ポリコサノールナノ粒子
本発明は、ナノ粒子ポリコサノール、これらの粒子を含む製剤、並びに様々な疾患及び状態の治療及び予防へのこれらの粒子及び製剤の使用方法を提供する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本出願は、２００９年２月２３日に出願された米国仮特許出願第６１／１５４，７１２号に対する優先権の恩典を主張するものであり、これはその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明は、少なくとも１つのポリコサノールを含むナノ粒子組成物、新規のナノ粒子ポリコサノール製剤、及びその使用に関する。様々な実施形態では、ナノ粒子ポリコサノール粒子は、約１００ｎｍ未満の有効平均粒子サイズを有する。
【背景技術】
【０００３】
ポリコサノールは、サトウキビなどの植物源から得られる濃縮長鎖Ｎ−アルキルアルコールの複合混合物である。ポリコサノールが健康なボランティアの血清脂質レベル及び血清リポタンパク質レベルに与える効果を調べたキューバでの初期研究から、２〜４０ｍｇ／ｄの投薬量でポリコサノールを投与することにより、血清脂質レベル及び血清リポタンパク質レベルが低下し（Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｔｈｅｒ．Ｒｅｓ．Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．１９９２；５１：５６８）、高コレステロール血症が軽減する（Ｐｏｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｔｈｅｒ．Ｒｅｓ．Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．；１９９２；５２：５０７）ことが示された。しかしながら、数々のその後の研究にもかかわらず、キューバ国外の研究者は、もとの研究と共になされた主張を確認することができなかった。血清脂質／コレステロールレベルに対するポリコサノールの無効性は、同業者による審査のある評判の高い専門誌において包括的に実証されている。
【０００４】
例えば、Ｆｒａｎｃｉｎｉ−Ｐｅｓｅｎｔｉと共同研究者らは、高コレステロール血症の対象に対してポリコサノールの二重盲検ランダム化プラセボ対照試験を実施し、１０ｍｇ／ｄ及び２０ｍｇ／ｄのポリコサノールの投与では脂質低下効果が示されないという結論を下した（Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ Ｔｈｅｒ．Ｍｅｄ．；２００８；１６（２）：６１；及びＰｈｙｔｏｔｈｅｒ．Ｒｅｓ．；２００８；２２（３）：３１８）。同様の盲検プラセボ対照試験において、Ｂｅｒｔｈｏｌｄと共同研究者らは、１０、２０、４０及び８０ｍｇ／ｄのポリコサノール投与では、プラセボが投与された対象で見られる血清脂質レベルよりも血清脂質レベルが低くならないことを示した（ＪＡＭＡ；２００６；２９５（１９）：２２６２）。Ｄｕｌｌｅｎｓらは、個々のポリコサノール成分（Ｃ２４、Ｃ２６、Ｃ２８、又はＣ３０）でも、天然のポリコサノール混合物（全成分、３０ｍｇ／１００ｇ食餌）でも、ＬＤＬ受容体ノックアウトマウスの血清コレステロール濃度は低下しないことを見出した（Ｊ．Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ．；２００８；４９（４）：７９０）。Ｋａｓｓｉｓと共同研究者らは、ヒトの高コレステロール血症の治療におけるキューバのサトウキビポリコサノールの有効性を１０ｍｇ／ｄの投薬量で研究し、ポリコサノールに高コレステロール血症対象の脂質指標に対する有益な効果がないという結論を下した（Ａｍ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｎｕｔｒ．；２００６；８４（５）：１００３）。Ｌｉｎと共同研究者らは、正常から軽度に上昇した血漿コレステロールを有する対象において２０ｍｇ／ｄの投薬量のコムギ胚芽ポリコサノールの効果を研究したが、血漿コレステロールの低下は検出されなかった（Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ；２００４；５３（１０）：１３０９）。Ｌｕｋａｓｈｅｖｉｃｈらは、錠剤又は軟質ゲル製剤として毎日投与した蜜蝋ポリコサノール（１０ｍｇ又は４０ｍｇ）に、軽度から中程度の高コレステロール血症の対象の血清脂質に対する効果がないことを見出した（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ；２００６；１１４：８９２）。Ｍｕｒｐｈｙらは、ウサギにヒマワリ油由来のポリコサノールを食餌補給しても、コレステロール低下効果がないことを見出した（Ｊ．Ａｍ．Ｃｏｌｌｅｇｅ Ｎｕｔｒ；２００８；２７（４）：４７６）。
【０００５】
従って、キューバ人の研究の初期の一見前途有望そうな結果にもかかわらず、同時期に行なわれた盲検プラセボ対照試験から到達せざるを得ない結果は、当該技術分野で認められているポリコサノール製剤は、血清脂質／コレステロールレベルの調節に効果がないということである。
【０００６】
他の代謝パラメータ及び生理的パラメータに対するポリコサノール製剤の有用性に関する研究も同様に否定的な結果を生んでいる。例えば、ポリコサノールは、血糖レベル、血糖管理（Ｃｒｅｓｐｏ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．；１９９９：１１７）又は糖尿病状態（Ｓｈｉｎｂｏｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ；２００７；１３９−１４４）に対して効果がないことが示された。
【０００７】
キューバ人の研究で使用されたポリコサノールの組成物又は製剤が、キューバ人の研究と他の研究者の研究の矛盾した結果の原因であるかどうかに関して、しばらくの間、論争が存在した。この論争は、独創的な研究において解消された（Ｋａｓｓｉｓ，Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ（２００７），９７，３８１−３８８；Ｋａｓｓｉｓ，Ｌｉｐｉｄｓ Ｈｅａｌｔｈ Ｄｉｓ．（２００８）；７：１７；Ｋａｓｓｉｓ， Ａｐｐｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｎｕｔｒ．Ｍｅｔａｂ；（２００８）；３３（３）：５４０及びＤｕｌｌｅｎｓ， Ｊ．Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ．（２００８），４９：７９０）。これらの研究者は、キューバ人の研究で使用された製剤を含む、利用された様々なサトウキビ由来のポリコサノール製剤を調べた。彼らの研究により、試験したポリコサノール製剤の中に、対照と比べてヒト又は動物における脂質パラメータを有意に改善するものはないという結論が下された。さらに、ＬＤＬ酸化のインビボ評価により、ベースライン及び対照と比べた酸化ＬＤＬ濃度の有意な変化は示されなかった。このように、２００８年の半ばの時点で、キューバのサトウキビポリコサノール製剤及び他のサトウキビポリコサノール製剤の血清脂質低下効果に関する論争は、キューバ国外で解決されている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、ポリコサノールのナノ粒子及びナノ粒子製剤並びにこのナノ粒子及び製剤を作製する方法を提供する。極めて驚くべきことに、本発明のポリコサノール製剤は、コレステロールと血清脂質を減少させ、収縮期血圧と拡張期血圧を低下させる。さらに、本発明の製剤は、抗酸化効果を発揮し、インスリン抵抗性及びその結果を軽減し、ビタミンＣレベルを上昇させ、血糖レベルを調節する。従って、本発明はまた、本発明の製剤を対象に投与することによって疾患を治療し、代謝を調節する方法を提供する。本発明はまた、代謝を調節し、高血圧症、高コレステロール血症及びいくつかの他の疾患を治療する方法を提供する。例えば、本発明の製剤は、インビボのタンパク質酸化を制御し、血中グルコースレベルを調節するのに有用であり、インスリン抵抗性及びその結果、例えば、糖尿病、及びその有害な下流効果を治療及び予防するために用いることができる。さらに、本発明の製剤は、対象のインビボのビタミンＣレベルの調節に有用である。
【０００９】
従って、様々な実施形態において、本発明は、ポリコサノールのナノ粒子を提供する。典型的な本発明のナノ粒子は、約６０％〜約９５％、例えば、約７０％〜約９５％のオクタコサノールを含むポリコサノール画分と、安定剤画分とを含む。例示的な実施形態では、安定剤画分は、ポリ（エチレングリコール）エステルを含む。様々な実施形態では、安定剤画分は、トコフェリルエステルを含む。安定剤画分の例示的な成分は、トコフェリルポリ（エチレングリコール）エステル、例えば、トコフェリルポリエチレングリコール（１０００）スクシネート（「ＴＰＧＳ」）を含む。例示的な本発明のナノ粒子は、約１００ｎｍ未満の直径を有する。
【００１０】
本発明の他の目的、利点、及び実施形態を以下の詳細な説明に示す。
【００１１】
以下に明確される内容と同様に、本発明の上述の特性、利点及び目的が達成され、また、詳細に理解されるように、上で簡潔に要約された本発明のより具体的な説明は、添付の図面で示されるその特定の実施形態を参照してなされ得る。これらの図面は、本明細書の一部を形成する。しかしながら、添付の図面は、本発明の好ましい実施形態を示すものであり、従って、それらの範囲に限定するものと考えられるべきでないことに留意すべきである。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】他のナノ粒子と比べた本発明の粒子のサイズを示す。
【図２】光散乱で測定される約４８ｎｍのピークを有する本発明のナノ粒子のサイズ分布を示す。
【図３】光散乱で測定される約５５ｎｍのピークを有する本発明のナノ粒子のサイズ分布を示す。
【図４】光散乱で測定される約５３ｎｍのピークを有する本発明のナノ粒子のサイズ分布を示す。
【図５】未処理のラット並びに１ｍｇ／ｋｇ及び２ｍｇ／ｋｇの本発明の粒子で処理したラットにおけるインスリン抵抗性のレベルを示す。
【図６】未処理のラット及び本発明の粒子で処理したラットにおけるアディポネクチンの血漿レベルを示す。
【図７】未処理のラット並びに１ｍｇ／ｋｇ及び２ｍｇ／ｋｇの本発明の粒子で処理したラットにおけるアルカリホスファターゼの血中レベルを示す。
【図８】未処理のラット並びに１ｍｇ／ｋｇ及び２ｍｇ／ｋｇの本発明の粒子で処理したラットにおける総コレステロール／ＨＤＬ比のレベルを示す。
【図９】未処理のラット並びに１ｍｇ／ｋｇ及び２ｍｇ／ｋｇの本発明の粒子で処理したラットにおけるＣ反応性タンパク質の血中レベルを示す。
【図１０】未処理のラット及び本発明の粒子で処理したラットにおける空腹時血中グルコースレベルを示す。
【図１１】未処理のラット及び本発明の粒子で処理したラットにおけるグルタチオンレベルを示す。
【図１２】未処理のラット及び本発明の粒子で処理したラットにおけるグリコシル化ヘモグロビン（ＨｂＡ１ｃ）レベルを示す。
【図１３】未処理のラット及び本発明の粒子で処理したラットにおけるＨＤＬレベルを示す。
【図１４】未処理のラット及び本発明の粒子で処理したラットにおけるＩＣＡＭ−１（細胞間接着分子）レベルを示す。
【図１５】未処理のラット及び本発明の粒子で処理したラットにおけるＭＣＰ−１（単球走化性タンパク質−１）レベルを示す。
【図１６】未処理のラット及び本発明の粒子で処理したラットにおける血漿Ｈ２Ｓ（硫化水素）のレベルを示す。
【図１７】未処理のラット及び本発明の粒子で処理したラットにおけるＰＡＩ−１（プラスミノーゲン活性化インヒビター）レベルを示す。
【図１８】未処理のラット及び本発明の粒子で処理したラットにおける一酸化窒素レベルを示す。
【図１９】未処理のラット及び本発明の粒子で処理したラットにおけるタンパク質酸化レベルを示す。
【図２０】未処理のラット及び本発明の粒子で処理したラットにおけるランダムなグルコースレベルを示す。
【図２１】未処理のラット及び本発明の粒子で処理したラットにおける赤血球脂質過酸化レベルを示す。
【図２２】未処理のラット及び本発明の粒子で処理したラットにおけるＲＢＰ−４（レチノール結合タンパク質）レベルを示す。
【図２３】未処理のラット及び本発明の粒子で処理したラットにおけるＴＮＦ−α（腫瘍壊死因子）レベルを示す。
【図２４】未処理のラット及び本発明の粒子で処理したラットにおける総コレステロールレベルを示す。
【図２５】未処理のラット及び本発明の粒子で処理したラットにおけるトリグリセリドレベルを示す。
【図２６】未処理のラット及び本発明の粒子で処理したラットにおけるビタミンＣレベルを示す。
【図２７】未処理のラット及び本発明の粒子で処理したラットにおけるウェスタンブロット解析によるＮＦ−κＢ（活性化Ｂ細胞の核因子κ軽鎖エンハンサー）ｐ５０及びｐ６５のタンパク質強度を示す。
【図２８】未処理のラット及び本発明の粒子で処理したラットにおけるｐ−５０−ｎｆ−κｂ／βアクチン比を示す。
【図２９】未処理のラット及び本発明の粒子で処理したラットにおけるｐ−６５−ｎｆ−κｂ／βアクチン比を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
定義
別途指示がない限り、本明細書で用いられる全ての技術用語及び科学用語は、一般に、本発明が属する技術分野の専門家によって共通に理解されるものと同じ意味を有する。
【００１４】
「ポリコサノール」という用語は、濃縮Ｎ−アルキルアルコールの混合物を指す。ポリコサノールの例示的な供給源は、サトウキビ及び蜜蝋である。ポリコサノールは、既知の方法により抽出される。ポリコサノール中の長鎖アルコールは、主に１−オクタコサノール、１−トリアコンタノール、１−テトラコサノール、及び１−ヘキサコサノールである。典型的な市販の商業組成物は、（ａ）１−テトラコサノール：０〜１０％；（ｂ）１−ヘキサコサノール：２〜１５％；（ｃ）１−ヘプタコサノール：０〜０．５％；（ｄ）１−オクタコサノール：５５〜７０％；（ｅ）１−ノナコサノール：０〜１０％；（ｆ）１−トリアコンタノール：５〜２０％；（ｇ）１−ドトリアコンタノール：０．１〜１０％；及び（ｈ）１−テトレートリアコンタノール：０．１〜１０％といった最低９０％の脂肪アルコールから構成される。
【００１５】
「有効平均粒子サイズ」、「粒子サイズ」及び「サイズ」という用語は互換的に用いられる。これらの用語は、光散乱を用いた粒子サイズ評価において生じるピークの頂点に本質的に対応する粒子サイズを指す。本発明の粒子のサイズを決定するための有用な方法は、光散乱に限定されない。
【００１６】
本方法及び製剤は、予防目的又は治療目的で使用され得る。いくつかの実施形態では、任意の疾患もしくは障害を「治療する」又は任意の疾患もしくは障害の「治療」という用語は、疾患又は障害を改善すること（すなわち、疾患又はその臨床症状の少なくとも１つの進行を停止させる又は軽減すること）を指す。他の実施形態では、「治療する」又は「治療」は、対象によって認識されない場合がある少なくとも１つの物理的パラメータを改善することを指す。さらに他の実施形態では、「治療する」又は「治療」は、物理的に（例えば、認識可能な症状の安定化もしくは根絶）、生理的に（例えば、物理的パラメータの安定化もしくは根絶）又はその両方のいずれかで、疾患又は障害を抑制することを指す。また他の実施形態では、「治療する」又は「治療」は、疾患又は障害の発症を遅延させることを指す。
【００１７】
「治療的有効量」は、本発明の方法に言及するとき、本明細書において「に有効な量」と互換的に用いられる。ポリコサノール投薬量に関して用いられるとき、これらの用語は、特定の薬理学的応答を提供する投薬量を指し、この特定の薬理学的応答を得るために、ポリコサノールは、そのような治療を必要とする相当数の対象に投与される。特定の場合に特定の対象に投与される「治療的有効量」は、そのような投薬量が当業者に「治療的有効量」とみなされるとしても、特定の疾患の治療を受ける患者の１００％に有効なものではあり得ず、本明細書に記載の疾患の治療に必ずしも有効であるわけではないことが強調される。ポリコサノール投薬量が、特定の場合には、経口投薬量として、又は血中で測定されるような薬物レベルに関して測定されることがさらに理解されるべきである。
【００１８】
本明細書で用いられる場合、「個体」、「対象」、及び「患者」という用語は、動物、例えば、哺乳動物（例えば、ヒト）を指すために互換的に用いられる。
【００１９】
Ａ．組成物
様々な実施形態では、本発明は、ポリコサノールのナノ粒子を提供する。典型的な本発明のナノ粒子は、約７０％〜９０％のオクタコサノールを含むポリコサノール画分と、安定剤画分とを含む。例示的な実施形態では、安定剤画分は、ポリ（エチレングリコール）エステルを含む。様々な実施形態では、安定剤画分は、トコフェリルエステルを含む。安定剤画分の例示的な成分としては、トコフェリルポリ（エチレングリコール）エステル、例えば、トコフェリルポリエチレングリコール（１０００）スクシネート（「ＴＰＧＳ」）が挙げられる。例示的な本発明のナノ粒子は、約１００ｎｍ未満の直径を有する。薬学的製剤をはじめとする、複数の本発明のナノ粒子を取り込んだ製剤も提供する。
【００２０】
様々な実施形態では、ナノ粒子は、少なくとも約７０％のオクタコサノール、少なくとも約７１％のオクタコサノール、少なくとも約７２％のオクタコサノール、少なくとも約７３％のオクタコサノール、少なくとも約７４％のオクタコサノール、少なくとも約７５％のオクタコサノール、少なくとも約７６％のオクタコサノール、少なくとも約７７％のオクタコサノール、少なくとも約７８％のオクタコサノール、少なくとも約７９％のオクタコサノール、少なくとも約８０％のオクタコサノール、少なくとも約８１％のオクタコサノール、少なくとも約８２％のオクタコサノール、少なくとも約８３％のオクタコサノール、少なくとも約８４％のオクタコサノール、少なくとも約８５％のオクタコサノール、少なくとも約８６％のオクタコサノール、少なくとも約８７％のオクタコサノール、少なくとも約８８％のオクタコサノール、少なくとも約８９％のオクタコサノール、又は少なくとも約９０％のオクタコサノールを含むポリコサノール画分を含む。
【００２１】
様々な実施形態では、ナノ粒子は、約９０％以下のオクタコサノール、約８９％以下のオクタコサノール、約８８％以下のオクタコサノール、約８７％以下のオクタコサノール、約８６％以下のオクタコサノール、約８５％以下のオクタコサノール、約８４％以下のオクタコサノール、約８３％以下のオクタコサノール、約８２％以下のオクタコサノール、約８１％以下のオクタコサノール、約８０％以下のオクタコサノール、約７９％以下のオクタコサノール、７８％以下のオクタコサノール、７７％以下のオクタコサノール、７６％以下のオクタコサノール、７５％以下のオクタコサノール、７４％以下のオクタコサノール、７３％以下のオクタコサノール、７２％以下のオクタコサノール、又は７１％以下のオクタコサノールを含むポリコサノール画分を含む。
【００２２】
例示的な実施形態では、ナノ粒子は、約７０％〜約９０％、約７１％〜約８９％、約７２％〜約８８％、約７３％〜約８７％、約７４％〜約８６％、約７５％〜約８５％、約７６％〜約８４％、約７７％〜約８３％、約７８％〜約８２％、約７９％〜約８１％、又は約８０％のオクタコサノールを有するポリコサノール画分を含む。
【００２３】
様々な実施形態では、ポリコサノール画分は、オクタコサノールとトリアコンタノールの両方を含む。例示的な実施形態では、使用されるポリコサノールは、約８：１〜約１７：１、約９：１〜約１６：１、約１０：１〜約１５：１、約１１：１〜約１４：１、約１２：１〜約１３：１、約８：１〜約１５：１、約８：１〜約１３：１、約８：１〜約１１：１、又は約８：１〜約９：１のオクタコサノール：トリアコンタノール比を有する。
【００２４】
様々な実施形態では、ポリコサノール画分は、オクタコサノールとヘキサコサノールの両方を含む。例示的な実施形態では、使用されるポリコサノールは、約１６：１〜約５０：１；約１８：１〜約４５：１；約１９：１〜約４０：１；約１９：１〜約３５：１；約１９：１〜約３０：１；約１９：１〜約２５：１；約１９：１〜約２２：１；又は約１９：１〜約２０：１のオクタコサノール：ヘキサコンタノール比を有する。
【００２５】
様々な実施形態では、ポリコサノール画分は、トリアコンタノールとヘキサコサノールの両方を含む。例示的な実施形態では、使用されるポリコサノールは、最大でも約１．５：１、最大でも約１．３：１；最大でも約１：１；最大でも約０．８：１；最大でも約０．６：１；最大でも約０．４：１；又は最大でも約０．２：１のトリアコサノール：ヘキサコンタノール比を有する。
【００２６】
例示的な実施形態では、ナノ粒子は、約９：１〜約１６：１の比でトリアコンタノールと混合された７０％〜約９５％のオクタコサノールを含むポリコサノール画分と、ＴＰＧＳから本質的に完全に形成されている安定剤画分（例えば、少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％ＴＰＧＳ）とを含む。様々な実施形態では、ポリコサノール画分とＴＰＧＳは、約１：２．８の比である。
【００２７】
本発明は、任意の好適な供給源から獲得又は単離されたポリコサノール又はポリコサノールの成分を利用する。例えば、米国特許第５，６６３，１５６号；第５，８５６，３１６号；第６，１９７，８３２号；第６，２２５，３５４号；及び第６，５９６，７７６号（これらは全て、参照により本明細書に組み込まれる）は、使用される出発材料及び抽出過程に特有のポリコサノール組成物を開示している。様々な実施形態では、本発明のナノ粒子の作製に有用なポリコサノールは、少なくとも約８０％のオクタコサノール、少なくとも約８１％のオクタコサノール、少なくとも約８２％のオクタコサノール、少なくとも約８３％のオクタコサノール、少なくとも約８４％のオクタコサノール、少なくとも約８５％のオクタコサノール、少なくとも約８６％のオクタコサノール、少なくとも約８７％のオクタコサノール、少なくとも約８８％のオクタコサノール、少なくとも約８９％のオクタコサノール又は少なくとも約９０％のオクタコサノールを含む。様々な実施形態では、使用されるポリコサノールは、約８０％〜約８５％のオクタコサノールを含む。例示的な実施形態では、オクタコサノールの量は、約８２％〜約８３％である。
【００２８】
本発明のナノ粒子及びその製剤における安定剤画分として有用な様々な例示的な界面活性剤としては、ビタミンＥ ＴＰＧＳ（トコフェロールプロピレングロコールスクシネート、水溶性形態のビタミンＥ）、ソルビタンモノラウレート（Ｓｐａｎ ２０）、ソルビタンモノパルミテート（Ｓｐａｎ ４０）、ポロキサマー、ソルビタンモノステアレート（Ｓｐａｎ ６０）、ソルビタンモノオレエート（Ｓｐａｎ ８０）、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート（Ｔｗｅｅｎ ２０、ポリソルベート２０）、ポリオキシエチレン（２０）モノパルミテート（Ｔｗｅｅｎ ４０、ポリソルベート４０）、ポリオキシエチレン（２０）モノステアレート（Ｔｗｅｅｎ ６０、ポリソルベート６０）、ポリオキシエチレン（２０）トリステアレート（Ｔｗｅｅｎ ６５、ポリソルベート６５）、ポリオキシエチレン（２０）モノオレエート（Ｔｗｅｅｎ ８０、ポリソルベート８０）、スクロースモノミリステート、スクロースパルミテート／ステアレート、スクロースステアレート、ジオクチルスルホスクシネートナトリウム塩、モノグリセリドモノオレエート、モノグリセリドモノラウレート、モノグリセリドモノパルミテート、レシチン、ジグリセリド混合物、モノグリセリドのクエン酸エステル、モノグリセリドの酢酸エステル、モノグリセリドの乳酸エステル、モノグリセリドのジアセチル酒石酸エステル、脂肪酸のポリグリセロールエステル、シクロデキストリン、脂肪酸のプロピレングリコールエステル、ステアロイルラクチレート、Ｃ８−１８遊離脂肪酸、ＰＴＳ（米国特許第６．０４５．８２６号）又はそれらの組合せが挙げられる。様々な実施形態では、安定剤画分は、シクロデキストリンを含まない。他の実施形態では、安定剤画分は、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルを含まない。
【００２９】
本発明のナノ粒子は、約１００ｎｍ以下の直径を有するナノ粒子を提供する任意の有用な比のポリコサノール画分と安定剤画分を含むことができる。例示的な実施形態では、ポリコサノール画分：安定剤画分の比は、約１：１〜約１：４、例えば、約１：２〜約１：３．５である。同様に、様々な実施形態では、オクタコサノール：安定剤の比の範囲は、約１：１．６〜約１：２．８、例えば、約１：２〜約１：２．５である。例示的な実施形態では、比は、約１：２．２５である。例示的な本発明のナノ粒子におけるトリアコンタノール：安定剤の比の範囲は、約１：１０〜約１：４０、例えば、約１：１１〜約１：３５である。例示的な実施形態では、安定剤はビタミンＥのエステル、例えば、ＴＰＧＳ（ｄ−α−トコフェリルポリエチレングリコール１０００スクシネート）である。
【００３０】
ナノ粒子を生成させる混合物は、安定剤画分の他に、界面活性剤を含むこともできる。例示的な界面活性剤が上に示されており、これらは、例えば、ＴＷＥＥＮ２０、ＴＷＥＥＮ８０、エステル（例えば、スクロースパルミチン酸エステル及びスクロースステアリン酸モノエステル）、ペクチン、寒天など、当業者に一般に知られている。
【００３１】
得られるナノ粒子ポリコサノール製剤を、固体投薬製剤又は液体投薬製剤、例えば、液体分散液、ゲル、エアロゾル、軟膏、クリーム、制御放出製剤、急速溶解製剤、凍結乾燥製剤、錠剤、カプセル、遅延放出製剤、延長放出製剤、パルス放出製剤、即時放出製剤と制御放出製剤を混ぜ合わせた物などにおいて利用することができる。
【００３２】
本発明によるナノ粒子及び薬学的製剤は、１以上の結合剤、充填剤、潤滑剤、懸濁剤、甘味料、香味剤、防腐剤、緩衝剤、湿潤剤、崩壊剤、発泡剤、及び他の賦形剤も含み得る。このような賦形剤は当該技術分野で公知である。
【００３３】
ナノ粒子又はナノ粒子の製剤において使用可能な例示的な賦形剤としては、限定するものではないが、大豆レシチン、大豆レシチン誘導体、カプリロカプロイルマクロゴール−８グリセリド、中鎖トリグリセリド、精製オリーブ油、液体香味料、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、糖エステル、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、プロピレングリコール、デクスパンテノール、アーモンド油、米油、ヒマワリ油、大豆油、ゴマ油、グリセリン、グリセリルパルミトステアレート、甘扁桃油、オレイン酸、ポリグリセリルオレエート、サッカロース、ポロキサマー、マクロゴール−１５ヒドロキシステアレート、ソルビタン脂肪酸エステル、アスコルビルパルミテート、ポリエチレングリコール、セラリューションＦ、セラリューションＨ、セラリューションＣ、ラウロイルマクロゴール−３２グリセリド、グリセリド、Ｃ12−Ｃ18ノグリセリド、Ｃ12−Ｃ18ジグリセリド、及びＣ12−Ｃ18トリグリセリド、グリセリルステアレート、プロピレングリコールラウレート、プロピレングリコールカプリレート、プロピレングリコールジペルゴネートが挙げられる。いくつかの実施形態では、本製剤は、クエン酸無水物、ソルビン酸カリウム、安息香酸ナトリウム、及びスクロースラウレートから選択される１以上の賦形剤を含む。
【００３４】
充填剤の例は、ラクトース一水和物、ラクトース無水物、及び様々なデンプン類であり、結合剤の例は、様々なセルロース類及び架橋ポリビニルピロリドン、微結晶性セルロース（例えば、アビセル（商標）ＰＨ１０１及びアビセル（商標）ＰＨ１０２）、微結晶性セルロース、並びにケイ化微結晶性セルロース（プロソルブＳＭＣＣ（商標））である。
【００３５】
圧縮すべき粉末の流動性に対して作用する薬剤を含む、好適な潤滑剤は、コロイド状二酸化ケイ素（例えば、アエロジル（商標）２００）、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、及びシリカゲルである。
【００３６】
甘味料の例は、スクロース、キシリトール、サッカリンナトリウム、チクロ、アスパルテーム、及びアセスルファムなどの、任意の天然甘味料又は人工甘味料である。香味剤の例は、メガスイート（商標）（ＭＡＦＣＯの商標）、バブルガムフレーバー、及び果実フレーバーなどである。
【００３７】
防腐剤の例は、ソルビン酸カリウム、メチルパラベン、プロピルパラベン、安息香酸及びその塩、パラヒドロキシ安息香酸の他のエステル（例えば、ブチルパラベン）、アルコール（例えば、エチルアルコールもしくはベンジルアルコール）、フェノール化合物（例えば、フェノール）、又は四級化合物（例えば、塩化ベンザルコニウム）である。例示的な防腐剤としては、限定するものではないが、亜硝酸カリウム、亜硝酸ナトリウム、安息香酸、安息香酸ナトリウム、安息香酸カリウム及び安息香酸カルシウムが挙げられる。
【００３８】
好適な希釈剤としては、薬学的に許容される不活性フィラー、例えば、微結晶性セルロース、ラクトース、リン酸水素カルシウム、糖類、及び／又は前述のもののいずれかの混合物が挙げられる。希釈剤の例としては、微結晶性セルロース（例えば、アビセル（商標）ＰＨ１０１及びアビセル（商標）ＰＨ１０２）；ラクトース（例えば、ラクトース一水和物、ラクトース無水物、及びファルマトース（商標）ＤＣＬ２１）；リン酸水素カルシウム（例えば、エムコンプレス（商標））；マンニトール；デンプン；ソルビトール；スクロース；並びにグルコースが挙げられる。
【００３９】
好適な崩壊剤としては、軽く架橋したポリビニルピロリドン、トウモロコシ（ｃｏｒｎ）デンプン、ジャガイモデンプン、トウモロコシ（ｍａｉｚｅ）デンプン、及び加工デンプン類、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン、グリコール酸ナトリウムデンプン、並びにそれらの混合物が挙げられる。
【００４０】
発泡剤の例は、有機酸と炭酸塩又は重炭酸塩などの発泡性カップル（ｅｆｆｅｒｖｅｓｃｅｎｔ ｃｏｕｐｌｅｓ）である。好適な有機酸としては、例えば、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、フマル酸、アジピン酸、コハク酸、及びアルギン酸と、これらの無水物並びに塩とが挙げられる。好適な炭酸塩及び重炭酸塩としては、例えば、炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、重炭酸カリウム、炭酸マグネシウム、炭酸ナトリウムグリシン、炭酸Ｌ−リジン、及び炭酸アルギニンが挙げられる。あるいは、発泡性カップルの重炭酸ナトリウム成分のみが存在していてもよい。
【００４１】
様々な実施形態では、本発明の組成物は、光散乱法、顕微鏡法、又は他の適当な方法で測定したときに、約１００ｎｍ未満、約９０ｎｍ未満、約８０ｎｍ未満、約７０ｎｍ未満、約６０ｎｍ未満、又は約５０ｎｍ未満の平均粒子サイズを有するナノ粒子ポリコサノールナノ粒子を含有する。
【００４２】
本発明の一実施形態では、上述の方法で測定したときに、ポリコサノールナノ粒子の少なくとも９９％が、約１００ｎｍ未満、約９０ｎｍ未満、約８０ｎｍ未満、約７０ｎｍ未満、約６０ｎｍ未満、又は約５０ｎｍ未満の粒子サイズを有する製剤を提供する。
【００４３】
本発明の一実施形態では、上述の方法で測定したときに、ポリコサノールナノ粒子の少なくとも９５％が、約１００ｎｍ未満、約９０ｎｍ未満、約８０ｎｍ未満、約７０ｎｍ未満、約６０ｎｍ未満、又は約５０ｎｍ未満の粒子サイズを有する製剤を提供する。
【００４４】
本発明の一実施形態では、上述の方法で測定したときに、ポリコサノールナノ粒子の少なくとも９０％が、約１００ｎｍ未満、約９０ｎｍ未満、約８０ｎｍ未満、約７０ｎｍ未満、約６０ｎｍ未満、又は約５０ｎｍ未満の粒子サイズを有する製剤を提供する。
【００４５】
本発明の一実施形態では、上述の方法で測定したときに、ポリコサノールナノ粒子の少なくとも８５％（例えば、約８５％〜約９９％、９５％、又は９０％）が、約１００ｎｍ未満、約９０ｎｍ未満、約８０ｎｍ未満、約７０ｎｍ未満、約６０ｎｍ未満、又は約５０ｎｍ未満の粒子サイズを有する製剤を提供する。
【００４６】
本発明の一実施形態では、上述の方法で測定したときに、ポリコサノールナノ粒子の少なくとも約８０％（例えば、約８０％〜約９９％、９５％、９０％、又は８５％）が、約１００ｎｍ未満、約９０ｎｍ未満、約８０ｎｍ未満、約７０ｎｍ未満、約６０ｎｍ未満、又は約５０ｎｍ未満の粒子サイズを有する製剤を提供する。
【００４７】
本発明の一実施形態では、上述の方法で測定したときに、ポリコサノールナノ粒子の少なくとも約７５％（例えば、約７５％〜約９９％、９５％、９０％、８５％、又は８０％）が、約１００ｎｍ未満、約９０ｎｍ未満、約８０ｎｍ未満、約７０ｎｍ未満、約６０ｎｍ未満、又は約５０ｎｍ未満の粒子サイズを有する製剤を提供する。
【００４８】
本発明の一実施形態では、上述の方法で測定したときに、ポリコサノールナノ粒子の少なくとも約７０％（例えば、約７０％〜約９９％、９５％、９０％、８５％、８０％、又は７０％）が、約１００ｎｍ未満、約９０ｎｍ未満、約８０ｎｍ未満、約７０ｎｍ未満、約６０ｎｍ未満、又は約５０ｎｍ未満の粒子サイズを有する製剤を提供する。
【００４９】
本発明の一実施形態では、上述の方法で測定したときに、ポリコサノールナノ粒子の少なくとも約６５％（例えば、約６５％〜約９９％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、又は７０％）が、約１００ｎｍ未満、約９０ｎｍ未満、約８０ｎｍ未満、約７０ｎｍ未満、約６０ｎｍ未満、又は約５０ｎｍ未満の粒子サイズを有する製剤を提供する。
【００５０】
本発明の一実施形態では、上述の方法で測定したときに、ポリコサノールナノ粒子の少なくとも約６０％（例えば、約６０％〜約９９％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、又は６５％）が、約１００ｎｍ未満、約９０ｎｍ未満、約８０ｎｍ未満、約７０ｎｍ未満、約６０ｎｍ未満、又は約５０ｎｍ未満の粒子サイズを有する製剤を提供する。
【００５１】
本発明の一実施形態では、上述の方法で測定したときに、ポリコサノールナノ粒子の少なくとも５５％（例えば、約５５％〜約９９％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、又は６０％）が、約１００ｎｍ未満、約９０ｎｍ未満、約８０ｎｍ未満、約７０ｎｍ未満、約６０ｎｍ未満、又は約５０ｎｍ未満の粒子サイズを有する製剤を提供する。
【００５２】
ナノ粒子のサイズを決定する方法は当該技術分野で周知である。例えば、光回折（すなわち、光散乱計測）技術を用いることができる。これらの技術としては、広帯域散乱計測（米国特許第５，６０７，８００号；第５，８６７，２７６号及び第５，９６３，３２９号）、スペクトル偏光解析（米国特許第５，７３９，９０９号）並びにスペクトル及び単一波長ビームプロファイル反射率測定及びビームプロファイル偏光解析（米国特許第６，４２９，９４３号）が挙げられる。さらに、隔離されたライン又は隔離されたバイア及びメサ上でＣＤ測定を取得するために、単一波長レーザーＢＰＲ又はＢＰＥを用いることが可能な場合もある（２００２年９月１３日に出願された米国特許出願第１０／２４３，２４５号を参照されたい）。
【００５３】
例示的な実施形態では、本発明は、治療的有効量のポリコサノールを含有する本発明のポリコサノールナノ粒子の単位投薬量製剤を提供する。例示的な実施形態では、単位投薬量製剤は、ポリコサノール画分と安定剤画分とを含有するナノ粒子の製剤であり、単位投薬量製剤は、約１０ｍｇ〜約１００ｍｇ、例えば、約１０ｍｇ〜約５０ｍｇを含む。様々な実施形態では、単位投薬量は１日投薬量である。当業者であれば、ポリコサノールの治療的有効量を実験的に決定することができ、純粋な形態で、又はそのような形態が存在する場合には、薬学的に許容される塩、エステル、もしくはプロドラッグの形態で用いることができることを理解するであろう。本発明のナノ粒子組成物中のポリコサノールの実際の投薬量レベルは、特定の組成物や特定の投与方法に対する所望の治療応答を得るために有効なポリコサノールの量を得るように変化させてもよい。従って、選択される投薬量レベルは、所望の治療効果、投与経路、投与されるポリコサノールの効力、所望の治療期間、及び他の因子によって決まる。
【００５４】
投薬量単位組成物は、１日用量を作り上げるために使用し得るような量又はその約量を含み得る。しかしながら、任意の特定の患者に対する特定の用量レベルは、種々の因子、すなわち、達成されるべき細胞応答又は生理的応答の種類及び程度；利用される特定の薬剤又は組成物の活性；利用される特定の薬剤又は組成物；患者の年齢、体重、全体的な健康、性別、及び食事；薬剤の投与時間、投与経路、及び排出速度；治療期間；特定の薬剤と組み合わせて又は同時に使用される薬物；並びに医学分野で周知の同様の因子によって決まることが理解されるであろう。
【００５５】
本発明のナノ粒子の例示的な作製方法では、事前に選択された量の安定剤とポリコサノールを撹拌により一緒に溶解させて、確実に均質になるようにする。高温の水又は添加剤、防腐剤、賦形剤などの水溶液を溶解物に添加し、撹拌しながら、所望の温度、通常は約６０℃〜約９０℃に維持する。例示的な方法では、水と固体の混合物は、水を固体よりも多く含み、例えば、重量で約１０：１である。混合物を撹拌しながら、室温まで冷却する。様々な実施形態では、本方法により粒子の懸濁液が生じる。
【００５６】
Ａ．方法
ポリコサノールのナノ粒子及びこのナノ粒子を含む製剤の他に、本発明は、このナノ粒子及び製剤を用いて、疾患を治療及び予防し、代謝を調節する方法を提供する。様々な実施形態では、本発明のナノ粒子は、高血圧、コレステロール代謝の調節、及び高脂血症、高コレステロール血症、炎症などの治療に有用である。様々な実施形態では、本製剤は、タンパク質酸化の調節又は低下に用いられる。例示的な実施形態では、本製剤は、血糖値、インスリン抵抗性、糖尿病、及び血糖レベルに関連する他の状態の管理に有用である。またさらなる実施形態では、本製剤は、血漿ビタミンＣレベルの調節（例えば、増加）、並びに収縮期血圧及び拡張期血圧の低下に有用である。他の実施形態では、本製剤は、ＮＦ−κＢの活性化の阻害に有用である。
【００５７】
例示的な実施形態では、本製剤を治療的有効量で対象に投与して、特定の疾患又は障害を治療し、ここで、この対象は、別の場合にはポリコサノールによる治療を必要としない。様々な実施形態では、ナノ粒子を投与して、単一の疾患を治療するか又は単一の代謝因子を調節する。従って、例示的な実施形態では、本発明は、高脂血症、高コレステロール血症、高血圧症などの治療を必要としない対象においてインスリン抵抗性を治療する方法を提供する。例示的な実施形態では、本発明は、高脂血症、高コレステロール血症などの治療を必要としない対象において血糖を調節する方法を提供する。様々な実施形態では、本発明は、高脂血症、高コレステロール血症などの治療を必要としない対象において糖尿病（例えば、ＩＩ型糖尿病）を治療する方法を提供する。様々な実施形態では、本発明は、高血圧症、高脂血症、高コレステロール血症などの治療を必要としない対象においてタンパク質酸化を減少させるか又は予防する方法を提供する。例示的な実施形態では、本発明は、高脂血症、高コレステロール血症などの治療を必要としない対象において血清ビタミンＣレベルを増加させる方法を提供する。他の実施形態では、本発明は、高脂血症、高コレステロール血症などの治療を必要としない対象においてＮＦ−κＢの活性化を阻害する方法を提供する。
【００５８】
本発明の方法の非限定的な例を以下に示す。
【００５９】
タンパク質酸化
本発明は、対象のタンパク質酸化を減少させ、従って、この酸化の有害な結果を軽減する方法を提供する。本方法は、対象のタンパク質酸化を減少させる治療的有効量の本発明のポリコサノール製剤を対象に投与することを含む。
【００６０】
酸化ストレスは、肝臓毒素への曝露、肝内胆汁鬱滞、アルコール性肝障害、肝虚血／再灌流傷害及びウイルス性肝炎などの種々の病態生理学的状態における急性及び慢性の疾患及び損傷の発症の原因とされてきた（Ｓｔｅｈｂｅｎｓ，Ｅｘｐ．Ｍｏｌ．Ｐａｔｈｏｌ；２００３；７５（３）：２６５；Ｊａｅｓｃｈｋｅ ｅｔ ａｌ．，Ｔｏｘｉｃｏｌ．Ｌｅｔｔ．；２００３；１４４（３）：２７９−８８；ＭｃＤｏｎｏｕｇｈ，Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ．２００３；１８９（１−２）：８９；Ｊａｅｓｃｈｋｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ；１９８８；８１（４）：１２４０）。活性酸素種（ＲＯＳ）及び活性窒素種（ＲＮＳ）の過剰産生は、これらの病的状態における抗酸化防御の顕著な減少とともに、脂質過酸化、タンパク質酸化及び核塩基酸化の過程を通じて様々な細胞機能を障害する。脂質過酸化は、例えば、細胞膜の物理的特性及び化学的特性を変化させ、それにより、その流動性及び透過性を変化させ、膜シグナル伝達及びイオン交換の障害を生じさせ、膨張、細胞溶解、そして最後には細胞死をもたらす。タンパク質及びＤＮＡの酸化も、細胞の機能障害及び死に直接関係する（Ｆａｎｇ Ｙ Ｚ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ．２００２；１８（１０）：８７２−９）。
【００６１】
タンパク質酸化に関連する疾患としては、限定するものではないが、関節リウマチ（ＩｇＧ、α１−プロテイナーゼインヒビター）、虚血再灌流傷害、肺気腫（α１−プロテイナーゼインヒビター、エラスターゼ）、神経変性疾患（例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病）、筋ジストロフィー、加齢に伴う障害（グルタミンシンセターゼ、炭酸脱水素酵素ＩＩＩ、アコニターゼ）、急性膵炎、白内障発生（α−クリスタリン）、癌、慢性エタノール摂取、成人呼吸逼迫症候群が挙げられる。本発明の製剤を用いて、クワシオルコールの影響を治療又は改善することもできる（Ｍａｎｏｒｙ，Ｊ．Ｐｅｄｉａｔｒ；２０００；１３７：４２１）．
【００６２】
例示的な治療関連用量は、タンパク質酸化の標準的な臨床マーカー（例えば、タンパク質カルボキシル化）の低下をもたらす用量である。タンパク質カルボニル含量（ＰＣＣ）は、最も広く用いられているタンパク質の酸化修飾のマーカーである。ＰＣＣの定量にはいくつかの方法がある。様々な従来法では、２，４−ジニトロフェニルヒドラジンをタンパク質カルボニルと反応させて、対応するヒドラゾンを形成させ、これを放射能計数により光学的に、又は免疫組織化学的に解析することができる。例えば、Ｙａｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．３２７：３３０−３３４，１９９６を参照されたい。
【００６３】
様々な実施形態では、本発明のナノ粒子を経口投与する。例示的な実施形態では、ナノ粒子を１日当たり約１０ｍｇ〜約１００ｍｇ、例えば、１日当たり約１０ｍｇ〜約５０ｍｇの投薬量で投与する。
【００６４】
血清ビタミンＣの増加
本発明はまた、対象の血清ビタミンＣを増加させる方法を提供する。本方法は、対象の血清ビタミンＣレベルを増加させるか又は調節する治療的有効量の本発明のポリコサノール製剤を対象に投与する工程を含む。
【００６５】
インスリン抵抗性及び糖尿病は、健康な対象で見られるレベルと比較したときに、血清ビタミンＣレベルの減少を伴うので、経口投与される補給ビタミンＣが、内皮機能障害をはじめとするインスリン抵抗性及び糖尿病の結果を治療するものとして提案されている。しかしながら、補給ビタミンＣは、単独で用いた場合、有効性が認められなかった（Ｋａｎｅｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｄｉａｂｅｔｅｓ；１９９９；４８（１２）：２３９８）。これはおそらく、経口投与されるビタミンＣ補給では、内皮機能障害又はインスリン抵抗性が改善されないためである（Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｈｅａｒｔ Ｃｉｒｃ．Ｐｈｙｓｉｏｌ；２００６；２９０（１）：Ｈ１３７）。
【００６６】
本発明は、内在性ビタミンＣを調節する方法、従って、インスリン抵抗性、糖尿病及びこれらの症候群の結果を治療する方法を提供する。
【００６７】
例示的な治療関連用量は、例えば、Ｆｉｓｈｅｒ Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｃｏ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌｌ製の市販のキットを用いたサンドイッチＥＬＩＳＡ法で、血清ビタミンＣ濃度の標準的な臨床マーカーの増加をもたらす用量である。例えば、Ｗａｓｈｋｏ ｅｔ ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９９２；２０４：１−１４を参照されたい。
【００６８】
様々な実施形態では、本発明のナノ粒子を経口投与する。例示的な実施形態では、ナノ粒子を１日当たり約１０ｍｇ〜約１００ｍｇ、例えば、１日当たり約１０ｍｇ〜約５０ｍｇの投薬量で投与する。
【００６９】
インスリン抵抗性
本発明はまた、インスリン抵抗性及び限定するものではないが、糖尿病をはじめとする、インスリン抵抗性から生じる結果を治療する方法を提供する。本方法は、インスリン抵抗性を治療するのに十分な量の本発明の粒子製剤を対象に投与することを含む。
【００７０】
インスリン抵抗性は、循環インスリンの生理的効果に対するインスリン標的組織（例えば、骨格筋、肝臓、及び脂肪組織）による不十分な応答と定義される。これら３つの組織におけるインスリン感受性の障害の特徴は、インスリンにより刺激される骨格筋へのグルコース取込みの減少、インスリンにより媒介される肝臓における肝グルコース産生抑制の障害、及び脂肪組織における脂肪分解を抑制するインスリンの能力の低下である。実際、インスリン抵抗性は、ＩＩ型糖尿病の発症の主な予測因子である。
【００７１】
ＩＩ型糖尿病では、インスリン抵抗性が顕性高血糖症の発症の前に起こることが広く認められている。インスリン抵抗性の原因は遺伝性及び／又は後天性であることがある。ＩＩ型糖尿病によっても、患者にコレステロールの上昇や心血管疾患が生じやすくなる。西洋文化では、インスリン抵抗性を引き起こす最も一般的な後天性因子は、肥満、座っていることが多いライフスタイル、及び加齢であり、これらは全て相互に関連する。インスリン抵抗性に対する強力な代償性インスリン分泌応答が存在するとき、グルコースレベルは比較的正常であり続けることができる。しかしながら、インスリン産生膵β細胞がもはや組織インスリン感受性の減少を保証することができなくなったとき、グルコース恒常性が悪化し、耐糖能障害、そして最終的にはＩＩ型糖尿病が発症する。
【００７２】
糖尿病を患う個体は、血流中のビタミンＣのレベルも減少している。研究により、糖尿病患者は、正常個体よりも少なくとも３０％低い循環アスコルビン酸レベルを有することが分かっている（Ｗｉｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｔｒ．Ｒｅｖ．５４（７）：１９３（１９９６））。しかしながら、高用量の経口ビタミンＣを投与しても、この欠損は改善されない（Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｈｅａｒｔ Ｃｉｒｃ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，２９０（１）：Ｈ１３７−４５（２００６））。しかしながら、下記の実施例に見られるように、本発明の投与はこの欠損に対処する。
【００７３】
インスリン抵抗性と関連する一般的な疾患又は障害としては、黒色表皮症、尋常性座瘡、アレルギー、喘息、アルツハイマー病、アテローム性動脈硬化症、双極性障害、乳癌、心血管疾患、白内障、子宮頸癌、鬱病、真性糖尿病、脂質異常症、脂肪肝疾患、小児２型糖尿病、慢性疲労、結腸直腸癌、ふけ、グレーブス病、心疾患、高ＬＤＬコレステロール、高トリグリセリド、多毛症、低血糖症、甲状腺機能低下症、炎症、腎疾患、低ＨＤＬコレステロール、ループス、神経障害、神経炎、骨粗鬆症、膵癌、パーキンソン病、多嚢胞性卵巣症候群、前立腺癌、関節リウマチ、強皮症、脂漏症、卒中、及び静脈瘤が挙げられる。
【００７４】
上に示した疾患及び障害の他に、インスリン抵抗性の主な結果のうちのいくつかとしては、限定するものではないが、２型真性糖尿病、高血圧症、動脈硬化症、多嚢胞性卵巣症候群、非アルコール性脂肪肝疾患、血管内皮の機能の障害、トリグリセリド及びコレステロールの上昇、凝固の障害、腎機能の障害、心拍リズムの障害、並びに尿酸レベルの上昇が挙げられる。
【００７５】
例示的な治療関連用量は、血清インスリン抵抗性の標準的な臨床マーカー、例えば、Ｆｉｓｈｅｒ Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｃｏ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌｌ）製の市販のキットを用いたサンドイッチＥＬＩＳＡ法で測定可能な血漿中のインスリン及びインスリンレベルの減少をもたらす用量である。
【００７６】
様々な実施形態では、本発明のナノ粒子を経口投与する。例示的な実施形態では、ナノ粒子を１日当たり約１０ｍｇ〜約１００ｍｇ、例えば、１日当たり約１０ｍｇ〜約５０ｍｇの投薬量で投与する。
【００７７】
コレステロール関連疾患
様々な実施形態では、本発明は、対象の高コレステロール血症を治療する及び／又は脂質代謝を調節する方法を提供する。本方法は、高コレステロール血症を治療するのに十分な量の本発明のナノ粒子製剤を対象に投与することを含む。
【００７８】
高コレステロール血症、高脂血症及び心血管疾患は、西洋産業社会でますます広まっている。この理由は完全には理解されていないが、肉体労働がますます必要なくなるにつれて座っていることがますます多くなったライフスタイルとともに、一部はこれらの状態に対する遺伝的素因に関連し、一部は飽和脂肪の多い食事に関連している可能性がある。高コレステロール血症及び高脂血症は極めて重大であるが、それは、これらによって、個体に、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞（心臓発作）、及び卒中をはじめとする、心血管疾患が生じやすくなるからである。
【００７９】
特定の形態の高脂血症としては、例えば、高コレステロール血症、家族性異常βリポタンパク質血症、糖尿病性脂質異常症、ネフローゼ脂質異常症及び家族性複合型高脂血症が挙げられる。高コレステロール血症は、血清低密度リポタンパク質−コレステロール及び血清総コレステロールの上昇を特徴とする。低密度リポタンパク質（ＬＤＬコレステロール）は、血中コレステロールを輸送する。家族性異常βリポタンパク質血症（別名、ＩＩＩ型高脂血症）は、血清中でのβＶＬＤＬと呼ばれる超低密度リポタンパク質−コレステロール（ＶＬＤＬコレステロール）粒子の蓄積を特徴とする。正常なアポリポタンパク質Ｅ３が異常なアイソフォームのアポリポタンパク質Ｅ２と置き換わることもまた、この状態と関連している。糖尿病性脂質異常症は、ＶＬＤＬコレステロールの過剰産生、ＶＬＤＬトリグリセリド脂質分解の異常、ＬＤＬコレステロール受容体活性の低下、及び場合によっては、ＩＩＩ型高脂血症などの複数のリポタンパク質異常を特徴とする。腎臓の機能不全と関連するネフローゼ脂質異常症は治療が難しく、多くの場合、高コレステロール血症や高トリグリセリド血症を含む。家族性複合型高脂血症は、高脂血症の複数の表現型、すなわち、ＩＩａ型、ＩＩｂ型、ＩＶ型、Ｖ型又は高アポβリポタンパク質血症を特徴とする。
【００８０】
血清脂質、特にＬＤＬコレステロールを低下させることができれば、心血管疾患の可能性を減少させることができることはよく知られている。血清脂質を減らすことができれば、アテローム性動脈硬化症の進行を遅延させることができるか、又はアテローム性動脈硬化症の退行を誘導することができることもよく知られている。このような場合、高脂血症又は高コレステロール血症と診断された個体は、心血管疾患、特に冠状動脈疾患のリスクを低下させる目的でアテローム性動脈硬化症の進行を遅延させるか又はアテローム性動脈硬化症の退行を誘導するために、脂質低下療法を考慮すべきである。このような療法は、その他の結果として、卒中や心筋梗塞のリスクを低下させる。さらに、正常な血清脂質レベルとみなされるレベルを示す特定の個体が心血管疾患を発症することもある。これらの個体では、脂質過酸化や高レベルのＬｐ（ａ）又はリポタンパク質Ａのような他の因子によって、コレステロールレベルや脂質レベルが比較的正常であるにもかかわらず、アテローム発生が生じることがある。
【００８１】
本明細書で用いられる「治療的有効量」の例示的なマーカーは、対象に投与（例えば、経口投与）したときに、一例として、総コレステロールレベルを低下させること、ＬＤＬコレステロールを低下させること、ＨＤＬコレステロールを上昇させること、総コレステロール／ＨＤＬ比を低下させること、及び／又はトリグリセリドを低下させることによって健康な血清脂質プロファイルを維持するか、あるいは健康体重の維持を助ける本発明の製剤中のポリコサノールの量を指す。
【００８２】
別の例示的な治療関連用量は、脂質代謝及び心血管危険因子の標準的な臨床マーカーである、Ｃ反応性タンパク質の減少をもたらす用量である。
【００８３】
ＮＦ−κＢ活性化の阻害
様々な実施形態では、本発明は、対象のＮＦ−κＢの活性化を阻害する方法を提供する。本方法は、ＮＦ−κＢの活性化を阻害するのに十分な量の本発明のナノ粒子製剤を対象に投与することを含む。
【００８４】
ＮＦ−κＢ／Ｒｅｌファミリーの転写因子は、ホモ二量体やヘテロ二量体を形成するいくつかの構造的に関連するタンパク質から構成され、ｐ５０／ｐ１０５、ｐ５２／ｐ１００、ＲｅｌＡ（ｐ６５）、ｃ−Ｒｅｌ／ＮＦ−κＢを含む。哺乳動物で最もよく見られるＲｅｌ／ＮＦ−κＢ二量体は、ｐ５０−ＲｅｌＡ（ｐ５０／ｐ６５）ヘテロ二量体を含み、特にＮＦ−κＢと呼ばれる。これは細胞質中に存在する遍在性因子であるが、活性化されると、核に移行し、核内で遺伝子の転写を誘導する。ほとんどの疾患が無秩序な炎症によって引き起こされるために、ＮＦ−κＢは多種多様な疾患と関連付けられている。従って、ＮＦ−κＢ活性化を阻害することができる薬剤は、ＮＦ−κＢ関連疾患の発症を予防するもしくは遅延させるか、又はＮＦ−κＢ関連疾患を治療する可能性がある。
【００８５】
ＮＦ−κＢは、フリーラジカル、炎症性刺激、発癌物質、腫瘍促進物質、内毒素、γ線、紫外線（ＵＶ）光、及びＸ線によって活性化される（Ｂ．Ｂ．Ａｇｇａｒｗａｌ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅａｒ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ−ｋａｐｐａ Ｂ ａｓ ａ ｔａｒｇｅｔ ｆｏｒ ｃａｎｃｅｒ ｄｒｕｇ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｌｅｕｋｅｍｉａ．１６：１０５３−６８）。活性化されると、ＮＦ−κＢは、アポトーシスを抑制し、細胞の形質転換、増殖、浸潤、転移、化学療法耐性、放射線耐性、及び炎症を誘導することが示されている２００を超える遺伝子の発現を誘導する。Ｋｕｍａｒ Ａ， ｅｔ ａｌ．，２００４．Ｎｕｃｌｅａｒ ｆａｃｔｏｒ−ｋａｐｐａ Ｂ：Ｉｔｓ ｒｏｌｅ ｉｎ ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｊ Ｍｏｌ Ｍｅｄ．，８２：４３４−４４８を参照されたい。
【００８６】
活性化形態のＮＦ−κＢは、限定するものではないが、癌、アレルギー、頭痛、疼痛、心筋梗塞、複合性局所疼痛症候群、心肥大、筋ジストロフィー（２ａ型）、筋肉疲労、異化障害、１型糖尿病、２型糖尿病、肥満、胎児の成長遅延、高コレステロール血症、アテローム性動脈硬化症、心疾患、慢性心不全、虚血／再灌流、卒中、脳動脈瘤、狭心症、肺疾患、嚢胞性線維症、酸誘導性の肺損傷、肺高血圧症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、ヒアリン膜症、腎疾患、糸球体疾患、アルコール性肝疾患、レプトスピラ腎症、腸疾患、腹膜子宮内膜症、皮膚疾患、副鼻腔炎、中皮腫、無汗性外胚葉性形成異常、ベーチェット病、色素失調症、結核、喘息、関節炎、クローン病、大腸炎（ラット）、眼アレルギー、緑内障、虫垂炎、パジェット病、膵炎、歯周炎、子宮内膜症、炎症性腸疾患、炎症性肺疾患、敗血症、シリカ誘導性の疾患、睡眠時無呼吸、ＡＩＤＳ（ＨＩＶ−１）、自己免疫、抗リン脂質症候群、ループス、ループス腎炎、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、慢性疾患症候群、家族性地中海熱、遺伝性周期性発熱症候群、心理社会的ストレス疾患、神経病理学的疾患、家族性アミロイド神経障害、炎症性神経障害、外傷性脳損傷、脊髄損傷、乾癬、敗血性ショック、パーキンソン病、多発性硬化症、リウマチ性疾患、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、網膜疾患、白内障、及び様々な炎症性疾患をはじめとする、疾患及び障害の原因とされている。本発明の製剤及び方法は、ＮＦ−κＢの活性化を阻害する能力を示しており、この能力により、体内のＮＦ−κＢ活性化と関連する疾患を治療又は予防することができる。
【００８７】
アディポネクチン
様々な実施形態では、本発明は、対象のアディポネクチンレベルを増加させる方法を提供する。本方法は、アディポネクチンレベルの増加させ、それにより低アディポネクチンレベルと関連する疾患を治療するのに十分な量の本発明のナノ粒子製剤を対象に投与することを含む。
【００８８】
アディポネクチンは、グルコース調節や脂肪酸異化をはじめとする、いくつかの代謝過程を調節するタンパク質ホルモンである。Ｄｉｅｚ ＪＪ，Ｉｇｌｅｓｉａｓ Ｐ．“Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｔｈｅ ｎｏｖｅｌ ａｄｉｐｏｃｙｔｅ−ｄｅｒｉｖｅｄ ｈｏｒｍｏｎｅ ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｄｉｓｅａｓｅ．” Ｅｕｒ．Ｊ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．１４８（３）：２９３−３００，２００３を参照されたい。
【００８９】
アディポネクチンは、もっぱら脂肪組織から血流中に分泌され、多くの他のホルモンと比べて血漿中に非常に多く存在する。このホルモンのレベルは、成人では体脂肪率と逆相関する。Ｕｋｋｏｌａ Ｏ，Ｓａｎｔａｎｉｅｍｉ，“Ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ：ａ ｌｉｎｋ ｂｅｔｗｅｅｎ ｅｘｃｅｓｓ ａｄｉｐｏｓｉｔｙ ａｎｄ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｃｏ−ｍｏｒｂｉｄｉｔｉｅｓ” Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．８０（１１）：６９６−７０２，２００２を参照されたい。
【００９０】
このホルモンは、２型糖尿病、肥満、アテローム性動脈硬化症、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、また、メタボリックシンドロームの独立危険因子を引き起こすおそれのある代謝異常の抑制において役割を果たす。Ｒｅｎａｌｄｉ Ｏ．ｅｔ ａｌ．，２００９ “Ｈｙｐｏａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎｅｍｉａ：ａ ｒｉｓｋ ｆａｃｔｏｒ ｆｏｒ ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｓｙｎｄｒｏｍｅ” Ａｃｔａ Ｍｅｄ Ｉｎｄｏｎｅｓ ４１（１）：２０−４を参照されたい。
【００９１】
プラスミノーゲン活性化インヒビター
様々な実施形態では、本発明は、対象のＰＡＩ−１タンパク質レベルを調節する（例えば、低下させる）方法を提供する。本方法は、対象のＰＡＩ−１レベルを低下させるのに十分な量の本発明のナノ粒子製剤を対象に投与することを含む。ＰＡＩ−１は、ウロキナーゼ型及び組織型のプラスミノーゲン活性化因子を不活化することによって線維素溶解を阻害するセリンプロテアーゼインヒビターである。血漿ＰＡＩ−１の活性は、深夜１２時から朝６時の間に最も高い（Ｋｌｕｆｔ Ｃ， ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｒｏｍｂ Ｈａｅｍｏｓｔ．１９８８ Ａｐｒ ８；５９（２）：３２９−３２）。
【００９２】
ＰＡＩ−１は、様々な疾患状態（例えば、いくつかの形態の癌）、並びに肥満及びメタボリックシンドロームにおいて増加したレベルで存在する。ＰＡＩ−１は、これらの状態を有する患者における血栓症の発生の増加と関連付けられている（Ｍｉｍｕｒｏ Ｊ（１９９１） “［Ｔｙｐｅ １ ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ：ｉｔｓ ｒｏｌｅ ｉｎ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｒｅａｃｔｉｏｎｓ］．” Ｒｉｎｓｈｏ Ｋｅｔｓｕｅｋｉ ３２（５）：４８７−９．ＰＭＩＤ １８７０２６５．）：Ｂｉｎｄｅｒ ＢＲ， ｅｔ ａｌ．（２００２）．“Ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ １：ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｒｏｌｅｓ”． Ｎｅｗｓ Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｓｃｉ．１７：５６−６１．ＰＭＩＤ １１９０９９９３：Ｈｏｅｋｓｔｒａ Ｔ， ｅｔ ａｌ．（２００４）．“Ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ−ｔｙｐｅ １：ｉｔｓ ｐｌａｓｍａ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔｓ ａｎｄ ｒｅｌａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｒｉｓｋ．” Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．９１（５）：８６１−７２：Ｌｉｊｎｅｎ ＨＲ（２００５）．“Ｐｌｅｉｏｔｒｏｐｉｃ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ−１．” Ｊ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．３（１）：３５−４５；Ｄｅ Ｔａｅｙｅ Ｂ， ｅｔ ａｌ．（２００５）．“Ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ−１：ａ ｃｏｍｍｏｎ ｄｅｎｏｍｉｎａｔｏｒ ｉｎ ｏｂｅｓｉｔｙ，ｄｉａｂｅｔｅｓ ａｎｄ ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｄｉｓｅａｓｅ．” Ｃｕｒｒｅｎｔ ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ５（２）：１４９−５４：Ｄｅｌｌａｓ Ｃ，Ｌｏｓｋｕｔｏｆｆ ＤＪ（２００５）．“Ｈｉｓｔｏｒｉｃａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ＰＡＩ−１ ｆｒｏｍ ｉｔｓ ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ｔｏ ｉｔｓ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｒｏｌｅ ｉｎ ｃｅｌｌ ｍｏｔｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｄｉｓｅａｓｅ．” Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．９３（４）：６３１−４０）。
【００９３】
ＴＮＦ−α
様々な実施形態では、本発明は、対象のＴＮＦ−αレベルを調節する（例えば、低下させる）方法を提供する。本方法は、対象のＴＮＦ−αレベルを低下させ、それによりＴＮＦ−αレベルの上昇と関連する疾患を治療するのに十分な量の本発明のナノ粒子製剤を対象に投与することを含む。腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）は炎症応答を促進し、この炎症応答は、関節リウマチ、強直性脊椎炎、クローン病、乾癬、アルツハイマー病及び難治性喘息などの自己免疫障害と関連する臨床的な問題の多くを引き起こす。これらの障害は、ＴＮＦインヒビターを用いて治療することもある。ＴＮＦ産生の異常調節は、アルツハイマー病（Ｐｅｒｉｓｐｉｎａｌ Ｅｔａｎｅｒｃｅｐｔ ｆｏｒ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｅｄｗａｒｄ Ｔｏｂｉｎｉｃｋ＊ Ｃｕｒｒｅｎｔ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００７，４，５５０−５５２）及び癌をはじめとする、種々のヒト疾患の原因とされている。Ｌｏｃｋｓｌｅｙ ＲＭ，Ｋｉｌｌｅｅｎ Ｎ，Ｌｅｎａｒｄｏ ＭＪ（２００１）．“Ｔｈｅ ＴＮＦ ａｎｄ ＴＮＦ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｓｕｐｅｒ ｆａｍｉｌｉｅｓ：ｉｎｔｅｇｒａｔｉｎｇ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｂｉｏｌｏｇｙ．” Ｃｅｌｌ １０４（４）：４８７−５０１を参照されたい。
【００９４】
肥満の齧歯類や肥満のヒトは、脂肪組織内のＴＮＦ−α発現が増加している。従って、脂肪組織内のＴＮＦ−α発現と肥満及びインスリン抵抗性との間に正の相関がある（Ｅｎｄｏｃｒ Ｒｅｖ．２００３ Ｊｕｎ；２４（３）：２７８−３０１）。インビボやインビトロでの外因性ＴＮＦ−αへの慢性曝露により、インスリン抵抗性が誘導される。Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ．１９９２ Ｊａｎ；１３０（１）：４３−５２ Ｇｅｎｅ ｄｅｌｅｔｉｏｎ ｏｆ ＴＮＦα ｏｒ ｉｔｓ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｉｎ ｏｂｅｓｅ ｒｏｄｅｎｔｓ（ｆａ／ｆａ Ｚｕｃｋｅｒ ｒａｔｓ）ｉｍｐｒｏｖｅｓ ｉｎｓｕｌｉｎ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ ＮＥＦＡｓ．Ｎａｔｕｒｅ．１９９７ Ｏｃｔ ９；３８９（６６５１）：６１０−４を参照されたい。
【００９５】
脂肪組織では、ＴＮＦ−αは、ＮＥＦＡやグルコースの取込み及び貯蔵並びに脂肪生成に関与する遺伝子を抑制する。ＴＮＦ−αはまた、アディポネクチンのような脂肪細胞によって分泌される因子の発現を修飾する（Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ．２００３ Ｓｅｐ；２８５（３）：Ｅ５２７−３３）。肝臓では、ＴＮＦ−αは、グルコースの取込み及び代謝並びに脂肪酸酸化に関与する遺伝子の発現を抑制すると同時に、コレステロール及び脂肪酸のデノボ合成に関与する遺伝子の発現を増加させる。
【００９６】
インスリンシグナル伝達は、血清ＮＥＦＡレベルの増加を通じてＴＮＦ−αにより間接的に障害される。チアゾリジンジオンは、インスリン作用に対するＴＮＦ−αの阻害効果を改善することが知られている。Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．１９９７ Ｏｃｔ １；１００（７）：１８６３−９を参照されたい。さらに、体重減少により、ＴＮＦ−αレベルが減少することが認められている。Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．１９９５ Ｍａｙ；９５（５）：２１１１−９を参照されたい。
【００９７】
レチノール結合タンパク質
様々な実施形態では、本発明は、対象のＲＢＰ−４レベルを調節する（例えば、低下させる）方法を提供する。本方法は、対象のＲＢＰ−４レベルを低下させ、それによりＲＢＰ−４レベルの上昇と関連する疾患を治療するのに十分な量の本発明のナノ粒子製剤を対象に投与することを含む。レチノール結合タンパク質４（ＲＢＰ４）は、最近、ＡＧ４ＫＯマウスモデルでインスリン抵抗性に寄与するアディポカインとして記載されている。Ｙａｎｇ Ｑ， ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｒｕｍ ｒｅｔｉｎｏｌ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ４ ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ ｔｏ ｉｎｓｕｌｉｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｉｎ ｏｂｅｓｉｔｙ ａｎｄ ｔｙｐｅ ２ ｄｉａｂｅｔｅｓ，Ｎａｔｕｒｅ ４３６（７０４９）：３５６−６２．（２００５）を参照されたい。ＲＢＰ４は、糖尿病の発症前に血清中で上昇しており、多様な臨床症状を示す対象のインスリン抵抗性及び関連する心血管危険因子を同定するように思われる。これらの知見により、血清ＲＢＰ４レベルの低下を目的とした抗糖尿病療法の理論的根拠が与えられた。Ｇｒａｈａｍ ＴＥ，ｅｔ．ａｌ Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ．２００６ Ｊｕｎ １５；３５４（２４）：２５５２−６３を参照されたい。
【００９８】
一酸化窒素
様々な実施形態では、本発明は、対象の一酸化窒素レベルを増加させる方法を提供する。本方法は、対象の一酸化窒素レベルを増加させるのに十分な量の本発明のナノ粒子製剤を対象に投与することを含む。
【００９９】
内皮ＮＯＳ（ｅＮＯＳ）（別名、一酸化窒素シンターゼ３（ＮＯＳ３））は、血管中でＮＯを発生させ、血管機能の調節や血圧の低下に関与する。Ａｌｄｅｒｔｏｎ ＷＫ， ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．２００１ Ａｕｇ １；３５７（Ｐｔ ３）：５９３−６１５を参照されたい。ＮＯは、直接的な血管拡張（流量依存性、受容体媒介性）；血管収縮を引き起こす影響を阻害することによる間接的な血管拡張（例えば、アンジオテンシンＩＩ及び交感神経性血管収縮剤を阻害する）、抗血栓作用（血小板の血管内皮への接着を阻害する）、抗炎症作用（白血球の血管内皮への接着を阻害する）、スーパーオキシドアニオンを捕捉する能力；並びに抗増殖作用（例えば、平滑筋過形成を阻害する）をはじめとする、様々な血管作用を有することが知られている。
【０１００】
ＮＯに上述の作用があることから、その産生障害やバイオアベイラビリティ低下によって、血管収縮（例えば、冠攣縮性狭心症、全身血管抵抗の上昇、高血圧症）；血小板の凝集や血管内皮への接着による血栓症；白血球接着分子や内皮接着分子の上方調節による炎症；血管肥大及び血管狭窄が生じることがある。Ｎｉｔｒｉｃ Ｏｘｉｄｅ：Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｐａｔｈｏｂｉｏｌｏｇｙ；Ｂｙ：Ｌｏｕｉｓ Ｊ．Ｉｇｎａｒｒｏ（編者） ＩＳＢＮ−１０：０１２３７３８６６０；ＩＳＢＮ−１３：９７８０１２３７３８６６０ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒ：Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ − ２００９を参照されたい。ＮＯの産生及びバイオアベイラビリティの異常と関連する疾患又は状態としては、限定するものではないが、高血圧症；肥満；脂質異常症（特に、高コレステロール血症及び高トリグリセリド血症）；糖尿病（Ｉ型及びＩＩ型）；心不全；アテローム性動脈硬化症；並びに加齢と関連する状態が挙げられる。Ｄｅｓｓｙ，Ｃ， ｅｔ ａｌ．，（２００４年９月）． “Ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｏｌｅｓ ｏｆ Ｎｉｔｒｉｃ Ｏｘｉｄｅ：Ｉｎ ｔｈｅ Ｈｅａｒｔ ａｎｄ ｔｈｅ Ｃｏｒｏｎａｒｙ Ｖａｓｃｕｌａｔｕｒｅ”及びＣｕｒｒｅｎｔ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ − Ａｎｔｉ−Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ＆ Ａｎｔｉ−Ａｌｌｅｒｇｙ Ａｇｅｎｔｓ ｉｎ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｂｅｎｔｈａｍ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ Ｌｔｄ．） ３（３）：２０７−２１６を参照されたい。
【０１０１】
ＭＣＰ−１（単球走化性タンパク質−１）
様々な実施形態では、本発明は、対象のＭＣＰ−１レベルを調節する（例えば、低下させる）方法を提供する。本方法は、対象のＭＣＰ−１レベルを低下させ、それによりＭＣＰ−１レベルの上昇と関連する疾患を治療するのに十分な量の本発明のナノ粒子製剤を対象に投与することを含む。ＭＣＰ−１は、炎症部位に単球を動員するケモカインである。ＭＣＰ−１は、白色脂肪組織中の脂肪細胞や間質血管細胞によって発現され、分泌される。肥満の齧歯類では、循環ＭＣＰ−１レベルがより高く、脂肪組織によるＭＣＰ−１発現が増加している。Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２００３ Ｎｏｖ ２１，２７８（４７）：４６６５４−６０を参照されたい。さらに、ＭＣＰ−１は、インスリン刺激性のグルコース取込みやインスリン誘導性のインスリン受容体チロシンリン酸化を減少させることによってインスリン抵抗性に直接寄与することができ、また、脂肪生成遺伝子の発現を減少させることによって、脂肪細胞の増殖や分化を阻害することができる。
【０１０２】
ＭＣＰ−１をマウスに投与すると、末梢で循環単球が増加し、動脈中の単球蓄積が増加し、新生内膜が形成されるので、アテローム発生におけるＭＣＰ−１の役割が示唆される。Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｒｅｓ．２００３ Ｊａｎ；５７（１）：１７８−８５を参照されたい。
【０１０３】
硫化水素
様々な実施形態では、本発明は、対象のＨ２Ｓレベルを増加させる方法を提供する。本方法は、対象の血清Ｈ２Ｓレベルを増加させ、それにより低Ｈ２Ｓレベルと関連する疾患を治療するのに十分な量の本発明のナノ粒子製剤を対象に投与することを含む。Ｈ２Ｓは、代謝、心機能及び細胞生存を調節するいくつかの細胞シグナルを促進する。内在性Ｈ２Ｓのバイオアベイラビリティは、システインの生合成に関与するいくつかの酵素によって調節される。Ｓｚａｂｏ Ｃ（２００７）．Ｈｙｄｒｏｇｅｎ ｓｕｌｆｉｄｅ ａｎｄ ｉｔｓ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ．Ｎａｔ Ｒｅｖｉｅｗｓ ６：９１７−９３５を参照されたい。健常人とＩＩ型糖尿病の男性患者から採取した血液サンプル中のＨ２Ｓのレベルは、糖尿病患者におけるＨ２Ｓレベルの著しい減少を示した。より低いＨ２Ｓレベルは、微小血管機能障害の臨床マーカーと関連しており、この血圧降下ガスの喪失が、糖尿病患者における血管合併症の発症の要因となり得ることを示唆している。Ｂｒａｎｃａｌｅｏｎｅ Ｖ， ｅｔ ａｌ．（２００８）． Ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｈ２Ｓ ｉｓ ｉｍｐａｉｒｅｄ ｉｎ ｎｏｎ−ｏｂｅｓｅ ｄｉａｂｅｔｉｃ（ＮＯＤ） ｍｉｃｅ；Ｂｒ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ １５５：６７３−６８０：Ｌｅｆｅｒ ＤＪ（２００７）． Ａ ｎｅｗ ｇａｓｅｏｕｓ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｅｍｅｒｇｅｓ：ｃａｒｄｉｏ ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｈｙｄｒｏｇｅｎ ｓｕｌｆｉｄｅ；及びＰｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ １０４：１７９０７−１７９０８を参照されたい。
【０１０４】
ＩＣＡＭ−１（細胞間接着分子−１）
様々な実施形態では、本発明は、対象のＩＣＡＭ−１レベルの上昇を調節する（例えば、低下させる）方法を提供する。本方法は、対象のＩＣＡＭ−１レベルを低下させ、それによりＩＣＡＭ−１レベルの上昇と関連する疾患を治療するのに十分な量の本発明のナノ粒子製剤を対象に投与することを含む。ＩＣＡＭ−１は、風邪を引き起こすウイルスの大多数によって用いられるものと同じ受容体分子である。ライノウイルスは、風邪をよく引き起こす。接着分子は、発生学、免疫学、及び悪性腫瘍をはじめとする、多くの医学分野において主要な役割を果たす。
【０１０５】
多くの生理学的過程では、細胞が他の細胞又は細胞外マトリックスに接触し、これらに接着することが必要となる。細胞と細胞の相互作用や細胞とマトリックスの相互作用は、いくつかの細胞間接着分子、すなわち「ＩＣＡＭ」ファミリーによって仲介される。Ｎｅｗ Ｃｅｌｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｐａｔｒｉｃｋ Ｎｏｔｔ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｏｒｓ，ＩＳＢＮ−１０：１６０６９２３７８１；ＩＳＢＮ−１３：９７８１６０６９２３７８８ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒ：Ｎｏｖａ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｂｏｏｋｓ − ２００９−０４を参照されたい。従って、ＩＣＡＭ−１は、正常な過程と病態生理学的過程の両方において必須の役割を果たす（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：２２３−２５２）。従って、ＩＣＡＭ−１の機能又は発現を阻止することによって細胞接着を媒介するための戦略が開発されてきた。このような戦略は、典型的には、抗ＩＣＡＭ−１抗体、ＩＣＡＭ−１結合を競合的に阻止するリガンド、又はＩＣＡＭ−１ ｍＲＮＡに対するアンチセンス核酸分子を利用する。しかしながら、このような治療で用いられる薬剤は、ＩＣＡＭ−１を化学量論的に低下させるに過ぎず、通常、罹患細胞又は活性化細胞による異常に高いＩＣＡＭ−１の産生に圧倒される。
【０１０６】
好中球の浸潤を特徴とする疾患は、慢性疾患を伴うことが多く、その場合、ＩＣＡＭ−１又はＶＣＡＭ−１の発現が優勢になる。Ａｄａｍｓ ＤＨ，Ｓｈａｗ Ｓ １９９４ Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ．Ｌａｎｃｅｔ ３４３：８３１−８３６を参照されたい。局所発現の増加及び血清可溶性接着分子の増加は、動脈硬化症、血管炎、関節炎、腎疾患及び肝疾患、虚血再灌流状態、臓器拒絶反応、転移、並びに多くのより病的な状態をはじめとする、様々な病的状態において報告されている。Ｂｅｖｉｌａｃｑｕａ ＭＰ， ｅｔ ａｌ．，１９９４ Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｄｉｓｅａｓｅ．Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｍｅｄ ４５：３６１−３７８を参照されたい。
【０１０７】
接着分子は、特定の形態の炎症において重要であり得る。Ｇｏｒｓｋｉ Ａ １９９４ ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｃｅｌｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ｉｎ ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ．Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｔｏｄａｙ １５：２５１−２５５を参照されたい。従って、必要なのは、ＩＣＡＭ−１媒介性の細胞接着を効果的に減少させるか又は遮断するために、ＩＣＡＭ−１の発現を選択的に阻害する触媒量又は準化学量論的量の薬剤である。
【０１０８】
多くの様々なウイルス感染阻害方法のうちの１つは、ウイルスの細胞への結合を阻止することである。ライノウイルス血清型の多くは、細胞への付着に、単一の細胞受容体、すなわち、細胞間接着分子−１（ＩＣＡＭ−１）を用いている。このことは、風邪の治療法の探索を目指した、この受容体の遮断薬の開発につながる可能性がある。
【０１０９】
ＩＣＡＭ−１の発現は、アレルギー性接触皮膚炎、固定薬疹、扁平苔癬、及び乾癬などの種々の炎症性皮膚障害とも関連付けられている。Ｈｏ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｊ．Ａｍ．Ａｃａｄ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．２２：６４−６８；Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ ａｎｄ Ｎｉｃｋｏｌｏｆｆ，１９８９，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ １３５：１０４５−１０５３；Ｌｉｓｂｙ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｂｒ．Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１２０：４７９−４８４；及びＳｈｉｏｈａｒａ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ａｒｃｈ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１２５：１３７１−１３７６を参照されたい。さらに、ＩＣＡＭ−１発現は、関節リウマチ患者（Ｈａｌｅ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ａｒｔｈ．Ｒｈｅｕｍ．３２：２２−３０）；糖尿病患者の膵臓Ｂ細胞（Ｃａｍｐｂｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｐ．Ｎ．Ａ．Ｓ．ＵＳＡ ８６：４２８２−４２８６）；グレーブス病患者の甲状腺濾胞細胞（Ｗｅｅｔｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｊ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．１２２：１８５−１９１）；腎同種移植及び肝同種移植の拒絶反応（Ｆａｕｌｌ ａｎｄ Ｒｕｓｓ，１９８９，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ４８：２２６−２３０；Ａｄａｍｓ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｌａｎｃｅｔ １１２２−１１２５）；並びに炎症性腸疾患（ＩＢＤ）組織（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｔ，１９９０，Ｎａｔｕｒｅ ３４６：４２５−３４）において検出されている。
【０１１０】
Ｉ型糖尿病に共通して認められる合併症もまたＩＣＡＭ−１の発現を伴う。例えば、ＩＣＡＭ−１によって媒介される白血球の毛細血管内皮への接着は、網膜、末梢神経、及び腎臓などの糖尿病患者の特定の組織における微小血管虚血を引き起こすことがある。これは、これらの組織の毛細血管非灌流をもたらし、この毛細血管非灌流がさらに、糖尿病性網膜症、糖尿病性神経障害もしくは糖尿病性腎症、又は細胞間接着分子−１（ＩＣＡＭ−１）を介する多形核白血球と内皮細胞の接着によって誘導される血管形成を引き起こす。従って、ＩＣＡＭ−１によって媒介される白血球停滞を阻害することで、糖尿病と関連する網膜異常を予防することができると考えられている。Ｍｉｙａｍｏｔｏ Ｋ ｅｔ ａｌ．（２０００），Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１５６：１７３３−１７３９；Ｍｉｙａｍｏｔｏ Ｋ ｅｔ ａｌ．（１９９９），Ｐ．Ｎ．Ａ．Ｓ ＵＳＡ ９６：１０８３６−１０８４；Ｊｕｄｅ Ｅ Ｂ ｅｔ ａｌ．（１９９８），Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ ４１：３３０−６；Ｍｉｙａｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｐ．Ｎ．Ａ．Ｓ ＵＳＡ ９６：１０８３６−１０８４１；及びＹｏｎｇ Ｓｏｎｇ Ｇｈｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５９，５１２８−５１３２，Ｏｃｔｏｂｅｒ １５，１９９９を参照されたい。
【０１１１】
グルタチオン
様々な実施形態では、本発明は、対象のＧＳＨレベルを増加させるか又は調節する方法を提供する。本方法は、対象のＧＳＨレベルを増加させるか又は調節するのに十分な量の本発明のナノ粒子製剤を対象に投与することを含む。
【０１１２】
還元型のグルタチオン（ＧＳＨ）は、動物細胞において最も多い非タンパク質チオールである。そのデノボ合成とサルベージ合成は還元された細胞環境を維持するのに役立ち、このトリペプチドは多くの細胞質酵素の補因子であり、いくつかの細胞タンパク質の重要な翻訳後修飾としての役割も果たす。システインチオールは、外因性求電子種と内在性求電子種の両方との反応において求核物質としての役割を果たす。結果として、活性酸素種（ＲＯＳ）は、自然反応と触媒反応の両方において、ＧＳＨの標的となることが多い。ＲＯＳは、細胞シグナル伝達事象及びヒト疾患病理において明確な役割を有するので、ＧＳＨと関連酵素の発現の不均衡は、種々の状況の原因とされている。ＧＳＨ代謝と疾患（例えば、癌、神経変性疾患、嚢胞性線維症（ＣＦ）、ＨＩＶ、及び老化）の因果関係が示されている。ＧＳＨ恒常性に関与する酵素の多型発現は、これらの疾患の易罹患性や進行に影響を及ぼす。Ｄａｎｙｅｌｌｅ Ｍ．Ｔｏｗｎｓｅｎｄ，＊，Ｋｅｎｎｅｔｈ Ｄ．Ｔｅｗ，Ｈａｉｍ Ｔａｐｉｅｒｏ Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ＆ Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ ５７（２００３） １４５−１５５を参照されたい。
【０１１３】
様々な実施形態では、本発明のナノ粒子を経口投与する。例示的な実施形態では、ナノ粒子を１日当たり約１０ｍｇ〜約１００ｍｇ、例えば、１日当たり約１０ｍｇ〜約５０ｍｇの投薬量で投与する。
【０１１４】
上に示した例示的な方法を含む、本発明の方法の各々の様々な実施形態では、本発明の製剤で治療される対象は、ビタミンＥ補給を必要としない。様々な他の実施形態では、本製剤の投与によって調節される代謝パラメータ又は本製剤の投与によって治療される疾患は、対象へのビタミンＥ補給により治療可能であることが認識されているか又は対象へのビタミンＥ補給により改善することが知られているパラメータ又は疾患ではない。
【０１１５】
血液化学又は代謝の変化を測るための当該技術分野で認められているアッセイが、本発明の粒子の治療関連（又は他の）投薬量の有効性を確認するのに用いられる。以下に、様々な投薬量で本発明の有効性を解析するために使用可能な従来のアッセイのごく一部を示す実施例を提供する。血漿中のサイトカイン、インスリン、脂質過酸化及びビタミンＣ、ＣＲＰ、ＭＣＰ−１、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α、レプチン、レチノール結合タンパク質並びにインスリンのレベルを測る標準的アッセイは、Ｆｉｓｈｅｒ Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｃｏ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌｌ製の市販のキットを用いたサンドイッチＥＬＩＳＡ法の形態を取ることができる。酸化ストレスは、そのチオバルビツール酸との反応によるマロンジアルデヒド（脂質過酸化の最終産物）を測定することにより決定することができる。Ｊａｉｎ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４：２１３４０−２１３４５，１９８９；Ｊａｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｄｉａｂｅｔｅｓ ３８：１５３９−１５４３，１９８９を参照されたい。タンパク質酸化は、Ｙａｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ．３２７：３３０−３３４，１９９６に開示されている方法により決定することができる。インスリン抵抗性は、例えば、ＨＯＭＡ法により決定することができる（Ｙａｔｕｒｕ ｅｔ ａｌ．，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ ３４：２１９−２３，２００６）。血漿中のビタミンＣ濃度は、Ｎｉｎｏ及びＳｈａｗの方法により決定することができる。Ａｌａｎ Ｗｕ（編）．Ｔｅｉｔｚ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｔｅｓｔｓ（第４版），Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＷＢ Ｓａｕｎｄｅｒｓ Ｃｏ．２００６を参照されたい。グリコシル化ヘモグロビンは、Ｈｅｌｅｎａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｂｅａｕｍｏｎｔ，ＴＸ）から購入したＧｌｙｃｏ−Ｔｅｋ親和性カラムキット及び試薬（カタログ番号５３５１）を用いて決定することができる。グルコースレベルは、グルコースオキシダーゼを用いて、Ａｃｃｕ−ｃｈｅｃｋ Ａｄｖａｎｔａｇｅグルコメーター（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｈｅｉｍ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）により決定することができる。
【０１１６】
以下の実施例は、本発明を説明するために提供されている。しかしながら、本発明は、これらの実施例に記載されている特定の条件又は詳細に限定されるものではないことが理解されるべきである。
【実施例】
【０１１７】
実施例１
１％ポリコサノールを含む液体製剤の調製
１．スクロースラウレート（０．１〜０．５％）を含む水溶液（１００ｍＬ）を調製し、撹拌しながら８０〜８５℃まで加温する。
２．ビーカーの中に、ポリコサノール（１ｇ）と少なくとも１つの賦形剤又は安定剤（２〜５ｇ）とを量り取り、撹拌しながら８０〜８５℃まで加温する。
３．強く撹拌しながら、ビーカーの中にポリコサノールと賦形剤とともに糖エステル溶液を入れ、撹拌しながら８０〜８５℃に５分間維持する。温度が５０℃未満になると、この製剤は透明になる。
４．ヒーターのスイッチを切り、室温に達するまで穏やかに撹拌させておく。
５．防腐剤（例えば、ソルビン酸カリウム、安息香酸ナトリウム、クエン酸無水物）を添加する。
６．この溶液をボトルに入れる。
【０１１８】
実施例２
【表１】
【表２】
【表３】
【０１１９】
実施例３
粒子サイズが５３ｎｍで、オクタコサノールが約８２〜８３％の１％ポリコサノール溶液（１０ｍｇ／ｍＬ）を用いたラット研究
材料及び方法
雄のズッカー糖尿病肥満ラットを、５週齢でＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入した。動物にランダムに番号を振り、温度と湿度が調節された動物施設内のプラスチック製のコロニーケージで１匹ずつ飼育した。動物を、一般に認められた委員会プロトコルに従い、このプロトコルを用いて飼育した。ラットを２日間、環境とトレーナーによる扱いに馴れさせた。ラットの高血糖症を、その血中グルコース濃度を測定することにより検査した。血中グルコースは、好都合なＡｃｃｕ−Ｃｈｅｋ（商標登録）グルコメーター（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ Ｃｏｒｐ．，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）を用いて尾部切開により測定した。ラットをランダムに３つのグループに分けた。処理グループの各々のラットには、２０Ｇの給餌針（Ｐｏｐｐｅｒ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｈｙｄｅ Ｐａｒｋ，ＮＹ）を用いた強制経口投与により毎日８週間、適切な用量の本発明のナノ粒子ポリコサノール製剤を補給した。対照グループには、ビヒクル緩衝液を補給した。ポリコサノール補給投薬量を決定するために、体重を週１回モニタリングした。ラットを、２２±２℃で、１２時間：１２時間の明暗周期にして、水とＰｕｒｉｎａ ５００８実験食（ｌａｂ ｃｈｏｗ ｄｉｅｔ）を自由摂取させて、標準的な飼育条件下で飼育した。８週目の終わりに、ラットを一晩絶食させた後、解析のためにハロタン（２−ブロモ−２−クロロ−１，１，１−トリフルオロエタン）に曝露させて安楽死させた。１９ １／２ゲージ針で心穿刺して血液を採取し、ヘパリンを含むシリンジに血液を引き入れ、その後すぐに、それをＥＤＴＡバキュテナーチューブに移した。
【０１２０】
３つのグループのＺＤＦラットが存在した。１．対照ＺＤＦ；２．ポリコサノール（５ｍｇ／日／ｋｇ ＢＷ）を補給したＺＤＦ、及び（３）補給を開始する時点のラット。これにより、ＺＤＦラットの血液中で解析すべき全てのパラメータのベースラインレベルが分かった。同じぐらいの年齢のスプラーグドーリーラットを、正常食で飼育した年齢を一致させた正常対照ラットとして用いた。
【０１２１】
ラットを、ポリコサノールありとポリコサノールなしで、Ｐｕｒｉｎａ ５００８食で８週間飼育した。アイスバケットに置かれた予冷されたＥＤＴＡチューブの中に血液サンプルを採取した。ＥＤＴＡ血をＨｂＡ１ｃアッセイとＣＢＣアッセイ（臨床血液学研究室が実施）に用いた。ＥＤＴＡ血を遠心分離した。ＲＢＣをＧＳＨアッセイと脂質過酸化アッセイに用いた。透明な血漿は、脂質過酸化産物及びタンパク質酸化産物のために、並びにＥＬＩＳＡアッセイによるＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＭＣＰ−１、ＣＲＰ、アディポカイン、インスリン感受性のために取っておいた。解析は全て採血後すぐに実施した。酸化ストレスマーカーと炎症促進性サイトカイン用のサンプルは、−７０℃フリーザーで保存した。ポリコサノール補給時の毒性の兆候を明らかにするために、ＳＧＯＴ値とＳＧＰＴ値を含む完全な化学プロファイル（ＣＭＰ２）も実施した。サイトカインアッセイでは、異なる日にサイトカインを解析したときのプレート間変動をモニタリングするために、常に対照血清サンプルを解析した。日による対照血清値の変動が７％を超える場合は、アッセイを繰り返した。
【０１２２】
サイトカイン、インスリン、脂質過酸化及びビタミンＣのアッセイ：血漿中のＣＲＰ、ＭＣＰ−１、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α、レプチン、レチノール結合タンパク質及びインスリンのレベルは、Ｆｉｓｈｅｒ Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｃｏ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌｌ）製の市販のキットを用いたサンドイッチＥＬＩＳＡ法により決定した。製造元のキットにより指定された適切な対照と標準を全て用いた。サイトカインアッセイでは、異なる日に解析したときのプレート間変動を調べるために、対照サンプルを毎回解析した。酸化ストレスは、そのチオバルビツール酸との反応によるマロンジアルデヒド（脂質過酸化の最終産物）を測定することにより決定した（１，２）。Ｊａｉｎ “Ｈｙｐｅｒｇｌｙｃｅｍｉａ ｃａｎ ｃａｕｓｅ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｌｉｐｉｄ ｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｏｎ ａｎｄ ｏｓｍｏｔｉｃ ｆｒａｇｉｌｉｔｙ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｒｅｄ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌｓ．” Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２６４：２１３４０−２１３４５，１９８９；及びＪａｉｎ ｅｔ ａｌ．， “Ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｌｉｐｉｄ ｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｏｎ ａｎｄ ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｅｄ ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ ｉｎ ｄｉａｂｅｔｅｓ” Ｄｉａｂｅｔｅｓ ３８：１５３９−１５４３，１９８９を参照されたい。タンパク質酸化は、“Ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ ｈｙｐｏｃｈｌｏｒｏｕｓ ａｃｉｄ ｓｃａｖｅｎｇｅｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｃａｒｂｏｎｙｌ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ” Ａｒｃｈ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ ３２７：３３０−３３４，１９９６に記載のＹａｎ ｅｔ ａｌ．の方法により決定した。インスリン抵抗性は、ＨＯＭＡ法により決定した。Ｙａｔｕｒｕ ｅｔ ａｌ．， “Ｒｅｓｉｓｔｉｎ ａｎｄ ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ ｌｅｖｅｌｓ ｉｎ ｓｕｂｊｅｃｔｓ ｗｉｔｈ ｃｏｒｏｎａｒｙ ａｒｔｅｒｙ ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ ｔｙｐｅ ２ ｄｉａｂｅｔｅｓ．” Ｃｙｔｏｋｉｎｅ ３４：２１９−２３，２００６；及びＩｓｍａｅｌ ｅｔ ａｌ．， “Ｂｏｃｋａｄｅ ｏｆ ｓｅｎｓｏｒｙ ａｂｎｏｒｍａｌｉｔｉｅｓ ａｎｄ ｋｉｎｉｎ Ｂ１ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｂｙ Ｎ−ａｃｅｔｙｌ−Ｌ−ｃｙｓｔｅｉｎｅ ａｎｄ ｒａｍｉｐｒｉｌ ｉｎ ａ ｒａｔ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｉｎｓｕｌｉｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ．” Ｅｕｒ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５８９：６６−７２，２００８を参照されたい。血漿中のビタミンＣ濃度は、Ｎｉｎｏ及びＳｈａｗの方法により決定した。Ｗｕ（編）．Ｔｅｉｔｚ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｔｅｓｔｓ（第４版） Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＷＢ Ｓａｕｎｄｅｒｓ Ｃｏ．２００６を参照されたい。ＧＳＨは、Ｒｅｄ Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｌｌ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ：Ａ ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｐｕｂ：Ｇｒｕｎｅ ａｎｄ Ｓｔｒａｔｔｏｎ，ＮＹ．１３１−１３４，１９８４に記載のＢｅｕｔｌｅｒの方法により決定した。
【０１２３】
グリコシル化ヘモグロビン（ＧＨｂ）、グルコース及びインスリン抵抗性の測定
グリコシル化ヘモグロビンは、Ｈｅｌｅｎａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｂｅａｕｍｏｎｔ，ＴＸ）から購入したＧｌｙｃｏ−Ｔｅｋ親和性カラムキット及び試薬（カタログ番号５３５１）を用いて決定した。グルコースレベルは、グルコースオキシダーゼを用いてＡｃｃｕ−ｃｈｅｃｋ Ａｄｖａｎｔａｇｅグルコメーター（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｈｅｉｍ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）により決定した。
【０１２４】
肝抽出物のウェスタンブロット解析：実験用ラットから摘出した組織を液体窒素を用いてすぐに凍結させ、よくすり潰して粉末にし、さらに使用するまで−７０℃で凍結させた。凍結組織粉末（＜１５０ｍｇ）をプロテアーゼインヒビターを含む１ｍＬのＰＢＳに再懸濁して洗浄し、穏やかにボルテックスし、１５，０００ｒｐｍで４℃にて１０分間遠心分離した。上清を捨て、細胞ペレットを上述のようにもう１回洗浄した後、プロテアーゼインヒビターを含む５００ｍＬの抽出緩衝液（２５ｍＭ Ｔｒｉｓ、０．５ｍＭ ＥＤＴＡ、０．１ｍＭ ＰＭＳＦ、ｐＨ７．４）に再懸濁し、ホモジナイザーを用いてホモジナイズし、穏やかな超音波処理にかけた。チューブを１５，０００ｒｐｍ（４℃、３０分）で遠心分離し、上清（抽出物）を回収した。回収した抽出物を上記のようにもう１回遠心分離にかけ、細胞破片を除去した。この抽出物のタンパク質含量をＢＣＡタンパク質アッセイを用いて測定した。メルカプトエタノールを還元剤として含めて５分間沸騰させた後、各グループからの等量のタンパク質をＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲルに充填した。分離されたタンパク質をニトロセルロースメンブレンに転写し、Ｔ−ＰＢＳ中の１％ＢＳＡでブロッキングし、それぞれの一次抗体とともに４℃で一晩インキュベートした。翌日、メンブレンをＴ−ＰＢＳで洗浄し（８分、４回）、５％脱脂粉乳中の二次抗体とともに、室温で３０分間、インキュベートした。メンブレンをＴ−ＰＢＳで再度洗浄し（８分、４回）、化学発光試薬で２分間処理し、オートラジオグラフィで現像するＸ線フィルムに感光させた。
【０１２５】
別途言及しない限り、化学薬品は全てＳｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）から購入した。
【０１２６】
データ解析：データは、Ｓｉｇｍａ Ｐｌｏｔ統計ソフトウェア（Ｊａｎｄｅｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｓａｎ Ｒａｆａｅｌ，ＣＡ）で異なるグループ間のＡＮＯＶＡを用いて解析した。０．０５未満のｐ値を有意とみなした。
【０１２７】
結果
異なる処理グループ間において屠殺時点での体重差は認められなかった。補給を開始してから５週間及び７週間後に評価したとき、各ラットによる１週間分の食餌摂取量は、両方のグループで同じぐらいであった。ポリコサノールを８週間補給した雄のズッカー肥満ラットの体重と食餌摂取量を下記の表１に示す。各値は平均±ＳＥを表す。
【表４】
【０１２８】
全ての図において、「＊」で印が付けられた値は、対照と比較して統計的に有意である（ｐ＜０．０５）。図３０は、補給したラットの血液中のアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、アルカリホスファターゼ（ＡＰ）、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、血中尿素窒素（ＢＵＮ）、クレアチニン及びアニオンＧａｐのレベルに関するデータを示す。結果の解析から、ポリコサノール補給によって、グルコース、総コレステロール、トリグリセリド、タンパク質酸化、ＭＣＰ−１及びＣＲＰ及びアルカリホスファターゼの血中レベルが低下し、ビタミンＣの血中レベルが増加したことが示されている。ポリコサノールはトランスアミナーゼの血中レベルを変化させなかったが、糖尿病ラットと比較してアルカリホスファターゼレベルを確かに低下させた。
【０１２９】
表ＩＩは、ポリコサノール補給が、糖尿病ラットのヘモグロビン、ヘマトクリット又はＲＢＣ数に影響を及ぼさなかったことを示し、これは、赤血球生存の変化がポリコサノール補給ＺＤＦラットのより低いグリコシル化ヘモグロビンレベルに与える影響を一切否定し、ポリコサノール補給ラットにおいて毒性の兆候が一切ないことを支持するものである。このデータは、肝機能検査又は腎機能検査で評価したときに、ポリコサノール補給が毒性を一切引き起こさないようであることを示す。
【表５】
【０１３０】
肝臓は、グルコース代謝の調節において主要な役割を果たす。Ｍｉｃｈａｅｌ ｅｔ ａｌ．， “Ｌｏｓｓ ｏｆ Ｉｎｓｕｌｉｎ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ ｌｅａｄｓ ｔｏ ｓｅｖｅｒｅ ｉｎｓｕｌｉｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ａｎｄ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ ｈｅｐａｔｉｃ ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ．” Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ．６：８７−９７，２０００を参照されたい。肝臓は、グルコース、タンパク質及びビタミンの貯蔵器官である。血中グルコースレベルの主な調節因子である糖生成経路及び糖新生経路は肝臓に特有のものである。インスリン、グルカゴン、増殖ホルモン、コルチゾール、及びカテコールアミンをはじめとする、いくつかのホルモンが、肝臓によるグルコース代謝の調節に寄与する。従って、本発明者らは、ポリコサノール補給ラットにおける肝臓でのＮＦ−κＢ活性化の役割と、グルコース代謝に対するその潜在的な寄与を調べた。
【０１３１】
本発明者らの研究の結果は、実験的糖尿病が、ベースライン対照と比較して、糖尿病ズッカーラットの肝臓におけるＮＦ−κＢの活性化を誘導したことを示す。Ｙｅｒｎｅｎｉ ｅｔ ａｌ．， “Ｈｙｐｅｒｇｌｙｃｅｍｉａ−ｉｎｄｕｃｅｄ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｎｕｃｌｅａｒ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ｋａｐｐａＢ ｉｎ ｖａｓｃｕｌａｒ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌｓ．” Ｄｉａｂｅｔｅｓ．４８：８５５−６４，１９９９を参照されたい。ＮＦ−κＢは、高血糖症の既知の標的である。Ｍｅｎｇ ｅｔ ａｌ．， “Ａｋｔ ｉｓ ａ ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ ｔａｒｇｅｔ ｏｆ ＮＦｋＢ．” Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７７：２９６７４−２９６８０を参照されたい。糖尿病と関連する酸化ストレスは、ＮＦ−κＢ（ｐ５０及びｐ６５として知られる２つのＤＮＡ結合サブユニットからなるヘテロ二量体）の既知の活性化因子である。ＮＦ−κＢは、抑制性κＢ（ＩκＢ）として知られるその抑制性タンパク質と複合体を形成して細胞質中に存在する。活性化の後、ＩκＢはＮＦ−κＢから解離し、ユビキチン化され、分解される。ＮＦ−κＢは解放されて、核に移行する。その核移行と同時に、ＮＦ−κＢはｐ６５サブユニットの残基２７６でセリンリン酸化を受け、周囲のクロマチン構成要素と会合する。その後、ＮＦ−κＢはＤＮＡと結合し、炎症促進性サイトカインとインスリン抵抗性の既知のメディエーターの転写を促進する。従って、ＮＦ−κＢのリン酸化ｐ６５サブユニットの測定は、ＮＦ−κＢ活性化を決定するための有効なツールである。図２７に示すように、糖尿病ラットは、ＮＦ−κＢ活性化の上昇を示した。本発明者らは、ＮＦ−κＢが本明細書に記載のポリコサノール製剤の投与によって阻害されることも見出した。本発明者らの結果は、ポリコサノール補給によって、糖尿病ラットにおける血糖症と酸化ストレスの阻害と炎症促進性サイトカインの分泌とが有意に改善されたことを示している。
【０１３２】
結論として、ポリコサノール補給には、血糖や炎症促進性サイトカインの血中レベルを低下させ、ビタミンＣレベルを増加させる可能性がある。この効果は、ポリコサノールによるＮＦ−κＢ活性化阻害によってもたらされる。
【０１３３】
実施例４
臨床試験研究
糖尿病患者の血圧低下における有効性と認容性をプライマリーエンドポイントとして評価し、かつその他の重要なバイオマーカーを評価するための非盲検単一施設研究において、上記の１％ポリコサノール製剤を用いた。この研究の結果を下記の実施例４．１にまとめる。
【０１３４】
実施例４．１
Ｈｏｍａ％Ｂ（β細胞機能（％Ｂ））とインスリン感受性（％Ｓ）とインスリン抵抗性をＨＯＭＡ Ｃａｌｃｕｌａｔｏｒ ｖ２．２．２（Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ １９９８；２１：２１９１−９２）を用いて計算した。この研究には、平均年齢が４８±２２歳の１４名の糖尿病対象が含まれた。糖尿病の平均期間は、１３．５±１２．５年であった。対象は、１２週間の間、２０ｍｇ（１日２回、１ｍＬ）を摂取した。対象の食事に制限はなかった。
【０１３５】
下記の表ＩＩＩに示すように、ＢＭＩが２８を超える患者における収縮期血圧及び拡張期血圧、Ｃ反応性タンパク質レベル、超低密度脂質レベル（ＶＬＤＬ）、血清アルブミン、血清グロブリンレベル、並びに胴回りの減少は、ｐ＜＜０．０５で統計的に有意であった。この結果から、高血圧症の治療、Ｃ反応性タンパク質レベルが高い患者における心血管リスクの軽減、ＶＬＤＬ（ＬＤＬの前駆体）の減少、胴回りの減少、及び腎機能の改善に有用であり得ることが示される。ポリコサノールは認容性が極端に高く、患者からの有害事象の報告はなかった。
【表６】
【０１３６】
糖尿病患者の収縮期圧の低下における極めて有意な結果を基にして、英国の前向き糖尿病研究（ＵＫ Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｓｔｕｄｙ）（ＵＫＰＤＳ）に基づくリスク因子の低下を計算することができる。５０００人の患者を対象にしたこの１０年にわたる研究により、糖尿病の合併症と収縮期血圧の間には直接的なリスク関係があるという結論が下された。収縮期圧の１０ｍｍの降下によって、リスク因子は１０〜２０％低下する。これを下記の表ＩＶに示す。“Ｓｙｓｔｏｌｉｃ ｐｒｅｓｓｕｒｅ ｌｏｗｅｒｓ ｔｈｅ ｒｉｓｋ ｏｆ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｙｓｔｏｌｉｃ ｂｌｏｏｄ ｐｒｅｓｓｕｒｅ ｗｉｔｈ ｍａｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ ａｎｄ ｍｉｃｒｏ ｖａｓｃｕｌａｒ ｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｔｙｐｅ ２ ｄｉａｂｅｔｅｓ：ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎａｌ ｓｔｕｄｙ” Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ（２０００） ３２１：４１２−４１９を参照されたい。
【表７】
【表８】
【０１３７】
ＵＫＰＤＳリスク評価方法を適用すると、１２週目で、リスク低下が相当なものであったことが分かる。本発明のポリコサノール製剤は、糖尿病患者及び高血圧症関連疾患による危険にさらされている者のリスク因子を軽減するのに有用であると推測することができる。
【０１３８】
実施例４．２：
３歳の時に１型糖尿病と診断された２６歳の男性に本明細書に記載の１％ポリコサノール製剤（２０ｍｇ／日）を投与した。この男性の治療前の１日のインスリン摂取量は、毎日３０ユニットであった。ベースライン時点で、及び２１週間にわたって、空腹時インスリンを測定した。結果を下記の表ＶＩに示す。
【表９】
【０１３９】
上のデータに基づくと、ポリコサノール製剤は、１型糖尿病患者において、内在性インスリン産生時のβ細胞活性の増強に役立つ可能性がある。
【０１４０】
実施例４．３：
ネフローゼ症候群と診断された４歳の女児を１日１０ｍｇの本明細書に記載の１％ポリコサノール製剤で治療した。ネフローゼ症候群は、尿中タンパク質（１日に３．５グラムを上回る）、低血中タンパク質レベル、高コレステロールレベル、及び腫れを含む一群の症状である。ネフローゼ症候群は、腎臓、特に、糸球体の基底膜に損傷を与える様々な障害によって引き起こされる。これはすぐに、尿中タンパク質の異常な排泄を引き起こす。ネフローゼ症候群はあらゆる年齢層を襲う可能性がある。小児では、２歳から６歳の間に最もよく見られる。
【０１４１】
ベースラインでは尿路症状はなかった。女児の尿対タンパク質クレアチニン比（ＵＰＣＲ）は６．０であった。ポリコサノール製剤で２週間治療した後、ＵＰＣＲ比は１．６まで低下し、４週間後には０．６まで低下した。下記のデータに基づくと、ポリコサノール製剤は、実施例４．１に示すような腎疾患を治療するのに有用である可能性がある。実施例４．１では、アルブミンの低下が統計的に有意であった。
【表１０】
【０１４２】
実施例４．４：
日中に膝関節痛、夜間に関節の痺れと疼痛の症状を示す４８歳の男性を１日２０ｍｇの本明細書に記載の１％ポリコサノール製剤で３カ月間治療した。食事でビタミンＣが十分に消費されたにもかかわらず、ベースライン時のビタミンＣの血液血漿レベルは低かった（約０．１５ｍｇ％）。関節リウマチと骨関節炎は、Ｘ線とＭＲＩにより除外された。ＲＡ因子と尿酸レベルは正常であった。
【表１１】
【０１４３】
患者の日中の膝関節痛は完全に抑えられ、夜間の疼痛は最小限にまで軽減された。
【０１４４】
実施例４．５：
２型糖尿病の４３歳の男性患者（検出時は３８歳）は、ベースライン時の血漿ビタミンＣレベルが０．２７ｍｇ％と非常に低かった。この研究のために、この男性患者に１日２０ｍｇの本明細書に記載の１％ポリコサノール製剤を６カ月間投与した。
【０１４５】
６カ月目の終わりに、男性患者の血漿ビタミンＣレベルは３．８２ｍｇ％にまで改善していた。ＨｂＡ１ｃと空腹時インスリンレベルの改善も認められた。
【表１２】
【０１４６】
実施例４．６：
ＩＩ型糖尿病及び高インスリン血症と診断された４２歳の男性（診断時は３７歳）を１日２０ｍｇの本明細書に記載の１％ポリコサノール製剤で６カ月間治療した。下記の表に示すように、この男性は、６カ月目の終わりに空腹時インスリンレベルの有意な低下を示した。
【表１３】
【０１４７】
実施例４．７：
４１歳の時に２型糖尿病と診断された４７歳の女性患者を１日２０ｍｇの本明細書に記載の１％ポリコサノール製剤で６カ月間治療した。６カ月目の終わりに、ウェスト・ヒップ比、空腹時グルコースレベル、及びｈｓ−Ｃ反応性タンパク質レベルの有意な低下が認められた。
【表１４】
【０１４８】
実施例４．８：
ベースライン時に超低ＨＤＬを示した、非糖尿病の４８歳の肥満（ＢＭＩ＞３０）男性患者を１日４０ｍｇの本明細書に記載の１％ポリコサノール製剤で８週間治療した。結果は、ＨＤＬ、ＬＤＬ、ＣＨＯＬ／ＨＤＬ（総コレステロール／ＨＤＬ）比の大きな改善と６ｋｇの体重減少とＢＭＩ比の改善を示した。
【表１５】
【０１４９】
実施例４．９：
高血圧症及び２型糖尿病と診断された５０歳の女性を１日２０ｍｇの本明細書に記載の１％ポリコサノール製剤で治療した。結果は、６カ月での血圧の大きな改善を示した。
【表１６】
【０１５０】
実施例４．１０：
１０歳の女児が尿中アルブミンによる腎感染と診断された。この女児を１日１０ｍｇの本明細書に記載の１％ポリコサノール製剤で治療した。１０日後の尿検査で感染の完全寛解が示され、尿中アルブミンの痕跡は示されなかった。この結果は、アルブミンの存在を示す腎感染を治療する上での本発明の有用性を示している。
【０１５１】
本明細書に記載の実施例及び実施形態は説明を目的とするものに過ぎず、それに照らして様々な修正又は変更が当業者に示唆され、かつ本出願の精神及び範囲並びに添付の特許請求の範囲の範囲内に含まれるべきであることが理解される。本明細書に引用される刊行物、特許、及び特許出願は全て、あらゆる目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本出願は、２００９年２月２３日に出願された米国仮特許出願第６１／１５４，７１２号に対する優先権の恩典を主張するものであり、これはその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明は、少なくとも１つのポリコサノールを含むナノ粒子組成物、新規のナノ粒子ポリコサノール製剤、及びその使用に関する。様々な実施形態では、ナノ粒子ポリコサノール粒子は、約１００ｎｍ未満の有効平均粒子サイズを有する。
【背景技術】
【０００３】
ポリコサノールは、サトウキビなどの植物源から得られる濃縮長鎖Ｎ−アルキルアルコールの複合混合物である。ポリコサノールが健康なボランティアの血清脂質レベル及び血清リポタンパク質レベルに与える効果を調べたキューバでの初期研究から、２〜４０ｍｇ／ｄの投薬量でポリコサノールを投与することにより、血清脂質レベル及び血清リポタンパク質レベルが低下し（Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｔｈｅｒ．Ｒｅｓ．Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．１９９２；５１：５６８）、高コレステロール血症が軽減する（Ｐｏｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｔｈｅｒ．Ｒｅｓ．Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．；１９９２；５２：５０７）ことが示された。しかしながら、数々のその後の研究にもかかわらず、キューバ国外の研究者は、もとの研究と共になされた主張を確認することができなかった。血清脂質／コレステロールレベルに対するポリコサノールの無効性は、同業者による審査のある評判の高い専門誌において包括的に実証されている。
【０００４】
例えば、Ｆｒａｎｃｉｎｉ−Ｐｅｓｅｎｔｉと共同研究者らは、高コレステロール血症の対象に対してポリコサノールの二重盲検ランダム化プラセボ対照試験を実施し、１０ｍｇ／ｄ及び２０ｍｇ／ｄのポリコサノールの投与では脂質低下効果が示されないという結論を下した（Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ Ｔｈｅｒ．Ｍｅｄ．；２００８；１６（２）：６１；及びＰｈｙｔｏｔｈｅｒ．Ｒｅｓ．；２００８；２２（３）：３１８）。同様の盲検プラセボ対照試験において、Ｂｅｒｔｈｏｌｄと共同研究者らは、１０、２０、４０及び８０ｍｇ／ｄのポリコサノール投与では、プラセボが投与された対象で見られる血清脂質レベルよりも血清脂質レベルが低くならないことを示した（ＪＡＭＡ；２００６；２９５（１９）：２２６２）。Ｄｕｌｌｅｎｓらは、個々のポリコサノール成分（Ｃ２４、Ｃ２６、Ｃ２８、又はＣ３０）でも、天然のポリコサノール混合物（全成分、３０ｍｇ／１００ｇ食餌）でも、ＬＤＬ受容体ノックアウトマウスの血清コレステロール濃度は低下しないことを見出した（Ｊ．Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ．；２００８；４９（４）：７９０）。Ｋａｓｓｉｓと共同研究者らは、ヒトの高コレステロール血症の治療におけるキューバのサトウキビポリコサノールの有効性を１０ｍｇ／ｄの投薬量で研究し、ポリコサノールに高コレステロール血症対象の脂質指標に対する有益な効果がないという結論を下した（Ａｍ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｎｕｔｒ．；２００６；８４（５）：１００３）。Ｌｉｎと共同研究者らは、正常から軽度に上昇した血漿コレステロールを有する対象において２０ｍｇ／ｄの投薬量のコムギ胚芽ポリコサノールの効果を研究したが、血漿コレステロールの低下は検出されなかった（Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ；２００４；５３（１０）：１３０９）。Ｌｕｋａｓｈｅｖｉｃｈらは、錠剤又は軟質ゲル製剤として毎日投与した蜜蝋ポリコサノール（１０ｍｇ又は４０ｍｇ）に、軽度から中程度の高コレステロール血症の対象の血清脂質に対する効果がないことを見出した（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ；２００６；１１４：８９２）。Ｍｕｒｐｈｙらは、ウサギにヒマワリ油由来のポリコサノールを食餌補給しても、コレステロール低下効果がないことを見出した（Ｊ．Ａｍ．Ｃｏｌｌｅｇｅ Ｎｕｔｒ；２００８；２７（４）：４７６）。
【０００５】
従って、キューバ人の研究の初期の一見前途有望そうな結果にもかかわらず、同時期に行なわれた盲検プラセボ対照試験から到達せざるを得ない結果は、当該技術分野で認められているポリコサノール製剤は、血清脂質／コレステロールレベルの調節に効果がないということである。
【０００６】
他の代謝パラメータ及び生理的パラメータに対するポリコサノール製剤の有用性に関する研究も同様に否定的な結果を生んでいる。例えば、ポリコサノールは、血糖レベル、血糖管理（Ｃｒｅｓｐｏ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．；１９９９：１１７）又は糖尿病状態（Ｓｈｉｎｂｏｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ；２００７；１３９−１４４）に対して効果がないことが示された。
【０００７】
キューバ人の研究で使用されたポリコサノールの組成物又は製剤が、キューバ人の研究と他の研究者の研究の矛盾した結果の原因であるかどうかに関して、しばらくの間、論争が存在した。この論争は、独創的な研究において解消された（Ｋａｓｓｉｓ，Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ（２００７），９７，３８１−３８８；Ｋａｓｓｉｓ，Ｌｉｐｉｄｓ Ｈｅａｌｔｈ Ｄｉｓ．（２００８）；７：１７；Ｋａｓｓｉｓ， Ａｐｐｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｎｕｔｒ．Ｍｅｔａｂ；（２００８）；３３（３）：５４０及びＤｕｌｌｅｎｓ， Ｊ．Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ．（２００８），４９：７９０）。これらの研究者は、キューバ人の研究で使用された製剤を含む、利用された様々なサトウキビ由来のポリコサノール製剤を調べた。彼らの研究により、試験したポリコサノール製剤の中に、対照と比べてヒト又は動物における脂質パラメータを有意に改善するものはないという結論が下された。さらに、ＬＤＬ酸化のインビボ評価により、ベースライン及び対照と比べた酸化ＬＤＬ濃度の有意な変化は示されなかった。このように、２００８年の半ばの時点で、キューバのサトウキビポリコサノール製剤及び他のサトウキビポリコサノール製剤の血清脂質低下効果に関する論争は、キューバ国外で解決されている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、ポリコサノールのナノ粒子及びナノ粒子製剤並びにこのナノ粒子及び製剤を作製する方法を提供する。極めて驚くべきことに、本発明のポリコサノール製剤は、コレステロールと血清脂質を減少させ、収縮期血圧と拡張期血圧を低下させる。さらに、本発明の製剤は、抗酸化効果を発揮し、インスリン抵抗性及びその結果を軽減し、ビタミンＣレベルを上昇させ、血糖レベルを調節する。従って、本発明はまた、本発明の製剤を対象に投与することによって疾患を治療し、代謝を調節する方法を提供する。本発明はまた、代謝を調節し、高血圧症、高コレステロール血症及びいくつかの他の疾患を治療する方法を提供する。例えば、本発明の製剤は、インビボのタンパク質酸化を制御し、血中グルコースレベルを調節するのに有用であり、インスリン抵抗性及びその結果、例えば、糖尿病、及びその有害な下流効果を治療及び予防するために用いることができる。さらに、本発明の製剤は、対象のインビボのビタミンＣレベルの調節に有用である。
【０００９】
従って、様々な実施形態において、本発明は、ポリコサノールのナノ粒子を提供する。典型的な本発明のナノ粒子は、約６０％〜約９５％、例えば、約７０％〜約９５％のオクタコサノールを含むポリコサノール画分と、安定剤画分とを含む。例示的な実施形態では、安定剤画分は、ポリ（エチレングリコール）エステルを含む。様々な実施形態では、安定剤画分は、トコフェリルエステルを含む。安定剤画分の例示的な成分は、トコフェリルポリ（エチレングリコール）エステル、例えば、トコフェリルポリエチレングリコール（１０００）スクシネート（「ＴＰＧＳ」）を含む。例示的な本発明のナノ粒子は、約１００ｎｍ未満の直径を有する。
【００１０】
本発明の他の目的、利点、及び実施形態を以下の詳細な説明に示す。
【００１１】
以下に明確される内容と同様に、本発明の上述の特性、利点及び目的が達成され、また、詳細に理解されるように、上で簡潔に要約された本発明のより具体的な説明は、添付の図面で示されるその特定の実施形態を参照してなされ得る。これらの図面は、本明細書の一部を形成する。しかしながら、添付の図面は、本発明の好ましい実施形態を示すものであり、従って、それらの範囲に限定するものと考えられるべきでないことに留意すべきである。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】他のナノ粒子と比べた本発明の粒子のサイズを示す。
【図２】光散乱で測定される約４８ｎｍのピークを有する本発明のナノ粒子のサイズ分布を示す。
【図３】光散乱で測定される約５５ｎｍのピークを有する本発明のナノ粒子のサイズ分布を示す。
【図４】光散乱で測定される約５３ｎｍのピークを有する本発明のナノ粒子のサイズ分布を示す。
【図５】未処理のラット並びに１ｍｇ／ｋｇ及び２ｍｇ／ｋｇの本発明の粒子で処理したラットにおけるインスリン抵抗性のレベルを示す。
【図６】未処理のラット及び本発明の粒子で処理したラットにおけるアディポネクチンの血漿レベルを示す。
【図７】未処理のラット並びに１ｍｇ／ｋｇ及び２ｍｇ／ｋｇの本発明の粒子で処理したラットにおけるアルカリホスファターゼの血中レベルを示す。
【図８】未処理のラット並びに１ｍｇ／ｋｇ及び２ｍｇ／ｋｇの本発明の粒子で処理したラットにおける総コレステロール／ＨＤＬ比のレベルを示す。
【図９】未処理のラット並びに１ｍｇ／ｋｇ及び２ｍｇ／ｋｇの本発明の粒子で処理したラットにおけるＣ反応性タンパク質の血中レベルを示す。
【図１０】未処理のラット及び本発明の粒子で処理したラットにおける空腹時血中グルコースレベルを示す。
【図１１】未処理のラット及び本発明の粒子で処理したラットにおけるグルタチオンレベルを示す。
【図１２】未処理のラット及び本発明の粒子で処理したラットにおけるグリコシル化ヘモグロビン（ＨｂＡ１ｃ）レベルを示す。
【図１３】未処理のラット及び本発明の粒子で処理したラットにおけるＨＤＬレベルを示す。
【図１４】未処理のラット及び本発明の粒子で処理したラットにおけるＩＣＡＭ−１（細胞間接着分子）レベルを示す。
【図１５】未処理のラット及び本発明の粒子で処理したラットにおけるＭＣＰ−１（単球走化性タンパク質−１）レベルを示す。
【図１６】未処理のラット及び本発明の粒子で処理したラットにおける血漿Ｈ２Ｓ（硫化水素）のレベルを示す。
【図１７】未処理のラット及び本発明の粒子で処理したラットにおけるＰＡＩ−１（プラスミノーゲン活性化インヒビター）レベルを示す。
【図１８】未処理のラット及び本発明の粒子で処理したラットにおける一酸化窒素レベルを示す。
【図１９】未処理のラット及び本発明の粒子で処理したラットにおけるタンパク質酸化レベルを示す。
【図２０】未処理のラット及び本発明の粒子で処理したラットにおけるランダムなグルコースレベルを示す。
【図２１】未処理のラット及び本発明の粒子で処理したラットにおける赤血球脂質過酸化レベルを示す。
【図２２】未処理のラット及び本発明の粒子で処理したラットにおけるＲＢＰ−４（レチノール結合タンパク質）レベルを示す。
【図２３】未処理のラット及び本発明の粒子で処理したラットにおけるＴＮＦ−α（腫瘍壊死因子）レベルを示す。
【図２４】未処理のラット及び本発明の粒子で処理したラットにおける総コレステロールレベルを示す。
【図２５】未処理のラット及び本発明の粒子で処理したラットにおけるトリグリセリドレベルを示す。
【図２６】未処理のラット及び本発明の粒子で処理したラットにおけるビタミンＣレベルを示す。
【図２７】未処理のラット及び本発明の粒子で処理したラットにおけるウェスタンブロット解析によるＮＦ−κＢ（活性化Ｂ細胞の核因子κ軽鎖エンハンサー）ｐ５０及びｐ６５のタンパク質強度を示す。
【図２８】未処理のラット及び本発明の粒子で処理したラットにおけるｐ−５０−ｎｆ−κｂ／βアクチン比を示す。
【図２９】未処理のラット及び本発明の粒子で処理したラットにおけるｐ−６５−ｎｆ−κｂ／βアクチン比を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
定義
別途指示がない限り、本明細書で用いられる全ての技術用語及び科学用語は、一般に、本発明が属する技術分野の専門家によって共通に理解されるものと同じ意味を有する。
【００１４】
「ポリコサノール」という用語は、濃縮Ｎ−アルキルアルコールの混合物を指す。ポリコサノールの例示的な供給源は、サトウキビ及び蜜蝋である。ポリコサノールは、既知の方法により抽出される。ポリコサノール中の長鎖アルコールは、主に１−オクタコサノール、１−トリアコンタノール、１−テトラコサノール、及び１−ヘキサコサノールである。典型的な市販の商業組成物は、（ａ）１−テトラコサノール：０〜１０％；（ｂ）１−ヘキサコサノール：２〜１５％；（ｃ）１−ヘプタコサノール：０〜０．５％；（ｄ）１−オクタコサノール：５５〜７０％；（ｅ）１−ノナコサノール：０〜１０％；（ｆ）１−トリアコンタノール：５〜２０％；（ｇ）１−ドトリアコンタノール：０．１〜１０％；及び（ｈ）１−テトレートリアコンタノール：０．１〜１０％といった最低９０％の脂肪アルコールから構成される。
【００１５】
「有効平均粒子サイズ」、「粒子サイズ」及び「サイズ」という用語は互換的に用いられる。これらの用語は、光散乱を用いた粒子サイズ評価において生じるピークの頂点に本質的に対応する粒子サイズを指す。本発明の粒子のサイズを決定するための有用な方法は、光散乱に限定されない。
【００１６】
本方法及び製剤は、予防目的又は治療目的で使用され得る。いくつかの実施形態では、任意の疾患もしくは障害を「治療する」又は任意の疾患もしくは障害の「治療」という用語は、疾患又は障害を改善すること（すなわち、疾患又はその臨床症状の少なくとも１つの進行を停止させる又は軽減すること）を指す。他の実施形態では、「治療する」又は「治療」は、対象によって認識されない場合がある少なくとも１つの物理的パラメータを改善することを指す。さらに他の実施形態では、「治療する」又は「治療」は、物理的に（例えば、認識可能な症状の安定化もしくは根絶）、生理的に（例えば、物理的パラメータの安定化もしくは根絶）又はその両方のいずれかで、疾患又は障害を抑制することを指す。また他の実施形態では、「治療する」又は「治療」は、疾患又は障害の発症を遅延させることを指す。
【００１７】
「治療的有効量」は、本発明の方法に言及するとき、本明細書において「に有効な量」と互換的に用いられる。ポリコサノール投薬量に関して用いられるとき、これらの用語は、特定の薬理学的応答を提供する投薬量を指し、この特定の薬理学的応答を得るために、ポリコサノールは、そのような治療を必要とする相当数の対象に投与される。特定の場合に特定の対象に投与される「治療的有効量」は、そのような投薬量が当業者に「治療的有効量」とみなされるとしても、特定の疾患の治療を受ける患者の１００％に有効なものではあり得ず、本明細書に記載の疾患の治療に必ずしも有効であるわけではないことが強調される。ポリコサノール投薬量が、特定の場合には、経口投薬量として、又は血中で測定されるような薬物レベルに関して測定されることがさらに理解されるべきである。
【００１８】
本明細書で用いられる場合、「個体」、「対象」、及び「患者」という用語は、動物、例えば、哺乳動物（例えば、ヒト）を指すために互換的に用いられる。
【００１９】
Ａ．組成物
様々な実施形態では、本発明は、ポリコサノールのナノ粒子を提供する。典型的な本発明のナノ粒子は、約７０％〜９０％のオクタコサノールを含むポリコサノール画分と、安定剤画分とを含む。例示的な実施形態では、安定剤画分は、ポリ（エチレングリコール）エステルを含む。様々な実施形態では、安定剤画分は、トコフェリルエステルを含む。安定剤画分の例示的な成分としては、トコフェリルポリ（エチレングリコール）エステル、例えば、トコフェリルポリエチレングリコール（１０００）スクシネート（「ＴＰＧＳ」）が挙げられる。例示的な本発明のナノ粒子は、約１００ｎｍ未満の直径を有する。薬学的製剤をはじめとする、複数の本発明のナノ粒子を取り込んだ製剤も提供する。
【００２０】
様々な実施形態では、ナノ粒子は、少なくとも約７０％のオクタコサノール、少なくとも約７１％のオクタコサノール、少なくとも約７２％のオクタコサノール、少なくとも約７３％のオクタコサノール、少なくとも約７４％のオクタコサノール、少なくとも約７５％のオクタコサノール、少なくとも約７６％のオクタコサノール、少なくとも約７７％のオクタコサノール、少なくとも約７８％のオクタコサノール、少なくとも約７９％のオクタコサノール、少なくとも約８０％のオクタコサノール、少なくとも約８１％のオクタコサノール、少なくとも約８２％のオクタコサノール、少なくとも約８３％のオクタコサノール、少なくとも約８４％のオクタコサノール、少なくとも約８５％のオクタコサノール、少なくとも約８６％のオクタコサノール、少なくとも約８７％のオクタコサノール、少なくとも約８８％のオクタコサノール、少なくとも約８９％のオクタコサノール、又は少なくとも約９０％のオクタコサノールを含むポリコサノール画分を含む。
【００２１】
様々な実施形態では、ナノ粒子は、約９０％以下のオクタコサノール、約８９％以下のオクタコサノール、約８８％以下のオクタコサノール、約８７％以下のオクタコサノール、約８６％以下のオクタコサノール、約８５％以下のオクタコサノール、約８４％以下のオクタコサノール、約８３％以下のオクタコサノール、約８２％以下のオクタコサノール、約８１％以下のオクタコサノール、約８０％以下のオクタコサノール、約７９％以下のオクタコサノール、７８％以下のオクタコサノール、７７％以下のオクタコサノール、７６％以下のオクタコサノール、７５％以下のオクタコサノール、７４％以下のオクタコサノール、７３％以下のオクタコサノール、７２％以下のオクタコサノール、又は７１％以下のオクタコサノールを含むポリコサノール画分を含む。
【００２２】
例示的な実施形態では、ナノ粒子は、約７０％〜約９０％、約７１％〜約８９％、約７２％〜約８８％、約７３％〜約８７％、約７４％〜約８６％、約７５％〜約８５％、約７６％〜約８４％、約７７％〜約８３％、約７８％〜約８２％、約７９％〜約８１％、又は約８０％のオクタコサノールを有するポリコサノール画分を含む。
【００２３】
様々な実施形態では、ポリコサノール画分は、オクタコサノールとトリアコンタノールの両方を含む。例示的な実施形態では、使用されるポリコサノールは、約８：１〜約１７：１、約９：１〜約１６：１、約１０：１〜約１５：１、約１１：１〜約１４：１、約１２：１〜約１３：１、約８：１〜約１５：１、約８：１〜約１３：１、約８：１〜約１１：１、又は約８：１〜約９：１のオクタコサノール：トリアコンタノール比を有する。
【００２４】
様々な実施形態では、ポリコサノール画分は、オクタコサノールとヘキサコサノールの両方を含む。例示的な実施形態では、使用されるポリコサノールは、約１６：１〜約５０：１；約１８：１〜約４５：１；約１９：１〜約４０：１；約１９：１〜約３５：１；約１９：１〜約３０：１；約１９：１〜約２５：１；約１９：１〜約２２：１；又は約１９：１〜約２０：１のオクタコサノール：ヘキサコンタノール比を有する。
【００２５】
様々な実施形態では、ポリコサノール画分は、トリアコンタノールとヘキサコサノールの両方を含む。例示的な実施形態では、使用されるポリコサノールは、最大でも約１．５：１、最大でも約１．３：１；最大でも約１：１；最大でも約０．８：１；最大でも約０．６：１；最大でも約０．４：１；又は最大でも約０．２：１のトリアコサノール：ヘキサコンタノール比を有する。
【００２６】
例示的な実施形態では、ナノ粒子は、約９：１〜約１６：１の比でトリアコンタノールと混合された７０％〜約９５％のオクタコサノールを含むポリコサノール画分と、ＴＰＧＳから本質的に完全に形成されている安定剤画分（例えば、少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％ＴＰＧＳ）とを含む。様々な実施形態では、ポリコサノール画分とＴＰＧＳは、約１：２．８の比である。
【００２７】
本発明は、任意の好適な供給源から獲得又は単離されたポリコサノール又はポリコサノールの成分を利用する。例えば、米国特許第５，６６３，１５６号；第５，８５６，３１６号；第６，１９７，８３２号；第６，２２５，３５４号；及び第６，５９６，７７６号（これらは全て、参照により本明細書に組み込まれる）は、使用される出発材料及び抽出過程に特有のポリコサノール組成物を開示している。様々な実施形態では、本発明のナノ粒子の作製に有用なポリコサノールは、少なくとも約８０％のオクタコサノール、少なくとも約８１％のオクタコサノール、少なくとも約８２％のオクタコサノール、少なくとも約８３％のオクタコサノール、少なくとも約８４％のオクタコサノール、少なくとも約８５％のオクタコサノール、少なくとも約８６％のオクタコサノール、少なくとも約８７％のオクタコサノール、少なくとも約８８％のオクタコサノール、少なくとも約８９％のオクタコサノール又は少なくとも約９０％のオクタコサノールを含む。様々な実施形態では、使用されるポリコサノールは、約８０％〜約８５％のオクタコサノールを含む。例示的な実施形態では、オクタコサノールの量は、約８２％〜約８３％である。
【００２８】
本発明のナノ粒子及びその製剤における安定剤画分として有用な様々な例示的な界面活性剤としては、ビタミンＥ ＴＰＧＳ（トコフェロールプロピレングロコールスクシネート、水溶性形態のビタミンＥ）、ソルビタンモノラウレート（Ｓｐａｎ ２０）、ソルビタンモノパルミテート（Ｓｐａｎ ４０）、ポロキサマー、ソルビタンモノステアレート（Ｓｐａｎ ６０）、ソルビタンモノオレエート（Ｓｐａｎ ８０）、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート（Ｔｗｅｅｎ ２０、ポリソルベート２０）、ポリオキシエチレン（２０）モノパルミテート（Ｔｗｅｅｎ ４０、ポリソルベート４０）、ポリオキシエチレン（２０）モノステアレート（Ｔｗｅｅｎ ６０、ポリソルベート６０）、ポリオキシエチレン（２０）トリステアレート（Ｔｗｅｅｎ ６５、ポリソルベート６５）、ポリオキシエチレン（２０）モノオレエート（Ｔｗｅｅｎ ８０、ポリソルベート８０）、スクロースモノミリステート、スクロースパルミテート／ステアレート、スクロースステアレート、ジオクチルスルホスクシネートナトリウム塩、モノグリセリドモノオレエート、モノグリセリドモノラウレート、モノグリセリドモノパルミテート、レシチン、ジグリセリド混合物、モノグリセリドのクエン酸エステル、モノグリセリドの酢酸エステル、モノグリセリドの乳酸エステル、モノグリセリドのジアセチル酒石酸エステル、脂肪酸のポリグリセロールエステル、シクロデキストリン、脂肪酸のプロピレングリコールエステル、ステアロイルラクチレート、Ｃ８−１８遊離脂肪酸、ＰＴＳ（米国特許第６．０４５．８２６号）又はそれらの組合せが挙げられる。様々な実施形態では、安定剤画分は、シクロデキストリンを含まない。他の実施形態では、安定剤画分は、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルを含まない。
【００２９】
本発明のナノ粒子は、約１００ｎｍ以下の直径を有するナノ粒子を提供する任意の有用な比のポリコサノール画分と安定剤画分を含むことができる。例示的な実施形態では、ポリコサノール画分：安定剤画分の比は、約１：１〜約１：４、例えば、約１：２〜約１：３．５である。同様に、様々な実施形態では、オクタコサノール：安定剤の比の範囲は、約１：１．６〜約１：２．８、例えば、約１：２〜約１：２．５である。例示的な実施形態では、比は、約１：２．２５である。例示的な本発明のナノ粒子におけるトリアコンタノール：安定剤の比の範囲は、約１：１０〜約１：４０、例えば、約１：１１〜約１：３５である。例示的な実施形態では、安定剤はビタミンＥのエステル、例えば、ＴＰＧＳ（ｄ−α−トコフェリルポリエチレングリコール１０００スクシネート）である。
【００３０】
ナノ粒子を生成させる混合物は、安定剤画分の他に、界面活性剤を含むこともできる。例示的な界面活性剤が上に示されており、これらは、例えば、ＴＷＥＥＮ２０、ＴＷＥＥＮ８０、エステル（例えば、スクロースパルミチン酸エステル及びスクロースステアリン酸モノエステル）、ペクチン、寒天など、当業者に一般に知られている。
【００３１】
得られるナノ粒子ポリコサノール製剤を、固体投薬製剤又は液体投薬製剤、例えば、液体分散液、ゲル、エアロゾル、軟膏、クリーム、制御放出製剤、急速溶解製剤、凍結乾燥製剤、錠剤、カプセル、遅延放出製剤、延長放出製剤、パルス放出製剤、即時放出製剤と制御放出製剤を混ぜ合わせた物などにおいて利用することができる。
【００３２】
本発明によるナノ粒子及び薬学的製剤は、１以上の結合剤、充填剤、潤滑剤、懸濁剤、甘味料、香味剤、防腐剤、緩衝剤、湿潤剤、崩壊剤、発泡剤、及び他の賦形剤も含み得る。このような賦形剤は当該技術分野で公知である。
【００３３】
ナノ粒子又はナノ粒子の製剤において使用可能な例示的な賦形剤としては、限定するものではないが、大豆レシチン、大豆レシチン誘導体、カプリロカプロイルマクロゴール−８グリセリド、中鎖トリグリセリド、精製オリーブ油、液体香味料、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、糖エステル、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、プロピレングリコール、デクスパンテノール、アーモンド油、米油、ヒマワリ油、大豆油、ゴマ油、グリセリン、グリセリルパルミトステアレート、甘扁桃油、オレイン酸、ポリグリセリルオレエート、サッカロース、ポロキサマー、マクロゴール−１５ヒドロキシステアレート、ソルビタン脂肪酸エステル、アスコルビルパルミテート、ポリエチレングリコール、セラリューションＦ、セラリューションＨ、セラリューションＣ、ラウロイルマクロゴール−３２グリセリド、グリセリド、Ｃ12−Ｃ18ノグリセリド、Ｃ12−Ｃ18ジグリセリド、及びＣ12−Ｃ18トリグリセリド、グリセリルステアレート、プロピレングリコールラウレート、プロピレングリコールカプリレート、プロピレングリコールジペルゴネートが挙げられる。いくつかの実施形態では、本製剤は、クエン酸無水物、ソルビン酸カリウム、安息香酸ナトリウム、及びスクロースラウレートから選択される１以上の賦形剤を含む。
【００３４】
充填剤の例は、ラクトース一水和物、ラクトース無水物、及び様々なデンプン類であり、結合剤の例は、様々なセルロース類及び架橋ポリビニルピロリドン、微結晶性セルロース（例えば、アビセル（商標）ＰＨ１０１及びアビセル（商標）ＰＨ１０２）、微結晶性セルロース、並びにケイ化微結晶性セルロース（プロソルブＳＭＣＣ（商標））である。
【００３５】
圧縮すべき粉末の流動性に対して作用する薬剤を含む、好適な潤滑剤は、コロイド状二酸化ケイ素（例えば、アエロジル（商標）２００）、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、及びシリカゲルである。
【００３６】
甘味料の例は、スクロース、キシリトール、サッカリンナトリウム、チクロ、アスパルテーム、及びアセスルファムなどの、任意の天然甘味料又は人工甘味料である。香味剤の例は、メガスイート（商標）（ＭＡＦＣＯの商標）、バブルガムフレーバー、及び果実フレーバーなどである。
【００３７】
防腐剤の例は、ソルビン酸カリウム、メチルパラベン、プロピルパラベン、安息香酸及びその塩、パラヒドロキシ安息香酸の他のエステル（例えば、ブチルパラベン）、アルコール（例えば、エチルアルコールもしくはベンジルアルコール）、フェノール化合物（例えば、フェノール）、又は四級化合物（例えば、塩化ベンザルコニウム）である。例示的な防腐剤としては、限定するものではないが、亜硝酸カリウム、亜硝酸ナトリウム、安息香酸、安息香酸ナトリウム、安息香酸カリウム及び安息香酸カルシウムが挙げられる。
【００３８】
好適な希釈剤としては、薬学的に許容される不活性フィラー、例えば、微結晶性セルロース、ラクトース、リン酸水素カルシウム、糖類、及び／又は前述のもののいずれかの混合物が挙げられる。希釈剤の例としては、微結晶性セルロース（例えば、アビセル（商標）ＰＨ１０１及びアビセル（商標）ＰＨ１０２）；ラクトース（例えば、ラクトース一水和物、ラクトース無水物、及びファルマトース（商標）ＤＣＬ２１）；リン酸水素カルシウム（例えば、エムコンプレス（商標））；マンニトール；デンプン；ソルビトール；スクロース；並びにグルコースが挙げられる。
【００３９】
好適な崩壊剤としては、軽く架橋したポリビニルピロリドン、トウモロコシ（ｃｏｒｎ）デンプン、ジャガイモデンプン、トウモロコシ（ｍａｉｚｅ）デンプン、及び加工デンプン類、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン、グリコール酸ナトリウムデンプン、並びにそれらの混合物が挙げられる。
【００４０】
発泡剤の例は、有機酸と炭酸塩又は重炭酸塩などの発泡性カップル（ｅｆｆｅｒｖｅｓｃｅｎｔ ｃｏｕｐｌｅｓ）である。好適な有機酸としては、例えば、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、フマル酸、アジピン酸、コハク酸、及びアルギン酸と、これらの無水物並びに塩とが挙げられる。好適な炭酸塩及び重炭酸塩としては、例えば、炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、重炭酸カリウム、炭酸マグネシウム、炭酸ナトリウムグリシン、炭酸Ｌ−リジン、及び炭酸アルギニンが挙げられる。あるいは、発泡性カップルの重炭酸ナトリウム成分のみが存在していてもよい。
【００４１】
様々な実施形態では、本発明の組成物は、光散乱法、顕微鏡法、又は他の適当な方法で測定したときに、約１００ｎｍ未満、約９０ｎｍ未満、約８０ｎｍ未満、約７０ｎｍ未満、約６０ｎｍ未満、又は約５０ｎｍ未満の平均粒子サイズを有するナノ粒子ポリコサノールナノ粒子を含有する。
【００４２】
本発明の一実施形態では、上述の方法で測定したときに、ポリコサノールナノ粒子の少なくとも９９％が、約１００ｎｍ未満、約９０ｎｍ未満、約８０ｎｍ未満、約７０ｎｍ未満、約６０ｎｍ未満、又は約５０ｎｍ未満の粒子サイズを有する製剤を提供する。
【００４３】
本発明の一実施形態では、上述の方法で測定したときに、ポリコサノールナノ粒子の少なくとも９５％が、約１００ｎｍ未満、約９０ｎｍ未満、約８０ｎｍ未満、約７０ｎｍ未満、約６０ｎｍ未満、又は約５０ｎｍ未満の粒子サイズを有する製剤を提供する。
【００４４】
本発明の一実施形態では、上述の方法で測定したときに、ポリコサノールナノ粒子の少なくとも９０％が、約１００ｎｍ未満、約９０ｎｍ未満、約８０ｎｍ未満、約７０ｎｍ未満、約６０ｎｍ未満、又は約５０ｎｍ未満の粒子サイズを有する製剤を提供する。
【００４５】
本発明の一実施形態では、上述の方法で測定したときに、ポリコサノールナノ粒子の少なくとも８５％（例えば、約８５％〜約９９％、９５％、又は９０％）が、約１００ｎｍ未満、約９０ｎｍ未満、約８０ｎｍ未満、約７０ｎｍ未満、約６０ｎｍ未満、又は約５０ｎｍ未満の粒子サイズを有する製剤を提供する。
【００４６】
本発明の一実施形態では、上述の方法で測定したときに、ポリコサノールナノ粒子の少なくとも約８０％（例えば、約８０％〜約９９％、９５％、９０％、又は８５％）が、約１００ｎｍ未満、約９０ｎｍ未満、約８０ｎｍ未満、約７０ｎｍ未満、約６０ｎｍ未満、又は約５０ｎｍ未満の粒子サイズを有する製剤を提供する。
【００４７】
本発明の一実施形態では、上述の方法で測定したときに、ポリコサノールナノ粒子の少なくとも約７５％（例えば、約７５％〜約９９％、９５％、９０％、８５％、又は８０％）が、約１００ｎｍ未満、約９０ｎｍ未満、約８０ｎｍ未満、約７０ｎｍ未満、約６０ｎｍ未満、又は約５０ｎｍ未満の粒子サイズを有する製剤を提供する。
【００４８】
本発明の一実施形態では、上述の方法で測定したときに、ポリコサノールナノ粒子の少なくとも約７０％（例えば、約７０％〜約９９％、９５％、９０％、８５％、８０％、又は７０％）が、約１００ｎｍ未満、約９０ｎｍ未満、約８０ｎｍ未満、約７０ｎｍ未満、約６０ｎｍ未満、又は約５０ｎｍ未満の粒子サイズを有する製剤を提供する。
【００４９】
本発明の一実施形態では、上述の方法で測定したときに、ポリコサノールナノ粒子の少なくとも約６５％（例えば、約６５％〜約９９％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、又は７０％）が、約１００ｎｍ未満、約９０ｎｍ未満、約８０ｎｍ未満、約７０ｎｍ未満、約６０ｎｍ未満、又は約５０ｎｍ未満の粒子サイズを有する製剤を提供する。
【００５０】
本発明の一実施形態では、上述の方法で測定したときに、ポリコサノールナノ粒子の少なくとも約６０％（例えば、約６０％〜約９９％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、又は６５％）が、約１００ｎｍ未満、約９０ｎｍ未満、約８０ｎｍ未満、約７０ｎｍ未満、約６０ｎｍ未満、又は約５０ｎｍ未満の粒子サイズを有する製剤を提供する。
【００５１】
本発明の一実施形態では、上述の方法で測定したときに、ポリコサノールナノ粒子の少なくとも５５％（例えば、約５５％〜約９９％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、又は６０％）が、約１００ｎｍ未満、約９０ｎｍ未満、約８０ｎｍ未満、約７０ｎｍ未満、約６０ｎｍ未満、又は約５０ｎｍ未満の粒子サイズを有する製剤を提供する。
【００５２】
ナノ粒子のサイズを決定する方法は当該技術分野で周知である。例えば、光回折（すなわち、光散乱計測）技術を用いることができる。これらの技術としては、広帯域散乱計測（米国特許第５，６０７，８００号；第５，８６７，２７６号及び第５，９６３，３２９号）、スペクトル偏光解析（米国特許第５，７３９，９０９号）並びにスペクトル及び単一波長ビームプロファイル反射率測定及びビームプロファイル偏光解析（米国特許第６，４２９，９４３号）が挙げられる。さらに、隔離されたライン又は隔離されたバイア及びメサ上でＣＤ測定を取得するために、単一波長レーザーＢＰＲ又はＢＰＥを用いることが可能な場合もある（２００２年９月１３日に出願された米国特許出願第１０／２４３，２４５号を参照されたい）。
【００５３】
例示的な実施形態では、本発明は、治療的有効量のポリコサノールを含有する本発明のポリコサノールナノ粒子の単位投薬量製剤を提供する。例示的な実施形態では、単位投薬量製剤は、ポリコサノール画分と安定剤画分とを含有するナノ粒子の製剤であり、単位投薬量製剤は、約１０ｍｇ〜約１００ｍｇ、例えば、約１０ｍｇ〜約５０ｍｇを含む。様々な実施形態では、単位投薬量は１日投薬量である。当業者であれば、ポリコサノールの治療的有効量を実験的に決定することができ、純粋な形態で、又はそのような形態が存在する場合には、薬学的に許容される塩、エステル、もしくはプロドラッグの形態で用いることができることを理解するであろう。本発明のナノ粒子組成物中のポリコサノールの実際の投薬量レベルは、特定の組成物や特定の投与方法に対する所望の治療応答を得るために有効なポリコサノールの量を得るように変化させてもよい。従って、選択される投薬量レベルは、所望の治療効果、投与経路、投与されるポリコサノールの効力、所望の治療期間、及び他の因子によって決まる。
【００５４】
投薬量単位組成物は、１日用量を作り上げるために使用し得るような量又はその約量を含み得る。しかしながら、任意の特定の患者に対する特定の用量レベルは、種々の因子、すなわち、達成されるべき細胞応答又は生理的応答の種類及び程度；利用される特定の薬剤又は組成物の活性；利用される特定の薬剤又は組成物；患者の年齢、体重、全体的な健康、性別、及び食事；薬剤の投与時間、投与経路、及び排出速度；治療期間；特定の薬剤と組み合わせて又は同時に使用される薬物；並びに医学分野で周知の同様の因子によって決まることが理解されるであろう。
【００５５】
本発明のナノ粒子の例示的な作製方法では、事前に選択された量の安定剤とポリコサノールを撹拌により一緒に溶解させて、確実に均質になるようにする。高温の水又は添加剤、防腐剤、賦形剤などの水溶液を溶解物に添加し、撹拌しながら、所望の温度、通常は約６０℃〜約９０℃に維持する。例示的な方法では、水と固体の混合物は、水を固体よりも多く含み、例えば、重量で約１０：１である。混合物を撹拌しながら、室温まで冷却する。様々な実施形態では、本方法により粒子の懸濁液が生じる。
【００５６】
Ａ．方法
ポリコサノールのナノ粒子及びこのナノ粒子を含む製剤の他に、本発明は、このナノ粒子及び製剤を用いて、疾患を治療及び予防し、代謝を調節する方法を提供する。様々な実施形態では、本発明のナノ粒子は、高血圧、コレステロール代謝の調節、及び高脂血症、高コレステロール血症、炎症などの治療に有用である。様々な実施形態では、本製剤は、タンパク質酸化の調節又は低下に用いられる。例示的な実施形態では、本製剤は、血糖値、インスリン抵抗性、糖尿病、及び血糖レベルに関連する他の状態の管理に有用である。またさらなる実施形態では、本製剤は、血漿ビタミンＣレベルの調節（例えば、増加）、並びに収縮期血圧及び拡張期血圧の低下に有用である。他の実施形態では、本製剤は、ＮＦ−κＢの活性化の阻害に有用である。
【００５７】
例示的な実施形態では、本製剤を治療的有効量で対象に投与して、特定の疾患又は障害を治療し、ここで、この対象は、別の場合にはポリコサノールによる治療を必要としない。様々な実施形態では、ナノ粒子を投与して、単一の疾患を治療するか又は単一の代謝因子を調節する。従って、例示的な実施形態では、本発明は、高脂血症、高コレステロール血症、高血圧症などの治療を必要としない対象においてインスリン抵抗性を治療する方法を提供する。例示的な実施形態では、本発明は、高脂血症、高コレステロール血症などの治療を必要としない対象において血糖を調節する方法を提供する。様々な実施形態では、本発明は、高脂血症、高コレステロール血症などの治療を必要としない対象において糖尿病（例えば、ＩＩ型糖尿病）を治療する方法を提供する。様々な実施形態では、本発明は、高血圧症、高脂血症、高コレステロール血症などの治療を必要としない対象においてタンパク質酸化を減少させるか又は予防する方法を提供する。例示的な実施形態では、本発明は、高脂血症、高コレステロール血症などの治療を必要としない対象において血清ビタミンＣレベルを増加させる方法を提供する。他の実施形態では、本発明は、高脂血症、高コレステロール血症などの治療を必要としない対象においてＮＦ−κＢの活性化を阻害する方法を提供する。
【００５８】
本発明の方法の非限定的な例を以下に示す。
【００５９】
タンパク質酸化
本発明は、対象のタンパク質酸化を減少させ、従って、この酸化の有害な結果を軽減する方法を提供する。本方法は、対象のタンパク質酸化を減少させる治療的有効量の本発明のポリコサノール製剤を対象に投与することを含む。
【００６０】
酸化ストレスは、肝臓毒素への曝露、肝内胆汁鬱滞、アルコール性肝障害、肝虚血／再灌流傷害及びウイルス性肝炎などの種々の病態生理学的状態における急性及び慢性の疾患及び損傷の発症の原因とされてきた（Ｓｔｅｈｂｅｎｓ，Ｅｘｐ．Ｍｏｌ．Ｐａｔｈｏｌ；２００３；７５（３）：２６５；Ｊａｅｓｃｈｋｅ ｅｔ ａｌ．，Ｔｏｘｉｃｏｌ．Ｌｅｔｔ．；２００３；１４４（３）：２７９−８８；ＭｃＤｏｎｏｕｇｈ，Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ．２００３；１８９（１−２）：８９；Ｊａｅｓｃｈｋｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ；１９８８；８１（４）：１２４０）。活性酸素種（ＲＯＳ）及び活性窒素種（ＲＮＳ）の過剰産生は、これらの病的状態における抗酸化防御の顕著な減少とともに、脂質過酸化、タンパク質酸化及び核塩基酸化の過程を通じて様々な細胞機能を障害する。脂質過酸化は、例えば、細胞膜の物理的特性及び化学的特性を変化させ、それにより、その流動性及び透過性を変化させ、膜シグナル伝達及びイオン交換の障害を生じさせ、膨張、細胞溶解、そして最後には細胞死をもたらす。タンパク質及びＤＮＡの酸化も、細胞の機能障害及び死に直接関係する（Ｆａｎｇ Ｙ Ｚ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ．２００２；１８（１０）：８７２−９）。
【００６１】
タンパク質酸化に関連する疾患としては、限定するものではないが、関節リウマチ（ＩｇＧ、α１−プロテイナーゼインヒビター）、虚血再灌流傷害、肺気腫（α１−プロテイナーゼインヒビター、エラスターゼ）、神経変性疾患（例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病）、筋ジストロフィー、加齢に伴う障害（グルタミンシンセターゼ、炭酸脱水素酵素ＩＩＩ、アコニターゼ）、急性膵炎、白内障発生（α−クリスタリン）、癌、慢性エタノール摂取、成人呼吸逼迫症候群が挙げられる。本発明の製剤を用いて、クワシオルコールの影響を治療又は改善することもできる（Ｍａｎｏｒｙ，Ｊ．Ｐｅｄｉａｔｒ；２０００；１３７：４２１）．
【００６２】
例示的な治療関連用量は、タンパク質酸化の標準的な臨床マーカー（例えば、タンパク質カルボキシル化）の低下をもたらす用量である。タンパク質カルボニル含量（ＰＣＣ）は、最も広く用いられているタンパク質の酸化修飾のマーカーである。ＰＣＣの定量にはいくつかの方法がある。様々な従来法では、２，４−ジニトロフェニルヒドラジンをタンパク質カルボニルと反応させて、対応するヒドラゾンを形成させ、これを放射能計数により光学的に、又は免疫組織化学的に解析することができる。例えば、Ｙａｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．３２７：３３０−３３４，１９９６を参照されたい。
【００６３】
様々な実施形態では、本発明のナノ粒子を経口投与する。例示的な実施形態では、ナノ粒子を１日当たり約１０ｍｇ〜約１００ｍｇ、例えば、１日当たり約１０ｍｇ〜約５０ｍｇの投薬量で投与する。
【００６４】
血清ビタミンＣの増加
本発明はまた、対象の血清ビタミンＣを増加させる方法を提供する。本方法は、対象の血清ビタミンＣレベルを増加させるか又は調節する治療的有効量の本発明のポリコサノール製剤を対象に投与する工程を含む。
【００６５】
インスリン抵抗性及び糖尿病は、健康な対象で見られるレベルと比較したときに、血清ビタミンＣレベルの減少を伴うので、経口投与される補給ビタミンＣが、内皮機能障害をはじめとするインスリン抵抗性及び糖尿病の結果を治療するものとして提案されている。しかしながら、補給ビタミンＣは、単独で用いた場合、有効性が認められなかった（Ｋａｎｅｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｄｉａｂｅｔｅｓ；１９９９；４８（１２）：２３９８）。これはおそらく、経口投与されるビタミンＣ補給では、内皮機能障害又はインスリン抵抗性が改善されないためである（Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｈｅａｒｔ Ｃｉｒｃ．Ｐｈｙｓｉｏｌ；２００６；２９０（１）：Ｈ１３７）。
【００６６】
本発明は、内在性ビタミンＣを調節する方法、従って、インスリン抵抗性、糖尿病及びこれらの症候群の結果を治療する方法を提供する。
【００６７】
例示的な治療関連用量は、例えば、Ｆｉｓｈｅｒ Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｃｏ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌｌ製の市販のキットを用いたサンドイッチＥＬＩＳＡ法で、血清ビタミンＣ濃度の標準的な臨床マーカーの増加をもたらす用量である。例えば、Ｗａｓｈｋｏ ｅｔ ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９９２；２０４：１−１４を参照されたい。
【００６８】
様々な実施形態では、本発明のナノ粒子を経口投与する。例示的な実施形態では、ナノ粒子を１日当たり約１０ｍｇ〜約１００ｍｇ、例えば、１日当たり約１０ｍｇ〜約５０ｍｇの投薬量で投与する。
【００６９】
インスリン抵抗性
本発明はまた、インスリン抵抗性及び限定するものではないが、糖尿病をはじめとする、インスリン抵抗性から生じる結果を治療する方法を提供する。本方法は、インスリン抵抗性を治療するのに十分な量の本発明の粒子製剤を対象に投与することを含む。
【００７０】
インスリン抵抗性は、循環インスリンの生理的効果に対するインスリン標的組織（例えば、骨格筋、肝臓、及び脂肪組織）による不十分な応答と定義される。これら３つの組織におけるインスリン感受性の障害の特徴は、インスリンにより刺激される骨格筋へのグルコース取込みの減少、インスリンにより媒介される肝臓における肝グルコース産生抑制の障害、及び脂肪組織における脂肪分解を抑制するインスリンの能力の低下である。実際、インスリン抵抗性は、ＩＩ型糖尿病の発症の主な予測因子である。
【００７１】
ＩＩ型糖尿病では、インスリン抵抗性が顕性高血糖症の発症の前に起こることが広く認められている。インスリン抵抗性の原因は遺伝性及び／又は後天性であることがある。ＩＩ型糖尿病によっても、患者にコレステロールの上昇や心血管疾患が生じやすくなる。西洋文化では、インスリン抵抗性を引き起こす最も一般的な後天性因子は、肥満、座っていることが多いライフスタイル、及び加齢であり、これらは全て相互に関連する。インスリン抵抗性に対する強力な代償性インスリン分泌応答が存在するとき、グルコースレベルは比較的正常であり続けることができる。しかしながら、インスリン産生膵β細胞がもはや組織インスリン感受性の減少を保証することができなくなったとき、グルコース恒常性が悪化し、耐糖能障害、そして最終的にはＩＩ型糖尿病が発症する。
【００７２】
糖尿病を患う個体は、血流中のビタミンＣのレベルも減少している。研究により、糖尿病患者は、正常個体よりも少なくとも３０％低い循環アスコルビン酸レベルを有することが分かっている（Ｗｉｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｔｒ．Ｒｅｖ．５４（７）：１９３（１９９６））。しかしながら、高用量の経口ビタミンＣを投与しても、この欠損は改善されない（Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｈｅａｒｔ Ｃｉｒｃ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，２９０（１）：Ｈ１３７−４５（２００６））。しかしながら、下記の実施例に見られるように、本発明の投与はこの欠損に対処する。
【００７３】
インスリン抵抗性と関連する一般的な疾患又は障害としては、黒色表皮症、尋常性座瘡、アレルギー、喘息、アルツハイマー病、アテローム性動脈硬化症、双極性障害、乳癌、心血管疾患、白内障、子宮頸癌、鬱病、真性糖尿病、脂質異常症、脂肪肝疾患、小児２型糖尿病、慢性疲労、結腸直腸癌、ふけ、グレーブス病、心疾患、高ＬＤＬコレステロール、高トリグリセリド、多毛症、低血糖症、甲状腺機能低下症、炎症、腎疾患、低ＨＤＬコレステロール、ループス、神経障害、神経炎、骨粗鬆症、膵癌、パーキンソン病、多嚢胞性卵巣症候群、前立腺癌、関節リウマチ、強皮症、脂漏症、卒中、及び静脈瘤が挙げられる。
【００７４】
上に示した疾患及び障害の他に、インスリン抵抗性の主な結果のうちのいくつかとしては、限定するものではないが、２型真性糖尿病、高血圧症、動脈硬化症、多嚢胞性卵巣症候群、非アルコール性脂肪肝疾患、血管内皮の機能の障害、トリグリセリド及びコレステロールの上昇、凝固の障害、腎機能の障害、心拍リズムの障害、並びに尿酸レベルの上昇が挙げられる。
【００７５】
例示的な治療関連用量は、血清インスリン抵抗性の標準的な臨床マーカー、例えば、Ｆｉｓｈｅｒ Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｃｏ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌｌ）製の市販のキットを用いたサンドイッチＥＬＩＳＡ法で測定可能な血漿中のインスリン及びインスリンレベルの減少をもたらす用量である。
【００７６】
様々な実施形態では、本発明のナノ粒子を経口投与する。例示的な実施形態では、ナノ粒子を１日当たり約１０ｍｇ〜約１００ｍｇ、例えば、１日当たり約１０ｍｇ〜約５０ｍｇの投薬量で投与する。
【００７７】
コレステロール関連疾患
様々な実施形態では、本発明は、対象の高コレステロール血症を治療する及び／又は脂質代謝を調節する方法を提供する。本方法は、高コレステロール血症を治療するのに十分な量の本発明のナノ粒子製剤を対象に投与することを含む。
【００７８】
高コレステロール血症、高脂血症及び心血管疾患は、西洋産業社会でますます広まっている。この理由は完全には理解されていないが、肉体労働がますます必要なくなるにつれて座っていることがますます多くなったライフスタイルとともに、一部はこれらの状態に対する遺伝的素因に関連し、一部は飽和脂肪の多い食事に関連している可能性がある。高コレステロール血症及び高脂血症は極めて重大であるが、それは、これらによって、個体に、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞（心臓発作）、及び卒中をはじめとする、心血管疾患が生じやすくなるからである。
【００７９】
特定の形態の高脂血症としては、例えば、高コレステロール血症、家族性異常βリポタンパク質血症、糖尿病性脂質異常症、ネフローゼ脂質異常症及び家族性複合型高脂血症が挙げられる。高コレステロール血症は、血清低密度リポタンパク質−コレステロール及び血清総コレステロールの上昇を特徴とする。低密度リポタンパク質（ＬＤＬコレステロール）は、血中コレステロールを輸送する。家族性異常βリポタンパク質血症（別名、ＩＩＩ型高脂血症）は、血清中でのβＶＬＤＬと呼ばれる超低密度リポタンパク質−コレステロール（ＶＬＤＬコレステロール）粒子の蓄積を特徴とする。正常なアポリポタンパク質Ｅ３が異常なアイソフォームのアポリポタンパク質Ｅ２と置き換わることもまた、この状態と関連している。糖尿病性脂質異常症は、ＶＬＤＬコレステロールの過剰産生、ＶＬＤＬトリグリセリド脂質分解の異常、ＬＤＬコレステロール受容体活性の低下、及び場合によっては、ＩＩＩ型高脂血症などの複数のリポタンパク質異常を特徴とする。腎臓の機能不全と関連するネフローゼ脂質異常症は治療が難しく、多くの場合、高コレステロール血症や高トリグリセリド血症を含む。家族性複合型高脂血症は、高脂血症の複数の表現型、すなわち、ＩＩａ型、ＩＩｂ型、ＩＶ型、Ｖ型又は高アポβリポタンパク質血症を特徴とする。
【００８０】
血清脂質、特にＬＤＬコレステロールを低下させることができれば、心血管疾患の可能性を減少させることができることはよく知られている。血清脂質を減らすことができれば、アテローム性動脈硬化症の進行を遅延させることができるか、又はアテローム性動脈硬化症の退行を誘導することができることもよく知られている。このような場合、高脂血症又は高コレステロール血症と診断された個体は、心血管疾患、特に冠状動脈疾患のリスクを低下させる目的でアテローム性動脈硬化症の進行を遅延させるか又はアテローム性動脈硬化症の退行を誘導するために、脂質低下療法を考慮すべきである。このような療法は、その他の結果として、卒中や心筋梗塞のリスクを低下させる。さらに、正常な血清脂質レベルとみなされるレベルを示す特定の個体が心血管疾患を発症することもある。これらの個体では、脂質過酸化や高レベルのＬｐ（ａ）又はリポタンパク質Ａのような他の因子によって、コレステロールレベルや脂質レベルが比較的正常であるにもかかわらず、アテローム発生が生じることがある。
【００８１】
本明細書で用いられる「治療的有効量」の例示的なマーカーは、対象に投与（例えば、経口投与）したときに、一例として、総コレステロールレベルを低下させること、ＬＤＬコレステロールを低下させること、ＨＤＬコレステロールを上昇させること、総コレステロール／ＨＤＬ比を低下させること、及び／又はトリグリセリドを低下させることによって健康な血清脂質プロファイルを維持するか、あるいは健康体重の維持を助ける本発明の製剤中のポリコサノールの量を指す。
【００８２】
別の例示的な治療関連用量は、脂質代謝及び心血管危険因子の標準的な臨床マーカーである、Ｃ反応性タンパク質の減少をもたらす用量である。
【００８３】
ＮＦ−κＢ活性化の阻害
様々な実施形態では、本発明は、対象のＮＦ−κＢの活性化を阻害する方法を提供する。本方法は、ＮＦ−κＢの活性化を阻害するのに十分な量の本発明のナノ粒子製剤を対象に投与することを含む。
【００８４】
ＮＦ−κＢ／Ｒｅｌファミリーの転写因子は、ホモ二量体やヘテロ二量体を形成するいくつかの構造的に関連するタンパク質から構成され、ｐ５０／ｐ１０５、ｐ５２／ｐ１００、ＲｅｌＡ（ｐ６５）、ｃ−Ｒｅｌ／ＮＦ−κＢを含む。哺乳動物で最もよく見られるＲｅｌ／ＮＦ−κＢ二量体は、ｐ５０−ＲｅｌＡ（ｐ５０／ｐ６５）ヘテロ二量体を含み、特にＮＦ−κＢと呼ばれる。これは細胞質中に存在する遍在性因子であるが、活性化されると、核に移行し、核内で遺伝子の転写を誘導する。ほとんどの疾患が無秩序な炎症によって引き起こされるために、ＮＦ−κＢは多種多様な疾患と関連付けられている。従って、ＮＦ−κＢ活性化を阻害することができる薬剤は、ＮＦ−κＢ関連疾患の発症を予防するもしくは遅延させるか、又はＮＦ−κＢ関連疾患を治療する可能性がある。
【００８５】
ＮＦ−κＢは、フリーラジカル、炎症性刺激、発癌物質、腫瘍促進物質、内毒素、γ線、紫外線（ＵＶ）光、及びＸ線によって活性化される（Ｂ．Ｂ．Ａｇｇａｒｗａｌ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅａｒ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ−ｋａｐｐａ Ｂ ａｓ ａ ｔａｒｇｅｔ ｆｏｒ ｃａｎｃｅｒ ｄｒｕｇ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｌｅｕｋｅｍｉａ．１６：１０５３−６８）。活性化されると、ＮＦ−κＢは、アポトーシスを抑制し、細胞の形質転換、増殖、浸潤、転移、化学療法耐性、放射線耐性、及び炎症を誘導することが示されている２００を超える遺伝子の発現を誘導する。Ｋｕｍａｒ Ａ， ｅｔ ａｌ．，２００４．Ｎｕｃｌｅａｒ ｆａｃｔｏｒ−ｋａｐｐａ Ｂ：Ｉｔｓ ｒｏｌｅ ｉｎ ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｊ Ｍｏｌ Ｍｅｄ．，８２：４３４−４４８を参照されたい。
【００８６】
活性化形態のＮＦ−κＢは、限定するものではないが、癌、アレルギー、頭痛、疼痛、心筋梗塞、複合性局所疼痛症候群、心肥大、筋ジストロフィー（２ａ型）、筋肉疲労、異化障害、１型糖尿病、２型糖尿病、肥満、胎児の成長遅延、高コレステロール血症、アテローム性動脈硬化症、心疾患、慢性心不全、虚血／再灌流、卒中、脳動脈瘤、狭心症、肺疾患、嚢胞性線維症、酸誘導性の肺損傷、肺高血圧症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、ヒアリン膜症、腎疾患、糸球体疾患、アルコール性肝疾患、レプトスピラ腎症、腸疾患、腹膜子宮内膜症、皮膚疾患、副鼻腔炎、中皮腫、無汗性外胚葉性形成異常、ベーチェット病、色素失調症、結核、喘息、関節炎、クローン病、大腸炎（ラット）、眼アレルギー、緑内障、虫垂炎、パジェット病、膵炎、歯周炎、子宮内膜症、炎症性腸疾患、炎症性肺疾患、敗血症、シリカ誘導性の疾患、睡眠時無呼吸、ＡＩＤＳ（ＨＩＶ−１）、自己免疫、抗リン脂質症候群、ループス、ループス腎炎、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、慢性疾患症候群、家族性地中海熱、遺伝性周期性発熱症候群、心理社会的ストレス疾患、神経病理学的疾患、家族性アミロイド神経障害、炎症性神経障害、外傷性脳損傷、脊髄損傷、乾癬、敗血性ショック、パーキンソン病、多発性硬化症、リウマチ性疾患、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、網膜疾患、白内障、及び様々な炎症性疾患をはじめとする、疾患及び障害の原因とされている。本発明の製剤及び方法は、ＮＦ−κＢの活性化を阻害する能力を示しており、この能力により、体内のＮＦ−κＢ活性化と関連する疾患を治療又は予防することができる。
【００８７】
アディポネクチン
様々な実施形態では、本発明は、対象のアディポネクチンレベルを増加させる方法を提供する。本方法は、アディポネクチンレベルの増加させ、それにより低アディポネクチンレベルと関連する疾患を治療するのに十分な量の本発明のナノ粒子製剤を対象に投与することを含む。
【００８８】
アディポネクチンは、グルコース調節や脂肪酸異化をはじめとする、いくつかの代謝過程を調節するタンパク質ホルモンである。Ｄｉｅｚ ＪＪ，Ｉｇｌｅｓｉａｓ Ｐ．“Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｔｈｅ ｎｏｖｅｌ ａｄｉｐｏｃｙｔｅ−ｄｅｒｉｖｅｄ ｈｏｒｍｏｎｅ ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｄｉｓｅａｓｅ．” Ｅｕｒ．Ｊ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．１４８（３）：２９３−３００，２００３を参照されたい。
【００８９】
アディポネクチンは、もっぱら脂肪組織から血流中に分泌され、多くの他のホルモンと比べて血漿中に非常に多く存在する。このホルモンのレベルは、成人では体脂肪率と逆相関する。Ｕｋｋｏｌａ Ｏ，Ｓａｎｔａｎｉｅｍｉ，“Ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ：ａ ｌｉｎｋ ｂｅｔｗｅｅｎ ｅｘｃｅｓｓ ａｄｉｐｏｓｉｔｙ ａｎｄ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｃｏ−ｍｏｒｂｉｄｉｔｉｅｓ” Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．８０（１１）：６９６−７０２，２００２を参照されたい。
【００９０】
このホルモンは、２型糖尿病、肥満、アテローム性動脈硬化症、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、また、メタボリックシンドロームの独立危険因子を引き起こすおそれのある代謝異常の抑制において役割を果たす。Ｒｅｎａｌｄｉ Ｏ．ｅｔ ａｌ．，２００９ “Ｈｙｐｏａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎｅｍｉａ：ａ ｒｉｓｋ ｆａｃｔｏｒ ｆｏｒ ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｓｙｎｄｒｏｍｅ” Ａｃｔａ Ｍｅｄ Ｉｎｄｏｎｅｓ ４１（１）：２０−４を参照されたい。
【００９１】
プラスミノーゲン活性化インヒビター
様々な実施形態では、本発明は、対象のＰＡＩ−１タンパク質レベルを調節する（例えば、低下させる）方法を提供する。本方法は、対象のＰＡＩ−１レベルを低下させるのに十分な量の本発明のナノ粒子製剤を対象に投与することを含む。ＰＡＩ−１は、ウロキナーゼ型及び組織型のプラスミノーゲン活性化因子を不活化することによって線維素溶解を阻害するセリンプロテアーゼインヒビターである。血漿ＰＡＩ−１の活性は、深夜１２時から朝６時の間に最も高い（Ｋｌｕｆｔ Ｃ， ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｒｏｍｂ Ｈａｅｍｏｓｔ．１９８８ Ａｐｒ ８；５９（２）：３２９−３２）。
【００９２】
ＰＡＩ−１は、様々な疾患状態（例えば、いくつかの形態の癌）、並びに肥満及びメタボリックシンドロームにおいて増加したレベルで存在する。ＰＡＩ−１は、これらの状態を有する患者における血栓症の発生の増加と関連付けられている（Ｍｉｍｕｒｏ Ｊ（１９９１） “［Ｔｙｐｅ １ ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ：ｉｔｓ ｒｏｌｅ ｉｎ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｒｅａｃｔｉｏｎｓ］．” Ｒｉｎｓｈｏ Ｋｅｔｓｕｅｋｉ ３２（５）：４８７−９．ＰＭＩＤ １８７０２６５．）：Ｂｉｎｄｅｒ ＢＲ， ｅｔ ａｌ．（２００２）．“Ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ １：ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｒｏｌｅｓ”． Ｎｅｗｓ Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｓｃｉ．１７：５６−６１．ＰＭＩＤ １１９０９９９３：Ｈｏｅｋｓｔｒａ Ｔ， ｅｔ ａｌ．（２００４）．“Ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ−ｔｙｐｅ １：ｉｔｓ ｐｌａｓｍａ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔｓ ａｎｄ ｒｅｌａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｒｉｓｋ．” Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．９１（５）：８６１−７２：Ｌｉｊｎｅｎ ＨＲ（２００５）．“Ｐｌｅｉｏｔｒｏｐｉｃ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ−１．” Ｊ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．３（１）：３５−４５；Ｄｅ Ｔａｅｙｅ Ｂ， ｅｔ ａｌ．（２００５）．“Ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ−１：ａ ｃｏｍｍｏｎ ｄｅｎｏｍｉｎａｔｏｒ ｉｎ ｏｂｅｓｉｔｙ，ｄｉａｂｅｔｅｓ ａｎｄ ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｄｉｓｅａｓｅ．” Ｃｕｒｒｅｎｔ ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ５（２）：１４９−５４：Ｄｅｌｌａｓ Ｃ，Ｌｏｓｋｕｔｏｆｆ ＤＪ（２００５）．“Ｈｉｓｔｏｒｉｃａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ＰＡＩ−１ ｆｒｏｍ ｉｔｓ ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ｔｏ ｉｔｓ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｒｏｌｅ ｉｎ ｃｅｌｌ ｍｏｔｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｄｉｓｅａｓｅ．” Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．９３（４）：６３１−４０）。
【００９３】
ＴＮＦ−α
様々な実施形態では、本発明は、対象のＴＮＦ−αレベルを調節する（例えば、低下させる）方法を提供する。本方法は、対象のＴＮＦ−αレベルを低下させ、それによりＴＮＦ−αレベルの上昇と関連する疾患を治療するのに十分な量の本発明のナノ粒子製剤を対象に投与することを含む。腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）は炎症応答を促進し、この炎症応答は、関節リウマチ、強直性脊椎炎、クローン病、乾癬、アルツハイマー病及び難治性喘息などの自己免疫障害と関連する臨床的な問題の多くを引き起こす。これらの障害は、ＴＮＦインヒビターを用いて治療することもある。ＴＮＦ産生の異常調節は、アルツハイマー病（Ｐｅｒｉｓｐｉｎａｌ Ｅｔａｎｅｒｃｅｐｔ ｆｏｒ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｅｄｗａｒｄ Ｔｏｂｉｎｉｃｋ＊ Ｃｕｒｒｅｎｔ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００７，４，５５０−５５２）及び癌をはじめとする、種々のヒト疾患の原因とされている。Ｌｏｃｋｓｌｅｙ ＲＭ，Ｋｉｌｌｅｅｎ Ｎ，Ｌｅｎａｒｄｏ ＭＪ（２００１）．“Ｔｈｅ ＴＮＦ ａｎｄ ＴＮＦ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｓｕｐｅｒ ｆａｍｉｌｉｅｓ：ｉｎｔｅｇｒａｔｉｎｇ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｂｉｏｌｏｇｙ．” Ｃｅｌｌ １０４（４）：４８７−５０１を参照されたい。
【００９４】
肥満の齧歯類や肥満のヒトは、脂肪組織内のＴＮＦ−α発現が増加している。従って、脂肪組織内のＴＮＦ−α発現と肥満及びインスリン抵抗性との間に正の相関がある（Ｅｎｄｏｃｒ Ｒｅｖ．２００３ Ｊｕｎ；２４（３）：２７８−３０１）。インビボやインビトロでの外因性ＴＮＦ−αへの慢性曝露により、インスリン抵抗性が誘導される。Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ．１９９２ Ｊａｎ；１３０（１）：４３−５２ Ｇｅｎｅ ｄｅｌｅｔｉｏｎ ｏｆ ＴＮＦα ｏｒ ｉｔｓ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｉｎ ｏｂｅｓｅ ｒｏｄｅｎｔｓ（ｆａ／ｆａ Ｚｕｃｋｅｒ ｒａｔｓ）ｉｍｐｒｏｖｅｓ ｉｎｓｕｌｉｎ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ ＮＥＦＡｓ．Ｎａｔｕｒｅ．１９９７ Ｏｃｔ ９；３８９（６６５１）：６１０−４を参照されたい。
【００９５】
脂肪組織では、ＴＮＦ−αは、ＮＥＦＡやグルコースの取込み及び貯蔵並びに脂肪生成に関与する遺伝子を抑制する。ＴＮＦ−αはまた、アディポネクチンのような脂肪細胞によって分泌される因子の発現を修飾する（Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ．２００３ Ｓｅｐ；２８５（３）：Ｅ５２７−３３）。肝臓では、ＴＮＦ−αは、グルコースの取込み及び代謝並びに脂肪酸酸化に関与する遺伝子の発現を抑制すると同時に、コレステロール及び脂肪酸のデノボ合成に関与する遺伝子の発現を増加させる。
【００９６】
インスリンシグナル伝達は、血清ＮＥＦＡレベルの増加を通じてＴＮＦ−αにより間接的に障害される。チアゾリジンジオンは、インスリン作用に対するＴＮＦ−αの阻害効果を改善することが知られている。Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．１９９７ Ｏｃｔ １；１００（７）：１８６３−９を参照されたい。さらに、体重減少により、ＴＮＦ−αレベルが減少することが認められている。Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．１９９５ Ｍａｙ；９５（５）：２１１１−９を参照されたい。
【００９７】
レチノール結合タンパク質
様々な実施形態では、本発明は、対象のＲＢＰ−４レベルを調節する（例えば、低下させる）方法を提供する。本方法は、対象のＲＢＰ−４レベルを低下させ、それによりＲＢＰ−４レベルの上昇と関連する疾患を治療するのに十分な量の本発明のナノ粒子製剤を対象に投与することを含む。レチノール結合タンパク質４（ＲＢＰ４）は、最近、ＡＧ４ＫＯマウスモデルでインスリン抵抗性に寄与するアディポカインとして記載されている。Ｙａｎｇ Ｑ， ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｒｕｍ ｒｅｔｉｎｏｌ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ４ ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ ｔｏ ｉｎｓｕｌｉｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｉｎ ｏｂｅｓｉｔｙ ａｎｄ ｔｙｐｅ ２ ｄｉａｂｅｔｅｓ，Ｎａｔｕｒｅ ４３６（７０４９）：３５６−６２．（２００５）を参照されたい。ＲＢＰ４は、糖尿病の発症前に血清中で上昇しており、多様な臨床症状を示す対象のインスリン抵抗性及び関連する心血管危険因子を同定するように思われる。これらの知見により、血清ＲＢＰ４レベルの低下を目的とした抗糖尿病療法の理論的根拠が与えられた。Ｇｒａｈａｍ ＴＥ，ｅｔ．ａｌ Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ．２００６ Ｊｕｎ １５；３５４（２４）：２５５２−６３を参照されたい。
【００９８】
一酸化窒素
様々な実施形態では、本発明は、対象の一酸化窒素レベルを増加させる方法を提供する。本方法は、対象の一酸化窒素レベルを増加させるのに十分な量の本発明のナノ粒子製剤を対象に投与することを含む。
【００９９】
内皮ＮＯＳ（ｅＮＯＳ）（別名、一酸化窒素シンターゼ３（ＮＯＳ３））は、血管中でＮＯを発生させ、血管機能の調節や血圧の低下に関与する。Ａｌｄｅｒｔｏｎ ＷＫ， ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．２００１ Ａｕｇ １；３５７（Ｐｔ ３）：５９３−６１５を参照されたい。ＮＯは、直接的な血管拡張（流量依存性、受容体媒介性）；血管収縮を引き起こす影響を阻害することによる間接的な血管拡張（例えば、アンジオテンシンＩＩ及び交感神経性血管収縮剤を阻害する）、抗血栓作用（血小板の血管内皮への接着を阻害する）、抗炎症作用（白血球の血管内皮への接着を阻害する）、スーパーオキシドアニオンを捕捉する能力；並びに抗増殖作用（例えば、平滑筋過形成を阻害する）をはじめとする、様々な血管作用を有することが知られている。
【０１００】
ＮＯに上述の作用があることから、その産生障害やバイオアベイラビリティ低下によって、血管収縮（例えば、冠攣縮性狭心症、全身血管抵抗の上昇、高血圧症）；血小板の凝集や血管内皮への接着による血栓症；白血球接着分子や内皮接着分子の上方調節による炎症；血管肥大及び血管狭窄が生じることがある。Ｎｉｔｒｉｃ Ｏｘｉｄｅ：Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｐａｔｈｏｂｉｏｌｏｇｙ；Ｂｙ：Ｌｏｕｉｓ Ｊ．Ｉｇｎａｒｒｏ（編者） ＩＳＢＮ−１０：０１２３７３８６６０；ＩＳＢＮ−１３：９７８０１２３７３８６６０ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒ：Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ − ２００９を参照されたい。ＮＯの産生及びバイオアベイラビリティの異常と関連する疾患又は状態としては、限定するものではないが、高血圧症；肥満；脂質異常症（特に、高コレステロール血症及び高トリグリセリド血症）；糖尿病（Ｉ型及びＩＩ型）；心不全；アテローム性動脈硬化症；並びに加齢と関連する状態が挙げられる。Ｄｅｓｓｙ，Ｃ， ｅｔ ａｌ．，（２００４年９月）． “Ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｏｌｅｓ ｏｆ Ｎｉｔｒｉｃ Ｏｘｉｄｅ：Ｉｎ ｔｈｅ Ｈｅａｒｔ ａｎｄ ｔｈｅ Ｃｏｒｏｎａｒｙ Ｖａｓｃｕｌａｔｕｒｅ”及びＣｕｒｒｅｎｔ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ − Ａｎｔｉ−Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ＆ Ａｎｔｉ−Ａｌｌｅｒｇｙ Ａｇｅｎｔｓ ｉｎ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｂｅｎｔｈａｍ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ Ｌｔｄ．） ３（３）：２０７−２１６を参照されたい。
【０１０１】
ＭＣＰ−１（単球走化性タンパク質−１）
様々な実施形態では、本発明は、対象のＭＣＰ−１レベルを調節する（例えば、低下させる）方法を提供する。本方法は、対象のＭＣＰ−１レベルを低下させ、それによりＭＣＰ−１レベルの上昇と関連する疾患を治療するのに十分な量の本発明のナノ粒子製剤を対象に投与することを含む。ＭＣＰ−１は、炎症部位に単球を動員するケモカインである。ＭＣＰ−１は、白色脂肪組織中の脂肪細胞や間質血管細胞によって発現され、分泌される。肥満の齧歯類では、循環ＭＣＰ−１レベルがより高く、脂肪組織によるＭＣＰ−１発現が増加している。Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２００３ Ｎｏｖ ２１，２７８（４７）：４６６５４−６０を参照されたい。さらに、ＭＣＰ−１は、インスリン刺激性のグルコース取込みやインスリン誘導性のインスリン受容体チロシンリン酸化を減少させることによってインスリン抵抗性に直接寄与することができ、また、脂肪生成遺伝子の発現を減少させることによって、脂肪細胞の増殖や分化を阻害することができる。
【０１０２】
ＭＣＰ−１をマウスに投与すると、末梢で循環単球が増加し、動脈中の単球蓄積が増加し、新生内膜が形成されるので、アテローム発生におけるＭＣＰ−１の役割が示唆される。Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｒｅｓ．２００３ Ｊａｎ；５７（１）：１７８−８５を参照されたい。
【０１０３】
硫化水素
様々な実施形態では、本発明は、対象のＨ２Ｓレベルを増加させる方法を提供する。本方法は、対象の血清Ｈ２Ｓレベルを増加させ、それにより低Ｈ２Ｓレベルと関連する疾患を治療するのに十分な量の本発明のナノ粒子製剤を対象に投与することを含む。Ｈ２Ｓは、代謝、心機能及び細胞生存を調節するいくつかの細胞シグナルを促進する。内在性Ｈ２Ｓのバイオアベイラビリティは、システインの生合成に関与するいくつかの酵素によって調節される。Ｓｚａｂｏ Ｃ（２００７）．Ｈｙｄｒｏｇｅｎ ｓｕｌｆｉｄｅ ａｎｄ ｉｔｓ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ．Ｎａｔ Ｒｅｖｉｅｗｓ ６：９１７−９３５を参照されたい。健常人とＩＩ型糖尿病の男性患者から採取した血液サンプル中のＨ２Ｓのレベルは、糖尿病患者におけるＨ２Ｓレベルの著しい減少を示した。より低いＨ２Ｓレベルは、微小血管機能障害の臨床マーカーと関連しており、この血圧降下ガスの喪失が、糖尿病患者における血管合併症の発症の要因となり得ることを示唆している。Ｂｒａｎｃａｌｅｏｎｅ Ｖ， ｅｔ ａｌ．（２００８）． Ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｈ２Ｓ ｉｓ ｉｍｐａｉｒｅｄ ｉｎ ｎｏｎ−ｏｂｅｓｅ ｄｉａｂｅｔｉｃ（ＮＯＤ） ｍｉｃｅ；Ｂｒ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ １５５：６７３−６８０：Ｌｅｆｅｒ ＤＪ（２００７）． Ａ ｎｅｗ ｇａｓｅｏｕｓ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｅｍｅｒｇｅｓ：ｃａｒｄｉｏ ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｈｙｄｒｏｇｅｎ ｓｕｌｆｉｄｅ；及びＰｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ １０４：１７９０７−１７９０８を参照されたい。
【０１０４】
ＩＣＡＭ−１（細胞間接着分子−１）
様々な実施形態では、本発明は、対象のＩＣＡＭ−１レベルの上昇を調節する（例えば、低下させる）方法を提供する。本方法は、対象のＩＣＡＭ−１レベルを低下させ、それによりＩＣＡＭ−１レベルの上昇と関連する疾患を治療するのに十分な量の本発明のナノ粒子製剤を対象に投与することを含む。ＩＣＡＭ−１は、風邪を引き起こすウイルスの大多数によって用いられるものと同じ受容体分子である。ライノウイルスは、風邪をよく引き起こす。接着分子は、発生学、免疫学、及び悪性腫瘍をはじめとする、多くの医学分野において主要な役割を果たす。
【０１０５】
多くの生理学的過程では、細胞が他の細胞又は細胞外マトリックスに接触し、これらに接着することが必要となる。細胞と細胞の相互作用や細胞とマトリックスの相互作用は、いくつかの細胞間接着分子、すなわち「ＩＣＡＭ」ファミリーによって仲介される。Ｎｅｗ Ｃｅｌｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｐａｔｒｉｃｋ Ｎｏｔｔ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｏｒｓ，ＩＳＢＮ−１０：１６０６９２３７８１；ＩＳＢＮ−１３：９７８１６０６９２３７８８ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒ：Ｎｏｖａ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｂｏｏｋｓ − ２００９−０４を参照されたい。従って、ＩＣＡＭ−１は、正常な過程と病態生理学的過程の両方において必須の役割を果たす（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：２２３−２５２）。従って、ＩＣＡＭ−１の機能又は発現を阻止することによって細胞接着を媒介するための戦略が開発されてきた。このような戦略は、典型的には、抗ＩＣＡＭ−１抗体、ＩＣＡＭ−１結合を競合的に阻止するリガンド、又はＩＣＡＭ−１ ｍＲＮＡに対するアンチセンス核酸分子を利用する。しかしながら、このような治療で用いられる薬剤は、ＩＣＡＭ−１を化学量論的に低下させるに過ぎず、通常、罹患細胞又は活性化細胞による異常に高いＩＣＡＭ−１の産生に圧倒される。
【０１０６】
好中球の浸潤を特徴とする疾患は、慢性疾患を伴うことが多く、その場合、ＩＣＡＭ−１又はＶＣＡＭ−１の発現が優勢になる。Ａｄａｍｓ ＤＨ，Ｓｈａｗ Ｓ １９９４ Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ．Ｌａｎｃｅｔ ３４３：８３１−８３６を参照されたい。局所発現の増加及び血清可溶性接着分子の増加は、動脈硬化症、血管炎、関節炎、腎疾患及び肝疾患、虚血再灌流状態、臓器拒絶反応、転移、並びに多くのより病的な状態をはじめとする、様々な病的状態において報告されている。Ｂｅｖｉｌａｃｑｕａ ＭＰ， ｅｔ ａｌ．，１９９４ Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｄｉｓｅａｓｅ．Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｍｅｄ ４５：３６１−３７８を参照されたい。
【０１０７】
接着分子は、特定の形態の炎症において重要であり得る。Ｇｏｒｓｋｉ Ａ １９９４ ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｃｅｌｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ｉｎ ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ．Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｔｏｄａｙ １５：２５１−２５５を参照されたい。従って、必要なのは、ＩＣＡＭ−１媒介性の細胞接着を効果的に減少させるか又は遮断するために、ＩＣＡＭ−１の発現を選択的に阻害する触媒量又は準化学量論的量の薬剤である。
【０１０８】
多くの様々なウイルス感染阻害方法のうちの１つは、ウイルスの細胞への結合を阻止することである。ライノウイルス血清型の多くは、細胞への付着に、単一の細胞受容体、すなわち、細胞間接着分子−１（ＩＣＡＭ−１）を用いている。このことは、風邪の治療法の探索を目指した、この受容体の遮断薬の開発につながる可能性がある。
【０１０９】
ＩＣＡＭ−１の発現は、アレルギー性接触皮膚炎、固定薬疹、扁平苔癬、及び乾癬などの種々の炎症性皮膚障害とも関連付けられている。Ｈｏ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｊ．Ａｍ．Ａｃａｄ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．２２：６４−６８；Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ ａｎｄ Ｎｉｃｋｏｌｏｆｆ，１９８９，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ １３５：１０４５−１０５３；Ｌｉｓｂｙ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｂｒ．Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１２０：４７９−４８４；及びＳｈｉｏｈａｒａ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ａｒｃｈ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１２５：１３７１−１３７６を参照されたい。さらに、ＩＣＡＭ−１発現は、関節リウマチ患者（Ｈａｌｅ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ａｒｔｈ．Ｒｈｅｕｍ．３２：２２−３０）；糖尿病患者の膵臓Ｂ細胞（Ｃａｍｐｂｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｐ．Ｎ．Ａ．Ｓ．ＵＳＡ ８６：４２８２−４２８６）；グレーブス病患者の甲状腺濾胞細胞（Ｗｅｅｔｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｊ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．１２２：１８５−１９１）；腎同種移植及び肝同種移植の拒絶反応（Ｆａｕｌｌ ａｎｄ Ｒｕｓｓ，１９８９，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ４８：２２６−２３０；Ａｄａｍｓ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｌａｎｃｅｔ １１２２−１１２５）；並びに炎症性腸疾患（ＩＢＤ）組織（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｔ，１９９０，Ｎａｔｕｒｅ ３４６：４２５−３４）において検出されている。
【０１１０】
Ｉ型糖尿病に共通して認められる合併症もまたＩＣＡＭ−１の発現を伴う。例えば、ＩＣＡＭ−１によって媒介される白血球の毛細血管内皮への接着は、網膜、末梢神経、及び腎臓などの糖尿病患者の特定の組織における微小血管虚血を引き起こすことがある。これは、これらの組織の毛細血管非灌流をもたらし、この毛細血管非灌流がさらに、糖尿病性網膜症、糖尿病性神経障害もしくは糖尿病性腎症、又は細胞間接着分子−１（ＩＣＡＭ−１）を介する多形核白血球と内皮細胞の接着によって誘導される血管形成を引き起こす。従って、ＩＣＡＭ−１によって媒介される白血球停滞を阻害することで、糖尿病と関連する網膜異常を予防することができると考えられている。Ｍｉｙａｍｏｔｏ Ｋ ｅｔ ａｌ．（２０００），Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１５６：１７３３−１７３９；Ｍｉｙａｍｏｔｏ Ｋ ｅｔ ａｌ．（１９９９），Ｐ．Ｎ．Ａ．Ｓ ＵＳＡ ９６：１０８３６−１０８４；Ｊｕｄｅ Ｅ Ｂ ｅｔ ａｌ．（１９９８），Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ ４１：３３０−６；Ｍｉｙａｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｐ．Ｎ．Ａ．Ｓ ＵＳＡ ９６：１０８３６−１０８４１；及びＹｏｎｇ Ｓｏｎｇ Ｇｈｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５９，５１２８−５１３２，Ｏｃｔｏｂｅｒ １５，１９９９を参照されたい。
【０１１１】
グルタチオン
様々な実施形態では、本発明は、対象のＧＳＨレベルを増加させるか又は調節する方法を提供する。本方法は、対象のＧＳＨレベルを増加させるか又は調節するのに十分な量の本発明のナノ粒子製剤を対象に投与することを含む。
【０１１２】
還元型のグルタチオン（ＧＳＨ）は、動物細胞において最も多い非タンパク質チオールである。そのデノボ合成とサルベージ合成は還元された細胞環境を維持するのに役立ち、このトリペプチドは多くの細胞質酵素の補因子であり、いくつかの細胞タンパク質の重要な翻訳後修飾としての役割も果たす。システインチオールは、外因性求電子種と内在性求電子種の両方との反応において求核物質としての役割を果たす。結果として、活性酸素種（ＲＯＳ）は、自然反応と触媒反応の両方において、ＧＳＨの標的となることが多い。ＲＯＳは、細胞シグナル伝達事象及びヒト疾患病理において明確な役割を有するので、ＧＳＨと関連酵素の発現の不均衡は、種々の状況の原因とされている。ＧＳＨ代謝と疾患（例えば、癌、神経変性疾患、嚢胞性線維症（ＣＦ）、ＨＩＶ、及び老化）の因果関係が示されている。ＧＳＨ恒常性に関与する酵素の多型発現は、これらの疾患の易罹患性や進行に影響を及ぼす。Ｄａｎｙｅｌｌｅ Ｍ．Ｔｏｗｎｓｅｎｄ，＊，Ｋｅｎｎｅｔｈ Ｄ．Ｔｅｗ，Ｈａｉｍ Ｔａｐｉｅｒｏ Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ＆ Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ ５７（２００３） １４５−１５５を参照されたい。
【０１１３】
様々な実施形態では、本発明のナノ粒子を経口投与する。例示的な実施形態では、ナノ粒子を１日当たり約１０ｍｇ〜約１００ｍｇ、例えば、１日当たり約１０ｍｇ〜約５０ｍｇの投薬量で投与する。
【０１１４】
上に示した例示的な方法を含む、本発明の方法の各々の様々な実施形態では、本発明の製剤で治療される対象は、ビタミンＥ補給を必要としない。様々な他の実施形態では、本製剤の投与によって調節される代謝パラメータ又は本製剤の投与によって治療される疾患は、対象へのビタミンＥ補給により治療可能であることが認識されているか又は対象へのビタミンＥ補給により改善することが知られているパラメータ又は疾患ではない。
【０１１５】
血液化学又は代謝の変化を測るための当該技術分野で認められているアッセイが、本発明の粒子の治療関連（又は他の）投薬量の有効性を確認するのに用いられる。以下に、様々な投薬量で本発明の有効性を解析するために使用可能な従来のアッセイのごく一部を示す実施例を提供する。血漿中のサイトカイン、インスリン、脂質過酸化及びビタミンＣ、ＣＲＰ、ＭＣＰ−１、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α、レプチン、レチノール結合タンパク質並びにインスリンのレベルを測る標準的アッセイは、Ｆｉｓｈｅｒ Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｃｏ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌｌ製の市販のキットを用いたサンドイッチＥＬＩＳＡ法の形態を取ることができる。酸化ストレスは、そのチオバルビツール酸との反応によるマロンジアルデヒド（脂質過酸化の最終産物）を測定することにより決定することができる。Ｊａｉｎ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４：２１３４０−２１３４５，１９８９；Ｊａｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｄｉａｂｅｔｅｓ ３８：１５３９−１５４３，１９８９を参照されたい。タンパク質酸化は、Ｙａｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ．３２７：３３０−３３４，１９９６に開示されている方法により決定することができる。インスリン抵抗性は、例えば、ＨＯＭＡ法により決定することができる（Ｙａｔｕｒｕ ｅｔ ａｌ．，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ ３４：２１９−２３，２００６）。血漿中のビタミンＣ濃度は、Ｎｉｎｏ及びＳｈａｗの方法により決定することができる。Ａｌａｎ Ｗｕ（編）．Ｔｅｉｔｚ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｔｅｓｔｓ（第４版），Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＷＢ Ｓａｕｎｄｅｒｓ Ｃｏ．２００６を参照されたい。グリコシル化ヘモグロビンは、Ｈｅｌｅｎａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｂｅａｕｍｏｎｔ，ＴＸ）から購入したＧｌｙｃｏ−Ｔｅｋ親和性カラムキット及び試薬（カタログ番号５３５１）を用いて決定することができる。グルコースレベルは、グルコースオキシダーゼを用いて、Ａｃｃｕ−ｃｈｅｃｋ Ａｄｖａｎｔａｇｅグルコメーター（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｈｅｉｍ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）により決定することができる。
【０１１６】
以下の実施例は、本発明を説明するために提供されている。しかしながら、本発明は、これらの実施例に記載されている特定の条件又は詳細に限定されるものではないことが理解されるべきである。
【実施例】
【０１１７】
実施例１
１％ポリコサノールを含む液体製剤の調製
１．スクロースラウレート（０．１〜０．５％）を含む水溶液（１００ｍＬ）を調製し、撹拌しながら８０〜８５℃まで加温する。
２．ビーカーの中に、ポリコサノール（１ｇ）と少なくとも１つの賦形剤又は安定剤（２〜５ｇ）とを量り取り、撹拌しながら８０〜８５℃まで加温する。
３．強く撹拌しながら、ビーカーの中にポリコサノールと賦形剤とともに糖エステル溶液を入れ、撹拌しながら８０〜８５℃に５分間維持する。温度が５０℃未満になると、この製剤は透明になる。
４．ヒーターのスイッチを切り、室温に達するまで穏やかに撹拌させておく。
５．防腐剤（例えば、ソルビン酸カリウム、安息香酸ナトリウム、クエン酸無水物）を添加する。
６．この溶液をボトルに入れる。
【０１１８】
実施例２
【表１】
【表２】
【表３】
【０１１９】
実施例３
粒子サイズが５３ｎｍで、オクタコサノールが約８２〜８３％の１％ポリコサノール溶液（１０ｍｇ／ｍＬ）を用いたラット研究
材料及び方法
雄のズッカー糖尿病肥満ラットを、５週齢でＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入した。動物にランダムに番号を振り、温度と湿度が調節された動物施設内のプラスチック製のコロニーケージで１匹ずつ飼育した。動物を、一般に認められた委員会プロトコルに従い、このプロトコルを用いて飼育した。ラットを２日間、環境とトレーナーによる扱いに馴れさせた。ラットの高血糖症を、その血中グルコース濃度を測定することにより検査した。血中グルコースは、好都合なＡｃｃｕ−Ｃｈｅｋ（商標登録）グルコメーター（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ Ｃｏｒｐ．，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）を用いて尾部切開により測定した。ラットをランダムに３つのグループに分けた。処理グループの各々のラットには、２０Ｇの給餌針（Ｐｏｐｐｅｒ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｈｙｄｅ Ｐａｒｋ，ＮＹ）を用いた強制経口投与により毎日８週間、適切な用量の本発明のナノ粒子ポリコサノール製剤を補給した。対照グループには、ビヒクル緩衝液を補給した。ポリコサノール補給投薬量を決定するために、体重を週１回モニタリングした。ラットを、２２±２℃で、１２時間：１２時間の明暗周期にして、水とＰｕｒｉｎａ ５００８実験食（ｌａｂ ｃｈｏｗ ｄｉｅｔ）を自由摂取させて、標準的な飼育条件下で飼育した。８週目の終わりに、ラットを一晩絶食させた後、解析のためにハロタン（２−ブロモ−２−クロロ−１，１，１−トリフルオロエタン）に曝露させて安楽死させた。１９ １／２ゲージ針で心穿刺して血液を採取し、ヘパリンを含むシリンジに血液を引き入れ、その後すぐに、それをＥＤＴＡバキュテナーチューブに移した。
【０１２０】
３つのグループのＺＤＦラットが存在した。１．対照ＺＤＦ；２．ポリコサノール（５ｍｇ／日／ｋｇ ＢＷ）を補給したＺＤＦ、及び（３）補給を開始する時点のラット。これにより、ＺＤＦラットの血液中で解析すべき全てのパラメータのベースラインレベルが分かった。同じぐらいの年齢のスプラーグドーリーラットを、正常食で飼育した年齢を一致させた正常対照ラットとして用いた。
【０１２１】
ラットを、ポリコサノールありとポリコサノールなしで、Ｐｕｒｉｎａ ５００８食で８週間飼育した。アイスバケットに置かれた予冷されたＥＤＴＡチューブの中に血液サンプルを採取した。ＥＤＴＡ血をＨｂＡ１ｃアッセイとＣＢＣアッセイ（臨床血液学研究室が実施）に用いた。ＥＤＴＡ血を遠心分離した。ＲＢＣをＧＳＨアッセイと脂質過酸化アッセイに用いた。透明な血漿は、脂質過酸化産物及びタンパク質酸化産物のために、並びにＥＬＩＳＡアッセイによるＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＭＣＰ−１、ＣＲＰ、アディポカイン、インスリン感受性のために取っておいた。解析は全て採血後すぐに実施した。酸化ストレスマーカーと炎症促進性サイトカイン用のサンプルは、−７０℃フリーザーで保存した。ポリコサノール補給時の毒性の兆候を明らかにするために、ＳＧＯＴ値とＳＧＰＴ値を含む完全な化学プロファイル（ＣＭＰ２）も実施した。サイトカインアッセイでは、異なる日にサイトカインを解析したときのプレート間変動をモニタリングするために、常に対照血清サンプルを解析した。日による対照血清値の変動が７％を超える場合は、アッセイを繰り返した。
【０１２２】
サイトカイン、インスリン、脂質過酸化及びビタミンＣのアッセイ：血漿中のＣＲＰ、ＭＣＰ−１、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α、レプチン、レチノール結合タンパク質及びインスリンのレベルは、Ｆｉｓｈｅｒ Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｃｏ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌｌ）製の市販のキットを用いたサンドイッチＥＬＩＳＡ法により決定した。製造元のキットにより指定された適切な対照と標準を全て用いた。サイトカインアッセイでは、異なる日に解析したときのプレート間変動を調べるために、対照サンプルを毎回解析した。酸化ストレスは、そのチオバルビツール酸との反応によるマロンジアルデヒド（脂質過酸化の最終産物）を測定することにより決定した（１，２）。Ｊａｉｎ “Ｈｙｐｅｒｇｌｙｃｅｍｉａ ｃａｎ ｃａｕｓｅ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｌｉｐｉｄ ｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｏｎ ａｎｄ ｏｓｍｏｔｉｃ ｆｒａｇｉｌｉｔｙ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｒｅｄ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌｓ．” Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２６４：２１３４０−２１３４５，１９８９；及びＪａｉｎ ｅｔ ａｌ．， “Ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｌｉｐｉｄ ｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｏｎ ａｎｄ ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｅｄ ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ ｉｎ ｄｉａｂｅｔｅｓ” Ｄｉａｂｅｔｅｓ ３８：１５３９−１５４３，１９８９を参照されたい。タンパク質酸化は、“Ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ ｈｙｐｏｃｈｌｏｒｏｕｓ ａｃｉｄ ｓｃａｖｅｎｇｅｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｃａｒｂｏｎｙｌ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ” Ａｒｃｈ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ ３２７：３３０−３３４，１９９６に記載のＹａｎ ｅｔ ａｌ．の方法により決定した。インスリン抵抗性は、ＨＯＭＡ法により決定した。Ｙａｔｕｒｕ ｅｔ ａｌ．， “Ｒｅｓｉｓｔｉｎ ａｎｄ ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ ｌｅｖｅｌｓ ｉｎ ｓｕｂｊｅｃｔｓ ｗｉｔｈ ｃｏｒｏｎａｒｙ ａｒｔｅｒｙ ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ ｔｙｐｅ ２ ｄｉａｂｅｔｅｓ．” Ｃｙｔｏｋｉｎｅ ３４：２１９−２３，２００６；及びＩｓｍａｅｌ ｅｔ ａｌ．， “Ｂｏｃｋａｄｅ ｏｆ ｓｅｎｓｏｒｙ ａｂｎｏｒｍａｌｉｔｉｅｓ ａｎｄ ｋｉｎｉｎ Ｂ１ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｂｙ Ｎ−ａｃｅｔｙｌ−Ｌ−ｃｙｓｔｅｉｎｅ ａｎｄ ｒａｍｉｐｒｉｌ ｉｎ ａ ｒａｔ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｉｎｓｕｌｉｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ．” Ｅｕｒ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５８９：６６−７２，２００８を参照されたい。血漿中のビタミンＣ濃度は、Ｎｉｎｏ及びＳｈａｗの方法により決定した。Ｗｕ（編）．Ｔｅｉｔｚ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｔｅｓｔｓ（第４版） Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＷＢ Ｓａｕｎｄｅｒｓ Ｃｏ．２００６を参照されたい。ＧＳＨは、Ｒｅｄ Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｌｌ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ：Ａ ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｐｕｂ：Ｇｒｕｎｅ ａｎｄ Ｓｔｒａｔｔｏｎ，ＮＹ．１３１−１３４，１９８４に記載のＢｅｕｔｌｅｒの方法により決定した。
【０１２３】
グリコシル化ヘモグロビン（ＧＨｂ）、グルコース及びインスリン抵抗性の測定
グリコシル化ヘモグロビンは、Ｈｅｌｅｎａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｂｅａｕｍｏｎｔ，ＴＸ）から購入したＧｌｙｃｏ−Ｔｅｋ親和性カラムキット及び試薬（カタログ番号５３５１）を用いて決定した。グルコースレベルは、グルコースオキシダーゼを用いてＡｃｃｕ−ｃｈｅｃｋ Ａｄｖａｎｔａｇｅグルコメーター（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｈｅｉｍ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）により決定した。
【０１２４】
肝抽出物のウェスタンブロット解析：実験用ラットから摘出した組織を液体窒素を用いてすぐに凍結させ、よくすり潰して粉末にし、さらに使用するまで−７０℃で凍結させた。凍結組織粉末（＜１５０ｍｇ）をプロテアーゼインヒビターを含む１ｍＬのＰＢＳに再懸濁して洗浄し、穏やかにボルテックスし、１５，０００ｒｐｍで４℃にて１０分間遠心分離した。上清を捨て、細胞ペレットを上述のようにもう１回洗浄した後、プロテアーゼインヒビターを含む５００ｍＬの抽出緩衝液（２５ｍＭ Ｔｒｉｓ、０．５ｍＭ ＥＤＴＡ、０．１ｍＭ ＰＭＳＦ、ｐＨ７．４）に再懸濁し、ホモジナイザーを用いてホモジナイズし、穏やかな超音波処理にかけた。チューブを１５，０００ｒｐｍ（４℃、３０分）で遠心分離し、上清（抽出物）を回収した。回収した抽出物を上記のようにもう１回遠心分離にかけ、細胞破片を除去した。この抽出物のタンパク質含量をＢＣＡタンパク質アッセイを用いて測定した。メルカプトエタノールを還元剤として含めて５分間沸騰させた後、各グループからの等量のタンパク質をＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲルに充填した。分離されたタンパク質をニトロセルロースメンブレンに転写し、Ｔ−ＰＢＳ中の１％ＢＳＡでブロッキングし、それぞれの一次抗体とともに４℃で一晩インキュベートした。翌日、メンブレンをＴ−ＰＢＳで洗浄し（８分、４回）、５％脱脂粉乳中の二次抗体とともに、室温で３０分間、インキュベートした。メンブレンをＴ−ＰＢＳで再度洗浄し（８分、４回）、化学発光試薬で２分間処理し、オートラジオグラフィで現像するＸ線フィルムに感光させた。
【０１２５】
別途言及しない限り、化学薬品は全てＳｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）から購入した。
【０１２６】
データ解析：データは、Ｓｉｇｍａ Ｐｌｏｔ統計ソフトウェア（Ｊａｎｄｅｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｓａｎ Ｒａｆａｅｌ，ＣＡ）で異なるグループ間のＡＮＯＶＡを用いて解析した。０．０５未満のｐ値を有意とみなした。
【０１２７】
結果
異なる処理グループ間において屠殺時点での体重差は認められなかった。補給を開始してから５週間及び７週間後に評価したとき、各ラットによる１週間分の食餌摂取量は、両方のグループで同じぐらいであった。ポリコサノールを８週間補給した雄のズッカー肥満ラットの体重と食餌摂取量を下記の表１に示す。各値は平均±ＳＥを表す。
【表４】
【０１２８】
全ての図において、「＊」で印が付けられた値は、対照と比較して統計的に有意である（ｐ＜０．０５）。図３０は、補給したラットの血液中のアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、アルカリホスファターゼ（ＡＰ）、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、血中尿素窒素（ＢＵＮ）、クレアチニン及びアニオンＧａｐのレベルに関するデータを示す。結果の解析から、ポリコサノール補給によって、グルコース、総コレステロール、トリグリセリド、タンパク質酸化、ＭＣＰ−１及びＣＲＰ及びアルカリホスファターゼの血中レベルが低下し、ビタミンＣの血中レベルが増加したことが示されている。ポリコサノールはトランスアミナーゼの血中レベルを変化させなかったが、糖尿病ラットと比較してアルカリホスファターゼレベルを確かに低下させた。
【０１２９】
表ＩＩは、ポリコサノール補給が、糖尿病ラットのヘモグロビン、ヘマトクリット又はＲＢＣ数に影響を及ぼさなかったことを示し、これは、赤血球生存の変化がポリコサノール補給ＺＤＦラットのより低いグリコシル化ヘモグロビンレベルに与える影響を一切否定し、ポリコサノール補給ラットにおいて毒性の兆候が一切ないことを支持するものである。このデータは、肝機能検査又は腎機能検査で評価したときに、ポリコサノール補給が毒性を一切引き起こさないようであることを示す。
【表５】
【０１３０】
肝臓は、グルコース代謝の調節において主要な役割を果たす。Ｍｉｃｈａｅｌ ｅｔ ａｌ．， “Ｌｏｓｓ ｏｆ Ｉｎｓｕｌｉｎ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ ｌｅａｄｓ ｔｏ ｓｅｖｅｒｅ ｉｎｓｕｌｉｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ａｎｄ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ ｈｅｐａｔｉｃ ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ．” Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ．６：８７−９７，２０００を参照されたい。肝臓は、グルコース、タンパク質及びビタミンの貯蔵器官である。血中グルコースレベルの主な調節因子である糖生成経路及び糖新生経路は肝臓に特有のものである。インスリン、グルカゴン、増殖ホルモン、コルチゾール、及びカテコールアミンをはじめとする、いくつかのホルモンが、肝臓によるグルコース代謝の調節に寄与する。従って、本発明者らは、ポリコサノール補給ラットにおける肝臓でのＮＦ−κＢ活性化の役割と、グルコース代謝に対するその潜在的な寄与を調べた。
【０１３１】
本発明者らの研究の結果は、実験的糖尿病が、ベースライン対照と比較して、糖尿病ズッカーラットの肝臓におけるＮＦ−κＢの活性化を誘導したことを示す。Ｙｅｒｎｅｎｉ ｅｔ ａｌ．， “Ｈｙｐｅｒｇｌｙｃｅｍｉａ−ｉｎｄｕｃｅｄ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｎｕｃｌｅａｒ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ｋａｐｐａＢ ｉｎ ｖａｓｃｕｌａｒ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌｓ．” Ｄｉａｂｅｔｅｓ．４８：８５５−６４，１９９９を参照されたい。ＮＦ−κＢは、高血糖症の既知の標的である。Ｍｅｎｇ ｅｔ ａｌ．， “Ａｋｔ ｉｓ ａ ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ ｔａｒｇｅｔ ｏｆ ＮＦｋＢ．” Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７７：２９６７４−２９６８０を参照されたい。糖尿病と関連する酸化ストレスは、ＮＦ−κＢ（ｐ５０及びｐ６５として知られる２つのＤＮＡ結合サブユニットからなるヘテロ二量体）の既知の活性化因子である。ＮＦ−κＢは、抑制性κＢ（ＩκＢ）として知られるその抑制性タンパク質と複合体を形成して細胞質中に存在する。活性化の後、ＩκＢはＮＦ−κＢから解離し、ユビキチン化され、分解される。ＮＦ−κＢは解放されて、核に移行する。その核移行と同時に、ＮＦ−κＢはｐ６５サブユニットの残基２７６でセリンリン酸化を受け、周囲のクロマチン構成要素と会合する。その後、ＮＦ−κＢはＤＮＡと結合し、炎症促進性サイトカインとインスリン抵抗性の既知のメディエーターの転写を促進する。従って、ＮＦ−κＢのリン酸化ｐ６５サブユニットの測定は、ＮＦ−κＢ活性化を決定するための有効なツールである。図２７に示すように、糖尿病ラットは、ＮＦ−κＢ活性化の上昇を示した。本発明者らは、ＮＦ−κＢが本明細書に記載のポリコサノール製剤の投与によって阻害されることも見出した。本発明者らの結果は、ポリコサノール補給によって、糖尿病ラットにおける血糖症と酸化ストレスの阻害と炎症促進性サイトカインの分泌とが有意に改善されたことを示している。
【０１３２】
結論として、ポリコサノール補給には、血糖や炎症促進性サイトカインの血中レベルを低下させ、ビタミンＣレベルを増加させる可能性がある。この効果は、ポリコサノールによるＮＦ−κＢ活性化阻害によってもたらされる。
【０１３３】
実施例４
臨床試験研究
糖尿病患者の血圧低下における有効性と認容性をプライマリーエンドポイントとして評価し、かつその他の重要なバイオマーカーを評価するための非盲検単一施設研究において、上記の１％ポリコサノール製剤を用いた。この研究の結果を下記の実施例４．１にまとめる。
【０１３４】
実施例４．１
Ｈｏｍａ％Ｂ（β細胞機能（％Ｂ））とインスリン感受性（％Ｓ）とインスリン抵抗性をＨＯＭＡ Ｃａｌｃｕｌａｔｏｒ ｖ２．２．２（Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ １９９８；２１：２１９１−９２）を用いて計算した。この研究には、平均年齢が４８±２２歳の１４名の糖尿病対象が含まれた。糖尿病の平均期間は、１３．５±１２．５年であった。対象は、１２週間の間、２０ｍｇ（１日２回、１ｍＬ）を摂取した。対象の食事に制限はなかった。
【０１３５】
下記の表ＩＩＩに示すように、ＢＭＩが２８を超える患者における収縮期血圧及び拡張期血圧、Ｃ反応性タンパク質レベル、超低密度脂質レベル（ＶＬＤＬ）、血清アルブミン、血清グロブリンレベル、並びに胴回りの減少は、ｐ＜＜０．０５で統計的に有意であった。この結果から、高血圧症の治療、Ｃ反応性タンパク質レベルが高い患者における心血管リスクの軽減、ＶＬＤＬ（ＬＤＬの前駆体）の減少、胴回りの減少、及び腎機能の改善に有用であり得ることが示される。ポリコサノールは認容性が極端に高く、患者からの有害事象の報告はなかった。
【表６】
【０１３６】
糖尿病患者の収縮期圧の低下における極めて有意な結果を基にして、英国の前向き糖尿病研究（ＵＫ Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｓｔｕｄｙ）（ＵＫＰＤＳ）に基づくリスク因子の低下を計算することができる。５０００人の患者を対象にしたこの１０年にわたる研究により、糖尿病の合併症と収縮期血圧の間には直接的なリスク関係があるという結論が下された。収縮期圧の１０ｍｍの降下によって、リスク因子は１０〜２０％低下する。これを下記の表ＩＶに示す。“Ｓｙｓｔｏｌｉｃ ｐｒｅｓｓｕｒｅ ｌｏｗｅｒｓ ｔｈｅ ｒｉｓｋ ｏｆ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｙｓｔｏｌｉｃ ｂｌｏｏｄ ｐｒｅｓｓｕｒｅ ｗｉｔｈ ｍａｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ ａｎｄ ｍｉｃｒｏ ｖａｓｃｕｌａｒ ｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｔｙｐｅ ２ ｄｉａｂｅｔｅｓ：ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎａｌ ｓｔｕｄｙ” Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ（２０００） ３２１：４１２−４１９を参照されたい。
【表７】
【表８】
【０１３７】
ＵＫＰＤＳリスク評価方法を適用すると、１２週目で、リスク低下が相当なものであったことが分かる。本発明のポリコサノール製剤は、糖尿病患者及び高血圧症関連疾患による危険にさらされている者のリスク因子を軽減するのに有用であると推測することができる。
【０１３８】
実施例４．２：
３歳の時に１型糖尿病と診断された２６歳の男性に本明細書に記載の１％ポリコサノール製剤（２０ｍｇ／日）を投与した。この男性の治療前の１日のインスリン摂取量は、毎日３０ユニットであった。ベースライン時点で、及び２１週間にわたって、空腹時インスリンを測定した。結果を下記の表ＶＩに示す。
【表９】
【０１３９】
上のデータに基づくと、ポリコサノール製剤は、１型糖尿病患者において、内在性インスリン産生時のβ細胞活性の増強に役立つ可能性がある。
【０１４０】
実施例４．３：
ネフローゼ症候群と診断された４歳の女児を１日１０ｍｇの本明細書に記載の１％ポリコサノール製剤で治療した。ネフローゼ症候群は、尿中タンパク質（１日に３．５グラムを上回る）、低血中タンパク質レベル、高コレステロールレベル、及び腫れを含む一群の症状である。ネフローゼ症候群は、腎臓、特に、糸球体の基底膜に損傷を与える様々な障害によって引き起こされる。これはすぐに、尿中タンパク質の異常な排泄を引き起こす。ネフローゼ症候群はあらゆる年齢層を襲う可能性がある。小児では、２歳から６歳の間に最もよく見られる。
【０１４１】
ベースラインでは尿路症状はなかった。女児の尿対タンパク質クレアチニン比（ＵＰＣＲ）は６．０であった。ポリコサノール製剤で２週間治療した後、ＵＰＣＲ比は１．６まで低下し、４週間後には０．６まで低下した。下記のデータに基づくと、ポリコサノール製剤は、実施例４．１に示すような腎疾患を治療するのに有用である可能性がある。実施例４．１では、アルブミンの低下が統計的に有意であった。
【表１０】
【０１４２】
実施例４．４：
日中に膝関節痛、夜間に関節の痺れと疼痛の症状を示す４８歳の男性を１日２０ｍｇの本明細書に記載の１％ポリコサノール製剤で３カ月間治療した。食事でビタミンＣが十分に消費されたにもかかわらず、ベースライン時のビタミンＣの血液血漿レベルは低かった（約０．１５ｍｇ％）。関節リウマチと骨関節炎は、Ｘ線とＭＲＩにより除外された。ＲＡ因子と尿酸レベルは正常であった。
【表１１】
【０１４３】
患者の日中の膝関節痛は完全に抑えられ、夜間の疼痛は最小限にまで軽減された。
【０１４４】
実施例４．５：
２型糖尿病の４３歳の男性患者（検出時は３８歳）は、ベースライン時の血漿ビタミンＣレベルが０．２７ｍｇ％と非常に低かった。この研究のために、この男性患者に１日２０ｍｇの本明細書に記載の１％ポリコサノール製剤を６カ月間投与した。
【０１４５】
６カ月目の終わりに、男性患者の血漿ビタミンＣレベルは３．８２ｍｇ％にまで改善していた。ＨｂＡ１ｃと空腹時インスリンレベルの改善も認められた。
【表１２】
【０１４６】
実施例４．６：
ＩＩ型糖尿病及び高インスリン血症と診断された４２歳の男性（診断時は３７歳）を１日２０ｍｇの本明細書に記載の１％ポリコサノール製剤で６カ月間治療した。下記の表に示すように、この男性は、６カ月目の終わりに空腹時インスリンレベルの有意な低下を示した。
【表１３】
【０１４７】
実施例４．７：
４１歳の時に２型糖尿病と診断された４７歳の女性患者を１日２０ｍｇの本明細書に記載の１％ポリコサノール製剤で６カ月間治療した。６カ月目の終わりに、ウェスト・ヒップ比、空腹時グルコースレベル、及びｈｓ−Ｃ反応性タンパク質レベルの有意な低下が認められた。
【表１４】
【０１４８】
実施例４．８：
ベースライン時に超低ＨＤＬを示した、非糖尿病の４８歳の肥満（ＢＭＩ＞３０）男性患者を１日４０ｍｇの本明細書に記載の１％ポリコサノール製剤で８週間治療した。結果は、ＨＤＬ、ＬＤＬ、ＣＨＯＬ／ＨＤＬ（総コレステロール／ＨＤＬ）比の大きな改善と６ｋｇの体重減少とＢＭＩ比の改善を示した。
【表１５】
【０１４９】
実施例４．９：
高血圧症及び２型糖尿病と診断された５０歳の女性を１日２０ｍｇの本明細書に記載の１％ポリコサノール製剤で治療した。結果は、６カ月での血圧の大きな改善を示した。
【表１６】
【０１５０】
実施例４．１０：
１０歳の女児が尿中アルブミンによる腎感染と診断された。この女児を１日１０ｍｇの本明細書に記載の１％ポリコサノール製剤で治療した。１０日後の尿検査で感染の完全寛解が示され、尿中アルブミンの痕跡は示されなかった。この結果は、アルブミンの存在を示す腎感染を治療する上での本発明の有用性を示している。
【０１５１】
本明細書に記載の実施例及び実施形態は説明を目的とするものに過ぎず、それに照らして様々な修正又は変更が当業者に示唆され、かつ本出願の精神及び範囲並びに添付の特許請求の範囲の範囲内に含まれるべきであることが理解される。本明細書に引用される刊行物、特許、及び特許出願は全て、あらゆる目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリコサノールのナノ粒子、ここで、前記ナノ粒子は、
（ａ）約７０％〜９５％のオクタコサノールを含むポリコサノール画分と、
（ｂ）トコフェリルポリエチレングリコール（１０００）スクシネート（「ＴＰＧＳ」）を含む安定剤画分とを含み、
ここで、前記ナノ粒子は、約１００ｎｍ未満の直径を有する。
【請求項２】
前記ポリコサノール画分がトリアコンタノールをさらに含む、請求項１に記載のナノ粒子。
【請求項３】
前記ナノ粒子が、約９：１〜約１５：１のオクタコサノール：トリアコンタノールの比を有する、請求項２に記載のナノ粒子。
【請求項４】
前記ナノ粒子が、約１６：１〜約２０：１のオクタコサノール：ヘキサコサノールの比を有する、請求項２に記載のナノ粒子。
【請求項５】
前記ナノ粒子が、直径約１００ｎｍ〜約４０ｎｍのサイズを有する、請求項１に記載のナノ粒子。
【請求項６】
前記ナノ粒子が、直径約６０ｎｍのサイズを有する、請求項１に記載のナノ粒子。
【請求項７】
請求項１に記載の複数のナノ粒子。
【請求項８】
請求項７に記載の前記複数のナノ粒子と、薬学的に許容される担体とを含む薬学的製剤。
【請求項９】
約約１０〜約３０ｍｇ／ｍＬ（ｗｔ／ｖｏｌ）の請求項７に記載の前記複数のナノ粒子を含む単位投薬量製剤。
【請求項１０】
対象の血清ビタミンＣレベルを増加させる方法であって、請求項８に記載の薬学的製剤を、前記対象の前記血清ビタミンＣレベルを増加させるのに十分な量で前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項１１】
対象のタンパク質酸化を低下させる方法であって、請求項８に記載の薬学的製剤を、前記対象の前記タンパク質酸化を低下させるのに十分な量で前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項１２】
対象の血圧を低下させる方法であって、請求項８に記載の薬学的製剤を、前記対象の血圧を低下させるのに十分な量で前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項１３】
対象の胴回りを減少させる方法であって、請求項８に記載の薬学的製剤を、前記対象の胴回りを減少させるのに十分な量で前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項１４】
対象のＶＬＤＬ（超低密度脂質）レベルを調節する方法であって、請求項８に記載の薬学的製剤を、前記対象のＶＬＤＬレベルを減少させるのに十分な量で前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項１５】
対象のアルブミン／グロブリン比の上昇を調節する方法であって、請求項８に記載の薬学的製剤を、前記対象の前記アルブミン／グロブリン比の上昇を調節するのに十分な量で前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項１６】
対象のインスリン抵抗性を治療する方法であって、請求項８に記載の薬学的製剤を、前記インスリン抵抗性を治療するのに十分な量で前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項１７】
対象の血糖レベルを調節する方法であって、請求項８に記載の薬学的製剤を、前記対象の前記血糖レベルを調節するのに十分な量で前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項１８】
対象の糖尿病を治療する方法であって、請求項８に記載の薬学的製剤を、前記対象の糖尿病を治療するのに十分な量で前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項１９】
前記糖尿病がＩＩ型糖尿病である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記糖尿病がＩ型糖尿病である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
対象のＣ反応性タンパク質レベルを調節する方法であって、請求項８に記載の薬学的製剤を、前記対象の前記Ｃ反応性タンパク質レベルを調節するのに十分な量で前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項２２】
対象のＮＦ−κＢタンパク質レベルを阻害する方法であって、請求項８に記載の薬学的製剤を、前記対象のＮＦ−κＢレベルを調節するのに十分な量で前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項２３】
対象のＰＡＩ−１レベルを調節する方法であって、請求項８に記載の薬学的製剤を、前記対象の前記ＰＡＩ−１レベルを調節するのに十分な量で前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項２４】
対象のＩＣＡＭ−１レベルを低下させる方法であって、請求項８に記載の薬学的製剤を、前記対象の前記ＩＣＡＭ−１レベルを低下させるのに十分な量で前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項２５】
対象のアディポネクチンレベルを増加させる方法であって、請求項８に記載の薬学的製剤を、前記対象の前記アディポネクチンレベルを増加させるのに十分な量で前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項２６】
対象の一酸化窒素レベルを調節する方法であって、請求項８に記載の薬学的製剤を、前記対象の前記一酸化窒素レベルを調節するのに十分な量で前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項２７】
対象のＴＮＦ−αレベルを低下させる方法であって、請求項８に記載の薬学的製剤を、前記対象の前記ＴＮＦ−αレベルを低下させるのに十分な量で前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項２８】
対象のＭＣＰ−１（単球走化性タンパク質−１）レベルを調節する方法であって、請求項８に記載の薬学的製剤を、前記対象の前記ＭＣＰ−１（単球走化性タンパク質−１）レベルを調節するのに十分な量で前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項２９】
対象のグルタチオンレベルを調節する方法であって、請求項８に記載の薬学的製剤を、前記対象の前記グルタチオンレベルを調節するのに十分な量で前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項３０】
前記対象が別の場合には前記薬学的製剤による治療を必要としない、請求項１１に記載の方法。
【請求項１】
ポリコサノールのナノ粒子、ここで、前記ナノ粒子は、
（ａ）約７０％〜９５％のオクタコサノールを含むポリコサノール画分と、
（ｂ）トコフェリルポリエチレングリコール（１０００）スクシネート（「ＴＰＧＳ」）を含む安定剤画分とを含み、
ここで、前記ナノ粒子は、約１００ｎｍ未満の直径を有する。
【請求項２】
前記ポリコサノール画分がトリアコンタノールをさらに含む、請求項１に記載のナノ粒子。
【請求項３】
前記ナノ粒子が、約９：１〜約１５：１のオクタコサノール：トリアコンタノールの比を有する、請求項２に記載のナノ粒子。
【請求項４】
前記ナノ粒子が、約１６：１〜約２０：１のオクタコサノール：ヘキサコサノールの比を有する、請求項２に記載のナノ粒子。
【請求項５】
前記ナノ粒子が、直径約１００ｎｍ〜約４０ｎｍのサイズを有する、請求項１に記載のナノ粒子。
【請求項６】
前記ナノ粒子が、直径約６０ｎｍのサイズを有する、請求項１に記載のナノ粒子。
【請求項７】
請求項１に記載の複数のナノ粒子。
【請求項８】
請求項７に記載の前記複数のナノ粒子と、薬学的に許容される担体とを含む薬学的製剤。
【請求項９】
約約１０〜約３０ｍｇ／ｍＬ（ｗｔ／ｖｏｌ）の請求項７に記載の前記複数のナノ粒子を含む単位投薬量製剤。
【請求項１０】
対象の血清ビタミンＣレベルを増加させる方法であって、請求項８に記載の薬学的製剤を、前記対象の前記血清ビタミンＣレベルを増加させるのに十分な量で前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項１１】
対象のタンパク質酸化を低下させる方法であって、請求項８に記載の薬学的製剤を、前記対象の前記タンパク質酸化を低下させるのに十分な量で前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項１２】
対象の血圧を低下させる方法であって、請求項８に記載の薬学的製剤を、前記対象の血圧を低下させるのに十分な量で前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項１３】
対象の胴回りを減少させる方法であって、請求項８に記載の薬学的製剤を、前記対象の胴回りを減少させるのに十分な量で前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項１４】
対象のＶＬＤＬ（超低密度脂質）レベルを調節する方法であって、請求項８に記載の薬学的製剤を、前記対象のＶＬＤＬレベルを減少させるのに十分な量で前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項１５】
対象のアルブミン／グロブリン比の上昇を調節する方法であって、請求項８に記載の薬学的製剤を、前記対象の前記アルブミン／グロブリン比の上昇を調節するのに十分な量で前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項１６】
対象のインスリン抵抗性を治療する方法であって、請求項８に記載の薬学的製剤を、前記インスリン抵抗性を治療するのに十分な量で前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項１７】
対象の血糖レベルを調節する方法であって、請求項８に記載の薬学的製剤を、前記対象の前記血糖レベルを調節するのに十分な量で前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項１８】
対象の糖尿病を治療する方法であって、請求項８に記載の薬学的製剤を、前記対象の糖尿病を治療するのに十分な量で前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項１９】
前記糖尿病がＩＩ型糖尿病である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記糖尿病がＩ型糖尿病である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
対象のＣ反応性タンパク質レベルを調節する方法であって、請求項８に記載の薬学的製剤を、前記対象の前記Ｃ反応性タンパク質レベルを調節するのに十分な量で前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項２２】
対象のＮＦ−κＢタンパク質レベルを阻害する方法であって、請求項８に記載の薬学的製剤を、前記対象のＮＦ−κＢレベルを調節するのに十分な量で前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項２３】
対象のＰＡＩ−１レベルを調節する方法であって、請求項８に記載の薬学的製剤を、前記対象の前記ＰＡＩ−１レベルを調節するのに十分な量で前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項２４】
対象のＩＣＡＭ−１レベルを低下させる方法であって、請求項８に記載の薬学的製剤を、前記対象の前記ＩＣＡＭ−１レベルを低下させるのに十分な量で前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項２５】
対象のアディポネクチンレベルを増加させる方法であって、請求項８に記載の薬学的製剤を、前記対象の前記アディポネクチンレベルを増加させるのに十分な量で前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項２６】
対象の一酸化窒素レベルを調節する方法であって、請求項８に記載の薬学的製剤を、前記対象の前記一酸化窒素レベルを調節するのに十分な量で前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項２７】
対象のＴＮＦ−αレベルを低下させる方法であって、請求項８に記載の薬学的製剤を、前記対象の前記ＴＮＦ−αレベルを低下させるのに十分な量で前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項２８】
対象のＭＣＰ−１（単球走化性タンパク質−１）レベルを調節する方法であって、請求項８に記載の薬学的製剤を、前記対象の前記ＭＣＰ−１（単球走化性タンパク質−１）レベルを調節するのに十分な量で前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項２９】
対象のグルタチオンレベルを調節する方法であって、請求項８に記載の薬学的製剤を、前記対象の前記グルタチオンレベルを調節するのに十分な量で前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項３０】
前記対象が別の場合には前記薬学的製剤による治療を必要としない、請求項１１に記載の方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図２５】
【図２６】
【図２７】
【図２８】
【図２９】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図２５】
【図２６】
【図２７】
【図２８】
【図２９】
【公表番号】特表２０１２−５１８６３９（Ｐ２０１２−５１８６３９Ａ）
【公表日】平成２４年８月１６日（２０１２．８．１６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５５１０８４（Ｐ２０１１−５５１０８４）
【出願日】平成２２年１月２１日（２０１０．１．２１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０２１６８４
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０９６２３１
【国際公開日】平成２２年８月２６日（２０１０．８．２６）
【出願人】（５１１１７７３２９）ナノルクス、インコーポレイテッド (1)
【氏名又は名称原語表記】ＮＡＮＯＲＸ，ＩＮＣ．
【住所又は居所原語表記】６ Ｄｅｖｏｅ Ｐｌａｃｅ，Ｃｈａｐｐａｑｕｅ，ＮＹ １０５１４ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２４年８月１６日（２０１２．８．１６）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年１月２１日（２０１０．１．２１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０２１６８４
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０９６２３１
【国際公開日】平成２２年８月２６日（２０１０．８．２６）
【出願人】（５１１１７７３２９）ナノルクス、インコーポレイテッド (1)
【氏名又は名称原語表記】ＮＡＮＯＲＸ，ＩＮＣ．
【住所又は居所原語表記】６ Ｄｅｖｏｅ Ｐｌａｃｅ，Ｃｈａｐｐａｑｕｅ，ＮＹ １０５１４ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ
【Ｆターム（参考）】
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