リウマチの治療のための糖質コルチコイド受容体調節因子としての（Ｅ）−Ｎ−｛３−［１−（８−フルオロ−１１Ｈ−１０−オキサ−１−アザ−ジベンゾ［ａ，ｄ］シクロヘプテン−５−イリデン）プロピル］フェニル｝メタンスルホンアミド
本発明は、化合物（Ｉ）：
または、その薬学的に許容され得る塩；１種以上の薬学的に許容され得るキャリア、賦形剤、または希釈剤と組み合わせて、化合物（Ｉ）を含む医薬組成物；および炎症性疾患および免疫疾患の処置のための方法であって、その必要のある患者に、化合物（Ｉ）またはその薬学的に許容され得る塩の有効量を投与することを含む方法を提供する。
または、その薬学的に許容され得る塩；１種以上の薬学的に許容され得るキャリア、賦形剤、または希釈剤と組み合わせて、化合物（Ｉ）を含む医薬組成物；および炎症性疾患および免疫疾患の処置のための方法であって、その必要のある患者に、化合物（Ｉ）またはその薬学的に許容され得る塩の有効量を投与することを含む方法を提供する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ステロイド性糖質コルチコイドに反応する炎症性疾患および免疫疾患の処置または予防のための治療薬、その薬剤を含む医薬組成物、患者において炎症性疾患および免疫疾患を処置または予防する方法、およびその治療薬の合成に有用な中間体およびプロセスに関する。
【背景技術】
【０００２】
天然に存在するステロイド性糖質コルチコイドならびに合成ステロイド性糖質コルチコイドは、慢性関節リウマチ、変形性関節症、リウマチ熱、喘息、アレルギー性鼻炎、全身性エリテマトーデス、慢性閉塞性肺疾患、クローン病、炎症性腸疾患、および潰瘍性大腸炎のような、急性および慢性の炎症性疾患および免疫疾患の処置のために、５０年間にわたって広く使用されてきた。しかしながら、糖質コルチコイドの使用は、骨量の減少／骨粗しょう症、高血糖症、糖尿病、高血圧症、緑内障、筋委縮、クッシング症候群、および精神病のような、重篤でときに不可逆性の副作用としばしば関連する。したがって、ステロイド性糖質コルチコイドの有益な効果を有するが、付随する副作用の可能性または発生率が低減された代替療法の必要性が残る。
【０００３】
糖質コルチコイドは、糖質コルチコイド受容体（ＧＲ）との複合体の形成後に、遺伝子転写を調節する。糖質コルチコイド結合の後に、ＧＲ−糖質コルチコイド複合体は、それが特定の遺伝子のプロモーター領域中の糖質コルチコイドホルモン応答要素（ＧＲＥ）に結合する細胞核へ移行する。ＧＲ−糖質コルチコイド／ＧＲＥ複合体は、次いで、次々に、近くに配置された遺伝子の転写を活性化（トランス活性化）または阻害する。あるいは、ＧＲ−糖質コルチコイド複合体は、ＤＮＡ結合を含まないプロセスによって遺伝子転写を負に調節し得る。この転写抑制と呼ばれるプロセスにおいて、ＧＲ−糖質コルチコイド複合体は核に進入し、（タンパク質間相互作用を介して）他の転写因子と直接的に相互作用し、それらの遺伝子転写およびそれによるタンパク質発現を誘導する能力を抑制する。
【０００４】
ステロイド性糖質コルチコイドに替わるものとして好適なＧＲリガンドの探索は、他の生理学的プロセスを調節する他のステロイドホルモン受容体、例えば、アンドロゲン受容体（ＡＲ）、鉱質コルチコイド受容体（ＭＲ）、およびプロゲステロン受容体（ＰＲ）が、ＧＲに相似するリガンド結合ドメインを有するという事実によって妨げられる。結果として、ＧＲリガンドは、これらの他の受容体との交差反応の可能性を有する。したがって、ステロイド性糖質コルチコイドに替わるものの所望される特性は、それが、他のステロイドホルモン受容体と比べてより大きな親和性でＧＲに結合することである。
【０００５】
最近の見識は、糖質コルチコイドの抗炎症効果がＤＮＡへのＧＲ結合の非存在下で維持されることができることを実証する。結果として、ＧＲタンパク質間相互作用（例えば、転写抑制）によって主に調節される糖質コルチコイド作用の機構は、抗炎症反応を誘導するのに十分であると考えられる。さらに、糖質コルチコイド療法の多くの副作用（例えば、高血糖症、糖尿病、緑内障、および筋委縮）は、今やＤＮＡへのＧＲ結合の後のトランス活性化機構によって主に介在されると考えられる。したがって、ＧＲ介在性転写抑制をＧＲ介在性トランス活性化と区別することができる薬剤が、特に望ましい。さらに、他のステロイドホルモン受容体の転写活性を調節する（すなわち、作用する、部分的に作用する、部分的に拮抗する、または拮抗する）限定された能力を示す薬剤もまた、特に望ましい。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
他のステロイドホルモン受容体に比べてより大きな親和性でＧＲに結合する薬剤を提供することが、本発明の目的である。より具体的には、ＡＲ、ＭＲ、およびＲＰに比べて１０倍より大きな親和性でＧＲに結合する薬剤を提供することが目的である。糖質コルチコイド療法に関連する副作用を含む傾向に比べて、強力な抗炎症特性を持つ薬剤を提供することが、本発明のさらなる目的である。より具体的には、骨量の減少または骨粗しょう症を含む傾向に比べて、強力な抗炎症特性を持つ薬剤を提供することが目的である。他のステロイドホルモン受容体である、ＡＲ、ＭＲ、およびＰＲの活性を調節する限定された能力を示す薬剤を提供することまた、本発明のさらなる目的である。
【０００７】
ＧＲ調節因子は、当該分野において公知である。例えば、ＷＯ ０４／０５２８４７は、鉱質コルチコイド受容体または糖質コルチコイド受容体の調節の影響を受けやすい疾患を処置するのに有用な一種の三環式ステロイドホルモン受容体調節因子を開示する。驚くべきことに、ＷＯ ０４／０５２８４７の範囲内から化合物を選択することによって（本明細書中以下では化合物（Ｉ）として提供される）、ステロイド性糖質コルチコイドに反応する炎症性疾患および免疫疾患の処置に特に有用であることを示唆する予想外の活性プロフィールを持つ新規の治療薬が特定されたことが見出された。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
したがって、本発明は、化合物（Ｉ）：
【化１】
（（Ｅ）−Ｎ−｛３−［１−（８−フルオロ−１１Ｈ−１０−オキサ−１−アザ−ジベンゾ［ａ，ｄ］シクロヘプテン−５−イリデン）−プロピル］−フェニル｝−メタンスルホンアミド）または、その薬学的に許容され得る塩を提供する。
【０００９】
別の実施形態において、本発明は、炎症性疾患または免疫疾患、特に慢性関節リウマチを処置または予防する方法であって、それを必要とする患者に、有効量の化合物（Ｉ）またはその薬学的に許容され得る塩を投与することを含む方法を提供する。さらに、本発明は、治療における使用のための、化合物（Ｉ）またはその薬学的に許容され得る塩を提供する。本発明はまた、炎症性疾患または免疫疾患、特に慢性関節リウマチの処置または予防における使用のための、化合物（Ｉ）またはその薬学的に許容され得る塩も提供する。
【００１０】
別の実施形態において、本発明は、炎症性疾患または免疫疾患、特に慢性関節リウマチを処置するための医薬品の製造のための、化合物（Ｉ）またはその薬学的に許容され得る塩の使用を提供する。
【００１１】
別の実施形態において、本発明は、１種以上の薬学的に許容され得るキャリア、賦形剤、または希釈剤と組み合わせて、化合物（Ｉ）またはその薬学的に許容され得る塩を含む医薬組成物を提供する。好ましい実施形態として、本発明は、１種以上の薬学的に許容され得るキャリア、賦形剤、または希釈剤と組み合わせて、化合物（Ｉ）またはその薬学的に許容され得る塩を含む、慢性関節リウマチの処置または予防のための医薬組成物を提供する。さらに、本発明はまた、化合物（Ｉ）の合成のための新規な中間体およびプロセスも提供する。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明は、ステロイド性糖質コルチコイドに反応する炎症性疾患および免疫疾患の処置または予防のための、化合物（Ｉ）の使用を提供する。そのような疾患は、例えば、慢性関節リウマチ、変形性関節症、リウマチ熱、喘息、アレルギー性鼻炎、全身性エリテマトーデス、慢性閉塞性肺疾患、クローン病、炎症性腸疾患、および潰瘍性大腸炎を含む。化合物（Ｉ）が有用な特定の疾患は、慢性関節リウマチである。慢性関節リウマチ（ＲＡ）は、３０歳〜５０歳の典型的な年齢で開始する、持続性の滑膜関節組織の炎症によって特徴づけられる慢性疾患である。ＲＡは、男性に比べて女性がその疾患を発症する可能性が２倍である、最も一般的な炎症性関節炎の形態である。
【００１３】
炎症性疾患および免疫疾患の処置または予防のための化合物（Ｉ）の使用はまた、糖質コルチコイド療法と典型的に関連する副作用の低減された傾向、可能性、または発生率と関連するとも考えられる。糖質コルチコイド療法の１つのそのような副作用は、骨量の減少／骨粗しょう症または糖質コルチコイド誘導性骨粗しょう症（ＧＩＯＰ）である。ＧＩＯＰは、薬物誘導性骨粗しょう症の最も一般的な原因であり、慢性の（すなわち、６カ月以上続く）糖質コルチコイド療法を受けている患者の最大５０％に発生すると報告されている。特に、化合物（Ｉ）の使用は、骨量の減少または骨粗しょう症の低減された傾向、可能性、または発生率と関連すると考えられる。
【００１４】
他のように定義されない限り、本発明は、化合物（Ｉ）の薬学的に許容され得る塩、ならびに化合物（Ｉ）の遊離塩基の溶媒和物およびその薬学的に許容され得る塩を含む。しかしながら、化合物（Ｉ）の遊離塩基が好ましい。本明細書で使用される用語「薬学的に許容され得る塩」は、生物に対して実質的に非毒性である化合物（Ｉ）の塩を示す。薬学的に許容され得る塩およびそれらの調製方法の例は、当該分野において確立されている。例えば、Ｓｔａｈｌら、「Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｕｓｅ」，ＶＣＨＡ／Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，（２００２）；Ｇｏｕｌｄ，Ｐ．Ｌ．，「Ｓａｌｔ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｆｏｒ ｂａｓｉｃ ｄｒｕｇｓ」，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，３３：２０１−２１７（１９８６）；およびＢａｓｔｉｎら、「Ｓａｌｔ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ ｆｏｒ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｎｅｗ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｎｔｉｔｉｅｓ」，Ｏｒｇａｎｉｃ Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，４：４２７−４３５（２０００）を参照のこと。
【００１５】
本明細書中で使用される用語「患者」は、イヌ、ネコ、ウシ、サル、ウマ、またはヒツジのようなヒトまたは非ヒト哺乳動物を示す。より具体的には、用語「患者」は、ヒトを示す。本明細書中で使用される用語「処置すること」（あるいは「処置する」または「処置」）は、既存の症状または疾患の進行または重篤度を、妨げること、予防すること、抑えること、遅滞させること、停止させること、または逆転させることを含む。本明細書中で使用される用語「予防すること」（あるいは「予防する」または「予防」）は、症状または疾患の発生または出現を、妨げること、抑えること、または阻害することを示す。
【００１６】
化合物（Ｉ）またはその薬学的に許容され得る塩は、医薬組成物の一部としての投与のために配合され得る。そのようなものとして、１種以上の薬学的に許容され得るキャリア、賦形剤、または希釈剤と組み合わせて、化合物（Ｉ）またはその薬学的に許容され得る塩を含む医薬組成物は、本発明の重要な実施形態である。医薬組成物およびそれらの調製方法の例は、当該分野において周知である。例えば、ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ：ＴＨＥ ＳＣＩＥＮＣＥ ＡＮＤ ＰＲＡＣＴＩＣＥ ＯＦ ＰＨＡＲＭＡＣＹ，Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏら編、第１９版、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ（１９９５）を参照のこと。化合物（Ｉ）を含む例示的な組成物は、例えば、１％カルボキシメチルセルロースナトリウム、０．２５％ポリソルベート８０、および０．０５％ Ａｎｔｉｆｏａｍ １５１０（商標）（Ｄｏｗ Ｃｏｒｎｉｎｇ）と共に浮遊する化合物（Ｉ）；および０．０１Ｎ ＨＣｌ中の０．５％メチルセルロース、１％ラウリル硫酸ナトリウム、および０．１％ Ａｎｔｉｆｏａｍ １５１０と共に浮遊する化合物（Ｉ）を含む。本発明の好ましい組成物は、カプセルまたは錠剤中に配合された化合物（Ｉ）またはその薬学的に許容され得る塩を含む。
【００１７】
化合物（Ｉ）または化合物（Ｉ）を含む組成物は、経口経路または非経口経路を含む、化合物（Ｉ）を生物学的に利用可能にするいかなる経路によっても投与されることができる。例えば、化合物（Ｉ）、または化合物（Ｉ）を含む組成物は、経口投与、皮下投与、筋肉内投与、静脈内投与、経皮投与、鼻内投与、直腸投与、口腔投与などされることができる。あるいは、化合物は、持続注入によって投与され得る。しかしながら、経口投与が好ましい投与の経路であることが理解される。
【００１８】
本明細書で使用される用語「有効量」は、患者への単回または複数回の投薬の際に、診断または処置下の患者に所望の効果を提供する、化合物（Ｉ）の量または投薬量を示す。有効量は、当業者として、哺乳動物の種；その大きさ、年齢、および一般的健康；関連する特定の疾患；疾患の度合いまたは重篤度；個々の患者の反応；投与された特定の化合物；投与の様式；投与された調製物の生物学的利用能特性；選択された投薬養生法；ならびに何らかの併用薬の使用のような多くの因子を考慮することにより、担当の診断医によって容易に決定されることができる。
【００１９】
生物学的活性
本明細書中で使用される場合、「Ｋｄ」は、リガンド−受容体複合体についての平衡解離定数を示し；「Ｋｉ」は、薬物−受容体複合体についての平衡解離定数を示し、かつ、平衡状態で結合部位の半数に結合する薬物の濃度の指標であり；「ＩＣ５０」は、薬剤について考えられうる最大阻害応答の５０％を生じる薬剤の濃度、あるいは、受容体へのリガンド結合の５０％変位を生じる薬剤の濃度を示し；「ＥＣ５０」は、薬剤について考えられうる最大応答の５０％を生じる薬剤の濃度を示し；そして「ＥＤ５０」は、薬剤についての最大応答の５０％を生じる、投与された治療剤の投薬量を示す。
【００２０】
核ホルモン受容体結合アッセイ：
ヒトＧＲ（糖質コルチコイド受容体）、ＡＲ（アンドロゲン受容体）、ＭＲ（鉱質コルチコイド受容体）、またはＰＲ（プロゲステロン受容体）を過剰発現するヒト胎児腎臓ＨＥＫ２９３細胞からの細胞溶解物を、Ｋｉ値を決定するための受容体−リガンド競合結合アッセイのために使用する。
【００２１】
簡単に言うと、ステロイド受容体競合結合アッセイを、２０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ緩衝液（ｐＨ＝７．６）、０．２ｍＭ ＥＤＴＡ、７５ｍＭ ＮａＣｌ、１．５ｍＭ ＭｇＣｌ２、２０％グリセロール、２０ｍＭモリブデン酸ナトリウム、０．２ｍＭ ＤＴＴ（ジチオスレイトール）、２０μｇ／ｍＬアプロチニン、および２０μｇ／ｍＬロイペプチンを含有する緩衝液中で行う。典型的には、ステロイド受容体結合アッセイは、１ウェル毎に、放射線標識されたリガンド（例えば、ＧＲ結合について０．３ｎＭ［３Ｈ］−デキサメタゾン、ＡＲ結合について０．３６ｎＭ［３Ｈ］−メチルトリエノロン、ＭＲ結合について０．２５ｎＭ［３Ｈ］−アルドステロン、およびＰＲ結合について０．２９ｎＭ［３Ｈ］−メチルトリエノロン）、および２０μｇ ２９３−ＧＲ溶解物、２２μｇ ２９３−ＡＲ溶解物、２０μｇ ２９３−ＭＲ溶解物、または４０μｇ ２９３−ＰＲ溶解物のいずれかを含む。アッセイは、典型的には９６ウェル形式で行う。競合する試験化合物を、約０．０１ｎＭ〜１０μＭの範囲の種々の濃度で添加する。非特異的結合を、ＧＲ結合について５００ｎＭデキサメタゾン、ＭＲ結合について５００ｎＭアルドステロン、またはＡＲおよびＰＲ結合について５００ｎＭメチルトリエノロンの存在下で決定する。結合反応物（１４０μＬ）を、４℃で一晩インキュベートし、次いで、７０μｌの冷チャコールデキストラン緩衝液（５０ｍｌのアッセイ緩衝液毎に０．７５ｇの炭と０．２５ｇのデキストランを含有する）を、各反応物に添加する。プレートを、４℃で、オービタルシェーカー上で８分間混合する。プレートを、次いで、１０分間４℃で、３，０００ｒｐｍで遠心分離する。結合反応混合物の１２０μｌのアリコートを、次いで、別の９６ウェルプレートに移し、１７５μｌのＷａｌｌａｃ Ｏｐｔｉｐｈａｓｅ Ｈｉｓａｆｅ ３（商標）シンチレーション液を各ウェルに添加する。プレートを密封し、オービタルシェーカー上で激しく撹拌する。２時間のインキュベーション後、プレートを、Ｗａｌｌａｃ Ｍｉｃｒｏｂｅｔａ計数器で読み取る。
【００２２】
データを、推定ＩＣ５０および１０μＭでの阻害率を計算するために使用する。ＧＲ結合についての［３Ｈ］−デキサメタゾン、ＡＲ結合についての［３Ｈ］−メチルトリエノロン、ＭＲ結合についての［３Ｈ］−アルドステロン、またはＰＲ結合についての［３Ｈ］−メチルトリエノロンに対するＫｄを、飽和結合によって決定する。化合物に対するＩＣ５０値を、Ｃｈｅｎｇ−Ｐｒｕｓｏｆｆ方程式を使用してＫｉに変換する。
【００２３】
上記に記載されるプロトコールと類似の結合アッセイプロトコールは、当業者によって容易に設計されることができる。本質的に上記に記載される手順にしたがって、化合物（Ｉ）は、約０．２ｎＭのＧＲ結合アッセイにおけるＫｉ；約６．７ｎＭのＡＲ結合アッセイにおけるＫｉ；約９．２ｎＭのＭＲ結合アッセイにおけるＫｉ；および約３２ｎＭのＰＲ結合アッセイにおけるＫｉを示す（値は、ｎ＝７の実験の平均値として報告される）。したがって、化合物（Ｉ）は、ヒトＧＲの強力なリガンドであり、さらに、ヒトＭＲ、ＡＲ、およびＰＲの各々と比べて約１５倍以上の親和性でＧＲに結合する。
【００２４】
本発明の化合物がステロイドホルモン受容体の活性を調節する（すなわち、作用する、部分的に作用する、部分的に拮抗する、または拮抗する、のいずれか）能力を実証するために、核受容体タンパク質およびホルモン応答エレメント−受容体遺伝子構築物で一時的にトランスフェクトされた細胞における標的遺伝子発現の機能的調節を検出するバイオアッセイを実施する。機能アッセイにおいて利用される溶媒、試薬、およびリガンドは、商業的供給源から容易に利用可能であり、または、当業者によって調製されることができる。
【００２５】
核ホルモン受容体機能調節アッセイ：
ヒト胎児腎臓ＨＥＫ２９３細胞を、Ｆｕｇｅｎｅ（商標）トランスフェクション試薬を使用して、ステロイドホルモン受容体およびレポーター遺伝子プラスミドでトランスフェクトする。簡単に言うと、ルシフェラーゼレポーターｃＤＮＡの上流のプロバシン（ｐｒｏｂａｓｉｎ）ＡＲＥおよびＴＫ（チミジンキナーゼ）プロモーターの２つのコピーを含有するレポータープラスミドを、ウイルス性ＣＭＶ（サイトメガロウイルス）プロモーターを使用して、ヒトアンドロゲン受容体（ＡＲ）を構成的に発現するプラスミドと共にＨＥＫ２９３細胞中にトランスフェクトする。ルシフェラーゼレポーターｃＤＮＡの上流のＧＲＥおよびＴＫプロモーターの２つのコピーを含有するレポータープラスミドを、ウイルス性ＣＭＶプロモーターを使用して、ヒト糖質コルチコイド受容体（ＧＲ）、ヒト鉱質コルチコイド受容体（ＭＲ）、またはヒトプロゲステロン受容体（ＰＲ）のいずれかを構成的に発現するプラスミドと共にトランスフェクトする。細胞を、Ｔ１５０ｃｍフラスコにおいて５％活性炭処理済（ｃｈａｒｃｏａｌ−ｓｔｒｉｐｐｅｄ）ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を有するＤｕｌｂｅｃｃｏの改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）中でトランスフェクトする。一晩のインキュベーション後、トランスフェクトされた細胞をトリプシン処理し、９６ウェル皿において５％活性炭処理済ＦＢＳを含有するＤＭＥＭ培地中に平板培養し、４時間インキュベートし、次いで、約０．０１ｎＭ〜１０μＭの範囲の種々の濃度の試験化合物に曝露する。アッセイのためのアンタゴニスト様式において、各々の受容体に対して低濃度のアゴニストを培地に添加する（ＧＲについて０．２５ｎＭ デキサメタゾン、ＡＲについて０．３ｎＭのメチルトリエノロン、ＰＲについて０．０５ｎＭのプロメゲストン、およびＭＲについて０．０５ｎＭアルドステロン）。試験化合物との２４時間のインキュベーション後、細胞を溶解させ、標準的な技術を使用してルシフェラーゼ活性を決定する。
【００２６】
データを、ＥＣ５０値を決定するために４パラメータフィットのロジスティック曲線に当てはめる。有効性率（飽和最大応答を有する化合物）または最大刺激率（飽和していない最大応答を有する化合物）を、以下の参照アゴニストで得られた最大刺激と比較して決定する：ＡＲアッセイについて１００ｎＭメチルトリエノロン、ＰＲアッセイについて３０ｎＭプロメゲストン、ＭＲアッセイについて３０ｎＭアルドステロン、およびＧＲアッセイについて１００ｎＭデキサメタゾン。ＩＣ５０値を、アンタゴニスト様式アッセイのデータを使用して同様に決定することができる。阻害率もまた、上記に記載されるように、アゴニスト単独の存在下での応答と比べて決定され得る。
【００２７】
本質的に上記に記載される手順に従って、化合物（Ｉ）は、転写活性化において以下のプロフィールを示した：ＧＲについて、約１．８ｎＭのＥＣ５０を有する約４４％の有効性；ＡＲについて、１０μＭより大きいＥＣ５０を有する約４．４％の有効性；ＭＲについて、１０μＭより大きいＥＣ５０を有する約１１％の有効性；およびＰＲについて、１０μＭより大きいＥＣ５０を有する約５４％の有効性（値は、ｎ＝４または５の実験の平均値として報告される）。
【００２８】
糖質コルチコイド受容体介在性転写抑制アッセイ
１．ヒト皮膚線維芽細胞ＣＣＤ−３９ＳＫ細胞におけるＩＬ−１β刺激性ＩＬ−６生成：
簡単に言うと、ＡＴＣＣから得られたヒト皮膚線維芽細胞ＣＣＤ−３９ＳＫ細胞（２０，０００細胞／ウェル）を、１０％ ＦＢＳ、１００Ｕ／ｍｌペニシリン、１００ｕｇ／ｍｌストレプトマイシン、および２ｍｍｏｌ／Ｌ Ｌ−グルタミンが補充された血清不含成長培地において９６ウェルプレートに播種する。細胞を、３７℃、５％ ＣＯ２で加湿されたチャンバにおいて維持する。試験化合物を、約４．６５ｐＭ〜４．６４μＭの最終濃度の範囲の種々の濃度でウェルに加える。０．１μＭのデキサメタゾンを、陽性コントロールとして使用する。試験化合物での処理の１時間後に、ＩＬ−１βを、１ｎｇ／ｍｌの最終濃度で加え；反応混合物を一晩インキュベートする。１０μｌの上清を各ウェルから取り出し、４５０ｎｍでの吸光度を読み取ることによってＩＬ−６濃度が定量化されるＥＬＩＳＡキットを使用して、ＩＬ−６の濃度を決定する。
【００２９】
２．ＰＭＡ分化性Ｕ９３７細胞におけるＬＰＳ刺激性ＴＮＦ−α生成：
ＡＴＣＣから得られたヒトＵ９３７プレ単球細胞を、１０％ＦＢＳを含有する完全ＲＰＭＩ １６４０培地において増殖させる。単球を、接着性のマクロファージに分化させ、Ｕ９３７細胞をカルシウム、マグネシウム不含中で洗浄し、２０ｎＭホルボール １２−ミリスチン酸−１３−酢酸（ＰＭＡ）を含有する新しいＲＰＭＩ培地に一晩再懸濁させる。分化の後、試験化合物を、９６ウェルプレート中の細胞に、約４．６５ｐＭ〜４．６４μＭの範囲の種々の濃度で加える。試験化合物での処理の１時間後に、ＬＰＳを、１００ｎｇ／ｍｌの最終濃度で加え、反応混合物を一晩インキュベートする。２５μｌの細胞不含上清を各ウェルから別の９６ウェルプレートに移し、ＴＮＦ−α生成を、４５０ｎｍでの吸光度を読み取ることによってＴＮＦ−αが定量化されるＥＬＩＳＡキットを使用して測定する。
【００３０】
本質的に上記で記載される手順に従って、化合物（Ｉ）は、それぞれ約８．５ｎＭおよび２１ｎＭのＩＣ５０値で、約９０％またはそれより大きいＩＬ−６およびＴＮＦ−αの内因性発現の最大阻害を誘導する（値は、ｎ＝１５の実験（ＩＬ−６アッセイ）およびｎ＝４の実験（ＴＮＦ−αアッセイ）の平均値として報告される）。
【００３１】
したがって、化合物（Ｉ）は、炎症性タンパク質ＩＬ−６およびＴＮＦαの内因性生成の強力かつ完全な（約９０％またはそれより大きい最大阻害の）転写抑制因子である。さらに、化合物（Ｉ）は、ＧＲ／ＧＲＥ介在性遺伝子転写の誘導において（約５０％またはそれより小さい最大有効率の）部分的なアゴニスト活性のみを示す。したがって、化合物（Ｉ）は、完全なＧＲ介在性転写抑制を誘導し、さらにＧＲ／ＧＲＥ介在性トランス活性化を部分的にのみ誘導することによって、分化したプロフィールを示す。さらに、他のステロイド受容体の機能調節に対する効果を試験するアッセイにおいて、化合物（Ｉ）は、ＡＲ、ＭＲ、およびＰＲによって介在される遺伝子発現の活性化において限られた活性のみを示す。
【００３２】
動物モデル：
１．カラゲニン誘導性足浮腫（ＣＰＥ）モデル
カラゲニン類は、多糖類の１つのグループであり、それは、動物において急性の炎症反応を誘導することができる。浮腫、痛覚過敏、および紅斑を含む炎症の主要な兆候は、注射の直後に、注射部位において発症する。ＣＰＥモデルは、炎症の広く認められているモデルであり、糖質コルチコイド受容体リガンドの抗炎症効果を評価するために使用されることができる。
【００３３】
化合物（Ｉ）の抗炎症効果を評価するために、化合物を、０．５％カルボキシメチルセルロース、および０．２５％ Ｔｗｅｅｎ ８０を含む賦形剤中に配合し、次いで、雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（１８０ｇ〜２００ｇ）に強制栄養法を介して経口的に投与する。比較のために、プレドニゾロンを、同じ賦形剤において経口的に投与し得る。２時間後、５０μｌの０．９％発熱物質不含生理食塩水中の１％カラゲニンを、右後肢の足底下（ｓｕｂｐｌａｎｔａｒ）領域中に注射する。ラットをカラゲニン注射の３時間後に、ＣＯ２によって麻酔する。肢を除去し、次いで、微量天秤を使用して重さを量る。肢を、次いで、肢表面にいくつかの切り込みを作成し、すぐに、凍結するまで液体窒素中に漬けることによって解剖する。凍結した肢を、次いで、遠心分離して滲出物を抽出する。炎症反応の間に生成されたサイトカインであるＩＬ−１β滲出レベルを、次いで、メーカーの使用説明書に従ってＥＬＩＳＡによって測定する。全肢タンパク質もまた、タンパク質アッセイキットを使用して測定し、ＩＬ−１βの絶対レベルを、全タンパク質の１ｍｇあたりのＩＬ−１βのｎｇ濃度値を出すために正規化する。
【００３４】
化合物（Ｉ）は、カラゲニン誘導性肢重量の増加を、約２．８ｍｇ／ｋｇのＥＤ５０で阻害した。化合物（Ｉ）はまた、ＩＬ−１βの肢滲出レベルを、約３．２ｍｇ／ｋｇのＥＤ５０で低減させた。逆に、このモデルにおけるプレドニゾロン処理は、肢重量の増加を、約６．６ｍｇ／ｋｇのＥＤ５０で阻害し、ＩＬ−１βレベルを、約１ｍｇ／ｋｇ未満のＥＤ５０で（５個体の測定の平均を表すＥＤ５０値で）低減させた。
【００３５】
２．血清オステオカルシンアッセイ
骨量の減少／骨粗しょう症、および結果として生じる骨折の危険性の増加は、糖質コルチコイド療法から生じる一般的かつ顕著な悪影響である。糖質コルチコイド誘導性骨粗しょう症は、少なくとも部分的に、骨形成の阻害から生じると考えられる。骨合成の生物学的マーカーである血清オステオカルシンの測定は、骨に対する糖質コルチコイド療法の悪影響を評価するための広く認められるツールである。
【００３６】
骨形成に対する化合物（Ｉ）の効果を評価するために、化合物（Ｉ）を、５％カルボキシメチルセルロースおよび０．２５％ Ｔｗｅｅｎ ８０を含む賦形剤中に配合し、１６週齢の雄性Ｓｗｉｓｓ−Ｗｅｂｓｔｅｒマウス（Ｈａｒｌａｎ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ）に７日間、強制栄養法を介して経口的に投与する。比較のために、プレドニゾロンを、同じ賦形剤において経口的に投与する。血清を、最後の投薬から２４時間後に採取し、オステオカルシンレベルを、９６ウェル形式に変更した競合的放射免疫測定を使用して決定する。簡単に言うと、２．５μｌマウス血清、２．５μｌヤギ抗マウスオステオカルシン、０．６２５μｌ正常ヤギ血清、および１１９．３７５μｌ ＲＩＡ 緩衝液（０．１２２５Ｍ ＮａＣｌ、０．０１Ｍ ＮａＨ２ＰＯ４、ｐＨ ７．４、０．０２５ＭテトラナトリウムＥＤＴＡ、０．１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ、および０．１％（ｗ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ−２０）を含有するＭｕｌｔｉｓｃｒｅｅｎ（商標）プレートの各ウェルを、８０ｒｐｍのオービタルシェーカー上で、１８時間４℃でインキュベートする。２５μｌ ＲＩＡ緩衝液中の０．２μＣｉ／ｍｌ［１２５Ｉ］マウスオステオカルシンの各ウェルへの添加後に、プレートを、８０ｒｐｍのオービタルシェーカー上で、４℃で２４時間インキュベートする。複合体を、ウェルあたり１２５μｌの０．２Ｍ Ｎａ２ＨＰＯ４、ｐＨ ７．４、５％（ｗ／ｖ）ポリエチレングリコール中のロバ抗ヤギＩｇＧ（１：３０）の添加により、２５℃で２時間沈降させる。沈殿物を、真空濾過によって採取し、１００μｌ／ウェルｄＨ２Ｏで１回洗浄する。濾過材に穴をあけ、放射能をγカウンターで定量化する。試験サンプルからの濾過材上で検出される放射能は、血清オステオカルシン濃度に反比例する。精製されたマウスオステオカルシンの標準曲線を使用して、試験サンプル中の血清オステオカルシン濃度を計算する。
【００３７】
ラットＣＰＥモデルにおいて決定されたＥＤ５０値に近似する１日投与量（化合物（Ｉ）については３ｍｇ／Ｋｇ／日、およびプレドニゾロンについては１０ｍｇ／Ｋｇ／日）で比較すると、化合物（Ｉ）は、プレドニゾロンよりも、血清オステオカルシンレベルを低減させなかった。
【００３８】
化合物（Ｉ）を調製するための方法は、当該分野において公知である。例えば、ＷＯ ０４／０５２８４７は、利用され得る一般的手順を提供する。さらに、ＷＯ ０５／０６６１６１は、利用され得るさらなる一般的手順を提供する。以下のスキーム、中間体、および実施例は、本発明をさらに説明し、化合物（Ｉ）の典型的な合成を表す。試薬および出発物質は、当業者に容易に利用可能であり、または当業者によって容易に合成され得る。例として記載されるスキーム、中間体、および実施例が限定されていないこと、および当業者によって変更がなされ得ることは理解されるべきである。本発明の化合物の名前は、ＣｈｅｍＤｒａｗ Ｕｌｔｒａ（商標）バージョン７．０．１から一般的に得られる。
【００３９】
本明細書中で使用される場合、「ＤＭＳＯ」は、ジメチルスルホキシドを示し；「ＤＩＡＤ」は、ジイソプロピルジアゾジカルボン酸を示し；「ＡＤＤＰ」は、１，１’−（アゾジカルボニル）ジピペリジンを示し；「ＴＨＦ」は、テトラヒドロフランを示し；「ＤＭＦ」は、ジメチルホルムアミドを示し；「ＴＭＳＣＮ」は、シアン化トリメチルシリルを示し；「ＴＥＡ」または「Ｅｔ３Ｎ」は、トリエチルアミンを示し；「ＤＭＥ」は、１，２−ジメトキシエタンを示し；「ＡｃＯＥｔ」は、酢酸エチルを示し；「ｐｙｒ」は、ピリジンを示し；「ＭｓＣｌ」は、塩化メタンスルホニルを示し；「Ｅｔ２ＮＨ」は、ジエチルアミンを示し；「ＭｅＯＨ」は、メタノールを示し；「ＰｈＣＨ３」は、トルエンを示し；「ＰｈＨ」は、ベンゼンを示し；「ＰＢｕ３」は、トリブチルホスフィンを示し；「ＰＰｈ３」は、トリフェニルホスフィンを示し；「ｄｐｐｆ」は、１，１’−ビス（ジフェニルホスファニル）フェロセンを示し；「ＮａＯ−ｔ−Ｂｕ」は、ナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシドを示す。
【実施例】
【００４０】
【化２】
スキームＩにおいて、ピリジン中間体（５）および（６）の調製を記載する。スキーム１の工程１において、３−ブロモピリジン（１）を、３−ブロモ−ピリジン−Ｎ−オキシド（２）に酸化する。スキームＩの工程２において、シアン化物の添加は、３−ブロモ−ピリジン−２−カルボニトリル（３）を生じる。式（３）のニトリルをカルボン酸に加水分解し、式（４）のエステルに酸触媒作用によりエステル化する。スキームＩの工程４において、エステルは、水素化ホウ素ナトリウムを使用して式（５ａ）のピリジルメタノールに還元する。
【００４１】
Ｈａｌ＝Ｉの式（５ｂ）のピリジニルメタノールに、ピコリン酸（７）のジアニオンを形成し、その後ヨウ素での求電子的急冷によって３−ヨードピコリン酸（８）を得ることによって、スキームＩの工程５に示されるようにアクセスする。工程６において、式（８）の酸を、水素化ジイソブチルアルミニウムを使用して還元して、式（５ｂ）のピリジルメタノールを提供する。
【００４２】
スキームＩの工程７において、式（５ａ、ｂ）のアルコールを、塩化チオニルを使用して式（６ａ、ｂ）の塩化ピリジルメチルに合成する。
【００４３】
【化３】
スキームＩＩにおいて、重要な中間体（１３ａ、ｂ）を合成するための種々の方法を記載する。スキームＩＩの工程１において、５−フルオロ−３−ブロモ−フェノール（９）を保護して、式（１０）のメトキシメチル（ＭＯＭ）エーテルを得る。スキームＩＩの工程２において、式（１０）の保護されたブロモフェノールと１−ブチンとの間の薗頭カップリングは、式（１１）のアリールアルキンを提供する。反応を、ジエチルアミンまたはトリエチルアミンのいずれかで実行することができる。臭化アリールは、高温（７０℃）で結合し、ヨウ化アリールは、室温で結合する。フェノールを、スキームＩの工程３に示されるように、ＨＣｌ−アセトンを使用して脱保護して、式（１２）のフェノールを得る。あるいは、フェノールをＴＨＰエーテルとして保護し、メタノール中のｐ−トルエンスルホン酸ピリジニウム（ＰＰＴＳ）を使用して脱保護して、式（１２）のフェノールを得る。
【００４４】
スキームＩＩの工程４において、式（１２）のアルキニルフェノールと式（５）または（５ｂ）のピリジンメチルアルコールとの間の光延反応は、式（１３ａ、ｂ）のハロピリジルアリールアルキンを得る。他の好適な試薬は、ＤＩＡＤおよびＴＨＦ中のトリフェニルホスフィンを含む。あるいは、工程５において、式（１３ａ、ｂ）のハロピリジルアリールアルキンを、アセトニトリル中の炭酸カリウムを使用する、式（６ａ）または（６ｂ）の塩化ピリジンメチルでの式（１２）のフェノールのアルキル化によってアクセスする。
【００４５】
式（１３ａ）のブロモピリジルアリールアルキンへの別の経路を、工程６および７に示す。スキームＩＩの工程６において、５−フルオロ−２−ヨードフェノール（Ｍｏｒｉｃｅ，Ｃ．ら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．２００１，４２，６４９９−６５０２）を、光延反応において、式（５ａ）のピリジルメタノールと結合させて、式（１５）のヨードアリールエーテルを得る。スキームＩＩ、工程７において、ヨードアリールエーテルに１−ブチンとの薗頭カップリングを受けさせて、式（１３ａ）のハロピリジルアリールアルキンを得る。
【００４６】
【化４】
スキームＩＩＩの工程１および２において、式（１３ａ、ｂ）のハロピリジルアリールアルキンの白金触媒によるジボロン化は、希釈条件（約０．０１Ｍ）下での分子内Ｓｕｚｕｋｉカップリングの際に式（１７）のビニルボロン酸を形成する、式（１６ａ、ｂ）のジボロン酸を得る。ジボロン化が、Ｈａｌ＝Ｂｒである（１３ａ）について最適であることに注意するべきである。
【００４７】
スキームＩＩＩの工程３において、ビニルボロン酸（１７）と３−ヨードアニリンとの間の分子間Ｓｕｚｕｋｉカップリングは、式（１８）のアニリンベンゾピリジル−１０−オキセピンを提供する。工程４において、式（１８）のアニリンを、塩化メタンスルホニルでスルホニル化して、最終の式（１９）のベンゾピリジル−１０−オキセピンを得る。あるいは、スキームＩＩＩの工程５において、式（１９）のベンゾピリジル−１０−オキセピンを、Ｎ−（３−ヨード−フェニル）−メタンスルホンアミドでＳｕｚｕｋｉカップリングすることによって、直接的にアクセスする。
【００４８】
【化５】
スキームＩＶにおいて、式（１９）のベンゾピリジル−１０−オキセピンを得るためのさらに別の方法を示す。スキームＩＶの工程１において、３−ニトロベンゼンボロン酸での式（１３ａ、ｂ）のハロピリジルアリールアルキンの連続的分子内ＨｅｃｋおよびＳｕｚｕｋｉ反応を実行して、式（２０）のニトロフェニルベンゾピリジルオキセピンを得る。Ｈａｌ＝Ｉのときに、アリールアルキンへのボロン酸のゆっくりとした添加を行う場合に、収率を改善する。工程２〜３において、（１９）が式（２０）のニトロ類似物を還元して、式（２１）のアニリンを得、その後、スルホニル化することによって誘導されることが当業者によって認識されるだろう。
【００４９】
【化６】
スキームＶの工程１において、スキーム２の工程２と類似の様式で、式（５ａ）の２−ブロモピリジンと１ブチンとの間に薗頭カップリングが起こり、式（２２）のアルキニルピリジルメチルアルコールを得る。スキームＶの工程２において、式（２２）のピリジルメチルアルコールと式（１４）の５−フルオロ−２−ヨードフェノールとの間の光延反応は、式（２３）のピリジンを生じる。工程３において、分子内Ｈｅｃｋ反応、その後のＮ−［３−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−フェニル］−メタンスルホンアミドでのＳｕｚｕｋｉ交差カップリングは、式（２４）のベンゾピリジル−１１−オキセピンを提供し、それを、式（１９）のベンゾピリジル−１０−オキセピンに光異性化する。
【００５０】
【化７】
スキームＶＩの工程１において、式（２５）のラクトンを、式（２６）のハロフェノールのナトリウム塩と反応させて、式（２７）の酸を提供する。スキームＶＩの工程２において、Ｆｒｉｅｄｅｌ−Ｃｒａｆｔｓ反応を式（２７）の安息香酸で実行して、式（２８）のベンゾピリジルオキセピノンを得る。スキームＶＩの工程３において、式（２８）のケトンを、Ｗｉｔｔｉｇオレフィン化またはアルキルセリウム添加／脱水シーケンスを介して、幾何異性体の混合物として式（２９）のアルケニルベンゾピリジルオキセピンに変換する。工程４において、式（２９）のアルケニルベンゾピリジルオキセピンおよびその異性体を、ブロミンまたは４−（ジメチルアミノ）ピリジニウムトリブロミドのいずれかと反応させて、式（３０）および（３１）の幾何学的臭化ビニルを得る。臭化ビニルを、分離し、工程５および６に示されるように、典型的な条件下でＮ−［３−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−フェニル］−メタンスルホンアミドでのＳｕｚｕｋｉ交差カップリングを介して、各々のスルホンアミド（１９）または（２４）に変換する。式（２４）のスルホンアミドを、スキームＶＩの工程７において、式（１９）のベンゾピリジル−１０−オキセピンに光異性化する。
【００５１】
中間体１
１−ブロモ−４−フルオロ−２−メトキシメトキシ−ベンゼン
【化８】
２−ブロモ−５−フルオロフェノール（３０ｇ、０．１６ｍｏｌ）を、ジクロロメタン（１７０ｍＬ）中に溶解させ、０℃まで冷却する。この溶液に、注射器を介してジイソプロピルエチルアミン（３６ｍＬ、０．２０ｍｏｌ）を加え、その後、添加漏斗を介してクロロメチルメチルエーテル（１６ｍＬ、０．２０ｍｏｌ）を加える。溶液を撹拌し、室温まで温める。２時間後、混合物を飽和含水ＮＨ４Ｃｌ、水、および塩水で洗浄する。有機部分を、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮する。生じた残渣をフラッシュクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ（登録商標） Ｓｉ６５Ｍ、２０％ ＡｃＯＥｔ／ヘキサン）によって精製して、透明な無色の油として２６．１ｇ（７１％）の標題の化合物を得る。１Ｈ ＮＭＲ ４００ＭＨｚ（ＣＤＣｌ３）δ７．４６−７．５３（ｍ，１Ｈ），６．９２−６．９９（ｍ，１Ｈ），６．６３−６．７０（ｍ，１Ｈ），５．２６（ｓ，２Ｈ），３．５５（ｓ，３Ｈ）．
【００５２】
中間体２
１−ブタ−１−イニル−４−フルオロ−２−メトキシメトキシ−ベンゼン
【化９】
１−ブロモ−４−フルオロ−２−メトキシメトキシ−ベンゼン（７．６ｇ、３２ｍｍｏｌ）を、耐圧フラスコ（ｐｒｅｓｓｕｒｅ ｆｌａｓｋ）中に入れ、ジエチルアミン（６５ｍＬ）中に溶解させ、窒素で１５分間脱気する。過剰のブチンを、溶液を通してバブリングし、ＣｕＩ（１．９ｇ、１０ｍｍｏｌ）およびＰｄＣｌ２（ＰＰｈ３）２（２．３ｇ、３．３ｍｍｏｌ）を加え、フラスコを７０℃まで４４時間加熱する。混合物をエーテルで希釈し、次いで、飽和含水ＮＨ４Ｃｌおよび塩水で洗浄する。有機部分を、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。生じた残渣をフラッシュクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ（登録商標） Ｓｉ６５Ｍ、３％ ＴＨＦ／ヘキサン）によって精製して、橙色の固体として６．１２ｇ（９１％）の標題の化合物を得る。ＧＣＭＳ ｍ／ｅ ２０８ ［Ｍ］＋．
【００５３】
中間体３
２−ブタ−１−イニル−５−フルオロ−フェノール
【化１０】
１−ブタ−１−イニル−４−フルオロ−２−メトキシメトキシ−ベンゼン（６．１ｇ、２９ｍｍｏｌ）を、アセトン中の２５０ｍＬの濃塩酸の１０％溶液中に溶解させる。溶液を、室温で５時間撹拌する。反応物を、エーテルで希釈し、飽和含水ＮａＨＣＯ３および塩水で洗浄する。有機部分を、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。生じた残渣をフラッシュクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ（登録商標） Ｓｉ６５Ｍ、５％ ＡｃＯＥｔ／ヘキサン）によって精製して、橙色の油として３．５２ｇ（７３％）の標題の化合物を得る。ＧＣＭＳ ｍ／ｅ １６４［Ｍ］＋．
【００５４】
中間体４
３−ブロモ−ピリジン １−オキシド
【化１１】
メチルトリオキソレニウム（１００ｍｇ、０．４０１ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（４０ｍＬ）中に溶解させ、３−ブロモピリジン（１５．８ｇ、１００ｍｍｏｌ）を加え、その後、３０％含水Ｈ２Ｏ２（２２．７ｍＬ）を加える。二相性の混合物を室温で撹拌する。１８時間後、ＭｎＯ２（２５ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で２時間撹拌する。混合物をジクロロメタンで抽出し、合わせた抽出物を塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、橙色の油として９．５２ｇ（５５％）の標題の化合物を得る。ＧＣＭＳ ｍ／ｅ １７４ ［Ｍ−Ｈ］−．
【００５５】
中間体５
３−ブロモ−ピリジン−２−カルボニトリル
【化１２】
３−ブロモ−ピリジン １−オキシド（９．４ｇ、５４ｍｍｏｌ）を、アセトニトリル（６０ｍＬ）中に溶解させ、トリエチルアミン（１５ｍＬ）を加え、その後、シアン化トリメチルシリル（２１．７ｍＬ、１６３ｍｍｏｌ）を加える。混合物を１００℃まで加熱し、１６時間撹拌する。混合物を０℃に冷却し、２５０ｍＬの５Ｍ含水ＮａＯＨ中に注ぎ、ジクロロメタンで抽出する。合わせた抽出物を塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。生じた物質を、フラッシュクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ（登録商標） Ｓｉ６５Ｍ、２０％ ＡｃＯＥｔ／ヘキサン）を使用して精製して、黄色の固体として７．８ｇ（７９％）の標題の化合物を得る。ＧＣＭＳ ｍ／ｅ １８２ ［Ｍ−Ｈ］−．
【００５６】
中間体６
３−ブロモ−ピリジン−２−カルボン酸メチルエステル
【化１３】
３−ブロモ−ピリジン−２−カルボニトリル（１４．７ｇ、８０．３ｍｍｏｌ）を、濃ＨＣｌ（５０ｍＬ）中に溶解させ、１１０℃まで１８時間加熱する。混合物を０℃に冷却し、濾過して、少量のエーテルで洗い流し、減圧下でオーブンにおいて乾燥する。生じた褐色の固体を、メタノール（８０ｍＬ）中に溶解させ、濃Ｈ２ＳＯ４（６．６ｍＬ）を滴下して加え、溶液を９０℃まで１６時間加熱する。メタノールを減圧下で除去し、飽和含水重炭酸ナトリウムを加えて、基本ｐＨを得、混合物をＡｃＯＥｔで抽出する。合わせた抽出物を塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、白色の固体として１２．８ｇ（７４％）の標題の化合物を得る。ＧＣＭＳ ｍ／ｅ ２１５ ［Ｍ−Ｈ］−．
【００５７】
中間体７
（３−ブロモ−ピリジン−２−イル）−メタノール
【化１４】
３−ブロモ−ピリジン−２−カルボン酸メチルエステル（１２．８ｇ、５９．２ｍｍｏｌ）をメタノール（１５０ｍＬ）中に溶解させ、０℃まで冷却する。混合物に、ＮａＢＨ４（１１．２ｇ、２９６ｍｍｏｌ）を、１．０ｇずつ加える。混合物を室温まで温め、３時間撹拌する。メタノールを減圧下で除去し、ＡｃＯＥｔを加え、溶液を飽和した含水塩化アンモニウムおよび塩水で洗浄する。有機部分をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、白色の固体として６．８ｇ（６２％）の標題の化合物を得る。ＧＣＭＳ ｍ／ｅ １８７ ［Ｍ−Ｈ］−．
【００５８】
中間体８
３−ブロモ−２−（２−ブタ−１−イニル−５−フルオロ−フェノキシメチル）−ピリジン
【化１５】
ジクロロメタン（１６２ｍＬ）中の（３−ブロモ−ピリジン−２−イル）−メタノール（３．０９ｇ、１６．４３ｍｍｏｌ）、２−ブタ−１−イニル−５−フルオロ−フェノール（２．７０ｇ，１６．４３ｍｍｏｌ）、およびトリフェニルホスフィン（６．４６ｇ、２４．６４ｍｍｏｌ）の溶液を、−５℃〜０℃に冷却する。ジイソプロピルアゾジカルボン酸（ＤＩＡＤ）（４．８５ｍＬ、２４．６４ｍｍｏｌ）を１５分間にわたって滴下して加える。１時間後に、溶媒を蒸発させ、粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２；４％ヘキサン：ＡｃＯＥｔ）によって直接的に精製し、３．５ｇ（６４％）の標題の化合物を得る。ＬＣＭＳ ｍ／ｅ ３３４ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
【００５９】
中間体９
８−フルオロ−５−［１−（３−ニトロ−フェニル）−プロピリデン］−５，１１−ジヒドロ−１０−オキサ−１−アザ−ジベンゾ［ａ，ｄ］シクロヘプテン
【化１６】
Ｐｄ（ＯＡｃ）２（０．１８ｇ、５％）およびｏ−トリルホスフィン（０．３２ｇ、１．０５ｍｍｏｌ）を、４：１のジオキサン：水（１０１ｍＬ）中の３−ブロモ−２−（２−ブタ−１−イニル−５−フルオロ−フェノキシメチル）−ピリジン（３．５０ｇ、１０．５ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム（３．３９ｇ、３１．５ｍｍｏｌ）、および３−ニトロベンゼンボロン酸（２．２７ｇ、１３．６ｍｍｏｌ）の溶液に加える。窒素を、混合物を通して１５分間バブリングし、次いで、反応物を７５℃で一晩撹拌する。混合物を室温まで冷却し、固体をＣｅｌｉｔｅ（登録商標）を通して濾過する。水およびＡｃＯＥｔを加えて、相を静かに移す。水層をＡｃＯＥｔで抽出し、合わせた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮する。生じた残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、２０％ ＡｃＯＥｔ：ヘキサン）によって精製して、１．４９ｇ（３８％）の標題の化合物を提供する。ＬＣＭＳ ｍ／ｅ ３７７ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
【００６０】
中間体１０
３−［１−（８−フルオロ−１１Ｈ−１０ オキサ−１−アザ−ジベンゾ［ａ，ｄ］シクロヘプテン−５−イリデン）−プロピル］−フェニルアミン
【化１７】
８−フルオロ−５−［１−（３−ニトロ−フェニル）−プロピリデン］−５，１１−ジヒドロ−１０−オキサ−１−アザ−ジベンゾ［ａ，ｄ］シクロヘプテン（１．４９ｇ、３．９６ｍｍｏｌ）を、エタノール（２０ｍｌ）中に溶解させ、窒素でパージする。Ｐｄ／Ｃ（０．１５ｇ、１０％）を混合物に加え、１気圧の水素で２時間水素化する。混合物を窒素でパージし、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）を通して濾過し、固体をエタノールで洗浄する。濾液を減圧下で濃縮して、１．３７ｇ（９９％）の標題の化合物を得る。ＬＣＭＳ ｍ／ｅ ３４７ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
【００６１】
実施例１
Ｎ−｛３−［１−（８−フルオロ−１１Ｈ−１０−オキサ−１−アザ−ジベンゾ［ａ，ｄ］シクロヘプテン−５−イリデン）−プロピル］−フェニル｝−メタンスルホンアミド
【化１８】
塩化メタンスルホニル（０．３４ｍＬ、４．３６ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（１０ｍＬ）中の３−［１−（８−フルオロ−１１Ｈ−１０−オキサ−１−アザ−ジベンゾ［ａ，ｄ］シクロヘプテン−５−イリデン）−プロピル］−フェニルアミン（１．３７ｇ、３．９６ｍｍｏｌ）およびピリジン（０．３５ｍＬ、４．３６ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃で滴下して加える。２時間後に、７％含水重炭酸ナトリウム（２０ｍＬ）を加え、混合物を３０分間撹拌し、静かに移し、層を分離させる。水相をジクロロメタン（２×２０ｍＬ）で洗浄する。有機相を採取し、塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濾過および濃縮して、１．９８ｇの粗生成物を得る。物質を、Ｂｉｏｔａｇｅ（登録商標）を使用し、ヘキサン：エタノール（９：１）で溶出するフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、１．３５ｇ（８０％）の標題の化合物を提供する。ＬＣＭＳ ｍ／ｅ ４２５ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ステロイド性糖質コルチコイドに反応する炎症性疾患および免疫疾患の処置または予防のための治療薬、その薬剤を含む医薬組成物、患者において炎症性疾患および免疫疾患を処置または予防する方法、およびその治療薬の合成に有用な中間体およびプロセスに関する。
【背景技術】
【０００２】
天然に存在するステロイド性糖質コルチコイドならびに合成ステロイド性糖質コルチコイドは、慢性関節リウマチ、変形性関節症、リウマチ熱、喘息、アレルギー性鼻炎、全身性エリテマトーデス、慢性閉塞性肺疾患、クローン病、炎症性腸疾患、および潰瘍性大腸炎のような、急性および慢性の炎症性疾患および免疫疾患の処置のために、５０年間にわたって広く使用されてきた。しかしながら、糖質コルチコイドの使用は、骨量の減少／骨粗しょう症、高血糖症、糖尿病、高血圧症、緑内障、筋委縮、クッシング症候群、および精神病のような、重篤でときに不可逆性の副作用としばしば関連する。したがって、ステロイド性糖質コルチコイドの有益な効果を有するが、付随する副作用の可能性または発生率が低減された代替療法の必要性が残る。
【０００３】
糖質コルチコイドは、糖質コルチコイド受容体（ＧＲ）との複合体の形成後に、遺伝子転写を調節する。糖質コルチコイド結合の後に、ＧＲ−糖質コルチコイド複合体は、それが特定の遺伝子のプロモーター領域中の糖質コルチコイドホルモン応答要素（ＧＲＥ）に結合する細胞核へ移行する。ＧＲ−糖質コルチコイド／ＧＲＥ複合体は、次いで、次々に、近くに配置された遺伝子の転写を活性化（トランス活性化）または阻害する。あるいは、ＧＲ−糖質コルチコイド複合体は、ＤＮＡ結合を含まないプロセスによって遺伝子転写を負に調節し得る。この転写抑制と呼ばれるプロセスにおいて、ＧＲ−糖質コルチコイド複合体は核に進入し、（タンパク質間相互作用を介して）他の転写因子と直接的に相互作用し、それらの遺伝子転写およびそれによるタンパク質発現を誘導する能力を抑制する。
【０００４】
ステロイド性糖質コルチコイドに替わるものとして好適なＧＲリガンドの探索は、他の生理学的プロセスを調節する他のステロイドホルモン受容体、例えば、アンドロゲン受容体（ＡＲ）、鉱質コルチコイド受容体（ＭＲ）、およびプロゲステロン受容体（ＰＲ）が、ＧＲに相似するリガンド結合ドメインを有するという事実によって妨げられる。結果として、ＧＲリガンドは、これらの他の受容体との交差反応の可能性を有する。したがって、ステロイド性糖質コルチコイドに替わるものの所望される特性は、それが、他のステロイドホルモン受容体と比べてより大きな親和性でＧＲに結合することである。
【０００５】
最近の見識は、糖質コルチコイドの抗炎症効果がＤＮＡへのＧＲ結合の非存在下で維持されることができることを実証する。結果として、ＧＲタンパク質間相互作用（例えば、転写抑制）によって主に調節される糖質コルチコイド作用の機構は、抗炎症反応を誘導するのに十分であると考えられる。さらに、糖質コルチコイド療法の多くの副作用（例えば、高血糖症、糖尿病、緑内障、および筋委縮）は、今やＤＮＡへのＧＲ結合の後のトランス活性化機構によって主に介在されると考えられる。したがって、ＧＲ介在性転写抑制をＧＲ介在性トランス活性化と区別することができる薬剤が、特に望ましい。さらに、他のステロイドホルモン受容体の転写活性を調節する（すなわち、作用する、部分的に作用する、部分的に拮抗する、または拮抗する）限定された能力を示す薬剤もまた、特に望ましい。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
他のステロイドホルモン受容体に比べてより大きな親和性でＧＲに結合する薬剤を提供することが、本発明の目的である。より具体的には、ＡＲ、ＭＲ、およびＲＰに比べて１０倍より大きな親和性でＧＲに結合する薬剤を提供することが目的である。糖質コルチコイド療法に関連する副作用を含む傾向に比べて、強力な抗炎症特性を持つ薬剤を提供することが、本発明のさらなる目的である。より具体的には、骨量の減少または骨粗しょう症を含む傾向に比べて、強力な抗炎症特性を持つ薬剤を提供することが目的である。他のステロイドホルモン受容体である、ＡＲ、ＭＲ、およびＰＲの活性を調節する限定された能力を示す薬剤を提供することまた、本発明のさらなる目的である。
【０００７】
ＧＲ調節因子は、当該分野において公知である。例えば、ＷＯ ０４／０５２８４７は、鉱質コルチコイド受容体または糖質コルチコイド受容体の調節の影響を受けやすい疾患を処置するのに有用な一種の三環式ステロイドホルモン受容体調節因子を開示する。驚くべきことに、ＷＯ ０４／０５２８４７の範囲内から化合物を選択することによって（本明細書中以下では化合物（Ｉ）として提供される）、ステロイド性糖質コルチコイドに反応する炎症性疾患および免疫疾患の処置に特に有用であることを示唆する予想外の活性プロフィールを持つ新規の治療薬が特定されたことが見出された。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
したがって、本発明は、化合物（Ｉ）：
【化１】
（（Ｅ）−Ｎ−｛３−［１−（８−フルオロ−１１Ｈ−１０−オキサ−１−アザ−ジベンゾ［ａ，ｄ］シクロヘプテン−５−イリデン）−プロピル］−フェニル｝−メタンスルホンアミド）または、その薬学的に許容され得る塩を提供する。
【０００９】
別の実施形態において、本発明は、炎症性疾患または免疫疾患、特に慢性関節リウマチを処置または予防する方法であって、それを必要とする患者に、有効量の化合物（Ｉ）またはその薬学的に許容され得る塩を投与することを含む方法を提供する。さらに、本発明は、治療における使用のための、化合物（Ｉ）またはその薬学的に許容され得る塩を提供する。本発明はまた、炎症性疾患または免疫疾患、特に慢性関節リウマチの処置または予防における使用のための、化合物（Ｉ）またはその薬学的に許容され得る塩も提供する。
【００１０】
別の実施形態において、本発明は、炎症性疾患または免疫疾患、特に慢性関節リウマチを処置するための医薬品の製造のための、化合物（Ｉ）またはその薬学的に許容され得る塩の使用を提供する。
【００１１】
別の実施形態において、本発明は、１種以上の薬学的に許容され得るキャリア、賦形剤、または希釈剤と組み合わせて、化合物（Ｉ）またはその薬学的に許容され得る塩を含む医薬組成物を提供する。好ましい実施形態として、本発明は、１種以上の薬学的に許容され得るキャリア、賦形剤、または希釈剤と組み合わせて、化合物（Ｉ）またはその薬学的に許容され得る塩を含む、慢性関節リウマチの処置または予防のための医薬組成物を提供する。さらに、本発明はまた、化合物（Ｉ）の合成のための新規な中間体およびプロセスも提供する。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明は、ステロイド性糖質コルチコイドに反応する炎症性疾患および免疫疾患の処置または予防のための、化合物（Ｉ）の使用を提供する。そのような疾患は、例えば、慢性関節リウマチ、変形性関節症、リウマチ熱、喘息、アレルギー性鼻炎、全身性エリテマトーデス、慢性閉塞性肺疾患、クローン病、炎症性腸疾患、および潰瘍性大腸炎を含む。化合物（Ｉ）が有用な特定の疾患は、慢性関節リウマチである。慢性関節リウマチ（ＲＡ）は、３０歳〜５０歳の典型的な年齢で開始する、持続性の滑膜関節組織の炎症によって特徴づけられる慢性疾患である。ＲＡは、男性に比べて女性がその疾患を発症する可能性が２倍である、最も一般的な炎症性関節炎の形態である。
【００１３】
炎症性疾患および免疫疾患の処置または予防のための化合物（Ｉ）の使用はまた、糖質コルチコイド療法と典型的に関連する副作用の低減された傾向、可能性、または発生率と関連するとも考えられる。糖質コルチコイド療法の１つのそのような副作用は、骨量の減少／骨粗しょう症または糖質コルチコイド誘導性骨粗しょう症（ＧＩＯＰ）である。ＧＩＯＰは、薬物誘導性骨粗しょう症の最も一般的な原因であり、慢性の（すなわち、６カ月以上続く）糖質コルチコイド療法を受けている患者の最大５０％に発生すると報告されている。特に、化合物（Ｉ）の使用は、骨量の減少または骨粗しょう症の低減された傾向、可能性、または発生率と関連すると考えられる。
【００１４】
他のように定義されない限り、本発明は、化合物（Ｉ）の薬学的に許容され得る塩、ならびに化合物（Ｉ）の遊離塩基の溶媒和物およびその薬学的に許容され得る塩を含む。しかしながら、化合物（Ｉ）の遊離塩基が好ましい。本明細書で使用される用語「薬学的に許容され得る塩」は、生物に対して実質的に非毒性である化合物（Ｉ）の塩を示す。薬学的に許容され得る塩およびそれらの調製方法の例は、当該分野において確立されている。例えば、Ｓｔａｈｌら、「Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｕｓｅ」，ＶＣＨＡ／Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，（２００２）；Ｇｏｕｌｄ，Ｐ．Ｌ．，「Ｓａｌｔ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｆｏｒ ｂａｓｉｃ ｄｒｕｇｓ」，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，３３：２０１−２１７（１９８６）；およびＢａｓｔｉｎら、「Ｓａｌｔ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ ｆｏｒ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｎｅｗ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｎｔｉｔｉｅｓ」，Ｏｒｇａｎｉｃ Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，４：４２７−４３５（２０００）を参照のこと。
【００１５】
本明細書中で使用される用語「患者」は、イヌ、ネコ、ウシ、サル、ウマ、またはヒツジのようなヒトまたは非ヒト哺乳動物を示す。より具体的には、用語「患者」は、ヒトを示す。本明細書中で使用される用語「処置すること」（あるいは「処置する」または「処置」）は、既存の症状または疾患の進行または重篤度を、妨げること、予防すること、抑えること、遅滞させること、停止させること、または逆転させることを含む。本明細書中で使用される用語「予防すること」（あるいは「予防する」または「予防」）は、症状または疾患の発生または出現を、妨げること、抑えること、または阻害することを示す。
【００１６】
化合物（Ｉ）またはその薬学的に許容され得る塩は、医薬組成物の一部としての投与のために配合され得る。そのようなものとして、１種以上の薬学的に許容され得るキャリア、賦形剤、または希釈剤と組み合わせて、化合物（Ｉ）またはその薬学的に許容され得る塩を含む医薬組成物は、本発明の重要な実施形態である。医薬組成物およびそれらの調製方法の例は、当該分野において周知である。例えば、ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ：ＴＨＥ ＳＣＩＥＮＣＥ ＡＮＤ ＰＲＡＣＴＩＣＥ ＯＦ ＰＨＡＲＭＡＣＹ，Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏら編、第１９版、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ（１９９５）を参照のこと。化合物（Ｉ）を含む例示的な組成物は、例えば、１％カルボキシメチルセルロースナトリウム、０．２５％ポリソルベート８０、および０．０５％ Ａｎｔｉｆｏａｍ １５１０（商標）（Ｄｏｗ Ｃｏｒｎｉｎｇ）と共に浮遊する化合物（Ｉ）；および０．０１Ｎ ＨＣｌ中の０．５％メチルセルロース、１％ラウリル硫酸ナトリウム、および０．１％ Ａｎｔｉｆｏａｍ １５１０と共に浮遊する化合物（Ｉ）を含む。本発明の好ましい組成物は、カプセルまたは錠剤中に配合された化合物（Ｉ）またはその薬学的に許容され得る塩を含む。
【００１７】
化合物（Ｉ）または化合物（Ｉ）を含む組成物は、経口経路または非経口経路を含む、化合物（Ｉ）を生物学的に利用可能にするいかなる経路によっても投与されることができる。例えば、化合物（Ｉ）、または化合物（Ｉ）を含む組成物は、経口投与、皮下投与、筋肉内投与、静脈内投与、経皮投与、鼻内投与、直腸投与、口腔投与などされることができる。あるいは、化合物は、持続注入によって投与され得る。しかしながら、経口投与が好ましい投与の経路であることが理解される。
【００１８】
本明細書で使用される用語「有効量」は、患者への単回または複数回の投薬の際に、診断または処置下の患者に所望の効果を提供する、化合物（Ｉ）の量または投薬量を示す。有効量は、当業者として、哺乳動物の種；その大きさ、年齢、および一般的健康；関連する特定の疾患；疾患の度合いまたは重篤度；個々の患者の反応；投与された特定の化合物；投与の様式；投与された調製物の生物学的利用能特性；選択された投薬養生法；ならびに何らかの併用薬の使用のような多くの因子を考慮することにより、担当の診断医によって容易に決定されることができる。
【００１９】
生物学的活性
本明細書中で使用される場合、「Ｋｄ」は、リガンド−受容体複合体についての平衡解離定数を示し；「Ｋｉ」は、薬物−受容体複合体についての平衡解離定数を示し、かつ、平衡状態で結合部位の半数に結合する薬物の濃度の指標であり；「ＩＣ５０」は、薬剤について考えられうる最大阻害応答の５０％を生じる薬剤の濃度、あるいは、受容体へのリガンド結合の５０％変位を生じる薬剤の濃度を示し；「ＥＣ５０」は、薬剤について考えられうる最大応答の５０％を生じる薬剤の濃度を示し；そして「ＥＤ５０」は、薬剤についての最大応答の５０％を生じる、投与された治療剤の投薬量を示す。
【００２０】
核ホルモン受容体結合アッセイ：
ヒトＧＲ（糖質コルチコイド受容体）、ＡＲ（アンドロゲン受容体）、ＭＲ（鉱質コルチコイド受容体）、またはＰＲ（プロゲステロン受容体）を過剰発現するヒト胎児腎臓ＨＥＫ２９３細胞からの細胞溶解物を、Ｋｉ値を決定するための受容体−リガンド競合結合アッセイのために使用する。
【００２１】
簡単に言うと、ステロイド受容体競合結合アッセイを、２０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ緩衝液（ｐＨ＝７．６）、０．２ｍＭ ＥＤＴＡ、７５ｍＭ ＮａＣｌ、１．５ｍＭ ＭｇＣｌ２、２０％グリセロール、２０ｍＭモリブデン酸ナトリウム、０．２ｍＭ ＤＴＴ（ジチオスレイトール）、２０μｇ／ｍＬアプロチニン、および２０μｇ／ｍＬロイペプチンを含有する緩衝液中で行う。典型的には、ステロイド受容体結合アッセイは、１ウェル毎に、放射線標識されたリガンド（例えば、ＧＲ結合について０．３ｎＭ［３Ｈ］−デキサメタゾン、ＡＲ結合について０．３６ｎＭ［３Ｈ］−メチルトリエノロン、ＭＲ結合について０．２５ｎＭ［３Ｈ］−アルドステロン、およびＰＲ結合について０．２９ｎＭ［３Ｈ］−メチルトリエノロン）、および２０μｇ ２９３−ＧＲ溶解物、２２μｇ ２９３−ＡＲ溶解物、２０μｇ ２９３−ＭＲ溶解物、または４０μｇ ２９３−ＰＲ溶解物のいずれかを含む。アッセイは、典型的には９６ウェル形式で行う。競合する試験化合物を、約０．０１ｎＭ〜１０μＭの範囲の種々の濃度で添加する。非特異的結合を、ＧＲ結合について５００ｎＭデキサメタゾン、ＭＲ結合について５００ｎＭアルドステロン、またはＡＲおよびＰＲ結合について５００ｎＭメチルトリエノロンの存在下で決定する。結合反応物（１４０μＬ）を、４℃で一晩インキュベートし、次いで、７０μｌの冷チャコールデキストラン緩衝液（５０ｍｌのアッセイ緩衝液毎に０．７５ｇの炭と０．２５ｇのデキストランを含有する）を、各反応物に添加する。プレートを、４℃で、オービタルシェーカー上で８分間混合する。プレートを、次いで、１０分間４℃で、３，０００ｒｐｍで遠心分離する。結合反応混合物の１２０μｌのアリコートを、次いで、別の９６ウェルプレートに移し、１７５μｌのＷａｌｌａｃ Ｏｐｔｉｐｈａｓｅ Ｈｉｓａｆｅ ３（商標）シンチレーション液を各ウェルに添加する。プレートを密封し、オービタルシェーカー上で激しく撹拌する。２時間のインキュベーション後、プレートを、Ｗａｌｌａｃ Ｍｉｃｒｏｂｅｔａ計数器で読み取る。
【００２２】
データを、推定ＩＣ５０および１０μＭでの阻害率を計算するために使用する。ＧＲ結合についての［３Ｈ］−デキサメタゾン、ＡＲ結合についての［３Ｈ］−メチルトリエノロン、ＭＲ結合についての［３Ｈ］−アルドステロン、またはＰＲ結合についての［３Ｈ］−メチルトリエノロンに対するＫｄを、飽和結合によって決定する。化合物に対するＩＣ５０値を、Ｃｈｅｎｇ−Ｐｒｕｓｏｆｆ方程式を使用してＫｉに変換する。
【００２３】
上記に記載されるプロトコールと類似の結合アッセイプロトコールは、当業者によって容易に設計されることができる。本質的に上記に記載される手順にしたがって、化合物（Ｉ）は、約０．２ｎＭのＧＲ結合アッセイにおけるＫｉ；約６．７ｎＭのＡＲ結合アッセイにおけるＫｉ；約９．２ｎＭのＭＲ結合アッセイにおけるＫｉ；および約３２ｎＭのＰＲ結合アッセイにおけるＫｉを示す（値は、ｎ＝７の実験の平均値として報告される）。したがって、化合物（Ｉ）は、ヒトＧＲの強力なリガンドであり、さらに、ヒトＭＲ、ＡＲ、およびＰＲの各々と比べて約１５倍以上の親和性でＧＲに結合する。
【００２４】
本発明の化合物がステロイドホルモン受容体の活性を調節する（すなわち、作用する、部分的に作用する、部分的に拮抗する、または拮抗する、のいずれか）能力を実証するために、核受容体タンパク質およびホルモン応答エレメント−受容体遺伝子構築物で一時的にトランスフェクトされた細胞における標的遺伝子発現の機能的調節を検出するバイオアッセイを実施する。機能アッセイにおいて利用される溶媒、試薬、およびリガンドは、商業的供給源から容易に利用可能であり、または、当業者によって調製されることができる。
【００２５】
核ホルモン受容体機能調節アッセイ：
ヒト胎児腎臓ＨＥＫ２９３細胞を、Ｆｕｇｅｎｅ（商標）トランスフェクション試薬を使用して、ステロイドホルモン受容体およびレポーター遺伝子プラスミドでトランスフェクトする。簡単に言うと、ルシフェラーゼレポーターｃＤＮＡの上流のプロバシン（ｐｒｏｂａｓｉｎ）ＡＲＥおよびＴＫ（チミジンキナーゼ）プロモーターの２つのコピーを含有するレポータープラスミドを、ウイルス性ＣＭＶ（サイトメガロウイルス）プロモーターを使用して、ヒトアンドロゲン受容体（ＡＲ）を構成的に発現するプラスミドと共にＨＥＫ２９３細胞中にトランスフェクトする。ルシフェラーゼレポーターｃＤＮＡの上流のＧＲＥおよびＴＫプロモーターの２つのコピーを含有するレポータープラスミドを、ウイルス性ＣＭＶプロモーターを使用して、ヒト糖質コルチコイド受容体（ＧＲ）、ヒト鉱質コルチコイド受容体（ＭＲ）、またはヒトプロゲステロン受容体（ＰＲ）のいずれかを構成的に発現するプラスミドと共にトランスフェクトする。細胞を、Ｔ１５０ｃｍフラスコにおいて５％活性炭処理済（ｃｈａｒｃｏａｌ−ｓｔｒｉｐｐｅｄ）ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を有するＤｕｌｂｅｃｃｏの改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）中でトランスフェクトする。一晩のインキュベーション後、トランスフェクトされた細胞をトリプシン処理し、９６ウェル皿において５％活性炭処理済ＦＢＳを含有するＤＭＥＭ培地中に平板培養し、４時間インキュベートし、次いで、約０．０１ｎＭ〜１０μＭの範囲の種々の濃度の試験化合物に曝露する。アッセイのためのアンタゴニスト様式において、各々の受容体に対して低濃度のアゴニストを培地に添加する（ＧＲについて０．２５ｎＭ デキサメタゾン、ＡＲについて０．３ｎＭのメチルトリエノロン、ＰＲについて０．０５ｎＭのプロメゲストン、およびＭＲについて０．０５ｎＭアルドステロン）。試験化合物との２４時間のインキュベーション後、細胞を溶解させ、標準的な技術を使用してルシフェラーゼ活性を決定する。
【００２６】
データを、ＥＣ５０値を決定するために４パラメータフィットのロジスティック曲線に当てはめる。有効性率（飽和最大応答を有する化合物）または最大刺激率（飽和していない最大応答を有する化合物）を、以下の参照アゴニストで得られた最大刺激と比較して決定する：ＡＲアッセイについて１００ｎＭメチルトリエノロン、ＰＲアッセイについて３０ｎＭプロメゲストン、ＭＲアッセイについて３０ｎＭアルドステロン、およびＧＲアッセイについて１００ｎＭデキサメタゾン。ＩＣ５０値を、アンタゴニスト様式アッセイのデータを使用して同様に決定することができる。阻害率もまた、上記に記載されるように、アゴニスト単独の存在下での応答と比べて決定され得る。
【００２７】
本質的に上記に記載される手順に従って、化合物（Ｉ）は、転写活性化において以下のプロフィールを示した：ＧＲについて、約１．８ｎＭのＥＣ５０を有する約４４％の有効性；ＡＲについて、１０μＭより大きいＥＣ５０を有する約４．４％の有効性；ＭＲについて、１０μＭより大きいＥＣ５０を有する約１１％の有効性；およびＰＲについて、１０μＭより大きいＥＣ５０を有する約５４％の有効性（値は、ｎ＝４または５の実験の平均値として報告される）。
【００２８】
糖質コルチコイド受容体介在性転写抑制アッセイ
１．ヒト皮膚線維芽細胞ＣＣＤ−３９ＳＫ細胞におけるＩＬ−１β刺激性ＩＬ−６生成：
簡単に言うと、ＡＴＣＣから得られたヒト皮膚線維芽細胞ＣＣＤ−３９ＳＫ細胞（２０，０００細胞／ウェル）を、１０％ ＦＢＳ、１００Ｕ／ｍｌペニシリン、１００ｕｇ／ｍｌストレプトマイシン、および２ｍｍｏｌ／Ｌ Ｌ−グルタミンが補充された血清不含成長培地において９６ウェルプレートに播種する。細胞を、３７℃、５％ ＣＯ２で加湿されたチャンバにおいて維持する。試験化合物を、約４．６５ｐＭ〜４．６４μＭの最終濃度の範囲の種々の濃度でウェルに加える。０．１μＭのデキサメタゾンを、陽性コントロールとして使用する。試験化合物での処理の１時間後に、ＩＬ−１βを、１ｎｇ／ｍｌの最終濃度で加え；反応混合物を一晩インキュベートする。１０μｌの上清を各ウェルから取り出し、４５０ｎｍでの吸光度を読み取ることによってＩＬ−６濃度が定量化されるＥＬＩＳＡキットを使用して、ＩＬ−６の濃度を決定する。
【００２９】
２．ＰＭＡ分化性Ｕ９３７細胞におけるＬＰＳ刺激性ＴＮＦ−α生成：
ＡＴＣＣから得られたヒトＵ９３７プレ単球細胞を、１０％ＦＢＳを含有する完全ＲＰＭＩ １６４０培地において増殖させる。単球を、接着性のマクロファージに分化させ、Ｕ９３７細胞をカルシウム、マグネシウム不含中で洗浄し、２０ｎＭホルボール １２−ミリスチン酸−１３−酢酸（ＰＭＡ）を含有する新しいＲＰＭＩ培地に一晩再懸濁させる。分化の後、試験化合物を、９６ウェルプレート中の細胞に、約４．６５ｐＭ〜４．６４μＭの範囲の種々の濃度で加える。試験化合物での処理の１時間後に、ＬＰＳを、１００ｎｇ／ｍｌの最終濃度で加え、反応混合物を一晩インキュベートする。２５μｌの細胞不含上清を各ウェルから別の９６ウェルプレートに移し、ＴＮＦ−α生成を、４５０ｎｍでの吸光度を読み取ることによってＴＮＦ−αが定量化されるＥＬＩＳＡキットを使用して測定する。
【００３０】
本質的に上記で記載される手順に従って、化合物（Ｉ）は、それぞれ約８．５ｎＭおよび２１ｎＭのＩＣ５０値で、約９０％またはそれより大きいＩＬ−６およびＴＮＦ−αの内因性発現の最大阻害を誘導する（値は、ｎ＝１５の実験（ＩＬ−６アッセイ）およびｎ＝４の実験（ＴＮＦ−αアッセイ）の平均値として報告される）。
【００３１】
したがって、化合物（Ｉ）は、炎症性タンパク質ＩＬ−６およびＴＮＦαの内因性生成の強力かつ完全な（約９０％またはそれより大きい最大阻害の）転写抑制因子である。さらに、化合物（Ｉ）は、ＧＲ／ＧＲＥ介在性遺伝子転写の誘導において（約５０％またはそれより小さい最大有効率の）部分的なアゴニスト活性のみを示す。したがって、化合物（Ｉ）は、完全なＧＲ介在性転写抑制を誘導し、さらにＧＲ／ＧＲＥ介在性トランス活性化を部分的にのみ誘導することによって、分化したプロフィールを示す。さらに、他のステロイド受容体の機能調節に対する効果を試験するアッセイにおいて、化合物（Ｉ）は、ＡＲ、ＭＲ、およびＰＲによって介在される遺伝子発現の活性化において限られた活性のみを示す。
【００３２】
動物モデル：
１．カラゲニン誘導性足浮腫（ＣＰＥ）モデル
カラゲニン類は、多糖類の１つのグループであり、それは、動物において急性の炎症反応を誘導することができる。浮腫、痛覚過敏、および紅斑を含む炎症の主要な兆候は、注射の直後に、注射部位において発症する。ＣＰＥモデルは、炎症の広く認められているモデルであり、糖質コルチコイド受容体リガンドの抗炎症効果を評価するために使用されることができる。
【００３３】
化合物（Ｉ）の抗炎症効果を評価するために、化合物を、０．５％カルボキシメチルセルロース、および０．２５％ Ｔｗｅｅｎ ８０を含む賦形剤中に配合し、次いで、雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（１８０ｇ〜２００ｇ）に強制栄養法を介して経口的に投与する。比較のために、プレドニゾロンを、同じ賦形剤において経口的に投与し得る。２時間後、５０μｌの０．９％発熱物質不含生理食塩水中の１％カラゲニンを、右後肢の足底下（ｓｕｂｐｌａｎｔａｒ）領域中に注射する。ラットをカラゲニン注射の３時間後に、ＣＯ２によって麻酔する。肢を除去し、次いで、微量天秤を使用して重さを量る。肢を、次いで、肢表面にいくつかの切り込みを作成し、すぐに、凍結するまで液体窒素中に漬けることによって解剖する。凍結した肢を、次いで、遠心分離して滲出物を抽出する。炎症反応の間に生成されたサイトカインであるＩＬ−１β滲出レベルを、次いで、メーカーの使用説明書に従ってＥＬＩＳＡによって測定する。全肢タンパク質もまた、タンパク質アッセイキットを使用して測定し、ＩＬ−１βの絶対レベルを、全タンパク質の１ｍｇあたりのＩＬ−１βのｎｇ濃度値を出すために正規化する。
【００３４】
化合物（Ｉ）は、カラゲニン誘導性肢重量の増加を、約２．８ｍｇ／ｋｇのＥＤ５０で阻害した。化合物（Ｉ）はまた、ＩＬ−１βの肢滲出レベルを、約３．２ｍｇ／ｋｇのＥＤ５０で低減させた。逆に、このモデルにおけるプレドニゾロン処理は、肢重量の増加を、約６．６ｍｇ／ｋｇのＥＤ５０で阻害し、ＩＬ−１βレベルを、約１ｍｇ／ｋｇ未満のＥＤ５０で（５個体の測定の平均を表すＥＤ５０値で）低減させた。
【００３５】
２．血清オステオカルシンアッセイ
骨量の減少／骨粗しょう症、および結果として生じる骨折の危険性の増加は、糖質コルチコイド療法から生じる一般的かつ顕著な悪影響である。糖質コルチコイド誘導性骨粗しょう症は、少なくとも部分的に、骨形成の阻害から生じると考えられる。骨合成の生物学的マーカーである血清オステオカルシンの測定は、骨に対する糖質コルチコイド療法の悪影響を評価するための広く認められるツールである。
【００３６】
骨形成に対する化合物（Ｉ）の効果を評価するために、化合物（Ｉ）を、５％カルボキシメチルセルロースおよび０．２５％ Ｔｗｅｅｎ ８０を含む賦形剤中に配合し、１６週齢の雄性Ｓｗｉｓｓ−Ｗｅｂｓｔｅｒマウス（Ｈａｒｌａｎ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ）に７日間、強制栄養法を介して経口的に投与する。比較のために、プレドニゾロンを、同じ賦形剤において経口的に投与する。血清を、最後の投薬から２４時間後に採取し、オステオカルシンレベルを、９６ウェル形式に変更した競合的放射免疫測定を使用して決定する。簡単に言うと、２．５μｌマウス血清、２．５μｌヤギ抗マウスオステオカルシン、０．６２５μｌ正常ヤギ血清、および１１９．３７５μｌ ＲＩＡ 緩衝液（０．１２２５Ｍ ＮａＣｌ、０．０１Ｍ ＮａＨ２ＰＯ４、ｐＨ ７．４、０．０２５ＭテトラナトリウムＥＤＴＡ、０．１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ、および０．１％（ｗ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ−２０）を含有するＭｕｌｔｉｓｃｒｅｅｎ（商標）プレートの各ウェルを、８０ｒｐｍのオービタルシェーカー上で、１８時間４℃でインキュベートする。２５μｌ ＲＩＡ緩衝液中の０．２μＣｉ／ｍｌ［１２５Ｉ］マウスオステオカルシンの各ウェルへの添加後に、プレートを、８０ｒｐｍのオービタルシェーカー上で、４℃で２４時間インキュベートする。複合体を、ウェルあたり１２５μｌの０．２Ｍ Ｎａ２ＨＰＯ４、ｐＨ ７．４、５％（ｗ／ｖ）ポリエチレングリコール中のロバ抗ヤギＩｇＧ（１：３０）の添加により、２５℃で２時間沈降させる。沈殿物を、真空濾過によって採取し、１００μｌ／ウェルｄＨ２Ｏで１回洗浄する。濾過材に穴をあけ、放射能をγカウンターで定量化する。試験サンプルからの濾過材上で検出される放射能は、血清オステオカルシン濃度に反比例する。精製されたマウスオステオカルシンの標準曲線を使用して、試験サンプル中の血清オステオカルシン濃度を計算する。
【００３７】
ラットＣＰＥモデルにおいて決定されたＥＤ５０値に近似する１日投与量（化合物（Ｉ）については３ｍｇ／Ｋｇ／日、およびプレドニゾロンについては１０ｍｇ／Ｋｇ／日）で比較すると、化合物（Ｉ）は、プレドニゾロンよりも、血清オステオカルシンレベルを低減させなかった。
【００３８】
化合物（Ｉ）を調製するための方法は、当該分野において公知である。例えば、ＷＯ ０４／０５２８４７は、利用され得る一般的手順を提供する。さらに、ＷＯ ０５／０６６１６１は、利用され得るさらなる一般的手順を提供する。以下のスキーム、中間体、および実施例は、本発明をさらに説明し、化合物（Ｉ）の典型的な合成を表す。試薬および出発物質は、当業者に容易に利用可能であり、または当業者によって容易に合成され得る。例として記載されるスキーム、中間体、および実施例が限定されていないこと、および当業者によって変更がなされ得ることは理解されるべきである。本発明の化合物の名前は、ＣｈｅｍＤｒａｗ Ｕｌｔｒａ（商標）バージョン７．０．１から一般的に得られる。
【００３９】
本明細書中で使用される場合、「ＤＭＳＯ」は、ジメチルスルホキシドを示し；「ＤＩＡＤ」は、ジイソプロピルジアゾジカルボン酸を示し；「ＡＤＤＰ」は、１，１’−（アゾジカルボニル）ジピペリジンを示し；「ＴＨＦ」は、テトラヒドロフランを示し；「ＤＭＦ」は、ジメチルホルムアミドを示し；「ＴＭＳＣＮ」は、シアン化トリメチルシリルを示し；「ＴＥＡ」または「Ｅｔ３Ｎ」は、トリエチルアミンを示し；「ＤＭＥ」は、１，２−ジメトキシエタンを示し；「ＡｃＯＥｔ」は、酢酸エチルを示し；「ｐｙｒ」は、ピリジンを示し；「ＭｓＣｌ」は、塩化メタンスルホニルを示し；「Ｅｔ２ＮＨ」は、ジエチルアミンを示し；「ＭｅＯＨ」は、メタノールを示し；「ＰｈＣＨ３」は、トルエンを示し；「ＰｈＨ」は、ベンゼンを示し；「ＰＢｕ３」は、トリブチルホスフィンを示し；「ＰＰｈ３」は、トリフェニルホスフィンを示し；「ｄｐｐｆ」は、１，１’−ビス（ジフェニルホスファニル）フェロセンを示し；「ＮａＯ−ｔ−Ｂｕ」は、ナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシドを示す。
【実施例】
【００４０】
【化２】
スキームＩにおいて、ピリジン中間体（５）および（６）の調製を記載する。スキーム１の工程１において、３−ブロモピリジン（１）を、３−ブロモ−ピリジン−Ｎ−オキシド（２）に酸化する。スキームＩの工程２において、シアン化物の添加は、３−ブロモ−ピリジン−２−カルボニトリル（３）を生じる。式（３）のニトリルをカルボン酸に加水分解し、式（４）のエステルに酸触媒作用によりエステル化する。スキームＩの工程４において、エステルは、水素化ホウ素ナトリウムを使用して式（５ａ）のピリジルメタノールに還元する。
【００４１】
Ｈａｌ＝Ｉの式（５ｂ）のピリジニルメタノールに、ピコリン酸（７）のジアニオンを形成し、その後ヨウ素での求電子的急冷によって３−ヨードピコリン酸（８）を得ることによって、スキームＩの工程５に示されるようにアクセスする。工程６において、式（８）の酸を、水素化ジイソブチルアルミニウムを使用して還元して、式（５ｂ）のピリジルメタノールを提供する。
【００４２】
スキームＩの工程７において、式（５ａ、ｂ）のアルコールを、塩化チオニルを使用して式（６ａ、ｂ）の塩化ピリジルメチルに合成する。
【００４３】
【化３】
スキームＩＩにおいて、重要な中間体（１３ａ、ｂ）を合成するための種々の方法を記載する。スキームＩＩの工程１において、５−フルオロ−３−ブロモ−フェノール（９）を保護して、式（１０）のメトキシメチル（ＭＯＭ）エーテルを得る。スキームＩＩの工程２において、式（１０）の保護されたブロモフェノールと１−ブチンとの間の薗頭カップリングは、式（１１）のアリールアルキンを提供する。反応を、ジエチルアミンまたはトリエチルアミンのいずれかで実行することができる。臭化アリールは、高温（７０℃）で結合し、ヨウ化アリールは、室温で結合する。フェノールを、スキームＩの工程３に示されるように、ＨＣｌ−アセトンを使用して脱保護して、式（１２）のフェノールを得る。あるいは、フェノールをＴＨＰエーテルとして保護し、メタノール中のｐ−トルエンスルホン酸ピリジニウム（ＰＰＴＳ）を使用して脱保護して、式（１２）のフェノールを得る。
【００４４】
スキームＩＩの工程４において、式（１２）のアルキニルフェノールと式（５）または（５ｂ）のピリジンメチルアルコールとの間の光延反応は、式（１３ａ、ｂ）のハロピリジルアリールアルキンを得る。他の好適な試薬は、ＤＩＡＤおよびＴＨＦ中のトリフェニルホスフィンを含む。あるいは、工程５において、式（１３ａ、ｂ）のハロピリジルアリールアルキンを、アセトニトリル中の炭酸カリウムを使用する、式（６ａ）または（６ｂ）の塩化ピリジンメチルでの式（１２）のフェノールのアルキル化によってアクセスする。
【００４５】
式（１３ａ）のブロモピリジルアリールアルキンへの別の経路を、工程６および７に示す。スキームＩＩの工程６において、５−フルオロ−２−ヨードフェノール（Ｍｏｒｉｃｅ，Ｃ．ら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．２００１，４２，６４９９−６５０２）を、光延反応において、式（５ａ）のピリジルメタノールと結合させて、式（１５）のヨードアリールエーテルを得る。スキームＩＩ、工程７において、ヨードアリールエーテルに１−ブチンとの薗頭カップリングを受けさせて、式（１３ａ）のハロピリジルアリールアルキンを得る。
【００４６】
【化４】
スキームＩＩＩの工程１および２において、式（１３ａ、ｂ）のハロピリジルアリールアルキンの白金触媒によるジボロン化は、希釈条件（約０．０１Ｍ）下での分子内Ｓｕｚｕｋｉカップリングの際に式（１７）のビニルボロン酸を形成する、式（１６ａ、ｂ）のジボロン酸を得る。ジボロン化が、Ｈａｌ＝Ｂｒである（１３ａ）について最適であることに注意するべきである。
【００４７】
スキームＩＩＩの工程３において、ビニルボロン酸（１７）と３−ヨードアニリンとの間の分子間Ｓｕｚｕｋｉカップリングは、式（１８）のアニリンベンゾピリジル−１０−オキセピンを提供する。工程４において、式（１８）のアニリンを、塩化メタンスルホニルでスルホニル化して、最終の式（１９）のベンゾピリジル−１０−オキセピンを得る。あるいは、スキームＩＩＩの工程５において、式（１９）のベンゾピリジル−１０−オキセピンを、Ｎ−（３−ヨード−フェニル）−メタンスルホンアミドでＳｕｚｕｋｉカップリングすることによって、直接的にアクセスする。
【００４８】
【化５】
スキームＩＶにおいて、式（１９）のベンゾピリジル−１０−オキセピンを得るためのさらに別の方法を示す。スキームＩＶの工程１において、３−ニトロベンゼンボロン酸での式（１３ａ、ｂ）のハロピリジルアリールアルキンの連続的分子内ＨｅｃｋおよびＳｕｚｕｋｉ反応を実行して、式（２０）のニトロフェニルベンゾピリジルオキセピンを得る。Ｈａｌ＝Ｉのときに、アリールアルキンへのボロン酸のゆっくりとした添加を行う場合に、収率を改善する。工程２〜３において、（１９）が式（２０）のニトロ類似物を還元して、式（２１）のアニリンを得、その後、スルホニル化することによって誘導されることが当業者によって認識されるだろう。
【００４９】
【化６】
スキームＶの工程１において、スキーム２の工程２と類似の様式で、式（５ａ）の２−ブロモピリジンと１ブチンとの間に薗頭カップリングが起こり、式（２２）のアルキニルピリジルメチルアルコールを得る。スキームＶの工程２において、式（２２）のピリジルメチルアルコールと式（１４）の５−フルオロ−２−ヨードフェノールとの間の光延反応は、式（２３）のピリジンを生じる。工程３において、分子内Ｈｅｃｋ反応、その後のＮ−［３−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−フェニル］−メタンスルホンアミドでのＳｕｚｕｋｉ交差カップリングは、式（２４）のベンゾピリジル−１１−オキセピンを提供し、それを、式（１９）のベンゾピリジル−１０−オキセピンに光異性化する。
【００５０】
【化７】
スキームＶＩの工程１において、式（２５）のラクトンを、式（２６）のハロフェノールのナトリウム塩と反応させて、式（２７）の酸を提供する。スキームＶＩの工程２において、Ｆｒｉｅｄｅｌ−Ｃｒａｆｔｓ反応を式（２７）の安息香酸で実行して、式（２８）のベンゾピリジルオキセピノンを得る。スキームＶＩの工程３において、式（２８）のケトンを、Ｗｉｔｔｉｇオレフィン化またはアルキルセリウム添加／脱水シーケンスを介して、幾何異性体の混合物として式（２９）のアルケニルベンゾピリジルオキセピンに変換する。工程４において、式（２９）のアルケニルベンゾピリジルオキセピンおよびその異性体を、ブロミンまたは４−（ジメチルアミノ）ピリジニウムトリブロミドのいずれかと反応させて、式（３０）および（３１）の幾何学的臭化ビニルを得る。臭化ビニルを、分離し、工程５および６に示されるように、典型的な条件下でＮ−［３−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−フェニル］−メタンスルホンアミドでのＳｕｚｕｋｉ交差カップリングを介して、各々のスルホンアミド（１９）または（２４）に変換する。式（２４）のスルホンアミドを、スキームＶＩの工程７において、式（１９）のベンゾピリジル−１０−オキセピンに光異性化する。
【００５１】
中間体１
１−ブロモ−４−フルオロ−２−メトキシメトキシ−ベンゼン
【化８】
２−ブロモ−５−フルオロフェノール（３０ｇ、０．１６ｍｏｌ）を、ジクロロメタン（１７０ｍＬ）中に溶解させ、０℃まで冷却する。この溶液に、注射器を介してジイソプロピルエチルアミン（３６ｍＬ、０．２０ｍｏｌ）を加え、その後、添加漏斗を介してクロロメチルメチルエーテル（１６ｍＬ、０．２０ｍｏｌ）を加える。溶液を撹拌し、室温まで温める。２時間後、混合物を飽和含水ＮＨ４Ｃｌ、水、および塩水で洗浄する。有機部分を、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮する。生じた残渣をフラッシュクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ（登録商標） Ｓｉ６５Ｍ、２０％ ＡｃＯＥｔ／ヘキサン）によって精製して、透明な無色の油として２６．１ｇ（７１％）の標題の化合物を得る。１Ｈ ＮＭＲ ４００ＭＨｚ（ＣＤＣｌ３）δ７．４６−７．５３（ｍ，１Ｈ），６．９２−６．９９（ｍ，１Ｈ），６．６３−６．７０（ｍ，１Ｈ），５．２６（ｓ，２Ｈ），３．５５（ｓ，３Ｈ）．
【００５２】
中間体２
１−ブタ−１−イニル−４−フルオロ−２−メトキシメトキシ−ベンゼン
【化９】
１−ブロモ−４−フルオロ−２−メトキシメトキシ−ベンゼン（７．６ｇ、３２ｍｍｏｌ）を、耐圧フラスコ（ｐｒｅｓｓｕｒｅ ｆｌａｓｋ）中に入れ、ジエチルアミン（６５ｍＬ）中に溶解させ、窒素で１５分間脱気する。過剰のブチンを、溶液を通してバブリングし、ＣｕＩ（１．９ｇ、１０ｍｍｏｌ）およびＰｄＣｌ２（ＰＰｈ３）２（２．３ｇ、３．３ｍｍｏｌ）を加え、フラスコを７０℃まで４４時間加熱する。混合物をエーテルで希釈し、次いで、飽和含水ＮＨ４Ｃｌおよび塩水で洗浄する。有機部分を、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。生じた残渣をフラッシュクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ（登録商標） Ｓｉ６５Ｍ、３％ ＴＨＦ／ヘキサン）によって精製して、橙色の固体として６．１２ｇ（９１％）の標題の化合物を得る。ＧＣＭＳ ｍ／ｅ ２０８ ［Ｍ］＋．
【００５３】
中間体３
２−ブタ−１−イニル−５−フルオロ−フェノール
【化１０】
１−ブタ−１−イニル−４−フルオロ−２−メトキシメトキシ−ベンゼン（６．１ｇ、２９ｍｍｏｌ）を、アセトン中の２５０ｍＬの濃塩酸の１０％溶液中に溶解させる。溶液を、室温で５時間撹拌する。反応物を、エーテルで希釈し、飽和含水ＮａＨＣＯ３および塩水で洗浄する。有機部分を、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。生じた残渣をフラッシュクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ（登録商標） Ｓｉ６５Ｍ、５％ ＡｃＯＥｔ／ヘキサン）によって精製して、橙色の油として３．５２ｇ（７３％）の標題の化合物を得る。ＧＣＭＳ ｍ／ｅ １６４［Ｍ］＋．
【００５４】
中間体４
３−ブロモ−ピリジン １−オキシド
【化１１】
メチルトリオキソレニウム（１００ｍｇ、０．４０１ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（４０ｍＬ）中に溶解させ、３−ブロモピリジン（１５．８ｇ、１００ｍｍｏｌ）を加え、その後、３０％含水Ｈ２Ｏ２（２２．７ｍＬ）を加える。二相性の混合物を室温で撹拌する。１８時間後、ＭｎＯ２（２５ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で２時間撹拌する。混合物をジクロロメタンで抽出し、合わせた抽出物を塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、橙色の油として９．５２ｇ（５５％）の標題の化合物を得る。ＧＣＭＳ ｍ／ｅ １７４ ［Ｍ−Ｈ］−．
【００５５】
中間体５
３−ブロモ−ピリジン−２−カルボニトリル
【化１２】
３−ブロモ−ピリジン １−オキシド（９．４ｇ、５４ｍｍｏｌ）を、アセトニトリル（６０ｍＬ）中に溶解させ、トリエチルアミン（１５ｍＬ）を加え、その後、シアン化トリメチルシリル（２１．７ｍＬ、１６３ｍｍｏｌ）を加える。混合物を１００℃まで加熱し、１６時間撹拌する。混合物を０℃に冷却し、２５０ｍＬの５Ｍ含水ＮａＯＨ中に注ぎ、ジクロロメタンで抽出する。合わせた抽出物を塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。生じた物質を、フラッシュクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ（登録商標） Ｓｉ６５Ｍ、２０％ ＡｃＯＥｔ／ヘキサン）を使用して精製して、黄色の固体として７．８ｇ（７９％）の標題の化合物を得る。ＧＣＭＳ ｍ／ｅ １８２ ［Ｍ−Ｈ］−．
【００５６】
中間体６
３−ブロモ−ピリジン−２−カルボン酸メチルエステル
【化１３】
３−ブロモ−ピリジン−２−カルボニトリル（１４．７ｇ、８０．３ｍｍｏｌ）を、濃ＨＣｌ（５０ｍＬ）中に溶解させ、１１０℃まで１８時間加熱する。混合物を０℃に冷却し、濾過して、少量のエーテルで洗い流し、減圧下でオーブンにおいて乾燥する。生じた褐色の固体を、メタノール（８０ｍＬ）中に溶解させ、濃Ｈ２ＳＯ４（６．６ｍＬ）を滴下して加え、溶液を９０℃まで１６時間加熱する。メタノールを減圧下で除去し、飽和含水重炭酸ナトリウムを加えて、基本ｐＨを得、混合物をＡｃＯＥｔで抽出する。合わせた抽出物を塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、白色の固体として１２．８ｇ（７４％）の標題の化合物を得る。ＧＣＭＳ ｍ／ｅ ２１５ ［Ｍ−Ｈ］−．
【００５７】
中間体７
（３−ブロモ−ピリジン−２−イル）−メタノール
【化１４】
３−ブロモ−ピリジン−２−カルボン酸メチルエステル（１２．８ｇ、５９．２ｍｍｏｌ）をメタノール（１５０ｍＬ）中に溶解させ、０℃まで冷却する。混合物に、ＮａＢＨ４（１１．２ｇ、２９６ｍｍｏｌ）を、１．０ｇずつ加える。混合物を室温まで温め、３時間撹拌する。メタノールを減圧下で除去し、ＡｃＯＥｔを加え、溶液を飽和した含水塩化アンモニウムおよび塩水で洗浄する。有機部分をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、白色の固体として６．８ｇ（６２％）の標題の化合物を得る。ＧＣＭＳ ｍ／ｅ １８７ ［Ｍ−Ｈ］−．
【００５８】
中間体８
３−ブロモ−２−（２−ブタ−１−イニル−５−フルオロ−フェノキシメチル）−ピリジン
【化１５】
ジクロロメタン（１６２ｍＬ）中の（３−ブロモ−ピリジン−２−イル）−メタノール（３．０９ｇ、１６．４３ｍｍｏｌ）、２−ブタ−１−イニル−５−フルオロ−フェノール（２．７０ｇ，１６．４３ｍｍｏｌ）、およびトリフェニルホスフィン（６．４６ｇ、２４．６４ｍｍｏｌ）の溶液を、−５℃〜０℃に冷却する。ジイソプロピルアゾジカルボン酸（ＤＩＡＤ）（４．８５ｍＬ、２４．６４ｍｍｏｌ）を１５分間にわたって滴下して加える。１時間後に、溶媒を蒸発させ、粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２；４％ヘキサン：ＡｃＯＥｔ）によって直接的に精製し、３．５ｇ（６４％）の標題の化合物を得る。ＬＣＭＳ ｍ／ｅ ３３４ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
【００５９】
中間体９
８−フルオロ−５−［１−（３−ニトロ−フェニル）−プロピリデン］−５，１１−ジヒドロ−１０−オキサ−１−アザ−ジベンゾ［ａ，ｄ］シクロヘプテン
【化１６】
Ｐｄ（ＯＡｃ）２（０．１８ｇ、５％）およびｏ−トリルホスフィン（０．３２ｇ、１．０５ｍｍｏｌ）を、４：１のジオキサン：水（１０１ｍＬ）中の３−ブロモ−２−（２−ブタ−１−イニル−５−フルオロ−フェノキシメチル）−ピリジン（３．５０ｇ、１０．５ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム（３．３９ｇ、３１．５ｍｍｏｌ）、および３−ニトロベンゼンボロン酸（２．２７ｇ、１３．６ｍｍｏｌ）の溶液に加える。窒素を、混合物を通して１５分間バブリングし、次いで、反応物を７５℃で一晩撹拌する。混合物を室温まで冷却し、固体をＣｅｌｉｔｅ（登録商標）を通して濾過する。水およびＡｃＯＥｔを加えて、相を静かに移す。水層をＡｃＯＥｔで抽出し、合わせた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮する。生じた残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、２０％ ＡｃＯＥｔ：ヘキサン）によって精製して、１．４９ｇ（３８％）の標題の化合物を提供する。ＬＣＭＳ ｍ／ｅ ３７７ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
【００６０】
中間体１０
３−［１−（８−フルオロ−１１Ｈ−１０ オキサ−１−アザ−ジベンゾ［ａ，ｄ］シクロヘプテン−５−イリデン）−プロピル］−フェニルアミン
【化１７】
８−フルオロ−５−［１−（３−ニトロ−フェニル）−プロピリデン］−５，１１−ジヒドロ−１０−オキサ−１−アザ−ジベンゾ［ａ，ｄ］シクロヘプテン（１．４９ｇ、３．９６ｍｍｏｌ）を、エタノール（２０ｍｌ）中に溶解させ、窒素でパージする。Ｐｄ／Ｃ（０．１５ｇ、１０％）を混合物に加え、１気圧の水素で２時間水素化する。混合物を窒素でパージし、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）を通して濾過し、固体をエタノールで洗浄する。濾液を減圧下で濃縮して、１．３７ｇ（９９％）の標題の化合物を得る。ＬＣＭＳ ｍ／ｅ ３４７ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
【００６１】
実施例１
Ｎ−｛３−［１−（８−フルオロ−１１Ｈ−１０−オキサ−１−アザ−ジベンゾ［ａ，ｄ］シクロヘプテン−５−イリデン）−プロピル］−フェニル｝−メタンスルホンアミド
【化１８】
塩化メタンスルホニル（０．３４ｍＬ、４．３６ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（１０ｍＬ）中の３−［１−（８−フルオロ−１１Ｈ−１０−オキサ−１−アザ−ジベンゾ［ａ，ｄ］シクロヘプテン−５−イリデン）−プロピル］−フェニルアミン（１．３７ｇ、３．９６ｍｍｏｌ）およびピリジン（０．３５ｍＬ、４．３６ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃で滴下して加える。２時間後に、７％含水重炭酸ナトリウム（２０ｍＬ）を加え、混合物を３０分間撹拌し、静かに移し、層を分離させる。水相をジクロロメタン（２×２０ｍＬ）で洗浄する。有機相を採取し、塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濾過および濃縮して、１．９８ｇの粗生成物を得る。物質を、Ｂｉｏｔａｇｅ（登録商標）を使用し、ヘキサン：エタノール（９：１）で溶出するフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、１．３５ｇ（８０％）の標題の化合物を提供する。ＬＣＭＳ ｍ／ｅ ４２５ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（Ｅ）−Ｎ−｛３−［１−（８−フルオロ−１１Ｈ−１０−オキサ−１−アザ−ジベンゾ［ａ，ｄ］シクロヘプテン−５−イリデン）−プロピル］−フェニル｝−メタンスルホンアミドである化合物、またはその薬学的に許容され得る塩。
【請求項２】
（Ｅ）−Ｎ−｛３−［１−（８−フルオロ−１１Ｈ−１０−オキサ−１−アザ−ジベンゾ［ａ，ｄ］シクロヘプテン−５−イリデン）−プロピル］−フェニル｝−メタンスルホンアミドである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
治療における使用のための、請求項１または２のいずれかに記載の化合物または塩。
【請求項４】
慢性関節リウマチ、変形性関節症、リウマチ熱、喘息、アレルギー性鼻炎、全身性エリテマトーデス、慢性閉塞性肺疾患、クローン病、炎症性腸疾患、または潰瘍性大腸炎の処置における使用のための、請求項１または２のいずれかに記載の化合物または塩。
【請求項５】
慢性関節リウマチの処置における使用のための、請求項４に記載の化合物または塩。
【請求項６】
慢性関節リウマチ、変形性関節症、リウマチ熱、喘息、アレルギー性鼻炎、全身性エリテマトーデス、慢性閉塞性肺疾患、クローン病、炎症性腸疾患、または潰瘍性大腸炎を処置する方法であって、その必要のある患者に、請求項１または２のいずれかに記載の化合物または塩の有効量を投与することを含む方法。
【請求項７】
１種以上の薬学的に許容され得るキャリア、賦形剤、または希釈剤と組み合わせて、請求項１または２のいずれかに記載の化合物または塩を含む医薬組成物。
【請求項８】
１種以上の薬学的に許容され得るキャリア、賦形剤、または希釈剤と組み合わせて、請求項１または２のいずれかに記載の化合物または塩を含む、慢性関節リウマチの処置のための医薬組成物。
【請求項１】
（Ｅ）−Ｎ−｛３−［１−（８−フルオロ−１１Ｈ−１０−オキサ−１−アザ−ジベンゾ［ａ，ｄ］シクロヘプテン−５−イリデン）−プロピル］−フェニル｝−メタンスルホンアミドである化合物、またはその薬学的に許容され得る塩。
【請求項２】
（Ｅ）−Ｎ−｛３−［１−（８−フルオロ−１１Ｈ−１０−オキサ−１−アザ−ジベンゾ［ａ，ｄ］シクロヘプテン−５−イリデン）−プロピル］−フェニル｝−メタンスルホンアミドである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
治療における使用のための、請求項１または２のいずれかに記載の化合物または塩。
【請求項４】
慢性関節リウマチ、変形性関節症、リウマチ熱、喘息、アレルギー性鼻炎、全身性エリテマトーデス、慢性閉塞性肺疾患、クローン病、炎症性腸疾患、または潰瘍性大腸炎の処置における使用のための、請求項１または２のいずれかに記載の化合物または塩。
【請求項５】
慢性関節リウマチの処置における使用のための、請求項４に記載の化合物または塩。
【請求項６】
慢性関節リウマチ、変形性関節症、リウマチ熱、喘息、アレルギー性鼻炎、全身性エリテマトーデス、慢性閉塞性肺疾患、クローン病、炎症性腸疾患、または潰瘍性大腸炎を処置する方法であって、その必要のある患者に、請求項１または２のいずれかに記載の化合物または塩の有効量を投与することを含む方法。
【請求項７】
１種以上の薬学的に許容され得るキャリア、賦形剤、または希釈剤と組み合わせて、請求項１または２のいずれかに記載の化合物または塩を含む医薬組成物。
【請求項８】
１種以上の薬学的に許容され得るキャリア、賦形剤、または希釈剤と組み合わせて、請求項１または２のいずれかに記載の化合物または塩を含む、慢性関節リウマチの処置のための医薬組成物。
【公表番号】特表２０１１−５２５４７４（Ｐ２０１１−５２５４７４Ａ）
【公表日】平成２３年９月２２日（２０１１．９．２２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５４２３２９（Ｐ２０１０−５４２３２９）
【出願日】平成２１年１月８日（２００９．１．８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０３０３７４
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０８９３１２
【国際公開日】平成２１年７月１６日（２００９．７．１６）
【出願人】（５９４１９７８７２）イーライ リリー アンド カンパニー (301)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２３年９月２２日（２０１１．９．２２）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年１月８日（２００９．１．８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０３０３７４
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０８９３１２
【国際公開日】平成２１年７月１６日（２００９．７．１６）
【出願人】（５９４１９７８７２）イーライ リリー アンド カンパニー (301)
【Ｆターム（参考）】
[ Back to top ]