ボアカンガアフリカーナより得られるカンナビノイド受容体阻害薬およびその利用
【課題】カンナビノイド受容体阻害作用に優れ、カンナビノイド受容体関連疾患または障害の処置に優れた新規な物質。
【解決手段】本発明はボアカンガアフリカーナの植物抽出物およびそれに含まれるアルカロイドを含有するカンナビノイド受容体阻害薬に関する。
【解決手段】本発明はボアカンガアフリカーナの植物抽出物およびそれに含まれるアルカロイドを含有するカンナビノイド受容体阻害薬に関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、カンナビノイド受容体リガンドとして、特にカンナビノイド受容体（ＣＢ１）アンタゴニストまたはインバースアゴニストとして、並びにカンナビノイド受容体アンタゴニストにより変調される疾患、状態および／または障害を治療するためのその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
カンナビノイド（非特許文献１）はマリファナに含まれる化学物質の総称であり、精神賦活性を有しており、主なものにデルタ−９−テトラヒドロカンナビノールがある。カンナビノイド受容体としては、ＣＢ１およびＣＢ２の２つがこれまでクローン化されている。ＣＢ１は主に中枢神経系に発現し、一方ＣＢ２は末梢組織、主として免疫系に発現される。両受容体ともＧ−タンパク質共役クラスであり、それらの阻害はアデニレートシクラーゼ活性に関連する。
【０００３】
中枢神経系に発現するＣＢ１受容体は食欲に関係すると考えられており、これを阻害することによって、食欲を抑制することができ、肥満などに有効であると考えられる。また、記憶、学習に重要な脳部位にＣＢ１受容体が高密度に分布していることから記憶障害にも関連すると考えられ、認知障害などの疾患に有用であると考えられる。一方、カンナビノイド受容体の阻害剤としてリモナバン（rimonabant）が有名であるが、自殺企図などの副作用が問題となっており、安全性の高い阻害剤は少ない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】日薬理誌（Folia Pharmacol. Jpn.）130, 135-140 (2007)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は上記従来技術の問題点に鑑みてなされたものであって、カンナビノイド受容体阻害作用に優れ、カンナビノイド受容体関連疾患または障害の処置に優れた新規な物質を提供すべく、さまざまな天然由来の物質を検討した結果、ある特定の植物から得られた抽出物及びそれから単離された化合物にこの課題を解決しうる有効な作用を見出し、本発明を完成するに至った。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、鋭意研究を重ねた結果、ボアカンガアフリカーナ（Voacanga africana）由来の物質がカンナビノイド受容体阻害作用を示すことを発見し、本発明を完成させた。
【０００７】
上記課題を解決する本発明は、以下の発明を包含する。
［１］ボアカンガアフリカーナの植物抽出物を含むことを特徴とするカンナビノイド受容体阻害薬。
【０００８】
［２］式（１）：
【化１】
で表されるアルカドイドを含有するカンナビノイド受容体阻害薬。
【０００９】
［３］式（２）：
【化２】
で表されるアルカドイドを含有するカンナビノイド受容体阻害薬。
【００１０】
［４］式（３）：
【化３】
で表されるアルカドイドを含有するカンナビノイド受容体阻害薬。
【００１１】
［５］上記式（１）〜（３）の２または３の混合物を含有するカンナビノイド受容体阻害剤。
【００１２】
［６］カンナビノイド受容体阻害剤を製造するための、上記ボアカンガアフリカーナの植物抽出物、または上記式（１）〜（３）のいずれかの化合物もしくはその混合物の使用。
【００１３】
［７］カンナビノイド受容体関連疾患または障害の患者に、治療上の有効量の上記ボアカンガアフリカーナの植物抽出物、または上記式（１）〜（３）のいずれかの化合物もしくはその混合物を投与することからなるカンナビノイド受容体関連疾患または障害の予防及び／又は治療方法。
【発明の効果】
【００１４】
本発明の植物抽出物および化合物は、ＣＢ１の活性を阻害し、従って、例えば精神病、記憶欠損、認知障害、片頭痛、ニューロパシー、神経炎症性障害、脳血管障害、頭部外傷、不安障害、物質濫用(例えば禁煙)、ストレス、癲癇、パーキンソン病、統合失調症、骨粗鬆症、便秘、慢性偽性腸閉塞、肝臓の硬変、喘息、肥満、および過度の摂食が関連する他の摂食障害を含むが、これらに限定されないＣＢ１関連疾患または障害の処置に有用であることが期待される。
本発明のカンナビノイド受容体リガンドはカンナビノイド受容体の変調と関連した病気の治療に有用である。
【００１５】
本発明のカンナビノイド受容体リガンドは、天然成分のボアカンガアフリカーナ由来の物質であり、副作用の問題が少ない。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】各試料のカンナビノイド受容体阻害活性を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本発明のカンナビノイド受容体リガンドは、ボアカンガアフリカーナ由来で、カンナビノイド受容体阻害作用を示す物質を有効成分として含有する。
【００１８】
本発明で用いるボアカンガアフリカーナの生産地または品種は特に制限されないが、生産地としては例えばガーナが挙げられる。ボアカンガアフリカーナは、粉砕、破砕などにより粉末化処理したものを用いてもよいが、抽出物またはその処理物として用いることが好ましい。
【００１９】
抽出溶媒としては、メタノールが好ましいが、ヘキサン、ジクロロメタン、エタノールなどを使用することもできる。例えば、粉砕した試料５０ｍｇにメタノール１ｍＬを使用して、超音波下で１時間抽出を行ってもよい。
【００２０】
このようにして得られる抽出物は、そのまま本発明のカンナビノイド受容体阻害薬の有効成分として用いることができる。また、当該抽出物をイオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー、透析等の各種精製手段により処理し、さらに活性を高めた処理物として用いてもよい。
【００２１】
本発明者らはさらに、メタノール抽出したボアカンガアフリカーナを活性成分の分離精製を行ったところ、次式で表される３種類のアルカロイドを単離・同定することに成功した。
【化４】
【化５】
【化６】
【００２２】
これら３種類のアルカロイドのカンナビノイド受容体阻害作用は、カンナビノイド受容体阻害薬として知られるリモナバントの阻害活性（ＩＣ50：２μｇ／Ｌ）と比較しても、遜色がないものであることがわかった。
【００２３】
本発明において、これら３種類のアルカロイドの混合物とは、これら３種類の混合物または任意の２種類の混合物を意図し、その含有する比率は特に問わない。
特に断りがなければ、本発明における化合物の立体構造は、立体的に可能ならいずれの立体配置も含みうる。
【００２４】
本発明の植物抽出物、並びに単離された個々の化合物およびその混合物は、抽出エキスもしくは化合物のバルクの形態で、または好ましくは通常の医薬担体もしくは希釈剤で医薬製剤の形態で用いられ得る。投与形態は特定の形態に制限されないが、具体的には例えば、いずれの通常の投与形態、例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤のような経口投与の製剤、経口投与に適した様々な液体製剤、または注射剤、坐剤のような非経口投与用製剤であってもよい。植物抽出物または活性化合物はその製剤の組成物に対して０．１〜７０重量％含まれる。
【００２５】
注射用製剤は通常、液剤、乳濁液、または懸濁液の形態で調製され、無菌化し、更に好ましくは血液に対して等張にされる。液体、乳濁液または懸濁液の形態の製剤は一般的に、通常の医薬希釈剤、例えば、水、エチルアルコール、プロピレングリコール、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルを用いて調製される。これらの製剤には、塩化ナトリウム、ブドウ糖、グリセリンのような等張剤と、等張にするのに十分な量で混合してもよく、更に通常の可溶化剤、緩衝剤、麻酔剤、および適宜、着色剤、保存剤、芳香物質、香料、甘味料、および他の薬剤で混合してもよい。
【００２６】
錠剤、カプセル剤、経口投与用液剤のような製剤は、通常の方法で調製され得る。錠剤は、ゼラチン、デンプン、乳糖、ステアリン酸マグネシウム、タルク、アラビアガムなどのような通常の医薬担体と混合して調製され得る。カプセル剤は、不活性な医薬充填剤または希釈剤と共に混合して調製し、硬ゼラチンカプセルまたは軟カプセルに詰められ得る。シロップ剤またはエリキシル剤のような経口液体製剤は、活性化合物と、甘味料（例えば、ショ糖）、保存剤（例えば、メチルパラベン、プロピルパラベン）、着色料、香料などとを混合して調製する。非経口投与用製剤はまた、通常の方法、例えば本発明の植物抽出物または活性化合物を無菌の水性担体、好ましくは水または生理食塩水溶液に溶解しても調製され得る。非経口投与に適した好ましい液体製剤は、約１〜１００ ｍｇの本発明の植物抽出物または活性化合物を、水および有機溶媒中に、更に分子量３００〜５０００を有するポリエチレングリコール中に溶解して調製し、好ましくは、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン、およびポリビニルアルコールのような滑沢剤と混合される。上記の液体製剤には好ましくは更に、消毒剤（例えば、ベンジルアルコール、フェノール、チメロサール）、殺菌剤、および更に適宜、等張剤（例えば、ショ糖、塩化ナトリウム）、局所麻酔剤、安定化剤、緩衝剤などを加えてよい。安定性を保つために、非経口投与用製剤は、小さな容器に充填し、続いて通常の凍結乾燥技術で水性溶媒を除いてもよく、これを使用に際して水性溶媒に溶解して液体製剤に戻す。
【実施例】
【００２７】
実施例１（ボアカンガアフリカーナの植物抽出物）
１．抽出操作
ボアカンガアフリカーナの根皮（粗粉末）６０１ｇ（乾燥重量）をメタノール（１.７Ｌ×２）に２日間冷浸した後、さらに熱メタノール（７０℃）にて２回（８.５時間、１０.５時間）抽出し、抽出液を減圧下濃縮してメタノールエキス（抽出物）７０.１２ｇを得た。
２．分液操作
メタノールエキス７０.１２ｇを酢酸エチル（０.５Ｌ）に溶解し、１Ｎ ＨＣｌ（０.５Ｌ×３）で抽出した。水層をＮａ2ＣＯ3で塩基性にした後、ＣＨＣｌ3で８回（各０.５Ｌ×８）抽出した。有機層の溶媒を減圧下留去し、ＣＨＣｌ3層から１５.４５ｇの粗塩基を得た。
【００２８】
実施例２（ＳＫＢ−ＯＨ１１（ボアカミン voacamine））
【化７】
１．ＳＫＢ−ＯＨ１１の単離と同定
実施例１で得た粗塩基をシリカゲルオープンカラムに付し、３〜５％メタノール／ＣＨＣｌ3溶出部をシリカゲルフラッシュカラムに付した。その８０％酢酸エチル／ヘキサン溶出部をさらにシリカゲルフラッシュカラム（５％メタノール／酢酸エチル）にて順次精製することにより、ＳＫＢ−ＯＨ１１を１４４１ｍｇ得た。
【００２９】
本化合物は、ＵＶスペクトル（メタノール）において、294.0、287.0、224.5 nmに５−メトキシインドールに特徴的な吸収が認められ、ＦＡＢＭＳ（ＮＢＡ）スペクトルにおいては705 [M+H]+にピークが認められた。1Ｈ−ＮＭＲにおいて、６Ｈ分の芳香族プロトンがδ7.54 (1H，br-d, J=6.8 Hz, H-9')、δ7.04-7.06 (3H, overlapped, H-10', H-11', H-12')、δ6.92 (1H, s, H-9)、δ6.75 (1H, br-s, H-12) に観測された。特徴的なシグナルとして、δ3.99 (3H, s, 10-OMe)にメトキシ基のプロトン、δ3.64 (3H, s, CO2Me)にカルボン酸メチルのプロトン、δ7.70 (1H, br-s, NH) にインドールのＮ−Ｈのプロトンが観測されたことから、ボアカンギン（voacangine）ユニットの存在が示唆された。また、δ2.46 (3H, s, CO2Me') にベンゼン環によって遮蔽され高磁場シフトしたカルボン酸メチルのプロトン、δ2.59 (3H, s, NMe') にＮ-Ｍｅのプロトン、δ5.31 (1H, q, J=6.8 Hz, H-19')およびδ1.65 (3H, d, J=6.5 Hz, H3-18') にエチリデンのプロトン、およびδ7.45 (1H, br-s, N'H) にインドールのＮ−Ｈのプロトンが観測されたことから、ボバシン（vobasine）ユニットの存在が示唆された。
以上のスペクトル解析よりボアカンギンユニットとボバシンユニットからなるビスインドールアルカロイドと推定した。両ユニットの結合様式については、δ6.92 (H-9)、δ6.75 (H-12)にシングレットの芳香族プロトンのシグナルが２本観測されたことからボアカンギンユニットのパラの位置関係にプロトンが存在すると考え、ボアカンギンユニットの１１位と、ボバシンユニットの３’位が結合していると推定した。従って、本化合物をボアカミンと推定し、各種スペクトルデータを下記の文献(１）〜（３）と比較したところ一致したので、本化合物をボアカミンと確認した。
（１） H. Achenbach and E. Schaller，Chem. Ber.，1976，109，3527-3536．
（２） W. L. B. Medeiros，I. J. C. Vieira，L. Mathias，R. B-Filho，K. Z. Leal，E. R-Filho，and J. Schripsema，Magn. Reson. Chem.，1999，37，676-681．
（３） V. Agwada，M. B. Patel，M. Hesse，and H. Schmid，Helv. Chim. Acta，1970，53，1567-1577．
【００３０】
２．ＳＫＢ−ＯＨ１１のデータ
FABMS(NBA) m/z : 705 [M+H]+,
UV (MeOH)λmax nm : 294.0, 287.0, 224.5,
[α]D25 : -66 (c 0.6, CHCl3),
CD (MeOH, 24 ℃, c 0.13 mM): Δε(λnm) : 0 (321), -8.33 (306), 0 (300), +11.72 (297), 0 (291), +1.68 (288), 0 (287), -7.73 (278), 0 (264), +58.81 (240), 0 (234), -97.80 (223), 0 (208),
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 7.70 (1H, br-s, NH), 7.54 (1H, br-d, J=6.8 Hz, H-9'), 7.45 (1H, br-s, N'H), 7.04-7.06 (3H, overlapped, H-10', H-11', H-12'), 6.92 (1H, s, H-9), 6.75 (1H, br-s, H-12), 5.31 (1H, q, J=6.8 Hz, H-19'), 5.13 (1H, br-d, J=12.0 Hz, H-3'), 4.04 (1H, m, H-5'), 3.99 (3H, s, 10-OMe), 3.70-3.79 (2H, overlapped, H-15', H-21'), 3.64 (3H, s, CO2Me), 3.50 (1H, s, H-21), 3.48 (1H, m, H-6'), 3.35 (1H, m, H-5), 3.07-3.23 (3H, overlapped, H-5, H-6, H-6'), 2.85-2.99 (3H, overlapped, H-3, H-6, H-21'), 2.70-2.73 (2H, overlapped, H-3, H-16'), 2.59 (3H, s, NMe'), 2.58 (1H, m, H-14'), 2.48 (1H, m, H-17), 2.46 (3H, s, CO2Me'), 1.98 (1H, br-d, J=13.2 Hz, H-14'), 1.80 (1H, m, H-14), 1.70-1.76 (2H, overlapped, H-15, H-17), 1.65 (3H, d, J=6.5 Hz, H3-18'), 1.53 (1H, m, H-19), 1.41 (1H, m, H-19), 1.28 (1H, m, H-20), 1.07 (1H, m, H-15), 0.87 (3H, dd, J=7.3, 7.3 Hz, H3-18),
13C-NMR (125 MHz, CDCl3): 175.2 (CO2Me), 171.6 (CO2Me'), 150.9 (C-10), 138.1 (C-2', C-20'), 137.2 (C-2), 135.8 (C-13'), 130.2 (C-13), 130.0 (C-8'), 129.8 (C-11), 127.3 (C-8), 121.5 (C-11'), 118.9 (C-10'), 118.8 (C-19'), 117.5 (C-9'), 110.3 (C-12), 110.0 (C-7, C-7'), 109.8 (C-12'), 92.2 (C-9), 59.9 (C-5'), 57.2 (C-21), 56.1 (10-OMe), 54.9 (C-16), 53.1 (C-5), 52.5 (CO2Me, C-21'), 51.8 (C-3), 49.9 (CO2Me'), 47.1 (C-16'), 42.4 (NMe'), 39.0 (C-20), 37.3 (C-3'), 36.5 (C-17), 36.4 (C-14'), 33.6 (C-15'), 32.0 (C-15), 26.7 (C-19), 27.3 (C-14), 22.2 (C-6), 19.4 (C-6'), 12.3 (C-18'), 11.6 (C-18)
【００３１】
実施例３（ＳＫＢ−ＯＨ２３（３，６−オキシドボアカンギン 3,6-oxidovoacangine））
【化８】
１．ＳＫＢ−ＯＨ２３の単離と同定
実施例１で得た粗塩基をシリカゲルオープンカラムに付し、３〜５％メタノール／ＣＨＣｌ3溶出部をシリカゲルフラッシュカラムに付した。その４０％酢酸エチル／ヘキサン溶出部をさらにシリカゲルフラッシュカラム（２０〜３０％酢酸エチル／ヘキサン）、ＮＨ−ＳｉＯ2オープンカラム（２０〜３０％酢酸エチル／ヘキサン)、ＮＨ−ＳｉＯ2ペンシルカラム（２５％酢酸エチル／ヘキサン）、ＳｉＯ2オープンカラム（１０％酢酸エチル／ＣＨＣｌ3）にて順次精製することにより、ＳＫＢ−ＯＨ２３を６.８ｍｇ得た。
【００３２】
本化合物は、ＵＶスペクトル（メタノール）において、288.0、206.5 nmに５−メトキシインドールに特徴的な吸収が認められ、ＥＩＭＳスペクトルにおいてはボアカンギンより14マス大きい382 [M]+ にピークが認められた。1Ｈ−ＮＭＲにおける特徴的なシグナルとして、δ5.17 (1H，d，J=3.3 Hz，H-6) に酸素が結合したベンジル位のメチンプロトン、δ4.98 (1H，d，J=4.6 Hz，H-3) にアミナールのメチンプロトンのシグナルが観測された。13Ｃ−ＮＭＲにおいては、ボアカンギンでδ51.5 (C-3)、δ22.2 (C-6) に観測されたシグナルがそれぞれ本化合物では、δ93.7 (C-3)、δ69.0 (C-6) へと大きく低磁場シフトして観測された。1Ｈ−1Ｈ ＣＯＳＹ測定において、δ7.13 (H-12) のプロトンとδ6.78 (H-11) のプロトン間、δ5.17 (H-6) のプロトンとδ3.47-3.48 (H2-5) のプロトン間、δ4.98 (H-3) のプロトンとδ2.30 (H-14) のプロトン間、δ1.90 (H-15)のプロトンとδ1.27 (H-20)のプロトン間、δ1.57 (H-19)のプロトンとδ0.88 (H3-18)のプロトン間に相関が認められた。ＨＭＢＣ測定において、δ3.87 (CO2Me) のプロトンからδ175.6 (CO2Me) の炭素への相関からカルボン酸メチルの存在、δ0.88 (H3-18)のプロトンからδ38.8 (C-20) の炭素への相関から孤立したエチル基の存在、δ3.84 (10-OMe) のプロトンからδ154.5 (C-10)の炭素への相関から芳香環上のメトキシ基の存在が確認された。さらに、δ7.13 (H-12) のプロトンからδ154.5 (C-10) の炭素への相関、およびδ6.98 (H-9) のプロトンからδ117.6 (C-7) の炭素への相関からメトキシ基が１０位に存在すると推定した。他にδ5.17 (H-6) のプロトンからδ126.9 (C-8)、δ93.7 (C-3) の炭素、δ3.54 (H-21) のプロトンからδ60.5 (C-6)、δ26.5 (C-19) の炭素、δ1.10 (H-15) のプロトンからδ31.4 (C-17) の炭素、δ2.41 (H-17) のプロトンからδ175.6 (CO2Me) の炭素への相関が認められたことから、標題に示した基本構造であると推定した。ＣＤスペクトルにおいて、265 nmで負のコットン効果を示したことから、１６位はボアカンギンと同様にＳ配置と推定した。さらに本化合物はリジッドな環構造を組むことより、３位Ｓ配置、６位Ｒ配置、１４位Ｒ配置、２１位Ｓ配置となる。このことは、差ＮＯＥ測定において、δ4.98 (H-3) のプロトンを照射した際、δ5.17 (H-6)、δ3.47-3.48 (H-5)、δ2.30 (H-14)、δ1.10 (H-15) のプロトンにＮＯＥが認められたことからも確認した。また、1Ｈ−ＮＭＲにおいて、２１位のシグナルがシングレットであることから、２０位の立体配置をＳ配置と推定した。以上のスペクトル解析より３，６−オキシドボアカンギンと推定し、各種スペクトルデータを下記の文献（４）と比較したところ一致したので、本化合物を３，６−オキシドボアカンギンと確認した。
（４） N. Ghorbel，M. Damak，A. Ahond，E. Philogene，C. Poupat，P. Potier，and H. Jacquemin，J. Nat. Prod.，1981，44，717-721．
【００３３】
２．ＳＫＢ−ＯＨ２３のデータ
EIMS m/z (%) : 382 ([M]+, 42), 135 (100),
UV (MeOH)λmax nm (log ε) : 288.0 (3.68), 206.5 (4.26),
CD (MeOH, 24 ℃, c 0.29 mM): Δε(λnm) : 0 (321), +0.31 (311), 0 (292), -0.78 (265), 0 (249), +2.79 (224), 0 (212),
1H-NMR (500 MHz, CDCl3): 7.47 (1H, br-s, NH), 7.13 (1H, d, J=8.8 Hz, H-12), 6.98 (1H, d, J=2.2 Hz, H-9), 6.78 (1H, dd, J=8.8, 2.2 Hz, H-11), 5.17 (1H, d, J=3.3 Hz, H-6), 4.98 (1H, d, J=4.6 Hz, H-3), 3.87 （3H, s, CO2Me), 3.84 (3H, s, 10-OMe), 3.54 (1H, br-s, H-21), 3.47-3.48 (2H, overlapped, H2-5), 2.41 (1H, br-d, J=14.0 Hz, H-17), 2.30 (1H, m, H-14), 2.15 (1H, br-ddd, J=14.0, 4.2, 2.8 Hz, H-17), 1.90 (1H, ddd, J=13.0, 9.5, 4.4 Hz, H-15), 1.57 (1H, m, H-19), 1.40 (1H, m, H-19), 1.27 (1H, m, H-20), 1.10 (1H, br-dd, J=13.0, 7.5 Hz, H-15), 0.88 (3H, dd, J=7.5, 7.5 Hz, H3-18)
13C-NMR (125 MHz, CDCl3): 175.6 (CO2Me), 154.5 (C-10), 138.6 (C-2), 128.8 (C-13), 126.9 (C-8), 117.6 (C-7), 112.0 (C-11), 111.6 (C-12), 99.4 (C-9), 93.7 (C-3), 69.0 (C-6), 60.5 (C-5), 59.6 (C-21), 55.9 (10-OMe), 54.1 (C-16), 52.8 (CO2Me), 38.8 (C-20), 31.4 (C-17), 29.9 (C-14), 29.8 (C-15), 26.5 (C-19), 11.6 (C-18)
【００３４】
実施例４（ＳＫＢ−ＯＨ２８）
【化９】
１．ＳＫＢ−ＯＨ２８の単離と構造決定
実施例１で得た粗塩基をシリカゲルオープンカラムに付し、３〜５％メタノール／ＣＨＣｌ3溶出部をシリカゲルフラッシュカラムに付した。その１０％メタノール／酢酸エチル溶出部をさらにシリカゲルフラッシュカラム（３％メタノール／ＣＨＣｌ3）、ＮＨ−ＳｉＯ2オープンカラム（４０％酢酸エチル／ヘキサン）、ＳｉＯ2フラッシュカラム（３％メタノール／ＣＨＣｌ3）にて順次精製することによりＳＫＢ−ＯＨ２８を１.４ｍｇ得た。
【００３５】
本化合物は、ＵＶスペクトル（メタノール）において、285.0、203.5 nmに５−メトキシインドールに特徴的な吸収が認められた。またＥＩＭＳスペクトルにおいて、３，６−オキシドボアカンギン（ＳＫＢ−ＯＨ２３）より16マス大きい398 [M]+ にピークが認められ、高分解能ＥＩＭＳスペクトルの結果、分子式C22H26N2O5が得られた。1Ｈ−ＮＭＲ (600 MHz，CDCl3)、13Ｃ−ＮＭＲ (150 MHz，CDCl3) は、ともに３，６−オキシドボアカンギンとよく類似したチャートを与えた。1Ｈ−ＮＭＲにおいて、３，６−オキシドボアカンギンでδ3.47-3.48 (H2-5)に観測された５位メチレンプロトンが１Ｈ分しか認められず、さらにδ5.16 (H-5) へ低磁場シフトして観測された。また13Ｃ−ＮＭＲにおいて、５位炭素のシグナルが低磁場シフトして観測されたことから、本化合物は３，６−オキシドボアカンギンの５位に水酸基が導入された構造を有すると推定した。1Ｈ−1Ｈ ＣＯＳＹ測定において、δ7.13 (H-12)のプロトンとδ6.80 (H-11)のプロトン間、δ5.24 (H-3) のプロトンとδ2.30 (H-14) のプロトン間、δ1.41 (H-19)のプロトンとδ0.89 (H3-18)のプロトン間に相関が認められた（下図参照）。
【化１０】
【００３６】
ＨＭＢＣ測定において、δ3.88 (CO2Me) のプロトンからδ175.0 (CO2Me) の炭素への相関からカルボン酸メチルの存在、δ0.89 (H3-18)のプロトンからδ38.4 (C-20) の炭素への相関から孤立したエチル基の存在、δ3.84 (10-OMe) のプロトンからδ154.7 (C-10)の炭素への相関から芳香環上のメトキシ基の存在が確認された。さらに、δ7.13 (H-12)のプロトンからδ154.7 (C-10)の炭素への相関からメトキシ基が１０位に存在すると推定した。他にδ5.27 (H-6) のプロトンからδ139.0 (C-2)、δ93.4 (C-3) の炭素、δ5.16 (H-5) のプロトンからδ59.0 (C-21) の炭素、δ2.43 (H-17) のプロトンからδ175.0 (CO2Me)、δ29.5* (C-15) の炭素、δ1.57 (H-19) プロトンからδ29.5* (C-15) 炭素への相関が認められたことから平面構造を推定した。
ＣＤスペクトルにおいては、281 nmで負のコットン効果を示したことから、１６位はボアカンギンと同様にＳ配置と推定した。さらに本化合物はリジッドな環構造を組むことより、６位、１４位をＲ配置、３位、２１位をＳ配置となる。差ＮＯＥ測定では、δ5.16 (H-5) のプロトンを照射したところ、δ5.27 (H-6)、δ3.69 (H-21) のプロトンにＮＯＥが認められた。これより、５位Ｒ配置と推定した。２０位の立体配置については1Ｈ−ＮＭＲにおいて、２１位のシグナルがシングレットであることから、Ｓ配置と決定した（下図参照）。
【化１１】
以上のスペクトル解析より本化合物は、３，６−オキシドボアカンギンの５β位に水酸基が導入された構造を有する新規化合物と決定した。
【００３７】
２．ＳＫＢ−ＯＨ２８のデータ
EIMS m/z (%) : 398 ([M]+, 27), 75 (100),
HR-EIMS : observed 398.1844, calculated for C22H26N2O5 398.1841,
UV (MeOH)λmax nm (log ε) : 285.0 (3.43), 203.5 (4.01),
CD (MeOH, 24 ℃, c 0.29 mM): Δε(λnm) : 0 (356), -0.24 (320), 0 (306), -0.54 (281), 0 (265), +0.15 (255), 0 (251), -0.26 (241), 0 (231), +2.38 (217),
1H-NMR (600 MHz, CDCl3): 7.53 (1H, br-s, NH), 7.13 (1H, d, J=8.8 Hz, H-12), 7.01 (1H, d, J=2.5 Hz, H-9), 6.80 (1H, dd, J=8.8, 2.5 Hz, H-11), 5.27 (1H, s, H-6), 5.24 (1H, d, J=3.8 Hz, H-3), 5.16 (1H, s, H-5), 3.88 (3H, s, CO2Me), 3.84 (3H, s, 10-OMe), 3.69 (1H, br-d, J=2.8 Hz, H-21), 2.43 (1H, br-d, J=14.0 Hz, H-17), 2.30 (1H, br-s, H-14), 2.13 (1H, br-ddd, J=14.0, 3.0, 3.0 Hz, H-17), 1.91 (1H, m, H-15), 1.57 (1H, m, H-19), 1.41 (1H, dq, J=13.8, 7.1 Hz, H-19), 1.30 (1H, m, H-20), 1.08 (1H, m, H-15), 0.89 (3H, dd, J=7.1, 7.1 Hz, H3-18),
13C-NMR (150 MHz, CDCl3): 175.0 (CO2Me), 154.7 (C-10), 139.0 (C-2), 130.0 (C-13), 128.8 (C-8), 127.1 (C-7), 112.6 (C-11), 111.7 (C-12), 99.5 (C-9), 93.4 (C-3), 92.7 (C-5), 74.9 (C-6), 59.0 (C-21), 55.9 (10-OMe), 53.0*1 (C-16), 52.9*1 (CO2Me), 38.4 (C-20), 32.4 (C-17), 29.7*2 (C-14), 29.5*2 (C-15), 26.6 (C-19), 11.7 (C-18), *1, *2： interchangeable
【００３８】
実施例５ カンナビノイド受容体阻害作用の測定
実施例１の抽出操作で得られたメタノールエキス（抽出物）および実施例２〜４で得られた３種類のアルカロイドについてカンナビノイド受容体阻害作用を測定した。
各試料をメタノールに溶解し、メタノール溶液（実施例１からのメタノールエキスについては１０ｍｇ／ｍＬ、実施例２〜４の同定された化合物については１０ｍＭ）を作成した。次にこの溶液をＤＭＥＭ／Ｆ１２培地で１００倍に希釈し、試料溶液を７つの濃度に調整し、マイクロプレートに各濃度の試料溶液１０μＬを分注した。そこに９０μＬのカンナビノイド受容体１と発光タンパク質であるイクオリンおよびＧα１６を安定的に発現させた細胞を加えた。その後、代表的なＣＢ１受容体アンタゴニストであるＣＰ５５９４０（Ｔｏｃｒｉｓ社製：ＣＡＳ Ｎｏ．８３００２−０４−４、最終濃度が２×１０-6Ｍ)を添加し、その発光強度（ＲＬＵ）をＦＤＳＳ７０００（浜松フォトニクス）を用いて測定し評価した。測定は各試料、各濃度について３ウェルずつ行い、平均値を求めて図１に示した。ＩＣ50値をグラフより求めた。
図１よりＳＫＢ−ＯＨ１１、ＳＫＢ−ＯＨ２３およびＳＫＢ−ＯＨ２８についてＩＣ50を求めたところ、それぞれ２９、７６、５６μｇ／Ｌであった。これはカンナビノイド受容体阻害薬として知られるリモナバン（rimonabant）のＩＣ50：２μｇ／Ｌにくらべても遜色がない活性であった。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、カンナビノイド受容体リガンドとして、特にカンナビノイド受容体（ＣＢ１）アンタゴニストまたはインバースアゴニストとして、並びにカンナビノイド受容体アンタゴニストにより変調される疾患、状態および／または障害を治療するためのその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
カンナビノイド（非特許文献１）はマリファナに含まれる化学物質の総称であり、精神賦活性を有しており、主なものにデルタ−９−テトラヒドロカンナビノールがある。カンナビノイド受容体としては、ＣＢ１およびＣＢ２の２つがこれまでクローン化されている。ＣＢ１は主に中枢神経系に発現し、一方ＣＢ２は末梢組織、主として免疫系に発現される。両受容体ともＧ−タンパク質共役クラスであり、それらの阻害はアデニレートシクラーゼ活性に関連する。
【０００３】
中枢神経系に発現するＣＢ１受容体は食欲に関係すると考えられており、これを阻害することによって、食欲を抑制することができ、肥満などに有効であると考えられる。また、記憶、学習に重要な脳部位にＣＢ１受容体が高密度に分布していることから記憶障害にも関連すると考えられ、認知障害などの疾患に有用であると考えられる。一方、カンナビノイド受容体の阻害剤としてリモナバン（rimonabant）が有名であるが、自殺企図などの副作用が問題となっており、安全性の高い阻害剤は少ない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】日薬理誌（Folia Pharmacol. Jpn.）130, 135-140 (2007)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は上記従来技術の問題点に鑑みてなされたものであって、カンナビノイド受容体阻害作用に優れ、カンナビノイド受容体関連疾患または障害の処置に優れた新規な物質を提供すべく、さまざまな天然由来の物質を検討した結果、ある特定の植物から得られた抽出物及びそれから単離された化合物にこの課題を解決しうる有効な作用を見出し、本発明を完成するに至った。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、鋭意研究を重ねた結果、ボアカンガアフリカーナ（Voacanga africana）由来の物質がカンナビノイド受容体阻害作用を示すことを発見し、本発明を完成させた。
【０００７】
上記課題を解決する本発明は、以下の発明を包含する。
［１］ボアカンガアフリカーナの植物抽出物を含むことを特徴とするカンナビノイド受容体阻害薬。
【０００８】
［２］式（１）：
【化１】
で表されるアルカドイドを含有するカンナビノイド受容体阻害薬。
【０００９】
［３］式（２）：
【化２】
で表されるアルカドイドを含有するカンナビノイド受容体阻害薬。
【００１０】
［４］式（３）：
【化３】
で表されるアルカドイドを含有するカンナビノイド受容体阻害薬。
【００１１】
［５］上記式（１）〜（３）の２または３の混合物を含有するカンナビノイド受容体阻害剤。
【００１２】
［６］カンナビノイド受容体阻害剤を製造するための、上記ボアカンガアフリカーナの植物抽出物、または上記式（１）〜（３）のいずれかの化合物もしくはその混合物の使用。
【００１３】
［７］カンナビノイド受容体関連疾患または障害の患者に、治療上の有効量の上記ボアカンガアフリカーナの植物抽出物、または上記式（１）〜（３）のいずれかの化合物もしくはその混合物を投与することからなるカンナビノイド受容体関連疾患または障害の予防及び／又は治療方法。
【発明の効果】
【００１４】
本発明の植物抽出物および化合物は、ＣＢ１の活性を阻害し、従って、例えば精神病、記憶欠損、認知障害、片頭痛、ニューロパシー、神経炎症性障害、脳血管障害、頭部外傷、不安障害、物質濫用(例えば禁煙)、ストレス、癲癇、パーキンソン病、統合失調症、骨粗鬆症、便秘、慢性偽性腸閉塞、肝臓の硬変、喘息、肥満、および過度の摂食が関連する他の摂食障害を含むが、これらに限定されないＣＢ１関連疾患または障害の処置に有用であることが期待される。
本発明のカンナビノイド受容体リガンドはカンナビノイド受容体の変調と関連した病気の治療に有用である。
【００１５】
本発明のカンナビノイド受容体リガンドは、天然成分のボアカンガアフリカーナ由来の物質であり、副作用の問題が少ない。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】各試料のカンナビノイド受容体阻害活性を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本発明のカンナビノイド受容体リガンドは、ボアカンガアフリカーナ由来で、カンナビノイド受容体阻害作用を示す物質を有効成分として含有する。
【００１８】
本発明で用いるボアカンガアフリカーナの生産地または品種は特に制限されないが、生産地としては例えばガーナが挙げられる。ボアカンガアフリカーナは、粉砕、破砕などにより粉末化処理したものを用いてもよいが、抽出物またはその処理物として用いることが好ましい。
【００１９】
抽出溶媒としては、メタノールが好ましいが、ヘキサン、ジクロロメタン、エタノールなどを使用することもできる。例えば、粉砕した試料５０ｍｇにメタノール１ｍＬを使用して、超音波下で１時間抽出を行ってもよい。
【００２０】
このようにして得られる抽出物は、そのまま本発明のカンナビノイド受容体阻害薬の有効成分として用いることができる。また、当該抽出物をイオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー、透析等の各種精製手段により処理し、さらに活性を高めた処理物として用いてもよい。
【００２１】
本発明者らはさらに、メタノール抽出したボアカンガアフリカーナを活性成分の分離精製を行ったところ、次式で表される３種類のアルカロイドを単離・同定することに成功した。
【化４】
【化５】
【化６】
【００２２】
これら３種類のアルカロイドのカンナビノイド受容体阻害作用は、カンナビノイド受容体阻害薬として知られるリモナバントの阻害活性（ＩＣ50：２μｇ／Ｌ）と比較しても、遜色がないものであることがわかった。
【００２３】
本発明において、これら３種類のアルカロイドの混合物とは、これら３種類の混合物または任意の２種類の混合物を意図し、その含有する比率は特に問わない。
特に断りがなければ、本発明における化合物の立体構造は、立体的に可能ならいずれの立体配置も含みうる。
【００２４】
本発明の植物抽出物、並びに単離された個々の化合物およびその混合物は、抽出エキスもしくは化合物のバルクの形態で、または好ましくは通常の医薬担体もしくは希釈剤で医薬製剤の形態で用いられ得る。投与形態は特定の形態に制限されないが、具体的には例えば、いずれの通常の投与形態、例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤のような経口投与の製剤、経口投与に適した様々な液体製剤、または注射剤、坐剤のような非経口投与用製剤であってもよい。植物抽出物または活性化合物はその製剤の組成物に対して０．１〜７０重量％含まれる。
【００２５】
注射用製剤は通常、液剤、乳濁液、または懸濁液の形態で調製され、無菌化し、更に好ましくは血液に対して等張にされる。液体、乳濁液または懸濁液の形態の製剤は一般的に、通常の医薬希釈剤、例えば、水、エチルアルコール、プロピレングリコール、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルを用いて調製される。これらの製剤には、塩化ナトリウム、ブドウ糖、グリセリンのような等張剤と、等張にするのに十分な量で混合してもよく、更に通常の可溶化剤、緩衝剤、麻酔剤、および適宜、着色剤、保存剤、芳香物質、香料、甘味料、および他の薬剤で混合してもよい。
【００２６】
錠剤、カプセル剤、経口投与用液剤のような製剤は、通常の方法で調製され得る。錠剤は、ゼラチン、デンプン、乳糖、ステアリン酸マグネシウム、タルク、アラビアガムなどのような通常の医薬担体と混合して調製され得る。カプセル剤は、不活性な医薬充填剤または希釈剤と共に混合して調製し、硬ゼラチンカプセルまたは軟カプセルに詰められ得る。シロップ剤またはエリキシル剤のような経口液体製剤は、活性化合物と、甘味料（例えば、ショ糖）、保存剤（例えば、メチルパラベン、プロピルパラベン）、着色料、香料などとを混合して調製する。非経口投与用製剤はまた、通常の方法、例えば本発明の植物抽出物または活性化合物を無菌の水性担体、好ましくは水または生理食塩水溶液に溶解しても調製され得る。非経口投与に適した好ましい液体製剤は、約１〜１００ ｍｇの本発明の植物抽出物または活性化合物を、水および有機溶媒中に、更に分子量３００〜５０００を有するポリエチレングリコール中に溶解して調製し、好ましくは、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン、およびポリビニルアルコールのような滑沢剤と混合される。上記の液体製剤には好ましくは更に、消毒剤（例えば、ベンジルアルコール、フェノール、チメロサール）、殺菌剤、および更に適宜、等張剤（例えば、ショ糖、塩化ナトリウム）、局所麻酔剤、安定化剤、緩衝剤などを加えてよい。安定性を保つために、非経口投与用製剤は、小さな容器に充填し、続いて通常の凍結乾燥技術で水性溶媒を除いてもよく、これを使用に際して水性溶媒に溶解して液体製剤に戻す。
【実施例】
【００２７】
実施例１（ボアカンガアフリカーナの植物抽出物）
１．抽出操作
ボアカンガアフリカーナの根皮（粗粉末）６０１ｇ（乾燥重量）をメタノール（１.７Ｌ×２）に２日間冷浸した後、さらに熱メタノール（７０℃）にて２回（８.５時間、１０.５時間）抽出し、抽出液を減圧下濃縮してメタノールエキス（抽出物）７０.１２ｇを得た。
２．分液操作
メタノールエキス７０.１２ｇを酢酸エチル（０.５Ｌ）に溶解し、１Ｎ ＨＣｌ（０.５Ｌ×３）で抽出した。水層をＮａ2ＣＯ3で塩基性にした後、ＣＨＣｌ3で８回（各０.５Ｌ×８）抽出した。有機層の溶媒を減圧下留去し、ＣＨＣｌ3層から１５.４５ｇの粗塩基を得た。
【００２８】
実施例２（ＳＫＢ−ＯＨ１１（ボアカミン voacamine））
【化７】
１．ＳＫＢ−ＯＨ１１の単離と同定
実施例１で得た粗塩基をシリカゲルオープンカラムに付し、３〜５％メタノール／ＣＨＣｌ3溶出部をシリカゲルフラッシュカラムに付した。その８０％酢酸エチル／ヘキサン溶出部をさらにシリカゲルフラッシュカラム（５％メタノール／酢酸エチル）にて順次精製することにより、ＳＫＢ−ＯＨ１１を１４４１ｍｇ得た。
【００２９】
本化合物は、ＵＶスペクトル（メタノール）において、294.0、287.0、224.5 nmに５−メトキシインドールに特徴的な吸収が認められ、ＦＡＢＭＳ（ＮＢＡ）スペクトルにおいては705 [M+H]+にピークが認められた。1Ｈ−ＮＭＲにおいて、６Ｈ分の芳香族プロトンがδ7.54 (1H，br-d, J=6.8 Hz, H-9')、δ7.04-7.06 (3H, overlapped, H-10', H-11', H-12')、δ6.92 (1H, s, H-9)、δ6.75 (1H, br-s, H-12) に観測された。特徴的なシグナルとして、δ3.99 (3H, s, 10-OMe)にメトキシ基のプロトン、δ3.64 (3H, s, CO2Me)にカルボン酸メチルのプロトン、δ7.70 (1H, br-s, NH) にインドールのＮ−Ｈのプロトンが観測されたことから、ボアカンギン（voacangine）ユニットの存在が示唆された。また、δ2.46 (3H, s, CO2Me') にベンゼン環によって遮蔽され高磁場シフトしたカルボン酸メチルのプロトン、δ2.59 (3H, s, NMe') にＮ-Ｍｅのプロトン、δ5.31 (1H, q, J=6.8 Hz, H-19')およびδ1.65 (3H, d, J=6.5 Hz, H3-18') にエチリデンのプロトン、およびδ7.45 (1H, br-s, N'H) にインドールのＮ−Ｈのプロトンが観測されたことから、ボバシン（vobasine）ユニットの存在が示唆された。
以上のスペクトル解析よりボアカンギンユニットとボバシンユニットからなるビスインドールアルカロイドと推定した。両ユニットの結合様式については、δ6.92 (H-9)、δ6.75 (H-12)にシングレットの芳香族プロトンのシグナルが２本観測されたことからボアカンギンユニットのパラの位置関係にプロトンが存在すると考え、ボアカンギンユニットの１１位と、ボバシンユニットの３’位が結合していると推定した。従って、本化合物をボアカミンと推定し、各種スペクトルデータを下記の文献(１）〜（３）と比較したところ一致したので、本化合物をボアカミンと確認した。
（１） H. Achenbach and E. Schaller，Chem. Ber.，1976，109，3527-3536．
（２） W. L. B. Medeiros，I. J. C. Vieira，L. Mathias，R. B-Filho，K. Z. Leal，E. R-Filho，and J. Schripsema，Magn. Reson. Chem.，1999，37，676-681．
（３） V. Agwada，M. B. Patel，M. Hesse，and H. Schmid，Helv. Chim. Acta，1970，53，1567-1577．
【００３０】
２．ＳＫＢ−ＯＨ１１のデータ
FABMS(NBA) m/z : 705 [M+H]+,
UV (MeOH)λmax nm : 294.0, 287.0, 224.5,
[α]D25 : -66 (c 0.6, CHCl3),
CD (MeOH, 24 ℃, c 0.13 mM): Δε(λnm) : 0 (321), -8.33 (306), 0 (300), +11.72 (297), 0 (291), +1.68 (288), 0 (287), -7.73 (278), 0 (264), +58.81 (240), 0 (234), -97.80 (223), 0 (208),
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 7.70 (1H, br-s, NH), 7.54 (1H, br-d, J=6.8 Hz, H-9'), 7.45 (1H, br-s, N'H), 7.04-7.06 (3H, overlapped, H-10', H-11', H-12'), 6.92 (1H, s, H-9), 6.75 (1H, br-s, H-12), 5.31 (1H, q, J=6.8 Hz, H-19'), 5.13 (1H, br-d, J=12.0 Hz, H-3'), 4.04 (1H, m, H-5'), 3.99 (3H, s, 10-OMe), 3.70-3.79 (2H, overlapped, H-15', H-21'), 3.64 (3H, s, CO2Me), 3.50 (1H, s, H-21), 3.48 (1H, m, H-6'), 3.35 (1H, m, H-5), 3.07-3.23 (3H, overlapped, H-5, H-6, H-6'), 2.85-2.99 (3H, overlapped, H-3, H-6, H-21'), 2.70-2.73 (2H, overlapped, H-3, H-16'), 2.59 (3H, s, NMe'), 2.58 (1H, m, H-14'), 2.48 (1H, m, H-17), 2.46 (3H, s, CO2Me'), 1.98 (1H, br-d, J=13.2 Hz, H-14'), 1.80 (1H, m, H-14), 1.70-1.76 (2H, overlapped, H-15, H-17), 1.65 (3H, d, J=6.5 Hz, H3-18'), 1.53 (1H, m, H-19), 1.41 (1H, m, H-19), 1.28 (1H, m, H-20), 1.07 (1H, m, H-15), 0.87 (3H, dd, J=7.3, 7.3 Hz, H3-18),
13C-NMR (125 MHz, CDCl3): 175.2 (CO2Me), 171.6 (CO2Me'), 150.9 (C-10), 138.1 (C-2', C-20'), 137.2 (C-2), 135.8 (C-13'), 130.2 (C-13), 130.0 (C-8'), 129.8 (C-11), 127.3 (C-8), 121.5 (C-11'), 118.9 (C-10'), 118.8 (C-19'), 117.5 (C-9'), 110.3 (C-12), 110.0 (C-7, C-7'), 109.8 (C-12'), 92.2 (C-9), 59.9 (C-5'), 57.2 (C-21), 56.1 (10-OMe), 54.9 (C-16), 53.1 (C-5), 52.5 (CO2Me, C-21'), 51.8 (C-3), 49.9 (CO2Me'), 47.1 (C-16'), 42.4 (NMe'), 39.0 (C-20), 37.3 (C-3'), 36.5 (C-17), 36.4 (C-14'), 33.6 (C-15'), 32.0 (C-15), 26.7 (C-19), 27.3 (C-14), 22.2 (C-6), 19.4 (C-6'), 12.3 (C-18'), 11.6 (C-18)
【００３１】
実施例３（ＳＫＢ−ＯＨ２３（３，６−オキシドボアカンギン 3,6-oxidovoacangine））
【化８】
１．ＳＫＢ−ＯＨ２３の単離と同定
実施例１で得た粗塩基をシリカゲルオープンカラムに付し、３〜５％メタノール／ＣＨＣｌ3溶出部をシリカゲルフラッシュカラムに付した。その４０％酢酸エチル／ヘキサン溶出部をさらにシリカゲルフラッシュカラム（２０〜３０％酢酸エチル／ヘキサン）、ＮＨ−ＳｉＯ2オープンカラム（２０〜３０％酢酸エチル／ヘキサン)、ＮＨ−ＳｉＯ2ペンシルカラム（２５％酢酸エチル／ヘキサン）、ＳｉＯ2オープンカラム（１０％酢酸エチル／ＣＨＣｌ3）にて順次精製することにより、ＳＫＢ−ＯＨ２３を６.８ｍｇ得た。
【００３２】
本化合物は、ＵＶスペクトル（メタノール）において、288.0、206.5 nmに５−メトキシインドールに特徴的な吸収が認められ、ＥＩＭＳスペクトルにおいてはボアカンギンより14マス大きい382 [M]+ にピークが認められた。1Ｈ−ＮＭＲにおける特徴的なシグナルとして、δ5.17 (1H，d，J=3.3 Hz，H-6) に酸素が結合したベンジル位のメチンプロトン、δ4.98 (1H，d，J=4.6 Hz，H-3) にアミナールのメチンプロトンのシグナルが観測された。13Ｃ−ＮＭＲにおいては、ボアカンギンでδ51.5 (C-3)、δ22.2 (C-6) に観測されたシグナルがそれぞれ本化合物では、δ93.7 (C-3)、δ69.0 (C-6) へと大きく低磁場シフトして観測された。1Ｈ−1Ｈ ＣＯＳＹ測定において、δ7.13 (H-12) のプロトンとδ6.78 (H-11) のプロトン間、δ5.17 (H-6) のプロトンとδ3.47-3.48 (H2-5) のプロトン間、δ4.98 (H-3) のプロトンとδ2.30 (H-14) のプロトン間、δ1.90 (H-15)のプロトンとδ1.27 (H-20)のプロトン間、δ1.57 (H-19)のプロトンとδ0.88 (H3-18)のプロトン間に相関が認められた。ＨＭＢＣ測定において、δ3.87 (CO2Me) のプロトンからδ175.6 (CO2Me) の炭素への相関からカルボン酸メチルの存在、δ0.88 (H3-18)のプロトンからδ38.8 (C-20) の炭素への相関から孤立したエチル基の存在、δ3.84 (10-OMe) のプロトンからδ154.5 (C-10)の炭素への相関から芳香環上のメトキシ基の存在が確認された。さらに、δ7.13 (H-12) のプロトンからδ154.5 (C-10) の炭素への相関、およびδ6.98 (H-9) のプロトンからδ117.6 (C-7) の炭素への相関からメトキシ基が１０位に存在すると推定した。他にδ5.17 (H-6) のプロトンからδ126.9 (C-8)、δ93.7 (C-3) の炭素、δ3.54 (H-21) のプロトンからδ60.5 (C-6)、δ26.5 (C-19) の炭素、δ1.10 (H-15) のプロトンからδ31.4 (C-17) の炭素、δ2.41 (H-17) のプロトンからδ175.6 (CO2Me) の炭素への相関が認められたことから、標題に示した基本構造であると推定した。ＣＤスペクトルにおいて、265 nmで負のコットン効果を示したことから、１６位はボアカンギンと同様にＳ配置と推定した。さらに本化合物はリジッドな環構造を組むことより、３位Ｓ配置、６位Ｒ配置、１４位Ｒ配置、２１位Ｓ配置となる。このことは、差ＮＯＥ測定において、δ4.98 (H-3) のプロトンを照射した際、δ5.17 (H-6)、δ3.47-3.48 (H-5)、δ2.30 (H-14)、δ1.10 (H-15) のプロトンにＮＯＥが認められたことからも確認した。また、1Ｈ−ＮＭＲにおいて、２１位のシグナルがシングレットであることから、２０位の立体配置をＳ配置と推定した。以上のスペクトル解析より３，６−オキシドボアカンギンと推定し、各種スペクトルデータを下記の文献（４）と比較したところ一致したので、本化合物を３，６−オキシドボアカンギンと確認した。
（４） N. Ghorbel，M. Damak，A. Ahond，E. Philogene，C. Poupat，P. Potier，and H. Jacquemin，J. Nat. Prod.，1981，44，717-721．
【００３３】
２．ＳＫＢ−ＯＨ２３のデータ
EIMS m/z (%) : 382 ([M]+, 42), 135 (100),
UV (MeOH)λmax nm (log ε) : 288.0 (3.68), 206.5 (4.26),
CD (MeOH, 24 ℃, c 0.29 mM): Δε(λnm) : 0 (321), +0.31 (311), 0 (292), -0.78 (265), 0 (249), +2.79 (224), 0 (212),
1H-NMR (500 MHz, CDCl3): 7.47 (1H, br-s, NH), 7.13 (1H, d, J=8.8 Hz, H-12), 6.98 (1H, d, J=2.2 Hz, H-9), 6.78 (1H, dd, J=8.8, 2.2 Hz, H-11), 5.17 (1H, d, J=3.3 Hz, H-6), 4.98 (1H, d, J=4.6 Hz, H-3), 3.87 （3H, s, CO2Me), 3.84 (3H, s, 10-OMe), 3.54 (1H, br-s, H-21), 3.47-3.48 (2H, overlapped, H2-5), 2.41 (1H, br-d, J=14.0 Hz, H-17), 2.30 (1H, m, H-14), 2.15 (1H, br-ddd, J=14.0, 4.2, 2.8 Hz, H-17), 1.90 (1H, ddd, J=13.0, 9.5, 4.4 Hz, H-15), 1.57 (1H, m, H-19), 1.40 (1H, m, H-19), 1.27 (1H, m, H-20), 1.10 (1H, br-dd, J=13.0, 7.5 Hz, H-15), 0.88 (3H, dd, J=7.5, 7.5 Hz, H3-18)
13C-NMR (125 MHz, CDCl3): 175.6 (CO2Me), 154.5 (C-10), 138.6 (C-2), 128.8 (C-13), 126.9 (C-8), 117.6 (C-7), 112.0 (C-11), 111.6 (C-12), 99.4 (C-9), 93.7 (C-3), 69.0 (C-6), 60.5 (C-5), 59.6 (C-21), 55.9 (10-OMe), 54.1 (C-16), 52.8 (CO2Me), 38.8 (C-20), 31.4 (C-17), 29.9 (C-14), 29.8 (C-15), 26.5 (C-19), 11.6 (C-18)
【００３４】
実施例４（ＳＫＢ−ＯＨ２８）
【化９】
１．ＳＫＢ−ＯＨ２８の単離と構造決定
実施例１で得た粗塩基をシリカゲルオープンカラムに付し、３〜５％メタノール／ＣＨＣｌ3溶出部をシリカゲルフラッシュカラムに付した。その１０％メタノール／酢酸エチル溶出部をさらにシリカゲルフラッシュカラム（３％メタノール／ＣＨＣｌ3）、ＮＨ−ＳｉＯ2オープンカラム（４０％酢酸エチル／ヘキサン）、ＳｉＯ2フラッシュカラム（３％メタノール／ＣＨＣｌ3）にて順次精製することによりＳＫＢ−ＯＨ２８を１.４ｍｇ得た。
【００３５】
本化合物は、ＵＶスペクトル（メタノール）において、285.0、203.5 nmに５−メトキシインドールに特徴的な吸収が認められた。またＥＩＭＳスペクトルにおいて、３，６−オキシドボアカンギン（ＳＫＢ−ＯＨ２３）より16マス大きい398 [M]+ にピークが認められ、高分解能ＥＩＭＳスペクトルの結果、分子式C22H26N2O5が得られた。1Ｈ−ＮＭＲ (600 MHz，CDCl3)、13Ｃ−ＮＭＲ (150 MHz，CDCl3) は、ともに３，６−オキシドボアカンギンとよく類似したチャートを与えた。1Ｈ−ＮＭＲにおいて、３，６−オキシドボアカンギンでδ3.47-3.48 (H2-5)に観測された５位メチレンプロトンが１Ｈ分しか認められず、さらにδ5.16 (H-5) へ低磁場シフトして観測された。また13Ｃ−ＮＭＲにおいて、５位炭素のシグナルが低磁場シフトして観測されたことから、本化合物は３，６−オキシドボアカンギンの５位に水酸基が導入された構造を有すると推定した。1Ｈ−1Ｈ ＣＯＳＹ測定において、δ7.13 (H-12)のプロトンとδ6.80 (H-11)のプロトン間、δ5.24 (H-3) のプロトンとδ2.30 (H-14) のプロトン間、δ1.41 (H-19)のプロトンとδ0.89 (H3-18)のプロトン間に相関が認められた（下図参照）。
【化１０】
【００３６】
ＨＭＢＣ測定において、δ3.88 (CO2Me) のプロトンからδ175.0 (CO2Me) の炭素への相関からカルボン酸メチルの存在、δ0.89 (H3-18)のプロトンからδ38.4 (C-20) の炭素への相関から孤立したエチル基の存在、δ3.84 (10-OMe) のプロトンからδ154.7 (C-10)の炭素への相関から芳香環上のメトキシ基の存在が確認された。さらに、δ7.13 (H-12)のプロトンからδ154.7 (C-10)の炭素への相関からメトキシ基が１０位に存在すると推定した。他にδ5.27 (H-6) のプロトンからδ139.0 (C-2)、δ93.4 (C-3) の炭素、δ5.16 (H-5) のプロトンからδ59.0 (C-21) の炭素、δ2.43 (H-17) のプロトンからδ175.0 (CO2Me)、δ29.5* (C-15) の炭素、δ1.57 (H-19) プロトンからδ29.5* (C-15) 炭素への相関が認められたことから平面構造を推定した。
ＣＤスペクトルにおいては、281 nmで負のコットン効果を示したことから、１６位はボアカンギンと同様にＳ配置と推定した。さらに本化合物はリジッドな環構造を組むことより、６位、１４位をＲ配置、３位、２１位をＳ配置となる。差ＮＯＥ測定では、δ5.16 (H-5) のプロトンを照射したところ、δ5.27 (H-6)、δ3.69 (H-21) のプロトンにＮＯＥが認められた。これより、５位Ｒ配置と推定した。２０位の立体配置については1Ｈ−ＮＭＲにおいて、２１位のシグナルがシングレットであることから、Ｓ配置と決定した（下図参照）。
【化１１】
以上のスペクトル解析より本化合物は、３，６−オキシドボアカンギンの５β位に水酸基が導入された構造を有する新規化合物と決定した。
【００３７】
２．ＳＫＢ−ＯＨ２８のデータ
EIMS m/z (%) : 398 ([M]+, 27), 75 (100),
HR-EIMS : observed 398.1844, calculated for C22H26N2O5 398.1841,
UV (MeOH)λmax nm (log ε) : 285.0 (3.43), 203.5 (4.01),
CD (MeOH, 24 ℃, c 0.29 mM): Δε(λnm) : 0 (356), -0.24 (320), 0 (306), -0.54 (281), 0 (265), +0.15 (255), 0 (251), -0.26 (241), 0 (231), +2.38 (217),
1H-NMR (600 MHz, CDCl3): 7.53 (1H, br-s, NH), 7.13 (1H, d, J=8.8 Hz, H-12), 7.01 (1H, d, J=2.5 Hz, H-9), 6.80 (1H, dd, J=8.8, 2.5 Hz, H-11), 5.27 (1H, s, H-6), 5.24 (1H, d, J=3.8 Hz, H-3), 5.16 (1H, s, H-5), 3.88 (3H, s, CO2Me), 3.84 (3H, s, 10-OMe), 3.69 (1H, br-d, J=2.8 Hz, H-21), 2.43 (1H, br-d, J=14.0 Hz, H-17), 2.30 (1H, br-s, H-14), 2.13 (1H, br-ddd, J=14.0, 3.0, 3.0 Hz, H-17), 1.91 (1H, m, H-15), 1.57 (1H, m, H-19), 1.41 (1H, dq, J=13.8, 7.1 Hz, H-19), 1.30 (1H, m, H-20), 1.08 (1H, m, H-15), 0.89 (3H, dd, J=7.1, 7.1 Hz, H3-18),
13C-NMR (150 MHz, CDCl3): 175.0 (CO2Me), 154.7 (C-10), 139.0 (C-2), 130.0 (C-13), 128.8 (C-8), 127.1 (C-7), 112.6 (C-11), 111.7 (C-12), 99.5 (C-9), 93.4 (C-3), 92.7 (C-5), 74.9 (C-6), 59.0 (C-21), 55.9 (10-OMe), 53.0*1 (C-16), 52.9*1 (CO2Me), 38.4 (C-20), 32.4 (C-17), 29.7*2 (C-14), 29.5*2 (C-15), 26.6 (C-19), 11.7 (C-18), *1, *2： interchangeable
【００３８】
実施例５ カンナビノイド受容体阻害作用の測定
実施例１の抽出操作で得られたメタノールエキス（抽出物）および実施例２〜４で得られた３種類のアルカロイドについてカンナビノイド受容体阻害作用を測定した。
各試料をメタノールに溶解し、メタノール溶液（実施例１からのメタノールエキスについては１０ｍｇ／ｍＬ、実施例２〜４の同定された化合物については１０ｍＭ）を作成した。次にこの溶液をＤＭＥＭ／Ｆ１２培地で１００倍に希釈し、試料溶液を７つの濃度に調整し、マイクロプレートに各濃度の試料溶液１０μＬを分注した。そこに９０μＬのカンナビノイド受容体１と発光タンパク質であるイクオリンおよびＧα１６を安定的に発現させた細胞を加えた。その後、代表的なＣＢ１受容体アンタゴニストであるＣＰ５５９４０（Ｔｏｃｒｉｓ社製：ＣＡＳ Ｎｏ．８３００２−０４−４、最終濃度が２×１０-6Ｍ)を添加し、その発光強度（ＲＬＵ）をＦＤＳＳ７０００（浜松フォトニクス）を用いて測定し評価した。測定は各試料、各濃度について３ウェルずつ行い、平均値を求めて図１に示した。ＩＣ50値をグラフより求めた。
図１よりＳＫＢ−ＯＨ１１、ＳＫＢ−ＯＨ２３およびＳＫＢ−ＯＨ２８についてＩＣ50を求めたところ、それぞれ２９、７６、５６μｇ／Ｌであった。これはカンナビノイド受容体阻害薬として知られるリモナバン（rimonabant）のＩＣ50：２μｇ／Ｌにくらべても遜色がない活性であった。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ボアカンガアフリカーナの植物抽出物を含むことを特徴とするカンナビノイド受容体阻害薬。
【請求項２】
式（１）：
【化１】
で表されるアルカドイドを含有するカンナビノイド受容体阻害薬。
【請求項３】
式（２）：
【化２】
で表されるアルカドイドを含有するカンナビノイド受容体阻害薬。
【請求項４】
式（３）：
【化３】
で表されるアルカドイドを含有するカンナビノイド受容体阻害薬。
【請求項１】
ボアカンガアフリカーナの植物抽出物を含むことを特徴とするカンナビノイド受容体阻害薬。
【請求項２】
式（１）：
【化１】
で表されるアルカドイドを含有するカンナビノイド受容体阻害薬。
【請求項３】
式（２）：
【化２】
で表されるアルカドイドを含有するカンナビノイド受容体阻害薬。
【請求項４】
式（３）：
【化３】
で表されるアルカドイドを含有するカンナビノイド受容体阻害薬。
【図１】
【公開番号】特開２０１１−１２１８９５（Ｐ２０１１−１２１８９５Ａ）
【公開日】平成２３年６月２３日（２０１１．６．２３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−２８０２９１（Ｐ２００９−２８０２９１）
【出願日】平成２１年１２月１０日（２００９．１２．１０）
【出願人】（５９７１２８００４）国立医薬品食品衛生研究所長 (22)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２３年６月２３日（２０１１．６．２３）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年１２月１０日（２００９．１２．１０）
【出願人】（５９７１２８００４）国立医薬品食品衛生研究所長 (22)
【Ｆターム（参考）】
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