リン酸ジエステルアミド
本発明は、脂質類似のリン酸エステル化合物および殊にリン酸トリエステル、リン酸ジエステルアミドならびにリン酸ジエステルに関する。有利には、好ましくは少なくとも１個の遊離ヒドロキシル基を有するカチオン性リン脂質に関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、脂質類似のリン酸化合物および殊にリン酸トリエステル、リン酸ジエステルアミドならびにリン酸ジエステルに関する。有利には、好ましくは少なくとも１個の遊離ヒドロキシル基を有するカチオン性リン脂質に関する。
【０００２】
リン脂質はきわめて興味深い化合物であり、それは非常に様々の使用目的において使用されうる。リン脂質は、例えばリポソーム構成成分として使用される。しかし、それ自体でも活性作用物質になりえ、かつ病気の治療または遺伝子導入にも使用されうる。それゆえ本発明の課題は、好適な特性を有する、さらなるリン脂質構造を提供することであった。この課題は、本発明により、式（Ｉ）
【化１】
［式中、
Ｒ１は、無極性基であり、
Ｒ２は、−（ＣＨ２）ｘ−Ｎ＋（Ｒ４）３であり、その際、
ｘ＝１〜１０、殊に２または３、
Ｒ４は、それぞれの出現において、互いに無関係に、Ｈ、場合によっては置換されていてよくまたはヘテロ原子を含有してよいアルキル、またはＲ２に関して挙げられた意味を有し、かつ
Ｘは、−Ｏ−Ｒ３、−ＮＲ５−Ｒ３およびＯ−から選択され、
その際、
Ｒ３は、場合によっては置換されていてよくかつ／またはヘテロ原子を有してよいアルキル基であり、またはＲ２に関して挙げられた意味を有し、かつ
Ｒ５は、そのつど無関係に、水素、アルキル、ＯＨ、または置換されているかもしくはヘテロ原子を含有してよいアルキルである］
の化合物によって解決される。
【０００３】
本発明による化合物は、脂質類似のリン酸化合物、および殊に全体で正に帯電している化合物である。該化合物は、好ましくは少なくとも１つの正の過剰電荷を有する。その際、該正電荷は、負電荷の過補償または負電荷の除去によって得られる。負電荷の過補償は、例えば正に帯電している第四級窒素元素の分子中への導入によって得られる。負電荷の除去は、例えばエステルまたはアミド形成によって行われうる。
【０００４】
本発明による化合物は、好ましくは１分子当たり少なくとも１個の遊離ヒドロキシル基、殊に１分子当たり少なくとも２個の遊離ヒドロキシル基、さらに有利には１分子当たり少なくとも３個の遊離ヒドロキシル基およびそれより有利には１分子当たり少なくとも４個の遊離ヒドロキシル基を含有する。遊離ヒドロキシル基によって、生物体（リポソーム）中での殊に長い循環時間もしくは遺伝子導入のための安定した錯体が得られる。
【０００５】
本発明によるリン酸化合物は、殊に無極性脂質構造である無極性基Ｒ１を包含する。分子の疎水性部分を形成するこの基Ｒ１は、当業者に公知の無極性基から選択されうる。有利にはＲ１は、ジアシルグリセリン基、ジアルキルグリセリン基またはアシルアルキルグリセリン基であり、その際、アシル基もしくはアルキル基は、好ましくはＣ原子１０〜３０個、さらに有利には１２〜２８個および殊に１４〜２４個を有する。ジアシル鎖または／およびアルキル鎖は、飽和またはポリ不飽和であってよい。一実施態様において、天然に存在する脂肪酸基を用いることが有利である。その他の一実施態様においては、天然には存在しない位置にそれらの不飽和が存在するアシル基またはアルキル基が用いられる。とりわけ有利なアシル基は、オレイン酸、リノール酸またはリノレン酸の基であり、とりわけ有利なアルキル基は、オクタデセニル基、オクタデカンジエニル基ならびにオクタデカントリエニル基である。
【０００６】
とりわけ重要な一実施態様は、Ｒ１が単にアルキル基、殊にＣ１〜Ｃ３０アルキル、有利にはＣ８〜Ｃ２８アルキル、それよりさらに有利にはＣ１２〜Ｃ２６アルキル、最も有利にはＣ１４〜Ｃ２４アルキルの時である。該アルキル基は、直鎖状または分岐鎖状かつ飽和または不飽和であってよく、殊に１個または２個の二重結合を有してよい。該アルキル基は、例えばテトラデシル基、ヘキサデシル基、オクタデシル基または有利にはオレイル基、リノレイル基、またはリノレニル基であってよい。この場合、該アルキル基は直接にリン酸エステルでエステル化され、すなわち架橋分子としてのグリセリンが失われる。この実施態様においては、直接に薬剤作用を有し、かつ癌および寄生虫病に対して使用されうる化合物群が生じる。
【０００７】
基Ｒ２は、本発明により原子団−（ＣＨ２）ｘ−Ｎ＋（Ｒ４）３を表す。この基によって、少なくとも１個の正電荷が分子中に導入される。ｘは、好ましくは１〜１０、殊に１〜６の整数およびとりわけ有利には２または３である。Ｒ４は、それぞれの出現において、互いに無関係に、水素またはアルキル基を意味し、その際、該アルキル基は、場合によっては置換されていてよいかまたはヘテロ原子を含有してよい。有利には、それはＣ１〜Ｃ１０−アルキル基、殊にＣ１〜Ｃ６−アルキル基、それよりさらに有利にはＣ１〜Ｃ４−アルキル基、殊にメチルである。該アルキル基は、殊に酸素、窒素および硫黄、有利には酸素から選択された１つ以上のヘテロ原子を含有してよい。さらにＲ４は、置換基で、殊に１個以上のＯＨ基で置換されていてよい。有利にはＲ４は、少なくとも２個、それよりさらに有利には少なくとも３個のＯＨ基を有する。Ｒ４がＯＨ基を有するような化合物は、新規の化合物群である。さらにＲ４は、Ｒ２に関して挙げられた意味を有し、そのことによって−（ＣＨ２）ｘ−Ｎ＋（Ｒ４）２−（ＣＨ２）ｘ−Ｎ＋（Ｒ４）３の種の基がもたらされうる。これらの基は２つ以上の正電荷を含有し、ひいてはリン酸基の負電荷が過補償されることになる。そのような原子団は、ｘ＝２においてはエチレンジアミンから出発して、ｘ＝３においてはプロピレンジアミンから出発して、ｘ＝４においてはブチレンジアミン等から出発して得られる。
【０００８】
本発明の有利な一実施態様において、Ｘは−ＮＲ５−Ｒ３である。この場合、リン酸ジエステルアミドの化合物が重要である。好ましくはＲ３は、ヘテロ原子を含有してよく、かつ場合によっては置換されていてよいアルキル基である。適した基Ｒ３に関する例は、例えばメチル、エチル等である。さらなる有利な一実施態様においてＲ３は、Ｒ４に関して挙げられた意味を持つ。有利にはＲ３は、少なくとも１個のＯＨ基で、さらに有利には少なくとも２個のＯＨ基で置換されているアルキル基であり、その際、該アルキル基は鎖中にヘテロ原子、殊に窒素または酸素、有利には酸素を含有してよい。該アルキル基は、好ましくはＣ原子１〜１０個、殊に２〜６個を含有する。とりわけ有利にはＲ３は、−（ＣＲ５２）ｙ−［Ｏ−（ＣＲ５２）ｚ］ｐ−（ＣＲ５３）であり、その際、Ｒ５は、そのつど無関係に、水素、ＯＨ、アルキル、殊にＣ１〜Ｃ１０−アルキル、さらに有利にはＣ１〜Ｃ６−アルキルおよびとりわけ有利にはＣ１〜Ｃ４−アルキルであり、それは場合によっては、殊にＯＨで置換されており、ｙは１から１０の間の整数、殊に１〜６の整数およびとりわけ有利には２または３であり、ｚは０〜６の整数、殊に２または３であり、かつｐは０〜１０の整数、殊に１〜５の整数である。
【０００９】
さらなる有利な一実施態様において、Ｘは−Ｏ−Ｒ３である。この場合、リン酸トリエステルの化合物が重要である。そのような化合物は、好ましくは少なくとも１個の基Ｒ４を有し、該基は少なくとも１個の遊離ヒドロキシル基を含有する。
【００１０】
さらなる有利な一実施態様において、ＸはＯ−である。この場合、少なくとも１個の遊離ヒドロキシル基を有する化合物が有利である。
【００１１】
本発明による化合物は、殊にリポソーム構成成分として使用されうる。殊に、該リポソーム構成成分は、過剰の正電荷を有するリポソーム（肝臓での速い集積）の製造のために使用されうる。
【００１２】
しかし、該リポソーム構成成分は、それ自体も活性作用物質として、殊に薬剤として使用されうる。殊にＲ１＝Ｃ原子１４〜２４個を有するアルキルにおいて、その物質は、薬剤として使用される活性作用物質である。本発明による化合物の使用は、癌および寄生虫病、例えばリーシュマニア症の治療に際しての薬剤として、とりわけ重要である。
【００１３】
さらに本発明による化合物は、オリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）錯体およびプラスミド（ＤＮＡ）錯体の製造のために使用されえ、該化合物は、他方でトランスフェクションのために使用されうる。該化合物は、治療目的で、発現可能な核酸（遺伝子）または発現可能でない核酸（オリゴデオキシヌクレオチド、リボザイム）を体細胞に導入するのに適している。
【００１４】
殊に確かめられたのは、従来技術の慣例の化合物の場合、血清が合間に除去されなければならない一方で、遊離ＯＨ基を包含する本発明による化合物では血清中での遺伝子導入が可能なことである。
【００１５】
さらに本発明は、式（Ｉ）に従う化合物の製造法に関し、該製造法は、以下の工程：
（ｉ）Ｏ＝ＰＣｌ３を準備する工程、
（ｉｉ）Ｏ＝ＰＣｌ３を無極性化合物と、殊にジアシルグリセリン、ジアルキルグリセリンまたはアシルアルキルグリセリンと反応させる工程、
（ｉｉｉ）化合物ＯＨ−Ｒ２と反応させる工程であって、その際、Ｒ２に存在する遊離アミノ基は保護基を有している、
（ｉｖ）ＨＸと反応させる工程および
（ｖ）場合によっては該保護基を除去する工程、
を含有し、その際、Ｒ２およびＸは、請求項２で挙げられた意味を有する。
【００１６】
適した保護基は、例えばＢＯＣ保護基である。３番目の塩素原子は、Ｏ＝ＰＣｌ３と２個のアルコール官能基との反応後、非常に低反応性であるため、アミノアルコールの使用によってアミンと実質的に定量的な反応を行ってよい。それというのもアミンは、アルコール基より約１０００〜１００００倍速く反応するからである。また複数の遊離ヒドロキシル基を包含するアミン（例えば、ＮＨ２−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２（ＯＨ））の使用によって、問題なく、任意の所望された数の遊離ヒドロキシル基が本発明による化合物中に導入されうる。
【００１７】
本発明は、以下の実施例によってさらに説明される。
【００１８】
実施例１
２個のＮ原子によるリン酸の負電荷の過補償
【化２】
【００１９】
【化３】
【００２０】
実施例２
トリエステル形成下でのリン酸の負電荷の除去
【化４】
【００２１】
実施例３
ジエステル−アミド形成によるリン酸の負電荷の除去
【化５】
【００２２】
実施例４
【化６】
【００２３】
実施例５
遺伝子導入において使用するための負電荷が過補償された有利な化合物
１）１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−（Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−［Ｎ'，Ｎ'，Ｎ'−トリメチル−エチルアンモニオ］−エチルアンモニウムクロリド、
Ｃ４０Ｈ８２ＣｌＮ２Ｏ８Ｐ（７８５．５）
１，２−ジパルミトイル誘導体とのＤＣ（薄層クロマトグラフィー）比較による検出（物質２を参照のこと）
２）１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−（Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−［Ｎ'，Ｎ'，Ｎ'−トリメチル−エチルアンモニオ］−エチルアンモニウムクロリド、
Ｃ４４Ｈ９０ＣｌＮ２Ｏ８Ｐ（８４１．６）
計算された（％）：Ｃ，６２．７９；Ｈ，１０．７８；Ｎ，３．３３；Ｐ．３．６８
測定された（％）： ６２．５４； １０．７１； ３．２１； ３．６７
３）１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−（Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−［Ｎ'，Ｎ'，Ｎ'−トリメチル−エチルアンモニオ］−エチルアンモニウムクロリド、
Ｃ４８Ｈ９８ＣｌＮ２Ｏ８Ｐ（８９７．８）
１，２−ジパルミトイル誘導体とのＤＣ比較による検出（物質２を参照のこと）
４）１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−（Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−［Ｎ'，Ｎ'−ジメチル−エチルアンモニオ］−エチルアンモニウム、
Ｃ４３Ｈ８７Ｎ２Ｏ８Ｐ（７９１．２）
計算された（％）：Ｃ，６５．２８；Ｈ，１１．０９；Ｎ，３．５４；Ｐ．３．９２
測定された（％）： ６５．１１； １１．０２； ３．４７； ３．８８
５）１，２−ジオレイル−ｒａｃ−グリセロ−３−ホスホ−（Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−［Ｎ'，Ｎ'，Ｎ'−トリメチル−エチルアンモニオ］−エチルアンモニウムクロリド、
Ｃ４８Ｈ９８ＣｌＮ２Ｏ６Ｐ（８６５．８）
計算された（％）：Ｃ，６６．５９；Ｈ，１１．４１；Ｎ，３．２４；Ｐ．３．５８
測定された（％）： ６６．４１； １１．３５； ３．１９； ３．４５
【００２４】
実施例６
遺伝子導入において使用するための、かつ正の過剰電荷を有するリポソームを製造するための、負電荷の過補償をともなう有利な新規の化合物。
【００２５】
例えば、１，３−ジアミノ−２−プロパノールの使用によって
６）１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−（Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−［Ｎ'，Ｎ'−ジメチル−Ｎ'−ヒドロキシプロピルアンモニオ］−エチルアンモニウムクロリド）
Ｃ４１Ｈ８４ＣｌＮ２Ｏ９Ｐ（８１５．６０）が
または１，４−ジアミノ−ブタンジオール−２，３により
７）１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−（Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ［Ｎ'，Ｎ'−ジメチル−Ｎ'−２，３−ジヒドロキシプロピルアンモニオ］−エチルアンモニウムクロリド）
Ｃ４２Ｈ８５ＣｌＮ２Ｏ１０Ｐ（８４５．８０）が生じる。
【００２６】
実施例７
トリエステル形成によるリン酸の負電荷の除去による正の過剰電荷。
【００２７】
Ａ）遺伝子導入においておよび正の過剰電荷を有するリポソームの製造のため
８）１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−エチレングリコール−コリンエステルクロリド
Ｃ３８Ｈ７７ＣｌＮＯ９Ｐ（７５８．４６）
９）１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−グリセロール−コリンエステルクロリド
Ｃ３９Ｈ７９ＣｌＮＯ１０Ｐ（７８８．４９）
１０）１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−グリセロール−（Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル）−プロピルアンモニウムクロリド
Ｃ４０Ｈ８１ＣｌＮＯ１０Ｐ（８０２．５１）
１１）１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−エチレングリコール−コリンエステルクロリド
Ｃ４２Ｈ８５ＣｌＮＯ９Ｐ（８１４．５７）
１２）１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−グリセロール−コリンエステルクロリド
Ｃ４３Ｈ８７ＣｌＮＯ１０Ｐ（８４４．５９）
１３）１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−グリセロール−（Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル）−プロピルアンモニウムクロリド
Ｃ４４Ｈ８９ＣｌＮＯ１０Ｐ（８５８．６２）
１４）１−パルミトイル−２−ラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−エチレングリコール−コリンエステルクロリド
Ｃ３８Ｈ７７ＣｌＮＯ９Ｐ（７５８．４６）
１５）１−パルミトイル−２−ラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−グリセロール−コリンエステルクロリド
Ｃ３９Ｈ７９ＣｌＮＯ１０Ｐ（７８８．４９）
１６）１−パルミトイル−２−ラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−グリセロール−（Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル）−プロピルアンモニウムクロリド
Ｃ４０Ｈ８１ＣｌＮＯ１０Ｐ（８０２．５１）
【００２８】
Ｂ）癌および寄生虫病に対する作用物質として
１７）オクタデシル−ホスホ−エチレングリコール−コリンエステルクロリド
Ｃ２５Ｈ５５ＣｌＮＯ５Ｐ（５１６．１４）
１８）オクタデシル−ホスホ−グリセロール−コリンエステルクロリド
Ｃ２６Ｈ５７ＣｌＮＯ６Ｐ（５４６．１７）
１９）オクタデシル−ホスホ−グリセロール−（Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル）−プロピルアンモニウムクロリド
Ｃ２７Ｈ５９ＣｌＮＯ６Ｐ（５６０．２０）
２０）オレイル−ホスホ−エチレングリコール−コリンエステルクロリド
Ｃ２５Ｈ５３ＣｌＮＯ５Ｐ（５１４．００）
２１）オレイル−ホスホ−グリセロール−コリンエステルクロリド
Ｃ２６Ｈ５５ＣｌＮＯ６Ｐ（５４４．０３）
２２）オレイル−ホスホ−グリセロール−（Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル）−プロピルアンモニウムクロリド
Ｃ２７Ｈ５７ＣｌＮＯ６Ｐ（５５８．０６）
２３）エルシル−ホスホ−エチレングリコール−コリンエステルクロリド
Ｃ２９Ｈ６１ＣｌＮＯ５Ｐ（５７０．２４）
２４）エルシル−ホスホ−グリセロール−コリンエステルクロリド
Ｃ３０Ｈ６３ＣｌＮＯ６Ｐ（６００．２７）
２５）エルシル−ホスホ−グリセロール−（Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル）−プロピルアンモニウムクロリド
Ｃ３１Ｈ６５ＣｌＮＯ６Ｐ（６１４．３０）
【００２９】
実施例８
アミド形成によるリン酸の負電荷の除去による正の過剰電荷。
【００３０】
Ａ）遺伝子のトランスフェションに関しておよび正の過剰電荷を有するリポソームの製造のため
２６）１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−エタノールアミド−コリンエステルクロリド
Ｃ３８Ｈ７８ＣｌＮ２Ｏ８Ｐ（７５７．４８）
２７）１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−３−アミド−１，２−プロパンジオール−コリンエステルクロリド
Ｃ３９Ｈ８０ＣｌＮ２Ｏ９Ｐ（７８７．４６）
２８）１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−アミド−１，２−プロパンジオール−（Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル）−プロピルアンモニウムクロリド
Ｃ４０Ｈ８２ＣｌＮ２Ｏ９Ｐ（８０１．４９）
２９）１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−エタノールアミド−コリンエステルクロリド
Ｃ４２Ｈ８６ＣｌＮ２Ｏ８Ｐ（８１３．５５）
３０）１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−３−アミド−１，２−プロパンジオール−コリンエステルクロリド
Ｃ４３Ｈ８８ＣｌＮ２Ｏ９Ｐ（８４３．５７）
３１）１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−３−アミド−１，２−プロパンジオール−（Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル）−プロピルアンモニウムクロリド
Ｃ４３Ｈ８８ＣｌＮ２Ｏ９Ｐ（８５７．６０）
３２）１−パルミトイル−２−ラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−エタノールアミド−コリンエステルクロリド
Ｃ３８Ｈ７８ＣｌＮ２Ｏ８Ｐ（７５７．４８）
３３）１−パルミトイル−２−ラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−３−アミド−１，２−プロパンジオール−コリンエステルクロリド
Ｃ３９Ｈ８０ＣｌＮ２Ｏ９Ｐ（７８７．４６）
３４）１−パルミトイル−２−ラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−３−アミド−１，２−プロパンジオール−（Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル）−プロピルアンモニウムクロリド
Ｃ４０Ｈ８２ＣｌＮ２Ｏ９Ｐ（８０１．４９）
【００３１】
Ａ）癌および寄生虫病に対する作用物質として
３５）オクタデシル−ホスホ−エタノールアミド−コリンエステルクロリド
Ｃ２５Ｈ５６ＣｌＮ２Ｏ４Ｐ（５１５．１２）
３６）オクタデイル−ホスホ−３−アミド−１，２−プロパンジオール−コリンエステルクロリド
Ｃ２６Ｈ５８ＣｌＮ２Ｏ５Ｐ（５４５．１５）
３７）オクタデイル−ホスホ−３−アミド−１，２−プロパンジオール−（Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル）−プロピルアンモニウムクロリド
Ｃ２７Ｈ６０ＣｌＮ２Ｏ５Ｐ（５５９．１８）
３８）オレイル−ホスホ−エタノールアミド−コリンエステルクロリド
Ｃ２５Ｈ５４ＣｌＮ２Ｏ４Ｐ（５１２．９８）
３９）オレイル−ホスホ−３−アミド−１，２−プロパンジオール−コリンエステルクロリド
Ｃ２６Ｈ５６ＣｌＮ２Ｏ５Ｐ（５４３．１１）
４０）オレイル−ホスホ−３−アミド−１，２−プロパンジオール−（Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル）−プロピルアンモニウムクロリド
Ｃ２７Ｈ５８ＣｌＮ２Ｏ５Ｐ（５５７．０４）
４１）エルシル−ホスホ−エタノールアミド−コリンエステルクロリド
Ｃ２９Ｈ６２ＣｌＮ２Ｏ４Ｐ（５６９．２２）
４２）エルシル−ホスホ−３−アミド−１，２−プロパンジオール−コリンエステルクロリド
Ｃ３０Ｈ６４ＣｌＮ２Ｏ５Ｐ（５９９．２５）
４３）エルシル−ホスホ−３−アミド−１，２−プロパンジオール−（Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル）−プロピルアンモニウムクロリド
Ｃ３１Ｈ６６ＣｌＮ２Ｏ５Ｐ（６１３．２８）
【００３２】
実施例９
窒素を有する基に遊離ヒドロキシル基を持つ化合物；遺伝子導入のためのおよび正の過剰電荷を有するリポソームの製造のための使用。
【００３３】
Ａ）トリエステルとして
４４）１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−グリセリン−（Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−ジヒドロキシプロピル）−エチルアンモニウムクロリド
Ｃ４１Ｈ８３ＣｌＮＯ１２Ｐ（８４８．５４）
４５）１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−グリコール−（Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−ジヒドロキシプロピル）−エチルアンモニウムクロリド
Ｃ４０Ｈ８１ＣｌＮＯ１１Ｐ（８１８．５０）
Ｂ）アミドとして
４６）１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−３−アミド−１，２−プロパンジオール−（Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−ジヒドロキシプロピル）−エチルアンモニウムクロリド
Ｃ４１Ｈ８４ＣｌＮ２Ｏ１１Ｐ（８４７．５２）
４７）１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−グリコール−（Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−ジヒドロキシプロピル）−エチルアンモニウムクロリド
Ｃ４０Ｈ８２ＣｌＮ２Ｏ１０Ｐ（８１７．４９）
【技術分野】
【０００１】
本発明は、脂質類似のリン酸化合物および殊にリン酸トリエステル、リン酸ジエステルアミドならびにリン酸ジエステルに関する。有利には、好ましくは少なくとも１個の遊離ヒドロキシル基を有するカチオン性リン脂質に関する。
【０００２】
リン脂質はきわめて興味深い化合物であり、それは非常に様々の使用目的において使用されうる。リン脂質は、例えばリポソーム構成成分として使用される。しかし、それ自体でも活性作用物質になりえ、かつ病気の治療または遺伝子導入にも使用されうる。それゆえ本発明の課題は、好適な特性を有する、さらなるリン脂質構造を提供することであった。この課題は、本発明により、式（Ｉ）
【化１】
［式中、
Ｒ１は、無極性基であり、
Ｒ２は、−（ＣＨ２）ｘ−Ｎ＋（Ｒ４）３であり、その際、
ｘ＝１〜１０、殊に２または３、
Ｒ４は、それぞれの出現において、互いに無関係に、Ｈ、場合によっては置換されていてよくまたはヘテロ原子を含有してよいアルキル、またはＲ２に関して挙げられた意味を有し、かつ
Ｘは、−Ｏ−Ｒ３、−ＮＲ５−Ｒ３およびＯ−から選択され、
その際、
Ｒ３は、場合によっては置換されていてよくかつ／またはヘテロ原子を有してよいアルキル基であり、またはＲ２に関して挙げられた意味を有し、かつ
Ｒ５は、そのつど無関係に、水素、アルキル、ＯＨ、または置換されているかもしくはヘテロ原子を含有してよいアルキルである］
の化合物によって解決される。
【０００３】
本発明による化合物は、脂質類似のリン酸化合物、および殊に全体で正に帯電している化合物である。該化合物は、好ましくは少なくとも１つの正の過剰電荷を有する。その際、該正電荷は、負電荷の過補償または負電荷の除去によって得られる。負電荷の過補償は、例えば正に帯電している第四級窒素元素の分子中への導入によって得られる。負電荷の除去は、例えばエステルまたはアミド形成によって行われうる。
【０００４】
本発明による化合物は、好ましくは１分子当たり少なくとも１個の遊離ヒドロキシル基、殊に１分子当たり少なくとも２個の遊離ヒドロキシル基、さらに有利には１分子当たり少なくとも３個の遊離ヒドロキシル基およびそれより有利には１分子当たり少なくとも４個の遊離ヒドロキシル基を含有する。遊離ヒドロキシル基によって、生物体（リポソーム）中での殊に長い循環時間もしくは遺伝子導入のための安定した錯体が得られる。
【０００５】
本発明によるリン酸化合物は、殊に無極性脂質構造である無極性基Ｒ１を包含する。分子の疎水性部分を形成するこの基Ｒ１は、当業者に公知の無極性基から選択されうる。有利にはＲ１は、ジアシルグリセリン基、ジアルキルグリセリン基またはアシルアルキルグリセリン基であり、その際、アシル基もしくはアルキル基は、好ましくはＣ原子１０〜３０個、さらに有利には１２〜２８個および殊に１４〜２４個を有する。ジアシル鎖または／およびアルキル鎖は、飽和またはポリ不飽和であってよい。一実施態様において、天然に存在する脂肪酸基を用いることが有利である。その他の一実施態様においては、天然には存在しない位置にそれらの不飽和が存在するアシル基またはアルキル基が用いられる。とりわけ有利なアシル基は、オレイン酸、リノール酸またはリノレン酸の基であり、とりわけ有利なアルキル基は、オクタデセニル基、オクタデカンジエニル基ならびにオクタデカントリエニル基である。
【０００６】
とりわけ重要な一実施態様は、Ｒ１が単にアルキル基、殊にＣ１〜Ｃ３０アルキル、有利にはＣ８〜Ｃ２８アルキル、それよりさらに有利にはＣ１２〜Ｃ２６アルキル、最も有利にはＣ１４〜Ｃ２４アルキルの時である。該アルキル基は、直鎖状または分岐鎖状かつ飽和または不飽和であってよく、殊に１個または２個の二重結合を有してよい。該アルキル基は、例えばテトラデシル基、ヘキサデシル基、オクタデシル基または有利にはオレイル基、リノレイル基、またはリノレニル基であってよい。この場合、該アルキル基は直接にリン酸エステルでエステル化され、すなわち架橋分子としてのグリセリンが失われる。この実施態様においては、直接に薬剤作用を有し、かつ癌および寄生虫病に対して使用されうる化合物群が生じる。
【０００７】
基Ｒ２は、本発明により原子団−（ＣＨ２）ｘ−Ｎ＋（Ｒ４）３を表す。この基によって、少なくとも１個の正電荷が分子中に導入される。ｘは、好ましくは１〜１０、殊に１〜６の整数およびとりわけ有利には２または３である。Ｒ４は、それぞれの出現において、互いに無関係に、水素またはアルキル基を意味し、その際、該アルキル基は、場合によっては置換されていてよいかまたはヘテロ原子を含有してよい。有利には、それはＣ１〜Ｃ１０−アルキル基、殊にＣ１〜Ｃ６−アルキル基、それよりさらに有利にはＣ１〜Ｃ４−アルキル基、殊にメチルである。該アルキル基は、殊に酸素、窒素および硫黄、有利には酸素から選択された１つ以上のヘテロ原子を含有してよい。さらにＲ４は、置換基で、殊に１個以上のＯＨ基で置換されていてよい。有利にはＲ４は、少なくとも２個、それよりさらに有利には少なくとも３個のＯＨ基を有する。Ｒ４がＯＨ基を有するような化合物は、新規の化合物群である。さらにＲ４は、Ｒ２に関して挙げられた意味を有し、そのことによって−（ＣＨ２）ｘ−Ｎ＋（Ｒ４）２−（ＣＨ２）ｘ−Ｎ＋（Ｒ４）３の種の基がもたらされうる。これらの基は２つ以上の正電荷を含有し、ひいてはリン酸基の負電荷が過補償されることになる。そのような原子団は、ｘ＝２においてはエチレンジアミンから出発して、ｘ＝３においてはプロピレンジアミンから出発して、ｘ＝４においてはブチレンジアミン等から出発して得られる。
【０００８】
本発明の有利な一実施態様において、Ｘは−ＮＲ５−Ｒ３である。この場合、リン酸ジエステルアミドの化合物が重要である。好ましくはＲ３は、ヘテロ原子を含有してよく、かつ場合によっては置換されていてよいアルキル基である。適した基Ｒ３に関する例は、例えばメチル、エチル等である。さらなる有利な一実施態様においてＲ３は、Ｒ４に関して挙げられた意味を持つ。有利にはＲ３は、少なくとも１個のＯＨ基で、さらに有利には少なくとも２個のＯＨ基で置換されているアルキル基であり、その際、該アルキル基は鎖中にヘテロ原子、殊に窒素または酸素、有利には酸素を含有してよい。該アルキル基は、好ましくはＣ原子１〜１０個、殊に２〜６個を含有する。とりわけ有利にはＲ３は、−（ＣＲ５２）ｙ−［Ｏ−（ＣＲ５２）ｚ］ｐ−（ＣＲ５３）であり、その際、Ｒ５は、そのつど無関係に、水素、ＯＨ、アルキル、殊にＣ１〜Ｃ１０−アルキル、さらに有利にはＣ１〜Ｃ６−アルキルおよびとりわけ有利にはＣ１〜Ｃ４−アルキルであり、それは場合によっては、殊にＯＨで置換されており、ｙは１から１０の間の整数、殊に１〜６の整数およびとりわけ有利には２または３であり、ｚは０〜６の整数、殊に２または３であり、かつｐは０〜１０の整数、殊に１〜５の整数である。
【０００９】
さらなる有利な一実施態様において、Ｘは−Ｏ−Ｒ３である。この場合、リン酸トリエステルの化合物が重要である。そのような化合物は、好ましくは少なくとも１個の基Ｒ４を有し、該基は少なくとも１個の遊離ヒドロキシル基を含有する。
【００１０】
さらなる有利な一実施態様において、ＸはＯ−である。この場合、少なくとも１個の遊離ヒドロキシル基を有する化合物が有利である。
【００１１】
本発明による化合物は、殊にリポソーム構成成分として使用されうる。殊に、該リポソーム構成成分は、過剰の正電荷を有するリポソーム（肝臓での速い集積）の製造のために使用されうる。
【００１２】
しかし、該リポソーム構成成分は、それ自体も活性作用物質として、殊に薬剤として使用されうる。殊にＲ１＝Ｃ原子１４〜２４個を有するアルキルにおいて、その物質は、薬剤として使用される活性作用物質である。本発明による化合物の使用は、癌および寄生虫病、例えばリーシュマニア症の治療に際しての薬剤として、とりわけ重要である。
【００１３】
さらに本発明による化合物は、オリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）錯体およびプラスミド（ＤＮＡ）錯体の製造のために使用されえ、該化合物は、他方でトランスフェクションのために使用されうる。該化合物は、治療目的で、発現可能な核酸（遺伝子）または発現可能でない核酸（オリゴデオキシヌクレオチド、リボザイム）を体細胞に導入するのに適している。
【００１４】
殊に確かめられたのは、従来技術の慣例の化合物の場合、血清が合間に除去されなければならない一方で、遊離ＯＨ基を包含する本発明による化合物では血清中での遺伝子導入が可能なことである。
【００１５】
さらに本発明は、式（Ｉ）に従う化合物の製造法に関し、該製造法は、以下の工程：
（ｉ）Ｏ＝ＰＣｌ３を準備する工程、
（ｉｉ）Ｏ＝ＰＣｌ３を無極性化合物と、殊にジアシルグリセリン、ジアルキルグリセリンまたはアシルアルキルグリセリンと反応させる工程、
（ｉｉｉ）化合物ＯＨ−Ｒ２と反応させる工程であって、その際、Ｒ２に存在する遊離アミノ基は保護基を有している、
（ｉｖ）ＨＸと反応させる工程および
（ｖ）場合によっては該保護基を除去する工程、
を含有し、その際、Ｒ２およびＸは、請求項２で挙げられた意味を有する。
【００１６】
適した保護基は、例えばＢＯＣ保護基である。３番目の塩素原子は、Ｏ＝ＰＣｌ３と２個のアルコール官能基との反応後、非常に低反応性であるため、アミノアルコールの使用によってアミンと実質的に定量的な反応を行ってよい。それというのもアミンは、アルコール基より約１０００〜１００００倍速く反応するからである。また複数の遊離ヒドロキシル基を包含するアミン（例えば、ＮＨ２−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２（ＯＨ））の使用によって、問題なく、任意の所望された数の遊離ヒドロキシル基が本発明による化合物中に導入されうる。
【００１７】
本発明は、以下の実施例によってさらに説明される。
【００１８】
実施例１
２個のＮ原子によるリン酸の負電荷の過補償
【化２】
【００１９】
【化３】
【００２０】
実施例２
トリエステル形成下でのリン酸の負電荷の除去
【化４】
【００２１】
実施例３
ジエステル−アミド形成によるリン酸の負電荷の除去
【化５】
【００２２】
実施例４
【化６】
【００２３】
実施例５
遺伝子導入において使用するための負電荷が過補償された有利な化合物
１）１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−（Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−［Ｎ'，Ｎ'，Ｎ'−トリメチル−エチルアンモニオ］−エチルアンモニウムクロリド、
Ｃ４０Ｈ８２ＣｌＮ２Ｏ８Ｐ（７８５．５）
１，２−ジパルミトイル誘導体とのＤＣ（薄層クロマトグラフィー）比較による検出（物質２を参照のこと）
２）１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−（Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−［Ｎ'，Ｎ'，Ｎ'−トリメチル−エチルアンモニオ］−エチルアンモニウムクロリド、
Ｃ４４Ｈ９０ＣｌＮ２Ｏ８Ｐ（８４１．６）
計算された（％）：Ｃ，６２．７９；Ｈ，１０．７８；Ｎ，３．３３；Ｐ．３．６８
測定された（％）： ６２．５４； １０．７１； ３．２１； ３．６７
３）１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−（Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−［Ｎ'，Ｎ'，Ｎ'−トリメチル−エチルアンモニオ］−エチルアンモニウムクロリド、
Ｃ４８Ｈ９８ＣｌＮ２Ｏ８Ｐ（８９７．８）
１，２−ジパルミトイル誘導体とのＤＣ比較による検出（物質２を参照のこと）
４）１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−（Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−［Ｎ'，Ｎ'−ジメチル−エチルアンモニオ］−エチルアンモニウム、
Ｃ４３Ｈ８７Ｎ２Ｏ８Ｐ（７９１．２）
計算された（％）：Ｃ，６５．２８；Ｈ，１１．０９；Ｎ，３．５４；Ｐ．３．９２
測定された（％）： ６５．１１； １１．０２； ３．４７； ３．８８
５）１，２−ジオレイル−ｒａｃ−グリセロ−３−ホスホ−（Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−［Ｎ'，Ｎ'，Ｎ'−トリメチル−エチルアンモニオ］−エチルアンモニウムクロリド、
Ｃ４８Ｈ９８ＣｌＮ２Ｏ６Ｐ（８６５．８）
計算された（％）：Ｃ，６６．５９；Ｈ，１１．４１；Ｎ，３．２４；Ｐ．３．５８
測定された（％）： ６６．４１； １１．３５； ３．１９； ３．４５
【００２４】
実施例６
遺伝子導入において使用するための、かつ正の過剰電荷を有するリポソームを製造するための、負電荷の過補償をともなう有利な新規の化合物。
【００２５】
例えば、１，３−ジアミノ−２−プロパノールの使用によって
６）１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−（Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−［Ｎ'，Ｎ'−ジメチル−Ｎ'−ヒドロキシプロピルアンモニオ］−エチルアンモニウムクロリド）
Ｃ４１Ｈ８４ＣｌＮ２Ｏ９Ｐ（８１５．６０）が
または１，４−ジアミノ−ブタンジオール−２，３により
７）１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−（Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ［Ｎ'，Ｎ'−ジメチル−Ｎ'−２，３−ジヒドロキシプロピルアンモニオ］−エチルアンモニウムクロリド）
Ｃ４２Ｈ８５ＣｌＮ２Ｏ１０Ｐ（８４５．８０）が生じる。
【００２６】
実施例７
トリエステル形成によるリン酸の負電荷の除去による正の過剰電荷。
【００２７】
Ａ）遺伝子導入においておよび正の過剰電荷を有するリポソームの製造のため
８）１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−エチレングリコール−コリンエステルクロリド
Ｃ３８Ｈ７７ＣｌＮＯ９Ｐ（７５８．４６）
９）１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−グリセロール−コリンエステルクロリド
Ｃ３９Ｈ７９ＣｌＮＯ１０Ｐ（７８８．４９）
１０）１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−グリセロール−（Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル）−プロピルアンモニウムクロリド
Ｃ４０Ｈ８１ＣｌＮＯ１０Ｐ（８０２．５１）
１１）１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−エチレングリコール−コリンエステルクロリド
Ｃ４２Ｈ８５ＣｌＮＯ９Ｐ（８１４．５７）
１２）１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−グリセロール−コリンエステルクロリド
Ｃ４３Ｈ８７ＣｌＮＯ１０Ｐ（８４４．５９）
１３）１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−グリセロール−（Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル）−プロピルアンモニウムクロリド
Ｃ４４Ｈ８９ＣｌＮＯ１０Ｐ（８５８．６２）
１４）１−パルミトイル−２−ラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−エチレングリコール−コリンエステルクロリド
Ｃ３８Ｈ７７ＣｌＮＯ９Ｐ（７５８．４６）
１５）１−パルミトイル−２−ラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−グリセロール−コリンエステルクロリド
Ｃ３９Ｈ７９ＣｌＮＯ１０Ｐ（７８８．４９）
１６）１−パルミトイル−２−ラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−グリセロール−（Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル）−プロピルアンモニウムクロリド
Ｃ４０Ｈ８１ＣｌＮＯ１０Ｐ（８０２．５１）
【００２８】
Ｂ）癌および寄生虫病に対する作用物質として
１７）オクタデシル−ホスホ−エチレングリコール−コリンエステルクロリド
Ｃ２５Ｈ５５ＣｌＮＯ５Ｐ（５１６．１４）
１８）オクタデシル−ホスホ−グリセロール−コリンエステルクロリド
Ｃ２６Ｈ５７ＣｌＮＯ６Ｐ（５４６．１７）
１９）オクタデシル−ホスホ−グリセロール−（Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル）−プロピルアンモニウムクロリド
Ｃ２７Ｈ５９ＣｌＮＯ６Ｐ（５６０．２０）
２０）オレイル−ホスホ−エチレングリコール−コリンエステルクロリド
Ｃ２５Ｈ５３ＣｌＮＯ５Ｐ（５１４．００）
２１）オレイル−ホスホ−グリセロール−コリンエステルクロリド
Ｃ２６Ｈ５５ＣｌＮＯ６Ｐ（５４４．０３）
２２）オレイル−ホスホ−グリセロール−（Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル）−プロピルアンモニウムクロリド
Ｃ２７Ｈ５７ＣｌＮＯ６Ｐ（５５８．０６）
２３）エルシル−ホスホ−エチレングリコール−コリンエステルクロリド
Ｃ２９Ｈ６１ＣｌＮＯ５Ｐ（５７０．２４）
２４）エルシル−ホスホ−グリセロール−コリンエステルクロリド
Ｃ３０Ｈ６３ＣｌＮＯ６Ｐ（６００．２７）
２５）エルシル−ホスホ−グリセロール−（Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル）−プロピルアンモニウムクロリド
Ｃ３１Ｈ６５ＣｌＮＯ６Ｐ（６１４．３０）
【００２９】
実施例８
アミド形成によるリン酸の負電荷の除去による正の過剰電荷。
【００３０】
Ａ）遺伝子のトランスフェションに関しておよび正の過剰電荷を有するリポソームの製造のため
２６）１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−エタノールアミド−コリンエステルクロリド
Ｃ３８Ｈ７８ＣｌＮ２Ｏ８Ｐ（７５７．４８）
２７）１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−３−アミド−１，２−プロパンジオール−コリンエステルクロリド
Ｃ３９Ｈ８０ＣｌＮ２Ｏ９Ｐ（７８７．４６）
２８）１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−アミド−１，２−プロパンジオール−（Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル）−プロピルアンモニウムクロリド
Ｃ４０Ｈ８２ＣｌＮ２Ｏ９Ｐ（８０１．４９）
２９）１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−エタノールアミド−コリンエステルクロリド
Ｃ４２Ｈ８６ＣｌＮ２Ｏ８Ｐ（８１３．５５）
３０）１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−３−アミド−１，２−プロパンジオール−コリンエステルクロリド
Ｃ４３Ｈ８８ＣｌＮ２Ｏ９Ｐ（８４３．５７）
３１）１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−３−アミド−１，２−プロパンジオール−（Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル）−プロピルアンモニウムクロリド
Ｃ４３Ｈ８８ＣｌＮ２Ｏ９Ｐ（８５７．６０）
３２）１−パルミトイル−２−ラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−エタノールアミド−コリンエステルクロリド
Ｃ３８Ｈ７８ＣｌＮ２Ｏ８Ｐ（７５７．４８）
３３）１−パルミトイル−２−ラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−３−アミド−１，２−プロパンジオール−コリンエステルクロリド
Ｃ３９Ｈ８０ＣｌＮ２Ｏ９Ｐ（７８７．４６）
３４）１−パルミトイル−２−ラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−３−アミド−１，２−プロパンジオール−（Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル）−プロピルアンモニウムクロリド
Ｃ４０Ｈ８２ＣｌＮ２Ｏ９Ｐ（８０１．４９）
【００３１】
Ａ）癌および寄生虫病に対する作用物質として
３５）オクタデシル−ホスホ−エタノールアミド−コリンエステルクロリド
Ｃ２５Ｈ５６ＣｌＮ２Ｏ４Ｐ（５１５．１２）
３６）オクタデイル−ホスホ−３−アミド−１，２−プロパンジオール−コリンエステルクロリド
Ｃ２６Ｈ５８ＣｌＮ２Ｏ５Ｐ（５４５．１５）
３７）オクタデイル−ホスホ−３−アミド−１，２−プロパンジオール−（Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル）−プロピルアンモニウムクロリド
Ｃ２７Ｈ６０ＣｌＮ２Ｏ５Ｐ（５５９．１８）
３８）オレイル−ホスホ−エタノールアミド−コリンエステルクロリド
Ｃ２５Ｈ５４ＣｌＮ２Ｏ４Ｐ（５１２．９８）
３９）オレイル−ホスホ−３−アミド−１，２−プロパンジオール−コリンエステルクロリド
Ｃ２６Ｈ５６ＣｌＮ２Ｏ５Ｐ（５４３．１１）
４０）オレイル−ホスホ−３−アミド−１，２−プロパンジオール−（Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル）−プロピルアンモニウムクロリド
Ｃ２７Ｈ５８ＣｌＮ２Ｏ５Ｐ（５５７．０４）
４１）エルシル−ホスホ−エタノールアミド−コリンエステルクロリド
Ｃ２９Ｈ６２ＣｌＮ２Ｏ４Ｐ（５６９．２２）
４２）エルシル−ホスホ−３−アミド−１，２−プロパンジオール−コリンエステルクロリド
Ｃ３０Ｈ６４ＣｌＮ２Ｏ５Ｐ（５９９．２５）
４３）エルシル−ホスホ−３−アミド−１，２−プロパンジオール−（Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル）−プロピルアンモニウムクロリド
Ｃ３１Ｈ６６ＣｌＮ２Ｏ５Ｐ（６１３．２８）
【００３２】
実施例９
窒素を有する基に遊離ヒドロキシル基を持つ化合物；遺伝子導入のためのおよび正の過剰電荷を有するリポソームの製造のための使用。
【００３３】
Ａ）トリエステルとして
４４）１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−グリセリン−（Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−ジヒドロキシプロピル）−エチルアンモニウムクロリド
Ｃ４１Ｈ８３ＣｌＮＯ１２Ｐ（８４８．５４）
４５）１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−グリコール−（Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−ジヒドロキシプロピル）−エチルアンモニウムクロリド
Ｃ４０Ｈ８１ＣｌＮＯ１１Ｐ（８１８．５０）
Ｂ）アミドとして
４６）１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−３−アミド−１，２−プロパンジオール−（Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−ジヒドロキシプロピル）−エチルアンモニウムクロリド
Ｃ４１Ｈ８４ＣｌＮ２Ｏ１１Ｐ（８４７．５２）
４７）１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−グリコール−（Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−ジヒドロキシプロピル）−エチルアンモニウムクロリド
Ｃ４０Ｈ８２ＣｌＮ２Ｏ１０Ｐ（８１７．４９）
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
【化１】
［式中、
Ｒ１は、無極性基であり、
Ｒ２は、−（ＣＨ２）ｘ−Ｎ＋（Ｒ４）３であり、その際、
ｘ＝１〜１０、殊に２または３、
Ｒ４は、それぞれの出現において、互いに無関係に、Ｈ、置換または非置換であってよくまたはヘテロ原子を含有してよいアルキル、またはＲ２に関して挙げられた意味を有し、かつ
Ｘは、−Ｏ−Ｒ３、−ＮＲ５−Ｒ３およびＯ−から選択され、
その際、
Ｒ３は、置換または非置換であってよくかつ／またはヘテロ原子を有してよいアルキル基であり、またはＲ２に関して挙げられた意味を有し、かつ
Ｒ５は、そのつど無関係に、水素、アルキル、ＯＨ、または置換されているかもしくはヘテロ原子を含有してよいアルキルである］
の化合物。
【請求項２】
Ｒ３が、基−（ＣＲ５２）ｙ−［Ｏ−（ＣＲ５２）ｚ］ｐ−（ＣＲ５３）であり、その際、Ｒ５は、そのつど互いに無関係に、Ｈ、アルキル、ＯＨまたは１個以上のＯＨ基で置換されたアルキルであり、
ｙは１〜１０の、殊に１〜６の整数であり、
ｚは０〜１０の、殊に０〜６の整数でありかつ
ｐは０〜１０の、殊に１〜３の整数である
ことを特徴とする式（Ｉ）に従う化合物。
【請求項３】
該化合物が、全体で正電荷を有することを特徴とする、請求項１または２に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項４】
該化合物が、少なくとも１個の、殊に少なくとも２個の、有利には少なくとも３個の遊離ヒドロキシル基を有することを特徴とする、請求項１から３までのいずれか１項に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ１が、ジアシルグリセリン基、ジアルキルグリセリン基またはアシルアルキルグリセリン基であることを特徴とする、請求項１から４までのいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６】
ＸがＮＲ５−Ｒ３である、請求項１から５までのいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７】
Ｘが−Ｏ−Ｒ３であることを特徴とする、請求項１から５までのいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８】
少なくとも１個の基Ｒ４が、少なくとも１個のＯＨ基を含有することを特徴とする、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
ＸがＯ−である、請求項１から５までのいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１０】
該化合物が少なくとも１個の遊離ヒドロキシル基を有することを特徴とする、請求項９に記載の化合物。
【請求項１１】
少なくとも１個の基Ｒ４が、Ｒ２に関して挙げられた意味を有する、請求項９または１０に記載の化合物。
【請求項１２】
請求項１から１１までのいずれか１項に記載の化合物を含有するリポソーム。
【請求項１３】
請求項１から１１までのいずれか１項に記載の化合物または請求項１２に記載のリポソーム含有する薬剤。
【請求項１４】
癌の治療のための薬剤を製造するための、請求項１から１１までのいずれか１項に記載の化合物または請求項１２に記載のリポソームの使用。
【請求項１５】
遺伝子導入のための、請求項１から１１までのいずれか１項に記載の化合物または請求項１２に記載のリポソームの使用。
【請求項１６】
請求項１から１１までのいずれか１項に記載の化合物の製造法であって、以下の工程：
（ｉ）Ｏ＝ＰＣｌ３を準備する工程、
（ｉｉ）Ｏ＝ＰＣｌ３を無極性化合物と、殊にジアシルグリセリン、ジアルキルグリセリンまたはアシルアルキルグリセリンと反応させる工程、
（ｉｉｉ）化合物ＨＯ−Ｒ２と反応させる工程であって、その際、Ｒ２に存在する遊離アミノ基が保護基を有している、
（ｉｖ）ＨＸと反応させる工程および
（ｖ）場合によっては該保護基を除去する工程、
を包含し、その際、Ｒ２およびＸは、請求項１で挙げられた意味を有する、請求項１から１１までのいずれか１項に記載の化合物の製造法。
【請求項１】
式（Ｉ）
【化１】
［式中、
Ｒ１は、無極性基であり、
Ｒ２は、−（ＣＨ２）ｘ−Ｎ＋（Ｒ４）３であり、その際、
ｘ＝１〜１０、殊に２または３、
Ｒ４は、それぞれの出現において、互いに無関係に、Ｈ、置換または非置換であってよくまたはヘテロ原子を含有してよいアルキル、またはＲ２に関して挙げられた意味を有し、かつ
Ｘは、−Ｏ−Ｒ３、−ＮＲ５−Ｒ３およびＯ−から選択され、
その際、
Ｒ３は、置換または非置換であってよくかつ／またはヘテロ原子を有してよいアルキル基であり、またはＲ２に関して挙げられた意味を有し、かつ
Ｒ５は、そのつど無関係に、水素、アルキル、ＯＨ、または置換されているかもしくはヘテロ原子を含有してよいアルキルである］
の化合物。
【請求項２】
Ｒ３が、基−（ＣＲ５２）ｙ−［Ｏ−（ＣＲ５２）ｚ］ｐ−（ＣＲ５３）であり、その際、Ｒ５は、そのつど互いに無関係に、Ｈ、アルキル、ＯＨまたは１個以上のＯＨ基で置換されたアルキルであり、
ｙは１〜１０の、殊に１〜６の整数であり、
ｚは０〜１０の、殊に０〜６の整数でありかつ
ｐは０〜１０の、殊に１〜３の整数である
ことを特徴とする式（Ｉ）に従う化合物。
【請求項３】
該化合物が、全体で正電荷を有することを特徴とする、請求項１または２に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項４】
該化合物が、少なくとも１個の、殊に少なくとも２個の、有利には少なくとも３個の遊離ヒドロキシル基を有することを特徴とする、請求項１から３までのいずれか１項に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ１が、ジアシルグリセリン基、ジアルキルグリセリン基またはアシルアルキルグリセリン基であることを特徴とする、請求項１から４までのいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６】
ＸがＮＲ５−Ｒ３である、請求項１から５までのいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７】
Ｘが−Ｏ−Ｒ３であることを特徴とする、請求項１から５までのいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８】
少なくとも１個の基Ｒ４が、少なくとも１個のＯＨ基を含有することを特徴とする、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
ＸがＯ−である、請求項１から５までのいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１０】
該化合物が少なくとも１個の遊離ヒドロキシル基を有することを特徴とする、請求項９に記載の化合物。
【請求項１１】
少なくとも１個の基Ｒ４が、Ｒ２に関して挙げられた意味を有する、請求項９または１０に記載の化合物。
【請求項１２】
請求項１から１１までのいずれか１項に記載の化合物を含有するリポソーム。
【請求項１３】
請求項１から１１までのいずれか１項に記載の化合物または請求項１２に記載のリポソーム含有する薬剤。
【請求項１４】
癌の治療のための薬剤を製造するための、請求項１から１１までのいずれか１項に記載の化合物または請求項１２に記載のリポソームの使用。
【請求項１５】
遺伝子導入のための、請求項１から１１までのいずれか１項に記載の化合物または請求項１２に記載のリポソームの使用。
【請求項１６】
請求項１から１１までのいずれか１項に記載の化合物の製造法であって、以下の工程：
（ｉ）Ｏ＝ＰＣｌ３を準備する工程、
（ｉｉ）Ｏ＝ＰＣｌ３を無極性化合物と、殊にジアシルグリセリン、ジアルキルグリセリンまたはアシルアルキルグリセリンと反応させる工程、
（ｉｉｉ）化合物ＨＯ−Ｒ２と反応させる工程であって、その際、Ｒ２に存在する遊離アミノ基が保護基を有している、
（ｉｖ）ＨＸと反応させる工程および
（ｖ）場合によっては該保護基を除去する工程、
を包含し、その際、Ｒ２およびＸは、請求項１で挙げられた意味を有する、請求項１から１１までのいずれか１項に記載の化合物の製造法。
【公表番号】特表２０１０−５３１２９１（Ｐ２０１０−５３１２９１Ａ）
【公表日】平成２２年９月２４日（２０１０．９．２４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５１６９６７（Ｐ２００９−５１６９６７）
【出願日】平成１９年６月２５日（２００７．６．２５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００７／００５６１５
【国際公開番号】ＷＯ２００７／１４７６４４
【国際公開日】平成１９年１２月２７日（２００７．１２．２７）
【出願人】（３９００４０４２０）マックス−プランク−ゲゼルシャフト・ツア・フェルデルング・デア・ヴィッセンシャフテン・エー・ファオ (54)
【氏名又は名称原語表記】Ｍａｘ−Ｐｌａｎｃｋ−Ｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ ｚｕｒ Ｆｏｅｒｄｅｒｕｎｇ ｄｅｒ Ｗｉｓｓｅｎｓｃｈａｆｔｅｎ ｅ．Ｖ．
【住所又は居所原語表記】Ｂｅｒｌｉｎ， Ｇｅｒｍａｎｙ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年９月２４日（２０１０．９．２４）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年６月２５日（２００７．６．２５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００７／００５６１５
【国際公開番号】ＷＯ２００７／１４７６４４
【国際公開日】平成１９年１２月２７日（２００７．１２．２７）
【出願人】（３９００４０４２０）マックス−プランク−ゲゼルシャフト・ツア・フェルデルング・デア・ヴィッセンシャフテン・エー・ファオ (54)
【氏名又は名称原語表記】Ｍａｘ−Ｐｌａｎｃｋ−Ｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ ｚｕｒ Ｆｏｅｒｄｅｒｕｎｇ ｄｅｒ Ｗｉｓｓｅｎｓｃｈａｆｔｅｎ ｅ．Ｖ．
【住所又は居所原語表記】Ｂｅｒｌｉｎ， Ｇｅｒｍａｎｙ
【Ｆターム（参考）】
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