メラニン産生抑制剤及びメラニン産生抑制作用を有する医薬品、食品又は化粧料
【課題】「副作用の恐れがなく、安全で、かつ、優れたメラニン産生抑制剤」及び当該メラニン産生抑制剤を含有する「メラニン産生抑制作用を有する医薬品、食品又は化粧料」を提供する。
【解決手段】サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物、当該抽出物からのカラム分画成分又はジヒドロデヒドロコスツスラクトンを有効成分として含有するメラニン産生抑制剤。また、当該メラニン産生抑制剤を含有する、メラニン産生抑制作用を有する医薬品、食品又は化粧料。
【解決手段】サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物、当該抽出物からのカラム分画成分又はジヒドロデヒドロコスツスラクトンを有効成分として含有するメラニン産生抑制剤。また、当該メラニン産生抑制剤を含有する、メラニン産生抑制作用を有する医薬品、食品又は化粧料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、メラニン産生抑制剤及びメラニン産生抑制作用を有する医薬品、食品又は化粧料に関する。
【背景技術】
【０００２】
メラニンは皮膚のメラノサイトに存在するチロシナーゼの作用により、チロシンからドーパを経て酵素的あるいは非酵素的酸化反応を介して生成される。皮膚のシミ、ソバカスなどの色素沈着はホルモン分泌の異常や紫外線暴露により、メラニンが過剰に生成し皮膚に沈着することが原因であると考えられている。従来、シミ、ソバカスなどの色素沈着の予防や治療を目的とする美白剤（美白化粧料）には、ハイドロキノン、Ｌ−アスコルビン酸及びその誘導体、コウジ酸、アルブチン等が配合されている（例えば、特許文献１参照。）。
【０００３】
しかしながら、これらの物質は処方系中での安定性や溶解性が悪く、経時により変色したり澱が発生したりするものや、美白効果を認める濃度に配合すると安全性に問題を生じるものもあり、満足できるものではなかった。
【０００４】
一方、サウスレア（Saussurea）属に属する植物からの抽出物をコラーゲン産生促進剤としてあるいはエストロゲン様作用剤として皮膚化粧料に用いることが知られている（例えば、特許文献２参照。）。また、サウスレア（Saussurea）属に属する植物のうちサウスレア・ラニセプス（Saussurea laniceps Hand.-Mazz.）からの抽出物をチロシナーゼ阻害剤あるいはメラニン産生抑制剤として、美白化粧料に用いることも知られている（例えば、特許文献３参照。）。また、近年サウスレア（Saussurea）属に属する植物からの抽出物に対する研究の進展により、サウスレア（Saussurea）属に属する植物からの抽出物を化粧料に用いることも知られている（例えば、特許文献４及び５参照。）。
【０００５】
しかしながら、サウスレア（Saussurea）属に属する植物のうちサウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物、サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物から分画した所定の成分又はサウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）に含まれるジヒドロデヒドロコスツスラクトン（Dihydrodehydrocostuslactone）が顕著なメラニン産生抑制作用を有することは知られていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２００９−２５６３２６号公報
【特許文献２】特開２００１−３１６２４０号公報
【特許文献３】特許第３６５８５４８号公報
【特許文献４】特開２００４−３３１５４６号公報
【特許文献５】特開２００４−３３１５４７号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、「副作用の恐れがなく、安全で、かつ、顕著なメラニン産生抑制作用を有するメラニン産生抑制剤」を提供することを目的とする。また、当該メラニン産生抑制剤を含有する「メラニン産生抑制作用を有する医薬品、食品又は化粧料」を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者等は、メラニン産生抑制作用を有する物質につき鋭意研究の結果、従来、顕著なメラニン産生抑制作用を有することが知られていなかった「サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物」がメラニン産生抑制剤として有効であること、また、「サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物から分画した所定の成分」及び「ジヒドロデヒドロコスツスラクトン」もメラニン産生抑制剤として有効であることを見出し、本発明を完成させるに至った。本発明は、下記の事項より構成される。
【０００９】
［１］サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物を有効成分として含有するメラニン産生抑制剤。
【００１０】
［２］サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物を３０％（Ｖ／Ｖ）メタノールに溶解させた溶液を、多孔質ポリスチレン樹脂を担体とするカラムに通したときに、前記多孔質ポリスチレン樹脂に吸着される成分を有効成分として含有するメラニン産生抑制剤。
【００１１】
［３］サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物を３０％（Ｖ／Ｖ）メタノールに溶解させた溶液を、多孔質ポリスチレン樹脂を担体とするカラムに通し、その後、溶出用溶媒としての５０％（Ｖ／Ｖ）メタノールを前記カラムに通したときに、前記多孔質ポリスチレン樹脂に吸着される成分を有効成分として含有するメラニン産生抑制剤。
【００１２】
［４］サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物を３０％（Ｖ／Ｖ）メタノールに溶解させた溶液を、多孔質ポリスチレン樹脂を担体とするカラムに通し、その後、溶出用溶媒としての５０％（Ｖ／Ｖ）メタノールを前記カラムに通し、さらにその後、溶出用溶媒としてのメタノールを前記カラムに通したときに、前記メタノールにより前記カラムから溶出される成分を有効成分として含有するメラニン産生抑制剤。
【００１３】
［５］下記の式（１）で表されるジヒドロデヒドロコスツスラクトンを含有するメラニン産生抑制剤。
【化１】
【００１４】
［６］上記［１］に記載のメラニン産生抑制剤を含有する、メラニン産生抑制作用を有する医薬品、食品又は化粧料。
【００１５】
［７］上記［２］に記載のメラニン産生抑制剤を含有する、メラニン産生抑制作用を有する医薬品、食品又は化粧料。
【００１６】
［８］上記［３］に記載のメラニン産生抑制剤を含有する、メラニン産生抑制作用を有する医薬品、食品又は化粧料。
【００１７】
［９］上記［４］に記載のメラニン産生抑制剤を含有する、メラニン産生抑制作用を有する医薬品、食品又は化粧料。
【００１８】
［１０］上記［５］に記載のメラニン産生抑制剤を含有する、メラニン産生抑制作用を有する医薬品、食品又は化粧料。
【発明の効果】
【００１９】
本発明によれば、後述する試験例からも分かるように、「副作用の恐れがなく、安全で、かつ、顕著なメラニン産生抑制作用を有するメラニン産生抑制剤」及び「メラニン産生抑制作用を有する医薬品、食品又は化粧料」を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】実施形態１〜５を説明するために示すフローチャートである。
【図２】試料ｄ〜ｆ及び比較試料１の調製例を説明するために示すフローチャートである。
【図３】試験例（Ｂ１６マウスメラノーマ細胞に対するメラニン産生抑制作用）の結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
以下、本発明の「メラニン産生抑制剤」及び「メラニン産生抑制作用を有する医薬品、食品又は化粧料」を、実施形態に基づいてさらに詳細に説明する。
【００２２】
図１は、実施形態１〜５を説明するために示すフローチャートである。
本発明のメラニン産生抑制剤は、「サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物」、「サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物を３０％（Ｖ／Ｖ）メタノールに溶解させた溶液を、多孔質ポリスチレン樹脂を担体とするカラムに通したときに、多孔質ポリスチレン樹脂に吸着される成分」、「サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物を３０％（Ｖ／Ｖ）メタノールに溶解させた溶液を、多孔質ポリスチレン樹脂を担体とするカラムに通し、その後、５０％（Ｖ／Ｖ）メタノールをカラムに通したときに、多孔質ポリスチレン樹脂に吸着される成分」、「サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物を３０％（Ｖ／Ｖ）メタノールに溶解させた溶液を、多孔質ポリスチレン樹脂を担体とするカラムに通し、その後、５０％（Ｖ／Ｖ）メタノールをカラムに通し、さらにその後、メタノールをカラムに通したときに、メタノールによりカラムから溶出される成分を有効成分」又は「ジヒドロデヒドロコスツスラクトン」を有効成分として含有する（図１及び後述する図２参照。）。
以下、上記した各有効成分について、実施形態１〜５により説明する。
【００２３】
［実施形態１］
実施形態１に係るメラニン産生抑制剤は、「サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物」を有効成分として含有する（図１参照。）。
【００２４】
実施形態１に係るメラニン産生抑制剤において、「サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物」には、サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）から抽出処理によって得られる抽出液、該抽出液の希釈液もしくは濃縮液、該抽出液を乾燥して得られる乾燥物、又はこれらの粗精製物もしくは精製物のいずれもが含まれる。
【００２５】
抽出処理においては、抽出原料としてサウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）（中国名：新疆雪蓮（大苞雪蓮、天山雪蓮又は新疆雪蓮花と呼ぶこともある。）を使用する。抽出原料としては、全草を用いることができるが、地上部分を用いることが好ましい。
【００２６】
サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）は、主に中国の新疆自治区、四川省、崑崙山及びチベットの各省区等に分布するキク科の草本であり、これまでに関節リュウマチ、インポテンツ、月経不順、子宮出血、女性の下腹部の冷えと痛み、無色の帯下、腎虚及び雪盲に使用されており、創傷出血に外用できることが知れられていた。
サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）は中国の新疆自治区等で入手可能である。
【００２７】
抽出原料とするサウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）は、採取後ただちに乾燥し粉砕したものが適当である。乾燥は、天日で行ってもよいし、通常用いられる乾燥機を使用して行ってもよい。
【００２８】
抽出処理においては、抽出溶媒として極性溶媒を使用することが好ましい。メラニン産生抑制作用を有する成分は、極性溶媒を用いた抽出処理によって、サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）から容易に抽出することができる。
【００２９】
極性溶媒の具体例としては、水、水溶性有機溶媒等を例示でき、これらを単独で又は２種類以上を組み合わせて使用してもよい。抽出溶媒としては、これら極性溶媒のうち、水、水溶性有機溶媒又は含水水溶性有機溶媒を使用することが好ましい。
【００３０】
抽出溶媒として使用し得る水には、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等の他、これらに各種処理を施したものが含まれる。各種処理としては、例えば、加熱、殺菌、滅菌、ろ過、イオン交換等が含まれる。従って、本発明において抽出溶媒として使用し得る水には、熱水、イオン交換水等も含まれる。
また、抽出溶媒として、各種の水に浸透圧の調整、緩衝化等の処理をしたもの（生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等）を用いることもできる。
【００３１】
抽出溶媒として使用し得る水溶性有機溶媒としては、低級脂肪族アルコール、アセトン等を例示することができる。低級脂肪族アルコールの具体例としては、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等の一価アルコール、１,３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、１，３−プロパンジオール、ペンチレングリコール、イソプレングリコール等の多価アルコールを例示することができる。
【００３２】
２種以上の極性溶媒の混合液を抽出溶媒として使用する場合、その混合比は適宜調整することができる。例えば、抽出溶媒として含水水溶性有機溶媒を使用する場合、一価アルコール、多価アルコール、アセトン等を好ましくは５０重量％以上含有する含水水溶性有機溶媒を使用することができる。
【００３３】
抽出溶媒として、酢酸エチル、酢酸ブチル等の中間極性溶媒を使用してもよい。
【００３４】
なお、抽出溶媒としては、５０％（Ｖ／Ｖ）エタノール及び８０％（Ｖ／Ｖ）エタノールを好適に用いることができる。
【００３５】
抽出処理は、サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）に含まれる可溶性成分を抽出溶媒に溶出させ得る限り特に限定されず、常法に従って行うことができる。抽出処理の際には、特殊な抽出方法を採用する必要はなく、室温ないし還流加熱下において任意の装置を使用することができる。
【００３６】
抽出方法としては、抽出溶媒中に抽出原料を長時間常温で浸漬して抽出する方法や、抽出溶媒の沸点以下の温度に加熱し攪拌しながら抽出する方法、あるいは抽出溶媒の沸点付近で加熱還流下にて抽出する方法を例示することができる。この際、抽出溶媒量は、抽出原料の通常５〜５０倍量（重量比）、好ましくは５〜１５倍量（重量比）であり、抽出時間は、通常１〜１０時間、好ましくは１〜４時間であり、抽出温度は、通常５０〜９５℃、好ましくは８０〜９５℃である。
【００３７】
抽出処理の際、極性溶媒による抽出を行う前に、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、オクタン、石油エーテル等の非極性溶媒を用いた脱脂処理を施してもよく、かかる前処理を行うことにより、極性溶媒による抽出処理を効率良く行うことができる。
【００３８】
抽出処理により可溶性成分を溶出させた後、ろ過、遠心分離等の処理を施して抽出残渣を除くことにより抽出液を得ることができる。得られた抽出液は、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物を得るために、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。
【００３９】
サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物は特有の匂いと味を有するため、脱色、脱臭等を目的とする精製を行なってもよい。精製は、具体的には活性炭処理吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等によって行うことができ、これらの処理は、サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物におけるメラニン産生抑制作用の低下を招かない範囲で行う。
【００４０】
［実施形態２］
実施形態２に係るメラニン産生抑制剤は、「サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物を３０％（Ｖ／Ｖ）メタノールに溶解させた溶液を、多孔質ポリスチレン樹脂を担体とするカラムに通したときに、多孔質ポリスチレン樹脂に吸着される成分」を有効成分として含有する（図１参照。）。
【００４１】
「サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物」は、上記実施形態１に記載したような方法で得ることができる。
【００４２】
担体となる多孔質ポリスチレン樹脂としては、例えば、ダイヤイオン（三菱化学株式会社の登録商標）ＨＰ２０及びＨＰ２１や、セパビーズ（三菱化学株式会社の登録商標）ＳＰ８５０、ＳＰ７００及びＳＰ７０を挙げることができる。
【００４３】
なお、実施形態２において多孔質ポリスチレン樹脂に吸着される成分は、サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物を３０％（Ｖ／Ｖ）メタノールに溶解させた溶液をカラムに通した後に、比較的極性の低い溶媒をカラムに通すことで溶出することができる。当該成分の溶出に用いることができる溶媒としては、低級脂肪族アルコール、アセトン、酢酸エチル等の中間極性溶媒、ヘキサン等の非極性溶媒等を例示することができる。これら溶媒のうち、メタノールを特に好適に用いることができる。
【００４４】
本明細書においては、「サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物を３０％（Ｖ／Ｖ）メタノールに溶解させた溶液を、多孔質ポリスチレン樹脂を担体とするカラムに通したときに、多孔質ポリスチレン樹脂に吸着される成分」を「吸着成分」という。
また、「サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物を３０％（Ｖ／Ｖ）メタノールに溶解させた溶液を、多孔質ポリスチレン樹脂を担体とするカラムに通したときに、３０％（Ｖ／Ｖ）メタノールによりカラムから溶出される成分」を「非吸着成分」という。
【００４５】
［実施形態３］
実施形態３に係るメラニン産生抑制剤は、「サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物を３０％（Ｖ／Ｖ）メタノールに溶解させた溶液を、多孔質ポリスチレン樹脂を担体とするカラムに通し、その後、５０％（Ｖ／Ｖ）メタノールをカラムに通したときに、多孔質ポリスチレン樹脂に吸着される成分」を有効成分として含有する（図１参照。）。
【００４６】
「サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物」は、上記実施形態１に記載したような方法で得ることができる。
【００４７】
担体となる多孔質ポリスチレン樹脂としては、例えば、ダイヤイオン（三菱化学株式会社の登録商標）ＨＰ２０及びＨＰ２１や、セパビーズ（三菱化学株式会社の登録商標）ＳＰ８５０、ＳＰ７００及びＳＰ７０を挙げることができる。
【００４８】
なお、実施形態３において多孔質ポリスチレン樹脂に吸着される成分は、５０％（Ｖ／Ｖ）メタノールをカラムに通した後に、さらに極性が低い溶媒をカラムに通すことで溶出することができる。当該成分の溶出に用いることができる溶媒としては、低級脂肪族アルコール、アセトン、酢酸エチル等の中間極性溶媒、ヘキサン等の非極性溶媒等を例示することができる。これら溶媒のうち、メタノールを特に好適に用いることができる。
【００４９】
［実施形態４］
実施形態４に係るメラニン産生抑制剤は、「サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物を３０％（Ｖ／Ｖ）メタノールに溶解させた溶液を、多孔質ポリスチレン樹脂を担体とするカラムに通し、その後、５０％（Ｖ／Ｖ）メタノールをカラムに通し、さらにその後、メタノールをカラムに通したときに、メタノールによりカラムから溶出される成分」を有効成分として含有する（図１参照。）。
【００５０】
「サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物」は、上記実施形態１に記載したような方法で得ることができる。
【００５１】
担体となる多孔質ポリスチレン樹脂としては、例えば、ダイヤイオン（三菱化学株式会社の登録商標）ＨＰ２０及びＨＰ２１や、セパビーズ（三菱化学株式会社の登録商標）ＳＰ８５０、ＳＰ７００及びＳＰ７０を挙げることができる。
【００５２】
本明細書においては、「サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物を３０％（Ｖ／Ｖ）メタノールに溶解させた溶液を、多孔質ポリスチレン樹脂を担体とするカラムに通し、その後、５０％（Ｖ／Ｖ）メタノールをカラムに通し、さらにその後、メタノールをカラムに通したときに、メタノールによりカラムから溶出される成分」を「メタノール溶出画分」という。
【００５３】
［実施形態５］
実施形態５に係るメラニン産生抑制剤は、下記の式（１）で表されるジヒドロデヒドロコスツスラクトンを有効成分として含有する。
【化１】
【００５４】
ジヒドロデヒドロコスツスラクトンは、後述する調製例に示すように、サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物に含まれる（図１及び後述する図２参照。）。メラニン産生抑制剤に用いるジヒドロデヒドロコスツスラクトンとしては、サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物から分離したものを用いてもよいし、サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）以外の天然物であって、ジヒドロデヒドロコスツスラクトンを含有する天然物から分離したものを用いてもよいし、市販品や合成品を用いてもよい。
【００５５】
上記実施形態１〜５に係るメラニン産生抑制剤（つまり、本発明のメラニン産生抑制剤）は、メラニン産生抑制作用を通じて、シミ、ソバカスなどの色素沈着を予防、治療又は改善することが期待できる。
また、本発明のメラニン産生抑制剤は、伝承薬として長く使われている天然物に含まれる成分を有効成分として含有するため、「副作用の恐れがなく、安全なメラニン産生抑制剤」となる。また、本発明のメラニン産生抑制剤は、後述する試験例からわかるように、「顕著なメラニン産生抑制効果を有するメラニン産生抑制剤」となる。なお、本発明のメラニン産生抑制剤は、上記実施形態１〜５における有効成分のうちのいずれか１種を含有してもよいし、上記実施形態１〜５における有効成分のうち２種以上を含有してもよい。上記実施形態１〜５における有効成分のうち２種以上を含有する場合、それらの配合比は、それらの作用の程度に応じて適宜決定すればよい。
【００５６】
本発明のメラニン産生抑制剤は、当該メラニン産生抑制剤を含有する、メラニン産生抑制作用を有する医薬品、食品又は化粧料として用いることができる。
【００５７】
本発明の「メラニン産生抑制作用を有する内用医薬品」の投与経路としては、特に限定されないが、例えば、経口投与・直腸内投与等の経腸投与、経鼻投与などの粘膜投与、静脈内投与・皮下投与などの注射投与等をあげることができる。本発明の内用医薬品の剤型としては、いずれも投与方法に適した製剤の形態をとることができ、例えば錠剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、カプセル剤、粉末、丸剤、トローチ剤等の固形剤、溶液、懸濁剤、乳剤、シロップ剤、注射剤などの液剤、ゲル状の製剤などが挙げられる。本発明のメラニン産生抑制剤の純品、精製物、粗精製物等をそのまま投与しても良いが、薬理的に許容される賦形剤とともに投与しても良い。賦形剤としては、単糖類、二等類、多糖類、無機塩類、油脂、蒸留水など、製剤として一般に使用可能なものであればいずれも用いることができる。製剤化する際には、結合剤、滑沢剤、分散剤、懸濁剤、乳化剤、希釈剤、緩衝剤、抗酸化剤、細菌抑制剤等の添加剤を用いることもできる。
【００５８】
本発明の内用医薬品中のメラニン産生抑制剤の含有量は、製剤の形態・有効投与量・製剤としての投与量のデータに基づき、各投与形態に最適な量を設定することができる。
【００５９】
本発明の「メラニン産生抑制作用を有する食品」の形態としては、本発明のメラニン産生抑制剤の純品、これらの部分精製品、当該メラニン産生抑制剤を含有するペースト、当該メラニン産生抑制剤を配合した食品等が挙げられる。つまり、「メラニン産生抑制作用を有する食品」の形態としては、ドリンク剤、ゼリー、ビスケット、お茶、錠剤、丸剤、ソフトカプセル剤、ハードカプセル剤、散剤、細粒剤、顆粒剤等、通常食品として提供可能な形態であれば、いずれの形態も用いることができる。副原料として、賦形剤、結合剤、滑沢剤、分散剤、懸濁剤、乳化剤、希釈剤、緩衝剤、抗酸化剤、細菌抑制剤等の添加剤を用いることもできる。
【００６０】
本発明の「メラニン産生抑制作用を有する外用医薬品又は化粧料」の形態の例としては、特に限定されない。
【００６１】
外用医薬品の形態としては、例えば、軟膏剤、クリーム剤、発布剤、テープ剤、外用剤等があげられる。本発明の外用医薬品は、本発明のメラニン産生抑制剤に、必要に応じてその他の医薬成分を含有することができ、また、結合剤、分散剤、懸濁剤、乳化剤、希釈剤、緩衝剤、抗酸化剤、細菌抑制剤等の添加剤を用いても良い。
【００６２】
化粧料の形態としては、化粧水、美容液、乳液、クリーム、ジェル、パック、美容パウダー、洗顔フォーム、浴用剤等、外用剤・化粧料製剤として使用可能ないずれの形態も用いることができる。上記化粧料製剤には、本発明のメラニン産生抑制剤に加え、必要に応じて化粧料製剤に配合される成分を含有しても良い。配合成分としては、例えば、固形油、半固形油、液体油、低分子保湿剤、高分子保湿剤、脂溶性保湿剤、エモリエント剤、界面活性剤、防腐剤、酸化防止剤、ｐＨ調整剤、エタノール、水等をあげることができる。
【００６３】
本発明の医薬品、食品及び化粧料は、本発明のメラニン産生抑制剤が有するメラニン産生抑制作用を通じて、メラニン産生抑制作用を通じて、シミ、ソバカスなどの色素沈着を予防、治療又は改善することが期待できる。
また、本発明の医薬品、食品及び化粧料は、「副作用の恐れがなく、安全で、かつ、顕著なメラニン産生抑制作用を有するメラニン産生抑制剤」を含有するため、「副作用の恐れがなく、安全で、かつ、顕著なメラニン産生抑制作用を有する医薬品、食品又は化粧料」となる。
【００６４】
以下、「１．試料の調製例」及び「２．メラニン産生抑制作用の試験例」を挙げ、本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれらに何ら制約されるものではない。
【００６５】
１．試料の調製例
（調製例１）試料ａの調製例
調製例１は、サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）から精製水による抽出物（試料ａ（水抽出物））を得るための調製例である。
サウスレア（Saussurea）属に属する植物であるサウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）地上部分の粉砕物３０．３ｇに対して、４５０ｍＬ（ミリリットル）の精製水による加熱抽出（８０℃〜９０℃、２時間）を行った後、得られた溶液を濾過して（定性分析用２種濾紙（アドバンテック東洋株式会社より購入）を使用。）抽出液を得た。得られた抽出液に対して減圧濃縮及び凍結乾燥を順次行い、８．３ｇの試料ａ（水抽出物）を得た。固形収率は２７．３％であった。
【００６６】
（調製例２）試料ｂの調製例
調製例２は、サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）から５０％（Ｖ／Ｖ）エタノールによる抽出物（試料ｂ（５０％エタノール抽出物））を得るための調製例である。
サウスレア（Saussurea）属に属する植物であるサウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）地上部分の粉砕物３０．５ｇに対して、４５０ｍＬの５０％（Ｖ／Ｖ）エタノールによる加熱抽出（８０℃〜９０℃、２時間）を行った後、得られた溶液を濾過して（定性分析用２種濾紙（アドバンテック東洋株式会社より購入）を使用。）抽出液を得た。得られた抽出液に対して減圧濃縮及び凍結乾燥を順次行い、７．４ｇの試料ｂ（５０％エタノール抽出物）を得た。固形収率は２４．２％であった。
【００６７】
（調製例３）試料ｃの調製例
調製例３は、サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）から８０％（Ｖ／Ｖ）エタノールによる抽出物（試料ｃ（８０％エタノール抽出物））を得るための調製例である。
サウスレア（Saussurea）属に属する植物であるサウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）地上部分の粉砕物３０．７ｇに対して、４５０ｍＬの８０％（Ｖ／Ｖ）エタノールによる加熱抽出（８０℃〜９０℃、２時間）を行った後、得られた溶液を濾過して（定性分析用２種濾紙（アドバンテック東洋株式会社より購入）を使用。）抽出液を得た。得られた抽出液に対して減圧濃縮及び凍結乾燥を順次行い、５．４ｇの試料ｃ（８０％エタノール抽出物）を得た。固形収率は１７．５％であった。
【００６８】
（調製例４）試料ｄ〜ｆ及び比較試料１の調製例
図２は、試料ｄ〜ｆ及び比較試料１の調製例を説明するために示すフローチャートである。
調製例４は、サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）から、比較試料１（非吸着成分）、試料ｄ（吸着成分）、試料ｅ（メタノール溶出画分）及び試料ｆ（ジヒドロデヒドロコスツスラクトン）を得るための調製例である。当該調製例は、図２に示すフローに従って行った。
【００６９】
サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）地上部分の粉砕物４ｋｇに対して、４５Ｌの８０％（Ｖ／Ｖ）エタノールによる温浸抽出（８０℃、２時間）を２回行った後、得られた溶液を濾過して（定性分析用２種濾紙（アドバンテック東洋株式会社より購入）を使用。）抽出液を得た。さらに、当該抽出液を６０℃で減圧下に濃縮した後に乾燥（常温、１０時間）し、抽出物６８０ｇを得た。次に、抽出物を３０％（Ｖ／Ｖ）メタノール（３Ｌ、４０℃）に溶解させて溶液とし、当該溶液を、あらかじめ３０％（Ｖ／Ｖ）メタノールで平衡化したダイヤイオンＨＰ２０（１５００ｇ、三菱化学株式会社より購入）を担体として充填したカラムに通した。その後に、６Ｌの３０％（Ｖ／Ｖ）メタノールにより溶出を行い、当該３０％（Ｖ／Ｖ）メタノール溶出画分を非吸着成分（比較試料１）として回収した。続けて、７Ｌの５０％（Ｖ／Ｖ）メタノール、６Ｌのメタノール、５Ｌのエタノール、５Ｌの酢酸エチル及び５Ｌのヘキサンにより順次溶出を行い、それぞれ溶出画分を回収した。溶媒を除いて各溶出画分を乾固物とし、３９９ｇの非吸着成分（比較試料１）、３８ｇの５０％（Ｖ／Ｖ）メタノール溶出画分、１００ｇのメタノール溶出画分（試料ｅ）、２１ｇのエタノール溶出画分、１８ｇの酢酸エチル溶出画分及び０．１１ｇのヘキサン溶出画分を得た。非吸着成分以外の各溶出画分を合わせたものを吸着成分（試料ｄ）とし、非吸着成分以外の各溶出画分（つまり、吸着成分）の重量を合計したところ、１７７．１１ｇとなった。
【００７０】
このうち、メタノール溶出画分（試料ｅ）（１００ｇ）を、クロロホルム／メタノール／水を溶出溶媒とするシリカゲルカラムクロマトグラフィー（８０ｍｍφ×３５０ｍｍ、富士シリシア化学株式会社より購入）に付した。すなわち、溶出溶媒の比率を、９０：１０：０、４０：１０：１、３０：１０：１（いずれもクロロホルム：メタノール：水）と順次変化させながら溶出を行い、溶出液を１フラクションにつき１５０ｍＬずつ分取し、これらフラクションを合わせ、Ａ〜Ｈの８画分を得た。このうち、画分Ａ（溶出量：４５０ｍＬ〜１２００ｍＬ）を含有する溶出液から溶媒を除いて乾固物とし、４０．９ｇの画分Ａを得た。
次に、画分Ａ（４０．９ｇ）を、ヘキサン／アセトンを溶出溶媒とするシリカゲルカラムクロマトグラフィー（６０ｍｍφ×２５０ｍｍ、富士シリシア化学株式会社より購入）に付した。すなわち、溶出溶媒の比率を、９：１、６：１、４：１、２：１（いずれもヘキサン：アセトン）と順次変化させながら溶出を行い、溶出液を１フラクションにつき６０ｍＬずつ分取し、これらフラクションを合わせ、ＡＡ〜ＡＨの８画分を得た。このうち、画分ＡＢを含有する溶出液から溶媒を除いて乾固物とし、１３．１ｇの画分ＡＢ（溶出量：１８０ｍＬ〜６００ｍＬ）を得た。
さらに、画分ＡＢ（１３．１ｇ）を、メタノール／水を溶出溶媒とするＯＤＳシリカゲルカラムクロマトグラフィー（６０ｍｍφ×１５０ｍｍ、ナカライテスク株式会社より購入）に付した。すなわち、溶出溶媒の比率を７：３、８：２、９：１（いずれもメタノール：水）と順次変化させながら溶出を行い、溶出液を１フラクションにつき４０ｍＬずつ分取し、これらフラクションを合わせ、ＡＢ−１〜ＡＢ−１０の１０画分を得た。このうち、画分ＡＢ−３（溶出量：１２００ｍＬ〜１４４０ｍＬ）を含有する溶出液から溶媒を除いて乾固物とし、２．１ｇの画分ＡＢ−３を得た。
さらに、画分ＡＢ−３（２．１ｇ）を、ヘキサン／酢酸エチルを溶出溶媒とするシリカゲルカラムクロマトグラフィー（６０ｍｍφ×１５０ｍｍ、富士シリシア化学株式会社より購入）に付した。すなわち、溶出溶媒の比率を１９：１、９：１（いずれもヘキサン：酢酸エチル）と順次変化させながら溶出を行い、溶出液を１フラクションにつき４０ｍＬずつ分取し、ジヒドロデヒドロコスツスラクトンを含有する溶出液（溶出量：１２４０ｍＬ〜１５２０ｍＬ）を得た。当該溶出液から溶媒を除いて乾固物とし、１６１ｍｇのジヒドロデヒドロコスツスラクトン（試料ｆ）を得た。
【００７１】
上記方法により分画・単離されたジヒドロデヒドロコスツスラクトン（試料ｆ）について、核磁気共鳴スペクトル法により１Ｈ−ＮＭＲスペクトルデータ及び１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルデータを取得したところ、以下のピークが観測され、文献（ジャーナル オブ ナチュラル プロダクト（Journal of Natural Products） 第６２巻、２７ページ，１９９９年）の値と略一致した。なお、ジヒドロデヒドロコスツスラクトン（試料ｆ）の分子式はＣ１５Ｈ２０Ｏ２である。
【００７２】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ） δ：１．２３（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，Ｍｅ−１２）、１．３０（１Ｈ，ｍ，Ｈ−８）、１．８５（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２）、１．９４（２Ｈ，ｍ，Ｈ−２，Ｈ−７）、２．０４（１Ｈ，ｍ，Ｈ−９）、２．１０（１Ｈ，ｍ，Ｈ−３）、２．２１（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１１）、２．５０（３Ｈ，ｍ，Ｈ−３，Ｈ−８，Ｈ−９）、２．７９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．９，８．９Ｈｚ，Ｈ−５）、２．８７（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１）、３．９１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．３，９．３Ｈｚ，Ｈ−６）、４．７７（１Ｈ，ｂｒ ｓ，Ｈ−１５ａ）、４．８７（１Ｈ，ｂｒ ｓ，Ｈ−１５ｂ）、５．０４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，Ｈ−１４ａ）５．１９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，Ｈ−１４ｂ）．
【００７３】
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ） δ：１３．２２（Ｃ−１２）、３０．１７（Ｃ−２）、３２．４８（Ｃ−３，８）、３７．６５（Ｃ−９）、４２．０４（Ｃ−１１）、４７．０４（Ｃ−１）、４９．８５（Ｃ−７）、５１．９３（Ｃ−５）、８５．２８（Ｃ−６）、１０９．１５（Ｃ−１４）、１１１．８１（Ｃ−１５）、１４９．９４（Ｃ−１０）、１５１．７０（Ｃ−４）、１７８．７０（Ｃ−１３）．
【００７４】
また、上記方法により分画・単離されたジヒドロデヒドロコスツスラクトン（試料ｆ）について質量分析を行ったところ、以下のような結果となり、測定された質量が分子式から推定される質量と略一致した。
【００７５】
ＨＲ−ＥＳＩ−ＴＯＦ−ＭＳ ｍ/ｚ：２３３．１５５０［Ｍ＋Ｈ］＋ （Ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ１５Ｈ２０Ｏ２：２３３．１５４２）．
【００７６】
なお、上記において、ダイヤイオンＨＰ２０によるカラムクロマトグラフィー、シリカゲルカラムクロマトグラフィー及びＯＤＳシリカゲルカラムクロマトグラフィーは、汎用の実験器具及び実験装置を用いた。また、核磁気共鳴スペクトル装置としては、Bruker DRX-400型核磁気共鳴スペクトル装置（ブルカー・バイオスピン株式会社製）を用いた。質量分析装置としては、Waters-Micromass LCT質量分析装置（ウォーターズ社製）を用いた。
【００７７】
２．メラニン産生抑制作用の試験例
メラニン産生抑制作用の試験例は、Ｂ１６マウスメラノーマ細胞に対するメラニン産生抑制作用の測定をすることにより行った。
【００７８】
（ア）試験方法
培地としてダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ。ＧＩＢＣＯ−ＢＲＬより購入）に１０％（Ｖ／Ｖ）牛胎児血清（ＦＢＳ。ＧＩＢＣＯ−ＢＲＬより購入）を添加したもの（１０％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地）を使用し、Ｂ１６マウスメラノーマ細胞（Ｂ１６ ｍｅｌａｎｏｍａ ４Ａ５。理研バイオリソースセンターより購入）を３．５×１０５ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌとなるように６ウェルプレート（ＮＵＮＣより購入）に播種し、ＣＯ２ インキュベーター（３７℃、５％二酸化炭素、９５％空気）にて培養した。２４時間後、試料を所定濃度（２０μｇ／ｍＬ又は１０μｇ／ｍＬ）含有するように調整した１０ｎｍｏｌ／Ｌ α−ＭＳＨ（メラノサイト刺激ホルモン。ＳＩＧＭＡより購入）含有１０％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地に培地を交換し、さらに４８時間培養を行った。
試料としては、試料ａ（水抽出物。上記調製例１を参照。濃度２００μｇ／ｍＬ）、試料ｂ（５０％エタノール抽出物。上記調製例２を参照。濃度２００μｇ／ｍＬ）、試料ｃ（８０％エタノール抽出物。上記調製例３を参照。濃度２００μｇ／ｍＬ）、試料ｄ（吸着成分。上記調製例４を参照。濃度２０μｇ／ｍＬ）、試料ｅ（メタノール溶出画分。上記調製例４を参照。濃度２０μｇ／ｍＬ）及び試料ｆ（ジヒドロデヒドロコスツスラクトン。上記調製例４を参照。濃度２０μｇ／ｍＬ）を用い、それぞれについて試験を行った。また、比較のために、比較試料１（非吸着成分。上記調製例４を参照。濃度２００μｇ／ｍＬ）及び比較試料２（アルブチン（４−ヒドロキシフェニル−β−Ｄ−グルコピラノシド）。ＳＩＧＭＡより購入。濃度２０μｇ／ｍＬ）についても試験を行った。
【００７９】
次に、常法によりトリプシン処理を行い、各ウェルから細胞を回収した。その後、回収した細胞を１．５ｍＬマイクロチューブに移し、遠心分離（８００Ｇ、１０分）によりペレットを得た。当該ペレットに１ｍｏｌ／Ｌ ＮａＯＨ水溶液２００μＬを添加し、８０℃で１５分間加熱して溶解させ、波長４７５ｎｍにおける吸光度（ブランク：１ｍｏｌ／Ｌ ＮａＯＨ水溶液）を測定した。当該測定と同時に血球計算盤を用いてトリパンブルー非染の生細胞数をカウントして生細胞あたりのメラニン量として評価し、試料無添加の培地を用いた場合の生細胞あたりのメラニン量と比較することで相対メラニン量（試料無添加時における生細胞あたりのメラニン量を１００％としたときの指標）を算出した。
【００８０】
（イ）試験結果
試験結果を表１及び図３に示す。表１は、試験例（Ｂ１６マウスメラノーマ細胞に対するメラニン産生抑制作用）の結果を示す表である。図３は、試験例（Ｂ１６マウスメラノーマ細胞に対するメラニン産生抑制作用）の結果を示すグラフである。
［表１］
Ｂ１６マウスメラノーマ細胞における相対メラニン量
試料 濃度 相対メラニン量
試料ａ（水抽出物） ４０μｇ／ｍＬ ７９．５％
試料ｂ（５０％エタノール抽出物） ４０μｇ／ｍＬ ８２．２％
試料ｃ（８０％エタノール抽出物） ４０μｇ／ｍＬ ８４．７％
試料ｄ（吸着成分） ２０μｇ／ｍＬ ７６．６％
試料ｅ（メタノール溶出画分） ２０μｇ／ｍＬ ６７．６％
試料ｆ（ジヒドロデヒドロコスツスラクトン） １０μｇ／ｍＬ ７３．５％
比較試料１（非吸着成分） ２０μｇ／ｍＬ １０１．０％
比較試料２（アルブチン） ２０μｇ／ｍＬ ８０．３％
試料無添加（対照） − １００．０％
【００８１】
（ａ）試料ａ〜ｃについて
表１及び図３に示すように、サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からのいずれの抽出物（試料ａ〜ｃ）も、Ｂ１６マウスメラノーマ細胞に対してメラニン産生抑制作用を示すことが確認できた。
【００８２】
（ｂ）試料ｄについて
表１及び図３に示すように、試料ｄ（吸着成分）は、試料無添加及び比較試料１（非吸着成分）との比較からわかるように、明確なメラニン産生抑制作用を示すことが確認できた。また、試料ｄ（吸着成分）は、比較試料２（アルブチン）よりも高いメラニン産生抑制作用を示すことも確認できた。
【００８３】
（ｂ）試料ｅについて
表１及び図３に示すように、試料ｅ（メタノール溶出画分）は、試料ｄ（吸着成分）よりもさらに高いメラニン産生抑制作用を示すことが確認できた。
【００８４】
（ｃ）試料ｆについて
表１及び図３に示すように、試料ｆ（ジヒドロデヒドロコスツスラクトン）は、比較試料２（アルブチン）の濃度（２０μｇ／ｍＬ）よりも低い濃度（１０μｇ／ｍＬ）であっても、より高いメラニン産生抑制作用を示すことが確認できた。
【実施例】
【００８５】
実施例１．錠剤の作製
上記の「（調製例１）試料ａの調製例」に記載した方法に従って調製された水抽出物を用いて、次の処方で錠剤（１錠あたり５００ｍｇ）を作製する。
水抽出物（調製例１） １０ｍｇ
乳糖 ４７０ｍｇ
乾燥コーンスターチ １０ｍｇ
タルク ９ｍｇ
ステアリン酸カルシウム １ｍｇ
【００８６】
（調製法）
乳糖（９４ｇ）に、水抽出物（２ｇ）、乾燥コーンスターチ（２ｇ）、タルク（１．８ｇ）、ステアリン酸カルシウム（０．２ｇ）を添加して混合する。次いで、単発式打錠機を用いて常法により錠剤を作製する。
【００８７】
実施例２．ハードカプセル剤の作製
上記の「（調製例２）試料ｂの調製例」に記載した方法に従って調製された５０％エタノール抽出物を用いて、次の処方でハードカプセル剤（１カプセルあたり３６０ｍｇ）を作製する。
５０％エタノール抽出物（調製例２） ５ｍｇ
乳糖 ２２０ｍｇ
コーンスターチ １１０ｍｇ
ヒドロキシプロピルセルロース ２５ｍｇ
【００８８】
（調製法）
５０％エタノール抽出物（５ｇ）に、乳糖（２２０ｇ）及びコーンスターチ（１１０ｇ）を添加して混合し、これにヒドロキシプロピルセルロース（２５ｇ）の水溶液を添加して練合する。次いで、押し出し造粒機を用いて、常法により顆粒を製造する。この顆粒をゼラチンハードカプセルに充填することにより、ハードカプセル剤を作製する。
【００８９】
実施例３．ソフトカプセル剤の作製
上記の「（調製例３）試料ｃの調製例」に記載した方法に従って調製された８０％エタノール抽出物を用いて、次の処方でソフトカプセル剤（１カプセルあたり１７０ｍｇ）を作製する。
８０％エタノール抽出物（調製例３） ５ｍｇ
大豆油 １６５ｍｇ
【００９０】
（調製法）
大豆油（１６５ｇ）に、８０％エタノール抽出物（５ｇ）を添加して混合する。次いで、ロータリー・ダイ式自動成型機を用いて、常法に従い、ソフトカプセルに充填することにより、ソフトカプセル剤を作製する。
【００９１】
実施例４．丸剤の作製
上記の「（調製例４）試料ｄ〜ｆ及び比較試料１の調製例」に記載した方法に従って調製された吸着成分を用いて、次の処方で丸剤（１粒あたり１００ｍｇ）を作製する。
吸着成分（調製例４） ０．５ｍｇ
モロヘイヤ末 ２０．０ｍｇ
デンプン ３０．０ｍｇ
糖蜜 ２０．０ｍｇ
茶抽出物 １５．０ｍｇ
大豆ファイバー １４．０ｍｇ
セラック ０．５ｍｇ
【００９２】
（調製法）
上記配合で原料を混合し、適量加水後、練合機で均質な練合物を製造し、得られた練合物を圧延し製丸機を用いて製丸後乾燥して丸剤を作製する。
【００９３】
実施例５．ゼリーの作製
上記の「（調製例１）試料ａの調製例」に記載した方法に従って調製された水抽出物を用いて、次の処方で、常法によりゼリー（１００ｇ）を作製する。
水抽出物（調製例１） ０．０２ｇ
ゼラチン ２．００ｇ
オレンジ果汁 ２０．００ｇ
水 ７７．９８ｇ
【００９４】
（調製法）
上記成分を混合し、９０℃へ加熱する。ゼラチンの溶解を確認してから容器に充填し、冷却する。ゼラチンを固化することでゼリーを作製する。
【００９５】
実施例６．軟膏の作製
上記の「（調製例４）試料ｄ〜ｆ及び比較試料１の調製例」に記載した方法に従って調製されたジヒドロデヒドロコスツスラクトンを用いて、次の処方で、常法により軟膏（１００ｇ）を作製する。
（油相成分）
ジヒドロデヒドロコスツスラクトン（調製例４） ０．０１ｇ
白色ワセリン ２０．００ｇ
ミネラルオイル ２０．００ｇ
ステアリルアルコール ５．００ｇ
ステアレス−２ ３．００ｇ
プロピルパラベン ０．１０ｇ
天然ビタミンＥ ０．１０ｇ
（水相成分）
１，３−ブチレングリコール ５．００ｇ
フェノキシエタノール ０．４０ｇ
ポリソルベート ６０ ４．５０ｇ
精製水 適量
全量 １００ｇ
【００９６】
（調製法）
油相成分及び水相成分をそれぞれ８０℃に熱して均一にし、水相を油相に攪拌しながら加え、乳化後冷却し軟膏を作製した。
【００９７】
実施例７．テープ剤の作製
上記の「（調製例４）試料ｄ〜ｆ及び比較試料１の調製例」に記載した方法に従って調製されたメタノール溶出画分を用いて、次の処方で、常法によりテープ剤（１００ｇ）を作製する。
（粘着剤溶剤）
スチレン−イソプロピレン−スチレンブロック共重合体 ７．００ｇ
ピコライト ２５．００ｇ
イソプロピレンゴム ５．００ｇ
トルエン １５．００ｇ
酢酸エチル １４．２０ｇ
ヘキサン ２５．００ｇ
（薬効成分）
メタノール溶出画分（調製例４） ０．０１ｇ
エタノール ７．９９ｇ
（経皮吸収促進剤）
オレイルアルコール ０．８０ｇ
全量 １００ｇ
【００９８】
（調製法）
粘着剤溶剤及び薬効成分をそれぞれ均一にし、薬効成分及び経皮吸収促進剤を粘着剤溶剤に加え、室温で攪拌し組成物を作製した。この組成物をシリコーン処理したポリエステルフィルム上に延展し、１２０℃で乾燥させ冷却後、ポリエチレンフィルムへ粘着剤層を転写させ、テープ剤を作製する。
【００９９】
実施例８．ローションの作製
上記の「（調製例１）試料ａの調製例」に記載した方法に従って調製された水抽出物を用いて、次の処方で、常法によりローション（１００ｇ）を作製する。
（油相成分）
ポリオキシエチレン（６０モル）硬化ヒマシ油 ２．０ｇ
１，３−ブチレングリコール ５．０ｇ
（水相成分）
水抽出物（調製例１） ０．１ｇ
グリセリン ５．０ｇ
フェノキシエタノール ０．３ｇ
クエン酸 ０．１ｇ
クエン酸ナトリウム ０．２ｇ
エタノール ８．０ｇ
精製水 適量
全量 １００ｇ
【０１００】
（調製法）
油相成分及び水相成分をそれぞれ均一に溶解し、油相を水相に攪拌しながら加え、化粧水を作製する。
【０１０１】
実施例９．乳液の作製
上記の「（調製例２）試料ｂの調製例」に記載した方法に従って調製された５０％エタノール抽出物を用いて、次の処方で、常法により乳液（１００ｇ）を作製する。
ヤシ油 ８．００ｇ
エタノール ５．００ｇ
ベヘニルアルコール ０．５０ｇ
クエン酸 ０．１０ｇ
クエン酸ナトリウム ０．２０ｇ
５０％エタノール抽出物（調製例２） １．５０ｇ
１，３−ブチレングリコール ４．００ｇ
パラオキシ安息香酸エステル ０．１０ｇ
エデト酸２ナトリウム ０．０１ｇ
精製水 適量
全量 １００ｇ
【０１０２】
（調製法）
上記素材を攪拌・混合して乳液を作製する。
【０１０３】
実施例１０．美容液の作製
上記の「（調製例３）試料ｃの調製例」に記載した方法に従って調製された８０％エタノール抽出物を用いて、次の処方で、常法により美容液（１００ｇ）を作製する。
８０％エタノール抽出物（調製例３） １．５０ｇ
カルボキシビニルポリマー ０．５０ｇ
グリセリン ６．５０ｇ
１，３−ブチレングリコール ７．５０ｇ
フェノキシエタノール ０．３０ｇ
水酸化カリウム ０．２０ｇ
ヒアルロン酸ナトリウム ０．２５ｇ
スクワラン ０．５０ｇ
ビタミンＥアセテート ０．０５ｇ
ステアリン酸 ０．２０ｇ
精製水 適量
全量 １００ｇ
【０１０４】
（調製法）
上記素材を攪拌・混合・溶解して美容液を作製する。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、メラニン産生抑制剤及びメラニン産生抑制作用を有する医薬品、食品又は化粧料に関する。
【背景技術】
【０００２】
メラニンは皮膚のメラノサイトに存在するチロシナーゼの作用により、チロシンからドーパを経て酵素的あるいは非酵素的酸化反応を介して生成される。皮膚のシミ、ソバカスなどの色素沈着はホルモン分泌の異常や紫外線暴露により、メラニンが過剰に生成し皮膚に沈着することが原因であると考えられている。従来、シミ、ソバカスなどの色素沈着の予防や治療を目的とする美白剤（美白化粧料）には、ハイドロキノン、Ｌ−アスコルビン酸及びその誘導体、コウジ酸、アルブチン等が配合されている（例えば、特許文献１参照。）。
【０００３】
しかしながら、これらの物質は処方系中での安定性や溶解性が悪く、経時により変色したり澱が発生したりするものや、美白効果を認める濃度に配合すると安全性に問題を生じるものもあり、満足できるものではなかった。
【０００４】
一方、サウスレア（Saussurea）属に属する植物からの抽出物をコラーゲン産生促進剤としてあるいはエストロゲン様作用剤として皮膚化粧料に用いることが知られている（例えば、特許文献２参照。）。また、サウスレア（Saussurea）属に属する植物のうちサウスレア・ラニセプス（Saussurea laniceps Hand.-Mazz.）からの抽出物をチロシナーゼ阻害剤あるいはメラニン産生抑制剤として、美白化粧料に用いることも知られている（例えば、特許文献３参照。）。また、近年サウスレア（Saussurea）属に属する植物からの抽出物に対する研究の進展により、サウスレア（Saussurea）属に属する植物からの抽出物を化粧料に用いることも知られている（例えば、特許文献４及び５参照。）。
【０００５】
しかしながら、サウスレア（Saussurea）属に属する植物のうちサウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物、サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物から分画した所定の成分又はサウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）に含まれるジヒドロデヒドロコスツスラクトン（Dihydrodehydrocostuslactone）が顕著なメラニン産生抑制作用を有することは知られていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２００９−２５６３２６号公報
【特許文献２】特開２００１−３１６２４０号公報
【特許文献３】特許第３６５８５４８号公報
【特許文献４】特開２００４−３３１５４６号公報
【特許文献５】特開２００４−３３１５４７号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、「副作用の恐れがなく、安全で、かつ、顕著なメラニン産生抑制作用を有するメラニン産生抑制剤」を提供することを目的とする。また、当該メラニン産生抑制剤を含有する「メラニン産生抑制作用を有する医薬品、食品又は化粧料」を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者等は、メラニン産生抑制作用を有する物質につき鋭意研究の結果、従来、顕著なメラニン産生抑制作用を有することが知られていなかった「サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物」がメラニン産生抑制剤として有効であること、また、「サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物から分画した所定の成分」及び「ジヒドロデヒドロコスツスラクトン」もメラニン産生抑制剤として有効であることを見出し、本発明を完成させるに至った。本発明は、下記の事項より構成される。
【０００９】
［１］サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物を有効成分として含有するメラニン産生抑制剤。
【００１０】
［２］サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物を３０％（Ｖ／Ｖ）メタノールに溶解させた溶液を、多孔質ポリスチレン樹脂を担体とするカラムに通したときに、前記多孔質ポリスチレン樹脂に吸着される成分を有効成分として含有するメラニン産生抑制剤。
【００１１】
［３］サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物を３０％（Ｖ／Ｖ）メタノールに溶解させた溶液を、多孔質ポリスチレン樹脂を担体とするカラムに通し、その後、溶出用溶媒としての５０％（Ｖ／Ｖ）メタノールを前記カラムに通したときに、前記多孔質ポリスチレン樹脂に吸着される成分を有効成分として含有するメラニン産生抑制剤。
【００１２】
［４］サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物を３０％（Ｖ／Ｖ）メタノールに溶解させた溶液を、多孔質ポリスチレン樹脂を担体とするカラムに通し、その後、溶出用溶媒としての５０％（Ｖ／Ｖ）メタノールを前記カラムに通し、さらにその後、溶出用溶媒としてのメタノールを前記カラムに通したときに、前記メタノールにより前記カラムから溶出される成分を有効成分として含有するメラニン産生抑制剤。
【００１３】
［５］下記の式（１）で表されるジヒドロデヒドロコスツスラクトンを含有するメラニン産生抑制剤。
【化１】
【００１４】
［６］上記［１］に記載のメラニン産生抑制剤を含有する、メラニン産生抑制作用を有する医薬品、食品又は化粧料。
【００１５】
［７］上記［２］に記載のメラニン産生抑制剤を含有する、メラニン産生抑制作用を有する医薬品、食品又は化粧料。
【００１６】
［８］上記［３］に記載のメラニン産生抑制剤を含有する、メラニン産生抑制作用を有する医薬品、食品又は化粧料。
【００１７】
［９］上記［４］に記載のメラニン産生抑制剤を含有する、メラニン産生抑制作用を有する医薬品、食品又は化粧料。
【００１８】
［１０］上記［５］に記載のメラニン産生抑制剤を含有する、メラニン産生抑制作用を有する医薬品、食品又は化粧料。
【発明の効果】
【００１９】
本発明によれば、後述する試験例からも分かるように、「副作用の恐れがなく、安全で、かつ、顕著なメラニン産生抑制作用を有するメラニン産生抑制剤」及び「メラニン産生抑制作用を有する医薬品、食品又は化粧料」を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】実施形態１〜５を説明するために示すフローチャートである。
【図２】試料ｄ〜ｆ及び比較試料１の調製例を説明するために示すフローチャートである。
【図３】試験例（Ｂ１６マウスメラノーマ細胞に対するメラニン産生抑制作用）の結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
以下、本発明の「メラニン産生抑制剤」及び「メラニン産生抑制作用を有する医薬品、食品又は化粧料」を、実施形態に基づいてさらに詳細に説明する。
【００２２】
図１は、実施形態１〜５を説明するために示すフローチャートである。
本発明のメラニン産生抑制剤は、「サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物」、「サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物を３０％（Ｖ／Ｖ）メタノールに溶解させた溶液を、多孔質ポリスチレン樹脂を担体とするカラムに通したときに、多孔質ポリスチレン樹脂に吸着される成分」、「サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物を３０％（Ｖ／Ｖ）メタノールに溶解させた溶液を、多孔質ポリスチレン樹脂を担体とするカラムに通し、その後、５０％（Ｖ／Ｖ）メタノールをカラムに通したときに、多孔質ポリスチレン樹脂に吸着される成分」、「サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物を３０％（Ｖ／Ｖ）メタノールに溶解させた溶液を、多孔質ポリスチレン樹脂を担体とするカラムに通し、その後、５０％（Ｖ／Ｖ）メタノールをカラムに通し、さらにその後、メタノールをカラムに通したときに、メタノールによりカラムから溶出される成分を有効成分」又は「ジヒドロデヒドロコスツスラクトン」を有効成分として含有する（図１及び後述する図２参照。）。
以下、上記した各有効成分について、実施形態１〜５により説明する。
【００２３】
［実施形態１］
実施形態１に係るメラニン産生抑制剤は、「サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物」を有効成分として含有する（図１参照。）。
【００２４】
実施形態１に係るメラニン産生抑制剤において、「サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物」には、サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）から抽出処理によって得られる抽出液、該抽出液の希釈液もしくは濃縮液、該抽出液を乾燥して得られる乾燥物、又はこれらの粗精製物もしくは精製物のいずれもが含まれる。
【００２５】
抽出処理においては、抽出原料としてサウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）（中国名：新疆雪蓮（大苞雪蓮、天山雪蓮又は新疆雪蓮花と呼ぶこともある。）を使用する。抽出原料としては、全草を用いることができるが、地上部分を用いることが好ましい。
【００２６】
サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）は、主に中国の新疆自治区、四川省、崑崙山及びチベットの各省区等に分布するキク科の草本であり、これまでに関節リュウマチ、インポテンツ、月経不順、子宮出血、女性の下腹部の冷えと痛み、無色の帯下、腎虚及び雪盲に使用されており、創傷出血に外用できることが知れられていた。
サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）は中国の新疆自治区等で入手可能である。
【００２７】
抽出原料とするサウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）は、採取後ただちに乾燥し粉砕したものが適当である。乾燥は、天日で行ってもよいし、通常用いられる乾燥機を使用して行ってもよい。
【００２８】
抽出処理においては、抽出溶媒として極性溶媒を使用することが好ましい。メラニン産生抑制作用を有する成分は、極性溶媒を用いた抽出処理によって、サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）から容易に抽出することができる。
【００２９】
極性溶媒の具体例としては、水、水溶性有機溶媒等を例示でき、これらを単独で又は２種類以上を組み合わせて使用してもよい。抽出溶媒としては、これら極性溶媒のうち、水、水溶性有機溶媒又は含水水溶性有機溶媒を使用することが好ましい。
【００３０】
抽出溶媒として使用し得る水には、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等の他、これらに各種処理を施したものが含まれる。各種処理としては、例えば、加熱、殺菌、滅菌、ろ過、イオン交換等が含まれる。従って、本発明において抽出溶媒として使用し得る水には、熱水、イオン交換水等も含まれる。
また、抽出溶媒として、各種の水に浸透圧の調整、緩衝化等の処理をしたもの（生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等）を用いることもできる。
【００３１】
抽出溶媒として使用し得る水溶性有機溶媒としては、低級脂肪族アルコール、アセトン等を例示することができる。低級脂肪族アルコールの具体例としては、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等の一価アルコール、１,３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、１，３−プロパンジオール、ペンチレングリコール、イソプレングリコール等の多価アルコールを例示することができる。
【００３２】
２種以上の極性溶媒の混合液を抽出溶媒として使用する場合、その混合比は適宜調整することができる。例えば、抽出溶媒として含水水溶性有機溶媒を使用する場合、一価アルコール、多価アルコール、アセトン等を好ましくは５０重量％以上含有する含水水溶性有機溶媒を使用することができる。
【００３３】
抽出溶媒として、酢酸エチル、酢酸ブチル等の中間極性溶媒を使用してもよい。
【００３４】
なお、抽出溶媒としては、５０％（Ｖ／Ｖ）エタノール及び８０％（Ｖ／Ｖ）エタノールを好適に用いることができる。
【００３５】
抽出処理は、サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）に含まれる可溶性成分を抽出溶媒に溶出させ得る限り特に限定されず、常法に従って行うことができる。抽出処理の際には、特殊な抽出方法を採用する必要はなく、室温ないし還流加熱下において任意の装置を使用することができる。
【００３６】
抽出方法としては、抽出溶媒中に抽出原料を長時間常温で浸漬して抽出する方法や、抽出溶媒の沸点以下の温度に加熱し攪拌しながら抽出する方法、あるいは抽出溶媒の沸点付近で加熱還流下にて抽出する方法を例示することができる。この際、抽出溶媒量は、抽出原料の通常５〜５０倍量（重量比）、好ましくは５〜１５倍量（重量比）であり、抽出時間は、通常１〜１０時間、好ましくは１〜４時間であり、抽出温度は、通常５０〜９５℃、好ましくは８０〜９５℃である。
【００３７】
抽出処理の際、極性溶媒による抽出を行う前に、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、オクタン、石油エーテル等の非極性溶媒を用いた脱脂処理を施してもよく、かかる前処理を行うことにより、極性溶媒による抽出処理を効率良く行うことができる。
【００３８】
抽出処理により可溶性成分を溶出させた後、ろ過、遠心分離等の処理を施して抽出残渣を除くことにより抽出液を得ることができる。得られた抽出液は、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物を得るために、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。
【００３９】
サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物は特有の匂いと味を有するため、脱色、脱臭等を目的とする精製を行なってもよい。精製は、具体的には活性炭処理吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等によって行うことができ、これらの処理は、サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物におけるメラニン産生抑制作用の低下を招かない範囲で行う。
【００４０】
［実施形態２］
実施形態２に係るメラニン産生抑制剤は、「サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物を３０％（Ｖ／Ｖ）メタノールに溶解させた溶液を、多孔質ポリスチレン樹脂を担体とするカラムに通したときに、多孔質ポリスチレン樹脂に吸着される成分」を有効成分として含有する（図１参照。）。
【００４１】
「サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物」は、上記実施形態１に記載したような方法で得ることができる。
【００４２】
担体となる多孔質ポリスチレン樹脂としては、例えば、ダイヤイオン（三菱化学株式会社の登録商標）ＨＰ２０及びＨＰ２１や、セパビーズ（三菱化学株式会社の登録商標）ＳＰ８５０、ＳＰ７００及びＳＰ７０を挙げることができる。
【００４３】
なお、実施形態２において多孔質ポリスチレン樹脂に吸着される成分は、サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物を３０％（Ｖ／Ｖ）メタノールに溶解させた溶液をカラムに通した後に、比較的極性の低い溶媒をカラムに通すことで溶出することができる。当該成分の溶出に用いることができる溶媒としては、低級脂肪族アルコール、アセトン、酢酸エチル等の中間極性溶媒、ヘキサン等の非極性溶媒等を例示することができる。これら溶媒のうち、メタノールを特に好適に用いることができる。
【００４４】
本明細書においては、「サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物を３０％（Ｖ／Ｖ）メタノールに溶解させた溶液を、多孔質ポリスチレン樹脂を担体とするカラムに通したときに、多孔質ポリスチレン樹脂に吸着される成分」を「吸着成分」という。
また、「サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物を３０％（Ｖ／Ｖ）メタノールに溶解させた溶液を、多孔質ポリスチレン樹脂を担体とするカラムに通したときに、３０％（Ｖ／Ｖ）メタノールによりカラムから溶出される成分」を「非吸着成分」という。
【００４５】
［実施形態３］
実施形態３に係るメラニン産生抑制剤は、「サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物を３０％（Ｖ／Ｖ）メタノールに溶解させた溶液を、多孔質ポリスチレン樹脂を担体とするカラムに通し、その後、５０％（Ｖ／Ｖ）メタノールをカラムに通したときに、多孔質ポリスチレン樹脂に吸着される成分」を有効成分として含有する（図１参照。）。
【００４６】
「サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物」は、上記実施形態１に記載したような方法で得ることができる。
【００４７】
担体となる多孔質ポリスチレン樹脂としては、例えば、ダイヤイオン（三菱化学株式会社の登録商標）ＨＰ２０及びＨＰ２１や、セパビーズ（三菱化学株式会社の登録商標）ＳＰ８５０、ＳＰ７００及びＳＰ７０を挙げることができる。
【００４８】
なお、実施形態３において多孔質ポリスチレン樹脂に吸着される成分は、５０％（Ｖ／Ｖ）メタノールをカラムに通した後に、さらに極性が低い溶媒をカラムに通すことで溶出することができる。当該成分の溶出に用いることができる溶媒としては、低級脂肪族アルコール、アセトン、酢酸エチル等の中間極性溶媒、ヘキサン等の非極性溶媒等を例示することができる。これら溶媒のうち、メタノールを特に好適に用いることができる。
【００４９】
［実施形態４］
実施形態４に係るメラニン産生抑制剤は、「サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物を３０％（Ｖ／Ｖ）メタノールに溶解させた溶液を、多孔質ポリスチレン樹脂を担体とするカラムに通し、その後、５０％（Ｖ／Ｖ）メタノールをカラムに通し、さらにその後、メタノールをカラムに通したときに、メタノールによりカラムから溶出される成分」を有効成分として含有する（図１参照。）。
【００５０】
「サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物」は、上記実施形態１に記載したような方法で得ることができる。
【００５１】
担体となる多孔質ポリスチレン樹脂としては、例えば、ダイヤイオン（三菱化学株式会社の登録商標）ＨＰ２０及びＨＰ２１や、セパビーズ（三菱化学株式会社の登録商標）ＳＰ８５０、ＳＰ７００及びＳＰ７０を挙げることができる。
【００５２】
本明細書においては、「サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物を３０％（Ｖ／Ｖ）メタノールに溶解させた溶液を、多孔質ポリスチレン樹脂を担体とするカラムに通し、その後、５０％（Ｖ／Ｖ）メタノールをカラムに通し、さらにその後、メタノールをカラムに通したときに、メタノールによりカラムから溶出される成分」を「メタノール溶出画分」という。
【００５３】
［実施形態５］
実施形態５に係るメラニン産生抑制剤は、下記の式（１）で表されるジヒドロデヒドロコスツスラクトンを有効成分として含有する。
【化１】
【００５４】
ジヒドロデヒドロコスツスラクトンは、後述する調製例に示すように、サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物に含まれる（図１及び後述する図２参照。）。メラニン産生抑制剤に用いるジヒドロデヒドロコスツスラクトンとしては、サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物から分離したものを用いてもよいし、サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）以外の天然物であって、ジヒドロデヒドロコスツスラクトンを含有する天然物から分離したものを用いてもよいし、市販品や合成品を用いてもよい。
【００５５】
上記実施形態１〜５に係るメラニン産生抑制剤（つまり、本発明のメラニン産生抑制剤）は、メラニン産生抑制作用を通じて、シミ、ソバカスなどの色素沈着を予防、治療又は改善することが期待できる。
また、本発明のメラニン産生抑制剤は、伝承薬として長く使われている天然物に含まれる成分を有効成分として含有するため、「副作用の恐れがなく、安全なメラニン産生抑制剤」となる。また、本発明のメラニン産生抑制剤は、後述する試験例からわかるように、「顕著なメラニン産生抑制効果を有するメラニン産生抑制剤」となる。なお、本発明のメラニン産生抑制剤は、上記実施形態１〜５における有効成分のうちのいずれか１種を含有してもよいし、上記実施形態１〜５における有効成分のうち２種以上を含有してもよい。上記実施形態１〜５における有効成分のうち２種以上を含有する場合、それらの配合比は、それらの作用の程度に応じて適宜決定すればよい。
【００５６】
本発明のメラニン産生抑制剤は、当該メラニン産生抑制剤を含有する、メラニン産生抑制作用を有する医薬品、食品又は化粧料として用いることができる。
【００５７】
本発明の「メラニン産生抑制作用を有する内用医薬品」の投与経路としては、特に限定されないが、例えば、経口投与・直腸内投与等の経腸投与、経鼻投与などの粘膜投与、静脈内投与・皮下投与などの注射投与等をあげることができる。本発明の内用医薬品の剤型としては、いずれも投与方法に適した製剤の形態をとることができ、例えば錠剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、カプセル剤、粉末、丸剤、トローチ剤等の固形剤、溶液、懸濁剤、乳剤、シロップ剤、注射剤などの液剤、ゲル状の製剤などが挙げられる。本発明のメラニン産生抑制剤の純品、精製物、粗精製物等をそのまま投与しても良いが、薬理的に許容される賦形剤とともに投与しても良い。賦形剤としては、単糖類、二等類、多糖類、無機塩類、油脂、蒸留水など、製剤として一般に使用可能なものであればいずれも用いることができる。製剤化する際には、結合剤、滑沢剤、分散剤、懸濁剤、乳化剤、希釈剤、緩衝剤、抗酸化剤、細菌抑制剤等の添加剤を用いることもできる。
【００５８】
本発明の内用医薬品中のメラニン産生抑制剤の含有量は、製剤の形態・有効投与量・製剤としての投与量のデータに基づき、各投与形態に最適な量を設定することができる。
【００５９】
本発明の「メラニン産生抑制作用を有する食品」の形態としては、本発明のメラニン産生抑制剤の純品、これらの部分精製品、当該メラニン産生抑制剤を含有するペースト、当該メラニン産生抑制剤を配合した食品等が挙げられる。つまり、「メラニン産生抑制作用を有する食品」の形態としては、ドリンク剤、ゼリー、ビスケット、お茶、錠剤、丸剤、ソフトカプセル剤、ハードカプセル剤、散剤、細粒剤、顆粒剤等、通常食品として提供可能な形態であれば、いずれの形態も用いることができる。副原料として、賦形剤、結合剤、滑沢剤、分散剤、懸濁剤、乳化剤、希釈剤、緩衝剤、抗酸化剤、細菌抑制剤等の添加剤を用いることもできる。
【００６０】
本発明の「メラニン産生抑制作用を有する外用医薬品又は化粧料」の形態の例としては、特に限定されない。
【００６１】
外用医薬品の形態としては、例えば、軟膏剤、クリーム剤、発布剤、テープ剤、外用剤等があげられる。本発明の外用医薬品は、本発明のメラニン産生抑制剤に、必要に応じてその他の医薬成分を含有することができ、また、結合剤、分散剤、懸濁剤、乳化剤、希釈剤、緩衝剤、抗酸化剤、細菌抑制剤等の添加剤を用いても良い。
【００６２】
化粧料の形態としては、化粧水、美容液、乳液、クリーム、ジェル、パック、美容パウダー、洗顔フォーム、浴用剤等、外用剤・化粧料製剤として使用可能ないずれの形態も用いることができる。上記化粧料製剤には、本発明のメラニン産生抑制剤に加え、必要に応じて化粧料製剤に配合される成分を含有しても良い。配合成分としては、例えば、固形油、半固形油、液体油、低分子保湿剤、高分子保湿剤、脂溶性保湿剤、エモリエント剤、界面活性剤、防腐剤、酸化防止剤、ｐＨ調整剤、エタノール、水等をあげることができる。
【００６３】
本発明の医薬品、食品及び化粧料は、本発明のメラニン産生抑制剤が有するメラニン産生抑制作用を通じて、メラニン産生抑制作用を通じて、シミ、ソバカスなどの色素沈着を予防、治療又は改善することが期待できる。
また、本発明の医薬品、食品及び化粧料は、「副作用の恐れがなく、安全で、かつ、顕著なメラニン産生抑制作用を有するメラニン産生抑制剤」を含有するため、「副作用の恐れがなく、安全で、かつ、顕著なメラニン産生抑制作用を有する医薬品、食品又は化粧料」となる。
【００６４】
以下、「１．試料の調製例」及び「２．メラニン産生抑制作用の試験例」を挙げ、本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれらに何ら制約されるものではない。
【００６５】
１．試料の調製例
（調製例１）試料ａの調製例
調製例１は、サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）から精製水による抽出物（試料ａ（水抽出物））を得るための調製例である。
サウスレア（Saussurea）属に属する植物であるサウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）地上部分の粉砕物３０．３ｇに対して、４５０ｍＬ（ミリリットル）の精製水による加熱抽出（８０℃〜９０℃、２時間）を行った後、得られた溶液を濾過して（定性分析用２種濾紙（アドバンテック東洋株式会社より購入）を使用。）抽出液を得た。得られた抽出液に対して減圧濃縮及び凍結乾燥を順次行い、８．３ｇの試料ａ（水抽出物）を得た。固形収率は２７．３％であった。
【００６６】
（調製例２）試料ｂの調製例
調製例２は、サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）から５０％（Ｖ／Ｖ）エタノールによる抽出物（試料ｂ（５０％エタノール抽出物））を得るための調製例である。
サウスレア（Saussurea）属に属する植物であるサウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）地上部分の粉砕物３０．５ｇに対して、４５０ｍＬの５０％（Ｖ／Ｖ）エタノールによる加熱抽出（８０℃〜９０℃、２時間）を行った後、得られた溶液を濾過して（定性分析用２種濾紙（アドバンテック東洋株式会社より購入）を使用。）抽出液を得た。得られた抽出液に対して減圧濃縮及び凍結乾燥を順次行い、７．４ｇの試料ｂ（５０％エタノール抽出物）を得た。固形収率は２４．２％であった。
【００６７】
（調製例３）試料ｃの調製例
調製例３は、サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）から８０％（Ｖ／Ｖ）エタノールによる抽出物（試料ｃ（８０％エタノール抽出物））を得るための調製例である。
サウスレア（Saussurea）属に属する植物であるサウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）地上部分の粉砕物３０．７ｇに対して、４５０ｍＬの８０％（Ｖ／Ｖ）エタノールによる加熱抽出（８０℃〜９０℃、２時間）を行った後、得られた溶液を濾過して（定性分析用２種濾紙（アドバンテック東洋株式会社より購入）を使用。）抽出液を得た。得られた抽出液に対して減圧濃縮及び凍結乾燥を順次行い、５．４ｇの試料ｃ（８０％エタノール抽出物）を得た。固形収率は１７．５％であった。
【００６８】
（調製例４）試料ｄ〜ｆ及び比較試料１の調製例
図２は、試料ｄ〜ｆ及び比較試料１の調製例を説明するために示すフローチャートである。
調製例４は、サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）から、比較試料１（非吸着成分）、試料ｄ（吸着成分）、試料ｅ（メタノール溶出画分）及び試料ｆ（ジヒドロデヒドロコスツスラクトン）を得るための調製例である。当該調製例は、図２に示すフローに従って行った。
【００６９】
サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）地上部分の粉砕物４ｋｇに対して、４５Ｌの８０％（Ｖ／Ｖ）エタノールによる温浸抽出（８０℃、２時間）を２回行った後、得られた溶液を濾過して（定性分析用２種濾紙（アドバンテック東洋株式会社より購入）を使用。）抽出液を得た。さらに、当該抽出液を６０℃で減圧下に濃縮した後に乾燥（常温、１０時間）し、抽出物６８０ｇを得た。次に、抽出物を３０％（Ｖ／Ｖ）メタノール（３Ｌ、４０℃）に溶解させて溶液とし、当該溶液を、あらかじめ３０％（Ｖ／Ｖ）メタノールで平衡化したダイヤイオンＨＰ２０（１５００ｇ、三菱化学株式会社より購入）を担体として充填したカラムに通した。その後に、６Ｌの３０％（Ｖ／Ｖ）メタノールにより溶出を行い、当該３０％（Ｖ／Ｖ）メタノール溶出画分を非吸着成分（比較試料１）として回収した。続けて、７Ｌの５０％（Ｖ／Ｖ）メタノール、６Ｌのメタノール、５Ｌのエタノール、５Ｌの酢酸エチル及び５Ｌのヘキサンにより順次溶出を行い、それぞれ溶出画分を回収した。溶媒を除いて各溶出画分を乾固物とし、３９９ｇの非吸着成分（比較試料１）、３８ｇの５０％（Ｖ／Ｖ）メタノール溶出画分、１００ｇのメタノール溶出画分（試料ｅ）、２１ｇのエタノール溶出画分、１８ｇの酢酸エチル溶出画分及び０．１１ｇのヘキサン溶出画分を得た。非吸着成分以外の各溶出画分を合わせたものを吸着成分（試料ｄ）とし、非吸着成分以外の各溶出画分（つまり、吸着成分）の重量を合計したところ、１７７．１１ｇとなった。
【００７０】
このうち、メタノール溶出画分（試料ｅ）（１００ｇ）を、クロロホルム／メタノール／水を溶出溶媒とするシリカゲルカラムクロマトグラフィー（８０ｍｍφ×３５０ｍｍ、富士シリシア化学株式会社より購入）に付した。すなわち、溶出溶媒の比率を、９０：１０：０、４０：１０：１、３０：１０：１（いずれもクロロホルム：メタノール：水）と順次変化させながら溶出を行い、溶出液を１フラクションにつき１５０ｍＬずつ分取し、これらフラクションを合わせ、Ａ〜Ｈの８画分を得た。このうち、画分Ａ（溶出量：４５０ｍＬ〜１２００ｍＬ）を含有する溶出液から溶媒を除いて乾固物とし、４０．９ｇの画分Ａを得た。
次に、画分Ａ（４０．９ｇ）を、ヘキサン／アセトンを溶出溶媒とするシリカゲルカラムクロマトグラフィー（６０ｍｍφ×２５０ｍｍ、富士シリシア化学株式会社より購入）に付した。すなわち、溶出溶媒の比率を、９：１、６：１、４：１、２：１（いずれもヘキサン：アセトン）と順次変化させながら溶出を行い、溶出液を１フラクションにつき６０ｍＬずつ分取し、これらフラクションを合わせ、ＡＡ〜ＡＨの８画分を得た。このうち、画分ＡＢを含有する溶出液から溶媒を除いて乾固物とし、１３．１ｇの画分ＡＢ（溶出量：１８０ｍＬ〜６００ｍＬ）を得た。
さらに、画分ＡＢ（１３．１ｇ）を、メタノール／水を溶出溶媒とするＯＤＳシリカゲルカラムクロマトグラフィー（６０ｍｍφ×１５０ｍｍ、ナカライテスク株式会社より購入）に付した。すなわち、溶出溶媒の比率を７：３、８：２、９：１（いずれもメタノール：水）と順次変化させながら溶出を行い、溶出液を１フラクションにつき４０ｍＬずつ分取し、これらフラクションを合わせ、ＡＢ−１〜ＡＢ−１０の１０画分を得た。このうち、画分ＡＢ−３（溶出量：１２００ｍＬ〜１４４０ｍＬ）を含有する溶出液から溶媒を除いて乾固物とし、２．１ｇの画分ＡＢ−３を得た。
さらに、画分ＡＢ−３（２．１ｇ）を、ヘキサン／酢酸エチルを溶出溶媒とするシリカゲルカラムクロマトグラフィー（６０ｍｍφ×１５０ｍｍ、富士シリシア化学株式会社より購入）に付した。すなわち、溶出溶媒の比率を１９：１、９：１（いずれもヘキサン：酢酸エチル）と順次変化させながら溶出を行い、溶出液を１フラクションにつき４０ｍＬずつ分取し、ジヒドロデヒドロコスツスラクトンを含有する溶出液（溶出量：１２４０ｍＬ〜１５２０ｍＬ）を得た。当該溶出液から溶媒を除いて乾固物とし、１６１ｍｇのジヒドロデヒドロコスツスラクトン（試料ｆ）を得た。
【００７１】
上記方法により分画・単離されたジヒドロデヒドロコスツスラクトン（試料ｆ）について、核磁気共鳴スペクトル法により１Ｈ−ＮＭＲスペクトルデータ及び１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルデータを取得したところ、以下のピークが観測され、文献（ジャーナル オブ ナチュラル プロダクト（Journal of Natural Products） 第６２巻、２７ページ，１９９９年）の値と略一致した。なお、ジヒドロデヒドロコスツスラクトン（試料ｆ）の分子式はＣ１５Ｈ２０Ｏ２である。
【００７２】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ） δ：１．２３（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，Ｍｅ−１２）、１．３０（１Ｈ，ｍ，Ｈ−８）、１．８５（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２）、１．９４（２Ｈ，ｍ，Ｈ−２，Ｈ−７）、２．０４（１Ｈ，ｍ，Ｈ−９）、２．１０（１Ｈ，ｍ，Ｈ−３）、２．２１（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１１）、２．５０（３Ｈ，ｍ，Ｈ−３，Ｈ−８，Ｈ−９）、２．７９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．９，８．９Ｈｚ，Ｈ−５）、２．８７（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１）、３．９１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．３，９．３Ｈｚ，Ｈ−６）、４．７７（１Ｈ，ｂｒ ｓ，Ｈ−１５ａ）、４．８７（１Ｈ，ｂｒ ｓ，Ｈ−１５ｂ）、５．０４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，Ｈ−１４ａ）５．１９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，Ｈ−１４ｂ）．
【００７３】
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ） δ：１３．２２（Ｃ−１２）、３０．１７（Ｃ−２）、３２．４８（Ｃ−３，８）、３７．６５（Ｃ−９）、４２．０４（Ｃ−１１）、４７．０４（Ｃ−１）、４９．８５（Ｃ−７）、５１．９３（Ｃ−５）、８５．２８（Ｃ−６）、１０９．１５（Ｃ−１４）、１１１．８１（Ｃ−１５）、１４９．９４（Ｃ−１０）、１５１．７０（Ｃ−４）、１７８．７０（Ｃ−１３）．
【００７４】
また、上記方法により分画・単離されたジヒドロデヒドロコスツスラクトン（試料ｆ）について質量分析を行ったところ、以下のような結果となり、測定された質量が分子式から推定される質量と略一致した。
【００７５】
ＨＲ−ＥＳＩ−ＴＯＦ−ＭＳ ｍ/ｚ：２３３．１５５０［Ｍ＋Ｈ］＋ （Ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ１５Ｈ２０Ｏ２：２３３．１５４２）．
【００７６】
なお、上記において、ダイヤイオンＨＰ２０によるカラムクロマトグラフィー、シリカゲルカラムクロマトグラフィー及びＯＤＳシリカゲルカラムクロマトグラフィーは、汎用の実験器具及び実験装置を用いた。また、核磁気共鳴スペクトル装置としては、Bruker DRX-400型核磁気共鳴スペクトル装置（ブルカー・バイオスピン株式会社製）を用いた。質量分析装置としては、Waters-Micromass LCT質量分析装置（ウォーターズ社製）を用いた。
【００７７】
２．メラニン産生抑制作用の試験例
メラニン産生抑制作用の試験例は、Ｂ１６マウスメラノーマ細胞に対するメラニン産生抑制作用の測定をすることにより行った。
【００７８】
（ア）試験方法
培地としてダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ。ＧＩＢＣＯ−ＢＲＬより購入）に１０％（Ｖ／Ｖ）牛胎児血清（ＦＢＳ。ＧＩＢＣＯ−ＢＲＬより購入）を添加したもの（１０％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地）を使用し、Ｂ１６マウスメラノーマ細胞（Ｂ１６ ｍｅｌａｎｏｍａ ４Ａ５。理研バイオリソースセンターより購入）を３．５×１０５ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌとなるように６ウェルプレート（ＮＵＮＣより購入）に播種し、ＣＯ２ インキュベーター（３７℃、５％二酸化炭素、９５％空気）にて培養した。２４時間後、試料を所定濃度（２０μｇ／ｍＬ又は１０μｇ／ｍＬ）含有するように調整した１０ｎｍｏｌ／Ｌ α−ＭＳＨ（メラノサイト刺激ホルモン。ＳＩＧＭＡより購入）含有１０％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地に培地を交換し、さらに４８時間培養を行った。
試料としては、試料ａ（水抽出物。上記調製例１を参照。濃度２００μｇ／ｍＬ）、試料ｂ（５０％エタノール抽出物。上記調製例２を参照。濃度２００μｇ／ｍＬ）、試料ｃ（８０％エタノール抽出物。上記調製例３を参照。濃度２００μｇ／ｍＬ）、試料ｄ（吸着成分。上記調製例４を参照。濃度２０μｇ／ｍＬ）、試料ｅ（メタノール溶出画分。上記調製例４を参照。濃度２０μｇ／ｍＬ）及び試料ｆ（ジヒドロデヒドロコスツスラクトン。上記調製例４を参照。濃度２０μｇ／ｍＬ）を用い、それぞれについて試験を行った。また、比較のために、比較試料１（非吸着成分。上記調製例４を参照。濃度２００μｇ／ｍＬ）及び比較試料２（アルブチン（４−ヒドロキシフェニル−β−Ｄ−グルコピラノシド）。ＳＩＧＭＡより購入。濃度２０μｇ／ｍＬ）についても試験を行った。
【００７９】
次に、常法によりトリプシン処理を行い、各ウェルから細胞を回収した。その後、回収した細胞を１．５ｍＬマイクロチューブに移し、遠心分離（８００Ｇ、１０分）によりペレットを得た。当該ペレットに１ｍｏｌ／Ｌ ＮａＯＨ水溶液２００μＬを添加し、８０℃で１５分間加熱して溶解させ、波長４７５ｎｍにおける吸光度（ブランク：１ｍｏｌ／Ｌ ＮａＯＨ水溶液）を測定した。当該測定と同時に血球計算盤を用いてトリパンブルー非染の生細胞数をカウントして生細胞あたりのメラニン量として評価し、試料無添加の培地を用いた場合の生細胞あたりのメラニン量と比較することで相対メラニン量（試料無添加時における生細胞あたりのメラニン量を１００％としたときの指標）を算出した。
【００８０】
（イ）試験結果
試験結果を表１及び図３に示す。表１は、試験例（Ｂ１６マウスメラノーマ細胞に対するメラニン産生抑制作用）の結果を示す表である。図３は、試験例（Ｂ１６マウスメラノーマ細胞に対するメラニン産生抑制作用）の結果を示すグラフである。
［表１］
Ｂ１６マウスメラノーマ細胞における相対メラニン量
試料 濃度 相対メラニン量
試料ａ（水抽出物） ４０μｇ／ｍＬ ７９．５％
試料ｂ（５０％エタノール抽出物） ４０μｇ／ｍＬ ８２．２％
試料ｃ（８０％エタノール抽出物） ４０μｇ／ｍＬ ８４．７％
試料ｄ（吸着成分） ２０μｇ／ｍＬ ７６．６％
試料ｅ（メタノール溶出画分） ２０μｇ／ｍＬ ６７．６％
試料ｆ（ジヒドロデヒドロコスツスラクトン） １０μｇ／ｍＬ ７３．５％
比較試料１（非吸着成分） ２０μｇ／ｍＬ １０１．０％
比較試料２（アルブチン） ２０μｇ／ｍＬ ８０．３％
試料無添加（対照） − １００．０％
【００８１】
（ａ）試料ａ〜ｃについて
表１及び図３に示すように、サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からのいずれの抽出物（試料ａ〜ｃ）も、Ｂ１６マウスメラノーマ細胞に対してメラニン産生抑制作用を示すことが確認できた。
【００８２】
（ｂ）試料ｄについて
表１及び図３に示すように、試料ｄ（吸着成分）は、試料無添加及び比較試料１（非吸着成分）との比較からわかるように、明確なメラニン産生抑制作用を示すことが確認できた。また、試料ｄ（吸着成分）は、比較試料２（アルブチン）よりも高いメラニン産生抑制作用を示すことも確認できた。
【００８３】
（ｂ）試料ｅについて
表１及び図３に示すように、試料ｅ（メタノール溶出画分）は、試料ｄ（吸着成分）よりもさらに高いメラニン産生抑制作用を示すことが確認できた。
【００８４】
（ｃ）試料ｆについて
表１及び図３に示すように、試料ｆ（ジヒドロデヒドロコスツスラクトン）は、比較試料２（アルブチン）の濃度（２０μｇ／ｍＬ）よりも低い濃度（１０μｇ／ｍＬ）であっても、より高いメラニン産生抑制作用を示すことが確認できた。
【実施例】
【００８５】
実施例１．錠剤の作製
上記の「（調製例１）試料ａの調製例」に記載した方法に従って調製された水抽出物を用いて、次の処方で錠剤（１錠あたり５００ｍｇ）を作製する。
水抽出物（調製例１） １０ｍｇ
乳糖 ４７０ｍｇ
乾燥コーンスターチ １０ｍｇ
タルク ９ｍｇ
ステアリン酸カルシウム １ｍｇ
【００８６】
（調製法）
乳糖（９４ｇ）に、水抽出物（２ｇ）、乾燥コーンスターチ（２ｇ）、タルク（１．８ｇ）、ステアリン酸カルシウム（０．２ｇ）を添加して混合する。次いで、単発式打錠機を用いて常法により錠剤を作製する。
【００８７】
実施例２．ハードカプセル剤の作製
上記の「（調製例２）試料ｂの調製例」に記載した方法に従って調製された５０％エタノール抽出物を用いて、次の処方でハードカプセル剤（１カプセルあたり３６０ｍｇ）を作製する。
５０％エタノール抽出物（調製例２） ５ｍｇ
乳糖 ２２０ｍｇ
コーンスターチ １１０ｍｇ
ヒドロキシプロピルセルロース ２５ｍｇ
【００８８】
（調製法）
５０％エタノール抽出物（５ｇ）に、乳糖（２２０ｇ）及びコーンスターチ（１１０ｇ）を添加して混合し、これにヒドロキシプロピルセルロース（２５ｇ）の水溶液を添加して練合する。次いで、押し出し造粒機を用いて、常法により顆粒を製造する。この顆粒をゼラチンハードカプセルに充填することにより、ハードカプセル剤を作製する。
【００８９】
実施例３．ソフトカプセル剤の作製
上記の「（調製例３）試料ｃの調製例」に記載した方法に従って調製された８０％エタノール抽出物を用いて、次の処方でソフトカプセル剤（１カプセルあたり１７０ｍｇ）を作製する。
８０％エタノール抽出物（調製例３） ５ｍｇ
大豆油 １６５ｍｇ
【００９０】
（調製法）
大豆油（１６５ｇ）に、８０％エタノール抽出物（５ｇ）を添加して混合する。次いで、ロータリー・ダイ式自動成型機を用いて、常法に従い、ソフトカプセルに充填することにより、ソフトカプセル剤を作製する。
【００９１】
実施例４．丸剤の作製
上記の「（調製例４）試料ｄ〜ｆ及び比較試料１の調製例」に記載した方法に従って調製された吸着成分を用いて、次の処方で丸剤（１粒あたり１００ｍｇ）を作製する。
吸着成分（調製例４） ０．５ｍｇ
モロヘイヤ末 ２０．０ｍｇ
デンプン ３０．０ｍｇ
糖蜜 ２０．０ｍｇ
茶抽出物 １５．０ｍｇ
大豆ファイバー １４．０ｍｇ
セラック ０．５ｍｇ
【００９２】
（調製法）
上記配合で原料を混合し、適量加水後、練合機で均質な練合物を製造し、得られた練合物を圧延し製丸機を用いて製丸後乾燥して丸剤を作製する。
【００９３】
実施例５．ゼリーの作製
上記の「（調製例１）試料ａの調製例」に記載した方法に従って調製された水抽出物を用いて、次の処方で、常法によりゼリー（１００ｇ）を作製する。
水抽出物（調製例１） ０．０２ｇ
ゼラチン ２．００ｇ
オレンジ果汁 ２０．００ｇ
水 ７７．９８ｇ
【００９４】
（調製法）
上記成分を混合し、９０℃へ加熱する。ゼラチンの溶解を確認してから容器に充填し、冷却する。ゼラチンを固化することでゼリーを作製する。
【００９５】
実施例６．軟膏の作製
上記の「（調製例４）試料ｄ〜ｆ及び比較試料１の調製例」に記載した方法に従って調製されたジヒドロデヒドロコスツスラクトンを用いて、次の処方で、常法により軟膏（１００ｇ）を作製する。
（油相成分）
ジヒドロデヒドロコスツスラクトン（調製例４） ０．０１ｇ
白色ワセリン ２０．００ｇ
ミネラルオイル ２０．００ｇ
ステアリルアルコール ５．００ｇ
ステアレス−２ ３．００ｇ
プロピルパラベン ０．１０ｇ
天然ビタミンＥ ０．１０ｇ
（水相成分）
１，３−ブチレングリコール ５．００ｇ
フェノキシエタノール ０．４０ｇ
ポリソルベート ６０ ４．５０ｇ
精製水 適量
全量 １００ｇ
【００９６】
（調製法）
油相成分及び水相成分をそれぞれ８０℃に熱して均一にし、水相を油相に攪拌しながら加え、乳化後冷却し軟膏を作製した。
【００９７】
実施例７．テープ剤の作製
上記の「（調製例４）試料ｄ〜ｆ及び比較試料１の調製例」に記載した方法に従って調製されたメタノール溶出画分を用いて、次の処方で、常法によりテープ剤（１００ｇ）を作製する。
（粘着剤溶剤）
スチレン−イソプロピレン−スチレンブロック共重合体 ７．００ｇ
ピコライト ２５．００ｇ
イソプロピレンゴム ５．００ｇ
トルエン １５．００ｇ
酢酸エチル １４．２０ｇ
ヘキサン ２５．００ｇ
（薬効成分）
メタノール溶出画分（調製例４） ０．０１ｇ
エタノール ７．９９ｇ
（経皮吸収促進剤）
オレイルアルコール ０．８０ｇ
全量 １００ｇ
【００９８】
（調製法）
粘着剤溶剤及び薬効成分をそれぞれ均一にし、薬効成分及び経皮吸収促進剤を粘着剤溶剤に加え、室温で攪拌し組成物を作製した。この組成物をシリコーン処理したポリエステルフィルム上に延展し、１２０℃で乾燥させ冷却後、ポリエチレンフィルムへ粘着剤層を転写させ、テープ剤を作製する。
【００９９】
実施例８．ローションの作製
上記の「（調製例１）試料ａの調製例」に記載した方法に従って調製された水抽出物を用いて、次の処方で、常法によりローション（１００ｇ）を作製する。
（油相成分）
ポリオキシエチレン（６０モル）硬化ヒマシ油 ２．０ｇ
１，３−ブチレングリコール ５．０ｇ
（水相成分）
水抽出物（調製例１） ０．１ｇ
グリセリン ５．０ｇ
フェノキシエタノール ０．３ｇ
クエン酸 ０．１ｇ
クエン酸ナトリウム ０．２ｇ
エタノール ８．０ｇ
精製水 適量
全量 １００ｇ
【０１００】
（調製法）
油相成分及び水相成分をそれぞれ均一に溶解し、油相を水相に攪拌しながら加え、化粧水を作製する。
【０１０１】
実施例９．乳液の作製
上記の「（調製例２）試料ｂの調製例」に記載した方法に従って調製された５０％エタノール抽出物を用いて、次の処方で、常法により乳液（１００ｇ）を作製する。
ヤシ油 ８．００ｇ
エタノール ５．００ｇ
ベヘニルアルコール ０．５０ｇ
クエン酸 ０．１０ｇ
クエン酸ナトリウム ０．２０ｇ
５０％エタノール抽出物（調製例２） １．５０ｇ
１，３−ブチレングリコール ４．００ｇ
パラオキシ安息香酸エステル ０．１０ｇ
エデト酸２ナトリウム ０．０１ｇ
精製水 適量
全量 １００ｇ
【０１０２】
（調製法）
上記素材を攪拌・混合して乳液を作製する。
【０１０３】
実施例１０．美容液の作製
上記の「（調製例３）試料ｃの調製例」に記載した方法に従って調製された８０％エタノール抽出物を用いて、次の処方で、常法により美容液（１００ｇ）を作製する。
８０％エタノール抽出物（調製例３） １．５０ｇ
カルボキシビニルポリマー ０．５０ｇ
グリセリン ６．５０ｇ
１，３−ブチレングリコール ７．５０ｇ
フェノキシエタノール ０．３０ｇ
水酸化カリウム ０．２０ｇ
ヒアルロン酸ナトリウム ０．２５ｇ
スクワラン ０．５０ｇ
ビタミンＥアセテート ０．０５ｇ
ステアリン酸 ０．２０ｇ
精製水 適量
全量 １００ｇ
【０１０４】
（調製法）
上記素材を攪拌・混合・溶解して美容液を作製する。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物を有効成分として含有するメラニン産生抑制剤。
【請求項２】
サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物を３０％（Ｖ／Ｖ）メタノールに溶解させた溶液を、多孔質ポリスチレン樹脂を担体とするカラムに通したときに、前記多孔質ポリスチレン樹脂に吸着される成分を有効成分として含有するメラニン産生抑制剤。
【請求項３】
サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物を３０％（Ｖ／Ｖ）メタノールに溶解させた溶液を、多孔質ポリスチレン樹脂を担体とするカラムに通し、その後、５０％（Ｖ／Ｖ）メタノールを前記カラムに通したときに、前記多孔質ポリスチレン樹脂に吸着される成分を有効成分として含有するメラニン産生抑制剤。
【請求項４】
サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物を３０％（Ｖ／Ｖ）メタノールに溶解させた溶液を、多孔質ポリスチレン樹脂を担体とするカラムに通し、その後、５０％（Ｖ／Ｖ）メタノールを前記カラムに通し、さらにその後、メタノールを前記カラムに通したときに、前記メタノールにより前記カラムから溶出される成分を有効成分として含有するメラニン産生抑制剤。
【請求項５】
下記の式（１）で表されるジヒドロデヒドロコスツスラクトンを含有するメラニン産生抑制剤。
【化１】
【請求項６】
請求項１に記載のメラニン産生抑制剤を含有する、メラニン産生抑制作用を有する医薬品、食品又は化粧料。
【請求項７】
請求項２に記載のメラニン産生抑制剤を含有する、メラニン産生抑制作用を有する医薬品、食品又は化粧料。
【請求項８】
請求項３に記載のメラニン産生抑制剤を含有する、メラニン産生抑制作用を有する医薬品、食品又は化粧料。
【請求項９】
請求項４に記載のメラニン産生抑制剤を含有する、メラニン産生抑制作用を有する医薬品、食品又は化粧料。
【請求項１０】
請求項５に記載のメラニン産生抑制剤を含有する、メラニン産生抑制作用を有する医薬品、食品又は化粧料。
【請求項１】
サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物を有効成分として含有するメラニン産生抑制剤。
【請求項２】
サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物を３０％（Ｖ／Ｖ）メタノールに溶解させた溶液を、多孔質ポリスチレン樹脂を担体とするカラムに通したときに、前記多孔質ポリスチレン樹脂に吸着される成分を有効成分として含有するメラニン産生抑制剤。
【請求項３】
サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物を３０％（Ｖ／Ｖ）メタノールに溶解させた溶液を、多孔質ポリスチレン樹脂を担体とするカラムに通し、その後、５０％（Ｖ／Ｖ）メタノールを前記カラムに通したときに、前記多孔質ポリスチレン樹脂に吸着される成分を有効成分として含有するメラニン産生抑制剤。
【請求項４】
サウスレア・インボルクラタ（Saussurea involucrata (Kar.et Kir.) Sch.Blp.）からの抽出物を３０％（Ｖ／Ｖ）メタノールに溶解させた溶液を、多孔質ポリスチレン樹脂を担体とするカラムに通し、その後、５０％（Ｖ／Ｖ）メタノールを前記カラムに通し、さらにその後、メタノールを前記カラムに通したときに、前記メタノールにより前記カラムから溶出される成分を有効成分として含有するメラニン産生抑制剤。
【請求項５】
下記の式（１）で表されるジヒドロデヒドロコスツスラクトンを含有するメラニン産生抑制剤。
【化１】
【請求項６】
請求項１に記載のメラニン産生抑制剤を含有する、メラニン産生抑制作用を有する医薬品、食品又は化粧料。
【請求項７】
請求項２に記載のメラニン産生抑制剤を含有する、メラニン産生抑制作用を有する医薬品、食品又は化粧料。
【請求項８】
請求項３に記載のメラニン産生抑制剤を含有する、メラニン産生抑制作用を有する医薬品、食品又は化粧料。
【請求項９】
請求項４に記載のメラニン産生抑制剤を含有する、メラニン産生抑制作用を有する医薬品、食品又は化粧料。
【請求項１０】
請求項５に記載のメラニン産生抑制剤を含有する、メラニン産生抑制作用を有する医薬品、食品又は化粧料。
【図１】
【図２】
【図３】
【図２】
【図３】
【公開番号】特開２０１２−２０９６３（Ｐ２０１２−２０９６３Ａ）
【公開日】平成２４年２月２日（２０１２．２．２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−１５９９８３（Ｐ２０１０−１５９９８３）
【出願日】平成２２年７月１４日（２０１０．７．１４）
【出願人】（３９８０５０７７７）株式会社アルソア本社 (10)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２４年２月２日（２０１２．２．２）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年７月１４日（２０１０．７．１４）
【出願人】（３９８０５０７７７）株式会社アルソア本社 (10)
【Ｆターム（参考）】
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