マクロラクトン誘導体
本発明は、微生物ＳＴ２０１１９６（ＤＳＭ１８８７０）により形成される、式（Ｉ）
【化１】
［式中、ＸおよびＹが互いに独立して、ＯＨ、Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル、ＮＨ2もしくはＮＨ（Ｃ1Ｃ6）アルキルであるか、またはＸおよびＹが一緒になって基−Ｏ−を形成し、Ｒ１およびＲ２が互いに独立して、ＣｌまたはＨであり、Ｒ３がＨ、（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル、Ｃ（＝Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルまたは（Ｃ1−Ｃ6）−アルキレン−ＮＨ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルであり、そしてＲ４がＨ、（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルまたはＣ（＝Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルである］
の化合物またはそれらの生理的に許容される塩、真菌性疾患を治療および／または予防するためのそれらの使用、式（Ｉ）の化合物を含有する薬剤、それらを調製するための方法および微生物ＳＴ２０１１９６（ＤＳＭ１８８７０）に関する。
【化１】
［式中、ＸおよびＹが互いに独立して、ＯＨ、Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル、ＮＨ2もしくはＮＨ（Ｃ1Ｃ6）アルキルであるか、またはＸおよびＹが一緒になって基−Ｏ−を形成し、Ｒ１およびＲ２が互いに独立して、ＣｌまたはＨであり、Ｒ３がＨ、（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル、Ｃ（＝Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルまたは（Ｃ1−Ｃ6）−アルキレン−ＮＨ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルであり、そしてＲ４がＨ、（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルまたはＣ（＝Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルである］
の化合物またはそれらの生理的に許容される塩、真菌性疾患を治療および／または予防するためのそれらの使用、式（Ｉ）の化合物を含有する薬剤、それらを調製するための方法および微生物ＳＴ２０１１９６（ＤＳＭ１８８７０）に関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規なマクロラクトン、ならびにそれらの製造方法および使用に関する。微生物株ＳＴ２０１１９６（ＤＳＭ１８８７０）は真菌カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）に対して強力な抗真菌活性を有する新規な大環状化合物を形成し得ることが今や発見された。従って、本化合物は局所性および／または全身性真菌性疾患の治療に適している。
【背景技術】
【０００２】
多数の抗感染薬は感染性疾患の治療に使用されている。しかし、原因微生物は使用した薬剤に対してますます耐性を持つようになっており、そして１種類だけでなく、同時に数種の抗感染薬に対する耐性を有する「多剤耐性微生物」による大きな危険がまさに差し迫っている。市販の抗感染薬全てに対して耐性となっている原因微生物さえ存在する。この種の微生物によって引き起こされる感染性疾患はもはや治療不可能である。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００３】
【非特許文献１】Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（第１７編，ｐａｇｅ １４１８（１９８５））
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
従って、耐性微生物に対して使用できる新規な薬剤についての大きなニーズが存在する。何千もの抗感染薬が文献に記載されているが、多くが薬剤として使用するには余りに毒性である。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、式（Ｉ）：
【化１】
［式中、
ＸおよびＹが互いに独立して、ＯＨ、Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル、ＮＨ2もしくはＮＨ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルであるか、またはＸおよびＹが一緒になって基−Ｏ−を形成し、
Ｒ１およびＲ２が互いに独立して、ＣｌまたはＨであり、
Ｒ３がＨ、（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル、Ｃ（＝Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルまたは（Ｃ1−Ｃ6）−アルキレン−ＮＨ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルであり、そして
Ｒ４がＨ、（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルまたはＣ（＝Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルである］
の化合物、または式（Ｉ）の化合物の生理学的に許容される塩に関する。
【０００６】
好ましくは、本発明は、ＸおよびＹが一緒になって基−Ｏ−を形成し、この結果、対応する好ましい化合物中のＸおよびＹがそれらが結合するＣ原子と一緒になって、エポキシド基を形成する式（Ｉ）の化合物に関する。
【０００７】
より好ましくは、本発明は、Ｒ１およびＲ２がＣｌである、式（Ｉ）の化合物に関する。
【０００８】
より好ましくは、本発明は、Ｒ１がＣｌであり、そしてＲ２がＨである式（Ｉ）の化合物に関する。
【０００９】
好ましくは、Ｒ３およびＲ４が互いに独立して、Ｈ、（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルまたはＣ（＝Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルであり、特に好ましくはＲ３およびＲ４の両方がＨである。特に好ましくは、本発明は、ＸおよびＹが一緒になって基−Ｏ−を形成し、Ｒ１およびＲ２が互いに独立して、ＣｌまたはＨであり、そしてＲ３およびＲ４が互いに独立して、Ｈ、（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルまたはＣ（＝Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルである式（Ｉ）の化合物、
さらにＸおよびＹが一緒になって基−Ｏ−を形成し、Ｒ１およびＲ２がＣｌであり、そしてＲ３およびＲ４が互いに独立して、Ｈ、（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルまたはＣ（＝Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルである式（Ｉ）の化合物、
さらに、ＸおよびＹが一緒になって基−Ｏ−を形成し、Ｒ１がＣｌであり、Ｒ２がＨであり、そしてＲ３およびＲ４が互いに独立して、Ｈ、（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルまたはＣ（＝Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルである式（Ｉ）の化合物、
【００１０】
さらにＸおよびＹが一緒になって基−Ｏ−を形成し、Ｒ３およびＲ４がＨであり、そしてここでＲ１およびＲ２が互いに独立して、ＣｌまたはＨであり、好ましくはここでＲ１およびＲ２がＣｌである（以下の式（ＩＩ）：
【化２】
の化合物としても示される）か、
【００１１】
またはここでより好ましくはＲ１がＣｌであり、そしてＲ２がＨである（以下の式（ＩＩＩ）：
【化３】
の化合物としても示される）か、
またはここでより好ましくはＲ１およびＲ２がＨである式（Ｉ）の化合物に関する。
【００１２】
（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキルは、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖のアルキル基、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチルまたはｎ−ヘキシルである。
【００１３】
式（Ｉ）の化合物中のキラル中心は、他の記述がない場合、ＲまたはＳ配置で存在し得る。本発明は光学的に純粋な化合物ならびにエナンチオマー混合物およびジアステレオマー混合物のような立体異性体混合物の両方に関する。
【００１４】
式（Ｉ）の化合物の生理的に許容される塩は、非特許文献１に記載されるようにその有機塩および無機塩の両方の意味として理解される。物理的および化学的安定性、および溶解性の理由で、特に酸性基については、ナトリウム、カリウム、カルシウムおよびアンモニウム塩が好ましく；特に塩基性基については、塩酸、硫酸、リン酸の塩、または例えば酢酸、クエン酸、安息香酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸およびｐ−トルエンスルホン酸のようなカルボン酸もしくはスルホン酸の塩が好ましい。
【００１５】
さらに、本発明は、本発明の式（Ｉ）の化合物の全ての自明な化学的等価体に関する。この種の等価体は、わずかな化学的な差異を示す、従って同じ作用を有するか、または穏やかな条件下で本発明の化合物に変換される化合物である。前述の等価体としてはまた、例えば式（Ｉ）の化合物の塩、還元生成物、酸化生成物、エステル、エーテル、アセタールまたはアミド、および標準的な方法を使用して当業者が製造し得る等価体が挙げられる。
【００１６】
さらに、本発明は、式（Ｉ）：
【化４】
［式中
ＸおよびＹが互いに独立して、ＯＨ、Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル、ＮＨ2もしくはＮＨ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルであるか、またはＸおよびＹが一緒になって基−Ｏ−を形成し、
Ｒ１およびＲ２が互いに独立して、ＣｌまたはＨであり、
Ｒ３がＨ、（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル、Ｃ（＝Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルまたは（Ｃ1−Ｃ6）−アルキレン−ＮＨ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルであり、そして
Ｒ４がＨ、（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルまたはＣ（＝Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルである］
の化合物、または式（Ｉ）の化合物の生理学的に許容される塩の調製方法であって、
該方法は、
１．１つまたはそれ以上の式（Ｉ）の化合物が培地中に堆積するまで、適切な条件下、Ｃｌ源を含む培地中で、株ＳＴ２０１１９６（ＤＳＭ１８８７０）、またはその変異株および／もしくは突然変異株の１つを発酵させ、そして
２．培地から式（Ｉ）の化合物を単離し、そして
３．場合により、式（Ｉ）の化合物を誘導体化および／または生理学的に許容される塩に変換することを含む、方法に関する。
【００１７】
培地は、少なくとも１つの炭素源および窒素源、および通常の無機塩を含む栄養溶液または固形培地である。
【００１８】
使用されるＣｌ源は、例えば、ＮａＣｌまたはＣａＣｌ2であり得る。この場合において、株ＳＴ２０１１９６（ＤＳＭ１８８７０）は、好ましくはラジカルＲ１およびＲ２の両方がＣｌであるか、またはＲがＣｌであり、そしてＲ２がＨである式（Ｉ）の化合物を生産する。好ましくは、本発明は、Ｒ１およびＲ２がＣｌである式（Ｉ）の化合物の調製方法に関する。さらに好ましくは、本発明は、Ｒ１がＨであり、Ｒ２がＣｌである式（Ｉ）の化合物の調製方法に関する。
【００１９】
好ましくは、本発明はＸとＹが基−Ｏ−を形成し、さらにＲ３およびＲ４が上記の通り、または好ましくはＨである式（Ｉ）の化合物の調製方法に関する。
【００２０】
特に好ましくは、本発明は、式（ＩＩ）の化合物の調製方法に関する。より特に好ましくは、本発明は式（ＩＩＩ）の化合物の調製方法に関する。さらに、特に好ましくは、本発明は、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４がＨである、式（Ｉ）の化合物の調製方法に関する。
【００２１】
本発明の方法は、実験室規模（ミリリットル〜リットル規模）および工業的規模（立方メートル規模）での発酵に使用され得る。
【００２２】
発酵のために適した炭素源は、資化性の炭水化物および糖アルコール、例えばブドウ糖、乳糖、ショ糖、またはＤ−マンニトール、および炭水化物含有天然産物、例えば麦芽エキスまたは酵母エキスである。適した窒素含有栄養物は、アミノ酸；ペプチドおよび蛋白質、およびそれらの分解産物、例えばＰｒｏｂｉｏｎ Ｆ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １９８４，１９（１），２３−２８）、カゼイン、ペプトンまたはトリプトン；肉エキス；酵母エキス；グルテン；挽いた種子、例えばトウモロコシ、小麦、豆類、大豆または綿の種子；アルコール製造からの蒸留残渣；ミートミール；酵母エキス；アンモニウム塩；ナイトレート（nitrates）である。好ましくは、窒素源は、１つまたはそれ以上の合成的または生合成的に得られるペプチドである。無機塩は、例えば、アルカリ金属またはアルカリ土類金属、鉄、亜鉛、コバルトまたはマンガンの塩化物、炭酸塩、硫酸塩またはリン酸塩である。微量元素は、例えば、コバルトおよびマンガンである。
【００２３】
本発明の物質を形成するための適した条件は以下の通りである：本発明の物質の形成は、好ましくは、０．０５〜５％、好ましくは０．１〜２．５％のＰｒｏｂｉｏｎ Ｆ；０．０２〜１．０％、好ましくは０．０５〜０．５％のＣａＣｌ2×２Ｈ2Ｏ；０．０２〜１．５％、好ましくは０．０５〜０．７％のＭｇＳＯ4×７Ｈ2Ｏ、および０．００００１％〜０．００１％のシアノコラバミン、１〜５％の吸着樹脂ＸＡＤ−１６、または０．０５〜５％、好ましくは０．１〜２．５％のオートミール；０．２〜５．０％、好ましくは０．１〜２％のグリセリン；０．０２〜１．０％、好ましくは０．０５〜０．５％のＣａＣｌ2；０．０２〜１．５％、好ましくは０．０５〜０．７％のＭｇＳＯ4×７Ｈ2Ｏ、および０．００００１％〜０．００１％のシアノコバラミンのいずれかを含む培地中で進められる。各場合において、百分率のデータは、栄養溶液全体の質量に基づく。
【００２４】
微生物は、好気的に、すなわち、例えば、場合によっては空気または酸素を導入しながら、振とうフラスコもしくは発酵槽中振とうまたは撹拌しながら浸水形式（ｓｕｂｍｅｒｓｅ ｆｏｒｍ）で、または固形培地上で培養される。培養は約１８〜３５℃、好ましくは約２０〜３２℃、特に２７〜３０℃の温度範囲で行われ得る。ｐＨの範囲は４〜１０、好ましくは６．５〜９であるべきである。微生物は、一般に、こうした条件下で３〜１８日間、好ましくは１４４〜２１６時間培養される。有利には、培養は多数の段階で行われ、すなわち、最初に１つまたはそれ以上の前培養物が液体栄養培地中で調製され、次いで実際の生産培地、つまり本培養の培地中に、例えば体積比１：１０〜１：１００で植菌される。前培養物は、例えば栄養細胞または子実体の形態の株を栄養溶液中に植菌し、そして約３〜１３日間、好ましくは９６〜２４０時間増殖させることにより得られる。栄養細胞および／または子実体は、例えば、固形または液体の栄養培地、例えば、酵母寒天で株を約３〜１５日間、好ましくは７〜１０日間増殖させることにより得ることができる。
【００２５】
培地からの式（Ｉ）の物質の単離または精製は、天然物質の化学的、物理的および生物学的特性を考慮した公知の方法に従って行なわれる。培地中のまたは個々の単離段階でのそれぞれの誘導体の濃度を試験するために、ＨＰＬＣを使用した。
【００２６】
単離のために、培養ブロスは遠心分離および／または吸引フィルターに通して濾過される。菌子体はＸＡＤと共に凍結乾燥され、次いで天然物質は、有機溶媒、例えばメタノールまたは２−プロパノールを使用して凍結乾燥物から抽出される。有機溶媒相は本発明の天然物質を含有し；この相は場合によって、真空で濃縮され、そしてさらに精製される。
【００２７】
本発明の１つまたはそれ以上の化合物のさらなる精製は、適切な材料上で、好ましくは、例えばモレキュラーシーブ上で、シリカゲル上で、アルミナ上で、イオン交換体上でまたは吸着樹脂上でまたは逆相（ＲＰ）上でのクロマトグラフィーにより行なわれる。このクロマトグラフィーの助けによって、天然物質誘導体が分離される。本発明の化合物のクロマトグラフィーは、緩衝水溶液、または水溶液と有機溶液との混合物を使用して行なわれる。水溶液または有機溶液の混合物とは、０〜１００％の溶媒濃度で水と混和性の全ての有機溶媒、好ましくはメタノール、２−プロパノールおよびアセトニトリル、あるいは有機溶媒と混和性の全ての緩衝水溶液の意味として理解される。使用すべき緩衝液は上記に示したものと同じである。
【００２８】
極性の差に基づく本発明の化合物の分離は、逆相クロマトグラフィーを用いて、例えば、ＭＣＩ(R)（吸着樹脂、Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ、Ｊａｐａｎ）またはＡｍｂｅｒｌｉｔｅ ＸＡＤ(R)（ＴＯＳＯＨＡＡＳ）上で、または例えばＲＰ−８もしくはＲＰ−１８相のような別の疎水性材料上で行われる。さらに、分離は順相クロマトグラフィーを用いて、例えばシリカゲル、アルミナ上などで行われ得る。
【００２９】
天然物質誘導体のクロマトグラフィーは、好ましくは緩衝された、塩基性または酸性の水溶液またはアルコールもしくは他の水混和性有機溶媒と水溶液との混合物を使用して、当業者に公知の方法に従って行なわれた。アセトニトリルおよび／またはメタノールが有機溶媒として使用されるのに好ましい。
【００３０】
緩衝化した、塩基性または酸性の水溶液とは、例えば水、０．５Ｍまでの濃度におけるリン酸緩衝液、酢酸アンモニウム、ギ酸アンモニウム、クエン酸緩衝液、および好ましくは１％までの濃度におけるギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、アンモニア、トリエチルアミンまたは当業者に公知の市販の全ての酸および塩基の意味として理解される。緩衝化水溶液の場合、０．１％の酢酸アンモニウムが特に好ましい。
【００３１】
クロマトグラフィーは、例えば、水１００％に始まり溶媒１００％で終わるグラジエントを使用して行なわれ；好ましくは、５〜９５％のアセトニトリルの直線グラジエントで操作された。
【００３２】
あるいは、ゲルクロマトグラフィーまたは疎水性相上でのクロマトグラフィーをもまた行ない得る。ゲルクロマトグラフィーは、ポリアクリルアミドまたは混合ポリマーゲル、例えばＢｉｏｇｅｌ−Ｐ ２(R)（Ｂｉｏｒａｄ）またはＦｒａｃｔｏｇｅｌ ＴＳＫＨＷ４０(R)（Ｍｅｒｃｋ、Ｇｅｒｍａｎｙ）上で行なわれる。上記のクロマトグラフィーの順序は逆も可能である。
【００３３】
式（Ｉ）の化合物が立体異性体混合物として存在する場合、立体異性体は、公知の方法、例えばキラルカラムを用いる分離により分離され得る。
【００３４】
式（Ｉ）の化合物の３，５−ジクロロチロシンアミノ酸のＯＨ基［Ｒ３がＨである］のアシル基［Ｒ３がＣ（＝Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル）である］への誘導体化および／または式（Ｉ）の化合物の３−ヒドロキシバリンアミノ酸のＯＨ基［Ｒ４がＨである］のアシル基［Ｒ４がＣ（＝Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル）である］への誘導体化を、例えば塩基の存在下、酸塩化物との、または酸無水物との反応により、それ自体が公知である方法（Ｊ．Ｍａｒｃｈ，Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，第４編，１９９２）に従って行ない得る。
【００３５】
式（Ｉ）の化合物の３，５−ジクロロチロシンアミノ酸のＯＨ基［Ｒ３がＨである］のアルキル基［Ｒ３が（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルである］を用いるアルキル化および／または式（Ｉ）の化合物の３−ヒドロキシバリンアミノ酸のＯＨ基［Ｒ４がＨである］のアルキル基［Ｒ４が（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルである］を用いるアルキル化を、例えば塩基の存在下、（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルブロミドとの反応、またはメチル化の場合、ヨウ化メチルまたはＭｅ2ＳＯ4との反応により、それ自体が当業者に公知である方法（Ｊ．Ｍａｒｃｈ，Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，第４編，１９９２）により行ない得る。
【００３６】
保護基の導入のための当業者に自体公知の方法により、フェノール性ＯＨ基（Ｒ３＝Ｈ）と脂肪族ＯＨ基（Ｒ４＝Ｈ）の間の選択的差異化（selective differentiation）が行なわれる（Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ，Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，第３編，１９９９）。例えば、Ｐｅｔｔｕｓ ｅｔ ａｌ．（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２０００，１２２，６１６０−６１６８）は、Ｋ2ＣＯ3の存在下、アセトン中、（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルブロミドとの反応による、または（ＣＦ3ＣＯ）2ＯおよびＣｕＣｌ2水和物の存在下、ＤＢＵ中、（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル−ＯＨとの反応による第三級脂肪族アルコールの存在下でのフェノール性ＯＨ基の選択的アルキル化を記載する。ビス−アルキル化［Ｒ３およびＲ４が（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルである］された式（Ｉ）の化合物またはビス−アシル化［Ｒ３およびＲ４が（＝Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル）である］された式（Ｉ）の化合物の選択的脱保護のための当業者に自体公知の方法により、フェノール性ＯＨ基と脂肪族ＯＨ基との間のさらなる可能性ある差異化が行なわれる（Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ，Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，第３編，１９９９）。例えば、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２００１，６６，３６８８−３６９５）は、ＴＢＳ−保護第三級アルコールの存在下、−２０℃でのｔｅｒｔ−ブチルアンモニウムフルオリド（ＴＢＡＦ）によるｔｅｒｔ−ブチルシリル（ＴＢＳ）−保護フェノールの選択的脱保護を記載する。さらに、フェノール性ＯＨ基（Ｒ３＝Ｈ）は、Ｃｌ−［（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル］−ＣｌまたはＢｒ−［（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル］−Ｂｒの存在下、Ｈ2Ｎ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルとの反応により、基−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキレン−ＮＨ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルに誘導体化され得る。
【００３７】
式（Ｉ）の化合物（ここで、ＸとＹが基−Ｏ−を形成する）の式（Ｉ）の化合物（ここで、ＸおよびＹが互いに独立して、ＯＨ、Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル、ＮＨ2またはＮＨ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルである）への誘導体化は、例えば、エポキシド基と（Ｃ1−Ｃ6）−アルコラート［ＹがＯ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルである場合、ＸはＯＨであるか、またはＸがＯ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルである場合、ＹはＯＨである］、ＮＨ3［ＹがＮＨ2である場合、ＸはＯＨであるか、またはＸがＮＨ2である場合、ＹはＯＨである］、またはＨ2Ｎ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル［ＹがＮＨ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルである場合、ＸはＯＨであるか、またはＸがＮＨ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルである場合、ＹはＯＨである］との反応による当業者に自体公知の方法により行なわれる（Ｊ．Ｍａｒｃｈ，Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，第４編，１９９２）。
【００３８】
微生物株ＳＴ２０１１９６の単離物は、以下の番号で、２００３年９月１１日付けのＢｕｄａｐｅｓｔ Ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎの規則に従って、Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ［Ｇｅｒｍａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ］ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ），Ｍａｓｃｈｅｒｏｄｅｒ Ｗｅｇ １Ｂ，３８１２４ Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ，Ｇｅｒｍａｎｙに寄託された。以下の番号とは、寄託番号：ＤＳＭ１８８７０が指定された。
【００３９】
株ＳＴ２０１１９６（ＤＳＭ１８８７０）の栄養細胞は、特徴的な桿状（rodshape）を有する。固形栄養培地上で、ＳＴ２０１１９６（ＤＳＭ１８８７０）は円形の粘菌胞子を含む橙黄色の子実体を形成する。従って、株ＳＴ２０１１９６は、Ｍｙｘｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐ．として分類され得る。
【００４０】
株ＳＴ２０１１９６（ＤＳＭ１８８７０）の代わりに、１つまたはそれ以上の本発明の化合物を合成するこの株の突然変異株および／または変異株を使用することもまた可能である。
【００４１】
突然変異株は、ゲノムの１つまたはそれ以上の遺伝子が修飾されている微生物であり、ここで本発明の化合物を生産する生物体の能力に関与する１つまたは複数の遺伝子は機能的、かつ遺伝的に保持する。
【００４２】
この種の突然変異株は、物理的手段、例えば紫外線もしくはＸ線のような照射、または例えばメタンスルホン酸エチル（ＥＭＳ）；２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン（ＭＯＢ）もしくはＮ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（ＭＭＮＧ）のような化学的突然変異誘発物質によって、またはＢｒｏｃｋ ｅｔ ａｌ．「Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ」，Ｐｒｅｎｔｉｃｅ Ｈａｌｌ，ｐａｇｅ ２３８−２４７（１９８４）に記載されているように、自体公知の方法で産生され得る。
【００４３】
変異株は微生物の１つの表現型である。微生物は、その環境に適応する能力を有し、従って、顕著な生理学的適応性を示す。表現型適応の場合において、微生物の全ての細胞が関与し、修飾の性質は遺伝的に条件づけられておらず、修飾された条件下では可逆性である（Ｈ．Ｓｔｏｌｐ，Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｅｃｏｌｏｇｙ：ｏｒｇａｎｉｓｍｕｓ，ｈａｂｉｔａｔｓ，ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ．Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＧＢ，ｐａｇｅ １８０，１９８８）。
【００４４】
１つまたはそれ以上の本発明の化合物を合成する突然変異株および／または変異株のスクリーニングは、以下のスキームに従って行なわれる：
−発酵培地の凍結乾燥；
−有機溶媒を使用する凍結乾燥物の抽出；
−固相を使用する培養濾液からの化合物の抽出；
−ＨＰＬＣ、ＴＬＣによる、または生物活性の試験による分析。
【００４５】
記載した発酵条件は、ＳＴ２０１１９６（ＤＳＭ１８８７０）ならびにその突然変異株および／または変異株に当てはまる。
【００４６】
急増殖する好気性原因微生物の抗真菌活性を検出するために、ＣＬＳＩ（Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｍ７−Ａ７，Ｖｏｌ．２６，Ｎｏ．２）の手順に従うブイヨン希釈法（微量希釈）を使用する。ＩＣ50値を決定した。これは、試験生物カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）の増殖を５０％阻害するために必要な活性物質の濃度である。
【００４７】
式（ＩＩ）の化合物は、カンジダ・アルビカンスに対して０．０６μｇ／ｍｌのＩＣ50値を有する。式（ＩＶ）の化合物は、カンジダ・アルビカンスに対して０．４１μｇ／ｍｌのＩＣ50値を有する。
【００４８】
従って、本発明は、特に、真菌性疾患を治療および／または予防する人間医学または獣医学の薬剤としての、式（Ｉ）の化合物またはそれらの生理学的に許容される塩の使用に関する。好ましくは、本発明は、局所性および／または全身性真菌性疾患を治療するための、式（Ｉ）の化合物またはそれらの生理学的に許容される塩の使用に関する。
【００４９】
加えて、本発明は、少なくとも１種の式（Ｉ）の化合物を含有する薬剤に関し、ここで式（Ｉ）の１つまたは複数の化合物は、実質上それ自体で、または好ましくは、１つまたはそれ以上の通常の薬理学的に適したビヒクルまたは添加剤との混合物として投与され得る。
【００５０】
本発明の化合物は、固体状態でおよび２〜９、特に５〜７の範囲のｐＨの溶液中で安定であり、従って通常のガレヌス製剤中に組み込まれ得る。
【００５１】
本発明の薬剤は、経口的または非経口的に投与され得るが、直腸投与もまた原則として可能である。適切な固形または液体のガレヌス製剤の形態は、例えば顆粒剤、散剤、錠剤、コーティング錠剤、（マイクロ）カプセル剤、坐薬、シロップ剤、乳剤、懸濁剤、エアゾール剤、アンプル形態の滴剤または注射用液剤、および活性物質を持続放出する製剤であり、この製剤中で薬理学的に適切なビヒクルまたは添加剤、例えば崩壊剤、結合剤、コーティング剤、膨張剤、流動促進剤もしくは滑沢剤、着香添加物、甘味料または可溶化剤、例えば炭酸マグネシウム、二酸化チタン、乳糖、マンニトールおよび他の糖、タルク、乳タンパク質、ゼラチン、澱粉、ビタミン、セルロースおよびその誘導体、動物油もしくは植物油、ポリエチレングリコール、ならびに例えば滅菌水、アルコール、グリセロールおよび多価アルコールのような溶媒が通例使用される。
【００５２】
場合によっては、経口投与のための投薬単位は、放出を遅延またはより長期間延長させるために、例えば粒子形態の活性物質を適切なポリマー、ワックスなどでコーティングまたは埋め込むことにより、マイクロカプセル化され得る。
【００５３】
好ましくは、製薬学的製剤は、各単位が活性成分として特定の用量の１つまたはそれ以上の本発明の天然物質誘導体の化合物を含有する投薬単位に調製され、そして投与される。錠剤、カプセル剤および坐剤のような固形の投薬単位の場合において、この用量は、１日あたり約５００ｍｇまで、しかし好ましくは約０．１〜２００ｍｇ、そしてアンプル形態の注射液の場合において、約２００ｍｇまで、しかし好ましくは約０．５〜１００ｍｇであり得る。
【００５４】
投与すべき日用量は、哺乳動物の体重、年齢、性別および状態に依存する。しかし、特定の条件下で、より多いまたはより少ない日用量もまた適切であり得る。日用量の投与は、個々の投薬単位の形態の単回投与あるいは多数のより少ない投薬単位により、および細分された投与量の特定の間隔での反復投与の両方により行なわれ得る。
【００５５】
本発明の製剤は、場合により、１つまたはそれ以上の本発明の式（Ｉ）の化合物を１つまたはそれ以上の通常のビヒクルまたは添加剤と混合し、そして適切な投与形態にすることにより調製される。
【００５６】
以下の実施例は、決して本発明の範囲を限定することなしに、本発明をより詳細に説明するために役立つことを目的とする。
【００５７】
百分率は質量に関連する。液体の場合の混合比は、特に他に示されていない場合、体積に関連する。
【実施例】
【００５８】
実施例１：−１３５℃でのＳＴ２０１１９６（ＤＳＭ１８８７０）の保存
寒天平板（１％ 新鮮なパン酵母；１％ ＣａＣｌ2×２Ｈ2Ｏ；０．４７７％ ＨＥＰＥＳ（２０ｍＭ）；０．００００５％ シアノコバラミン；１．８％ 寒天；ｐＨ ７．２）に株ＳＴ２０１１９６（ＤＳＭ１８８７０）を植菌し、そして約７〜１０日間、３０℃でインキュベートした。滅菌スパチュラを使用して、この表面培養の細胞を寒天表面から掻き取り、クリオチューブ（ｃｒｙｏｔｕｂｅ）中のカジトン培地（１％ カジトン（Ｄｉｆｃｏ）；０．１５％ ＭｇＳＯ4×７Ｈ2Ｏ；ｐＨ ７．０）（１ｍｌ）に懸濁し、そして−１３５℃で保存した。
【００５９】
実施例２：−１９６℃でのＳＴ２０１１９６（ＤＳＭ１８８７０）の保存
寒天平板（１％ 新鮮なパン酵母；１％ ＣａＣｌ2×２ Ｈ2Ｏ；０．４７７％ ＨＥＰＥＳ（２０ｍＭ）；０．００００５％ シアノコバラミン；１．８％ 寒天；ｐＨ ７．２）に株ＳＴ２０１１９６（ＤＳＭ１８８７０）を植菌し、そして約７〜１０日間、３０℃でインキュベートした。滅菌スパチュラを使用して、この表面培養の細胞を寒天表面から掻き取り、クリオチューブ中のカジトン培地（１％ カジトン（Ｄｉｆｃｏ）；０．１５％ ＭｇＳＯ4×７Ｈ2Ｏ；ｐＨ ７．０）（１ｍｌ）に懸濁し、そして−１９６℃で保存した。
【００６０】
実施例３：エーレンマイヤーフラスコ中のＳＴ２０１１９６（ＤＳＭ１８８７０）の前培養物の調製
滅菌３００ｍｌエーレンマイヤーフラスコ中の栄養溶液（１％ 新鮮なパン酵母；１％ ＣａＣｌ2×２Ｈ2Ｏ；０．４７７％ ＨＥＰＥＳ（２０ｍＭ）；０．００００５％ シアノコバラミン；１．８％ 寒天；ｐＨ ７．２）（１００ｍｌ）に株ＳＴ２０１１９６（ＤＳＭ１８８７０）を植菌し、そして７日間、３０℃および１８０ｒｐｍのロータリーシェイカーでインキュベートした。各場合のこの前培養物（１０ｍｌ、１０％）を、続けて本培養の調製に使用した。
【００６１】
実施例４：培地１を使用する液体本培養ＳＴ２０１１９６（ＤＳＭ１８８７０）の調製
以下の栄養溶液（１％ Ｐｒｏｂｉｏｎ Ｆ；０．１％ ＣａＣｌ2×２Ｈ2Ｏ；０．２％ ＭｇＳＯ4×７Ｈ2Ｏ；０．００００５％ シアノコバラミン；２％ 吸着樹脂ＸＡＤ−１６、ｐＨ ８．４）（１００ｍｌ）を含む滅菌３００ｍｌエーレンマイヤーフラスコに前培養物（１０ｍｌ、１０％）（実施例３を参照のこと）または新しい寒天平板（１％ 新鮮なパン酵母；１％ ＣａＣｌ2×２Ｈ2Ｏ；０．４７７％ ＨＥＰＥＳ（２０ｍＭ）；０．００００５％ シアノコバラミン；１．８％ 寒天；ｐＨ ７．２）上で洗浄した培養物を植菌し、そして１８０ｒｐｍのシェーカーで、３０℃でインキュベートした。本発明の物質の最大産生が１４４〜２１６時間後に達成された。実施例３に記載されるような同じ栄養溶液の１４４〜１９６時間経過後の浸水培養物（ｓｕｂｍｅｒｓｅ ｃｕｌｔｕｒｅ）（植菌材料 １０％）が、１０〜２００Ｌの発酵槽に植菌するために十分であった。
【００６２】
実施例５：培地２を使用する液体本培養ＳＴ２０１１９６（ＤＳＭ１８８７０）の調製
以下の栄養溶液（１％ オートミール；０．５％ グリセリン；０．１％ ＣａＣｌ2×２Ｈ2Ｏ；０．２％ ＭｇＳＯ4×７Ｈ2Ｏ；０．００００５％ シアノコバラミン；２％ 吸着樹脂ＸＡＤ−１６、ｐＨ ９．０）（１００ｍｌ）を含む滅菌３００ｍｌエーレンマイヤーフラスコに前培養物（１０ｍｌ、１０％）（実施例３を参照のこと）または新しい寒天平板（１％ 新鮮なパン酵母；１％ ＣａＣｌ2×２Ｈ2Ｏ；０．４７７％ ＨＥＰＥＳ（２０ｍＭ）；０．００００５％ シアノコバラミン；１．８％ 寒天；ｐＨ ７．２）上で増殖させた培養物を植菌し、そして１８０ｒｐｍのシェーカーで、３０℃でインキュベートした。本発明の物質の最大産生が１４４〜２１６時間後に達成された。実施例３に記載されるような同じ栄養溶液の１４４〜１９６時間経過後の浸水培養物（植菌材料 １０％）が、１０〜２００Ｌの発酵槽に植菌するために十分であった。
【００６３】
実施例６：発酵槽中での本発明の物質の調製
１Ｌおよび５０Ｌの発酵槽を、以下の条件下で操作した：
植菌材料： ２０％
栄養培地： １％ オートミール；０．５％ グリセリン；０．１％ 酵母エキス；０．１％ ＣａＣｌ2×２Ｈ2Ｏ；０．２％ ＭｇＳＯ4×７Ｈ2Ｏ；０．００００５％ シアノコバラミン、２％ 吸着樹脂ＸＡＤ−１６
インキュベーション温度： ３０℃
撹拌スピード： ２００ｒｐｍ
通気： ０．６ｍ3／ｈ
ｐＨ調節： なし、滅菌前にＫＯＨによりｐＨ ７．６±０．３
ｐＯ2調節： なし
消泡添加剤： ０．０５％ デスモフェン（Ｂａｙｅｒ）
実行時間： １５５時間
ｐＨ調節は、１０％ ＫＯＨまたは１０％ Ｈ2ＳＯ4を使用して行なった。
【００６４】
実施例７：微生物株ＳＴ２０１１９６（ＤＳＭ１８８７０）の撹拌培養物からの化合物（ＩＩ）および（ＩＩＩ）の単離
微生物株ＳＴ２０１１９６（ＤＳＭ１８８７０）の発酵が完了した後、実施例４からの培養ブロス（培養ブロス６０Ｌ）を濾過した。ＸＡＤを含むバイオマスを凍結乾燥し、次いでメタノールで抽出した（４×５Ｌ）。メタノール抽出物を真空で８Ｌまで減らし、次いでＣＨＰ−２０Ｐ材料（ＭＣＩ(R) Ｇｅｌ、７５〜１５０μ、Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ
Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）（約３．０Ｌ）を充てんした分取用カラムに供した。１０％〜９５％のメタノールグラジエントを使用して溶離を行なった。カラム流れ（１２０ｍｌ／分）をフラクション（１Ｌフラクション）に集めた。フラクション１１〜１４を合わせ、溶媒をＲｏｔａｖａｐｏｒで除去し、次いでフラクションプールを凍結乾燥した（収量約０．９ｇ）。
【００６５】
実施例８：ＲＰ１８クロマトグラフィーによる化合物（ＩＩ）および（ＩＩＩ）の予備分離
実施例７からのフラクションプール１１〜１４をメタノール（１００ｍｌ）に溶解し、そしてＬｕｎａ(R) １０μ Ｃ１８（２）プレカラム（寸法：６０ｍｍ×２１．２ｍｍ）を有するＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ(R) １０μ Ｃ１８（２）カラム（寸法：２５０ｍｍ×５０ｍｍ）に供し、そして水中５％〜９５％アセトニトリル（０．１％ 酢酸アンモニウム、酢酸を使用してｐＨ ４．６に設定した）のグラジエントを使用して、４０分にわたって溶離した。流れは１９０ｍｌ／分であり、フラクションは１９０ｍｌの大きさであった。次いで、フラクション２８〜２９および３１をさらに後処理した。
【００６６】
実施例９：化合物（ＩＩ）の精製
実施例８からのフラクション３１を始めに凍結乾燥し（収量約９８ｍｇ）、次いでメタノール（５０ｍｌ）に溶解し、そしてＸＴｅｒｒａ(R) Ｐｒｅｐ ＭＳ Ｃ１８ １０μｍプレカラム（Ｗａｔｅｒｓ、寸法：１９×１０ｍｍ）を有するＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ(R) Ａｘｉａ ５μｍ Ｃ１８（２）カラム（寸法：１００ｍｍ×３０ｍｍ）でのＨＰＬＣを用いて再び精製した。水中５％〜９５％アセトニトリル（０．１％ 酢酸アンモニウムを添加し、酢酸を使用してｐＨ ４．６に設定した）のグラジエントを使用して、４０分にわたって溶離した。ＵＶに従ってカラム流れ（５０ｍｌ／分）をフラクションに集めた。フラクション４〜１４は式（ＩＩ）の化合物を含み、そして凍結乾燥後、３８ｍｇ（純度＞９５％）を得た。
【００６７】
実施例１０：式（ＩＩ）の化合物のキャラクタリゼーション
無色の固体、アセトニトリル／水から結晶
ＵＶ：２０８、２３２、２８６ｎｍ
ＥＳＩ−ＭＳ：ＭＷ＝８１５．３３１２
実験式：Ｃ42Ｈ55Ｃｌ2Ｎ3Ｏ9
比旋光度（ＭｅＯＨ）：−０．１９°、αD＝−３８°
【００６８】
【表１】
【００６９】
【表２】
【００７０】
実施例１１：化合物（ＩＩＩ）の精製
実施例８からのフラクション２８〜２９（３８０ｍｌ）を再びＸＴｅｒｒａ(R) Ｐｒｅｐ ＭＳ Ｃ１８ １０μｍプレカラム（Ｗａｔｅｒｓ、寸法：１９×１０ｍｍ）を有するＷａｔｅｒｓ ＸＴｅｒｒａ(R) １０μｍ Ｃ１８カラム（寸法：１００ｍｍ×３０ｍｍ）でのＨＰＬＣを用いて精製した。水中１０％〜９５％アセトニトリル（１０％ ギ酸を添加、ｐＨ＝２．０）のグラジエントを使用して、４０分にわたって溶離した。ＵＶに従ってカラム流れ（７０ｍｌ／分）をフラクションに集めた。フラクション４５〜４７は式（ＩＩＩ）の化合物を含み、そして凍結乾燥後、約５．４ｍｇ（純度＞５０％）を得た。
【００７１】
実施例１２：化合物（ＩＩＩ）のキャラクタリゼーション
無色の固体
ＵＶ：２０４、２３２、２８６ｎｍ
ＥＳＩ−ＭＳ：ＭＷ＝７９９．３００２
実験式：Ｃ42Ｈ56ＣｌＮ3Ｏ9
【００７２】
【表３】
【００７３】
【表４】
【００７４】
実施例１３：化合物（ＩＶ）の合成
化合物（ＩＩ）（８０ｍｇ、０．０９８ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（５ｍｌ）に溶解し、そして溶液を室温の炭酸カリウム（２７ｍｇ、０．１９６ｍｍｏｌ）およびヨウ化メチル（７０ｍｇ、０．４９０ｍｍｏｌ）で処理した。次いで、混合物を５０℃で１２時間撹拌した。溶液を濾過し、そしてＸＴｅｒｒａ(R) Ｐｒｅｐ ＭＳ Ｃ１８ １０μｍ プレカラム（Ｗａｔｅｒｓ、寸法：１９×１０ｍｍ）を有するＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ(R) Ａｘｉａ ５μｍ Ｃ１８（２）カラム（寸法：１００ｍｍ×３０ｍｍ）上でのＨＰＬＣを用いて精製した。水中５％〜９５％アセトニトリル（０．１％ 酢酸アンモニウムを添加し、酢酸を使用してｐＨ ４．６に合わせた）のグラジエントを使用して、４０分にわたって溶離した。ＵＶに従ってカラム流れ（５０ｍｌ／分）をフラクションに集めた。フラクション４および５は所望の式（ＩＶ）の化合物を含み、そして凍結乾燥後、５０ｍｇ（収率：６１％、純度＞９５％）を得た。
【００７５】
実施例１４：式（ＩＶ）の化合物のキャラクタリゼーション
【化５】
無色の固体、アセトニトリル／水から結晶
ＵＶ：２３５、２８６ｎｍ
ＭＷ＝８３０．８５
実験式：Ｃ43Ｈ57Ｃｌ2Ｎ3Ｏ9
【００７６】
【表５】
【００７７】
【表６】
【００７８】
実施例１５：化合物（Ｖ）および（ＶＩ）の合成
化合物（ＩＩ）（３０ｍｇ、０．０３７ｍｍｏｌ）を１，２−ジクロロエタン（１０ｍｌ）に溶解し、そして溶液を室温のイソブチルアミン（５００μｌ、５．０３ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を７０℃で４８時間撹拌し、次いで濾過し、そしてＸＴｅｒｒａ(R)
Ｐｒｅｐ ＭＳ Ｃ１８ １０μｍ プレカラム（Ｗａｔｅｒｓ、寸法：１９×１０ｍｍ）を有するＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ(R) Ａｘｉａ ５μｍ Ｃ１８（２）カラム（寸法：１００ｍｍ×３０ｍｍ）でのＨＰＬＣを用いて精製した。水中５％〜９５％アセトニトリル（０．１％ 酢酸アンモニウムを添加し、酢酸を使用してｐＨ ４．６に合わせた）のグラジエントを使用して、４０分にわたって溶離した。ＵＶに従ってカラム流れ（５０ｍｌ／分）をフラクションに集めた。フラクション７０は式（Ｖ）および（ＶＩ）の２つの化合物を含み、そして凍結乾燥後、２つの化合物（５５：４５の比率で３ｍｇ）を得た。
【００７９】
実施例１６：式（Ｖ）の化合物のキャラクタリゼーション
【化６】
ＭＷ＝８８９．９７
実験式：Ｃ46Ｈ66Ｃｌ2Ｎ4Ｏ9
【００８０】
【表７】
【００８１】
【表８】
【００８２】
実施例１７：式（ＶＩ）の化合物のキャラクタリゼーション
【化７】
ＭＷ＝９１６．００
実験式：Ｃ48Ｈ68Ｃｌ2Ｎ4Ｏ9
【００８３】
【表９】
【００８４】
【表１０】
【００８５】
実施例１８：カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）に対する抗真菌活性の測定
１０００μｇ／ｍｌの活性物質［例えば、式（ＩＩ）の化合物または式（ＩＶ）の化合物］のメタノール貯蔵液を調製した。試験株［カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）ＦＨ ２１７３］を−８０℃で保存した。新しい液体前培養から植菌材料を調製した。前培養物を−８０℃で保存した物質（１ビーズ）および栄養培地（サブローデキストロースブロス、Ｄｉｆｃｏ）（３０ｍｌ）から調製し、そして３７℃、１８０毎分回転数で、２４時間インキュベートした。試験容器に植菌した後、必要な数のコロニー形成単位に達するように、植菌材料を調整すべきである。そのために、植菌材料を５９０ｎｍの波長の光度計を用いて、１０7ＣＦＵ／ｍｌ（ＣＦＵ：コロニー形成単位）の値に調整した。植菌材料の調整後、懸濁液を栄養溶液（ミュラーヒントンブロス、Ｄｉｆｃｏ）で１：１００に希釈した。植菌材料の調製１５分以内で、マイクロタイタープレートに植菌した。表面培養を用いて正確なコロニー計数を測定した。活性物質および栄養培地（ミュラーヒントンブロス、Ｄｉｆｃｏ）の貯蔵液を使用して、連続希釈をマイクロタイタープレートで予め調製した。活性物質は２０μｌの体積で存在し、そして４０μｌの全試験体積が得られるように、２０μｌの植菌材料で処理した。次いで、植菌したマイクロタイタープレートを蓋で密閉し、そして３７℃、５％ ＣＯ2および９５％雰囲気湿度（atmospheric humidity）で２０時間インキュベートした。各試験について、活性物質を含まない対照、無菌対照、および基準物質として、シプロフロキサシンおよびナイスタチンを３８４ウェルマイクロタイタープレートで共試験した（ｃｏ−ｔｅｓｔ）。５９０ｎｍの波長の光度計を用いて吸収を測定することにより、マイクロタイタープレートを読み取った。次いで、標準処理に従って、試験生物カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）の増殖を５０％阻害するのに必要な活性物質の濃度として、連続希釈の値からＩＣ50値を計算した。
【００８６】
【表１１】
【００８７】
【表１２】
【００８８】
【表１３】
【００８９】
【表１４】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規なマクロラクトン、ならびにそれらの製造方法および使用に関する。微生物株ＳＴ２０１１９６（ＤＳＭ１８８７０）は真菌カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）に対して強力な抗真菌活性を有する新規な大環状化合物を形成し得ることが今や発見された。従って、本化合物は局所性および／または全身性真菌性疾患の治療に適している。
【背景技術】
【０００２】
多数の抗感染薬は感染性疾患の治療に使用されている。しかし、原因微生物は使用した薬剤に対してますます耐性を持つようになっており、そして１種類だけでなく、同時に数種の抗感染薬に対する耐性を有する「多剤耐性微生物」による大きな危険がまさに差し迫っている。市販の抗感染薬全てに対して耐性となっている原因微生物さえ存在する。この種の微生物によって引き起こされる感染性疾患はもはや治療不可能である。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００３】
【非特許文献１】Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（第１７編，ｐａｇｅ １４１８（１９８５））
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
従って、耐性微生物に対して使用できる新規な薬剤についての大きなニーズが存在する。何千もの抗感染薬が文献に記載されているが、多くが薬剤として使用するには余りに毒性である。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、式（Ｉ）：
【化１】
［式中、
ＸおよびＹが互いに独立して、ＯＨ、Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル、ＮＨ2もしくはＮＨ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルであるか、またはＸおよびＹが一緒になって基−Ｏ−を形成し、
Ｒ１およびＲ２が互いに独立して、ＣｌまたはＨであり、
Ｒ３がＨ、（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル、Ｃ（＝Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルまたは（Ｃ1−Ｃ6）−アルキレン−ＮＨ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルであり、そして
Ｒ４がＨ、（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルまたはＣ（＝Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルである］
の化合物、または式（Ｉ）の化合物の生理学的に許容される塩に関する。
【０００６】
好ましくは、本発明は、ＸおよびＹが一緒になって基−Ｏ−を形成し、この結果、対応する好ましい化合物中のＸおよびＹがそれらが結合するＣ原子と一緒になって、エポキシド基を形成する式（Ｉ）の化合物に関する。
【０００７】
より好ましくは、本発明は、Ｒ１およびＲ２がＣｌである、式（Ｉ）の化合物に関する。
【０００８】
より好ましくは、本発明は、Ｒ１がＣｌであり、そしてＲ２がＨである式（Ｉ）の化合物に関する。
【０００９】
好ましくは、Ｒ３およびＲ４が互いに独立して、Ｈ、（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルまたはＣ（＝Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルであり、特に好ましくはＲ３およびＲ４の両方がＨである。特に好ましくは、本発明は、ＸおよびＹが一緒になって基−Ｏ−を形成し、Ｒ１およびＲ２が互いに独立して、ＣｌまたはＨであり、そしてＲ３およびＲ４が互いに独立して、Ｈ、（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルまたはＣ（＝Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルである式（Ｉ）の化合物、
さらにＸおよびＹが一緒になって基−Ｏ−を形成し、Ｒ１およびＲ２がＣｌであり、そしてＲ３およびＲ４が互いに独立して、Ｈ、（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルまたはＣ（＝Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルである式（Ｉ）の化合物、
さらに、ＸおよびＹが一緒になって基−Ｏ−を形成し、Ｒ１がＣｌであり、Ｒ２がＨであり、そしてＲ３およびＲ４が互いに独立して、Ｈ、（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルまたはＣ（＝Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルである式（Ｉ）の化合物、
【００１０】
さらにＸおよびＹが一緒になって基−Ｏ−を形成し、Ｒ３およびＲ４がＨであり、そしてここでＲ１およびＲ２が互いに独立して、ＣｌまたはＨであり、好ましくはここでＲ１およびＲ２がＣｌである（以下の式（ＩＩ）：
【化２】
の化合物としても示される）か、
【００１１】
またはここでより好ましくはＲ１がＣｌであり、そしてＲ２がＨである（以下の式（ＩＩＩ）：
【化３】
の化合物としても示される）か、
またはここでより好ましくはＲ１およびＲ２がＨである式（Ｉ）の化合物に関する。
【００１２】
（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキルは、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖のアルキル基、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチルまたはｎ−ヘキシルである。
【００１３】
式（Ｉ）の化合物中のキラル中心は、他の記述がない場合、ＲまたはＳ配置で存在し得る。本発明は光学的に純粋な化合物ならびにエナンチオマー混合物およびジアステレオマー混合物のような立体異性体混合物の両方に関する。
【００１４】
式（Ｉ）の化合物の生理的に許容される塩は、非特許文献１に記載されるようにその有機塩および無機塩の両方の意味として理解される。物理的および化学的安定性、および溶解性の理由で、特に酸性基については、ナトリウム、カリウム、カルシウムおよびアンモニウム塩が好ましく；特に塩基性基については、塩酸、硫酸、リン酸の塩、または例えば酢酸、クエン酸、安息香酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸およびｐ−トルエンスルホン酸のようなカルボン酸もしくはスルホン酸の塩が好ましい。
【００１５】
さらに、本発明は、本発明の式（Ｉ）の化合物の全ての自明な化学的等価体に関する。この種の等価体は、わずかな化学的な差異を示す、従って同じ作用を有するか、または穏やかな条件下で本発明の化合物に変換される化合物である。前述の等価体としてはまた、例えば式（Ｉ）の化合物の塩、還元生成物、酸化生成物、エステル、エーテル、アセタールまたはアミド、および標準的な方法を使用して当業者が製造し得る等価体が挙げられる。
【００１６】
さらに、本発明は、式（Ｉ）：
【化４】
［式中
ＸおよびＹが互いに独立して、ＯＨ、Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル、ＮＨ2もしくはＮＨ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルであるか、またはＸおよびＹが一緒になって基−Ｏ−を形成し、
Ｒ１およびＲ２が互いに独立して、ＣｌまたはＨであり、
Ｒ３がＨ、（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル、Ｃ（＝Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルまたは（Ｃ1−Ｃ6）−アルキレン−ＮＨ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルであり、そして
Ｒ４がＨ、（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルまたはＣ（＝Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルである］
の化合物、または式（Ｉ）の化合物の生理学的に許容される塩の調製方法であって、
該方法は、
１．１つまたはそれ以上の式（Ｉ）の化合物が培地中に堆積するまで、適切な条件下、Ｃｌ源を含む培地中で、株ＳＴ２０１１９６（ＤＳＭ１８８７０）、またはその変異株および／もしくは突然変異株の１つを発酵させ、そして
２．培地から式（Ｉ）の化合物を単離し、そして
３．場合により、式（Ｉ）の化合物を誘導体化および／または生理学的に許容される塩に変換することを含む、方法に関する。
【００１７】
培地は、少なくとも１つの炭素源および窒素源、および通常の無機塩を含む栄養溶液または固形培地である。
【００１８】
使用されるＣｌ源は、例えば、ＮａＣｌまたはＣａＣｌ2であり得る。この場合において、株ＳＴ２０１１９６（ＤＳＭ１８８７０）は、好ましくはラジカルＲ１およびＲ２の両方がＣｌであるか、またはＲがＣｌであり、そしてＲ２がＨである式（Ｉ）の化合物を生産する。好ましくは、本発明は、Ｒ１およびＲ２がＣｌである式（Ｉ）の化合物の調製方法に関する。さらに好ましくは、本発明は、Ｒ１がＨであり、Ｒ２がＣｌである式（Ｉ）の化合物の調製方法に関する。
【００１９】
好ましくは、本発明はＸとＹが基−Ｏ−を形成し、さらにＲ３およびＲ４が上記の通り、または好ましくはＨである式（Ｉ）の化合物の調製方法に関する。
【００２０】
特に好ましくは、本発明は、式（ＩＩ）の化合物の調製方法に関する。より特に好ましくは、本発明は式（ＩＩＩ）の化合物の調製方法に関する。さらに、特に好ましくは、本発明は、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４がＨである、式（Ｉ）の化合物の調製方法に関する。
【００２１】
本発明の方法は、実験室規模（ミリリットル〜リットル規模）および工業的規模（立方メートル規模）での発酵に使用され得る。
【００２２】
発酵のために適した炭素源は、資化性の炭水化物および糖アルコール、例えばブドウ糖、乳糖、ショ糖、またはＤ−マンニトール、および炭水化物含有天然産物、例えば麦芽エキスまたは酵母エキスである。適した窒素含有栄養物は、アミノ酸；ペプチドおよび蛋白質、およびそれらの分解産物、例えばＰｒｏｂｉｏｎ Ｆ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １９８４，１９（１），２３−２８）、カゼイン、ペプトンまたはトリプトン；肉エキス；酵母エキス；グルテン；挽いた種子、例えばトウモロコシ、小麦、豆類、大豆または綿の種子；アルコール製造からの蒸留残渣；ミートミール；酵母エキス；アンモニウム塩；ナイトレート（nitrates）である。好ましくは、窒素源は、１つまたはそれ以上の合成的または生合成的に得られるペプチドである。無機塩は、例えば、アルカリ金属またはアルカリ土類金属、鉄、亜鉛、コバルトまたはマンガンの塩化物、炭酸塩、硫酸塩またはリン酸塩である。微量元素は、例えば、コバルトおよびマンガンである。
【００２３】
本発明の物質を形成するための適した条件は以下の通りである：本発明の物質の形成は、好ましくは、０．０５〜５％、好ましくは０．１〜２．５％のＰｒｏｂｉｏｎ Ｆ；０．０２〜１．０％、好ましくは０．０５〜０．５％のＣａＣｌ2×２Ｈ2Ｏ；０．０２〜１．５％、好ましくは０．０５〜０．７％のＭｇＳＯ4×７Ｈ2Ｏ、および０．００００１％〜０．００１％のシアノコラバミン、１〜５％の吸着樹脂ＸＡＤ−１６、または０．０５〜５％、好ましくは０．１〜２．５％のオートミール；０．２〜５．０％、好ましくは０．１〜２％のグリセリン；０．０２〜１．０％、好ましくは０．０５〜０．５％のＣａＣｌ2；０．０２〜１．５％、好ましくは０．０５〜０．７％のＭｇＳＯ4×７Ｈ2Ｏ、および０．００００１％〜０．００１％のシアノコバラミンのいずれかを含む培地中で進められる。各場合において、百分率のデータは、栄養溶液全体の質量に基づく。
【００２４】
微生物は、好気的に、すなわち、例えば、場合によっては空気または酸素を導入しながら、振とうフラスコもしくは発酵槽中振とうまたは撹拌しながら浸水形式（ｓｕｂｍｅｒｓｅ ｆｏｒｍ）で、または固形培地上で培養される。培養は約１８〜３５℃、好ましくは約２０〜３２℃、特に２７〜３０℃の温度範囲で行われ得る。ｐＨの範囲は４〜１０、好ましくは６．５〜９であるべきである。微生物は、一般に、こうした条件下で３〜１８日間、好ましくは１４４〜２１６時間培養される。有利には、培養は多数の段階で行われ、すなわち、最初に１つまたはそれ以上の前培養物が液体栄養培地中で調製され、次いで実際の生産培地、つまり本培養の培地中に、例えば体積比１：１０〜１：１００で植菌される。前培養物は、例えば栄養細胞または子実体の形態の株を栄養溶液中に植菌し、そして約３〜１３日間、好ましくは９６〜２４０時間増殖させることにより得られる。栄養細胞および／または子実体は、例えば、固形または液体の栄養培地、例えば、酵母寒天で株を約３〜１５日間、好ましくは７〜１０日間増殖させることにより得ることができる。
【００２５】
培地からの式（Ｉ）の物質の単離または精製は、天然物質の化学的、物理的および生物学的特性を考慮した公知の方法に従って行なわれる。培地中のまたは個々の単離段階でのそれぞれの誘導体の濃度を試験するために、ＨＰＬＣを使用した。
【００２６】
単離のために、培養ブロスは遠心分離および／または吸引フィルターに通して濾過される。菌子体はＸＡＤと共に凍結乾燥され、次いで天然物質は、有機溶媒、例えばメタノールまたは２−プロパノールを使用して凍結乾燥物から抽出される。有機溶媒相は本発明の天然物質を含有し；この相は場合によって、真空で濃縮され、そしてさらに精製される。
【００２７】
本発明の１つまたはそれ以上の化合物のさらなる精製は、適切な材料上で、好ましくは、例えばモレキュラーシーブ上で、シリカゲル上で、アルミナ上で、イオン交換体上でまたは吸着樹脂上でまたは逆相（ＲＰ）上でのクロマトグラフィーにより行なわれる。このクロマトグラフィーの助けによって、天然物質誘導体が分離される。本発明の化合物のクロマトグラフィーは、緩衝水溶液、または水溶液と有機溶液との混合物を使用して行なわれる。水溶液または有機溶液の混合物とは、０〜１００％の溶媒濃度で水と混和性の全ての有機溶媒、好ましくはメタノール、２−プロパノールおよびアセトニトリル、あるいは有機溶媒と混和性の全ての緩衝水溶液の意味として理解される。使用すべき緩衝液は上記に示したものと同じである。
【００２８】
極性の差に基づく本発明の化合物の分離は、逆相クロマトグラフィーを用いて、例えば、ＭＣＩ(R)（吸着樹脂、Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ、Ｊａｐａｎ）またはＡｍｂｅｒｌｉｔｅ ＸＡＤ(R)（ＴＯＳＯＨＡＡＳ）上で、または例えばＲＰ−８もしくはＲＰ−１８相のような別の疎水性材料上で行われる。さらに、分離は順相クロマトグラフィーを用いて、例えばシリカゲル、アルミナ上などで行われ得る。
【００２９】
天然物質誘導体のクロマトグラフィーは、好ましくは緩衝された、塩基性または酸性の水溶液またはアルコールもしくは他の水混和性有機溶媒と水溶液との混合物を使用して、当業者に公知の方法に従って行なわれた。アセトニトリルおよび／またはメタノールが有機溶媒として使用されるのに好ましい。
【００３０】
緩衝化した、塩基性または酸性の水溶液とは、例えば水、０．５Ｍまでの濃度におけるリン酸緩衝液、酢酸アンモニウム、ギ酸アンモニウム、クエン酸緩衝液、および好ましくは１％までの濃度におけるギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、アンモニア、トリエチルアミンまたは当業者に公知の市販の全ての酸および塩基の意味として理解される。緩衝化水溶液の場合、０．１％の酢酸アンモニウムが特に好ましい。
【００３１】
クロマトグラフィーは、例えば、水１００％に始まり溶媒１００％で終わるグラジエントを使用して行なわれ；好ましくは、５〜９５％のアセトニトリルの直線グラジエントで操作された。
【００３２】
あるいは、ゲルクロマトグラフィーまたは疎水性相上でのクロマトグラフィーをもまた行ない得る。ゲルクロマトグラフィーは、ポリアクリルアミドまたは混合ポリマーゲル、例えばＢｉｏｇｅｌ−Ｐ ２(R)（Ｂｉｏｒａｄ）またはＦｒａｃｔｏｇｅｌ ＴＳＫＨＷ４０(R)（Ｍｅｒｃｋ、Ｇｅｒｍａｎｙ）上で行なわれる。上記のクロマトグラフィーの順序は逆も可能である。
【００３３】
式（Ｉ）の化合物が立体異性体混合物として存在する場合、立体異性体は、公知の方法、例えばキラルカラムを用いる分離により分離され得る。
【００３４】
式（Ｉ）の化合物の３，５−ジクロロチロシンアミノ酸のＯＨ基［Ｒ３がＨである］のアシル基［Ｒ３がＣ（＝Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル）である］への誘導体化および／または式（Ｉ）の化合物の３−ヒドロキシバリンアミノ酸のＯＨ基［Ｒ４がＨである］のアシル基［Ｒ４がＣ（＝Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル）である］への誘導体化を、例えば塩基の存在下、酸塩化物との、または酸無水物との反応により、それ自体が公知である方法（Ｊ．Ｍａｒｃｈ，Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，第４編，１９９２）に従って行ない得る。
【００３５】
式（Ｉ）の化合物の３，５−ジクロロチロシンアミノ酸のＯＨ基［Ｒ３がＨである］のアルキル基［Ｒ３が（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルである］を用いるアルキル化および／または式（Ｉ）の化合物の３−ヒドロキシバリンアミノ酸のＯＨ基［Ｒ４がＨである］のアルキル基［Ｒ４が（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルである］を用いるアルキル化を、例えば塩基の存在下、（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルブロミドとの反応、またはメチル化の場合、ヨウ化メチルまたはＭｅ2ＳＯ4との反応により、それ自体が当業者に公知である方法（Ｊ．Ｍａｒｃｈ，Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，第４編，１９９２）により行ない得る。
【００３６】
保護基の導入のための当業者に自体公知の方法により、フェノール性ＯＨ基（Ｒ３＝Ｈ）と脂肪族ＯＨ基（Ｒ４＝Ｈ）の間の選択的差異化（selective differentiation）が行なわれる（Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ，Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，第３編，１９９９）。例えば、Ｐｅｔｔｕｓ ｅｔ ａｌ．（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２０００，１２２，６１６０−６１６８）は、Ｋ2ＣＯ3の存在下、アセトン中、（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルブロミドとの反応による、または（ＣＦ3ＣＯ）2ＯおよびＣｕＣｌ2水和物の存在下、ＤＢＵ中、（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル−ＯＨとの反応による第三級脂肪族アルコールの存在下でのフェノール性ＯＨ基の選択的アルキル化を記載する。ビス−アルキル化［Ｒ３およびＲ４が（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルである］された式（Ｉ）の化合物またはビス−アシル化［Ｒ３およびＲ４が（＝Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル）である］された式（Ｉ）の化合物の選択的脱保護のための当業者に自体公知の方法により、フェノール性ＯＨ基と脂肪族ＯＨ基との間のさらなる可能性ある差異化が行なわれる（Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ，Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，第３編，１９９９）。例えば、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２００１，６６，３６８８−３６９５）は、ＴＢＳ−保護第三級アルコールの存在下、−２０℃でのｔｅｒｔ−ブチルアンモニウムフルオリド（ＴＢＡＦ）によるｔｅｒｔ−ブチルシリル（ＴＢＳ）−保護フェノールの選択的脱保護を記載する。さらに、フェノール性ＯＨ基（Ｒ３＝Ｈ）は、Ｃｌ−［（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル］−ＣｌまたはＢｒ−［（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル］−Ｂｒの存在下、Ｈ2Ｎ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルとの反応により、基−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキレン−ＮＨ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルに誘導体化され得る。
【００３７】
式（Ｉ）の化合物（ここで、ＸとＹが基−Ｏ−を形成する）の式（Ｉ）の化合物（ここで、ＸおよびＹが互いに独立して、ＯＨ、Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル、ＮＨ2またはＮＨ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルである）への誘導体化は、例えば、エポキシド基と（Ｃ1−Ｃ6）−アルコラート［ＹがＯ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルである場合、ＸはＯＨであるか、またはＸがＯ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルである場合、ＹはＯＨである］、ＮＨ3［ＹがＮＨ2である場合、ＸはＯＨであるか、またはＸがＮＨ2である場合、ＹはＯＨである］、またはＨ2Ｎ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル［ＹがＮＨ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルである場合、ＸはＯＨであるか、またはＸがＮＨ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルである場合、ＹはＯＨである］との反応による当業者に自体公知の方法により行なわれる（Ｊ．Ｍａｒｃｈ，Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，第４編，１９９２）。
【００３８】
微生物株ＳＴ２０１１９６の単離物は、以下の番号で、２００３年９月１１日付けのＢｕｄａｐｅｓｔ Ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎの規則に従って、Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ［Ｇｅｒｍａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ］ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ），Ｍａｓｃｈｅｒｏｄｅｒ Ｗｅｇ １Ｂ，３８１２４ Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ，Ｇｅｒｍａｎｙに寄託された。以下の番号とは、寄託番号：ＤＳＭ１８８７０が指定された。
【００３９】
株ＳＴ２０１１９６（ＤＳＭ１８８７０）の栄養細胞は、特徴的な桿状（rodshape）を有する。固形栄養培地上で、ＳＴ２０１１９６（ＤＳＭ１８８７０）は円形の粘菌胞子を含む橙黄色の子実体を形成する。従って、株ＳＴ２０１１９６は、Ｍｙｘｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐ．として分類され得る。
【００４０】
株ＳＴ２０１１９６（ＤＳＭ１８８７０）の代わりに、１つまたはそれ以上の本発明の化合物を合成するこの株の突然変異株および／または変異株を使用することもまた可能である。
【００４１】
突然変異株は、ゲノムの１つまたはそれ以上の遺伝子が修飾されている微生物であり、ここで本発明の化合物を生産する生物体の能力に関与する１つまたは複数の遺伝子は機能的、かつ遺伝的に保持する。
【００４２】
この種の突然変異株は、物理的手段、例えば紫外線もしくはＸ線のような照射、または例えばメタンスルホン酸エチル（ＥＭＳ）；２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン（ＭＯＢ）もしくはＮ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（ＭＭＮＧ）のような化学的突然変異誘発物質によって、またはＢｒｏｃｋ ｅｔ ａｌ．「Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ」，Ｐｒｅｎｔｉｃｅ Ｈａｌｌ，ｐａｇｅ ２３８−２４７（１９８４）に記載されているように、自体公知の方法で産生され得る。
【００４３】
変異株は微生物の１つの表現型である。微生物は、その環境に適応する能力を有し、従って、顕著な生理学的適応性を示す。表現型適応の場合において、微生物の全ての細胞が関与し、修飾の性質は遺伝的に条件づけられておらず、修飾された条件下では可逆性である（Ｈ．Ｓｔｏｌｐ，Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｅｃｏｌｏｇｙ：ｏｒｇａｎｉｓｍｕｓ，ｈａｂｉｔａｔｓ，ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ．Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＧＢ，ｐａｇｅ １８０，１９８８）。
【００４４】
１つまたはそれ以上の本発明の化合物を合成する突然変異株および／または変異株のスクリーニングは、以下のスキームに従って行なわれる：
−発酵培地の凍結乾燥；
−有機溶媒を使用する凍結乾燥物の抽出；
−固相を使用する培養濾液からの化合物の抽出；
−ＨＰＬＣ、ＴＬＣによる、または生物活性の試験による分析。
【００４５】
記載した発酵条件は、ＳＴ２０１１９６（ＤＳＭ１８８７０）ならびにその突然変異株および／または変異株に当てはまる。
【００４６】
急増殖する好気性原因微生物の抗真菌活性を検出するために、ＣＬＳＩ（Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｍ７−Ａ７，Ｖｏｌ．２６，Ｎｏ．２）の手順に従うブイヨン希釈法（微量希釈）を使用する。ＩＣ50値を決定した。これは、試験生物カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）の増殖を５０％阻害するために必要な活性物質の濃度である。
【００４７】
式（ＩＩ）の化合物は、カンジダ・アルビカンスに対して０．０６μｇ／ｍｌのＩＣ50値を有する。式（ＩＶ）の化合物は、カンジダ・アルビカンスに対して０．４１μｇ／ｍｌのＩＣ50値を有する。
【００４８】
従って、本発明は、特に、真菌性疾患を治療および／または予防する人間医学または獣医学の薬剤としての、式（Ｉ）の化合物またはそれらの生理学的に許容される塩の使用に関する。好ましくは、本発明は、局所性および／または全身性真菌性疾患を治療するための、式（Ｉ）の化合物またはそれらの生理学的に許容される塩の使用に関する。
【００４９】
加えて、本発明は、少なくとも１種の式（Ｉ）の化合物を含有する薬剤に関し、ここで式（Ｉ）の１つまたは複数の化合物は、実質上それ自体で、または好ましくは、１つまたはそれ以上の通常の薬理学的に適したビヒクルまたは添加剤との混合物として投与され得る。
【００５０】
本発明の化合物は、固体状態でおよび２〜９、特に５〜７の範囲のｐＨの溶液中で安定であり、従って通常のガレヌス製剤中に組み込まれ得る。
【００５１】
本発明の薬剤は、経口的または非経口的に投与され得るが、直腸投与もまた原則として可能である。適切な固形または液体のガレヌス製剤の形態は、例えば顆粒剤、散剤、錠剤、コーティング錠剤、（マイクロ）カプセル剤、坐薬、シロップ剤、乳剤、懸濁剤、エアゾール剤、アンプル形態の滴剤または注射用液剤、および活性物質を持続放出する製剤であり、この製剤中で薬理学的に適切なビヒクルまたは添加剤、例えば崩壊剤、結合剤、コーティング剤、膨張剤、流動促進剤もしくは滑沢剤、着香添加物、甘味料または可溶化剤、例えば炭酸マグネシウム、二酸化チタン、乳糖、マンニトールおよび他の糖、タルク、乳タンパク質、ゼラチン、澱粉、ビタミン、セルロースおよびその誘導体、動物油もしくは植物油、ポリエチレングリコール、ならびに例えば滅菌水、アルコール、グリセロールおよび多価アルコールのような溶媒が通例使用される。
【００５２】
場合によっては、経口投与のための投薬単位は、放出を遅延またはより長期間延長させるために、例えば粒子形態の活性物質を適切なポリマー、ワックスなどでコーティングまたは埋め込むことにより、マイクロカプセル化され得る。
【００５３】
好ましくは、製薬学的製剤は、各単位が活性成分として特定の用量の１つまたはそれ以上の本発明の天然物質誘導体の化合物を含有する投薬単位に調製され、そして投与される。錠剤、カプセル剤および坐剤のような固形の投薬単位の場合において、この用量は、１日あたり約５００ｍｇまで、しかし好ましくは約０．１〜２００ｍｇ、そしてアンプル形態の注射液の場合において、約２００ｍｇまで、しかし好ましくは約０．５〜１００ｍｇであり得る。
【００５４】
投与すべき日用量は、哺乳動物の体重、年齢、性別および状態に依存する。しかし、特定の条件下で、より多いまたはより少ない日用量もまた適切であり得る。日用量の投与は、個々の投薬単位の形態の単回投与あるいは多数のより少ない投薬単位により、および細分された投与量の特定の間隔での反復投与の両方により行なわれ得る。
【００５５】
本発明の製剤は、場合により、１つまたはそれ以上の本発明の式（Ｉ）の化合物を１つまたはそれ以上の通常のビヒクルまたは添加剤と混合し、そして適切な投与形態にすることにより調製される。
【００５６】
以下の実施例は、決して本発明の範囲を限定することなしに、本発明をより詳細に説明するために役立つことを目的とする。
【００５７】
百分率は質量に関連する。液体の場合の混合比は、特に他に示されていない場合、体積に関連する。
【実施例】
【００５８】
実施例１：−１３５℃でのＳＴ２０１１９６（ＤＳＭ１８８７０）の保存
寒天平板（１％ 新鮮なパン酵母；１％ ＣａＣｌ2×２Ｈ2Ｏ；０．４７７％ ＨＥＰＥＳ（２０ｍＭ）；０．００００５％ シアノコバラミン；１．８％ 寒天；ｐＨ ７．２）に株ＳＴ２０１１９６（ＤＳＭ１８８７０）を植菌し、そして約７〜１０日間、３０℃でインキュベートした。滅菌スパチュラを使用して、この表面培養の細胞を寒天表面から掻き取り、クリオチューブ（ｃｒｙｏｔｕｂｅ）中のカジトン培地（１％ カジトン（Ｄｉｆｃｏ）；０．１５％ ＭｇＳＯ4×７Ｈ2Ｏ；ｐＨ ７．０）（１ｍｌ）に懸濁し、そして−１３５℃で保存した。
【００５９】
実施例２：−１９６℃でのＳＴ２０１１９６（ＤＳＭ１８８７０）の保存
寒天平板（１％ 新鮮なパン酵母；１％ ＣａＣｌ2×２ Ｈ2Ｏ；０．４７７％ ＨＥＰＥＳ（２０ｍＭ）；０．００００５％ シアノコバラミン；１．８％ 寒天；ｐＨ ７．２）に株ＳＴ２０１１９６（ＤＳＭ１８８７０）を植菌し、そして約７〜１０日間、３０℃でインキュベートした。滅菌スパチュラを使用して、この表面培養の細胞を寒天表面から掻き取り、クリオチューブ中のカジトン培地（１％ カジトン（Ｄｉｆｃｏ）；０．１５％ ＭｇＳＯ4×７Ｈ2Ｏ；ｐＨ ７．０）（１ｍｌ）に懸濁し、そして−１９６℃で保存した。
【００６０】
実施例３：エーレンマイヤーフラスコ中のＳＴ２０１１９６（ＤＳＭ１８８７０）の前培養物の調製
滅菌３００ｍｌエーレンマイヤーフラスコ中の栄養溶液（１％ 新鮮なパン酵母；１％ ＣａＣｌ2×２Ｈ2Ｏ；０．４７７％ ＨＥＰＥＳ（２０ｍＭ）；０．００００５％ シアノコバラミン；１．８％ 寒天；ｐＨ ７．２）（１００ｍｌ）に株ＳＴ２０１１９６（ＤＳＭ１８８７０）を植菌し、そして７日間、３０℃および１８０ｒｐｍのロータリーシェイカーでインキュベートした。各場合のこの前培養物（１０ｍｌ、１０％）を、続けて本培養の調製に使用した。
【００６１】
実施例４：培地１を使用する液体本培養ＳＴ２０１１９６（ＤＳＭ１８８７０）の調製
以下の栄養溶液（１％ Ｐｒｏｂｉｏｎ Ｆ；０．１％ ＣａＣｌ2×２Ｈ2Ｏ；０．２％ ＭｇＳＯ4×７Ｈ2Ｏ；０．００００５％ シアノコバラミン；２％ 吸着樹脂ＸＡＤ−１６、ｐＨ ８．４）（１００ｍｌ）を含む滅菌３００ｍｌエーレンマイヤーフラスコに前培養物（１０ｍｌ、１０％）（実施例３を参照のこと）または新しい寒天平板（１％ 新鮮なパン酵母；１％ ＣａＣｌ2×２Ｈ2Ｏ；０．４７７％ ＨＥＰＥＳ（２０ｍＭ）；０．００００５％ シアノコバラミン；１．８％ 寒天；ｐＨ ７．２）上で洗浄した培養物を植菌し、そして１８０ｒｐｍのシェーカーで、３０℃でインキュベートした。本発明の物質の最大産生が１４４〜２１６時間後に達成された。実施例３に記載されるような同じ栄養溶液の１４４〜１９６時間経過後の浸水培養物（ｓｕｂｍｅｒｓｅ ｃｕｌｔｕｒｅ）（植菌材料 １０％）が、１０〜２００Ｌの発酵槽に植菌するために十分であった。
【００６２】
実施例５：培地２を使用する液体本培養ＳＴ２０１１９６（ＤＳＭ１８８７０）の調製
以下の栄養溶液（１％ オートミール；０．５％ グリセリン；０．１％ ＣａＣｌ2×２Ｈ2Ｏ；０．２％ ＭｇＳＯ4×７Ｈ2Ｏ；０．００００５％ シアノコバラミン；２％ 吸着樹脂ＸＡＤ−１６、ｐＨ ９．０）（１００ｍｌ）を含む滅菌３００ｍｌエーレンマイヤーフラスコに前培養物（１０ｍｌ、１０％）（実施例３を参照のこと）または新しい寒天平板（１％ 新鮮なパン酵母；１％ ＣａＣｌ2×２Ｈ2Ｏ；０．４７７％ ＨＥＰＥＳ（２０ｍＭ）；０．００００５％ シアノコバラミン；１．８％ 寒天；ｐＨ ７．２）上で増殖させた培養物を植菌し、そして１８０ｒｐｍのシェーカーで、３０℃でインキュベートした。本発明の物質の最大産生が１４４〜２１６時間後に達成された。実施例３に記載されるような同じ栄養溶液の１４４〜１９６時間経過後の浸水培養物（植菌材料 １０％）が、１０〜２００Ｌの発酵槽に植菌するために十分であった。
【００６３】
実施例６：発酵槽中での本発明の物質の調製
１Ｌおよび５０Ｌの発酵槽を、以下の条件下で操作した：
植菌材料： ２０％
栄養培地： １％ オートミール；０．５％ グリセリン；０．１％ 酵母エキス；０．１％ ＣａＣｌ2×２Ｈ2Ｏ；０．２％ ＭｇＳＯ4×７Ｈ2Ｏ；０．００００５％ シアノコバラミン、２％ 吸着樹脂ＸＡＤ−１６
インキュベーション温度： ３０℃
撹拌スピード： ２００ｒｐｍ
通気： ０．６ｍ3／ｈ
ｐＨ調節： なし、滅菌前にＫＯＨによりｐＨ ７．６±０．３
ｐＯ2調節： なし
消泡添加剤： ０．０５％ デスモフェン（Ｂａｙｅｒ）
実行時間： １５５時間
ｐＨ調節は、１０％ ＫＯＨまたは１０％ Ｈ2ＳＯ4を使用して行なった。
【００６４】
実施例７：微生物株ＳＴ２０１１９６（ＤＳＭ１８８７０）の撹拌培養物からの化合物（ＩＩ）および（ＩＩＩ）の単離
微生物株ＳＴ２０１１９６（ＤＳＭ１８８７０）の発酵が完了した後、実施例４からの培養ブロス（培養ブロス６０Ｌ）を濾過した。ＸＡＤを含むバイオマスを凍結乾燥し、次いでメタノールで抽出した（４×５Ｌ）。メタノール抽出物を真空で８Ｌまで減らし、次いでＣＨＰ−２０Ｐ材料（ＭＣＩ(R) Ｇｅｌ、７５〜１５０μ、Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ
Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）（約３．０Ｌ）を充てんした分取用カラムに供した。１０％〜９５％のメタノールグラジエントを使用して溶離を行なった。カラム流れ（１２０ｍｌ／分）をフラクション（１Ｌフラクション）に集めた。フラクション１１〜１４を合わせ、溶媒をＲｏｔａｖａｐｏｒで除去し、次いでフラクションプールを凍結乾燥した（収量約０．９ｇ）。
【００６５】
実施例８：ＲＰ１８クロマトグラフィーによる化合物（ＩＩ）および（ＩＩＩ）の予備分離
実施例７からのフラクションプール１１〜１４をメタノール（１００ｍｌ）に溶解し、そしてＬｕｎａ(R) １０μ Ｃ１８（２）プレカラム（寸法：６０ｍｍ×２１．２ｍｍ）を有するＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ(R) １０μ Ｃ１８（２）カラム（寸法：２５０ｍｍ×５０ｍｍ）に供し、そして水中５％〜９５％アセトニトリル（０．１％ 酢酸アンモニウム、酢酸を使用してｐＨ ４．６に設定した）のグラジエントを使用して、４０分にわたって溶離した。流れは１９０ｍｌ／分であり、フラクションは１９０ｍｌの大きさであった。次いで、フラクション２８〜２９および３１をさらに後処理した。
【００６６】
実施例９：化合物（ＩＩ）の精製
実施例８からのフラクション３１を始めに凍結乾燥し（収量約９８ｍｇ）、次いでメタノール（５０ｍｌ）に溶解し、そしてＸＴｅｒｒａ(R) Ｐｒｅｐ ＭＳ Ｃ１８ １０μｍプレカラム（Ｗａｔｅｒｓ、寸法：１９×１０ｍｍ）を有するＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ(R) Ａｘｉａ ５μｍ Ｃ１８（２）カラム（寸法：１００ｍｍ×３０ｍｍ）でのＨＰＬＣを用いて再び精製した。水中５％〜９５％アセトニトリル（０．１％ 酢酸アンモニウムを添加し、酢酸を使用してｐＨ ４．６に設定した）のグラジエントを使用して、４０分にわたって溶離した。ＵＶに従ってカラム流れ（５０ｍｌ／分）をフラクションに集めた。フラクション４〜１４は式（ＩＩ）の化合物を含み、そして凍結乾燥後、３８ｍｇ（純度＞９５％）を得た。
【００６７】
実施例１０：式（ＩＩ）の化合物のキャラクタリゼーション
無色の固体、アセトニトリル／水から結晶
ＵＶ：２０８、２３２、２８６ｎｍ
ＥＳＩ−ＭＳ：ＭＷ＝８１５．３３１２
実験式：Ｃ42Ｈ55Ｃｌ2Ｎ3Ｏ9
比旋光度（ＭｅＯＨ）：−０．１９°、αD＝−３８°
【００６８】
【表１】
【００６９】
【表２】
【００７０】
実施例１１：化合物（ＩＩＩ）の精製
実施例８からのフラクション２８〜２９（３８０ｍｌ）を再びＸＴｅｒｒａ(R) Ｐｒｅｐ ＭＳ Ｃ１８ １０μｍプレカラム（Ｗａｔｅｒｓ、寸法：１９×１０ｍｍ）を有するＷａｔｅｒｓ ＸＴｅｒｒａ(R) １０μｍ Ｃ１８カラム（寸法：１００ｍｍ×３０ｍｍ）でのＨＰＬＣを用いて精製した。水中１０％〜９５％アセトニトリル（１０％ ギ酸を添加、ｐＨ＝２．０）のグラジエントを使用して、４０分にわたって溶離した。ＵＶに従ってカラム流れ（７０ｍｌ／分）をフラクションに集めた。フラクション４５〜４７は式（ＩＩＩ）の化合物を含み、そして凍結乾燥後、約５．４ｍｇ（純度＞５０％）を得た。
【００７１】
実施例１２：化合物（ＩＩＩ）のキャラクタリゼーション
無色の固体
ＵＶ：２０４、２３２、２８６ｎｍ
ＥＳＩ−ＭＳ：ＭＷ＝７９９．３００２
実験式：Ｃ42Ｈ56ＣｌＮ3Ｏ9
【００７２】
【表３】
【００７３】
【表４】
【００７４】
実施例１３：化合物（ＩＶ）の合成
化合物（ＩＩ）（８０ｍｇ、０．０９８ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（５ｍｌ）に溶解し、そして溶液を室温の炭酸カリウム（２７ｍｇ、０．１９６ｍｍｏｌ）およびヨウ化メチル（７０ｍｇ、０．４９０ｍｍｏｌ）で処理した。次いで、混合物を５０℃で１２時間撹拌した。溶液を濾過し、そしてＸＴｅｒｒａ(R) Ｐｒｅｐ ＭＳ Ｃ１８ １０μｍ プレカラム（Ｗａｔｅｒｓ、寸法：１９×１０ｍｍ）を有するＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ(R) Ａｘｉａ ５μｍ Ｃ１８（２）カラム（寸法：１００ｍｍ×３０ｍｍ）上でのＨＰＬＣを用いて精製した。水中５％〜９５％アセトニトリル（０．１％ 酢酸アンモニウムを添加し、酢酸を使用してｐＨ ４．６に合わせた）のグラジエントを使用して、４０分にわたって溶離した。ＵＶに従ってカラム流れ（５０ｍｌ／分）をフラクションに集めた。フラクション４および５は所望の式（ＩＶ）の化合物を含み、そして凍結乾燥後、５０ｍｇ（収率：６１％、純度＞９５％）を得た。
【００７５】
実施例１４：式（ＩＶ）の化合物のキャラクタリゼーション
【化５】
無色の固体、アセトニトリル／水から結晶
ＵＶ：２３５、２８６ｎｍ
ＭＷ＝８３０．８５
実験式：Ｃ43Ｈ57Ｃｌ2Ｎ3Ｏ9
【００７６】
【表５】
【００７７】
【表６】
【００７８】
実施例１５：化合物（Ｖ）および（ＶＩ）の合成
化合物（ＩＩ）（３０ｍｇ、０．０３７ｍｍｏｌ）を１，２−ジクロロエタン（１０ｍｌ）に溶解し、そして溶液を室温のイソブチルアミン（５００μｌ、５．０３ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を７０℃で４８時間撹拌し、次いで濾過し、そしてＸＴｅｒｒａ(R)
Ｐｒｅｐ ＭＳ Ｃ１８ １０μｍ プレカラム（Ｗａｔｅｒｓ、寸法：１９×１０ｍｍ）を有するＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ(R) Ａｘｉａ ５μｍ Ｃ１８（２）カラム（寸法：１００ｍｍ×３０ｍｍ）でのＨＰＬＣを用いて精製した。水中５％〜９５％アセトニトリル（０．１％ 酢酸アンモニウムを添加し、酢酸を使用してｐＨ ４．６に合わせた）のグラジエントを使用して、４０分にわたって溶離した。ＵＶに従ってカラム流れ（５０ｍｌ／分）をフラクションに集めた。フラクション７０は式（Ｖ）および（ＶＩ）の２つの化合物を含み、そして凍結乾燥後、２つの化合物（５５：４５の比率で３ｍｇ）を得た。
【００７９】
実施例１６：式（Ｖ）の化合物のキャラクタリゼーション
【化６】
ＭＷ＝８８９．９７
実験式：Ｃ46Ｈ66Ｃｌ2Ｎ4Ｏ9
【００８０】
【表７】
【００８１】
【表８】
【００８２】
実施例１７：式（ＶＩ）の化合物のキャラクタリゼーション
【化７】
ＭＷ＝９１６．００
実験式：Ｃ48Ｈ68Ｃｌ2Ｎ4Ｏ9
【００８３】
【表９】
【００８４】
【表１０】
【００８５】
実施例１８：カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）に対する抗真菌活性の測定
１０００μｇ／ｍｌの活性物質［例えば、式（ＩＩ）の化合物または式（ＩＶ）の化合物］のメタノール貯蔵液を調製した。試験株［カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）ＦＨ ２１７３］を−８０℃で保存した。新しい液体前培養から植菌材料を調製した。前培養物を−８０℃で保存した物質（１ビーズ）および栄養培地（サブローデキストロースブロス、Ｄｉｆｃｏ）（３０ｍｌ）から調製し、そして３７℃、１８０毎分回転数で、２４時間インキュベートした。試験容器に植菌した後、必要な数のコロニー形成単位に達するように、植菌材料を調整すべきである。そのために、植菌材料を５９０ｎｍの波長の光度計を用いて、１０7ＣＦＵ／ｍｌ（ＣＦＵ：コロニー形成単位）の値に調整した。植菌材料の調整後、懸濁液を栄養溶液（ミュラーヒントンブロス、Ｄｉｆｃｏ）で１：１００に希釈した。植菌材料の調製１５分以内で、マイクロタイタープレートに植菌した。表面培養を用いて正確なコロニー計数を測定した。活性物質および栄養培地（ミュラーヒントンブロス、Ｄｉｆｃｏ）の貯蔵液を使用して、連続希釈をマイクロタイタープレートで予め調製した。活性物質は２０μｌの体積で存在し、そして４０μｌの全試験体積が得られるように、２０μｌの植菌材料で処理した。次いで、植菌したマイクロタイタープレートを蓋で密閉し、そして３７℃、５％ ＣＯ2および９５％雰囲気湿度（atmospheric humidity）で２０時間インキュベートした。各試験について、活性物質を含まない対照、無菌対照、および基準物質として、シプロフロキサシンおよびナイスタチンを３８４ウェルマイクロタイタープレートで共試験した（ｃｏ−ｔｅｓｔ）。５９０ｎｍの波長の光度計を用いて吸収を測定することにより、マイクロタイタープレートを読み取った。次いで、標準処理に従って、試験生物カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）の増殖を５０％阻害するのに必要な活性物質の濃度として、連続希釈の値からＩＣ50値を計算した。
【００８６】
【表１１】
【００８７】
【表１２】
【００８８】
【表１３】
【００８９】
【表１４】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
［式中
ＸおよびＹが互いに独立して、ＯＨ、Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル、ＮＨ2もしくはＮＨ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルであるか、またはＸおよびＹが一緒になって基−Ｏ−を形成し、
Ｒ１およびＲ２が互いに独立して、ＣｌまたはＨであり、
Ｒ３がＨ、（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル、Ｃ（＝Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルまたは（Ｃ1−Ｃ6）−アルキレン−ＮＨ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルであり、そして
Ｒ４がＨ、（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルまたはＣ（＝Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルである］
の化合物、または式（Ｉ）の化合物の生理的に許容される塩。
【請求項２】
ＸおよびＹが一緒になって基−Ｏ−を形成する、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項３】
Ｒ３およびＲ４が互いに独立して、Ｈ、（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルまたはＣ（＝Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）アルキルである、請求項１または２に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項４】
ＸおよびＹが一緒になって基−Ｏ−を形成し、Ｒ１およびＲ２が互いに独立して、ＣｌまたはＨであり、そしてＲ３およびＲ４が互いに独立して、Ｈ、（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルまたはＣ（＝Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項５】
Ｒ１およびＲ２がＣｌである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項６】
Ｒ１がＣｌであり、そしてＲ２がＨである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項７】
Ｒ３およびＲ４がＨである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項８】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４がＨである、請求項１〜７のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項９】
薬剤を製造するための、請求項１〜８のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物またはそれらの生理的に許容される塩の使用。
【請求項１０】
真菌性疾患を治療および／または予防する薬剤を製造するための、請求項１〜８のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物またはそれらの生理的に許容される塩の使用。
【請求項１１】
少なくとも１つの請求項１〜８のいずれか１項に記載の式（I）の化合物を含有する薬剤。
【請求項１２】
式（Ｉ）：
【化２】
［式中
ＸおよびＹが互いに独立して、ＯＨ、Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル、ＮＨ2もしくはＮＨ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルであるか、またはＸおよびＹが一緒になって基−Ｏ−を形成し、
Ｒ１およびＲ２が互いに独立して、ＣｌまたはＨであり、
Ｒ３がＨ、（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル、Ｃ（＝Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルまたは（Ｃ1−Ｃ6）−アルキレン−ＮＨ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルであり、そして
Ｒ４がＨ、（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルまたはＣ（＝Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルである］
の化合物、または式（Ｉ）の化合物の生理学的に許容される塩の調製方法であって、
該方法は、
１．１つまたはそれ以上の式（Ｉ）の化合物が培地中に蓄積するまで、適切な条件下、Ｃｌ源を含む培地中で、株ＳＴ２０１１９６（ＤＳＭ１８８７０）、またはその変異株および／もしくは突然変異株の１つを発酵させ、そして
２．培地から式（Ｉ）の化合物を単離し、そして
３．場合により、式（Ｉ）の化合物を誘導体化および／または生理学的に許容される塩に変換することを含む、方法。
【請求項１３】
ＸおよびＹが一緒になって基−Ｏ−を形成し、Ｒ１およびＲ２が互いに独立して、ＣｌまたはＨであり、そしてＲ３およびＲ４が互いに独立して、Ｈ、（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルまたはＣ（＝Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルである、式（Ｉ）の化合物の請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
微生物株ＳＴ２０１１９６（ＤＳＭ１８８７０）。
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
［式中
ＸおよびＹが互いに独立して、ＯＨ、Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル、ＮＨ2もしくはＮＨ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルであるか、またはＸおよびＹが一緒になって基−Ｏ−を形成し、
Ｒ１およびＲ２が互いに独立して、ＣｌまたはＨであり、
Ｒ３がＨ、（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル、Ｃ（＝Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルまたは（Ｃ1−Ｃ6）−アルキレン−ＮＨ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルであり、そして
Ｒ４がＨ、（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルまたはＣ（＝Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルである］
の化合物、または式（Ｉ）の化合物の生理的に許容される塩。
【請求項２】
ＸおよびＹが一緒になって基−Ｏ−を形成する、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項３】
Ｒ３およびＲ４が互いに独立して、Ｈ、（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルまたはＣ（＝Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）アルキルである、請求項１または２に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項４】
ＸおよびＹが一緒になって基−Ｏ−を形成し、Ｒ１およびＲ２が互いに独立して、ＣｌまたはＨであり、そしてＲ３およびＲ４が互いに独立して、Ｈ、（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルまたはＣ（＝Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項５】
Ｒ１およびＲ２がＣｌである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項６】
Ｒ１がＣｌであり、そしてＲ２がＨである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項７】
Ｒ３およびＲ４がＨである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項８】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４がＨである、請求項１〜７のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項９】
薬剤を製造するための、請求項１〜８のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物またはそれらの生理的に許容される塩の使用。
【請求項１０】
真菌性疾患を治療および／または予防する薬剤を製造するための、請求項１〜８のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物またはそれらの生理的に許容される塩の使用。
【請求項１１】
少なくとも１つの請求項１〜８のいずれか１項に記載の式（I）の化合物を含有する薬剤。
【請求項１２】
式（Ｉ）：
【化２】
［式中
ＸおよびＹが互いに独立して、ＯＨ、Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル、ＮＨ2もしくはＮＨ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルであるか、またはＸおよびＹが一緒になって基−Ｏ−を形成し、
Ｒ１およびＲ２が互いに独立して、ＣｌまたはＨであり、
Ｒ３がＨ、（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル、Ｃ（＝Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルまたは（Ｃ1−Ｃ6）−アルキレン−ＮＨ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルであり、そして
Ｒ４がＨ、（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルまたはＣ（＝Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルである］
の化合物、または式（Ｉ）の化合物の生理学的に許容される塩の調製方法であって、
該方法は、
１．１つまたはそれ以上の式（Ｉ）の化合物が培地中に蓄積するまで、適切な条件下、Ｃｌ源を含む培地中で、株ＳＴ２０１１９６（ＤＳＭ１８８７０）、またはその変異株および／もしくは突然変異株の１つを発酵させ、そして
２．培地から式（Ｉ）の化合物を単離し、そして
３．場合により、式（Ｉ）の化合物を誘導体化および／または生理学的に許容される塩に変換することを含む、方法。
【請求項１３】
ＸおよびＹが一緒になって基−Ｏ−を形成し、Ｒ１およびＲ２が互いに独立して、ＣｌまたはＨであり、そしてＲ３およびＲ４が互いに独立して、Ｈ、（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルまたはＣ（＝Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルである、式（Ｉ）の化合物の請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
微生物株ＳＴ２０１１９６（ＤＳＭ１８８７０）。
【公表番号】特表２０１０−５３１８２３（Ｐ２０１０−５３１８２３Ａ）
【公表日】平成２２年９月３０日（２０１０．９．３０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５１３７２９（Ｐ２０１０−５１３７２９）
【出願日】平成２０年６月２０日（２００８．６．２０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００８／００４９７１
【国際公開番号】ＷＯ２００９／００３５９５
【国際公開日】平成２１年１月８日（２００９．１．８）
【出願人】（３９９０５０９０９）サノフィ−アベンティス (225)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年９月３０日（２０１０．９．３０）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年６月２０日（２００８．６．２０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００８／００４９７１
【国際公開番号】ＷＯ２００９／００３５９５
【国際公開日】平成２１年１月８日（２００９．１．８）
【出願人】（３９９０５０９０９）サノフィ−アベンティス (225)
【Ｆターム（参考）】
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