一般に血糖変動を、及び糖尿病患者の食後高血糖を測定するための、１，５−アンヒドログルシトール（１，５−ＡＧ）アッセイ及びＡ１Ｃ／１，５−ＡＧアッセイの組合せ
本発明は、１，５−アンヒドログルシトールアッセイ（１，５−ＡＧ）又はＡ１Ｃ／１，５−ＡＧアッセイの組合せによって、一般に血糖変動を、特に糖尿病患者の食後高血糖を測定する方法である。短期間における１，５−ＡＧ値及び１，５−ＡＧ値のパーセント変化は、同じようなＡ１Ｃ値を有する適切に管理された糖尿病患者において、異なる食事後グルコース値を示す。したがって、１，５−ＡＧアッセイは、Ａ１Ｃ値のみによっては同定可能でないであろう心血管系合併症の危険があり得る糖尿病患者を同定するのに有用である。さらに、各患者のＡ１Ｃを１，５−ＡＧで割った比は、１，５−ＡＧ値より優れた指標である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２００５年４月２２日に出願した米国仮出願第６０／６７４，３８６号の優先権を主張するものである。
【０００２】
本発明は、１，５−アンヒドログルシトールアッセイ（１，５−ＡＧ）又はＡ１Ｃ／１，５−ＡＧアッセイの組合せによって、糖尿病患者の食後高血糖を含めた血糖変動を測定する方法である。１，５−ＡＧ値及び短期間の１，５−ＡＧ値のパーセント変化は、同じようなＡ１Ｃ値を有する適切に管理された糖尿病患者において異なる食事後グルコース値を示す。したがって、１，５−ＡＧアッセイは、Ａ１Ｃ値のみによっては同定可能でないであろう心血管系合併症の危険があり得る糖尿病患者を同定するのに有用である。さらに、各患者のＡ１Ｃを１，５−ＡＧで割った比は、１，５−ＡＧ値より優れた指標である。
【０００３】
参照による組込み
下記の参照は、本明細書中でかっこ内の数字により言及されており、参照により本明細書中に組み込まれている。
（参考文献）
【背景技術】
【０００４】
合併症を予防するための厳格な糖血症コントロールの重要性は、十分に立証されてきている。より最近では、研究により食後グルコースが大血管合併症を発生させる独立した危険因子であることが示されている（１〜３）。糖尿病を有する良好にコントロールされた多くの患者は、かなりの食後高血糖を有する。したがって、Ａ１Ｃ測定よりも食後グルコース変動をより確実に反映する代わりのマーカーは、糖尿病を有する患者の長期療養において有益であり得る。ここで、「グルコース変動」とは、当初の量の水準に最終的に戻るであろうという意味合いを通常こめて、ある水準から他の水準へ血中グルコースの量が変動することを意味し、「Ａ１Ｃ」又は同等に「ＨｂＡ１ｃ」は、グリコシル化ヘモグロビンを示す。
【０００５】
１，５−アンヒドロ−Ｄ−グルシトール（以下、１，５−アンヒドログルシトール又は「１，５−ＡＧ」と略する）は、グルコースと非常に似た化学構造を有し、ヒトの脳脊髄液及び血漿に存在する天然の食餌性ポリオールである。血漿中のその量は、健康な被験者では安定しており、特定の疾患、特に糖尿病を有する被験者では減少する。
【０００６】
グルコースの腎閾値であり、正常な食後グルコースの上限である約１８０ｍｇ／ｄＬで、一般に尿中グルコースが現れると、１，５−ＡＧの血漿濃度が減少する。したがって、１，５−ＡＧ試験は、敏感及び迅速に血清グルコース値に反応し、数日内の糖尿の腎閾値を超えた一過性に上昇する血清グルコースさえも反映する（４、５）。対照的に、Ａ１Ｃは、はるかに長い期間（２〜３ヶ月）に亘る平均グルコース量の反映であり、高血糖及び低血糖期間の両方を包含する。したがって、糖血変動は、Ａ１Ｃモニタリングの状況において「平均化される」。
【０００７】
臨床現場では、血漿又は血清中の１，５−ＡＧは、１，５−ＡＧを酸化する酵素を使用する酵素比色法に基づいた市販キットによって便利に測定することができる。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明者らの結果は、大きな臨床上の意義を有する。適切に管理された患者（Ａ１Ｃ６．５〜８．０％）の一部の中に、かなりの食後高血糖症が存在する場合がある。さらに、同じようなＡ１Ｃ値で、１，５−ＡＧ値によって反映される異なる食後グルコース値となる場合がある。したがって１，５−ＡＧ値は、同じようなＡ１Ｃ値を有する適切に管理された患者において異なる食事後グルコース値を示し、したがって心血管系合併症の危険があり得る糖尿病患者を同定する。
【０００９】
次いで臨床現場では、Ａ１Ｃ及び１，５−ＡＧを順次使用し、Ａ１Ｃアッセイを最初に使用し、適切に管理された患者（Ａ１Ｃ６．５〜８．０％）を同定し、次いで１，５−ＡＧアッセイを使用して、異なる食事後グルコース値を決定する。
【００１０】
本発明は、血中１，５−アンヒドログルシトール値によって特徴付けられる、一般に血糖変動を、特に糖尿病患者の食後高血糖を検査する方法に関する。
【００１１】
本発明はさらに、１，５−アンヒドログルシトール値に基づいた食後の平均最高グルコース値を推定する計算式又は表を使用して、一般に血糖変動を、特に糖尿病患者の食後高血糖を検査する方法に関する。
【００１２】
本発明はさらに、１，５−アンヒドログルシトール値及び他の糖血症コントロールマーカー値の組合せによって特徴付けられる、一般に血糖変動を、特に糖尿病患者の食後高血糖を検査する方法に関し、他の糖血症コントロールマーカーは、Ａ１Ｃ又は空腹時血漿グルコースでよい。
【００１３】
本発明はさらに、Ａ１Ｃ値と１，５−アンヒドログルシトール値の比、又はＡ１Ｃ値及び１，５−アンヒドログルシトール値の積をインデックスとして使用する、一般に血糖変動を、特に糖尿病患者の食後高血糖を検査する方法に関する。
【００１４】
本発明はさらに、短期間に亘る少なくとも２回の連続測定から得た１，５−アンヒドログルシトール値の変化又はパーセント変化をインデックスとして使用する、一般に血糖変動を、特に糖尿病患者の食後高血糖を検査する方法に関し、この短期間は２〜７日でよい。
【００１５】
さらに本発明において、糖尿病患者は、適切に管理された患者又はＡ１Ｃ値が６．５〜８．０％の患者でよい。
【００１６】
本発明はさらに、糖尿病患者の１，５−アンヒドログルシトール値の測定に基づいた、患者の心血管系合併症の危険を推定するための方法に関する。
【００１７】
本発明はさらに、血中１，５−アンヒドログルシトール値を測定するユニットを備える、一般に血糖変動を、特に糖尿病患者の食後高血糖を検査する装置に関する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
１，５−ＡＧ値が糖尿を反映するという事実は、１，５−ＡＧ試験が、一般に血糖変動の、特に糖尿病患者の食後高血糖と通常称される上昇した食後グルコース変動の効果的な尺度であり得ることを示している。１，５−ＡＧアッセイは、食後高血糖の評価に特定の関連性を有し、糖血症コントロールのＡ１Ｃに対する相補的指標であり得る。
【００１９】
グルコース値の１分毎の記録を可能にする連続グルコースモニタリングシステム（「ＣＧＭＳ」）の登場によって、ＣＧＭＳプロファイルと１，５ＡＧの血清濃度を比較することが今や可能となり、１，５−ＡＧと食後高血糖の発生との間の直接的実証を可能にする。本研究は、Ａ１Ｃに反映されるように一見良好にコントロールされているが、食後の一過性糖血変動の結果として悪化している可能性がある糖尿病患者をより適時に評価するものとしての、１，５−ＡＧの役割を調査した。
【００２０】
１，５−ＡＧアッセイ、並びに他の糖血試験（Ａ１Ｃ、フルクトサミン、及び空腹時血漿グルコース）、並びに食後高血糖の関係を決定するために、Ａ１Ｃ値により定義される適切に管理された患者において、ＣＧＭＳによって行われるようなグルコース連続測定を、糖血試験値と比べた。
【００２１】
１８〜７５歳の１型又は２型糖尿病を有し、安定的な糖血症コントロール下のＡ１Ｃが６．５〜８．０％の患者（適切に管理された患者）（ｎ＝３４）を試験した。患者はＣＧＭＳモニターを連続７２時間で２回装着し、７つの時点のフィンガースティックによる自らのグルコースプロファイルを調べた。
【００２２】
１８０ｍｇ／ｄＬを超えるグルコースの曲線下面積（「ＡＵＣ−１８０」）及び各々７２時間に亘るＣＧＭＳによって決定した平均グルコースを、ベースライン、４日目及び７日目に、１，５−ＡＧ（μｇ／ｍＬ）、フルクトサミン（μｍｏｌ／ｌ）及びＡ１Ｃ（％Ｈｂ）と比較した。
【００２３】
上記の関係の相関係数及び多変量解析を調査した。
【００２４】
１，５−ＡＧは、Ａ１Ｃ又はフルクトサミンよりも、食後グルコース変動とより有意な相関関係を有し、１，５−ＡＧは、高水準及び低水準の食後グルコース変動を有する２群間で有意な差異を示すことをその結果は示した。Ａ１Ｃ、フルクトサミン、及び空腹時血漿グルコースについては、これらの群間での差異は示さなかった。さらに、ＣＧＭＳプロファイルは、食事後グルコース値が、食事後に同時に各々の最高値に到達しないことを示した。したがって、自己モニタリングのグルコースメーターなどの従来の方法によって測定された食後グルコース値は、食後グルコース変動の全ての状態を反映しない。１，５−ＡＧは、食後グルコース変動の正確な状態を好都合に決定することができる唯一の公知のマーカーである。
【００２５】
さらに、糖血症コントロールの状態は、各々の糖尿病患者によって非常に異なる。ある患者は、高い空腹時血漿グルコース値と高いグルコース変動を有する場合がある。他の患者は、正常に近い空腹時血漿グルコース値を有するが、グルコース変動は高い場合がある。良好にコントロールされた患者は、正常又は正常に近い空腹時血漿グルコース値を有し、グルコース変動は、健康な被験者と同レベルである。
【００２６】
現在のところ、多くの種類の薬物が糖尿病患者の治療に使用されている。薬物の各々の種類は、異なる作用機序を有する。例えばα−グルコシダーゼ阻害剤は、速効性インスリン分泌薬又は短時間作用型インスリンとして食後高血糖を減少させる。スルホニル尿素の糖尿病薬は、空腹時血漿グルコース値が高い患者を治療するために使用される。正常に近い空腹時血漿グルコース及び高い糖血変動を有する患者は、食後高血糖を減少させる薬物で治療し得る。各患者に最も適した薬物を選択することが非常に重要である。１，５−ＡＧは、糖尿病患者を治療するための最も適切な薬物を選択する上で有用な指標である。
【００２７】
１，５−ＡＧは、一般に血糖変動に関し、特に糖尿病患者の食後高血糖に関する情報を提供する。過去数日間の平均最高血漿グルコース値は、測定した１，５−ＡＧ値からも推定できる。
【００２８】
１，５−ＡＧ値は、Ａ１Ｃ、フルクトサミン又は糖化アルブミン値とほんの中程度に相関関係があるが、このような糖血症コントロールマーカーは、糖尿病患者の平均血漿グルコース値を反映する。１，５−ＡＧ値が、他の糖血症コントロールマーカー、特にＡ１Ｃから推定した１，５−ＡＧ値より低い場合、その患者は高いグルコース変動を有すると判断を下すことができる。Ａ１Ｃ値と１，５−ＡＧ値の比又はＡ１Ｃ値と１，５−ＡＧ値の積を、高いグルコース変動を判断するためのインデックスとして使用するのにも有用である。
【００２９】
空腹時血漿グルコース及び１，５−ＡＧの組合せも有用である。１，５−ＡＧ値が低く、一方空腹時血漿グルコース値がほとんど正常範囲内の場合、患者は重度の食後高血糖であると思われる。
【００３０】
短期間にグルコース変動の程度が変化する場合は、１，５−ＡＧ値もそれに応じてその期間中に変化する。したがって１，５−ＡＧは、初期治療の間の薬物の効果を確認するために使用することができる。１，５−ＡＧによる確認は７日以内で終えることができる。１，５−ＡＧ値のパーセント変化も、この確認のために使用することができる。
【００３１】
食後グルコース上昇が優勢である、Ａ１Ｃ値が８．０％までの適切に管理された糖尿病患者において、１，５−ＡＧ値は有意に異なる場合がある。食後グルコース変動を含めた血糖変動を検査するための１，５−ＡＧの有用性は、６．５〜８．０％のＡ１Ｃの範囲において特に顕著である。Ａ１Ｃは、１，５−ＡＧで測定する必要がある患者を選択するために使用することができる。
【００３２】
研究方法
患者集団：糖尿病患者（Ｎ＝３４）は、１型及び２型糖尿病を有する患者に均等に分布。
対象基準
・年齢１８歳〜７５歳、男性及び女性
・１型又は２型糖尿病と診断される
・Ａ１Ｃ６．５〜８．０％（Ｂａｙｅｒ ＤＣＡ−２０００ポイントオブケアのメーターにより測定）
・最近顕著なコントロールの悪化又は改善がないこと（患者報告）、及び過去６ヶ月間において少なくとも１回事前にＡ１Ｃ測定をし、０．５％を超える測定間の変化がないことと定義される、安定した糖血症コントロール
・患者報告による、グルコースの少なくとも１日２回（２型）又は１日３回以上（１型）のモニタリング
【００３３】
除外基準
・妊娠又は授乳期
・癌、末期肝臓病、慢性腎不全（クレアチニン＞２．０ｍｇ／ｄＬ）、栄養失調（１年以内で意図しない体重減少＞１０％）、結合組織病の病歴
・著しい貧血（ヘモグロビン＜１０ｇ／ｄＬ）、公知の異常血色素症、最近の献血、溶血、最近の失血を伴う手術
・不安定な網膜症又は最近の（＜６ヶ月）網膜処置
・現在治験薬を摂取している患者又は任意の治療治験への積極的な参加者
・英語を話さない被験者
・血糖の自己モニタリングが不本意である、又はできない
・それ以前３ヶ月に助けを必要とする低血糖
【００３４】
一連の経緯
１日目：１，５−ＡＧ、Ａ１Ｃ、フルクトサミン及び空腹時血漿グルコース（「ＦＰＧ」）のために血液採取した。ＣＧＭＳ装置を挿入し、患者は装置の管理方法を教えられた。
４日目：血液検査を繰り返し、ＣＧＭＳセンサーを新たな部位に付け直した。３日目に２４時間尿を集め、４日目に提出した。グルコース記録を回収し、メーターをダウンロードした。
７日目：血液検査を繰り返した。ＣＧＭＳ装置を取り除き、その部位を検査した。グルコース記録を回収し、メーターをダウンロードした。
【００３５】
ＣＧＭＳ装置：患者は皮下に挿入したＣＧＭＳ（ＭｉｎｉＭｅｄ）装置を付け、１日目に挿入し、７日目に取り除いた。その部位を４日目に変えた。ＦＤＡに認可されたラベルの通りに装置を使用した。訓練された医療専門家が、局所消毒薬を使用して腹部の皮膚に小さなセンサーを挿入し、自動挿入装置及び導入針は直ぐに外された。センサーは皮膚の直ぐ下にあり、所定位置に保持するためにテープで固定する。センサーをモニターに接続し、そのモニターは医療提供者のオフィスのラップトップコンピュータにダウンロードして始めて利用できる測定値を記録した。
【００３６】
フィンガースティックによるグルコース：患者は、フィンガースティックによるグルコースをチェックし、研究の１日目から６日目まで毎日、朝の空腹時、食前、食後２時間、及び就寝時のグルコース（７回まで）の記録を付けるように指示された。
【００３７】
糖血アッセイ：１，５−ＡＧをＧｌｙｃｏＭａｒｋ（１，５−ＡＧ試験の商品名、Ｔｏｍｅｎ Ａｍｅｒｉｃａ Ｉｎｃ．，ＮＹから購入）で測定した。Ａ１Ｃ及びフルクトサミンを従来の方法で測定した。１日目、４日目及び７日目に採取した各患者の３つの血液試料を測定した。
【００３８】
食後変数及び分析
試験した食後変数
糖血試験と、グルコース変動及び食後高血糖との関係を決定するために、下記を含む、ＣＧＭＳで測定したいくつかの変数を使用した。
１）ＡＵＣ−１８０（３日間及び７日間）−１８０ｍｇ／ｄＬを超えるグルコース変動の総面積の測定を、７２時間（３日間）毎に、患者毎に決定し、次いで全ＣＧＭＳ試験期間（７日間）として組み合わせた。ＡＵＣ−１８０は、グルコース変動を反映するために使用される主要な変数である。
２）食事後平均（最高）グルコース（ｍｇ／ｄＬ）−各食事後グルコース変動の最高高さを決定し、次いで各患者の３回の食事（朝食、昼食、及び夕食）毎に平均した。全ての患者がＣＧＭＳユニットに食事マーカーを入力しなかったことに留意すべきである。したがって、食事後平均最高値を、患者の一部のみで決定した。上昇した食事後平均グルコース値は、特に食後高血糖を示す。
３）食後インデックス−４種類の変数、すなわち朝食後、昼食後、夕食後の最高グルコース値、及びＡＵＣ−１８０（７日間）を組み込むことによって、包括的グルコース変動及び食後高血糖インデックス（「食後インデックス（ＰＩ）」）を公式化した。すなわち、ＰＩを上記の４種類の独立変数で重回帰により計算した。すなわち、係数及び切片を、各々の平均糖血アッセイ値、それらの比、又は１，５−ＡＧのパーセント変化による多重線形回帰分析によって決定した。
【００３９】
相関／多変量解析
３日間及び７日間に亘る、各患者の糖血試験の３種類の値（１，５−ＡＧ、Ａ１Ｃ、及びフルクトサミン）の平均を、上記で概要を述べた食後変数と比較した。次いで、相関解析（Ｐｅａｒｓｏｎ）及び多変量解析を行った。
【００４０】
（実施例１）
糖血アッセイ対食後変数（相関及び多変量解析）
平均ＡＵＣ−１８０（７日間及び３日間）対糖血アッセイ値
研究は患者の全体的な代謝状態を反映するように設計されているため、全７日間に亘る実験室試験の平均値を使用し、ＡＵＣ−１８０（７日間）と関連付けた。ＡＵＣ−１８０（３日間）の場合、各３日間の終わりにアッセイ絶対値を使用した。相関（Ｒ値）及び対応するｐ値（ｐ）を下記に示す。表に示すようにＳｔｅｉｇｅｒ Ｚ値を使用して、比較相関を計算した。
【００４１】
【表１】
期間１の終わりは診察＃２（研究の中間点）、及び期間２の終わりは診察＃３（研究の終わり）である。比較相関を計算し、Ｓｔｅｉｇｅｒ Ｚ（１バール）値は、ＡＵＣ−１８０（全期間）／Ａ１Ｃ対ＡＵＣ−１８０（全期間）／１，５−ＡＧ（Ｚ＝−３．０１、ｐ＜０．０１）＊、ＡＵＣ−１８０（期間１）／Ａ１Ｃ対ＡＵＣ−１８０（期間１）／１，５−ＡＧ（Ｚ＝−１．９９、ｐ＜０．０５）＊＊、ＡＵＣ−１８０（期間２）／Ａ１Ｃ対ＡＵＣ−１８０（期間２）／１，５−ＡＧ（Ｚ＝−２．６１、ｐ＜０．０１）＊＊＊であった。
【００４２】
１，５−ＡＧアッセイは、Ａ１Ｃ及びフルクトサミンアッセイより、両期間ともＡＵＣ−１８０（３日間及び７日間）を反映する。Ａ１Ｃは、フルクトサミンより相関する（対ＡＵＣ）。ＡＵＣ−１８０は、グルコース変動及び食後高血糖の主要な基準であるので、これらのデータは、１，５−ＡＧ値が、Ａ１Ｃ又はフルクトサミンより変動及び食後高血糖を非常に反映することを示す。
【００４３】
食事後平均最高グルコース対平均糖血アッセイ値
いくつかの公表されている食後アッセイ研究と同様に、食事後最高グルコース値を、食後高血糖の主要なインデックスとして測定する。各食事（朝食、昼食、及び夕食）の食事後平均最高グルコース値は、平均糖血アッセイ値と相関した。次いで、３種類の食事後グルコース最高値を、平均糖血アッセイ値と比較するために多変量解析における独立変数として使用した。
【００４４】
【表２】
【００４５】
１，５−ＡＧ値は、Ａ１Ｃ又はフルクトサミンより、各々の食事後グルコース最大変数（朝食、昼食、及び夕食）に相関した。さらに、多変量解析（３回の食事後最大変数の混合）によって、１，５−ＡＧは、Ａ１Ｃ又はフルクトサミンより、食後高血糖をより有意に予測することが示された。
【００４６】
糖血試験値と食後変数（ＡＵＣ−１８０及び食事後最高グルコース値）とを比較する分析によって、１，５−ＡＧアッセイが、従来の糖血アッセイ（Ａ１Ｃ及びフルクトサミン）より食後高血糖をより強く反映することが示される。
【００４７】
（実施例２）
「食後インデックス」対平均糖血アッセイ値
次いで、食後インデックス（「ＰＩ」）を、各々の平均糖血アッセイ値と比較した。食後インデックスは、上記で説明したように、食事後及びＡＵＣ−１８０変数の両方を捉える、包括的なグルコース変動及び食後高血糖の関数である。
【００４８】
【表３】
【００４９】
多変量解析によって、１，５−ＡＧは、Ａ１Ｃ又はフルクトサミンより有意に高い絶対Ｒ値を有し、１，５−ＡＧアッセイが、従来の糖血アッセイ（Ａ１Ｃ及びフルクトサミン）よりもグルコース変動及び食後高血糖をより強く反映することを示すことが示された。
【００５０】
（実施例３）
１，５−ＡＧ変化対食後インデックス
平均１，５−ＡＧアッセイ値を食後インデックスに相関させることに加えて、１，５−ＡＧ値の変化（２回目の患者診察から３回目の患者診察の％変化）は、食後インデックスと相関した。Ｒ値は０．８２で、Ｒの２乗は０．６７に等しかった。すなわち、１，５−ＡＧ値の変化は、食後インデックスにおける変動の６７％を説明した。フルクトサミン変化又はＡ１Ｃ変化と、食後インデックスとの間の統計的に有意な関係はなかったことに留意すべきである。
【００５１】
これらのデータは、特定の時期に亘って１，５−ＡＧ値を測定することが、グルコース変動及び食後高血糖のモニタリングにおいて有用であることを示す。食後高血糖を特に標的にした治療の効果をモニタリングするのに、これは特に有用である。
【００５２】
（実施例４）
１，５−ＡＧ及びＡ１Ｃアッセイの組合せ対食後インデックス
１，５−ＡＧ及びＡ１Ｃアッセイ値の組合せと、食後高血糖との関係を決定するために、Ａ１Ｃを１，５−ＡＧで割った比（「Ａ１Ｃ／１，５−ＡＧ」）を、食後インデックスと比較し、相関／多変量解析を行った。１，５−ＡＧ及びＡ１Ｃの各々対食後インデックスの相関を、比較をする目的で示す。
【００５３】
【表４】
【００５４】
Ａ１Ｃ／１，５−ＡＧの比は、Ａ１Ｃアッセイ又は１，５−ＡＧアッセイ単独よりも、食後インデックスへの強い相関を有し、２種類のアッセイの組合せは、グルコース変動及び食後高血糖をより予測することを示す。相関／多変量解析から、１，５−ＡＧは、Ａ１Ｃよりも、食後インデックスにより有意に寄与することも明らかである。Ａ１Ｃ及び１，５−ＡＧアッセイ変数の両方を各々の食後変数と比較する多変量解析によっても、これは支持され、１，５−ＡＧ（Ａ１Ｃ値と併せた場合）が、個々の食後変数との関係の多くを変動させていることを示す。食後インデックスを変動させる上で、１，５−ＡＧは主要な変数であるが、全体的にＡ１Ｃ／１，５−ＡＧアッセイ比は、各アッセイ単独よりも、グルコース変動及び食後高血糖をより強く反映する。
【００５５】
（実施例５）
臨床的有用性−食後高血糖を反映するための、Ａ１Ｃアッセイを補助するアッセイとしての１，５−ＡＧアッセイ
１，５−ＡＧは食後インデックスを変動させる上で主要な変数であるが、前項で説明したように、Ａ１Ｃ／１，５−ＡＧ混合アッセイ比は、各アッセイ単独より、グルコース変動及び食後高血糖をより強く反映する。これらの知見についての臨床上の可能性を調査するために、３４人の適切に管理された患者（Ａ１Ｃ６．５〜８．０％）を、総ＡＵＣ−１８０値によって分類し、２つの集団「低い総ＡＵＣ−１８０値」（１７人の患者）及び「高い総ＡＵＣ−１８０値」（１７人の患者）に再分割した。下の表は、Ａ１Ｃ及び１，５−ＡＧアッセイパラメーター、並びに食後変数を示す。
【００５６】
【表５】
【００５７】
Ａ１Ｃ、フルクトサミン及び空腹時グルコース値は、２群間で非常に類似しているが、１，５−ＡＧ及び朝食、昼食、又は夕食後の食事後グルコース変動の平均最高グルコース値（ＭＰＭＧ）は、２群間で有意に異なる。さらに、米国住民の１，５−ＡＧの正常範囲は、６．８μｇ／ｍＬを超える。これは上記の表における１，５−ＡＧ値の範囲が６．０μｇ／ｍＬ未満である「高い総ＡＵＣ−１８０」群で観察されるものと一致し、相当な食後高血糖を反映する。したがって、Ａ１Ｃ値は非常に似通っているが、特定の１，５−ＡＧ範囲は、食後グルコース値と関連している可能性がある。
【００５８】
さらに、Ａ１Ｃ／１，５−ＡＧ混合アッセイ比で得た結果と一致して、１，５−ＡＧとＡＵＣ−１８０（Ａ１Ｃのためにコントロール）との部分相関は、−０．３８（ｐ＝０．０１）であり、これは独立変数としての１，５−ＡＧとＡＵＣ−１８０（ｒ−０．４８）との相関と比較してかなりの相関であり、所与のＡ１Ｃレベルでは、１，５−ＡＧとＡＵＣ−１８０との間には有意な関係があることが示される。このような部分相関分析は、１，５−ＡＧアッセイは、食後高血糖を含めたグルコース変動を反映する、Ａ１Ｃアッセイの有用な補助アッセイであるというさらなる証拠を提供する。
【００５９】
ＣＧＭＳは、総ＡＵＣ−１８０値又はＭＰＭＧ値などのインデックスによってほんの大まかに捉えられた、正確な食後グルコース値を決定することができるが、ＣＧＭＳはまた、単調で時間がかかる。ＣＧＭＳは、多くの患者を扱う実際の診療には実用的ではない。１，５−ＡＧは、食後グルコース変動レベルを反映する唯一の実用的なマーカーである。
【００６０】
（実施例６）
臨床的有用性−１，５−ＡＧアッセイ及び食事後グルコース参照範囲表
食事後平均最高グルコース値（朝食、昼食及び夕食全ての食事後グルコース値の平均、ｎ＝２３）と、平均１，５−ＡＧアッセイ値とを相関させることによって、いくつかの線形回帰式を、下記に示すように計算した。
【００６１】
単純回帰
Ｘ変数：平均１，５−ＡＧ
Ｙ変数：平均全食事後最高値
【表６】
【００６２】
最適な線形回帰アプローチは、Ｒ値が０．６８の双曲線回帰である（Ｙ＝Ａ＋Ｂ／Ｘ）。［食事後平均最高値＝１５６．９１＋２７３．６９／平均１，５−ＡＧ］と表される式を使用して、１，５−ＡＧ値と、対応する食事後平均最高グルコース値が一致する参照範囲表を計算し、下記に示す。この参照範囲表は、おおよその食事後グルコース値を、測定した１，５−ＡＧ値から導き出すために臨床的に使用し得る。
【００６３】
１，５−ＡＧ値とおおよその食事後平均血糖値との関係（適切に管理された患者）
【表７】
【００６４】
（実施例７）
臨床的有用性−診療における１，５−ＡＧアッセイの使用
診療においてグルコース変動及び食後高血糖を測定するための１，５−ＡＧアッセイの有用性をさらに実証するために、２人の代表の患者からのデータを図１Ａ及び１Ｂに示す。図１Ａの患者１は、図１Ｂの患者２（７．２７％）と同じようなＡ１Ｃ（７．４３％）を有する。対照的に、患者１の１，５−ＡＧは、１２．３７μｇ／ｍＬで正常範囲内であり、患者２は４．５μｇ／ｍＬで対照的である。これは、患者２に対する患者１の各々より低いＡＵＣ（８対２２ｍｇ／ｄＬ＊日）、及びより低いＭＰＭＧ（１９５ｍｇ／ｄＬ対２３５ｍｇ／ｄＬ）にも一致する。ＣＧＭＳの記録も、図に各患者について示され、異常な１，５−ＡＧを有する患者、すなわち患者２では、かなりより大きなグルコース変動が明らかに示される。
【００６５】
これらの代表の患者は、１，５−ＡＧアッセイは、同じようなＡ１Ｃに関わらず、異なる食事後グルコース値を反映することを明らかに示す。食後グルコース上昇が優勢である適切に管理された又は最善の水準に次ぐ患者（Ａ１Ｃ値６．５〜８．０％）で、これは特に重要である。
【００６６】
診療において、最初にＡ１Ｃアッセイを用いて、適切に管理された患者（Ａ１Ｃ６．５〜８．０％）を同定し、次いで１，５−ＡＧアッセイを用いて、食後グルコース変動の程度を決定することによって、Ａ１Ｃ及び１，５−ＡＧを順次用いることができる（図２の診断アルゴリズム及び上記の実施例６の参照範囲表を参照のこと）。Ａ１Ｃが目標を超え、１，５−ＡＧが正常の場合、基礎グルコースを目標とした治療がより有用であり得る。他方、Ａ１Ｃが目標を超え、１，５−ＡＧが低い場合、食後グルコース上昇を目標とすることにより、より成果が上がり得る。これは、より徹底した食後モニタリング又は食後高血糖に特異的に対処する薬剤の追加を伴い得る。
【００６７】
血糖の変化に対する１，５−ＡＧの迅速な応答性によって、連続的な１，５−ＡＧ測定は、食後高血糖を評価するのに有用であり得る。これは、食後グルコースコントロールを特に目標とした治療の効果を検討する上で特に有用であり得る。大部分の患者において、完全な糖血症コントロールへの本当の障害が、不適切な食事にあるのか又は基礎血糖処置にあるのかを識別するのは困難である場合がある。集中的なインスリン治療中の１型糖尿病患者において必要である場合がある複雑な調節を行うために、自己モニタリングデータが不十分である場合が多い。他方、経口剤を使用している多くの２型糖尿病患者は、通常空腹状態で、血糖を１日１回又はそれ以下の頻度でしか調べない。１，５−ＡＧは、このような状況において、Ａ１Ｃを補助するものとして有用であり得る。
【図面の簡単な説明】
【００６８】
【図１Ａ】同じようなＡ１Ｃ値を有するが、１，５−ＡＧ値が異なる２人の患者から得た血糖変動のプロファイルを示す。
【図１Ｂ】同じようなＡ１Ｃ値を有するが、１，５−ＡＧ値が異なる２人の患者から得た血糖変動のプロファイルを示す。
【図２】測定した１，５−ＡＧ値を使用した食後グルコースをコントロールするための診断アルゴリズムを示す。
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２００５年４月２２日に出願した米国仮出願第６０／６７４，３８６号の優先権を主張するものである。
【０００２】
本発明は、１，５−アンヒドログルシトールアッセイ（１，５−ＡＧ）又はＡ１Ｃ／１，５−ＡＧアッセイの組合せによって、糖尿病患者の食後高血糖を含めた血糖変動を測定する方法である。１，５−ＡＧ値及び短期間の１，５−ＡＧ値のパーセント変化は、同じようなＡ１Ｃ値を有する適切に管理された糖尿病患者において異なる食事後グルコース値を示す。したがって、１，５−ＡＧアッセイは、Ａ１Ｃ値のみによっては同定可能でないであろう心血管系合併症の危険があり得る糖尿病患者を同定するのに有用である。さらに、各患者のＡ１Ｃを１，５−ＡＧで割った比は、１，５−ＡＧ値より優れた指標である。
【０００３】
参照による組込み
下記の参照は、本明細書中でかっこ内の数字により言及されており、参照により本明細書中に組み込まれている。
（参考文献）
【背景技術】
【０００４】
合併症を予防するための厳格な糖血症コントロールの重要性は、十分に立証されてきている。より最近では、研究により食後グルコースが大血管合併症を発生させる独立した危険因子であることが示されている（１〜３）。糖尿病を有する良好にコントロールされた多くの患者は、かなりの食後高血糖を有する。したがって、Ａ１Ｃ測定よりも食後グルコース変動をより確実に反映する代わりのマーカーは、糖尿病を有する患者の長期療養において有益であり得る。ここで、「グルコース変動」とは、当初の量の水準に最終的に戻るであろうという意味合いを通常こめて、ある水準から他の水準へ血中グルコースの量が変動することを意味し、「Ａ１Ｃ」又は同等に「ＨｂＡ１ｃ」は、グリコシル化ヘモグロビンを示す。
【０００５】
１，５−アンヒドロ−Ｄ−グルシトール（以下、１，５−アンヒドログルシトール又は「１，５−ＡＧ」と略する）は、グルコースと非常に似た化学構造を有し、ヒトの脳脊髄液及び血漿に存在する天然の食餌性ポリオールである。血漿中のその量は、健康な被験者では安定しており、特定の疾患、特に糖尿病を有する被験者では減少する。
【０００６】
グルコースの腎閾値であり、正常な食後グルコースの上限である約１８０ｍｇ／ｄＬで、一般に尿中グルコースが現れると、１，５−ＡＧの血漿濃度が減少する。したがって、１，５−ＡＧ試験は、敏感及び迅速に血清グルコース値に反応し、数日内の糖尿の腎閾値を超えた一過性に上昇する血清グルコースさえも反映する（４、５）。対照的に、Ａ１Ｃは、はるかに長い期間（２〜３ヶ月）に亘る平均グルコース量の反映であり、高血糖及び低血糖期間の両方を包含する。したがって、糖血変動は、Ａ１Ｃモニタリングの状況において「平均化される」。
【０００７】
臨床現場では、血漿又は血清中の１，５−ＡＧは、１，５−ＡＧを酸化する酵素を使用する酵素比色法に基づいた市販キットによって便利に測定することができる。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明者らの結果は、大きな臨床上の意義を有する。適切に管理された患者（Ａ１Ｃ６．５〜８．０％）の一部の中に、かなりの食後高血糖症が存在する場合がある。さらに、同じようなＡ１Ｃ値で、１，５−ＡＧ値によって反映される異なる食後グルコース値となる場合がある。したがって１，５−ＡＧ値は、同じようなＡ１Ｃ値を有する適切に管理された患者において異なる食事後グルコース値を示し、したがって心血管系合併症の危険があり得る糖尿病患者を同定する。
【０００９】
次いで臨床現場では、Ａ１Ｃ及び１，５−ＡＧを順次使用し、Ａ１Ｃアッセイを最初に使用し、適切に管理された患者（Ａ１Ｃ６．５〜８．０％）を同定し、次いで１，５−ＡＧアッセイを使用して、異なる食事後グルコース値を決定する。
【００１０】
本発明は、血中１，５−アンヒドログルシトール値によって特徴付けられる、一般に血糖変動を、特に糖尿病患者の食後高血糖を検査する方法に関する。
【００１１】
本発明はさらに、１，５−アンヒドログルシトール値に基づいた食後の平均最高グルコース値を推定する計算式又は表を使用して、一般に血糖変動を、特に糖尿病患者の食後高血糖を検査する方法に関する。
【００１２】
本発明はさらに、１，５−アンヒドログルシトール値及び他の糖血症コントロールマーカー値の組合せによって特徴付けられる、一般に血糖変動を、特に糖尿病患者の食後高血糖を検査する方法に関し、他の糖血症コントロールマーカーは、Ａ１Ｃ又は空腹時血漿グルコースでよい。
【００１３】
本発明はさらに、Ａ１Ｃ値と１，５−アンヒドログルシトール値の比、又はＡ１Ｃ値及び１，５−アンヒドログルシトール値の積をインデックスとして使用する、一般に血糖変動を、特に糖尿病患者の食後高血糖を検査する方法に関する。
【００１４】
本発明はさらに、短期間に亘る少なくとも２回の連続測定から得た１，５−アンヒドログルシトール値の変化又はパーセント変化をインデックスとして使用する、一般に血糖変動を、特に糖尿病患者の食後高血糖を検査する方法に関し、この短期間は２〜７日でよい。
【００１５】
さらに本発明において、糖尿病患者は、適切に管理された患者又はＡ１Ｃ値が６．５〜８．０％の患者でよい。
【００１６】
本発明はさらに、糖尿病患者の１，５−アンヒドログルシトール値の測定に基づいた、患者の心血管系合併症の危険を推定するための方法に関する。
【００１７】
本発明はさらに、血中１，５−アンヒドログルシトール値を測定するユニットを備える、一般に血糖変動を、特に糖尿病患者の食後高血糖を検査する装置に関する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
１，５−ＡＧ値が糖尿を反映するという事実は、１，５−ＡＧ試験が、一般に血糖変動の、特に糖尿病患者の食後高血糖と通常称される上昇した食後グルコース変動の効果的な尺度であり得ることを示している。１，５−ＡＧアッセイは、食後高血糖の評価に特定の関連性を有し、糖血症コントロールのＡ１Ｃに対する相補的指標であり得る。
【００１９】
グルコース値の１分毎の記録を可能にする連続グルコースモニタリングシステム（「ＣＧＭＳ」）の登場によって、ＣＧＭＳプロファイルと１，５ＡＧの血清濃度を比較することが今や可能となり、１，５−ＡＧと食後高血糖の発生との間の直接的実証を可能にする。本研究は、Ａ１Ｃに反映されるように一見良好にコントロールされているが、食後の一過性糖血変動の結果として悪化している可能性がある糖尿病患者をより適時に評価するものとしての、１，５−ＡＧの役割を調査した。
【００２０】
１，５−ＡＧアッセイ、並びに他の糖血試験（Ａ１Ｃ、フルクトサミン、及び空腹時血漿グルコース）、並びに食後高血糖の関係を決定するために、Ａ１Ｃ値により定義される適切に管理された患者において、ＣＧＭＳによって行われるようなグルコース連続測定を、糖血試験値と比べた。
【００２１】
１８〜７５歳の１型又は２型糖尿病を有し、安定的な糖血症コントロール下のＡ１Ｃが６．５〜８．０％の患者（適切に管理された患者）（ｎ＝３４）を試験した。患者はＣＧＭＳモニターを連続７２時間で２回装着し、７つの時点のフィンガースティックによる自らのグルコースプロファイルを調べた。
【００２２】
１８０ｍｇ／ｄＬを超えるグルコースの曲線下面積（「ＡＵＣ−１８０」）及び各々７２時間に亘るＣＧＭＳによって決定した平均グルコースを、ベースライン、４日目及び７日目に、１，５−ＡＧ（μｇ／ｍＬ）、フルクトサミン（μｍｏｌ／ｌ）及びＡ１Ｃ（％Ｈｂ）と比較した。
【００２３】
上記の関係の相関係数及び多変量解析を調査した。
【００２４】
１，５−ＡＧは、Ａ１Ｃ又はフルクトサミンよりも、食後グルコース変動とより有意な相関関係を有し、１，５−ＡＧは、高水準及び低水準の食後グルコース変動を有する２群間で有意な差異を示すことをその結果は示した。Ａ１Ｃ、フルクトサミン、及び空腹時血漿グルコースについては、これらの群間での差異は示さなかった。さらに、ＣＧＭＳプロファイルは、食事後グルコース値が、食事後に同時に各々の最高値に到達しないことを示した。したがって、自己モニタリングのグルコースメーターなどの従来の方法によって測定された食後グルコース値は、食後グルコース変動の全ての状態を反映しない。１，５−ＡＧは、食後グルコース変動の正確な状態を好都合に決定することができる唯一の公知のマーカーである。
【００２５】
さらに、糖血症コントロールの状態は、各々の糖尿病患者によって非常に異なる。ある患者は、高い空腹時血漿グルコース値と高いグルコース変動を有する場合がある。他の患者は、正常に近い空腹時血漿グルコース値を有するが、グルコース変動は高い場合がある。良好にコントロールされた患者は、正常又は正常に近い空腹時血漿グルコース値を有し、グルコース変動は、健康な被験者と同レベルである。
【００２６】
現在のところ、多くの種類の薬物が糖尿病患者の治療に使用されている。薬物の各々の種類は、異なる作用機序を有する。例えばα−グルコシダーゼ阻害剤は、速効性インスリン分泌薬又は短時間作用型インスリンとして食後高血糖を減少させる。スルホニル尿素の糖尿病薬は、空腹時血漿グルコース値が高い患者を治療するために使用される。正常に近い空腹時血漿グルコース及び高い糖血変動を有する患者は、食後高血糖を減少させる薬物で治療し得る。各患者に最も適した薬物を選択することが非常に重要である。１，５−ＡＧは、糖尿病患者を治療するための最も適切な薬物を選択する上で有用な指標である。
【００２７】
１，５−ＡＧは、一般に血糖変動に関し、特に糖尿病患者の食後高血糖に関する情報を提供する。過去数日間の平均最高血漿グルコース値は、測定した１，５−ＡＧ値からも推定できる。
【００２８】
１，５−ＡＧ値は、Ａ１Ｃ、フルクトサミン又は糖化アルブミン値とほんの中程度に相関関係があるが、このような糖血症コントロールマーカーは、糖尿病患者の平均血漿グルコース値を反映する。１，５−ＡＧ値が、他の糖血症コントロールマーカー、特にＡ１Ｃから推定した１，５−ＡＧ値より低い場合、その患者は高いグルコース変動を有すると判断を下すことができる。Ａ１Ｃ値と１，５−ＡＧ値の比又はＡ１Ｃ値と１，５−ＡＧ値の積を、高いグルコース変動を判断するためのインデックスとして使用するのにも有用である。
【００２９】
空腹時血漿グルコース及び１，５−ＡＧの組合せも有用である。１，５−ＡＧ値が低く、一方空腹時血漿グルコース値がほとんど正常範囲内の場合、患者は重度の食後高血糖であると思われる。
【００３０】
短期間にグルコース変動の程度が変化する場合は、１，５−ＡＧ値もそれに応じてその期間中に変化する。したがって１，５−ＡＧは、初期治療の間の薬物の効果を確認するために使用することができる。１，５−ＡＧによる確認は７日以内で終えることができる。１，５−ＡＧ値のパーセント変化も、この確認のために使用することができる。
【００３１】
食後グルコース上昇が優勢である、Ａ１Ｃ値が８．０％までの適切に管理された糖尿病患者において、１，５−ＡＧ値は有意に異なる場合がある。食後グルコース変動を含めた血糖変動を検査するための１，５−ＡＧの有用性は、６．５〜８．０％のＡ１Ｃの範囲において特に顕著である。Ａ１Ｃは、１，５−ＡＧで測定する必要がある患者を選択するために使用することができる。
【００３２】
研究方法
患者集団：糖尿病患者（Ｎ＝３４）は、１型及び２型糖尿病を有する患者に均等に分布。
対象基準
・年齢１８歳〜７５歳、男性及び女性
・１型又は２型糖尿病と診断される
・Ａ１Ｃ６．５〜８．０％（Ｂａｙｅｒ ＤＣＡ−２０００ポイントオブケアのメーターにより測定）
・最近顕著なコントロールの悪化又は改善がないこと（患者報告）、及び過去６ヶ月間において少なくとも１回事前にＡ１Ｃ測定をし、０．５％を超える測定間の変化がないことと定義される、安定した糖血症コントロール
・患者報告による、グルコースの少なくとも１日２回（２型）又は１日３回以上（１型）のモニタリング
【００３３】
除外基準
・妊娠又は授乳期
・癌、末期肝臓病、慢性腎不全（クレアチニン＞２．０ｍｇ／ｄＬ）、栄養失調（１年以内で意図しない体重減少＞１０％）、結合組織病の病歴
・著しい貧血（ヘモグロビン＜１０ｇ／ｄＬ）、公知の異常血色素症、最近の献血、溶血、最近の失血を伴う手術
・不安定な網膜症又は最近の（＜６ヶ月）網膜処置
・現在治験薬を摂取している患者又は任意の治療治験への積極的な参加者
・英語を話さない被験者
・血糖の自己モニタリングが不本意である、又はできない
・それ以前３ヶ月に助けを必要とする低血糖
【００３４】
一連の経緯
１日目：１，５−ＡＧ、Ａ１Ｃ、フルクトサミン及び空腹時血漿グルコース（「ＦＰＧ」）のために血液採取した。ＣＧＭＳ装置を挿入し、患者は装置の管理方法を教えられた。
４日目：血液検査を繰り返し、ＣＧＭＳセンサーを新たな部位に付け直した。３日目に２４時間尿を集め、４日目に提出した。グルコース記録を回収し、メーターをダウンロードした。
７日目：血液検査を繰り返した。ＣＧＭＳ装置を取り除き、その部位を検査した。グルコース記録を回収し、メーターをダウンロードした。
【００３５】
ＣＧＭＳ装置：患者は皮下に挿入したＣＧＭＳ（ＭｉｎｉＭｅｄ）装置を付け、１日目に挿入し、７日目に取り除いた。その部位を４日目に変えた。ＦＤＡに認可されたラベルの通りに装置を使用した。訓練された医療専門家が、局所消毒薬を使用して腹部の皮膚に小さなセンサーを挿入し、自動挿入装置及び導入針は直ぐに外された。センサーは皮膚の直ぐ下にあり、所定位置に保持するためにテープで固定する。センサーをモニターに接続し、そのモニターは医療提供者のオフィスのラップトップコンピュータにダウンロードして始めて利用できる測定値を記録した。
【００３６】
フィンガースティックによるグルコース：患者は、フィンガースティックによるグルコースをチェックし、研究の１日目から６日目まで毎日、朝の空腹時、食前、食後２時間、及び就寝時のグルコース（７回まで）の記録を付けるように指示された。
【００３７】
糖血アッセイ：１，５−ＡＧをＧｌｙｃｏＭａｒｋ（１，５−ＡＧ試験の商品名、Ｔｏｍｅｎ Ａｍｅｒｉｃａ Ｉｎｃ．，ＮＹから購入）で測定した。Ａ１Ｃ及びフルクトサミンを従来の方法で測定した。１日目、４日目及び７日目に採取した各患者の３つの血液試料を測定した。
【００３８】
食後変数及び分析
試験した食後変数
糖血試験と、グルコース変動及び食後高血糖との関係を決定するために、下記を含む、ＣＧＭＳで測定したいくつかの変数を使用した。
１）ＡＵＣ−１８０（３日間及び７日間）−１８０ｍｇ／ｄＬを超えるグルコース変動の総面積の測定を、７２時間（３日間）毎に、患者毎に決定し、次いで全ＣＧＭＳ試験期間（７日間）として組み合わせた。ＡＵＣ−１８０は、グルコース変動を反映するために使用される主要な変数である。
２）食事後平均（最高）グルコース（ｍｇ／ｄＬ）−各食事後グルコース変動の最高高さを決定し、次いで各患者の３回の食事（朝食、昼食、及び夕食）毎に平均した。全ての患者がＣＧＭＳユニットに食事マーカーを入力しなかったことに留意すべきである。したがって、食事後平均最高値を、患者の一部のみで決定した。上昇した食事後平均グルコース値は、特に食後高血糖を示す。
３）食後インデックス−４種類の変数、すなわち朝食後、昼食後、夕食後の最高グルコース値、及びＡＵＣ−１８０（７日間）を組み込むことによって、包括的グルコース変動及び食後高血糖インデックス（「食後インデックス（ＰＩ）」）を公式化した。すなわち、ＰＩを上記の４種類の独立変数で重回帰により計算した。すなわち、係数及び切片を、各々の平均糖血アッセイ値、それらの比、又は１，５−ＡＧのパーセント変化による多重線形回帰分析によって決定した。
【００３９】
相関／多変量解析
３日間及び７日間に亘る、各患者の糖血試験の３種類の値（１，５−ＡＧ、Ａ１Ｃ、及びフルクトサミン）の平均を、上記で概要を述べた食後変数と比較した。次いで、相関解析（Ｐｅａｒｓｏｎ）及び多変量解析を行った。
【００４０】
（実施例１）
糖血アッセイ対食後変数（相関及び多変量解析）
平均ＡＵＣ−１８０（７日間及び３日間）対糖血アッセイ値
研究は患者の全体的な代謝状態を反映するように設計されているため、全７日間に亘る実験室試験の平均値を使用し、ＡＵＣ−１８０（７日間）と関連付けた。ＡＵＣ−１８０（３日間）の場合、各３日間の終わりにアッセイ絶対値を使用した。相関（Ｒ値）及び対応するｐ値（ｐ）を下記に示す。表に示すようにＳｔｅｉｇｅｒ Ｚ値を使用して、比較相関を計算した。
【００４１】
【表１】
期間１の終わりは診察＃２（研究の中間点）、及び期間２の終わりは診察＃３（研究の終わり）である。比較相関を計算し、Ｓｔｅｉｇｅｒ Ｚ（１バール）値は、ＡＵＣ−１８０（全期間）／Ａ１Ｃ対ＡＵＣ−１８０（全期間）／１，５−ＡＧ（Ｚ＝−３．０１、ｐ＜０．０１）＊、ＡＵＣ−１８０（期間１）／Ａ１Ｃ対ＡＵＣ−１８０（期間１）／１，５−ＡＧ（Ｚ＝−１．９９、ｐ＜０．０５）＊＊、ＡＵＣ−１８０（期間２）／Ａ１Ｃ対ＡＵＣ−１８０（期間２）／１，５−ＡＧ（Ｚ＝−２．６１、ｐ＜０．０１）＊＊＊であった。
【００４２】
１，５−ＡＧアッセイは、Ａ１Ｃ及びフルクトサミンアッセイより、両期間ともＡＵＣ−１８０（３日間及び７日間）を反映する。Ａ１Ｃは、フルクトサミンより相関する（対ＡＵＣ）。ＡＵＣ−１８０は、グルコース変動及び食後高血糖の主要な基準であるので、これらのデータは、１，５−ＡＧ値が、Ａ１Ｃ又はフルクトサミンより変動及び食後高血糖を非常に反映することを示す。
【００４３】
食事後平均最高グルコース対平均糖血アッセイ値
いくつかの公表されている食後アッセイ研究と同様に、食事後最高グルコース値を、食後高血糖の主要なインデックスとして測定する。各食事（朝食、昼食、及び夕食）の食事後平均最高グルコース値は、平均糖血アッセイ値と相関した。次いで、３種類の食事後グルコース最高値を、平均糖血アッセイ値と比較するために多変量解析における独立変数として使用した。
【００４４】
【表２】
【００４５】
１，５−ＡＧ値は、Ａ１Ｃ又はフルクトサミンより、各々の食事後グルコース最大変数（朝食、昼食、及び夕食）に相関した。さらに、多変量解析（３回の食事後最大変数の混合）によって、１，５−ＡＧは、Ａ１Ｃ又はフルクトサミンより、食後高血糖をより有意に予測することが示された。
【００４６】
糖血試験値と食後変数（ＡＵＣ−１８０及び食事後最高グルコース値）とを比較する分析によって、１，５−ＡＧアッセイが、従来の糖血アッセイ（Ａ１Ｃ及びフルクトサミン）より食後高血糖をより強く反映することが示される。
【００４７】
（実施例２）
「食後インデックス」対平均糖血アッセイ値
次いで、食後インデックス（「ＰＩ」）を、各々の平均糖血アッセイ値と比較した。食後インデックスは、上記で説明したように、食事後及びＡＵＣ−１８０変数の両方を捉える、包括的なグルコース変動及び食後高血糖の関数である。
【００４８】
【表３】
【００４９】
多変量解析によって、１，５−ＡＧは、Ａ１Ｃ又はフルクトサミンより有意に高い絶対Ｒ値を有し、１，５−ＡＧアッセイが、従来の糖血アッセイ（Ａ１Ｃ及びフルクトサミン）よりもグルコース変動及び食後高血糖をより強く反映することを示すことが示された。
【００５０】
（実施例３）
１，５−ＡＧ変化対食後インデックス
平均１，５−ＡＧアッセイ値を食後インデックスに相関させることに加えて、１，５−ＡＧ値の変化（２回目の患者診察から３回目の患者診察の％変化）は、食後インデックスと相関した。Ｒ値は０．８２で、Ｒの２乗は０．６７に等しかった。すなわち、１，５−ＡＧ値の変化は、食後インデックスにおける変動の６７％を説明した。フルクトサミン変化又はＡ１Ｃ変化と、食後インデックスとの間の統計的に有意な関係はなかったことに留意すべきである。
【００５１】
これらのデータは、特定の時期に亘って１，５−ＡＧ値を測定することが、グルコース変動及び食後高血糖のモニタリングにおいて有用であることを示す。食後高血糖を特に標的にした治療の効果をモニタリングするのに、これは特に有用である。
【００５２】
（実施例４）
１，５−ＡＧ及びＡ１Ｃアッセイの組合せ対食後インデックス
１，５−ＡＧ及びＡ１Ｃアッセイ値の組合せと、食後高血糖との関係を決定するために、Ａ１Ｃを１，５−ＡＧで割った比（「Ａ１Ｃ／１，５−ＡＧ」）を、食後インデックスと比較し、相関／多変量解析を行った。１，５−ＡＧ及びＡ１Ｃの各々対食後インデックスの相関を、比較をする目的で示す。
【００５３】
【表４】
【００５４】
Ａ１Ｃ／１，５−ＡＧの比は、Ａ１Ｃアッセイ又は１，５−ＡＧアッセイ単独よりも、食後インデックスへの強い相関を有し、２種類のアッセイの組合せは、グルコース変動及び食後高血糖をより予測することを示す。相関／多変量解析から、１，５−ＡＧは、Ａ１Ｃよりも、食後インデックスにより有意に寄与することも明らかである。Ａ１Ｃ及び１，５−ＡＧアッセイ変数の両方を各々の食後変数と比較する多変量解析によっても、これは支持され、１，５−ＡＧ（Ａ１Ｃ値と併せた場合）が、個々の食後変数との関係の多くを変動させていることを示す。食後インデックスを変動させる上で、１，５−ＡＧは主要な変数であるが、全体的にＡ１Ｃ／１，５−ＡＧアッセイ比は、各アッセイ単独よりも、グルコース変動及び食後高血糖をより強く反映する。
【００５５】
（実施例５）
臨床的有用性−食後高血糖を反映するための、Ａ１Ｃアッセイを補助するアッセイとしての１，５−ＡＧアッセイ
１，５−ＡＧは食後インデックスを変動させる上で主要な変数であるが、前項で説明したように、Ａ１Ｃ／１，５−ＡＧ混合アッセイ比は、各アッセイ単独より、グルコース変動及び食後高血糖をより強く反映する。これらの知見についての臨床上の可能性を調査するために、３４人の適切に管理された患者（Ａ１Ｃ６．５〜８．０％）を、総ＡＵＣ−１８０値によって分類し、２つの集団「低い総ＡＵＣ−１８０値」（１７人の患者）及び「高い総ＡＵＣ−１８０値」（１７人の患者）に再分割した。下の表は、Ａ１Ｃ及び１，５−ＡＧアッセイパラメーター、並びに食後変数を示す。
【００５６】
【表５】
【００５７】
Ａ１Ｃ、フルクトサミン及び空腹時グルコース値は、２群間で非常に類似しているが、１，５−ＡＧ及び朝食、昼食、又は夕食後の食事後グルコース変動の平均最高グルコース値（ＭＰＭＧ）は、２群間で有意に異なる。さらに、米国住民の１，５−ＡＧの正常範囲は、６．８μｇ／ｍＬを超える。これは上記の表における１，５−ＡＧ値の範囲が６．０μｇ／ｍＬ未満である「高い総ＡＵＣ−１８０」群で観察されるものと一致し、相当な食後高血糖を反映する。したがって、Ａ１Ｃ値は非常に似通っているが、特定の１，５−ＡＧ範囲は、食後グルコース値と関連している可能性がある。
【００５８】
さらに、Ａ１Ｃ／１，５−ＡＧ混合アッセイ比で得た結果と一致して、１，５−ＡＧとＡＵＣ−１８０（Ａ１Ｃのためにコントロール）との部分相関は、−０．３８（ｐ＝０．０１）であり、これは独立変数としての１，５−ＡＧとＡＵＣ−１８０（ｒ−０．４８）との相関と比較してかなりの相関であり、所与のＡ１Ｃレベルでは、１，５−ＡＧとＡＵＣ−１８０との間には有意な関係があることが示される。このような部分相関分析は、１，５−ＡＧアッセイは、食後高血糖を含めたグルコース変動を反映する、Ａ１Ｃアッセイの有用な補助アッセイであるというさらなる証拠を提供する。
【００５９】
ＣＧＭＳは、総ＡＵＣ−１８０値又はＭＰＭＧ値などのインデックスによってほんの大まかに捉えられた、正確な食後グルコース値を決定することができるが、ＣＧＭＳはまた、単調で時間がかかる。ＣＧＭＳは、多くの患者を扱う実際の診療には実用的ではない。１，５−ＡＧは、食後グルコース変動レベルを反映する唯一の実用的なマーカーである。
【００６０】
（実施例６）
臨床的有用性−１，５−ＡＧアッセイ及び食事後グルコース参照範囲表
食事後平均最高グルコース値（朝食、昼食及び夕食全ての食事後グルコース値の平均、ｎ＝２３）と、平均１，５−ＡＧアッセイ値とを相関させることによって、いくつかの線形回帰式を、下記に示すように計算した。
【００６１】
単純回帰
Ｘ変数：平均１，５−ＡＧ
Ｙ変数：平均全食事後最高値
【表６】
【００６２】
最適な線形回帰アプローチは、Ｒ値が０．６８の双曲線回帰である（Ｙ＝Ａ＋Ｂ／Ｘ）。［食事後平均最高値＝１５６．９１＋２７３．６９／平均１，５−ＡＧ］と表される式を使用して、１，５−ＡＧ値と、対応する食事後平均最高グルコース値が一致する参照範囲表を計算し、下記に示す。この参照範囲表は、おおよその食事後グルコース値を、測定した１，５−ＡＧ値から導き出すために臨床的に使用し得る。
【００６３】
１，５−ＡＧ値とおおよその食事後平均血糖値との関係（適切に管理された患者）
【表７】
【００６４】
（実施例７）
臨床的有用性−診療における１，５−ＡＧアッセイの使用
診療においてグルコース変動及び食後高血糖を測定するための１，５−ＡＧアッセイの有用性をさらに実証するために、２人の代表の患者からのデータを図１Ａ及び１Ｂに示す。図１Ａの患者１は、図１Ｂの患者２（７．２７％）と同じようなＡ１Ｃ（７．４３％）を有する。対照的に、患者１の１，５−ＡＧは、１２．３７μｇ／ｍＬで正常範囲内であり、患者２は４．５μｇ／ｍＬで対照的である。これは、患者２に対する患者１の各々より低いＡＵＣ（８対２２ｍｇ／ｄＬ＊日）、及びより低いＭＰＭＧ（１９５ｍｇ／ｄＬ対２３５ｍｇ／ｄＬ）にも一致する。ＣＧＭＳの記録も、図に各患者について示され、異常な１，５−ＡＧを有する患者、すなわち患者２では、かなりより大きなグルコース変動が明らかに示される。
【００６５】
これらの代表の患者は、１，５−ＡＧアッセイは、同じようなＡ１Ｃに関わらず、異なる食事後グルコース値を反映することを明らかに示す。食後グルコース上昇が優勢である適切に管理された又は最善の水準に次ぐ患者（Ａ１Ｃ値６．５〜８．０％）で、これは特に重要である。
【００６６】
診療において、最初にＡ１Ｃアッセイを用いて、適切に管理された患者（Ａ１Ｃ６．５〜８．０％）を同定し、次いで１，５−ＡＧアッセイを用いて、食後グルコース変動の程度を決定することによって、Ａ１Ｃ及び１，５−ＡＧを順次用いることができる（図２の診断アルゴリズム及び上記の実施例６の参照範囲表を参照のこと）。Ａ１Ｃが目標を超え、１，５−ＡＧが正常の場合、基礎グルコースを目標とした治療がより有用であり得る。他方、Ａ１Ｃが目標を超え、１，５−ＡＧが低い場合、食後グルコース上昇を目標とすることにより、より成果が上がり得る。これは、より徹底した食後モニタリング又は食後高血糖に特異的に対処する薬剤の追加を伴い得る。
【００６７】
血糖の変化に対する１，５−ＡＧの迅速な応答性によって、連続的な１，５−ＡＧ測定は、食後高血糖を評価するのに有用であり得る。これは、食後グルコースコントロールを特に目標とした治療の効果を検討する上で特に有用であり得る。大部分の患者において、完全な糖血症コントロールへの本当の障害が、不適切な食事にあるのか又は基礎血糖処置にあるのかを識別するのは困難である場合がある。集中的なインスリン治療中の１型糖尿病患者において必要である場合がある複雑な調節を行うために、自己モニタリングデータが不十分である場合が多い。他方、経口剤を使用している多くの２型糖尿病患者は、通常空腹状態で、血糖を１日１回又はそれ以下の頻度でしか調べない。１，５−ＡＧは、このような状況において、Ａ１Ｃを補助するものとして有用であり得る。
【図面の簡単な説明】
【００６８】
【図１Ａ】同じようなＡ１Ｃ値を有するが、１，５−ＡＧ値が異なる２人の患者から得た血糖変動のプロファイルを示す。
【図１Ｂ】同じようなＡ１Ｃ値を有するが、１，５−ＡＧ値が異なる２人の患者から得た血糖変動のプロファイルを示す。
【図２】測定した１，５−ＡＧ値を使用した食後グルコースをコントロールするための診断アルゴリズムを示す。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト血液中の１，５−アンヒドログルシトール値を測定するステップを含む、ヒトの血糖変動を検査する方法。
【請求項２】
ヒトの前記血糖変動が糖尿病患者の食後高血糖である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
糖尿病患者の食後の平均最高血糖値を推定するステップをさらに含み、前記推定ステップが、１，５−アンヒドログルシトール値を使用するステップと、計算式又は表を使用するステップとを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
１種類のさらなる糖血症コントロールマーカー値を測定するステップをさらに含む、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
前記さらなる糖血症コントロールマーカー値と１，５−ＡＧ値の比を計算するステップをさらに含む、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記さらなる糖血症コントロールマーカーが、Ａ１Ｃ、フルクトサミン、及び空腹時血漿グルコースの少なくとも１つである、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記さらなる糖血症コントロールマーカーがＡ１Ｃである、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
一定期間に亘ってヒト血液中の１，５−アンヒドログルシトール（「１，５−ＡＧ」）値を複数回測定するステップと、
ヒトの１，５−ＡＧ値の変化又はパーセント変化を計算するステップと
を含む、ヒトの血糖変動を検査する方法。
【請求項９】
ヒトの前記血糖変動が糖尿病患者の食後高血糖である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
測定が行われる期間が２日〜７日である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記糖尿病患者が６．５〜８．０％のＡ１Ｃ値を有する、請求項２に記載の方法。
【請求項１２】
前記糖尿病患者が６．５〜８．０％のＡ１Ｃ値を有する、請求項３に記載の方法。
【請求項１３】
前記糖尿病患者が６．５〜８．０％のＡ１Ｃ値を有する、請求項９に記載の方法。
【請求項１４】
前記糖尿病患者が６．５〜８．０％のＡ１Ｃ値を有する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１５】
請求項２の方法を含む、糖尿病患者の心血管系合併症の危険を推定する方法。
【請求項１６】
請求項９の方法を含む、糖尿病患者の心血管系合併症の危険を推定する方法。
【請求項１７】
前記糖尿病患者が、１型糖尿病患者又は２型糖尿病患者である、請求項２に記載の方法。
【請求項１８】
前記糖尿病患者が、１型糖尿病患者又は２型糖尿病患者である、請求項９に記載の方法。
【請求項１９】
ヒト血液中の１，５−アンヒドログルシトール値を測定するユニットを含む、ヒトの血糖変動を検査するための装置。
【請求項２０】
ヒトの前記血糖変動が糖尿病患者の食後高血糖である、請求項１９に記載の装置。
【請求項１】
ヒト血液中の１，５−アンヒドログルシトール値を測定するステップを含む、ヒトの血糖変動を検査する方法。
【請求項２】
ヒトの前記血糖変動が糖尿病患者の食後高血糖である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
糖尿病患者の食後の平均最高血糖値を推定するステップをさらに含み、前記推定ステップが、１，５−アンヒドログルシトール値を使用するステップと、計算式又は表を使用するステップとを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
１種類のさらなる糖血症コントロールマーカー値を測定するステップをさらに含む、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
前記さらなる糖血症コントロールマーカー値と１，５−ＡＧ値の比を計算するステップをさらに含む、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記さらなる糖血症コントロールマーカーが、Ａ１Ｃ、フルクトサミン、及び空腹時血漿グルコースの少なくとも１つである、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記さらなる糖血症コントロールマーカーがＡ１Ｃである、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
一定期間に亘ってヒト血液中の１，５−アンヒドログルシトール（「１，５−ＡＧ」）値を複数回測定するステップと、
ヒトの１，５−ＡＧ値の変化又はパーセント変化を計算するステップと
を含む、ヒトの血糖変動を検査する方法。
【請求項９】
ヒトの前記血糖変動が糖尿病患者の食後高血糖である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
測定が行われる期間が２日〜７日である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記糖尿病患者が６．５〜８．０％のＡ１Ｃ値を有する、請求項２に記載の方法。
【請求項１２】
前記糖尿病患者が６．５〜８．０％のＡ１Ｃ値を有する、請求項３に記載の方法。
【請求項１３】
前記糖尿病患者が６．５〜８．０％のＡ１Ｃ値を有する、請求項９に記載の方法。
【請求項１４】
前記糖尿病患者が６．５〜８．０％のＡ１Ｃ値を有する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１５】
請求項２の方法を含む、糖尿病患者の心血管系合併症の危険を推定する方法。
【請求項１６】
請求項９の方法を含む、糖尿病患者の心血管系合併症の危険を推定する方法。
【請求項１７】
前記糖尿病患者が、１型糖尿病患者又は２型糖尿病患者である、請求項２に記載の方法。
【請求項１８】
前記糖尿病患者が、１型糖尿病患者又は２型糖尿病患者である、請求項９に記載の方法。
【請求項１９】
ヒト血液中の１，５−アンヒドログルシトール値を測定するユニットを含む、ヒトの血糖変動を検査するための装置。
【請求項２０】
ヒトの前記血糖変動が糖尿病患者の食後高血糖である、請求項１９に記載の装置。
【図１Ａ】
【図１Ｂ】
【図２】
【図１Ｂ】
【図２】
【公表番号】特表２００８−５３７１５４（Ｐ２００８−５３７１５４Ａ）
【公表日】平成２０年９月１１日（２００８．９．１１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−５０７９１７（Ｐ２００８−５０７９１７）
【出願日】平成１８年４月２１日（２００６．４．２１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０１５０９１
【国際公開番号】ＷＯ２００６／１１６０８３
【国際公開日】平成１８年１１月２日（２００６．１１．２）
【出願人】（０００００４０８６）日本化薬株式会社 (921)
【出願人】（５０７３４７８２０）トヨタ ツウショウ アメリカ インコーポレイテッド (2)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２０年９月１１日（２００８．９．１１）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年４月２１日（２００６．４．２１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０１５０９１
【国際公開番号】ＷＯ２００６／１１６０８３
【国際公開日】平成１８年１１月２日（２００６．１１．２）
【出願人】（０００００４０８６）日本化薬株式会社 (921)
【出願人】（５０７３４７８２０）トヨタ ツウショウ アメリカ インコーポレイテッド (2)
【Ｆターム（参考）】
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