ポリペプチド−核酸複合体の細胞の送達および活性化
本発明は一般的に核酸、ポリペプチドおよび／または蛍光団の細胞送達のため組成物、蛍光分子または部分、核酸およびポリペプチドを含む分子複合体、および、このような組成物の製造および使用の方法を提供する。複合体の光活性化分散は組成物または複合体からの核酸および／またはペプチド１つ以上の細胞内放出をもたらす。核酸、ポリペプチドおよび蛍光団の生物学的活性は複合体内において抑制され、そして、これらの活性は複合体からの放出により回復する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞にポリペプチドを送達する方法であって、以下：
（ａ）該細胞を、いずれかの順序または組み合わせにおいて、該ポリペプチド、核酸、蛍光分子、および、細胞送達分子に接触させる工程；ならびに
（ｂ）該核酸、該蛍光分子、および、該細胞送達分子の１つ以上からの該ポリペプチドの解離をもたらす処理により該細胞を処理する工程
を包含する、方法。
【請求項２】
前記処理が照射を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ポリペプチド、前記核酸、前記蛍光分子、および、前記細胞送達分子の２つ以上を前記接触の前に混合する、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記細胞送達分子が細胞送達ポリペプチドである、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記細胞送達ポリペプチドが合成ペプチドである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記ポリペプチドが、前記細胞送達ポリペプチドをさらに含む融合蛋白内に含まれる、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記融合蛋白がさらに副次的ポリペプチドを含む、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記副次的ポリペプチドがその反応体の１つまたはその生成物の１つとして核酸を有する酵素である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記副次的ポリペプチドがリコンビナーゼである、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記リコンビナーゼが部位特異的リコンビナーゼである、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記核酸が前記部位特異的リコンビナーゼにより認識される少なくとも１つの部位を含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
前記細胞送達ポリペプチドが：
（ａ）ｍ％塩基性アミノ酸、ただしここでｍ％は約５０％〜１００％であるものを含み；
（ｂ）ｎ連続塩基性アミノ酸の配列、ただしここでｎは２〜約７５のいずれかの整数であるものを含み；そして、これに加えて、または、代替として、
（ｃ）単純疱疹ウィルス（ＨＳＶ）によりコードされる蛋白のアミノ酸配列中に存在しないアミノ酸配列を有する、
請求項４に記載の方法。
【請求項１３】
前記ポリペプチドがリコンビナーゼである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記リコンビナーゼが部位特異的リコンビナーゼである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記核酸が前記部位特異的リコンビナーゼにより認識される少なくとも１つの部位を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記細胞送達ポリペプチドが約１０．５〜約１４のｐＩを有する、請求項４に記載の方法。
【請求項１７】
前記ｎ連続塩基性アミノ酸の配列を有するオリゴペプチドが約１０．５〜約１４のｐＩを有する、請求項１２に記載の方法。
【請求項１８】
前記蛍光分子が蛍光ポリペプチドである、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
前記ポリペプチドが前記蛍光ポリペプチドをさらに含む融合蛋白内に含まれる、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記蛍光分子が蛍光ポリペプチドである、請求項４に記載の方法。
【請求項２１】
前記蛍光ポリペプチドが前記ポリペプチド、および、これに加えて、または、代替として、前記蛍光ポリペプチドをさらに含む融合蛋白内に含まれる、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
１つ以上の前記ポリペプチド、細胞送達ポリペプチドおよび前記蛍光ポリペプチドが副次的ポリペプチドをさらに含む融合蛋白内に含まれる、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
前記副次的ポリペプチドがその反応体の１つまたはその生成物の１つとして核酸を有する酵素である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記細胞送達分子が核酸結合蛋白である、請求項１に記載の方法。
【請求項２５】
前記核酸結合蛋白がヒストン、ヒストン様蛋白およびポリ−Ｌリジン、ならびに、これらの組み合わせおよびそれらの誘導体よりなる群から選択される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記ポリペプチド、前記核酸、前記蛍光分子、および、前記細胞送達ポリペプチドの２つ以上を前記接触の前に混合する、請求項４に記載の方法。
【請求項２７】
前記核酸がオリゴヌクレオチドである、請求項１に記載の方法。
【請求項２８】
細胞にポリペプチドを送達する方法であって、以下：
（ａ）該細胞を、いずれかの順序または組み合わせにおいて、該ポリペプチド、核酸、蛍光分子、細胞送達分子およびトランスフェクション剤に接触させる工程；ならびに
（ｂ）該核酸、該蛍光分子、および、該細胞送達分子の１つ以上からの該ポリペプチドの解離をもたらす処理により該細胞を処理する工程、
を包含する、方法。
【請求項２９】
前記ポリペプチド、前記核酸、前記蛍光分子、および、前記細胞送達分子の２つ以上を前記接触の前に混合する、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記蛍光分子および前記細胞送達分子の１つ以上がポリペプチドである、請求項２８に記載の方法。
【請求項３１】
少なくとも１つの蛍光分子および少なくとも１つの細胞送達分子を含むキット。
【請求項３２】
少なくとも１つのトランスフェクション剤、少なくとも１つの細胞、少なくとも１つの核酸、少なくとも１つの取扱説明書のセット、および、少なくとも１つの光照明装置、および、場合によりこれらのための電源よりなる群から選択される１つ以上の要素をさらに含む、請求項３１に記載のキット。
【請求項３３】
前記細胞送達分子および前記蛍光分子の１つまたは両方がポリペプチドである、請求項３１に記載のキット。
【請求項３４】
前記細胞送達ポリペプチドおよび前記蛍光ポリペプチドが融合蛋白内に含まれる、請求項３３に記載のキット。
【請求項３５】
少なくとも１つのＲＮＡｉ分子をさらに含む、請求項３１に記載のキット。
【請求項３６】
１つ以上の細胞をさらに含む、請求項３１に記載のキット。
【請求項３７】
前記細胞がトランスフェクションまたは形質転換に対してコンピテントである、請求項３６に記載のキット。
【請求項３８】
前記細胞がダイサーを発現または過剰発現する、請求項３６に記載のキット。
【請求項３９】
少なくとも１つのトランスフェクション剤および少なくとも１つのＲＮＡｉ分子を含むキット。
【請求項４０】
１つ以上の細胞、１つ以上のリコンビナーゼ、１つ以上の組み換え蛋白および１つ以上の取扱説明書のセットよりなる群から選択される１つ以上の要素をさらに含む、請求項３９に記載のキット。
【請求項４１】
細胞送達ポリペプチドおよび細胞により取り込まれる工程が望ましい薬剤を含み、該細胞送達ポリペプチドは蛍光部分を含む複合体。
【請求項４２】
細胞により取り込まれる工程が望ましい前記薬剤の活性が前記複合体内において抑制される、請求項４１に記載の複合体。
【請求項４３】
前記薬剤が一旦前記複合体から解離すると、前記薬剤が活性化される、請求項４２に記載の複合体。
【請求項４４】
前記複合体からの前記細胞送達ポリペプチドの解離が光活性化可能である、請求項４１に記載の複合体。
【請求項４５】
前記複合体からの細胞により取り込まれる工程が望ましい前記薬剤の解離が光活性化可能である、請求項４１に記載の複合体。
【請求項４６】
核酸をさらに含む、請求項４１に記載の複合体。
【請求項４７】
前記核酸が約５塩基〜約２００キロ塩基を含む、請求項４１に記載の複合体。
【請求項４８】
前記核酸がｍＲＮＡ、ｔｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ＰＮＡ、ｓｓＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｓＤＮＡ、ｄｓＤＮＡ、ＤＮＡ：ＲＮＡハイブリッド分子、プラスミド、人工染色体、遺伝子療法コンストラクト、ｃＤＮＡ、ＰＣＲ産物、制限フラグメント、リボザイム、アンチセンスコンストラクトおよびこれらの組み合わせよりなる群から選択される、請求項４６に記載の複合体。
【請求項４９】
前記核酸がオリゴヌクレオチドである、請求項４６に記載の複合体。
【請求項５０】
前記核酸が１つ以上の化学修飾を含む、請求項４６に記載の複合体。
【請求項５１】
前記核酸が細胞により取り込まれる工程が望ましい薬剤である、請求項４６に記載の複合体。
【請求項５２】
前記細胞送達ポリペプチドが副次的ポリペプチドとの融合蛋白内に含まれる、請求項４６に記載の複合体。
【請求項５３】
前記副次的ポリペプチドが生物学的に活性である、請求項５２に記載の複合体。
【請求項５４】
前記副次的ポリペプチドが、アフィニティータグ、エピトープ、プロテアーゼ切断部位、検出可能なポリペプチド、酵素、ホルモン、受容体リガンド、受容体フラグメントおよび抗体または抗体誘導体よりなる群から選択される、請求項５３に記載の複合体。
【請求項５５】
前記蛍光部分が蛍光ポリペプチドである、請求項４１に記載の複合体。
【請求項５６】
前記蛍光ポリペプチドが第２のポリペプチドとの融合蛋白内に含まれる、請求項５５に記載の複合体。
【請求項５７】
前記副次的ポリペプチドが前記細胞送達ポリペプチドである、請求項５２に記載の複合体。
【請求項５８】
１つ以上のトランスフェクション剤をさらに含む、請求項４１に記載の複合体。
【請求項５９】
１つ以上のリコンビナーゼ、および、これに加えて、または、代替として、組み換え蛋白をさらに含む、請求項４１に記載の複合体。
【請求項６０】
請求項５９に記載の複合体を含むキット。
【請求項６１】
細胞に核酸を送達する方法であって、以下：
（ａ）該細胞を、いずれかの順序または組み合わせにおいて、該核酸、蛍光分子、および、細胞送達分子に接触させる工程；ならびに
（ｂ）該蛍光分子および該細胞送達分子の一方または両方からの該核酸の解離をもたらす処理により該細胞を処理する工程、
を包含する、方法。
【請求項６２】
前記処理が照射を含む、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
前記核酸が前記処理の後に生物学的に活性である、請求項６１に記載の方法。
【請求項６４】
前記核酸が前記処理の後に前記細胞の原形質内に分散される、請求項６１に記載の方法。
【請求項６５】
前記核酸が約５塩基〜約２００キロ塩基を含む、請求項６１に記載の方法。
【請求項６６】
前記核酸がｍＲＮＡ、ｔｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ＰＮＡ、ｓｓＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｓＤＮＡ、ｄｓＤＮＡ、ＤＮＡ：ＲＮＡハイブリッド分子、プラスミド、人工染色体、遺伝子療法コンストラクト、ｃＤＮＡ、ＰＣＲ産物、制限フラグメント、リボザイム、アンチセンスコンストラクトおよびこれらの組み合わせよりなる群から選択される、請求項６１に記載の方法。
【請求項６７】
前記核酸がオリゴヌクレオチドである、請求項６１に記載の方法。
【請求項６８】
前記核酸が１つ以上の化学修飾を含む、請求項６１に記載の方法。
【請求項６９】
前記蛍光分子が前記核酸に結合していない請求項６１に記載の方法。
【請求項７０】
前記蛍光分子が前記細胞送達分子に結合している、請求項６１に記載の方法。
【請求項７１】
前記細胞送達分子が細胞送達ポリペプチドである、請求項６１に記載の方法。
【請求項７２】
前記細胞送達ポリペプチドが合成ペプチドである、請求項７１に記載の方法。
【請求項７３】
前記細胞送達ポリペプチドが：
（ａ）ｍ％塩基性アミノ酸、ただしここでｍ％は約５０％〜１００％であるものを含み；
（ｂ）ｎ連続塩基性アミノ酸の配列、ただしここでｎは２〜約７５のいずれかの整数であるものを含み；そして、これに加えて、または、代替として、
（ｃ）単純疱疹ウィルス（ＨＳＶ）によりコードされる蛋白のアミノ酸配列中に存在しないアミノ酸配列を有する、
請求項７１に記載の方法。
【請求項７４】
前記細胞送達ポリペプチドが融合蛋白内に含まれる、請求項７１に記載の方法。
【請求項７５】
前記融合蛋白がさらに副次的ポリペプチドを含む、請求項７４に記載の方法。
【請求項７６】
前記副次的ポリペプチドがその反応体の１つまたはその生成物の１つとして核酸を有する酵素である、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
前記副次的ポリペプチドがリコンビナーゼである、請求項７６に記載の方法。
【請求項７８】
前記リコンビナーゼが部位特異的リコンビナーゼである、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
前記核酸が前記部位特異的リコンビナーゼにより認識される少なくとも１つの部位を含む、請求項７８に記載の方法。
【請求項８０】
前記核酸が蛋白またはその一部をコードする配列を包含する、請求項６１に記載の方法。
【請求項８１】
前記配列が前記細胞の蛋白の一部のアミノ酸配列をコードし、該蛋白またはその一部をコードする細胞核酸が該配列により望ましく置き換えられる、請求項８０に記載の方法。
【請求項８２】
前記蛋白が前記細胞において発現される、請求項８０に記載の方法。
【請求項８３】
前記細胞送達ポリペプチドが約１０．５〜約１４のｐＩを有する、請求項７３に記載の方法。
【請求項８４】
前記ｎ連続塩基性アミノ酸の配列を有するオリゴペプチドが約１０．５〜約１４のｐＩを有する、請求項７３に記載の方法。
【請求項８５】
前記蛍光分子が蛍光ポリペプチドである、請求項６１に記載の方法。
【請求項８６】
前記蛍光分子が蛍光ポリペプチドである、請求項７１に記載の方法。
【請求項８７】
前記蛍光分子および前記蛍光送達分子が融合蛋白内に含まれるポリペプチドである、請求項８６に記載の方法。
【請求項８８】
細胞に核酸を送達する方法であって、以下：
（ａ）該細胞を、いずれかの順序または組み合わせにおいて、該核酸、蛍光分子、細胞送達分子およびトランスフェクション剤に接触させる工程；ならびに
（ｂ）該蛍光分子および該細胞送達分子の１つ以上からの該核酸の解離をもたらす処理により該細胞を処理する工程
を包含する、方法。
【請求項８９】
前記核酸、前記蛍光分子、および、前記細胞送達分子の２つ以上を前記接触の前に混合する、請求項８８に記載の方法。
【請求項９０】
前記蛍光分子および前記細胞送達分子の１つ以上がポリペプチドである、請求項８８に記載の方法。
【請求項９１】
１つ以上の核酸、１つ以上の蛍光団、および、１つ以上の細胞送達ポリペプチドを含む分子複合体であって、各細胞送達ポリペプチドが、
（ａ）ｍ％塩基性アミノ酸、ただしここでｍ％は約１０％〜１００％であるものであり；
（ｂ）ｎ連続塩基性アミノ酸の配列、ただしここでｎは２〜５０のいずれかの整数であるものを含み；そして、
（ｃ）単純疱疹ウィルス（ＨＳＶ）蛋白に由来しない、
複合分子複合体。
【請求項９２】
前記蛍光団が前記核酸または前記細胞送達ポリペプチドに共有結合している、請求項９１に記載の分子複合体。
【請求項９３】
請求項９１に記載の分子複合体を含む、組成物。
【請求項９４】
トランスフェクション剤、トランスフェクション増強剤およびエンドソーム崩壊剤よりなる群から選択される１つ以上の薬剤をさらに含む、請求項９３に記載の組成物。
【請求項９５】
請求項９１に記載の分子複合体を含む、細胞。
【請求項９６】
請求項９５に記載の細胞を含む、組成物。
【請求項９７】
前記組成物を凍結した後に前記細胞が生存性を維持している、請求項９６に記載の組成物。
【請求項９８】
前記組成物がグリセロールを含む、請求項９７に記載の組成物。
【請求項９９】
請求項９１に記載の分子複合体を含む、容器。
【請求項１００】
請求項９１に記載の分子複合体および薬学的に許容される賦形剤または担体を含む、医薬組成物。
【請求項１０１】
１つ以上の前記核酸、前記ポリペプチドおよび前記蛍光団が生物学的に活性である、請求項１００に記載の医薬組成物。
【請求項１０２】
前記核酸が生物学的に活性である、請求項１００に記載の医薬組成物。
【請求項１０３】
前記生物学的に活性な核酸がｍＲＮＡ、ｔｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ＰＮＡ、ｓｓＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｓＤＮＡ、ｄｓＤＮＡ、ＤＮＡ：ＲＮＡハイブリッド分子、プラスミド、人工染色体、遺伝子療法コンストラクト、ｃＤＮＡ、ＰＣＲ産物、制限フラグメント、リボザイム、アンチセンスコンストラクトおよびこれらの組み合わせよりなる群から選択される、請求項１０２に記載の医薬組成物。
【請求項１０４】
前記ポリペプチドが生物学的に活性である、請求項１００に記載の医薬組成物。
【請求項１０５】
疾患または障害に罹患した個体の治療方法であって、該方法が請求項９１に記載の複合体、請求項９３に記載の組成物、または、請求項１００に記載の医薬組成物に該個体を接触させる工程を包含する、方法。
【請求項１０６】
電磁気照射に前記個体を曝露する工程をさらに含む、請求項１０５に記載の方法。
【請求項１０７】
遺伝子療法を必要とする個体に、該療法を提供する方法であって、該個体またはその個体に由来する細胞を請求項９１に記載の複合体、請求項９３に記載の組成物、または、請求項１００に記載の医薬組成物に接触させる工程を包含する、方法。
【請求項１０８】
試験化合物への細胞の応答を測定する方法であって、以下：
（ａ）第１の細胞を、いずれかの順序または組み合わせにおいて、第１の核酸、蛍光分子、および、細胞送達分子に接触させる工程；
（ｂ）第２の細胞を、いずれかの順序または組み合わせにおいて、第２の核酸、該蛍光分子、および、該細胞送達分子に接触させる工程；
（ｃ）該核酸、該蛍光分子、および、該細胞送達分子の１つ以上からの該ポリペプチドの解離をもたらす処理により該細胞を処理する工程；
（ｄ）（ａ）の前；（ａ）、（ｂ）または（ｃ）の最中；（ａ）と（ｂ）との間；（ｂ）と（ｃ）との間；および、これに加えて、または、代替として、（ｃ）の後に該試験化合物に該細胞を接触させる工程；
（ｅ）該細胞からの細胞応答に相当するシグナルを検出する工程；ならびに
（ｆ）該第１の細胞からのシグナルを該第２の細胞からのシグナルと比較する工程
を包含する、方法。
【請求項１０９】
前記細胞の１つ以上が１つ以上のレポーター遺伝子を含む、請求項１０８に記載の方法。
【請求項１１０】
１つ以上の前記核酸、前記細胞送達分子、および、前記蛍光団が生物学的に活性である、請求項１０８に記載の方法。
【請求項１１１】
前記核酸が生物学的に活性である、請求項１０８に記載の方法。
【請求項１１２】
前記生物学的に活性な核酸がｍＲＮＡ、ｔｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ＰＮＡ、ｓｓＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｓＤＮＡ、ｄｓＤＮＡ、ＤＮＡ：ＲＮＡハイブリッド分子、プラスミド、人工染色体、遺伝子療法コンストラクト、ｃＤＮＡ、ＰＣＲ産物、制限フラグメント、リボザイム、アンチセンスコンストラクトおよびこれらの組み合わせよりなる群から選択される、請求項１１１に記載の方法。
【請求項１１３】
予め選択された活性または作用を有する化合物を発見する方法であって、以下：
（ａ）第１の細胞を、いずれかの順序または組み合わせにおいて、第１の核酸、蛍光分子、および、細胞送達分子に接触させる工程；
（ｂ）第２の細胞を、いずれかの順序または組み合わせにおいて、第２の核酸、蛍光分子、および、細胞送達分子に接触させる工程；
（ｃ）該核酸、該蛍光分子、および、該細胞送達分子の１つ以上からの該ポリペプチドの解離をもたらす処理により該細胞を処理する工程；
（ｄ）（ａ）の前；（ａ）、（ｂ）または（ｃ）の最中；（ａ）と（ｂ）との間；（ｂ）と（ｃ）との間；および、これに加えて、または、代替として、（ｃ）の後に該試験化合物に該細胞を接触させる工程；
（ｅ）該細胞からの細胞応答に相当するシグナルを検出する工程；ならびに
（ｆ）該第１の細胞からのシグナルを該第２の細胞からのシグナルと比較する工程；
を包含し、
ここで該第２の細胞からのシグナルとの第１の細胞からのシグナルの相違が該予め選択された活性または作用に相当する、方法。
【請求項１１４】
前記細胞の１つ以上が１つ以上のレポーター遺伝子を含む、請求項１１３に記載の方法。
【請求項１１５】
１つ以上の前記核酸、前記細胞送達分子、および、前記蛍光団が生物学的に活性である、請求項１１３に記載の方法。
【請求項１１６】
前記核酸が生物学的に活性である、請求項１１３に記載の方法。
【請求項１１７】
前記生物学的に活性な核酸がｍＲＮＡ、ｔｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ＰＮＡ、ｓｓＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｓＤＮＡ、ｄｓＤＮＡ、ＤＮＡ：ＲＮＡハイブリッド分子、プラスミド、人工染色体、遺伝子療法コンストラクト、ｃＤＮＡ、ＰＣＲ産物、制限フラグメント、リボザイム、アンチセンスコンストラクトおよびこれらの組み合わせよりなる群から選択される、請求項１１６に記載の方法。
【請求項１】
細胞にポリペプチドを送達する方法であって、以下：
（ａ）該細胞を、いずれかの順序または組み合わせにおいて、該ポリペプチド、核酸、蛍光分子、および、細胞送達分子に接触させる工程；ならびに
（ｂ）該核酸、該蛍光分子、および、該細胞送達分子の１つ以上からの該ポリペプチドの解離をもたらす処理により該細胞を処理する工程
を包含する、方法。
【請求項２】
前記処理が照射を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ポリペプチド、前記核酸、前記蛍光分子、および、前記細胞送達分子の２つ以上を前記接触の前に混合する、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記細胞送達分子が細胞送達ポリペプチドである、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記細胞送達ポリペプチドが合成ペプチドである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記ポリペプチドが、前記細胞送達ポリペプチドをさらに含む融合蛋白内に含まれる、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記融合蛋白がさらに副次的ポリペプチドを含む、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記副次的ポリペプチドがその反応体の１つまたはその生成物の１つとして核酸を有する酵素である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記副次的ポリペプチドがリコンビナーゼである、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記リコンビナーゼが部位特異的リコンビナーゼである、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記核酸が前記部位特異的リコンビナーゼにより認識される少なくとも１つの部位を含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
前記細胞送達ポリペプチドが：
（ａ）ｍ％塩基性アミノ酸、ただしここでｍ％は約５０％〜１００％であるものを含み；
（ｂ）ｎ連続塩基性アミノ酸の配列、ただしここでｎは２〜約７５のいずれかの整数であるものを含み；そして、これに加えて、または、代替として、
（ｃ）単純疱疹ウィルス（ＨＳＶ）によりコードされる蛋白のアミノ酸配列中に存在しないアミノ酸配列を有する、
請求項４に記載の方法。
【請求項１３】
前記ポリペプチドがリコンビナーゼである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記リコンビナーゼが部位特異的リコンビナーゼである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記核酸が前記部位特異的リコンビナーゼにより認識される少なくとも１つの部位を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記細胞送達ポリペプチドが約１０．５〜約１４のｐＩを有する、請求項４に記載の方法。
【請求項１７】
前記ｎ連続塩基性アミノ酸の配列を有するオリゴペプチドが約１０．５〜約１４のｐＩを有する、請求項１２に記載の方法。
【請求項１８】
前記蛍光分子が蛍光ポリペプチドである、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
前記ポリペプチドが前記蛍光ポリペプチドをさらに含む融合蛋白内に含まれる、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記蛍光分子が蛍光ポリペプチドである、請求項４に記載の方法。
【請求項２１】
前記蛍光ポリペプチドが前記ポリペプチド、および、これに加えて、または、代替として、前記蛍光ポリペプチドをさらに含む融合蛋白内に含まれる、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
１つ以上の前記ポリペプチド、細胞送達ポリペプチドおよび前記蛍光ポリペプチドが副次的ポリペプチドをさらに含む融合蛋白内に含まれる、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
前記副次的ポリペプチドがその反応体の１つまたはその生成物の１つとして核酸を有する酵素である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記細胞送達分子が核酸結合蛋白である、請求項１に記載の方法。
【請求項２５】
前記核酸結合蛋白がヒストン、ヒストン様蛋白およびポリ−Ｌリジン、ならびに、これらの組み合わせおよびそれらの誘導体よりなる群から選択される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記ポリペプチド、前記核酸、前記蛍光分子、および、前記細胞送達ポリペプチドの２つ以上を前記接触の前に混合する、請求項４に記載の方法。
【請求項２７】
前記核酸がオリゴヌクレオチドである、請求項１に記載の方法。
【請求項２８】
細胞にポリペプチドを送達する方法であって、以下：
（ａ）該細胞を、いずれかの順序または組み合わせにおいて、該ポリペプチド、核酸、蛍光分子、細胞送達分子およびトランスフェクション剤に接触させる工程；ならびに
（ｂ）該核酸、該蛍光分子、および、該細胞送達分子の１つ以上からの該ポリペプチドの解離をもたらす処理により該細胞を処理する工程、
を包含する、方法。
【請求項２９】
前記ポリペプチド、前記核酸、前記蛍光分子、および、前記細胞送達分子の２つ以上を前記接触の前に混合する、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記蛍光分子および前記細胞送達分子の１つ以上がポリペプチドである、請求項２８に記載の方法。
【請求項３１】
少なくとも１つの蛍光分子および少なくとも１つの細胞送達分子を含むキット。
【請求項３２】
少なくとも１つのトランスフェクション剤、少なくとも１つの細胞、少なくとも１つの核酸、少なくとも１つの取扱説明書のセット、および、少なくとも１つの光照明装置、および、場合によりこれらのための電源よりなる群から選択される１つ以上の要素をさらに含む、請求項３１に記載のキット。
【請求項３３】
前記細胞送達分子および前記蛍光分子の１つまたは両方がポリペプチドである、請求項３１に記載のキット。
【請求項３４】
前記細胞送達ポリペプチドおよび前記蛍光ポリペプチドが融合蛋白内に含まれる、請求項３３に記載のキット。
【請求項３５】
少なくとも１つのＲＮＡｉ分子をさらに含む、請求項３１に記載のキット。
【請求項３６】
１つ以上の細胞をさらに含む、請求項３１に記載のキット。
【請求項３７】
前記細胞がトランスフェクションまたは形質転換に対してコンピテントである、請求項３６に記載のキット。
【請求項３８】
前記細胞がダイサーを発現または過剰発現する、請求項３６に記載のキット。
【請求項３９】
少なくとも１つのトランスフェクション剤および少なくとも１つのＲＮＡｉ分子を含むキット。
【請求項４０】
１つ以上の細胞、１つ以上のリコンビナーゼ、１つ以上の組み換え蛋白および１つ以上の取扱説明書のセットよりなる群から選択される１つ以上の要素をさらに含む、請求項３９に記載のキット。
【請求項４１】
細胞送達ポリペプチドおよび細胞により取り込まれる工程が望ましい薬剤を含み、該細胞送達ポリペプチドは蛍光部分を含む複合体。
【請求項４２】
細胞により取り込まれる工程が望ましい前記薬剤の活性が前記複合体内において抑制される、請求項４１に記載の複合体。
【請求項４３】
前記薬剤が一旦前記複合体から解離すると、前記薬剤が活性化される、請求項４２に記載の複合体。
【請求項４４】
前記複合体からの前記細胞送達ポリペプチドの解離が光活性化可能である、請求項４１に記載の複合体。
【請求項４５】
前記複合体からの細胞により取り込まれる工程が望ましい前記薬剤の解離が光活性化可能である、請求項４１に記載の複合体。
【請求項４６】
核酸をさらに含む、請求項４１に記載の複合体。
【請求項４７】
前記核酸が約５塩基〜約２００キロ塩基を含む、請求項４１に記載の複合体。
【請求項４８】
前記核酸がｍＲＮＡ、ｔｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ＰＮＡ、ｓｓＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｓＤＮＡ、ｄｓＤＮＡ、ＤＮＡ：ＲＮＡハイブリッド分子、プラスミド、人工染色体、遺伝子療法コンストラクト、ｃＤＮＡ、ＰＣＲ産物、制限フラグメント、リボザイム、アンチセンスコンストラクトおよびこれらの組み合わせよりなる群から選択される、請求項４６に記載の複合体。
【請求項４９】
前記核酸がオリゴヌクレオチドである、請求項４６に記載の複合体。
【請求項５０】
前記核酸が１つ以上の化学修飾を含む、請求項４６に記載の複合体。
【請求項５１】
前記核酸が細胞により取り込まれる工程が望ましい薬剤である、請求項４６に記載の複合体。
【請求項５２】
前記細胞送達ポリペプチドが副次的ポリペプチドとの融合蛋白内に含まれる、請求項４６に記載の複合体。
【請求項５３】
前記副次的ポリペプチドが生物学的に活性である、請求項５２に記載の複合体。
【請求項５４】
前記副次的ポリペプチドが、アフィニティータグ、エピトープ、プロテアーゼ切断部位、検出可能なポリペプチド、酵素、ホルモン、受容体リガンド、受容体フラグメントおよび抗体または抗体誘導体よりなる群から選択される、請求項５３に記載の複合体。
【請求項５５】
前記蛍光部分が蛍光ポリペプチドである、請求項４１に記載の複合体。
【請求項５６】
前記蛍光ポリペプチドが第２のポリペプチドとの融合蛋白内に含まれる、請求項５５に記載の複合体。
【請求項５７】
前記副次的ポリペプチドが前記細胞送達ポリペプチドである、請求項５２に記載の複合体。
【請求項５８】
１つ以上のトランスフェクション剤をさらに含む、請求項４１に記載の複合体。
【請求項５９】
１つ以上のリコンビナーゼ、および、これに加えて、または、代替として、組み換え蛋白をさらに含む、請求項４１に記載の複合体。
【請求項６０】
請求項５９に記載の複合体を含むキット。
【請求項６１】
細胞に核酸を送達する方法であって、以下：
（ａ）該細胞を、いずれかの順序または組み合わせにおいて、該核酸、蛍光分子、および、細胞送達分子に接触させる工程；ならびに
（ｂ）該蛍光分子および該細胞送達分子の一方または両方からの該核酸の解離をもたらす処理により該細胞を処理する工程、
を包含する、方法。
【請求項６２】
前記処理が照射を含む、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
前記核酸が前記処理の後に生物学的に活性である、請求項６１に記載の方法。
【請求項６４】
前記核酸が前記処理の後に前記細胞の原形質内に分散される、請求項６１に記載の方法。
【請求項６５】
前記核酸が約５塩基〜約２００キロ塩基を含む、請求項６１に記載の方法。
【請求項６６】
前記核酸がｍＲＮＡ、ｔｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ＰＮＡ、ｓｓＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｓＤＮＡ、ｄｓＤＮＡ、ＤＮＡ：ＲＮＡハイブリッド分子、プラスミド、人工染色体、遺伝子療法コンストラクト、ｃＤＮＡ、ＰＣＲ産物、制限フラグメント、リボザイム、アンチセンスコンストラクトおよびこれらの組み合わせよりなる群から選択される、請求項６１に記載の方法。
【請求項６７】
前記核酸がオリゴヌクレオチドである、請求項６１に記載の方法。
【請求項６８】
前記核酸が１つ以上の化学修飾を含む、請求項６１に記載の方法。
【請求項６９】
前記蛍光分子が前記核酸に結合していない請求項６１に記載の方法。
【請求項７０】
前記蛍光分子が前記細胞送達分子に結合している、請求項６１に記載の方法。
【請求項７１】
前記細胞送達分子が細胞送達ポリペプチドである、請求項６１に記載の方法。
【請求項７２】
前記細胞送達ポリペプチドが合成ペプチドである、請求項７１に記載の方法。
【請求項７３】
前記細胞送達ポリペプチドが：
（ａ）ｍ％塩基性アミノ酸、ただしここでｍ％は約５０％〜１００％であるものを含み；
（ｂ）ｎ連続塩基性アミノ酸の配列、ただしここでｎは２〜約７５のいずれかの整数であるものを含み；そして、これに加えて、または、代替として、
（ｃ）単純疱疹ウィルス（ＨＳＶ）によりコードされる蛋白のアミノ酸配列中に存在しないアミノ酸配列を有する、
請求項７１に記載の方法。
【請求項７４】
前記細胞送達ポリペプチドが融合蛋白内に含まれる、請求項７１に記載の方法。
【請求項７５】
前記融合蛋白がさらに副次的ポリペプチドを含む、請求項７４に記載の方法。
【請求項７６】
前記副次的ポリペプチドがその反応体の１つまたはその生成物の１つとして核酸を有する酵素である、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
前記副次的ポリペプチドがリコンビナーゼである、請求項７６に記載の方法。
【請求項７８】
前記リコンビナーゼが部位特異的リコンビナーゼである、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
前記核酸が前記部位特異的リコンビナーゼにより認識される少なくとも１つの部位を含む、請求項７８に記載の方法。
【請求項８０】
前記核酸が蛋白またはその一部をコードする配列を包含する、請求項６１に記載の方法。
【請求項８１】
前記配列が前記細胞の蛋白の一部のアミノ酸配列をコードし、該蛋白またはその一部をコードする細胞核酸が該配列により望ましく置き換えられる、請求項８０に記載の方法。
【請求項８２】
前記蛋白が前記細胞において発現される、請求項８０に記載の方法。
【請求項８３】
前記細胞送達ポリペプチドが約１０．５〜約１４のｐＩを有する、請求項７３に記載の方法。
【請求項８４】
前記ｎ連続塩基性アミノ酸の配列を有するオリゴペプチドが約１０．５〜約１４のｐＩを有する、請求項７３に記載の方法。
【請求項８５】
前記蛍光分子が蛍光ポリペプチドである、請求項６１に記載の方法。
【請求項８６】
前記蛍光分子が蛍光ポリペプチドである、請求項７１に記載の方法。
【請求項８７】
前記蛍光分子および前記蛍光送達分子が融合蛋白内に含まれるポリペプチドである、請求項８６に記載の方法。
【請求項８８】
細胞に核酸を送達する方法であって、以下：
（ａ）該細胞を、いずれかの順序または組み合わせにおいて、該核酸、蛍光分子、細胞送達分子およびトランスフェクション剤に接触させる工程；ならびに
（ｂ）該蛍光分子および該細胞送達分子の１つ以上からの該核酸の解離をもたらす処理により該細胞を処理する工程
を包含する、方法。
【請求項８９】
前記核酸、前記蛍光分子、および、前記細胞送達分子の２つ以上を前記接触の前に混合する、請求項８８に記載の方法。
【請求項９０】
前記蛍光分子および前記細胞送達分子の１つ以上がポリペプチドである、請求項８８に記載の方法。
【請求項９１】
１つ以上の核酸、１つ以上の蛍光団、および、１つ以上の細胞送達ポリペプチドを含む分子複合体であって、各細胞送達ポリペプチドが、
（ａ）ｍ％塩基性アミノ酸、ただしここでｍ％は約１０％〜１００％であるものであり；
（ｂ）ｎ連続塩基性アミノ酸の配列、ただしここでｎは２〜５０のいずれかの整数であるものを含み；そして、
（ｃ）単純疱疹ウィルス（ＨＳＶ）蛋白に由来しない、
複合分子複合体。
【請求項９２】
前記蛍光団が前記核酸または前記細胞送達ポリペプチドに共有結合している、請求項９１に記載の分子複合体。
【請求項９３】
請求項９１に記載の分子複合体を含む、組成物。
【請求項９４】
トランスフェクション剤、トランスフェクション増強剤およびエンドソーム崩壊剤よりなる群から選択される１つ以上の薬剤をさらに含む、請求項９３に記載の組成物。
【請求項９５】
請求項９１に記載の分子複合体を含む、細胞。
【請求項９６】
請求項９５に記載の細胞を含む、組成物。
【請求項９７】
前記組成物を凍結した後に前記細胞が生存性を維持している、請求項９６に記載の組成物。
【請求項９８】
前記組成物がグリセロールを含む、請求項９７に記載の組成物。
【請求項９９】
請求項９１に記載の分子複合体を含む、容器。
【請求項１００】
請求項９１に記載の分子複合体および薬学的に許容される賦形剤または担体を含む、医薬組成物。
【請求項１０１】
１つ以上の前記核酸、前記ポリペプチドおよび前記蛍光団が生物学的に活性である、請求項１００に記載の医薬組成物。
【請求項１０２】
前記核酸が生物学的に活性である、請求項１００に記載の医薬組成物。
【請求項１０３】
前記生物学的に活性な核酸がｍＲＮＡ、ｔｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ＰＮＡ、ｓｓＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｓＤＮＡ、ｄｓＤＮＡ、ＤＮＡ：ＲＮＡハイブリッド分子、プラスミド、人工染色体、遺伝子療法コンストラクト、ｃＤＮＡ、ＰＣＲ産物、制限フラグメント、リボザイム、アンチセンスコンストラクトおよびこれらの組み合わせよりなる群から選択される、請求項１０２に記載の医薬組成物。
【請求項１０４】
前記ポリペプチドが生物学的に活性である、請求項１００に記載の医薬組成物。
【請求項１０５】
疾患または障害に罹患した個体の治療方法であって、該方法が請求項９１に記載の複合体、請求項９３に記載の組成物、または、請求項１００に記載の医薬組成物に該個体を接触させる工程を包含する、方法。
【請求項１０６】
電磁気照射に前記個体を曝露する工程をさらに含む、請求項１０５に記載の方法。
【請求項１０７】
遺伝子療法を必要とする個体に、該療法を提供する方法であって、該個体またはその個体に由来する細胞を請求項９１に記載の複合体、請求項９３に記載の組成物、または、請求項１００に記載の医薬組成物に接触させる工程を包含する、方法。
【請求項１０８】
試験化合物への細胞の応答を測定する方法であって、以下：
（ａ）第１の細胞を、いずれかの順序または組み合わせにおいて、第１の核酸、蛍光分子、および、細胞送達分子に接触させる工程；
（ｂ）第２の細胞を、いずれかの順序または組み合わせにおいて、第２の核酸、該蛍光分子、および、該細胞送達分子に接触させる工程；
（ｃ）該核酸、該蛍光分子、および、該細胞送達分子の１つ以上からの該ポリペプチドの解離をもたらす処理により該細胞を処理する工程；
（ｄ）（ａ）の前；（ａ）、（ｂ）または（ｃ）の最中；（ａ）と（ｂ）との間；（ｂ）と（ｃ）との間；および、これに加えて、または、代替として、（ｃ）の後に該試験化合物に該細胞を接触させる工程；
（ｅ）該細胞からの細胞応答に相当するシグナルを検出する工程；ならびに
（ｆ）該第１の細胞からのシグナルを該第２の細胞からのシグナルと比較する工程
を包含する、方法。
【請求項１０９】
前記細胞の１つ以上が１つ以上のレポーター遺伝子を含む、請求項１０８に記載の方法。
【請求項１１０】
１つ以上の前記核酸、前記細胞送達分子、および、前記蛍光団が生物学的に活性である、請求項１０８に記載の方法。
【請求項１１１】
前記核酸が生物学的に活性である、請求項１０８に記載の方法。
【請求項１１２】
前記生物学的に活性な核酸がｍＲＮＡ、ｔｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ＰＮＡ、ｓｓＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｓＤＮＡ、ｄｓＤＮＡ、ＤＮＡ：ＲＮＡハイブリッド分子、プラスミド、人工染色体、遺伝子療法コンストラクト、ｃＤＮＡ、ＰＣＲ産物、制限フラグメント、リボザイム、アンチセンスコンストラクトおよびこれらの組み合わせよりなる群から選択される、請求項１１１に記載の方法。
【請求項１１３】
予め選択された活性または作用を有する化合物を発見する方法であって、以下：
（ａ）第１の細胞を、いずれかの順序または組み合わせにおいて、第１の核酸、蛍光分子、および、細胞送達分子に接触させる工程；
（ｂ）第２の細胞を、いずれかの順序または組み合わせにおいて、第２の核酸、蛍光分子、および、細胞送達分子に接触させる工程；
（ｃ）該核酸、該蛍光分子、および、該細胞送達分子の１つ以上からの該ポリペプチドの解離をもたらす処理により該細胞を処理する工程；
（ｄ）（ａ）の前；（ａ）、（ｂ）または（ｃ）の最中；（ａ）と（ｂ）との間；（ｂ）と（ｃ）との間；および、これに加えて、または、代替として、（ｃ）の後に該試験化合物に該細胞を接触させる工程；
（ｅ）該細胞からの細胞応答に相当するシグナルを検出する工程；ならびに
（ｆ）該第１の細胞からのシグナルを該第２の細胞からのシグナルと比較する工程；
を包含し、
ここで該第２の細胞からのシグナルとの第１の細胞からのシグナルの相違が該予め選択された活性または作用に相当する、方法。
【請求項１１４】
前記細胞の１つ以上が１つ以上のレポーター遺伝子を含む、請求項１１３に記載の方法。
【請求項１１５】
１つ以上の前記核酸、前記細胞送達分子、および、前記蛍光団が生物学的に活性である、請求項１１３に記載の方法。
【請求項１１６】
前記核酸が生物学的に活性である、請求項１１３に記載の方法。
【請求項１１７】
前記生物学的に活性な核酸がｍＲＮＡ、ｔｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ＰＮＡ、ｓｓＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｓＤＮＡ、ｄｓＤＮＡ、ＤＮＡ：ＲＮＡハイブリッド分子、プラスミド、人工染色体、遺伝子療法コンストラクト、ｃＤＮＡ、ＰＣＲ産物、制限フラグメント、リボザイム、アンチセンスコンストラクトおよびこれらの組み合わせよりなる群から選択される、請求項１１６に記載の方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図２】
【図３】
【公表番号】特表２００６−５１７７９０（Ｐ２００６−５１７７９０Ａ）
【公表日】平成１８年８月３日（２００６．８．３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５００８５７（Ｐ２００６−５００８５７）
【出願日】平成１６年１月９日（２００４．１．９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０００４３０
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０６３３４２
【国際公開日】平成１６年７月２９日（２００４．７．２９）
【出願人】（５０２２２１２８２）インヴィトロジェン コーポレーション (113)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１８年８月３日（２００６．８．３）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年１月９日（２００４．１．９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０００４３０
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０６３３４２
【国際公開日】平成１６年７月２９日（２００４．７．２９）
【出願人】（５０２２２１２８２）インヴィトロジェン コーポレーション (113)
【Ｆターム（参考）】
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