ポリペプチド
本発明は、1以上の抗体ドメインを含む天然のあるいは合成ポリマーに結合しているポリペプチドを包含する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
１以上の抗体単一可変ドメインを含むPEGに結合しているポリペプチドであって、少なくとも24kDaの流体力学的サイズ及び少なくとも1.3時間の半減期を有することを特徴とし、各可変ドメインが抗原結合部位を有し、かつ、各可変ドメインがポリペプチド中の単一の抗体可変ドメインとして抗原に結合することを特徴とするPEGに結合しているポリペプチド。
【請求項２】
１以上の抗体単一可変ドメインを含むPEGに結合しているポリペプチドであって、200kDaの流体力学的サイズ及び20から60kDaのトータルPEGサイズを有し、各可変ドメインが、抗原結合部位を有し、及び、各可変ドメインがポリペプチド中の単一の抗体可変ドメインとして抗原に結合することを特徴とするPEGに結合しているポリペプチド。
【請求項３】
すくなくとも24kDaの流体力学的サイズを有する抗体単一可変ドメインのPEGに結合している多量体であって、20から60kDaの総PEGサイズを有しすることを特徴とし、各可変ドメインが、抗原結合部位を有し及び各可変ドメインがポリペプチド中の単一の抗体単一可変ドメインとして抗原に結合することを特徴とするPEGに結合しているポリペプチド。
【請求項４】
請求項1又は2のPEGに結合しているポリペプチドであって、前記PEGに結合しているポリペプチドが、PEGに結合していない同じポリペプチドに対して少なくとも90%の活性を保持していることを特徴とし、該活性は標的リガンドに対するPEGに結合しているポリペプチド又はPEGに結合していないポリペプチドの親和性により測定することを特徴とするポリペプチド。
【請求項５】
請求項1又は2のPEGに結合しているポリペプチドであって、前記各可変ドメインがユニバーサルフレームワークを含むことを特徴とするポリペプチド。
【請求項６】
請求項5のPEGに結合しているポリペプチドであって、各可変ドメインが、DP47、DP45及びDP38から成る群より選択されるＶＨフレームワーク、又は、DPK9であるVLフレームワークを含むことを特徴とするポリペプチド。
【請求項７】
TNFαに対して特異的な抗原結合性を有するPEGに結合しているポリペプチドであって、前記ポリペプチドが1以上の抗体単一可変ドメインを有し、個々の可変ドメインがTNFα結合部位を有していることを特徴とし、このポリペプチドが、少なくとも200kDaの流体力学的サイズ及び20から60kDaの総PEGサイズを有することを特徴とするポリペプチド。
【請求項８】
請求項1又は2のPEGに結合しているポリペプチドであって、前記ポリペプチドがTNFα特異性を有することを特徴とするポリペプチド。
【請求項９】
請求項7のPEGに結合しているポリペプチドであって、前記ポリペプチドが、表面プラスモン共鳴法の測定により、50nMから20pMの解離定数(Kd)及び5x10-１から1x10-7s-1のKoffでヒトTNFαから解離することを特徴とするPEGに結合しているポリペプチド。
【請求項１０】
請求項7のPEGに結合しているポリペプチドであって、該ポリペプチドが、基準となる細胞アッセイにおいて、500nMから50pMのND50でヒトTNFαを中和することを特徴とするポリペプチド。
【請求項１１】
請求項7のユニバーサルフレームワークを含むPEGに結合しているポリペプチドであって、個々の可変ドメインが、DP47、DP45及びDP38から成る群より選択されるVHフレームワークを含み、及び/又は、VLフレームワークがDPK9であることを特徴とするポリペプチド。
【請求項１２】
少なくとも1.3の半減期を有するポリマーに結合している抗体単一可変ドメインであって、前記ポリマーが抗体単一可変ドメインのシステイン又はリジン残基の位置で結合していることを特徴とするポリマーに結合している抗体単一可変ドメイン。
【請求項１３】
請求項12のポリマーに結合している抗体単一可変ドメインであって、前記ポリマーに結合している抗体単一可変ドメインが少なくとも24kDaの流体力学的サイズを有することを特徴とするポリマーに結合している抗体単一可変ドメイン。
【請求項１４】
請求項12のポリマーに結合している抗体単一可変ドメインであって、前記システイン又はリジン残基が、前記抗体単一可変ドメインの予め決められた位置にあることを特徴とするポリマーに結合している抗体単一可変ドメイン。
【請求項１５】
請求項12のポリマーに結合している抗体単一可変ドメインであって、前記システイン又はリジン残基が、前記抗体単一可変ドメインのC末端又はN末端に存在していることを特徴とするポリマーに結合している抗体単一可変ドメイン。
【請求項１６】
請求項12のポリマーに結合している抗体単一可変ドメインであって、前記ポリマーが抗体単一可変ドメインのC末端又はN末端にあるシステイン又はリジン以外のシステイン又はリジンと結合していることを特徴とするポリマーに結合している抗体単一可変ドメイン。
【請求項１７】
請求項12のポリマーに結合している抗体単一可変ドメインであって、前記ポリマーが、C末端及び/又はN末端から少なくとも2残査離れた位置にあるシステイン又はリジンの位置で抗体単一可変ドメインと結合していることを特徴とするポリマーに結合している抗体単一可変ドメイン。
【請求項１８】
請求項12のポリマーに結合している抗体単一可変ドメインであって、前記ポリマーが、Gln13、Pro41又はLeu115から成る群より選択される位置で置換するシステイン又はリジン残査を含む重鎖可変ドメインに結合していることを特徴とするポリマーに結合している抗体単一可変ドメイン。
【請求項１９】
請求項12のポリマーに結合している抗体単一可変ドメインであって、前記抗体単一可変ドメインが、C末端のヒンジ領域を含むことを特徴とし、前記ポリマーが、前記ヒンジ領域に結合することを特徴とするポリマーに結合している抗体単一可変ドメイン。
【請求項２０】
請求項12のポリマーに結合している抗体単一可変ドメインであって、前記ポリマーが、直鎖又は分岐鎖のポリ(エチレングリコール)(PEG)、ポリ(プロピレングリコール)、ポリ(ビニルアルコール)、メトキシ(ポリエチレングリコール)、ラクトース、アミロース、デキルトラン及びグリコゲンから成る群より選択されることを特徴とするポリマーに結合している抗体単一可変ドメイン。
【請求項２１】
請求項20のポリマーに結合している抗体単一可変ドメインであって、前記ポリマーがPEGであることを特徴とするポリマーに結合している抗体単一可変ドメイン。
【請求項２２】
請求項12のポリマーに結合している抗体単一可変ドメインであって、前記抗体単一可変ドメインの1以上の所定の残査がシステイン又はリジン残査に置換されていることを特徴とするポリマーに結合している抗体単一可変ドメイン。
【請求項２３】
請求項12のポリマーに結合している抗体単一可変ドメインであって、前記抗体単一可変ドメインが重鎖可変ドメインであることを特徴とするポリマーに結合している抗体単一可変ドメイン。
【請求項２４】
請求項12のポリマーに結合している抗体単一可変ドメインであって、前記抗体単一可変ドメインが軽鎖可変ドメイン(VL)であることを特徴とするポリマーに結合している抗体単一可変ドメイン。
【請求項２５】
請求項12のポリマーに結合している抗体単一可変ドメインであって、半減期が1.3及び170時間の間であることを特徴とするポリマーに結合している抗体単一可変ドメイン。
【請求項２６】
請求項12のポリマーに結合している抗体単一可変ドメインであって、前記ポリマーに結合している抗体単一可変ドメインが、0.25から6時間の間のt1/2αを有することを特徴とするポリマーに結合している抗体単一可変ドメイン。
【請求項２７】
請求項12のポリマーに結合している抗体単一可変ドメインであって、前記ポリマーに結合している抗体単一可変ドメインが、2から40時間の間のt1/2βを有することを特徴とするポリマーに結合している抗体単一可変ドメイン。
【請求項２８】
少なくとも1.3時間の半減期を有するPEGに結合している抗体単一可変ドメインの多量体であって、前記PEGが、前記多量体のシステイン又はリジン残査に結合していることを特徴とし、各可変ドメインが抗原結合部位を有し、各可変ドメインがポリペプチドの中の抗体単一可変ドメインとして抗原に結合することを特徴とするPEGに結合している抗体単一可変ドメイン。
【請求項２９】
請求項28のPEGに結合している多量体であって、前記多量体は、抗体単一可変ドメインの二量体であることを特徴とするPEGに結合している多量体。
【請求項３０】
請求項28のPEGに結合している多量体であって、前記多量体が抗体単一可変ドメインの三量体であることを特徴とするPEGに結合している多量体。
【請求項３１】
請求項28のPEGに結合している多量体であって、前記多量体が抗体単一可変ドメインの四量体であることを特徴とするPEGに結合している多量体。
【請求項３２】
請求項28のPEGに結合している多量体であって、前記システイン又はリジン残査が、前記多量体に含まれる抗体単一可変ドメインのC末端又はN末端にあることを特徴とするPEGに結合している多量体。
【請求項３３】
請求項28のPEGに結合している多量体であって、少なくとも1の抗体単一可変ドメインの1以上の所定の残査が、システイン又はリジン残査に変異されていることを特徴とし、前記PEGが、前記変異残査に結合していることを特徴とするPEGに結合している多量体。
【請求項３４】
請求項33のPEGに結合している多量体であって、前記変異残査が、前記抗体単一可変ドメインのC末端又はN末端のいずれにも存在しないことを特徴とするPEGに結合している多量体。
【請求項３５】
請求項33のPEGに結合している多量体であって、前記抗体単一可変ドメインポリペプチドが、重鎖可変ドメインであることを特徴とし、前記変異される残査が、Gln13、Pro41又はLeu115から成る群より選択されることを特徴とするPEGに結合している多量体。
【請求項３６】
請求項33のPEGに結合している多量体であって、前記PEGがC末端及び/又はN末端から少なくとも2残査離れたところに位置するシステイン又はリジン残査で、前記抗体単一可変ドメインと結合していることを特徴とするPEGに結合している多量体。
【請求項３７】
請求項28のPEGに結合している多量体であって、前記半減期が1.3から170時間の間であることを特徴とするPEGに結合している多量体。
【請求項３８】
請求項28のPEGに結合している多量体であって、前記PEGに結合している抗体単一可変ドメインが、0.25から5.8時間の間のt1/2αを有することを特徴とするPEGに結合している多量体。
【請求項３９】
請求項28のPEGに結合している多量体であって、前記PEGに結合している抗体単一可変ドメインが、2から40時間の間のt1/2αを有することを特徴とするPEGに結合している多量体。
【請求項４０】
3以上の抗体単一可変ドメインを含むPEGに結合している抗体単一可変ドメインの多量体であって、該可変ドメインが抗原結合部位を有し、個々の可変ドメインが単一の抗体可変ドメインとして抗原に結合することを特徴とするPEGに結合している多量体。
【請求項４１】
請求項40のPEGに結合している多量体であって、前記多量体が少なくとも24kDaの流体力学的サイズを有することを特徴とするPEGに結合している多量体。
【請求項４２】
請求項40のPEGに結合している多量体であって、前記多量体が少なくとも200kDaの流体力学的サイズを有することを特徴とするPEGに結合している多量体。
【請求項４３】
請求項40のPEGに結合している多量体であって、前記多量体が、3、4、又は8の抗体単一可変ドメインを有することを特徴とするPEGに結合している多量体。
【請求項４４】
請求項40のPEGに結合している多量体であって、少なくとも1.3時間の半減期を有することを特徴とするPEGに結合している多量体。
【請求項４５】
請求項40のPEGに結合している多量体であって、前記半減期が1.3から170時間の間であることを特徴とするPEGに結合している多量体。
【請求項４６】
請求項40のPEGに結合している多量体であって、前記PEGに結合している抗体単一可変ドメインが、0.55から6時間のt1/2αを有することを特徴とするPEGに結合している多量体。
【請求項４７】
請求項40のEPGに結合している多量体であって、前記PEGに結合している抗体単一可変ドメインが、2から40時間のt1/2βを有することを特徴とするPEGに結合している多量体。
【請求項４８】
請求項28又は40に記載のPEGに結合している多量体であって、前記PEGが、多量体の可変ドメインの所定の位置にあるシステイン又はリジン残査と、前記抗体単一可変ドメインの三量体又は四量体が結合していることを特徴とするPEGに結合している多量体。
【請求項４９】
請求項48のPEGに結合している多量体であって、前記システイン又はリジン残査が、前記多量体の抗体単一可変ドメインのC末端又はN末端に存在することを特徴とするPEGに結合している多量体。
【請求項５０】
請求項48のPEGに結合している多量体であって、前記抗体単一可変ドメインの1以上の所定の残査が、システイン又はリジンに変異されていることを特徴とし、前記PEGが、前記変異残査に結合することを特徴とする多量体。
【請求項５１】
請求項50のPEGに結合している多量体であって、前記変異残査が、前記抗体単一可変ドメインのC末端又はN末端には存在しないことを特徴とする多量体。
【請求項５２】
請求項51のPEGに結合している多量体であって、前記抗体単一可変ドメインが、重鎖可変ドメインであることを特徴とし、前記変異残査が、Gln13、Pro41、又はLeu115から成る群より選択されることを特徴とするPEGに結合している多量体。
【請求項５３】
請求項51のPEGに結合している多量体であって、前記PEGが前記抗体単一可変ドメインのC又はN末端から少なくとも2残査離れたところに位置するシステイン又はリジン残査に結合していることを特徴とする多量体。
【請求項５４】
抗原結合部位を有するポリペプチドであって、該ポリペプチドが、1又は2の抗体の可変ドメインを含み、該ポリペプチドが、少なくとも24kDaの流体力学的サイズ及び少なくとも1.3時間の半減期を有することを特徴とし、各可変ドメインが、抗原結合部位を有し、各可変ドメインが、ポリペプチドの中の1の抗体単一可変ドメインとして抗原に結合することを特徴とする抗原結合部位を有するポリペプチド。
【請求項５５】
TNFαに特異的な結合部位を含むポリペプチドであって、前記ポリペプチドが、1又は2の抗体可変ドメインを含み、該ポリペプチドが、少なくとも24kDaの流体力学的サイズ及び少なくとも1.3時間の半減期を有することを特徴とするTNFαに特異的な結合部位を含むポリペプチド。
【請求項５６】
請求項55のポリペプチドであって、各可変ドメインが、抗原結合部位を有し、各可変ドメインが、ポリペプチドの中の抗体単一可変ドメインとして抗原に結合することを特徴とするポリペプチド。
【請求項５７】
請求項54又は55のポリペプチドであって、前記ポリペプチドが、20から60kDaの間のサイズを有するPEGポリマーに結合することを特徴とするポリペプチド。
【請求項５８】
請求項54又は55のポリペプチドであって、前記ポリペプチドが少なくとも200kDaの流体力学的サイズを有することを特徴とするポリペプチド。
【請求項５９】
請求項54又は55のポリペプチドであって、前記半減期が1.3から170時間の間であることを特徴とするポリペプチド。
【請求項６０】
請求項54又は55のポリペプチドであって、前記ポリペプチドが0.25から6時間の間のt1/2αを有することを特徴とするポリペプチド。
【請求項６１】
請求項54又は55のポリペプチドであって、前記ポリペプチドが2から40時間の間のt1/2βを有することを特徴とするポリペプチド。
【請求項６２】
請求項54又は55のポリペプチドであって、該ポリペプチドは、可変ドメインのシステイン又はリジンの位置で、PEG部分と結合する可変ドメインを有することを特徴とするポリペプチド。
【請求項６３】
請求項62のポリペプチドであって、前記システイン又はリジン残査が、前記抗体単一可変ドメインのC末端又はN末端にあることを特徴とするポリペプチド。
【請求項６４】
請求項62のポリペプチドであって、前記可変ドメインの1以上の所定の残査が、システイン又はリジン残基に変異され、前記PEGが、前記変異残査に結合することを特徴とするポリペプチド。
【請求項６５】
請求項64のポリペプチドであって、前記変異残査が、前記抗体単一可変ドメインのC末端又はN末端には存在しないことを特徴とするポリペプチド。
【請求項６６】
請求項65のポリペプチドであって、前記可変ドメインが重鎖可変ドメインであることを特徴とし、前記変異される残査が、Gln13、Pro41、又はLeu115から成る群より選択されることを特徴とするポリペプチド。
【請求項６７】
抗体単一可変ドメインのホモ多量体であって、前記ホモ多量体が、少なくとも24kDaの流体力学的サイズ及び少なくとも1.3時間の半減期を有することを特徴とする抗体単一可変ドメインのホモ多量体。
【請求項６８】
請求項67のホモ多量体であって、各可変ドメインが抗原結合部位を有し、各可変ドメインが該ホモ多量体の中の1の抗体単一可変ドメインとして抗原に結合することを特徴とするホモ多量体。
【請求項６９】
請求項67のホモ多量体であって、前記ホモ多量体が少なくとも1のPEGポリマーに結合していることを特徴とするホモ多量体。
【請求項７０】
請求項67のホモ多量体であって、前記半減期が1.3時間から170時間の間であることを特徴とするホモ多量体。
【請求項７１】
請求項67のホモ多量体であって、0.25から6時間の間のt1/2αを有することを特徴とするホモ多量体。
【請求項７２】
請求項67のホモ多量体であって、1から40時間の間のt1/2βを有することを特徴とするホモ多量体。
【請求項７３】
請求項67のホモ多量体であって、前記ホモ多量体の個々の抗体単一可変ドメインが、重鎖可変ドメイン又はVLのいずれかを含むことを特徴とするホモ多量体。
【請求項７４】
請求項67のホモ多量体であって、前記ホモ多量体の個々の抗体単一可変ドメインが、前記抗体単一可変ドメインのC末端に付加的なシステイン残査を含むように配列されていることを特徴とするホモ多量体。
【請求項７５】
請求項67の抗体ホモ多量体であって、前記ホモ多量体の抗体単一可変ドメインが、ペプチドリンカーによりお互いに結合されていることを特徴とする抗体ホモ多量体。
【請求項７６】
請求項67のホモ多量体であって、前記ホモ多量体が第一及び第二抗体単一可変ドメインのみを含むことを特徴とし、前記ホモ二量体の第一の抗体単一可変ドメインが、抗体単一可変ドメイン及び重鎖定常領域(CH1)を含むことを特徴とし、前記ホモ二量体の抗体単一可変ドメインが、抗体単一可変ドメイン及び軽鎖定常領域(CL)を含むことを特徴とするホモ多量体。
【請求項７７】
請求項67のホモ多量体であって、前記ホモ多量体が、TNFαに対して特異性を有することを特徴とするホモ多量体。
【請求項７８】
請求項67のホモ多量体であって、表面プラスモン共鳴法により測定した場合、50nMから20pMの解離定数(Kd)及び5ｘ10-7から1ｘ10-7ｓ-1のKoff速度定数でヒトTNFαから解離することを特徴とするホモ多量体。
【請求項７９】
請求項67のホモ多量体であって、このホモ多量体は、基準となる細胞アッセイにおいて500nMから50pMのND50でヒトTNFαを中和することを特徴とするホモ多量体。
【請求項８０】
請求項67のホモ多量体であって、前記ホモ多量体の個々の抗体単一可変ドメインは、TNFαに結合することを特徴とするホモ多量体。
【請求項８１】
請求項80のホモ多量体であって、表面プラスモン共鳴により測定した場合、ホモ多量体の個々の抗体単一可変ドメインが、50nMから20pMの解離定数(Kd)及び5ｘ10-7から1ｘ10-7ｓ-1のKoff速度定数でヒトTNFαから解離することを特徴とするホモ多量体。
【請求項８２】
請求項81のホモ多量体であって、前記ホモ多量体の抗体単一可変ドメインは、基準となる細胞アッセイにおいて500nMから50pMのND50でヒトTNFαを中和することを特徴とするホモ多量体。
【請求項８３】
抗体単一可変ドメインのヘテロ多量体であって、このヘテロ多量体は、少なくとも24kDaの流体力学的サイズ及び1.3時間の半減期を有することを特徴とし、各可変ドメインは、抗原結合サイトを含み、各抗体単一可変ドメインは、ヘテロ多量体中の1の抗体単一可変ドメインとして抗原に結合することを特徴とするへテロ多量体。
【請求項８４】
請求項83のヘテロ多量体であって、前記へテロ多量体が少なくとも1のPEGポリマーに結合していることを特徴とするへテロ多量体。
【請求項８５】
請求項83のヘテロ多量体であって、前記半減期が、1.3時間から170時間の間であることを特徴とするへテロ多量体。
【請求項８６】
請求項83のヘテロ多量体であて、前記へテロ多量体が、0.25から6時間の間のt1/2αを有することを特徴とするへテロ多量体。
【請求項８７】
請求項83のヘテロ多量体であて、前記へテロ多量体が、2から40時間の間のt1/2βを有することを特徴とするへテロ多量体。
【請求項８８】
請求項83のヘテロ多量体であって、前記へテロ多量体の個々の抗体単一可変ドメインが重鎖可変ドメイン又はVLのいずれかを含むことを特徴とするへテロ多量体。
【請求項８９】
請求項83のヘテロ多量体であって、前記へテロ多量体の個々の抗体単一可変ドメインが、前記抗体単一可変ドメインのC末端又はN末端に付加的なシステイン残査を含むように配列されていることを特徴とするへテロ多量体。
【請求項９０】
請求項83のヘテロ多量体であって、前記へテロ多量体の抗体単一可変ドメインが、ペプチドリンカーで互いに結合されていることを特徴とするへテロ多量体。
【請求項９１】
請求項83のヘテロ多量体であって、前記へテロ多量体が第一及び第二の抗体単一可変ドメインのみを含むことを特徴とし、前記へテロ二量体の第一の抗体単一可変ドメインが、抗体単一可変ドメイン及び重鎖定常領域(CH1)を含むことを特徴とし、前記へテロ二量体の抗体単一可変ドメインが、抗体単一可変ドメイン及び軽鎖定常領域(CL)を含むことを特徴とするへテロ多量体。
【請求項９２】
請求項83のヘテロ多量体であって、前記へテロ多量体が、TNFαに対して特異性を有することを特徴とするへテロ多量体。
【請求項９３】
請求項83のヘテロ多量体であって、表面プラスモン共鳴法により測定した場合、50nMから20pMの解離定数(Kd)及び5ｘ10-7から1ｘ10-7ｓ-1のKoff速度定数でヒトTNFαから解離することを特徴とするへテロ多量体。
【請求項９４】
請求項93のヘテロ多量体であって、該へテロ多量体は、基準となる細胞アッセイにおいて500nMから50pMのND50でヒトTNFαを中和することを特徴とするへテロ多量体。
【請求項９５】
請求項83のヘテロ多量体であって、前記へテロ多量体の抗体単一可変ドメインがTNFαに特性を有することを特徴とするへテロ多量体。
【請求項９６】
請求項95のヘテロ多量体であって、前記へテロ多量体の個々の抗体単一可変ドメインは、表面プラスモン共鳴法により測定した場合、50nMから20pMの解離定数(Kd)及び5ｘ10-7から1ｘ10-7ｓ-1のKoff速度定数でヒトTNFαから解離することを特徴とするへテロ多量体。
【請求項９７】
請求項96のヘテロ多量体であって、前記へテロ多量体の個々の抗体単一可変ドメインは、基準となる細胞アッセイにおいて500nMから50pMのND50でヒトTNFαを中和することを特徴とするへテロ多量体。
【請求項９８】
同じ抗体単一可変ドメインを有するPEGに結合していない抗体単一可変ドメインに匹敵する活性を保持し、標的リガンドに対して特異性を有するPEGに結合した抗体単一可変ドメインであって、該活性は、標的リガンドに対してPEGに結合している抗体単一可変ドメイン又はPEGに結合していない抗体単一可変ドメインの親和性により測定されることを特徴とする。PEGに結合している抗体単一可変ドメイン。
【請求項９９】
請求項98のPEGに結合している抗体単一可変ドメインであって、前記PEGに結合している抗体単一可変ドメインが、PEGに結合していない同じ抗体単一可変ドメインに対して少なくとも90％の活性を有することを特徴とする、PEGに結合している抗体単一可変ドメイン。
【請求項１００】
請求項98のPEGに結合している抗体単一可変ドメインであって、前記活性が、PEGに結合している抗体単一可変ドメインのTNFαに対する結合として、表面プラスモン共鳴法により測定されることを特徴とする、PEGに結合している抗体単一可変ドメイン。
【請求項１０１】
請求項100のPEGに結合している抗体単一可変ドメインであって、前記PEGに結合している抗体単一可変ドメインが、表面プラスモン共鳴法により測定した場合、50nMから20pMの解離定数(Kd)及び5ｘ10-7から1ｘ10-7ｓ-1のKoff速度定数でヒトTNFαから解離することを特徴とするPEGに結合している抗体単一可変ドメイン。
【請求項１０２】
請求項98のPEG結合している抗体単一可変ドメインであって、前記活性が、基準となる細胞アッセイにおいてヒトTNFα又はTNFレセプター1を中和する能力として測定されることを特徴とするPEGに結合している抗体単一可変ドメイン。
【請求項１０３】
請求項102のPEGに結合している抗体単一可変ドメインであって、前記PEGに結合している抗体単一可変ドメインが、基準となる細胞アッセイにおいて500nMから50pMのND50でヒトTNFαを中和することを特徴とするPEGに結合している抗体単一可変ドメイン。
【請求項１０４】
請求項103のPEGに結合している抗体単一可変ドメインであって、前記PEGに結合している抗体単一可変ドメインのIC50又はND50が、前記PEGに結合している抗体単一可変ドメインと同じ抗体単一可変ドメインを有するPEGに結合していない抗体単一可変ドメインのIC50又はND50よりも10％未満大きいことを特徴とする、PEGに結合している抗体単一可変ドメイン。
【請求項１０５】
80nMから30pMのKdで標的抗原に特異的に結合するPEGに結合している抗体単一可変ドメイン。
【請求項１０６】
3nMから30pMのKdで標的抗原に特異的に結合するPEGに結合している抗体単一可変ドメイン。
【請求項１０７】
100pMから30pMのKdで標的抗原に特異的に結合するPEGに結合している抗体単一可変ドメイン。
【請求項１０８】
請求項105のPEGに結合している抗体単一可変ドメインであって、前記PEGに結合している抗体単一可変ドメインは表面プラスモン共鳴法により測定した場合、50nMから20pMの解離定数(Kd)及び5ｘ10-7から1ｘ10-7ｓ-1のKoff速度定数でヒトTNFαに結合することを特徴とするPEGに結合している抗体単一可変ドメイン。
【請求項１０９】
請求項105の抗体単一可変ドメインであって、前記結合が基準となる細胞アッセイにおいてヒトTNFα又はTNFレセプター1を中和する能力として測定されることを特徴とするPEGに結合している抗体単一可変ドメイン。
【請求項１１０】
請求項109のPEGに結合している抗体単一可変ドメインであって、PEG結合している抗体単一可変ドメインは、基準となる細胞アッセイにおいて500nMから50pMのND50でヒトTNFα又はTNFレセプター1を中和することを特徴とするPEGに結合している抗体単一可変ドメイン。
【請求項１１１】
同じ抗体単一可変ドメインを有するPEGに結合していない抗体単一可変ドメインホモ多量体に匹敵する活性を保持して、標的リガンドに対して特異性を有するPEGに結合した抗体単一可変ドメインホモ多量体であって、該活性が、標的リガンドに対する、PEGに結合している抗体単一可変ドメインホモ多量体又はPEGに結合していない抗体単一可変ドメインホモ多量体の親和性により測定されることを特徴とするPEGに結合した抗体単一可変ドメインホモ多量体。
【請求項１１２】
請求項111のPEGに結合している抗体単一可変ドメインのホモ多量体であって、前記PEGに結合している抗体単一可変ドメインが、PEGに結合していない同じ抗体単一可変ドメインホモ多量体に対して90％の活性を保持していることを特徴とするPEGに結合している抗体単一可変ドメインのホモ多量体。
【請求項１１３】
請求項111のPEGに結合している抗体単一可変ドメインホモ多量体であって、前記活性が、TNFαに対するPEGに結合している抗体単一可変ドメインホモ多量体の結合として測定されることを特徴とするPEGに結合している抗体単一可変ドメインホモ多量体。
【請求項１１４】
請求項111のPEGに結合している抗体単一可変ドメインのホモ多量体であって、前記活性が、TNFαに反応して生産される細胞毒性を抑制する能力として測定されることを特徴とするPEGに結合している抗体単一可変ドメインのホモ多量体。
【請求項１１５】
請求項114のPEGに結合している抗体単一可変ドメインのホモ多量体であって、前記PEGに結合している抗体単一可変ドメインのIC50が、PEGに結合していない抗体単一可変ドメインホモ多量体のIC50よりもわずかに10％大きいことを特徴とするPEGに結合している抗体単一可変ドメインのホモ多量体。
【請求項１１６】
請求項111のPEGに結合している抗体単一可変ドメインのホモ多量体であって、前記ホモ多量体の各メンバーが、重鎖可変ドメイン又はVLのいずれかを含むことを特徴とするPEGに結合している抗体単一可変ドメインのホモ多量体。
【請求項１１７】
請求項111のPEGに結合している抗体のホモ多量体であって、該ホモ多量体が、抗体単一可変ドメインのC末端又はN末端に付加的なシステイン残基を含むように配列されている抗体単一可変ドメインを含むことを特徴とするPEGに結合している抗体のホモ多量体。
【請求項１１８】
請求項111の抗体のホモ多量体であって、前記ホモ多量体のメンバーが、ペプチドリンカーにより結合されていることを特徴とする抗体のホモ多量体。
【請求項１１９】
請求項111の抗体のホモ多量体であって、前記ホモ多量体が、第一及び第二のメンバーのみを含み、前記ホモ二量体の前記第一メンバーは抗体単一可変ドメイン及び重鎖(CH1)定常領域を含み、前記ホモ二量体の第二メンバーは抗体単一可変ドメイン及び軽鎖(CL)定常領域を含むことを特徴とする抗体のホモ多量体。
【請求項１２０】
同じ抗体単一可変ドメインを有するPEGに結合していない抗体単一可変ドメインへテロ多量体に匹敵する活性を保持し、標的リガンドに対して特異性を有するPEGに結合した抗体単一可変ドメインへテロ多量体であって、該活性が、標的リガンドに対する、PEGに結合している抗体単一可変ドメインへテロ多量体又はPEGに結合していない抗体単一可変ドメインへテロ多量体の親和性により測定されることを特徴とするPEGに結合している抗体単一可変ドメインへテロ多量体。
【請求項１２１】
請求項120のPEGに結合している抗体単一可変ドメインのヘテロ多量体であって、前記PEGに結合している抗体単一可変ドメインはPEGに結合していない同じ抗体単一可変ドメインへテロ多量体に対して90％の活性を保持していることを特徴とするPEGに結合している抗体単一可変ドメインのヘテロ多量体。
【請求項１２２】
請求項120のPEGに結合している抗体単一可変ドメインのヘテロ多量体であって、該活性が、TNFαに対するPEGに結合している抗体単一可変ドメインへテロ多量体の結合として測定されることを特徴とするPEGに結合している抗体単一可変ドメインのヘテロ多量体。
【請求項１２３】
請求項120のPEGに結合している抗体単一可変ドメインのへテロ多量体であって、前記活性が、PEGに結合している抗体単一可変ドメインのヘテロ多量体のTNFαに反応する細胞の細胞毒性を抑制する能力として測定されることを特徴とするPEGに結合している抗体単一可変ドメインのへテロ多量体。
【請求項１２４】
請求項120のPEGに結合している抗体単一可変ドメインのヘテロ多量体であって、前記PEGに結合している抗体単一可変ドメインのIC50が、PEGに結合している抗体単一可変ドメインと同じ抗体単一可変ドメインを有するPEGに結合していない抗体単一可変ドメインへテロ多量体のIC50よりも10％未満大きいことを特徴とするPEGに結合している抗体単一可変ドメインのヘテロ多量体。
【請求項１２５】
請求項120のPEGに結合している抗体単一可変ドメインのヘテロ多量体であって、前記へテロ多量体の個々のメンバーは、重鎖可変ドメイン又はVLのいずれかを含んでいることを特徴とするPEGに結合している抗体単一可変ドメインのヘテロ多量体。
【請求項１２６】
請求項120のPEGに結合している抗体のへテロ多量体であって、前記抗体単一可変ドメインが、抗体単一可変ドメインのC末端又はN末端に付加的なシステイン残基を含むように配列されていることを特徴とするPEGに結合しているへテロ多量体。
【請求項１２７】
請求項120のPEGに結合している抗体のヘテロ多量体であって、前記へテロ多量体のメンバーは、ペプチドリンカーによりお互いに結合されていることを特徴とするPEGに結合している抗体のヘテロ多量体。
【請求項１２８】
請求項120のPEGに結合している抗体のヘテロ多量体であって、前記多量体が、第一及び第二メンバーのみを含み、前記へテロ二量体の前記第一メンバーは抗体単一可変ドメイン及び重鎖定常領域(CH1)を含み、第二メンバーは抗体単一可変ドメイン及び軽鎖定常領域(CL)を含むことを特徴とするPEGに結合している抗体のヘテロ多量体。
【請求項１２９】
請求項111のPEGに結合している抗体のホモ多量体又は請求項120のPEGに結合している抗体のヘテロ多量体であって、前記ホモ又はへテロ多量体が、二量体、三量体又は四量体から成る群より選択されることを特徴とするPEGに結合している抗体のホモ又はへテロ多量体。
【請求項１３０】
請求項111のPEGに結合している抗体のホモ多量体又は請求項120のPEGに結合している抗体のヘテロ多量体であって、前記ホモ-又はへテロ-多量体のPEG部分は、分岐鎖PEGであることを特徴とするPEGに結合しているホモ-又はへテロ-多量体。
【請求項１３１】
80nMから30pMのKdで標的抗原に特異的に結合する抗体単一可変ドメインのPEGに結合しているホモ多量体。
【請求項１３２】
請求項131のPEGに結合しているホモ多量体であって、前記PEGに結合しているホモ多量体は表面プラスモン共鳴法により測定した場合、50nMから20pMの解離定数(Kd)及び5ｘ10-7から1ｘ10-7ｓ-1のKoff速度定数でTNFαに結合することを特徴とするPEGに結合しているホモ多量体。
【請求項１３３】
請求項131のPEGに結合しているホモ多量体であって、該結合が、基準となる細胞アッセイにおいて前記PEG結合されたホモ多量体がヒトTNFα又はTNFレセプター1を中和する能力として測定されることを特徴とするPEGに結合しているホモ多量体。
【請求項１３４】
請求項133のPEGに結合しているホモ多量体であって、前記PEGに結合しているホモ多量体は、基準となる細胞アッセイにおいて500nMから50pMのND50でヒトTNFα又はTNFレセプター1を中和することを特徴とするPEGに結合しているホモ多量体。
【請求項１３５】
3nMから30pMのKdで標的抗原に特異的に結合する抗体単一可変ドメインのPEGに結合しているホモ多量体。
【請求項１３６】
100pMから30pMのKdで標的抗原に特異的に結合する抗体単一可変ドメインのPEGに結合しているホモ多量体。
【請求項１３７】
80nMから30pMのKdで標的抗原に特異的に結合する抗体単一可変ドメインのPEGに結合しているへテロ多量体。
【請求項１３８】
3nMから30pMのKdで標的抗原に特異的に結合する抗体単一可変ドメインのPEGに結合しているへテロ多量体。
【請求項１３９】
100pMから30pMのKdで標的抗原に特異的に結合する抗体単一可変ドメインのPEGに結合しているへテロ多量体。
【請求項１４０】
PEG分子に結合している前記抗体単一可変ドメインの中の所定の位置にある少なくとも1の溶媒可接性リジン残基を含む抗体単一可変ドメイン。
【請求項１４１】
請求項140の抗体単一可変ドメインであって、前記PEGが、PEGに結合しているN-ヒドロキシスクシニミド活性エステルの形態をしている前記溶媒可接性リジンに結合していることを特徴とする抗体単一可変ドメイン。
【請求項１４２】
請求項141の抗体単一可変ドメインであって、該N-ヒドロキシスクシニミド活性エステルが、PEG-O-CH2CH2CH2-CO2-NHS、PEG-O-CH2-NHS、PEG-O-CH2CH2-CO2-NHS、PEG-S-CH2CH2-CO-NHS、PEG-O2CNH-CH(R)-CO2-NHS、PEG-NHCO-CH2CH2-CO-NHS及びPEG-O-CH2-CO2-NHSからなる群より選択され、この式において、R が(CH2) 4NHCO2 (mPEG)であることを特徴とする抗体単一可変ドメイン。
【請求項１４３】
請求項140の抗体単一可変ドメインであって、該PEGが分岐鎖PEGであることを特徴とする抗体単一可変ドメイン。
【請求項１４４】
抗体単一可変ドメインの多量体であって、前記多量体の個々のメンバーが少なくとも1のPEGに結合している溶媒可接性リジン残査を含むことを特徴とする抗体単一可変ドメインの多量体。
【請求項１４５】
請求項144の抗体単一可変ドメインの多量体であって、前記溶媒可接性リジン残基がGln13、Pro41又はLeu115からなる群より選択される1以上の残基を変異することにより得られることを特徴とする抗体単一可変ドメインの多量体。
【請求項１４６】
請求項144の抗体単一可変ドメインの多量体であって、前記多量体がホモ多量体であることを特徴とする抗体単一可変ドメインの多量体。
【請求項１４７】
請求項144の抗体単一可変ドメインの多量体であって、前記多量体がヘテロ多量体であることを特徴とする抗体単一可変ドメインの多量体。
【請求項１４８】
請求項144の抗体単一可変ドメイン多量体であって、前記多量体がヘテロ又はホモ三量体であることを特徴とする抗体単一可変ドメインの多量体。
【請求項１４９】
請求項144の抗体単一可変ドメインの多量体であって、前記多量体がホモ又はへテロ四量体であることを特徴とする抗体単一可変ドメインの多量体。
【請求項１５０】
抗体単一可変ドメインのホモ又はへテロの三量体又は四量体であって、PEGに結合する少なくとも1の溶媒可接性システイン残査を含むことを特徴とする抗体単一可変ドメインのホモ又はへテロの三量体又は四量体。
【請求項１５１】
請求項150の抗体単一可変ドメインであって、前記PEGがマレイミド、ビニルフスホン及びチオールから成る群より選択されるスルフヒドリル基選択試薬により溶媒可接性システインに結合されることを特徴とする抗体単一可変ドメイン。
【請求項１５２】
請求項150の抗体単一可変ドメインであって、この抗体単一可変ドメインが重鎖可変ドメインであり、前記溶媒可接性システイン残基がGln13、Pro41又はLeu115からなる群より選択される1以上の残基の変異により得られることを特徴とする抗体単一可変ドメイン。
【請求項１５３】
PEGに結合していない同じ抗体の単一可変領域ポリペプチドの半減期よりも少なくとも7倍高い半減期を有するPEGに結合している抗体の単一可変領域ポリペプチド。
【請求項１５４】
請求項153のPEGに結合している抗体単一可変ドメインポリペプチドであって、前記PEGに結合している抗体の可変領域が、少なくとも24kDaの流体力学的サイズを有することを特徴とするPEGに結合している抗体単一可変ドメインポリペプチド。
【請求項１５５】
請求項153のPEGに結合している抗体単一可変ドメインポリペプチドであって、前記PEGに結合している抗体の可変領域が、24kDaから500kDaの流体力学的サイズを有することを特徴とするPEGに結合している抗体単一可変ドメインポリペプチド。
【請求項１５６】
少なくとも1.3時間の半減期を有するPEGに結合している抗体単一可変ドメイン及び担体を含む医薬品製剤。
【請求項１５７】
少なくとも1.3時間の半減期及び少なくとも24kDaの流体力学的サイズを有するPEGに結合している抗体単一可変ドメイン及び担体を含む医薬品製剤。
【請求項１５８】
PEGに結合している抗体単一可変ドメインへテロ三量体、ホモ三量体、へテロ四量体又はホモ四量体を含む医薬品製剤であって、前記多量体の各可変ドメインが抗原結合サイトを有し、各可変ドメインが1の可変ドメインとして抗原に結合することを特徴とする医薬品製剤。
【請求項１５９】
PEGに結合している抗体単一可変ドメインを含む医薬品製剤であって、この前記PEGに結合している抗体単一可変ドメインは前記医薬品製剤を動物に投与した後該動物の胃において10％未満しか分解されていないことを特徴とする医薬品製剤。
【請求項１６０】
PEGに結合している抗体単一可変ドメインを含む医薬品製剤であって、前記PEGに結合している抗体単一可変ドメインは、in vitroにおいて、ペプシン、トリプシン、エラスターゼ、キモトリプシン及びカルボキシペプチダーゼから成る群より選択されるプロテアーゼに曝したときに10％までしか分解されないことを特徴とし、
前記プロテアーゼがペプシンの場合、前記PEGに結合している抗体単一可変ドメインはpＨ2.0で30分間ペプシンに曝したときには、10％未満しか分解されないことを特徴とし、
前記プロテアーゼがトリプシン、エラスターゼ、キモトリプシン又はカルボキシペプチダーゼである場合、前記PEGに結合している抗体単一可変ドメインは、トリプシン、エラスターゼ、キモトリプシン又はカルボキシペプチダーゼにpＨ8.0で30分間曝したときには、10％未満しか分解されないことを特徴とする医薬品製剤。
【請求項１６１】
請求項152の医薬品製剤であって、前記医薬品製剤が、経口投与、並びに、静脈内の、筋肉内の、腹腔内注射、体内移植、直腸投与、及び経皮投与から成る群より選択される経路を介する非経口投与に適していることを特徴とする医薬品製剤。
【請求項１６２】
請求項152の医薬品製剤であって、放出遅延機構を有する非経口又は経口投与製剤であることを特徴とする医薬品製剤。
【請求項１６３】
少なくとも1のPEGポリマーに対して結合している単一可変ドメインを含み、ペプシン、トリプシン、エラスターゼ、キモトリプシン及びカルボキシペプチダーゼから成る群より選択されるプロテアーゼによる抗体単一可変ドメイン又は多量体ドメインの分解を減らす方法。
【請求項１６４】
請求項159の方法であって、前記分解が、動物の胃内における減少であることを特徴とする方法。
【請求項１６５】
請求項159の方法であって、該分解が、in vitroにおいて、pH2.0で30分間ペプシンに曝した場合の抗体単一可変ドメインの減少が10％未満であり、in vitroにおいて、pH8.0で30分間トリプシン、エラスターゼ、キモトリプシン及びカルボキシペプチダーゼに曝した場合の抗体単一可変ドメインの減少が10％未満であることを特徴とする方法。
【請求項１】
１以上の抗体単一可変ドメインを含むPEGに結合しているポリペプチドであって、少なくとも24kDaの流体力学的サイズ及び少なくとも1.3時間の半減期を有することを特徴とし、各可変ドメインが抗原結合部位を有し、かつ、各可変ドメインがポリペプチド中の単一の抗体可変ドメインとして抗原に結合することを特徴とするPEGに結合しているポリペプチド。
【請求項２】
１以上の抗体単一可変ドメインを含むPEGに結合しているポリペプチドであって、200kDaの流体力学的サイズ及び20から60kDaのトータルPEGサイズを有し、各可変ドメインが、抗原結合部位を有し、及び、各可変ドメインがポリペプチド中の単一の抗体可変ドメインとして抗原に結合することを特徴とするPEGに結合しているポリペプチド。
【請求項３】
すくなくとも24kDaの流体力学的サイズを有する抗体単一可変ドメインのPEGに結合している多量体であって、20から60kDaの総PEGサイズを有しすることを特徴とし、各可変ドメインが、抗原結合部位を有し及び各可変ドメインがポリペプチド中の単一の抗体単一可変ドメインとして抗原に結合することを特徴とするPEGに結合しているポリペプチド。
【請求項４】
請求項1又は2のPEGに結合しているポリペプチドであって、前記PEGに結合しているポリペプチドが、PEGに結合していない同じポリペプチドに対して少なくとも90%の活性を保持していることを特徴とし、該活性は標的リガンドに対するPEGに結合しているポリペプチド又はPEGに結合していないポリペプチドの親和性により測定することを特徴とするポリペプチド。
【請求項５】
請求項1又は2のPEGに結合しているポリペプチドであって、前記各可変ドメインがユニバーサルフレームワークを含むことを特徴とするポリペプチド。
【請求項６】
請求項5のPEGに結合しているポリペプチドであって、各可変ドメインが、DP47、DP45及びDP38から成る群より選択されるＶＨフレームワーク、又は、DPK9であるVLフレームワークを含むことを特徴とするポリペプチド。
【請求項７】
TNFαに対して特異的な抗原結合性を有するPEGに結合しているポリペプチドであって、前記ポリペプチドが1以上の抗体単一可変ドメインを有し、個々の可変ドメインがTNFα結合部位を有していることを特徴とし、このポリペプチドが、少なくとも200kDaの流体力学的サイズ及び20から60kDaの総PEGサイズを有することを特徴とするポリペプチド。
【請求項８】
請求項1又は2のPEGに結合しているポリペプチドであって、前記ポリペプチドがTNFα特異性を有することを特徴とするポリペプチド。
【請求項９】
請求項7のPEGに結合しているポリペプチドであって、前記ポリペプチドが、表面プラスモン共鳴法の測定により、50nMから20pMの解離定数(Kd)及び5x10-１から1x10-7s-1のKoffでヒトTNFαから解離することを特徴とするPEGに結合しているポリペプチド。
【請求項１０】
請求項7のPEGに結合しているポリペプチドであって、該ポリペプチドが、基準となる細胞アッセイにおいて、500nMから50pMのND50でヒトTNFαを中和することを特徴とするポリペプチド。
【請求項１１】
請求項7のユニバーサルフレームワークを含むPEGに結合しているポリペプチドであって、個々の可変ドメインが、DP47、DP45及びDP38から成る群より選択されるVHフレームワークを含み、及び/又は、VLフレームワークがDPK9であることを特徴とするポリペプチド。
【請求項１２】
少なくとも1.3の半減期を有するポリマーに結合している抗体単一可変ドメインであって、前記ポリマーが抗体単一可変ドメインのシステイン又はリジン残基の位置で結合していることを特徴とするポリマーに結合している抗体単一可変ドメイン。
【請求項１３】
請求項12のポリマーに結合している抗体単一可変ドメインであって、前記ポリマーに結合している抗体単一可変ドメインが少なくとも24kDaの流体力学的サイズを有することを特徴とするポリマーに結合している抗体単一可変ドメイン。
【請求項１４】
請求項12のポリマーに結合している抗体単一可変ドメインであって、前記システイン又はリジン残基が、前記抗体単一可変ドメインの予め決められた位置にあることを特徴とするポリマーに結合している抗体単一可変ドメイン。
【請求項１５】
請求項12のポリマーに結合している抗体単一可変ドメインであって、前記システイン又はリジン残基が、前記抗体単一可変ドメインのC末端又はN末端に存在していることを特徴とするポリマーに結合している抗体単一可変ドメイン。
【請求項１６】
請求項12のポリマーに結合している抗体単一可変ドメインであって、前記ポリマーが抗体単一可変ドメインのC末端又はN末端にあるシステイン又はリジン以外のシステイン又はリジンと結合していることを特徴とするポリマーに結合している抗体単一可変ドメイン。
【請求項１７】
請求項12のポリマーに結合している抗体単一可変ドメインであって、前記ポリマーが、C末端及び/又はN末端から少なくとも2残査離れた位置にあるシステイン又はリジンの位置で抗体単一可変ドメインと結合していることを特徴とするポリマーに結合している抗体単一可変ドメイン。
【請求項１８】
請求項12のポリマーに結合している抗体単一可変ドメインであって、前記ポリマーが、Gln13、Pro41又はLeu115から成る群より選択される位置で置換するシステイン又はリジン残査を含む重鎖可変ドメインに結合していることを特徴とするポリマーに結合している抗体単一可変ドメイン。
【請求項１９】
請求項12のポリマーに結合している抗体単一可変ドメインであって、前記抗体単一可変ドメインが、C末端のヒンジ領域を含むことを特徴とし、前記ポリマーが、前記ヒンジ領域に結合することを特徴とするポリマーに結合している抗体単一可変ドメイン。
【請求項２０】
請求項12のポリマーに結合している抗体単一可変ドメインであって、前記ポリマーが、直鎖又は分岐鎖のポリ(エチレングリコール)(PEG)、ポリ(プロピレングリコール)、ポリ(ビニルアルコール)、メトキシ(ポリエチレングリコール)、ラクトース、アミロース、デキルトラン及びグリコゲンから成る群より選択されることを特徴とするポリマーに結合している抗体単一可変ドメイン。
【請求項２１】
請求項20のポリマーに結合している抗体単一可変ドメインであって、前記ポリマーがPEGであることを特徴とするポリマーに結合している抗体単一可変ドメイン。
【請求項２２】
請求項12のポリマーに結合している抗体単一可変ドメインであって、前記抗体単一可変ドメインの1以上の所定の残査がシステイン又はリジン残査に置換されていることを特徴とするポリマーに結合している抗体単一可変ドメイン。
【請求項２３】
請求項12のポリマーに結合している抗体単一可変ドメインであって、前記抗体単一可変ドメインが重鎖可変ドメインであることを特徴とするポリマーに結合している抗体単一可変ドメイン。
【請求項２４】
請求項12のポリマーに結合している抗体単一可変ドメインであって、前記抗体単一可変ドメインが軽鎖可変ドメイン(VL)であることを特徴とするポリマーに結合している抗体単一可変ドメイン。
【請求項２５】
請求項12のポリマーに結合している抗体単一可変ドメインであって、半減期が1.3及び170時間の間であることを特徴とするポリマーに結合している抗体単一可変ドメイン。
【請求項２６】
請求項12のポリマーに結合している抗体単一可変ドメインであって、前記ポリマーに結合している抗体単一可変ドメインが、0.25から6時間の間のt1/2αを有することを特徴とするポリマーに結合している抗体単一可変ドメイン。
【請求項２７】
請求項12のポリマーに結合している抗体単一可変ドメインであって、前記ポリマーに結合している抗体単一可変ドメインが、2から40時間の間のt1/2βを有することを特徴とするポリマーに結合している抗体単一可変ドメイン。
【請求項２８】
少なくとも1.3時間の半減期を有するPEGに結合している抗体単一可変ドメインの多量体であって、前記PEGが、前記多量体のシステイン又はリジン残査に結合していることを特徴とし、各可変ドメインが抗原結合部位を有し、各可変ドメインがポリペプチドの中の抗体単一可変ドメインとして抗原に結合することを特徴とするPEGに結合している抗体単一可変ドメイン。
【請求項２９】
請求項28のPEGに結合している多量体であって、前記多量体は、抗体単一可変ドメインの二量体であることを特徴とするPEGに結合している多量体。
【請求項３０】
請求項28のPEGに結合している多量体であって、前記多量体が抗体単一可変ドメインの三量体であることを特徴とするPEGに結合している多量体。
【請求項３１】
請求項28のPEGに結合している多量体であって、前記多量体が抗体単一可変ドメインの四量体であることを特徴とするPEGに結合している多量体。
【請求項３２】
請求項28のPEGに結合している多量体であって、前記システイン又はリジン残査が、前記多量体に含まれる抗体単一可変ドメインのC末端又はN末端にあることを特徴とするPEGに結合している多量体。
【請求項３３】
請求項28のPEGに結合している多量体であって、少なくとも1の抗体単一可変ドメインの1以上の所定の残査が、システイン又はリジン残査に変異されていることを特徴とし、前記PEGが、前記変異残査に結合していることを特徴とするPEGに結合している多量体。
【請求項３４】
請求項33のPEGに結合している多量体であって、前記変異残査が、前記抗体単一可変ドメインのC末端又はN末端のいずれにも存在しないことを特徴とするPEGに結合している多量体。
【請求項３５】
請求項33のPEGに結合している多量体であって、前記抗体単一可変ドメインポリペプチドが、重鎖可変ドメインであることを特徴とし、前記変異される残査が、Gln13、Pro41又はLeu115から成る群より選択されることを特徴とするPEGに結合している多量体。
【請求項３６】
請求項33のPEGに結合している多量体であって、前記PEGがC末端及び/又はN末端から少なくとも2残査離れたところに位置するシステイン又はリジン残査で、前記抗体単一可変ドメインと結合していることを特徴とするPEGに結合している多量体。
【請求項３７】
請求項28のPEGに結合している多量体であって、前記半減期が1.3から170時間の間であることを特徴とするPEGに結合している多量体。
【請求項３８】
請求項28のPEGに結合している多量体であって、前記PEGに結合している抗体単一可変ドメインが、0.25から5.8時間の間のt1/2αを有することを特徴とするPEGに結合している多量体。
【請求項３９】
請求項28のPEGに結合している多量体であって、前記PEGに結合している抗体単一可変ドメインが、2から40時間の間のt1/2αを有することを特徴とするPEGに結合している多量体。
【請求項４０】
3以上の抗体単一可変ドメインを含むPEGに結合している抗体単一可変ドメインの多量体であって、該可変ドメインが抗原結合部位を有し、個々の可変ドメインが単一の抗体可変ドメインとして抗原に結合することを特徴とするPEGに結合している多量体。
【請求項４１】
請求項40のPEGに結合している多量体であって、前記多量体が少なくとも24kDaの流体力学的サイズを有することを特徴とするPEGに結合している多量体。
【請求項４２】
請求項40のPEGに結合している多量体であって、前記多量体が少なくとも200kDaの流体力学的サイズを有することを特徴とするPEGに結合している多量体。
【請求項４３】
請求項40のPEGに結合している多量体であって、前記多量体が、3、4、又は8の抗体単一可変ドメインを有することを特徴とするPEGに結合している多量体。
【請求項４４】
請求項40のPEGに結合している多量体であって、少なくとも1.3時間の半減期を有することを特徴とするPEGに結合している多量体。
【請求項４５】
請求項40のPEGに結合している多量体であって、前記半減期が1.3から170時間の間であることを特徴とするPEGに結合している多量体。
【請求項４６】
請求項40のPEGに結合している多量体であって、前記PEGに結合している抗体単一可変ドメインが、0.55から6時間のt1/2αを有することを特徴とするPEGに結合している多量体。
【請求項４７】
請求項40のEPGに結合している多量体であって、前記PEGに結合している抗体単一可変ドメインが、2から40時間のt1/2βを有することを特徴とするPEGに結合している多量体。
【請求項４８】
請求項28又は40に記載のPEGに結合している多量体であって、前記PEGが、多量体の可変ドメインの所定の位置にあるシステイン又はリジン残査と、前記抗体単一可変ドメインの三量体又は四量体が結合していることを特徴とするPEGに結合している多量体。
【請求項４９】
請求項48のPEGに結合している多量体であって、前記システイン又はリジン残査が、前記多量体の抗体単一可変ドメインのC末端又はN末端に存在することを特徴とするPEGに結合している多量体。
【請求項５０】
請求項48のPEGに結合している多量体であって、前記抗体単一可変ドメインの1以上の所定の残査が、システイン又はリジンに変異されていることを特徴とし、前記PEGが、前記変異残査に結合することを特徴とする多量体。
【請求項５１】
請求項50のPEGに結合している多量体であって、前記変異残査が、前記抗体単一可変ドメインのC末端又はN末端には存在しないことを特徴とする多量体。
【請求項５２】
請求項51のPEGに結合している多量体であって、前記抗体単一可変ドメインが、重鎖可変ドメインであることを特徴とし、前記変異残査が、Gln13、Pro41、又はLeu115から成る群より選択されることを特徴とするPEGに結合している多量体。
【請求項５３】
請求項51のPEGに結合している多量体であって、前記PEGが前記抗体単一可変ドメインのC又はN末端から少なくとも2残査離れたところに位置するシステイン又はリジン残査に結合していることを特徴とする多量体。
【請求項５４】
抗原結合部位を有するポリペプチドであって、該ポリペプチドが、1又は2の抗体の可変ドメインを含み、該ポリペプチドが、少なくとも24kDaの流体力学的サイズ及び少なくとも1.3時間の半減期を有することを特徴とし、各可変ドメインが、抗原結合部位を有し、各可変ドメインが、ポリペプチドの中の1の抗体単一可変ドメインとして抗原に結合することを特徴とする抗原結合部位を有するポリペプチド。
【請求項５５】
TNFαに特異的な結合部位を含むポリペプチドであって、前記ポリペプチドが、1又は2の抗体可変ドメインを含み、該ポリペプチドが、少なくとも24kDaの流体力学的サイズ及び少なくとも1.3時間の半減期を有することを特徴とするTNFαに特異的な結合部位を含むポリペプチド。
【請求項５６】
請求項55のポリペプチドであって、各可変ドメインが、抗原結合部位を有し、各可変ドメインが、ポリペプチドの中の抗体単一可変ドメインとして抗原に結合することを特徴とするポリペプチド。
【請求項５７】
請求項54又は55のポリペプチドであって、前記ポリペプチドが、20から60kDaの間のサイズを有するPEGポリマーに結合することを特徴とするポリペプチド。
【請求項５８】
請求項54又は55のポリペプチドであって、前記ポリペプチドが少なくとも200kDaの流体力学的サイズを有することを特徴とするポリペプチド。
【請求項５９】
請求項54又は55のポリペプチドであって、前記半減期が1.3から170時間の間であることを特徴とするポリペプチド。
【請求項６０】
請求項54又は55のポリペプチドであって、前記ポリペプチドが0.25から6時間の間のt1/2αを有することを特徴とするポリペプチド。
【請求項６１】
請求項54又は55のポリペプチドであって、前記ポリペプチドが2から40時間の間のt1/2βを有することを特徴とするポリペプチド。
【請求項６２】
請求項54又は55のポリペプチドであって、該ポリペプチドは、可変ドメインのシステイン又はリジンの位置で、PEG部分と結合する可変ドメインを有することを特徴とするポリペプチド。
【請求項６３】
請求項62のポリペプチドであって、前記システイン又はリジン残査が、前記抗体単一可変ドメインのC末端又はN末端にあることを特徴とするポリペプチド。
【請求項６４】
請求項62のポリペプチドであって、前記可変ドメインの1以上の所定の残査が、システイン又はリジン残基に変異され、前記PEGが、前記変異残査に結合することを特徴とするポリペプチド。
【請求項６５】
請求項64のポリペプチドであって、前記変異残査が、前記抗体単一可変ドメインのC末端又はN末端には存在しないことを特徴とするポリペプチド。
【請求項６６】
請求項65のポリペプチドであって、前記可変ドメインが重鎖可変ドメインであることを特徴とし、前記変異される残査が、Gln13、Pro41、又はLeu115から成る群より選択されることを特徴とするポリペプチド。
【請求項６７】
抗体単一可変ドメインのホモ多量体であって、前記ホモ多量体が、少なくとも24kDaの流体力学的サイズ及び少なくとも1.3時間の半減期を有することを特徴とする抗体単一可変ドメインのホモ多量体。
【請求項６８】
請求項67のホモ多量体であって、各可変ドメインが抗原結合部位を有し、各可変ドメインが該ホモ多量体の中の1の抗体単一可変ドメインとして抗原に結合することを特徴とするホモ多量体。
【請求項６９】
請求項67のホモ多量体であって、前記ホモ多量体が少なくとも1のPEGポリマーに結合していることを特徴とするホモ多量体。
【請求項７０】
請求項67のホモ多量体であって、前記半減期が1.3時間から170時間の間であることを特徴とするホモ多量体。
【請求項７１】
請求項67のホモ多量体であって、0.25から6時間の間のt1/2αを有することを特徴とするホモ多量体。
【請求項７２】
請求項67のホモ多量体であって、1から40時間の間のt1/2βを有することを特徴とするホモ多量体。
【請求項７３】
請求項67のホモ多量体であって、前記ホモ多量体の個々の抗体単一可変ドメインが、重鎖可変ドメイン又はVLのいずれかを含むことを特徴とするホモ多量体。
【請求項７４】
請求項67のホモ多量体であって、前記ホモ多量体の個々の抗体単一可変ドメインが、前記抗体単一可変ドメインのC末端に付加的なシステイン残査を含むように配列されていることを特徴とするホモ多量体。
【請求項７５】
請求項67の抗体ホモ多量体であって、前記ホモ多量体の抗体単一可変ドメインが、ペプチドリンカーによりお互いに結合されていることを特徴とする抗体ホモ多量体。
【請求項７６】
請求項67のホモ多量体であって、前記ホモ多量体が第一及び第二抗体単一可変ドメインのみを含むことを特徴とし、前記ホモ二量体の第一の抗体単一可変ドメインが、抗体単一可変ドメイン及び重鎖定常領域(CH1)を含むことを特徴とし、前記ホモ二量体の抗体単一可変ドメインが、抗体単一可変ドメイン及び軽鎖定常領域(CL)を含むことを特徴とするホモ多量体。
【請求項７７】
請求項67のホモ多量体であって、前記ホモ多量体が、TNFαに対して特異性を有することを特徴とするホモ多量体。
【請求項７８】
請求項67のホモ多量体であって、表面プラスモン共鳴法により測定した場合、50nMから20pMの解離定数(Kd)及び5ｘ10-7から1ｘ10-7ｓ-1のKoff速度定数でヒトTNFαから解離することを特徴とするホモ多量体。
【請求項７９】
請求項67のホモ多量体であって、このホモ多量体は、基準となる細胞アッセイにおいて500nMから50pMのND50でヒトTNFαを中和することを特徴とするホモ多量体。
【請求項８０】
請求項67のホモ多量体であって、前記ホモ多量体の個々の抗体単一可変ドメインは、TNFαに結合することを特徴とするホモ多量体。
【請求項８１】
請求項80のホモ多量体であって、表面プラスモン共鳴により測定した場合、ホモ多量体の個々の抗体単一可変ドメインが、50nMから20pMの解離定数(Kd)及び5ｘ10-7から1ｘ10-7ｓ-1のKoff速度定数でヒトTNFαから解離することを特徴とするホモ多量体。
【請求項８２】
請求項81のホモ多量体であって、前記ホモ多量体の抗体単一可変ドメインは、基準となる細胞アッセイにおいて500nMから50pMのND50でヒトTNFαを中和することを特徴とするホモ多量体。
【請求項８３】
抗体単一可変ドメインのヘテロ多量体であって、このヘテロ多量体は、少なくとも24kDaの流体力学的サイズ及び1.3時間の半減期を有することを特徴とし、各可変ドメインは、抗原結合サイトを含み、各抗体単一可変ドメインは、ヘテロ多量体中の1の抗体単一可変ドメインとして抗原に結合することを特徴とするへテロ多量体。
【請求項８４】
請求項83のヘテロ多量体であって、前記へテロ多量体が少なくとも1のPEGポリマーに結合していることを特徴とするへテロ多量体。
【請求項８５】
請求項83のヘテロ多量体であって、前記半減期が、1.3時間から170時間の間であることを特徴とするへテロ多量体。
【請求項８６】
請求項83のヘテロ多量体であて、前記へテロ多量体が、0.25から6時間の間のt1/2αを有することを特徴とするへテロ多量体。
【請求項８７】
請求項83のヘテロ多量体であて、前記へテロ多量体が、2から40時間の間のt1/2βを有することを特徴とするへテロ多量体。
【請求項８８】
請求項83のヘテロ多量体であって、前記へテロ多量体の個々の抗体単一可変ドメインが重鎖可変ドメイン又はVLのいずれかを含むことを特徴とするへテロ多量体。
【請求項８９】
請求項83のヘテロ多量体であって、前記へテロ多量体の個々の抗体単一可変ドメインが、前記抗体単一可変ドメインのC末端又はN末端に付加的なシステイン残査を含むように配列されていることを特徴とするへテロ多量体。
【請求項９０】
請求項83のヘテロ多量体であって、前記へテロ多量体の抗体単一可変ドメインが、ペプチドリンカーで互いに結合されていることを特徴とするへテロ多量体。
【請求項９１】
請求項83のヘテロ多量体であって、前記へテロ多量体が第一及び第二の抗体単一可変ドメインのみを含むことを特徴とし、前記へテロ二量体の第一の抗体単一可変ドメインが、抗体単一可変ドメイン及び重鎖定常領域(CH1)を含むことを特徴とし、前記へテロ二量体の抗体単一可変ドメインが、抗体単一可変ドメイン及び軽鎖定常領域(CL)を含むことを特徴とするへテロ多量体。
【請求項９２】
請求項83のヘテロ多量体であって、前記へテロ多量体が、TNFαに対して特異性を有することを特徴とするへテロ多量体。
【請求項９３】
請求項83のヘテロ多量体であって、表面プラスモン共鳴法により測定した場合、50nMから20pMの解離定数(Kd)及び5ｘ10-7から1ｘ10-7ｓ-1のKoff速度定数でヒトTNFαから解離することを特徴とするへテロ多量体。
【請求項９４】
請求項93のヘテロ多量体であって、該へテロ多量体は、基準となる細胞アッセイにおいて500nMから50pMのND50でヒトTNFαを中和することを特徴とするへテロ多量体。
【請求項９５】
請求項83のヘテロ多量体であって、前記へテロ多量体の抗体単一可変ドメインがTNFαに特性を有することを特徴とするへテロ多量体。
【請求項９６】
請求項95のヘテロ多量体であって、前記へテロ多量体の個々の抗体単一可変ドメインは、表面プラスモン共鳴法により測定した場合、50nMから20pMの解離定数(Kd)及び5ｘ10-7から1ｘ10-7ｓ-1のKoff速度定数でヒトTNFαから解離することを特徴とするへテロ多量体。
【請求項９７】
請求項96のヘテロ多量体であって、前記へテロ多量体の個々の抗体単一可変ドメインは、基準となる細胞アッセイにおいて500nMから50pMのND50でヒトTNFαを中和することを特徴とするへテロ多量体。
【請求項９８】
同じ抗体単一可変ドメインを有するPEGに結合していない抗体単一可変ドメインに匹敵する活性を保持し、標的リガンドに対して特異性を有するPEGに結合した抗体単一可変ドメインであって、該活性は、標的リガンドに対してPEGに結合している抗体単一可変ドメイン又はPEGに結合していない抗体単一可変ドメインの親和性により測定されることを特徴とする。PEGに結合している抗体単一可変ドメイン。
【請求項９９】
請求項98のPEGに結合している抗体単一可変ドメインであって、前記PEGに結合している抗体単一可変ドメインが、PEGに結合していない同じ抗体単一可変ドメインに対して少なくとも90％の活性を有することを特徴とする、PEGに結合している抗体単一可変ドメイン。
【請求項１００】
請求項98のPEGに結合している抗体単一可変ドメインであって、前記活性が、PEGに結合している抗体単一可変ドメインのTNFαに対する結合として、表面プラスモン共鳴法により測定されることを特徴とする、PEGに結合している抗体単一可変ドメイン。
【請求項１０１】
請求項100のPEGに結合している抗体単一可変ドメインであって、前記PEGに結合している抗体単一可変ドメインが、表面プラスモン共鳴法により測定した場合、50nMから20pMの解離定数(Kd)及び5ｘ10-7から1ｘ10-7ｓ-1のKoff速度定数でヒトTNFαから解離することを特徴とするPEGに結合している抗体単一可変ドメイン。
【請求項１０２】
請求項98のPEG結合している抗体単一可変ドメインであって、前記活性が、基準となる細胞アッセイにおいてヒトTNFα又はTNFレセプター1を中和する能力として測定されることを特徴とするPEGに結合している抗体単一可変ドメイン。
【請求項１０３】
請求項102のPEGに結合している抗体単一可変ドメインであって、前記PEGに結合している抗体単一可変ドメインが、基準となる細胞アッセイにおいて500nMから50pMのND50でヒトTNFαを中和することを特徴とするPEGに結合している抗体単一可変ドメイン。
【請求項１０４】
請求項103のPEGに結合している抗体単一可変ドメインであって、前記PEGに結合している抗体単一可変ドメインのIC50又はND50が、前記PEGに結合している抗体単一可変ドメインと同じ抗体単一可変ドメインを有するPEGに結合していない抗体単一可変ドメインのIC50又はND50よりも10％未満大きいことを特徴とする、PEGに結合している抗体単一可変ドメイン。
【請求項１０５】
80nMから30pMのKdで標的抗原に特異的に結合するPEGに結合している抗体単一可変ドメイン。
【請求項１０６】
3nMから30pMのKdで標的抗原に特異的に結合するPEGに結合している抗体単一可変ドメイン。
【請求項１０７】
100pMから30pMのKdで標的抗原に特異的に結合するPEGに結合している抗体単一可変ドメイン。
【請求項１０８】
請求項105のPEGに結合している抗体単一可変ドメインであって、前記PEGに結合している抗体単一可変ドメインは表面プラスモン共鳴法により測定した場合、50nMから20pMの解離定数(Kd)及び5ｘ10-7から1ｘ10-7ｓ-1のKoff速度定数でヒトTNFαに結合することを特徴とするPEGに結合している抗体単一可変ドメイン。
【請求項１０９】
請求項105の抗体単一可変ドメインであって、前記結合が基準となる細胞アッセイにおいてヒトTNFα又はTNFレセプター1を中和する能力として測定されることを特徴とするPEGに結合している抗体単一可変ドメイン。
【請求項１１０】
請求項109のPEGに結合している抗体単一可変ドメインであって、PEG結合している抗体単一可変ドメインは、基準となる細胞アッセイにおいて500nMから50pMのND50でヒトTNFα又はTNFレセプター1を中和することを特徴とするPEGに結合している抗体単一可変ドメイン。
【請求項１１１】
同じ抗体単一可変ドメインを有するPEGに結合していない抗体単一可変ドメインホモ多量体に匹敵する活性を保持して、標的リガンドに対して特異性を有するPEGに結合した抗体単一可変ドメインホモ多量体であって、該活性が、標的リガンドに対する、PEGに結合している抗体単一可変ドメインホモ多量体又はPEGに結合していない抗体単一可変ドメインホモ多量体の親和性により測定されることを特徴とするPEGに結合した抗体単一可変ドメインホモ多量体。
【請求項１１２】
請求項111のPEGに結合している抗体単一可変ドメインのホモ多量体であって、前記PEGに結合している抗体単一可変ドメインが、PEGに結合していない同じ抗体単一可変ドメインホモ多量体に対して90％の活性を保持していることを特徴とするPEGに結合している抗体単一可変ドメインのホモ多量体。
【請求項１１３】
請求項111のPEGに結合している抗体単一可変ドメインホモ多量体であって、前記活性が、TNFαに対するPEGに結合している抗体単一可変ドメインホモ多量体の結合として測定されることを特徴とするPEGに結合している抗体単一可変ドメインホモ多量体。
【請求項１１４】
請求項111のPEGに結合している抗体単一可変ドメインのホモ多量体であって、前記活性が、TNFαに反応して生産される細胞毒性を抑制する能力として測定されることを特徴とするPEGに結合している抗体単一可変ドメインのホモ多量体。
【請求項１１５】
請求項114のPEGに結合している抗体単一可変ドメインのホモ多量体であって、前記PEGに結合している抗体単一可変ドメインのIC50が、PEGに結合していない抗体単一可変ドメインホモ多量体のIC50よりもわずかに10％大きいことを特徴とするPEGに結合している抗体単一可変ドメインのホモ多量体。
【請求項１１６】
請求項111のPEGに結合している抗体単一可変ドメインのホモ多量体であって、前記ホモ多量体の各メンバーが、重鎖可変ドメイン又はVLのいずれかを含むことを特徴とするPEGに結合している抗体単一可変ドメインのホモ多量体。
【請求項１１７】
請求項111のPEGに結合している抗体のホモ多量体であって、該ホモ多量体が、抗体単一可変ドメインのC末端又はN末端に付加的なシステイン残基を含むように配列されている抗体単一可変ドメインを含むことを特徴とするPEGに結合している抗体のホモ多量体。
【請求項１１８】
請求項111の抗体のホモ多量体であって、前記ホモ多量体のメンバーが、ペプチドリンカーにより結合されていることを特徴とする抗体のホモ多量体。
【請求項１１９】
請求項111の抗体のホモ多量体であって、前記ホモ多量体が、第一及び第二のメンバーのみを含み、前記ホモ二量体の前記第一メンバーは抗体単一可変ドメイン及び重鎖(CH1)定常領域を含み、前記ホモ二量体の第二メンバーは抗体単一可変ドメイン及び軽鎖(CL)定常領域を含むことを特徴とする抗体のホモ多量体。
【請求項１２０】
同じ抗体単一可変ドメインを有するPEGに結合していない抗体単一可変ドメインへテロ多量体に匹敵する活性を保持し、標的リガンドに対して特異性を有するPEGに結合した抗体単一可変ドメインへテロ多量体であって、該活性が、標的リガンドに対する、PEGに結合している抗体単一可変ドメインへテロ多量体又はPEGに結合していない抗体単一可変ドメインへテロ多量体の親和性により測定されることを特徴とするPEGに結合している抗体単一可変ドメインへテロ多量体。
【請求項１２１】
請求項120のPEGに結合している抗体単一可変ドメインのヘテロ多量体であって、前記PEGに結合している抗体単一可変ドメインはPEGに結合していない同じ抗体単一可変ドメインへテロ多量体に対して90％の活性を保持していることを特徴とするPEGに結合している抗体単一可変ドメインのヘテロ多量体。
【請求項１２２】
請求項120のPEGに結合している抗体単一可変ドメインのヘテロ多量体であって、該活性が、TNFαに対するPEGに結合している抗体単一可変ドメインへテロ多量体の結合として測定されることを特徴とするPEGに結合している抗体単一可変ドメインのヘテロ多量体。
【請求項１２３】
請求項120のPEGに結合している抗体単一可変ドメインのへテロ多量体であって、前記活性が、PEGに結合している抗体単一可変ドメインのヘテロ多量体のTNFαに反応する細胞の細胞毒性を抑制する能力として測定されることを特徴とするPEGに結合している抗体単一可変ドメインのへテロ多量体。
【請求項１２４】
請求項120のPEGに結合している抗体単一可変ドメインのヘテロ多量体であって、前記PEGに結合している抗体単一可変ドメインのIC50が、PEGに結合している抗体単一可変ドメインと同じ抗体単一可変ドメインを有するPEGに結合していない抗体単一可変ドメインへテロ多量体のIC50よりも10％未満大きいことを特徴とするPEGに結合している抗体単一可変ドメインのヘテロ多量体。
【請求項１２５】
請求項120のPEGに結合している抗体単一可変ドメインのヘテロ多量体であって、前記へテロ多量体の個々のメンバーは、重鎖可変ドメイン又はVLのいずれかを含んでいることを特徴とするPEGに結合している抗体単一可変ドメインのヘテロ多量体。
【請求項１２６】
請求項120のPEGに結合している抗体のへテロ多量体であって、前記抗体単一可変ドメインが、抗体単一可変ドメインのC末端又はN末端に付加的なシステイン残基を含むように配列されていることを特徴とするPEGに結合しているへテロ多量体。
【請求項１２７】
請求項120のPEGに結合している抗体のヘテロ多量体であって、前記へテロ多量体のメンバーは、ペプチドリンカーによりお互いに結合されていることを特徴とするPEGに結合している抗体のヘテロ多量体。
【請求項１２８】
請求項120のPEGに結合している抗体のヘテロ多量体であって、前記多量体が、第一及び第二メンバーのみを含み、前記へテロ二量体の前記第一メンバーは抗体単一可変ドメイン及び重鎖定常領域(CH1)を含み、第二メンバーは抗体単一可変ドメイン及び軽鎖定常領域(CL)を含むことを特徴とするPEGに結合している抗体のヘテロ多量体。
【請求項１２９】
請求項111のPEGに結合している抗体のホモ多量体又は請求項120のPEGに結合している抗体のヘテロ多量体であって、前記ホモ又はへテロ多量体が、二量体、三量体又は四量体から成る群より選択されることを特徴とするPEGに結合している抗体のホモ又はへテロ多量体。
【請求項１３０】
請求項111のPEGに結合している抗体のホモ多量体又は請求項120のPEGに結合している抗体のヘテロ多量体であって、前記ホモ-又はへテロ-多量体のPEG部分は、分岐鎖PEGであることを特徴とするPEGに結合しているホモ-又はへテロ-多量体。
【請求項１３１】
80nMから30pMのKdで標的抗原に特異的に結合する抗体単一可変ドメインのPEGに結合しているホモ多量体。
【請求項１３２】
請求項131のPEGに結合しているホモ多量体であって、前記PEGに結合しているホモ多量体は表面プラスモン共鳴法により測定した場合、50nMから20pMの解離定数(Kd)及び5ｘ10-7から1ｘ10-7ｓ-1のKoff速度定数でTNFαに結合することを特徴とするPEGに結合しているホモ多量体。
【請求項１３３】
請求項131のPEGに結合しているホモ多量体であって、該結合が、基準となる細胞アッセイにおいて前記PEG結合されたホモ多量体がヒトTNFα又はTNFレセプター1を中和する能力として測定されることを特徴とするPEGに結合しているホモ多量体。
【請求項１３４】
請求項133のPEGに結合しているホモ多量体であって、前記PEGに結合しているホモ多量体は、基準となる細胞アッセイにおいて500nMから50pMのND50でヒトTNFα又はTNFレセプター1を中和することを特徴とするPEGに結合しているホモ多量体。
【請求項１３５】
3nMから30pMのKdで標的抗原に特異的に結合する抗体単一可変ドメインのPEGに結合しているホモ多量体。
【請求項１３６】
100pMから30pMのKdで標的抗原に特異的に結合する抗体単一可変ドメインのPEGに結合しているホモ多量体。
【請求項１３７】
80nMから30pMのKdで標的抗原に特異的に結合する抗体単一可変ドメインのPEGに結合しているへテロ多量体。
【請求項１３８】
3nMから30pMのKdで標的抗原に特異的に結合する抗体単一可変ドメインのPEGに結合しているへテロ多量体。
【請求項１３９】
100pMから30pMのKdで標的抗原に特異的に結合する抗体単一可変ドメインのPEGに結合しているへテロ多量体。
【請求項１４０】
PEG分子に結合している前記抗体単一可変ドメインの中の所定の位置にある少なくとも1の溶媒可接性リジン残基を含む抗体単一可変ドメイン。
【請求項１４１】
請求項140の抗体単一可変ドメインであって、前記PEGが、PEGに結合しているN-ヒドロキシスクシニミド活性エステルの形態をしている前記溶媒可接性リジンに結合していることを特徴とする抗体単一可変ドメイン。
【請求項１４２】
請求項141の抗体単一可変ドメインであって、該N-ヒドロキシスクシニミド活性エステルが、PEG-O-CH2CH2CH2-CO2-NHS、PEG-O-CH2-NHS、PEG-O-CH2CH2-CO2-NHS、PEG-S-CH2CH2-CO-NHS、PEG-O2CNH-CH(R)-CO2-NHS、PEG-NHCO-CH2CH2-CO-NHS及びPEG-O-CH2-CO2-NHSからなる群より選択され、この式において、R が(CH2) 4NHCO2 (mPEG)であることを特徴とする抗体単一可変ドメイン。
【請求項１４３】
請求項140の抗体単一可変ドメインであって、該PEGが分岐鎖PEGであることを特徴とする抗体単一可変ドメイン。
【請求項１４４】
抗体単一可変ドメインの多量体であって、前記多量体の個々のメンバーが少なくとも1のPEGに結合している溶媒可接性リジン残査を含むことを特徴とする抗体単一可変ドメインの多量体。
【請求項１４５】
請求項144の抗体単一可変ドメインの多量体であって、前記溶媒可接性リジン残基がGln13、Pro41又はLeu115からなる群より選択される1以上の残基を変異することにより得られることを特徴とする抗体単一可変ドメインの多量体。
【請求項１４６】
請求項144の抗体単一可変ドメインの多量体であって、前記多量体がホモ多量体であることを特徴とする抗体単一可変ドメインの多量体。
【請求項１４７】
請求項144の抗体単一可変ドメインの多量体であって、前記多量体がヘテロ多量体であることを特徴とする抗体単一可変ドメインの多量体。
【請求項１４８】
請求項144の抗体単一可変ドメイン多量体であって、前記多量体がヘテロ又はホモ三量体であることを特徴とする抗体単一可変ドメインの多量体。
【請求項１４９】
請求項144の抗体単一可変ドメインの多量体であって、前記多量体がホモ又はへテロ四量体であることを特徴とする抗体単一可変ドメインの多量体。
【請求項１５０】
抗体単一可変ドメインのホモ又はへテロの三量体又は四量体であって、PEGに結合する少なくとも1の溶媒可接性システイン残査を含むことを特徴とする抗体単一可変ドメインのホモ又はへテロの三量体又は四量体。
【請求項１５１】
請求項150の抗体単一可変ドメインであって、前記PEGがマレイミド、ビニルフスホン及びチオールから成る群より選択されるスルフヒドリル基選択試薬により溶媒可接性システインに結合されることを特徴とする抗体単一可変ドメイン。
【請求項１５２】
請求項150の抗体単一可変ドメインであって、この抗体単一可変ドメインが重鎖可変ドメインであり、前記溶媒可接性システイン残基がGln13、Pro41又はLeu115からなる群より選択される1以上の残基の変異により得られることを特徴とする抗体単一可変ドメイン。
【請求項１５３】
PEGに結合していない同じ抗体の単一可変領域ポリペプチドの半減期よりも少なくとも7倍高い半減期を有するPEGに結合している抗体の単一可変領域ポリペプチド。
【請求項１５４】
請求項153のPEGに結合している抗体単一可変ドメインポリペプチドであって、前記PEGに結合している抗体の可変領域が、少なくとも24kDaの流体力学的サイズを有することを特徴とするPEGに結合している抗体単一可変ドメインポリペプチド。
【請求項１５５】
請求項153のPEGに結合している抗体単一可変ドメインポリペプチドであって、前記PEGに結合している抗体の可変領域が、24kDaから500kDaの流体力学的サイズを有することを特徴とするPEGに結合している抗体単一可変ドメインポリペプチド。
【請求項１５６】
少なくとも1.3時間の半減期を有するPEGに結合している抗体単一可変ドメイン及び担体を含む医薬品製剤。
【請求項１５７】
少なくとも1.3時間の半減期及び少なくとも24kDaの流体力学的サイズを有するPEGに結合している抗体単一可変ドメイン及び担体を含む医薬品製剤。
【請求項１５８】
PEGに結合している抗体単一可変ドメインへテロ三量体、ホモ三量体、へテロ四量体又はホモ四量体を含む医薬品製剤であって、前記多量体の各可変ドメインが抗原結合サイトを有し、各可変ドメインが1の可変ドメインとして抗原に結合することを特徴とする医薬品製剤。
【請求項１５９】
PEGに結合している抗体単一可変ドメインを含む医薬品製剤であって、この前記PEGに結合している抗体単一可変ドメインは前記医薬品製剤を動物に投与した後該動物の胃において10％未満しか分解されていないことを特徴とする医薬品製剤。
【請求項１６０】
PEGに結合している抗体単一可変ドメインを含む医薬品製剤であって、前記PEGに結合している抗体単一可変ドメインは、in vitroにおいて、ペプシン、トリプシン、エラスターゼ、キモトリプシン及びカルボキシペプチダーゼから成る群より選択されるプロテアーゼに曝したときに10％までしか分解されないことを特徴とし、
前記プロテアーゼがペプシンの場合、前記PEGに結合している抗体単一可変ドメインはpＨ2.0で30分間ペプシンに曝したときには、10％未満しか分解されないことを特徴とし、
前記プロテアーゼがトリプシン、エラスターゼ、キモトリプシン又はカルボキシペプチダーゼである場合、前記PEGに結合している抗体単一可変ドメインは、トリプシン、エラスターゼ、キモトリプシン又はカルボキシペプチダーゼにpＨ8.0で30分間曝したときには、10％未満しか分解されないことを特徴とする医薬品製剤。
【請求項１６１】
請求項152の医薬品製剤であって、前記医薬品製剤が、経口投与、並びに、静脈内の、筋肉内の、腹腔内注射、体内移植、直腸投与、及び経皮投与から成る群より選択される経路を介する非経口投与に適していることを特徴とする医薬品製剤。
【請求項１６２】
請求項152の医薬品製剤であって、放出遅延機構を有する非経口又は経口投与製剤であることを特徴とする医薬品製剤。
【請求項１６３】
少なくとも1のPEGポリマーに対して結合している単一可変ドメインを含み、ペプシン、トリプシン、エラスターゼ、キモトリプシン及びカルボキシペプチダーゼから成る群より選択されるプロテアーゼによる抗体単一可変ドメイン又は多量体ドメインの分解を減らす方法。
【請求項１６４】
請求項159の方法であって、前記分解が、動物の胃内における減少であることを特徴とする方法。
【請求項１６５】
請求項159の方法であって、該分解が、in vitroにおいて、pH2.0で30分間ペプシンに曝した場合の抗体単一可変ドメインの減少が10％未満であり、in vitroにおいて、pH8.0で30分間トリプシン、エラスターゼ、キモトリプシン及びカルボキシペプチダーゼに曝した場合の抗体単一可変ドメインの減少が10％未満であることを特徴とする方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【公表番号】特表２００７−５１６１９５（Ｐ２００７−５１６１９５Ａ）
【公表日】平成１９年６月２１日（２００７．６．２１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５１８３３１（Ｐ２００６−５１８３３１）
【出願日】平成１６年６月３０日（２００４．６．３０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＧＢ２００４／００２８２９
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０８１０２６
【国際公開日】平成１６年９月２３日（２００４．９．２３）
【出願人】（５０２１９７０４６）ドマンティス リミテッド (47)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１９年６月２１日（２００７．６．２１）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年６月３０日（２００４．６．３０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＧＢ２００４／００２８２９
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０８１０２６
【国際公開日】平成１６年９月２３日（２００４．９．２３）
【出願人】（５０２１９７０４６）ドマンティス リミテッド (47)
【Ｆターム（参考）】
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