【課題】医薬品、工業製品、化粧品、食品等として商業的に一層価値がある高性能な多用途素材となるようなコラーゲン（具体的には例えば、３重ヘリックス構造が安定化され、且つ、線維形成能が高いコラーゲン）を見出し、見出された新規コラーゲンを取得するための方法等の開発が求められていた。
【解決手段】下記（１）〜（３）の全てのタンパク質のアミノ酸配列をコードする塩基配列を有する外来遺伝子が微生物細胞内に導入されて得られることを特徴とする形質転換体等。
（１）リジン水酸化酵素
（２）プロリン水酸化酵素
（３）コラーゲン

【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記（１）〜（３）の全てのタンパク質のアミノ酸配列をコードする塩基配列を有する外来遺伝子が微生物細胞内に導入されて得られることを特徴とする形質転換体。
（１）リジン水酸化酵素
（２）プロリン水酸化酵素
（３）コラーゲン
【請求項２】
請求項１記載の形質転換体が、前記（１）〜（３）の全てのタンパク質をその細胞内で共発現していることを特徴とする形質転換体。
【請求項３】
前記リジン水酸化酵素が、リジルヒドロキシラーゼ１、リジルヒドロキシラーゼ２又はリジルヒドロキシラーゼ３から選択される少なくとも１種類のリジン水酸化酵素であることを特徴とする請求項１又は２記載の形質転換体。
【請求項４】
前記プロリン水酸化酵素が、プロリル−４−ヒドロキシラーゼのαサブユニット及びプロリル−４−ヒドロキシラーゼのβサブユニットからなる酵素であることを特徴とする請求項１〜３のいずれかの請求項記載の形質転換体。
【請求項５】
前記プロリル−４−ヒドロキシラーゼのβサブユニットが酵母αファクターの分泌シグナルとの融合体であることを特徴とする請求項４記載の形質転換体。
【請求項６】
前記プロリル−４−ヒドロキシラーゼのαサブユニットが、α１サブユニット、α２サブユニット又はα３サブユニットであることを特徴とする請求項４又は５記載の形質転換体。
【請求項７】
前記コラーゲンが、コラーゲンType I〜Type XXIXから選択される少なくとも１種類のコラーゲンであることを特徴とする請求項１〜６のいずれかの請求項記載の形質転換体。
【請求項８】
前記リジン水酸化酵素及び前記プロリン水酸化酵素のタンパク質のアミノ酸配列をコードする塩基配列を有する外来遺伝子の少なくとも１つが、酵母由来のプロモーターの下流に連結されていることを特徴とする請求項１又は２記載の形質転換体。
【請求項９】
前記プロモーターが、アルコールオキシダーゼ１プロモーターであることを特徴とする請求項８記載の形質転換体。
【請求項１０】
前記微生物細胞が、真核生物細胞であることを特徴とする請求項１〜９のいずれかの請求項記載の形質転換体。
【請求項１１】
前記真核生物細胞が、酵母細胞であることを特徴とする請求項１０記載の形質転換体。
【請求項１２】
前記酵母細胞が、メタノール資化性酵母細胞であることを特徴とする請求項１１記載の形質転換体。
【請求項１３】
前記メタノール資化性酵母細胞が、Komagataella pastorisであることを特徴とする請求項１２記載の形質転換体。
【請求項１４】
請求項１〜１３のいずれかの請求項記載の形質転換体が産生して得られうることを特徴とするコラーゲン。
【請求項１５】
全リジン残基のうち１５％以上が水酸化されていることを特徴とする請求項１４記載のコラーゲン。
【請求項１６】
テロペプチド領域のリジン残基が水酸化されていることを特徴とする前項１４記載のコラーゲン。
【請求項１７】
微生物細胞内に、下記（１）〜（３）の全てのタンパク質のアミノ酸配列をコードする塩基配列を有する外来遺伝子を導入する第一工程、第一工程で得られる形質転換体によってコラーゲンを産生させる第二工程、及び、第二工程で産生されたコラーゲンを回収することを特徴とするコラーゲンの取得方法。
（１）リジン水酸化酵素
（２）プロリン水酸化酵素
（３）コラーゲン
【請求項１８】
請求項１７記載の取得方法により取得されたコラーゲン。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【公開番号】特開２０１１−１２０５７６（Ｐ２０１１−１２０５７６Ａ）
【公開日】平成２３年６月２３日（２０１１．６．２３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−２５２６０６（Ｐ２０１０−２５２６０６）
【出願日】平成２２年１１月１１日（２０１０．１１．１１）
【出願人】（０００００２０９３）住友化学株式会社 (8,981)
【出願人】（０００００２９１２）大日本住友製薬株式会社 (332)
【出願人】（５９１０７１１０４）株式会社高研 (38)
【Ｆターム（参考）】