モノアシルグリセリド及びジアシルグリセリド含有乳化剤の、酵素による製造方法
記載された、モノアシルグリセリド及びジアシルグリセリド含有乳化剤の酵素による製造方法の際には、第１の方法工程ａ）で、リン脂質成分及びトリアシルグリセリド成分からなる混合物を装入し、引き続き方法工程ｂ）で、このように得られた混合物に前記混合物の水含量が３〜１５質量％になるような量の（ホスホ）リパーゼ含有水溶液を添加する。引き続き、方法工程ｃ）で、前記工程から得られた混合物を２０〜８０℃の温度で、少なくとも２時間にわたって反応させ、かつ引き続きこの混合物を乾燥させる。粗ソーヤレシチン及び植物油及び／又は動物油が特に適した成分であることが判明し、これらを酵素成分であるリパーゼ及び／又はホスホリパーゼからなる混合物と共に反応させる。従来では通常である、有機溶剤、ポリオール又はイオン性添加物なしで、並びに少ない水割合で成功する前記方法を用いて、乳化剤が得られ、リゾリン脂質及びモノアシルグリセリド／ジアシルグリセリドからなる前記乳化剤の組成は狙いを定めて調整されてよく、前記乳化剤（これは液状でも得られる）は、食料品分野及び化粧品分野で使用される。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の詳細な説明
本発明の主題は、モノアシルグリセリド及びジアシルグリセリド含有乳化剤の、酵素による製造方法及びその使用である。
【０００２】
レシチン及びリゾレシチンは様々な適用において乳化剤として使用される。これらは食料品、化粧品、栄養補助剤及び化学製剤中で見出される。これらは一般的に、採油の副生成物として、例えば大豆又はナタネから採られるか、又は相応する原料、例えば卵黄から直接的に抽出される。レシチン及びリゾレシチンは大抵は、リン脂質（１，２−ジアシルグリセリンホスファート）、リゾリン脂質（リン脂質の加水分解誘導体として１−又は２−モノアシルグリセリンホスファート）、糖脂質、及びトリアシルグリセリドからなる複雑な混合物である。加工方法に応じて、終生成物中のその個々の分画の含量は激しく変動してよい。
【０００３】
粗レシチンは、規格化していないレシチンであり、例えばこれは、例えば植物油の精製の際に搾油機中で副生成物として生じる。油との表現は、精製又は未精製の植物油、部分的に又は完全に硬化した（水素化した）植物油又は動物脂を含み、これらの全ての主成分はトリアシルグリセリドである。
【０００４】
モノアシルグリセリド、ジアシルグリセリド、及びトリアシルグリセリドは、１つ、２つ、又は３つのアシル基を有し、これらは長鎖の、飽和の又は１つ又はそれ以上が不飽和の脂肪酸に由来する。有利にはアシル基は６〜３５つのＣ原子、特に１０〜３０つのＣ原子、更に有利には１２〜２６つのＣ原子を有する。モノアシルグリセリドは１−又は２−モノアシルグリセリドであってよく、ジグリセリドは１，２−又は１，３−ジアシルグリセリドであってよい。
【０００５】
リゾレシチンに関するより高い含量は、相応するリン脂質を相応するリゾリン脂質へと、１つ又は２つの脂肪酸残基を分離することによる、酵素による加水分解を用いて得られてよい。
【０００６】
「リゾレシチン」とは、本発明の関連においても、商業的な及び食料品上妥当な意味においても、酵素により部分的に加水分解された極性の脂質及び中性脂質からなる混合物が理解されるべきであり、これは少なくとも５６％のアセトン不溶性の割合を有する。アセトン不溶性はこの際、レシチンの食料品上妥当な評価のために考慮され、かつアセトン中に溶解しない、レシチン中の極性の脂質の割合を記す最も重要な分析パラメーターの１つである。
【０００７】
脂質及びリン脂質の、リパーゼ及びホスホリパーゼでの加水分解はよく記載されている（Ａｄｌｅｒｃｒｅｕｔｚ，Ｐａｔｒｉｃｋ，１９９４：“Ｅｎｚｙｍｅｃａｔａｌｙｚｅｄ ｌｉｐｉｄ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ”；Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ＆ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｒｅｖｉｅｗｓ １２，２３１−２５４）。
【０００８】
更に、多数の特許文献は同様に、リン脂質のリゾレシチンへの、酵素による加水分解を取り扱っている。
【０００９】
ＥＰ−Ａ ２６０５７３は、レシチンを水５〜３０質量％と混合し、カルシウム塩並びにレシチンを加水分解する酵素の存在下で、リゾレシチンへと反応させる、リゾレシチンの製造を記載する。
【００１０】
ＷＯ ９１／０３５６５では、有機溶媒中の単離したリン脂質の、固定化したリパーゼによる加水分解を教示し、その一方でＥＰ−Ａ ８７０８４０は、レシチン水溶液の、ホスホリパーゼでの加水分解を記載し、その際相応するリゾリン脂質は、溶媒抽出（アセトン）により随伴物から取り除かれる。
【００１１】
リゾレシチンの更なる製造方法はＪＰ １００４２８８４に記載されていて、ここではこの所望の生成物は、ホスホリパーゼＡ２を用いた、溶媒／水混合物中でのレシチンの加水分解により製造される。
【００１２】
ＷＯ ９７／２８２７０は、ホスホリパーゼＡ２を用いた、基質ホスファチジルコリンからのリゾホスファチジルコリンの製造方法を教示する。この反応は前記基質の分散液中で、モノアシルグリセリド、ジアシルグリセリド、ポリグリセロール−脂肪酸エステル、サッカロース−脂肪酸エステル、及びソルビタン−脂肪酸エステル並びにグリセリンのグループからの更なる試薬を用いて、水存在下で実施される。
【００１３】
レシチン及びリゾレシチンの他に、モノアシルグリセリド及びジアシルグリセリドも、エマルションの安定剤として作用する。これらは大抵、高温でのトリアシルグリセリドのアルカリけん化によって得られる。但しこれらは、前記の加水分解工程に引き続き、費用をかけて精製されなくてはならない。
【００１４】
ＷＯ ０２／１１５４３はモノアシルグリセリドのその他の製造方法を記載する。リパーゼを用いて、相応するトリアシルグリセリドから、４０％超がモノアシルグリセリドとしてポリオール／水混合物中で得られる。レシチンは脂と同様にこの場合、基質スペクトルの拡大のためのみに添加される。
【００１５】
通常は、前記モノアシルグリセリド及びジアシルグリセリドは、エマルションの安定化のために、リゾレシチンと組み合わせて、ベークド製品分野及びマーガリン分野で使用される。このために以前までは、前記単独成分は大抵は別々に製造され、精製され、かつこの所望の濃度で混合される。
【００１６】
ＷＯ ００／５２１９０は、水／ポリオール混合物中のレシチンの、リパーゼ及びホスホリパーゼの組み合わせの存在下での反応による、リゾ脂質、リゾリン脂質、モノアシルグリセリド、及びジアシルグリセリドの混合物の製造方法を記載する。この難点はこの場合、リゾホスファチジルコリン／ホスファチジルコリンの割合に関して８０％の反応率での、前記リン脂質の可能な限り完全な反応である。約６０％の前記反応溶液の高い水含量により、前記終生成物の獲得は、勿論高いエネルギー消費及び出費と結びついている。前記リゾレシチン／モノアシルグリセリド及びジアシルグリセリド割合の定義された調節はもっとも、前記方法によって可能ではなく、というのも前記リゾリン脂質割合は常に圧倒的であり、かつ前記モノアシルグリセリド割合は、前記グリセリンの添加によって、前記ジアシルグリセリド割合よりも常に大幅により多い結果になる。
【００１７】
但し、モノアシルグリセリド及びジアシルグリセリド並びにリゾリン脂質の前記割合は、安定化すべき生成物中で、そのつどの適用に依存して激しく変動してよい。従って、例えばマーガリンの安定化のために、モノアシルグリセリド／ジアシルグリセリド及びリゾレシチンは、１．７：１の割合で添加され、これに対して、ベークド製品の分野では、リゾレシチンの割合が上回っていて、前記の相応する混合物は０．４：１の割合で存在する。
【００１８】
前記の知識水準から出発して、本発明に対して、モノアシルグリセリド及びジアシルグリセリド含有乳化剤の酵素による製造方法であって、前記方法が、従来では通常である、カルシウム、ポリオール又は有機溶媒なしに、モノアシルグリセリド及びジアシルグリセリド並びにリゾリン脂質からなる混合物の安価な製造を可能にし、かつ前記方法が更に、前記モノアシルグリセリド及びジアシルグリセリド並びにリゾリン脂質の割合の柔軟な調節を、前記反応混合物の組成又は前記反応条件の変化によって可能にする、モノアシルグリセリド及びジアシルグリセリド含有乳化剤の酵素による製造方法を準備するという課題が提示される。
【００１９】
前記課題は、
ａ）リン脂質成分及びトリアシルグリセリド成分からなる混合物を装入し、
ｂ）前記方法工程ａ）からの混合物に、前記混合物の水含量が３〜１５質量％、特に５〜１２質量％になるような量の（ホスホ）リパーゼ含有水溶液を添加し、引き続き
ｃ）前記方法工程ｂ）から得られた混合物を２０〜８０℃の温度で、少なくとも２時間にわたって反応させ、かつ最後に
ｄ）この混合物を前記反応終了後に乾燥させる
相応する製造方法により解決された。
【００２０】
意外にも、リン脂質（レシチン）及びトリアシルグリセリド（油）の、リゾリン脂質及びモノアシルグリセリド並びにジアシルグリセリドへの、本発明による同時の反応の際に、このパラメーター、温度、インキュベーション時間、レシチンと油との割合、レシチンと水との割合、又は水と油との割合、又は／及び添加した酵素の量の選択により、前記反応生成物の組成は正確に調節されてよいことが判明した。従って、例えばレシチン対油の割合（これはアセトン不溶性の割合により定義される）を介して、リパーゼ及び一定の水割合での加水分解の際に、合計したモノアシルグリセリド／ジアシルグリセリド割合に関するモノアシルグリセリドの割合及び１，２−ジアシルグリセリドの割合を、１，３−ジアシルグリセリドの比較的一定な割合で、狙いを定めて調節することが可能である。又は、前記インキュベーション時間を介しても、例えば６０℃の温度で、水割合１０％を有する粗レシチン／油の混合物（アセトン不溶性割合５０％を有する）中の、リパーゼ０．０５質量％により、合計したモノアシルグリセリド／ジアシルグリセリド割合に関するモノアシルグリセリドの割合及び１，３−ジアシルグリセリドの割合を変化させてよく、その際合計したモノアシルグリセリド／ジアシルグリセリド含量に関して、１，２−ジアシルグリセリド割合は比較的一定のままである。この利点は、この程度において、本方法の実施の単純さの考慮下では期待されるものでない。
【００２１】
リン脂質成分として、本発明によりレシチン、有利には粗レシチンが特に適することが判明し、その際粗ソーヤレシチンが特に有利であると判断されたい。
【００２２】
植物油及び／又は動物油、有利には精製し、かつ／又は少なくとも部分的に硬化させた状態にある植物油及び／又は動物油が、本発明の枠内において、前記方法工程ａ）で装入される、トリアシルグリセリド成分の特に適した代表である。
【００２３】
本方法の実施に関しては、特別な実施態様において、前記方法工程ａ）で、リン脂質成分割合１０〜８０質量％及び／又はトリアシルグリセリド成分割合２０〜９０質量％を有する混合物を装入してよい。前記のリン脂質成分割合とトリアシルグリセリド成分割合との質量割合は、有利には１：０．２５〜１：４である。
【００２４】
一般的に、前記方法工程ａ）は、特別な限定を受けないが、但し特定の条件下では、前記方法工程ａ）で前記混合物を３５〜６０℃の温度にさせることが有利であってよく、本発明はこれを同様に考慮する。
【００２５】
工程ｂ）に関しては、微生物由来のリパーゼ及び／又はホスホリパーゼ、有利にはＣａｎｄｉｄａ及び／又はＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓからのリパーゼ及び／又はホスホリパーゼを使用する場合に有利であると判断されたい。特に有利な株はこの際、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ及びＣａｎｄｉｄａ ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａであり、その際勿論、その他のそれぞれ適した酵素供給源も選択してよい。
【００２６】
既に説明したように、本発明の方法の大きな利点は、モノアシルグリセリド及びジアシルグリセリドの割合が、乳化作用のある生成物中で狙いを定めて調節可能であることである。本発明は従って、前記方法工程ｂ）で、反応混合物１ｍｌ当たり０．０５〜１０．０ｍｇ、特に反応混合物当たり０．１〜５ｍｇの（ホスホ）リパーゼ量を使用することも予定している。そのつど所望の酵素量をこの際、無論、この酵素活性に依存して使用してもよく、そのために反応混合物１ｍｌ当たり０．１〜１２０ｕの相応する量が推奨される。一般的にリパーゼ対ホスホリパーゼの割合は、この使用した酵素成分中で幅広い範囲で変化してよく、これにより、（前記乳化剤の）この得られた生成物の組成に狙いを定めた影響を及ぼしてよい。
【００２７】
有利には、前記方法工程ｃ）に関して、４０〜５０℃の温度が予定されてよい。前記方法工程ｃ）で、前記反応期間は有利には５〜２０時間、特に有利には８〜１２時間であるとする。
【００２８】
この最後の反応工程ｄ）は本発明の方法において、やはり特に限定のあるものでなく、それぞれの通常の方法によって実施されてよい。但し慎重な条件を考慮してよく、このために６０〜８０℃の温度が特に適する。真空中での前記乾燥の実施が特に推奨される。
【００２９】
典型的には、本発明による方法は、レシチンを油と、特定の割合で一緒にし、３５〜６０℃の温度に調温し、撹拌によって混合することで実施される。前記レシチンのための可能性のある供給源はこの際大豆からの粗レシチンであり、その際粗レシチンの代わりに、規格化した、脱油レシチン又は分別レシチンを使用してもよい。油として、植物油、例えば大豆油、又は水素化した植物油、例えばパーム脂、又は動物油脂も考慮してよい。前記酵素成分を水溶液中のリパーゼとして、前記レシチン／油混合物に添加し、その際この水の総割合は有利には６〜１２質量％の範囲にある。リパーゼ−酵素の可能性のある供給源はこの際、特にＣａｎｄｉｄａ ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ（参照、Ｂｉｏｃａｔａｌｙｓｔｓ，Ｐｏｎｔｙｐｒｉｄｄ，Ｗａｌｅｓ）又はＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ（参照、Ａｍａｎｏ，Ｎａｇｏｙａ，Ｊａｐａｎ）である。前記反応混合物を引き続き、一定の温度で、かつ一定の時間の間攪拌し、その際前記温度は例えば５０℃の範囲内にあってよい。インキュベーション時間として有利には、２〜１５時間の期間が予定されている。前記反応の進行後、前記混合物を真空中で約７０℃の温度で乾燥させ、前記生成物を場合により更に結晶化させる。
【００３０】
有利な生成物として、本発明により、リゾレシチン、モノアシルグリセリド及びジアシルグリセリドからなる混合物であって、その際この有利な割合が、リゾレシチンに関して３．０〜５５質量％、及びモノアシルグリセリドに関して２．０〜２０質量％であるとする混合物が請求される。このジアシルグリセリド割合に関して、６．０〜４０質量％の量が推奨される。
【００３１】
又は、本発明は、前記の請求した方法からの生成物として、前記のリン脂質成分対組み合わせたモノアシルグリセリド成分及びジアシルグリセリド成分の割合が、１：０．２５〜４．０である混合物を予定する。
【００３２】
前記反応生成物は、前記乾燥後、直接的に乳化剤として、標準的な方法においてマーガリンの製造又はベークド製品原料の混合のために使用してよい。この際、更なる成分の添加、例えば付加的なモノアシルグリセリド又はジアシルグリセリドの添加は必要ない。
【００３３】
前記方法自体及びこれにより製造された混合物の他に、本発明は、食料品分野における、特にアイスクリーム、マーガリン及びベークド製品の種類における、及び化粧品分野における、エマルション及びクリームの製造のための、前記方法により製造可能な混合物の使用をも請求する。
【００３４】
本発明の枠内では最終的に、前記生成物及びこれに伴う前記乳化剤は、純粋なリゾレシチン成分及びモノアシルグリセリド成分／ジアシルグリセリド成分の混合により製造された、これまでに得られた乳化剤とは対照的に、液状でも存在してよく、かつこれは従って更なる処理なしに容易に使用可能であり、この際品質損失を被ることがないことを見出した。
【００３５】
この請求した方法を用いて、リン脂質（レシチン）及びトリアシルグリセリド（油）の、リゾリン脂質及びモノアシルグリセリド／ジアシルグリセリドへの前記の同時の酵素反応により、単純な方法で、前記乳化剤の製造が成功する。レシチンの、リゾレシチンへの前記反応はこの際、酵素による加水分解により行われ、このために有機溶媒、ポリオール、及び／又はカルシウムが添加される必要なく、又は水割合＞１５質量％が使用される必要もない。更に本発明による方法の枠内では、前記生成物中の、個々の脂質成分の割合の正確な調節は、選択した出発パラメーターを変化させることにより、精度良く可能である。最終的に本発明の更なる利点は、このように得られた乳化剤を、直接的に液状でも得てよいことが理解される。
【００３６】
モノアシルグリセリド及びジアシルグリセリド含有乳化剤の、酵素による記載した製造方法では、第１の方法工程ａ）で、リン脂質成分及びトリアシルグリセリド成分からなる混合物を装入し、引き続き前記方法工程ｂ）で、このように得られた混合物に、前記混合物の水含量が３〜１５質量％になるような量の（ホスホ）リパーゼ含有水溶液を添加する。引き続き、前記方法工程ｃ）で、前記工程から得られた混合物を２０〜８０℃の温度で、少なくとも２時間にわたって反応させ、かつ最後に前記混合物を乾燥させる。粗ソーヤ−レシチン及び植物油及び／又は動物油が特に適した成分であることが判明し、これらを酵素成分であるリパーゼ及び／又はホスホリパーゼからなる混合物と共に反応させる。従来では通常である、有機溶媒、ポリオール、又はイオン性添加剤なしで、並びに少ない水割合で成功する前記方法を用いて、乳化剤が得られ、リゾリン脂質及びモノアシルグリセリド／ジアシルグリセリドからなる前記乳化剤の組成は狙いを定めて調整されてよい。前記乳化剤（これは液状でも得られる）は、食料品分野及び化粧品分野で使用される。
【００３７】
以下の実施例は、請求した、前記乳化剤の酵素による製造方法の上述の利点を具体的に示す。
【００３８】
実施例
以下の実施例で使用した粗レシチンは、Ｈｏｎｅｙｍｅａｄ，ＵＳＡに由来する；大豆油は、自由に入手可能な市販の製品である。
【００３９】
このそのつど得られた生成物の組成を、ＨＰＬＣ、ＨＰＴＬＣを用いて、及び重量法により分析した。
【００４０】
前記ＨＰＬＣのために固定相としてシリカゲルＳｉ６０カラムを使用した。この移動相は、ｎ−ヘキサン／２−プロパノール／水（０．２５／４／１［ｖ／ｖ／ｖ］）からなり、これを１．２ｍＬ／ｍｉｎの流速で、前記カラムに流した。異なる保持時間に基づいて、ホスファチジルコリン及びリゾホスファチジルコリンの含量を定量化した。この試験体を前もってｎ−ヘキサン／２−プロパノール（２／１［ｖ／ｖ］）に溶解した。
【００４１】
前記ＨＰＴＬＣを、固定相として、ガラスプレート（サイズ２０×１０ｃｍ）上に設けたシリカゲルＳｉ６０を用いて実施した。移動相として、ジエチルエーテル／石油ベンジン／酢酸（４０／５９／１［ｖ／ｖ／ｖ］の割合）を用いた。分析経過及び前記プレートの乾燥後、この得られたバンドを、硫酸銅（ＩＩ）溶液（８％リン酸に溶解した１０質量％硫酸銅）で誘導体化し、モノアシルグリセリド並びに１，２−及び１，３−ジアシルグリセリドに関する含量を定量化した。この試験体を前もってクロロホルムに溶解した。
【００４２】
前記重量法を、前記アセトン不溶性試験の決定に使用した。この際前記試験体をアセトンと混合し、この得られた残留物を分離し、乾燥させ、量り取った。
【００４３】
実施例１
粗レシチン４５ｇを、大豆油５５ｇと混合し、４７．５℃の温度で撹拌した。Ｃａｎｄｉｄａ ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ （Ｂｉｏｃａｔａｌｙｓｔｓより， ＵＫ）からのリパーゼ０．１３ｇを、水９ｇに溶解し、引き続き撹拌下で、前記レシチン／油混合物に添加した。前記混合物を４７．５℃で撹拌し、８．５時間の反応時間後、０．１ｂａｒの真空中で、８０℃の温度で乾燥させた。
【００４４】
結果：この得られた生成物はアセトン不溶性部２８質量％を有し、これはレシチン割合４３％に相応し、更にリゾホスファチジルコリン２質量％、モノアシルグリセリド４．５質量％、及びジアシルグリセリド１１質量％に相応する。このレシチン対モノアシルグリセリド／ジアシルグリセリドの割合は１：０．３４である。
【００４５】
実施例２
粗レシチン１３５ｇを大豆油１６５ｇ及び水２７ｇと混合し、４７．５℃の温度で撹拌した。Ｃａｎｄｉｄａ ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａからのリパーゼ０．１５ｇを撹拌下で、前記レシチン／油混合物に添加した。前記混合物を４７．５℃で撹拌し、８．５時間の反応時間後、０．１ｂａｒの真空中で、８０℃の温度で乾燥させた。
【００４６】
結果：この得られた生成物はアセトン不溶性部２７質量％を有し、これはレシチン割合４２％に相応し、更にリゾホスファチジルコリン２．５質量％、モノアシルグリセリド５質量％、及びジアシルグリセリド１０質量％に相応する。このレシチン対モノアシルグリセリド／ジアシルグリセリドの割合は１：０．３６である。
【００４７】
実施例３
粗レシチン１０ｇを大豆油９０ｇと混合し、３５℃の温度で撹拌した。Ｃａｎｄｉｄａ ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａからのリパーゼ０．１ｇを水１２ｇに溶解し、引き続き撹拌下で前記レシチン／油混合物に添加した。前記混合物を３５℃で撹拌し、１５時間の反応時間後、０．１ｂａｒの真空中で、６０℃の温度で乾燥させた。
【００４８】
結果：この得られた生成物はアセトン不溶性部６質量％を有し、これはレシチン割合９．５％に相応し、更にリゾホスファチジルコリン０．２質量％、モノアシルグリセリド４質量％、及びジアシルグリセリド１０質量％に相応する。このレシチン対モノアシルグリセリド／ジアシルグリセリドの割合は１：１．５である。
【００４９】
実施例４
粗レシチン３０ｇを、大豆油２７０ｇと混合し、６０℃の温度で撹拌した。Ｃａｎｄｉｄａ ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａからのリパーゼ０．３ｇを、水１８ｇに溶解し、引き続き撹拌下で、前記レシチン／油混合物に添加した。前記混合物を６０℃で撹拌し、１５時間の反応時間後、０．１ｂａｒの真空中で、８０℃の温度で乾燥させた。
【００５０】
結果：この得られた生成物はアセトン不溶性部６質量％を有し、これはレシチン割合９．５％に相応し、更にリゾホスファチジルコリン０．２質量％、モノアシルグリセリド２質量％、及びジアシルグリセリド１２質量％に相応する。このレシチン対モノアシルグリセリド／ジアシルグリセリドの割合は１：１．５である。
【００５１】
実施例５
粗レシチン７０ｇを大豆油３０ｇと混合し、３５℃の温度で撹拌した。Ｃａｎｄｉｄａ ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａからのリパーゼ０．１ｇを水１２ｇに溶解し、引き続き撹拌下で前記レシチン／油混合物に添加した。前記混合物を３５℃で撹拌し、２時間の反応時間後、０．１ｂａｒの真空中で、６０℃の温度で乾燥させた。
【００５２】
結果：この得られた生成物は、アセトン不溶性部の割合約４５質量％を有し、かつこれはリゾホスファチジルコリン３質量％、モノアシルグリセリド６．５質量％、及びジアシルグリセリド９質量％を含有する。
【００５３】
実施例６
粗レシチン７５ｇを、大豆油２５ｇと混合し、４７．５℃の温度で撹拌した。Ｃａｎｄｉｄａ ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａからのリパーゼ０．０５ｇを、水９ｇに溶解し、引き続き撹拌下で、前記レシチン／油混合物に添加した。前記混合物を４７．５℃で８．５時間の間撹拌し、引き続き０．１ｂａｒの真空中で、８０℃の温度で乾燥させた。
【００５４】
結果：この得られた生成物は、アセトン不溶性部の割合約５０質量％を有し、かつこれはリゾホスファチジルコリン４質量％、モノアシルグリセリド５質量％、及びジアシルグリセリド６質量％を含有する。
【００５５】
実施例７
粗レシチン２２５ｇを、大豆油２７５ｇと混合し、４７．５℃の温度で撹拌した。Ｃａｎｄｉｄａ ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａからのリパーゼ０．２５ｇを、水７０ｇに溶解し、引き続き撹拌下で、前記レシチン／油混合物に添加した。前記混合物を４７．５℃で撹拌し、８．５時間の反応時間後、０．１ｂａｒの真空中で、６０℃の温度で乾燥させた。
【００５６】
結果：この得られた生成物は、アセトン不溶性部の割合約３０質量％を有し、かつこれはリゾホスファチジルコリン２質量％、モノアシルグリセリド６質量％、及びジアシルグリセリド８．５質量％を含有する。
【００５７】
実施例８
粗レシチン７０ｇを、大豆油３０ｇと混合し、６０℃の温度で撹拌した。Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒからのリパーゼ０．１ｇを、水１２ｇに溶解し、引き続き撹拌下で、前記レシチン／油混合物に添加した。前記混合物を６０℃で撹拌し、１５時間の反応時間後、０．１ｂａｒの真空中で、６０℃の温度で乾燥させた。
【００５８】
結果：この得られた生成物は、アセトン不溶性部の割合約４５質量％を有し、かつこれはリゾホスファチジルコリン３質量％、モノアシルグリセリド５質量％、及びジアシルグリセリド１０質量％を含有する。
【００５９】
実施例９
粗レシチン７０ｇを、硬化したパーム脂３０ｇと混合し、４５℃の温度で撹拌した。Ｃａｎｄｉｄａ ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａからのリパーゼ０．０５ｇを、水１０ｇに溶解し、引き続き撹拌下で、前記レシチン／油混合物に添加した。前記混合物を４５℃で撹拌し、８時間の反応時間後、０．１ｂａｒの真空中で、６０℃の温度で乾燥させた。引き続き前記生成物を冷却し、晶出させた。
【００６０】
結果：前記乳化剤は、アセトン不溶性部の割合約４５質量％を含有し、かつ更にリゾホスファチジルコリン３質量％、モノアシルグリセリド５質量％、及びジアシルグリセリド１０質量％を含有する。
【００６１】
実施例１０（適用例）
前記実施例９により製造した乳化剤を、以下のレシピによる、マーガリンの製造のための標準的な方法において使用した：
大豆油４７．５質量％
パーム油３１．５質量％
水１９．８質量％
食塩０．１質量％
乳清タンパク質０．０７質量％
クエン酸０．０３質量％
乳化剤１．０質量％。
【００６２】
結果：テクスチャー、融解挙動、及び塗りやすさに関して、標準のマーガリンと同等のマーガリンを得た。
【技術分野】
【０００１】
発明の詳細な説明
本発明の主題は、モノアシルグリセリド及びジアシルグリセリド含有乳化剤の、酵素による製造方法及びその使用である。
【０００２】
レシチン及びリゾレシチンは様々な適用において乳化剤として使用される。これらは食料品、化粧品、栄養補助剤及び化学製剤中で見出される。これらは一般的に、採油の副生成物として、例えば大豆又はナタネから採られるか、又は相応する原料、例えば卵黄から直接的に抽出される。レシチン及びリゾレシチンは大抵は、リン脂質（１，２−ジアシルグリセリンホスファート）、リゾリン脂質（リン脂質の加水分解誘導体として１−又は２−モノアシルグリセリンホスファート）、糖脂質、及びトリアシルグリセリドからなる複雑な混合物である。加工方法に応じて、終生成物中のその個々の分画の含量は激しく変動してよい。
【０００３】
粗レシチンは、規格化していないレシチンであり、例えばこれは、例えば植物油の精製の際に搾油機中で副生成物として生じる。油との表現は、精製又は未精製の植物油、部分的に又は完全に硬化した（水素化した）植物油又は動物脂を含み、これらの全ての主成分はトリアシルグリセリドである。
【０００４】
モノアシルグリセリド、ジアシルグリセリド、及びトリアシルグリセリドは、１つ、２つ、又は３つのアシル基を有し、これらは長鎖の、飽和の又は１つ又はそれ以上が不飽和の脂肪酸に由来する。有利にはアシル基は６〜３５つのＣ原子、特に１０〜３０つのＣ原子、更に有利には１２〜２６つのＣ原子を有する。モノアシルグリセリドは１−又は２−モノアシルグリセリドであってよく、ジグリセリドは１，２−又は１，３−ジアシルグリセリドであってよい。
【０００５】
リゾレシチンに関するより高い含量は、相応するリン脂質を相応するリゾリン脂質へと、１つ又は２つの脂肪酸残基を分離することによる、酵素による加水分解を用いて得られてよい。
【０００６】
「リゾレシチン」とは、本発明の関連においても、商業的な及び食料品上妥当な意味においても、酵素により部分的に加水分解された極性の脂質及び中性脂質からなる混合物が理解されるべきであり、これは少なくとも５６％のアセトン不溶性の割合を有する。アセトン不溶性はこの際、レシチンの食料品上妥当な評価のために考慮され、かつアセトン中に溶解しない、レシチン中の極性の脂質の割合を記す最も重要な分析パラメーターの１つである。
【０００７】
脂質及びリン脂質の、リパーゼ及びホスホリパーゼでの加水分解はよく記載されている（Ａｄｌｅｒｃｒｅｕｔｚ，Ｐａｔｒｉｃｋ，１９９４：“Ｅｎｚｙｍｅｃａｔａｌｙｚｅｄ ｌｉｐｉｄ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ”；Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ＆ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｒｅｖｉｅｗｓ １２，２３１−２５４）。
【０００８】
更に、多数の特許文献は同様に、リン脂質のリゾレシチンへの、酵素による加水分解を取り扱っている。
【０００９】
ＥＰ−Ａ ２６０５７３は、レシチンを水５〜３０質量％と混合し、カルシウム塩並びにレシチンを加水分解する酵素の存在下で、リゾレシチンへと反応させる、リゾレシチンの製造を記載する。
【００１０】
ＷＯ ９１／０３５６５では、有機溶媒中の単離したリン脂質の、固定化したリパーゼによる加水分解を教示し、その一方でＥＰ−Ａ ８７０８４０は、レシチン水溶液の、ホスホリパーゼでの加水分解を記載し、その際相応するリゾリン脂質は、溶媒抽出（アセトン）により随伴物から取り除かれる。
【００１１】
リゾレシチンの更なる製造方法はＪＰ １００４２８８４に記載されていて、ここではこの所望の生成物は、ホスホリパーゼＡ２を用いた、溶媒／水混合物中でのレシチンの加水分解により製造される。
【００１２】
ＷＯ ９７／２８２７０は、ホスホリパーゼＡ２を用いた、基質ホスファチジルコリンからのリゾホスファチジルコリンの製造方法を教示する。この反応は前記基質の分散液中で、モノアシルグリセリド、ジアシルグリセリド、ポリグリセロール−脂肪酸エステル、サッカロース−脂肪酸エステル、及びソルビタン−脂肪酸エステル並びにグリセリンのグループからの更なる試薬を用いて、水存在下で実施される。
【００１３】
レシチン及びリゾレシチンの他に、モノアシルグリセリド及びジアシルグリセリドも、エマルションの安定剤として作用する。これらは大抵、高温でのトリアシルグリセリドのアルカリけん化によって得られる。但しこれらは、前記の加水分解工程に引き続き、費用をかけて精製されなくてはならない。
【００１４】
ＷＯ ０２／１１５４３はモノアシルグリセリドのその他の製造方法を記載する。リパーゼを用いて、相応するトリアシルグリセリドから、４０％超がモノアシルグリセリドとしてポリオール／水混合物中で得られる。レシチンは脂と同様にこの場合、基質スペクトルの拡大のためのみに添加される。
【００１５】
通常は、前記モノアシルグリセリド及びジアシルグリセリドは、エマルションの安定化のために、リゾレシチンと組み合わせて、ベークド製品分野及びマーガリン分野で使用される。このために以前までは、前記単独成分は大抵は別々に製造され、精製され、かつこの所望の濃度で混合される。
【００１６】
ＷＯ ００／５２１９０は、水／ポリオール混合物中のレシチンの、リパーゼ及びホスホリパーゼの組み合わせの存在下での反応による、リゾ脂質、リゾリン脂質、モノアシルグリセリド、及びジアシルグリセリドの混合物の製造方法を記載する。この難点はこの場合、リゾホスファチジルコリン／ホスファチジルコリンの割合に関して８０％の反応率での、前記リン脂質の可能な限り完全な反応である。約６０％の前記反応溶液の高い水含量により、前記終生成物の獲得は、勿論高いエネルギー消費及び出費と結びついている。前記リゾレシチン／モノアシルグリセリド及びジアシルグリセリド割合の定義された調節はもっとも、前記方法によって可能ではなく、というのも前記リゾリン脂質割合は常に圧倒的であり、かつ前記モノアシルグリセリド割合は、前記グリセリンの添加によって、前記ジアシルグリセリド割合よりも常に大幅により多い結果になる。
【００１７】
但し、モノアシルグリセリド及びジアシルグリセリド並びにリゾリン脂質の前記割合は、安定化すべき生成物中で、そのつどの適用に依存して激しく変動してよい。従って、例えばマーガリンの安定化のために、モノアシルグリセリド／ジアシルグリセリド及びリゾレシチンは、１．７：１の割合で添加され、これに対して、ベークド製品の分野では、リゾレシチンの割合が上回っていて、前記の相応する混合物は０．４：１の割合で存在する。
【００１８】
前記の知識水準から出発して、本発明に対して、モノアシルグリセリド及びジアシルグリセリド含有乳化剤の酵素による製造方法であって、前記方法が、従来では通常である、カルシウム、ポリオール又は有機溶媒なしに、モノアシルグリセリド及びジアシルグリセリド並びにリゾリン脂質からなる混合物の安価な製造を可能にし、かつ前記方法が更に、前記モノアシルグリセリド及びジアシルグリセリド並びにリゾリン脂質の割合の柔軟な調節を、前記反応混合物の組成又は前記反応条件の変化によって可能にする、モノアシルグリセリド及びジアシルグリセリド含有乳化剤の酵素による製造方法を準備するという課題が提示される。
【００１９】
前記課題は、
ａ）リン脂質成分及びトリアシルグリセリド成分からなる混合物を装入し、
ｂ）前記方法工程ａ）からの混合物に、前記混合物の水含量が３〜１５質量％、特に５〜１２質量％になるような量の（ホスホ）リパーゼ含有水溶液を添加し、引き続き
ｃ）前記方法工程ｂ）から得られた混合物を２０〜８０℃の温度で、少なくとも２時間にわたって反応させ、かつ最後に
ｄ）この混合物を前記反応終了後に乾燥させる
相応する製造方法により解決された。
【００２０】
意外にも、リン脂質（レシチン）及びトリアシルグリセリド（油）の、リゾリン脂質及びモノアシルグリセリド並びにジアシルグリセリドへの、本発明による同時の反応の際に、このパラメーター、温度、インキュベーション時間、レシチンと油との割合、レシチンと水との割合、又は水と油との割合、又は／及び添加した酵素の量の選択により、前記反応生成物の組成は正確に調節されてよいことが判明した。従って、例えばレシチン対油の割合（これはアセトン不溶性の割合により定義される）を介して、リパーゼ及び一定の水割合での加水分解の際に、合計したモノアシルグリセリド／ジアシルグリセリド割合に関するモノアシルグリセリドの割合及び１，２−ジアシルグリセリドの割合を、１，３−ジアシルグリセリドの比較的一定な割合で、狙いを定めて調節することが可能である。又は、前記インキュベーション時間を介しても、例えば６０℃の温度で、水割合１０％を有する粗レシチン／油の混合物（アセトン不溶性割合５０％を有する）中の、リパーゼ０．０５質量％により、合計したモノアシルグリセリド／ジアシルグリセリド割合に関するモノアシルグリセリドの割合及び１，３−ジアシルグリセリドの割合を変化させてよく、その際合計したモノアシルグリセリド／ジアシルグリセリド含量に関して、１，２−ジアシルグリセリド割合は比較的一定のままである。この利点は、この程度において、本方法の実施の単純さの考慮下では期待されるものでない。
【００２１】
リン脂質成分として、本発明によりレシチン、有利には粗レシチンが特に適することが判明し、その際粗ソーヤレシチンが特に有利であると判断されたい。
【００２２】
植物油及び／又は動物油、有利には精製し、かつ／又は少なくとも部分的に硬化させた状態にある植物油及び／又は動物油が、本発明の枠内において、前記方法工程ａ）で装入される、トリアシルグリセリド成分の特に適した代表である。
【００２３】
本方法の実施に関しては、特別な実施態様において、前記方法工程ａ）で、リン脂質成分割合１０〜８０質量％及び／又はトリアシルグリセリド成分割合２０〜９０質量％を有する混合物を装入してよい。前記のリン脂質成分割合とトリアシルグリセリド成分割合との質量割合は、有利には１：０．２５〜１：４である。
【００２４】
一般的に、前記方法工程ａ）は、特別な限定を受けないが、但し特定の条件下では、前記方法工程ａ）で前記混合物を３５〜６０℃の温度にさせることが有利であってよく、本発明はこれを同様に考慮する。
【００２５】
工程ｂ）に関しては、微生物由来のリパーゼ及び／又はホスホリパーゼ、有利にはＣａｎｄｉｄａ及び／又はＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓからのリパーゼ及び／又はホスホリパーゼを使用する場合に有利であると判断されたい。特に有利な株はこの際、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ及びＣａｎｄｉｄａ ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａであり、その際勿論、その他のそれぞれ適した酵素供給源も選択してよい。
【００２６】
既に説明したように、本発明の方法の大きな利点は、モノアシルグリセリド及びジアシルグリセリドの割合が、乳化作用のある生成物中で狙いを定めて調節可能であることである。本発明は従って、前記方法工程ｂ）で、反応混合物１ｍｌ当たり０．０５〜１０．０ｍｇ、特に反応混合物当たり０．１〜５ｍｇの（ホスホ）リパーゼ量を使用することも予定している。そのつど所望の酵素量をこの際、無論、この酵素活性に依存して使用してもよく、そのために反応混合物１ｍｌ当たり０．１〜１２０ｕの相応する量が推奨される。一般的にリパーゼ対ホスホリパーゼの割合は、この使用した酵素成分中で幅広い範囲で変化してよく、これにより、（前記乳化剤の）この得られた生成物の組成に狙いを定めた影響を及ぼしてよい。
【００２７】
有利には、前記方法工程ｃ）に関して、４０〜５０℃の温度が予定されてよい。前記方法工程ｃ）で、前記反応期間は有利には５〜２０時間、特に有利には８〜１２時間であるとする。
【００２８】
この最後の反応工程ｄ）は本発明の方法において、やはり特に限定のあるものでなく、それぞれの通常の方法によって実施されてよい。但し慎重な条件を考慮してよく、このために６０〜８０℃の温度が特に適する。真空中での前記乾燥の実施が特に推奨される。
【００２９】
典型的には、本発明による方法は、レシチンを油と、特定の割合で一緒にし、３５〜６０℃の温度に調温し、撹拌によって混合することで実施される。前記レシチンのための可能性のある供給源はこの際大豆からの粗レシチンであり、その際粗レシチンの代わりに、規格化した、脱油レシチン又は分別レシチンを使用してもよい。油として、植物油、例えば大豆油、又は水素化した植物油、例えばパーム脂、又は動物油脂も考慮してよい。前記酵素成分を水溶液中のリパーゼとして、前記レシチン／油混合物に添加し、その際この水の総割合は有利には６〜１２質量％の範囲にある。リパーゼ−酵素の可能性のある供給源はこの際、特にＣａｎｄｉｄａ ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ（参照、Ｂｉｏｃａｔａｌｙｓｔｓ，Ｐｏｎｔｙｐｒｉｄｄ，Ｗａｌｅｓ）又はＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ（参照、Ａｍａｎｏ，Ｎａｇｏｙａ，Ｊａｐａｎ）である。前記反応混合物を引き続き、一定の温度で、かつ一定の時間の間攪拌し、その際前記温度は例えば５０℃の範囲内にあってよい。インキュベーション時間として有利には、２〜１５時間の期間が予定されている。前記反応の進行後、前記混合物を真空中で約７０℃の温度で乾燥させ、前記生成物を場合により更に結晶化させる。
【００３０】
有利な生成物として、本発明により、リゾレシチン、モノアシルグリセリド及びジアシルグリセリドからなる混合物であって、その際この有利な割合が、リゾレシチンに関して３．０〜５５質量％、及びモノアシルグリセリドに関して２．０〜２０質量％であるとする混合物が請求される。このジアシルグリセリド割合に関して、６．０〜４０質量％の量が推奨される。
【００３１】
又は、本発明は、前記の請求した方法からの生成物として、前記のリン脂質成分対組み合わせたモノアシルグリセリド成分及びジアシルグリセリド成分の割合が、１：０．２５〜４．０である混合物を予定する。
【００３２】
前記反応生成物は、前記乾燥後、直接的に乳化剤として、標準的な方法においてマーガリンの製造又はベークド製品原料の混合のために使用してよい。この際、更なる成分の添加、例えば付加的なモノアシルグリセリド又はジアシルグリセリドの添加は必要ない。
【００３３】
前記方法自体及びこれにより製造された混合物の他に、本発明は、食料品分野における、特にアイスクリーム、マーガリン及びベークド製品の種類における、及び化粧品分野における、エマルション及びクリームの製造のための、前記方法により製造可能な混合物の使用をも請求する。
【００３４】
本発明の枠内では最終的に、前記生成物及びこれに伴う前記乳化剤は、純粋なリゾレシチン成分及びモノアシルグリセリド成分／ジアシルグリセリド成分の混合により製造された、これまでに得られた乳化剤とは対照的に、液状でも存在してよく、かつこれは従って更なる処理なしに容易に使用可能であり、この際品質損失を被ることがないことを見出した。
【００３５】
この請求した方法を用いて、リン脂質（レシチン）及びトリアシルグリセリド（油）の、リゾリン脂質及びモノアシルグリセリド／ジアシルグリセリドへの前記の同時の酵素反応により、単純な方法で、前記乳化剤の製造が成功する。レシチンの、リゾレシチンへの前記反応はこの際、酵素による加水分解により行われ、このために有機溶媒、ポリオール、及び／又はカルシウムが添加される必要なく、又は水割合＞１５質量％が使用される必要もない。更に本発明による方法の枠内では、前記生成物中の、個々の脂質成分の割合の正確な調節は、選択した出発パラメーターを変化させることにより、精度良く可能である。最終的に本発明の更なる利点は、このように得られた乳化剤を、直接的に液状でも得てよいことが理解される。
【００３６】
モノアシルグリセリド及びジアシルグリセリド含有乳化剤の、酵素による記載した製造方法では、第１の方法工程ａ）で、リン脂質成分及びトリアシルグリセリド成分からなる混合物を装入し、引き続き前記方法工程ｂ）で、このように得られた混合物に、前記混合物の水含量が３〜１５質量％になるような量の（ホスホ）リパーゼ含有水溶液を添加する。引き続き、前記方法工程ｃ）で、前記工程から得られた混合物を２０〜８０℃の温度で、少なくとも２時間にわたって反応させ、かつ最後に前記混合物を乾燥させる。粗ソーヤ−レシチン及び植物油及び／又は動物油が特に適した成分であることが判明し、これらを酵素成分であるリパーゼ及び／又はホスホリパーゼからなる混合物と共に反応させる。従来では通常である、有機溶媒、ポリオール、又はイオン性添加剤なしで、並びに少ない水割合で成功する前記方法を用いて、乳化剤が得られ、リゾリン脂質及びモノアシルグリセリド／ジアシルグリセリドからなる前記乳化剤の組成は狙いを定めて調整されてよい。前記乳化剤（これは液状でも得られる）は、食料品分野及び化粧品分野で使用される。
【００３７】
以下の実施例は、請求した、前記乳化剤の酵素による製造方法の上述の利点を具体的に示す。
【００３８】
実施例
以下の実施例で使用した粗レシチンは、Ｈｏｎｅｙｍｅａｄ，ＵＳＡに由来する；大豆油は、自由に入手可能な市販の製品である。
【００３９】
このそのつど得られた生成物の組成を、ＨＰＬＣ、ＨＰＴＬＣを用いて、及び重量法により分析した。
【００４０】
前記ＨＰＬＣのために固定相としてシリカゲルＳｉ６０カラムを使用した。この移動相は、ｎ−ヘキサン／２−プロパノール／水（０．２５／４／１［ｖ／ｖ／ｖ］）からなり、これを１．２ｍＬ／ｍｉｎの流速で、前記カラムに流した。異なる保持時間に基づいて、ホスファチジルコリン及びリゾホスファチジルコリンの含量を定量化した。この試験体を前もってｎ−ヘキサン／２−プロパノール（２／１［ｖ／ｖ］）に溶解した。
【００４１】
前記ＨＰＴＬＣを、固定相として、ガラスプレート（サイズ２０×１０ｃｍ）上に設けたシリカゲルＳｉ６０を用いて実施した。移動相として、ジエチルエーテル／石油ベンジン／酢酸（４０／５９／１［ｖ／ｖ／ｖ］の割合）を用いた。分析経過及び前記プレートの乾燥後、この得られたバンドを、硫酸銅（ＩＩ）溶液（８％リン酸に溶解した１０質量％硫酸銅）で誘導体化し、モノアシルグリセリド並びに１，２−及び１，３−ジアシルグリセリドに関する含量を定量化した。この試験体を前もってクロロホルムに溶解した。
【００４２】
前記重量法を、前記アセトン不溶性試験の決定に使用した。この際前記試験体をアセトンと混合し、この得られた残留物を分離し、乾燥させ、量り取った。
【００４３】
実施例１
粗レシチン４５ｇを、大豆油５５ｇと混合し、４７．５℃の温度で撹拌した。Ｃａｎｄｉｄａ ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ （Ｂｉｏｃａｔａｌｙｓｔｓより， ＵＫ）からのリパーゼ０．１３ｇを、水９ｇに溶解し、引き続き撹拌下で、前記レシチン／油混合物に添加した。前記混合物を４７．５℃で撹拌し、８．５時間の反応時間後、０．１ｂａｒの真空中で、８０℃の温度で乾燥させた。
【００４４】
結果：この得られた生成物はアセトン不溶性部２８質量％を有し、これはレシチン割合４３％に相応し、更にリゾホスファチジルコリン２質量％、モノアシルグリセリド４．５質量％、及びジアシルグリセリド１１質量％に相応する。このレシチン対モノアシルグリセリド／ジアシルグリセリドの割合は１：０．３４である。
【００４５】
実施例２
粗レシチン１３５ｇを大豆油１６５ｇ及び水２７ｇと混合し、４７．５℃の温度で撹拌した。Ｃａｎｄｉｄａ ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａからのリパーゼ０．１５ｇを撹拌下で、前記レシチン／油混合物に添加した。前記混合物を４７．５℃で撹拌し、８．５時間の反応時間後、０．１ｂａｒの真空中で、８０℃の温度で乾燥させた。
【００４６】
結果：この得られた生成物はアセトン不溶性部２７質量％を有し、これはレシチン割合４２％に相応し、更にリゾホスファチジルコリン２．５質量％、モノアシルグリセリド５質量％、及びジアシルグリセリド１０質量％に相応する。このレシチン対モノアシルグリセリド／ジアシルグリセリドの割合は１：０．３６である。
【００４７】
実施例３
粗レシチン１０ｇを大豆油９０ｇと混合し、３５℃の温度で撹拌した。Ｃａｎｄｉｄａ ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａからのリパーゼ０．１ｇを水１２ｇに溶解し、引き続き撹拌下で前記レシチン／油混合物に添加した。前記混合物を３５℃で撹拌し、１５時間の反応時間後、０．１ｂａｒの真空中で、６０℃の温度で乾燥させた。
【００４８】
結果：この得られた生成物はアセトン不溶性部６質量％を有し、これはレシチン割合９．５％に相応し、更にリゾホスファチジルコリン０．２質量％、モノアシルグリセリド４質量％、及びジアシルグリセリド１０質量％に相応する。このレシチン対モノアシルグリセリド／ジアシルグリセリドの割合は１：１．５である。
【００４９】
実施例４
粗レシチン３０ｇを、大豆油２７０ｇと混合し、６０℃の温度で撹拌した。Ｃａｎｄｉｄａ ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａからのリパーゼ０．３ｇを、水１８ｇに溶解し、引き続き撹拌下で、前記レシチン／油混合物に添加した。前記混合物を６０℃で撹拌し、１５時間の反応時間後、０．１ｂａｒの真空中で、８０℃の温度で乾燥させた。
【００５０】
結果：この得られた生成物はアセトン不溶性部６質量％を有し、これはレシチン割合９．５％に相応し、更にリゾホスファチジルコリン０．２質量％、モノアシルグリセリド２質量％、及びジアシルグリセリド１２質量％に相応する。このレシチン対モノアシルグリセリド／ジアシルグリセリドの割合は１：１．５である。
【００５１】
実施例５
粗レシチン７０ｇを大豆油３０ｇと混合し、３５℃の温度で撹拌した。Ｃａｎｄｉｄａ ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａからのリパーゼ０．１ｇを水１２ｇに溶解し、引き続き撹拌下で前記レシチン／油混合物に添加した。前記混合物を３５℃で撹拌し、２時間の反応時間後、０．１ｂａｒの真空中で、６０℃の温度で乾燥させた。
【００５２】
結果：この得られた生成物は、アセトン不溶性部の割合約４５質量％を有し、かつこれはリゾホスファチジルコリン３質量％、モノアシルグリセリド６．５質量％、及びジアシルグリセリド９質量％を含有する。
【００５３】
実施例６
粗レシチン７５ｇを、大豆油２５ｇと混合し、４７．５℃の温度で撹拌した。Ｃａｎｄｉｄａ ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａからのリパーゼ０．０５ｇを、水９ｇに溶解し、引き続き撹拌下で、前記レシチン／油混合物に添加した。前記混合物を４７．５℃で８．５時間の間撹拌し、引き続き０．１ｂａｒの真空中で、８０℃の温度で乾燥させた。
【００５４】
結果：この得られた生成物は、アセトン不溶性部の割合約５０質量％を有し、かつこれはリゾホスファチジルコリン４質量％、モノアシルグリセリド５質量％、及びジアシルグリセリド６質量％を含有する。
【００５５】
実施例７
粗レシチン２２５ｇを、大豆油２７５ｇと混合し、４７．５℃の温度で撹拌した。Ｃａｎｄｉｄａ ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａからのリパーゼ０．２５ｇを、水７０ｇに溶解し、引き続き撹拌下で、前記レシチン／油混合物に添加した。前記混合物を４７．５℃で撹拌し、８．５時間の反応時間後、０．１ｂａｒの真空中で、６０℃の温度で乾燥させた。
【００５６】
結果：この得られた生成物は、アセトン不溶性部の割合約３０質量％を有し、かつこれはリゾホスファチジルコリン２質量％、モノアシルグリセリド６質量％、及びジアシルグリセリド８．５質量％を含有する。
【００５７】
実施例８
粗レシチン７０ｇを、大豆油３０ｇと混合し、６０℃の温度で撹拌した。Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒからのリパーゼ０．１ｇを、水１２ｇに溶解し、引き続き撹拌下で、前記レシチン／油混合物に添加した。前記混合物を６０℃で撹拌し、１５時間の反応時間後、０．１ｂａｒの真空中で、６０℃の温度で乾燥させた。
【００５８】
結果：この得られた生成物は、アセトン不溶性部の割合約４５質量％を有し、かつこれはリゾホスファチジルコリン３質量％、モノアシルグリセリド５質量％、及びジアシルグリセリド１０質量％を含有する。
【００５９】
実施例９
粗レシチン７０ｇを、硬化したパーム脂３０ｇと混合し、４５℃の温度で撹拌した。Ｃａｎｄｉｄａ ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａからのリパーゼ０．０５ｇを、水１０ｇに溶解し、引き続き撹拌下で、前記レシチン／油混合物に添加した。前記混合物を４５℃で撹拌し、８時間の反応時間後、０．１ｂａｒの真空中で、６０℃の温度で乾燥させた。引き続き前記生成物を冷却し、晶出させた。
【００６０】
結果：前記乳化剤は、アセトン不溶性部の割合約４５質量％を含有し、かつ更にリゾホスファチジルコリン３質量％、モノアシルグリセリド５質量％、及びジアシルグリセリド１０質量％を含有する。
【００６１】
実施例１０（適用例）
前記実施例９により製造した乳化剤を、以下のレシピによる、マーガリンの製造のための標準的な方法において使用した：
大豆油４７．５質量％
パーム油３１．５質量％
水１９．８質量％
食塩０．１質量％
乳清タンパク質０．０７質量％
クエン酸０．０３質量％
乳化剤１．０質量％。
【００６２】
結果：テクスチャー、融解挙動、及び塗りやすさに関して、標準のマーガリンと同等のマーガリンを得た。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）リン脂質成分及びトリアシルグリセリド成分からなる混合物を装入し、
ｂ）前記方法工程ａ）からの混合物に、前記混合物の水含量が３〜１５質量％になるような量の（ホスホ）リパーゼ含有水溶液を添加し、引き続き
ｃ）前記方法工程ｂ）から得られた混合物を２０〜８０℃の温度で、少なくとも２時間にわたって反応させ、かつ最後に
ｄ）この混合物を前記反応終了後に乾燥させる
ことを特徴とする、モノアシルグリセリド及びジアシルグリセリド含有乳化剤の、酵素による製造方法。
【請求項２】
リン脂質成分としてレシチン、有利には粗レシチン、特に有利には粗ソーヤレシチンが使用されることを特徴とする、請求項１記載の方法。
【請求項３】
トリアシルグリセリド成分として、植物油及び／又は動物油、有利には精製し、かつ／又は少なくとも部分的に硬化させた状態にある植物油及び／又は動物油が使用されることを特徴とする、請求項１又は２記載の方法。
【請求項４】
前記方法工程ａ）で、リン脂質成分割合１０〜８０質量％を有する混合物を装入することを特徴とする、請求項１から３までのいずれか１項記載の方法。
【請求項５】
前記方法工程ａ）で、トリアシルグリセリド成分割合２０〜９０質量％を有する混合物を装入することを特徴とする、請求項１から４までのいずれか１項記載の方法。
【請求項６】
前記方法工程ａ）で、前記混合物を３５〜６０℃の温度にさせることを特徴とする、請求項１から５までのいずれか１項記載の方法。
【請求項７】
前記方法工程ｂ）で、微生物由来のリパーゼ及び／又はホスホリパーゼ、有利にはＣａｎｄｉｄａ及び／又はＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓからのリパーゼ及び／又はホスホリパーゼを使用することを特徴とする、請求項１から６までのいずれか１項記載の方法。
【請求項８】
０．０５〜１０ｍｇ／ｍｌの（ホスホ）リパーゼ量を使用することを特徴とする、請求項１から７までのいずれか１項記載の方法。
【請求項９】
前記方法工程ｃ）で、４０〜５０℃の温度に調節することを特徴とする、請求項１から８までのいずれか１項記載の方法。
【請求項１０】
前記方法工程ｃ）で、前記反応期間は５〜２０時間、特に有利には８〜１２時間であることを特徴とする、請求項１から９までのいずれか１項記載の方法。
【請求項１１】
前記乾燥工程ｄ）を、６０〜８０℃の温度で、かつ特に有利には真空中で実施することを特徴とする、請求項１から１０までのいずれか１項記載の方法。
【請求項１２】
リゾレシチン、モノアシルグリセリド及びジアシルグリセリドからなる混合物を、リゾレシチン３．０〜７５質量％、モノアシルグリセリド２．０〜２０質量％、及びジアシルグリセリド６．０〜４０質量％の有利な割合で得ることを特徴とする、請求項１から１１までのいずれか１項記載の方法。
【請求項１３】
リン脂質成分：モノアシルグリセリド成分及びジアシルグリセリド成分の割合１：０．２５〜４．０を有する混合物を得ることを特徴とする、請求項１から１１までのいずれか１項記載の方法。
【請求項１４】
食料品分野における、特にアイスクリーム、マーガリン及びベークド製品の種類における、及び化粧品分野における、エマルション及びクリームの製造のための、請求項１から１３までのいずれか１項記載の方法により得られた混合物の使用。
【請求項１】
ａ）リン脂質成分及びトリアシルグリセリド成分からなる混合物を装入し、
ｂ）前記方法工程ａ）からの混合物に、前記混合物の水含量が３〜１５質量％になるような量の（ホスホ）リパーゼ含有水溶液を添加し、引き続き
ｃ）前記方法工程ｂ）から得られた混合物を２０〜８０℃の温度で、少なくとも２時間にわたって反応させ、かつ最後に
ｄ）この混合物を前記反応終了後に乾燥させる
ことを特徴とする、モノアシルグリセリド及びジアシルグリセリド含有乳化剤の、酵素による製造方法。
【請求項２】
リン脂質成分としてレシチン、有利には粗レシチン、特に有利には粗ソーヤレシチンが使用されることを特徴とする、請求項１記載の方法。
【請求項３】
トリアシルグリセリド成分として、植物油及び／又は動物油、有利には精製し、かつ／又は少なくとも部分的に硬化させた状態にある植物油及び／又は動物油が使用されることを特徴とする、請求項１又は２記載の方法。
【請求項４】
前記方法工程ａ）で、リン脂質成分割合１０〜８０質量％を有する混合物を装入することを特徴とする、請求項１から３までのいずれか１項記載の方法。
【請求項５】
前記方法工程ａ）で、トリアシルグリセリド成分割合２０〜９０質量％を有する混合物を装入することを特徴とする、請求項１から４までのいずれか１項記載の方法。
【請求項６】
前記方法工程ａ）で、前記混合物を３５〜６０℃の温度にさせることを特徴とする、請求項１から５までのいずれか１項記載の方法。
【請求項７】
前記方法工程ｂ）で、微生物由来のリパーゼ及び／又はホスホリパーゼ、有利にはＣａｎｄｉｄａ及び／又はＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓからのリパーゼ及び／又はホスホリパーゼを使用することを特徴とする、請求項１から６までのいずれか１項記載の方法。
【請求項８】
０．０５〜１０ｍｇ／ｍｌの（ホスホ）リパーゼ量を使用することを特徴とする、請求項１から７までのいずれか１項記載の方法。
【請求項９】
前記方法工程ｃ）で、４０〜５０℃の温度に調節することを特徴とする、請求項１から８までのいずれか１項記載の方法。
【請求項１０】
前記方法工程ｃ）で、前記反応期間は５〜２０時間、特に有利には８〜１２時間であることを特徴とする、請求項１から９までのいずれか１項記載の方法。
【請求項１１】
前記乾燥工程ｄ）を、６０〜８０℃の温度で、かつ特に有利には真空中で実施することを特徴とする、請求項１から１０までのいずれか１項記載の方法。
【請求項１２】
リゾレシチン、モノアシルグリセリド及びジアシルグリセリドからなる混合物を、リゾレシチン３．０〜７５質量％、モノアシルグリセリド２．０〜２０質量％、及びジアシルグリセリド６．０〜４０質量％の有利な割合で得ることを特徴とする、請求項１から１１までのいずれか１項記載の方法。
【請求項１３】
リン脂質成分：モノアシルグリセリド成分及びジアシルグリセリド成分の割合１：０．２５〜４．０を有する混合物を得ることを特徴とする、請求項１から１１までのいずれか１項記載の方法。
【請求項１４】
食料品分野における、特にアイスクリーム、マーガリン及びベークド製品の種類における、及び化粧品分野における、エマルション及びクリームの製造のための、請求項１から１３までのいずれか１項記載の方法により得られた混合物の使用。
【公表番号】特表２００７−５０３８２５（Ｐ２００７−５０３８２５Ａ）
【公表日】平成１９年３月１日（２００７．３．１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５２５１０６（Ｐ２００６−５２５１０６）
【出願日】平成１６年９月２日（２００４．９．２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００４／００９８００
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０２４０３６
【国際公開日】平成１７年３月１７日（２００５．３．１７）
【出願人】（５０５１０６７０４）サティア ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング (3)
【氏名又は名称原語表記】Ｓａｔｉａ ＧｍｂＨ
【住所又は居所原語表記】Ｌｉｓｅ−Ｍｅｉｔｎｅｒ−Ｓｔｒａｓｓｅ ３４， Ｄ−８５３５４ Ｆｒｅｉｓｉｎｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１９年３月１日（２００７．３．１）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年９月２日（２００４．９．２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００４／００９８００
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０２４０３６
【国際公開日】平成１７年３月１７日（２００５．３．１７）
【出願人】（５０５１０６７０４）サティア ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング (3)
【氏名又は名称原語表記】Ｓａｔｉａ ＧｍｂＨ
【住所又は居所原語表記】Ｌｉｓｅ−Ｍｅｉｔｎｅｒ−Ｓｔｒａｓｓｅ ３４， Ｄ−８５３５４ Ｆｒｅｉｓｉｎｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ
【Ｆターム（参考）】
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