モノアシル化ベツリンおよびジヒドロベツリン誘導体、その製造および使用
本発明のベツリンおよびジヒドロベツリンアシル誘導体は強力な抗ＨＩＶ活性を有することが言い出された。本発明の化合物は、本明細書に記載された式Ｉを有する化合物、またはその製薬的に許容し得る塩［ここに、Ｒ1は、Ｃ2−Ｃ20の置換されているかまたは置換されていないカルボキシアシルであり、Ｒ2は、水素、クロロ、ブロモまたはヒドロキシであり、Ｒ4は、水素、またはＣ（Ｃ6Ｈ5）3であり、ここで、破線は、Ｃ20とＣ29との間の任意の二重結合を表する］である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ベツリンおよびジヒドロベツリンの新規合成誘導体、およびそのような誘導体の医薬としての使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
レトロウイルスは、小さく一本鎖のプラス鎖ＲＮＡウイルスである。レトロウイルス粒子は、２つの同一の一本鎖プラス鎖ＲＮＡ分子を含む。それらのゲノムは、とりわけ、逆転写酵素としても知られるＲＮＡ依存性ＤＮＡポリメラーゼの配列を含む。逆転写酵素の多くの分子は、成熟ウイルス粒子においてゲノムＲＮＡと密接な関連にあることが見い出されている。細胞への進入において、この逆転写酵素は、二本鎖のＤＮＡのウイルスゲノムのコピーを生成し、次いで、これは、宿主細胞のクロマチンへと挿入される。一旦挿入されると、このウイルスの配列は、プロウイルスと呼ばれる。レトロウイルス組込みは、ウイルスタンパク質に直接依存する。線状のウイルスＤＮＡ末端（ＬＴＲ）は、組み込まれたプロウイルスＤＮＡの直接の前駆体である。組込み部位では宿主のＤＮＡの短い範囲の特徴的な重複が存在する。
【０００３】
子孫ウイルスゲノムおよびｍＲＮＡは、プロウイルス配列の末端領域における転写調節シグナルである長末端反復すなわちＬＴＲに応答して宿主細胞ＲＮＡポリメラーゼによって挿入されたプロウイルス配列から転写される。宿主細胞のタンパク質産生機構を使用して、ウイルスタンパク質が生成され、その多くは、ウイルスのコードするプロテアーゼによってプロセシングを受けるまでは不活性である。代表的に、子孫ウイルス粒子は、非溶解性の様式で細胞表面から出芽する。レトロウイルス感染は、感染した細胞または生物の正常な生活環に必ずしも干渉緩衝するわけではない。しかし、宿主生物に対して常に良性であるわけでもない。殆どのクラスのＤＮＡウイルスが腫瘍形成と関連付けられ得るが、レトロウイルスは、ＲＮＡウイルスの中で腫瘍原性である唯一の分類学上の群である。種々のレトロウイルス（例えば、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、これは、ヒトにおける後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）の原因である病因因子である）もまた、高等動物の免疫系のいくつかの非常に異常な疾患の原因である。
【０００４】
ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）は、レトロウイルスの亜科であるレンチウイルスのメンバーである。多くのレトロウイルスは、周知の発ガン因子である。ＨＩＶ自体は、ヒトまたは他の動物においてガンを発生させることは知られていないが、それは、宿主に対して激しい攻撃を提示する。ウイルスゲノムは、多くの調節エレメントを含み、これは、そのウイルスが静止細胞および分裂細胞の両方において複製速度を制御することを可能とする。最も重要なことに、ＨＩＶは、免疫系の細胞に感染し、そして侵入し；これは、身体の免疫系を破壊し、そしてその患者を日和見感染および新生物に対して感受性にさせる。免疫欠損は、進行性でありそして不可逆性であるようであり、数年間にわたって１００％に近づく高死亡率を伴う。
【０００５】
ＨＩＶ−１は、栄養性であり、そして細胞表面識別抗原ＣＤ４（ＯＫＴ４、Ｔ４およびｌｅｕ３としても知られる）を発現する免疫系の細胞であるＴ４リンパ球に対して細胞変性性である。ウイルス栄養性は、ウイルスエンベロープ糖タンパク質であるｇｐ１２０と、細胞表面ＣＤ４分子との間の相互作用に起因する（Ｄａｌｇｅｉｓｈら、Ｎａｔｕｒｅ、３１２：７６３−７６７（１９８４））。これらの相互作用は、ＨＩＶによる感受性細胞の感染を媒介するのみならず、感染したＴ細胞と感染していないＴ細胞とのウイルス誘発性の融合の原因ともなっている。この細胞融合は、ＨＩＶ感染患者におけるＣＤ４細胞の巨大な多核合胞体の形成、細胞死、および進行性涸渇をもたらす。これらの事象は、ＨＩＶ誘発性免疫抑制およびその後続の続発症、日和見感染および新生物をもたらす。
【０００６】
ＣＤ４＋Ｔ細胞に加え、ＨＩＶの宿主の範囲は、単核食作用系統の細胞を含み（Ｄａｌｇｌｅｉｓｈら、前出）、これには、血液単球、組織マクロファージ、皮膚のランゲルハンス細胞およびリンパ節内の細網細胞が含まれる。ＨＩＶはまた、神経栄養性であり、中枢神経系における単球およびマクロファージに感染し得、重篤な神経障害を生じる。マクロファージ／単球は、主要なＨＩＶのリザーバである。それらは、ＣＤ４保有Ｔ細胞と相互作用し、そして融合して、Ｔ細胞の涸渇を生じ、従って、ＡＩＤＳの病因に寄与し得る。
【０００７】
かなりの進展が、過去数年間の間にＨＩＶ−１治療のための薬物開発においてなされてきた。現在では、米国において１２の薬物が使用承認を受けており、これには５つのヌクレオシドアナログ逆転写酵素インヒビター（ＡＺＴ、３ＴＣ、ｄｄＩ、ｄｄＣおよびＤ４Ｔ）、３つの非ヌクレオシドＲＴインヒビター（ネビラピン、デラビルジンおよびエファビレンツ）、および４つのプロテアーゼインヒビター（サキナビル、リトナビル、インジナビルおよびネルフィナビル）が含まれる。これらの薬物の組合せは特に有効であり、そして血漿中のウイルスＲＮＡのレベルを検出不能レベルにまで減少させ得、そしてウイルスの耐性の発生を遅延化させ得、患者の健康および寿命において改善をもたらす。
【０００８】
これらの利点にもかかわらず、現在利用可能な薬物療法には、なお問題が存在する。これらの薬物の多くは、重篤な毒性を示し、他の副作用（例えば、脂肪再分布）を有し、または複雑な投与スケジュールを要求し、これは、コンプライアンスを低減させ、それゆえ効力を制限する。ＨＩＶの耐性株はしばしば、組合せ治療でさえも長期間におよぶと発生する。これらの薬物の高いコストもまた、特に、先進国以外で、その広汎な使用についての制限となっている。
【０００９】
これらの問題を回避するさらなる薬物の開発に対するかなりの必要性がなお存在する。理想的には、これらは、ウイルスの生活環において異なる段階を標的化しており、組合せ治療について武器を追加し、そして最小限の毒性を示し、なお、より安い製造コストを有する。
【００１０】
これまで、ベツリン酸およびプラタン酸（ｐｌａｔａｎｉｃ ａｃｉｄ）は、Ｓｙｚｉｇｉｕｍ ｃｌａｖｉｆｌｏｒｕｍ由来の抗ＨＩＶ素因として単離された。ベツリン酸およびプラタン酸は、Ｈ９リンパ球におけるＨＩＶ−１複製に対して、阻害活性を示しており、ＥＣ50値は、それぞれ、１．４μＭおよび６．５μＭであり、そしてＴ．Ｉ．値は、それぞれ９．３および１４であった。ベツリン酸の水素化によって、ジヒドロベツリン酸が得られ、これは、若干より強力な抗ＨＩＶ活性を示し、ＥＣ50値は０．９であり、そしてＴ．Ｉ．値は、１４であった（Ｆｕｊｉｏｋａ，Ｔ．ら、Ｊ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．５７：２４３−２４７（１９９４））。
【００１１】
ベツリン酸（１）の特定の置換アシル基（例えば、３'，３'−ジメチルグルタリル基および３’，３’−ジメチルスクシニル基）でのエステル化によって、活性が増強された誘導体が生成した（Ｋａｓｈｉｗａｄａ，Ｙ．ら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３９：１０１６−１０１７（１９９６））。強力な抗ＨＩＶ薬剤であるアシル化ベツリン酸およびジヒドロベツリン酸の誘導体はまた、米国特許第５，６７９，８２８号に記載される。
【化１】
【００１２】
米国特許第５，４６８，８８８号は、ルパン（ｌｕｐａｎｅ）の２８−アミド誘導体を開示しており、これは、ＨＩＶ感染細胞に対して細胞保護効果を有すると記載されている。
【００１３】
特願２００１−１４３，８３２号は、抗ガン分野において有用である、ベツリン（３）およびその３，２８−ジエステルを開示する。
【化２】
【００１４】
米国特許第６，１７２，１１０号は、強力な抗ＨＩＶ活性を有することが見出されたベツリンおよびジヒドロベツリン誘導体を開示する。
【化３】
【００１５】
ベツリンの3'炭素のコハク酸によるエステル化により、ＨＩＶ−１活性を阻害することが可能な化合物が生じる(Pokrovskii, A.G. et al., Gos. Nauchnyi Tsentr Virusol. Biotekhnol. "Vector", 9:48５−491 (2001))。
【００１６】
公開された国際出願WO 02/26761は、真菌感染症を処置するためのベツリンおよび類縁体の使用を開示する。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１７】
改善された生体内分布（biodistribution）特性および異なる作用様式を有する、強力な抗レトロウイルス活性、特に抗ＨＩＶ活性、を有する化合物の必要性が依然として存在する。そのような化合物は、現存の抗ＨＩＶ治療に追加することが緊急に必要とされる。また、膣またはその他の粘膜に局所的に投与して個人間のＨＩＶ感染を予防できる安全で有効な化合物に対する必要性も存在する。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
本発明の第一の態様は、以下の式Ｉの新規化合物：
【００１９】
【化４】
［式中、
Ｒ1は、Ｃ2−Ｃ20の置換されているかまたは置換されていないカルボキシアシルであり、
Ｒ2は、水素、ハロゲン、ヒドロキシまたは−ＯＲ3であり；
Ｒ3は、水素、Ｃ2−Ｃ20の置換されているかまたは置換されていないカルボキシアシルであり；
Ｒ4は、水素、またはＣ（Ｃ6Ｈ5）3であり、
ここで、破線は、Ｃ20とＣ29との間の任意の二重結合を表す］
で示される化合物または、その製薬的に許容し得る塩に関する。
【００２０】
本発明の第二の態様は、医薬組成物に関し、これは、１以上の式Ｉの化合物、および製薬的に許容し得るキャリアまたは希釈剤を含有する。１以上のさらなる薬学的に活性な化合物もまた、これらの組成物に含有され得る。
【００２１】
本化合物は、抗レトロウイルス剤として有用である。従って、本発明の第三の態様は、動物の細胞または組織におけるレトロウイルス感染を阻害するための方法に関し、これは、式Ｉの化合物のレトロウイルス阻害有効量を投与する工程を包含する。好ましい態様は、レトロウイルス関連病理に罹患する患者を処置するための方法に関し、これは、被験体に、式Ｉの化合物を含む医薬組成物のレトロウイルス阻害有効量を投与する工程を包含する。
【００２２】
式Ｉの３−Ｏ-アシルベツリンおよびジヒドロベツリン誘導体は、１以上の抗ウイルス剤と共に組み合わせ治療に用いることができる。従って、本発明は、レトロウイルス関連の病状に冒されている患者を処置する方法であって、その患者にレトロウイルス阻害効果量の式Ｉで示される化合物を、１以上の抗ウイルス剤と組み合わせて投与することを含む方法を提供する。好ましくは、この抗ウイルス剤は、米国においてHIV治療での使用が承認されているものである。
【００２３】
本発明はさらに、個人間のＨＩＶ感染の伝搬を阻止する方法を提供する。特に、本発明は、ＨＩＶに感染した妊婦から胎児へのＨＩＶ感染の伝搬を阻止する方法であって、該妊婦および／または該胎児にレトロウイルス阻害に有効な量の１以上の式Ｉで示される化合物を妊娠中または出産直前、出産時または出産後に投与することを含む方法を提供する。
【００２４】
さらに本発明は、性交渉中のＨＩＶ感染の伝搬を予防する方法であって、性交渉の前に、レトロウイルス阻害に有効な量の１以上の式Ｉで示される化合物を含有する局所用組成物を膣または粘膜に適用することを含む方法を提供する。
【００２５】
さらに、本発明は式Ｉの化合物の製造方法に関する。
【００２６】
本発明のさらなる態様および利点は、以下のとおり明細書中に記載し、また、明細書の記載から自明であり、または本発明の実践によって取得し得る。本発明の態様および利点は、添付の請求の範囲において特に示された指摘された要素および組み合わせによって理解され達成される。
【００２７】
上記の一般的記載および以下の詳細な説明は、例示および単なる説明であって特許請求の範囲のように、本発明を限定するものではない。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２８】
本発明の化合物は、以下の一般式Ｉを有する化合物である：
【化５】
［式中、
Ｒ1は、Ｃ2−Ｃ20の置換されているかまたは置換されていないカルボキシアシルであり、
Ｒ2は、水素、ハロゲン、ヒドロキシまたは−ＯＲ3であり；
Ｒ3は、水素、Ｃ2−Ｃ20の置換されているかまたは置換されていないカルボキシアシルであり；
Ｒ4は、水素、またはＣ（Ｃ6Ｈ5）3であり、
ここで、破線は、Ｃ20とＣ29との間の任意の二重結合を表し、
但し、Ｒ1はスクシニル、即ち
【化６】
ではない］
を有する化合物または、その製薬的に許容し得る塩である。
【００２９】
本発明の好ましい化合物は、Ｒ2が水素である化合物である。１つの態様において、Ｃ20とＣ29との間の結合は二重結合である。別の態様において、Ｃ20とＣ29との間の結合は単結合である。
【００３０】
別の群の好ましい化合物は、Ｒ2がハロゲンまたは−ＯＲ3であり、ここでＲ3はＣ2−Ｃ20の置換されているかまたは置換されていないカルボキシアシルである化合物である。１つの態様において、Ｃ20とＣ29との間の結合は二重結合である。別の態様において、Ｃ20とＣ29との間の結合は単結合である。
【００３１】
さらにより好ましいのは、Ｒ1が３’炭素原子にてモノ置換またはジ置換されているＣ4−Ｃ16のカルボキシアルカノイル基である化合物である。そのような側鎖は、以下の式：
−Ｃ（Ｏ）ＣＨ2Ｒ’Ｒ”（ＣＨ2）bＣＯＯＨ
を有し、ここで、Ｒ’およびＲ”は、それぞれ、Ｃ1-4アルキルであり、好ましくはメチルもしくはエチルであるか、またはＲ’は水素であり、かつ、Ｒ”はＣ1-4アルキルであるか、またはＲ’およびＲ”は一緒になってジメチレン結合、トリメチレン結合、テトラメチレン結合またはペンタメチレン結合を形成し、そしてｂは０〜１２であり、好ましくは、ｂは０〜４であり、最も好ましくは、ｂは０または１である。いくつかの態様では、Ｒ1は１以上の二重結合を含んでいてもよい。
【００３２】
さらに好ましいのは、以下の化合物であって、ここで、前記Ｒ1が、以下の式のＣ4−Ｃ16カルボキシアルコキシアセチル基である：
−Ｃ（Ｏ）ＣＨ2Ｏ（ＣＨ2）aＣＯＯＨ
を有し、ここで、ａは、１〜１０であり、好ましくは１〜４であり、最も好ましくは１または２である。
【００３３】
Ｒ2の好ましい値は以下を含む：水素、ハロゲン、または−ＯＲ5（ここで、Ｒ5は、好ましくは水素である）；−Ｃ（Ｏ）ＣＨ2Ｒ’Ｒ”（ＣＨ2）bＣＯＯＨ（ここで、Ｒ’、Ｒ”およびｂは前記と同意義である）；あるいは−Ｃ（Ｏ）ＣＨ2Ｏ（ＣＨ2）aＣＯＯＨ（ここで、ａは前記と同意義である）。
【００３４】
式Ｉの有用な化合物としては、Ｒ1が、それぞれ以下：
【化７】
のうちの一つであり；そしてＲ2が、好ましくは、水素、クロロ、ブロモもしくはヒロドキシである化合物が挙げられる。
【００３５】
本発明において、本発明の側鎖Ｒ1およびＲ3は置換されていてもいなくてもよい。いくつかの態様では、Ｒ1およびＲ3は１〜３のヒドロキシまたはハロで置換されていてもよい。いくつかの態様では、アルキル基およびＲ1およびＲ3のアルキルを含有する基は、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖のアルキル基であってよい。
【００３６】
また、本発明の範囲には、本発明化合物の非毒性の医薬上許容される塩が含まれる。これらの塩は、化合物の最終の単離および精製の間に in situ で、またはその遊離塩基の形態の精製された化合物を適当な有機または無機の酸と別々に反応させ、形成した塩を単離することによって製造することができる。医薬上許容される塩の例としては、有機および無機の酸付加塩が挙げられる。これらには、アルカリおよびアルカリ土類金属、例えば、ナトリウム、リチウムカリウム、カルシウム、マグネシウムなど、並びに非毒性のアンモニウム、第４級アンモニウムおよびアミンカチオン（アンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、エチルアミン、Ｎ−メチルグルカミンなどが含まれるがこれに限定されない）が挙げられる。
【００３７】
本発明のベツリンおよびジヒドロベツリンは、抗レトロウイルス活性、特に抗ＨＩＶ活性を有することが見出された。本発明の誘導体は、改善された水溶性および増強された経口バイオアベイラビリティーを有すると予想される。また、改善された水溶性によって本発明の類縁体を医薬調製物に容易にできる。さらに、本発明のベツリンおよびジヒドロベツリン誘導体は、改善された生体内分布特性を有すると予想される。
【００３８】
最も活性な化合物のＣ３アシル基は、Ｃ３’位にジメチル基または酸素を有する。この観察は、この型のアシル基が抗ＨＩＶ活性を増強するに重要であり得ることを示唆する。
【００３９】
本発明はまた、上記のベツリンおよびジヒドロベツリン誘導体の少なくとも１つを、必要に応じて、１つの以上の公知の抗ＡＩＤＳ治療薬または免疫賦活剤のいずれかと組み合せて、投与することによって、ＨＩＶ−１に感染した被験体を処置する方法に関する。
【００４０】
本発明の他の特徴、利点、態様、態様および目的は、本明細書において提示される記載、教示および指針に基づけば、関連分野の当業者には明白である。
【００４１】
本発明の類縁体は、抗レトロウイルス活性を有することが発見され、従って、必要に応じて、抗レトロウイルス化合物、抗ＨＩＶ化合物および／または免疫賦活性化合物あるいは抗ウイルス抗体またはそのフラグメントのようなさらなる薬学的活性成分とともに、レトロウイルス感染を処置するための適切な化合物および組成物を提供する。
【００４２】
用語「抗レトロウイルス活性」または「抗ＨＩＶ活性」とは、以下の少なくとも１つを阻害する能力を意図する：
（１）ウイルスの宿主細胞ゲノムへのプロＤＮＡ組込み；
（２）細胞へのレトロウイルスの接着；
（３）細胞へのウイルスの侵入；
（４）ウイルス複製を可能にする細胞代謝；
（５）そのウイルスの細胞内拡散の阻害；
（６）ウイルス抗原の合成および／または細胞性発現；
（７）ウイルスの出芽および成熟；
（８）ウイルスがコードする酵素の活性（例えば、逆転写酵素、インテグラーゼおよびプロテアーゼ）；および／または
（９）任意の公知のレトロウイルス作用またはＨＩＶ病原性作用（例えば、免疫抑制）。従って、これらの機構のいずれかを阻害する傾向のある任意の活性は、「抗レトロウイルス活性」または「抗ＨＩＶ活性」である。
【００４３】
本発明のベツリンまたはジヒドロベツリン誘導体は、単独で、または当該分野で公知の他の様式の治療と組み合せて、レトロウイルス（例えば、ＨＩＶ）感染の処置のために使用され得る。このような治療の態様としては、薬物（例えば、ＡＺＴ、ｄｄＣ、ｄｄＡ、ｄ４Ｔ、ｄｄＩまたは他の任意の抗レトロウイルス薬物の少なくとも１つあるいは抗体を互いに組み合せたもの、あるいは例えば、可溶性ＣＤ４、ＣＤ４に対する抗体、およびＣＤ４もしくは抗ＣＤ４の結合体、または本明細書においてさらに提示するもののような生物学に基づいた治療剤との組合せであるが、それらに限定されない）を用いた化学療法が挙げられる。
【００４４】
本発明のベツリンまたはジヒドロベツリン誘導体が正常細胞に対して比較的ほとんどまたは実質的に全く毒性がないことから、その有用性は、確立されたレトロウイルス感染の処置に限定されない。例えば、本発明に従うベツリン誘導体は、血液銀行において維持されているもののような血液製剤を処置するに使用され得る。国の血液供給は、現在ＨＩＶに対する抗体について試験されている。しかし、この試験は、まだ不完全なもので、そして陰性の試験結果であったサンプルでもなお、ＨＩＶウイルスを含み得る。血液および血液製剤を、本発明のベツリン誘導体で処置することは、検出されなかったかもしれない任意のレトロウイルスを殺傷することによってさらなる程度の安全性を付加し得る。
【００４５】
さらに、本発明のベツリンおよびジヒドロベツリン誘導体は個人間のＨＩＶの伝搬を阻止するための予防約として用いることができる。例えば、この誘導体を、ＨＩＶに感染した妊婦および／または胎児に、妊娠中、出産の直前、出産時または出産後に、経口または注射により投与して、新生児が感染する可能性を低減することができる。また、この誘導体を分娩直前に膣に投与して、新生児が産道を通る間の感染を予防することができる。さらに、本発明の誘導体は、１以上の式ＩまたはＩＩで示される化合物を含有する局所用組成物のレトロウイルス阻害に有効な量を、性交渉前に膣またはその他の粘膜に適用することにより、性交渉中のＨＩＶの伝搬を予防することができる。例えば、本発明の本発明を用いて、感染した男性から感染していない女性へのまたはその逆のＨＩＶの伝搬を予防することができる。
【００４６】
医薬組成物
本発明の医薬組成物は、少なくとも１つのベツリンまたはジヒドロベツリン誘導体を含み得る。本発明に従う医薬組成物はまた、例えば、以下を含むがそれらに限定されない他の抗ウイルス薬剤をさらに含む：ＡＺＴ（ジドブジン、ＲＥＴＲＯＶＩＲ、Ｇｌａｘｏ Ｗｅｌｌｃｏｍｅ）、３ＴＣ（ラミブジン、ＣＯＭＢＩＶＩＲ、Ｇｌａｘｏ Ｗｅｌｌｃｏｍｅ）、ｄｄＩ（ジダノシン、ＶＩＤＥＸ、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、ｄｄＣ（ザルシタビン、ＨＩＶＩＤ、Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ）、Ｄ４Ｔ（スタブジン、ＺＥＲＩＴ、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、アバカビル（ＺＩＡＧＥＮ、Ｇｌａｘｏ Ｗｅｌｌｃｏｍｅ）、ネビラピン（ＶＩＲＡＭＵＮＥ，Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）、デラビルジン（Ｐｈａｒｍａｃｉａ ａｎｄ Ｕｐｊｏｈｎ）、エントリシタビン（ＥＭＴＲＩＶＡ、Gilead Science）、エファビレンツ（ＳＵＳＴＩＶＡ，ＤｕＰｏｎｔ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、テノフォビル（ＶＩＲＥＡＤ、Gilead Science）、サキナビル（ＩＮＶＩＲＡＳＥ、ＦＯＲＴＯＶＡＳＥ，Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ）、リトナビル（ＮＯＲＶＩＲ、Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、インジナビル（ＣＲＩＸＩＶＡＮ、Ｍｅｒｃｋ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ）、ネルフィナビル（ＶＩＲＡＣＥＰＴ、Ａｇｏｕｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、アンプレナビル（ＡＧＥＮＥＲＡＳＥ、Ｇｌａｘｏ Ｗｅｌｌｃｏｍｅ）、アデフォビル（ＰＲＥＶＥＯＮ，ＨＥＰＳＥＲＡ、Ｇｉｌｅａｄ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、アタザナビル（ＲＥＹＡＴＡＺ、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、ロピナビルおよびリトナビル（ＫＡＬＥＴＲＡ、Abbot Laboratories）、およびヒドロキシ尿素（ＨＹＤＲＥＡ、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｅｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）または任意の他の抗レトロウイルス薬または抗体を互いに組み合わせて、または例えば、gp４１由来ペプチドエンフビルチド（ＦＵＳＥＯＮ、Roche and Trimeris）やＴ−１２４９または可溶性ＣＤ４、ＣＤ４に対する抗体およびＣＤ４または抗ＣＤ４のコンジュゲート、または本明細書にさらに示すような、生物学的ベースの治療剤と共に含有することができる。
【００４７】
本発明のベツリン誘導体との最適な使用について適切なさらなる抗ウイルス薬剤としては、以下を含み得るがそれらに限定されない：Ｅｔｈｉｇｅｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｍａｔｒｉｘ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓによって製造されるＡＬ−７２１（脂質混合物）；アムホテリシンＢメチルエステル；ＤｕＰｏｎｔ／ＨＥＭ Ｒｅｓｅａｒｃｈによって開発されたＡｍｐｌｉｇｅｎ（ミスマッチＲＮＡ）；抗ＡＩＤＳ抗体（Ｎｉｓｓｈｏｎ Ｆｏｏｄ）；１ ＡＳ−１０１（重金属ベースの免疫賦活剤）；Ｔｒｉｔｏｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｓｈｅｌｌ Ｏｉｌ）によって製造されるＢｅｔａｓｅｒｏｎ（βインターフェロン）；ブチル化ヒドロキシトルエン；Ｃａｒｒｏｓｙｎ（ポリマンノアセテート）；Ｃａｓｔａｎｏｓｐｅｒｉｍｉｎｅ；Ｃｏｎｔｒａｃａｎ（ステアリン酸誘導体）；Ｐｈａｒｍａｌｅｃによって製造されるＣｒｅｍｅ Ｐｈａｒｍａｔｅｘ（塩化ベンザルコニウムを含有する）；ＣＳ−８７（ジドブジンの５−非置換誘導体）、Ｓｙｎｔｅｘ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎによって製造されたＣｙｔｏｖｅｎｅ（ガンシクロビル）；硫酸デキストラン；Ｃａｒｔｅｒ−Ｗａｌｌａｃｅ ａｎｄ Ｄｅｇｕｓｓａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌによって製造されるＤ−ペニシリラミン（３−メルカプト−Ｄ−バリン）；Ａｓｔｒａ ＡＢによって製造されるＦｏｓｃａｒｎｅｔ（ホスホノ蟻酸ナトリウム）；Ｌｅｏ Ｌｏｖｅｎｓによって製造されるフシジン酸；グリチルリチン（甘草根の構成成分）；Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｓａｎｔ’ｅによって製造されるＨＰＡ−２３（アンモニウム−２１−タングスト−９−アンチモネート）；Ｐｏｒｔｏｎ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌによって開発されたヒト免疫不全ウイルス抗ウイルス剤；Ｍｅｒｒｅｌｌ−Ｄｏｗによって製造されるＯｒｎｉｄｙｌ（エフロルニチン）；ノノキシノール；Ｌｙｐｈｏ Ｍｅｄによって製造されるペントアミジンイセチオナート（ＰＥＮＴＡＭ−３００）；Ｐｅｎｉｎｓｕｌａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓによって製造されるペプチドＴ（オクタペプチド配列）；フェニトイン（Ｗａｒｎｅｒ Ｌａｍｂｅｒｔ）；Ｒｉｂａｖｉｒｉｎ；Ａｄｒｉａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓによって製造されるＲｉｆａｂｕｔｉｎ（アンサマイシン）；ＣＤ４−ＩｇＧ２（Ｐｒｏｇｅｎｉｃｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）または他のＣＤ４含有分子もしくはＣＤ４ベースの分子；Ｔ−２０（Ｔｒｉｍｅｒｉｓ）；Ｗａｒｎｅｒ−Ｌａｍｂｅｒｔ Ｃｏｍｐａｎｙによって製造されるＴｒｉｍｅｔｒｅｘａｔｅ：Ｓａｎｗａ Ｋａｇａｋｕによって製造されるＳＫ−８１８（ゲルマニウム由来の抗ウイルス剤）；Ｍｉｌｅｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓによって製造されるスラミンおよびそのアナログ；Ｕｅｎｏ Ｆｉｎｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ Ｉｎｄｕｓｔｒｙによって製造されるＵＡ００１；ならびにＧｌａｘｏ Ｗｅｌｌｃｏｍｅによって製造されるＷｅｌｌｆｅｒｏｎ（αインターフェロン）。
【００４８】
本発明の医薬組成物はまた、免疫調節剤をさらに含み得る。本発明に従って、本発明のベツリンの誘導体とともに必要に応じて使用するための適切な免疫調節剤は、以下を含むがそれらに限定されない：ＡＢＰＰ（Ｂｒｏｐｒｉｒｉｍｉｎｅ）；ＤｕＰｏｎｒ／ＨＥＭ ＲｅｓｅａｒｃｈのＡｍｐｌｉｇｅｎ（ミスマッチＲＮＡ）；抗ヒトインターフェロンα抗体（Ａｄｖａｎｃｅ Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ Ｃｏｎｃｅｐｔｓ）；抗ＡＩＤＳ抗体（Ｎｉｓｓｈｏｎ Ｆｏｏｄ）；ＡＳ−１０１（重金属ベースの免疫賦活剤；アスコルビン酸およびその誘導体インターフェロンβ；Ｃａｒｒｏｓｙｎ（ポリマンノアセテート）；Ｃｉａｍｅｘｏｎ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ−Ｍａｎｎｈｅｉｍ）；シクロスポリン；シメチジン；ＣＬ−２４６，７３８（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｙａｎａｍｉｄ）；コロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ（Ｓａｎｄｏｚ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）を含む）；ジニトロクロロベンゼン；ＨＥ２０００（Ｈｏｌｌｉｓ−Ｅｄｅｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）；インターフェロン−α；インターフェロン−γ；グルカン；超免疫γグロブリン（Ｂａｙｅｒ）；ＩＭＲＥＧ−１（白血球透析物）およびＩＭＲＥＧ−２（ＩＭＲＥＧ Ｃｏｒｐ．）；イムチオール（ジエチルチオカルバミン酸ナトリウム）（Ｉｎｓｔｉｔｕｔ Ｍｅｒｉｅｕｘ）；インターロイキン１（Ｃｅｔｕｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ；Ｈｏｆｆｍａｎｎ−ＬａＲｏｃｈｅ；Ｉｍｍｕｎｅｘ）；インターロイキン２（ＩＬ−２）（Ｃｈｉｒｏｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）；イソプリノシン（イノシンプラノベクス）；Ｋｒｅｓｔｉｎ（三共）；ＬＣ−９０１８（ヤクルト）；レンチナン（味の素／山之内製薬）；ＬＦ−１６９５（Ｆｏｕｒｎｉｅｒ）；メチオニン−エンケファリン（ＴＮＩ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ；Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）：Ｍｉｎｏｐｈａｇｅｎ Ｃ；ムラミルトリペプチド、ＭＴＰ−ＰＥ（Ｃｉｂａ−Ｇｅｉｇｙ）；ナルトレキソン（「Ｔｒｅｘａｎ」ＤｕＰｏｎｔ）；Ｎｅｕｔｒｏｐｉｎ（ＲＮＡ免疫調節剤）（Ｎｉｐｐｏｎ Ｓｈｉｎｇａｋｕ）；Ｒｅｍｕｎｅ（Ｉｍｍｕｎｅ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）；Ｒｅｔｉｃｕｌｏｓｅ（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｖｉｒａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）；小柴胡湯およびニンジン；胸腺体液性因子；ＴＰ−０５（Ｔｈｙｍｏｐｅｎｔｉｎ、Ｏｒｔｈｏ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）；サイモシン第五因子およびサイモシン１；Ｔｈｙｍｏｓｔｉｍｕｌｉｎ；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈによって製造されるＴＮＦ（腫瘍壊死因子）；ならびにビタミンＢ調製物。
【００４９】
本発明の好ましい動物被験体は、哺乳動物である。用語「哺乳動物（の）」とは、哺乳綱に属する個体を意味する。本発明は、ヒト患者の処置において特に有用である。
【００５０】
用語「処置」とは、レトロウイルス関連病理の予防、改善または治癒を含み得る目的のために、ベツリンまたはジヒドロベツリン誘導体を被験体に投与することを意味する。
【００５１】
医薬は、それらがその患者に同時に投与される場合または各医薬の投与の間の時間が生物学的活性の重複を許容するような場合に、互いに「組み合せて」提供されることが考慮される。
【００５２】
１つの好ましい態様において、少なくとも１つのベツリンまたはジヒドロベツリン誘導体は、単一の医薬組成物を含み得る。
【００５３】
本発明に従う投与のための医薬組成物は、本発明に従う少なくとも１つのベツリンまたはジヒドロベツリン誘導体を、製薬的に許容し得る形態において、必要に応じて製薬的に許容し得るキャリアと組み合せて含み得る。これらの組成物は、その意図する目的を達成する任意の手段によって投与され得る。本発明に従うベツリン誘導体の投与のための量および養生法は、レトロウイルス病理を処置する臨床分野の当業者によって用意に決定され得る。
【００５４】
例えば、投与は非経口（例えば、皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内、経皮または経頬粘膜の経路）によるものであり得る。あるいは、または同時に、投与は、経口経路によるものであり得る。投与される投薬量は、そのレシピエントの年齢、健康および体重、既に受けた処置または同時に受けている処置の型（あれば）、処置の頻度および所望される効果の性質に依存する。
【００５５】
本発明の範囲内の組成物は、本発明に従う少なくとも１つのベツリンまたはジヒドロベツリン誘導体を、その意図する目的を達成するに有効な量において、含有する全ての組成物を含む。個体の必要量は変動するが、各成分の有効量の最適範囲の決定は、当業者の範囲内である。代表的な投薬量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ体重〜約１００ｍｇ／ｋｇ体重を包含する。好ましい投薬量は、約１ｍｇ／ｋｇ体重〜約１００ｍｇ／ｋｇ体重の活性成分を包含する。最も好ましい投薬量は、約１０ｍｇ／ｋｇ体重〜約１００ｍｇ／ｋｇ体重を包含する。
【００５６】
治療的投与はまた、本発明の少なくとも１つのさらなるベツリンまたはジヒドロベツリン誘導体または他の治療薬剤（例えば、抗ウイルス剤または免疫賦活剤）の、事前の、同時の、事後のまたは付属の投与を包含し得る。そのようなアプローチにおいて、第二の薬物の投薬量は、好ましくは、第一の治療剤の投薬量と同一であり得るか、または異なり得る。好ましくは、その薬物は、各薬物の推奨される量において別の日に投与される。
【００５７】
本発明の化合物の投与はまた、必要に応じて、免疫系の追加免疫剤または免疫調節剤を使用する、事前の、同時の、事後のまたは付属的な治療を包含し得る。薬理学的に活性な化合物に加えて、本発明の医薬組成物はまた、薬学的に使用され得る調製物へその活性化合物の処理を用意にする賦形剤および補助剤を含む適切な製薬的に許容し得るキャリアを含み得る。好ましくは、調製物、特に、経口投与され得る調製物、ならびに錠剤、糖衣錠、およびカプセルのような投与の好ましい型について使用され得る調製物、ならびにまた直腸投与され得る調製物（例えば、坐剤）、ならびに注射または経口による投与に適切な溶液は、約０．０１％〜９９％の、好ましくは、約２０〜７５％の、活性化合物を、賦形剤とともに含む。
【００５８】
本発明の医薬組成物は、それ自身が公知である様式（例えば、慣用的な混合、造粒、糖衣製造、溶解または凍結乾燥のプロセス）によって製造される。従って、経口使用のための医薬組成物は、その活性化合物を、固体賦形剤とともに混合すること、必要に応じて、得られた混合物を粉砕すること、および所望される場合または必要である場合に、適切な補助剤を添加した後に、顆粒混合物を処理して錠剤または糖衣錠のコアを得ることによって得られ得る。
【００５９】
適切な賦形剤は、例えば、糖（例えば、ラクトースまたはスクロース、マンニトールまたはソルビトール）；セルロース調製物および／またはリン酸カルシウム（例えば、リン酸三カルシウムまたはリン酸水素カルシウム；ならびに結合剤（例えば、トウモロコシデンプン、コムギデンプン、コメデンプン、イモデンプンを使用したデンプンペースト、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、および／またはポリビニルピロリドン）のような賦形剤である。所望される場合、崩壊剤（例えば、上記に言及したデンプン類、およびさらにカルボキシメチルデンプン、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸、あるいは、それらの塩（例えば、アルギン酸ナトリウム））が添加され得る。補助剤には、とりわけ、流動性調節剤および滑沢剤（例えば、シリカ、タルク、ステアリン酸またはそれらの塩（例えば、ステアリン酸マグネシウムもしくはステアリン酸カルシウム）および／またはポリエチレングリコール）がある。糖衣のコアは、所望される場合、胃液に抵抗性である適切なコーティングとともに提供される。この目的のために、濃縮された糖溶液が使用され得、これは、必要に応じて、アラビアガム、タルク、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコールならびに／または二酸化チタン、ラッカー溶液および適切な有機溶媒もしくは溶媒混合物を含み得る。胃液に抵抗性のコーティングを生産するために、フタル酸アセチルセルロースまたはフタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロースのような適切なセルロース調製物の溶液が使用される。染色物質または色素が、例えば、有効な化合物の用量の同定のため、またはその組合せを特徴付けるために、この錠剤または糖衣コーティングに添加され得る。
【００６０】
経口で使用され得る他の薬学的調製物は、ゼラチンで作製された押し出し成型（ｐｕｓｈ−ｆｉｔ）カプセル、およびゼラチンおよびグリセロールもしくはソルビトールのような可塑剤で作製された封入軟カプセルを含み得る。押し出し成型カプセルは、その有効な化合物を、賦形剤（例えば、ラクトース）、結合剤（例えば、デンプン）、および／または滑沢剤（例えば、タルクもしくはステアリン酸マグネシウム）、ならびに必要に応じて安定剤とともに混合され得る顆粒剤の形態で含み得る。軟カプセルにおいて、有効な化合物は、好ましくは、適切な液体（例えば、脂肪油または流動パラフィン）に溶解または懸濁される。さらに、安定剤が添加され得る。
【００６１】
直腸で使用され得る可能な薬学的調製物は、例えば、有効な化合物と坐剤の基剤との組合せからなる坐剤を含む。適切な坐剤の基剤は、例えば、天然または合成のトリグリセリドまたはパラフィン炭水化物である。さらに、基剤と有効な化合物との組合せからなる直腸ゼラチンカプセルを使用することもまた可能である。可能な基剤材料としては、例えば、液体のトリグリセリド、ポリエチレングリコール、またはパラフィン炭水化物が挙げられる。
【００６２】
非経口投与のための適切な処方物としては、水溶性形態の有効な化合物（例えば、水溶性の塩）の水溶液を含む。さらに、適切な油状注射懸濁液として有効な化合物の懸濁物が投与され得る。適切な親油性の溶媒またはビヒクルとしては、脂肪油（例えば、ゴマ油、または合成の脂肪酸エステル（例えば、オレイン酸エチルまたはトリグリセリド））が挙げられる。その懸濁物の粘性を上昇させる物質を含み得る水性注射用懸濁物は、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトールおよび／またはデキストランを含む。必要に応じて、その懸濁物はまた、安定剤を含み得る。
【００６３】
本発明に従う全身投与のための薬学的処方物は、経腸投与、非経口投与または局所投与のために処方され得る。実際、すべての３つの型の処方物を同時に使用して、その有効成分の全身投与を達成し得る。
【００６４】
経口投与のための適切な処方物は、硬ゼラチンカプセルまたは軟ゼラチンカプセル、糖衣錠、丸剤、錠剤（コーティング錠剤を含む）、エリキシル剤、懸濁剤、シロップ剤、または吸入剤およびそれらの徐放形態を包含する。
【００６５】
経口投与のために処方されたものに加えて、固体投与形態は、直腸坐剤を含む。
【００６６】
分娩中または性交渉中の個人間のＨＩＶ感染を予防するための予防用局所組成物は、１以上の式ＩまたはＩＩの化合物および少なくとも１つの製薬的に許容し得る局所用担体または希釈剤を含有する。局所用組成物は、例えば、軟膏、クリーム、ジェル、スプレー、泡、またはスポンジの形態である。予防用局所用製剤における式ＩまたはＩＩの化合物の投与量は、一般に、約１０００ｍgグラム未満、好ましくは、約０．０１〜約１００ミリグラムである。局所用製剤は他の予防用成分も含有し得る。担体および希釈剤は、他の製剤成分に適合し、患者に有害でない意味において許容される。
【００６７】
局所用予防製剤としては、膣内、直腸または局所投与に適した製剤が挙げられる。この製剤は、適切な場合、分割された単位投与形態で便利に提供され、薬学分野の任意の既知の方法によって製造することができる。そのような方法は全て、活性成分を液体の担体、ジェルまたは微細な固形担体またはその両方と混合した後、必要ならば、生成物を所望の製剤に形成する工程を含む。
【００６８】
膣内投与に適当な予防用製剤は、活性成分に加え当分野で公知の適当な担体を含有する、ペッサリー、タンポン、クリーム、ジェル、ペーストゼリー、泡またはスプレー、あるいは水溶性もしくは油性の懸濁液、溶液もしくはエマルジョン（液体製剤）として提供することができる。液体製剤は、慣用の添加剤、例えば、懸濁剤、乳化剤、食用油を含む非水溶性ビークル、または保存剤を含有することができる。これらの製剤は、ＨＩＶの性的伝搬および産道を通過する際の新生児の感染の両方を阻止するのに有用である。一例では、膣内投与は、性交渉の前または分娩の直前に行うことができる。
【００６９】
固形担体を有する直腸または膣内投与に適当な予防用製剤は、好ましくは単位投与形態で提供される。適当な担体としては、ココアバターや当分野で一般に用いられる他の物質が挙げられる。坐剤は、例えば１以上の式ＩまたはＩＩの化合物を１以上の柔らかくしたまたは融解させた担体と混合した後、型に入れて冷却、成型することにより形成させることができる。
【００７０】
本発明の予防用製剤はさらに、１以上の分散剤、溶解剤、または懸濁剤を含む水性または非水性の基剤と共に製剤化した液摘剤の形態であってよい。液体スプレーは加圧された包装材から送達することができる。
【００７１】
本発明の予防用製剤は持続的送達に適合させることができる。または、予防用製剤は他の活性成分、例えば、殺精子剤、抗菌剤および抗ウイルス剤を含有することもできる。
【００７２】
本発明の３−Ｏ−アシルベツリン誘導体はまた、生分解性の徐放キャリアと配合された移植片の形態で投与され得る。あるいは、本発明のベツリンまたはジヒドロベツリン誘導体は、その有効成分の連続的な放出のための経皮パッチとして処方され得る。
【００７３】
局所投与のために適切な処方物は、クリーム、ゲル、ゼリー、漿剤、ペーストおよび軟膏を含む。適切な注射可能な溶液には、静脈内に注射可能な溶液、皮下に注射可能な溶液、および筋肉内に注射可能な溶液が含まれる。あるいは、このベツリンまたはジヒドロベツリン誘導体は、注入溶液または経鼻吸入もしくはスプレーとしての形態で投与され得る。
【００７４】
本発明の化合物は、当分野で既知の方法を用いて製造することができる。本発明の３−Ｏ−ベツリンおよびジヒドロベツリン誘導体を、反応式１に示す通りに製造した。ベツリン（１）の２８−ヒドロキシル基をトリフェニルメチルエーテル基で保護してベツリン２８−Ｏ−トリフェニルメチルエーテル（２）を得、ピリジン中この溶液をさらにジメチルアミノピリジンの存在下で還流温度にて適当なジカルボン酸で処理した。最後に、２８−保護基を、ＣＨ2Ｃl2−ＥｔＯＨ中、ピリジウムｐ−トルエンスルホン酸とともに還流することにより脱離し、所望の３−Ｏ−アシルベツリン誘導体を得た。
【化８】
【００７５】
ＨＩＶ−１阻害の生物学的評価を、確立されたプロトコルに従って実施した（Ｋａｓｈｉａｗａｄａ、Ｙ．ら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３９：１０１６−１０１７（１９９６）；Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ、Ｆ．ら、Ｂｉｏｏｒｇ＆Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．５：２１３３−２１４３（１９９７））。Ｔ細胞株Ｈ９を、完全培地（５％ＣＯ2および３７℃でのＬ−グルタミンとともに１０％ウシ胎仔血清を補充したＲＰＭＩ１６４０）中での連続培養にて維持した。この細胞株のアリコートを、対数増殖期にあるときにのみ実験に使用した。試験サンプルをまず、ジメチルスルホキシド中に溶解した。以下の薬物の最終濃度を、スクリーニングについて慣用的に使用した：１００μｇ／ｍｌ、２０μｇ／ｍｌ、４μｇ／ｍｌおよび０．８μｇ／ｍｌ。活性薬剤について、さらなる希釈物を、続く試験のために調製し、その結果、正確なＥＣ50値（以下に規定）を達成し得た。試験サンプルが調製している最中に、Ｈ９細胞株のアリコートを、ＨＩＶ−１（ＩＩＩＢ単離物）に感染させ、他方で、別のアリコートを、完全培地を用いて偽感染させた。これらの研究について使用したストックウイルスは、代表的には、１０4感染単位／ｍｌのＴＣＩＤ50値を有した。０．１と０．０１との間の感染単位／細胞の感染多重度（ｍｏｉ）に対するウイルスの適切な量を、Ｈ９細胞の最初のアリコートに添加した。他のアリコートは培養培地のみを受け、そしてこれらの儀感染細胞を、毒性決定（ＩＣ50、以下に規定）について使用した。３７℃および５％ＣＯ2での４時間のインキュベーション後、両方の細胞集団を、３回新鮮な培地で洗浄し、次いで、種々の濃度の試験薬物または培養培地（陽性感染コントロール／陰性薬物コントロール）を含む２４ウェルのプレートの適切なウェルへと添加した。さらに、ＡＺＴもまた、陽性薬物コントロールとして各実験の間にアッセイした。このプレートを、３７℃および５％ＣＯ2で４日間インキュベートした。
無細胞上清を、ｐ２４抗原ＥＬＩＳＡアッセイにおける使用のために４日目に収集した。ｐ２４抗原は、ＨＩＶのコアタンパク質であり、それゆえ、これは、上清に存在するウイルスの間接的な尺度である。毒性を、培養培地（毒性なし）、試験サンプルまたはＡＺＴのいずれかを受けた偽感染Ｈ９細胞においてＣｏｕｌｔｅｒ Ｃｏｕｎｔｅｒによって細胞計数を行うことにより決定した。試験サンプルが抑制能力を有し、そして毒性でなかった場合は、その効果は以下の用語で報告された：ＩＣ50、偽感染Ｈ９細胞の５０％に対して毒性であった試験サンプルの濃度；ＥＣ50、ＨＩＶ複製を５０％抑制し得た試験サンプルの濃度；および治療指数（ＴＩ）、ＥＣ50に対するＩＣ50の比率。
【００７６】
以下の実施例は、本発明の方法および組成物の例示であるが、限定ではない。当業者が通常遭遇しそして自明である種々の条件およびパラメータの他の適切な改変および適用は、本発明の精神および範囲内にある。
【００７７】
実施例１
ベツリンおよびジヒドロベツリン誘導体の一般的合成
ベツリン2８−O-トリフェニルメチルエーテル(2)を、ベツリン(1)(10g、22.6mmol)、トリフェニルメチルクロリド(12.6g、45.2mmol)、およびジメチルアミノピリジン(3.3g、27.0mmol)のDMF(75mL)溶液を攪拌しながら５時間還流することにより製造した。反応混合物を水で希釈し、CHCl3で抽出した。有機層を水で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濃縮した。EtOHから結晶化して、ベツリン2８−O-トリフェニルメチルエーテル(2)無色の針状晶(11.4 g, 73.5％収率)として得た。融点14９−152℃; [α]18D 2.5°(c 0.8, CHCl3); 1H-NMR (CDCl3): 0.51 (3H,S, CH3-26), 0.74 (3H,S, CH3-24), 0.75 (3H,S, CH3-25), 0.89 (3H,S, CH3-27), 0.95 (3H,S, CH3-23), 1.63 (3H,S, CH3-29), 2.90, 3.13 (each 1H, d, J=9.0 Hz, H2-28), 4.47 (1H, dd, J=5.0, 10.5 Hz, H-3), 4.51, 4.57 (each 1H,S, H2-30), 7.20-7.50 (15H in total, m, 芳香族-H).
【００７８】
３−Ｏ−アシルベツリン２８−Ｏ−トリフェニルメチルエーテルを、ベツリン２８−Ｏ−トリフェニルメチルエーテル（１当量ｍｏｌ）、ジメチルアミノピリジン（１当量ｍｏｌ）、および適当なジカルボン酸（２．５４当量ｍｏｌ）の無水ピリジン（５２５ｍＬ）溶液を一晩還流することにより製造した。反応混合物を氷水で希釈し、ＣＨＣｌ3で抽出した。有機層を水で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付した。
【００７９】
化合物５を、ベツリン２８−Ｏ−トリフェニルメチルエーテル、ジメチルアミノピリジン、およびジエチルコハク酸の無水ピリジン溶液を用いて上記のとおり製造した。収率は６４％であった。白色のアモルファス粉末； [α]18D +2.3°(c 0.44, CHCl3); 1H-NMR (CDCl3) : 0.50 (3H,S, CH3-26), 0.76 (3H,S, CH3-25), 0.79 (3H,S, CH3-24), 0.81 (3H,S, CH3-23), 0.88 (3H,S, CH3-27), 1.28, 1.29 (each 3H,S, ジエチルスクシニル CH3), 1.63 (3H,S, CH3-29), 2.55, 2.66 (each 1H, d, J=15.9 Hz, ジエチルスクシニル H2-2'), 2.90, 3.12 (each 1H, d, J=9.0 Hz, H2-28), 3.16 (1H, dd, J=4.6, 11.0 Hz, H-3), 4.51, 4.56 (each 1H,S, H2-30), 7.20-7.50 (15H in total, m, 芳香族-H).
【００８０】
化合物７：収率８２％（４００ｍｇの２を出発物質とする）：白色のアモルファス粉末； [α]18D +2.4°(c 0.84, CHCl3); 1H-NMR (CDCl3) : 0.51 (3H,S, CH3-26), 0.78 (3H,S, CH3-25), 0.82 (3H,S, CH3-24), 0.84 (3H,S, CH3-23), 0.89 (3H,S, CH3-27), 1.13 (6H,S, ジエチルグルタリル CH3’2), 1.63 (3H,S, CH3-29), 2.38, 2.45 (each 1H, d, J=14.0 Hz, ジエチルグルタリル H2-2'), 2.45 (2H,S, ジエチルグルタリル H2-4'), 2.90, 3.13 (each 1H, d, J=9.0 Hz, H2-28), 4.47 (1H, dd, J=5.0, 10.5 Hz, H-3), 4.51, 4.57 (each 1H,S, H2-30), 7.20-7.50 (15H in total, m, 芳香族-H).
【００８１】
化合物９：収率６５％（２８５ｍｇの２を出発物質とする）；白色のアモルファス粉末；[α]18D +3.0°(c 0.80, CHCl3); 1H-NMR (CDCl3) : 0.51 (3H,S, CH3-26), 0.78 (3H,S, CH3-25), 0.82 (6H,S, CH3-24および-23), 0.89 (3H,S, CH3-27), 1.63 (3H,S, CH3-29), 1.95 (2H, quintet, J=7.3 Hz, グルタリルH2-3'), 2.38, 2.41 (wach 2H, t, J=7.3 Hz, グルタリル H2-2'および-4'), 2.90, 3.13 (each 1H, d, J=9.0 Hz, H2-28), 4.46 (1H, dd, J=5.0, 10.0 Hz, H-3), 4.51, 4.57 (each 1H,S, H2-30), 7.20-7.50 (15H in total, m, 芳香族-H).
【００８２】
化合物１１：収率７２％（２７８ｍｇの２を出発物質とする）；白色のアモルファス粉末； [α]18D +2.7°(c 0.74, CHCl3); 1H-NMR (CDCl3) : 0.50 (3H,S, CH3-26), 0.73 (3H,S, CH3-25), 0.76(3H,S, CH3-24), 0.78 (3H,S, CH3-23), 0.86 (3H,S, CH3-27), 1.60 (3H,S, CH3-29), 2.89, 3.12 (each 1H, d, J=9.0 Hz, H2-28), 4.00, 4.16 (each 2H, brS, ジグリコシル H2-2'および4'), 4.41 (1H, dd, J=5.0, 10.0 Hz, H-3), 4.47, 4.56 (each 1H,S, H2-30), 7.20-7.50 (15H in total, m, 芳香族-H).
【００８３】
３−Ｏ−アシルベツリンを、３−Ｏ−アシルベツリン２８−Ｏ−トリフェニルメチルエーテル（１当量ｍｏｌ）およびピリジウムｐ−トルエンスルホン酸（３−５当量ｍｏｌ）のＥｔＯＨ−ＣＨ2Ｃｌ2溶液を一晩還流することにより製造した。反応混合物を氷水で希釈し、ＣＨＣｌ3で抽出した。有機層を水で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、またはＨＰＬＣにより精製した。
【００８４】
化合物６：収率７０％（３００ｍｇの５を出発物質とする）；無色のプリズム晶（ＥｔＯＨから）；融点２６９−２７１℃; [α]18D +21.0°(c 0.5, CHCl3); 1H-NMR (CDCl3) : 0.81 (3H,S, CH3-24), 0.84 (6H,S, CH3-25および-23), 0.94 (3H,S, CH3-27), 1.08 (3H,S, CH3-26), 1.28, 1.30 (each 3H,S, ジエチルスクシニル CH3), 1.68 (3H,S, CH3-29), 2.56, 2.67 (each 1H, d, J=15.9 Hz, ジエチルスクシニル H2-2'), 3.34, 3.80 (each 1H, d, J=10.7 Hz, H2-28), 4.49 (1H, dd, J=5.5, 11.0 Hz, H-3), 4.58, 4.68 (each 1H, brS, H2-30)
【００８５】
化合物８：収率５１％（２７５ｍｇの７を出発物質とする）；無色の針状晶（ＥｔＯＨから）；融点２２４−２２６℃; [α]18D +28.3°(c 0.46, CHCl3); 1H-NMR (CDCl3) : 0.84 (3H,S, CH3-24), 0.85 (3H,S, CH3-25), 0.86 (3H,S, CH3-23), 0.98 (3H,S, CH3-27), 1.02 (3H,S, CH3-26), 1.14 (6H,S、 ジエチルグルタリル CH3), 1.68 (3H,S, CH3-29), 2.40, 2.47 (each 1H, d, J=12.0 Hz, ジエチルグルタリル H2−2’), 2.46 (2H,Ｓ、 ジエチルグルタリル H2−4’), 3.34, 3.80 (each 1H, d, J=10.5 Hz, H2-28), 4.50 (1H, dd, J=5.0, 10.5 Hz, H-3), 4.58, 4.68 (each 1H, brS, H2-30)
【００８６】
化合物１０：収率７３％（１５２ｍｇの９を出発物質とする）；無色の針状晶（ＥｔＯＨから）；融点２１７−２１８℃; [α]18D +18.5°(c 0.38, CHCl3); 1H-NMR (CDCl3) : 0.83 (3H,S, CH3-24), 0.84 (3H,S, CH3-23), 0.85 (3H,S, CH3-25), 0.98 (3H,S, CH3-27), 1.02 (3H,S, CH3-26), 1.68 (3H,S, CH3-29), 1.96 (2H, m, グルタリル H2-3'), 2.39, 2.43 (each 2H, t, J=7.3 Hz, グルタリル H2-2'および4'), 3.34, 3.80 (each 1H, d, J=10.5 Hz, H2-28), 4.49 (1H, dd, J=5.5, 10.5 Hz, H-3), 4.58, 4.68 (each 1H, brS, H2-30)
【００８７】
化合物１２：収率４７％（１５０ｍｇの１１を出発物質とする））；白色のアモルファス粉末；[α]18D +22.2°(c 0.72, CHCl3); 1H-NMR (CDCl3+CD3OD): 0.84 (3H,S, CH3-24), 0.85 (3H,S, CH3-23), 0.86 (3H,S, CH3-25), 0.98 (3H,S, CH3-27), 1.03 (3H,S, CH3-26), 1.68 (3H,S, CH3-29), 3.31, 3.76 (each 1H, d, J=11.0 Hz, H2-28), 4.04, 4.23 (each 2H, brS, ジグリコシル H2-2'および4'), 4.56 (1H, dd, J=5.5, 10.5 Hz, H-3), 4.58, 4.68 (each 1H, brS, H2-30)
【００８８】
実施例２
薬理学的活性
本発明の化合物を、抗ＨＩＶ活性について、以下のアッセイ手順に従って、アッセイした。Ｔ細胞株Ｈ９および前単球細胞株Ｕ９３７を、完全培地（１０％ウシ胎仔血清を補充したＲＰＭＩ１６４０）を５％ＣＯ2および３７℃で用いて連続培養にて別々に維持した。この細胞株を、対数増殖期におけるときのみ実験に使用し、他方、感染させていない末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、まずＰＨＡ（１μｇ／ｍｌ）を用いて３日間刺激した。全ての細胞標的を、ＨＩＶ−１（ＩＩＩＢ単離物，ＴＣＩＤ50１０4ＩＵ／ｍｌ、感染多重度０．０１〜０．０１ＩＵ／細胞）とともに３７℃および５％ＣＯ2で１時間インキュベートした。この細胞株およびＰＢＭＣを、完全に洗浄して吸着していないビリオンを除去し、そしてそれぞれ、完全培地または１０％ｖ／ｖインターロイキン２（ＩＬ−２）を有する完全培地中に４×１０5細胞／ｍｌで再懸濁した。１ｍｌのアリコートを等容量の試験化合物（適切な培養培地中に希釈した）を含む２４ウェル培養プレートのウェルに入れた。各化合物の毒性を、３７℃および５％ＣＯ2で４日間の後に残留した化合物に曝露した感染していない細胞の数を決定することによって評価した。ｐ２４抗原ＥＬＩＳＡアッセイを使用して、ＨＩＶ感染した培養物の培地において放出されたウイルスのレベルを決定した。ｐ２４抗原アッセイは、ＨＩＶ−１抗ｐ２４特異的モノクローナル抗体を９６ウェルプレートにコーティングされた捕捉抗体として用いた。サンプルインキュベーション期間の後、ＨＩＶ−１ ｐ２４についての抗体を含むウサギ血清を用いて、マイクロタイターウェル表面に捕捉された任意のｐ２４をタグ化した。次いで、ペルオキシダーゼ結合体化ヤギ抗ウサギ血清を使用して、捕捉されたｐ２４と複合体化したＨＩＶ−１ ｐ２４特異的ウサギ抗体をタグ化した。次いで、試験サンプルにおけるｐ２４の存在を、基質の添加によって明らかにした。ｐ２４ ＥＬＩＳＡアッセイについてのカットオフは１２．５ｐｇ／ｍｌであった。培養培地中のｐ２４を、ｐ２４の既知量を含む標準曲線に対して定量した。抗ＨＩＶ活性および細胞傷害性について、それぞれ、有効濃度（ＥＣ50）および阻害濃度（ＩＣ50）を決定した。
【表１】
【００８９】
当業者は、具体的な態様が説明、記載されている一方、本発明の精神と範囲から逸脱することなく様々な修飾と変更ができることを理解する。
【００９０】
本発明の他の態様は、本明細書を考慮し、本明細書に開示した発明の実践することから当業者には明らかであろう。明細書および実施例は、以下のクレームによって示される本発明の真の範囲および精神でもって、単なる例示であると解釈されることを意図するものである。本明細書において引用した刊行物、特許出願および特許はすべて、参考として本明細書の一部を構成する。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ベツリンおよびジヒドロベツリンの新規合成誘導体、およびそのような誘導体の医薬としての使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
レトロウイルスは、小さく一本鎖のプラス鎖ＲＮＡウイルスである。レトロウイルス粒子は、２つの同一の一本鎖プラス鎖ＲＮＡ分子を含む。それらのゲノムは、とりわけ、逆転写酵素としても知られるＲＮＡ依存性ＤＮＡポリメラーゼの配列を含む。逆転写酵素の多くの分子は、成熟ウイルス粒子においてゲノムＲＮＡと密接な関連にあることが見い出されている。細胞への進入において、この逆転写酵素は、二本鎖のＤＮＡのウイルスゲノムのコピーを生成し、次いで、これは、宿主細胞のクロマチンへと挿入される。一旦挿入されると、このウイルスの配列は、プロウイルスと呼ばれる。レトロウイルス組込みは、ウイルスタンパク質に直接依存する。線状のウイルスＤＮＡ末端（ＬＴＲ）は、組み込まれたプロウイルスＤＮＡの直接の前駆体である。組込み部位では宿主のＤＮＡの短い範囲の特徴的な重複が存在する。
【０００３】
子孫ウイルスゲノムおよびｍＲＮＡは、プロウイルス配列の末端領域における転写調節シグナルである長末端反復すなわちＬＴＲに応答して宿主細胞ＲＮＡポリメラーゼによって挿入されたプロウイルス配列から転写される。宿主細胞のタンパク質産生機構を使用して、ウイルスタンパク質が生成され、その多くは、ウイルスのコードするプロテアーゼによってプロセシングを受けるまでは不活性である。代表的に、子孫ウイルス粒子は、非溶解性の様式で細胞表面から出芽する。レトロウイルス感染は、感染した細胞または生物の正常な生活環に必ずしも干渉緩衝するわけではない。しかし、宿主生物に対して常に良性であるわけでもない。殆どのクラスのＤＮＡウイルスが腫瘍形成と関連付けられ得るが、レトロウイルスは、ＲＮＡウイルスの中で腫瘍原性である唯一の分類学上の群である。種々のレトロウイルス（例えば、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、これは、ヒトにおける後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）の原因である病因因子である）もまた、高等動物の免疫系のいくつかの非常に異常な疾患の原因である。
【０００４】
ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）は、レトロウイルスの亜科であるレンチウイルスのメンバーである。多くのレトロウイルスは、周知の発ガン因子である。ＨＩＶ自体は、ヒトまたは他の動物においてガンを発生させることは知られていないが、それは、宿主に対して激しい攻撃を提示する。ウイルスゲノムは、多くの調節エレメントを含み、これは、そのウイルスが静止細胞および分裂細胞の両方において複製速度を制御することを可能とする。最も重要なことに、ＨＩＶは、免疫系の細胞に感染し、そして侵入し；これは、身体の免疫系を破壊し、そしてその患者を日和見感染および新生物に対して感受性にさせる。免疫欠損は、進行性でありそして不可逆性であるようであり、数年間にわたって１００％に近づく高死亡率を伴う。
【０００５】
ＨＩＶ−１は、栄養性であり、そして細胞表面識別抗原ＣＤ４（ＯＫＴ４、Ｔ４およびｌｅｕ３としても知られる）を発現する免疫系の細胞であるＴ４リンパ球に対して細胞変性性である。ウイルス栄養性は、ウイルスエンベロープ糖タンパク質であるｇｐ１２０と、細胞表面ＣＤ４分子との間の相互作用に起因する（Ｄａｌｇｅｉｓｈら、Ｎａｔｕｒｅ、３１２：７６３−７６７（１９８４））。これらの相互作用は、ＨＩＶによる感受性細胞の感染を媒介するのみならず、感染したＴ細胞と感染していないＴ細胞とのウイルス誘発性の融合の原因ともなっている。この細胞融合は、ＨＩＶ感染患者におけるＣＤ４細胞の巨大な多核合胞体の形成、細胞死、および進行性涸渇をもたらす。これらの事象は、ＨＩＶ誘発性免疫抑制およびその後続の続発症、日和見感染および新生物をもたらす。
【０００６】
ＣＤ４＋Ｔ細胞に加え、ＨＩＶの宿主の範囲は、単核食作用系統の細胞を含み（Ｄａｌｇｌｅｉｓｈら、前出）、これには、血液単球、組織マクロファージ、皮膚のランゲルハンス細胞およびリンパ節内の細網細胞が含まれる。ＨＩＶはまた、神経栄養性であり、中枢神経系における単球およびマクロファージに感染し得、重篤な神経障害を生じる。マクロファージ／単球は、主要なＨＩＶのリザーバである。それらは、ＣＤ４保有Ｔ細胞と相互作用し、そして融合して、Ｔ細胞の涸渇を生じ、従って、ＡＩＤＳの病因に寄与し得る。
【０００７】
かなりの進展が、過去数年間の間にＨＩＶ−１治療のための薬物開発においてなされてきた。現在では、米国において１２の薬物が使用承認を受けており、これには５つのヌクレオシドアナログ逆転写酵素インヒビター（ＡＺＴ、３ＴＣ、ｄｄＩ、ｄｄＣおよびＤ４Ｔ）、３つの非ヌクレオシドＲＴインヒビター（ネビラピン、デラビルジンおよびエファビレンツ）、および４つのプロテアーゼインヒビター（サキナビル、リトナビル、インジナビルおよびネルフィナビル）が含まれる。これらの薬物の組合せは特に有効であり、そして血漿中のウイルスＲＮＡのレベルを検出不能レベルにまで減少させ得、そしてウイルスの耐性の発生を遅延化させ得、患者の健康および寿命において改善をもたらす。
【０００８】
これらの利点にもかかわらず、現在利用可能な薬物療法には、なお問題が存在する。これらの薬物の多くは、重篤な毒性を示し、他の副作用（例えば、脂肪再分布）を有し、または複雑な投与スケジュールを要求し、これは、コンプライアンスを低減させ、それゆえ効力を制限する。ＨＩＶの耐性株はしばしば、組合せ治療でさえも長期間におよぶと発生する。これらの薬物の高いコストもまた、特に、先進国以外で、その広汎な使用についての制限となっている。
【０００９】
これらの問題を回避するさらなる薬物の開発に対するかなりの必要性がなお存在する。理想的には、これらは、ウイルスの生活環において異なる段階を標的化しており、組合せ治療について武器を追加し、そして最小限の毒性を示し、なお、より安い製造コストを有する。
【００１０】
これまで、ベツリン酸およびプラタン酸（ｐｌａｔａｎｉｃ ａｃｉｄ）は、Ｓｙｚｉｇｉｕｍ ｃｌａｖｉｆｌｏｒｕｍ由来の抗ＨＩＶ素因として単離された。ベツリン酸およびプラタン酸は、Ｈ９リンパ球におけるＨＩＶ−１複製に対して、阻害活性を示しており、ＥＣ50値は、それぞれ、１．４μＭおよび６．５μＭであり、そしてＴ．Ｉ．値は、それぞれ９．３および１４であった。ベツリン酸の水素化によって、ジヒドロベツリン酸が得られ、これは、若干より強力な抗ＨＩＶ活性を示し、ＥＣ50値は０．９であり、そしてＴ．Ｉ．値は、１４であった（Ｆｕｊｉｏｋａ，Ｔ．ら、Ｊ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．５７：２４３−２４７（１９９４））。
【００１１】
ベツリン酸（１）の特定の置換アシル基（例えば、３'，３'−ジメチルグルタリル基および３’，３’−ジメチルスクシニル基）でのエステル化によって、活性が増強された誘導体が生成した（Ｋａｓｈｉｗａｄａ，Ｙ．ら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３９：１０１６−１０１７（１９９６））。強力な抗ＨＩＶ薬剤であるアシル化ベツリン酸およびジヒドロベツリン酸の誘導体はまた、米国特許第５，６７９，８２８号に記載される。
【化１】
【００１２】
米国特許第５，４６８，８８８号は、ルパン（ｌｕｐａｎｅ）の２８−アミド誘導体を開示しており、これは、ＨＩＶ感染細胞に対して細胞保護効果を有すると記載されている。
【００１３】
特願２００１−１４３，８３２号は、抗ガン分野において有用である、ベツリン（３）およびその３，２８−ジエステルを開示する。
【化２】
【００１４】
米国特許第６，１７２，１１０号は、強力な抗ＨＩＶ活性を有することが見出されたベツリンおよびジヒドロベツリン誘導体を開示する。
【化３】
【００１５】
ベツリンの3'炭素のコハク酸によるエステル化により、ＨＩＶ−１活性を阻害することが可能な化合物が生じる(Pokrovskii, A.G. et al., Gos. Nauchnyi Tsentr Virusol. Biotekhnol. "Vector", 9:48５−491 (2001))。
【００１６】
公開された国際出願WO 02/26761は、真菌感染症を処置するためのベツリンおよび類縁体の使用を開示する。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１７】
改善された生体内分布（biodistribution）特性および異なる作用様式を有する、強力な抗レトロウイルス活性、特に抗ＨＩＶ活性、を有する化合物の必要性が依然として存在する。そのような化合物は、現存の抗ＨＩＶ治療に追加することが緊急に必要とされる。また、膣またはその他の粘膜に局所的に投与して個人間のＨＩＶ感染を予防できる安全で有効な化合物に対する必要性も存在する。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
本発明の第一の態様は、以下の式Ｉの新規化合物：
【００１９】
【化４】
［式中、
Ｒ1は、Ｃ2−Ｃ20の置換されているかまたは置換されていないカルボキシアシルであり、
Ｒ2は、水素、ハロゲン、ヒドロキシまたは−ＯＲ3であり；
Ｒ3は、水素、Ｃ2−Ｃ20の置換されているかまたは置換されていないカルボキシアシルであり；
Ｒ4は、水素、またはＣ（Ｃ6Ｈ5）3であり、
ここで、破線は、Ｃ20とＣ29との間の任意の二重結合を表す］
で示される化合物または、その製薬的に許容し得る塩に関する。
【００２０】
本発明の第二の態様は、医薬組成物に関し、これは、１以上の式Ｉの化合物、および製薬的に許容し得るキャリアまたは希釈剤を含有する。１以上のさらなる薬学的に活性な化合物もまた、これらの組成物に含有され得る。
【００２１】
本化合物は、抗レトロウイルス剤として有用である。従って、本発明の第三の態様は、動物の細胞または組織におけるレトロウイルス感染を阻害するための方法に関し、これは、式Ｉの化合物のレトロウイルス阻害有効量を投与する工程を包含する。好ましい態様は、レトロウイルス関連病理に罹患する患者を処置するための方法に関し、これは、被験体に、式Ｉの化合物を含む医薬組成物のレトロウイルス阻害有効量を投与する工程を包含する。
【００２２】
式Ｉの３−Ｏ-アシルベツリンおよびジヒドロベツリン誘導体は、１以上の抗ウイルス剤と共に組み合わせ治療に用いることができる。従って、本発明は、レトロウイルス関連の病状に冒されている患者を処置する方法であって、その患者にレトロウイルス阻害効果量の式Ｉで示される化合物を、１以上の抗ウイルス剤と組み合わせて投与することを含む方法を提供する。好ましくは、この抗ウイルス剤は、米国においてHIV治療での使用が承認されているものである。
【００２３】
本発明はさらに、個人間のＨＩＶ感染の伝搬を阻止する方法を提供する。特に、本発明は、ＨＩＶに感染した妊婦から胎児へのＨＩＶ感染の伝搬を阻止する方法であって、該妊婦および／または該胎児にレトロウイルス阻害に有効な量の１以上の式Ｉで示される化合物を妊娠中または出産直前、出産時または出産後に投与することを含む方法を提供する。
【００２４】
さらに本発明は、性交渉中のＨＩＶ感染の伝搬を予防する方法であって、性交渉の前に、レトロウイルス阻害に有効な量の１以上の式Ｉで示される化合物を含有する局所用組成物を膣または粘膜に適用することを含む方法を提供する。
【００２５】
さらに、本発明は式Ｉの化合物の製造方法に関する。
【００２６】
本発明のさらなる態様および利点は、以下のとおり明細書中に記載し、また、明細書の記載から自明であり、または本発明の実践によって取得し得る。本発明の態様および利点は、添付の請求の範囲において特に示された指摘された要素および組み合わせによって理解され達成される。
【００２７】
上記の一般的記載および以下の詳細な説明は、例示および単なる説明であって特許請求の範囲のように、本発明を限定するものではない。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２８】
本発明の化合物は、以下の一般式Ｉを有する化合物である：
【化５】
［式中、
Ｒ1は、Ｃ2−Ｃ20の置換されているかまたは置換されていないカルボキシアシルであり、
Ｒ2は、水素、ハロゲン、ヒドロキシまたは−ＯＲ3であり；
Ｒ3は、水素、Ｃ2−Ｃ20の置換されているかまたは置換されていないカルボキシアシルであり；
Ｒ4は、水素、またはＣ（Ｃ6Ｈ5）3であり、
ここで、破線は、Ｃ20とＣ29との間の任意の二重結合を表し、
但し、Ｒ1はスクシニル、即ち
【化６】
ではない］
を有する化合物または、その製薬的に許容し得る塩である。
【００２９】
本発明の好ましい化合物は、Ｒ2が水素である化合物である。１つの態様において、Ｃ20とＣ29との間の結合は二重結合である。別の態様において、Ｃ20とＣ29との間の結合は単結合である。
【００３０】
別の群の好ましい化合物は、Ｒ2がハロゲンまたは−ＯＲ3であり、ここでＲ3はＣ2−Ｃ20の置換されているかまたは置換されていないカルボキシアシルである化合物である。１つの態様において、Ｃ20とＣ29との間の結合は二重結合である。別の態様において、Ｃ20とＣ29との間の結合は単結合である。
【００３１】
さらにより好ましいのは、Ｒ1が３’炭素原子にてモノ置換またはジ置換されているＣ4−Ｃ16のカルボキシアルカノイル基である化合物である。そのような側鎖は、以下の式：
−Ｃ（Ｏ）ＣＨ2Ｒ’Ｒ”（ＣＨ2）bＣＯＯＨ
を有し、ここで、Ｒ’およびＲ”は、それぞれ、Ｃ1-4アルキルであり、好ましくはメチルもしくはエチルであるか、またはＲ’は水素であり、かつ、Ｒ”はＣ1-4アルキルであるか、またはＲ’およびＲ”は一緒になってジメチレン結合、トリメチレン結合、テトラメチレン結合またはペンタメチレン結合を形成し、そしてｂは０〜１２であり、好ましくは、ｂは０〜４であり、最も好ましくは、ｂは０または１である。いくつかの態様では、Ｒ1は１以上の二重結合を含んでいてもよい。
【００３２】
さらに好ましいのは、以下の化合物であって、ここで、前記Ｒ1が、以下の式のＣ4−Ｃ16カルボキシアルコキシアセチル基である：
−Ｃ（Ｏ）ＣＨ2Ｏ（ＣＨ2）aＣＯＯＨ
を有し、ここで、ａは、１〜１０であり、好ましくは１〜４であり、最も好ましくは１または２である。
【００３３】
Ｒ2の好ましい値は以下を含む：水素、ハロゲン、または−ＯＲ5（ここで、Ｒ5は、好ましくは水素である）；−Ｃ（Ｏ）ＣＨ2Ｒ’Ｒ”（ＣＨ2）bＣＯＯＨ（ここで、Ｒ’、Ｒ”およびｂは前記と同意義である）；あるいは−Ｃ（Ｏ）ＣＨ2Ｏ（ＣＨ2）aＣＯＯＨ（ここで、ａは前記と同意義である）。
【００３４】
式Ｉの有用な化合物としては、Ｒ1が、それぞれ以下：
【化７】
のうちの一つであり；そしてＲ2が、好ましくは、水素、クロロ、ブロモもしくはヒロドキシである化合物が挙げられる。
【００３５】
本発明において、本発明の側鎖Ｒ1およびＲ3は置換されていてもいなくてもよい。いくつかの態様では、Ｒ1およびＲ3は１〜３のヒドロキシまたはハロで置換されていてもよい。いくつかの態様では、アルキル基およびＲ1およびＲ3のアルキルを含有する基は、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖のアルキル基であってよい。
【００３６】
また、本発明の範囲には、本発明化合物の非毒性の医薬上許容される塩が含まれる。これらの塩は、化合物の最終の単離および精製の間に in situ で、またはその遊離塩基の形態の精製された化合物を適当な有機または無機の酸と別々に反応させ、形成した塩を単離することによって製造することができる。医薬上許容される塩の例としては、有機および無機の酸付加塩が挙げられる。これらには、アルカリおよびアルカリ土類金属、例えば、ナトリウム、リチウムカリウム、カルシウム、マグネシウムなど、並びに非毒性のアンモニウム、第４級アンモニウムおよびアミンカチオン（アンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、エチルアミン、Ｎ−メチルグルカミンなどが含まれるがこれに限定されない）が挙げられる。
【００３７】
本発明のベツリンおよびジヒドロベツリンは、抗レトロウイルス活性、特に抗ＨＩＶ活性を有することが見出された。本発明の誘導体は、改善された水溶性および増強された経口バイオアベイラビリティーを有すると予想される。また、改善された水溶性によって本発明の類縁体を医薬調製物に容易にできる。さらに、本発明のベツリンおよびジヒドロベツリン誘導体は、改善された生体内分布特性を有すると予想される。
【００３８】
最も活性な化合物のＣ３アシル基は、Ｃ３’位にジメチル基または酸素を有する。この観察は、この型のアシル基が抗ＨＩＶ活性を増強するに重要であり得ることを示唆する。
【００３９】
本発明はまた、上記のベツリンおよびジヒドロベツリン誘導体の少なくとも１つを、必要に応じて、１つの以上の公知の抗ＡＩＤＳ治療薬または免疫賦活剤のいずれかと組み合せて、投与することによって、ＨＩＶ−１に感染した被験体を処置する方法に関する。
【００４０】
本発明の他の特徴、利点、態様、態様および目的は、本明細書において提示される記載、教示および指針に基づけば、関連分野の当業者には明白である。
【００４１】
本発明の類縁体は、抗レトロウイルス活性を有することが発見され、従って、必要に応じて、抗レトロウイルス化合物、抗ＨＩＶ化合物および／または免疫賦活性化合物あるいは抗ウイルス抗体またはそのフラグメントのようなさらなる薬学的活性成分とともに、レトロウイルス感染を処置するための適切な化合物および組成物を提供する。
【００４２】
用語「抗レトロウイルス活性」または「抗ＨＩＶ活性」とは、以下の少なくとも１つを阻害する能力を意図する：
（１）ウイルスの宿主細胞ゲノムへのプロＤＮＡ組込み；
（２）細胞へのレトロウイルスの接着；
（３）細胞へのウイルスの侵入；
（４）ウイルス複製を可能にする細胞代謝；
（５）そのウイルスの細胞内拡散の阻害；
（６）ウイルス抗原の合成および／または細胞性発現；
（７）ウイルスの出芽および成熟；
（８）ウイルスがコードする酵素の活性（例えば、逆転写酵素、インテグラーゼおよびプロテアーゼ）；および／または
（９）任意の公知のレトロウイルス作用またはＨＩＶ病原性作用（例えば、免疫抑制）。従って、これらの機構のいずれかを阻害する傾向のある任意の活性は、「抗レトロウイルス活性」または「抗ＨＩＶ活性」である。
【００４３】
本発明のベツリンまたはジヒドロベツリン誘導体は、単独で、または当該分野で公知の他の様式の治療と組み合せて、レトロウイルス（例えば、ＨＩＶ）感染の処置のために使用され得る。このような治療の態様としては、薬物（例えば、ＡＺＴ、ｄｄＣ、ｄｄＡ、ｄ４Ｔ、ｄｄＩまたは他の任意の抗レトロウイルス薬物の少なくとも１つあるいは抗体を互いに組み合せたもの、あるいは例えば、可溶性ＣＤ４、ＣＤ４に対する抗体、およびＣＤ４もしくは抗ＣＤ４の結合体、または本明細書においてさらに提示するもののような生物学に基づいた治療剤との組合せであるが、それらに限定されない）を用いた化学療法が挙げられる。
【００４４】
本発明のベツリンまたはジヒドロベツリン誘導体が正常細胞に対して比較的ほとんどまたは実質的に全く毒性がないことから、その有用性は、確立されたレトロウイルス感染の処置に限定されない。例えば、本発明に従うベツリン誘導体は、血液銀行において維持されているもののような血液製剤を処置するに使用され得る。国の血液供給は、現在ＨＩＶに対する抗体について試験されている。しかし、この試験は、まだ不完全なもので、そして陰性の試験結果であったサンプルでもなお、ＨＩＶウイルスを含み得る。血液および血液製剤を、本発明のベツリン誘導体で処置することは、検出されなかったかもしれない任意のレトロウイルスを殺傷することによってさらなる程度の安全性を付加し得る。
【００４５】
さらに、本発明のベツリンおよびジヒドロベツリン誘導体は個人間のＨＩＶの伝搬を阻止するための予防約として用いることができる。例えば、この誘導体を、ＨＩＶに感染した妊婦および／または胎児に、妊娠中、出産の直前、出産時または出産後に、経口または注射により投与して、新生児が感染する可能性を低減することができる。また、この誘導体を分娩直前に膣に投与して、新生児が産道を通る間の感染を予防することができる。さらに、本発明の誘導体は、１以上の式ＩまたはＩＩで示される化合物を含有する局所用組成物のレトロウイルス阻害に有効な量を、性交渉前に膣またはその他の粘膜に適用することにより、性交渉中のＨＩＶの伝搬を予防することができる。例えば、本発明の本発明を用いて、感染した男性から感染していない女性へのまたはその逆のＨＩＶの伝搬を予防することができる。
【００４６】
医薬組成物
本発明の医薬組成物は、少なくとも１つのベツリンまたはジヒドロベツリン誘導体を含み得る。本発明に従う医薬組成物はまた、例えば、以下を含むがそれらに限定されない他の抗ウイルス薬剤をさらに含む：ＡＺＴ（ジドブジン、ＲＥＴＲＯＶＩＲ、Ｇｌａｘｏ Ｗｅｌｌｃｏｍｅ）、３ＴＣ（ラミブジン、ＣＯＭＢＩＶＩＲ、Ｇｌａｘｏ Ｗｅｌｌｃｏｍｅ）、ｄｄＩ（ジダノシン、ＶＩＤＥＸ、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、ｄｄＣ（ザルシタビン、ＨＩＶＩＤ、Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ）、Ｄ４Ｔ（スタブジン、ＺＥＲＩＴ、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、アバカビル（ＺＩＡＧＥＮ、Ｇｌａｘｏ Ｗｅｌｌｃｏｍｅ）、ネビラピン（ＶＩＲＡＭＵＮＥ，Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）、デラビルジン（Ｐｈａｒｍａｃｉａ ａｎｄ Ｕｐｊｏｈｎ）、エントリシタビン（ＥＭＴＲＩＶＡ、Gilead Science）、エファビレンツ（ＳＵＳＴＩＶＡ，ＤｕＰｏｎｔ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、テノフォビル（ＶＩＲＥＡＤ、Gilead Science）、サキナビル（ＩＮＶＩＲＡＳＥ、ＦＯＲＴＯＶＡＳＥ，Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ）、リトナビル（ＮＯＲＶＩＲ、Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、インジナビル（ＣＲＩＸＩＶＡＮ、Ｍｅｒｃｋ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ）、ネルフィナビル（ＶＩＲＡＣＥＰＴ、Ａｇｏｕｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、アンプレナビル（ＡＧＥＮＥＲＡＳＥ、Ｇｌａｘｏ Ｗｅｌｌｃｏｍｅ）、アデフォビル（ＰＲＥＶＥＯＮ，ＨＥＰＳＥＲＡ、Ｇｉｌｅａｄ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、アタザナビル（ＲＥＹＡＴＡＺ、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、ロピナビルおよびリトナビル（ＫＡＬＥＴＲＡ、Abbot Laboratories）、およびヒドロキシ尿素（ＨＹＤＲＥＡ、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｅｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）または任意の他の抗レトロウイルス薬または抗体を互いに組み合わせて、または例えば、gp４１由来ペプチドエンフビルチド（ＦＵＳＥＯＮ、Roche and Trimeris）やＴ−１２４９または可溶性ＣＤ４、ＣＤ４に対する抗体およびＣＤ４または抗ＣＤ４のコンジュゲート、または本明細書にさらに示すような、生物学的ベースの治療剤と共に含有することができる。
【００４７】
本発明のベツリン誘導体との最適な使用について適切なさらなる抗ウイルス薬剤としては、以下を含み得るがそれらに限定されない：Ｅｔｈｉｇｅｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｍａｔｒｉｘ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓによって製造されるＡＬ−７２１（脂質混合物）；アムホテリシンＢメチルエステル；ＤｕＰｏｎｔ／ＨＥＭ Ｒｅｓｅａｒｃｈによって開発されたＡｍｐｌｉｇｅｎ（ミスマッチＲＮＡ）；抗ＡＩＤＳ抗体（Ｎｉｓｓｈｏｎ Ｆｏｏｄ）；１ ＡＳ−１０１（重金属ベースの免疫賦活剤）；Ｔｒｉｔｏｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｓｈｅｌｌ Ｏｉｌ）によって製造されるＢｅｔａｓｅｒｏｎ（βインターフェロン）；ブチル化ヒドロキシトルエン；Ｃａｒｒｏｓｙｎ（ポリマンノアセテート）；Ｃａｓｔａｎｏｓｐｅｒｉｍｉｎｅ；Ｃｏｎｔｒａｃａｎ（ステアリン酸誘導体）；Ｐｈａｒｍａｌｅｃによって製造されるＣｒｅｍｅ Ｐｈａｒｍａｔｅｘ（塩化ベンザルコニウムを含有する）；ＣＳ−８７（ジドブジンの５−非置換誘導体）、Ｓｙｎｔｅｘ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎによって製造されたＣｙｔｏｖｅｎｅ（ガンシクロビル）；硫酸デキストラン；Ｃａｒｔｅｒ−Ｗａｌｌａｃｅ ａｎｄ Ｄｅｇｕｓｓａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌによって製造されるＤ−ペニシリラミン（３−メルカプト−Ｄ−バリン）；Ａｓｔｒａ ＡＢによって製造されるＦｏｓｃａｒｎｅｔ（ホスホノ蟻酸ナトリウム）；Ｌｅｏ Ｌｏｖｅｎｓによって製造されるフシジン酸；グリチルリチン（甘草根の構成成分）；Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｓａｎｔ’ｅによって製造されるＨＰＡ−２３（アンモニウム−２１−タングスト−９−アンチモネート）；Ｐｏｒｔｏｎ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌによって開発されたヒト免疫不全ウイルス抗ウイルス剤；Ｍｅｒｒｅｌｌ−Ｄｏｗによって製造されるＯｒｎｉｄｙｌ（エフロルニチン）；ノノキシノール；Ｌｙｐｈｏ Ｍｅｄによって製造されるペントアミジンイセチオナート（ＰＥＮＴＡＭ−３００）；Ｐｅｎｉｎｓｕｌａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓによって製造されるペプチドＴ（オクタペプチド配列）；フェニトイン（Ｗａｒｎｅｒ Ｌａｍｂｅｒｔ）；Ｒｉｂａｖｉｒｉｎ；Ａｄｒｉａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓによって製造されるＲｉｆａｂｕｔｉｎ（アンサマイシン）；ＣＤ４−ＩｇＧ２（Ｐｒｏｇｅｎｉｃｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）または他のＣＤ４含有分子もしくはＣＤ４ベースの分子；Ｔ−２０（Ｔｒｉｍｅｒｉｓ）；Ｗａｒｎｅｒ−Ｌａｍｂｅｒｔ Ｃｏｍｐａｎｙによって製造されるＴｒｉｍｅｔｒｅｘａｔｅ：Ｓａｎｗａ Ｋａｇａｋｕによって製造されるＳＫ−８１８（ゲルマニウム由来の抗ウイルス剤）；Ｍｉｌｅｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓによって製造されるスラミンおよびそのアナログ；Ｕｅｎｏ Ｆｉｎｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ Ｉｎｄｕｓｔｒｙによって製造されるＵＡ００１；ならびにＧｌａｘｏ Ｗｅｌｌｃｏｍｅによって製造されるＷｅｌｌｆｅｒｏｎ（αインターフェロン）。
【００４８】
本発明の医薬組成物はまた、免疫調節剤をさらに含み得る。本発明に従って、本発明のベツリンの誘導体とともに必要に応じて使用するための適切な免疫調節剤は、以下を含むがそれらに限定されない：ＡＢＰＰ（Ｂｒｏｐｒｉｒｉｍｉｎｅ）；ＤｕＰｏｎｒ／ＨＥＭ ＲｅｓｅａｒｃｈのＡｍｐｌｉｇｅｎ（ミスマッチＲＮＡ）；抗ヒトインターフェロンα抗体（Ａｄｖａｎｃｅ Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ Ｃｏｎｃｅｐｔｓ）；抗ＡＩＤＳ抗体（Ｎｉｓｓｈｏｎ Ｆｏｏｄ）；ＡＳ−１０１（重金属ベースの免疫賦活剤；アスコルビン酸およびその誘導体インターフェロンβ；Ｃａｒｒｏｓｙｎ（ポリマンノアセテート）；Ｃｉａｍｅｘｏｎ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ−Ｍａｎｎｈｅｉｍ）；シクロスポリン；シメチジン；ＣＬ−２４６，７３８（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｙａｎａｍｉｄ）；コロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ（Ｓａｎｄｏｚ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）を含む）；ジニトロクロロベンゼン；ＨＥ２０００（Ｈｏｌｌｉｓ−Ｅｄｅｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）；インターフェロン−α；インターフェロン−γ；グルカン；超免疫γグロブリン（Ｂａｙｅｒ）；ＩＭＲＥＧ−１（白血球透析物）およびＩＭＲＥＧ−２（ＩＭＲＥＧ Ｃｏｒｐ．）；イムチオール（ジエチルチオカルバミン酸ナトリウム）（Ｉｎｓｔｉｔｕｔ Ｍｅｒｉｅｕｘ）；インターロイキン１（Ｃｅｔｕｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ；Ｈｏｆｆｍａｎｎ−ＬａＲｏｃｈｅ；Ｉｍｍｕｎｅｘ）；インターロイキン２（ＩＬ−２）（Ｃｈｉｒｏｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）；イソプリノシン（イノシンプラノベクス）；Ｋｒｅｓｔｉｎ（三共）；ＬＣ−９０１８（ヤクルト）；レンチナン（味の素／山之内製薬）；ＬＦ−１６９５（Ｆｏｕｒｎｉｅｒ）；メチオニン−エンケファリン（ＴＮＩ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ；Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）：Ｍｉｎｏｐｈａｇｅｎ Ｃ；ムラミルトリペプチド、ＭＴＰ−ＰＥ（Ｃｉｂａ−Ｇｅｉｇｙ）；ナルトレキソン（「Ｔｒｅｘａｎ」ＤｕＰｏｎｔ）；Ｎｅｕｔｒｏｐｉｎ（ＲＮＡ免疫調節剤）（Ｎｉｐｐｏｎ Ｓｈｉｎｇａｋｕ）；Ｒｅｍｕｎｅ（Ｉｍｍｕｎｅ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）；Ｒｅｔｉｃｕｌｏｓｅ（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｖｉｒａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）；小柴胡湯およびニンジン；胸腺体液性因子；ＴＰ−０５（Ｔｈｙｍｏｐｅｎｔｉｎ、Ｏｒｔｈｏ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）；サイモシン第五因子およびサイモシン１；Ｔｈｙｍｏｓｔｉｍｕｌｉｎ；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈによって製造されるＴＮＦ（腫瘍壊死因子）；ならびにビタミンＢ調製物。
【００４９】
本発明の好ましい動物被験体は、哺乳動物である。用語「哺乳動物（の）」とは、哺乳綱に属する個体を意味する。本発明は、ヒト患者の処置において特に有用である。
【００５０】
用語「処置」とは、レトロウイルス関連病理の予防、改善または治癒を含み得る目的のために、ベツリンまたはジヒドロベツリン誘導体を被験体に投与することを意味する。
【００５１】
医薬は、それらがその患者に同時に投与される場合または各医薬の投与の間の時間が生物学的活性の重複を許容するような場合に、互いに「組み合せて」提供されることが考慮される。
【００５２】
１つの好ましい態様において、少なくとも１つのベツリンまたはジヒドロベツリン誘導体は、単一の医薬組成物を含み得る。
【００５３】
本発明に従う投与のための医薬組成物は、本発明に従う少なくとも１つのベツリンまたはジヒドロベツリン誘導体を、製薬的に許容し得る形態において、必要に応じて製薬的に許容し得るキャリアと組み合せて含み得る。これらの組成物は、その意図する目的を達成する任意の手段によって投与され得る。本発明に従うベツリン誘導体の投与のための量および養生法は、レトロウイルス病理を処置する臨床分野の当業者によって用意に決定され得る。
【００５４】
例えば、投与は非経口（例えば、皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内、経皮または経頬粘膜の経路）によるものであり得る。あるいは、または同時に、投与は、経口経路によるものであり得る。投与される投薬量は、そのレシピエントの年齢、健康および体重、既に受けた処置または同時に受けている処置の型（あれば）、処置の頻度および所望される効果の性質に依存する。
【００５５】
本発明の範囲内の組成物は、本発明に従う少なくとも１つのベツリンまたはジヒドロベツリン誘導体を、その意図する目的を達成するに有効な量において、含有する全ての組成物を含む。個体の必要量は変動するが、各成分の有効量の最適範囲の決定は、当業者の範囲内である。代表的な投薬量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ体重〜約１００ｍｇ／ｋｇ体重を包含する。好ましい投薬量は、約１ｍｇ／ｋｇ体重〜約１００ｍｇ／ｋｇ体重の活性成分を包含する。最も好ましい投薬量は、約１０ｍｇ／ｋｇ体重〜約１００ｍｇ／ｋｇ体重を包含する。
【００５６】
治療的投与はまた、本発明の少なくとも１つのさらなるベツリンまたはジヒドロベツリン誘導体または他の治療薬剤（例えば、抗ウイルス剤または免疫賦活剤）の、事前の、同時の、事後のまたは付属の投与を包含し得る。そのようなアプローチにおいて、第二の薬物の投薬量は、好ましくは、第一の治療剤の投薬量と同一であり得るか、または異なり得る。好ましくは、その薬物は、各薬物の推奨される量において別の日に投与される。
【００５７】
本発明の化合物の投与はまた、必要に応じて、免疫系の追加免疫剤または免疫調節剤を使用する、事前の、同時の、事後のまたは付属的な治療を包含し得る。薬理学的に活性な化合物に加えて、本発明の医薬組成物はまた、薬学的に使用され得る調製物へその活性化合物の処理を用意にする賦形剤および補助剤を含む適切な製薬的に許容し得るキャリアを含み得る。好ましくは、調製物、特に、経口投与され得る調製物、ならびに錠剤、糖衣錠、およびカプセルのような投与の好ましい型について使用され得る調製物、ならびにまた直腸投与され得る調製物（例えば、坐剤）、ならびに注射または経口による投与に適切な溶液は、約０．０１％〜９９％の、好ましくは、約２０〜７５％の、活性化合物を、賦形剤とともに含む。
【００５８】
本発明の医薬組成物は、それ自身が公知である様式（例えば、慣用的な混合、造粒、糖衣製造、溶解または凍結乾燥のプロセス）によって製造される。従って、経口使用のための医薬組成物は、その活性化合物を、固体賦形剤とともに混合すること、必要に応じて、得られた混合物を粉砕すること、および所望される場合または必要である場合に、適切な補助剤を添加した後に、顆粒混合物を処理して錠剤または糖衣錠のコアを得ることによって得られ得る。
【００５９】
適切な賦形剤は、例えば、糖（例えば、ラクトースまたはスクロース、マンニトールまたはソルビトール）；セルロース調製物および／またはリン酸カルシウム（例えば、リン酸三カルシウムまたはリン酸水素カルシウム；ならびに結合剤（例えば、トウモロコシデンプン、コムギデンプン、コメデンプン、イモデンプンを使用したデンプンペースト、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、および／またはポリビニルピロリドン）のような賦形剤である。所望される場合、崩壊剤（例えば、上記に言及したデンプン類、およびさらにカルボキシメチルデンプン、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸、あるいは、それらの塩（例えば、アルギン酸ナトリウム））が添加され得る。補助剤には、とりわけ、流動性調節剤および滑沢剤（例えば、シリカ、タルク、ステアリン酸またはそれらの塩（例えば、ステアリン酸マグネシウムもしくはステアリン酸カルシウム）および／またはポリエチレングリコール）がある。糖衣のコアは、所望される場合、胃液に抵抗性である適切なコーティングとともに提供される。この目的のために、濃縮された糖溶液が使用され得、これは、必要に応じて、アラビアガム、タルク、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコールならびに／または二酸化チタン、ラッカー溶液および適切な有機溶媒もしくは溶媒混合物を含み得る。胃液に抵抗性のコーティングを生産するために、フタル酸アセチルセルロースまたはフタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロースのような適切なセルロース調製物の溶液が使用される。染色物質または色素が、例えば、有効な化合物の用量の同定のため、またはその組合せを特徴付けるために、この錠剤または糖衣コーティングに添加され得る。
【００６０】
経口で使用され得る他の薬学的調製物は、ゼラチンで作製された押し出し成型（ｐｕｓｈ−ｆｉｔ）カプセル、およびゼラチンおよびグリセロールもしくはソルビトールのような可塑剤で作製された封入軟カプセルを含み得る。押し出し成型カプセルは、その有効な化合物を、賦形剤（例えば、ラクトース）、結合剤（例えば、デンプン）、および／または滑沢剤（例えば、タルクもしくはステアリン酸マグネシウム）、ならびに必要に応じて安定剤とともに混合され得る顆粒剤の形態で含み得る。軟カプセルにおいて、有効な化合物は、好ましくは、適切な液体（例えば、脂肪油または流動パラフィン）に溶解または懸濁される。さらに、安定剤が添加され得る。
【００６１】
直腸で使用され得る可能な薬学的調製物は、例えば、有効な化合物と坐剤の基剤との組合せからなる坐剤を含む。適切な坐剤の基剤は、例えば、天然または合成のトリグリセリドまたはパラフィン炭水化物である。さらに、基剤と有効な化合物との組合せからなる直腸ゼラチンカプセルを使用することもまた可能である。可能な基剤材料としては、例えば、液体のトリグリセリド、ポリエチレングリコール、またはパラフィン炭水化物が挙げられる。
【００６２】
非経口投与のための適切な処方物としては、水溶性形態の有効な化合物（例えば、水溶性の塩）の水溶液を含む。さらに、適切な油状注射懸濁液として有効な化合物の懸濁物が投与され得る。適切な親油性の溶媒またはビヒクルとしては、脂肪油（例えば、ゴマ油、または合成の脂肪酸エステル（例えば、オレイン酸エチルまたはトリグリセリド））が挙げられる。その懸濁物の粘性を上昇させる物質を含み得る水性注射用懸濁物は、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトールおよび／またはデキストランを含む。必要に応じて、その懸濁物はまた、安定剤を含み得る。
【００６３】
本発明に従う全身投与のための薬学的処方物は、経腸投与、非経口投与または局所投与のために処方され得る。実際、すべての３つの型の処方物を同時に使用して、その有効成分の全身投与を達成し得る。
【００６４】
経口投与のための適切な処方物は、硬ゼラチンカプセルまたは軟ゼラチンカプセル、糖衣錠、丸剤、錠剤（コーティング錠剤を含む）、エリキシル剤、懸濁剤、シロップ剤、または吸入剤およびそれらの徐放形態を包含する。
【００６５】
経口投与のために処方されたものに加えて、固体投与形態は、直腸坐剤を含む。
【００６６】
分娩中または性交渉中の個人間のＨＩＶ感染を予防するための予防用局所組成物は、１以上の式ＩまたはＩＩの化合物および少なくとも１つの製薬的に許容し得る局所用担体または希釈剤を含有する。局所用組成物は、例えば、軟膏、クリーム、ジェル、スプレー、泡、またはスポンジの形態である。予防用局所用製剤における式ＩまたはＩＩの化合物の投与量は、一般に、約１０００ｍgグラム未満、好ましくは、約０．０１〜約１００ミリグラムである。局所用製剤は他の予防用成分も含有し得る。担体および希釈剤は、他の製剤成分に適合し、患者に有害でない意味において許容される。
【００６７】
局所用予防製剤としては、膣内、直腸または局所投与に適した製剤が挙げられる。この製剤は、適切な場合、分割された単位投与形態で便利に提供され、薬学分野の任意の既知の方法によって製造することができる。そのような方法は全て、活性成分を液体の担体、ジェルまたは微細な固形担体またはその両方と混合した後、必要ならば、生成物を所望の製剤に形成する工程を含む。
【００６８】
膣内投与に適当な予防用製剤は、活性成分に加え当分野で公知の適当な担体を含有する、ペッサリー、タンポン、クリーム、ジェル、ペーストゼリー、泡またはスプレー、あるいは水溶性もしくは油性の懸濁液、溶液もしくはエマルジョン（液体製剤）として提供することができる。液体製剤は、慣用の添加剤、例えば、懸濁剤、乳化剤、食用油を含む非水溶性ビークル、または保存剤を含有することができる。これらの製剤は、ＨＩＶの性的伝搬および産道を通過する際の新生児の感染の両方を阻止するのに有用である。一例では、膣内投与は、性交渉の前または分娩の直前に行うことができる。
【００６９】
固形担体を有する直腸または膣内投与に適当な予防用製剤は、好ましくは単位投与形態で提供される。適当な担体としては、ココアバターや当分野で一般に用いられる他の物質が挙げられる。坐剤は、例えば１以上の式ＩまたはＩＩの化合物を１以上の柔らかくしたまたは融解させた担体と混合した後、型に入れて冷却、成型することにより形成させることができる。
【００７０】
本発明の予防用製剤はさらに、１以上の分散剤、溶解剤、または懸濁剤を含む水性または非水性の基剤と共に製剤化した液摘剤の形態であってよい。液体スプレーは加圧された包装材から送達することができる。
【００７１】
本発明の予防用製剤は持続的送達に適合させることができる。または、予防用製剤は他の活性成分、例えば、殺精子剤、抗菌剤および抗ウイルス剤を含有することもできる。
【００７２】
本発明の３−Ｏ−アシルベツリン誘導体はまた、生分解性の徐放キャリアと配合された移植片の形態で投与され得る。あるいは、本発明のベツリンまたはジヒドロベツリン誘導体は、その有効成分の連続的な放出のための経皮パッチとして処方され得る。
【００７３】
局所投与のために適切な処方物は、クリーム、ゲル、ゼリー、漿剤、ペーストおよび軟膏を含む。適切な注射可能な溶液には、静脈内に注射可能な溶液、皮下に注射可能な溶液、および筋肉内に注射可能な溶液が含まれる。あるいは、このベツリンまたはジヒドロベツリン誘導体は、注入溶液または経鼻吸入もしくはスプレーとしての形態で投与され得る。
【００７４】
本発明の化合物は、当分野で既知の方法を用いて製造することができる。本発明の３−Ｏ−ベツリンおよびジヒドロベツリン誘導体を、反応式１に示す通りに製造した。ベツリン（１）の２８−ヒドロキシル基をトリフェニルメチルエーテル基で保護してベツリン２８−Ｏ−トリフェニルメチルエーテル（２）を得、ピリジン中この溶液をさらにジメチルアミノピリジンの存在下で還流温度にて適当なジカルボン酸で処理した。最後に、２８−保護基を、ＣＨ2Ｃl2−ＥｔＯＨ中、ピリジウムｐ−トルエンスルホン酸とともに還流することにより脱離し、所望の３−Ｏ−アシルベツリン誘導体を得た。
【化８】
【００７５】
ＨＩＶ−１阻害の生物学的評価を、確立されたプロトコルに従って実施した（Ｋａｓｈｉａｗａｄａ、Ｙ．ら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３９：１０１６−１０１７（１９９６）；Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ、Ｆ．ら、Ｂｉｏｏｒｇ＆Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．５：２１３３−２１４３（１９９７））。Ｔ細胞株Ｈ９を、完全培地（５％ＣＯ2および３７℃でのＬ−グルタミンとともに１０％ウシ胎仔血清を補充したＲＰＭＩ１６４０）中での連続培養にて維持した。この細胞株のアリコートを、対数増殖期にあるときにのみ実験に使用した。試験サンプルをまず、ジメチルスルホキシド中に溶解した。以下の薬物の最終濃度を、スクリーニングについて慣用的に使用した：１００μｇ／ｍｌ、２０μｇ／ｍｌ、４μｇ／ｍｌおよび０．８μｇ／ｍｌ。活性薬剤について、さらなる希釈物を、続く試験のために調製し、その結果、正確なＥＣ50値（以下に規定）を達成し得た。試験サンプルが調製している最中に、Ｈ９細胞株のアリコートを、ＨＩＶ−１（ＩＩＩＢ単離物）に感染させ、他方で、別のアリコートを、完全培地を用いて偽感染させた。これらの研究について使用したストックウイルスは、代表的には、１０4感染単位／ｍｌのＴＣＩＤ50値を有した。０．１と０．０１との間の感染単位／細胞の感染多重度（ｍｏｉ）に対するウイルスの適切な量を、Ｈ９細胞の最初のアリコートに添加した。他のアリコートは培養培地のみを受け、そしてこれらの儀感染細胞を、毒性決定（ＩＣ50、以下に規定）について使用した。３７℃および５％ＣＯ2での４時間のインキュベーション後、両方の細胞集団を、３回新鮮な培地で洗浄し、次いで、種々の濃度の試験薬物または培養培地（陽性感染コントロール／陰性薬物コントロール）を含む２４ウェルのプレートの適切なウェルへと添加した。さらに、ＡＺＴもまた、陽性薬物コントロールとして各実験の間にアッセイした。このプレートを、３７℃および５％ＣＯ2で４日間インキュベートした。
無細胞上清を、ｐ２４抗原ＥＬＩＳＡアッセイにおける使用のために４日目に収集した。ｐ２４抗原は、ＨＩＶのコアタンパク質であり、それゆえ、これは、上清に存在するウイルスの間接的な尺度である。毒性を、培養培地（毒性なし）、試験サンプルまたはＡＺＴのいずれかを受けた偽感染Ｈ９細胞においてＣｏｕｌｔｅｒ Ｃｏｕｎｔｅｒによって細胞計数を行うことにより決定した。試験サンプルが抑制能力を有し、そして毒性でなかった場合は、その効果は以下の用語で報告された：ＩＣ50、偽感染Ｈ９細胞の５０％に対して毒性であった試験サンプルの濃度；ＥＣ50、ＨＩＶ複製を５０％抑制し得た試験サンプルの濃度；および治療指数（ＴＩ）、ＥＣ50に対するＩＣ50の比率。
【００７６】
以下の実施例は、本発明の方法および組成物の例示であるが、限定ではない。当業者が通常遭遇しそして自明である種々の条件およびパラメータの他の適切な改変および適用は、本発明の精神および範囲内にある。
【００７７】
実施例１
ベツリンおよびジヒドロベツリン誘導体の一般的合成
ベツリン2８−O-トリフェニルメチルエーテル(2)を、ベツリン(1)(10g、22.6mmol)、トリフェニルメチルクロリド(12.6g、45.2mmol)、およびジメチルアミノピリジン(3.3g、27.0mmol)のDMF(75mL)溶液を攪拌しながら５時間還流することにより製造した。反応混合物を水で希釈し、CHCl3で抽出した。有機層を水で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濃縮した。EtOHから結晶化して、ベツリン2８−O-トリフェニルメチルエーテル(2)無色の針状晶(11.4 g, 73.5％収率)として得た。融点14９−152℃; [α]18D 2.5°(c 0.8, CHCl3); 1H-NMR (CDCl3): 0.51 (3H,S, CH3-26), 0.74 (3H,S, CH3-24), 0.75 (3H,S, CH3-25), 0.89 (3H,S, CH3-27), 0.95 (3H,S, CH3-23), 1.63 (3H,S, CH3-29), 2.90, 3.13 (each 1H, d, J=9.0 Hz, H2-28), 4.47 (1H, dd, J=5.0, 10.5 Hz, H-3), 4.51, 4.57 (each 1H,S, H2-30), 7.20-7.50 (15H in total, m, 芳香族-H).
【００７８】
３−Ｏ−アシルベツリン２８−Ｏ−トリフェニルメチルエーテルを、ベツリン２８−Ｏ−トリフェニルメチルエーテル（１当量ｍｏｌ）、ジメチルアミノピリジン（１当量ｍｏｌ）、および適当なジカルボン酸（２．５４当量ｍｏｌ）の無水ピリジン（５２５ｍＬ）溶液を一晩還流することにより製造した。反応混合物を氷水で希釈し、ＣＨＣｌ3で抽出した。有機層を水で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付した。
【００７９】
化合物５を、ベツリン２８−Ｏ−トリフェニルメチルエーテル、ジメチルアミノピリジン、およびジエチルコハク酸の無水ピリジン溶液を用いて上記のとおり製造した。収率は６４％であった。白色のアモルファス粉末； [α]18D +2.3°(c 0.44, CHCl3); 1H-NMR (CDCl3) : 0.50 (3H,S, CH3-26), 0.76 (3H,S, CH3-25), 0.79 (3H,S, CH3-24), 0.81 (3H,S, CH3-23), 0.88 (3H,S, CH3-27), 1.28, 1.29 (each 3H,S, ジエチルスクシニル CH3), 1.63 (3H,S, CH3-29), 2.55, 2.66 (each 1H, d, J=15.9 Hz, ジエチルスクシニル H2-2'), 2.90, 3.12 (each 1H, d, J=9.0 Hz, H2-28), 3.16 (1H, dd, J=4.6, 11.0 Hz, H-3), 4.51, 4.56 (each 1H,S, H2-30), 7.20-7.50 (15H in total, m, 芳香族-H).
【００８０】
化合物７：収率８２％（４００ｍｇの２を出発物質とする）：白色のアモルファス粉末； [α]18D +2.4°(c 0.84, CHCl3); 1H-NMR (CDCl3) : 0.51 (3H,S, CH3-26), 0.78 (3H,S, CH3-25), 0.82 (3H,S, CH3-24), 0.84 (3H,S, CH3-23), 0.89 (3H,S, CH3-27), 1.13 (6H,S, ジエチルグルタリル CH3’2), 1.63 (3H,S, CH3-29), 2.38, 2.45 (each 1H, d, J=14.0 Hz, ジエチルグルタリル H2-2'), 2.45 (2H,S, ジエチルグルタリル H2-4'), 2.90, 3.13 (each 1H, d, J=9.0 Hz, H2-28), 4.47 (1H, dd, J=5.0, 10.5 Hz, H-3), 4.51, 4.57 (each 1H,S, H2-30), 7.20-7.50 (15H in total, m, 芳香族-H).
【００８１】
化合物９：収率６５％（２８５ｍｇの２を出発物質とする）；白色のアモルファス粉末；[α]18D +3.0°(c 0.80, CHCl3); 1H-NMR (CDCl3) : 0.51 (3H,S, CH3-26), 0.78 (3H,S, CH3-25), 0.82 (6H,S, CH3-24および-23), 0.89 (3H,S, CH3-27), 1.63 (3H,S, CH3-29), 1.95 (2H, quintet, J=7.3 Hz, グルタリルH2-3'), 2.38, 2.41 (wach 2H, t, J=7.3 Hz, グルタリル H2-2'および-4'), 2.90, 3.13 (each 1H, d, J=9.0 Hz, H2-28), 4.46 (1H, dd, J=5.0, 10.0 Hz, H-3), 4.51, 4.57 (each 1H,S, H2-30), 7.20-7.50 (15H in total, m, 芳香族-H).
【００８２】
化合物１１：収率７２％（２７８ｍｇの２を出発物質とする）；白色のアモルファス粉末； [α]18D +2.7°(c 0.74, CHCl3); 1H-NMR (CDCl3) : 0.50 (3H,S, CH3-26), 0.73 (3H,S, CH3-25), 0.76(3H,S, CH3-24), 0.78 (3H,S, CH3-23), 0.86 (3H,S, CH3-27), 1.60 (3H,S, CH3-29), 2.89, 3.12 (each 1H, d, J=9.0 Hz, H2-28), 4.00, 4.16 (each 2H, brS, ジグリコシル H2-2'および4'), 4.41 (1H, dd, J=5.0, 10.0 Hz, H-3), 4.47, 4.56 (each 1H,S, H2-30), 7.20-7.50 (15H in total, m, 芳香族-H).
【００８３】
３−Ｏ−アシルベツリンを、３−Ｏ−アシルベツリン２８−Ｏ−トリフェニルメチルエーテル（１当量ｍｏｌ）およびピリジウムｐ−トルエンスルホン酸（３−５当量ｍｏｌ）のＥｔＯＨ−ＣＨ2Ｃｌ2溶液を一晩還流することにより製造した。反応混合物を氷水で希釈し、ＣＨＣｌ3で抽出した。有機層を水で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、またはＨＰＬＣにより精製した。
【００８４】
化合物６：収率７０％（３００ｍｇの５を出発物質とする）；無色のプリズム晶（ＥｔＯＨから）；融点２６９−２７１℃; [α]18D +21.0°(c 0.5, CHCl3); 1H-NMR (CDCl3) : 0.81 (3H,S, CH3-24), 0.84 (6H,S, CH3-25および-23), 0.94 (3H,S, CH3-27), 1.08 (3H,S, CH3-26), 1.28, 1.30 (each 3H,S, ジエチルスクシニル CH3), 1.68 (3H,S, CH3-29), 2.56, 2.67 (each 1H, d, J=15.9 Hz, ジエチルスクシニル H2-2'), 3.34, 3.80 (each 1H, d, J=10.7 Hz, H2-28), 4.49 (1H, dd, J=5.5, 11.0 Hz, H-3), 4.58, 4.68 (each 1H, brS, H2-30)
【００８５】
化合物８：収率５１％（２７５ｍｇの７を出発物質とする）；無色の針状晶（ＥｔＯＨから）；融点２２４−２２６℃; [α]18D +28.3°(c 0.46, CHCl3); 1H-NMR (CDCl3) : 0.84 (3H,S, CH3-24), 0.85 (3H,S, CH3-25), 0.86 (3H,S, CH3-23), 0.98 (3H,S, CH3-27), 1.02 (3H,S, CH3-26), 1.14 (6H,S、 ジエチルグルタリル CH3), 1.68 (3H,S, CH3-29), 2.40, 2.47 (each 1H, d, J=12.0 Hz, ジエチルグルタリル H2−2’), 2.46 (2H,Ｓ、 ジエチルグルタリル H2−4’), 3.34, 3.80 (each 1H, d, J=10.5 Hz, H2-28), 4.50 (1H, dd, J=5.0, 10.5 Hz, H-3), 4.58, 4.68 (each 1H, brS, H2-30)
【００８６】
化合物１０：収率７３％（１５２ｍｇの９を出発物質とする）；無色の針状晶（ＥｔＯＨから）；融点２１７−２１８℃; [α]18D +18.5°(c 0.38, CHCl3); 1H-NMR (CDCl3) : 0.83 (3H,S, CH3-24), 0.84 (3H,S, CH3-23), 0.85 (3H,S, CH3-25), 0.98 (3H,S, CH3-27), 1.02 (3H,S, CH3-26), 1.68 (3H,S, CH3-29), 1.96 (2H, m, グルタリル H2-3'), 2.39, 2.43 (each 2H, t, J=7.3 Hz, グルタリル H2-2'および4'), 3.34, 3.80 (each 1H, d, J=10.5 Hz, H2-28), 4.49 (1H, dd, J=5.5, 10.5 Hz, H-3), 4.58, 4.68 (each 1H, brS, H2-30)
【００８７】
化合物１２：収率４７％（１５０ｍｇの１１を出発物質とする））；白色のアモルファス粉末；[α]18D +22.2°(c 0.72, CHCl3); 1H-NMR (CDCl3+CD3OD): 0.84 (3H,S, CH3-24), 0.85 (3H,S, CH3-23), 0.86 (3H,S, CH3-25), 0.98 (3H,S, CH3-27), 1.03 (3H,S, CH3-26), 1.68 (3H,S, CH3-29), 3.31, 3.76 (each 1H, d, J=11.0 Hz, H2-28), 4.04, 4.23 (each 2H, brS, ジグリコシル H2-2'および4'), 4.56 (1H, dd, J=5.5, 10.5 Hz, H-3), 4.58, 4.68 (each 1H, brS, H2-30)
【００８８】
実施例２
薬理学的活性
本発明の化合物を、抗ＨＩＶ活性について、以下のアッセイ手順に従って、アッセイした。Ｔ細胞株Ｈ９および前単球細胞株Ｕ９３７を、完全培地（１０％ウシ胎仔血清を補充したＲＰＭＩ１６４０）を５％ＣＯ2および３７℃で用いて連続培養にて別々に維持した。この細胞株を、対数増殖期におけるときのみ実験に使用し、他方、感染させていない末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、まずＰＨＡ（１μｇ／ｍｌ）を用いて３日間刺激した。全ての細胞標的を、ＨＩＶ−１（ＩＩＩＢ単離物，ＴＣＩＤ50１０4ＩＵ／ｍｌ、感染多重度０．０１〜０．０１ＩＵ／細胞）とともに３７℃および５％ＣＯ2で１時間インキュベートした。この細胞株およびＰＢＭＣを、完全に洗浄して吸着していないビリオンを除去し、そしてそれぞれ、完全培地または１０％ｖ／ｖインターロイキン２（ＩＬ−２）を有する完全培地中に４×１０5細胞／ｍｌで再懸濁した。１ｍｌのアリコートを等容量の試験化合物（適切な培養培地中に希釈した）を含む２４ウェル培養プレートのウェルに入れた。各化合物の毒性を、３７℃および５％ＣＯ2で４日間の後に残留した化合物に曝露した感染していない細胞の数を決定することによって評価した。ｐ２４抗原ＥＬＩＳＡアッセイを使用して、ＨＩＶ感染した培養物の培地において放出されたウイルスのレベルを決定した。ｐ２４抗原アッセイは、ＨＩＶ−１抗ｐ２４特異的モノクローナル抗体を９６ウェルプレートにコーティングされた捕捉抗体として用いた。サンプルインキュベーション期間の後、ＨＩＶ−１ ｐ２４についての抗体を含むウサギ血清を用いて、マイクロタイターウェル表面に捕捉された任意のｐ２４をタグ化した。次いで、ペルオキシダーゼ結合体化ヤギ抗ウサギ血清を使用して、捕捉されたｐ２４と複合体化したＨＩＶ−１ ｐ２４特異的ウサギ抗体をタグ化した。次いで、試験サンプルにおけるｐ２４の存在を、基質の添加によって明らかにした。ｐ２４ ＥＬＩＳＡアッセイについてのカットオフは１２．５ｐｇ／ｍｌであった。培養培地中のｐ２４を、ｐ２４の既知量を含む標準曲線に対して定量した。抗ＨＩＶ活性および細胞傷害性について、それぞれ、有効濃度（ＥＣ50）および阻害濃度（ＩＣ50）を決定した。
【表１】
【００８９】
当業者は、具体的な態様が説明、記載されている一方、本発明の精神と範囲から逸脱することなく様々な修飾と変更ができることを理解する。
【００９０】
本発明の他の態様は、本明細書を考慮し、本明細書に開示した発明の実践することから当業者には明らかであろう。明細書および実施例は、以下のクレームによって示される本発明の真の範囲および精神でもって、単なる例示であると解釈されることを意図するものである。本明細書において引用した刊行物、特許出願および特許はすべて、参考として本明細書の一部を構成する。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
［式中、
Ｒ1は、Ｃ2−Ｃ20の置換されているかまたは置換されていないカルボキシアシルであり、
Ｒ2は、水素、ハロゲン、ヒドロキシまたは−ＯＲ3であり；
Ｒ3は、水素、Ｃ2−Ｃ20の置換されているかまたは置換されていないカルボキシアシルであり；
Ｒ4は、水素、またはＣ（Ｃ6Ｈ5）3であり、
ここで、破線は、Ｃ20とＣ29との間の任意の二重結合を表し、
但し、Ｒ1はスクシニルではない］
で示される化合物。
【請求項２】
Ｒ2が水素である、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ2がハロゲンまたは−ＯＲ3であり、Ｒ3がＣ2−Ｃ20の置換されているかまたは置換されていないカルボキシアシルである、請求項１記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ1が３’炭素原子にてジェミナルに置換されているＣ4−Ｃ16のカルボキシアルカノイル基である化合物である、請求項１記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ1が、式：−Ｃ（Ｏ）ＣＨ2ＣＲ’Ｒ”（ＣＨ2）ｂＣＯＯＨ
［式中、Ｒ’およびＲ”は、それぞれ、Ｃ1-4アルキルであるか、またはＲ’は水素であり、かつ、Ｒ”はＣ1-4アルキルであるか、またはＲ’およびＲ”は一緒になってジメチレン結合、トリメチレン結合、テトラメチレン結合またはペンタメチレン結合を形成し、そしてｂは０〜１２である］を有する、請求項１記載の化合物。
【請求項６】
ｂが０〜４である、請求項５記載の化合物。
【請求項７】
R'およびR"がそれぞれメチルであり、ｂが０または1である、請求項６記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ1が、式：−Ｃ（Ｏ）ＣＨ2Ｏ（ＣＨ2）ａＣＯＯＨ
［式中、ａは０〜１２である］を有する、請求項１記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ2が以下：
ｉ.水素、
ｉｉ．−Ｃ（Ｏ）ＣＨ2Ｒ’Ｒ”（ＣＨ2）bＣＯＯＨ［式中、Ｒ’およびＲ”は、それぞれ、Ｃ1-4アルキルであるか、またはＲ’は水素であり、かつ、Ｒ”はＣ1-4アルキルであるか、またはＲ’およびＲ”は一緒になってジメチレン結合、トリメチレン結合、テトラメチレン結合またはペンタメチレン結合を形成し、そしてｂは０〜１２である］
ｉｉｉ．−Ｃ（Ｏ）ＣＨ2Ｏ（ＣＨ2）aＣＯＯＨ（ここでａは０〜１２である）、または
ｉｖ．−ＯＨ
のうちの１つである請求項１記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ2が−Ｏ−Ｃ（Ｏ）ＣＨ2ＣＲ’Ｒ”（ＣＨ2）ｂＣＯＯＨ［式中、Ｒ’およびＲ”がそれぞれメチルであり、ｂが０または１である］である請求項１記載の化合物。
【請求項１１】
式中、Ｒ1が、
【化２】
のいずれかであり、Ｒ2が水素またはヒドロキシである、請求項１記載の化合物。
【請求項１２】
式中、Ｒ1が、
【化３】
であり、Ｒ2が水素である、請求項１記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ1およびＲ3が１〜３個のヒドロキシまたはハロで置換されていることもある、請求項１記載の化合物。
【請求項１４】
１以上の請求項１記載の化合物またはその製薬的に許容し得る塩、エステル、またはプロドラッグ、およびそのエステル、塩、エーテル、硫酸塩、またはグルクロニドおよび製薬的に許容し得る担体を含有する医薬組成物。
【請求項１５】
抗ウイルス剤または免疫賦活剤から選択される１以上の薬物をさらに含有する請求項１３の医薬組成物。
【請求項１６】
前記抗ウイルス剤が、１以上の、ネビラピン、デラビジン、エファビレンツ、サクイナビル、リトナビル、インジナビル、ネルフィナビル、アンプレナビル、エンフビルチド、テノフォビル、ロピナビル、ヒドロキシ尿素，インターロイキン−２，ガンマグロブリン、アマンタジン、グアニジンヒドロキシベンゾイミダゾール，インターフェロンα、インターフェロンβ、インターフェロンγ、チオセミカルバゾン、メチサゾン、リファンピン、ピリミジンアナログ、プリンアナログ、ホスカネット、ホスホノ酢酸、シクロビル、ジデオキシヌクレオシドおよびガンシクロビルからなる群から選択される、請求項１５の医薬組成物。
【請求項１７】
前記抗ウイルス剤が、ヌクレオシドアナログである請求項１４の医薬組成物。
【請求項１８】
前記ヌクレオシドアナログが、１以上のＡＺＴ、３ＴＣ、ｄｄＩ、ｄｄＣ、Ｄ４Ｔ、アバカビルおよびアデフォビルからなる群から選択される請求項１６の医薬組成物。
【請求項１９】
１以上の請求項５の化合物またはその医薬上許容される塩、エステル、またはプロドラッグ、そのエステル、塩、エーテル、硫酸塩、またはグルクロニドおよび製薬的に許容し得る担体を含有する医薬組成物。
【請求項２０】
抗ウイルス剤または免疫賦活剤から選択される１以上の薬物をさらに含有する請求項１７の医薬組成物。
【請求項２１】
前記抗ウイルス剤が、１以上の、ネビラピン、デラビジン、、エファビレンツ、サクイナビル、リトナビル、インジナビル、ネルフィナビル、アンプレナビル、エンフビルチド、テノフォビル、ロピナビル、ヒドロキシ尿素，インターロイキン−２，ガンマグロブリン、アマンタジン、グアニジンヒドロキシベンゾイミダゾール，インターフェロンα、インターフェロンβ、インターフェロンγ、チオセミカルバゾン、メチサゾン、リファンピン、ピリミジンアナログ、プリンアナログ、ホスカネット、ホスホノ酢酸、シクロビル、ジデオキシヌクレオシドおよびガンシクロビルからなる群から選択される、請求項１８の医薬組成物。
【請求項２２】
動物の細胞または組織におけるレトロウイルス感染を阻害する方法であって、有効量の請求項１４の医薬組成物を投与することを含む方法。
【請求項２３】
前記組成物を約０．１〜約１００ｍg／体重の量で投与する、請求項２０記載の方法。
【請求項２４】
前記組成物を約５〜約２５ｍg／体重の量で投与する、請求項２１記載の方法。
【請求項２５】
前記動物がヒトである請求項２５記載の方法。
【請求項２６】
レトロウイルス関連の病状に冒されている患者を処置する方法であって、レトロウイルス阻害の有効量の１以上の請求項１記載の式Ｉで示される化合物を１以上の抗ウイルス剤と組み合わせて該患者に投与することを含む方法。
【請求項２７】
前記抗ウイルス剤が、ＡＺＴ、３ＴＣ、ｄｄＩ、ｄｄＣ、Ｄ４Ｔ、ジドブジン、ラミブジン、ザルシタビン、スタブジン、ジダノシン、テノファオビル、アバカビル、ネビラピン、デラビルジン、エントリシタビン、エファビレンツ、サクイナビル、リトナビル、インジナビル、ネルフィナビル、ロピナビル、アタザナビル、エンフビルチド、およびアンプレナビルからなる群から選択される、請求項２６記載の方法。
【請求項２８】
ＨＩＶ感染した妊婦から胎児へのＨＩＶ感染の伝搬を予防する方法であって、レトロウイルス阻害に有効な量の請求項１の式Ｉで示される化合物を、妊娠中または出産の直前、出産中もしくは出産後に、該妊婦および／または胎児に投与することを含む方法。
【請求項２９】
性交渉中のＨＩＶ感染の伝搬を予防する方法であって、１以上の請求項１の式Ｉで示される化合物を含有する局所用組成物のレトロウイルス阻害に有効な量を、性交渉の前に膣またはその他の粘膜に適用することを含む方法。
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
［式中、
Ｒ1は、Ｃ2−Ｃ20の置換されているかまたは置換されていないカルボキシアシルであり、
Ｒ2は、水素、ハロゲン、ヒドロキシまたは−ＯＲ3であり；
Ｒ3は、水素、Ｃ2−Ｃ20の置換されているかまたは置換されていないカルボキシアシルであり；
Ｒ4は、水素、またはＣ（Ｃ6Ｈ5）3であり、
ここで、破線は、Ｃ20とＣ29との間の任意の二重結合を表し、
但し、Ｒ1はスクシニルではない］
で示される化合物。
【請求項２】
Ｒ2が水素である、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ2がハロゲンまたは−ＯＲ3であり、Ｒ3がＣ2−Ｃ20の置換されているかまたは置換されていないカルボキシアシルである、請求項１記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ1が３’炭素原子にてジェミナルに置換されているＣ4−Ｃ16のカルボキシアルカノイル基である化合物である、請求項１記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ1が、式：−Ｃ（Ｏ）ＣＨ2ＣＲ’Ｒ”（ＣＨ2）ｂＣＯＯＨ
［式中、Ｒ’およびＲ”は、それぞれ、Ｃ1-4アルキルであるか、またはＲ’は水素であり、かつ、Ｒ”はＣ1-4アルキルであるか、またはＲ’およびＲ”は一緒になってジメチレン結合、トリメチレン結合、テトラメチレン結合またはペンタメチレン結合を形成し、そしてｂは０〜１２である］を有する、請求項１記載の化合物。
【請求項６】
ｂが０〜４である、請求項５記載の化合物。
【請求項７】
R'およびR"がそれぞれメチルであり、ｂが０または1である、請求項６記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ1が、式：−Ｃ（Ｏ）ＣＨ2Ｏ（ＣＨ2）ａＣＯＯＨ
［式中、ａは０〜１２である］を有する、請求項１記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ2が以下：
ｉ.水素、
ｉｉ．−Ｃ（Ｏ）ＣＨ2Ｒ’Ｒ”（ＣＨ2）bＣＯＯＨ［式中、Ｒ’およびＲ”は、それぞれ、Ｃ1-4アルキルであるか、またはＲ’は水素であり、かつ、Ｒ”はＣ1-4アルキルであるか、またはＲ’およびＲ”は一緒になってジメチレン結合、トリメチレン結合、テトラメチレン結合またはペンタメチレン結合を形成し、そしてｂは０〜１２である］
ｉｉｉ．−Ｃ（Ｏ）ＣＨ2Ｏ（ＣＨ2）aＣＯＯＨ（ここでａは０〜１２である）、または
ｉｖ．−ＯＨ
のうちの１つである請求項１記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ2が−Ｏ−Ｃ（Ｏ）ＣＨ2ＣＲ’Ｒ”（ＣＨ2）ｂＣＯＯＨ［式中、Ｒ’およびＲ”がそれぞれメチルであり、ｂが０または１である］である請求項１記載の化合物。
【請求項１１】
式中、Ｒ1が、
【化２】
のいずれかであり、Ｒ2が水素またはヒドロキシである、請求項１記載の化合物。
【請求項１２】
式中、Ｒ1が、
【化３】
であり、Ｒ2が水素である、請求項１記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ1およびＲ3が１〜３個のヒドロキシまたはハロで置換されていることもある、請求項１記載の化合物。
【請求項１４】
１以上の請求項１記載の化合物またはその製薬的に許容し得る塩、エステル、またはプロドラッグ、およびそのエステル、塩、エーテル、硫酸塩、またはグルクロニドおよび製薬的に許容し得る担体を含有する医薬組成物。
【請求項１５】
抗ウイルス剤または免疫賦活剤から選択される１以上の薬物をさらに含有する請求項１３の医薬組成物。
【請求項１６】
前記抗ウイルス剤が、１以上の、ネビラピン、デラビジン、エファビレンツ、サクイナビル、リトナビル、インジナビル、ネルフィナビル、アンプレナビル、エンフビルチド、テノフォビル、ロピナビル、ヒドロキシ尿素，インターロイキン−２，ガンマグロブリン、アマンタジン、グアニジンヒドロキシベンゾイミダゾール，インターフェロンα、インターフェロンβ、インターフェロンγ、チオセミカルバゾン、メチサゾン、リファンピン、ピリミジンアナログ、プリンアナログ、ホスカネット、ホスホノ酢酸、シクロビル、ジデオキシヌクレオシドおよびガンシクロビルからなる群から選択される、請求項１５の医薬組成物。
【請求項１７】
前記抗ウイルス剤が、ヌクレオシドアナログである請求項１４の医薬組成物。
【請求項１８】
前記ヌクレオシドアナログが、１以上のＡＺＴ、３ＴＣ、ｄｄＩ、ｄｄＣ、Ｄ４Ｔ、アバカビルおよびアデフォビルからなる群から選択される請求項１６の医薬組成物。
【請求項１９】
１以上の請求項５の化合物またはその医薬上許容される塩、エステル、またはプロドラッグ、そのエステル、塩、エーテル、硫酸塩、またはグルクロニドおよび製薬的に許容し得る担体を含有する医薬組成物。
【請求項２０】
抗ウイルス剤または免疫賦活剤から選択される１以上の薬物をさらに含有する請求項１７の医薬組成物。
【請求項２１】
前記抗ウイルス剤が、１以上の、ネビラピン、デラビジン、、エファビレンツ、サクイナビル、リトナビル、インジナビル、ネルフィナビル、アンプレナビル、エンフビルチド、テノフォビル、ロピナビル、ヒドロキシ尿素，インターロイキン−２，ガンマグロブリン、アマンタジン、グアニジンヒドロキシベンゾイミダゾール，インターフェロンα、インターフェロンβ、インターフェロンγ、チオセミカルバゾン、メチサゾン、リファンピン、ピリミジンアナログ、プリンアナログ、ホスカネット、ホスホノ酢酸、シクロビル、ジデオキシヌクレオシドおよびガンシクロビルからなる群から選択される、請求項１８の医薬組成物。
【請求項２２】
動物の細胞または組織におけるレトロウイルス感染を阻害する方法であって、有効量の請求項１４の医薬組成物を投与することを含む方法。
【請求項２３】
前記組成物を約０．１〜約１００ｍg／体重の量で投与する、請求項２０記載の方法。
【請求項２４】
前記組成物を約５〜約２５ｍg／体重の量で投与する、請求項２１記載の方法。
【請求項２５】
前記動物がヒトである請求項２５記載の方法。
【請求項２６】
レトロウイルス関連の病状に冒されている患者を処置する方法であって、レトロウイルス阻害の有効量の１以上の請求項１記載の式Ｉで示される化合物を１以上の抗ウイルス剤と組み合わせて該患者に投与することを含む方法。
【請求項２７】
前記抗ウイルス剤が、ＡＺＴ、３ＴＣ、ｄｄＩ、ｄｄＣ、Ｄ４Ｔ、ジドブジン、ラミブジン、ザルシタビン、スタブジン、ジダノシン、テノファオビル、アバカビル、ネビラピン、デラビルジン、エントリシタビン、エファビレンツ、サクイナビル、リトナビル、インジナビル、ネルフィナビル、ロピナビル、アタザナビル、エンフビルチド、およびアンプレナビルからなる群から選択される、請求項２６記載の方法。
【請求項２８】
ＨＩＶ感染した妊婦から胎児へのＨＩＶ感染の伝搬を予防する方法であって、レトロウイルス阻害に有効な量の請求項１の式Ｉで示される化合物を、妊娠中または出産の直前、出産中もしくは出産後に、該妊婦および／または胎児に投与することを含む方法。
【請求項２９】
性交渉中のＨＩＶ感染の伝搬を予防する方法であって、１以上の請求項１の式Ｉで示される化合物を含有する局所用組成物のレトロウイルス阻害に有効な量を、性交渉の前に膣またはその他の粘膜に適用することを含む方法。
【公表番号】特表２００６−５０４７０４（Ｐ２００６−５０４７０４Ａ）
【公表日】平成１８年２月９日（２００６．２．９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００４−５３９８９７（Ｐ２００４−５３９８９７）
【出願日】平成１５年９月２６日（２００３．９．２６）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００３／０３０２２５
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０２８４５５
【国際公開日】平成１６年４月８日（２００４．４．８）
【出願人】（５００４０７７８７）パナコス ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド (3)
【出願人】（５０５１１１９８２）学校法人 新潟科学技術学園 新潟薬科大学 (7)
【出願人】（５０１３４５３２３）ザ ユニバーシティ オブ ノース カロライナ アット チャペル ヒル (52)
【氏名又は名称原語表記】ＴＨＥ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ ＯＦ ＮＯＲＴＨ ＣＡＲＯＬＩＮＡ ＡＴ ＣＨＡＰＥＬ ＨＩＬＬ
【住所又は居所原語表記】３０８ Ｂｙｎｕｍ Ｈａｌｌ，Ｃａｍｐｕｓ Ｂｏｘ ４１０５，Ｃｈａｐｅｌ Ｈｉｌｌ，Ｎｏｒｔｈ Ｃａｒｏｌｉｎａ ２７５９９−４１０５， Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１８年２月９日（２００６．２．９）
【国際特許分類】
【出願日】平成１５年９月２６日（２００３．９．２６）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００３／０３０２２５
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０２８４５５
【国際公開日】平成１６年４月８日（２００４．４．８）
【出願人】（５００４０７７８７）パナコス ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド (3)
【出願人】（５０５１１１９８２）学校法人 新潟科学技術学園 新潟薬科大学 (7)
【出願人】（５０１３４５３２３）ザ ユニバーシティ オブ ノース カロライナ アット チャペル ヒル (52)
【氏名又は名称原語表記】ＴＨＥ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ ＯＦ ＮＯＲＴＨ ＣＡＲＯＬＩＮＡ ＡＴ ＣＨＡＰＥＬ ＨＩＬＬ
【住所又は居所原語表記】３０８ Ｂｙｎｕｍ Ｈａｌｌ，Ｃａｍｐｕｓ Ｂｏｘ ４１０５，Ｃｈａｐｅｌ Ｈｉｌｌ，Ｎｏｒｔｈ Ｃａｒｏｌｉｎａ ２７５９９−４１０５， Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ
【Ｆターム（参考）】
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