リグナン系化合物又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物の新規な用途
本発明はリグナン系化合物又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物の新規な用途に関するものである。具体的に本発明はリグナン系化合物又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物を含有することを特徴とする美白用組成物に関するものである。化学式１乃至化学式３からなる群より選ばれたリグナン系化合物又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物はメラニン生成及びチロシナーゼ活性を抑制することにより、卓越な美白効果があるので美白用化粧料組成物、食品組成物又は薬学的組成物の有効な成分として利用し得る。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は２００７年１０月１７日付で出願された大韓民国特許出願第２００７−０１０４７８３号を優先権主張し、前記明細書全体は本発明の参考文献である。
【０００２】
本発明はリグナン系化合物又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物の新規な用途に関するものである。具体的に本発明はリグナン系化合物又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物を含有することを特徴とする美白用組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００３】
人間の皮膚色はメラニン色素を作るメラノサイト（melanocyte）の活動性、血管の分布、皮膚の厚さ及びカロチノイド、ビリルビン等人体内外の色素含有有無のような種々な要因等により決定されるものの、その中でメラノサイトでチロシナーゼ等の種々の酵素が作用して生成されるメラニンと言う黒色色素が最も重要である。
【０００４】
前記メラニン色素の形成には、遺伝的要因、ホルモン分泌、ストレス等と関連した生理的要因及び紫外線照射等のような環境的要因が影響を及ぼす。メラニンは皮膚の外郭である表皮層に存在して、紫外線等から真皮以下の皮膚器官を保護してくれると同時に、皮膚生体内に生じた自由ラジカル等を捉えてくれる役割をして、皮膚内蛋白質と遺伝子等を保護してくれる重要な機能を有しているものの、メラニンが過剰生産されることにより、しみ、そばかす等を形成するばかりでなく、皮膚老化を促進し、皮膚癌誘発にも重要な作用をするものとして知られている。
【０００５】
前記しみ、そばかす、色素沈着のような皮膚色素異常沈着症状と、紫外線露出等により発生する過度なメラニン色素沈着を治療又は軽減させる為に、以前からアスコルビン酸、コジ酸、アルブチン、ヒドロキノン、グルタチオン又はこれらの誘導体、チロシナーゼ阻害活性を有する化合物を化粧料や医薬品に配合使用してきたが、これらは不十分な美白効果、皮膚に対する安定性問題、化粧料に配合する場合、発生する剤形及び安定性問題等により、その使用が制限されている。ここに、安定性が優れて美白活性が優れた天然物由来の物質に対する研究が進行されている。
【０００６】
一方、肉荳蒄（nutmeg）は熱帯地方で栽培される多年生植物であるミリスチカフラグランス（Myristica fragrans）の実にして、古くから香辛料として利用されてきた。
【０００７】
さらに、肉荳蒄仮種皮は前記ミリスチカフラグランスの実の表皮部分を示すものにして、ヘリコバクターピロリ菌の成長抑制活性（In Vivo., 17;541-4, 2003）、肝の解毒機作の活性化（Food Chem.Toxicol., 31;517-21.1993）、皮膚疣の化学的予防作用（Cancer Lett.,56:59-63,1991）、抗癌活性（Jpn.J.Pharmacol., 49;155-63,1999）があるものとして知られている。しかしながら、肉荳蒄又は肉荳蒄仮種皮が美白活性があるか否かに対しては知られたことが全くない。
【０００８】
特に、前記肉荳蒄又は肉荳蒄仮種皮から抽出されているメースリグナンは代表的なリグナン系化合物であって（Phytochemistry,59:169-173,2002）、アポトシス（apoptosis）を誘導するカスパーゼ（caspase）−３活性増進作用（Biol.Pharm.Bull.,27:1305-1307,2004）、口腔微生物に対する抗菌活性（大韓民国特許公開特許公報１０−６９１７９２号）、抗炎症作用（大韓民国特許公開特許公報１０−０５７９７５２号）、抗にきび機能（大韓民国特許公開特許公報１０−０５６７４３１号）、脳細胞脂質過酸化及び活性酸素生成抑制効果（Biochem.Biophys.Res.Commu., 331:1264-1269）等が報告されている。しかしながら、メースリグナンを含めて前記肉荳蒄又は肉荳蒄仮種皮から抽出できるアウストバイリグナン７又はリカリンＥが美白活性があるか否かに対しては知られていない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
ここに、本発明者等は天然物由来の美白活性がある物質に関して研究を重ねる中でリグナン系化合物又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物が、優れた美白活性があることを見出だし本発明を完成した。
【００１０】
従って、本発明の目的は下記化学式１乃至化学式３からなる群より選ばれたリグナン系化合物又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物を含有することを特徴とする美白用化粧料組成物を提供することである。
【００１１】
【化１】
【００１２】
本発明の他の目的は前記化学式１乃至化学式３からなる群より選ばれたリグナン系化合物、又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物を含有することを特徴とする美白用食品組成物を提供することである。
【００１３】
本発明のさらに、他の目的は前記化学式１乃至化学式３からなる群より選ばれたリグナン系化合物、又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物を含有することを特徴とする美白用薬学的組成物を提供することである。
【００１４】
本発明のさらに、他の目的は前記化学式１乃至化学式３からなる群より選ばれたリグナン系化合物、又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物の化粧料組成物製造の為の用途を提供することである。
【００１５】
本発明のさらに、他の目的は前記化学式１乃至化学式３からなる群より選ばれたリグナン系化合物、又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物の食品組成物製造の為の用途を提供することである。
【００１６】
本発明のさらに、他の目的は前記化学式１乃至化学式３からなる群より選ばれたリグナン系化合物、又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物の薬学的組成物製造の為の用途を提供することである。
【００１７】
本発明のさらに、他の目的は前記化学式１乃至化学式３からなる群より選ばれたリグナン系化合物、又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物のメラニン生成を抑制する方法を提供することである。
【００１８】
本発明のさらに、他の目的は前記化学式１乃至化学式３からなる群より選ばれたリグナン系化合物、又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物のチロシナーゼ活性を抑制する方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１９】
本発明は、前記のような目的を達成する為に、下記化学式１乃至化学式３からなる群より選ばれたリグナン系化合物、又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物を含有することを特徴とする美白用化粧料組成物を提供する。
【００２０】
【化２】
【００２１】
本発明は、前記化学式１乃至化学式３からなる群より選ばれたリグナン系化合物、又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物を含有することを特徴とする美白用食品組成物を提供する。
【００２２】
本発明は、前記化学式１乃至化学式３からなる群より選ばれたリグナン系化合物、又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物を含有することを特徴とする美白用薬学的組成物を提供する。
【００２３】
本発明は、前記化学式１乃至化学式３からなる群より選ばれたリグナン系化合物、又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物の化粧料組成物製造の為の用途を提供する。
【００２４】
本発明は、前記化学式１乃至化学式３からなる群より選ばれたリグナン系化合物、又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物の食品組成物製造の為の用途を提供する。
【００２５】
本発明は、前記化学式１乃至化学式３からなる群より選ばれたリグナン系化合物、又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物の薬学的組成物製造の為の用途を提供する。
【００２６】
本発明は、前記化学式１乃至化学式３からなる群より選ばれたリグナン系化合物、又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物のメラニン生成を抑制する方法を提供する。
【００２７】
本発明は、前記化学式１乃至化学式３からなる群より選ばれたリグナン系化合物、又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物のチロシナーゼ活性を抑制する方法を提供する。
【００２８】
以下、本発明の内容をより詳細に説明する。
【００２９】
本発明で“肉荳蒄（nutmeg）”は熱帯地方で栽培される多年生植物であるミリスチカフラグランス（Myristica fragrans）の実にして、“肉荳蒄仮種皮”は前記ミリスチカフラグランスの実の皮の部分を言う。
【００３０】
本発明で“肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物”は、肉荳蒄又は肉荳蒄仮種皮から由来した下記リグナン系化合物を含有する抽出物を言う。前記リグナン系化合物を含有できるとすれば、前記肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物の製造方法には制限がないものの、好ましくは、肉荳蒄又は肉荳蒄仮種皮から水、Ｃ１−Ｃ６の有機溶媒及び亜臨界又は超臨界流体からなる群より選ばれた一つ以上の溶媒で抽出することにより製造し得る。さらに、必要とする場合、当業界に公知された方法により、濾過及び濃縮段階を追加的に含めて製造し得る。
【００３１】
前記Ｃ１−Ｃ６の有機溶媒はこれに限定はされないものの、好ましくは、Ｃ１−Ｃ６のアルコール、アセトン、エーテル、ベンゼン、クロロホルム、エチルアセテート、メチレンクロライド、ヘキサン、シクロヘキサン、石油エーテルからなる群より選ばれたことを言う。
【００３２】
さらに、前記“超臨界流体”とは、一般的な条件では気体状態であるが、臨界温度と臨界圧力以上では流体であることを言う。前記にて亜臨界流体とは、亜臨界液体と気体を含み、特に、亜臨界液体は温度が超臨界温度と飽和温度より低い状態の流体であって、亜臨界気体は温度が飽和温度より高く、圧力は超臨界圧力より低い状態の流体を言う。前記超臨界流体及び亜臨界流体は医薬品工業、食品工業、化粧品？香料工業、化学工業、エネルギー工業及びその他多様な分野に応用されている。本発明で使用し得る超臨界流体及び亜臨界流体は、特別に制限されるものではなく、例えば、二酸化炭素、窒素、亜酸化窒素、メタン、エチレン、プロパン、プロピレン、石油エーテル、エチルエーテル及びシクロヘキサン等を利用し得る。特に、二酸化炭素は大量購入が可能で、比較的安価で、非爆発性で、加工用として十分に安定的な長所の為特に好ましい。前記二酸化炭素は臨界温度が３１．１℃で臨界圧力は７３．８気圧である。
【００３３】
本発明の一実施例では、乾燥した肉荳蒄又は肉荳蒄仮種皮を粉砕し、これにエタノール、ヘキサン又はクロロホルム溶媒を利用して抽出して濾過及び濃縮段階を経て肉荳蒄又は肉荳蒄仮種皮エタノール、ヘキサン又はクロロホルム抽出物を製造した。さらに、超臨界流体として二酸化炭素（ＣＯ２）を利用した超臨界流体抽出機に肉荳蒄を投与して肉荳蒄超臨界抽出物を製造した（＜実施例１＞参照）。
【００３４】
本発明で”リグナン系化合物？とは、下記化学式１乃至３からなる群より選ばれた化合物を言う。具体的に化学式１で表示される化合物はメースリグナン（macelignan, 4-((2S,3R)-4-Benzo[1,3]dioxol-5-yl-2,3-dimethyl-butyl)-2-methoxyphenol）を言い、化学式２で表示される化合物はアウストバイリグナン７（austobailignan 7,4-(1-Benzo[1,3]dioxol-5-yl-2-methyl-butoxymethyl)-2-methoxy-phenol）を言い、化学式３で表示される化合物はリカリンＥ（licarin E,5-(7-methoxy-3-methyl-5-propenyl-2,3-dihydro-benzofuran-2-yl)-benzo[1,3]dioxole）を言う。
【００３５】
【化３】
【００３６】
前記リグナン系化合物は公知の合成方法を利用して製造することができ、前記肉荳蒄又は肉荳蒄仮種皮から抽出して分離精製することにより収得し得る。前記肉荳蒄又は肉荳蒄仮種皮抽出物からリグナン系化合物の分離及び精製は、これに限定はされないものの、好ましくは、シリカゲル（silica gel）又は活性アルミナ（alumina）等の各種合成樹脂を充填したカラムクロマトグラフィー（column chromatography）及び高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）等を単独或いは併行して使用し得る。しかしながら、リグナン系化合物の抽出、分離及び精製方法は必ずしも前記の方法に限定されるものではない。
【００３７】
本発明の一実施例では、乾燥した肉荳蒄又は肉荳蒄仮種皮抽出物から、公知されたシリカゲルカラムクロマトグラフィーを利用して前記メースリグナン、アウストバイリグナン７又はリカリンＥを分離した（＜実施例２＞参照）。
【００３８】
前記化学式１乃至化学式３からなる群より選ばれたリグナン系化合物、又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物は優れた美白活性を有している。
【００３９】
具体的に前記リグナン系化合物又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物をメラニン細胞（melanocyte）であるＭｅｌａｎ−ａ細胞に投与した結果、メラニン生成が顕著に抑制され（＜実験例１＞参照）、メラニン生成に関与する酵素であるチロシナーゼ（tyrosinase）活性を抑制し（＜実験例２＞参照）、前記チロシナーゼ及びチロシナーゼ関連蛋白質（ＴＲＰ−１，ＴＲＰ−２）発現が抑制されることが分った（＜実験例３＞参照）。
【００４０】
従って、前記リグナン系化合物又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物は美白活性が優れていることから化粧料組成物、食品組成物又は薬学的組成物の有効成分として利用し得る。
【００４１】
前記本発明の化粧料組成物は、前記化学式１乃至化学式３からなる群より選ばれたリグナン系化合物又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物を有効成分として含有し、皮膚学的に許容可能な賦形剤と共に、基礎化粧品組成物（化粧水、クリーム、エッセンス、クレンジングフォーム及びクレンジングウォータのような洗顔剤、パック、ボディオイル）、色素化粧品組成物（ファウンデーション、リップスティック、マスカラ、メーキャップベース）、頭髪製品組成物（シャンプー、リンス、ヘアコンデショーナ、ヘアゲル）及び石鹸等の形態で製造できる。
【００４２】
前記賦形剤には、これに限定はされないものの、例えば、皮膚軟化剤、皮膚浸透増強剤、着色剤、芳香剤、乳化剤、濃化剤及び溶媒を含め得る。さらに、香料、色素、殺菌剤、酸化防止剤、防腐剤及び保湿剤等を追加的に含めることができ、物性改善を目的に漸増剤、無機塩類、合成高分子物質等を含め得る。例えば、本発明の化粧料組成物として洗顔剤及び石鹸を製造する場合には、通常の洗顔剤及び石鹸ベースに前記リグナン系化合物又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物を添加して容易に製造し得る。クリームを製造する場合には、一般的な水中油滴型（Ｏ／Ｗ）のクリームベースに前記リグナン系化合物、又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物又はこれに塩を添加して製造し得る。これに、香料、キレート剤、色素、酸化防止剤、防腐剤等と、物性改善を目的とした蛋白質、ミネラル、ビタミン等合成又は天然素材を追加的に添加し得る。
【００４３】
本発明の化粧料組成物に含有される前記リグナン系化合物、又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物の含量は、これに限定はされないものの、全体組成物総重量に対して０．００１乃至１０重量％であることが好ましく、０．０１乃至 ５重量％であることがより好ましい。前記含量が０．００１重量％未満では、目的とする美白効果を期待できず、１０重量％超過では安全性又は剤形上の製造に困難性があり得る。
【００４４】
一方、本発明の食品組成物は機能性食品（functional food）、栄養補助剤（nutritional supplement）、健康食品（health food）及び食品添加剤（food additives）等の全ての形態を含む。
【００４５】
前記類型の食品組成物は当業界に公知された通常の方法により、多様な形態で製造し得る。これに限定はされないものの、例えば、健康食品には、前記リグナン系化合物又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物そのものを、お茶、ジュース及びドリンクの形態で製造して飲用できるように、液状化、顆粒化、カプセル化及び粉末化して摂取し得る。さらに、前記リグナン系化合物又は肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物と美白効果があるとして知られた、公知の活性成分と共に、混合して組成物の形態で製造できる。さらに、機能性食品には、これに限定はされないものの、飲料（アルコール性飲料を含む）、果実及びその加工食品（例：果実缶詰、瓶詰、ジャム、ママレード等）、魚類、肉類及びその加工食品（例：ハム、ソーセージ、コーンビーフ等）、パン類及び麺類（例：うどん、ソバ、ラーメン、スパゲッティ、マカロニ等）、果汁、各種ドリンク、クッキー、飴、乳製品（例：バター、チーズ等）、食用食物油脂、マーガリン、植物性蛋白質、レトルト食品、冷凍食品、各種調味料（例：味噌、醤油、ソース等）等に前記リグナン系化合物又は肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物を添加して製造し得る。さらに、前記リグナン系化合物又は肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物を食品添加剤の形態で使用する為には、粉末又は濃縮液形態で製造して使用し得る。
【００４６】
本発明の食品組成物の内、前記リグナン系化合物又は肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物の好ましい含有量としは、これに限定はされないものの、好ましくは、最終的に製造された食品中、０．０１乃至５０重量％である。より好ましくは、本発明の食品組成物は特に、美白効果があるとして知られた活性成分と共に混合して健康食品の形態で製造し得る。
【００４７】
一方、前記本発明の薬学的組成物は、前記リグナン系化合物又は肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物を単独で含有するか、又は一つ以上の薬学的に許容される担体、賦形剤又は希釈剤を追加的に含有し得る。
【００４８】
薬学的に許容される担体には、例えば、経口投与用担体又は非経口投与用担体を追加的に含め得る。経口投与用担体はラクトース、澱粉、セルロース誘導体、マグネシウムステアレート、ステアリン酸等を含め得る。さらに、非経口投与用担体は、水、適合したオイル、食塩水、水性グルコース及びグリコール等を含め得る。安定化剤及び保存剤を追加的に含め得る。適合した安定剤には、亜硫酸水素ナトリウム、亜硫酸ナトリウム又はアスコルビン酸のような抗酸化剤がある。適合した保存剤には、ベンズアルコニウムクロライド、メチルー又はプルピルーパラベン及びクロロブタノールがある。その他の薬学的に許容される担体には、下記の文献に記載されていることを参考にできる（Remington's Pharmaceutical Sciences,19th ed., Mack Publishing Company, Easton,PA,1995）。
【００４９】
本発明の薬学的組成物は人間を始め、哺乳動物にどのような方法でも投与し得る。例えば、経口又は非経口的に投与できる。非経口投与方法にはこれに限定はされないものの、静脈内、筋肉内、動脈内、骨髄内、隔膜内、心臓内、経皮、皮下、腹腔内、鼻孔内、腸管、局所、舌下又は直腸内投与でもあり得る。本発明の薬学的組成物は上述したような投与経路により、経口投与用又は非経口投与用製剤に剤形化し得る。経口投与用製剤の場合に本発明の組成物は粉末、顆粒、錠剤、丸剤、糖衣錠剤、カプセル剤、液剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリ剤、懸濁液等に当業界に公知された方法を利用して剤形化し得る。例えば、経口用製剤は活性成分を個体賦形剤と配合し、これを粉砕して適合した補助剤を添加した後、顆粒混合物に加工することにより、錠剤又は糖衣錠剤を収得し得る。適合した賦形剤の例には、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトル、マンニトール、キシリトール、エリスリトール及びマルチトール等を含む糖類とトウモロコシ澱粉、小麦澱粉、米澱粉及び馬鈴薯澱粉等を含む澱粉類、セルロース、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース及びヒドロキシプロピルメチルセルロース等を含むセルロース類、ゼラチン、ポリビニルピロリドン等のような充填剤が含まれ得る。さらに、場合によっては、架橋結合ポリビニルピロリドン、寒天、アルギン酸又はナトリウムアルギネート等を崩解剤として添加し得る。さらには、本発明の薬学的組成物は抗凝集剤、潤滑剤、湿潤剤、香料、乳化剤及び防腐剤等を含め得る。非経口投与用製剤化の場合には、注射剤、クリーム剤、ローション剤、外用軟膏剤、オイル剤、保湿剤、ゲル剤、エアロゾル及び鼻孔吸込み剤の形態で当業界に公知された方法により剤形化し得る。これらの剤形は、全ての製薬化学に一般的に、公知された処方書である文献（Remington's Pharmaceutical Sciences,15th Edition,1975. Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania 18042,Chapter 87:Blaug,Seymour）に記載されている。
【００５０】
本発明の薬学的組成物の総有効量は単一投与量（single dose）で患者に投与することができ、多重投与量（multiple dose）で長期間投与する分割治療方法（fractionated treatment protocol）により投与し得る。本発明の薬学的組成物は、疾患の程度によって有効成分の含量を異にすることができる。非経口投与時には前記リグナン系化合物又は肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物を基準にして、１日に体重１ｋｇ当り好ましくは０．０１乃至５０ｍｇ、さらに好ましくは、０．１乃至３０ｍｇの量で投与されるように、さらに、経口投与時には、前記リグナン系化合物又は肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物を基準にして、１日に体重１ｋｇ当り好ましくは０．０１乃至１００ｍｇ、さらに好ましくは、０．１乃至５０ｍｇの量で投与されるように１乃至数回に分けて投与し得る。しかしながら、前記リグナン系化合物又は肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物の用量は、薬学的組成物の投与経路及び治療回数ばかりでなく、患者の年齢、体重、健康状態、性別、疾患の重症度、食餌及び排泄率等多様な要因等を考慮して患者に対する有効投与量が決定されるものであることから、このような点を考慮するに、当分野の通常的な知識を有する者であれば、前記リグナン系化合物又は肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物を美白の為の特定した用途に伴う適切な有効投与量を決定し得るであろう。本発明に伴う薬学的組成物は本発明の効果を示す限りその剤形、投与経路及び投与方法に特別な制限はされない。
【００５１】
さらに、前記化学式１乃至化学式３からなる群より選ばれたリグナン系化合物又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物は、美白効果が優れていることから美白用化粧料組成物、食品組成物又は薬学的組成物製造の為に利用され得る。
【００５２】
前記リグナン系化合物又は肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物を利用して、化粧料組成物、食品組成物又は薬学的組成物を製造する方法及び前記組成物に対する前記リグナン系化合物、又は肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物の含量は前述した通りである。
【００５３】
さらに、化学式１乃至化学式３からなる群より選ばれた、リグナン系化合物又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物は、メラニン生成抑制及びチロシナーゼ活性抑制方法に利用され得る。
【００５４】
前記リグナン系化合物又は肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物を、メラニン生成抑制及びチロシナーゼ活性抑制方法に利用する為に、これに限定はされないものの、これを必要とする個体に有効な量で投与することができる。
【００５５】
前記“必要とする個体”とは、メラニン生成及びチロシナーゼ活性が抑制されることにより、美白が必要な哺乳動物を言い、好ましくは人間を言う。さらに、前記“有効な量”とは、前記個体内でメラニン生成及びチロシナーゼ活性が抑制され、美白効果を呈する量を言う。前記有効な量で投与する為の投与方法及び投与量は具体的に前記記述した通りである。
【発明の効果】
【００５６】
以上察した通り、前記化学式１乃至化学式３からなる群より選ばれたリグナン系化合物又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物は、メラニン生成及びチロシナーゼ活性を抑制することにより、卓越な美白効果があるので美白用化粧料組成物、食品組成物又は薬学的組成物の有効な成分として利用され得る。
【図面の簡単な説明】
【００５７】
【図１】図１は肉荳蒄エタノール抽出物がメラニン生成を抑制する活性があるか否かを確認した結果である。
【図２】図２はメースリグナン化合物がメラニン生成を抑制する活性があるか否かを確認した結果である。
【図３】図３は肉荳蒄エタノール抽出物がメラニン生成に関与する酵素であるチロシナーゼ活性があるか否かを確認した結果である。
【図４】図４はメースリグナン化合物がメラニン生成に関与する酵素であるチロシナーゼ活性があるか否かを確認した結果である。
【図５】図５は肉荳蒄エタノール抽出物がチロシナーゼ及びチロシナーゼ関連蛋白質（ＴＲＰ−１，ＴＲＰ−２）発現を抑制する活性があるか否かを確認した結果である。
【図６】図６はメースリグナン化合物がチロシナーゼ及びチロシナーゼ関連蛋白質（ＴＲＰ−１，ＲＰ−２）発現を抑制する活性があるか否かを確認した結果である。
【発明を実施するための形態】
【００５８】
以下、実施例を挙げて本発明の構成及び効果をより具体的に説明する。しかしながら、これら実施例は本発明に対する理解を促す為に例示の目的にのみ提供したものであって、本発明の範疇及び範囲が下記実施例により制限されるものではない。
【００５９】
＜実施例１：美白活性がある肉荳蒄又は肉荳蒄仮種皮抽出物の製造＞
＜１−１．肉荳蒄抽出物の製造＞
先ず、肉荳蒄エタノール抽出物を製造する為に、乾燥した肉荳蒄をミキサーで粉砕し、粉砕した肉荳蒄試料１００ｇをエタノール１Ｌに入れて４８時間常温で冷浸して抽出した。抽出した試料はワットマン（Whatman）２番濾過紙で濾過し、濾過された抽出液を真空回転濃縮機で濃縮して溶媒成分を除去して肉荳蒄エタノール抽出物を収得した。
【００６０】
さらに、抽出溶媒で前記エタノールの代わりにメタノール、ヘキサン又は平成22年4月2日クロロホルムを使用して前記と同一な方法を利用することにより、肉荳蒄メタノール、ヘキサン又はクロロホルム抽出物を収得した。
【００６１】
一方、超臨界流体抽出機を使用して肉荳蒄超臨界抽出物を製造した。具体的に超臨界流体で二酸化炭素を利用して抽出温度５０℃、抽出圧力は２００ｂａｒであって抽出物から溶媒を除去することにより製造した。
【００６２】
＜１−２：肉荳蒄仮種皮抽出物の製造＞
乾燥した肉荳蒄仮種皮をミキサーで粉砕し、粉砕した肉荳蒄仮種皮試料１００ｇをエタノール１Ｌに入れて４８時間常温で冷浸し、前記＜実施例１−１＞と同一な方法を利用して抽出することにより肉荳蒄仮種皮エタノール抽出物を収得した。
【００６３】
＜実施例２：肉荳蒄又は肉荳蒄仮種皮抽出物から美白活性がある化合物の分離＞
＜２−１：メースリグナン（macelignan）分離＞
【００６４】
前記＜実施例１−１＞でエタノール濃縮された肉荳蒄エタノール抽出物と、エチルアセテートを混合してエチルアセテート溶解性成分を抽出し、エチルアセテートを除去してエチルアセテート溶解性成分を濃縮した。シリカゲルを６ｘ１５ｃｍに充填したカラムにおいて、ヘキサン、エチルアセテートを１０：１（ｖ／ｖ）の比率で混合した溶媒システムを利用して非活性物質等を除去し、これをさらに、ヘキサン、エチルアセテートをそれぞれ２０：１（ｖ／ｖ）の比率で混合した溶媒の分画物を得た後、Ｒｐ−１８カラムクロマトグラフィーを利用して８０％メタノールでさせて濃縮液乾燥し、最終的に純粋な単一美白活性物質である下記化学式１のメースリグナン（macelignan,4-((2S, 3R)-4-Benzo[1,3]dioxol-5-yl-2,3-dimethyl-butyl)-2-methoxyphenol）を分離した。
【００６５】
【化４】
【００６６】
＜２−２：アウストバイリグナン７の分離＞
前記実施例＜１−２＞から得た濃縮された肉荳蒄仮種皮エタノール抽出物をエチルアセテート、ブタノール、水で分画した。エチルアセテート分画物（１０．２９ｇ）をシリカゲルカラムクロマトグラフィーを利用して、クロロホルムとエチルアセテートを９：１（ｖ／ｖ）の比率で混合した溶媒で溶出させ、分画物Ｖ（０．５２）と分画物ＶＩ（０．１９ｇ）を得た。分画物ＶＩをクロロホルムとエチルアセテートとアセトン３０：１：２（ｖ／ｖ／ｖ）の比率で混合した溶媒でカラムクロマトグラフィーして、分画物ＶＩ−Ｂ（０．５２ｇ）を得た。以降、分画物ＶＩ−Ｂをリサイクリング高性能液体クロマトグラフィーを利用して１００％エタノールで溶出することにより、最終的に純粋な単一美白活性物質である下記化学式２のアウストバイリグナン７（4-(1-Benzo[1, 3]dioxol-5-yl-2-methyl-butoxymethyl)-2-methoxy-phenol）０．０１１ｇを分離した。
【００６７】
【化５】
【００６８】
＜２−３：リカリンＥの分離＞
前記実施例＜１−２＞から得た濃縮された肉荳蒄仮種皮エタノール抽出物をエチルアセテート、ブタノール、水で分画した。エチルアセテート分画物（１８．４４ｇ）をシリカゲルカラムクロマトグラフィーを利用して、クロロホルムとエチルアセテートを９：１（ｖ／ｖ）の比率で混合した溶媒で溶出させ、分画物ＩＩ（３．０４ｇ）を得た。分画物ＩＩをクロロホルムとヘキサンとエチルアセテートとアセトン１５：１０：０．１：０．１（ｖ／ｖ／ｖ／ｖ）の比率で混合した溶媒でカラムクロマトグラフィーして、分画物ＩＩ−Ｂ（０．４Ｇ）を得た。以降、分画物ＩＩ−Ｂをリサイクリング高性能液体クロマトグラフィーを利用して１００％メタノールで溶出することにより、最終的に純粋な単一美白活性物質である下記化学式３のリカリンＥ（5-(7-Methoxy-3-methyl-5-propenyl-2, 3-dihydro-benzofuran-2-yl)-benzo[1, 3]dioxle）０．０１６ｇを分離した。
【００６９】
【化６】
【００７０】
＜実験例１：メラニン生成抑制活性＞
＜１−１：肉荳蒄又は肉荳蒄仮種皮抽出物のメラニン生成抑制＞
先ず、前記＜実施例１−１＞で製造された肉荳蒄エタノール抽出物がメラニン生成抑制活性があるか否かを確認した。
【００７１】
具体的に１０％ＦＢＳと２μＭのＴＰＡ（phorbol 12-myristate 13-acetate）が含有されたＲＰＭＩ１６４０で６−ウェルプレート（メラニン定量）に２×１０５ｃｅｌｌ（最終嵩３ｍＬ）のＭｅｌａｎ−ａ細胞を入れ、１０％ＣＯ２培養器（MCO-20AIC,Sanyo）で３７℃で２４時間培養した。前記培養後培地を除去し、ＲＰＭＩ１６４０培地に前記＜実施例１−１＞で製造された肉荳蒄エタノール抽出物を添加して、３日間毎日処理した。５日後６−ｗｅｌｌプレートで培養された培地を除去し、０．２５％ｔｒｙｐｓｉｎ−ＥＤＴＡ（Sigma Chemical Co.）溶液を処理して細胞ペレット（ｐｅｌｌｅｔ）を回収して１．５ｍＬチューブに移して１０．０００ｒｐｍで１０分間遠心分離して上澄液を除去した。収得したペレットを６０℃で乾燥させ、１ＮのＮａＯＨ１００μＬを入れて細胞内メラニンを溶解させた。この溶液をＰＢＳで希釈した後、ＥＬＩＳＡ ｒｅａｄｅｒ ４７５ｎｍで吸光度を測定して下記数学式１により、メラニン含量を求めてその結果を図１に記載した。この際、肉荳蒄エタノール抽出物を添加剤しない群を対照群とした。
【００７２】
【数１】
【００７３】
図１に記載された通り、肉荳蒄エタノール抽出物はメラニン生成を抑制する活性が優れているので美白効果が卓越であることが分った（＊＊：Ｐ＜０．０１）。
【００７４】
さらに、前記実施例＜１−１＞で製造された肉荳蒄ヘキサン抽出物、クロロホルム抽出物、超臨界抽出物及び前記実施例＜１−２＞で製造された肉荳蒄仮種皮エタノール抽出物４０μｇ／ｍＬをそれぞれＭｅｌａｎ−ａ細胞に処理して、前記と同一な方法でメラニン生成程度を測定した結果、肉荳蒄ヘキサン抽出物の場合約５３．７４％、肉荳蒄クロロホルム抽出物の場合約６６．９３％、肉荳蒄超臨界抽出物の場合約７３．８０％、肉荳蒄仮種皮エタノール抽出物の場合約７０．５０％、程度でメラニン生成が抑制されることが分った（結果未図示）。
【００７５】
従って、肉荳蒄又は肉荳蒄仮種皮抽出物はメラニン生成を抑制する活性が優れていて、美白用組成物の有効な成分として利用できるものとして思慮された。
【００７６】
＜１−２：メースリグナン、アウストバイリグナン７及びリカリンＥのメラニン生成抑制＞
前記＜実施例２−１＞で分離されたメースリグナンをＭｅｌａｎ−ａ細胞に処理して前記＜実験例１−１＞と同一な方法でメラニン生成を測定してその結果を図２に示した。
【００７７】
図２に示した通り、メースリグナンはメラニン生成を抑制する活性が優れているので美白効果が卓越であることが分った（＊＊：Ｐ＜０．０１）。
【００７８】
さらに、前記＜実施例２＞で分離されたアウストバイリグナン７（７５０μＭ）及びリカリンＥ（５０μＭ）をそれぞれＭｅｌａｎ−ａ細胞に処理して、前記＜実験例１−１＞と同一な方法でメラニン生成程度を測定した結果、アウストバイリグナン７の場合、約５３．８９％、リカリンＥの場合約５８．４４％程度でメラニン生成が抑制されることが分った（結果未図示）。
【００７９】
従って、メースリグナン、アウストバイリグナン７及びリカリンＥはメラニン生成を抑制する活性が優れて、美白用組成物の有効な成分として利用し得るものと思慮された。
【００８０】
＜実験例２：チロシナーゼ（tyrosinase）活性抑制＞
＜２−１：肉荳蒄又は肉荳蒄仮種皮抽出物のチロシナーゼ活性抑制＞
先ず、前記実施例＜１−１＞で製造された肉荳蒄エタノール抽出物がメラニン生成に関与する酵素であるチロシナーゼ活性を抑制するか否かを確認した。
【００８１】
前記＜実験例１−１＞の通り、培養されたＭｅｌａｎ−ａ細胞に前記＜実施例１−１＞で製造された肉荳蒄エタノール抽出物を３日間処理して、５日後６−４ウェルプレートで培養された培地を除去して、０．２５％ｔｒｙｐｓｉｎ−ＥＤＴＡ（Sigma Chemical Co.）溶液を処理して細胞ペレットを回収した。回収されたペレットを１．５ｍＬチューブに移してリン酸塩緩衝液（ｐＨ６．８）２００μＬを添加し、１０，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離後上澄液を集めて、その内１５０μＬを９６−ウェルマイクロプレート（96-well microplate）に入れ、カテコール（catechol）５０μＬを添加した。前記添加後３７℃で３０分間培養した後、マイクロプレートリーダ（microplate reader）を利用して生成されたドーパクロム（dopa chrome）の量を４９０ｎｍで吸光度を測定してその結果を図３に記載した。
【００８２】
図３に記載された通り、前記＜実施例１−１＞で製造された肉荳蒄エタノール抽出物を処理した場合、生成されたドーパクロム（dopa chrome）の量が著しく減少されたことが分った。従って、チロシナーゼがドーパクロム生成に関与する酵素である点を考慮すれば、前記＜実施例１−１＞にて製造された肉荳蒄エタノール抽出物は、チロシナーゼ活性を制限することにより、メラニン生成を抑制し得ることが分った（＊＊：Ｐ＜０．０１）。
【００８３】
さらに、前記＜実施例１−１＞にて製造された肉荳蒄ヘキサン抽出物、クロロホルム抽出物、超臨界抽出物及び前記＜実施例１−２＞にて製造された肉荳蒄仮種皮エタノール抽出物４０μｇ／ｍＬをそれぞれＭｅｌａｎ−ａ細胞に処理して前記と同一な方法でドーパクロム生成程度を測定した結果、肉荳蒄ヘキサン抽出物の場合、約５４．９２％、肉荳蒄クロロホルム抽出物の場合、約６２．８９％、肉荳蒄超臨界抽出物の場合、約６８．３４％、肉荳蒄仮種皮エタノール抽出物の場合、約７７２．７５％程度、ドーパクロム生成が抑制されることが分った（結果未図示）。
【００８４】
＜２−２：メースリグナン、アウストバイリグナン７及びリカリンＥのチロシナーゼ活性抑制＞
【００８５】
前記＜実施例２−１＞にて分離されたメースリグナンをＭｅｌａｎ−ａ細胞に処理して、前記＜実験例２−１＞と同一な方法でドーパクロム生成程度を測定してその結果を図４に記載した。
【００８６】
図４に記載した通り、メースリグナンはドーパクロム生成を抑制する活性が優れているので、チロシナーゼ活性を抑制し得ることが分った（＊＊：Ｐ＜０．０１）。
【００８７】
さらに、前記＜実施例２＞にて分離されたアウストバイリグナン７及びリカリンＥを、それぞれＭｅｌａｎ−ａ細胞に処理して前記＜実験例１−１＞と同一な方法でドーパクロム生成程度を測定した結果、アウストバイリグナン７の場合約５４．８７％、リカリンＥの場合約６０．０４％程度、ドーパクロム生成が抑制されることが分った（結果未図示）。
【００８８】
従って、チロシナーゼドーパクロム生成に関与する酵素である点を考慮すれば、メースリグナン、アウストバイリグナン７及びリカリンＥはチロシナーゼ活性を阻害することにより、メラニン生成を抑制し得ることが分った。
【００８９】
＜実験例３：チロシナーゼ及びチロシナーゼ関連蛋白質（ＴＲＰ−１，ＴＲＰ−２）発現抑制＞
＜３−１：肉荳蒄抽出物のチロシナーゼ、ＴＲＰ−１及びＴＲＰ−２発現抑制＞
前記＜実施例１−１＞で製造された肉荳蒄エタノール抽出物が、チロシナーゼ、チロシナーゼ関連蛋白質１（tyrosinase related protein-1,TRP-1）及びチロシナーゼ関連蛋白質２（tyrosinase related protein-2,TRP-2）発現を抑制するか否かを確認する為に、ウェスタンブロット（Western blot）を利用して分析してブラッドフォード（Bradford）法を利用して蛋白質を定量した。
【００９０】
具体的に前記＜実験例１−１＞で肉荳蒄エタノール抽出物が処理された細胞から抽出された蛋白質を、１０％ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲルに電気泳動させ、ニトロセルロース膜（nitrocellulose membrance）でゲルの蛋白質を転移させた。５％脱脂粉乳を１時間常温で処理し、チロシナーゼ、ＴＲＰ−１及びＴＲＰ−２の１次抗体を５％脱脂粉乳に、１：１０００の比率で希釈して２時間常温で反応させた。１次抗体反応後１０分ずつ２回にわたってＴＢＳＴ（Tris-buffer Saline Tween 20）でゆさぶりながら洗滌した。それぞれの１次抗体を認知する２次抗体を５％脱脂粉乳に１：１０００になるように、希釈して１時間常温で反応させて１次抗体の時と同様に、１０分ずつ３回にわたってＴＢＳＴ（Tris-buffer Saline Tween 20）でゆさぶりながら洗滌した後、下記の化学発光法（chemiluminescence）で現像してその結果を図５に記載した。
【００９１】
図５に記載した通り、前記肉荳蒄エタノール抽出物はチロシナーゼ、ＴＲＰ−１及びＴＲＰ−２の発現を阻害することにより、メラニン生成を抑制し得ることが分った（＊＊：Ｐ＜０．０１）。
【００９２】
＜３−２：メースリグナンのチロシナーゼ、ＴＲＰ−１及びＴＲＰ−２発現抑制＞
前記＜実施例２−１＞で分離されたメースリグナンをＭｅｌａｎ−ａ細胞に処理して前記＜実験例３−１＞と同一な方法によりチロシナーゼ、ＴＲＰ−１及びＴＲＰ−２の発現を抑制するか、否かを確認してその結果を図６に記載した。
【００９３】
図６に記載した通り、前記メースリグナンはチロシナーゼ、ＴＲＰ−１及びＴＲＰ−２の発現を疎外することにより、メラニン生成を抑制し得ることが分った（＊＊：Ｐ＜０１）。
【００９４】
＜剤形例１：化粧品＞
＜１−１乃至１−３：栄養化粧水（ミルクローション）＞
前記＜実施例１＞で製造された肉荳蒄抽出物、肉荳蒄仮種皮抽出物又は前記＜実施例２＞で分離された化合物（メースリグナン、アウストバイリグナン７及びリカリンＥ）を下記表１の栄養化粧水剤形比率の通り通常的な方法により栄養化粧水を製造した。
【００９５】
【表１】
【００９６】
＜１−４乃至１−６：柔軟化粧水（スキンローション）＞
前記＜実施例１＞で製造された肉荳蒄抽出物、肉荳蒄仮種皮抽出物又は前記＜実施例２＞で分離された化合物（メースリグナン、アウストバイリグナン７及びリカリンＥ）を、下記表２の柔軟化粧水剤形比率の通り通常的な方法により柔軟化粧水を製造した。
【００９７】
【表２】
【００９８】
＜１−７乃至１−９：栄養クリーム＞
前記＜実施例１＞で製造された肉荳蒄抽出物、肉荳蒄仮種皮抽出物又は前記＜実施例２＞で分離された化合物（メースリグナン、アウストバイリグナン７及びリカリンＥ）を下記表３の栄養クリーム剤形比率の通り通常的な方法により栄養クリームを製造した。
【００９９】
【表３】
【０１００】
＜１−１０乃至１−１２：マッサージクリーム＞
前記＜実施例１＞で製造された肉荳蒄抽出物、肉荳蒄仮種皮抽出物又は前記＜実施例２＞で分離された化合物（メースリグナン、アウストバイリグナン７及びリカリンＥ）を下記表４のマッサージクリーム剤形比率の通り通常的な方法によりマッサージクリームを製造した。
【０１０１】
【表４】
【０１０２】
＜１−１３乃至１−１５：パック＞
前記＜実施例１＞で製造された肉荳蒄抽出物、肉荳蒄仮種皮抽出物又は前記＜実施例２＞で分離された化合物（メースリグナン、アウストバイリグナン７及びリカリンＥ）を下記表５のパック剤形比率の通り通常的な方法によりパックを製造した。
【０１０３】
【表５】
【０１０４】
＜１−１６乃至１−１８：ゲル＞
前記＜実施例１＞で製造された肉荳蒄抽出物、肉荳蒄仮種皮抽出物又は前記＜実施例２＞で分離された化合物（メースリグナン、アウストバイリグナン７及びリカリンＥ）を下記表６のゲル剤形比率の通り通常的な方法によりゲルを製造した。
【０１０５】
【表６】
【０１０６】
＜剤形例２：食品＞
＜２−１：健康食品の製造＞
前記＜実施例１＞で製造された肉荳蒄抽出物、肉荳蒄仮種皮抽出物又は前記＜実施例２＞で分離された化合物（メースリグナン、アウストバイリグナン７及びリカリンＥ）１０００ｍｇ、ビタミンＡアセテート７０μｇ、ビタミンＥ：１．０ｍｇ、ビタミンＢ１：０．１３ｍｇ、ビタミンＢ２：０．１５ｍｇ、ビタミンＢ６：０．５ｍｇ、ビタミンＢ１２：０．２ｍｇ、ビタミンＣ：１０ｍｇ、ビオチン１０μｇ、ニコチン酸アミド１．７ｍｇ、葉酸５０μｇ、パントテン酸カルシウム０．５ｍｇ、硫酸第１鉄１．７５ｍｇ、酸化亜鉛０．８２ｍｇ、炭酸マグネシウム２５．３ｍｇ、第１リン酸カルシウム１５ｍｇ、第２リン酸カルシウム５５ｍｇ、クエン酸カルシウム９０ｍｇ、炭酸カルシウム１００ｍｇ、塩化マグネシウム２４．８ｍｇを混合して製造することができ、その配合比を任意に変更実施しても良く、通常の健康食品製造方法により、前記の成分を混合した後、顆粒を製造し、通常の方法により健康食品組成物製造に使用できる。
【０１０７】
＜２−２：健康飲料の製造＞
前記＜実施例１＞で製造された肉荳蒄抽出物、肉荳蒄仮種皮抽出物又は前記＜実施例２＞で分離された化合物（メースリグナン、アウストバイリグナン７及びリカリンＥ）１０００ｍｇ、クエン酸１０００ｍｇ、オリゴ糖１００ｇ、梅実濃縮液２ｇ、タウリン１ｇに精製水を加えて全体９００ｍＬを通常の健康飲料製造方法により前記の成分を混合し、約１時間８５℃で撹拌加熱して作られた溶液を濾過して滅菌された２Ｌ容器に収得して密封滅菌冷蔵保管して健康飲料組成物製造に使用し得る。
【０１０８】
＜２−３：チューインガム＞
ガムベース２０重量％、砂糖７６．９重量％、香料１重量％及び水２重量％と、前記＜実施例１＞で製造された肉荳蒄抽出物、肉荳蒄仮種皮抽出物又は前記＜実施例２＞で分離された化合物（メースリグナン、アウストバイリグナン７及びリカリンＥ）０．１重量％を配合して通常の方法によりチューインガムを製造した。
【０１０９】
＜２−４：キャンデー＞
砂糖６０重量％、水飴３９．８重量％及び香料０．１重量％と、前記＜実施例１＞で製造された肉荳蒄抽出物、肉荳蒄仮種皮抽出物又は前記＜実施例２＞で分離された化合物（メースリグナン、アウストバイリグナン７及びリカリンＥ）０．１重量％を配合して通常の方法によりキャンデーを製造した。
【０１１０】
＜２−５：ビスケット＞
薄力１級２５．５９重量％、重力１級２２．２２重量％、精白糖４．８０重量％、食塩０．７３重量％、ブドウ糖０．７８重量％、パームショートニング１１．７８重量％、アンモニウム１．５４重量％、重曹０．１７重量％、重亜硫酸ナトリウム０．１６重量％、米粉１．４５重量％、ビタミンＢ１：０．０００１重量％、ビタミンＢ２：０．０００１重量％、ミルク香０．０４重量％、水２０．６９９８重量％、全脂粉乳１．１６重量％、代用粉乳０．２９重量％、第１リン酸カルシウム０．０３重量％、散布塩０．２９重量％及び噴霧乳７．２７重量％と前記＜実施例１＞で製造された肉荳蒄抽出物、肉荳蒄仮種皮抽出物又は前記＜実施例２＞で分離された化合物（メースリグナン、アウストバイリグナン７及びリカリンＥ）１重量％を配合して通常の方法によりビスケットを製造した。
【０１１１】
＜剤形例３：医薬品＞
＜３−１：散剤＞
前記＜実施例１＞で製造された肉荳蒄抽出物、肉荳蒄仮種皮抽出物又は前記＜実施例２＞で分離された化合物（メースリグナン、アウストバイリグナン７及びリカリンＥ）５０ｍｇ、結晶セルロース２ｇを混合した後、通常の散剤製造方法により機密包に充填して散剤を製造した。
【０１１２】
＜３−２：錠剤＞
前記＜実施例１＞で製造された肉荳蒄抽出物、肉荳蒄仮種皮抽出物又は前記＜実施例２＞で分離された化合物（メースリグナン、アウストバイリグナン７及びリカリンＥ）５０ｍｇ、結晶セルロース４００ｍｇ、ステアリン酸マグネシウム５ｍｇを混合した後、通常の錠剤剤製造方法により打錠して錠剤を製造した。
【０１１３】
＜３−３：カプセル剤＞
前記＜実施例１＞で製造された肉荳蒄抽出物、肉荳蒄仮種皮抽出物又は前記＜実施例２＞で分離された化合物（メースリグナン、アウストバイリグナン７及びリカリンＥ）３０ｍｇ、乳清蛋白質１００ｍｇ、結晶セルロース４００ｍｇ、ステアリン酸マグネシウム６ｍｇを混合した後、通常のカプセル剤製造方法によりゼラチンカプセルに充填してカプセル剤を製造した。
【０１１４】
＜３−４：注射剤＞
通常の注射剤製造方法により、活性成分を注射用蒸留水に溶解し、ｐＨを約７．５に調節した後、前記＜実施例１＞で製造された肉荳蒄抽出物、肉荳蒄仮種皮抽出物又は前記＜実施例２＞で分離された化合物（メースリグナン、アウストバイリグナン７及びリカリンＥ）１００ｍｇ、注射用蒸留水、ｐＨ調節剤を混合して２ｍＬ容量のアンプルに充填、滅菌して注射剤を製造した。
【０１１５】
＜適用例＞
前記＜剤形例１−１＞乃至＜剤形例１−１８＞により製造された栄養化粧水、柔軟化粧水、栄養クリーム、マッサージクリーム、パック及びゲルによる色素沈着抑制効果を下記の通り検証した。
【０１１６】
先ず、健康な男女２０名ずつを選定して、両腕の下膊部に径７ｍｍ大の孔が６個ずつ２条に窪んだアルミニウムホイルを着けて、腕より１０ｃｍ離れた距離でORIEL solar simulator 1000Wを使用して６０Ｊ／ｃｍ２の光量を照射した。照射前に７０％エタノール水溶液で照射部位を綺麗に洗滌した。照射後照射部位に１日３回ずつ美白成分を含有する＜剤形例１−１＞乃至＜剤形例１−１８＞を塗布した。３週間塗布後色素沈着度を肉眼で判定し、前記剤形例が対照群に比べて色素沈着を抑制した程度を著しい効果、有効、無効の３段階で評価し、さらに、皮膚副作用発生可否を観察した後その結果を表７に示した。
【０１１７】
【表７】
【０１１８】
前記表７に記載した通り、本発明に伴う美白成分を含有する皮膚美白用組成物を彼試験者２０名の中で最少１２名以上に対して美白効果を示した。
【産業上の利用可能性】
【０１１９】
前記化学式１乃至化学式３からなる群より選ばれたリグナン系化合物、又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物は、メラニン生成及びチロシナーゼ活性を抑制することにより、卓越な美白効果があるので、美白用化粧料組成物、食品組成物又は薬学的組成物の有効な成分で利用され得る。
【技術分野】
【０００１】
本出願は２００７年１０月１７日付で出願された大韓民国特許出願第２００７−０１０４７８３号を優先権主張し、前記明細書全体は本発明の参考文献である。
【０００２】
本発明はリグナン系化合物又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物の新規な用途に関するものである。具体的に本発明はリグナン系化合物又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物を含有することを特徴とする美白用組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００３】
人間の皮膚色はメラニン色素を作るメラノサイト（melanocyte）の活動性、血管の分布、皮膚の厚さ及びカロチノイド、ビリルビン等人体内外の色素含有有無のような種々な要因等により決定されるものの、その中でメラノサイトでチロシナーゼ等の種々の酵素が作用して生成されるメラニンと言う黒色色素が最も重要である。
【０００４】
前記メラニン色素の形成には、遺伝的要因、ホルモン分泌、ストレス等と関連した生理的要因及び紫外線照射等のような環境的要因が影響を及ぼす。メラニンは皮膚の外郭である表皮層に存在して、紫外線等から真皮以下の皮膚器官を保護してくれると同時に、皮膚生体内に生じた自由ラジカル等を捉えてくれる役割をして、皮膚内蛋白質と遺伝子等を保護してくれる重要な機能を有しているものの、メラニンが過剰生産されることにより、しみ、そばかす等を形成するばかりでなく、皮膚老化を促進し、皮膚癌誘発にも重要な作用をするものとして知られている。
【０００５】
前記しみ、そばかす、色素沈着のような皮膚色素異常沈着症状と、紫外線露出等により発生する過度なメラニン色素沈着を治療又は軽減させる為に、以前からアスコルビン酸、コジ酸、アルブチン、ヒドロキノン、グルタチオン又はこれらの誘導体、チロシナーゼ阻害活性を有する化合物を化粧料や医薬品に配合使用してきたが、これらは不十分な美白効果、皮膚に対する安定性問題、化粧料に配合する場合、発生する剤形及び安定性問題等により、その使用が制限されている。ここに、安定性が優れて美白活性が優れた天然物由来の物質に対する研究が進行されている。
【０００６】
一方、肉荳蒄（nutmeg）は熱帯地方で栽培される多年生植物であるミリスチカフラグランス（Myristica fragrans）の実にして、古くから香辛料として利用されてきた。
【０００７】
さらに、肉荳蒄仮種皮は前記ミリスチカフラグランスの実の表皮部分を示すものにして、ヘリコバクターピロリ菌の成長抑制活性（In Vivo., 17;541-4, 2003）、肝の解毒機作の活性化（Food Chem.Toxicol., 31;517-21.1993）、皮膚疣の化学的予防作用（Cancer Lett.,56:59-63,1991）、抗癌活性（Jpn.J.Pharmacol., 49;155-63,1999）があるものとして知られている。しかしながら、肉荳蒄又は肉荳蒄仮種皮が美白活性があるか否かに対しては知られたことが全くない。
【０００８】
特に、前記肉荳蒄又は肉荳蒄仮種皮から抽出されているメースリグナンは代表的なリグナン系化合物であって（Phytochemistry,59:169-173,2002）、アポトシス（apoptosis）を誘導するカスパーゼ（caspase）−３活性増進作用（Biol.Pharm.Bull.,27:1305-1307,2004）、口腔微生物に対する抗菌活性（大韓民国特許公開特許公報１０−６９１７９２号）、抗炎症作用（大韓民国特許公開特許公報１０−０５７９７５２号）、抗にきび機能（大韓民国特許公開特許公報１０−０５６７４３１号）、脳細胞脂質過酸化及び活性酸素生成抑制効果（Biochem.Biophys.Res.Commu., 331:1264-1269）等が報告されている。しかしながら、メースリグナンを含めて前記肉荳蒄又は肉荳蒄仮種皮から抽出できるアウストバイリグナン７又はリカリンＥが美白活性があるか否かに対しては知られていない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
ここに、本発明者等は天然物由来の美白活性がある物質に関して研究を重ねる中でリグナン系化合物又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物が、優れた美白活性があることを見出だし本発明を完成した。
【００１０】
従って、本発明の目的は下記化学式１乃至化学式３からなる群より選ばれたリグナン系化合物又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物を含有することを特徴とする美白用化粧料組成物を提供することである。
【００１１】
【化１】
【００１２】
本発明の他の目的は前記化学式１乃至化学式３からなる群より選ばれたリグナン系化合物、又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物を含有することを特徴とする美白用食品組成物を提供することである。
【００１３】
本発明のさらに、他の目的は前記化学式１乃至化学式３からなる群より選ばれたリグナン系化合物、又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物を含有することを特徴とする美白用薬学的組成物を提供することである。
【００１４】
本発明のさらに、他の目的は前記化学式１乃至化学式３からなる群より選ばれたリグナン系化合物、又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物の化粧料組成物製造の為の用途を提供することである。
【００１５】
本発明のさらに、他の目的は前記化学式１乃至化学式３からなる群より選ばれたリグナン系化合物、又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物の食品組成物製造の為の用途を提供することである。
【００１６】
本発明のさらに、他の目的は前記化学式１乃至化学式３からなる群より選ばれたリグナン系化合物、又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物の薬学的組成物製造の為の用途を提供することである。
【００１７】
本発明のさらに、他の目的は前記化学式１乃至化学式３からなる群より選ばれたリグナン系化合物、又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物のメラニン生成を抑制する方法を提供することである。
【００１８】
本発明のさらに、他の目的は前記化学式１乃至化学式３からなる群より選ばれたリグナン系化合物、又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物のチロシナーゼ活性を抑制する方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１９】
本発明は、前記のような目的を達成する為に、下記化学式１乃至化学式３からなる群より選ばれたリグナン系化合物、又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物を含有することを特徴とする美白用化粧料組成物を提供する。
【００２０】
【化２】
【００２１】
本発明は、前記化学式１乃至化学式３からなる群より選ばれたリグナン系化合物、又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物を含有することを特徴とする美白用食品組成物を提供する。
【００２２】
本発明は、前記化学式１乃至化学式３からなる群より選ばれたリグナン系化合物、又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物を含有することを特徴とする美白用薬学的組成物を提供する。
【００２３】
本発明は、前記化学式１乃至化学式３からなる群より選ばれたリグナン系化合物、又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物の化粧料組成物製造の為の用途を提供する。
【００２４】
本発明は、前記化学式１乃至化学式３からなる群より選ばれたリグナン系化合物、又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物の食品組成物製造の為の用途を提供する。
【００２５】
本発明は、前記化学式１乃至化学式３からなる群より選ばれたリグナン系化合物、又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物の薬学的組成物製造の為の用途を提供する。
【００２６】
本発明は、前記化学式１乃至化学式３からなる群より選ばれたリグナン系化合物、又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物のメラニン生成を抑制する方法を提供する。
【００２７】
本発明は、前記化学式１乃至化学式３からなる群より選ばれたリグナン系化合物、又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物のチロシナーゼ活性を抑制する方法を提供する。
【００２８】
以下、本発明の内容をより詳細に説明する。
【００２９】
本発明で“肉荳蒄（nutmeg）”は熱帯地方で栽培される多年生植物であるミリスチカフラグランス（Myristica fragrans）の実にして、“肉荳蒄仮種皮”は前記ミリスチカフラグランスの実の皮の部分を言う。
【００３０】
本発明で“肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物”は、肉荳蒄又は肉荳蒄仮種皮から由来した下記リグナン系化合物を含有する抽出物を言う。前記リグナン系化合物を含有できるとすれば、前記肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物の製造方法には制限がないものの、好ましくは、肉荳蒄又は肉荳蒄仮種皮から水、Ｃ１−Ｃ６の有機溶媒及び亜臨界又は超臨界流体からなる群より選ばれた一つ以上の溶媒で抽出することにより製造し得る。さらに、必要とする場合、当業界に公知された方法により、濾過及び濃縮段階を追加的に含めて製造し得る。
【００３１】
前記Ｃ１−Ｃ６の有機溶媒はこれに限定はされないものの、好ましくは、Ｃ１−Ｃ６のアルコール、アセトン、エーテル、ベンゼン、クロロホルム、エチルアセテート、メチレンクロライド、ヘキサン、シクロヘキサン、石油エーテルからなる群より選ばれたことを言う。
【００３２】
さらに、前記“超臨界流体”とは、一般的な条件では気体状態であるが、臨界温度と臨界圧力以上では流体であることを言う。前記にて亜臨界流体とは、亜臨界液体と気体を含み、特に、亜臨界液体は温度が超臨界温度と飽和温度より低い状態の流体であって、亜臨界気体は温度が飽和温度より高く、圧力は超臨界圧力より低い状態の流体を言う。前記超臨界流体及び亜臨界流体は医薬品工業、食品工業、化粧品？香料工業、化学工業、エネルギー工業及びその他多様な分野に応用されている。本発明で使用し得る超臨界流体及び亜臨界流体は、特別に制限されるものではなく、例えば、二酸化炭素、窒素、亜酸化窒素、メタン、エチレン、プロパン、プロピレン、石油エーテル、エチルエーテル及びシクロヘキサン等を利用し得る。特に、二酸化炭素は大量購入が可能で、比較的安価で、非爆発性で、加工用として十分に安定的な長所の為特に好ましい。前記二酸化炭素は臨界温度が３１．１℃で臨界圧力は７３．８気圧である。
【００３３】
本発明の一実施例では、乾燥した肉荳蒄又は肉荳蒄仮種皮を粉砕し、これにエタノール、ヘキサン又はクロロホルム溶媒を利用して抽出して濾過及び濃縮段階を経て肉荳蒄又は肉荳蒄仮種皮エタノール、ヘキサン又はクロロホルム抽出物を製造した。さらに、超臨界流体として二酸化炭素（ＣＯ２）を利用した超臨界流体抽出機に肉荳蒄を投与して肉荳蒄超臨界抽出物を製造した（＜実施例１＞参照）。
【００３４】
本発明で”リグナン系化合物？とは、下記化学式１乃至３からなる群より選ばれた化合物を言う。具体的に化学式１で表示される化合物はメースリグナン（macelignan, 4-((2S,3R)-4-Benzo[1,3]dioxol-5-yl-2,3-dimethyl-butyl)-2-methoxyphenol）を言い、化学式２で表示される化合物はアウストバイリグナン７（austobailignan 7,4-(1-Benzo[1,3]dioxol-5-yl-2-methyl-butoxymethyl)-2-methoxy-phenol）を言い、化学式３で表示される化合物はリカリンＥ（licarin E,5-(7-methoxy-3-methyl-5-propenyl-2,3-dihydro-benzofuran-2-yl)-benzo[1,3]dioxole）を言う。
【００３５】
【化３】
【００３６】
前記リグナン系化合物は公知の合成方法を利用して製造することができ、前記肉荳蒄又は肉荳蒄仮種皮から抽出して分離精製することにより収得し得る。前記肉荳蒄又は肉荳蒄仮種皮抽出物からリグナン系化合物の分離及び精製は、これに限定はされないものの、好ましくは、シリカゲル（silica gel）又は活性アルミナ（alumina）等の各種合成樹脂を充填したカラムクロマトグラフィー（column chromatography）及び高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）等を単独或いは併行して使用し得る。しかしながら、リグナン系化合物の抽出、分離及び精製方法は必ずしも前記の方法に限定されるものではない。
【００３７】
本発明の一実施例では、乾燥した肉荳蒄又は肉荳蒄仮種皮抽出物から、公知されたシリカゲルカラムクロマトグラフィーを利用して前記メースリグナン、アウストバイリグナン７又はリカリンＥを分離した（＜実施例２＞参照）。
【００３８】
前記化学式１乃至化学式３からなる群より選ばれたリグナン系化合物、又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物は優れた美白活性を有している。
【００３９】
具体的に前記リグナン系化合物又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物をメラニン細胞（melanocyte）であるＭｅｌａｎ−ａ細胞に投与した結果、メラニン生成が顕著に抑制され（＜実験例１＞参照）、メラニン生成に関与する酵素であるチロシナーゼ（tyrosinase）活性を抑制し（＜実験例２＞参照）、前記チロシナーゼ及びチロシナーゼ関連蛋白質（ＴＲＰ−１，ＴＲＰ−２）発現が抑制されることが分った（＜実験例３＞参照）。
【００４０】
従って、前記リグナン系化合物又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物は美白活性が優れていることから化粧料組成物、食品組成物又は薬学的組成物の有効成分として利用し得る。
【００４１】
前記本発明の化粧料組成物は、前記化学式１乃至化学式３からなる群より選ばれたリグナン系化合物又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物を有効成分として含有し、皮膚学的に許容可能な賦形剤と共に、基礎化粧品組成物（化粧水、クリーム、エッセンス、クレンジングフォーム及びクレンジングウォータのような洗顔剤、パック、ボディオイル）、色素化粧品組成物（ファウンデーション、リップスティック、マスカラ、メーキャップベース）、頭髪製品組成物（シャンプー、リンス、ヘアコンデショーナ、ヘアゲル）及び石鹸等の形態で製造できる。
【００４２】
前記賦形剤には、これに限定はされないものの、例えば、皮膚軟化剤、皮膚浸透増強剤、着色剤、芳香剤、乳化剤、濃化剤及び溶媒を含め得る。さらに、香料、色素、殺菌剤、酸化防止剤、防腐剤及び保湿剤等を追加的に含めることができ、物性改善を目的に漸増剤、無機塩類、合成高分子物質等を含め得る。例えば、本発明の化粧料組成物として洗顔剤及び石鹸を製造する場合には、通常の洗顔剤及び石鹸ベースに前記リグナン系化合物又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物を添加して容易に製造し得る。クリームを製造する場合には、一般的な水中油滴型（Ｏ／Ｗ）のクリームベースに前記リグナン系化合物、又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物又はこれに塩を添加して製造し得る。これに、香料、キレート剤、色素、酸化防止剤、防腐剤等と、物性改善を目的とした蛋白質、ミネラル、ビタミン等合成又は天然素材を追加的に添加し得る。
【００４３】
本発明の化粧料組成物に含有される前記リグナン系化合物、又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物の含量は、これに限定はされないものの、全体組成物総重量に対して０．００１乃至１０重量％であることが好ましく、０．０１乃至 ５重量％であることがより好ましい。前記含量が０．００１重量％未満では、目的とする美白効果を期待できず、１０重量％超過では安全性又は剤形上の製造に困難性があり得る。
【００４４】
一方、本発明の食品組成物は機能性食品（functional food）、栄養補助剤（nutritional supplement）、健康食品（health food）及び食品添加剤（food additives）等の全ての形態を含む。
【００４５】
前記類型の食品組成物は当業界に公知された通常の方法により、多様な形態で製造し得る。これに限定はされないものの、例えば、健康食品には、前記リグナン系化合物又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物そのものを、お茶、ジュース及びドリンクの形態で製造して飲用できるように、液状化、顆粒化、カプセル化及び粉末化して摂取し得る。さらに、前記リグナン系化合物又は肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物と美白効果があるとして知られた、公知の活性成分と共に、混合して組成物の形態で製造できる。さらに、機能性食品には、これに限定はされないものの、飲料（アルコール性飲料を含む）、果実及びその加工食品（例：果実缶詰、瓶詰、ジャム、ママレード等）、魚類、肉類及びその加工食品（例：ハム、ソーセージ、コーンビーフ等）、パン類及び麺類（例：うどん、ソバ、ラーメン、スパゲッティ、マカロニ等）、果汁、各種ドリンク、クッキー、飴、乳製品（例：バター、チーズ等）、食用食物油脂、マーガリン、植物性蛋白質、レトルト食品、冷凍食品、各種調味料（例：味噌、醤油、ソース等）等に前記リグナン系化合物又は肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物を添加して製造し得る。さらに、前記リグナン系化合物又は肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物を食品添加剤の形態で使用する為には、粉末又は濃縮液形態で製造して使用し得る。
【００４６】
本発明の食品組成物の内、前記リグナン系化合物又は肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物の好ましい含有量としは、これに限定はされないものの、好ましくは、最終的に製造された食品中、０．０１乃至５０重量％である。より好ましくは、本発明の食品組成物は特に、美白効果があるとして知られた活性成分と共に混合して健康食品の形態で製造し得る。
【００４７】
一方、前記本発明の薬学的組成物は、前記リグナン系化合物又は肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物を単独で含有するか、又は一つ以上の薬学的に許容される担体、賦形剤又は希釈剤を追加的に含有し得る。
【００４８】
薬学的に許容される担体には、例えば、経口投与用担体又は非経口投与用担体を追加的に含め得る。経口投与用担体はラクトース、澱粉、セルロース誘導体、マグネシウムステアレート、ステアリン酸等を含め得る。さらに、非経口投与用担体は、水、適合したオイル、食塩水、水性グルコース及びグリコール等を含め得る。安定化剤及び保存剤を追加的に含め得る。適合した安定剤には、亜硫酸水素ナトリウム、亜硫酸ナトリウム又はアスコルビン酸のような抗酸化剤がある。適合した保存剤には、ベンズアルコニウムクロライド、メチルー又はプルピルーパラベン及びクロロブタノールがある。その他の薬学的に許容される担体には、下記の文献に記載されていることを参考にできる（Remington's Pharmaceutical Sciences,19th ed., Mack Publishing Company, Easton,PA,1995）。
【００４９】
本発明の薬学的組成物は人間を始め、哺乳動物にどのような方法でも投与し得る。例えば、経口又は非経口的に投与できる。非経口投与方法にはこれに限定はされないものの、静脈内、筋肉内、動脈内、骨髄内、隔膜内、心臓内、経皮、皮下、腹腔内、鼻孔内、腸管、局所、舌下又は直腸内投与でもあり得る。本発明の薬学的組成物は上述したような投与経路により、経口投与用又は非経口投与用製剤に剤形化し得る。経口投与用製剤の場合に本発明の組成物は粉末、顆粒、錠剤、丸剤、糖衣錠剤、カプセル剤、液剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリ剤、懸濁液等に当業界に公知された方法を利用して剤形化し得る。例えば、経口用製剤は活性成分を個体賦形剤と配合し、これを粉砕して適合した補助剤を添加した後、顆粒混合物に加工することにより、錠剤又は糖衣錠剤を収得し得る。適合した賦形剤の例には、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトル、マンニトール、キシリトール、エリスリトール及びマルチトール等を含む糖類とトウモロコシ澱粉、小麦澱粉、米澱粉及び馬鈴薯澱粉等を含む澱粉類、セルロース、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース及びヒドロキシプロピルメチルセルロース等を含むセルロース類、ゼラチン、ポリビニルピロリドン等のような充填剤が含まれ得る。さらに、場合によっては、架橋結合ポリビニルピロリドン、寒天、アルギン酸又はナトリウムアルギネート等を崩解剤として添加し得る。さらには、本発明の薬学的組成物は抗凝集剤、潤滑剤、湿潤剤、香料、乳化剤及び防腐剤等を含め得る。非経口投与用製剤化の場合には、注射剤、クリーム剤、ローション剤、外用軟膏剤、オイル剤、保湿剤、ゲル剤、エアロゾル及び鼻孔吸込み剤の形態で当業界に公知された方法により剤形化し得る。これらの剤形は、全ての製薬化学に一般的に、公知された処方書である文献（Remington's Pharmaceutical Sciences,15th Edition,1975. Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania 18042,Chapter 87:Blaug,Seymour）に記載されている。
【００５０】
本発明の薬学的組成物の総有効量は単一投与量（single dose）で患者に投与することができ、多重投与量（multiple dose）で長期間投与する分割治療方法（fractionated treatment protocol）により投与し得る。本発明の薬学的組成物は、疾患の程度によって有効成分の含量を異にすることができる。非経口投与時には前記リグナン系化合物又は肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物を基準にして、１日に体重１ｋｇ当り好ましくは０．０１乃至５０ｍｇ、さらに好ましくは、０．１乃至３０ｍｇの量で投与されるように、さらに、経口投与時には、前記リグナン系化合物又は肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物を基準にして、１日に体重１ｋｇ当り好ましくは０．０１乃至１００ｍｇ、さらに好ましくは、０．１乃至５０ｍｇの量で投与されるように１乃至数回に分けて投与し得る。しかしながら、前記リグナン系化合物又は肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物の用量は、薬学的組成物の投与経路及び治療回数ばかりでなく、患者の年齢、体重、健康状態、性別、疾患の重症度、食餌及び排泄率等多様な要因等を考慮して患者に対する有効投与量が決定されるものであることから、このような点を考慮するに、当分野の通常的な知識を有する者であれば、前記リグナン系化合物又は肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物を美白の為の特定した用途に伴う適切な有効投与量を決定し得るであろう。本発明に伴う薬学的組成物は本発明の効果を示す限りその剤形、投与経路及び投与方法に特別な制限はされない。
【００５１】
さらに、前記化学式１乃至化学式３からなる群より選ばれたリグナン系化合物又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物は、美白効果が優れていることから美白用化粧料組成物、食品組成物又は薬学的組成物製造の為に利用され得る。
【００５２】
前記リグナン系化合物又は肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物を利用して、化粧料組成物、食品組成物又は薬学的組成物を製造する方法及び前記組成物に対する前記リグナン系化合物、又は肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物の含量は前述した通りである。
【００５３】
さらに、化学式１乃至化学式３からなる群より選ばれた、リグナン系化合物又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物は、メラニン生成抑制及びチロシナーゼ活性抑制方法に利用され得る。
【００５４】
前記リグナン系化合物又は肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物を、メラニン生成抑制及びチロシナーゼ活性抑制方法に利用する為に、これに限定はされないものの、これを必要とする個体に有効な量で投与することができる。
【００５５】
前記“必要とする個体”とは、メラニン生成及びチロシナーゼ活性が抑制されることにより、美白が必要な哺乳動物を言い、好ましくは人間を言う。さらに、前記“有効な量”とは、前記個体内でメラニン生成及びチロシナーゼ活性が抑制され、美白効果を呈する量を言う。前記有効な量で投与する為の投与方法及び投与量は具体的に前記記述した通りである。
【発明の効果】
【００５６】
以上察した通り、前記化学式１乃至化学式３からなる群より選ばれたリグナン系化合物又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物は、メラニン生成及びチロシナーゼ活性を抑制することにより、卓越な美白効果があるので美白用化粧料組成物、食品組成物又は薬学的組成物の有効な成分として利用され得る。
【図面の簡単な説明】
【００５７】
【図１】図１は肉荳蒄エタノール抽出物がメラニン生成を抑制する活性があるか否かを確認した結果である。
【図２】図２はメースリグナン化合物がメラニン生成を抑制する活性があるか否かを確認した結果である。
【図３】図３は肉荳蒄エタノール抽出物がメラニン生成に関与する酵素であるチロシナーゼ活性があるか否かを確認した結果である。
【図４】図４はメースリグナン化合物がメラニン生成に関与する酵素であるチロシナーゼ活性があるか否かを確認した結果である。
【図５】図５は肉荳蒄エタノール抽出物がチロシナーゼ及びチロシナーゼ関連蛋白質（ＴＲＰ−１，ＴＲＰ−２）発現を抑制する活性があるか否かを確認した結果である。
【図６】図６はメースリグナン化合物がチロシナーゼ及びチロシナーゼ関連蛋白質（ＴＲＰ−１，ＲＰ−２）発現を抑制する活性があるか否かを確認した結果である。
【発明を実施するための形態】
【００５８】
以下、実施例を挙げて本発明の構成及び効果をより具体的に説明する。しかしながら、これら実施例は本発明に対する理解を促す為に例示の目的にのみ提供したものであって、本発明の範疇及び範囲が下記実施例により制限されるものではない。
【００５９】
＜実施例１：美白活性がある肉荳蒄又は肉荳蒄仮種皮抽出物の製造＞
＜１−１．肉荳蒄抽出物の製造＞
先ず、肉荳蒄エタノール抽出物を製造する為に、乾燥した肉荳蒄をミキサーで粉砕し、粉砕した肉荳蒄試料１００ｇをエタノール１Ｌに入れて４８時間常温で冷浸して抽出した。抽出した試料はワットマン（Whatman）２番濾過紙で濾過し、濾過された抽出液を真空回転濃縮機で濃縮して溶媒成分を除去して肉荳蒄エタノール抽出物を収得した。
【００６０】
さらに、抽出溶媒で前記エタノールの代わりにメタノール、ヘキサン又は平成22年4月2日クロロホルムを使用して前記と同一な方法を利用することにより、肉荳蒄メタノール、ヘキサン又はクロロホルム抽出物を収得した。
【００６１】
一方、超臨界流体抽出機を使用して肉荳蒄超臨界抽出物を製造した。具体的に超臨界流体で二酸化炭素を利用して抽出温度５０℃、抽出圧力は２００ｂａｒであって抽出物から溶媒を除去することにより製造した。
【００６２】
＜１−２：肉荳蒄仮種皮抽出物の製造＞
乾燥した肉荳蒄仮種皮をミキサーで粉砕し、粉砕した肉荳蒄仮種皮試料１００ｇをエタノール１Ｌに入れて４８時間常温で冷浸し、前記＜実施例１−１＞と同一な方法を利用して抽出することにより肉荳蒄仮種皮エタノール抽出物を収得した。
【００６３】
＜実施例２：肉荳蒄又は肉荳蒄仮種皮抽出物から美白活性がある化合物の分離＞
＜２−１：メースリグナン（macelignan）分離＞
【００６４】
前記＜実施例１−１＞でエタノール濃縮された肉荳蒄エタノール抽出物と、エチルアセテートを混合してエチルアセテート溶解性成分を抽出し、エチルアセテートを除去してエチルアセテート溶解性成分を濃縮した。シリカゲルを６ｘ１５ｃｍに充填したカラムにおいて、ヘキサン、エチルアセテートを１０：１（ｖ／ｖ）の比率で混合した溶媒システムを利用して非活性物質等を除去し、これをさらに、ヘキサン、エチルアセテートをそれぞれ２０：１（ｖ／ｖ）の比率で混合した溶媒の分画物を得た後、Ｒｐ−１８カラムクロマトグラフィーを利用して８０％メタノールでさせて濃縮液乾燥し、最終的に純粋な単一美白活性物質である下記化学式１のメースリグナン（macelignan,4-((2S, 3R)-4-Benzo[1,3]dioxol-5-yl-2,3-dimethyl-butyl)-2-methoxyphenol）を分離した。
【００６５】
【化４】
【００６６】
＜２−２：アウストバイリグナン７の分離＞
前記実施例＜１−２＞から得た濃縮された肉荳蒄仮種皮エタノール抽出物をエチルアセテート、ブタノール、水で分画した。エチルアセテート分画物（１０．２９ｇ）をシリカゲルカラムクロマトグラフィーを利用して、クロロホルムとエチルアセテートを９：１（ｖ／ｖ）の比率で混合した溶媒で溶出させ、分画物Ｖ（０．５２）と分画物ＶＩ（０．１９ｇ）を得た。分画物ＶＩをクロロホルムとエチルアセテートとアセトン３０：１：２（ｖ／ｖ／ｖ）の比率で混合した溶媒でカラムクロマトグラフィーして、分画物ＶＩ−Ｂ（０．５２ｇ）を得た。以降、分画物ＶＩ−Ｂをリサイクリング高性能液体クロマトグラフィーを利用して１００％エタノールで溶出することにより、最終的に純粋な単一美白活性物質である下記化学式２のアウストバイリグナン７（4-(1-Benzo[1, 3]dioxol-5-yl-2-methyl-butoxymethyl)-2-methoxy-phenol）０．０１１ｇを分離した。
【００６７】
【化５】
【００６８】
＜２−３：リカリンＥの分離＞
前記実施例＜１−２＞から得た濃縮された肉荳蒄仮種皮エタノール抽出物をエチルアセテート、ブタノール、水で分画した。エチルアセテート分画物（１８．４４ｇ）をシリカゲルカラムクロマトグラフィーを利用して、クロロホルムとエチルアセテートを９：１（ｖ／ｖ）の比率で混合した溶媒で溶出させ、分画物ＩＩ（３．０４ｇ）を得た。分画物ＩＩをクロロホルムとヘキサンとエチルアセテートとアセトン１５：１０：０．１：０．１（ｖ／ｖ／ｖ／ｖ）の比率で混合した溶媒でカラムクロマトグラフィーして、分画物ＩＩ−Ｂ（０．４Ｇ）を得た。以降、分画物ＩＩ−Ｂをリサイクリング高性能液体クロマトグラフィーを利用して１００％メタノールで溶出することにより、最終的に純粋な単一美白活性物質である下記化学式３のリカリンＥ（5-(7-Methoxy-3-methyl-5-propenyl-2, 3-dihydro-benzofuran-2-yl)-benzo[1, 3]dioxle）０．０１６ｇを分離した。
【００６９】
【化６】
【００７０】
＜実験例１：メラニン生成抑制活性＞
＜１−１：肉荳蒄又は肉荳蒄仮種皮抽出物のメラニン生成抑制＞
先ず、前記＜実施例１−１＞で製造された肉荳蒄エタノール抽出物がメラニン生成抑制活性があるか否かを確認した。
【００７１】
具体的に１０％ＦＢＳと２μＭのＴＰＡ（phorbol 12-myristate 13-acetate）が含有されたＲＰＭＩ１６４０で６−ウェルプレート（メラニン定量）に２×１０５ｃｅｌｌ（最終嵩３ｍＬ）のＭｅｌａｎ−ａ細胞を入れ、１０％ＣＯ２培養器（MCO-20AIC,Sanyo）で３７℃で２４時間培養した。前記培養後培地を除去し、ＲＰＭＩ１６４０培地に前記＜実施例１−１＞で製造された肉荳蒄エタノール抽出物を添加して、３日間毎日処理した。５日後６−ｗｅｌｌプレートで培養された培地を除去し、０．２５％ｔｒｙｐｓｉｎ−ＥＤＴＡ（Sigma Chemical Co.）溶液を処理して細胞ペレット（ｐｅｌｌｅｔ）を回収して１．５ｍＬチューブに移して１０．０００ｒｐｍで１０分間遠心分離して上澄液を除去した。収得したペレットを６０℃で乾燥させ、１ＮのＮａＯＨ１００μＬを入れて細胞内メラニンを溶解させた。この溶液をＰＢＳで希釈した後、ＥＬＩＳＡ ｒｅａｄｅｒ ４７５ｎｍで吸光度を測定して下記数学式１により、メラニン含量を求めてその結果を図１に記載した。この際、肉荳蒄エタノール抽出物を添加剤しない群を対照群とした。
【００７２】
【数１】
【００７３】
図１に記載された通り、肉荳蒄エタノール抽出物はメラニン生成を抑制する活性が優れているので美白効果が卓越であることが分った（＊＊：Ｐ＜０．０１）。
【００７４】
さらに、前記実施例＜１−１＞で製造された肉荳蒄ヘキサン抽出物、クロロホルム抽出物、超臨界抽出物及び前記実施例＜１−２＞で製造された肉荳蒄仮種皮エタノール抽出物４０μｇ／ｍＬをそれぞれＭｅｌａｎ−ａ細胞に処理して、前記と同一な方法でメラニン生成程度を測定した結果、肉荳蒄ヘキサン抽出物の場合約５３．７４％、肉荳蒄クロロホルム抽出物の場合約６６．９３％、肉荳蒄超臨界抽出物の場合約７３．８０％、肉荳蒄仮種皮エタノール抽出物の場合約７０．５０％、程度でメラニン生成が抑制されることが分った（結果未図示）。
【００７５】
従って、肉荳蒄又は肉荳蒄仮種皮抽出物はメラニン生成を抑制する活性が優れていて、美白用組成物の有効な成分として利用できるものとして思慮された。
【００７６】
＜１−２：メースリグナン、アウストバイリグナン７及びリカリンＥのメラニン生成抑制＞
前記＜実施例２−１＞で分離されたメースリグナンをＭｅｌａｎ−ａ細胞に処理して前記＜実験例１−１＞と同一な方法でメラニン生成を測定してその結果を図２に示した。
【００７７】
図２に示した通り、メースリグナンはメラニン生成を抑制する活性が優れているので美白効果が卓越であることが分った（＊＊：Ｐ＜０．０１）。
【００７８】
さらに、前記＜実施例２＞で分離されたアウストバイリグナン７（７５０μＭ）及びリカリンＥ（５０μＭ）をそれぞれＭｅｌａｎ−ａ細胞に処理して、前記＜実験例１−１＞と同一な方法でメラニン生成程度を測定した結果、アウストバイリグナン７の場合、約５３．８９％、リカリンＥの場合約５８．４４％程度でメラニン生成が抑制されることが分った（結果未図示）。
【００７９】
従って、メースリグナン、アウストバイリグナン７及びリカリンＥはメラニン生成を抑制する活性が優れて、美白用組成物の有効な成分として利用し得るものと思慮された。
【００８０】
＜実験例２：チロシナーゼ（tyrosinase）活性抑制＞
＜２−１：肉荳蒄又は肉荳蒄仮種皮抽出物のチロシナーゼ活性抑制＞
先ず、前記実施例＜１−１＞で製造された肉荳蒄エタノール抽出物がメラニン生成に関与する酵素であるチロシナーゼ活性を抑制するか否かを確認した。
【００８１】
前記＜実験例１−１＞の通り、培養されたＭｅｌａｎ−ａ細胞に前記＜実施例１−１＞で製造された肉荳蒄エタノール抽出物を３日間処理して、５日後６−４ウェルプレートで培養された培地を除去して、０．２５％ｔｒｙｐｓｉｎ−ＥＤＴＡ（Sigma Chemical Co.）溶液を処理して細胞ペレットを回収した。回収されたペレットを１．５ｍＬチューブに移してリン酸塩緩衝液（ｐＨ６．８）２００μＬを添加し、１０，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離後上澄液を集めて、その内１５０μＬを９６−ウェルマイクロプレート（96-well microplate）に入れ、カテコール（catechol）５０μＬを添加した。前記添加後３７℃で３０分間培養した後、マイクロプレートリーダ（microplate reader）を利用して生成されたドーパクロム（dopa chrome）の量を４９０ｎｍで吸光度を測定してその結果を図３に記載した。
【００８２】
図３に記載された通り、前記＜実施例１−１＞で製造された肉荳蒄エタノール抽出物を処理した場合、生成されたドーパクロム（dopa chrome）の量が著しく減少されたことが分った。従って、チロシナーゼがドーパクロム生成に関与する酵素である点を考慮すれば、前記＜実施例１−１＞にて製造された肉荳蒄エタノール抽出物は、チロシナーゼ活性を制限することにより、メラニン生成を抑制し得ることが分った（＊＊：Ｐ＜０．０１）。
【００８３】
さらに、前記＜実施例１−１＞にて製造された肉荳蒄ヘキサン抽出物、クロロホルム抽出物、超臨界抽出物及び前記＜実施例１−２＞にて製造された肉荳蒄仮種皮エタノール抽出物４０μｇ／ｍＬをそれぞれＭｅｌａｎ−ａ細胞に処理して前記と同一な方法でドーパクロム生成程度を測定した結果、肉荳蒄ヘキサン抽出物の場合、約５４．９２％、肉荳蒄クロロホルム抽出物の場合、約６２．８９％、肉荳蒄超臨界抽出物の場合、約６８．３４％、肉荳蒄仮種皮エタノール抽出物の場合、約７７２．７５％程度、ドーパクロム生成が抑制されることが分った（結果未図示）。
【００８４】
＜２−２：メースリグナン、アウストバイリグナン７及びリカリンＥのチロシナーゼ活性抑制＞
【００８５】
前記＜実施例２−１＞にて分離されたメースリグナンをＭｅｌａｎ−ａ細胞に処理して、前記＜実験例２−１＞と同一な方法でドーパクロム生成程度を測定してその結果を図４に記載した。
【００８６】
図４に記載した通り、メースリグナンはドーパクロム生成を抑制する活性が優れているので、チロシナーゼ活性を抑制し得ることが分った（＊＊：Ｐ＜０．０１）。
【００８７】
さらに、前記＜実施例２＞にて分離されたアウストバイリグナン７及びリカリンＥを、それぞれＭｅｌａｎ−ａ細胞に処理して前記＜実験例１−１＞と同一な方法でドーパクロム生成程度を測定した結果、アウストバイリグナン７の場合約５４．８７％、リカリンＥの場合約６０．０４％程度、ドーパクロム生成が抑制されることが分った（結果未図示）。
【００８８】
従って、チロシナーゼドーパクロム生成に関与する酵素である点を考慮すれば、メースリグナン、アウストバイリグナン７及びリカリンＥはチロシナーゼ活性を阻害することにより、メラニン生成を抑制し得ることが分った。
【００８９】
＜実験例３：チロシナーゼ及びチロシナーゼ関連蛋白質（ＴＲＰ−１，ＴＲＰ−２）発現抑制＞
＜３−１：肉荳蒄抽出物のチロシナーゼ、ＴＲＰ−１及びＴＲＰ−２発現抑制＞
前記＜実施例１−１＞で製造された肉荳蒄エタノール抽出物が、チロシナーゼ、チロシナーゼ関連蛋白質１（tyrosinase related protein-1,TRP-1）及びチロシナーゼ関連蛋白質２（tyrosinase related protein-2,TRP-2）発現を抑制するか否かを確認する為に、ウェスタンブロット（Western blot）を利用して分析してブラッドフォード（Bradford）法を利用して蛋白質を定量した。
【００９０】
具体的に前記＜実験例１−１＞で肉荳蒄エタノール抽出物が処理された細胞から抽出された蛋白質を、１０％ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲルに電気泳動させ、ニトロセルロース膜（nitrocellulose membrance）でゲルの蛋白質を転移させた。５％脱脂粉乳を１時間常温で処理し、チロシナーゼ、ＴＲＰ−１及びＴＲＰ−２の１次抗体を５％脱脂粉乳に、１：１０００の比率で希釈して２時間常温で反応させた。１次抗体反応後１０分ずつ２回にわたってＴＢＳＴ（Tris-buffer Saline Tween 20）でゆさぶりながら洗滌した。それぞれの１次抗体を認知する２次抗体を５％脱脂粉乳に１：１０００になるように、希釈して１時間常温で反応させて１次抗体の時と同様に、１０分ずつ３回にわたってＴＢＳＴ（Tris-buffer Saline Tween 20）でゆさぶりながら洗滌した後、下記の化学発光法（chemiluminescence）で現像してその結果を図５に記載した。
【００９１】
図５に記載した通り、前記肉荳蒄エタノール抽出物はチロシナーゼ、ＴＲＰ−１及びＴＲＰ−２の発現を阻害することにより、メラニン生成を抑制し得ることが分った（＊＊：Ｐ＜０．０１）。
【００９２】
＜３−２：メースリグナンのチロシナーゼ、ＴＲＰ−１及びＴＲＰ−２発現抑制＞
前記＜実施例２−１＞で分離されたメースリグナンをＭｅｌａｎ−ａ細胞に処理して前記＜実験例３−１＞と同一な方法によりチロシナーゼ、ＴＲＰ−１及びＴＲＰ−２の発現を抑制するか、否かを確認してその結果を図６に記載した。
【００９３】
図６に記載した通り、前記メースリグナンはチロシナーゼ、ＴＲＰ−１及びＴＲＰ−２の発現を疎外することにより、メラニン生成を抑制し得ることが分った（＊＊：Ｐ＜０１）。
【００９４】
＜剤形例１：化粧品＞
＜１−１乃至１−３：栄養化粧水（ミルクローション）＞
前記＜実施例１＞で製造された肉荳蒄抽出物、肉荳蒄仮種皮抽出物又は前記＜実施例２＞で分離された化合物（メースリグナン、アウストバイリグナン７及びリカリンＥ）を下記表１の栄養化粧水剤形比率の通り通常的な方法により栄養化粧水を製造した。
【００９５】
【表１】
【００９６】
＜１−４乃至１−６：柔軟化粧水（スキンローション）＞
前記＜実施例１＞で製造された肉荳蒄抽出物、肉荳蒄仮種皮抽出物又は前記＜実施例２＞で分離された化合物（メースリグナン、アウストバイリグナン７及びリカリンＥ）を、下記表２の柔軟化粧水剤形比率の通り通常的な方法により柔軟化粧水を製造した。
【００９７】
【表２】
【００９８】
＜１−７乃至１−９：栄養クリーム＞
前記＜実施例１＞で製造された肉荳蒄抽出物、肉荳蒄仮種皮抽出物又は前記＜実施例２＞で分離された化合物（メースリグナン、アウストバイリグナン７及びリカリンＥ）を下記表３の栄養クリーム剤形比率の通り通常的な方法により栄養クリームを製造した。
【００９９】
【表３】
【０１００】
＜１−１０乃至１−１２：マッサージクリーム＞
前記＜実施例１＞で製造された肉荳蒄抽出物、肉荳蒄仮種皮抽出物又は前記＜実施例２＞で分離された化合物（メースリグナン、アウストバイリグナン７及びリカリンＥ）を下記表４のマッサージクリーム剤形比率の通り通常的な方法によりマッサージクリームを製造した。
【０１０１】
【表４】
【０１０２】
＜１−１３乃至１−１５：パック＞
前記＜実施例１＞で製造された肉荳蒄抽出物、肉荳蒄仮種皮抽出物又は前記＜実施例２＞で分離された化合物（メースリグナン、アウストバイリグナン７及びリカリンＥ）を下記表５のパック剤形比率の通り通常的な方法によりパックを製造した。
【０１０３】
【表５】
【０１０４】
＜１−１６乃至１−１８：ゲル＞
前記＜実施例１＞で製造された肉荳蒄抽出物、肉荳蒄仮種皮抽出物又は前記＜実施例２＞で分離された化合物（メースリグナン、アウストバイリグナン７及びリカリンＥ）を下記表６のゲル剤形比率の通り通常的な方法によりゲルを製造した。
【０１０５】
【表６】
【０１０６】
＜剤形例２：食品＞
＜２−１：健康食品の製造＞
前記＜実施例１＞で製造された肉荳蒄抽出物、肉荳蒄仮種皮抽出物又は前記＜実施例２＞で分離された化合物（メースリグナン、アウストバイリグナン７及びリカリンＥ）１０００ｍｇ、ビタミンＡアセテート７０μｇ、ビタミンＥ：１．０ｍｇ、ビタミンＢ１：０．１３ｍｇ、ビタミンＢ２：０．１５ｍｇ、ビタミンＢ６：０．５ｍｇ、ビタミンＢ１２：０．２ｍｇ、ビタミンＣ：１０ｍｇ、ビオチン１０μｇ、ニコチン酸アミド１．７ｍｇ、葉酸５０μｇ、パントテン酸カルシウム０．５ｍｇ、硫酸第１鉄１．７５ｍｇ、酸化亜鉛０．８２ｍｇ、炭酸マグネシウム２５．３ｍｇ、第１リン酸カルシウム１５ｍｇ、第２リン酸カルシウム５５ｍｇ、クエン酸カルシウム９０ｍｇ、炭酸カルシウム１００ｍｇ、塩化マグネシウム２４．８ｍｇを混合して製造することができ、その配合比を任意に変更実施しても良く、通常の健康食品製造方法により、前記の成分を混合した後、顆粒を製造し、通常の方法により健康食品組成物製造に使用できる。
【０１０７】
＜２−２：健康飲料の製造＞
前記＜実施例１＞で製造された肉荳蒄抽出物、肉荳蒄仮種皮抽出物又は前記＜実施例２＞で分離された化合物（メースリグナン、アウストバイリグナン７及びリカリンＥ）１０００ｍｇ、クエン酸１０００ｍｇ、オリゴ糖１００ｇ、梅実濃縮液２ｇ、タウリン１ｇに精製水を加えて全体９００ｍＬを通常の健康飲料製造方法により前記の成分を混合し、約１時間８５℃で撹拌加熱して作られた溶液を濾過して滅菌された２Ｌ容器に収得して密封滅菌冷蔵保管して健康飲料組成物製造に使用し得る。
【０１０８】
＜２−３：チューインガム＞
ガムベース２０重量％、砂糖７６．９重量％、香料１重量％及び水２重量％と、前記＜実施例１＞で製造された肉荳蒄抽出物、肉荳蒄仮種皮抽出物又は前記＜実施例２＞で分離された化合物（メースリグナン、アウストバイリグナン７及びリカリンＥ）０．１重量％を配合して通常の方法によりチューインガムを製造した。
【０１０９】
＜２−４：キャンデー＞
砂糖６０重量％、水飴３９．８重量％及び香料０．１重量％と、前記＜実施例１＞で製造された肉荳蒄抽出物、肉荳蒄仮種皮抽出物又は前記＜実施例２＞で分離された化合物（メースリグナン、アウストバイリグナン７及びリカリンＥ）０．１重量％を配合して通常の方法によりキャンデーを製造した。
【０１１０】
＜２−５：ビスケット＞
薄力１級２５．５９重量％、重力１級２２．２２重量％、精白糖４．８０重量％、食塩０．７３重量％、ブドウ糖０．７８重量％、パームショートニング１１．７８重量％、アンモニウム１．５４重量％、重曹０．１７重量％、重亜硫酸ナトリウム０．１６重量％、米粉１．４５重量％、ビタミンＢ１：０．０００１重量％、ビタミンＢ２：０．０００１重量％、ミルク香０．０４重量％、水２０．６９９８重量％、全脂粉乳１．１６重量％、代用粉乳０．２９重量％、第１リン酸カルシウム０．０３重量％、散布塩０．２９重量％及び噴霧乳７．２７重量％と前記＜実施例１＞で製造された肉荳蒄抽出物、肉荳蒄仮種皮抽出物又は前記＜実施例２＞で分離された化合物（メースリグナン、アウストバイリグナン７及びリカリンＥ）１重量％を配合して通常の方法によりビスケットを製造した。
【０１１１】
＜剤形例３：医薬品＞
＜３−１：散剤＞
前記＜実施例１＞で製造された肉荳蒄抽出物、肉荳蒄仮種皮抽出物又は前記＜実施例２＞で分離された化合物（メースリグナン、アウストバイリグナン７及びリカリンＥ）５０ｍｇ、結晶セルロース２ｇを混合した後、通常の散剤製造方法により機密包に充填して散剤を製造した。
【０１１２】
＜３−２：錠剤＞
前記＜実施例１＞で製造された肉荳蒄抽出物、肉荳蒄仮種皮抽出物又は前記＜実施例２＞で分離された化合物（メースリグナン、アウストバイリグナン７及びリカリンＥ）５０ｍｇ、結晶セルロース４００ｍｇ、ステアリン酸マグネシウム５ｍｇを混合した後、通常の錠剤剤製造方法により打錠して錠剤を製造した。
【０１１３】
＜３−３：カプセル剤＞
前記＜実施例１＞で製造された肉荳蒄抽出物、肉荳蒄仮種皮抽出物又は前記＜実施例２＞で分離された化合物（メースリグナン、アウストバイリグナン７及びリカリンＥ）３０ｍｇ、乳清蛋白質１００ｍｇ、結晶セルロース４００ｍｇ、ステアリン酸マグネシウム６ｍｇを混合した後、通常のカプセル剤製造方法によりゼラチンカプセルに充填してカプセル剤を製造した。
【０１１４】
＜３−４：注射剤＞
通常の注射剤製造方法により、活性成分を注射用蒸留水に溶解し、ｐＨを約７．５に調節した後、前記＜実施例１＞で製造された肉荳蒄抽出物、肉荳蒄仮種皮抽出物又は前記＜実施例２＞で分離された化合物（メースリグナン、アウストバイリグナン７及びリカリンＥ）１００ｍｇ、注射用蒸留水、ｐＨ調節剤を混合して２ｍＬ容量のアンプルに充填、滅菌して注射剤を製造した。
【０１１５】
＜適用例＞
前記＜剤形例１−１＞乃至＜剤形例１−１８＞により製造された栄養化粧水、柔軟化粧水、栄養クリーム、マッサージクリーム、パック及びゲルによる色素沈着抑制効果を下記の通り検証した。
【０１１６】
先ず、健康な男女２０名ずつを選定して、両腕の下膊部に径７ｍｍ大の孔が６個ずつ２条に窪んだアルミニウムホイルを着けて、腕より１０ｃｍ離れた距離でORIEL solar simulator 1000Wを使用して６０Ｊ／ｃｍ２の光量を照射した。照射前に７０％エタノール水溶液で照射部位を綺麗に洗滌した。照射後照射部位に１日３回ずつ美白成分を含有する＜剤形例１−１＞乃至＜剤形例１−１８＞を塗布した。３週間塗布後色素沈着度を肉眼で判定し、前記剤形例が対照群に比べて色素沈着を抑制した程度を著しい効果、有効、無効の３段階で評価し、さらに、皮膚副作用発生可否を観察した後その結果を表７に示した。
【０１１７】
【表７】
【０１１８】
前記表７に記載した通り、本発明に伴う美白成分を含有する皮膚美白用組成物を彼試験者２０名の中で最少１２名以上に対して美白効果を示した。
【産業上の利用可能性】
【０１１９】
前記化学式１乃至化学式３からなる群より選ばれたリグナン系化合物、又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物は、メラニン生成及びチロシナーゼ活性を抑制することにより、卓越な美白効果があるので、美白用化粧料組成物、食品組成物又は薬学的組成物の有効な成分で利用され得る。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記化学式１乃至化学式３からなる群より選ばれたリグナン系化合物又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物を含有することを特徴とする美白用化粧料組成物。
【化１】
【請求項２】
下記化学式１乃至化学式３からなる群より選ばれたリグナン系化合物又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物を含有することを特徴とする美白用食品組成物。
【化２】
【請求項３】
下記化学式１乃至化学式３からなる群より選ばれたリグナン系化合物又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物を含有することを特徴とする美白用薬学的組成物。
【化３】
【請求項４】
前記肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物は、水、Ｃ１−Ｃ６の有機溶媒及び亜臨界又は超臨界流体からなる群より選ばれた一つ以上の溶媒による抽出物であることを特徴とする請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５】
前記Ｃ１−Ｃ６の有機溶媒は、Ｃ１−Ｃ６のアルコール、アセトン、エーテル、ベンゼン、クロロホルム、エチルアセテート、メチレンクロライド、ヘキサン、シクロヘキサン、石油エーテル、からなる群より選ばれたことを特徴とする請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
下記化学式１乃至化学式３からなる群より選ばれたリグナン系化合物又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物の化粧料組成物製造の為の用途。
【化４】
【請求項７】
下記化学式１乃至化学式３からなる群より選ばれたリグナン系化合物又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物の食品組成物製造の為の用途。
【化５】
【請求項８】
下記化学式１乃至化学式３からなる群より選ばれたリグナン系化合物又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物の薬学的組成物製造の為の用途。
【化６】
【請求項９】
下記化学式１乃至化学式３からなる群より選ばれたリグナン系化合物又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物のメラニン生成を抑制する方法。
【化７】
【請求項１０】
下記化学式１乃至化学式３からなる群より選ばれたリグナン系化合物又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物のチロシナーゼ活性を抑制する方法。
【化８】
【請求項１】
下記化学式１乃至化学式３からなる群より選ばれたリグナン系化合物又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物を含有することを特徴とする美白用化粧料組成物。
【化１】
【請求項２】
下記化学式１乃至化学式３からなる群より選ばれたリグナン系化合物又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物を含有することを特徴とする美白用食品組成物。
【化２】
【請求項３】
下記化学式１乃至化学式３からなる群より選ばれたリグナン系化合物又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物を含有することを特徴とする美白用薬学的組成物。
【化３】
【請求項４】
前記肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物は、水、Ｃ１−Ｃ６の有機溶媒及び亜臨界又は超臨界流体からなる群より選ばれた一つ以上の溶媒による抽出物であることを特徴とする請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５】
前記Ｃ１−Ｃ６の有機溶媒は、Ｃ１−Ｃ６のアルコール、アセトン、エーテル、ベンゼン、クロロホルム、エチルアセテート、メチレンクロライド、ヘキサン、シクロヘキサン、石油エーテル、からなる群より選ばれたことを特徴とする請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
下記化学式１乃至化学式３からなる群より選ばれたリグナン系化合物又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物の化粧料組成物製造の為の用途。
【化４】
【請求項７】
下記化学式１乃至化学式３からなる群より選ばれたリグナン系化合物又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物の食品組成物製造の為の用途。
【化５】
【請求項８】
下記化学式１乃至化学式３からなる群より選ばれたリグナン系化合物又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物の薬学的組成物製造の為の用途。
【化６】
【請求項９】
下記化学式１乃至化学式３からなる群より選ばれたリグナン系化合物又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物のメラニン生成を抑制する方法。
【化７】
【請求項１０】
下記化学式１乃至化学式３からなる群より選ばれたリグナン系化合物又はこれを含有する肉荳蒄抽出物又は肉荳蒄仮種皮抽出物のチロシナーゼ活性を抑制する方法。
【化８】
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【公表番号】特表２０１１−５００６７０（Ｐ２０１１−５００６７０Ａ）
【公表日】平成２３年１月６日（２０１１．１．６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５２９８７４（Ｐ２０１０−５２９８７４）
【出願日】平成２０年１０月１７日（２００８．１０．１７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＫＲ２００８／００６１４３
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０５１４３７
【国際公開日】平成２１年４月２３日（２００９．４．２３）
【出願人】（５０３３４４０７８）バイオケア カンパニ−リミテッド (4)
【出願人】（５１０１０３３６９）ニューツリー、カンパニー、リミテッド (1)
【氏名又は名称原語表記】ＮＥＷＴＲＥＥ ＣＯ．， ＬＴＤ．
【住所又は居所原語表記】１１Ｆ Ｔｅｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ， ＳＫ ｎ Ｔｅｃｈｎｏ Ｐａｒｋ， １９０−１， Ｓａｎｇｄａｅｗｏｎ−Ｄｏｎｇ， Ｊｏｏｎｇｗｏｎ−Ｇｕ， Ｓｕｎｇｎａｍ−Ｃｉｔｙ， Ｇｙｅｏｎｇｇｉ−Ｄｏ ４６２−１２０ Ｒｅｐｕｂｌｉｃ ｏｆ Ｋｏｒｅａ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２３年１月６日（２０１１．１．６）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年１０月１７日（２００８．１０．１７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＫＲ２００８／００６１４３
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０５１４３７
【国際公開日】平成２１年４月２３日（２００９．４．２３）
【出願人】（５０３３４４０７８）バイオケア カンパニ−リミテッド (4)
【出願人】（５１０１０３３６９）ニューツリー、カンパニー、リミテッド (1)
【氏名又は名称原語表記】ＮＥＷＴＲＥＥ ＣＯ．， ＬＴＤ．
【住所又は居所原語表記】１１Ｆ Ｔｅｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ， ＳＫ ｎ Ｔｅｃｈｎｏ Ｐａｒｋ， １９０−１， Ｓａｎｇｄａｅｗｏｎ−Ｄｏｎｇ， Ｊｏｏｎｇｗｏｎ−Ｇｕ， Ｓｕｎｇｎａｍ−Ｃｉｔｙ， Ｇｙｅｏｎｇｇｉ−Ｄｏ ４６２−１２０ Ｒｅｐｕｂｌｉｃ ｏｆ Ｋｏｒｅａ
【Ｆターム（参考）】
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