【課題】生物学的生産システムを使用して高収率で生産することができる、改善された性質を有するポリペプチドを提供する。
【解決手段】熱凝集に耐性である可変ドメインが濃縮された抗体可変ドメインライブラリーを製造する以下の工程。(a)複数のディスプレイされる抗体可変ドメインを含むファージディスプレイシステム。ここでディスプレイされる可変ドメインの少なくとも一部がアンフォールドおよびリフォールドされており、アンフォールド温度が８０〜１００℃である；(b)該ファージディスプレイシステムから、アンフォールドし、リフォールドし、かつ結合機能を回復した可変領域をディスプレイする少なくとも１つのファージを選択する；(c)(b)で選択されたファージにおいてディスプレイされる可変ドメインのCDR1および任意にCDR2をコードする核酸を得る；(d)抗体可変ドメインをコードする核酸のライブラリーを調製する。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
熱凝集に耐性である可変ドメインが濃縮された抗体可変ドメインライブラリーを製造する方法であって、該方法は、
(a)複数のディスプレイされる抗体可変ドメインを含むファージディスプレイシステムを提供する工程、ここでディスプレイされる可変ドメインの少なくとも一部がアンフォールドおよびリフォールドされており、アンフォールド温度が８０〜１００℃である；
(b)該ファージディスプレイシステムから、アンフォールドし、リフォールドし、かつ結合機能を回復した可変領域をディスプレイする少なくとも１つのファージを選択する工程；
(c)(b)で選択されたファージにおいてディスプレイされる可変ドメインのCDR1および任意にCDR2をコードする核酸を得る工程；および
(d)抗体可変ドメインをコードする核酸のライブラリーを調製する工程、ここで(c)で得られた該核酸が１つ以上の他の核酸と作動可能に連結され、CDR1および任意にCDR2が(c)で得られた核酸によりコードされる抗体可変ドメインをコードする核酸構築物のライブラリーが製造される、
を含む、方法。
【請求項２】
(a)のディスプレイされる可変ドメインの実質的に全てが、80℃まで加熱することによりアンフォールドしており、冷却によりリフォールドしている請求項１記載の方法。
【請求項３】
(d)で構築された核酸のライブラリーが、CDR3がランダム化されているか、またはCDR3が加熱の際に可逆的にアンフォールドする能力について選択された抗体可変ドメインに由来しない抗体可変ドメインをコードする請求項１記載の方法。

【図１】

【図２】

【図３−１】

【図３−２】

【図３−３】

【図３−４】

【図３−５】

【図３−６】

【図４−１】

【図４−２】

【図４−３】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１５】

【図１６】

【図１７】

【図１８】

【公開番号】特開２０１１−１３２２３３（Ｐ２０１１−１３２２３３Ａ）
【公開日】平成２３年７月７日（２０１１．７．７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−２９２１３８（Ｐ２０１０−２９２１３８）
【出願日】平成２２年１２月２８日（２０１０．１２．２８）
【分割の表示】特願２００６−５３０５０６（Ｐ２００６−５３０５０６）の分割
【原出願日】平成１６年５月１４日（２００４．５．１４）
【出願人】（５０２１９７０４６）ドマンティス　リミテッド (47)
【Ｆターム（参考）】