生室移動後の所要日数は同程度であった。
【産業上の利用可能性】
【０１０１】
本発明の選抜方法によれば、より安価な培地原料を用いた培養基で良好な子実体が、より短い発生室移動後の所要日数で収穫可能なホンシメジ菌株を選抜することが出来、ホンシメジの商業的人工栽培が可能になる。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ホンシメジ（Lyophyllum shimeji）の菌株及び人工栽培方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ホンシメジは10月中ごろにコナラ林又はコナラ・アカマツ混生林の地上に発生するきのこであり、「香りマツタケ味シメジ」と称されているように、マツタケと並んで我国の食用きのこの中で最高級きのことされている。
【０００３】
近年、エノキタケ、ヒラタケ、ナメコ、ブナシメジ、マイタケ等の食用きのこは主としてオガクズと米糠・フスマなどの栄養源を混合した培養基を用いて栽培を行う人工栽培方法が確立され、１年を通じて季節に関わり無く安定してきのこが収穫できるようになっている。
【０００４】
ホンシメジも極めて美味なきのこであるため人工栽培方法の確立が望まれているが、前述のエノキタケ等が木材腐朽菌であるのに対し、ホンシメジは菌根菌であるため人工栽培は困難であるとされていた。
【０００５】
このホンシメジの人工栽培についても一部で検討されており、例えば特許文献１では麦類を用いたホンシメジの人工栽培方法が開示されており、同発明者らは非特許文献１で麦類を用いた培地でのホンシメジ子実体の発生実験について報告している。
【０００６】
また特許文献２ではピートモスを基材とし、デンプン等を添加した培養基による菌根菌の菌糸培養方法が開示されており、同発明者らは非特許文献２でピートモスを基材とし、デンプン等を添加した培養基でのホンシメジの子実体発生実験を報告している。
【０００７】
しかし特許文献１の発明者らの方法では培地に使用する麦類が高価なため培地コストが高くなる。また特許文献２記載の方法では発生した子実体の収量が低く、いまだ商業生産レベルには至っていない。
【特許文献１】特公平８−４４２７号公報
【特許文献２】特開平６−１５３６９５号公報
【非特許文献１】日本菌学会報、第３９巻、第１３〜２０頁（１９９８）
【非特許文献２】日本菌学会報、第３５巻、第１９２〜１９５頁（１９９４）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明の目的は上記の現状にかんがみ、安価な培地原料を用いた培養基で良好な子実体形成能を有し、更に発生室移動後の所要日数を短縮できる商業的人工栽培を可能とするホンシメジ菌株を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
きのこは一般に、同じ種に属する菌株でありながら、採集された場所の違いにより菌糸の生育及び子実体形成能が著しく異なることが知られている。ホンシメジについても、大麦と鋸屑を用いた培地で、菌株によって子実体発生量が大きく異なることが日本菌学会報、第３９巻、第１３〜２０頁（１９９８）に報告されている。本発明者らは、安価なキビ亜科植物を用いた培地に適合する菌株が、必ず存在するはずであるとの考えに立ち、各地よりホンシメジの菌株の収集を行い鋭意検討した結果、キビ亜科植物の実類を含有する培養基で良好な子実体形成能を有するホンシメジ菌株を見出し、更にこれらの菌株をキビ亜科植物の実類を含有する培養基で栽培することにより、麦類を用いた培養基で栽培した場合よりも発生室への移動から収穫までの日数を短縮できることを見出し、本発明を完成した。
【００１０】
本発明を概説すれば、本発明の第１の発明はホンシメジの菌株に関し、キビ亜科植物の実類を含有する培養基で良好な子実体形成をする菌株であることを特徴とする。本発明の第２の発明はホンシメジの人工栽培方法に関し、上記第１発明の菌株を用いることを特徴とする。本発明の第３の発明はホンシメジの人工栽培方法に関し、前記第１の発明の菌株を、キビ亜科植物の実類を含有する培養基を用いて栽培することを特徴とする。
【００１１】
即ち、本発明は
〔１〕 Lyophyllum shimeji Ｌａ ０１−２０（ＦＥＲＭ Ｐ−１６８４１）、Lyophyllum shimeji Ｌａ ０１−２７（ＦＥＲＭ Ｐ−１７４５５）、及びLyophyllum shimeji Ｌａ ０１−４５（ＦＥＲＭ Ｐ−１７４５７）からなる群より選ばれる菌株の変異株であるホンシメジ菌株であって、押麦と広葉樹鋸屑を乾物重量比で２：１で含有する培養基と比べて、トウモロコシの実と広葉樹鋸屑を乾物重量比で２：１で含有する培養基で良好な子実体形成能を有するホンシメジ菌株、
〔２〕 前記〔１〕記載のホンシメジ菌株を液体培地に接種し、培養することにより得られるホンシメジの人工栽培用液体種菌、
〔３〕 前記〔１〕記載のホンシメジ菌株をトウモロコシの実を含有する固形培養基に接種し、培養することにより得られるホンシメジの人工栽培用培養基、
〔４〕 前記〔１〕記載の菌株をトウモロコシの実を含有する培養基で培養することを特徴とするホンシメジの人工栽培方法、及び
〔５〕 前記〔１〕記載の菌株をトウモロコシの実を含有する培養基で培養することを特徴とするホンシメジの生産方法
に関する。
【発明の効果】
【００１２】
本発明により、安価な培地原料を用いた培養基で良好な子実体が、より短い発生室移動後の所要日数で収穫可能なホンシメジ菌株が提供され、該菌株を用いることにより、ホンシメジの商業的人工栽培が可能になった。特にＬａ０１−２０株、Ｌａ０１−２７株、Ｌａ０１−３７株は発生室へ移動後の所要時日数も短く、商業的人工栽培に好適である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
以下、本発明を具体的に説明する。
本発明においてキビ亜科植物の実類とは、無加工のキビ亜科植物の実又はキビ亜科植物の実の加工物のことを指す。なお、本文記載のキビ亜科植物の実について説明すると、本発明においてキビ亜科植物の実とは学術的には穎果あるいは穀果と呼ばれる果実を指す。１９９６年岩波書店発行、岩波生物学辞典第４版の記載によると穎果とは、果皮が成熟後、乾燥して種子に密着する広義の痩果の一種であり、キビ亜科を含むイネ科やタケ科の植物の果実がこれに当る。
【００１４】
上記のキビ亜科植物の実の例としては、キビ、ヒエ、アワ、サトウキビ、モロコシ、コウリャン、トウモロコシ等の実が挙げられるが、本発明で使用できるキビ亜科植物の実はこれらに限定されることはなく、イネ科キビ亜科に属する植物の実であれば良い。また本発明で使用されるキビ亜科植物の実は、新鮮物であっても乾燥物であっても良い。また２種類以上のキビ亜科植物の実を併用しても良い。更に、本発明においては、キビ亜科植物の実全体を用いても、加工によって分別された実の一部分を使用しても良い。また分別された部分同士を混合しても良く、実全体のものと分別された部分を混合して使用しても良い。
【００１５】
キビ亜科植物の実の加工物としては、キビ亜科植物の実を粉砕したものや粉砕した上で篩分けして粒度調整したもの、あるいは顆粒状やペレット状に成型したもの等が挙げられるが、本発明ではキビ亜科植物の実の加工方法や加工物の形状、粒度等は問わず使用でき、また２種類以上の加工物を併用しても良く、実全体のものと加工物とを併用してもよい。
【００１６】
本発明におけるキビ亜科植物の実類の具体例について、トウモロコシの場合で説明する。トウモロコシの実は尖帽、表皮、胚乳及び胚芽からなり、胚乳は更に角質グルテン質部、角質デンプン質部、粉状質部と呼ばれる部分からなる。本発明ではトウモロコシの実の全体（全粒）でもこれらの一部分だけでも用いることができる。また部分に分けたものを混合して使用しても良い。トウモロコシの実の加工の一例としてドライミリングによる加工について説明するが、本発明で適用される加工方法はこれに限定されるものではない。トウモロコシの実のドライミリングによる加工では、まず精選工程で夾雑物を除去し、次に胚芽を分離しやすくする目的で吸水させる調質を行う。次いで脱胚芽機にかけて胚芽を除去し、ロールミルで粉砕したものを粒度別に篩分けしたのち乾燥することにより、主として角質部からなるコーングリッツと、主として粉状質部からなるコーンフラワーが得られる。これらは篩分けの段階で数段階の粒度に分別される。またドライミリングにおける副産物としては、脱胚芽により除去された胚芽及びこれを乾燥させたドライコーンジャームや表皮の部分からなるコーンファイバー、主として表皮と胚乳の間にあるアリューロン層（糊粉層）と表皮からなるコーンブラン（コーン糠）、更にこれら副産物をすべて合せたホミニーフィードがある。本発明では上記の加工によって得られた産物や副産物のいずれも使用することができ、またこれらを混合して使用しても良い。
【００１７】
以上、本発明のキビ亜科植物の実類についてトウモロコシを例として説明したが、本発明はこの例に限定されるものではない。
【００１８】
次に、菌株の選抜方法について説明する。
【００１９】
１／２ＰＧＹ液体培地（組成：グルコース１．０％、ペプトン０．１％、酵母エキス０．１％、ＫＨ2ＰＯ4 ０．０２５％、ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ０．０２５％）２００ｍｌにホンシメジ各菌株を接種し、２５℃で７〜１４日間、好ましくは１０日間培養し、液体種菌とする。
【００２０】
一方、固形培養基としてキビ亜科植物の実類、好ましくはトウモロコシの実と広葉樹鋸屑を乾物重量比で１：２〜３：１、好ましくは２：１に混合し、培養基の水分が最終的に５５〜６５％、好ましくは６０％になるように水を加えて十分にかくはん・混合したもの、及び押麦と広葉樹鋸屑を乾物重量比で１：２〜３：１、好ましくは２：１（ただし、前記トウモロコシ培地と比率を合せること）に混合し、培養基の水分が最終的に５５〜６５％、好ましくは６０％（ただし、前記トウモロコシ培地と比率を合せること）になるように水を加えて十分にかくはん・混合したものの２種類を調製し、それぞれ４００〜２３００ｍｌ容、好ましくは８５０ｍｌ容又は２３００ｍｌ容のポリプロピレン製の広口培養ビンに詰める。８５０ｍｌビンの場合はビン全体に圧詰めしたのち中央に直径３ｃｍ程度の穴を開け、２３００ｍｌビンの場合は８５０ｍｌビンに詰める分と同重量の培養基を容器の半分程度まで詰めたのち直径約１ｃｍの穴を３個所開ける。容器に打栓したあと、１０１〜１２５℃で３０〜９０分、好ましくは１１８℃で６０分間高圧蒸気殺菌を行い、放冷する。
【００２１】
この固形培養基に上記の液体種菌を８５０ｍｌビンの場合は５〜３０ｍｌ、好ましくは約１５ｍｌ、２３００ｍｌの場合は１０〜１００ｍｌ、好ましくは約５０ｍｌ接種し、暗所にて温度２０〜２５℃、好ましくは２３℃、湿度４０〜７０％、好ましくは６０〜７０％の条件下、６０〜１５０日間、好ましくは１００日間前後菌糸を培養し、培地全体に菌糸をまん延させる。次いで栓を外し、そのままでも良いが、好ましくは菌床面を適当な覆土材、更に好ましくはオートクレーブ滅菌した赤玉土で約２ｃｍ覆土した後、温度１０〜２０℃、好ましくは１５℃、加湿をヒューミアイ１００〔(株)鷺宮製作所製〕の表示値で９０〜１２０％、好ましくは１１５〜１２０％となるように制御した発生室に移動し、１０〜１０００ルクス、好ましくは５０〜５００ルクスの照明下、子実体原基が生じるまでは水濡れを防ぐためビン口を波板で被覆し、子実体原基形成後は波板を取去り、成熟子実体が得られるまで培養を続け、ホンシメジの各菌株における子実体収量、発生室へ移動後の所要日数について調べることによりキビ亜科植物の実類を含有する培養基において、良好な子実体形成能を有するホンシメジ菌株を得ることができる。このようにして得られた結果を表１に示す。
【００２２】
【表１】
【００２３】
表１から明らかなように、供試した菌のうち大部分は押麦培地では発生しないか子実体収量が不十分であるが、Ｌａ ０１−２０、Ｌａ ０１−２７、Ｌａ ０１−３７、Ｌａ ０１−４５、Ｌａ ０１−４６については、安価なトウモロコシ培地で高収量を得ており、キビ亜科植物の実類を含有する培地に適合した優良な品種と言える。なお、日本菌学会報、第３９巻、第１３〜２０頁（１９９８）記載の公知菌株であるＹＧ６Ｌが押麦培地では高収量であるが、トウモロコシ培地では、収量がこれより減じていること、Ｌａ ０１−２６及びＬａ ０１−３８株が、押麦培地のみで発生していることから、トウモロコシ培地への菌株適合性は、押麦培地での栽培試験結果のみからは類推し得ない。
【００２４】
表１で示したホンシメジ菌株のうち、野生から採集したものの採集時の子実体及び胞子、また、発生した各菌株の子実体及び胞子の形態的特徴は以下の通りである。
傘は直径２〜７ｃｍではじめ半球形〜まんじゅう型、後に開いて平らになる。傘表面は初め暗色、次第にねずみ色〜淡灰褐色となり、縁部は初め内側に強く巻く。肉は白色、緻密でありひだは白色〜淡クリーム色でやや垂生する。柄は白色で下方は徳利状にふくらむが生育が充分進んだ子実体ではほとんど上下同大に近くなるものも有る。胞子は球形で径４〜６μｍ。
以上の特徴を今関六也、本郷次雄編著「原色日本新菌類図鑑（Ｉ）」保育社（昭和６２年６月１０日初版発行）の記載と比較すると、これらの菌株はホンシメジであることが明瞭である。
【００２５】
これら供試菌株中、Ｌａ ０１−２０、Ｌａ ０１−２７、Ｌａ ０１−３７、Ｌａ ０１−４５、Ｌａ ０１−４６の５株は、それぞれLyophyllum shimeji Ｌａ ０１−２０、Lyophyllum shimeji Ｌａ ０１−２７、Lyophyllum shimeji Ｌａ ０１−３７、Lyophyllum shimeji Ｌａ ０１−４５、Lyophyllum shimeji Ｌａ ０１−４６と表示され、工業技術院生命工学工業技術研究所にそれぞれＦＥＲＭ Ｐ−１６８４１、ＦＥＲＭ Ｐ−１７４５５、ＦＥＲＭ Ｐ−１７４５６、ＦＥＲＭ Ｐ−１７４５７、ＦＥＲＭ Ｐ−１７４５８として寄託されている。
【００２６】
次に、ホンシメジＬａ ０１−２０株、Ｌａ ０１−２７株、Ｌａ ０１−３７株、Ｌａ ０１−４５株、Ｌａ ０１−４６株の５株の菌学的諸性質を以下に記す。
（１）ホンシメジＬａ ０１−２０株
Ａ． 麦芽エキス寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は３０ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は４６ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は６９ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。菌糸は放射状に伸長する。
Ｂ． バレイショ・ブドウ糖寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は２９ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は４４ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は７０ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。菌糸は放射状に伸長する。裏面の中心部がやや着色。
Ｃ． ツァペック・ドックス寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は８ｍｍ、白色で希薄な菌糸、気菌糸は極めて少ない。
１０日目でコロニー径は１０ｍｍ。
１７日目でコロニー径は１３ｍｍ、白色で希薄な菌糸、樹状に伸長し、気菌糸は極めて少ない。
Ｄ． サブロー寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は１１ｍｍ、白色で希薄な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は１４ｍｍ、白色で希薄な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は２３ｍｍ、周縁部は白色で希薄な菌糸、中心部はやや密でやや着色、気菌糸は少なく、コロニー形はいびつ。
Ｅ． オートミール寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は１９ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は３２ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は５９ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。菌糸は放射状に伸長する。
Ｆ． 合成ムコール寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は１７ｍｍ、白色で希薄な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は２５ｍｍ、白色で希薄な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は４２ｍｍ、白色で希薄な菌糸、気菌糸は少ない。裏面がやや着色する。
Ｇ． ＹｐＳｓ寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は８ｍｍ、白色でマット状の密な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は１０ｍｍ、白色でマット状の密な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は１７ｍｍ、白色でマット状の密な菌糸、気菌糸は少ない。
Ｈ． 砂糖酵母寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は２３ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は３５ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は５８ｍｍ、白色で中心部が密、周縁部が希薄な菌糸、気菌糸は少ない。コロニー中心部にしわを生じる。
Ｉ． フェノールオキシダーゼ検定用培地（２５℃）での生育状態
０．５％没食子酸添加バレイショ・ブドウ糖寒天培地を使用。７日目で全く生育無く、褐変域の径は１８ｍｍ。
Ｊ． 最適生育温度
ＰＧＹ寒天培地に直径６ｍｍの種菌を接種し、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５℃でそれぞれ培養して、１２日後に各コロニー径を測定したところ、最適生育温度は２５℃付近であった。また、３５℃では生育しなかった。
Ｋ． 最適生育ｐＨ
ＰＧＹ液体培地４０ｍｌを１００ｍｌ容の三角フラスコに調製し、殺菌後１規定塩酸又は１規定水酸化ナトリウム溶液で無菌的にｐＨ３．０、３．５、４．０、４．５、５．０、５．５、６．０、６．５、７．０、７．５、８．０、８．５、９．０、９．５、１０．０に調整、直径６ｍｍの種菌を接種し、１５日間静置後、各乾燥重量を測定したところ、最適生育ｐＨは５．５付近であった。また本菌株の生育範囲はｐＨ３．０〜７．５の範囲であった。
【００２７】
（２）ホンシメジＬａ ０１−２７株
Ａ． 麦芽エキス寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は３２ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は４６ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は６９ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。菌糸は放射状に伸長する。
Ｂ． バレイショ・ブドウ糖寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は２７ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は４０ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は７０ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。菌糸は放射状に伸長する。裏面の中心部にわずかにしわを生じる。
Ｃ． ツァペック・ドックス寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は７ｍｍ、白色で希薄な菌糸、気菌糸は極めて少ない。
１０日目でコロニー径は９ｍｍ。
１７日目でコロニー径は１０ｍｍ、白色で希薄な菌糸、樹状に伸長し、気菌糸は極めて少ない。
Ｄ． サブロー寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は１２ｍｍ、白色で希薄な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は１６ｍｍ、白色で希薄な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は３２ｍｍ、周縁部は白色で希薄な菌糸、中心部はやや密でやや着色、気菌糸は少ない。
Ｅ． オートミール寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は２１ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は３３ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は５５ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
Ｆ． 合成ムコール寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は２２ｍｍ、白色で希薄な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は３２ｍｍ、白色で希薄な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は５０ｍｍ、白色で希薄な菌糸、気菌糸は少ない。
Ｇ． ＹｐＳｓ寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は８ｍｍ、白色でマット状の密な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は１０ｍｍ、白色でマット状の密な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は１７ｍｍ、白色でマット状の密な菌糸、中心部やや着色。気菌糸は少ない。
Ｈ． 砂糖酵母寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は２４ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は３６ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は６２ｍｍ、白色で中心部が密、周縁部が希薄な菌糸、気菌糸は少ない。コロニー中心部にしわを生じる。
Ｉ． フェノールオキシダーゼ検定用培地（２５℃）での生育状態
０．５％没食子酸添加バレイショ・ブドウ糖寒天培地を使用。７日目で全く生育無く、褐変域の径は１２ｍｍ。
Ｊ． 最適生育温度
ＰＧＹ寒天培地に直径６ｍｍの種菌を接種し、（１）−Ｊ項記載の各温度でそれぞれ培養して、１２日後に各コロニー径を測定したところ、最適生育温度は２５℃付近であった。また、３５℃では生育しなかった。
Ｋ． 最適生育ｐＨ
ＰＧＹ液体培地４０ｍｌを１００ｍｌ容の三角フラスコに調製し、殺菌後（１）−Ｋ項と同様にｐＨを調整、直径６ｍｍの種菌を接種し、１５日間静置後、各乾燥重量を測定したところ、最適生育ｐＨは５．０付近であった。また本菌株の生育範囲はｐＨ３．０〜８．０の範囲であった。
【００２８】
（３）ホンシメジＬａ ０１−３７株
Ａ． 麦芽エキス寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は２８ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は４０ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は６７ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。菌糸は放射状に伸長する。
Ｂ． バレイショ・ブドウ糖寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は２８ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目コロニー径は４０ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は６６ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。菌糸は放射状に伸長する。
Ｃ．ツァペック・ドックス寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は８ｍｍ、白色で希薄な菌糸、気菌糸は極めて少ない。
１０日目でコロニー径は１０ｍｍ。
１７日目でコロニー径は１３ｍｍ、白色で希薄な菌糸、樹状に伸長し、気菌糸は極めて少ない。
Ｄ． サブロー寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は１９ｍｍ、白色で希薄な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は２７ｍｍ、白色で希薄な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は４０ｍｍ、周縁部は白色で希薄な菌糸、中心部はやや密で着色、気菌糸は少ない。
Ｅ． オートミール寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は２０ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は２９ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は５４ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
Ｆ． 合成ムコール寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は２０ｍｍ、白色で希薄な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は２５ｍｍ、白色で希薄な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は４２ｍｍ、白色で希薄な菌糸、気菌糸は少ない。
Ｇ． ＹｐＳｓ寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は１０ｍｍ、白色でマット状の密な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は１２ｍｍ、白色でマット状の密な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は２１ｍｍ、白色でマット状の密な菌糸、中心部やや着色。気菌糸は少ない。
Ｈ． 砂糖酵母寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は２２ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は３１ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は５６ｍｍ、白色で中心部が密、周縁部が希薄な菌糸、気菌糸は少ない。コロニー中心部にしわを生じる。
Ｉ．フェノールオキシダーゼ検定用培地（２５℃）での生育状態
０．５％没食子酸添加バレイショ・ブドウ糖寒天培地を使用。７日目で全く生育無く、褐変域の径は１２ｍｍ。
Ｊ． 最適生育温度
ＰＧＹ寒天培地に直径６ｍｍの種菌を接種し、（１）−Ｊ項記載の各温度でそれぞれ培養して、１２日後に各コロニー径を測定したところ、最適生育温度は２５℃付近であった。また、３５℃では生育しなかった。
Ｋ． 最適生育ｐＨ
ＰＧＹ液体培地４０ｍｌを１００ｍｌ容の三角フラスコに調製し、殺菌後（１）−Ｋ項と同様にｐＨを調整、直径６ｍｍの種菌を接種し、１５日間静置後、各乾燥重量を測定したところ、最適生育ｐＨは５．５付近であった。また本菌株の生育範囲はｐＨ３．０〜８．０の範囲であった。
【００２９】
（４）ホンシメジＬａ ０１−４５株
Ａ． 麦芽エキス寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は２７ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は４０ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は６９ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。菌糸は放射状に伸長する。
Ｂ． バレイショ・ブドウ糖寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は２４ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は３６ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は６６ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。菌糸は放射状に伸長する。裏面の中心部がやや着色。
Ｃ． ツァペック・ドックス寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は８ｍｍ、白色で希薄な菌糸、気菌糸は極めて少ない。
１０日目でコロニー径は１０ｍｍ。
１７日目でコロニー径は１２ｍｍ、白色で希薄な菌糸、樹状に伸長し、気菌糸は極めて少ない。
Ｄ． サブロー寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は１８ｍｍ、白色で希薄な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は２４ｍｍ、白色で希薄な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は３８ｍｍ、周縁部は白色で希薄な菌糸、中心部は密でやや着色、いびつなコロニーで、気菌糸は少ない。
Ｅ． オートミール寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は１４ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は３０ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は５７ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
Ｆ． 合成ムコール寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は１４ｍｍ、白色で希薄な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は２０ｍｍ、白色で希薄な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は３３ｍｍ、白色で希薄な菌糸、中央部の菌糸は密、気菌糸は少ない。裏面中心部がやや着色。
Ｇ． ＹｐＳｓ寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は１１ｍｍ、白色でマット状の密な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は１６ｍｍ、白色でマット状の密な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は３６ｍｍ、白色でマット状の密な菌糸、気菌糸は少ない。
Ｈ． 砂糖酵母寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は２５ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は３５ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は６３ｍｍ、白色で中心部が密、周縁部が希薄な菌糸、気菌糸は少ない。コロニー中心部にしわを生じる。
Ｉ． フェノールオキシダーゼ検定用培地（２５℃）での生育状態
０．５％没食子酸添加バレイショ・ブドウ糖寒天培地を使用。７日目で全く生育無く褐変域は径２２ｍｍ。
Ｊ． 最適生育温度
ＰＧＹ寒天培地に直径６ｍｍの種菌を接種し、（１）−Ｊ項記載の各温度でそれぞれ培養して、１２日後に各コロニー径を測定したところ、最適生育温度は２５℃付近であった。また、３５℃では生育しなかった。
Ｋ． 最適生育ｐＨ
ＰＧＹ液体培地４０ｍｌを１００ｍｌ容の三角フラスコに調製し、殺菌後（１）−Ｋ項と同様にｐＨを調整、直径６ｍｍの種菌を接種し、１５日間静置後、各乾燥重量を測定したところ、最適生育ｐＨは５．５付近であった。また本菌株の生育範囲はｐＨ３．５〜７．０の範囲であった。
【００３０】
（５）ホンシメジＬａ ０１−４６株
Ａ． 麦芽エキス寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は２９ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は４１ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は５６ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。菌糸は放射状に伸長する。
Ｂ． バレイショ・ブドウ糖寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は２７ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は４０ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は５４ｍｍ、白色で密な菌糸、表面、裏面とも中心部やや着色、気菌糸は少ない。菌糸は放射状に伸長する。
Ｃ． ツァペック・ドックス寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は８ｍｍ、白色で希薄な菌糸、気菌糸は極めて少ない。
１０日目でコロニー径は１１ｍｍ。
１７日目でコロニー径は１２ｍｍ、白色で希薄な菌糸、樹状に伸長し、気菌糸は極めて少ない。
Ｄ． サブロー寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は１７ｍｍ、白色で希薄な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は２５ｍｍ、白色で希薄な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は３６ｍｍ、周縁部は白色で希薄な菌糸、中心部はやや密でやや着色、気菌糸は少ない。
Ｅ． オートミール寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は１７ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は３１ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は４７ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。菌糸は放射状に伸長する。
Ｆ． 合成ムコール寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は２１ｍｍ、白色で希薄な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は２８ｍｍ、白色で希薄な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は３６ｍｍ、白色で希薄な菌糸、気菌糸は少ない。
Ｇ． ＹｐＳｓ寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は８ｍｍ、白色でマット状の密な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は１１ｍｍ、白色でマット状の密な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は１６ｍｍ、白色でマット状の密な菌糸、気菌糸は少ない。
Ｈ． 砂糖酵母寒天培地（２５℃）での生育状態
７日目でコロニー径は２３ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１０日目でコロニー径は３２ｍｍ、白色で密な菌糸、気菌糸は少ない。
１７日目でコロニー径は４４ｍｍ、白色で中心部が密、周縁部が希薄な菌糸、気菌糸は少ない。コロニー中心部にしわを生じる。
Ｉ． フェノールオキシダーゼ検定用培地（２５℃）での生育状態
０．５％没食子酸添加バレイショ・ブドウ糖寒天培地を使用。７日目で全く生育無く、褐変域は径１８ｍｍ。
Ｊ． 最適生育温度
ＰＧＹ寒天培地に直径６ｍｍの種菌を接種し、（１）−Ｊ項記載の各温度でそれぞれ培養して、１２日後に各コロニー径を測定したところ、最適生育温 度は２５℃付近であった。また、３５℃では生育しなかった。
Ｋ． 最適生育ｐＨ
ＰＧＹ液体培地４０ｍｌを１００ｍｌ容の三角フラスコに調製し、殺菌後（１）−Ｋ項と同様にｐＨを調整、直径６ｍｍの種菌を接種し、１５日間静置後、各乾燥重量を測定したところ、最適生育ｐＨは５．０付近であった。また本菌株の生育範囲はｐＨ３．０〜７．５の範囲であった。
【００３１】
更にホンシメジＬａ ０１−２０、Ｌａ ０１−２７、Ｌａ ０１−３７、Ｌａ ０１−４５、Ｌａ ０１−４６株と他のホンシメジ菌株との異同について、寒天培地上で対峙培養を行うことにより調べることができる。供試菌株の菌糸をＰＧＹ寒天培地より３ｍｍ×３ｍｍ×３ｍｍのブロックとして切り出し、ＰＧＹ寒天平板培地の中央部に２ｃｍ間隔で対峙して接種し、２５℃、１５日間培養後、両コロニーの境界部に帯線が生じるか否かを判定する。このようにしてホンシメジ菌株２０株を供試して得られた結果を、帯線が生じた場合を＋、生じなかった場合を−として表２に示す。なお、ここで、帯線には着色していない拮抗状態のものも含む。
【００３２】
【表２】
【００３３】
表２に示したように、ホンシメジＬａ ０１−２０、Ｌａ ０１−２７、Ｌａ ０１−３７、Ｌａ ０１−４５、Ｌａ ０１−４６株は、供試したすべての菌株と帯線を形成したことから新しい菌株であることは明白である。
【００３４】
本発明のホンシメジ菌株の栽培方法としては、ビン栽培、袋栽培、箱栽培などを適用することができる。一例としてビン栽培について述べると、その方法とは培地調製、ビン詰め、殺菌、接種、培養、芽出し、生育、収穫の各工程からなる。
【００３５】
次にこれらを具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００３６】
培地調製とは人工栽培に用いる各種基材を計量、かくはんし、加水して水分調整する工程をいう。本発明で用いられるホンシメジの人工栽培用培養基は、キビ亜科植物の実類、鋸屑、及びその他栄養剤の組合せからなる。キビ亜科植物の実類とその他の培地基材の混合比率は、例としてトウモロコシの実の場合で説明すると、トウモロコシの実がその他の基材に対して乾燥重量比で１重量部以上が好ましいが、本発明はこの比率に限定されるものではない。本発明における培地調製をトウモロコシの実で説明したが、本発明はこれに限定されるもではなくキビ亜科植物であればいずれも使用できる。
【００３７】
ビン詰めとは、培養基をビンに詰める工程であり、通常４００〜２３００ｍｌ容の耐熱性広口培養ビンに、調製した培養基を例えば８５０ｍｌビンの場合は５００〜８００ｇ、好ましくは６００〜７５０ｇ圧詰し、中央に１〜３ｃｍ程度の穴を１ないし複数個開け打栓する工程をいう。
【００３８】
殺菌とは、蒸気により培養基中のすべての微生物を死滅させる工程であれば良く、通常常圧殺菌では９８〜１００℃、４〜１２時間、高圧殺菌では１０１〜１２５℃、好ましくは１１８℃、３０〜９０分間行われる。
【００３９】
接種とは、殺菌後放冷された培地に種菌を植え付ける工程であり、通常種菌としてはホンシメジ菌糸をＰＧＹ液体培地、１／２ＰＧＹ液体培地などで２５℃、１０〜１５日間培養したものを用い、１ビン当り約１０〜５０ｍｌ無菌的に植え付ける。また、ここまで説明した工程で得られる液体種菌接種済みの培養基を２５℃で６０〜１５０日間培養し、菌廻りしたものも固体種菌として用いることができ、１ビン当り１５ｇほど無菌的に植え付ける。
【００４０】
培養とは、菌糸を生育、熟成させる工程で、通常接種済みの培養基を温度２０〜２５℃、湿度４０〜７０％において菌糸をまん延させ、更に熟成させる。熟成は省くこともできる。培養工程は、８５０ｍｌビンの場合は通常６０〜１５０日間、好ましくは１００日間前後行われる。
【００４１】
芽出しとは、培養工程を終了した後に栓を外し、子実体原基を形成させる工程で、通常１０〜２０℃、好ましくは１５℃前後、湿度８０％以上、照度１０００ルクス以下で１０〜２０日間行う。この際、菌床面に適当な素材で覆土を施しても良い。覆土素材の例としては、赤玉土、鹿沼土、バーミキュライト、石英、パーライト、ガラスビーズ等の無機鉱物質や畑土、森林土壌、山土等の土壌類が挙げられ、これらは微細粒子であることがより好ましいが、本発明は覆土材の粒径に限定されることはない。あるいは日向土、熱処理して硬質化した赤玉土などの多孔性無機鉱物質や腐葉土、バーク堆肥、ピートモス等の腐植性素材、あるいは針葉樹鋸屑、広葉樹鋸屑、コーンコブ、セルロースパルプ、セルローススポンジ、籾殻、稲ワラ、ミズゴケ等の植物性素材、寒天製造時に副生する寒天残渣等も覆土材の例として挙げられる。これらの覆土材は単独で使用しても良く、また２種類以上を混合して使用しても良い。更に、覆土材をあらかじめ適当な含水率になるように吸水させておいてから使用しても良い。
【００４２】
また栓を外した後、種菌部分と培養基表面をかき取る菌かき操作を行っても良い。更に、栓を外した後又は菌かき後、直ちにビン口まで水を入れて培養基に給水し、３〜５時間後余剰の水を排水する加水操作を加えても良い。また、芽出し工程中は加湿で結露水が発生しやすいため、濡れを防ぐ目的で菌床面を有孔ポリシートや波板等で覆っても良い。
【００４３】
生育とは、子実体原基から成熟子実体を形成させる工程で、通常芽出し工程とほぼ同じ条件で５〜１５日間行う。生育工程では結露水による濡れの影響を受けにくいので、有孔ポリシートや波板等の被覆は施さないほうが好ましい。
【００４４】
以上の工程により成熟子実体を得ることができ、収穫を行って栽培の全工程を終了する。
【００４５】
以上、本発明をビン栽培方法により説明したが、本発明は上記ビン栽培に限定されるものではない。
【００４６】
本発明によって安価な培地原料を用いた培養基で収量性及び形状の良好なホンシメジを商業的に人工栽培することが可能である。本発明に使用する好適なホンシメジ菌株の例としては、ホンシメジＬａ ０１−２０株、ホンシメジＬａ ０１−２７株、ホンシメジＬａ ０１−３７株、ホンシメジＬａ ０１−４５株、ホンシメジＬａ ０１−４６株、これらの変異株、及びこれらの菌株を親株とする菌株と対峙培養によって帯線を形成しない菌株が挙げられるが、本発明はこれらの菌株に限定されるものではなく、これらの菌株と対峙培養によって帯線を形成する菌株であっても、キビ亜科植物の実類を含有する培養基で良好な子実体形成能を有するホンシメジ菌株で自然界からの選抜・分離された菌株や、交配、変異誘導、プロトプラスト処理、細胞融合、遺伝子操作などによって育種され、人工栽培に用いることが可能なホンシメジ菌株であればいずれも本発明に含まれる。
【００４７】
また、本発明によりこれらの菌株をキビ亜科植物の実類を含有する培養基で栽培することにより、麦類を用いた培養基で栽培した場合よりも発生室への移動から収穫までの日数を短縮することが可能となる。
【実施例】
【００４８】
以下に、本発明を実施例により更に具体的に説明するが、本発明は以下の実施例の範囲のみに限定されるものではない。
【００４９】
実施例１
１／２ＰＧＹ液体培地（組成：グルコース１．０％、ペプトン０．１％、酵母エキス０．１％、ＫＨ2ＰＯ4０．０２５％、ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ０．０２５％）２００ｍｌにホンシメジＬａ ０１−２０株の菌糸を接種し、２５℃で１０日間培養し、液体種菌とした。
【００５０】
一方、ポリプロピレン製の広口培養ビン（８５０ｍｌ）に、トウモロコシの実〔(株)イトウ精麦製の飼料用粉砕物より、通常混合される魚粉を省いたもの〕又は押麦〔豊橋糧食工業(株)〕と広葉樹鋸屑〔（有）トモエ物産〕を乾物重量比で２：１に混合し培養基の水分が最終的に６０％になるように水を加えて十分にかくはん・混合したものを圧詰し、中央に直径３ｃｍ程度の穴を開けたのち打栓し、１１８℃で６０分間高圧蒸気殺菌を行い、放冷したものを固形培養基として調製した。
【００５１】
この固形培養基に上記の液体種菌を約１５ｍｌ接種し、暗所にて温度２３℃、湿度６０〜７０％の条件下で１０８日間菌糸を培養し、培地全体に菌糸をまん延させた。次いで栓を外しビン口をオートクレーブ滅菌した赤玉土で覆土した後、温度１５℃、加湿をヒューミアイ１００〔(株)鷺宮製作所製〕の表示値で１１５〜１２０％となるように制御した発生室に移動し、５０〜５００ルクスの照明下、子実体原基が生じるまでは水濡れを防ぐためビン口を波板で被覆し、子実体原基形成後は波板を取去り、発生室移動後トウモロコシ培地は２６日間、押麦培地は２７日間培養を続け、成熟子実体を得た。トウモロコシ培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は１２３．０g、押麦培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は８３．８gであり、収量、発生室移動後の所要日数ともトウモロコシ培地の方が優れていた。
【００５２】
実施例２
ポリプロピレン製の広口培養ビン（２３００ｍｌ）に、トウモロコシの実〔(株)イトウ精麦製の飼料用粉砕物より、通常混合される魚粉を省いたもの〕又は押麦〔豊橋糧食工業(株)〕と広葉樹鋸屑〔（有）トモエ物産〕を乾物重量比で２：１に混合し、培養基の水分が最終的に６０％になるように水を加えて十分にかくはん・混合したものを実施例１で８５０ｍｌビンに詰めた分と同重量を容器の半分程度まで詰めた後、直径約１ｃｍ程度の穴を３個所開け、打栓して１１８℃で６０分間高圧蒸気殺菌を行い、放冷したものを固形培養基として調製した。
【００５３】
この固形培養基に実施例１記載の液体種菌を約５０ｍｌ接種し、暗所にて温度２３℃、湿度６０〜７０％の条件下で８１日間菌糸を培養し、培地全体に菌糸をまん延させた。次いで栓を外しビン口をオートクレーブ滅菌した赤玉土で覆土した後、温度１５℃、加湿をヒューミアイ１００〔(株)鷺宮製作所製〕の表示値で１１５〜１２０％となるように制御した発生室に移動し、５０〜５００ルクスの照明下、子実体原基が生じるまでは水濡れを防ぐためビン口を波板で被覆し、子実体原基形成後は波板を取去り、発生室移動後トウモロコシ培地は２６日間、押麦培地は２９日間培養を続け、成熟子実体を得た。トウモロコシ培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は１５３．０g、押麦培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は９８．５gであり、収量、発生室移動後の所要日数ともトウモロコシ培地の方が優れていた。
【００５４】
実施例３
ポリプロピレン製の広口培養ビン（８００ｍｌナメコ用）に、トウモロコシの実〔(株)イトウ精麦の飼料用粉砕物より、通常混合される魚粉を省いたもの〕又は押麦〔豊橋糧食工業（株）〕と広葉樹鋸屑〔（有）トモエ物産〕を乾物重量比で２：１に混合し、培養基の水分が最終的に６０％になるように水を加えて十分にかくはん・混合したものをビン容積の約半量程度詰めた後、中央に直径１．５ｃｍ程度の穴を開けたのち打栓し、１１８℃で６０分間高圧蒸気殺菌を行い、放冷したものを固形培養基として調製した。
【００５５】
この固形培養基に実施例１に記載の液体種菌を約２０ｍｌ接種し、暗所にて温度２３℃、湿度６０〜７０％の条件下で６３日間菌糸を培養し、培地全体に菌糸をまん延させた。次いで栓を外しビン口をオートクレーブ滅菌した赤玉土で覆土した後、温度１５℃、加湿をヒューミアイ１００〔(株)鷺宮製作所製〕の表示値で１１５〜１２０％となるように制御した発生室に移動し、５０〜５００ルクスの照明下、子実体原基が生じるまでは水濡れを防ぐためビン口を波板で被覆し、子実体原基形成後は波板を取去り、発生室移動後トウモロコシ培地、押麦培地とも２９日間培養を続け、成熟子実体を得た。トウモロコシ培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は１０５．３ｇ、押麦培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は８２．５ｇであり、収量においてトウモロコシ培地の方が優れていた。
【００５６】
実施例４
ポリプロピレン製の広口培養ビン（８００ｍｌナメコ用）に、加熱圧片とうもろこし〔(株)イトウ精麦〕又は押麦〔豊橋糧食工業（株）〕と広葉樹鋸屑〔（有）トモエ物産〕を乾物重量比で２：１に混合し、培養基の水分が最終的に６０％になるように水を加えて十分にかくはん・混合したものをビン容積の約半量程度詰めた後、中央に直径１．５ｃｍ程度の穴を開けたのち打栓し、１１８℃で６０分間高圧蒸気殺菌を行い、放冷したものを固形培養基として調製した。
【００５７】
この固形培養基に実施例１に記載の液体種菌を約２０ｍｌ接種し、暗所にて温度２３℃、湿度６０〜７０％の条件下で６３日間菌糸を培養し、培地全体に菌糸をまん延させた。次いで栓を外しビン口をオートクレーブ滅菌した赤玉土で覆土した後、温度１５℃、加湿をヒューミアイ１００〔(株)鷺宮製作所製〕の表示値で１１５〜１２０％となるように制御した発生室に移動し、５０〜５００ルクスの照明下、子実体原基が生じるまでは水濡れを防ぐためビン口を波板で被覆し、子実体原基形成後は波板を取去り、発生室移動後加熱圧片とうもろこし培地、押麦培地ともに２９日間培養を続け、成熟子実体を得た。加熱圧片とうもろこし培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は８７．５g、押麦培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は８２．５ｇであり、収量において加熱圧片とうもろこし培地の方が優れていた。
【００５８】
実施例５
１／２ＰＧＹ液体培地（組成：グルコース１．０％、ペプトン０．１％、酵母エキス０．１％、ＫＨ2ＰＯ4０．０２５％、ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ０．０２５％）２００ｍｌにホンシメジＬａ ０１−２７株の菌糸を接種し、２５℃で１０日間培養し、液体種菌とした。
【００５９】
一方、ポリプロピレン製の広口培養ビン（８５０ｍｌ）に、トウモロコシの実〔(株)イトウ精麦製の飼料用粉砕物より、通常混合される魚粉を省いたもの〕又は押麦〔豊橋糧食工業(株)〕と広葉樹鋸屑〔（有）トモエ物産〕を乾物重量比で２：１に混合し培養基の水分が最終的に６０％になるように水を加えて十分にかくはん・混合したものを圧詰し、中央に直径３ｃｍ程度の穴を開けたのち打栓し、１１８℃で６０分間高圧蒸気殺菌を行い、放冷したものを固形培養基として調製した。
【００６０】
この固形培養基に上記の液体種菌を約１５ｍｌ接種し、暗所にて温度２３℃、湿度６０〜７０％の条件下で１０９日間菌糸を培養し、培地全体に菌糸をまん延させた。次いで栓を外しビン口をオートクレーブ滅菌した赤玉土で覆土した後、温度１５℃、加湿をヒューミアイ１００〔(株)鷺宮製作所製〕の表示値で１１５〜１２０％となるように制御した発生室に移動し、５０〜５００ルクスの照明下、子実体原基が生じるまでは水濡れを防ぐためビン口を波板で被覆し、子実体原基形成後は波板を取去り、発生室移動後３２日間培養を続け、成熟子実体を得た。トウモロコシ培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は８５．０gであった。押麦培地では子実体の発生は見られず、トウモロコシ培地の方が優れていた。
【００６１】
実施例６
ポリプロピレン製の広口培養ビン（２３００ｍｌ）に、トウモロコシの実〔(株)イトウ精麦製の飼料用粉砕物より、通常混合される魚粉を省いたもの〕又は押麦〔豊橋糧食工業(株)〕と広葉樹鋸屑〔（有）トモエ物産〕を乾物重量比で２：１に混合し、培養基の水分が最終的に６０％になるように水を加えて十分にかくはん・混合したものを実施例５で８５０ｍｌビンに詰めた分と同重量を容器の半分程度まで詰めた後、直径約１ｃｍ程度の穴を３個所開け、打栓して１１８℃で６０分間高圧蒸気殺菌を行い、放冷したものを固形培養基として調製した。
【００６２】
この固形培養基に実施例５記載の液体種菌を約５０ｍｌ接種し、暗所にて温度２３℃、湿度６０〜７０％の条件下で１０９日間菌糸を培養し、培地全体に菌糸をまん延させた。次いで栓を外しビン口をオートクレーブ滅菌した赤玉土で覆土した後、温度１５℃、加湿をヒューミアイ１００〔(株)鷺宮製作所製〕の表示値で１１５〜１２０％となるように制御した発生室に移動し、５０〜５００ルクスの照明下、子実体原基が生じるまでは水濡れを防ぐためビン口を波板で被覆し、子実体原基形成後は波板を取去り、発生室移動後２５日間培養を続け、成熟子実体を得た。トウモロコシ培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は１４５．５gであった。押麦培地では子実体の発生は見られず、トウモロコシ培地の方が優れていた。
【００６３】
実施例７
ポリプロピレン製の広口培養ビン（８００ｍｌナメコ用）に、トウモロコシの実〔(株)イトウ精麦〕の飼料用粉砕物より、通常混合される魚粉を省いたもの〕又は押麦〔豊橋糧食工業（株）〕と広葉樹鋸屑〔（有）トモエ物産〕を乾物重量比で２：１に混合し、培養基の水分が最終的に６０％になるように水を加えて十分にかくはん・混合したものをビン容積の約半量程度詰め、中央に直径１．５ｃｍ程度の穴を開けたのち打栓し、１１８℃で６０分間高圧蒸気殺菌を行い、放冷したものを固形培養基として調製した。
【００６４】
この固形培養基に実施例５に記載の液体種菌を約２０ｍｌ接種し、暗所にて温度２３℃、湿度６０〜７０％の条件下で１１２日間菌糸を培養し、培地全体に菌糸をまん延させた。次いで栓を外しビン口をオートクレーブ滅菌した赤玉土で覆土した後、温度１５℃、加湿をヒューミアイ１００〔(株)鷺宮製作所製〕の表示値で１１５〜１２０％となるように制御した発生室に移動し、５０〜５００ルクスの照明下、子実体原基が生じるまでは水濡れを防ぐためビン口を波板で被覆し、子実体原基形成後は波板を取去り、発生室移動後トウモロコシ培地は２０日間、押麦培地は２２日間培養を続け、成熟子実体を得た。トウモロコシ培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は９４．４g、押麦培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は６９．２ｇであり、収量、発生室移動後の所要日数ともトウモロコシ培地の方が優れていた。
【００６５】
実施例８
ポリプロピレン製の広口培養ビン（８００ｍｌナメコ用）に、加熱圧片とうもろこし〔(株)イトウ精麦〕又は押麦〔豊橋糧食工業（株）〕と広葉樹鋸屑〔（有）トモエ物産〕を乾物重量比で２：１に混合し、培養基の水分が最終的に６０％になるように水を加えて十分にかくはん・混合したものをビン容積の約半量程度詰め、中央に直径１．５ｃｍ程度の穴を開けたのち打栓し、１１８℃で６０分間高圧蒸気殺菌を行い、放冷したものを固形培養基として調製した。
【００６６】
この固形培養基に実施例５に記載の液体種菌を約２０ｍｌ接種し、暗所にて温度２３℃、湿度６０〜７０％の条件下で１１２日間菌糸を培養し、培地全体に菌糸をまん延させた。次いで栓を外しビン口をオートクレーブ滅菌した赤玉土で覆土した後、温度１５℃、加湿をヒューミアイ１００〔(株)鷺宮製作所製〕の表示値で１１５〜１２０％となるように制御した発生室に移動し、５０〜５００ルクスの照明下、子実体原基が生じるまでは水濡れを防ぐためビン口を波板で被覆し、子実体原基形成後は波板を取去り、発生室移動後加熱圧片とうもろこし培地では２１日間、押麦培地では２２日間培養を続け、成熟子実体を得た。加熱圧片とうもろこし培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は７９．３g、押麦培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は６９．２ｇであり、収量、発生室移動後の所要日数とも加熱圧片とうもろこし培地の方が優れていた。
【００６７】
実施例９
１／２ＰＧＹ液体培地（組成：グルコース１．０％、ペプトン０．１％、酵母エキス０．１％、ＫＨ2ＰＯ4０．０２５％、ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ０．０２５％）２００ｍｌにホンシメジＬａ ０１−３７株の菌糸を接種し、２５℃で１０日間培養し、液体種菌とした。
【００６８】
ポリプロピレン製の広口培養ビン（２３００ｍｌ）に、トウモロコシの実〔(株)イトウ精麦製の飼料用粉砕物より、通常混合される魚粉を省いたもの〕又は押麦〔豊橋糧食工業(株)〕と広葉樹鋸屑〔（有）トモエ物産〕を乾物重量比で２：１に混合し、培養基の水分が最終的に６０％になるように水を加えて十分にかくはん・混合したものを実施例１で８５０ｍｌビンに詰めた分と同重量を容器の半分程度まで詰めた後、直径約１ｃｍ程度の穴を３個所開け、打栓して１１８℃で６０分間高圧蒸気殺菌を行い、放冷したものを固形培養基として調製した。
【００６９】
この固形培養基に上記の液体種菌を約５０ｍｌ接種し、暗所にて温度２３℃、湿度６０〜７０％の条件下で８１日間菌糸を培養し、培地全体に菌糸をまん延させた。次いで栓を外しビン口をオートクレーブ滅菌した赤玉土で覆土した後、温度１５℃、加湿をヒューミアイ１００〔(株)鷺宮製作所製〕の表示値で１１５〜１２０％となるように制御した発生室に移動し、５０〜５００ルクスの照明下、子実体原基が生じるまでは水濡れを防ぐためビン口を波板で被覆し、子実体原基形成後は波板を取去り、発生室移動後２７日間培養を続け、成熟子実体を得た。トウモロコシ培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は９０．０gであった。押麦培地では子実体の発生は見られず、トウモロコシ培地の方が優れていた。
【００７０】
実施例１０
ポリプロピレン製の広口培養ビン（８００ｍｌナメコ用）に、トウモロコシの実〔(株)イトウ精麦の飼料用粉砕物より、通常混合される魚粉を省いたもの〕又は押麦〔豊橋糧食工業（株）〕と広葉樹鋸屑〔（有）トモエ物産〕を乾物重量比で２：１に混合し、培養基の水分が最終的に６０％になるように水を加えて十分にかくはん・混合したものをビン容積の約半量程度詰めた後、中央に直径１．５ｃｍ程度の穴を開けたのち打栓し、１１８℃で６０分間高圧蒸気殺菌を行い、放冷したものを固形培養基として調製した。
【００７１】
この固形培養基に実施例９に記載の液体種菌を約２０ｍｌ接種し、暗所にて温度２３℃、湿度６０〜７０％の条件下で１１２日間菌糸を培養し、培地全体に菌糸をまん延させた。次いで栓を外し、ビン口をオートクレーブ滅菌した赤玉土で覆土した後、温度１５℃、加湿をヒューミアイ１００〔(株)鷺宮製作所製〕の表示値で１１５〜１２０％となるように制御した発生室に移動し、５０〜５００ルクスの照明下、子実体原基が生じるまでは水濡れを防ぐためビン口を波板で被覆し、子実体原基形成後は波板を取去り、発生室移動後トウモロコシ培地は２５日間、押麦培地は２６日間培養を続け、成熟子実体を得た。トウモロコシ培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は６５．３g、押麦培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は５６．０ｇであり、収量、発生室移動後の所要日数ともトウモロコシ培地の方が優れていた。
【００７２】
実施例１１
１／２ＰＧＹ液体培地（組成：グルコース１．０％、ペプトン０．１％、酵母エキス０．１％、ＫＨ2ＰＯ4０．０２５％、ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ０．０２５％）２００ｍｌにホンシメジＬａ ０１−４５株の菌糸を接種し、２５℃で１０日間培養し、液体種菌とした。
【００７３】
一方、ポリプロピレン製の広口培養ビン（８５０ｍｌ）に、トウモロコシの実〔(株)イトウ精麦製の飼料用粉砕物より、通常混合される魚粉を省いたもの〕又は押麦〔豊橋糧食工業(株)〕と広葉樹鋸屑〔（有）トモエ物産〕を乾物重量比で２：１に混合し培養基の水分が最終的に６０％になるように水を加えて十分にかくはん・混合したものを圧詰し、中央に直径３ｃｍ程度の穴を開けたのち打栓し、１１８℃で６０分間高圧蒸気殺菌を行い、放冷したものを固形培養基として調製した。
【００７４】
この固形培養基に上記の液体種菌を約１５ｍｌ接種し、暗所にて温度２３℃、湿度６０〜７０％の条件下で１１２日間菌糸を培養し、培地全体に菌糸をまん延させた。次いで栓を外しビン口をオートクレーブ滅菌した赤玉土で覆土した後、温度１５℃、加湿をヒューミアイ１００〔(株)鷺宮製作所製〕の表示値で１１５〜１２０％となるように制御した発生室に移動し、５０〜５００ルクスの照明下、子実体原基が生じるまでは水濡れを防ぐためビン口を波板で被覆し、子実体原基形成後は波板を取去り、発生室移動後３０日間培養を続け、成熟子実体を得た。トウモロコシ培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は７９．０gであった。押麦培地では子実体の発生は見られず、収量、発生室移動後の所要日数ともトウモロコシ培地の方が優れていた。
【００７５】
実施例１２
ポリプロピレン製の広口培養ビン（２３００ｍｌ）に、トウモロコシの実〔(株)イトウ精麦製の飼料用粉砕物より、通常混合される魚粉を省いたもの〕又は押麦〔豊橋糧食工業(株)〕と広葉樹鋸屑〔（有）トモエ物産〕を乾物重量比で２：１に混合し、培養基の水分が最終的に６０％になるように水を加えて十分にかくはん・混合したものを実施例１で８５０ｍｌビンに詰めた分と同重量を容器の半分程度まで詰めた後、直径約１ｃｍ程度の穴を３個所開け、打栓して１１８℃で６０分間高圧蒸気殺菌を行い、放冷したものを固形培養基として調製した。
【００７６】
この固形培養基に実施例１１記載の液体種菌を約５０ｍｌ接種し、暗所にて温度２３℃、湿度６０〜７０％の条件下で８４日間菌糸を培養し、培地全体に菌糸をまん延させた。次いで栓を外しビン口をオートクレーブ滅菌した赤玉土で覆土した後、温度１５℃、加湿をヒューミアイ１００〔(株)鷺宮製作所製〕の表示値で１１５〜１２０％となるように制御した発生室に移動し、５０〜５００ルクスの照明下、子実体原基が生じるまでは水濡れを防ぐためビン口を波板で被覆し、子実体原基形成後は波板を取去り、発生室移動後トウモロコシ培地では３３日間、押麦培地では３９日間培養を続け、成熟子実体を得た。トウモロコシ培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は１１２．０g、押麦培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は４４．０ｇであり、収量、発生室移動後の所要日数ともトウモロコシ培地の方が優れていた。
【００７７】
実施例１３
１／２ＰＧＹ液体培地（組成：グルコース１．０％、ペプトン０．１％、酵母エキス０．１％、ＫＨ2ＰＯ4０．０２５％、ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ０．０２５％）２００ｍｌにホンシメジＬａ ０１−４６株の菌糸を接種し、２５℃で１０日間培養し、液体種菌とした。
【００７８】
一方、ポリプロピレン製の広口培養ビン（８５０ｍｌ）に、トウモロコシの実〔(株)イトウ精麦製の飼料用粉砕物より、通常混合される魚粉を省いたもの〕又は押麦〔豊橋糧食工業(株)〕と広葉樹鋸屑〔（有）トモエ物産〕を乾物重量比で２：１に混合し培養基の水分が最終的に６０％になるように水を加えて十分にかくはん・混合したものを圧詰し、中央に直径３ｃｍ程度の穴を開けたのち打栓し、１１８℃で６０分間高圧蒸気殺菌を行い、放冷したものを固形培養基として調製した。
【００７９】
この固形培養基に上記の液体種菌を約１５ｍｌ接種し、暗所にて温度２３℃、湿度６０〜７０％の条件下で１１２日間菌糸を培養し、培地全体に菌糸をまん延させた。次いで栓を外しビン口をオートクレーブ滅菌した赤玉土で覆土した後、温度１５℃、加湿をヒューミアイ１００〔(株)鷺宮製作所製〕の表示値で１１５〜１２０％となるように制御した発生室に移動し、５０〜５００ルクスの照明下、子実体原基が生じるまでは水濡れを防ぐためビン口を波板で被覆し、子実体原基形成後は波板を取去り、発生室移動後２９日間培養を続け、成熟子実体を得た。トウモロコシ培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は７８．９gであった。押麦培地では子実体の発生は見られず、トウモロコシ培地の方が優れていた。
【００８０】
実施例１４
ポリプロピレン製の広口培養ビン（８００ｍｌナメコ用）に、トウモロコシの実〔(株)イトウ精麦の飼料用粉砕物より、通常混合される魚粉を省いたもの〕又は押麦〔豊橋糧食工業（株）〕と広葉樹鋸屑〔（有）トモエ物産〕を乾物重量比で２：１に混合し、培養基の水分が最終的に６０％になるように水を加えて十分にかくはん・混合したものをビン容積の約半量程度詰めた後、中央に直径１．５ｃｍ程度の穴を開けたのち打栓し、１１８℃で６０分間高圧蒸気殺菌を行い、放冷したものを固形培養基として調製した。
【００８１】
この固形培養基に実施例１３に記載の液体種菌を約２０ｍｌ接種し、暗所にて温度２３℃、湿度６０〜７０％の条件下で１０５日間菌糸を培養し、培地全体に菌糸をまん延させた。次いで栓を外し、ビン口をオートクレーブ滅菌した赤玉土で覆土した後、温度１５℃、加湿をヒューミアイ１００〔(株)鷺宮製作所製〕の表示値で１１５〜１２０％となるように制御した発生室に移動し、５０〜５００ルクスの照明下、子実体原基が生じるまでは水濡れを防ぐためビン口を波板で被覆し、子実体原基形成後は波板を取去り、発生室移動後トウモロコシ培地は２６日間、押麦培地は２９日間培養を続け、成熟子実体を得た。トウモロコシ培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は６２．５g、押麦培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は２７．８ｇであり、収量、発生室移動後の所要日数ともトウモロコシ培地の方が優れていた。
【００８２】
実施例１５
ポリプロピレン製の広口培養ビン（８００ｍｌナメコ用）に、加熱圧片とうもろこし〔(株)イトウ精麦〕又は押麦〔豊橋糧食工業（株）〕と広葉樹鋸屑〔（有）トモエ物産〕を乾物重量比で２：１に混合し、培養基の水分が最終的に６０％になるように水を加えて十分にかくはん・混合したものをビン容積の約半量程度詰め、中央に直径１．５ｃｍ程度の穴を開けたのち打栓し、１１８℃で６０分間高圧蒸気殺菌を行い、放冷したものを固形培養基として調製した。
【００８３】
この固形培養基に実施例１３に記載の液体種菌を約２０ｍｌ接種し、暗所にて温度２３℃、湿度６０〜７０％の条件下で１０５日間菌糸を培養し、培地全体に菌糸をまん延させた。次いで栓を外しビン口をオートクレーブ滅菌した赤玉土で覆土した後、温度１５℃、加湿をヒューミアイ１００〔(株)鷺宮製作所製〕の表示値で１１５〜１２０％となるように制御した発生室に移動し、５０〜５００ルクスの照明下、子実体原基が生じるまでは水濡れを防ぐためビン口を波板で被覆し、子実体原基形成後は波板を取去り、発生室移動後加熱圧片とうもろこし培地は３４日間、押麦培地は２９日間培養を続け、成熟子実体を得た。加熱圧片とうもろこし培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は３５．３g、押麦培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は２７．８ｇであり、収量において加熱圧片とうもろこし培地の方が優れていた。
【００８４】
実施例１６
ポリプロピレン製の広口培養ビン（８００ｍｌナメコ用）に、全粒マイロ〔大阪新興飼料〕又は押麦〔豊橋糧食工業（株）〕と広葉樹鋸屑〔（有）トモエ物産〕を乾物重量比で２：１に混合し、培養基の水分が最終的に６０％になるように水を加えて十分にかくはん・混合したものをビン容積の約半量程度詰め、中央に直径１．５ｃｍ程度の穴を開けたのち打栓し、１１８℃で６０分間高圧蒸気殺菌を行い、放冷したものを固形培養基として調製した。
【００８５】
この固形培養基に実施例１３に記載の液体種菌を約２０ｍｌ接種し、暗所にて温度２３℃、湿度６０〜７０％の条件下で１０５日間菌糸を培養し、培地全体に菌糸をまん延させた。次いで栓を外しビン口をオートクレーブ滅菌した赤玉土で覆土した後、温度１５℃、加湿をヒューミアイ１００〔(株)鷺宮製作所製〕の表示値で１１５〜１２０％となるように制御した発生室に移動し、５０〜５００ルクスの照明下、子実体原基が生じるまでは水濡れを防ぐためビン口を波板で被覆し、子実体原基形成後は波板を取去り、発生室移動後全粒マイロ培地は３０日間、押麦培地は２９日間培養を続け、成熟子実体を得た。全粒マイロ培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は３１．３g、押麦培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は２７．８ｇであり、収量において全粒マイロ培地の方が優れていた。
【００８６】
実施例１７
ポリプロピレン製の広口培養ビン（８００ｍｌナメコ用）に、キビの実〔大阪新興飼料〕又は押麦〔豊橋糧食工業（株）〕と広葉樹鋸屑〔（有）トモエ物産〕を乾物重量比で２：１に混合し、培養基の水分が最終的に６０％になるように水を加えて十分にかくはん・混合したものをビン容積の約半量程度詰め、中央に直径１．５ｃｍ程度の穴を開けたのち打栓し、１１８℃で６０分間高圧蒸気殺菌を行い、放冷したものを固形培養基として調製した。
【００８７】
この固形培養基に実施例１３に記載の液体種菌を約２０ｍｌ接種し、暗所にて温度２３℃、湿度６０〜７０％の条件下で１０５日間菌糸を培養し、培地全体に菌糸をまん延させた。次いで栓を外しビン口をオートクレーブ滅菌した赤玉土で覆土した後、温度１５℃、加湿をヒューミアイ１００〔(株)鷺宮製作所製〕の表示値で１１５〜１２０％となるように制御した発生室に移動し、５０〜５００ルクスの照明下、子実体原基が生じるまでは水濡れを防ぐためビン口を波板で被覆し、子実体原基形成後は波板を取去り、発生室移動後キビ培地は３３日間、押麦培地は２９日間培養を続け、成熟子実体を得た。キビ培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は２９．０g、押麦培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は２７．８ｇであり、収量においてキビ培地の方が優れていた。
【００８８】
実施例１８
ポリプロピレン製の広口培養ビン（８００ｍｌナメコ用）に、アワの実〔大阪新興飼料〕又は押麦〔豊橋糧食工業（株）〕と広葉樹鋸屑〔（有）トモエ物産〕を乾物重量比で２：１に混合し、培養基の水分が最終的に６０％になるように水を加えて十分にかくはん・混合したものをビン容積の約半量程度詰め、中央に直径１．５ｃｍ程度の穴を開けたのち打栓し、１１８℃で６０分間高圧蒸気殺菌を行い、放冷したものを固形培養基として調製した。
【００８９】
この固形培養基に実施例１３に記載の液体種菌を約２０ｍｌ接種し、暗所にて温度２３℃、湿度６０〜７０％の条件下で１０５日間菌糸を培養し、培地全体に菌糸をまん延させた。次いで栓を外しビン口をオートクレーブ滅菌した赤玉土で覆土した後、温度１５℃、加湿をヒューミアイ１００〔(株)鷺宮製作所製〕の表示値で１１５〜１２０％となるように制御した発生室に移動し、５０〜５００ルクスの照明下、子実体原基が生じるまでは水濡れを防ぐためビン口を波板で被覆し、子実体原基形成後は波板を取去り、発生室移動後アワ培地は２７日間、押麦培地は２９日間培養を続け、成熟子実体を得た。アワ培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は４９．３g、押麦培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は２７．８ｇであり、収量、発生室移動後の所要日数ともアワの実培地の方が優れていた。
【００９０】
比較例１
１／２ＰＧＹ液体培地（組成：グルコース１．０％、ペプトン０．１％、酵母エキス０．１％、ＫＨ2ＰＯ4０．０２５％、ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ０．０２５％）２００ｍｌにホンシメジＬａ ０１−２６株の菌糸を接種し、２５℃で１０日間培養し、液体種菌とした。
【００９１】
一方、ポリプロピレン製の広口培養ビン（８５０ｍｌ）に、トウモロコシの実〔(株)イトウ精麦製の飼料用粉砕物より、通常混合される魚粉を省いたもの〕又は押麦〔豊橋糧食工業(株)〕と広葉樹鋸屑〔（有）トモエ物産〕を乾物重量比で２：１に混合し培養基の水分が最終的に６０％になるように水を加えて十分にかくはん・混合したものを圧詰し、中央に直径３ｃｍ程度の穴を開けたのち打栓し、１１８℃で６０分間高圧蒸気殺菌を行い、放冷したものを固形培養基として調製した。
【００９２】
この固形培養基に上記の液体種菌を約１５ｍｌ接種し、暗所にて温度２３℃、湿度６０〜７０％の条件下で１０９日間菌糸を培養し、培地全体に菌糸をまん延させた。次いで栓を外しビン口をオートクレーブ滅菌した赤玉土で覆土した後、温度１５℃、加湿をヒューミアイ１００〔(株)鷺宮製作所製〕の表示値で１１５〜１２０％となるように制御した発生室に移動し、５０〜５００ルクスの照明下、子実体原基が生じるまでは水濡れを防ぐためビン口を波板で被覆し、子実体原基形成後は波板を取去り、発生室移動後２７日間培養を続け、成熟子実体を得た。押麦培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は４２．０gであった。トウモロコシ培地では子実体の発生は見られず、押麦培地の方が優れていた。
【００９３】
比較例２
１／２ＰＧＹ液体培地（組成：グルコース１．０％、ペプトン０．１％、酵母エキス０．１％、ＫＨ2ＰＯ4０．０２５％、ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ０．０２５％）２００ｍｌにホンシメジＬａ ０１−３８株の菌糸を接種し、２５℃で１０日間培養し、液体種菌とした。
【００９４】
一方、ポリプロピレン製の広口培養ビン（８５０ｍｌ）に、トウモロコシの実〔(株)イトウ精麦製の飼料用粉砕物より、通常混合される魚粉を省いたもの〕又は押麦〔豊橋糧食工業(株)〕と広葉樹鋸屑〔（有）トモエ物産〕を乾物重量比で２：１に混合し培養基の水分が最終的に６０％になるように水を加えて十分にかくはん・混合したものを圧詰し、中央に直径３ｃｍ程度の穴を開けたのち打栓し、１１８℃で６０分間高圧蒸気殺菌を行い、放冷したものを固形培養基として調製した。
【００９５】
この固形培養基に上記の液体種菌を約１５ｍｌ接種し、暗所にて温度２３℃、湿度６０〜７０％の条件下で１０９日間菌糸を培養し、培地全体に菌糸をまん延させた。次いで栓を外しビン口をオートクレーブ滅菌した赤玉土で覆土した後、温度１５℃、加湿をヒューミアイ１００〔(株)鷺宮製作所製〕の表示値で１１５〜１２０％となるように制御した発生室に移動し、５０〜５００ルクスの照明下、子実体原基が生じるまでは水濡れを防ぐためビン口を波板で被覆し、子実体原基形成後は波板を取去り、発生室移動後３５日間培養を続け、成熟子実体を得た。押麦培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は７６．０gであった。トウモロコシ培地では子実体の発生は見られず、押麦培地の方が優れていた。
【００９６】
比較例３
１／２ＰＧＹ液体培地（組成：グルコース１．０％、ペプトン０．１％、酵母エキス０．１％、ＫＨ2ＰＯ4０．０２５％、ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ０．０２５％）２００ｍｌにホンシメジＹＧ６Ｌ株の菌糸を接種し、２５℃で１０日間培養し、液体種菌とした。
【００９７】
一方、ポリプロピレン製の広口培養ビン（８５０ｍｌ）に、トウモロコシの実〔(株)イトウ精麦製の飼料用粉砕物より、通常混合される魚粉を省いたもの〕又は押麦〔豊橋糧食工業(株)〕と広葉樹鋸屑〔（有）トモエ物産〕を乾物重量比で２：１に混合し培養基の水分が最終的に６０％になるように水を加えて十分にかくはん・混合したものを圧詰し、中央に直径３ｃｍ程度の穴を開けたのち打栓し、１１８℃で６０分間高圧蒸気殺菌を行い、放冷したものを固形培養基として調製した。
【００９８】
この固形培養基に上記の液体種菌を約１５ｍｌ接種し、暗所にて温度２３℃、湿度６０〜７０％の条件下で１２３日間菌糸を培養し、培地全体に菌糸をまん延させた。次いで栓を外しビン口をオートクレーブ滅菌した赤玉土で覆土した後、温度１５℃、加湿をヒューミアイ１００〔(株)鷺宮製作所製〕の表示値で１１５〜１２０％となるように制御した発生室に移動し、５０〜５００ルクスの照明下、子実体原基が生じるまでは水濡れを防ぐためビン口を波板で被覆し、子実体原基形成後は波板を取去り、発生室移動後トウモロコシ培地では２９日間、押麦培地では３７日間培養を続け、成熟子実体を得た。トウモロコシ培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は３４．３ｇ、トウモロコシ培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は７８．８ｇであり、収量は押麦培地の方が優れていた。
【００９９】
比較例４
ポリプロピレン製の広口培養ビン（２３００ｍｌ）に、トウモロコシの実〔(株)イトウ精麦製の飼料用粉砕物より、通常混合される魚粉を省いたもの〕又は押麦〔豊橋糧食工業(株)〕と広葉樹鋸屑〔（有）トモエ物産〕を乾物重量比で２：１に混合し、培養基の水分が最終的に６０％になるように水を加えて十分にかくはん・混合したものを比較例３で８５０ｍｌビンに詰めた分と同重量を容器の半分程度まで詰めた後、直径約１ｃｍ程度の穴を３個所開け、打栓して１１８℃で６０分間高圧蒸気殺菌を行い、放冷したものを固形培養基として調製した。
【０１００】
この固形培養基に比較例３記載の液体種菌を約５０ｍｌ接種し、暗所にて温度２３℃、湿度６０〜７０％の条件下で７７日間菌糸を培養し、培地全体に菌糸をまん延させた。次いで栓を外しビン口をオートクレーブ滅菌した赤玉土で覆土した後、温度１５℃、加湿をヒューミアイ１００〔(株)鷺宮製作所製〕の表示値で１１５〜１２０％となるように制御した発生室に移動し、５０〜５００ルクスの照明下、子実体原基が生じるまでは水濡れを防ぐためビン口を波板で被覆し、子実体原基形成後は波板を取去り、発生室移動後２８日間培養を続け、成熟子実体を得た。トウモロコシ培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は７４．１ｇ、押麦培地で得られた成熟子実体の１ビン当り平均収量は１４５．１ｇであり、収量は押麦培地の方が優れていた。発生室移動後の所要日数は同程度であった。
【産業上の利用可能性】
【０１０１】
本発明の選抜方法によれば、より安価な培地原料を用いた培養基で良好な子実体が、より短い発生室移動後の所要日数で収穫可能なホンシメジ菌株を選抜することが出来、ホンシメジの商業的人工栽培が可能になる。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Lyophyllum shimeji Ｌａ ０１−２０（ＦＥＲＭ Ｐ−１６８４１）、Lyophyllum shimeji Ｌａ ０１−２７（ＦＥＲＭ Ｐ−１７４５５）、及びLyophyllum shimeji Ｌａ ０１−４５（ＦＥＲＭ Ｐ−１７４５７）からなる群より選ばれる菌株の変異株であるホンシメジ菌株であって、押麦と広葉樹鋸屑を乾物重量比で２：１で含有する培養基と比べて、トウモロコシの実と広葉樹鋸屑を乾物重量比で２：１で含有する培養基で良好な子実体形成能を有するホンシメジ菌株。
【請求項２】
請求項１記載のホンシメジ菌株を液体培地に接種し、培養することにより得られるホンシメジの人工栽培用液体種菌。
【請求項３】
請求項１記載のホンシメジ菌株をトウモロコシの実を含有する固形培養基に接種し、培養することにより得られるホンシメジの人工栽培用培養基。
【請求項４】
請求項１記載の菌株をトウモロコシの実を含有する培養基で培養することを特徴とするホンシメジの人工栽培方法。
【請求項５】
請求項１記載の菌株をトウモロコシの実を含有する培養基で培養することを特徴とするホンシメジの生産方法。
【請求項１】
Lyophyllum shimeji Ｌａ ０１−２０（ＦＥＲＭ Ｐ−１６８４１）、Lyophyllum shimeji Ｌａ ０１−２７（ＦＥＲＭ Ｐ−１７４５５）、及びLyophyllum shimeji Ｌａ ０１−４５（ＦＥＲＭ Ｐ−１７４５７）からなる群より選ばれる菌株の変異株であるホンシメジ菌株であって、押麦と広葉樹鋸屑を乾物重量比で２：１で含有する培養基と比べて、トウモロコシの実と広葉樹鋸屑を乾物重量比で２：１で含有する培養基で良好な子実体形成能を有するホンシメジ菌株。
【請求項２】
請求項１記載のホンシメジ菌株を液体培地に接種し、培養することにより得られるホンシメジの人工栽培用液体種菌。
【請求項３】
請求項１記載のホンシメジ菌株をトウモロコシの実を含有する固形培養基に接種し、培養することにより得られるホンシメジの人工栽培用培養基。
【請求項４】
請求項１記載の菌株をトウモロコシの実を含有する培養基で培養することを特徴とするホンシメジの人工栽培方法。
【請求項５】
請求項１記載の菌株をトウモロコシの実を含有する培養基で培養することを特徴とするホンシメジの生産方法。
【公開番号】特開２００８−１３１９５６（Ｐ２００８−１３１９５６Ａ）
【公開日】平成２０年６月１２日（２００８．６．１２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−３３６０９（Ｐ２００８−３３６０９）
【出願日】平成２０年２月１４日（２００８．２．１４）
【分割の表示】特願２０００−２６４０１（Ｐ２０００−２６４０１）の分割
【原出願日】平成１２年２月３日（２０００．２．３）
【出願人】（３０２０１９２４５）タカラバイオ株式会社 (115)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２０年６月１２日（２００８．６．１２）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年２月１４日（２００８．２．１４）
【分割の表示】特願２０００−２６４０１（Ｐ２０００−２６４０１）の分割
【原出願日】平成１２年２月３日（２０００．２．３）
【出願人】（３０２０１９２４５）タカラバイオ株式会社 (115)
【Ｆターム（参考）】
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