リパーゼ阻害剤および肥満抑制剤
【課題】植物食品由来で副作用が少なく、長期投与可能なリパーゼ阻害剤および肥満抑制剤を提供すること目的とする。
【解決手段】アブラナ科アブラナ属植物、特に大和マナ（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｒａｐａ Ｌ．）由来のイソチオシアネート化合物および／またはその配糖体（グルコシノレート）を有効成分として含有するリパーゼ阻害剤、ならびに肥満症抑制剤および脂肪蓄積抑制剤、さらにはそれを配合してなる医薬品および飲食品などを提供する。
【解決手段】アブラナ科アブラナ属植物、特に大和マナ（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｒａｐａ Ｌ．）由来のイソチオシアネート化合物および／またはその配糖体（グルコシノレート）を有効成分として含有するリパーゼ阻害剤、ならびに肥満症抑制剤および脂肪蓄積抑制剤、さらにはそれを配合してなる医薬品および飲食品などを提供する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アブラナ科（Ｂｒａｓｓｉｃａｃｅａｅ）アブラナ属（Ｂｒａｓｓｉｃａ）植物、特に大和マナ（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｒａｐａ Ｌ．）由来のイソチオシアネート化合物および／またはその配糖体（グルコシノレート）を含有することを特徴とするリパーゼ阻害剤、ならびに肥満抑制剤および脂肪蓄積抑制剤に関する。更に詳しくは、生体内での脂質の消化吸収をにない肥満症や脂質異常症の鍵を握る膵リパーゼを有効に阻害して肥満や脂肪蓄積の抑制や予防に有効な安全性の高いリパーゼ阻害剤、ならびに肥満抑制剤および脂肪蓄積抑制剤、さらにそれを配合してなる医薬品および飲食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、食生活の欧米化に伴い、特に脂肪摂取量の増加によって肥満を始めとする生活習慣病患者が急増していることが指摘されている。肥満は、摂取エネルギーと消費エネルギーのアンバランスを特徴とするエネルギー代謝異常であり、結果として脂肪細胞に中性脂肪が過剰に蓄積した状態と定義されている。食事により摂取された脂肪は、腸管内で分解・吸収され、生体内でエネルギーとして蓄積される。しかしながら、脂肪の過剰摂取や消費カロリー不足等により、エネルギーの吸収量が消費量を上回った場合には、生体内の組織や臓器において脂肪の過剰蓄積が起こり、肥満や脂質異常症等の症状が生じる。これらの症状は、動脈硬化、糖尿病、脂質異常症等の生活習慣病の発症にも関与していることが分かっている。そのため、生体内における脂肪の過剰蓄積を抑制することは、肥満や脂質異常症等の症状の発症を予防乃至改善するだけでなく、前記生活習慣病の予防乃至治療にも有効であると考えられている。
【０００３】
脂肪は、腸管内に存在するリパーゼにより脂肪酸とグリセロールに分解後、腸管において吸収されるが、過剰な脂肪摂取によるグリセロールと脂肪酸の吸収は肥満へと至らしめる。従って、腸管内に存在するリパーゼの活性を阻害することによって、腸管における脂肪の分解・吸収を抑制できる。このような理由から、リパーゼ阻害剤は、肥満や脂質異常症等の予防又は改善剤、或いは前記生活習慣病の予防又は治療剤として有用であると考えられる。事実、膵リパーゼ阻害剤のオリルスタット（非特許文献１）は抗肥満薬として米国など多くの国にて臨床的に使用されている。しかし、オリルスタット服用の早期にみられる放屁、突然の便意、脂肪便等副作用が指摘されている。
【０００４】
近年、予防的な観点から、ヒトの健康状態や食品機能を科学的に研究する機能性食品、特にその有効成分の研究が盛んになされ、アブラナ科植物由来のイソチオシアネート化合物及びその配糖体は、そのガン予防効果等様々な生理活性作用にて注目を集めている（非特許文献２）。一方、リパーゼ阻害作用を特徴とした食品の機能性成分についても幾つかの特許出願があり（特許文献１、２、３、４、５）、さらに、わさび成分を有効成分とする抗肥満剤（特許文献６）やマカまたはベンジルグルコシノレートを有効成分とする抗肥満作用（特許文献７）に関する特許出願はあるが、アブラナ科アブラナ属の大和マナ由来のイソチオシアネート化合物であるフェネチルイソチオシアネートや３-ブテニルイソチオシアネート、ならびにそれらの配糖体についてのリパーゼ阻害活性、ならびに肥満抑制作用および脂肪蓄積抑制作用についての具体的開示はない。
【０００５】
【非特許文献１】Ａ．Ｍ．Ｈｅｃｋら、ファーマコセラピー（Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ）、２０巻、２７０−２７９頁、２０００年
【非特許文献２】Ｙ．Ｚｈａｎｇら、プロシーディングス・オブ・ザ・ニュートリション・ソサイアティ（Ｐｒｏｃ Ｎｕｔｒ Ｓｏｃ．）、第６５巻、６８−７５頁、２００６年
【特許文献１】特開２００１−１２０２３７号公報
【特許文献２】特開２００１−２９９２７２号公報
【特許文献３】特開２００２−５３４８４号公報
【特許文献４】特開２００４−１６１６４４号公報
【特許文献５】特許第３６８９０９９号公報
【特許文献６】特開２００６−３２８０５６号公報
【特許文献７】特開２００７−２３０９８７号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の目的は、植物食品由来で副作用が少なく、持続的かつ予防的な摂取あるいは投与可能なリパーゼ阻害剤、ならびに肥満抑制剤および脂質蓄積抑制剤、さらにそれを配合してなる医薬品および飲食品を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは上記目的を達成すべく、植物食品由来で安全性が高くリパーゼ阻害に効果を示す物質について鋭意検討した結果、大和マナ由来のイソチオシアネート化合物および／またはその配糖体（グルコシノレート）にリパーゼ阻害効果、ならびに肥満抑制効果および脂肪蓄積抑制剤を見出し、本発明を完成させた。
【０００８】
即ち、本発明は以下の発明を包含する。
（１）アブラナ科（Ｂｒａｓｓｉｃａｃｅａｅ）アブラナ属（Ｂｒａｓｓｉｃａ）植物由来のイソチオシアネート化合物および／またはその配糖体を含有することを特徴とするリパーゼ阻害剤；
（２）アブラナ科アブラナ属植物由来のイソチオシアネート化合物および／またはその配糖体を含有することを特徴とする肥満抑制剤；
（３）脂肪蓄積抑制剤である（２）記載の剤；
（４）アブラナ科アブラナ属植物が大和マナ（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｒａｐａ Ｌ．）である（１）〜（３）いずれかに記載の剤；
（５）前記イソチオシアネート化合物がフェネチルイソチオシアネートである（１）〜（３）いずれかに記載の剤；
（６）前記イソチオシアネート化合物が３-ブテニルイソチオシアネートである（２）または（３）記載の剤；
（７）大和マナ自体またはその抽出物を有効成分として含有することを特徴とするリパーゼ阻害剤または肥満抑制剤；
（８）（１）〜（７）のいずれかに記載の剤を配合してなる医薬品；
（９）（１）〜（７）のいずれかに記載の剤を配合してなる飲食品；
などに関する。
【発明の効果】
【０００９】
本発明により、アブラナ科アブラナ属植物、特に大和マナ由来のイソチオシアネート化合物および／またはその配糖体を有効成分として含有することにより、副作用が少なく、経口的に、持続的かつ予防的な摂取あるいは投与可能なリパーゼ阻害剤、肥満抑制剤および脂肪蓄積抑制剤、ならびにそれを配合してなる医薬品および飲食品を提供されることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
以下において、本発明を詳細に説明する。本発明におけるイソチオシアネート化合物またはその配糖体（グルコシノレート）は、アブラナ科アブラナ属由来のものが利用されるが、そのアブラナ科アブラナ属植物としては、ブロッコリー、タカナ、キャベツ、ハクサイ、大和マナ、小松菜、カリフラワー、カブ、チンゲンサイ、ミズナ、ノザワナなどがある。
【００１１】
本発明のイソチオシアネート化合物はアブラナ科アブラナ属植物由来のものが利用されるが、アリールアルキルイソチオシアネートおよびアルケニルアルキルイソチオシアネートが好ましく、さらにアリールアルキルイソチオシアネートとしてはフェネチルイソチオシアネートが好ましく、アルケニルアルキルイソチオシアネートとしては３−ブテニルイソチオシアネートが好ましい。
【００１２】
アブラナ科植物において、イソチオシアネート化合物は、配糖体（グルコシノレート）として存在している。イソチオシアネート配糖体は細胞内在ミロシナーゼ等の酵素と接触してイソチオシアネート化合物へ変換される。また、イソチオシアネート配糖体は、ヒトの腸内細菌によりイソチオシアネート化合物へ変換されることが知られている。
【００１３】
以上のようにアブラナ科植物においては、イソチオシアネート配糖体として存在しているため、イソチオシアネート化合物として用いてもよいが、その配糖体（グルコシノレート）をリパーゼ阻害剤として用いてもよい。さらにイソチオシアネート配糖体を用いる場合に、外在性のミロシナーゼを添加して用いてもよい。
【００１４】
さらに大和マナ自体またはその抽出物を有効成分として用いることが出来る。大和マナ自体を有効成分として用いる場合、採取した大和マナを水洗し必要により凍結乾燥、熱風乾燥あるいは自然乾燥したものを、細断または粉砕した細断物あるいは粉末状物にしたもの、ペースト状化したもの、ホモジナイズ化して不溶物をろ過したろ液、またはそのろ液を濃縮したもの等種々の形態のものが用いられる。抽出物を有効成分として用いる場合は、大和マナの細断物あるいは粉末状物を水や有機溶媒、あるいはその混合物にて抽出したもの、あるいはその抽出液を濃縮して得られた濃縮物（エキス）、あるいはその濃縮物を真空乾燥、スプレー乾燥、凍結乾燥をして粉末化したものなどが用いられる。抽出有機溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノールおよびイソブタノール等の低級アルコール類、アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類、酢酸メチル、酢酸エチル等の酢酸エステル類、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル等のエーテル類、ヘキサン、トルエン等の炭化水素類が用いられる。これら有機溶媒と水は、単独でも２種類以上を混合して用いても良い。
【００１５】
アブラナ科植物、特に大和マナからのイソチオシアネート化合物の抽出は、例えば、植物体をすりおろしなどによる粉砕ないし細断した後、植物内在性のミロシナーゼにより、イソチオシアネート配糖体からイソチオシアネート化合物を十分に生成させてから、適当な溶媒にて抽出することにより行うことができる。抽出溶媒としては、イソチオシアネート化合物の性質にもよるが、酢酸エチル、酢酸メチルなどのエステル類、ジエチルエーテル、エチルイソプロピルエーテルなどのエーテル類、クロロホルム、ジクロロメタンなどのハロゲン系炭化水素、メチルアルコール、エチルアルコール、イソプロピルアルコールなどのアルコール類、アセトン、メチルエチルケトンなどのケトン類などの溶媒が用いられる。好ましくは、酢酸エチルが用いられる。
【００１６】
イソチオシアネート化合物は、試薬として市販されているものは購入により入手可能であるが、種々の化学合成によっても得られる。例えば、アミン化合物やシリルアミン化合物等から得られる（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ，２６，１６６−４（１９８５），Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，５３９（１９７０）等）。
【００１７】
一方、アブラナ科植物、特に大和マナからのイソチオシアネート配糖体（グルコシノレート）の抽出は、例えば、あらかじめ植物体の内在性ミロシナーゼを加熱等により不活化し、続いてすりおろしなどによる粉砕ないし細断した後、ろ過し、ろ液をカラムクロマトグラフィーなどにより分離精製することにより、目的とするイソチオシアネート配糖体（グルコシノレート）が得られる。他方、イソチオシアネート配糖体（グルコシノレート）は、種々の化学的方法によっても得ることができる（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，３６，７７９−７８３（１９８０）等）。
【００１８】
かくして得られたイソチオシアネート化合物および／またはその配糖体は、１種あるいは２種以上を組み合わせて用いることができる。また、イソチオシアネート化合物および／またはその配糖体は、単独で摂取することは可能であるが、各種飲食品に添加してあるいは医薬組成物として使用することができる。具体的には、菓子、パン類、麺類の固形食品あるいはジュースや健康茶等の飲料品に添加して、または粉末状、顆粒状、カプセル状および錠剤などの医薬品・医薬部外品等の組成物として用いることができる。
【００１９】
本発明のイソチオシアネート化合物および／またはその配糖体を治療目的あるいは予防的目的の医薬として用いる場合の投与量は、その製剤形態、投与方法、使用目的および投与される患者の年齢、体重、症状によって異なるが、成人１日当たり好ましくは０．００１〜２０００ｍｇ／ｋｇ体重であり、より好ましくは０．０１〜２００ｍｇ／ｋｇ体重である。
【００２０】
一方、イソチオシアネート化合物および／またはその配糖体、ならびにそれを含有するアブラナ科アブラナ属植物体、特に大和マナを飲食品として用いる場合の有効成分の摂取量は、好ましくは０・０００１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重、より好ましくは０．０１〜１ｍｇ／ｋｇ体重である。
【実施例】
【００２１】
以下に、本発明を実施例に基づいて説明する。本発明は以下の実施例によってなんら限定されるものではなく、本発明の属する技術分野における通常の変更を加えて実施することが出来ることは言うまでもない。
【００２２】
製造例１ （大和マナから３−ブテニルイソチオシアネート（ＢＵＩＴＣ）の確認）
収穫した大和マナ１７ｇに１００ｍｌの蒸留水を添加し、３０秒間ホモジナイズし、３７℃で２時間放置し、生体内ミロシナーゼで反応させた。その後、ホモジナイズ液を、遠心分離（３１００ｒｐｍ，５ｍｉｎ）することで、マナの水抽出液を得た。続いて、水抽出液を等量の酢酸エチルで分配することにより、酢酸エチル画分を得、ＨＰＬＣ分析用サンプルとした。上記サンプルを用いたＨＰＬＣ分析（Ｃｏｓｍｏｓｉｌ５Ｃ１８−ＭＳＩＩ，ＣＨ３ＯＨ：Ｈ２Ｏ＝４／６−（５ｍｉｎ）−４／６−（５ｍｉｎ）−６／４−（７．５ｍｉｎ）−６／４−（７．５ｍｉｎ）−１０／０−（５ｍｉｎ）−１０／０−（１０ｍｉｎ）−１０／０，１．０ｍＬ／ｍｉｎ，２５４ｎｍ）の結果、３−ブテニルイソチオシアネートの標品（東京化成より購入の３−ブテニルイソチオシアネート）と一致した。
【００２３】
製造例２ （大和マナからフェネチルイソチオシアネート（ＰＥＩＴＣ）の確認）
製造例１と同様に処理して、フェネチルイソチオシアネート画分を得、ＨＰＬＣ分析の結果、標品（東京化成より購入のフェネチルイソチオシアネート）と完全に一致した。
【００２４】
製造例３ （３−ブテニルグルコシノレート（ＢＵＧＬＳ）の単離・精製）
収穫した大和マナ１１９ｇを８０℃に熱した１００ｍＬの蒸留水で２０分間処理し、ミロシナーゼを失活させた。その後、常温に戻したマナを蒸留水ごと、３０秒間ホモジナイズ、遠心分離（３１００ｒｐｍ，５ｍｉｎ）することで、マナの熱水抽出液と残渣を得た。また、残渣はもう一度、熱水抽出を行い、得られた熱水抽出液も１回目の熱水抽出液と合わせた。続いて、熱水抽出液に１Ｍ酢酸亜鉛を５ｍＬ添加し、攪拌することでタンパク質を沈殿させ、遠心分離を行うことで、除タンパクを行った。得られた上清は、陰イオン交換樹脂（ＤＥＡＥ Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ−２５）により精製を行い、最終的には分取ＨＰＬＣ（Ｃｏｓｍｏｓｉｌ Ｈｉｌｉｃ，ＣＨ３ＣＮ：１０ｍｍｏｌ／ｍＬ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ５．６）＝１：１，１．０ｍＬ／ｍｉｎ，２５４ｎｍ）を行うことにより、３−ブテニルイソチオシアネート配糖体（３−ブテニルグルコシノレート）を単離した。本品は、黄色不定形粉末として得られ、水に可溶であった。高分解能ＥＳＩ−ＭＳにより得られた分子イオンピークの値［ｍ／ｚ ３７２．０４２８５ （Ｍ−Ｈ）−Δ−０．０４ｍｍｕ］より、分子式がＣ１１Ｈ１９ＮＯ９Ｓ２であり、３−ブテニルイソチオシアネート配糖体の分子式と一致した。
本品の１Ｈ−ＮＭＲおよび１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルデータを以下に示す。そして、これらのスペクトルの解析から、本品は３−ブテニルイソチオシアネート配糖体であると決定した。
１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：５．９４（１Ｈ，ｍ，Ｈ１０），５．１７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１．２５＆１７．２４Ｈｚ，Ｈ−１１ａ），５．０９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１．２５＆１０．５０Ｈｚ，Ｈ−１１ｂ），５．０４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．８３Ｈｚ，Ｈ１），３．９０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．５９Ｈｚ，Ｈ−６ａ），３．７２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．６３＆１２．５９，Ｈ−６ｂ），３．５７−３．４７（４Ｈ，ｍ，Ｈ２，Ｈ３，Ｈ４ ａｎｄ Ｈ５），２．８４（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２−９），２．４９（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２−８）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：１６６．６（Ｃ７），１３９．６（Ｃ１０），１１８．８（Ｃ１１），８４．６（Ｃ１），８２．９（Ｃ５），７９．９（Ｃ３），７４．８（Ｃ２），７２．０（Ｃ４），６３．４（Ｃ６），３６．８ ａｎｄ ３５．４（Ｃ８ ａｎｄ Ｃ９）．
【００２５】
製造例４ （フェネチルグルコシノレート（ＰＥＧＬＳ）の単離・精製）
収穫した大和マナ１１９ｇを８０℃に熱した１００ｍＬの蒸留水で２０分間処理し、ミロシナーゼを失活させた。その後、常温に戻したマナを蒸留水ごと、３０秒間ホモジナイズ、遠心分離（３１００ｒｐｍ，５ｍｉｎ）することで、マナの熱水抽出液と残渣を得た。また、残渣はもう一度、熱水抽出を行い、得られた熱水抽出液も１回目の熱水抽出液と合わせた。続いて、熱水抽出液に１Ｍ酢酸亜鉛を５ｍＬ添加し、攪拌することでタンパク質を沈殿させ、遠心分離を行うことで、除タンパクを行った。得られた上清は、陰イオン交換樹脂（ＤＥＡＥ Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ−２５）、続いて分取ＨＰＬＣ（Ｃｏｓｍｏｓｉｌ Ｈｉｌｉｃ，ＣＨ３ＣＮ：１０ｍｍｏｌ／ｍＬ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ５．６）＝１：１，１．０ｍＬ／ｍｉｎ，２５４ｎｍ）により精製すると、フェネチルグルコシノレート（フェネチルイソチオシアネート配糖体）が黄色不定形粉末として得られた。本品は、高分解能ＥＳＩ−ＭＳにより得られた分子イオンピークの値［ｍ／ｚ ４２２．０５８５０ （Ｍ−Ｈ）−、Δ−０．０ｍｍｕ］より、分子式がＣ１５Ｈ２１ＮＯ９Ｓ２であり、フェネチルグルコシノレートの分子式と一致した。また、１Ｈ−ＮＭＲおよび１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルデータを以下に示すが、これらのデータは文献値（Ｆｉｔｏｔｅｒａｐｉａ，７２巻７６０−７６４頁２００１年）と良く一致した。
１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：７．３８（４Ｈ，ｍ，Ｈ１１ ａｎｄ Ｈ１２），７．３１（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．００Ｈｚ，Ｈ１３），４．８９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．７１Ｈｚ，Ｈ１），３．８４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．８０Ｈｚ，Ｈ−６ａ），３．６７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．１０＆１２．８０Ｈｚ，Ｈ−６ｂ），３．４７（４Ｈ，ｍ，Ｈ２，Ｈ３，Ｈ４ ａｎｄ Ｈ５），３．０５（４Ｈ，ｍ，ＣＨ２−８ ａｎｄ ＣＨ２−９）.
１３Ｃ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：１６６．２（Ｃ７），１４３．４（Ｃ１０），１３１．６（Ｃ１１ ａｎｄ Ｃ１２），１２９．５（Ｃ１３），８４．５（Ｃ１），８２．９（Ｃ５），７９．９（Ｃ３），７４．７（Ｃ２），７１．９（Ｃ４），６３．４（Ｃ６），３６．８ ａｎｄ ３５．４（Ｃ８ ａｎｄ Ｃ９）.
【００２６】
実施例１ （リパーゼ阻害活性試験）
フェネチルイソチオシアネート（ＰＥＩＴＣ）は、東京化成製のものを用いた。ＰＥＩＴＣのリパーゼ阻害活性は、リパーゼキットＳ（大日本住友製薬）［基質液：三酪酸ジメルカプロール（ＢＡＬＢ），ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）；エステラーゼ阻害剤：フェニルメチルスルホニウムフルオリド（ＰＭＳＦ）；発色剤：５，５’−ジチオビス（２−ニトロ安息香酸）（ＤＴＮＢ）；緩衝液：トリスアミノメタン緩衝液；反応停止液：ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）］を用いて測定した。酵素はブタ由来の膵リパーゼ（ＩＣＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ）を使用し、１．０ｕｎｉｔ／ｍＬの膵リパーゼ液を調製した。
【００２７】
膵リパーゼ液（５μＬ）、エステラーゼ阻害剤（２μＬ）、発色液（７３μＬ）を９６ウェルプレート上で混和して、５分間、３７℃でプレインキュベートを行った。次いで、サンプル溶液、あるいはコントロールとして蒸留水またはメタノール（１０μＬ）と基質液（１０μＬ）を混和し、３０分間３７℃でインキュベートを行った。ただし、ブランクには反応停止液を加えたのちに基質液を加えた。その後、反応停止液（２００μｌ）を加えてよく混和し、４０５ｎｍで吸光度を測定した。サンプルのリパーゼとの反応率（％）は数１により算出した。結果は、図１に示した。
【００２８】
【数１】
【００２９】
実施例２ （肥満抑制活性および脂肪蓄積抑制活性試験）
５週齢のマウス（雌、Ｓｌｃ：ｄｄＹ）を４群用意した。各群は８匹のマウスからなり、１週間の予備飼育後、試験開始時の各群の体重の平均値が群同士で同じになるように分けられた。標準食群には表１に示す標準食を与え、高脂肪職群には表１の高脂肪食を与え、試験群（ＢＵＧＬＳ摂取群およびＰＥＧＬＳ摂取群）には表１の高脂肪食に０．０３％のＢＵＧＬＳまたはＰＥＧＬＳを加えた飼料を与えて飼育を開始した。飼育開始から体重および食餌摂取量は週２回測定した。飼育日数は５６日で、１２時間絶食後、採血を行い、血中脂質を測定した。また飼育開始から５７日目に屠殺し、傍子宮脂肪組織重量を測定した。
【００３０】
【表１】
【００３１】
体重測定結果を図２、食餌摂取量測定結果を図３に示す。図２に示すように、高脂肪食群のマウスでは、標準食群と比べて体重が有意に増加した。これに対し、高脂肪食プラス０．０３％ＢＵＧＬＳまたはＰＥＧＬＳを与えた試験群のマウスでは、高脂肪食群のマウスと比べて体重の増加が抑えられた。
【００３２】
また、傍子宮脂肪組織重量測定結果を図４に示す。この結果、ＰＥＧＬＳ投与群は高脂肪食群と比較して有意に脂肪蓄積抑制効果を示し、ＢＵＧＬＳは脂肪蓄積抑制傾向を示した。
【産業上の利用可能性】
【００３３】
本発明により、アブラナ科アブラナ属植物食物由来のイソチオシアネートまたはその配糖体を含有する、副作用が少なく、持続的かつ予防的な摂取あるいは投与可能なリパーゼ阻害剤および肥満抑制剤、さらにそれを配合してなる医薬品および飲食品を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００３４】
【図１】フェネチルイソチオシアネート（ＰＥＩＴＣ）のリパーゼ阻害活性を示す
【図２】高脂肪食群、標準食群、ＢＵＧＬＳ投与群およびＰＥＧＬＳ投与群のマウスの体重測定結果を示す。
【図３】高脂肪食群、標準食群、ＢＵＧＬＳ投与群およびＰＥＧＬＳ投与群のマウスの食餌量を示す。
【図４】高脂肪食群、標準食群、ＢＵＧＬＳ投与群およびＰＥＧＬＳ投与群のマウスの傍子宮脂肪組織重量測定結果を示す。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アブラナ科（Ｂｒａｓｓｉｃａｃｅａｅ）アブラナ属（Ｂｒａｓｓｉｃａ）植物、特に大和マナ（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｒａｐａ Ｌ．）由来のイソチオシアネート化合物および／またはその配糖体（グルコシノレート）を含有することを特徴とするリパーゼ阻害剤、ならびに肥満抑制剤および脂肪蓄積抑制剤に関する。更に詳しくは、生体内での脂質の消化吸収をにない肥満症や脂質異常症の鍵を握る膵リパーゼを有効に阻害して肥満や脂肪蓄積の抑制や予防に有効な安全性の高いリパーゼ阻害剤、ならびに肥満抑制剤および脂肪蓄積抑制剤、さらにそれを配合してなる医薬品および飲食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、食生活の欧米化に伴い、特に脂肪摂取量の増加によって肥満を始めとする生活習慣病患者が急増していることが指摘されている。肥満は、摂取エネルギーと消費エネルギーのアンバランスを特徴とするエネルギー代謝異常であり、結果として脂肪細胞に中性脂肪が過剰に蓄積した状態と定義されている。食事により摂取された脂肪は、腸管内で分解・吸収され、生体内でエネルギーとして蓄積される。しかしながら、脂肪の過剰摂取や消費カロリー不足等により、エネルギーの吸収量が消費量を上回った場合には、生体内の組織や臓器において脂肪の過剰蓄積が起こり、肥満や脂質異常症等の症状が生じる。これらの症状は、動脈硬化、糖尿病、脂質異常症等の生活習慣病の発症にも関与していることが分かっている。そのため、生体内における脂肪の過剰蓄積を抑制することは、肥満や脂質異常症等の症状の発症を予防乃至改善するだけでなく、前記生活習慣病の予防乃至治療にも有効であると考えられている。
【０００３】
脂肪は、腸管内に存在するリパーゼにより脂肪酸とグリセロールに分解後、腸管において吸収されるが、過剰な脂肪摂取によるグリセロールと脂肪酸の吸収は肥満へと至らしめる。従って、腸管内に存在するリパーゼの活性を阻害することによって、腸管における脂肪の分解・吸収を抑制できる。このような理由から、リパーゼ阻害剤は、肥満や脂質異常症等の予防又は改善剤、或いは前記生活習慣病の予防又は治療剤として有用であると考えられる。事実、膵リパーゼ阻害剤のオリルスタット（非特許文献１）は抗肥満薬として米国など多くの国にて臨床的に使用されている。しかし、オリルスタット服用の早期にみられる放屁、突然の便意、脂肪便等副作用が指摘されている。
【０００４】
近年、予防的な観点から、ヒトの健康状態や食品機能を科学的に研究する機能性食品、特にその有効成分の研究が盛んになされ、アブラナ科植物由来のイソチオシアネート化合物及びその配糖体は、そのガン予防効果等様々な生理活性作用にて注目を集めている（非特許文献２）。一方、リパーゼ阻害作用を特徴とした食品の機能性成分についても幾つかの特許出願があり（特許文献１、２、３、４、５）、さらに、わさび成分を有効成分とする抗肥満剤（特許文献６）やマカまたはベンジルグルコシノレートを有効成分とする抗肥満作用（特許文献７）に関する特許出願はあるが、アブラナ科アブラナ属の大和マナ由来のイソチオシアネート化合物であるフェネチルイソチオシアネートや３-ブテニルイソチオシアネート、ならびにそれらの配糖体についてのリパーゼ阻害活性、ならびに肥満抑制作用および脂肪蓄積抑制作用についての具体的開示はない。
【０００５】
【非特許文献１】Ａ．Ｍ．Ｈｅｃｋら、ファーマコセラピー（Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ）、２０巻、２７０−２７９頁、２０００年
【非特許文献２】Ｙ．Ｚｈａｎｇら、プロシーディングス・オブ・ザ・ニュートリション・ソサイアティ（Ｐｒｏｃ Ｎｕｔｒ Ｓｏｃ．）、第６５巻、６８−７５頁、２００６年
【特許文献１】特開２００１−１２０２３７号公報
【特許文献２】特開２００１−２９９２７２号公報
【特許文献３】特開２００２−５３４８４号公報
【特許文献４】特開２００４−１６１６４４号公報
【特許文献５】特許第３６８９０９９号公報
【特許文献６】特開２００６−３２８０５６号公報
【特許文献７】特開２００７−２３０９８７号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の目的は、植物食品由来で副作用が少なく、持続的かつ予防的な摂取あるいは投与可能なリパーゼ阻害剤、ならびに肥満抑制剤および脂質蓄積抑制剤、さらにそれを配合してなる医薬品および飲食品を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは上記目的を達成すべく、植物食品由来で安全性が高くリパーゼ阻害に効果を示す物質について鋭意検討した結果、大和マナ由来のイソチオシアネート化合物および／またはその配糖体（グルコシノレート）にリパーゼ阻害効果、ならびに肥満抑制効果および脂肪蓄積抑制剤を見出し、本発明を完成させた。
【０００８】
即ち、本発明は以下の発明を包含する。
（１）アブラナ科（Ｂｒａｓｓｉｃａｃｅａｅ）アブラナ属（Ｂｒａｓｓｉｃａ）植物由来のイソチオシアネート化合物および／またはその配糖体を含有することを特徴とするリパーゼ阻害剤；
（２）アブラナ科アブラナ属植物由来のイソチオシアネート化合物および／またはその配糖体を含有することを特徴とする肥満抑制剤；
（３）脂肪蓄積抑制剤である（２）記載の剤；
（４）アブラナ科アブラナ属植物が大和マナ（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｒａｐａ Ｌ．）である（１）〜（３）いずれかに記載の剤；
（５）前記イソチオシアネート化合物がフェネチルイソチオシアネートである（１）〜（３）いずれかに記載の剤；
（６）前記イソチオシアネート化合物が３-ブテニルイソチオシアネートである（２）または（３）記載の剤；
（７）大和マナ自体またはその抽出物を有効成分として含有することを特徴とするリパーゼ阻害剤または肥満抑制剤；
（８）（１）〜（７）のいずれかに記載の剤を配合してなる医薬品；
（９）（１）〜（７）のいずれかに記載の剤を配合してなる飲食品；
などに関する。
【発明の効果】
【０００９】
本発明により、アブラナ科アブラナ属植物、特に大和マナ由来のイソチオシアネート化合物および／またはその配糖体を有効成分として含有することにより、副作用が少なく、経口的に、持続的かつ予防的な摂取あるいは投与可能なリパーゼ阻害剤、肥満抑制剤および脂肪蓄積抑制剤、ならびにそれを配合してなる医薬品および飲食品を提供されることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
以下において、本発明を詳細に説明する。本発明におけるイソチオシアネート化合物またはその配糖体（グルコシノレート）は、アブラナ科アブラナ属由来のものが利用されるが、そのアブラナ科アブラナ属植物としては、ブロッコリー、タカナ、キャベツ、ハクサイ、大和マナ、小松菜、カリフラワー、カブ、チンゲンサイ、ミズナ、ノザワナなどがある。
【００１１】
本発明のイソチオシアネート化合物はアブラナ科アブラナ属植物由来のものが利用されるが、アリールアルキルイソチオシアネートおよびアルケニルアルキルイソチオシアネートが好ましく、さらにアリールアルキルイソチオシアネートとしてはフェネチルイソチオシアネートが好ましく、アルケニルアルキルイソチオシアネートとしては３−ブテニルイソチオシアネートが好ましい。
【００１２】
アブラナ科植物において、イソチオシアネート化合物は、配糖体（グルコシノレート）として存在している。イソチオシアネート配糖体は細胞内在ミロシナーゼ等の酵素と接触してイソチオシアネート化合物へ変換される。また、イソチオシアネート配糖体は、ヒトの腸内細菌によりイソチオシアネート化合物へ変換されることが知られている。
【００１３】
以上のようにアブラナ科植物においては、イソチオシアネート配糖体として存在しているため、イソチオシアネート化合物として用いてもよいが、その配糖体（グルコシノレート）をリパーゼ阻害剤として用いてもよい。さらにイソチオシアネート配糖体を用いる場合に、外在性のミロシナーゼを添加して用いてもよい。
【００１４】
さらに大和マナ自体またはその抽出物を有効成分として用いることが出来る。大和マナ自体を有効成分として用いる場合、採取した大和マナを水洗し必要により凍結乾燥、熱風乾燥あるいは自然乾燥したものを、細断または粉砕した細断物あるいは粉末状物にしたもの、ペースト状化したもの、ホモジナイズ化して不溶物をろ過したろ液、またはそのろ液を濃縮したもの等種々の形態のものが用いられる。抽出物を有効成分として用いる場合は、大和マナの細断物あるいは粉末状物を水や有機溶媒、あるいはその混合物にて抽出したもの、あるいはその抽出液を濃縮して得られた濃縮物（エキス）、あるいはその濃縮物を真空乾燥、スプレー乾燥、凍結乾燥をして粉末化したものなどが用いられる。抽出有機溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノールおよびイソブタノール等の低級アルコール類、アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類、酢酸メチル、酢酸エチル等の酢酸エステル類、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル等のエーテル類、ヘキサン、トルエン等の炭化水素類が用いられる。これら有機溶媒と水は、単独でも２種類以上を混合して用いても良い。
【００１５】
アブラナ科植物、特に大和マナからのイソチオシアネート化合物の抽出は、例えば、植物体をすりおろしなどによる粉砕ないし細断した後、植物内在性のミロシナーゼにより、イソチオシアネート配糖体からイソチオシアネート化合物を十分に生成させてから、適当な溶媒にて抽出することにより行うことができる。抽出溶媒としては、イソチオシアネート化合物の性質にもよるが、酢酸エチル、酢酸メチルなどのエステル類、ジエチルエーテル、エチルイソプロピルエーテルなどのエーテル類、クロロホルム、ジクロロメタンなどのハロゲン系炭化水素、メチルアルコール、エチルアルコール、イソプロピルアルコールなどのアルコール類、アセトン、メチルエチルケトンなどのケトン類などの溶媒が用いられる。好ましくは、酢酸エチルが用いられる。
【００１６】
イソチオシアネート化合物は、試薬として市販されているものは購入により入手可能であるが、種々の化学合成によっても得られる。例えば、アミン化合物やシリルアミン化合物等から得られる（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ，２６，１６６−４（１９８５），Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，５３９（１９７０）等）。
【００１７】
一方、アブラナ科植物、特に大和マナからのイソチオシアネート配糖体（グルコシノレート）の抽出は、例えば、あらかじめ植物体の内在性ミロシナーゼを加熱等により不活化し、続いてすりおろしなどによる粉砕ないし細断した後、ろ過し、ろ液をカラムクロマトグラフィーなどにより分離精製することにより、目的とするイソチオシアネート配糖体（グルコシノレート）が得られる。他方、イソチオシアネート配糖体（グルコシノレート）は、種々の化学的方法によっても得ることができる（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，３６，７７９−７８３（１９８０）等）。
【００１８】
かくして得られたイソチオシアネート化合物および／またはその配糖体は、１種あるいは２種以上を組み合わせて用いることができる。また、イソチオシアネート化合物および／またはその配糖体は、単独で摂取することは可能であるが、各種飲食品に添加してあるいは医薬組成物として使用することができる。具体的には、菓子、パン類、麺類の固形食品あるいはジュースや健康茶等の飲料品に添加して、または粉末状、顆粒状、カプセル状および錠剤などの医薬品・医薬部外品等の組成物として用いることができる。
【００１９】
本発明のイソチオシアネート化合物および／またはその配糖体を治療目的あるいは予防的目的の医薬として用いる場合の投与量は、その製剤形態、投与方法、使用目的および投与される患者の年齢、体重、症状によって異なるが、成人１日当たり好ましくは０．００１〜２０００ｍｇ／ｋｇ体重であり、より好ましくは０．０１〜２００ｍｇ／ｋｇ体重である。
【００２０】
一方、イソチオシアネート化合物および／またはその配糖体、ならびにそれを含有するアブラナ科アブラナ属植物体、特に大和マナを飲食品として用いる場合の有効成分の摂取量は、好ましくは０・０００１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重、より好ましくは０．０１〜１ｍｇ／ｋｇ体重である。
【実施例】
【００２１】
以下に、本発明を実施例に基づいて説明する。本発明は以下の実施例によってなんら限定されるものではなく、本発明の属する技術分野における通常の変更を加えて実施することが出来ることは言うまでもない。
【００２２】
製造例１ （大和マナから３−ブテニルイソチオシアネート（ＢＵＩＴＣ）の確認）
収穫した大和マナ１７ｇに１００ｍｌの蒸留水を添加し、３０秒間ホモジナイズし、３７℃で２時間放置し、生体内ミロシナーゼで反応させた。その後、ホモジナイズ液を、遠心分離（３１００ｒｐｍ，５ｍｉｎ）することで、マナの水抽出液を得た。続いて、水抽出液を等量の酢酸エチルで分配することにより、酢酸エチル画分を得、ＨＰＬＣ分析用サンプルとした。上記サンプルを用いたＨＰＬＣ分析（Ｃｏｓｍｏｓｉｌ５Ｃ１８−ＭＳＩＩ，ＣＨ３ＯＨ：Ｈ２Ｏ＝４／６−（５ｍｉｎ）−４／６−（５ｍｉｎ）−６／４−（７．５ｍｉｎ）−６／４−（７．５ｍｉｎ）−１０／０−（５ｍｉｎ）−１０／０−（１０ｍｉｎ）−１０／０，１．０ｍＬ／ｍｉｎ，２５４ｎｍ）の結果、３−ブテニルイソチオシアネートの標品（東京化成より購入の３−ブテニルイソチオシアネート）と一致した。
【００２３】
製造例２ （大和マナからフェネチルイソチオシアネート（ＰＥＩＴＣ）の確認）
製造例１と同様に処理して、フェネチルイソチオシアネート画分を得、ＨＰＬＣ分析の結果、標品（東京化成より購入のフェネチルイソチオシアネート）と完全に一致した。
【００２４】
製造例３ （３−ブテニルグルコシノレート（ＢＵＧＬＳ）の単離・精製）
収穫した大和マナ１１９ｇを８０℃に熱した１００ｍＬの蒸留水で２０分間処理し、ミロシナーゼを失活させた。その後、常温に戻したマナを蒸留水ごと、３０秒間ホモジナイズ、遠心分離（３１００ｒｐｍ，５ｍｉｎ）することで、マナの熱水抽出液と残渣を得た。また、残渣はもう一度、熱水抽出を行い、得られた熱水抽出液も１回目の熱水抽出液と合わせた。続いて、熱水抽出液に１Ｍ酢酸亜鉛を５ｍＬ添加し、攪拌することでタンパク質を沈殿させ、遠心分離を行うことで、除タンパクを行った。得られた上清は、陰イオン交換樹脂（ＤＥＡＥ Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ−２５）により精製を行い、最終的には分取ＨＰＬＣ（Ｃｏｓｍｏｓｉｌ Ｈｉｌｉｃ，ＣＨ３ＣＮ：１０ｍｍｏｌ／ｍＬ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ５．６）＝１：１，１．０ｍＬ／ｍｉｎ，２５４ｎｍ）を行うことにより、３−ブテニルイソチオシアネート配糖体（３−ブテニルグルコシノレート）を単離した。本品は、黄色不定形粉末として得られ、水に可溶であった。高分解能ＥＳＩ−ＭＳにより得られた分子イオンピークの値［ｍ／ｚ ３７２．０４２８５ （Ｍ−Ｈ）−Δ−０．０４ｍｍｕ］より、分子式がＣ１１Ｈ１９ＮＯ９Ｓ２であり、３−ブテニルイソチオシアネート配糖体の分子式と一致した。
本品の１Ｈ−ＮＭＲおよび１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルデータを以下に示す。そして、これらのスペクトルの解析から、本品は３−ブテニルイソチオシアネート配糖体であると決定した。
１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：５．９４（１Ｈ，ｍ，Ｈ１０），５．１７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１．２５＆１７．２４Ｈｚ，Ｈ−１１ａ），５．０９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１．２５＆１０．５０Ｈｚ，Ｈ−１１ｂ），５．０４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．８３Ｈｚ，Ｈ１），３．９０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．５９Ｈｚ，Ｈ−６ａ），３．７２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．６３＆１２．５９，Ｈ−６ｂ），３．５７−３．４７（４Ｈ，ｍ，Ｈ２，Ｈ３，Ｈ４ ａｎｄ Ｈ５），２．８４（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２−９），２．４９（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２−８）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：１６６．６（Ｃ７），１３９．６（Ｃ１０），１１８．８（Ｃ１１），８４．６（Ｃ１），８２．９（Ｃ５），７９．９（Ｃ３），７４．８（Ｃ２），７２．０（Ｃ４），６３．４（Ｃ６），３６．８ ａｎｄ ３５．４（Ｃ８ ａｎｄ Ｃ９）．
【００２５】
製造例４ （フェネチルグルコシノレート（ＰＥＧＬＳ）の単離・精製）
収穫した大和マナ１１９ｇを８０℃に熱した１００ｍＬの蒸留水で２０分間処理し、ミロシナーゼを失活させた。その後、常温に戻したマナを蒸留水ごと、３０秒間ホモジナイズ、遠心分離（３１００ｒｐｍ，５ｍｉｎ）することで、マナの熱水抽出液と残渣を得た。また、残渣はもう一度、熱水抽出を行い、得られた熱水抽出液も１回目の熱水抽出液と合わせた。続いて、熱水抽出液に１Ｍ酢酸亜鉛を５ｍＬ添加し、攪拌することでタンパク質を沈殿させ、遠心分離を行うことで、除タンパクを行った。得られた上清は、陰イオン交換樹脂（ＤＥＡＥ Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ−２５）、続いて分取ＨＰＬＣ（Ｃｏｓｍｏｓｉｌ Ｈｉｌｉｃ，ＣＨ３ＣＮ：１０ｍｍｏｌ／ｍＬ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ５．６）＝１：１，１．０ｍＬ／ｍｉｎ，２５４ｎｍ）により精製すると、フェネチルグルコシノレート（フェネチルイソチオシアネート配糖体）が黄色不定形粉末として得られた。本品は、高分解能ＥＳＩ−ＭＳにより得られた分子イオンピークの値［ｍ／ｚ ４２２．０５８５０ （Ｍ−Ｈ）−、Δ−０．０ｍｍｕ］より、分子式がＣ１５Ｈ２１ＮＯ９Ｓ２であり、フェネチルグルコシノレートの分子式と一致した。また、１Ｈ−ＮＭＲおよび１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルデータを以下に示すが、これらのデータは文献値（Ｆｉｔｏｔｅｒａｐｉａ，７２巻７６０−７６４頁２００１年）と良く一致した。
１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：７．３８（４Ｈ，ｍ，Ｈ１１ ａｎｄ Ｈ１２），７．３１（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．００Ｈｚ，Ｈ１３），４．８９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．７１Ｈｚ，Ｈ１），３．８４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．８０Ｈｚ，Ｈ−６ａ），３．６７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．１０＆１２．８０Ｈｚ，Ｈ−６ｂ），３．４７（４Ｈ，ｍ，Ｈ２，Ｈ３，Ｈ４ ａｎｄ Ｈ５），３．０５（４Ｈ，ｍ，ＣＨ２−８ ａｎｄ ＣＨ２−９）.
１３Ｃ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：１６６．２（Ｃ７），１４３．４（Ｃ１０），１３１．６（Ｃ１１ ａｎｄ Ｃ１２），１２９．５（Ｃ１３），８４．５（Ｃ１），８２．９（Ｃ５），７９．９（Ｃ３），７４．７（Ｃ２），７１．９（Ｃ４），６３．４（Ｃ６），３６．８ ａｎｄ ３５．４（Ｃ８ ａｎｄ Ｃ９）.
【００２６】
実施例１ （リパーゼ阻害活性試験）
フェネチルイソチオシアネート（ＰＥＩＴＣ）は、東京化成製のものを用いた。ＰＥＩＴＣのリパーゼ阻害活性は、リパーゼキットＳ（大日本住友製薬）［基質液：三酪酸ジメルカプロール（ＢＡＬＢ），ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）；エステラーゼ阻害剤：フェニルメチルスルホニウムフルオリド（ＰＭＳＦ）；発色剤：５，５’−ジチオビス（２−ニトロ安息香酸）（ＤＴＮＢ）；緩衝液：トリスアミノメタン緩衝液；反応停止液：ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）］を用いて測定した。酵素はブタ由来の膵リパーゼ（ＩＣＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ）を使用し、１．０ｕｎｉｔ／ｍＬの膵リパーゼ液を調製した。
【００２７】
膵リパーゼ液（５μＬ）、エステラーゼ阻害剤（２μＬ）、発色液（７３μＬ）を９６ウェルプレート上で混和して、５分間、３７℃でプレインキュベートを行った。次いで、サンプル溶液、あるいはコントロールとして蒸留水またはメタノール（１０μＬ）と基質液（１０μＬ）を混和し、３０分間３７℃でインキュベートを行った。ただし、ブランクには反応停止液を加えたのちに基質液を加えた。その後、反応停止液（２００μｌ）を加えてよく混和し、４０５ｎｍで吸光度を測定した。サンプルのリパーゼとの反応率（％）は数１により算出した。結果は、図１に示した。
【００２８】
【数１】
【００２９】
実施例２ （肥満抑制活性および脂肪蓄積抑制活性試験）
５週齢のマウス（雌、Ｓｌｃ：ｄｄＹ）を４群用意した。各群は８匹のマウスからなり、１週間の予備飼育後、試験開始時の各群の体重の平均値が群同士で同じになるように分けられた。標準食群には表１に示す標準食を与え、高脂肪職群には表１の高脂肪食を与え、試験群（ＢＵＧＬＳ摂取群およびＰＥＧＬＳ摂取群）には表１の高脂肪食に０．０３％のＢＵＧＬＳまたはＰＥＧＬＳを加えた飼料を与えて飼育を開始した。飼育開始から体重および食餌摂取量は週２回測定した。飼育日数は５６日で、１２時間絶食後、採血を行い、血中脂質を測定した。また飼育開始から５７日目に屠殺し、傍子宮脂肪組織重量を測定した。
【００３０】
【表１】
【００３１】
体重測定結果を図２、食餌摂取量測定結果を図３に示す。図２に示すように、高脂肪食群のマウスでは、標準食群と比べて体重が有意に増加した。これに対し、高脂肪食プラス０．０３％ＢＵＧＬＳまたはＰＥＧＬＳを与えた試験群のマウスでは、高脂肪食群のマウスと比べて体重の増加が抑えられた。
【００３２】
また、傍子宮脂肪組織重量測定結果を図４に示す。この結果、ＰＥＧＬＳ投与群は高脂肪食群と比較して有意に脂肪蓄積抑制効果を示し、ＢＵＧＬＳは脂肪蓄積抑制傾向を示した。
【産業上の利用可能性】
【００３３】
本発明により、アブラナ科アブラナ属植物食物由来のイソチオシアネートまたはその配糖体を含有する、副作用が少なく、持続的かつ予防的な摂取あるいは投与可能なリパーゼ阻害剤および肥満抑制剤、さらにそれを配合してなる医薬品および飲食品を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００３４】
【図１】フェネチルイソチオシアネート（ＰＥＩＴＣ）のリパーゼ阻害活性を示す
【図２】高脂肪食群、標準食群、ＢＵＧＬＳ投与群およびＰＥＧＬＳ投与群のマウスの体重測定結果を示す。
【図３】高脂肪食群、標準食群、ＢＵＧＬＳ投与群およびＰＥＧＬＳ投与群のマウスの食餌量を示す。
【図４】高脂肪食群、標準食群、ＢＵＧＬＳ投与群およびＰＥＧＬＳ投与群のマウスの傍子宮脂肪組織重量測定結果を示す。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アブラナ科（Ｂｒａｓｓｉｃａｃｅａｅ）アブラナ属（Ｂｒａｓｓｉｃａ）植物由来のイソチオシアネート化合物および／またはその配糖体を含有することを特徴とするリパーゼ阻害剤。
【請求項２】
アブラナ科アブラナ属植物由来のイソチオシアネート化合物および／またはその配糖体を含有することを特徴とする肥満抑制剤。
【請求項３】
脂肪蓄積抑制剤である請求項２記載の剤。
【請求項４】
前記アブラナ科アブラナ属植物が大和マナ（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｒａｐａ Ｌ．）である請求項１〜３いずれか１項記載の剤。
【請求項５】
前記イソチオシアネート化合物がフェネチルイソチオシアネートである請求項１〜３いずれか１項記載の剤。
【請求項６】
前記イソチオシアネート化合物が３-ブテニルイソチオシアネートである請求項２または３記載の剤。
【請求項７】
大和マナ自体またはその抽出物を有効成分として含有することを特徴とするリパーゼ阻害剤または肥満抑制剤。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか１項記載の剤を配合してなる医薬品。
【請求項９】
請求項１〜７のいずれか１項記載の剤を配合してなる飲食品。
【請求項１】
アブラナ科（Ｂｒａｓｓｉｃａｃｅａｅ）アブラナ属（Ｂｒａｓｓｉｃａ）植物由来のイソチオシアネート化合物および／またはその配糖体を含有することを特徴とするリパーゼ阻害剤。
【請求項２】
アブラナ科アブラナ属植物由来のイソチオシアネート化合物および／またはその配糖体を含有することを特徴とする肥満抑制剤。
【請求項３】
脂肪蓄積抑制剤である請求項２記載の剤。
【請求項４】
前記アブラナ科アブラナ属植物が大和マナ（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｒａｐａ Ｌ．）である請求項１〜３いずれか１項記載の剤。
【請求項５】
前記イソチオシアネート化合物がフェネチルイソチオシアネートである請求項１〜３いずれか１項記載の剤。
【請求項６】
前記イソチオシアネート化合物が３-ブテニルイソチオシアネートである請求項２または３記載の剤。
【請求項７】
大和マナ自体またはその抽出物を有効成分として含有することを特徴とするリパーゼ阻害剤または肥満抑制剤。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか１項記載の剤を配合してなる医薬品。
【請求項９】
請求項１〜７のいずれか１項記載の剤を配合してなる飲食品。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図２】
【図３】
【図４】
【公開番号】特開２０１０−１２６４８９（Ｐ２０１０−１２６４８９Ａ）
【公開日】平成２２年６月１０日（２０１０．６．１０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−３０３２９３（Ｐ２００８−３０３２９３）
【出願日】平成２０年１１月２８日（２００８．１１．２８）
【出願人】（３０６０２３３３６）財団法人奈良県中小企業支援センター (18)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２２年６月１０日（２０１０．６．１０）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年１１月２８日（２００８．１１．２８）
【出願人】（３０６０２３３３６）財団法人奈良県中小企業支援センター (18)
【Ｆターム（参考）】
[ Back to top ]