二極性トランスカロテノイド塩およびそれらの使用
【課題】ヒトを含む哺乳類において、赤血球と身体組織との間での酸素の拡散率を改善させることに有用であるトランスカロテノイド塩化合物を合成する方法、それらを可溶化させる方法、およびそれらの使用法を提供する。
【解決手段】共役炭素−炭素二重結合を含有する対称ジアルデヒドを、トリフェニルホスホランとカップリングさせ、その生成物を鹸化することによるトランスカロテノイド塩化合物。この化合物をアルカリ水に添加する、生理食塩水に添加して未溶解物を濾過する等の方法により可溶化させることができる。
【解決手段】共役炭素−炭素二重結合を含有する対称ジアルデヒドを、トリフェニルホスホランとカップリングさせ、その生成物を鹸化することによるトランスカロテノイド塩化合物。この化合物をアルカリ水に添加する、生理食塩水に添加して未溶解物を濾過する等の方法により可溶化させることができる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、二極性トランスカロテノイド塩化合物、それらを可溶化させる方法、それらを作製する方法、およびそれらを使用する方法に関する。これらの二極性トランスカロテノイド塩（ＢＴＣＳ）化合物は、ヒトを含む哺乳類において赤血球と身体組織との間での酸素の拡散率を改善させることにおいて有用である。
【０００２】
発明の背景
カロテノイドは、その配列が分子の中心で反転される様式で結合されたイソプレノイド単位から構成される炭化水素の一種である。分子のバックボーン（骨格）は、共役炭素−炭素二重結合および単結合から構成され、ペンダント基もまた有し得る。カロテノイドの骨格は４０個の炭素を含有するとかつては考えられていたが、カロテノイドは４０個未満の炭素原子を含有する炭素骨格も有し得ると長年認識されてきた。炭素−炭素二重結合を取り巻く４つの単結合はすべて、同じ平面に存在する。ペンダント基が炭素−炭素二重結合の同じ側に存在する場合、それらの基はシスと称され、ペンダント基が炭素−炭素二重結合の向かい側に存在する場合、それらはトランスと称される。多数の二重結合のために、カロテノイドの幾何（シス／トランス）異性の広い可能性が存在し、溶液中で異性化が容易に起きる。最近の一連の書籍は、カロテノイドの多くの特性等に関する優れた参照文献である（「CAROTENOIDS」、G.BRITTON、S.LIAAEN-JENSENおよびH. PFANDER, BIRKHAUSER VERLAG, BASEL著、１９９５年、その全体が参照により本明細書に援用される）。
【０００３】
多くのカロテノイドは無極性であり、したがって水中に不溶である。これらの化合物は非常に疎水性であり、そのことが生物学的用途のためのその配合を困難なものにしている。というのは、それらを可溶化させるためには水性溶媒ではなく有機溶媒を使用しなくてはならないためである。他のカロテノイドは単極性であり、界面活性剤の特徴（疎水性部分および親水性極性基）を有する。したがって、これらの化合物は、大部分の液体中に溶解するのではなく、水溶液の表面に引き寄せられる。数種の天然の二極性カロテノイド化合物が存在し、これらの化合物は、中心の疎水性部分ならびに分子の両端に１つずつ２つの極性基を含有する。カロテノイドスルフェートは「最大０．４ＭＧ／ＭＬの水中での有意な溶解性」を有することが報告されている（「CAROTENOIDS」, VOL. 1A, P.283）。二極性と考えられ得る他のカロテノイドもまた水中にはあまり可溶性ではない。これらとしては、ジアルデヒドおよびジケトンが挙げられる。クロセチンのジピリジン塩もまた報告されているが、その水中での溶解性は室温で１ＭＧ／ＭＬ未満である。二極性カロテノイドの他の例はクロセチンおよびクロシン（ともに香辛料のサフラン中に見られる）である。しかしながら、クロセチンは水中にほんのわずかに可溶性である。実際に、二極性カロテノイドすべてのうち、クロシンのみが水中での有意な溶解性を示す。
【０００４】
米国特許第４，１７６，１７９号、同第４，０７０，４６０号、同第４，０４６，８８０号、同第４，０３８，１４４号、同第４，００９，２７０号、同第３，９７５，５１９号、同第３，９６５，２６１号、同第３，８５３，９３３号、および同第３，７８８，４６８号は、クロセチンの各種用途に関する。
【０００５】
米国特許第５，１０７，０３０号は、２，７−ジメチル−２，４，６−オクタトリエンジアールおよびその誘導体を作製する方法に関する。
【０００６】
米国特許第６，０６０，５１１号は、トランスナトリウムクロセチネート（ＴＳＣ）およびその用途に関する。ＴＳＣは、天然に存在するサフランを水酸化ナトリウムと反応させ、続いて抽出することにより作製される。
【０００７】
ROY ET AL., SHOCK 10, 213-7. (1998)では、出血させたラット（５５％の血液容量）に、１０分後にトランスナトリウムクロセチネート（ＴＳＣ）のボーラスを与え、続いてもう３０分後に生理食塩水を与えた。ＴＳＣ処理した動物すべてが生存したが、対照はすべて死亡した。全体内酸素消費がＴＳＣ群では増加し、約１５分後には正常静止値の７５％に達していた。
【０００８】
LAIDIG ET AL, J AM CHEM. SOC. 120, 9394-9395 (1998)は、ＴＳＣの計算モデリングに関する。人工ＴＳＣ分子は、それを水分子で取り囲むことで「水和」されていた。ＴＳＣの近傍での水の疎水性配列により、酸素分子が系を通って拡散するのをより容易となっていた。およそ３０％の拡散における計算上の増加は、ＩＮ ＶＩＴＲＯおよび動物実験の両方で得られた結果と一致していた。
【０００９】
SINGER ET AL., CRIT CARE MED 28, 1968-72 (2000)において、ＴＳＣは、急性低酸素症のラットモデルにおいて血行力学的状態および延長されたラットの生存を改善させた。低酸素症は、低酸素濃度（１０％）の空気混合物を使用して誘発させた。１０分後に、動物に生理食塩水またはＴＳＣのいずれかを付与した。低酸素血症は、血流の減少および塩基欠乏の増加を引き起こした。対照群では６匹の動物のうち２匹のみが生存した。処理群はすべて、二時間以上の間良好な血行力学的安定性で、その後はゆっくりした下り勾配で生存した。
【発明の概要】
【００１０】
本発明は、二極性トランスカロテノイド塩（ＢＴＣＳ）化合物、および下記構造：
ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
（式中、Ｙ＝カチオン、
Ｚ＝上記カチオンと会合される極性基、および
ＴＣＲＯ＝トランスカロテノイド骨格）
を有するかかる化合物の合成に関する。
【００１１】
本発明はまた、個々のＢＴＣＳ化合物組成物（ＴＳＣ組成物を含む）に関し、ここではＵＶ波長範囲で見られるピークの吸光度で除算した可視波長で見られる最高ピークの吸光度が８．５より大きく、好適には９より大きく、最も好適には９．５より大きい。
【００１２】
本発明はまた、各種疾患を治療する方法であって、治療を必要とする哺乳類に治療上有効量の次式：
ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
を有する化合物を投与することを含む方法に関する。
【００１３】
本発明はまた、次式：
ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
を有する化合物を可溶化および合成する幾つかの方法を包含する。
【００１４】
本発明はまた、本発明の化合物を送達するための吸入器に関する。
【００１５】
発明の詳細な説明
新規種類のカロテノイドおよびカロテノイド関連化合物が発見された。これらの化合物を「二極性トランスカロテノイド塩」（ＢＴＣＳ）と称する。
【００１６】
＜本発明の化合物＞
本発明は、疎水性カロテノイドまたはカロテノイド関連骨格により水溶液中に溶解することが可能な化合物種である二極性トランスカロテノイド塩、およびそれらを作製する方法に関する。これらの塩のカチオンは、多数の種であってもよいが、好適にはナトリウムまたはカリウム（これらはたいていの生物学的系に見られる）であり得る。本願と共通人の所有に係る米国特許第６，０６０，５１１号（その全体が参照により本明細書に援用される）は、サフランを出発としてトランスナトリウムクロセチネート、すなわちＴＳＣ（ＢＴＣＳの１種）を作製する抽出方法について記載している。
【００１７】
二極性トランスカロテノイド塩に関する一般構造は、下記：
ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
であり、
式中、
Ｙ（これは、２つの末端で同じであっても異なってもよい）＝カチオン、好ましくは、ＮＡ＋またはＫ＋またはＬＩ＋。Ｙは好適には、一価の金属イオンである。Ｙはまた、有機カチオン、例えば、Ｒ４Ｎ＋、Ｒ３Ｓ＋（式中、ＲはＨ、またはＣＮＨ２Ｎ＋１（ここで、Ｎは１〜１０、好適には１〜６である））であり得る。例えば、Ｒは、メチル、エチル、プロピルまたはブチルであり得る。
【００１８】
Ｚ（これは、２つの末端で同じであっても異なってもよい）＝上記カチオンと会合される極性基。カロテノイド（またはカロテノイド関連化合物）上の末端炭素を任意に包含し、この基はカルボキシル（ＣＯＯ−）基またはＣＯ基であり得る。この基はまたスルフェート基（ＯＳＯ３−）またはモノホスフェート基（ＯＰＯ３−）、（ＯＰ（ＯＨ）Ｏ２−）、ジホスフェート基、トリホスフェートまたはそれらの組合せであってもよい。
【００１９】
ＴＣＲＯ＝線状のトランスカロテノイドまたはカロテノイド関連骨格（好適には１００個未満の炭素）であり、ペンダント基（以下に定義される）を有し、通常「共役」すなわち交互の炭素−炭素二重結合および単結合を含む（一実施形態では、ＴＣＲＯはリコペンで見られるように完全に共役していない）。ペンダント基は通常メチル基であるが、以下に議論するように他の基であってもよい。好適な実施形態では、骨格の単位は、その配列が分子の中心で逆さまであるような様式で結合される。炭素−炭素二重結合を取り巻く４つの単結合はすべて、同じ平面に存在する。ペンダント基が炭素−炭素二重結合の同じ側に存在する場合、それらの基はシスと称され、ペンダント基が炭素−炭素二重結合の向かい側に存在する場合、それらはトランスと称される。本発明の化合物はトランスである。シス異性体は通常不利益であり、拡散率における結果が増加されない。一実施形態では、トランス異性体（ここで、骨格は線状のままである）が利用され得る。
【００２０】
トランスカロテノイドまたはカロテノイド関連骨格の例は、下記：
【化５】
【００２１】
（式中、ペンダント基Ｘ（これは同じであっても異なってもよい）は、水素（Ｈ）原子、あるいは１０個以下、好適には４個以下の炭素を有する線状または分岐状基（任意のハロゲンを含有する）、またはハロゲンである。Ｘの例は、メチル基（ＣＨ３）、エチル基（Ｃ２Ｈ５）、ハロゲン含有アルキル基（Ｃ１〜Ｃ１０）（例えば、ＣＨ２ＣＬ）、またはハロゲン（例えば、ＣＬまたはＢＲ）である。ペンダントＸ基は、同じであっても異なってもよいが、利用されるＸ基は骨格を線状に維持しなければならない。
【００２２】
多くのカロテノイドが天然に存在するが、カロテノイド塩は存在しない。本願と共通人の所有に係る米国特許第６，０６０，５１１号は、トランスナトリウムクロセチネート（ＴＳＣ）に関する。ＴＳＣは、天然に存在するサフランを水酸化ナトリウムと反応させ、続いて主としてトランス異性体に関して選択する抽出を行うことにより作製される。
【００２３】
ＢＴＣＳのシスおよびトランス異性体の存在は、水溶液中に溶解されたカロテノイド試料に関して紫外−可視スペクトルに注目することで決定され得る。スペクトルを考慮すると、２５０〜２５６ＮＭのＵＶ波長範囲で見られるピークの吸光度で除算した、４１６〜４２３ＮＭ（この数字は使用する溶媒に依存する）の可視波長範囲で見られる最高ピークの吸光度の値を用いて、トランス異性体の純度レベルを決定することができる。ＢＴＣＳが水に溶解されている場合、最高可視波長範囲ピークは約４２１ＮＭであり、ＵＶ波長範囲ピークは約２５４ＮＭである。M. CRAW AND C. LAMBERT, PHOTOCHEMISTRY AND PHOTOBIOLOGY, VOL. 38(2), 241-243 (1983)（その全体が参照により本明細書に援用される）によれば、算出の結果（その場合クロセチンが分析された）は３．１であり、これは精製後に６．６まで増加した。
【００２４】
本願と共通人の所有になる米国特許第６，０６０，５１１号のトランスナトリウムクロセチン（天然に存在するサフランを水酸化ナトリウムと反応させ、続いて主としてトランス異性体に関して選択する抽出を行うことにより作製されたＴＳＣ）に関して、CRAWおよびLAMBERTの分析を実施すると、得られた値は通常、およそ７〜７．５である（一度８．４の値が観察された）。本発明の合成ＴＳＣに関して試験を実施すると、その比は通常、８．５より大きく（例えば、８．５〜１０）、好適には９より大きく（例えば、９〜１０）、最も好適には９．５より大きい。実施例５の改良方法により合成されるＴＳＣに関しては、比は通常９．５より大きい（例えば、９．５〜１２）。合成された物質は、「より純粋なもの(PURER)」または高度に精製されたトランス異性体である。
【００２５】
最近、ＴＳＣが室温で１０ＭＧ／ＭＬより大きい水性溶解度を有することが見出されており、これは、このような長い疎水性部分を含有する分子にとっては珍しい。ＴＳＣはまた、液体を通しての酸素の拡散率を増加させることも見出されている。
【００２６】
米国特許第６，０６０，５１１号は、サフランを出発としてＴＳＣを作製する抽出方法について記載しているが、サフランの使用によりたった１つのカロテノイド骨格が塩に組み込まれ得るため、同じ手順を使用して他の二極性カロテノイド塩を作製することはできない。
【００２７】
本明細書中に開示する発明は、全種類の化合物（各種カロテノイドまたはカロテノイド関連骨格を含有する二極性トランスカロテノイド塩）の合成を可能にする。かかる化合物は、水溶液中に可溶性であり、酸素利用の増加を引き起こすといった好適な生物学的用途を有する。この増加は、二極性トランスカロテノイド塩の疎水性部分（骨格）が、隣接する水分子の結合に影響を及ぼす能力の結果であると考えられる。事実上、このことにより酸素分子はこの近傍ではあるが、より遠方へ拡散することが可能である。
【００２８】
＜本発明の化合物および組成物の可溶化＞
本発明は、トランスカロテノイドまたはカロテノイド関連骨格分子の水溶液中の溶解を可能にする。溶解の新規方法は以下に関連する。上記方法は、任意の二極性トランスカロテノイド塩およびその組成物に適用される。
【００２９】
ＢＴＣＳ含有生理食塩水注入溶液
大量（推定血液損失の３倍程度）の等張生理食塩水（生理食塩水とも呼ぶ）は、出血性ショック用の治療として注入される。等張生理食塩水溶液は、身体中に注入されたときに血漿のイオン強度を乱さないように、水１リットル当たり９ＧのＮＡＣＬを含有する。生理食塩水へのＴＳＣの添加は、より優れた注入液体をもたらす結果を示したが、単にＴＳＣ粉末を生理食塩水と混合するだけでは、かかる溶液を作製することはできない。どんなに多くのＴＳＣを添加しても（最大１ＭＬあたり数ミリグラムまで）、ＴＳＣの約５０％が生理食塩水中に溶解するに過ぎず、それは、ＴＳＣの未溶解粒子が依然として存在することを意味する。これを防止するためには、必要とされる２倍以上の量のＴＳＣを添加し、続いて溶解しない粒子を遠心分離で除去することにより、ストック溶液を作製することができる。ストック溶液の実際の組成は、ＵＶ−可視分光法を用いて確証することができる。このストック溶液を生理食塩水に添加することができ、ＴＳＣは溶解したままである。
【００３０】
この方法を用いて、他のタイプの塩化ナトリウム溶液、ならびにＫＣＬ、ＮＡ２ＳＯ４、乳酸塩等のような他の塩の溶液中に溶解させることができる。幾つか（例えば、１〜３ＭＧ／ＭＬ）をこの様式で溶液中に入れることができる。
【００３１】
炭酸ナトリウムの希釈溶液はＢＴＣＳを溶解する
ＴＳＣのようなＢＴＣＳは、超希釈炭酸ナトリウム溶液中に溶解する。炭酸ナトリウムの希釈（例えば、０．００００１〜０．００１Ｍ）溶液を、ＰＨが８．０になるまで脱イオン水に滴下することができる（脱イオン水のＰＨは通常５〜６）。これには、例えば脱イオン水５０ＭＬ当たり数滴の超希釈炭酸ナトリウムを要するに過ぎない。この炭酸ナトリウム−脱イオン水溶液は、大量のＴＳＣ（１０ＭＧ／ＭＬより大きい）を完全に溶解させることが可能であり、それはＢＴＣＳのカロテノイド部分の疎水性を考慮すると珍しい。
【００３２】
ＢＴＣＳは、炭酸ナトリウム水の滅菌ボトルと一緒に粉末として供給され得る。続いて、この濃縮溶液を直接注射することができる（血漿よりも低いイオン強度を有する溶液を非常に少量注射することができる）か、または濃縮溶液を生理食塩水に添加した後、注射することができる。ＴＳＣが炭酸ナトリウム−水溶媒中に溶解され、続いてより多くの同じ溶媒が添加される場合、ＴＳＣは溶液中に留まる。
【００３３】
別の実施形態では、炭酸ナトリウムではなく、炭酸水素ナトリウムが使用される。塩基性ＰＨを有する脱イオン水をもたらす他の塩もまた使用することができる。
【００３４】
カロテノイド骨格濃度５〜１０ＭＧ／ＭＬは、この手順を用いて達成することができる。
【００３５】
水はＢＴＣＳを溶解する
ＴＳＣは水（水道水、蒸留水、脱イオン水）中に溶解するが、これらの溶液は、溶液が塩基性となるようにＰＨが調節された場合のみ安定である。ＴＳＣは、正常水中よりも脱イオン水（非常にわずかなＮＡ＋イオンが存在する）中でより可溶性である。ＴＳＣのようなＢＴＣＳは、ぴったりの脱イオン化水のみに溶解するが、純粋な脱イオン化水を当該溶液に添加する場合、ＴＳＣは析出するであろう。ＢＴＣＳは、ぴったりの脱イオン化水のみに溶解するが、さらなる脱イオン化水は、ＰＨがわずかに塩基性となるように調節されない場合にはＢＴＣＳの沈殿を引き起こし得る。
【００３６】
ＢＴＣＳを可溶化させる他の方法
ＢＴＣＳは、送達を高める送達系中に配合され得る。後述のの本発明の化合物の配合を参照されたい。
【００３７】
＜本発明の化合物の合成＞
二極性トランスカロテノイド塩
二極性トランスカロテノイド塩を合成するのに使用することができる新規合成方法を以下に記載する。当業者に明らかな合成の様々な工程における変形が存在し得る。
【００３８】
Ａ．ＴＳＣ合成
トランスナトリウムクロセチネート（ＴＳＣ）は、共役炭素−炭素二重結合を含有する対称Ｃ１０ジアルデヒド（２，７−ジメチルオクタ−２，４，６−トリエン−１，８−ジアール）を［３−カルボメトキシ−２−ブタエン−１−イリデン］トリフェニルホスホランとカップリングさせることにより合成することができる。これは、クロセチンのトランスジメチルエステルの形成をもたらす。次に、このジメチルエステルを、鹸化により最終ＴＳＣ生成物へ変換する。通常、鹸化は、水酸化ナトリウム水またはＴＨＦ（テトラヒドロフラン）中に溶解させた水酸化ナトリウムのいずれかでエステルを処理することにより達成される。しかしながら、これらの方法は、今回の場合では最良の結果を提供しなかった。今回の場合、鹸化は、ＮＡＯＨ／メタノール溶液でエステルを処理することにより非常に良好に達成することができる。鹸化後、ＴＳＣは真空乾燥することにより回収される。
【００３９】
この合成で使用されるＣ１０ジアルデヒドおよびトリフェニルホスホラン反応物は、種々の経路を介して作製することができる。例えば、Ｃ１０ジアルデヒドは、ウィッテッヒ化学を用いてブロモ酢酸エチルおよびフランを出発して調製された。チグリン酸は、所望のホスホランを作製するための出発物質であった。種々の長さのカロテノイド骨格は、種々の長さの反応物（例えば、Ｃ１４ジアルデヒドおよびトリフェニルホスホラン）を結合させることにより作製することができる。この手順により、種々のトランス二極性カロテノイド塩の形成がもたらされる。種々のペンダント基を得るために、変更もまたなされ得る（ＴＳＣは、ペンダント基に関してはメチル基を有する）。
【００４０】
この様式で作製されるＴＳＣは、室温で１０ＭＧ／ＭＬ未満のレベルで水（ＰＨは、炭酸ナトリウムの超希釈溶液で８．０に調節される）中に可溶性である。他の二極性トランスカロテノイド塩は、中性以上のＰＨを有する水中に室温で可溶性である。本明細書中で使用する場合、「可溶性」は、室温で水１ＭＬ当たり５ＭＧより大きい量が溶解することを意味する（上述の通り、カロテノイドの参照文献は、０．４ＭＧ／ＭＬが「非常に有意な溶解性」であると主張しているが、それは溶解性の本定義未満である）。
【００４１】
Ｂ．一般合成
カロテノイドまたはカロテノイド関連構造は、以下の様式で構築することができる：
【化６】
【００４２】
（３−カルボメトキシ−２−ブテン−１−イリデン）トリフェニルホスホラン（またはＸがメチル基以外の関連化合物）は、イソプレノイド単位（またはイソプレノイド関連単位）を対称カロテノイド（またはカロテノイド関連化合物）の両末端に付加するための重要な前駆体である。このプロセスは無限に繰り返すことができる。例えば、ジメチルトランスクロセチネートは、上述の化学を用いて相当する対称的なジアルデヒドに還元することができる。このジアルデヒドは、過剰な（３−カルボキシメトキシ−２−ブテン−１−イリデン）トリフェニルホスホランと反応させて、相当するジエステルを得ることができる。この合成順序は、何度も何度も繰り返すことができる。
【００４３】
＜改良合成＞
２，７−ジメチル−２，４，６−オクタトリエンジアールは、ＴＳＣの合成への重要な中間体である。この重要な前駆体は３つの二重結合を有しており、したがって幾つかの異性体が可能である。ＴＳＣに関して、オールトランス異性体（Ｅ，Ｅ，Ｅ−異性体）が必要とされる。一般合成経路には、幾つかの工程で比較的低収率かつ乏しい選択性の１１工程の合成が包含される（実施例１を参照）。結果として、途中で幾つかの中間体を精製するのにカラムクロマトグラフィが必要とされる。
【００４４】
改良合成経路はかなり簡素である（以下の反応スキームを参照）。米国特許第５，１０７，０３０（その全体が参照により本明細書に援用される）に記載されるような３工程プロセスは、ジアルデヒドの幾何異性体の混合物を生じる（米国特許第５，１０７，０３０号はこの混合物に言及していない）。実施例１に記載する本発明の方法では、メタノールまたは酢酸エチルから数回の再結晶により、９６〜９７％の所望の異性体（オールトランス、すなわちＥ，Ｅ，Ｅ−異性体）が５９％の収率で得られる。
【００４５】
本発明の改良合成方法は、１，４−ジオキサン、テトラヒドロフランまたはジアルキルエーテル（ここで、アルキル基は、Ｃ１〜Ｃ１０の直鎖または分岐アルキル基のうちの１つまたは２つである）のような適切な溶媒中での、スルフィン酸ＲＳＯ２Ｈ（式中、Ｒは、Ｃ１〜Ｃ１０の直鎖もしくは分岐アルキル基またはアリール基（置換フェニル基）（例えば、パラトルエンスルフィン酸）である）による異性化により、残存するジアルデヒドの異性体混合物を所望のトランスアルデヒド（Ｅ，Ｅ，Ｅ）に変換することを包含する。純粋な所望のジアルデヒドのさらに８％の収率が得られ、最終工程の全収率を５９％から６７％の収率に上げる。この収率改良は重要である。この異性化工程は、米国特許第５，１０７，０３０号の第三工程に組み込んで、良好な収率を獲得することができる。
【００４６】
改良合成経路：
【化７】
【００４７】
２つの望ましくない異性体：
【化８】
【００４８】
望ましいジルデヒドへの望ましくないジアルデヒドの異性化：
【化９】
【００４９】
鹸化は、メタノール中にジエステルを溶解させた後、ＮＡＯＨのような塩基を添加することにより達成される（その結果、ＢＴＣＳのＹはＮＡ＋である）。あるいは、ジエステルを、すでに塩基を含有するメタノール中に溶解させることができる。ＮＡＯＨは通常、水溶液（２０〜６０重量％）であるが、固体であってもよい。ジエステルを溶解させるためのメタノールに対する代替物は、エタノール、プロパノールおよびイソプロパノールである。鹸化は、商業的に様々な方法で実施することができる。一相系または二相系（一方が有機相で一方が水相）を使用することができる。
【００５０】
トランスクロセチンはまた、上述の方法に従って合成することができる。
【００５１】
さらに、ＴＳＣに関して報告されているように、カロテノイド骨格の水との疎水性相互作用が拡散率の増加をもたらすため、かかるＢＴＣＳ化合物は、水を通しての酸素の拡散率を増加させる（これもまた、炭素鎖長のような最終生成物に組み込まれる疎水性部分の性質に依存する）。
【００５２】
＜本発明の化合物の配合物＞
二極性トランスカロテノイド塩の濃縮溶液は、上述のように、炭酸ナトリウムの超希釈溶液中に二極性トランスカロテノイド塩を溶解させることにより作製することができる。次に、得られた混合物をその様式で使用することができるか、または生理食塩水または他の水性溶媒でさらに希釈することができる。さらに、二極性トランスカロテノイド塩の溶液は、塩溶液中に二極性トランスカロテノイド塩を直接溶解させた後、溶解しない任意の物質を取り除くことにより作製することができる。
【００５３】
二極性トランスカロテノイド塩は、室温では乾燥形態で安定であり、長期間保管することができる。好適には、経口の場合、かかる塩の配合物は、胃ではなく腸で吸収される。
【００５４】
本発明の化合物は単独で投与することができるが、本発明の化合物は、薬学的配合物の一部として投与することができる。かかる配合物は、当業者に既知の薬学的に許容可能なキャリア、ならびに他の治療剤（以下を参照）を含み得る。好適には、配合物は、本発明の化合物の酸素の拡散率を改善させる能力を阻害する化合物を含まない。
【００５５】
本発明の化合物および組成物の適切な投与量は、治療される状態の重篤性に依存する。「治療上有効」であるべき用量に関して、その用量は、所望の効果を有さなくてはならず、すなわち酸素の拡散率を増加させなくてはならない。その結果、これにより酸素関連パラメータが正常値へと回復される。
【００５６】
投与は、経口、鼻、局所、非経口（皮下、筋内、静脈内、皮内および骨内を含む）、膣または直腸を含む任意の適切な経口投与によってもよい。投与の好ましい経路は、状況に応じる。ＢＴＣＳが非常に迅速に血流に進入することが必要である場合、吸入経路は緊急状況での治療に好適である。したがって、配合物としては、かかり経路による投与に適したもの（噴霧されるべき液体または粉末）が挙げられる。好ましい経路は、例えば患者の状態および年齢により様々であり得ることが理解されよう。配合物は、単位投薬形態、例えば錠剤および徐放性カプセルで利便性よく提供することができ、また薬剤学の技術分野で既知の方法により調製および投与することができる。配合物は、ＢＴＣＳの即時放出、あるいは徐放すなわち制御放出用であり得る。例えば、ＷＯ９９／１５１５０（その全体が参照により本明細書に援用される）の制御放出配合物を参照されたい。
【００５７】
経口投与に適した本発明の化合物は、丸剤、カプセル、カシェ剤または錠剤のような別個の単位として、粉末または顆粒として、あるいは溶液、懸濁液または乳濁液として提供することができる。経口投与に適した配合物としてはさらに、ロゼンジ、香錠、および適切な基剤または液体キャリア中に投与される吸入ミストが挙げられる。皮膚への局所投与用の配合物は、有効薬剤および薬学的に許容可能なキャリアを含む軟膏、クリーム、ジェルおよびペーストとして、あるいは経皮パッチで提供され得る。
【００５８】
キャリアが固体である鼻内投与に適した配合物としては、鼻腔を通っての迅速な吸入により投与され得る特定サイズの粉末が挙げられる。キャリアが液体である適切な配合物は、例えば鼻スプレーまたは点鼻剤として投与され得る。
【００５９】
非経口投与に適した配合物としては、酸化防止剤、緩衝液、静菌剤および配合物を対象レシピエントの血液と等張にさせる溶質を含有することができる水性および非水性滅菌注射溶液、ならびに沈殿防止剤および増粘剤を含み得る水性および非水性滅菌懸濁液が挙げられる。配合物は、単位用量または複数回用量容器、例えば密封アンプルおよびバイアルで提供することができ、また凍結乾燥することができ、これは使用直前に注射用水のような滅菌液体キャリアを添加することのみを要する。注射溶液および懸濁液は、滅菌粉末、顆粒および錠剤から調製することができる。
【００６０】
＜本発明の化合物および組成物の用途＞
各種状態が、身体組織への酸素の送達により制御または媒介される。本発明の化合物および組成物は、クロセチンに関して記載されるのと同じ薬学的用途で同じ有効量で使用することができる。米国特許第４，１７６，１７９号、同第４，０７０，４６０号、同第４，０４６，８８０号、同第４，０３８，１４４号、同第４，００９，２７０号、同第３，９７５，５１９号、同第３，９６５，２６１号、同第３，８５３，９３３号および同第３，７８８，４６８号（それらはそれぞれ、その全体が参照により本明細書に援用される）を参照されたい。
【００６１】
ＴＳＣは、水溶液を通っての酸素の拡散率を約３０％分増加されることがわかっている。したがって、本発明の化合物は、とりわけ、呼吸疾患、出血性ショックおよび心血管疾患、アテローム性動脈硬化症、気腫、喘息、高血圧、脳水腫、乳頭腫、脊髄障害のような低酸素（低酸素症）を特徴とする疾患／状態を治療するのに有用である。他の二極性トランスカロテノイド塩は、類似の特性を有する。かかる化合物はまた、酸素療法およびヘモグロビンまたはフルオロカーボンの使用のような、身体における酸素利用を増加させるために一般に提唱されている他の方法と併用して使用することができる。
【００６２】
本発明の一実施形態では、ＢＴＣＳは、酸素を投与しながら患者に投与される。あるいは、ヘモグロビンまたはフルオロカーボンおよびＢＴＣＳを一緒に与えることができる。これらの場合、相加効果が実現される。
【００６３】
これらの塩のいずれかに関して治療に必要とされる最小投与量は、酸素の拡散率が増加する投与量である。本発明の化合物の有効投与量は、治療される状態、状態の重篤性、対処される各哺乳類患者の病期および個々の特徴に依存する。しかしながら、投与量は、体重１ＫＧ当たり有効化合物約０．００１ＭＧ〜１ＫＧ当たり最大約５００ＭＧ、好適には約０．０１〜３０ＭＧ／ＫＧ（体重）に及ぶ。静脈内投与は好適であるが、筋内的、皮下的または吸入による経路のような他の注射経路もまた使用することができる。経皮送達または骨内送達であり得るように、経口投与もまた使用することができる。
【００６４】
呼吸障害
二極性トランスカロテノイド塩は、呼吸障害を治療するのに使用することができる。これらは、酸素の動脈分圧が減少されている状態（例えば、正常値９０〜１００ＭＭＨＧではなく６０〜７０ＭＭＨＧ値）として記載される。かかる疾患は、気腫、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）または慢性肺疾患（ＣＯＰＤ）である。
【００６５】
ＴＳＣは、酸素の分圧が低い場合（これは、気腫、ＡＲＤＳおよびＣＯＰＤの症状である）、血中の酸素分圧値を増加させる。血中の酸素分圧を増加させることにより、気腫、ＡＲＤＳおよびＣＯＰＤの症状の多くが軽減される。ＴＳＣは疾患の原因を治癒しないが、根本的な原因に起因する酸化性窮迫および損失を軽減する。
【００６６】
出血性ショック
出血性ショックは、酸素消費の減少を特徴とする。二極性トランスカロテノイド塩は、より多くの酸素を赤血球から組織へ拡散させることにより、身体の酸素消費を増加させる。ＴＳＣは、出血性ショックを被ったラットの酸素消費を増加することがわかっており、またショックの他の症状も相殺することがわかっている。本発明の化合物は、低血圧を増加させ、上昇した心拍数を下げ、ショック中に発症する血液アシドーシスを逆転させる。本発明の化合物はまた、出血性ショックに続く臓器損失を減少させる。
【００６７】
本発明の化合物は、吸入により本発明の化合物を投与するか、本発明の化合物を注射するか、または標準蘇生液（リンゲル乳酸塩または生理食塩水）に本発明の化合物を添加することにより、出血性ショックに使用することができる。
【００６８】
心血管疾患
西洋文化では、死亡の主要な原因は、虚血性心疾患である。死は、心臓の収縮する能力が徐々に低下すること、または頻繁には突然停止のいずれかに起因し得る。突然心臓死（ＳＣＤ）は、症状が始まった後の最初の６０秒から２４時間後の期間に及ぶ。これらの死は通常、急性冠動脈閉塞（封鎖）または心室細動（これは閉塞に起因し得る）の結果である。
【００６９】
心筋虚血は、心筋への酸素の供給が不十分である場合に存在する。冠動脈血流が極めて低い場合、心筋は機能することができず、死亡する。筋肉の当該領域は、梗塞を起こしていると言われる。最も多くの場合、冠動脈血流の減少は、冠動脈に見られるアテローム性動脈硬化症により引き起こされる。虚血は、機械的性能および電気的性能の障害ならびに筋肉細胞損傷をもたらし、これにより致死性不整脈、いわゆる心室細動（ＶＦ）が引き起こされ得る。心室細胞では、心臓の心室の電気活性が混沌とし、不規則な拍動および認識不可能なパターンを伴う心電図をもたらす。心室細細動は、心筋虚血および心筋梗塞を伴って頻繁に見られ、突然心臓死のほとんどの原因である。二極性トランスカロテノイド塩は、心筋虚血を治療するのに有益である。アテローム性動脈硬化症は、頻繁に心筋梗塞への前兆であり、これもまたこれらの塩で治療することができる。
【００７０】
虚血
二極性トランスカロテノイド塩はまた、腎臓、肝臓、脊髄および脳虚血（脳卒中を含む）のような他の形態の虚血（組織または臓器への不十分な血流）を治療するのに有益である。
【００７１】
高血圧
高血圧（すなわち、高い血圧）は、多くの場合心血管疾患に関連する。本発明の化合物は、血圧を下げるのに使用することができる。
【００７２】
性能の増強
ＢＴＣＳは有酸素代謝を高め、歩行、ランニング、リフティング等の間に酸素消費レベルを増加させる。持久力も増大される。
【００７３】
外傷性脳損傷
外傷性脳損傷に続く低酸素症は、脳損傷の増大をもたらす結果となる。ＢＴＣＳは、衝突損傷（限局性または広範性損傷）後に脳組織における酸素レベルを増加させる。衝突損傷の例としては、自動車／オートバイの事故および落下が挙げられる。ＢＴＣＳはまた、過剰酸素療法が使用される場合に、正常脳組織に到達する酸素量を増強する。
【００７４】
アルツハイマー病
ＢＴＣＳは、アルツハイマー病において脳酸素消費レベルを増加させ、したがってアルツハイマー病の症状を軽減させる。血流および酸素消費は、痴呆症にかかっていない老人に見られる３０％以下ほどのレベルに下降する(WURTMAN, SCIENTIFIC AMERICAN, VOLUME 252, 1985)。
【００７５】
ＢＴＣＳにより創出される脳における酸素消費レベルの増加はまた、記憶喪失を低減させる。
【００７６】
糖尿病
ＢＴＣＳは、潰瘍、壊疽および糖尿病性網膜症のような糖尿病の合併症を治療するのに有用である。糖尿病性の足の潰瘍は、高圧酸素呼吸治療により、より良好に治癒する(M. KALANI ET AL. JOURNAL OF DIABETES & ITS COMPLICATIONS, VOL 16, NO.2, 153-158, 2002)。
【００７７】
ＢＴＣＳはまた、低酸素圧力に関連する糖尿病性網膜症の合併症に役立つ(DENNINGHOFF ET AL., DIABETES TECHNOLOGY & THERAPEUTICS, VOL. 2, NO.1, 111-113, 2000)。
【００７８】
他の用途
二極性トランスカロテノイド塩はまた、脊髄損傷、脳水腫および皮膚乳頭症の治療に使用することができる。すべての場合において、二極性トランスカロテノイドは、症状を軽減し、より低い重篤性となる。これは、二極性トランスカロテノイド塩の使用に起因する酸素消費における増加に起因すると考えられる。
【００７９】
ＢＴＣＳはまた、酸素由来のフリーラジカルを除去する。
【００８０】
以下の実施例は例示的であり、本発明の組成物および方法を限定するものではない。当業者に明瞭である通常遭遇する各種条件およびパラメータの他の適切な変更および脚色は、本発明の精神および範囲内である。
【実施例１】
【００８１】
トランスナトリウムクロセチネートの合成
【化１０】
【００８２】
トランスナトリウムクロセチネートは、共役炭素−炭素二重結合を含有する対称Ｃ１０ジアルデヒドを［３−カルボメトキシ−２−ブテン−１−イリデン］トリフェニルホスホランとカップリングさせることにより合成される。次に、この生成物は、ＮＡＯＨ／メタノールの溶液を用いて鹸化される。
【００８３】
ブロモ酢酸エチルに、酢酸エチルに溶解した（およそ２モル／リットルの濃度で）トリフェニルホスフィンを徐々に添加する。単離および塩基による処理の後、生成物をヨウ化メチル、続いて苛性アルカリで処理して、ホスホランを形成することができる。カロテノイド骨格を形成するための基本化合物は、この場合ではフランのような環状化合物を出発として作製することができる。フランを臭素およびメタノールと反応させ、続いて選択的脱プロトン化工程によりモノアルデヒドが形成される。続いて、これをホスホランとカップリングさせる。酸性条件下で他のジメチルアセタール基を脱保護して、遊離アルデヒドが得られた。次に、この化合物を再び同じホスホランと反応させて、ジエチルジエステルを得る。エステル基をアルコールに還元して、続く酸化（例えば、ＭＮＯ２を用いて）により、ジアルデヒド形態のＣ１０骨格が生じる。これを後にチグリン酸から作製したホスホランと反応させる。チグリン酸を酸性条件下でメタノールを用いてエステル化して、メチルエステルを得て、続いて臭素化工程を行う。生じたアリル型ブロミド異性体が形成され、結晶化を用いて分離することができる。続いて所望の臭化物を水酸化ナトリウムで処理することにより、所望のホスホランが生じる。次に、このホスホランおよびＣ１０ジアルデヒドを、トルエンまたはベンゼンのような溶媒中に溶解させて、還流させる。生じた生成物を粉末として単離した後、４０％ＮＡＯＨ／メタノール混合物で鹸化して、溶媒を除去した後、ＴＳＣを形成する。
【００８４】
トランスナトリウムクロセチネート１（ＴＳＣ）は、１７工程の合成順序にて全収率１
．５％で調製した。合計４．１ＧのＴＳＣを、出発原料としてブロモ酢酸エチル、フランおよびチグリン酸から調製した。
【化１１】
【００８５】
トランスナトリウムクロセチネート（ＴＳＣ）は、ジメチルクロセチネートの鹸化から合成され、その調製は、BUCHTAおよびANGREE１により報告された全合成に基づいていた。ジメチルクロセチネートの調製の背後にある合成戦略は、対称Ｃ１０ジアルデヒド（２，７−ジメチルオクタ−２，４，６−トリエン−１，８−ジアール）を［３−カルボメトキシ−２−ブテン−１−イリデン］トリフェニルホスホランとカップリングさせることに基づいていた。
【化１２】
【００８６】
元のBUCHTAおよびANGREEの文献１は「トランス−２，２−ビスメチル−クロセチン−ジメチルエステルおよびトランス−クロセチン−ジメチルエステルの全合成(THE TOTAL SYNTHESIS OF TRANS-2,2-BISMETHYL-CROCETIN-DIMETHYL ESTER AND TRANS-CROCETIN-DIMETHYL ESTER)」という表題であったが、実験の詳細および収率は報告されていなかった。Ｃ１０ジアルデヒドおよびホスホランにつながる各種工程に関する手順は、広範囲の文献に続いて見出された。最終的に、ＴＳＣは、出発原料としてブロモ酢酸エチル、フランおよびチグリン酸を用いて、１７工程の合成順序にて全収率１．５％で調製された。
【００８７】
Ｃ１０対称ジアルデヒドは、ウィッティッヒ化学を用いてブロモ酢酸エチル２およびフラン３から調製した。ブロモ酢酸エチルをトリフェニルホスフィンおよびヨウ化メチルで処理して、ホスホラン６を得た：
【化１３】
【００８８】
第一工程の収率は、まずまずの９２％であった。この順序の続く工程の定量は、ホスホラン４およびホスホニウム塩５の性質により複雑であった。これらの化合物はともに、ロータリーエバポレータにより濃縮する間に激しく発泡する極めて粘性のシロップであった。両化合物は、塩化メチル溶液として利便性よく取り扱うことができ、ホスホラン６の総収率は、定量の観点からまずまずのようであった（７５％を上回ると推定される）。
【００８９】
フランを臭素で開環させて、フマルアルデヒドビス（ジメチルアセタール）８３を得た。
【化１４】
【００９０】
酸性条件下でのビス（ジメチルアセタール）８の一脱保護４によりアルデヒド９が得られ、次にこれをホスホラン６とカップリングさせて、４５％の収率で１０を得た。酸性条件下を用いて、ジメチルアセタール１０を脱保護した。１１をホスホラン６で処理することにより、ジエステル１２が得られた。ＤＩＢＡＬ−Ｈによりエステル基をアルコールに還元して、続くＭＮＯ２を用いた酸化によりＣ１０ジアルデヒド１４が得られた。１４のトランス立体化学がＮＭＲにより決定された。特に、化合物のＣ２対称により、１３Ｃ ＮＭＲスペクトルで予想される５つの共鳴が得られ、１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、δ９．５４（１Ｈ）、７．０７（２Ｈ）および１．９５（３Ｈ）でシグナルを示した。
【化１５】
【００９１】
工程Ｈ〜Ｋの収率範囲は、初期のパイロット研究からスケールアップ反応までの単離の改善を反映している。
【００９２】
チグリン酸１５を４工程順序でホスホラン４に変換した。１５におけるフィッシャーエステル化条件によりメチルエステル１６が得られた。ＮＢＳとの反応によりγ−ブロモチグリン酸メチル５９％、α−ブロモチグリン酸メチル２６％の混合物が得られ、物質の残余は未反応の出発原料であった。位置異性体の形成は、報告された文献５に基づいて予想された。続く工程では、ホスホニウム塩のα／γ混合物を再結晶して、所望のγ−ホスホニウムブロミド１９６を得た。続く水酸化ナトリウムでの処理によりホスホラン２０が得られた。
【化１６】
【００９３】
ホスホラン２０およびＣ１０ジアルデヒド１４をベンゼン中で還流しながらカップリングさせた６。ジメチルクロセチネート２１を赤色粉末として単離した。メチルエステルの鹸化は予想よりも困難であることがわかった。室温および還流にてＴＨＦ／Ｈ２Ｏ中でエステル２１を２当量のＮＡＯＨで処理することでは物質は変化しないままであった。溶解度がかなりの問題であるようだったので、ピリジンを添加した。これによりほとんどの固形物が溶解したが、ピリジンおよび２．５Ｎ ＮＡＯＨの混合物を還流させても生成物は生じなかった。標準的なＴＨＦ／２．５Ｎ ＮＡＯＨ鹸化条件もまたエステルに対してなんら影響がなかった。結局、還流にて一晩の４０％ＮＡＯＨ／メタノールが首尾よいことがわかった。これにより橙色固体としてＴＳＣ１が得られた。
【化１７】
【００９４】
１Ｈ ＮＭＲスペクトルを得るために、ＴＳＣを溶解させる試みを行った。しかしながら、ＴＳＣはほとんどの有機溶媒（クロロホルム、ＤＭＳＯ、ピリジン、メタノール、アセトン、および氷酢酸）中に事実上不溶性であった。このプロジェクトから生産されたＴＳＣは、ＩＲ、ＵＶ、ＨＰＬＣおよび元素分析で特性化した。ＩＲは１５４４および１４０２ＣＭ−１に特徴的な吸光度（共役カルボキシレートと一致）を示した。ＵＶおよびＨＰＬＣは、実際のＴＳＣ７と一致した。元素分析では満足のいく値が得られた。
【００９５】
反応順序の総収率は１．５％であった（フランに基づいて）。
【００９６】
以下に合成を詳述する：
試薬および化学物質はすべて、ALDRICHまたはSIGMAから購入し、別記しない限り受け取った状態で使用した。溶媒は、ＡＣＳ試薬またはＨＰＬＣ純度としてFISHER SCIENTIFICKから購入し、さらに精製せずに使用した。無水溶媒は、ＳＵＲＥ／ＳＥＡＬ（登録商標）ボトル中にALDRICHから購入し、さらに精製せずに直接使用した。脱イオン水は施設内のＣＵＬＬＩＧＡＮ水処理システムから得られた。
【００９７】
融点は、ＭＥＬ−ＴＥＭＰ ＩＩにて得られ、補正しなかった。赤外スペクトルは、ＰＥＲＫＩＮ−ＥＬＭＥＲ １６００ ＦＴＩＲ分光光度計で測定した。核磁気スペクトルは、試料の性質に応じて内部または外部重水素ロックにより５ＭＭの多核プローブを用いてＪＥＯＬ ＦＸ９０Ｑ分光光度計で測定した。プロトンおよびカーボンＮＭＲのケミカルシフトは、それぞれＴＭＳまたは重水素化溶媒に対して割り当てられた。リンＮＭＲスペクトルは、外部標準として５％リン酸水の共軸挿入管を用いてプロトン−デカップリングモードで一般的に実施された。
【００９８】
反応の進行を評価するか、または生成物の組成を推定するためのガスクロマトグラフィによるルーチンな分析は、水素炎イオン化検出器および ＨＥＷＬＥＴＴ ＰＡＣＫＡＲＤ ３３９４Ａ積分器を装備したＶＡＲＩＡＮ ３７００ガスクロマトグラフィで実施した。２０℃／分で５０から２５０℃までプログラムを用いて、２５０℃で１０分保持しながら、溶液１マイクロリットルを、ヘリウムキャリアガスを用いた１５メートルのＤＢ５カラム（内径０．５３ＭＭおよび膜厚１．５ミクロン）上へ注入した。インジェクターおよび検出器の温度は通常２５０℃に設定した。
【００９９】
薄層クロマトグラフィは、検出の方法に応じて蛍光指示薬を用いて、または蛍光指示薬を用いずに、ＢＡＫＥＲ−ＦＬＥＸ ２．５×７．５ＣＭのシリカゲルプレート上で実施した。発色させたプレート上の成分をＵＶで検出した。
【０１００】
元素分析は、QUANTITATIVE TECHNOLOGIES, INC., WHITEHOUSE, N.J.で実施した。
【０１０１】
［（エトキシカルボニル）メチレン］トリフェニルホスホラン（４）２（ＡＣＬ−Ｇ２９−１）
トリフェニルホスフィン（２３５．６Ｇ、０．９０ＭＯＬ）をＥＴＯＡＣ（５４０ＭＬ）中に溶解した。固形分すべてが溶解するのにおよそ３０分を要した。当該プロセスは吸熱性であった（外気温が２０℃であった場合、溶液は１３℃まで冷却）。ＥＴＯＡＣ（４００ＭＬ）中のブロモ酢酸エチルの溶液（１００ＭＬ、０．９０ＭＯＬ）を１．５時間かけて滴下した。添加中に白色の沈殿物を形成した。外気温（１８℃）で一晩（２０時間）攪拌した。
【０１０２】
固形分を真空濾過により収集し、多量のＥＴ２Ｏですすいだ。４５℃で一晩、真空乾燥させて、白色固体として３（３５６．３Ｇ、収率９２．６％（０．８３ＭＯＬ））を得た。１Ｈ ＮＭＲは文献値と一致した。
【０１０３】
固形分を塩化メチレン（３Ｌ）中に溶解させて、１２Ｌのフラスコ中で４５分間強攪拌しながら１Ｍ ＮＡＯＨ（３．６Ｌ）で処理した。有機層を分離して、水相をさらなる塩化メチレン（２×１Ｌ）で抽出した。有機層を乾燥させて（ＭＧＳＯ４）、容積およそ１Ｌが残留するまで濃縮した。物質を少量取り出して、１Ｈ ＮＭＲで検査し、文献値と一致することがわかった。
【０１０４】
［１−（エトキシカルボニル）エチリデン］トリフェニルホスホニウムヨージド（５）２（ＡＣＬ−Ｇ２９−２）
反応フラスコを氷浴で冷却しながら、ＡＣＬ−Ｇ２９−１からの物質をヨードメタン（６４．０ＭＬ、１．０３ＭＯＬ）で処理した。添加が完了した時点（１時間）で、反応混合物をＴＬＣ（シリカゲル、１０％ＭＥＯＨ／ＣＨＣＬ３）により検査し、相当量の出発原料が残留していることが示された。氷浴を取り外して、１．５時間後に反応混合物をＴＬＣで検査して、主要バンド（出発原料が筋を引いている）のタイトニングに基づいて完了したと思われた。ロータリーエバポレータで反応混合物を濃縮し、ほとんどの溶媒が除去された場合に生成物は発泡し始め、蒸気ダクトまで上昇した。出現したホスホニウム塩５は極めて粘性のあるシロップであり、これは取り扱いを容易にするために塩化メチレン溶液として保持した。５の性質により、物質を定量化しなかった。
【０１０５】
［１−（エトキシカルボニル）エチリデン］トリフェニルホスホラン（６）２（ＡＣＬ−Ｇ２９−２Ａ）
５の一部をＣＨ２ＣＬ２（３５０ＭＬ）中に溶解し、１Ｍ ＮＡＯＨ（５００ＭＬ）とともに４５分間強攪拌した。有機層を分離して、水相をＣＨ２ＣＬ２（２×１００ＭＬ）で抽出した。併せた有機層を乾燥させて（ＭＧＳＯ４）、濃縮して、黄色固体として６（８．０Ｇ）を得た。１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、文献値と一致した。
【０１０６】
フマルアルデヒドビス（ジメチルアセタール）（８）３（ＡＣＬ−Ｇ２９−３）
無水ＭＥＯＨ（６５０ＭＬ）中のフラン（８８．０Ｇ、１．２９ＭＯＬ）の溶液をＮ２下で−４５℃にまで冷却した。−４５℃以下を維持するような速度で、２．５時間かけて臭素（６８．０ＭＬ、１．３２ＭＯＬ）の溶液を滴下した。赤色溶液を２．５時間かけて−１０℃まで加温して、さらに２時間保持した。反応混合物は淡琥珀色であった。ＮＡ２ＣＯ３の添加により相当量の気体放出および４℃の発熱が生じた。反応混合物をドライアイスで冷却して、残りのＮＡ２ＣＯ３（合計２１０Ｇ）を５０分かけて添加した。−１０℃で一晩（１１時間）保持した後、冷却用浴を取り外して、反応混合物を室温まで加温して、２０時間攪拌した。
【０１０７】
塩を真空濾過により取り出して、およそ１５０ＭＬが除去されるまでＶＩＧＲＥＵＸカラムにより濾液を真空蒸留した。さらなる塩を析出させて、蒸留ポットを激しくぶつからせていた。濾過後、もう１５０ＭＬを蒸留して、さらに塩が溶液から出現した。再び、激しいぶつかり合いが問題であった。蒸留器ポットを冷却して、濾過して、濾液をＥＴ２Ｏ（４００ＭＬ）で処理し、沈殿物を真空濾過により取り出した。少なくとも１２０Ｇの塩が収集された（塩の初期収穫物は定量化せずに廃棄した）。水アスピレータにより２５℃にてロータリーエバポレータでＥＴ２Ｏの大部分を除去した。ＶＩＧＲＥＵＸカラムを用いて蒸留を再開し、透明無色液体として８を収集した（１７５．２Ｇ）（収率７６．９％）（沸点８６〜９２℃／９トル（文献値：８５〜９０℃／１５トル））。１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、所望の生成物に関して一致した。ＧＣ分析：純度８１．９％。
【０１０８】
フマルアルデヒドモノ（ジメチルアセタール）（９）４（ＡＣＬ−Ｇ２９−４）
フマルアルデヒドビス（ジメチルアセタール）８（５．２９Ｇ、０．０３ＭＭＯＬ）をアセトン（１２０ＭＬ）中に溶解した。Ｈ２Ｏ（１．８０ＭＬ）およびアンバーリスト１５（１．２０Ｇ）を順次添加した。混合物を５分間強攪拌した後、濾過して、樹脂を除去した。この間に、溶液は無色から黄色になった。室温にてロータリーエバポレータで濾液を濃縮して、淡茶色残渣をＫＵＧＥＬＲＯＨＲで蒸留して（３７℃／２００ミリトル）、黄色液体として９（２．８０Ｇ、収率７１．８％）として得た。最初に蒸留ポットがぶつかりあった際に物質の少量を損失した。１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、所望の生成物に関して一致した。ＧＣ分析は純度８０％を示した。
【０１０９】
（ＡＣＬ−Ｇ２９−７）
フマルアルデヒドビス（ジメチルアセタール）８（７２．１Ｇ、０．４１ＭＭＯＬ）をアセトン（１６００ＭＬ）中に溶解した。Ｈ２Ｏ（２５．０ＭＬ）およびアンバーリスト１５（１６．７Ｇ、アセトンで予洗）を添加した。混合物を５分間強攪拌した後、濾過して、酸性樹脂を除去した。反応混合物はわずかに黄色味を帯びており、従来の大量スケール調製よりもはるかに薄かった。ＧＣ分析は３４．５％および出発原料４６．１％を示した。もう５分間樹脂で処理した。ＧＣ分析は５９．５％および出発原料２１．７％を示した。もう１０分間樹脂で処理した（合計時間２０分）。ＧＣ分析は７３．９％および出発原料２．０％を示した。室温にてロータリーエバポレータで濾液を濃縮して、茶色オイル５４Ｇを得た。真空蒸留により黄緑色オイル（３４．４８Ｇ）が得られた。ＧＣ分析は、１７．５％（９．００分）および６．９％（９．１４分）の主要不純物を伴って、純度６４．７％（８．２２分）を示した。正味収量２２．３Ｇ（０．１７ＭＯＬ）を回収した。ＧＣによる前部カットの分析は極めて汚れた物質を示した。
【０１１０】
（ＡＣＬ−Ｇ２９−１３）
アンバーリスト１５（８．６１Ｇ）をアセトン（１００ＭＬ）中３０分間攪拌し、濾過により収集した。アセタール８（３５．０Ｇ。０．１６ＭＯＬ）をアセトニトリル（６２０ＭＬ）中に溶解し、機械的に攪拌しながら、酸性樹脂および脱イオンＨ２Ｏ（１０．０ＭＬ、０．５５ＭＯＬ）を添加した。反応の進行はＴＬＣ（１０：３ ヘキサン：ＥＴ２Ｏ）によりモニタリングし、１５分後にはほとんどの出発原料が変換されていた。２０分後、ほんのわずかなジメチルアセタールが検出された。樹脂を濾過により除去して、４０℃以下にてロータリーエバポレータで濾液を濃縮した。粗製生成物をＢＩＯＴＡＧＥカラム（７．５×９．０ＣＭ）上に載せて、ヘキサン中の１５％ＥＴ２Ｏで溶出させて、１９．８Ｇ（収率６５％）を得た。
【０１１１】
６，６−ジメトキシ−２−メチルヘキサ−２，４−ジエノエート（１０）２
（ＡＣＬ−Ｇ２９−５）
イリド６（７．８０Ｇ、２２ＭＯＬ）を塩化メチレン（６５ＭＬ）中に溶解した。フマルアルデヒドモノ（ジメチルアセタール）９（２．８０Ｇ、１７ＭＭＯＬ）溶液を添加して、溶液を一晩攪拌した。ロータリーエバポレータで減圧にて溶媒を除去した。粗製物の１Ｈ ＮＭＲにより、所望の生成物は存在することが示された。静置すると、結晶が成長した（推定ではトリフェニルホスフィンオキシド）。固体（真空濾過による乾燥後の１４．１Ｇ）を石油エーテル中にスラリー状態とし、濾過した。濾液を濃縮して、析出した固体を伴う黄色オイルを得て、これを塩化メチレン（１５ＭＬ）中に溶解して、ＢＩＯＴＡＧＥ４×７．５ＣＭカラム上でクロマトグラフィにかけ、塩化メチレンで溶出させて、黄色オイルとして１０（１８Ｇ、収率５０％）を得た。当該黄色オイルの１Ｈ ＮＭＲは、文献値と一致したが、わずかな塩化メチレンが残留しており（０．７５当量）、そのため物質を４５分間ロータリーエバポレータにかけた。質量は１．５Ｇ（収率４０．６％）に減り、塩化メチレンの共鳴は消失した。ＧＣ分析は１２．６分に主なピークが見られた（８７．５％）（５０℃、５分保持、２０℃／分で最終温度２５０℃まで）。
【０１１２】
（ＡＣＬ−Ｇ２９−６）
塩化メチレン（６５０ＭＬ）中のイリド６（５９．２Ｇ、０．１６ＭＯＬ）溶液を氷浴中で冷却し、９（２５．７Ｇ、０．１９ＭＭＯＬ）溶液を添加した。溶液を一晩攪拌して、氷浴を溶かした。ＴＬＣ（ヘキサン：ＥＴ２Ｏ １０：３）は、生成物に非常に接近して流れる少なくとも３つの他の化合物を示した。アルデヒドの検査は、ＧＣ分析により純度５０％を示した。溶媒を除去して、固体／オイル混合物を得た。
【０１１３】
（ＡＣＬ−Ｇ２９−８）
イリド６（５９．２Ｇ、０．１６ＭＯＬ）およびアセタール９（０．１９ＭＭＯＬ）を塩化メチレン（１．１Ｌ）中でカップリングさせて、上述のようにワークアップして、黄緑色オイル（８０Ｇ）を得た。粗製反応混合物の一部（もとの８０Ｇのうち４．１３Ｇ）をＫＵＧＥＬＲＯＨＲにかけ、５０℃／２５０ミリトルで蒸留した。無色オイル２．２８Ｇが濃縮され、１Ｈ ＮＭＲは、それが出発原料である一方で、生成物１０は蒸留ポット中に残留していた（１．８５Ｇ）ことを示した。５０℃／２５０ミリトルでのＫＵＧＥＬＲＯＨＲ蒸留により、粗製生成物の塊から揮発性成分を除去した（正味３５Ｇ）。
【０１１４】
エチル ２−メチル−６−オキソ−ヘキサ−２，４−ジエノエート（１１）２
（ＡＣＬ−Ｇ２９−９）
パイロット蒸留ポットからのアセタール１０（ＡＣＬ−Ｇ２９−８、１．８５Ｇ、９ＭＭＯＬ）をアセトン（３３ＭＬ）中に溶解した。脱イオンＨ２Ｏ（０．５０ＭＬ）およびアンバーリスト１５樹脂（０．３５Ｇ、アセトンで予洗）を添加した。混合物を２０分間攪拌した。濾過して、ロータリーエバポレータで濃縮して、黄緑色オイル（１．５３Ｇ）を得た。４．５×７ＣＭのＢＩＯＴＡＧＥ上でクロマトグラフィにかけ、ヘキサン中の１５％ＥＴ２Ｏで溶出させた。この系では分離は不完全であったが、主な成分０．３２Ｇを単離して、分析した。１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、文献データと一致し、ＩＲ（１７１１、１６８２ＣＭ−１）は所望の生成物と一致した。ＧＣ９５．６％。さらに０．３５Ｇを回収したが、それはより極性の低いおよび高い物質で汚染されていた。１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、かなり純粋な物質を示した。ＧＣ ９０．６％。収率：４２％。
【０１１５】
ジエチル ２，７−ジメチルオクタ−２，４，６−トリエン−１，８−ジオエート（１２）２
（ＡＣＬ−Ｇ２９−１０）
Ｇ２９−９からのアルデヒド１１（０．６５Ｇ、３．５ＭＭＯＬ）を塩化メチレン中に溶解して、磁気的に攪拌した。イリド（１．５９Ｇ、４．４ＭＭＯＬ）を添加した。淡黄緑色溶液が数分以内により濃い色合いの黄色になった。１０分後のＴＬＣは、出発原料がほぼ完全に消費されたことを示した。２０時間攪拌した後、シリカゲルで部分的に充填したピペットに通して反応混合物（褐色溶液）を濾過した。濾液を濃縮して、褐色オイルを得た。少量のＣＨＣＬ３を伴うヘキサン中の５％ＥＴ２Ｏに固体を溶解させた。４．５×７．５ＣＭのＢＩＯＴＡＧＥ上でクロマトグラフィにかけ、ヘキサン中の１５％ＥＴ２Ｏで溶出させた。主な生成物を白色結晶として単離した（０．４５Ｇ、収率５０％）。１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、文献データと一致した。
【０１１６】
（ＡＣＬ−Ｇ２９−１４）
さらなる量の１２を上述のように調製して、クロマトグラフィ精製後に２１．８Ｇ（８１．６％）を得た。１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、所望の生成物と一致した。
【０１１７】
２，７−ジメチルオクタ−２，４，６−トリエン−１，８−ジオール（１３）２
（ＡＣＬ−Ｇ２９−１１）
ジエステル１２（０．４５Ｇ、１．８ＭＭＯＬ）を無水ヘキサン（１５．０ＭＬ）中に溶解した。物質のいくらかは溶けたようであったが、混合物は完全に濁っていた。混合物を−７８℃浴中で冷却すると、より多くの物質が溶液から出てくるようであった。ニートのＤＩＢＡＬ−Ｈ（２．５０ＭＬ）を無水ヘキサン（総容積１０．０ＭＬ）中に溶解し、ジエステルをドライアイス浴で冷却しながら、その一部（およそ２ＭＬ）を反応混合物へ不注意に吸い上げて移した。合計５．０ＭＬ（６．７ＭＭＯＬ）が添加されるまで、さらなる量のＤＩＢＡＬ−Ｈ溶液を添加した。ＣＯ２浴を加温した。２時間５０分間攪拌した後、ジエステルが完全に消費したことがＴＬＣで示された。浴温度を−２０℃に調節して、２０分かけて０℃に加温した。混合物をＨ２Ｏ／シリカゲル（２ＭＬ／７Ｇ）で３０分間処理した。Ｋ２ＣＯ３およびＭＧＳＯ４を添加した。濾過して固形分を除去して、塩化メチレンで完全にすすいだ。濃縮して、白色固体（０．１４Ｇ、収率５０％）を得た。ＴＬＣ ＲＦ＝０．２１（５％ ＭＥＯＨ／ＣＨＣＬ３）は非常に極性が高い。塩化メチレンですすぐことは、生成物のすべてを回収するのに十分では有り得なかった。１Ｈ ＮＭＲスペクトルは文献値と一致した。
【０１１８】
（ＡＣＬ−Ｇ２９−１５）
ジエステル（５．４Ｇ、２１ＭＭＯＬ）を無水ヘキサン（１７５ＭＬ、乏しい溶解度）中に溶解し、−７８℃に冷却して、３５分間かけてＤＩＢＡＬ−Ｈ（無水ヘキサン５０ＭＬ中１４．５ＭＬ）の溶液で処理した。添加中に激しい気体の発生が観察された。スラリーの色は、初期に白色から濃黄色となり、さらなるＤＩＢＡＬ−Ｈを添加するにつれこれが薄くなっていった。２時間かけて−４０℃に加温した後、−２８℃浴へ一晩移した。反応混合物をＨ２Ｏ／シリカゲル（４ＭＬ／１４．４Ｇ）の均質混合物で３０分間処理した。ＭＧＳＯ４（７．５Ｇ）およびＫ２ＣＯ３（５．１Ｇ）を添加し、反応混合物を冷却用浴から取り出した。２０分攪拌した後、ガラス漏斗に通した。固形分を塩化メチレンで洗浄した。これにより相当量の沈殿物が形成した。ロータリーエバポレータに設置しながら加温して、沈殿固体を溶解させた。ガラス漏斗上に残留した固体をＥＴＯＡＣ（４×７５ＭＬ）で洗浄して、濾液を濃縮した。
【０１１９】
ＣＨ２ＣＬ２ですすぐことにより、淡黄色固体（１．７Ｇ）を得た。１Ｈ ＮＭＲスペクトルは文献値と一致した。ＥＴＯＡＣですすぐことにより、オフホワイト色固体（全回収量２．７Ｇ、収率７５％）を得た。１Ｈ ＮＭＲスペクトルは文献値と一致した。
【０１２０】
（ＡＣＬ−Ｇ２９−１７）
ジエステル（１６．４Ｇ、６．５ＭＭＯＬ）をＮ２下にて無水ヘキサン（５００ＭＬ）中で攪拌し、−７８℃に冷却した。て、１時間かけてヘキサン（１５０ＭＬ）中のＤＩＢＡＬ−Ｈ（４５ＭＬ、２５３ＭＭＯＬ）の溶液を添加した。−３０℃に加温して、一晩（総時間１７．５時間）攪拌した。Ｈ２Ｏ／シリカゲル（１２．３Ｇ／４３．７Ｇ）の均質混合物を添加して、４５分間かけて混合物を手動でぐるぐる回した。Ｋ２ＣＯ３（１５．５Ｇ）およびＭＧＳＯ４（２３．５Ｇ）を添加した。さらに３０分間ぐるぐる回した。ガラス漏斗で濾過して、塩化メチレンですすぎ（沈殿物が形成され、おそらく蒸発冷却により引き起こされる）、濾液を濃縮した。固形分を数回ＥＴＯＡＣ（およそ１００ＭＬずつ、合計容積２Ｌ）ですすいで、もとの濾液とともにプールした。濃縮して、黄色固体（８．９Ｇ、粗製収率８１％）を得た。１Ｈ ＮＭＲスペクトルは所望の生成物と一致した。
【０１２１】
２，７−ジメチルオクタ−２，４，６−トリエン−１，８−ジアール（１４）２
（ＡＣＬ−Ｇ２９−１２）
ＭＮＯ２（７．８０Ｇ、９０ＭＭＯＬ）のスラリーをＮ２下にて氷浴中で冷却した。ジオール１３（０．１４Ｇ、０．８ＭＭＯＬ）をアセトン溶液（５．０ＭＬ）としてピペットで添加した。さらに２．０ＭＬのアセトンを用いて、フラスコをすすぎ、移送を完了させた。反応混合物を攪拌しながら、氷浴を一晩溶かした。ＨＹＦＬＯによる濾過により固形分を除去し、濃縮して、黄色固体を得た。最小量のＣＨＣＬ３を伴う１０％ＥＴ２Ｏ／ヘキサン中に当該物質を溶解して、シリカゲルのカラム（３０×１９０ＭＭ）にかけて、１０％ＥＴ２Ｏ／ヘキサンで溶出させた。生成物は、溶出する際に黄色いバンドとして追跡することができ、１４を淡黄色固体（３７ＭＧ、収率２６％）として単離した。１Ｈ ＮＭＲスペクトルは文献値と一致した。
【０１２２】
（ＡＣＬ−Ｇ２９−１６）
アセトン（５００ＭＬ）中のジオール１３（２．７０Ｇ、１６ＭＭＯＬ）の溶液をＮ２下にて氷浴中で冷却した。ＭＮＯ２（６０．０Ｇ、０．６９ＭＭＯＬ）を２０分間かけて少しずつ添加した。反応混合物を一晩攪拌しながら、氷浴を溶かした。反応混合物をＨＹＦＬＯにより濾過して、濾液を濃縮して、黄色固体（１．６Ｇ、粗製収率６１％）を得た。１Ｈ ＮＭＲスペクトルは文献値と一致した。粗製黄色固体を塩化メチレン（少量のヘキサン中の１０％ＥＴ２Ｏとともに添加）中に溶解して、４×７．５ＣＭのＢＩＯＴＡＧＥシリカゲルカラムに載せた。初期はヘキサン中の１０％エーテル（１Ｌ）で溶出し、続いて１５％ＥＴ２Ｏ（１Ｌ）および２０％ＥＴ２Ｏ（０．５Ｌ）へ極性を上げた。黄色固体（１．０Ｇ、収率３８％）を回収した。１Ｈ ＮＭＲスペクトルは所望の生成物と一致した。
【０１２３】
（ＡＣＬ−Ｇ２９−２１）
アセトン（５００ＭＬ）中のジオール１３（９．３１Ｇ、６０ＭＭＯＬ）の溶液をＮ２下にて氷浴中で冷却した。ＭＮＯ２（１００Ｇ、１．１５ＭＯＬ）を添加して、氷浴を一晩溶かしながら、混合物を攪拌した。２４時間後ＩＲで検査して、相当量の生成物が形成したが、依然としてほんの微量のアルコールが存在していた。さらに酸化剤５０Ｇを添加し、もう一晩攪拌し続けた。反応混合物の一部を濾過して、１Ｈ ＮＭＲで検査し、出発原料の消費に基づいて、反応が完了したようであった。反応混合物の残部をＨＹＦＬＯのパッドに通して濾過して、アセトンで完全にすすいだ。濃縮して、濃黄色固体を得た。ベンゼン４０ＭＬで一度共沸させた後、４０℃で５時間、続いて室温で一晩真空乾燥させた。５．２８Ｇ（収率５８％）を回収した。１Ｈ ＮＭＲおよびＩＲスペクトルは所望の生成物と一致した。
【０１２４】
チグリン酸メチル（１６）
オーバーヘッド攪拌機、冷却器および温度計を取り付けた２Ｌの３つ口フラスコ中に、メタノール９００ＭＬ中のチグリン酸１５（８９．８Ｇ、０．９ＭＯＬ）および５ＭＬの濃硫酸（０．０９ＭＯＬ）の溶液を還流下にて２０時間加熱した。溶液を２５℃にまで冷却し、過剰のメタノールをロータリーエバポレータで３０℃および２７ＩＮ ＨＧの真空で取り除いた。回収したメタノール留出液のＧＣ分析により、オーバーヘッド中に生成物が示された。得られた２相の淡褐色濃縮液をエチルエーテル５００ＭＬ中に溶解して、水２５０ＭＬ、１０％炭酸水素ナトリウム水２５０ＭＬおよび飽和食塩水２５０ＭＬで順次洗浄した。エーテル溶液を無水炭酸カリウムで乾燥させて、濾過して、ロータリーエバポレータで２５℃および２７ＩＮ ＨＧの真空で取り除いて、ほぼ無色オイルとして粗製チグリン酸メチル（４３．６Ｇ）（収率４２％）を得た。ＧＬＣ分析により、出発チグリン酸に関する３．８分と比較して２．７分の保持時間を有する１つの主要な揮発性生成物が示された。ＣＤＣＬ３中のプロトンＮＭＲにより、ほんのいくらかのエチルエーテルの混入を伴った予想シグナルが示された：１．７９ＰＰＭ（Ｄ，３Ｈ）、１．８３（Ｓ，３Ｈ）、３．７３（Ｓ，３Ｈ）、６．８６（Ｑ，６．６ＨＺ）。ＩＲ（ＫＢＲ上でニート）：１７１８ＣＭ−１にエステルのカルボニル。このオイルはそのまま次工程で使用した。
【０１２５】
γ−ブロモチグリン酸メチル（１７）５
オーバーヘッド攪拌機、冷却器および温度計を取り付けた１Ｌの４つ口フラスコ中に、四塩化炭素５００ＭＬ中の粗製チグリン酸メチル（４３．６Ｇ、０．３８ＭＯＬ）、Ｎ−ブロモサクシンイミド（６８Ｇ、０．３８ＭＯＬ）および７０％過酸化ベンゾイル（５．３４Ｇ、０．０１５ＭＯＬ）の攪拌混合物を還流下にて２時間加熱した。２０℃に冷却した後、不溶性のサクシンイミド（３８．１Ｇ、回収率１００％）を吸引濾別した。濾液を水２５０ＭＬで三回洗浄して、ＭＧＳＯ４で乾燥させて、続いて２５℃および２６ＩＮ ＨＧの真空で取り除いて、黄色オイル（７８．８Ｇ）を得た。ＣＤＣＬ３中のこのオイルのプロトンＮＭＲにより複雑なスペクトルが得られた。所望のγ−ブロモエステルに関するメチレンプロトンは、４．０４ＰＰＭを中心とするダブレット（８．６ＨＺ）に割り当てられた一方で、α−ブロモ異性体に関する同じプロトンは４．２４ＰＰＭにあるシングレットとされた。これらのシグナルおよび１．６〜２．０ＰＰＭのメチルマルチプレットのプロトン積分値から以下の組成（モル％）が提唱された：
γ−ブロモエステル： ５９％
α−ブロモエステル： ２６％
出発原料 ： １５％
この粗製オイルはいかなるさらなる精製をせずに次工程で使用した。
【０１２６】
この反応はまた、たったの０．８７当量のＮ−ブロモサクシンイミドを用いて、その他は同一条件下で０．０５モルスケールでも実施した。この粗製オイルの組成は、γ−ブロモエステル５２％、α−ブロモエステル２４％および未反応のチグリン酸メチル２３％としてそのプロトンＮＭＲに基づいて推定された。このオイルのＧＬＣ分析は、ややより複雑であり、他の少量成分を示した。
【０１２７】
γ−ブロモチグリン酸メチルのトリフェニルホスホニウム塩（１９）６
温度計、１００ＭＬの定圧添加漏斗および静止窒素系に接続した冷却器を取り付けた２Ｌの４つ口フラスコ中で、ベンゼン３５０ＭＬ中の粗製γ−ブロモチグリン酸メチル（７８．８Ｇ）の攪拌溶液をベンゼン３５０ＭＬ中のトリフェニルホスフィン（９５Ｇ、０．３６ＭＯＬ）の溶液で１．７５時間かけて処理した。混合物の温度は、２４から２７℃にまでわずかに発熱した（その他は外気条件）。添加後、反応を一晩強攪拌して、フラスコの壁に付着した黄色がかったガム状物質を含有する白色固体のスラリーを得た。黄色がかったガム状物質を乱すことなく白色個体をガラス漏斗へと吸引濾過した。フラスコをベンゼン１００ＭＬで二度洗浄して、フィルターへ注いだ。フィルターケーキをベンゼン５０ＭＬ、続いてヘキサン５０ＭＬで二度洗浄した。湿ったケーキを外気温で真空オーブン中で５．５時間乾燥させた。乾燥した白色粉末［９３Ｇ、ＭＰ＝１２５℃ＤＥＣ］を加熱しながらアセトニトリル１５０ＭＬ中に溶解して、透明な黄色溶液を得た。酢酸エチル（３００ＭＬ）をこの熱溶液に添加して、酢酸エチル約１００ＭＬを添加した後、生成物が結晶化し始めた。フラスコを冷蔵庫に一晩保管した。生成物を吸引濾過して、最小量の１：２のアセトニトリルおよび酢酸エチルで洗浄した：４５．０Ｇ、ＭＰ＝１８７〜１９０℃（ＤＥＣ）。文献ＭＰ＝１８３℃（ＤＥＣ）。
【０１２８】
反応フラスコ中のゴム上の固体を、アセトニトリル１０ＭＬおよび酢酸エチル２０ＭＬから再結晶させた。同様に、ベンゼン母液からさらなる固体を一晩沈殿させた。これらの固体を濾過して、同じ様式で再結晶させた。両方の試料を２時間冷蔵して、吸引濾過して、さらなる生成物（１３．３Ｇ）を得た。
【０１２９】
ベンゼン濾液をロータリーエバポレータで取り除き、黄色オイルをアセトニトリル１０ＭＬ中に溶解し、酢酸エチル２０ＭＬで沈殿させた。スラリーを冷蔵庫に一晩保管して、白色固体としてさらなる生成物（４．６Ｇ）を得た。Ｍ．Ｐ． １８５〜１８７℃（ＤＥＣ）。白色固体としての所望のホスホニウム塩の総収率は、６２．９Ｇ、すなわち粗製チグリン酸メチルに基づいて収率３６．２％であった。プロトンＮＭＲ（ＣＤＣＬ３、ＴＭＳ） ＰＰＭ １．５５（Ｄ，４ＨＺ，３Ｈ）、３．５７（Ｓ，３Ｈ）、４．９（ＤＤ，１５．８＆７．９ＨＺ，２Ｈ）、６．５５（ブロード Ｑ，６．６〜７．９ＨＺ，１Ｈ）、７．４〜７．９（Ｍ，１５Ｈ）。プロトンデカップリングによるリンＮＭＲ（ＣＤＣＬ３、５％Ｈ３ＰＯ４水共軸外標準） ２２．０８ＰＰＭ。部分的カーボンＮＭＲ（ＣＤＣＬ３）：ＣＯ２ＣＨ３（１６６．６ＰＰＭ，Ｄ，ＪＣＰ＝３ＨＺ）、オレフィンＣＨ（１１７．５ＰＰＭ，Ｄ，ＪＣＰ＝８６．１ＨＺ）、ＣＯ２ＣＨ３（５２．０ＰＰＭ）、ＰＨ３Ｐ−ＣＨ２（２５．４ＰＰＭ，Ｄ，ＪＣＰ＝５０．６ＨＺ）およびＣＨ３（１３．４Ｐ
ＰＭ，Ｄ，ＪＣＰ＝２．４ＨＺ）。部分的ＩＲ（ＫＢＲペレット）：１７１１ＣＭ−１にあるエステルカルボニル。
【０１３０】
（３−カルボメトキシ−２−ブテン−１−イリデン）トリフェニルホスホラン（２０）６
オーバーヘッド攪拌機、添加漏斗および温度計を取り付けた５Ｌの５つ口フラスコ中で、水２５０ＭＬ中の水酸化ナトリウム（５．１２Ｇ、０．１２８ＭＯＬ）の溶液を、水２，５００ＭＬ中のγ−ブロモチグリン酸メチルのトリフェニルホスホニウム塩（５８．３Ｇ、０．１２８ＭＯＬ）の強攪拌溶液を２５℃にて４１分間かけて滴下した。黄色スラリーを室温で１０分間攪拌し、続いて吸引濾過した。フィルターケーキを水１，８００ＭＬで洗浄し、続いて窒素ブランケットを取り付けたフィルター上で完全に乾燥させた。次に、黄色固体を室温および２７”ＨＧ真空にてＰ２Ｏ５により真空デシケータ中で一晩乾燥させた。３５．３Ｇ（収率７３．７％）。ＭＰ＝１４５〜１５０℃。文献ＭＰ＝１４５〜１６５℃。プロトンデカップリングによるＣＤＣＬ３中のリンＮＭＲは、１７．１ＰＰＭおよび２１．１ＰＰＭに９３：７の比で２つのピークを示した。プロトンＮＭＲ（ＣＤＣＬ３、ＴＭＳ） ＰＰＭ １．８９（Ｓ，３Ｈ）、３．５８（Ｓ，３Ｈ）、７．３〜７．８（Ｍ，１７Ｈ）。少量であるが検出可能な１．７４ＰＰＭにあるシングレットがこのスペクトルで明らかであり、これは不純物に起因していた。この固体をさらに精製せずに次工程で使用した。
【０１３１】
ジメチルクロセチネート（２１）６
（ＡＣＬ−Ｇ２９−１８）
ジアルデヒド１４（０．４８Ｇ、２．９ＭＭＯＬ）を１００ＭＬの丸底フラスコへ添加した。ベンゼン（２０ＭＬ）を添加して、固体を磁気的攪拌で溶解させた。イリドを添加し、ベンゼンをさらに１０ＭＬ使用して、当該化合物をフラスコへと洗浄した。強還流に６時間加温した。反応混合物を一晩冷却させた。文献の報告と対比して、非常に少量の固体が形成された。反応混合物を濃縮して、残渣をＭＥＯＨ（３０ＭＬ）中に溶解し、３０分間沸騰させた。外気温にまで冷却し、固体を真空濾過により収集した。ＣＤＣＬ３０．５ＭＬに２０ＭＧを溶解させることにより、ＮＭＲ試料を調製し、多少驚くべきことに、これは完全に溶解するのにヒートガンで加温する必要があった。１Ｈ ＮＭＲスペクトルを記録して、所望の生成物と一致することがわかった。残りの物質を熱ベンゼン中に溶解して、濾過して、濾液を濃縮し、ＭＥＯＨ中に溶解して、氷浴中で冷却し、赤色固体を収集した（３３４ＭＧ、収率３３％）。この物質は最初に単離した物質よりも可溶性でないようだった。
【０１３２】
（ＡＣＬ−Ｇ２９−１８Ａ）
ジアルデヒド１４（５．７８Ｇ、３５ＭＭＯＬ）をＮ２下にてベンゼン（３００ＭＬ）に溶解した。イリド２０（３５．３Ｇ、９４ＭＭＯＬ）を添加して、混合物を加温して６時間還流させ、濃赤色溶液を形成した。反応混合物を一晩冷却させた後、真空濾過により赤色固体を収集し、メタノールですすいだ。５００ＭＬのＲＢＦへ移して、メタノールおよそ６５ＭＬを用いて３０分間還流させた。冷却して、赤色固体を収集した。冷メタノールですすいで、真空乾燥させて、赤色固体として２１（３．００Ｇ）を得た。１Ｈ ＮＭＲおよびＩＲスペクトルは、所望の生成物と一致した。
【０１３３】
もともとの濾液（反応混合物からの）をロータリーエバポレータで濃縮し、黒っぽい残渣をメタノール１００ＭＬ中に溶解して、４０分間還流させた。氷浴中で冷却させて、真空濾過により赤色固体を収集した。冷メタノールですすいで、真空乾燥させて、赤色固体として２１（１．３１Ｇ）を得た。１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、所望の生成物と一致した。濾液をプールして、濃縮して、メタノール７５ＭＬ中に溶解して、室温で一晩静置した。赤色固体を真空濾過により回収した：０．３８Ｇ。１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、所望の生成物と一致した。より多くの固体が濾液中で形成された。真空濾過により単離して、赤色固体（０．１２７Ｇ）を得た。ＩＲは上記と一致した。総回収率：４．８９Ｇ、３９％。
【０１３４】
ＴＨＦ／ＮＡＯＨを用いた鹸化の試み
（ＡＣＬ−Ｇ２９−１９）
ＴＨＦ（２ＭＬ）中のジエステル２１（１００ＭＧ、０．２８ＭＭＯＬ）および１Ｎ ＮＡＯＨ（０．５６ＭＬ、２当量）の攪拌懸濁液を添加した。室温で一晩攪拌した。ＴＬＣは出発原料のみを示した。加温して還流させたが、数時間後変化はなかった。より多くの固体を溶解させようとＴＨＦ（６ＭＬ）を添加したが、重要ではなかったようだった。一晩還流し続けた。より多くのＴＨＦを添加し（約６ＭＬ、ＴＬＣは出発原料のみを示した）、もう一晩還流させた。濃縮して、出発原料のみを１Ｈ ＮＭＲにより検査した（メチルおよびメチルエステルの積分値に基づく）。加熱用マントルで加温しながらピリジン（１０ＭＬ）中に溶解させた。２．５Ｎ ＮＡＯＨ（１．０ＭＬ）を添加した。数分後に濃橙色溶液が深紅色になった。加熱用マントルを取り外し、固体が形成し始め、マントルを３０分間再度適用し、続いて室温で一晩攪拌した。高圧下で濃縮した。残渣はクロロホルム、ＤＭＳＯ、ピリジンに不溶性であり、Ｈ２Ｏに難溶性であった。ＩＲ（ヌジョールムル）は、出発原料の特徴であるＣ＝Ｏ吸収を示した。
【０１３５】
２．５Ｎ ＮＡＯＨおよびＴＨＦを用いた鹸化
（ＡＣＬ−Ｇ２９−２０）
ジエステル２１（３７ＭＧ、０．１０ＭＭＯＬ）をフラスコに秤量し、ジエチルエーテル（４ＭＬ）中で攪拌した。溶媒は橙色を帯びたが、固体は依然として存在していた。２．５Ｎ ＮＡＯＨ １ＭＬを添加して、加温して還流させた。３０分後、エーテルのほとんどは蒸発した。これにＴＨＦ（３ＭＬ）を入れ替え、数時間還流を続けた。真空濾過で固体を収集し、脱イオン水ですすいだ後、真空オーブン中で乾燥させた。ＩＲは出発原料のみを示した。
【０１３６】
４０％ＮＡＯＨを用いた鹸化（１）
（ＡＣＬ−Ｇ２９−２２）
ジエステル２１（３２ＭＧ、８．９ＭＭＯＬ）をフラスコ中に秤量して、メタノール（１．５ＭＬ）中で攪拌した。溶媒は橙色／赤色を帯びたが、固体は依然として存在していた。４０％ＮＡＯＨ １．５ＭＬを添加して、加温して１７時間還流させた。室温に冷却した後、真空濾過で橙色固体を収集し、脱イオン水ですすいだ。４０℃にて真空乾燥させて、橙色粉末として１を得た（２１ＭＧ、５９％）。ＩＲ（ＫＢＲペレット） ３４１２、１５４４、１４０２ＣＭ−１。化合物はおそらく吸湿性である。高磁場のカルボニルシフトは共役と一致した。
【０１３７】
（ＡＣＬ−Ｇ２９−２２Ａ）
ジエステル１ ３５ＭＧを用いて繰り返し、１５時間還流させた。反応混合物を氷浴中で冷却し、真空濾過により収集し、冷脱イオン水ですすいだ。４０℃にて真空乾燥させた。橙色固体として１を回収した（２５．５ＭＧ、６５％）。
【０１３８】
（ＡＣＬ−Ｇ２９−２３）
ジエステル２１（０．４８Ｇ、１．３ＭＭＯＬ）をメタノール（１５．０ＭＬ）および４０％水酸化ナトリウム（１５．０ＭＬ）中に溶解し、加温して還流させた。不均一赤色固体が約２時間後に橙色になった。６時間後に加熱をやめて、混合物を一晩冷却させた。橙色固体を真空濾過により収集し、冷脱イオン水で洗浄した。真空乾燥させて、脆い橙色固体を得た（０．３６Ｇ、収率６８％）。
【０１３９】
（ＡＣＬ−Ｇ２９−２４）
ジエステル２１（１．１０Ｇ、３．１ＭＭＯＬ）を１００ＭＬの回収フラスコに入れて、加熱してメタノール（２０ＭＬ）および４０％ＮＡＯＨ（２０ＭＬ）中で１２時間還流させた。氷浴中で冷却させた後、橙色固体を真空濾過により収集し、冷脱イオン水ですすいだ。真空乾燥させて、１．４Ｇ（１００％）を得た。Ｃ２０Ｈ２２Ｏ４ＮＡ２−０．４Ｈ２Ｏに関する分析計算値：Ｃ，６３．２９、Ｈ，６．０５、ＮＡ，１２．１１、Ｈ２Ｏ，１．９０。実測値：Ｃ，６３．４１、Ｈ，６．２６、ＮＡ，１１．７５、Ｈ２Ｏ，１．
９３。
【０１４０】
（ＡＣＬ−Ｇ２９−２５）
ジエステル２１（３．００Ｇ、８．４ＭＭＯＬ）をメタノール（８０ＭＬ）および４０％ＮＡＯＨ（６０ＭＬ）中で１２時間還流させた。上述のように生成物を橙色固体として単離した（２．７Ｇ、８０％）。Ｃ２０Ｈ２２Ｏ４ＮＡ２−０．４Ｈ２Ｏに関する分析計算値：Ｃ，６３．２９、Ｈ，６．０５、ＮＡ，１２．１１、Ｈ２Ｏ，１．９０。実測値：Ｃ，６３．２０、Ｈ，６．００、ＮＡ，１１．９３、Ｈ２Ｏ，１．８１。試料ＡＣＬ−Ｇ２９−２３、−２４および−２５をめのう乳鉢ですり砕いて、ＡＣＬ−Ｇ２９−Ａとして併せた。
【０１４１】
参照文献
１．E.BUCHTA AND F. ANDREE NATURWISS. 1959, 46, 74.
２．F.J.H.M. JANSEN, M.KWESTRO, D. SCHMITT, J. LUGTENBURG RECL. TRAV. CHIM. PA
YS-BAS 1994, 113, 552.
３．R. GREE, H. TOURBAH, R. CARRIE TETRAHEDRON LETTERS 1986, 27, 4983.
４．G.M. COPPOLA SYN. COMMUN. 1984, 1021.
５．D.S. LETHAM AND H. YOUNG PHYTOCHEMISTRY 1971, 10, 2077.
６．E.BUCHTA AND F. ANDREE CHEM. BER. 1960, 93, 1349.
【実施例２】
【０１４２】
トランスカリウムノルビキシネート
【化１８】
【０１４３】
トランスカリウムノルビキネートは、共役炭素−炭素二重結合を含有する対称Ｃ２０ジアルデヒドを［１−（エトキシカルボニル）メチリデン］トリフェニルホスホランとカップリングさせることにより合成される。この化合物の調製は、フラン出発原料を適切な環状構造に置き換えることを除いて、トランスナトリウムクロセチネートに関してすでに列挙した調製と類似する。次に、この生成物をＫＯＨ／メタノール溶液を用いて鹸化する。
【実施例３】
【０１４４】
より長鎖のＢＴＣＳの合成
【化１９】
【０１４５】
上述の化合物は、共役炭素−炭素二重結合を含有する対称Ｃ２０ジアルデヒドを過剰の［３−カルボメトキシ−２−ブテン−１−イリデン］トリフェニルホスホランに添加することにより合成される。この化合物の調製は、フラン出発原料を適切な環状構造に置き換えることを除いて、トランスナトリウムクロセチネートに関してすでに列挙した調製と類似する。次に、トランス４０炭素生成物は、クロマトグラフィーのような方法を用いて単離される。次に、この生成物をＮＡＯＨ／メタノール溶液を用いて鹸化する。
【実施例４】
【０１４６】
吸入によるＴＳＣ
ＴＳＣを吸入経路によりラットに与えた。１０匹のラットには肺へ直接ＴＳＣを与えた。これは、気管にチューブを挿入し、空気約３〜６ＭＬとともにＴＳＣ溶液（希炭酸ナトリウム溶液中に溶解したＴＳＣ）０．２ＭＬを噴霧することにより行われた。研究した投与量すべて（０．５〜２ＭＧ／ＫＧ）に関して、薬剤の約２０％が、薬剤と施した１分後以内に血流に存在していた。８〜１．６ＭＧ／ＫＧの投与量に関して、薬剤は、少なくとも２時間血流に存在していた。
【実施例５】
【０１４７】
改良合成法
２−ブテニル−１，４−ビスホスホン酸テトラエチルの調製
【化２０】
【０１４８】
２５０ＭＬの３つ口フラスコにテフロン（登録商標）被覆熱電対、６０ＭＬ定圧添加漏斗および簡易蒸留ヘッドを装備した。窒素雰囲気下にて、１４０℃にてＪＫＥＭ制御計に接続させた加熱用マントルでニートのトリエチルホスフィン（５９ＭＬ、０．３４４ＭＯＬ）を加熱した。トランス−１，４−ジクロロ−２−ブテン（２６．９Ｇ、０．２１５ＭＯＬ）およびトリエチルホスフィン（３５ＭＬ、０．２０４ＭＯＬ）の溶液を１３４〜１４４℃で９３分間かけて滴下した。次に、透明溶液を窒素下にて１４０℃で維持した。３７分後、酢酸エチル１ＭＬ中の分取量（１滴）のガスクロマトグラフィにより所望の生成物、中間生成物および２つの出発原料が示された。
【０１４９】
１４０℃で１５．５時間後、分取量（ＥＴＯＡＣ ０．５ＭＬ中１滴）のガスクロマトグラフィにより、出発ジクロリドおよび中間体生成物は検出されずに所望の生成物が示された。１６時間後、淡黄色溶液を窒素下にて室温に冷却した。淡黄色オイルを２バルブ受け器およびドライアイス−アセトン浴中で冷却したさらなるバルブを備えたＫＵＧＥＬＲＯＨＲで２５〜１００℃および０．１〜０．２トルで蒸留して、無色オイル（１４．８Ｇ）を前部カットとして得た。ガスクロマトグラフィによりＫＵＧＥＬＲＯＨＲポット中に生成物のみが示された。この淡琥珀色オイルをＫＵＧＥＬＲＯＨＲで１４０℃および０．１〜０．１５トルで蒸留して、無色オイルとして留出物を得た：６６．４５Ｇ（収率９４．１％）。ガスクロマトグラフィによりたった１つの揮発性成分が示された。ＧＣ−ＭＳ分析により、この成分が所望の生成物であることが示され、３２８Ｍ／Ｚに小分子イオンおよび１９１Ｍ／Ｚにベースイオン（ＰＯ３ＥＴ２の損失）が得られた。プロトンＮＭＲは所望の生成物と一致した。カーボンＮＭＲもまた所望のビス（ホスホン酸ジエステル）と一致し、ロングレンジ（Ｗ−カップリング）およびアリル型カーボンへの正常炭素−リンカップリングのみを示した。
【０１５０】
ポット残渣−淡黄色オイル−０．８Ｇ。
【０１５１】
１，１，８，８−テトラメトキシ−２，７−ジメチル−２，４，６−オクタトリエンの調製
【化２１】
【０１５２】
窒素雰囲気下にて、トルエン１０ＭＬおよびシクロヘキサン１０ＭＬ中のトランス−２−ブテニル−１，４−ビスホスホン酸テトラエチル（３．３Ｇ、１０．０ＭＭＯＬ）、ピルビン酸アルデヒドジメチルアセタール（２．６ＭＬ、２１．５ＭＭＯＬ）の磁気的攪拌混合物を無水炭酸カリウム（１０．２Ｇ、７３．８ＭＭＯＬ）および粉末水酸化ナトリウム（１．２５Ｇ、３１．２ＭＭＯＬ）で順次処理した。溶液は瞬時に黄色になった。生じたスラリーを窒素下にて外気温で攪拌した。反応はゆっくりと発熱し、約２５分後に最大３８℃に到達した。また、ガム状沈殿物が形成され、これは磁気的攪拌にマイナスの影響を与えた。２．５時間後、黄橙色溶液の分取量（トルエン０．５ＭＬ中に１滴）のガスクロマトグラフィにより、２つの出発原料および３つの他の新規成分が示された。
【０１５３】
外気温で１６．７５時間後、橙色溶液の分取量（トルエン０．５ＭＬ中に１滴）のガスクロマトグラフィにより、少量の出発ビス（ホスホン酸ジエステル）のみが示された。ガム状物を伴う生じた橙色混合物（攪拌することができない）を氷浴中で冷却し、１０％ＮＡＣＬ水１００ＭＬでクエンチした。スパチュラを連動させることにより固形分をこの水溶液中に溶解した。次に、混合物を１：１のエーテル：ヘキサン２００ＭＬで抽出した。有機層を１０％ＮＡＣＬ水（２０ＭＬ）、続いて飽和食塩水（１００ＭＬ）で洗浄した。無色有機層をＮＡ２ＳＯ４で乾燥させた。ガスクロマトグラフィにより３つの主要な成分が示され、出発ビス（ホスホン酸ジエステル）は検出されなかった。薄相クロマトグラフィにより２つの主要なスポットおよび１つの少量のスポットが示された。ＮＡ２ＳＯ４を吸引濾別して、エーテルで洗浄した。濾液を３５℃にてロータリーエバポレータで濃縮して、無色オイル（１．８Ｇ）を得た。ＧＣ−ＭＳ分析により、３つの主要な揮発成分が異性体生成物であることが示され、２５６Ｍ／Ｚに分子イオンおよび７５Ｍ／Ｚにベースイオン［（ＭＥＯ）２ＣＨ＋］が得られた。プロトンＮＭＲもまた他の未確認不純物を伴った異性体生成物の混合物と一致した。粗製生成物の収率＝７０．３％。
【０１５４】
１，１，８，８−テトラメトキシ−２，７−ジメチル−２，４，６−オクタトリエンの調製
【化２２】
【０１５５】
窒素下にて、トルエン２００ＭＬおよびシクロヘキサン２００ＭＬ中のトランス−２−ブテニル−１，４−ビスホスホン酸テトラエチル（６３．２Ｇ、０．１９ＭＯＬ）、ピルビン酸アルデヒドジメチルアセタール（５０ＭＬ、０．４１ＭＯＬ）の機械的攪拌混合物を無水炭酸カリウム（１９６Ｇ、１．４２ＭＯＬ）および粉末水酸化ナトリウム（２４．０Ｇ、０．６０ＭＯＬ）で順次処理した。溶液は瞬時に黄色になった。生じたスラリーを窒素下にて外気温で攪拌した。反応は約１１分後に６１℃に発熱し、攪拌混合物を氷浴中で冷却して、温度を３５℃に下げた。２９〜３５℃で４．７時間後、分取量（トルエン０．５ＭＬ中に３滴）のガスクロマトグラフィにより、出発ビス（ホスホネート）が存在しないことが示された。５時間後、混合物を氷浴中で１３℃に冷却して、１０％塩化ナトリウム水４００ＭＬを添加し、その際温度は３０℃に上昇した。さらに１０％塩化ナトリウム水（１，５００ＭＬ）を添加し、混合物を１：１のエーテル：ヘキサン３，０００ＭＬで抽出した。薄黄色有機層を１０％塩化ナトリウム水（２×１，０００ＭＬ）、続いて飽和食塩水（１，０００ＭＬ）で洗浄した。薄黄色有機層をＮＡ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過して、３０℃にてロータリーエバポレータで濃縮して、淡黄色オイル（４３．４Ｇ）を得た。ガスクロマトグラフィにより、出発ビス（ホスホネート）は検出されずに混合物の８９％を含む３つの主要な成分が示された。ＴＬＣ分析により１つの主要な成分および３つの少量の成分が示された。
【０１５６】
プロトンＮＭＲにより異性体生成物とトルエンが示された。当該オイルをＫＵＧＥＬＲＯＨＲで５０℃および０．２トルにて３０分間さらに蒸発させた（３１．９Ｇ）。プロトンＮＭＲにより、トルエンは検出されずに異性体ビス（アセタール）生成物が示された。収率＝６５．５％。
【０１５７】
より高いペイロードでの２，７−ジメチル−２，４，６−オクタトリエンジアールの調製
【化２３】
【０１５８】
窒素雰囲気下にて、テトラヒドロフラン（１６０ＭＬ）、水（８０ＭＬ）および氷酢酸（３２０ＭＬ）中の粗製１，１，８，８−テトラメトキシ−２，７−ジメチル−２，４，６−オクタトリエン異性体（３１．９Ｇ、１２４．４ＭＭＯＬ）の磁気的攪拌溶液を、テフロン（登録商標）被覆熱電対によるＪＫＥＭ制御器で制御した加熱用マントルで４５℃にて加熱した。３０分後、混合物は最大５４℃に発熱し、続いて４５℃の設定温度に戻った。３時間後の分取量（ＴＨＦ０．５ＭＬ中に３滴）のガスクロマトグラフィにより、いくらか残留している出発原料、２つの主要な生成物および１つの少量の生成物が示された。黄色反応溶液を氷浴中で２１℃にまで冷却した後、４：１のエーテル：ジクロロメタン（２，０００ＭＬ）で希釈した。次に、この溶液を２０％ＮＡＣＬ水（２，０００ＭＬ×２）、４：１の２０％ＮＡＣＬ水：１Ｍ ＮＡＯＨ水（２，０００ＭＬ×３）１および２０％ＮＡＣＬ水（１，０００ＭＬ×２）で順次洗浄した。黄色有機層をＭＧＳＯ４で乾燥させ、濾過して、ロータリーエバポレータで濃縮して、黄色固体（１８．９Ｇ）を得た。ガスクロマトグラフィにより、１つの主要な成分および１つの少量の成分、出発ビス（アセタール）が示された。ＴＬＣ分析により１つの主要なスポットおよび数個の少量のより極性の高い不純物が示された。この固体を還流メタノール２５０ＭＬ中に溶解し、室温にまで冷却した後、１時間氷浴中で冷却した。スラリーを吸引濾過して、黄色綿様針状物質（１４．１５Ｇ）が得られた。ガスクロマトグラフィにより、異性体ジアルデヒドの９５：５の混合物が示された。この固体を還流メタノール２００ＭＬから再び再結晶させ、室温にまで冷却した後、一晩冷蔵庫で冷却した。
【０１５９】
１ 最初の２回の洗浄は、中性ＰＨにより明白である通り酢酸を除去したようであった。三度目の洗浄は赤くなり、依然として塩基性であり、生成物の除去をほのめかしていた。
【０１６０】
スラリーを吸引濾過して、冷蔵庫冷却したメタノールで洗浄して、黄色針状物質（１１．２Ｇ）を得た。ガスクロマトグラフィにより異性体ジアルデヒドの９７：３の混合物が示された。ＴＬＣ分析により１つのスポットが示された。針状物質を真空オーブン中で４５℃にて１６０分間、一定の重量（１０．７５Ｇ）になるまで乾燥させた。未補正ＭＰ＝１５４〜１５６℃。文献２ＭＰ＝１６１〜１６２℃。プロトンＮＭＲおよびカーボンＮＭＲは所望の対称アルデヒドと一致した。
【０１６１】
再結晶からの２つのメタノール濾液を併せた。薄相クロマトグラムにより生成物と他の不純物が示された。濾液を濃縮して、各種収穫物を以下に示すように収集した。
【表１】
【０１６２】
収穫物２＆３：これらの併せた収穫物を還流酢酸エチル２０ＭＬ中に溶解させ、室温にまで冷却した後、冷蔵庫で１時間置いた。スラリーを吸引濾過して、冷蔵庫冷却した酢酸エチルで洗浄して、黄色針状物質（１．９５Ｇ）を得た。ガスクロマトグラフィにより異性体の８６：１４の混合物が示された。この固体を再び酢酸エチル（１０ＭＬ）中で再結晶して、黄色針状物質（１．５５Ｇ）を得た。ガスクロマトグラフィにより９２：８の比の異性体が示された。酢酸エチル（１０ＭＬ）からの第３の再結晶により黄色針状物質（１．２５Ｇ）を得た。ＭＰ＝１５２〜１５４℃。ガスクロマトグラフィにより９６：４の異性体比が示された。プロトンＮＭＲにより所望のジアルデヒドと確認された。ＧＣ−ＭＳ分析は所望のジアルデヒドと一致し、１６４Ｍ／Ｚに顕著なＭ＋イオンおよび９１Ｍ／Ｚにベースイオンを示した。
【０１６３】
酢酸エチル濾液をメタノール濾液からの黄色固体（収穫物４）と併せて、ロータリーエバポレータで濃縮して、黄色固体（６．０Ｇ）を得た。ガスクロマトグラフィにより、他の不純物とともに２つの異性体の５３：３４の混合物が示された。
【０１６４】
２ DICTIONARY OF ORGANIC COMPOUNDS. VERSON 10:2, SEPT, 2002.
固体をジクロロメタン１００ＭＬ中に溶解して、ＤＡＶＩＳＩＬグレード６４３シリカゲル（３３．５Ｇ）を添加した。混合物を３５℃にてロータリーエバポレータで取り除いた。次に、吸着した物質を伴ったシリカゲルをＢＩＯＴＡＧＥ系用の試料導入モジュールに添加し、そこにはすでにガラスウールのプラグおよび砂の層が含まれていた。次に、シリカゲルにフィルター紙を乗せた。ＢＩＯＴＡＧＥ７５Ｓカラムを遠心圧３５ＰＳＩおよび溶媒圧２０ＰＳＩで予め溶媒混合物で湿らせた。カラムを８５：１５のヘキサン：酢酸エチル（６，０００ＭＬ）で溶出させた。前湿潤段階を含む何も含まれない容積１，０００ＭＬを採取した。２５０ＭＬの分画を収集し、薄相クロマトグラム分析に基づいて併せた。これらの分画を以下に示すようにロータリーエバポレータで３５℃にて濃縮した。
【表２】
【０１６５】
分画５〜１０：黄色固体をヘキサン中でスラリーとし、吸引濾過して、明黄色固体（２．５Ｇ）を得た。ガスクロマトグラフィにより６７：３３の比でジアルデヒド異性体の混合物が示された。
【０１６６】
総収率９６〜９７％。Ｅ，Ｅ，Ｅ−ジアルデヒド＝１０．７５＋１．２５＝１２．０Ｇ（収率５８．８％）。
【０１６７】
パラトルエンスルフィン酸による２，７−ジメチル−２，４，６−オクタトリエンジアールの異性化
【化２４】
【０１６８】
窒素雰囲気下にて、２，７−ジメチル−２，４，６−オクタトリエンジアールの２：１異性体混合物およびそのオフ異性体（２．５Ｇ、１５．２ＭＭＯＬ）、４−トルエンスルフィン酸（０．３５Ｇ、２．２ＭＭＯＬ）および無水１，４−ジオキサン５０ＭＬを還流下で１５分間加熱した。分取量（７滴）を４：１のエーテル：ジクロロメタン０．５ＭＬで希釈して、Ｋ２ＣＯ３で乾燥させた。ガスクロマトグラフィにより、所望の異性体およびオフ異性体の９１：９の混合物が示された。
【０１６９】
室温で一晩冷却した後、生じたスラリーを４：１のエーテル：ジクロロメタン１００ＭＬ中に溶解し、水（５０ＭＬ×３）、０．２Ｍ ＮＡＯＨ水（５０ＭＬ）、水（５０ＭＬ×２）および飽和食塩水（５０ＭＬ×３）で順次洗浄した。層を分離した後、残留ラグ層をジクロロメタンに溶解させた。併せた有機層をＭＧＳＯ４で乾燥させて、濾過して、ロータリーエバポレータで４０℃にて濃縮して、橙色固体（２．２Ｇ）を得た。ガスクロマトグラフィにより所望のジアルデヒド対オフ異性体の９３：７の比が示された。この固体をヘキサン中でスラリーとし、吸引濾過して、橙色固体（２．１５Ｇ）を得た。還流酢酸エチル２０ＭＬから、３０〜４０℃も冷却した後、冷蔵庫に１時間置くことによりこの固体を再結晶した。スラリーを吸引濾過して、冷蔵庫冷却した酢酸エチルで洗浄して、黄橙色針状物質（１．６５Ｇ）を得た。ＭＰ＝１５８〜１６０℃。文献ＭＰ＝１６１〜１６２℃。ガスクロマトグラフィにより所望のジアルデヒド対オフ異性体の９６：４の比が示された、プロトンＮＭＲおよびカーボンＮＭＲは所望のジアルデヒド異性体と一致した。収率＝６６％。
【０１７０】
メタノール中塩化チオニルを用いたチグリン酸メチルのスケールアップ調製
【化２５】
【０１７１】
メタノール３，０００ＭＬ中のチグリン酸（３９７．３５Ｇ、３．９７ＭＯＬ）の機械的攪拌溶液をニートの塩化チオニル（３９７ＭＬ、５．４４ＭＯＬ）で外部冷却せずに１３０分間かけて滴下処理し、その際温度は１４℃から８０分後には最大５０℃にまで上昇した。分取量のガスクロマトグラフィによりエステルへの完全な変換が示され、チグリン酸は検出されなかった。外気温で１時間攪拌した後、銀メッキした真空ジャケット付きＶＩＧＲＥＵＸカラム（４００ＭＭ×２０ＭＭ）を通して大気圧で溶液を蒸留した。ポット温度５８〜６３℃で、主として５７〜６１℃にて濃縮液を収集した（２時間で６３０ＭＬ）。ガスクロマトグラフィにより留出物中にかなりのメチルエステルが示された。
【０１７２】
ＶＩＧＲＥＵＸカラムをより効率の悪いカラム（３０×２ＣＭ Ｗ／刻み目がより小さい）と交換して、蒸留の速度を加速させた。６９〜７１℃のポット温度で、６５〜６９℃のヘッド温度を有する留出物を収集した（２．２５時間かけて１，３００ＭＬ）。
【０１７３】
ガスクロマトグラフィにより留出物中にかなりのメチルエステルが示された。ポット温度が８７℃に到達するまで大気圧蒸留を続け、６９〜８３℃のヘッド温度でこの期間中に留出物を収集した（２時間かけて９７５ＭＬ）。ガスクロマトグラフィにより初期の分画よりも留出物中にかなり多くのメチルエステルが示された。
【０１７４】
ポット中の黄色二相混合物をエーテル（３００＆２００ＭＬ）で抽出し、Ｋ２ＣＯ３で乾燥させ、濾過して、ロータリーエバポレータで２５℃にて濃縮して、橙色オイル（１３２．６Ｇ）（収率２９．３％）を得た。ガスクロマトグラフィにより生成物が示された。プロトンＮＭＲおよびカーボンＮＭＲはわずかなエチルエーテルを伴って所望の生成物と一致した。エーテル濃縮液のガスクロマトグラフィによりオーバーヘッド中にいくらかメチルエステルが示された。
【０１７５】
留出物３：第３のメタノール留出物（９７５ＭＬ）をロータリーエバポレータで２５℃にて濃縮して、二相混合物（１００〜１５０ＭＬ）を得た。この混合物をエーテル（１００＆５０ＭＬ）で抽出し、Ｋ２ＣＯ３で乾燥させた。
【０１７６】
留出物２：第２のメタノール留出物（１，３００ＭＬ）をロータリーエバポレータで２５℃にて濃縮して、二相混合物（３０〜５０ＭＬ）を得た。この混合物をエーテル（２×５０ＭＬ）で抽出し、Ｋ２ＣＯ３で乾燥させた。
【０１７７】
留出物２および留出物３に関する濃縮エーテル抽出物を併せて、吸引濾過して、ロータリーエバポレータで２５℃にて濃縮して、無色オイル（７７．３Ｇ）を得た。
【０１７８】
プロトンＮＭＲおよびカーボンＮＭＲは所望のメチルエステルのこれまでのスペクトルと合致した。
【０１７９】
総収量＝１３２．６＋７７．３＝２０９．９Ｇ（４６．３％）
あるいは、１）チグリン酸メチルは、ALFA, LANCASTERまたはACROS.から市販されており、２）パイロットはJOC, 64, 8051-8053(1999)によりパイロットを実施して、ホスホニウム塩を作製することができる。
【０１８０】
チグリン酸メチルの臭素化
【化２６】
【０１８１】
四塩化炭素２，０００ＭＬ中のチグリン酸メチル（２０９．９Ｇ、１．８４ＭＯＬ）およびＮ−ブロモサクシンイミド（３２７．５Ｇ、１．８４ＭＯＬ）、７０％過酸化ベンゾイル（３．２Ｇ、０．００９ＭＯＬ）の機械的攪拌スラリーを、５Ｌの反応フラスコと還流冷却管との間に１ＬのＫＵＧＥＬＲＯＨＲバルブを用いて加熱して還流させた（７８〜８１℃）。２時間後、還流を停止して、マントルを外して、スターラーを止めた。固形分はすべて、ＣＣＬ４溶液上に浮遊し、ないに等しいＮＢＳを伴うサクシンイミドを示唆した。スラリーを氷浴中で２０℃にまで冷却し、吸引濾過して、オフホワイト色固体（１８０．７Ｇ）を得た。洗浄はしなかった。黄色濾液を水（１Ｌ×３）で洗浄して、ＭＧＳＯ４で乾燥させた。ガスクロマトグラフィにより、他の少量の成分と一緒に出発チグリン酸メチルおよび２つのモノブロミドが１：２：１の比で示された。
【０１８２】
ＭＧＳＯ４を濾別した後、淡黄色濾液をロータリーエバポレータで３５℃にて濃縮して、淡黄色オイル（３２７．１Ｇ）を得た。プロトンＮＭＲおよびガスクロマトグラフィにより以下の組成が示唆された。
【表３】
【０１８３】
５０％アッセイ用に調節した所望の生成物の収率＝４６．０％
このオイルはそのまま次工程で使用する。
【０１８４】
わずかに高いペイロードでのアセトニトリル中のトリフェニルホスフィンを用いたγ−ブロモチグリン酸メチルのスケールアップ反応
【化２７】
【０１８５】
５Ｌの四つ口フラスコ中窒素雰囲気下にて、無水アセトニトリル１，３００ＭＬ中のγ−ブロモチグリン酸メチルの粗製混合物（３２２．６Ｇ、８５％アリル型ブロミド、１．４２ＭＯＬ）を機械的に攪拌した。
【０１８６】
酢酸エチル２，０００ＭＬ中のトリフェニルホスフィン（３８７．０Ｇ、１．４８ＭＯＬ）の溶液を４時間かけて滴下した。添加中、最初の７５分で約４０％を添加した後に温度は２２℃から最大３０℃に上昇した。１２０分かけてトリフェニルホスフィン溶液の６０％を添加した後に、溶液は濁るようになり、残部の添加により固体が沈殿し続けた。添加後、漏斗を酢酸エチル（６００ＭＬ）ですすいで、反応混合物に足した。クリームスラリーは週末の間外気温で攪拌した。
【０１８７】
白色スラリーを吸引濾過して、ケーキを２：１の酢酸エチル：アセトニトリル（１５０ＭＬ×３）で洗浄した。白色固体（３５２．５５Ｇ）を真空オーブン中で４０℃にて４時間乾燥させた（２時間後に一定重量）（３２２．５５Ｇ）。ＭＰ＝１８７〜１８８℃（ＤＥＣ）。文献ＭＰ＝１８３℃（ＤＥＣ）。プロトンＮＭＲおよびカーボンＮＭＲは所望のホスホニウム塩に関する従来のスペクトルと合致した。ＬＣ−ＭＳ分析により１つの主要成分が示され、その陽モードでのエレクトロスプレーマススペクトルは所望のホスホニウム塩と一致し、３７５Ｍ／Ｚに分子イオンを提供した。リンＮＭＲにより２２．０ＰＰＭに単一のリンシグナルが示された。
【０１８８】
出発チグリン酸メチルに基づいた収率＝１００×３２２．５５／（４５５．３２×１．８４×３２２．６／３２７．１）＝３９．０％。
【０１８９】
（３−カルボメトキシ−２−Ｚ−ブテン−１−イリデン）トリフェニルホスホランの調製
【化２８】
【０１９０】
脱イオン水３，４００ＭＬ中の（３−カルボメトキシ−２−Ｅ−ブテン−１−イリデン）トリフェニルホスホニウムブロミド（１５４．８Ｇ、０．３４ＭＯＬ）の機械的に攪拌したわずかなスラリーを、２３℃にて３２分間かけて水５００ＭＬ中の水酸化ナトリウム（１３．６Ｇ、０．３４ＭＯＬ）の溶液で滴下処理し、明白な発熱はなかったが、褐黄色固体の沈殿がすぐに見られた。１５分間攪拌した後、褐黄色スラリーを吸引濾過して、水（１，５００ＭＬ）で洗浄して、吸引乾燥させて、明黄色固体（１５１．７Ｇ）を得た。この固体を真空オーブン中で３５〜４５℃にて（午後３時５０分）一晩乾燥させた。
【０１９１】
真空オーブン中で３５〜４５℃にて２２．５時間乾燥させた後、一定重量が得られた（１０７．８Ｇ）。ＭＰ＝１４４〜１６０℃。文献ＭＰ＝１４５〜１６５℃。プロトンＮＭＲは、ＮＭＲ場強度における差異を考慮して、所望のイリドの従来のスペクトルに類似していた。カーボンＮＭＲにより、５０．２ＰＰＭおよび１１．８ＰＰＭにメチル炭素が示され、それは複雑な芳香族領域を伴い、オレフィン炭素およびイリド炭素に関する明白なシグナルは見られなかった。収率＝８４．７％。
【０１９２】
ジメチルクロセチネートのパイロット調製
【化２９】
【０１９３】
窒素雰囲気下にて、ベンゼン（１２８ＭＬ）中の（３−カルボメトキシ−２−Ｚ−ブテン−１−イリデン）トリフェニルホスホラン（１２．８Ｇ、３４．２ＭＭＯＬ）および２，７−ジメチル−２，４，６−オクタトリエンジアール（２．１Ｇ、１２．８ＭＭＯＬ）の磁気的攪拌混合物を加熱して、タイマーを使用して６時間還流させた。
【０１９４】
生じたスラリーを氷浴中で４０分間冷却して、吸引濾過して、ベンゼンで洗浄して、吸引乾燥させて、凍ったベンゼンを溶かして、赤色固体（２．１Ｇ）を得た。ＴＬＣ分析により単一の黄色いスポットが示された。この固体を真空オーブン中で４０〜４５℃にて７０分間乾燥させた（１．８５Ｇ（収率４０．５％））。未補正ＭＰ＝２１０〜２１３℃。文献３ＭＰ＝２１４〜２１６℃。プロトンＮＭＲは、９０ＭＨＺ計器でのジメチルクロセチンの従来のスペクトルに類似していた。カーボンＮＭＲにより残留ベンゼンである可能性がある１つの少量の不純物シグナルを伴って、所望のジメチルエステルに関する正確なケミカルシフトを有する１１個の特有のカーボンシグナルすべてが示された。エレクトロスプレーマススペクトルによりフラグメントの分解および再結合が示唆された。
【０１９５】
ＴＬＣ分析により、赤色濾液がさらなる生成物であるトリフェニルホスフィンオキシドおよび単離固体よりもわずかに低いＲＦを有する橙色成分を含有することが示された。赤色濾液をロータリーエバポレータで３５℃にて濃縮して、赤色固体（１３．２Ｇ）を得た。この固体をメタノール（２５ＭＬ）中で還流下にて加熱した。次に、生じたスラリーを氷浴中で冷却して、６０分後に吸引濾過して、メタノールで洗浄して、赤色固体（０．６Ｇ）を得た。この固体を真空オーブン中で４５℃にて１３５分間乾燥させた（０．５Ｇ）。ＭＰ＝２０３〜２０８℃。プロトンＮＭＲにより残留不純物を伴って所望のジエステルが示された。カーボンＮＭＲにより所望の生成物に関するシグナルのみが示された。ＴＬＣ分析により筋状の生成物スポットが示された。
【０１９６】
濾液を濃縮して、保管した。
【０１９７】
３ E. BUCHTA & F. ANDREE, CHEM BER, 93, 1349 (1960).
クロセチンのジメチルエステルの第２の調製
【化３０】
【０１９８】
窒素雰囲気下にて、２，７−ジメチル−２，４，６−オクタトリエンジアール（１１．９５Ｇ、１２．８ＭＭＯＬ）を、ベンゼン４００ＭＬ中の（３−カルボメトキシ−２−Ｚ−ブテン−１−イリデン）トリフェニルホスホラン（７３．０Ｇ、１９５．０ＭＭＯＬ）の機械的攪拌スラリーに一度に添加した後、ベンゼン３３０ＭＬを足した。得られた褐色スラリーを加熱してタイマーを使用して６時間還流させ、窒素下にて一晩室温に冷却した。
【０１９９】
生じたスラリーを氷浴中で６〜１０℃に冷却して、吸引濾過して、ベンゼン（５０ＭＬ×２）で洗浄して、赤色固体（１０．０５Ｇ）を得た。ＴＬＣ分析により単一の黄色いスポットが示された。この固体を真空オーブン中で４０℃にて（午後９時）３．５時間乾燥させ、質量損失はなかった（１０．０５Ｇ（収率３８．７％））。ＭＰ＝２１１〜２１４℃。文献ＭＰ＝２１４〜２１６℃。プロトンＮＭＲおよびカーボンＮＭＲは、クロセチンの所望のジメチルエステルに関する従来のスペクトルと合致した。
【０２００】
赤色濾液をロータリーエバポレータで４０℃にて濃縮し、赤色固体（８４．４Ｇ）を得た。ＴＬＣ分析は、パイロット実施に類似していた。この固体を還流下にて磁気的に攪拌しながらメタノール１６５ＭＬ中でスラリー状にした。次に、生じたスラリーを氷浴中で２．５時間冷却して、吸引濾過して、最少量のメタノールで洗浄して、橙色ペースト（１０．５Ｇ）を得た。ＴＬＣ分析により単一の黄色いスポットが得られた。このペーストを真空オーブン中で４５℃にて１９０分間乾燥させた（５．６Ｇ）。ＭＰ＝２０１〜２０８℃。ＮＭＲにより未知の芳香族不純物を伴って所望のジエステルが示された。
【０２０１】
この純粋でない固体および初期の実施からの２つの他の類似の固体（合計６．５Ｇ）を還流クロロホルム（７５ＭＬ）に溶解して、メタノールで希釈して、一晩冷蔵庫中で冷却した。
【０２０２】
スラリーを吸引濾過して、最少量のメタノールで洗浄して、赤色結晶固体（６．１Ｇ）を得た。この固体を真空オーブン中で４５℃にて３時間、一定重量になるまで乾燥した（４．２５Ｇ）。ＭＰ＝２１１〜２１３℃。プロトンＮＭＲおよびカーボンＮＭＲにより他のオレフィン系不純物または芳香族不純物が示された。当該固体を還流トルエン（１５０ＭＬ）中に溶解して、最終的には冷蔵庫中で１３０分間冷却した。スラリーを吸引濾過して、トルエンで洗浄して、赤色固体（２．０５Ｇ）を得た。この固体を真空オーブン中で４５℃にて５０分間乾燥させ、重量変化は見られなかった（２．０５Ｇ）。ＭＰ＝２１４〜２１６℃。プロトンＮＭＲによりいくらかの残留トルエンおよびないに等しいオフ異性体不純物を伴って所望のジメチルクロセチンが示された。カーボンＮＭＲにより所望のジメチルクロセチンが示され、オフ異性体不純物は検出不可能であり、トルエンと一致する２〜３個の新規残留シグナルが存在した。収率＝４５．５％。
【０２０３】
クロセチンの二ナトリウム塩の調製
【化３１】
【０２０４】
ジメチルクロセチン（１３．９５Ｇ、３９．１ＭＭＯＬ）および４０重量％水酸化ナトリウム水（２７３ＭＬ、３．９１５ＭＯＬ）およびメタノール（３９１ＭＬ）の機械的攪拌スラリーを還流下で７４℃にてタイマーを使用して１２時間加熱した。
【０２０５】
フィルター紙を備えたブフナー漏斗およびガラス漏斗に通して橙色スラリーを吸引濾過した。ゆっくり濾過した４。ガラス漏斗中のスラリーをブフナー漏斗中の固体に添加した。橙色ペーストを水（１００ＭＬ×３）、続いてメタノール（５０ＭＬ×３）で洗浄した。橙色ペーストを真空オーブン中で４５〜５０℃にて乾燥させた。
【０２０６】
４ 乾燥しきった後にフィルターが詰まるまでガラス濾過を通してより迅速に濾過した。しかしながら、水洗浄によりフィルターの詰まりが除かれた。
【０２０７】
２１時間後、橙色塊は２４．２５Ｇの重量になった。当該物質をスパチュラで粉砕して、真空オーブン中で４５〜５０℃にて乾燥させた。
【０２０８】
合計６５．５時間の乾燥の後、橙色粉末の量は２３．１Ｇだった。赤外スペクトルによりＴＳＣの報告されているＩＲスペクトルと比較して余分のバンド、特に３４２４および１４４４ＣＭ−１に大きなバンドが示された。プロトンＮＭＲによりメチルエステルの徴候は示されなかった。しかしながら、オレフィン領域およびメチル領域の積分値は、おそらく整相問題に起因して外れていた。
【０２０９】
過剰重量は水酸化ナトリウムに起因すると仮定して、橙色固体を脱イオン水４００ＭＬ中で３５分間磁気的に攪拌した。スラリーを吸引濾過して、ケーキを脱イオン水（５０ＭＬ×２）で洗浄して、橙色ペーストを得た。この物質を真空オーブン中で４５〜５０℃にて一定重量になるまで乾燥させた。約７時間後、当該固体を圧搾して、粉砕して、さらに真空オーブン中で４５℃にて一晩乾燥させた。
【０２１０】
４５℃で２１時間乾燥した後、固体量は１３．２５Ｇだった。さらに粉砕して、真空オーブン中で４５℃にて乾燥させた後、固体量は１３．１５Ｇだった。赤外スペクトルは報告されているＩＲスペクトルと一致した。プロトンＮＭＲは二ナトリウム塩と一致するプロトンＮＭＲスペクトルが得られた。ＨＰＬＣ分析により、おそらく１つの少量の不純物を伴って１つの主要な成分が示された。主要成分のエレクトロスプレー陰イオンマススペクトルはクロセチンの所望の二ナトリウム塩と一致した。カーボンＮＭＲにより、クロセチンの二ナトリウム塩に関する１０個すべての特有のカーボンシグナルが示され、分子の対称性が確証された。
【０２１１】
水、水酸化ナトリウムおよびメタノールのもとの濾液は水洗浄中にさらに固体を沈殿させた。このスラリーを吸引濾過して、水で洗浄して、橙色ペーストを得た。このペーストを真空オーブン中で４５℃にて１８．５時間乾燥させて、橙色固体（０．６５Ｇ）を得た。スペクトルデータは、クロセチンの所望の二ナトリウム塩と一致した。この固体を第１の収穫物と併せた。収率＝１３．１５＋０．６５＝１３．８Ｇ（９４．８％）。
【０２１２】
第１の収穫物の元素分析により、所望の生成物に関する許容できない値が示され、クロセチンの二ナトリウム塩に水酸化ナトリウムが混入していることが示唆された。
【０２１３】
クロセチンの二ナトリウム塩の水洗浄
クロセチンの二ナトリウム塩（１３．６Ｇ）を脱イオン水１５０ＭＬ中でスラリー状にし、室温で１時間磁気的に攪拌した。スラリーをブフナー漏斗上へと吸引濾過した。次に、橙色ペーストを水で洗浄して、橙色濾液のＰＨをモニタリングした。
【０２１４】
橙色のペーストをラバーダムでフィルター上で吸引乾燥した。このペーストを２５〜５５℃にて５．５時間、真空乾燥させて脆い橙色固体（１１．２Ｇ）を得た。この固体を粉砕して、ボトルに移し、真空オーブン中で４５℃にて一晩乾燥させた。
【０２１５】
量＝１１．１Ｇ。回収率＝８１．６％。ＩＲおよびプロトンＮＭＲスペクトルは、クロセチンの所望の二ナトリウム塩の従来のＩＲおよびプロトンＮＭＲスペクトルと合致した。ＨＰＬＣ分析により４２０ＮＭで単一成分が示され、その陰イオンモードでのエレクトロスプレーマススペクトルはクロセチンと一致した。
【０２１６】
カーボンＮＭＲにより、クロセチンの所望の二ナトリウム塩に関する正確なケミカルシフトを有する１０個すべての特有のカーボンシグナルが示された。元素分析により所望の生成物に関する許容可能なデータが得られた。
【０２１７】
参照文献
１．TETRAHEDRON LETTERS, 27, 4983-4986 (1986)。
【０２１８】
２．F.J.H.M. JANSEN, M. KWESTRO, D. SCHMITT & J. LUGTENBURG. RECL. TRAV. CHEM. PAYS-BAS, 113, 552-562 (1994)およびそこで引用された参照文献。
【０２１９】
３．J.H. BABLER、米国特許第４，１０７，０３０号（１９９２年４月２１日）。
【０２２０】
４．T.W. GIBSON & P. STRASSBURGER, J. ORG. CHEM., 41, 791 (1976) & J.M. SNYDER & C.R. SCHOLFIELD, J. AM. OIL CHEM. SOC., 59, 469 (1982)。
【実施例６】
【０２２１】
改良合成方法に従って作製されるＴＳＣの純度測定
実施例５の方法に従って合成したＴＳＣ物質に関して、４２１ＮＭの吸光度対２５４ＮＭの吸光度の比は、ＵＶ−可視分光光度計を用いて１１．１であった。
【実施例７】
【０２２２】
ＴＳＣの経口投与
ＴＳＣは、経口的に（胃管による技法）投与すると血流に吸収されることがラットで示されている。２匹のラットにおいて、与えた投与量の１〜２％が、付与後１５〜３０分時点で血流に存在することがわかった。実際に経口的に吸収された最大量は、その時点よりも初期に起こった。
【０２２３】
開示する本発明を逸脱することなく、本発明の化合物および組成物の両方、ならびに関連方法に対して、数多くの変更および付け足しがなされ得ることが当業者には容易に明らかであろう。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、二極性トランスカロテノイド塩化合物、それらを可溶化させる方法、それらを作製する方法、およびそれらを使用する方法に関する。これらの二極性トランスカロテノイド塩（ＢＴＣＳ）化合物は、ヒトを含む哺乳類において赤血球と身体組織との間での酸素の拡散率を改善させることにおいて有用である。
【０００２】
発明の背景
カロテノイドは、その配列が分子の中心で反転される様式で結合されたイソプレノイド単位から構成される炭化水素の一種である。分子のバックボーン（骨格）は、共役炭素−炭素二重結合および単結合から構成され、ペンダント基もまた有し得る。カロテノイドの骨格は４０個の炭素を含有するとかつては考えられていたが、カロテノイドは４０個未満の炭素原子を含有する炭素骨格も有し得ると長年認識されてきた。炭素−炭素二重結合を取り巻く４つの単結合はすべて、同じ平面に存在する。ペンダント基が炭素−炭素二重結合の同じ側に存在する場合、それらの基はシスと称され、ペンダント基が炭素−炭素二重結合の向かい側に存在する場合、それらはトランスと称される。多数の二重結合のために、カロテノイドの幾何（シス／トランス）異性の広い可能性が存在し、溶液中で異性化が容易に起きる。最近の一連の書籍は、カロテノイドの多くの特性等に関する優れた参照文献である（「CAROTENOIDS」、G.BRITTON、S.LIAAEN-JENSENおよびH. PFANDER, BIRKHAUSER VERLAG, BASEL著、１９９５年、その全体が参照により本明細書に援用される）。
【０００３】
多くのカロテノイドは無極性であり、したがって水中に不溶である。これらの化合物は非常に疎水性であり、そのことが生物学的用途のためのその配合を困難なものにしている。というのは、それらを可溶化させるためには水性溶媒ではなく有機溶媒を使用しなくてはならないためである。他のカロテノイドは単極性であり、界面活性剤の特徴（疎水性部分および親水性極性基）を有する。したがって、これらの化合物は、大部分の液体中に溶解するのではなく、水溶液の表面に引き寄せられる。数種の天然の二極性カロテノイド化合物が存在し、これらの化合物は、中心の疎水性部分ならびに分子の両端に１つずつ２つの極性基を含有する。カロテノイドスルフェートは「最大０．４ＭＧ／ＭＬの水中での有意な溶解性」を有することが報告されている（「CAROTENOIDS」, VOL. 1A, P.283）。二極性と考えられ得る他のカロテノイドもまた水中にはあまり可溶性ではない。これらとしては、ジアルデヒドおよびジケトンが挙げられる。クロセチンのジピリジン塩もまた報告されているが、その水中での溶解性は室温で１ＭＧ／ＭＬ未満である。二極性カロテノイドの他の例はクロセチンおよびクロシン（ともに香辛料のサフラン中に見られる）である。しかしながら、クロセチンは水中にほんのわずかに可溶性である。実際に、二極性カロテノイドすべてのうち、クロシンのみが水中での有意な溶解性を示す。
【０００４】
米国特許第４，１７６，１７９号、同第４，０７０，４６０号、同第４，０４６，８８０号、同第４，０３８，１４４号、同第４，００９，２７０号、同第３，９７５，５１９号、同第３，９６５，２６１号、同第３，８５３，９３３号、および同第３，７８８，４６８号は、クロセチンの各種用途に関する。
【０００５】
米国特許第５，１０７，０３０号は、２，７−ジメチル−２，４，６−オクタトリエンジアールおよびその誘導体を作製する方法に関する。
【０００６】
米国特許第６，０６０，５１１号は、トランスナトリウムクロセチネート（ＴＳＣ）およびその用途に関する。ＴＳＣは、天然に存在するサフランを水酸化ナトリウムと反応させ、続いて抽出することにより作製される。
【０００７】
ROY ET AL., SHOCK 10, 213-7. (1998)では、出血させたラット（５５％の血液容量）に、１０分後にトランスナトリウムクロセチネート（ＴＳＣ）のボーラスを与え、続いてもう３０分後に生理食塩水を与えた。ＴＳＣ処理した動物すべてが生存したが、対照はすべて死亡した。全体内酸素消費がＴＳＣ群では増加し、約１５分後には正常静止値の７５％に達していた。
【０００８】
LAIDIG ET AL, J AM CHEM. SOC. 120, 9394-9395 (1998)は、ＴＳＣの計算モデリングに関する。人工ＴＳＣ分子は、それを水分子で取り囲むことで「水和」されていた。ＴＳＣの近傍での水の疎水性配列により、酸素分子が系を通って拡散するのをより容易となっていた。およそ３０％の拡散における計算上の増加は、ＩＮ ＶＩＴＲＯおよび動物実験の両方で得られた結果と一致していた。
【０００９】
SINGER ET AL., CRIT CARE MED 28, 1968-72 (2000)において、ＴＳＣは、急性低酸素症のラットモデルにおいて血行力学的状態および延長されたラットの生存を改善させた。低酸素症は、低酸素濃度（１０％）の空気混合物を使用して誘発させた。１０分後に、動物に生理食塩水またはＴＳＣのいずれかを付与した。低酸素血症は、血流の減少および塩基欠乏の増加を引き起こした。対照群では６匹の動物のうち２匹のみが生存した。処理群はすべて、二時間以上の間良好な血行力学的安定性で、その後はゆっくりした下り勾配で生存した。
【発明の概要】
【００１０】
本発明は、二極性トランスカロテノイド塩（ＢＴＣＳ）化合物、および下記構造：
ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
（式中、Ｙ＝カチオン、
Ｚ＝上記カチオンと会合される極性基、および
ＴＣＲＯ＝トランスカロテノイド骨格）
を有するかかる化合物の合成に関する。
【００１１】
本発明はまた、個々のＢＴＣＳ化合物組成物（ＴＳＣ組成物を含む）に関し、ここではＵＶ波長範囲で見られるピークの吸光度で除算した可視波長で見られる最高ピークの吸光度が８．５より大きく、好適には９より大きく、最も好適には９．５より大きい。
【００１２】
本発明はまた、各種疾患を治療する方法であって、治療を必要とする哺乳類に治療上有効量の次式：
ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
を有する化合物を投与することを含む方法に関する。
【００１３】
本発明はまた、次式：
ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
を有する化合物を可溶化および合成する幾つかの方法を包含する。
【００１４】
本発明はまた、本発明の化合物を送達するための吸入器に関する。
【００１５】
発明の詳細な説明
新規種類のカロテノイドおよびカロテノイド関連化合物が発見された。これらの化合物を「二極性トランスカロテノイド塩」（ＢＴＣＳ）と称する。
【００１６】
＜本発明の化合物＞
本発明は、疎水性カロテノイドまたはカロテノイド関連骨格により水溶液中に溶解することが可能な化合物種である二極性トランスカロテノイド塩、およびそれらを作製する方法に関する。これらの塩のカチオンは、多数の種であってもよいが、好適にはナトリウムまたはカリウム（これらはたいていの生物学的系に見られる）であり得る。本願と共通人の所有に係る米国特許第６，０６０，５１１号（その全体が参照により本明細書に援用される）は、サフランを出発としてトランスナトリウムクロセチネート、すなわちＴＳＣ（ＢＴＣＳの１種）を作製する抽出方法について記載している。
【００１７】
二極性トランスカロテノイド塩に関する一般構造は、下記：
ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
であり、
式中、
Ｙ（これは、２つの末端で同じであっても異なってもよい）＝カチオン、好ましくは、ＮＡ＋またはＫ＋またはＬＩ＋。Ｙは好適には、一価の金属イオンである。Ｙはまた、有機カチオン、例えば、Ｒ４Ｎ＋、Ｒ３Ｓ＋（式中、ＲはＨ、またはＣＮＨ２Ｎ＋１（ここで、Ｎは１〜１０、好適には１〜６である））であり得る。例えば、Ｒは、メチル、エチル、プロピルまたはブチルであり得る。
【００１８】
Ｚ（これは、２つの末端で同じであっても異なってもよい）＝上記カチオンと会合される極性基。カロテノイド（またはカロテノイド関連化合物）上の末端炭素を任意に包含し、この基はカルボキシル（ＣＯＯ−）基またはＣＯ基であり得る。この基はまたスルフェート基（ＯＳＯ３−）またはモノホスフェート基（ＯＰＯ３−）、（ＯＰ（ＯＨ）Ｏ２−）、ジホスフェート基、トリホスフェートまたはそれらの組合せであってもよい。
【００１９】
ＴＣＲＯ＝線状のトランスカロテノイドまたはカロテノイド関連骨格（好適には１００個未満の炭素）であり、ペンダント基（以下に定義される）を有し、通常「共役」すなわち交互の炭素−炭素二重結合および単結合を含む（一実施形態では、ＴＣＲＯはリコペンで見られるように完全に共役していない）。ペンダント基は通常メチル基であるが、以下に議論するように他の基であってもよい。好適な実施形態では、骨格の単位は、その配列が分子の中心で逆さまであるような様式で結合される。炭素−炭素二重結合を取り巻く４つの単結合はすべて、同じ平面に存在する。ペンダント基が炭素−炭素二重結合の同じ側に存在する場合、それらの基はシスと称され、ペンダント基が炭素−炭素二重結合の向かい側に存在する場合、それらはトランスと称される。本発明の化合物はトランスである。シス異性体は通常不利益であり、拡散率における結果が増加されない。一実施形態では、トランス異性体（ここで、骨格は線状のままである）が利用され得る。
【００２０】
トランスカロテノイドまたはカロテノイド関連骨格の例は、下記：
【化５】
【００２１】
（式中、ペンダント基Ｘ（これは同じであっても異なってもよい）は、水素（Ｈ）原子、あるいは１０個以下、好適には４個以下の炭素を有する線状または分岐状基（任意のハロゲンを含有する）、またはハロゲンである。Ｘの例は、メチル基（ＣＨ３）、エチル基（Ｃ２Ｈ５）、ハロゲン含有アルキル基（Ｃ１〜Ｃ１０）（例えば、ＣＨ２ＣＬ）、またはハロゲン（例えば、ＣＬまたはＢＲ）である。ペンダントＸ基は、同じであっても異なってもよいが、利用されるＸ基は骨格を線状に維持しなければならない。
【００２２】
多くのカロテノイドが天然に存在するが、カロテノイド塩は存在しない。本願と共通人の所有に係る米国特許第６，０６０，５１１号は、トランスナトリウムクロセチネート（ＴＳＣ）に関する。ＴＳＣは、天然に存在するサフランを水酸化ナトリウムと反応させ、続いて主としてトランス異性体に関して選択する抽出を行うことにより作製される。
【００２３】
ＢＴＣＳのシスおよびトランス異性体の存在は、水溶液中に溶解されたカロテノイド試料に関して紫外−可視スペクトルに注目することで決定され得る。スペクトルを考慮すると、２５０〜２５６ＮＭのＵＶ波長範囲で見られるピークの吸光度で除算した、４１６〜４２３ＮＭ（この数字は使用する溶媒に依存する）の可視波長範囲で見られる最高ピークの吸光度の値を用いて、トランス異性体の純度レベルを決定することができる。ＢＴＣＳが水に溶解されている場合、最高可視波長範囲ピークは約４２１ＮＭであり、ＵＶ波長範囲ピークは約２５４ＮＭである。M. CRAW AND C. LAMBERT, PHOTOCHEMISTRY AND PHOTOBIOLOGY, VOL. 38(2), 241-243 (1983)（その全体が参照により本明細書に援用される）によれば、算出の結果（その場合クロセチンが分析された）は３．１であり、これは精製後に６．６まで増加した。
【００２４】
本願と共通人の所有になる米国特許第６，０６０，５１１号のトランスナトリウムクロセチン（天然に存在するサフランを水酸化ナトリウムと反応させ、続いて主としてトランス異性体に関して選択する抽出を行うことにより作製されたＴＳＣ）に関して、CRAWおよびLAMBERTの分析を実施すると、得られた値は通常、およそ７〜７．５である（一度８．４の値が観察された）。本発明の合成ＴＳＣに関して試験を実施すると、その比は通常、８．５より大きく（例えば、８．５〜１０）、好適には９より大きく（例えば、９〜１０）、最も好適には９．５より大きい。実施例５の改良方法により合成されるＴＳＣに関しては、比は通常９．５より大きい（例えば、９．５〜１２）。合成された物質は、「より純粋なもの(PURER)」または高度に精製されたトランス異性体である。
【００２５】
最近、ＴＳＣが室温で１０ＭＧ／ＭＬより大きい水性溶解度を有することが見出されており、これは、このような長い疎水性部分を含有する分子にとっては珍しい。ＴＳＣはまた、液体を通しての酸素の拡散率を増加させることも見出されている。
【００２６】
米国特許第６，０６０，５１１号は、サフランを出発としてＴＳＣを作製する抽出方法について記載しているが、サフランの使用によりたった１つのカロテノイド骨格が塩に組み込まれ得るため、同じ手順を使用して他の二極性カロテノイド塩を作製することはできない。
【００２７】
本明細書中に開示する発明は、全種類の化合物（各種カロテノイドまたはカロテノイド関連骨格を含有する二極性トランスカロテノイド塩）の合成を可能にする。かかる化合物は、水溶液中に可溶性であり、酸素利用の増加を引き起こすといった好適な生物学的用途を有する。この増加は、二極性トランスカロテノイド塩の疎水性部分（骨格）が、隣接する水分子の結合に影響を及ぼす能力の結果であると考えられる。事実上、このことにより酸素分子はこの近傍ではあるが、より遠方へ拡散することが可能である。
【００２８】
＜本発明の化合物および組成物の可溶化＞
本発明は、トランスカロテノイドまたはカロテノイド関連骨格分子の水溶液中の溶解を可能にする。溶解の新規方法は以下に関連する。上記方法は、任意の二極性トランスカロテノイド塩およびその組成物に適用される。
【００２９】
ＢＴＣＳ含有生理食塩水注入溶液
大量（推定血液損失の３倍程度）の等張生理食塩水（生理食塩水とも呼ぶ）は、出血性ショック用の治療として注入される。等張生理食塩水溶液は、身体中に注入されたときに血漿のイオン強度を乱さないように、水１リットル当たり９ＧのＮＡＣＬを含有する。生理食塩水へのＴＳＣの添加は、より優れた注入液体をもたらす結果を示したが、単にＴＳＣ粉末を生理食塩水と混合するだけでは、かかる溶液を作製することはできない。どんなに多くのＴＳＣを添加しても（最大１ＭＬあたり数ミリグラムまで）、ＴＳＣの約５０％が生理食塩水中に溶解するに過ぎず、それは、ＴＳＣの未溶解粒子が依然として存在することを意味する。これを防止するためには、必要とされる２倍以上の量のＴＳＣを添加し、続いて溶解しない粒子を遠心分離で除去することにより、ストック溶液を作製することができる。ストック溶液の実際の組成は、ＵＶ−可視分光法を用いて確証することができる。このストック溶液を生理食塩水に添加することができ、ＴＳＣは溶解したままである。
【００３０】
この方法を用いて、他のタイプの塩化ナトリウム溶液、ならびにＫＣＬ、ＮＡ２ＳＯ４、乳酸塩等のような他の塩の溶液中に溶解させることができる。幾つか（例えば、１〜３ＭＧ／ＭＬ）をこの様式で溶液中に入れることができる。
【００３１】
炭酸ナトリウムの希釈溶液はＢＴＣＳを溶解する
ＴＳＣのようなＢＴＣＳは、超希釈炭酸ナトリウム溶液中に溶解する。炭酸ナトリウムの希釈（例えば、０．００００１〜０．００１Ｍ）溶液を、ＰＨが８．０になるまで脱イオン水に滴下することができる（脱イオン水のＰＨは通常５〜６）。これには、例えば脱イオン水５０ＭＬ当たり数滴の超希釈炭酸ナトリウムを要するに過ぎない。この炭酸ナトリウム−脱イオン水溶液は、大量のＴＳＣ（１０ＭＧ／ＭＬより大きい）を完全に溶解させることが可能であり、それはＢＴＣＳのカロテノイド部分の疎水性を考慮すると珍しい。
【００３２】
ＢＴＣＳは、炭酸ナトリウム水の滅菌ボトルと一緒に粉末として供給され得る。続いて、この濃縮溶液を直接注射することができる（血漿よりも低いイオン強度を有する溶液を非常に少量注射することができる）か、または濃縮溶液を生理食塩水に添加した後、注射することができる。ＴＳＣが炭酸ナトリウム−水溶媒中に溶解され、続いてより多くの同じ溶媒が添加される場合、ＴＳＣは溶液中に留まる。
【００３３】
別の実施形態では、炭酸ナトリウムではなく、炭酸水素ナトリウムが使用される。塩基性ＰＨを有する脱イオン水をもたらす他の塩もまた使用することができる。
【００３４】
カロテノイド骨格濃度５〜１０ＭＧ／ＭＬは、この手順を用いて達成することができる。
【００３５】
水はＢＴＣＳを溶解する
ＴＳＣは水（水道水、蒸留水、脱イオン水）中に溶解するが、これらの溶液は、溶液が塩基性となるようにＰＨが調節された場合のみ安定である。ＴＳＣは、正常水中よりも脱イオン水（非常にわずかなＮＡ＋イオンが存在する）中でより可溶性である。ＴＳＣのようなＢＴＣＳは、ぴったりの脱イオン化水のみに溶解するが、純粋な脱イオン化水を当該溶液に添加する場合、ＴＳＣは析出するであろう。ＢＴＣＳは、ぴったりの脱イオン化水のみに溶解するが、さらなる脱イオン化水は、ＰＨがわずかに塩基性となるように調節されない場合にはＢＴＣＳの沈殿を引き起こし得る。
【００３６】
ＢＴＣＳを可溶化させる他の方法
ＢＴＣＳは、送達を高める送達系中に配合され得る。後述のの本発明の化合物の配合を参照されたい。
【００３７】
＜本発明の化合物の合成＞
二極性トランスカロテノイド塩
二極性トランスカロテノイド塩を合成するのに使用することができる新規合成方法を以下に記載する。当業者に明らかな合成の様々な工程における変形が存在し得る。
【００３８】
Ａ．ＴＳＣ合成
トランスナトリウムクロセチネート（ＴＳＣ）は、共役炭素−炭素二重結合を含有する対称Ｃ１０ジアルデヒド（２，７−ジメチルオクタ−２，４，６−トリエン−１，８−ジアール）を［３−カルボメトキシ−２−ブタエン−１−イリデン］トリフェニルホスホランとカップリングさせることにより合成することができる。これは、クロセチンのトランスジメチルエステルの形成をもたらす。次に、このジメチルエステルを、鹸化により最終ＴＳＣ生成物へ変換する。通常、鹸化は、水酸化ナトリウム水またはＴＨＦ（テトラヒドロフラン）中に溶解させた水酸化ナトリウムのいずれかでエステルを処理することにより達成される。しかしながら、これらの方法は、今回の場合では最良の結果を提供しなかった。今回の場合、鹸化は、ＮＡＯＨ／メタノール溶液でエステルを処理することにより非常に良好に達成することができる。鹸化後、ＴＳＣは真空乾燥することにより回収される。
【００３９】
この合成で使用されるＣ１０ジアルデヒドおよびトリフェニルホスホラン反応物は、種々の経路を介して作製することができる。例えば、Ｃ１０ジアルデヒドは、ウィッテッヒ化学を用いてブロモ酢酸エチルおよびフランを出発して調製された。チグリン酸は、所望のホスホランを作製するための出発物質であった。種々の長さのカロテノイド骨格は、種々の長さの反応物（例えば、Ｃ１４ジアルデヒドおよびトリフェニルホスホラン）を結合させることにより作製することができる。この手順により、種々のトランス二極性カロテノイド塩の形成がもたらされる。種々のペンダント基を得るために、変更もまたなされ得る（ＴＳＣは、ペンダント基に関してはメチル基を有する）。
【００４０】
この様式で作製されるＴＳＣは、室温で１０ＭＧ／ＭＬ未満のレベルで水（ＰＨは、炭酸ナトリウムの超希釈溶液で８．０に調節される）中に可溶性である。他の二極性トランスカロテノイド塩は、中性以上のＰＨを有する水中に室温で可溶性である。本明細書中で使用する場合、「可溶性」は、室温で水１ＭＬ当たり５ＭＧより大きい量が溶解することを意味する（上述の通り、カロテノイドの参照文献は、０．４ＭＧ／ＭＬが「非常に有意な溶解性」であると主張しているが、それは溶解性の本定義未満である）。
【００４１】
Ｂ．一般合成
カロテノイドまたはカロテノイド関連構造は、以下の様式で構築することができる：
【化６】
【００４２】
（３−カルボメトキシ−２−ブテン−１−イリデン）トリフェニルホスホラン（またはＸがメチル基以外の関連化合物）は、イソプレノイド単位（またはイソプレノイド関連単位）を対称カロテノイド（またはカロテノイド関連化合物）の両末端に付加するための重要な前駆体である。このプロセスは無限に繰り返すことができる。例えば、ジメチルトランスクロセチネートは、上述の化学を用いて相当する対称的なジアルデヒドに還元することができる。このジアルデヒドは、過剰な（３−カルボキシメトキシ−２−ブテン−１−イリデン）トリフェニルホスホランと反応させて、相当するジエステルを得ることができる。この合成順序は、何度も何度も繰り返すことができる。
【００４３】
＜改良合成＞
２，７−ジメチル−２，４，６−オクタトリエンジアールは、ＴＳＣの合成への重要な中間体である。この重要な前駆体は３つの二重結合を有しており、したがって幾つかの異性体が可能である。ＴＳＣに関して、オールトランス異性体（Ｅ，Ｅ，Ｅ−異性体）が必要とされる。一般合成経路には、幾つかの工程で比較的低収率かつ乏しい選択性の１１工程の合成が包含される（実施例１を参照）。結果として、途中で幾つかの中間体を精製するのにカラムクロマトグラフィが必要とされる。
【００４４】
改良合成経路はかなり簡素である（以下の反応スキームを参照）。米国特許第５，１０７，０３０（その全体が参照により本明細書に援用される）に記載されるような３工程プロセスは、ジアルデヒドの幾何異性体の混合物を生じる（米国特許第５，１０７，０３０号はこの混合物に言及していない）。実施例１に記載する本発明の方法では、メタノールまたは酢酸エチルから数回の再結晶により、９６〜９７％の所望の異性体（オールトランス、すなわちＥ，Ｅ，Ｅ−異性体）が５９％の収率で得られる。
【００４５】
本発明の改良合成方法は、１，４−ジオキサン、テトラヒドロフランまたはジアルキルエーテル（ここで、アルキル基は、Ｃ１〜Ｃ１０の直鎖または分岐アルキル基のうちの１つまたは２つである）のような適切な溶媒中での、スルフィン酸ＲＳＯ２Ｈ（式中、Ｒは、Ｃ１〜Ｃ１０の直鎖もしくは分岐アルキル基またはアリール基（置換フェニル基）（例えば、パラトルエンスルフィン酸）である）による異性化により、残存するジアルデヒドの異性体混合物を所望のトランスアルデヒド（Ｅ，Ｅ，Ｅ）に変換することを包含する。純粋な所望のジアルデヒドのさらに８％の収率が得られ、最終工程の全収率を５９％から６７％の収率に上げる。この収率改良は重要である。この異性化工程は、米国特許第５，１０７，０３０号の第三工程に組み込んで、良好な収率を獲得することができる。
【００４６】
改良合成経路：
【化７】
【００４７】
２つの望ましくない異性体：
【化８】
【００４８】
望ましいジルデヒドへの望ましくないジアルデヒドの異性化：
【化９】
【００４９】
鹸化は、メタノール中にジエステルを溶解させた後、ＮＡＯＨのような塩基を添加することにより達成される（その結果、ＢＴＣＳのＹはＮＡ＋である）。あるいは、ジエステルを、すでに塩基を含有するメタノール中に溶解させることができる。ＮＡＯＨは通常、水溶液（２０〜６０重量％）であるが、固体であってもよい。ジエステルを溶解させるためのメタノールに対する代替物は、エタノール、プロパノールおよびイソプロパノールである。鹸化は、商業的に様々な方法で実施することができる。一相系または二相系（一方が有機相で一方が水相）を使用することができる。
【００５０】
トランスクロセチンはまた、上述の方法に従って合成することができる。
【００５１】
さらに、ＴＳＣに関して報告されているように、カロテノイド骨格の水との疎水性相互作用が拡散率の増加をもたらすため、かかるＢＴＣＳ化合物は、水を通しての酸素の拡散率を増加させる（これもまた、炭素鎖長のような最終生成物に組み込まれる疎水性部分の性質に依存する）。
【００５２】
＜本発明の化合物の配合物＞
二極性トランスカロテノイド塩の濃縮溶液は、上述のように、炭酸ナトリウムの超希釈溶液中に二極性トランスカロテノイド塩を溶解させることにより作製することができる。次に、得られた混合物をその様式で使用することができるか、または生理食塩水または他の水性溶媒でさらに希釈することができる。さらに、二極性トランスカロテノイド塩の溶液は、塩溶液中に二極性トランスカロテノイド塩を直接溶解させた後、溶解しない任意の物質を取り除くことにより作製することができる。
【００５３】
二極性トランスカロテノイド塩は、室温では乾燥形態で安定であり、長期間保管することができる。好適には、経口の場合、かかる塩の配合物は、胃ではなく腸で吸収される。
【００５４】
本発明の化合物は単独で投与することができるが、本発明の化合物は、薬学的配合物の一部として投与することができる。かかる配合物は、当業者に既知の薬学的に許容可能なキャリア、ならびに他の治療剤（以下を参照）を含み得る。好適には、配合物は、本発明の化合物の酸素の拡散率を改善させる能力を阻害する化合物を含まない。
【００５５】
本発明の化合物および組成物の適切な投与量は、治療される状態の重篤性に依存する。「治療上有効」であるべき用量に関して、その用量は、所望の効果を有さなくてはならず、すなわち酸素の拡散率を増加させなくてはならない。その結果、これにより酸素関連パラメータが正常値へと回復される。
【００５６】
投与は、経口、鼻、局所、非経口（皮下、筋内、静脈内、皮内および骨内を含む）、膣または直腸を含む任意の適切な経口投与によってもよい。投与の好ましい経路は、状況に応じる。ＢＴＣＳが非常に迅速に血流に進入することが必要である場合、吸入経路は緊急状況での治療に好適である。したがって、配合物としては、かかり経路による投与に適したもの（噴霧されるべき液体または粉末）が挙げられる。好ましい経路は、例えば患者の状態および年齢により様々であり得ることが理解されよう。配合物は、単位投薬形態、例えば錠剤および徐放性カプセルで利便性よく提供することができ、また薬剤学の技術分野で既知の方法により調製および投与することができる。配合物は、ＢＴＣＳの即時放出、あるいは徐放すなわち制御放出用であり得る。例えば、ＷＯ９９／１５１５０（その全体が参照により本明細書に援用される）の制御放出配合物を参照されたい。
【００５７】
経口投与に適した本発明の化合物は、丸剤、カプセル、カシェ剤または錠剤のような別個の単位として、粉末または顆粒として、あるいは溶液、懸濁液または乳濁液として提供することができる。経口投与に適した配合物としてはさらに、ロゼンジ、香錠、および適切な基剤または液体キャリア中に投与される吸入ミストが挙げられる。皮膚への局所投与用の配合物は、有効薬剤および薬学的に許容可能なキャリアを含む軟膏、クリーム、ジェルおよびペーストとして、あるいは経皮パッチで提供され得る。
【００５８】
キャリアが固体である鼻内投与に適した配合物としては、鼻腔を通っての迅速な吸入により投与され得る特定サイズの粉末が挙げられる。キャリアが液体である適切な配合物は、例えば鼻スプレーまたは点鼻剤として投与され得る。
【００５９】
非経口投与に適した配合物としては、酸化防止剤、緩衝液、静菌剤および配合物を対象レシピエントの血液と等張にさせる溶質を含有することができる水性および非水性滅菌注射溶液、ならびに沈殿防止剤および増粘剤を含み得る水性および非水性滅菌懸濁液が挙げられる。配合物は、単位用量または複数回用量容器、例えば密封アンプルおよびバイアルで提供することができ、また凍結乾燥することができ、これは使用直前に注射用水のような滅菌液体キャリアを添加することのみを要する。注射溶液および懸濁液は、滅菌粉末、顆粒および錠剤から調製することができる。
【００６０】
＜本発明の化合物および組成物の用途＞
各種状態が、身体組織への酸素の送達により制御または媒介される。本発明の化合物および組成物は、クロセチンに関して記載されるのと同じ薬学的用途で同じ有効量で使用することができる。米国特許第４，１７６，１７９号、同第４，０７０，４６０号、同第４，０４６，８８０号、同第４，０３８，１４４号、同第４，００９，２７０号、同第３，９７５，５１９号、同第３，９６５，２６１号、同第３，８５３，９３３号および同第３，７８８，４６８号（それらはそれぞれ、その全体が参照により本明細書に援用される）を参照されたい。
【００６１】
ＴＳＣは、水溶液を通っての酸素の拡散率を約３０％分増加されることがわかっている。したがって、本発明の化合物は、とりわけ、呼吸疾患、出血性ショックおよび心血管疾患、アテローム性動脈硬化症、気腫、喘息、高血圧、脳水腫、乳頭腫、脊髄障害のような低酸素（低酸素症）を特徴とする疾患／状態を治療するのに有用である。他の二極性トランスカロテノイド塩は、類似の特性を有する。かかる化合物はまた、酸素療法およびヘモグロビンまたはフルオロカーボンの使用のような、身体における酸素利用を増加させるために一般に提唱されている他の方法と併用して使用することができる。
【００６２】
本発明の一実施形態では、ＢＴＣＳは、酸素を投与しながら患者に投与される。あるいは、ヘモグロビンまたはフルオロカーボンおよびＢＴＣＳを一緒に与えることができる。これらの場合、相加効果が実現される。
【００６３】
これらの塩のいずれかに関して治療に必要とされる最小投与量は、酸素の拡散率が増加する投与量である。本発明の化合物の有効投与量は、治療される状態、状態の重篤性、対処される各哺乳類患者の病期および個々の特徴に依存する。しかしながら、投与量は、体重１ＫＧ当たり有効化合物約０．００１ＭＧ〜１ＫＧ当たり最大約５００ＭＧ、好適には約０．０１〜３０ＭＧ／ＫＧ（体重）に及ぶ。静脈内投与は好適であるが、筋内的、皮下的または吸入による経路のような他の注射経路もまた使用することができる。経皮送達または骨内送達であり得るように、経口投与もまた使用することができる。
【００６４】
呼吸障害
二極性トランスカロテノイド塩は、呼吸障害を治療するのに使用することができる。これらは、酸素の動脈分圧が減少されている状態（例えば、正常値９０〜１００ＭＭＨＧではなく６０〜７０ＭＭＨＧ値）として記載される。かかる疾患は、気腫、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）または慢性肺疾患（ＣＯＰＤ）である。
【００６５】
ＴＳＣは、酸素の分圧が低い場合（これは、気腫、ＡＲＤＳおよびＣＯＰＤの症状である）、血中の酸素分圧値を増加させる。血中の酸素分圧を増加させることにより、気腫、ＡＲＤＳおよびＣＯＰＤの症状の多くが軽減される。ＴＳＣは疾患の原因を治癒しないが、根本的な原因に起因する酸化性窮迫および損失を軽減する。
【００６６】
出血性ショック
出血性ショックは、酸素消費の減少を特徴とする。二極性トランスカロテノイド塩は、より多くの酸素を赤血球から組織へ拡散させることにより、身体の酸素消費を増加させる。ＴＳＣは、出血性ショックを被ったラットの酸素消費を増加することがわかっており、またショックの他の症状も相殺することがわかっている。本発明の化合物は、低血圧を増加させ、上昇した心拍数を下げ、ショック中に発症する血液アシドーシスを逆転させる。本発明の化合物はまた、出血性ショックに続く臓器損失を減少させる。
【００６７】
本発明の化合物は、吸入により本発明の化合物を投与するか、本発明の化合物を注射するか、または標準蘇生液（リンゲル乳酸塩または生理食塩水）に本発明の化合物を添加することにより、出血性ショックに使用することができる。
【００６８】
心血管疾患
西洋文化では、死亡の主要な原因は、虚血性心疾患である。死は、心臓の収縮する能力が徐々に低下すること、または頻繁には突然停止のいずれかに起因し得る。突然心臓死（ＳＣＤ）は、症状が始まった後の最初の６０秒から２４時間後の期間に及ぶ。これらの死は通常、急性冠動脈閉塞（封鎖）または心室細動（これは閉塞に起因し得る）の結果である。
【００６９】
心筋虚血は、心筋への酸素の供給が不十分である場合に存在する。冠動脈血流が極めて低い場合、心筋は機能することができず、死亡する。筋肉の当該領域は、梗塞を起こしていると言われる。最も多くの場合、冠動脈血流の減少は、冠動脈に見られるアテローム性動脈硬化症により引き起こされる。虚血は、機械的性能および電気的性能の障害ならびに筋肉細胞損傷をもたらし、これにより致死性不整脈、いわゆる心室細動（ＶＦ）が引き起こされ得る。心室細胞では、心臓の心室の電気活性が混沌とし、不規則な拍動および認識不可能なパターンを伴う心電図をもたらす。心室細細動は、心筋虚血および心筋梗塞を伴って頻繁に見られ、突然心臓死のほとんどの原因である。二極性トランスカロテノイド塩は、心筋虚血を治療するのに有益である。アテローム性動脈硬化症は、頻繁に心筋梗塞への前兆であり、これもまたこれらの塩で治療することができる。
【００７０】
虚血
二極性トランスカロテノイド塩はまた、腎臓、肝臓、脊髄および脳虚血（脳卒中を含む）のような他の形態の虚血（組織または臓器への不十分な血流）を治療するのに有益である。
【００７１】
高血圧
高血圧（すなわち、高い血圧）は、多くの場合心血管疾患に関連する。本発明の化合物は、血圧を下げるのに使用することができる。
【００７２】
性能の増強
ＢＴＣＳは有酸素代謝を高め、歩行、ランニング、リフティング等の間に酸素消費レベルを増加させる。持久力も増大される。
【００７３】
外傷性脳損傷
外傷性脳損傷に続く低酸素症は、脳損傷の増大をもたらす結果となる。ＢＴＣＳは、衝突損傷（限局性または広範性損傷）後に脳組織における酸素レベルを増加させる。衝突損傷の例としては、自動車／オートバイの事故および落下が挙げられる。ＢＴＣＳはまた、過剰酸素療法が使用される場合に、正常脳組織に到達する酸素量を増強する。
【００７４】
アルツハイマー病
ＢＴＣＳは、アルツハイマー病において脳酸素消費レベルを増加させ、したがってアルツハイマー病の症状を軽減させる。血流および酸素消費は、痴呆症にかかっていない老人に見られる３０％以下ほどのレベルに下降する(WURTMAN, SCIENTIFIC AMERICAN, VOLUME 252, 1985)。
【００７５】
ＢＴＣＳにより創出される脳における酸素消費レベルの増加はまた、記憶喪失を低減させる。
【００７６】
糖尿病
ＢＴＣＳは、潰瘍、壊疽および糖尿病性網膜症のような糖尿病の合併症を治療するのに有用である。糖尿病性の足の潰瘍は、高圧酸素呼吸治療により、より良好に治癒する(M. KALANI ET AL. JOURNAL OF DIABETES & ITS COMPLICATIONS, VOL 16, NO.2, 153-158, 2002)。
【００７７】
ＢＴＣＳはまた、低酸素圧力に関連する糖尿病性網膜症の合併症に役立つ(DENNINGHOFF ET AL., DIABETES TECHNOLOGY & THERAPEUTICS, VOL. 2, NO.1, 111-113, 2000)。
【００７８】
他の用途
二極性トランスカロテノイド塩はまた、脊髄損傷、脳水腫および皮膚乳頭症の治療に使用することができる。すべての場合において、二極性トランスカロテノイドは、症状を軽減し、より低い重篤性となる。これは、二極性トランスカロテノイド塩の使用に起因する酸素消費における増加に起因すると考えられる。
【００７９】
ＢＴＣＳはまた、酸素由来のフリーラジカルを除去する。
【００８０】
以下の実施例は例示的であり、本発明の組成物および方法を限定するものではない。当業者に明瞭である通常遭遇する各種条件およびパラメータの他の適切な変更および脚色は、本発明の精神および範囲内である。
【実施例１】
【００８１】
トランスナトリウムクロセチネートの合成
【化１０】
【００８２】
トランスナトリウムクロセチネートは、共役炭素−炭素二重結合を含有する対称Ｃ１０ジアルデヒドを［３−カルボメトキシ−２−ブテン−１−イリデン］トリフェニルホスホランとカップリングさせることにより合成される。次に、この生成物は、ＮＡＯＨ／メタノールの溶液を用いて鹸化される。
【００８３】
ブロモ酢酸エチルに、酢酸エチルに溶解した（およそ２モル／リットルの濃度で）トリフェニルホスフィンを徐々に添加する。単離および塩基による処理の後、生成物をヨウ化メチル、続いて苛性アルカリで処理して、ホスホランを形成することができる。カロテノイド骨格を形成するための基本化合物は、この場合ではフランのような環状化合物を出発として作製することができる。フランを臭素およびメタノールと反応させ、続いて選択的脱プロトン化工程によりモノアルデヒドが形成される。続いて、これをホスホランとカップリングさせる。酸性条件下で他のジメチルアセタール基を脱保護して、遊離アルデヒドが得られた。次に、この化合物を再び同じホスホランと反応させて、ジエチルジエステルを得る。エステル基をアルコールに還元して、続く酸化（例えば、ＭＮＯ２を用いて）により、ジアルデヒド形態のＣ１０骨格が生じる。これを後にチグリン酸から作製したホスホランと反応させる。チグリン酸を酸性条件下でメタノールを用いてエステル化して、メチルエステルを得て、続いて臭素化工程を行う。生じたアリル型ブロミド異性体が形成され、結晶化を用いて分離することができる。続いて所望の臭化物を水酸化ナトリウムで処理することにより、所望のホスホランが生じる。次に、このホスホランおよびＣ１０ジアルデヒドを、トルエンまたはベンゼンのような溶媒中に溶解させて、還流させる。生じた生成物を粉末として単離した後、４０％ＮＡＯＨ／メタノール混合物で鹸化して、溶媒を除去した後、ＴＳＣを形成する。
【００８４】
トランスナトリウムクロセチネート１（ＴＳＣ）は、１７工程の合成順序にて全収率１
．５％で調製した。合計４．１ＧのＴＳＣを、出発原料としてブロモ酢酸エチル、フランおよびチグリン酸から調製した。
【化１１】
【００８５】
トランスナトリウムクロセチネート（ＴＳＣ）は、ジメチルクロセチネートの鹸化から合成され、その調製は、BUCHTAおよびANGREE１により報告された全合成に基づいていた。ジメチルクロセチネートの調製の背後にある合成戦略は、対称Ｃ１０ジアルデヒド（２，７−ジメチルオクタ−２，４，６−トリエン−１，８−ジアール）を［３−カルボメトキシ−２−ブテン−１−イリデン］トリフェニルホスホランとカップリングさせることに基づいていた。
【化１２】
【００８６】
元のBUCHTAおよびANGREEの文献１は「トランス−２，２−ビスメチル−クロセチン−ジメチルエステルおよびトランス−クロセチン−ジメチルエステルの全合成(THE TOTAL SYNTHESIS OF TRANS-2,2-BISMETHYL-CROCETIN-DIMETHYL ESTER AND TRANS-CROCETIN-DIMETHYL ESTER)」という表題であったが、実験の詳細および収率は報告されていなかった。Ｃ１０ジアルデヒドおよびホスホランにつながる各種工程に関する手順は、広範囲の文献に続いて見出された。最終的に、ＴＳＣは、出発原料としてブロモ酢酸エチル、フランおよびチグリン酸を用いて、１７工程の合成順序にて全収率１．５％で調製された。
【００８７】
Ｃ１０対称ジアルデヒドは、ウィッティッヒ化学を用いてブロモ酢酸エチル２およびフラン３から調製した。ブロモ酢酸エチルをトリフェニルホスフィンおよびヨウ化メチルで処理して、ホスホラン６を得た：
【化１３】
【００８８】
第一工程の収率は、まずまずの９２％であった。この順序の続く工程の定量は、ホスホラン４およびホスホニウム塩５の性質により複雑であった。これらの化合物はともに、ロータリーエバポレータにより濃縮する間に激しく発泡する極めて粘性のシロップであった。両化合物は、塩化メチル溶液として利便性よく取り扱うことができ、ホスホラン６の総収率は、定量の観点からまずまずのようであった（７５％を上回ると推定される）。
【００８９】
フランを臭素で開環させて、フマルアルデヒドビス（ジメチルアセタール）８３を得た。
【化１４】
【００９０】
酸性条件下でのビス（ジメチルアセタール）８の一脱保護４によりアルデヒド９が得られ、次にこれをホスホラン６とカップリングさせて、４５％の収率で１０を得た。酸性条件下を用いて、ジメチルアセタール１０を脱保護した。１１をホスホラン６で処理することにより、ジエステル１２が得られた。ＤＩＢＡＬ−Ｈによりエステル基をアルコールに還元して、続くＭＮＯ２を用いた酸化によりＣ１０ジアルデヒド１４が得られた。１４のトランス立体化学がＮＭＲにより決定された。特に、化合物のＣ２対称により、１３Ｃ ＮＭＲスペクトルで予想される５つの共鳴が得られ、１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、δ９．５４（１Ｈ）、７．０７（２Ｈ）および１．９５（３Ｈ）でシグナルを示した。
【化１５】
【００９１】
工程Ｈ〜Ｋの収率範囲は、初期のパイロット研究からスケールアップ反応までの単離の改善を反映している。
【００９２】
チグリン酸１５を４工程順序でホスホラン４に変換した。１５におけるフィッシャーエステル化条件によりメチルエステル１６が得られた。ＮＢＳとの反応によりγ−ブロモチグリン酸メチル５９％、α−ブロモチグリン酸メチル２６％の混合物が得られ、物質の残余は未反応の出発原料であった。位置異性体の形成は、報告された文献５に基づいて予想された。続く工程では、ホスホニウム塩のα／γ混合物を再結晶して、所望のγ−ホスホニウムブロミド１９６を得た。続く水酸化ナトリウムでの処理によりホスホラン２０が得られた。
【化１６】
【００９３】
ホスホラン２０およびＣ１０ジアルデヒド１４をベンゼン中で還流しながらカップリングさせた６。ジメチルクロセチネート２１を赤色粉末として単離した。メチルエステルの鹸化は予想よりも困難であることがわかった。室温および還流にてＴＨＦ／Ｈ２Ｏ中でエステル２１を２当量のＮＡＯＨで処理することでは物質は変化しないままであった。溶解度がかなりの問題であるようだったので、ピリジンを添加した。これによりほとんどの固形物が溶解したが、ピリジンおよび２．５Ｎ ＮＡＯＨの混合物を還流させても生成物は生じなかった。標準的なＴＨＦ／２．５Ｎ ＮＡＯＨ鹸化条件もまたエステルに対してなんら影響がなかった。結局、還流にて一晩の４０％ＮＡＯＨ／メタノールが首尾よいことがわかった。これにより橙色固体としてＴＳＣ１が得られた。
【化１７】
【００９４】
１Ｈ ＮＭＲスペクトルを得るために、ＴＳＣを溶解させる試みを行った。しかしながら、ＴＳＣはほとんどの有機溶媒（クロロホルム、ＤＭＳＯ、ピリジン、メタノール、アセトン、および氷酢酸）中に事実上不溶性であった。このプロジェクトから生産されたＴＳＣは、ＩＲ、ＵＶ、ＨＰＬＣおよび元素分析で特性化した。ＩＲは１５４４および１４０２ＣＭ−１に特徴的な吸光度（共役カルボキシレートと一致）を示した。ＵＶおよびＨＰＬＣは、実際のＴＳＣ７と一致した。元素分析では満足のいく値が得られた。
【００９５】
反応順序の総収率は１．５％であった（フランに基づいて）。
【００９６】
以下に合成を詳述する：
試薬および化学物質はすべて、ALDRICHまたはSIGMAから購入し、別記しない限り受け取った状態で使用した。溶媒は、ＡＣＳ試薬またはＨＰＬＣ純度としてFISHER SCIENTIFICKから購入し、さらに精製せずに使用した。無水溶媒は、ＳＵＲＥ／ＳＥＡＬ（登録商標）ボトル中にALDRICHから購入し、さらに精製せずに直接使用した。脱イオン水は施設内のＣＵＬＬＩＧＡＮ水処理システムから得られた。
【００９７】
融点は、ＭＥＬ−ＴＥＭＰ ＩＩにて得られ、補正しなかった。赤外スペクトルは、ＰＥＲＫＩＮ−ＥＬＭＥＲ １６００ ＦＴＩＲ分光光度計で測定した。核磁気スペクトルは、試料の性質に応じて内部または外部重水素ロックにより５ＭＭの多核プローブを用いてＪＥＯＬ ＦＸ９０Ｑ分光光度計で測定した。プロトンおよびカーボンＮＭＲのケミカルシフトは、それぞれＴＭＳまたは重水素化溶媒に対して割り当てられた。リンＮＭＲスペクトルは、外部標準として５％リン酸水の共軸挿入管を用いてプロトン−デカップリングモードで一般的に実施された。
【００９８】
反応の進行を評価するか、または生成物の組成を推定するためのガスクロマトグラフィによるルーチンな分析は、水素炎イオン化検出器および ＨＥＷＬＥＴＴ ＰＡＣＫＡＲＤ ３３９４Ａ積分器を装備したＶＡＲＩＡＮ ３７００ガスクロマトグラフィで実施した。２０℃／分で５０から２５０℃までプログラムを用いて、２５０℃で１０分保持しながら、溶液１マイクロリットルを、ヘリウムキャリアガスを用いた１５メートルのＤＢ５カラム（内径０．５３ＭＭおよび膜厚１．５ミクロン）上へ注入した。インジェクターおよび検出器の温度は通常２５０℃に設定した。
【００９９】
薄層クロマトグラフィは、検出の方法に応じて蛍光指示薬を用いて、または蛍光指示薬を用いずに、ＢＡＫＥＲ−ＦＬＥＸ ２．５×７．５ＣＭのシリカゲルプレート上で実施した。発色させたプレート上の成分をＵＶで検出した。
【０１００】
元素分析は、QUANTITATIVE TECHNOLOGIES, INC., WHITEHOUSE, N.J.で実施した。
【０１０１】
［（エトキシカルボニル）メチレン］トリフェニルホスホラン（４）２（ＡＣＬ−Ｇ２９−１）
トリフェニルホスフィン（２３５．６Ｇ、０．９０ＭＯＬ）をＥＴＯＡＣ（５４０ＭＬ）中に溶解した。固形分すべてが溶解するのにおよそ３０分を要した。当該プロセスは吸熱性であった（外気温が２０℃であった場合、溶液は１３℃まで冷却）。ＥＴＯＡＣ（４００ＭＬ）中のブロモ酢酸エチルの溶液（１００ＭＬ、０．９０ＭＯＬ）を１．５時間かけて滴下した。添加中に白色の沈殿物を形成した。外気温（１８℃）で一晩（２０時間）攪拌した。
【０１０２】
固形分を真空濾過により収集し、多量のＥＴ２Ｏですすいだ。４５℃で一晩、真空乾燥させて、白色固体として３（３５６．３Ｇ、収率９２．６％（０．８３ＭＯＬ））を得た。１Ｈ ＮＭＲは文献値と一致した。
【０１０３】
固形分を塩化メチレン（３Ｌ）中に溶解させて、１２Ｌのフラスコ中で４５分間強攪拌しながら１Ｍ ＮＡＯＨ（３．６Ｌ）で処理した。有機層を分離して、水相をさらなる塩化メチレン（２×１Ｌ）で抽出した。有機層を乾燥させて（ＭＧＳＯ４）、容積およそ１Ｌが残留するまで濃縮した。物質を少量取り出して、１Ｈ ＮＭＲで検査し、文献値と一致することがわかった。
【０１０４】
［１−（エトキシカルボニル）エチリデン］トリフェニルホスホニウムヨージド（５）２（ＡＣＬ−Ｇ２９−２）
反応フラスコを氷浴で冷却しながら、ＡＣＬ−Ｇ２９−１からの物質をヨードメタン（６４．０ＭＬ、１．０３ＭＯＬ）で処理した。添加が完了した時点（１時間）で、反応混合物をＴＬＣ（シリカゲル、１０％ＭＥＯＨ／ＣＨＣＬ３）により検査し、相当量の出発原料が残留していることが示された。氷浴を取り外して、１．５時間後に反応混合物をＴＬＣで検査して、主要バンド（出発原料が筋を引いている）のタイトニングに基づいて完了したと思われた。ロータリーエバポレータで反応混合物を濃縮し、ほとんどの溶媒が除去された場合に生成物は発泡し始め、蒸気ダクトまで上昇した。出現したホスホニウム塩５は極めて粘性のあるシロップであり、これは取り扱いを容易にするために塩化メチレン溶液として保持した。５の性質により、物質を定量化しなかった。
【０１０５】
［１−（エトキシカルボニル）エチリデン］トリフェニルホスホラン（６）２（ＡＣＬ−Ｇ２９−２Ａ）
５の一部をＣＨ２ＣＬ２（３５０ＭＬ）中に溶解し、１Ｍ ＮＡＯＨ（５００ＭＬ）とともに４５分間強攪拌した。有機層を分離して、水相をＣＨ２ＣＬ２（２×１００ＭＬ）で抽出した。併せた有機層を乾燥させて（ＭＧＳＯ４）、濃縮して、黄色固体として６（８．０Ｇ）を得た。１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、文献値と一致した。
【０１０６】
フマルアルデヒドビス（ジメチルアセタール）（８）３（ＡＣＬ−Ｇ２９−３）
無水ＭＥＯＨ（６５０ＭＬ）中のフラン（８８．０Ｇ、１．２９ＭＯＬ）の溶液をＮ２下で−４５℃にまで冷却した。−４５℃以下を維持するような速度で、２．５時間かけて臭素（６８．０ＭＬ、１．３２ＭＯＬ）の溶液を滴下した。赤色溶液を２．５時間かけて−１０℃まで加温して、さらに２時間保持した。反応混合物は淡琥珀色であった。ＮＡ２ＣＯ３の添加により相当量の気体放出および４℃の発熱が生じた。反応混合物をドライアイスで冷却して、残りのＮＡ２ＣＯ３（合計２１０Ｇ）を５０分かけて添加した。−１０℃で一晩（１１時間）保持した後、冷却用浴を取り外して、反応混合物を室温まで加温して、２０時間攪拌した。
【０１０７】
塩を真空濾過により取り出して、およそ１５０ＭＬが除去されるまでＶＩＧＲＥＵＸカラムにより濾液を真空蒸留した。さらなる塩を析出させて、蒸留ポットを激しくぶつからせていた。濾過後、もう１５０ＭＬを蒸留して、さらに塩が溶液から出現した。再び、激しいぶつかり合いが問題であった。蒸留器ポットを冷却して、濾過して、濾液をＥＴ２Ｏ（４００ＭＬ）で処理し、沈殿物を真空濾過により取り出した。少なくとも１２０Ｇの塩が収集された（塩の初期収穫物は定量化せずに廃棄した）。水アスピレータにより２５℃にてロータリーエバポレータでＥＴ２Ｏの大部分を除去した。ＶＩＧＲＥＵＸカラムを用いて蒸留を再開し、透明無色液体として８を収集した（１７５．２Ｇ）（収率７６．９％）（沸点８６〜９２℃／９トル（文献値：８５〜９０℃／１５トル））。１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、所望の生成物に関して一致した。ＧＣ分析：純度８１．９％。
【０１０８】
フマルアルデヒドモノ（ジメチルアセタール）（９）４（ＡＣＬ−Ｇ２９−４）
フマルアルデヒドビス（ジメチルアセタール）８（５．２９Ｇ、０．０３ＭＭＯＬ）をアセトン（１２０ＭＬ）中に溶解した。Ｈ２Ｏ（１．８０ＭＬ）およびアンバーリスト１５（１．２０Ｇ）を順次添加した。混合物を５分間強攪拌した後、濾過して、樹脂を除去した。この間に、溶液は無色から黄色になった。室温にてロータリーエバポレータで濾液を濃縮して、淡茶色残渣をＫＵＧＥＬＲＯＨＲで蒸留して（３７℃／２００ミリトル）、黄色液体として９（２．８０Ｇ、収率７１．８％）として得た。最初に蒸留ポットがぶつかりあった際に物質の少量を損失した。１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、所望の生成物に関して一致した。ＧＣ分析は純度８０％を示した。
【０１０９】
（ＡＣＬ−Ｇ２９−７）
フマルアルデヒドビス（ジメチルアセタール）８（７２．１Ｇ、０．４１ＭＭＯＬ）をアセトン（１６００ＭＬ）中に溶解した。Ｈ２Ｏ（２５．０ＭＬ）およびアンバーリスト１５（１６．７Ｇ、アセトンで予洗）を添加した。混合物を５分間強攪拌した後、濾過して、酸性樹脂を除去した。反応混合物はわずかに黄色味を帯びており、従来の大量スケール調製よりもはるかに薄かった。ＧＣ分析は３４．５％および出発原料４６．１％を示した。もう５分間樹脂で処理した。ＧＣ分析は５９．５％および出発原料２１．７％を示した。もう１０分間樹脂で処理した（合計時間２０分）。ＧＣ分析は７３．９％および出発原料２．０％を示した。室温にてロータリーエバポレータで濾液を濃縮して、茶色オイル５４Ｇを得た。真空蒸留により黄緑色オイル（３４．４８Ｇ）が得られた。ＧＣ分析は、１７．５％（９．００分）および６．９％（９．１４分）の主要不純物を伴って、純度６４．７％（８．２２分）を示した。正味収量２２．３Ｇ（０．１７ＭＯＬ）を回収した。ＧＣによる前部カットの分析は極めて汚れた物質を示した。
【０１１０】
（ＡＣＬ−Ｇ２９−１３）
アンバーリスト１５（８．６１Ｇ）をアセトン（１００ＭＬ）中３０分間攪拌し、濾過により収集した。アセタール８（３５．０Ｇ。０．１６ＭＯＬ）をアセトニトリル（６２０ＭＬ）中に溶解し、機械的に攪拌しながら、酸性樹脂および脱イオンＨ２Ｏ（１０．０ＭＬ、０．５５ＭＯＬ）を添加した。反応の進行はＴＬＣ（１０：３ ヘキサン：ＥＴ２Ｏ）によりモニタリングし、１５分後にはほとんどの出発原料が変換されていた。２０分後、ほんのわずかなジメチルアセタールが検出された。樹脂を濾過により除去して、４０℃以下にてロータリーエバポレータで濾液を濃縮した。粗製生成物をＢＩＯＴＡＧＥカラム（７．５×９．０ＣＭ）上に載せて、ヘキサン中の１５％ＥＴ２Ｏで溶出させて、１９．８Ｇ（収率６５％）を得た。
【０１１１】
６，６−ジメトキシ−２−メチルヘキサ−２，４−ジエノエート（１０）２
（ＡＣＬ−Ｇ２９−５）
イリド６（７．８０Ｇ、２２ＭＯＬ）を塩化メチレン（６５ＭＬ）中に溶解した。フマルアルデヒドモノ（ジメチルアセタール）９（２．８０Ｇ、１７ＭＭＯＬ）溶液を添加して、溶液を一晩攪拌した。ロータリーエバポレータで減圧にて溶媒を除去した。粗製物の１Ｈ ＮＭＲにより、所望の生成物は存在することが示された。静置すると、結晶が成長した（推定ではトリフェニルホスフィンオキシド）。固体（真空濾過による乾燥後の１４．１Ｇ）を石油エーテル中にスラリー状態とし、濾過した。濾液を濃縮して、析出した固体を伴う黄色オイルを得て、これを塩化メチレン（１５ＭＬ）中に溶解して、ＢＩＯＴＡＧＥ４×７．５ＣＭカラム上でクロマトグラフィにかけ、塩化メチレンで溶出させて、黄色オイルとして１０（１８Ｇ、収率５０％）を得た。当該黄色オイルの１Ｈ ＮＭＲは、文献値と一致したが、わずかな塩化メチレンが残留しており（０．７５当量）、そのため物質を４５分間ロータリーエバポレータにかけた。質量は１．５Ｇ（収率４０．６％）に減り、塩化メチレンの共鳴は消失した。ＧＣ分析は１２．６分に主なピークが見られた（８７．５％）（５０℃、５分保持、２０℃／分で最終温度２５０℃まで）。
【０１１２】
（ＡＣＬ−Ｇ２９−６）
塩化メチレン（６５０ＭＬ）中のイリド６（５９．２Ｇ、０．１６ＭＯＬ）溶液を氷浴中で冷却し、９（２５．７Ｇ、０．１９ＭＭＯＬ）溶液を添加した。溶液を一晩攪拌して、氷浴を溶かした。ＴＬＣ（ヘキサン：ＥＴ２Ｏ １０：３）は、生成物に非常に接近して流れる少なくとも３つの他の化合物を示した。アルデヒドの検査は、ＧＣ分析により純度５０％を示した。溶媒を除去して、固体／オイル混合物を得た。
【０１１３】
（ＡＣＬ−Ｇ２９−８）
イリド６（５９．２Ｇ、０．１６ＭＯＬ）およびアセタール９（０．１９ＭＭＯＬ）を塩化メチレン（１．１Ｌ）中でカップリングさせて、上述のようにワークアップして、黄緑色オイル（８０Ｇ）を得た。粗製反応混合物の一部（もとの８０Ｇのうち４．１３Ｇ）をＫＵＧＥＬＲＯＨＲにかけ、５０℃／２５０ミリトルで蒸留した。無色オイル２．２８Ｇが濃縮され、１Ｈ ＮＭＲは、それが出発原料である一方で、生成物１０は蒸留ポット中に残留していた（１．８５Ｇ）ことを示した。５０℃／２５０ミリトルでのＫＵＧＥＬＲＯＨＲ蒸留により、粗製生成物の塊から揮発性成分を除去した（正味３５Ｇ）。
【０１１４】
エチル ２−メチル−６−オキソ−ヘキサ−２，４−ジエノエート（１１）２
（ＡＣＬ−Ｇ２９−９）
パイロット蒸留ポットからのアセタール１０（ＡＣＬ−Ｇ２９−８、１．８５Ｇ、９ＭＭＯＬ）をアセトン（３３ＭＬ）中に溶解した。脱イオンＨ２Ｏ（０．５０ＭＬ）およびアンバーリスト１５樹脂（０．３５Ｇ、アセトンで予洗）を添加した。混合物を２０分間攪拌した。濾過して、ロータリーエバポレータで濃縮して、黄緑色オイル（１．５３Ｇ）を得た。４．５×７ＣＭのＢＩＯＴＡＧＥ上でクロマトグラフィにかけ、ヘキサン中の１５％ＥＴ２Ｏで溶出させた。この系では分離は不完全であったが、主な成分０．３２Ｇを単離して、分析した。１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、文献データと一致し、ＩＲ（１７１１、１６８２ＣＭ−１）は所望の生成物と一致した。ＧＣ９５．６％。さらに０．３５Ｇを回収したが、それはより極性の低いおよび高い物質で汚染されていた。１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、かなり純粋な物質を示した。ＧＣ ９０．６％。収率：４２％。
【０１１５】
ジエチル ２，７−ジメチルオクタ−２，４，６−トリエン−１，８−ジオエート（１２）２
（ＡＣＬ−Ｇ２９−１０）
Ｇ２９−９からのアルデヒド１１（０．６５Ｇ、３．５ＭＭＯＬ）を塩化メチレン中に溶解して、磁気的に攪拌した。イリド（１．５９Ｇ、４．４ＭＭＯＬ）を添加した。淡黄緑色溶液が数分以内により濃い色合いの黄色になった。１０分後のＴＬＣは、出発原料がほぼ完全に消費されたことを示した。２０時間攪拌した後、シリカゲルで部分的に充填したピペットに通して反応混合物（褐色溶液）を濾過した。濾液を濃縮して、褐色オイルを得た。少量のＣＨＣＬ３を伴うヘキサン中の５％ＥＴ２Ｏに固体を溶解させた。４．５×７．５ＣＭのＢＩＯＴＡＧＥ上でクロマトグラフィにかけ、ヘキサン中の１５％ＥＴ２Ｏで溶出させた。主な生成物を白色結晶として単離した（０．４５Ｇ、収率５０％）。１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、文献データと一致した。
【０１１６】
（ＡＣＬ−Ｇ２９−１４）
さらなる量の１２を上述のように調製して、クロマトグラフィ精製後に２１．８Ｇ（８１．６％）を得た。１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、所望の生成物と一致した。
【０１１７】
２，７−ジメチルオクタ−２，４，６−トリエン−１，８−ジオール（１３）２
（ＡＣＬ−Ｇ２９−１１）
ジエステル１２（０．４５Ｇ、１．８ＭＭＯＬ）を無水ヘキサン（１５．０ＭＬ）中に溶解した。物質のいくらかは溶けたようであったが、混合物は完全に濁っていた。混合物を−７８℃浴中で冷却すると、より多くの物質が溶液から出てくるようであった。ニートのＤＩＢＡＬ−Ｈ（２．５０ＭＬ）を無水ヘキサン（総容積１０．０ＭＬ）中に溶解し、ジエステルをドライアイス浴で冷却しながら、その一部（およそ２ＭＬ）を反応混合物へ不注意に吸い上げて移した。合計５．０ＭＬ（６．７ＭＭＯＬ）が添加されるまで、さらなる量のＤＩＢＡＬ−Ｈ溶液を添加した。ＣＯ２浴を加温した。２時間５０分間攪拌した後、ジエステルが完全に消費したことがＴＬＣで示された。浴温度を−２０℃に調節して、２０分かけて０℃に加温した。混合物をＨ２Ｏ／シリカゲル（２ＭＬ／７Ｇ）で３０分間処理した。Ｋ２ＣＯ３およびＭＧＳＯ４を添加した。濾過して固形分を除去して、塩化メチレンで完全にすすいだ。濃縮して、白色固体（０．１４Ｇ、収率５０％）を得た。ＴＬＣ ＲＦ＝０．２１（５％ ＭＥＯＨ／ＣＨＣＬ３）は非常に極性が高い。塩化メチレンですすぐことは、生成物のすべてを回収するのに十分では有り得なかった。１Ｈ ＮＭＲスペクトルは文献値と一致した。
【０１１８】
（ＡＣＬ−Ｇ２９−１５）
ジエステル（５．４Ｇ、２１ＭＭＯＬ）を無水ヘキサン（１７５ＭＬ、乏しい溶解度）中に溶解し、−７８℃に冷却して、３５分間かけてＤＩＢＡＬ−Ｈ（無水ヘキサン５０ＭＬ中１４．５ＭＬ）の溶液で処理した。添加中に激しい気体の発生が観察された。スラリーの色は、初期に白色から濃黄色となり、さらなるＤＩＢＡＬ−Ｈを添加するにつれこれが薄くなっていった。２時間かけて−４０℃に加温した後、−２８℃浴へ一晩移した。反応混合物をＨ２Ｏ／シリカゲル（４ＭＬ／１４．４Ｇ）の均質混合物で３０分間処理した。ＭＧＳＯ４（７．５Ｇ）およびＫ２ＣＯ３（５．１Ｇ）を添加し、反応混合物を冷却用浴から取り出した。２０分攪拌した後、ガラス漏斗に通した。固形分を塩化メチレンで洗浄した。これにより相当量の沈殿物が形成した。ロータリーエバポレータに設置しながら加温して、沈殿固体を溶解させた。ガラス漏斗上に残留した固体をＥＴＯＡＣ（４×７５ＭＬ）で洗浄して、濾液を濃縮した。
【０１１９】
ＣＨ２ＣＬ２ですすぐことにより、淡黄色固体（１．７Ｇ）を得た。１Ｈ ＮＭＲスペクトルは文献値と一致した。ＥＴＯＡＣですすぐことにより、オフホワイト色固体（全回収量２．７Ｇ、収率７５％）を得た。１Ｈ ＮＭＲスペクトルは文献値と一致した。
【０１２０】
（ＡＣＬ−Ｇ２９−１７）
ジエステル（１６．４Ｇ、６．５ＭＭＯＬ）をＮ２下にて無水ヘキサン（５００ＭＬ）中で攪拌し、−７８℃に冷却した。て、１時間かけてヘキサン（１５０ＭＬ）中のＤＩＢＡＬ−Ｈ（４５ＭＬ、２５３ＭＭＯＬ）の溶液を添加した。−３０℃に加温して、一晩（総時間１７．５時間）攪拌した。Ｈ２Ｏ／シリカゲル（１２．３Ｇ／４３．７Ｇ）の均質混合物を添加して、４５分間かけて混合物を手動でぐるぐる回した。Ｋ２ＣＯ３（１５．５Ｇ）およびＭＧＳＯ４（２３．５Ｇ）を添加した。さらに３０分間ぐるぐる回した。ガラス漏斗で濾過して、塩化メチレンですすぎ（沈殿物が形成され、おそらく蒸発冷却により引き起こされる）、濾液を濃縮した。固形分を数回ＥＴＯＡＣ（およそ１００ＭＬずつ、合計容積２Ｌ）ですすいで、もとの濾液とともにプールした。濃縮して、黄色固体（８．９Ｇ、粗製収率８１％）を得た。１Ｈ ＮＭＲスペクトルは所望の生成物と一致した。
【０１２１】
２，７−ジメチルオクタ−２，４，６−トリエン−１，８−ジアール（１４）２
（ＡＣＬ−Ｇ２９−１２）
ＭＮＯ２（７．８０Ｇ、９０ＭＭＯＬ）のスラリーをＮ２下にて氷浴中で冷却した。ジオール１３（０．１４Ｇ、０．８ＭＭＯＬ）をアセトン溶液（５．０ＭＬ）としてピペットで添加した。さらに２．０ＭＬのアセトンを用いて、フラスコをすすぎ、移送を完了させた。反応混合物を攪拌しながら、氷浴を一晩溶かした。ＨＹＦＬＯによる濾過により固形分を除去し、濃縮して、黄色固体を得た。最小量のＣＨＣＬ３を伴う１０％ＥＴ２Ｏ／ヘキサン中に当該物質を溶解して、シリカゲルのカラム（３０×１９０ＭＭ）にかけて、１０％ＥＴ２Ｏ／ヘキサンで溶出させた。生成物は、溶出する際に黄色いバンドとして追跡することができ、１４を淡黄色固体（３７ＭＧ、収率２６％）として単離した。１Ｈ ＮＭＲスペクトルは文献値と一致した。
【０１２２】
（ＡＣＬ−Ｇ２９−１６）
アセトン（５００ＭＬ）中のジオール１３（２．７０Ｇ、１６ＭＭＯＬ）の溶液をＮ２下にて氷浴中で冷却した。ＭＮＯ２（６０．０Ｇ、０．６９ＭＭＯＬ）を２０分間かけて少しずつ添加した。反応混合物を一晩攪拌しながら、氷浴を溶かした。反応混合物をＨＹＦＬＯにより濾過して、濾液を濃縮して、黄色固体（１．６Ｇ、粗製収率６１％）を得た。１Ｈ ＮＭＲスペクトルは文献値と一致した。粗製黄色固体を塩化メチレン（少量のヘキサン中の１０％ＥＴ２Ｏとともに添加）中に溶解して、４×７．５ＣＭのＢＩＯＴＡＧＥシリカゲルカラムに載せた。初期はヘキサン中の１０％エーテル（１Ｌ）で溶出し、続いて１５％ＥＴ２Ｏ（１Ｌ）および２０％ＥＴ２Ｏ（０．５Ｌ）へ極性を上げた。黄色固体（１．０Ｇ、収率３８％）を回収した。１Ｈ ＮＭＲスペクトルは所望の生成物と一致した。
【０１２３】
（ＡＣＬ−Ｇ２９−２１）
アセトン（５００ＭＬ）中のジオール１３（９．３１Ｇ、６０ＭＭＯＬ）の溶液をＮ２下にて氷浴中で冷却した。ＭＮＯ２（１００Ｇ、１．１５ＭＯＬ）を添加して、氷浴を一晩溶かしながら、混合物を攪拌した。２４時間後ＩＲで検査して、相当量の生成物が形成したが、依然としてほんの微量のアルコールが存在していた。さらに酸化剤５０Ｇを添加し、もう一晩攪拌し続けた。反応混合物の一部を濾過して、１Ｈ ＮＭＲで検査し、出発原料の消費に基づいて、反応が完了したようであった。反応混合物の残部をＨＹＦＬＯのパッドに通して濾過して、アセトンで完全にすすいだ。濃縮して、濃黄色固体を得た。ベンゼン４０ＭＬで一度共沸させた後、４０℃で５時間、続いて室温で一晩真空乾燥させた。５．２８Ｇ（収率５８％）を回収した。１Ｈ ＮＭＲおよびＩＲスペクトルは所望の生成物と一致した。
【０１２４】
チグリン酸メチル（１６）
オーバーヘッド攪拌機、冷却器および温度計を取り付けた２Ｌの３つ口フラスコ中に、メタノール９００ＭＬ中のチグリン酸１５（８９．８Ｇ、０．９ＭＯＬ）および５ＭＬの濃硫酸（０．０９ＭＯＬ）の溶液を還流下にて２０時間加熱した。溶液を２５℃にまで冷却し、過剰のメタノールをロータリーエバポレータで３０℃および２７ＩＮ ＨＧの真空で取り除いた。回収したメタノール留出液のＧＣ分析により、オーバーヘッド中に生成物が示された。得られた２相の淡褐色濃縮液をエチルエーテル５００ＭＬ中に溶解して、水２５０ＭＬ、１０％炭酸水素ナトリウム水２５０ＭＬおよび飽和食塩水２５０ＭＬで順次洗浄した。エーテル溶液を無水炭酸カリウムで乾燥させて、濾過して、ロータリーエバポレータで２５℃および２７ＩＮ ＨＧの真空で取り除いて、ほぼ無色オイルとして粗製チグリン酸メチル（４３．６Ｇ）（収率４２％）を得た。ＧＬＣ分析により、出発チグリン酸に関する３．８分と比較して２．７分の保持時間を有する１つの主要な揮発性生成物が示された。ＣＤＣＬ３中のプロトンＮＭＲにより、ほんのいくらかのエチルエーテルの混入を伴った予想シグナルが示された：１．７９ＰＰＭ（Ｄ，３Ｈ）、１．８３（Ｓ，３Ｈ）、３．７３（Ｓ，３Ｈ）、６．８６（Ｑ，６．６ＨＺ）。ＩＲ（ＫＢＲ上でニート）：１７１８ＣＭ−１にエステルのカルボニル。このオイルはそのまま次工程で使用した。
【０１２５】
γ−ブロモチグリン酸メチル（１７）５
オーバーヘッド攪拌機、冷却器および温度計を取り付けた１Ｌの４つ口フラスコ中に、四塩化炭素５００ＭＬ中の粗製チグリン酸メチル（４３．６Ｇ、０．３８ＭＯＬ）、Ｎ−ブロモサクシンイミド（６８Ｇ、０．３８ＭＯＬ）および７０％過酸化ベンゾイル（５．３４Ｇ、０．０１５ＭＯＬ）の攪拌混合物を還流下にて２時間加熱した。２０℃に冷却した後、不溶性のサクシンイミド（３８．１Ｇ、回収率１００％）を吸引濾別した。濾液を水２５０ＭＬで三回洗浄して、ＭＧＳＯ４で乾燥させて、続いて２５℃および２６ＩＮ ＨＧの真空で取り除いて、黄色オイル（７８．８Ｇ）を得た。ＣＤＣＬ３中のこのオイルのプロトンＮＭＲにより複雑なスペクトルが得られた。所望のγ−ブロモエステルに関するメチレンプロトンは、４．０４ＰＰＭを中心とするダブレット（８．６ＨＺ）に割り当てられた一方で、α−ブロモ異性体に関する同じプロトンは４．２４ＰＰＭにあるシングレットとされた。これらのシグナルおよび１．６〜２．０ＰＰＭのメチルマルチプレットのプロトン積分値から以下の組成（モル％）が提唱された：
γ−ブロモエステル： ５９％
α−ブロモエステル： ２６％
出発原料 ： １５％
この粗製オイルはいかなるさらなる精製をせずに次工程で使用した。
【０１２６】
この反応はまた、たったの０．８７当量のＮ−ブロモサクシンイミドを用いて、その他は同一条件下で０．０５モルスケールでも実施した。この粗製オイルの組成は、γ−ブロモエステル５２％、α−ブロモエステル２４％および未反応のチグリン酸メチル２３％としてそのプロトンＮＭＲに基づいて推定された。このオイルのＧＬＣ分析は、ややより複雑であり、他の少量成分を示した。
【０１２７】
γ−ブロモチグリン酸メチルのトリフェニルホスホニウム塩（１９）６
温度計、１００ＭＬの定圧添加漏斗および静止窒素系に接続した冷却器を取り付けた２Ｌの４つ口フラスコ中で、ベンゼン３５０ＭＬ中の粗製γ−ブロモチグリン酸メチル（７８．８Ｇ）の攪拌溶液をベンゼン３５０ＭＬ中のトリフェニルホスフィン（９５Ｇ、０．３６ＭＯＬ）の溶液で１．７５時間かけて処理した。混合物の温度は、２４から２７℃にまでわずかに発熱した（その他は外気条件）。添加後、反応を一晩強攪拌して、フラスコの壁に付着した黄色がかったガム状物質を含有する白色固体のスラリーを得た。黄色がかったガム状物質を乱すことなく白色個体をガラス漏斗へと吸引濾過した。フラスコをベンゼン１００ＭＬで二度洗浄して、フィルターへ注いだ。フィルターケーキをベンゼン５０ＭＬ、続いてヘキサン５０ＭＬで二度洗浄した。湿ったケーキを外気温で真空オーブン中で５．５時間乾燥させた。乾燥した白色粉末［９３Ｇ、ＭＰ＝１２５℃ＤＥＣ］を加熱しながらアセトニトリル１５０ＭＬ中に溶解して、透明な黄色溶液を得た。酢酸エチル（３００ＭＬ）をこの熱溶液に添加して、酢酸エチル約１００ＭＬを添加した後、生成物が結晶化し始めた。フラスコを冷蔵庫に一晩保管した。生成物を吸引濾過して、最小量の１：２のアセトニトリルおよび酢酸エチルで洗浄した：４５．０Ｇ、ＭＰ＝１８７〜１９０℃（ＤＥＣ）。文献ＭＰ＝１８３℃（ＤＥＣ）。
【０１２８】
反応フラスコ中のゴム上の固体を、アセトニトリル１０ＭＬおよび酢酸エチル２０ＭＬから再結晶させた。同様に、ベンゼン母液からさらなる固体を一晩沈殿させた。これらの固体を濾過して、同じ様式で再結晶させた。両方の試料を２時間冷蔵して、吸引濾過して、さらなる生成物（１３．３Ｇ）を得た。
【０１２９】
ベンゼン濾液をロータリーエバポレータで取り除き、黄色オイルをアセトニトリル１０ＭＬ中に溶解し、酢酸エチル２０ＭＬで沈殿させた。スラリーを冷蔵庫に一晩保管して、白色固体としてさらなる生成物（４．６Ｇ）を得た。Ｍ．Ｐ． １８５〜１８７℃（ＤＥＣ）。白色固体としての所望のホスホニウム塩の総収率は、６２．９Ｇ、すなわち粗製チグリン酸メチルに基づいて収率３６．２％であった。プロトンＮＭＲ（ＣＤＣＬ３、ＴＭＳ） ＰＰＭ １．５５（Ｄ，４ＨＺ，３Ｈ）、３．５７（Ｓ，３Ｈ）、４．９（ＤＤ，１５．８＆７．９ＨＺ，２Ｈ）、６．５５（ブロード Ｑ，６．６〜７．９ＨＺ，１Ｈ）、７．４〜７．９（Ｍ，１５Ｈ）。プロトンデカップリングによるリンＮＭＲ（ＣＤＣＬ３、５％Ｈ３ＰＯ４水共軸外標準） ２２．０８ＰＰＭ。部分的カーボンＮＭＲ（ＣＤＣＬ３）：ＣＯ２ＣＨ３（１６６．６ＰＰＭ，Ｄ，ＪＣＰ＝３ＨＺ）、オレフィンＣＨ（１１７．５ＰＰＭ，Ｄ，ＪＣＰ＝８６．１ＨＺ）、ＣＯ２ＣＨ３（５２．０ＰＰＭ）、ＰＨ３Ｐ−ＣＨ２（２５．４ＰＰＭ，Ｄ，ＪＣＰ＝５０．６ＨＺ）およびＣＨ３（１３．４Ｐ
ＰＭ，Ｄ，ＪＣＰ＝２．４ＨＺ）。部分的ＩＲ（ＫＢＲペレット）：１７１１ＣＭ−１にあるエステルカルボニル。
【０１３０】
（３−カルボメトキシ−２−ブテン−１−イリデン）トリフェニルホスホラン（２０）６
オーバーヘッド攪拌機、添加漏斗および温度計を取り付けた５Ｌの５つ口フラスコ中で、水２５０ＭＬ中の水酸化ナトリウム（５．１２Ｇ、０．１２８ＭＯＬ）の溶液を、水２，５００ＭＬ中のγ−ブロモチグリン酸メチルのトリフェニルホスホニウム塩（５８．３Ｇ、０．１２８ＭＯＬ）の強攪拌溶液を２５℃にて４１分間かけて滴下した。黄色スラリーを室温で１０分間攪拌し、続いて吸引濾過した。フィルターケーキを水１，８００ＭＬで洗浄し、続いて窒素ブランケットを取り付けたフィルター上で完全に乾燥させた。次に、黄色固体を室温および２７”ＨＧ真空にてＰ２Ｏ５により真空デシケータ中で一晩乾燥させた。３５．３Ｇ（収率７３．７％）。ＭＰ＝１４５〜１５０℃。文献ＭＰ＝１４５〜１６５℃。プロトンデカップリングによるＣＤＣＬ３中のリンＮＭＲは、１７．１ＰＰＭおよび２１．１ＰＰＭに９３：７の比で２つのピークを示した。プロトンＮＭＲ（ＣＤＣＬ３、ＴＭＳ） ＰＰＭ １．８９（Ｓ，３Ｈ）、３．５８（Ｓ，３Ｈ）、７．３〜７．８（Ｍ，１７Ｈ）。少量であるが検出可能な１．７４ＰＰＭにあるシングレットがこのスペクトルで明らかであり、これは不純物に起因していた。この固体をさらに精製せずに次工程で使用した。
【０１３１】
ジメチルクロセチネート（２１）６
（ＡＣＬ−Ｇ２９−１８）
ジアルデヒド１４（０．４８Ｇ、２．９ＭＭＯＬ）を１００ＭＬの丸底フラスコへ添加した。ベンゼン（２０ＭＬ）を添加して、固体を磁気的攪拌で溶解させた。イリドを添加し、ベンゼンをさらに１０ＭＬ使用して、当該化合物をフラスコへと洗浄した。強還流に６時間加温した。反応混合物を一晩冷却させた。文献の報告と対比して、非常に少量の固体が形成された。反応混合物を濃縮して、残渣をＭＥＯＨ（３０ＭＬ）中に溶解し、３０分間沸騰させた。外気温にまで冷却し、固体を真空濾過により収集した。ＣＤＣＬ３０．５ＭＬに２０ＭＧを溶解させることにより、ＮＭＲ試料を調製し、多少驚くべきことに、これは完全に溶解するのにヒートガンで加温する必要があった。１Ｈ ＮＭＲスペクトルを記録して、所望の生成物と一致することがわかった。残りの物質を熱ベンゼン中に溶解して、濾過して、濾液を濃縮し、ＭＥＯＨ中に溶解して、氷浴中で冷却し、赤色固体を収集した（３３４ＭＧ、収率３３％）。この物質は最初に単離した物質よりも可溶性でないようだった。
【０１３２】
（ＡＣＬ−Ｇ２９−１８Ａ）
ジアルデヒド１４（５．７８Ｇ、３５ＭＭＯＬ）をＮ２下にてベンゼン（３００ＭＬ）に溶解した。イリド２０（３５．３Ｇ、９４ＭＭＯＬ）を添加して、混合物を加温して６時間還流させ、濃赤色溶液を形成した。反応混合物を一晩冷却させた後、真空濾過により赤色固体を収集し、メタノールですすいだ。５００ＭＬのＲＢＦへ移して、メタノールおよそ６５ＭＬを用いて３０分間還流させた。冷却して、赤色固体を収集した。冷メタノールですすいで、真空乾燥させて、赤色固体として２１（３．００Ｇ）を得た。１Ｈ ＮＭＲおよびＩＲスペクトルは、所望の生成物と一致した。
【０１３３】
もともとの濾液（反応混合物からの）をロータリーエバポレータで濃縮し、黒っぽい残渣をメタノール１００ＭＬ中に溶解して、４０分間還流させた。氷浴中で冷却させて、真空濾過により赤色固体を収集した。冷メタノールですすいで、真空乾燥させて、赤色固体として２１（１．３１Ｇ）を得た。１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、所望の生成物と一致した。濾液をプールして、濃縮して、メタノール７５ＭＬ中に溶解して、室温で一晩静置した。赤色固体を真空濾過により回収した：０．３８Ｇ。１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、所望の生成物と一致した。より多くの固体が濾液中で形成された。真空濾過により単離して、赤色固体（０．１２７Ｇ）を得た。ＩＲは上記と一致した。総回収率：４．８９Ｇ、３９％。
【０１３４】
ＴＨＦ／ＮＡＯＨを用いた鹸化の試み
（ＡＣＬ−Ｇ２９−１９）
ＴＨＦ（２ＭＬ）中のジエステル２１（１００ＭＧ、０．２８ＭＭＯＬ）および１Ｎ ＮＡＯＨ（０．５６ＭＬ、２当量）の攪拌懸濁液を添加した。室温で一晩攪拌した。ＴＬＣは出発原料のみを示した。加温して還流させたが、数時間後変化はなかった。より多くの固体を溶解させようとＴＨＦ（６ＭＬ）を添加したが、重要ではなかったようだった。一晩還流し続けた。より多くのＴＨＦを添加し（約６ＭＬ、ＴＬＣは出発原料のみを示した）、もう一晩還流させた。濃縮して、出発原料のみを１Ｈ ＮＭＲにより検査した（メチルおよびメチルエステルの積分値に基づく）。加熱用マントルで加温しながらピリジン（１０ＭＬ）中に溶解させた。２．５Ｎ ＮＡＯＨ（１．０ＭＬ）を添加した。数分後に濃橙色溶液が深紅色になった。加熱用マントルを取り外し、固体が形成し始め、マントルを３０分間再度適用し、続いて室温で一晩攪拌した。高圧下で濃縮した。残渣はクロロホルム、ＤＭＳＯ、ピリジンに不溶性であり、Ｈ２Ｏに難溶性であった。ＩＲ（ヌジョールムル）は、出発原料の特徴であるＣ＝Ｏ吸収を示した。
【０１３５】
２．５Ｎ ＮＡＯＨおよびＴＨＦを用いた鹸化
（ＡＣＬ−Ｇ２９−２０）
ジエステル２１（３７ＭＧ、０．１０ＭＭＯＬ）をフラスコに秤量し、ジエチルエーテル（４ＭＬ）中で攪拌した。溶媒は橙色を帯びたが、固体は依然として存在していた。２．５Ｎ ＮＡＯＨ １ＭＬを添加して、加温して還流させた。３０分後、エーテルのほとんどは蒸発した。これにＴＨＦ（３ＭＬ）を入れ替え、数時間還流を続けた。真空濾過で固体を収集し、脱イオン水ですすいだ後、真空オーブン中で乾燥させた。ＩＲは出発原料のみを示した。
【０１３６】
４０％ＮＡＯＨを用いた鹸化（１）
（ＡＣＬ−Ｇ２９−２２）
ジエステル２１（３２ＭＧ、８．９ＭＭＯＬ）をフラスコ中に秤量して、メタノール（１．５ＭＬ）中で攪拌した。溶媒は橙色／赤色を帯びたが、固体は依然として存在していた。４０％ＮＡＯＨ １．５ＭＬを添加して、加温して１７時間還流させた。室温に冷却した後、真空濾過で橙色固体を収集し、脱イオン水ですすいだ。４０℃にて真空乾燥させて、橙色粉末として１を得た（２１ＭＧ、５９％）。ＩＲ（ＫＢＲペレット） ３４１２、１５４４、１４０２ＣＭ−１。化合物はおそらく吸湿性である。高磁場のカルボニルシフトは共役と一致した。
【０１３７】
（ＡＣＬ−Ｇ２９−２２Ａ）
ジエステル１ ３５ＭＧを用いて繰り返し、１５時間還流させた。反応混合物を氷浴中で冷却し、真空濾過により収集し、冷脱イオン水ですすいだ。４０℃にて真空乾燥させた。橙色固体として１を回収した（２５．５ＭＧ、６５％）。
【０１３８】
（ＡＣＬ−Ｇ２９−２３）
ジエステル２１（０．４８Ｇ、１．３ＭＭＯＬ）をメタノール（１５．０ＭＬ）および４０％水酸化ナトリウム（１５．０ＭＬ）中に溶解し、加温して還流させた。不均一赤色固体が約２時間後に橙色になった。６時間後に加熱をやめて、混合物を一晩冷却させた。橙色固体を真空濾過により収集し、冷脱イオン水で洗浄した。真空乾燥させて、脆い橙色固体を得た（０．３６Ｇ、収率６８％）。
【０１３９】
（ＡＣＬ−Ｇ２９−２４）
ジエステル２１（１．１０Ｇ、３．１ＭＭＯＬ）を１００ＭＬの回収フラスコに入れて、加熱してメタノール（２０ＭＬ）および４０％ＮＡＯＨ（２０ＭＬ）中で１２時間還流させた。氷浴中で冷却させた後、橙色固体を真空濾過により収集し、冷脱イオン水ですすいだ。真空乾燥させて、１．４Ｇ（１００％）を得た。Ｃ２０Ｈ２２Ｏ４ＮＡ２−０．４Ｈ２Ｏに関する分析計算値：Ｃ，６３．２９、Ｈ，６．０５、ＮＡ，１２．１１、Ｈ２Ｏ，１．９０。実測値：Ｃ，６３．４１、Ｈ，６．２６、ＮＡ，１１．７５、Ｈ２Ｏ，１．
９３。
【０１４０】
（ＡＣＬ−Ｇ２９−２５）
ジエステル２１（３．００Ｇ、８．４ＭＭＯＬ）をメタノール（８０ＭＬ）および４０％ＮＡＯＨ（６０ＭＬ）中で１２時間還流させた。上述のように生成物を橙色固体として単離した（２．７Ｇ、８０％）。Ｃ２０Ｈ２２Ｏ４ＮＡ２−０．４Ｈ２Ｏに関する分析計算値：Ｃ，６３．２９、Ｈ，６．０５、ＮＡ，１２．１１、Ｈ２Ｏ，１．９０。実測値：Ｃ，６３．２０、Ｈ，６．００、ＮＡ，１１．９３、Ｈ２Ｏ，１．８１。試料ＡＣＬ−Ｇ２９−２３、−２４および−２５をめのう乳鉢ですり砕いて、ＡＣＬ−Ｇ２９−Ａとして併せた。
【０１４１】
参照文献
１．E.BUCHTA AND F. ANDREE NATURWISS. 1959, 46, 74.
２．F.J.H.M. JANSEN, M.KWESTRO, D. SCHMITT, J. LUGTENBURG RECL. TRAV. CHIM. PA
YS-BAS 1994, 113, 552.
３．R. GREE, H. TOURBAH, R. CARRIE TETRAHEDRON LETTERS 1986, 27, 4983.
４．G.M. COPPOLA SYN. COMMUN. 1984, 1021.
５．D.S. LETHAM AND H. YOUNG PHYTOCHEMISTRY 1971, 10, 2077.
６．E.BUCHTA AND F. ANDREE CHEM. BER. 1960, 93, 1349.
【実施例２】
【０１４２】
トランスカリウムノルビキシネート
【化１８】
【０１４３】
トランスカリウムノルビキネートは、共役炭素−炭素二重結合を含有する対称Ｃ２０ジアルデヒドを［１−（エトキシカルボニル）メチリデン］トリフェニルホスホランとカップリングさせることにより合成される。この化合物の調製は、フラン出発原料を適切な環状構造に置き換えることを除いて、トランスナトリウムクロセチネートに関してすでに列挙した調製と類似する。次に、この生成物をＫＯＨ／メタノール溶液を用いて鹸化する。
【実施例３】
【０１４４】
より長鎖のＢＴＣＳの合成
【化１９】
【０１４５】
上述の化合物は、共役炭素−炭素二重結合を含有する対称Ｃ２０ジアルデヒドを過剰の［３−カルボメトキシ−２−ブテン−１−イリデン］トリフェニルホスホランに添加することにより合成される。この化合物の調製は、フラン出発原料を適切な環状構造に置き換えることを除いて、トランスナトリウムクロセチネートに関してすでに列挙した調製と類似する。次に、トランス４０炭素生成物は、クロマトグラフィーのような方法を用いて単離される。次に、この生成物をＮＡＯＨ／メタノール溶液を用いて鹸化する。
【実施例４】
【０１４６】
吸入によるＴＳＣ
ＴＳＣを吸入経路によりラットに与えた。１０匹のラットには肺へ直接ＴＳＣを与えた。これは、気管にチューブを挿入し、空気約３〜６ＭＬとともにＴＳＣ溶液（希炭酸ナトリウム溶液中に溶解したＴＳＣ）０．２ＭＬを噴霧することにより行われた。研究した投与量すべて（０．５〜２ＭＧ／ＫＧ）に関して、薬剤の約２０％が、薬剤と施した１分後以内に血流に存在していた。８〜１．６ＭＧ／ＫＧの投与量に関して、薬剤は、少なくとも２時間血流に存在していた。
【実施例５】
【０１４７】
改良合成法
２−ブテニル−１，４−ビスホスホン酸テトラエチルの調製
【化２０】
【０１４８】
２５０ＭＬの３つ口フラスコにテフロン（登録商標）被覆熱電対、６０ＭＬ定圧添加漏斗および簡易蒸留ヘッドを装備した。窒素雰囲気下にて、１４０℃にてＪＫＥＭ制御計に接続させた加熱用マントルでニートのトリエチルホスフィン（５９ＭＬ、０．３４４ＭＯＬ）を加熱した。トランス−１，４−ジクロロ−２−ブテン（２６．９Ｇ、０．２１５ＭＯＬ）およびトリエチルホスフィン（３５ＭＬ、０．２０４ＭＯＬ）の溶液を１３４〜１４４℃で９３分間かけて滴下した。次に、透明溶液を窒素下にて１４０℃で維持した。３７分後、酢酸エチル１ＭＬ中の分取量（１滴）のガスクロマトグラフィにより所望の生成物、中間生成物および２つの出発原料が示された。
【０１４９】
１４０℃で１５．５時間後、分取量（ＥＴＯＡＣ ０．５ＭＬ中１滴）のガスクロマトグラフィにより、出発ジクロリドおよび中間体生成物は検出されずに所望の生成物が示された。１６時間後、淡黄色溶液を窒素下にて室温に冷却した。淡黄色オイルを２バルブ受け器およびドライアイス−アセトン浴中で冷却したさらなるバルブを備えたＫＵＧＥＬＲＯＨＲで２５〜１００℃および０．１〜０．２トルで蒸留して、無色オイル（１４．８Ｇ）を前部カットとして得た。ガスクロマトグラフィによりＫＵＧＥＬＲＯＨＲポット中に生成物のみが示された。この淡琥珀色オイルをＫＵＧＥＬＲＯＨＲで１４０℃および０．１〜０．１５トルで蒸留して、無色オイルとして留出物を得た：６６．４５Ｇ（収率９４．１％）。ガスクロマトグラフィによりたった１つの揮発性成分が示された。ＧＣ−ＭＳ分析により、この成分が所望の生成物であることが示され、３２８Ｍ／Ｚに小分子イオンおよび１９１Ｍ／Ｚにベースイオン（ＰＯ３ＥＴ２の損失）が得られた。プロトンＮＭＲは所望の生成物と一致した。カーボンＮＭＲもまた所望のビス（ホスホン酸ジエステル）と一致し、ロングレンジ（Ｗ−カップリング）およびアリル型カーボンへの正常炭素−リンカップリングのみを示した。
【０１５０】
ポット残渣−淡黄色オイル−０．８Ｇ。
【０１５１】
１，１，８，８−テトラメトキシ−２，７−ジメチル−２，４，６−オクタトリエンの調製
【化２１】
【０１５２】
窒素雰囲気下にて、トルエン１０ＭＬおよびシクロヘキサン１０ＭＬ中のトランス−２−ブテニル−１，４−ビスホスホン酸テトラエチル（３．３Ｇ、１０．０ＭＭＯＬ）、ピルビン酸アルデヒドジメチルアセタール（２．６ＭＬ、２１．５ＭＭＯＬ）の磁気的攪拌混合物を無水炭酸カリウム（１０．２Ｇ、７３．８ＭＭＯＬ）および粉末水酸化ナトリウム（１．２５Ｇ、３１．２ＭＭＯＬ）で順次処理した。溶液は瞬時に黄色になった。生じたスラリーを窒素下にて外気温で攪拌した。反応はゆっくりと発熱し、約２５分後に最大３８℃に到達した。また、ガム状沈殿物が形成され、これは磁気的攪拌にマイナスの影響を与えた。２．５時間後、黄橙色溶液の分取量（トルエン０．５ＭＬ中に１滴）のガスクロマトグラフィにより、２つの出発原料および３つの他の新規成分が示された。
【０１５３】
外気温で１６．７５時間後、橙色溶液の分取量（トルエン０．５ＭＬ中に１滴）のガスクロマトグラフィにより、少量の出発ビス（ホスホン酸ジエステル）のみが示された。ガム状物を伴う生じた橙色混合物（攪拌することができない）を氷浴中で冷却し、１０％ＮＡＣＬ水１００ＭＬでクエンチした。スパチュラを連動させることにより固形分をこの水溶液中に溶解した。次に、混合物を１：１のエーテル：ヘキサン２００ＭＬで抽出した。有機層を１０％ＮＡＣＬ水（２０ＭＬ）、続いて飽和食塩水（１００ＭＬ）で洗浄した。無色有機層をＮＡ２ＳＯ４で乾燥させた。ガスクロマトグラフィにより３つの主要な成分が示され、出発ビス（ホスホン酸ジエステル）は検出されなかった。薄相クロマトグラフィにより２つの主要なスポットおよび１つの少量のスポットが示された。ＮＡ２ＳＯ４を吸引濾別して、エーテルで洗浄した。濾液を３５℃にてロータリーエバポレータで濃縮して、無色オイル（１．８Ｇ）を得た。ＧＣ−ＭＳ分析により、３つの主要な揮発成分が異性体生成物であることが示され、２５６Ｍ／Ｚに分子イオンおよび７５Ｍ／Ｚにベースイオン［（ＭＥＯ）２ＣＨ＋］が得られた。プロトンＮＭＲもまた他の未確認不純物を伴った異性体生成物の混合物と一致した。粗製生成物の収率＝７０．３％。
【０１５４】
１，１，８，８−テトラメトキシ−２，７−ジメチル−２，４，６−オクタトリエンの調製
【化２２】
【０１５５】
窒素下にて、トルエン２００ＭＬおよびシクロヘキサン２００ＭＬ中のトランス−２−ブテニル−１，４−ビスホスホン酸テトラエチル（６３．２Ｇ、０．１９ＭＯＬ）、ピルビン酸アルデヒドジメチルアセタール（５０ＭＬ、０．４１ＭＯＬ）の機械的攪拌混合物を無水炭酸カリウム（１９６Ｇ、１．４２ＭＯＬ）および粉末水酸化ナトリウム（２４．０Ｇ、０．６０ＭＯＬ）で順次処理した。溶液は瞬時に黄色になった。生じたスラリーを窒素下にて外気温で攪拌した。反応は約１１分後に６１℃に発熱し、攪拌混合物を氷浴中で冷却して、温度を３５℃に下げた。２９〜３５℃で４．７時間後、分取量（トルエン０．５ＭＬ中に３滴）のガスクロマトグラフィにより、出発ビス（ホスホネート）が存在しないことが示された。５時間後、混合物を氷浴中で１３℃に冷却して、１０％塩化ナトリウム水４００ＭＬを添加し、その際温度は３０℃に上昇した。さらに１０％塩化ナトリウム水（１，５００ＭＬ）を添加し、混合物を１：１のエーテル：ヘキサン３，０００ＭＬで抽出した。薄黄色有機層を１０％塩化ナトリウム水（２×１，０００ＭＬ）、続いて飽和食塩水（１，０００ＭＬ）で洗浄した。薄黄色有機層をＮＡ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過して、３０℃にてロータリーエバポレータで濃縮して、淡黄色オイル（４３．４Ｇ）を得た。ガスクロマトグラフィにより、出発ビス（ホスホネート）は検出されずに混合物の８９％を含む３つの主要な成分が示された。ＴＬＣ分析により１つの主要な成分および３つの少量の成分が示された。
【０１５６】
プロトンＮＭＲにより異性体生成物とトルエンが示された。当該オイルをＫＵＧＥＬＲＯＨＲで５０℃および０．２トルにて３０分間さらに蒸発させた（３１．９Ｇ）。プロトンＮＭＲにより、トルエンは検出されずに異性体ビス（アセタール）生成物が示された。収率＝６５．５％。
【０１５７】
より高いペイロードでの２，７−ジメチル−２，４，６−オクタトリエンジアールの調製
【化２３】
【０１５８】
窒素雰囲気下にて、テトラヒドロフラン（１６０ＭＬ）、水（８０ＭＬ）および氷酢酸（３２０ＭＬ）中の粗製１，１，８，８−テトラメトキシ−２，７−ジメチル−２，４，６−オクタトリエン異性体（３１．９Ｇ、１２４．４ＭＭＯＬ）の磁気的攪拌溶液を、テフロン（登録商標）被覆熱電対によるＪＫＥＭ制御器で制御した加熱用マントルで４５℃にて加熱した。３０分後、混合物は最大５４℃に発熱し、続いて４５℃の設定温度に戻った。３時間後の分取量（ＴＨＦ０．５ＭＬ中に３滴）のガスクロマトグラフィにより、いくらか残留している出発原料、２つの主要な生成物および１つの少量の生成物が示された。黄色反応溶液を氷浴中で２１℃にまで冷却した後、４：１のエーテル：ジクロロメタン（２，０００ＭＬ）で希釈した。次に、この溶液を２０％ＮＡＣＬ水（２，０００ＭＬ×２）、４：１の２０％ＮＡＣＬ水：１Ｍ ＮＡＯＨ水（２，０００ＭＬ×３）１および２０％ＮＡＣＬ水（１，０００ＭＬ×２）で順次洗浄した。黄色有機層をＭＧＳＯ４で乾燥させ、濾過して、ロータリーエバポレータで濃縮して、黄色固体（１８．９Ｇ）を得た。ガスクロマトグラフィにより、１つの主要な成分および１つの少量の成分、出発ビス（アセタール）が示された。ＴＬＣ分析により１つの主要なスポットおよび数個の少量のより極性の高い不純物が示された。この固体を還流メタノール２５０ＭＬ中に溶解し、室温にまで冷却した後、１時間氷浴中で冷却した。スラリーを吸引濾過して、黄色綿様針状物質（１４．１５Ｇ）が得られた。ガスクロマトグラフィにより、異性体ジアルデヒドの９５：５の混合物が示された。この固体を還流メタノール２００ＭＬから再び再結晶させ、室温にまで冷却した後、一晩冷蔵庫で冷却した。
【０１５９】
１ 最初の２回の洗浄は、中性ＰＨにより明白である通り酢酸を除去したようであった。三度目の洗浄は赤くなり、依然として塩基性であり、生成物の除去をほのめかしていた。
【０１６０】
スラリーを吸引濾過して、冷蔵庫冷却したメタノールで洗浄して、黄色針状物質（１１．２Ｇ）を得た。ガスクロマトグラフィにより異性体ジアルデヒドの９７：３の混合物が示された。ＴＬＣ分析により１つのスポットが示された。針状物質を真空オーブン中で４５℃にて１６０分間、一定の重量（１０．７５Ｇ）になるまで乾燥させた。未補正ＭＰ＝１５４〜１５６℃。文献２ＭＰ＝１６１〜１６２℃。プロトンＮＭＲおよびカーボンＮＭＲは所望の対称アルデヒドと一致した。
【０１６１】
再結晶からの２つのメタノール濾液を併せた。薄相クロマトグラムにより生成物と他の不純物が示された。濾液を濃縮して、各種収穫物を以下に示すように収集した。
【表１】
【０１６２】
収穫物２＆３：これらの併せた収穫物を還流酢酸エチル２０ＭＬ中に溶解させ、室温にまで冷却した後、冷蔵庫で１時間置いた。スラリーを吸引濾過して、冷蔵庫冷却した酢酸エチルで洗浄して、黄色針状物質（１．９５Ｇ）を得た。ガスクロマトグラフィにより異性体の８６：１４の混合物が示された。この固体を再び酢酸エチル（１０ＭＬ）中で再結晶して、黄色針状物質（１．５５Ｇ）を得た。ガスクロマトグラフィにより９２：８の比の異性体が示された。酢酸エチル（１０ＭＬ）からの第３の再結晶により黄色針状物質（１．２５Ｇ）を得た。ＭＰ＝１５２〜１５４℃。ガスクロマトグラフィにより９６：４の異性体比が示された。プロトンＮＭＲにより所望のジアルデヒドと確認された。ＧＣ−ＭＳ分析は所望のジアルデヒドと一致し、１６４Ｍ／Ｚに顕著なＭ＋イオンおよび９１Ｍ／Ｚにベースイオンを示した。
【０１６３】
酢酸エチル濾液をメタノール濾液からの黄色固体（収穫物４）と併せて、ロータリーエバポレータで濃縮して、黄色固体（６．０Ｇ）を得た。ガスクロマトグラフィにより、他の不純物とともに２つの異性体の５３：３４の混合物が示された。
【０１６４】
２ DICTIONARY OF ORGANIC COMPOUNDS. VERSON 10:2, SEPT, 2002.
固体をジクロロメタン１００ＭＬ中に溶解して、ＤＡＶＩＳＩＬグレード６４３シリカゲル（３３．５Ｇ）を添加した。混合物を３５℃にてロータリーエバポレータで取り除いた。次に、吸着した物質を伴ったシリカゲルをＢＩＯＴＡＧＥ系用の試料導入モジュールに添加し、そこにはすでにガラスウールのプラグおよび砂の層が含まれていた。次に、シリカゲルにフィルター紙を乗せた。ＢＩＯＴＡＧＥ７５Ｓカラムを遠心圧３５ＰＳＩおよび溶媒圧２０ＰＳＩで予め溶媒混合物で湿らせた。カラムを８５：１５のヘキサン：酢酸エチル（６，０００ＭＬ）で溶出させた。前湿潤段階を含む何も含まれない容積１，０００ＭＬを採取した。２５０ＭＬの分画を収集し、薄相クロマトグラム分析に基づいて併せた。これらの分画を以下に示すようにロータリーエバポレータで３５℃にて濃縮した。
【表２】
【０１６５】
分画５〜１０：黄色固体をヘキサン中でスラリーとし、吸引濾過して、明黄色固体（２．５Ｇ）を得た。ガスクロマトグラフィにより６７：３３の比でジアルデヒド異性体の混合物が示された。
【０１６６】
総収率９６〜９７％。Ｅ，Ｅ，Ｅ−ジアルデヒド＝１０．７５＋１．２５＝１２．０Ｇ（収率５８．８％）。
【０１６７】
パラトルエンスルフィン酸による２，７−ジメチル−２，４，６−オクタトリエンジアールの異性化
【化２４】
【０１６８】
窒素雰囲気下にて、２，７−ジメチル−２，４，６−オクタトリエンジアールの２：１異性体混合物およびそのオフ異性体（２．５Ｇ、１５．２ＭＭＯＬ）、４−トルエンスルフィン酸（０．３５Ｇ、２．２ＭＭＯＬ）および無水１，４−ジオキサン５０ＭＬを還流下で１５分間加熱した。分取量（７滴）を４：１のエーテル：ジクロロメタン０．５ＭＬで希釈して、Ｋ２ＣＯ３で乾燥させた。ガスクロマトグラフィにより、所望の異性体およびオフ異性体の９１：９の混合物が示された。
【０１６９】
室温で一晩冷却した後、生じたスラリーを４：１のエーテル：ジクロロメタン１００ＭＬ中に溶解し、水（５０ＭＬ×３）、０．２Ｍ ＮＡＯＨ水（５０ＭＬ）、水（５０ＭＬ×２）および飽和食塩水（５０ＭＬ×３）で順次洗浄した。層を分離した後、残留ラグ層をジクロロメタンに溶解させた。併せた有機層をＭＧＳＯ４で乾燥させて、濾過して、ロータリーエバポレータで４０℃にて濃縮して、橙色固体（２．２Ｇ）を得た。ガスクロマトグラフィにより所望のジアルデヒド対オフ異性体の９３：７の比が示された。この固体をヘキサン中でスラリーとし、吸引濾過して、橙色固体（２．１５Ｇ）を得た。還流酢酸エチル２０ＭＬから、３０〜４０℃も冷却した後、冷蔵庫に１時間置くことによりこの固体を再結晶した。スラリーを吸引濾過して、冷蔵庫冷却した酢酸エチルで洗浄して、黄橙色針状物質（１．６５Ｇ）を得た。ＭＰ＝１５８〜１６０℃。文献ＭＰ＝１６１〜１６２℃。ガスクロマトグラフィにより所望のジアルデヒド対オフ異性体の９６：４の比が示された、プロトンＮＭＲおよびカーボンＮＭＲは所望のジアルデヒド異性体と一致した。収率＝６６％。
【０１７０】
メタノール中塩化チオニルを用いたチグリン酸メチルのスケールアップ調製
【化２５】
【０１７１】
メタノール３，０００ＭＬ中のチグリン酸（３９７．３５Ｇ、３．９７ＭＯＬ）の機械的攪拌溶液をニートの塩化チオニル（３９７ＭＬ、５．４４ＭＯＬ）で外部冷却せずに１３０分間かけて滴下処理し、その際温度は１４℃から８０分後には最大５０℃にまで上昇した。分取量のガスクロマトグラフィによりエステルへの完全な変換が示され、チグリン酸は検出されなかった。外気温で１時間攪拌した後、銀メッキした真空ジャケット付きＶＩＧＲＥＵＸカラム（４００ＭＭ×２０ＭＭ）を通して大気圧で溶液を蒸留した。ポット温度５８〜６３℃で、主として５７〜６１℃にて濃縮液を収集した（２時間で６３０ＭＬ）。ガスクロマトグラフィにより留出物中にかなりのメチルエステルが示された。
【０１７２】
ＶＩＧＲＥＵＸカラムをより効率の悪いカラム（３０×２ＣＭ Ｗ／刻み目がより小さい）と交換して、蒸留の速度を加速させた。６９〜７１℃のポット温度で、６５〜６９℃のヘッド温度を有する留出物を収集した（２．２５時間かけて１，３００ＭＬ）。
【０１７３】
ガスクロマトグラフィにより留出物中にかなりのメチルエステルが示された。ポット温度が８７℃に到達するまで大気圧蒸留を続け、６９〜８３℃のヘッド温度でこの期間中に留出物を収集した（２時間かけて９７５ＭＬ）。ガスクロマトグラフィにより初期の分画よりも留出物中にかなり多くのメチルエステルが示された。
【０１７４】
ポット中の黄色二相混合物をエーテル（３００＆２００ＭＬ）で抽出し、Ｋ２ＣＯ３で乾燥させ、濾過して、ロータリーエバポレータで２５℃にて濃縮して、橙色オイル（１３２．６Ｇ）（収率２９．３％）を得た。ガスクロマトグラフィにより生成物が示された。プロトンＮＭＲおよびカーボンＮＭＲはわずかなエチルエーテルを伴って所望の生成物と一致した。エーテル濃縮液のガスクロマトグラフィによりオーバーヘッド中にいくらかメチルエステルが示された。
【０１７５】
留出物３：第３のメタノール留出物（９７５ＭＬ）をロータリーエバポレータで２５℃にて濃縮して、二相混合物（１００〜１５０ＭＬ）を得た。この混合物をエーテル（１００＆５０ＭＬ）で抽出し、Ｋ２ＣＯ３で乾燥させた。
【０１７６】
留出物２：第２のメタノール留出物（１，３００ＭＬ）をロータリーエバポレータで２５℃にて濃縮して、二相混合物（３０〜５０ＭＬ）を得た。この混合物をエーテル（２×５０ＭＬ）で抽出し、Ｋ２ＣＯ３で乾燥させた。
【０１７７】
留出物２および留出物３に関する濃縮エーテル抽出物を併せて、吸引濾過して、ロータリーエバポレータで２５℃にて濃縮して、無色オイル（７７．３Ｇ）を得た。
【０１７８】
プロトンＮＭＲおよびカーボンＮＭＲは所望のメチルエステルのこれまでのスペクトルと合致した。
【０１７９】
総収量＝１３２．６＋７７．３＝２０９．９Ｇ（４６．３％）
あるいは、１）チグリン酸メチルは、ALFA, LANCASTERまたはACROS.から市販されており、２）パイロットはJOC, 64, 8051-8053(1999)によりパイロットを実施して、ホスホニウム塩を作製することができる。
【０１８０】
チグリン酸メチルの臭素化
【化２６】
【０１８１】
四塩化炭素２，０００ＭＬ中のチグリン酸メチル（２０９．９Ｇ、１．８４ＭＯＬ）およびＮ−ブロモサクシンイミド（３２７．５Ｇ、１．８４ＭＯＬ）、７０％過酸化ベンゾイル（３．２Ｇ、０．００９ＭＯＬ）の機械的攪拌スラリーを、５Ｌの反応フラスコと還流冷却管との間に１ＬのＫＵＧＥＬＲＯＨＲバルブを用いて加熱して還流させた（７８〜８１℃）。２時間後、還流を停止して、マントルを外して、スターラーを止めた。固形分はすべて、ＣＣＬ４溶液上に浮遊し、ないに等しいＮＢＳを伴うサクシンイミドを示唆した。スラリーを氷浴中で２０℃にまで冷却し、吸引濾過して、オフホワイト色固体（１８０．７Ｇ）を得た。洗浄はしなかった。黄色濾液を水（１Ｌ×３）で洗浄して、ＭＧＳＯ４で乾燥させた。ガスクロマトグラフィにより、他の少量の成分と一緒に出発チグリン酸メチルおよび２つのモノブロミドが１：２：１の比で示された。
【０１８２】
ＭＧＳＯ４を濾別した後、淡黄色濾液をロータリーエバポレータで３５℃にて濃縮して、淡黄色オイル（３２７．１Ｇ）を得た。プロトンＮＭＲおよびガスクロマトグラフィにより以下の組成が示唆された。
【表３】
【０１８３】
５０％アッセイ用に調節した所望の生成物の収率＝４６．０％
このオイルはそのまま次工程で使用する。
【０１８４】
わずかに高いペイロードでのアセトニトリル中のトリフェニルホスフィンを用いたγ−ブロモチグリン酸メチルのスケールアップ反応
【化２７】
【０１８５】
５Ｌの四つ口フラスコ中窒素雰囲気下にて、無水アセトニトリル１，３００ＭＬ中のγ−ブロモチグリン酸メチルの粗製混合物（３２２．６Ｇ、８５％アリル型ブロミド、１．４２ＭＯＬ）を機械的に攪拌した。
【０１８６】
酢酸エチル２，０００ＭＬ中のトリフェニルホスフィン（３８７．０Ｇ、１．４８ＭＯＬ）の溶液を４時間かけて滴下した。添加中、最初の７５分で約４０％を添加した後に温度は２２℃から最大３０℃に上昇した。１２０分かけてトリフェニルホスフィン溶液の６０％を添加した後に、溶液は濁るようになり、残部の添加により固体が沈殿し続けた。添加後、漏斗を酢酸エチル（６００ＭＬ）ですすいで、反応混合物に足した。クリームスラリーは週末の間外気温で攪拌した。
【０１８７】
白色スラリーを吸引濾過して、ケーキを２：１の酢酸エチル：アセトニトリル（１５０ＭＬ×３）で洗浄した。白色固体（３５２．５５Ｇ）を真空オーブン中で４０℃にて４時間乾燥させた（２時間後に一定重量）（３２２．５５Ｇ）。ＭＰ＝１８７〜１８８℃（ＤＥＣ）。文献ＭＰ＝１８３℃（ＤＥＣ）。プロトンＮＭＲおよびカーボンＮＭＲは所望のホスホニウム塩に関する従来のスペクトルと合致した。ＬＣ−ＭＳ分析により１つの主要成分が示され、その陽モードでのエレクトロスプレーマススペクトルは所望のホスホニウム塩と一致し、３７５Ｍ／Ｚに分子イオンを提供した。リンＮＭＲにより２２．０ＰＰＭに単一のリンシグナルが示された。
【０１８８】
出発チグリン酸メチルに基づいた収率＝１００×３２２．５５／（４５５．３２×１．８４×３２２．６／３２７．１）＝３９．０％。
【０１８９】
（３−カルボメトキシ−２−Ｚ−ブテン−１−イリデン）トリフェニルホスホランの調製
【化２８】
【０１９０】
脱イオン水３，４００ＭＬ中の（３−カルボメトキシ−２−Ｅ−ブテン−１−イリデン）トリフェニルホスホニウムブロミド（１５４．８Ｇ、０．３４ＭＯＬ）の機械的に攪拌したわずかなスラリーを、２３℃にて３２分間かけて水５００ＭＬ中の水酸化ナトリウム（１３．６Ｇ、０．３４ＭＯＬ）の溶液で滴下処理し、明白な発熱はなかったが、褐黄色固体の沈殿がすぐに見られた。１５分間攪拌した後、褐黄色スラリーを吸引濾過して、水（１，５００ＭＬ）で洗浄して、吸引乾燥させて、明黄色固体（１５１．７Ｇ）を得た。この固体を真空オーブン中で３５〜４５℃にて（午後３時５０分）一晩乾燥させた。
【０１９１】
真空オーブン中で３５〜４５℃にて２２．５時間乾燥させた後、一定重量が得られた（１０７．８Ｇ）。ＭＰ＝１４４〜１６０℃。文献ＭＰ＝１４５〜１６５℃。プロトンＮＭＲは、ＮＭＲ場強度における差異を考慮して、所望のイリドの従来のスペクトルに類似していた。カーボンＮＭＲにより、５０．２ＰＰＭおよび１１．８ＰＰＭにメチル炭素が示され、それは複雑な芳香族領域を伴い、オレフィン炭素およびイリド炭素に関する明白なシグナルは見られなかった。収率＝８４．７％。
【０１９２】
ジメチルクロセチネートのパイロット調製
【化２９】
【０１９３】
窒素雰囲気下にて、ベンゼン（１２８ＭＬ）中の（３−カルボメトキシ−２−Ｚ−ブテン−１−イリデン）トリフェニルホスホラン（１２．８Ｇ、３４．２ＭＭＯＬ）および２，７−ジメチル−２，４，６−オクタトリエンジアール（２．１Ｇ、１２．８ＭＭＯＬ）の磁気的攪拌混合物を加熱して、タイマーを使用して６時間還流させた。
【０１９４】
生じたスラリーを氷浴中で４０分間冷却して、吸引濾過して、ベンゼンで洗浄して、吸引乾燥させて、凍ったベンゼンを溶かして、赤色固体（２．１Ｇ）を得た。ＴＬＣ分析により単一の黄色いスポットが示された。この固体を真空オーブン中で４０〜４５℃にて７０分間乾燥させた（１．８５Ｇ（収率４０．５％））。未補正ＭＰ＝２１０〜２１３℃。文献３ＭＰ＝２１４〜２１６℃。プロトンＮＭＲは、９０ＭＨＺ計器でのジメチルクロセチンの従来のスペクトルに類似していた。カーボンＮＭＲにより残留ベンゼンである可能性がある１つの少量の不純物シグナルを伴って、所望のジメチルエステルに関する正確なケミカルシフトを有する１１個の特有のカーボンシグナルすべてが示された。エレクトロスプレーマススペクトルによりフラグメントの分解および再結合が示唆された。
【０１９５】
ＴＬＣ分析により、赤色濾液がさらなる生成物であるトリフェニルホスフィンオキシドおよび単離固体よりもわずかに低いＲＦを有する橙色成分を含有することが示された。赤色濾液をロータリーエバポレータで３５℃にて濃縮して、赤色固体（１３．２Ｇ）を得た。この固体をメタノール（２５ＭＬ）中で還流下にて加熱した。次に、生じたスラリーを氷浴中で冷却して、６０分後に吸引濾過して、メタノールで洗浄して、赤色固体（０．６Ｇ）を得た。この固体を真空オーブン中で４５℃にて１３５分間乾燥させた（０．５Ｇ）。ＭＰ＝２０３〜２０８℃。プロトンＮＭＲにより残留不純物を伴って所望のジエステルが示された。カーボンＮＭＲにより所望の生成物に関するシグナルのみが示された。ＴＬＣ分析により筋状の生成物スポットが示された。
【０１９６】
濾液を濃縮して、保管した。
【０１９７】
３ E. BUCHTA & F. ANDREE, CHEM BER, 93, 1349 (1960).
クロセチンのジメチルエステルの第２の調製
【化３０】
【０１９８】
窒素雰囲気下にて、２，７−ジメチル−２，４，６−オクタトリエンジアール（１１．９５Ｇ、１２．８ＭＭＯＬ）を、ベンゼン４００ＭＬ中の（３−カルボメトキシ−２−Ｚ−ブテン−１−イリデン）トリフェニルホスホラン（７３．０Ｇ、１９５．０ＭＭＯＬ）の機械的攪拌スラリーに一度に添加した後、ベンゼン３３０ＭＬを足した。得られた褐色スラリーを加熱してタイマーを使用して６時間還流させ、窒素下にて一晩室温に冷却した。
【０１９９】
生じたスラリーを氷浴中で６〜１０℃に冷却して、吸引濾過して、ベンゼン（５０ＭＬ×２）で洗浄して、赤色固体（１０．０５Ｇ）を得た。ＴＬＣ分析により単一の黄色いスポットが示された。この固体を真空オーブン中で４０℃にて（午後９時）３．５時間乾燥させ、質量損失はなかった（１０．０５Ｇ（収率３８．７％））。ＭＰ＝２１１〜２１４℃。文献ＭＰ＝２１４〜２１６℃。プロトンＮＭＲおよびカーボンＮＭＲは、クロセチンの所望のジメチルエステルに関する従来のスペクトルと合致した。
【０２００】
赤色濾液をロータリーエバポレータで４０℃にて濃縮し、赤色固体（８４．４Ｇ）を得た。ＴＬＣ分析は、パイロット実施に類似していた。この固体を還流下にて磁気的に攪拌しながらメタノール１６５ＭＬ中でスラリー状にした。次に、生じたスラリーを氷浴中で２．５時間冷却して、吸引濾過して、最少量のメタノールで洗浄して、橙色ペースト（１０．５Ｇ）を得た。ＴＬＣ分析により単一の黄色いスポットが得られた。このペーストを真空オーブン中で４５℃にて１９０分間乾燥させた（５．６Ｇ）。ＭＰ＝２０１〜２０８℃。ＮＭＲにより未知の芳香族不純物を伴って所望のジエステルが示された。
【０２０１】
この純粋でない固体および初期の実施からの２つの他の類似の固体（合計６．５Ｇ）を還流クロロホルム（７５ＭＬ）に溶解して、メタノールで希釈して、一晩冷蔵庫中で冷却した。
【０２０２】
スラリーを吸引濾過して、最少量のメタノールで洗浄して、赤色結晶固体（６．１Ｇ）を得た。この固体を真空オーブン中で４５℃にて３時間、一定重量になるまで乾燥した（４．２５Ｇ）。ＭＰ＝２１１〜２１３℃。プロトンＮＭＲおよびカーボンＮＭＲにより他のオレフィン系不純物または芳香族不純物が示された。当該固体を還流トルエン（１５０ＭＬ）中に溶解して、最終的には冷蔵庫中で１３０分間冷却した。スラリーを吸引濾過して、トルエンで洗浄して、赤色固体（２．０５Ｇ）を得た。この固体を真空オーブン中で４５℃にて５０分間乾燥させ、重量変化は見られなかった（２．０５Ｇ）。ＭＰ＝２１４〜２１６℃。プロトンＮＭＲによりいくらかの残留トルエンおよびないに等しいオフ異性体不純物を伴って所望のジメチルクロセチンが示された。カーボンＮＭＲにより所望のジメチルクロセチンが示され、オフ異性体不純物は検出不可能であり、トルエンと一致する２〜３個の新規残留シグナルが存在した。収率＝４５．５％。
【０２０３】
クロセチンの二ナトリウム塩の調製
【化３１】
【０２０４】
ジメチルクロセチン（１３．９５Ｇ、３９．１ＭＭＯＬ）および４０重量％水酸化ナトリウム水（２７３ＭＬ、３．９１５ＭＯＬ）およびメタノール（３９１ＭＬ）の機械的攪拌スラリーを還流下で７４℃にてタイマーを使用して１２時間加熱した。
【０２０５】
フィルター紙を備えたブフナー漏斗およびガラス漏斗に通して橙色スラリーを吸引濾過した。ゆっくり濾過した４。ガラス漏斗中のスラリーをブフナー漏斗中の固体に添加した。橙色ペーストを水（１００ＭＬ×３）、続いてメタノール（５０ＭＬ×３）で洗浄した。橙色ペーストを真空オーブン中で４５〜５０℃にて乾燥させた。
【０２０６】
４ 乾燥しきった後にフィルターが詰まるまでガラス濾過を通してより迅速に濾過した。しかしながら、水洗浄によりフィルターの詰まりが除かれた。
【０２０７】
２１時間後、橙色塊は２４．２５Ｇの重量になった。当該物質をスパチュラで粉砕して、真空オーブン中で４５〜５０℃にて乾燥させた。
【０２０８】
合計６５．５時間の乾燥の後、橙色粉末の量は２３．１Ｇだった。赤外スペクトルによりＴＳＣの報告されているＩＲスペクトルと比較して余分のバンド、特に３４２４および１４４４ＣＭ−１に大きなバンドが示された。プロトンＮＭＲによりメチルエステルの徴候は示されなかった。しかしながら、オレフィン領域およびメチル領域の積分値は、おそらく整相問題に起因して外れていた。
【０２０９】
過剰重量は水酸化ナトリウムに起因すると仮定して、橙色固体を脱イオン水４００ＭＬ中で３５分間磁気的に攪拌した。スラリーを吸引濾過して、ケーキを脱イオン水（５０ＭＬ×２）で洗浄して、橙色ペーストを得た。この物質を真空オーブン中で４５〜５０℃にて一定重量になるまで乾燥させた。約７時間後、当該固体を圧搾して、粉砕して、さらに真空オーブン中で４５℃にて一晩乾燥させた。
【０２１０】
４５℃で２１時間乾燥した後、固体量は１３．２５Ｇだった。さらに粉砕して、真空オーブン中で４５℃にて乾燥させた後、固体量は１３．１５Ｇだった。赤外スペクトルは報告されているＩＲスペクトルと一致した。プロトンＮＭＲは二ナトリウム塩と一致するプロトンＮＭＲスペクトルが得られた。ＨＰＬＣ分析により、おそらく１つの少量の不純物を伴って１つの主要な成分が示された。主要成分のエレクトロスプレー陰イオンマススペクトルはクロセチンの所望の二ナトリウム塩と一致した。カーボンＮＭＲにより、クロセチンの二ナトリウム塩に関する１０個すべての特有のカーボンシグナルが示され、分子の対称性が確証された。
【０２１１】
水、水酸化ナトリウムおよびメタノールのもとの濾液は水洗浄中にさらに固体を沈殿させた。このスラリーを吸引濾過して、水で洗浄して、橙色ペーストを得た。このペーストを真空オーブン中で４５℃にて１８．５時間乾燥させて、橙色固体（０．６５Ｇ）を得た。スペクトルデータは、クロセチンの所望の二ナトリウム塩と一致した。この固体を第１の収穫物と併せた。収率＝１３．１５＋０．６５＝１３．８Ｇ（９４．８％）。
【０２１２】
第１の収穫物の元素分析により、所望の生成物に関する許容できない値が示され、クロセチンの二ナトリウム塩に水酸化ナトリウムが混入していることが示唆された。
【０２１３】
クロセチンの二ナトリウム塩の水洗浄
クロセチンの二ナトリウム塩（１３．６Ｇ）を脱イオン水１５０ＭＬ中でスラリー状にし、室温で１時間磁気的に攪拌した。スラリーをブフナー漏斗上へと吸引濾過した。次に、橙色ペーストを水で洗浄して、橙色濾液のＰＨをモニタリングした。
【０２１４】
橙色のペーストをラバーダムでフィルター上で吸引乾燥した。このペーストを２５〜５５℃にて５．５時間、真空乾燥させて脆い橙色固体（１１．２Ｇ）を得た。この固体を粉砕して、ボトルに移し、真空オーブン中で４５℃にて一晩乾燥させた。
【０２１５】
量＝１１．１Ｇ。回収率＝８１．６％。ＩＲおよびプロトンＮＭＲスペクトルは、クロセチンの所望の二ナトリウム塩の従来のＩＲおよびプロトンＮＭＲスペクトルと合致した。ＨＰＬＣ分析により４２０ＮＭで単一成分が示され、その陰イオンモードでのエレクトロスプレーマススペクトルはクロセチンと一致した。
【０２１６】
カーボンＮＭＲにより、クロセチンの所望の二ナトリウム塩に関する正確なケミカルシフトを有する１０個すべての特有のカーボンシグナルが示された。元素分析により所望の生成物に関する許容可能なデータが得られた。
【０２１７】
参照文献
１．TETRAHEDRON LETTERS, 27, 4983-4986 (1986)。
【０２１８】
２．F.J.H.M. JANSEN, M. KWESTRO, D. SCHMITT & J. LUGTENBURG. RECL. TRAV. CHEM. PAYS-BAS, 113, 552-562 (1994)およびそこで引用された参照文献。
【０２１９】
３．J.H. BABLER、米国特許第４，１０７，０３０号（１９９２年４月２１日）。
【０２２０】
４．T.W. GIBSON & P. STRASSBURGER, J. ORG. CHEM., 41, 791 (1976) & J.M. SNYDER & C.R. SCHOLFIELD, J. AM. OIL CHEM. SOC., 59, 469 (1982)。
【実施例６】
【０２２１】
改良合成方法に従って作製されるＴＳＣの純度測定
実施例５の方法に従って合成したＴＳＣ物質に関して、４２１ＮＭの吸光度対２５４ＮＭの吸光度の比は、ＵＶ−可視分光光度計を用いて１１．１であった。
【実施例７】
【０２２２】
ＴＳＣの経口投与
ＴＳＣは、経口的に（胃管による技法）投与すると血流に吸収されることがラットで示されている。２匹のラットにおいて、与えた投与量の１〜２％が、付与後１５〜３０分時点で血流に存在することがわかった。実際に経口的に吸収された最大量は、その時点よりも初期に起こった。
【０２２３】
開示する本発明を逸脱することなく、本発明の化合物および組成物の両方、ならびに関連方法に対して、数多くの変更および付け足しがなされ得ることが当業者には容易に明らかであろう。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記構造を有する化合物であって、ＴＳＣでない化合物：
ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
式中、
Ｙ＝カチオン、
Ｚ＝前記カチオンと会合される極性基、および
ＴＣＲＯ＝トランスカロテノイド骨格
である。
【請求項２】
Ｙは、ＮＡ＋、Ｋ＋、ＬＩ＋からなる群から選択される一価の金属イオン、またはＲ４Ｎ＋、Ｒ３Ｓ＋（式中、ＲはＨ、またはＣＮＨ２Ｎ＋１（ここで、Ｎは１〜１０である）である）からなる群から選択される有機カチオンである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｚは、カルボキシル（ＣＯＯ−）基、スルフェート基（ＯＳＯ３−）もしくはモノホスフェート基（ＯＰＯ３−）、（ＯＰ（ＯＨ）Ｏ２−）、ジホスフェート基、トリホスフェート基またはそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
ＴＣＲＯは、炭素原子を含有する共役炭素−炭素二重結合および単結合であり、炭素−炭素二重結合を取り巻く４つの単結合はすべて同じ平面に存在し、前記化合物は線状である、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
ＴＣＲＯが次式で表される、請求項１に記載の化合物：
【化１】
式中、
同じであっても異なってもよいＸは、Ｈ、任意にハロゲンを含有する１０個以下の炭素を有する線状もしくは分岐状基、またはハロゲンである。
【請求項６】
ＴＣＲＯが次式で表される、請求項１に記載の化合物：
【化２】
式中、
同じであっても異なってもよいＸは、Ｈ、任意にハロゲンを含有する１０個以下の炭素を有する線状もしくは分岐状基、またはハロゲンである。
【請求項７】
ＴＣＲＯが次式で表される、請求項１に記載の化合物：
【化３】
式中、
同じであっても異なってもよいＸは、Ｈ、任意にハロゲンを含有する１０個以下の炭素を有する線状もしくは分岐状基、またはハロゲンである。
【請求項８】
ＴＣＲＯが次式で表される、請求項１に記載の化合物：
【化４】
式中、
同じであっても異なってもよいＸは、Ｈ、任意にハロゲンを含有する１０個以下の炭素を有する線状もしくは分岐状基、またはハロゲンである。
【請求項９】
下記構造を有するＢＴＣＳを可溶化させる方法であって：
ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
（式中、Ｙ＝カチオン、
Ｚ＝前記カチオンと会合される極性基、および
ＴＣＲＯ＝トランスカロテノイド骨格）
該方法は、
Ａ）炭酸ナトリウムまたは炭酸水素ナトリウムの希釈溶液を調製する工程と、
Ｂ）前記希釈溶液を脱イオン水に添加して、ＰＨを７以上に上げる工程と、
Ｃ）ＢＴＣＳを工程Ｂ）の溶液に添加する工程と
を含む方法。
【請求項１０】
下記構造を有するＢＴＣＳを可溶化させる方法であって：
ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
（式中、Ｙ＝カチオン、
Ｚ＝前記カチオンと会合される極性基、および
ＴＣＲＯ＝トランスカロテノイド骨格）
該方法は、
Ａ）ＢＴＣＳを生理食塩水溶液に添加する工程と、
Ｂ）未溶解物質を除去する工程と
を含む方法。
【請求項１１】
下記構造を有するＢＴＣＳを可溶化させる方法であって：
ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
（式中、Ｙ＝カチオン、
Ｚ＝前記カチオンと会合される極性基、および
ＴＣＲＯ＝トランスカロテノイド骨格）
該方法は、
Ａ）塩基を水に添加して塩基性溶液を作製する工程と、
Ｃ）ＢＴＣＳを前記溶液に添加する工程と
を含む方法。
【請求項１２】
下記構造を有するＢＴＣＳを可溶化させる方法であって：
ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
（式中、Ｙ＝カチオン、
Ｚ＝前記カチオンと会合される極性基、および
ＴＣＲＯ＝トランスカロテノイド骨格）
該方法は、
Ａ）脱塩水を調製する工程、
Ｂ）ＢＴＣＳを工程Ａ）の溶液に添加する工程
を含む方法。
【請求項１３】
前記化合物がトランスナトリウムクロセチネートである、請求項９、１０、１１または１２に記載の方法。
【請求項１４】
哺乳類において酸素の拡散率を増加させる方法であって、哺乳類に治療上有効な量の次式を有する化合物を投与することを含み、該化合物がＴＳＣでない方法：
ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
式中、
Ｙ＝カチオン、
Ｚ＝前記カチオンと会合される極性基、および
ＴＣＲＯ＝トランスカロテノイド骨格
である。
【請求項１５】
前記投与が吸入によるものである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
呼吸疾患を治療する方法であって、治療を必要とする哺乳類に治療上有効な量の次式を有する化合物を投与することを含み、該化合物がＴＳＣでない方法：
ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
式中、
Ｙ＝カチオン、
Ｚ＝前記カチオンと会合される極性基、および
ＴＣＲＯ＝トランスカロテノイド骨格）
である。
【請求項１７】
気腫を治療する方法であって、治療を必要とする哺乳類に治療上有効な量の次式を有する化合物を投与することを含み、該化合物がＴＳＣでない方法：
ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
式中、
Ｙ＝カチオン、
Ｚ＝前記カチオンと会合される極性基、および
ＴＣＲＯ＝トランスカロテノイド骨格
である。
【請求項１８】
出血性ショックを治療する方法であって、治療を必要とする哺乳類に治療上有効な量の次式を有する化合物を投与することを含み、該化合物がＴＳＣでない方法：
ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
式中、
Ｙ＝カチオン、
Ｚ＝前記カチオンと会合される極性基、および
ＴＣＲＯ＝トランスカロテノイド骨格
である。
【請求項１９】
心血管疾患を治療する方法であって、治療を必要とする哺乳類に治療上有効な量の次式を有する化合物を投与することを含み、該化合物がＴＳＣでない方法：
ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
式中、
Ｙ＝カチオン、
Ｚ＝前記カチオンと会合される極性基、および
ＴＣＲＯ＝トランスカロテノイド骨格
である。
【請求項２０】
アテローム性動脈硬化症を治療する方法であって、治療を必要とする哺乳類に治療上有効な量の次式を有する化合物を投与することを含み、該化合物がＴＳＣでない方法：
ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
式中、
Ｙ＝カチオン、
Ｚ＝前記カチオンと会合される極性基、および
ＴＣＲＯ＝トランスカロテノイド骨格
である。
【請求項２１】
喘息を治療する方法であって、治療を必要とする哺乳類に治療上有効な量の次式を有する化合物を投与することを含み、前記化合物がＴＳＣでない方法：
ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
式中、
Ｙ＝カチオン、
Ｚ＝前記カチオンと会合される極性基、および
ＴＣＲＯ＝トランスカロテノイド骨格
である。
【請求項２２】
脊髄障害を治療する方法であって、治療を必要とする哺乳類に治療上有効な量の次式を有する化合物を投与することを含み、該化合物がＴＳＣでない方法：
ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
式中、
Ｙ＝カチオン、
Ｚ＝前記カチオンと会合される極性基、および
ＴＣＲＯ＝トランスカロテノイド骨格
である。
【請求項２３】
脳水腫を治療する方法であって、治療を必要とする哺乳類に治療上有効な量の次式を有する化合物を投与することを含み、前記化合物がＴＳＣでない方法：
ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
式中、
Ｙ＝カチオン、
Ｚ＝前記カチオンと会合される極性基、および
ＴＣＲＯ＝トランスカロテノイド骨格
である。
【請求項２４】
乳頭腫を治療する方法であって、治療を必要とする哺乳類に治療上有効な量の次式を有する化合物を投与することを含み、該化合物がＴＳＣでない方法：
ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
式中、
Ｙ＝カチオン、
Ｚ＝前記カチオンと会合される極性基、および
ＴＣＲＯ＝トランスカロテノイド骨格
である。
【請求項２５】
低酸素症を治療する方法であって、治療を必要とする哺乳類に治療上有効な量の次式を有する化合物を投与することを含み、該化合物がＴＳＣでない方法：
ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
式中、
Ｙ＝カチオン、
Ｚ＝前記カチオンと会合される極性基、および
ＴＣＲＯ＝トランスカロテノイド骨格
である。
【請求項２６】
次式を有するＢＴＣＳ化合物を合成する方法であって：
ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
（式中、Ｙ＝カチオン、
Ｚ＝前記カチオンと会合される極性基、および
ＴＣＲＯ＝トランスカロテノイド骨格）
該方法は、
Ａ）共役炭素−炭素二重結合を含有する対称ジアルデヒドを、トリフェニルホスホランとカップリングさせる工程と、
Ｂ）工程Ａ）の生成物を鹸化する工程と
を含む方法。
【請求項２７】
工程Ａ）のカップリングが、［３−カルボメトキシ−２−ブテン−１−イリデン］トリフェニルホスホランを用いて行われる、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
工程Ａ）の生成物が、ＮＡＯＨとメタノールの溶液を用いて鹸化される、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
工程Ａ）の後に、カップリング反応の所望の生成物を単離する工程が行われる、請求項２６に記載の方法。
【請求項３０】
共役炭素−炭素二重結合を含有する対称ジエステルを鹸化して、ＢＴＣＳを形成する方法であって：
Ａ）共役炭素−炭素二重結合を含有する対称ジエステルを、メタノール、エタノール、プロパノールおよびイソプロパノールからなる群から選択される化合物で可溶化させる工程と、
Ｂ）工程Ａ）の溶液を塩基と混合する工程と
を含む方法。
【請求項３１】
前記塩基がＮＡＯＨ、ＫＯＨおよびＬＩＯＨからなる群から選択される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記ジエステルがメタノールおよびＮＡＯＨを用いて鹸化される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３３】
請求項２６に従って合成されたＢＴＣＳ化合物。
【請求項３４】
可視波長に見られる最高ピークの吸光度をＵＶ波長範囲に見られるピーク吸光度で除算した値が、８．５より大きいＢＴＣＳ化合物。
【請求項３５】
可視波長に見られる最高ピークの吸光度をＵＶ波長範囲に見られるピーク吸光度で除算した値が、８．５より大きいＴＳＣ化合物。
【請求項３６】
哺乳類において酸素の拡散率を増加させる方法であって、哺乳類に治療上有効な量のＢＴＣＳを投与することを含み、該ＢＴＣＳは、可視波長範囲に見られる最高ピーク吸光度をＵＶ波長範囲に見られるピーク吸光度で除算した値が８．５より大きい方法。
【請求項３７】
気腫を治療する方法であって、哺乳類に治療上有効な量のＢＴＣＳを投与することを含み、該ＢＴＣＳは、可視波長範囲に見られる最高ピーク吸光度をＵＶ波長範囲に見られるピーク吸光度で除算した値が８．５より大きい方法。
【請求項３８】
出血性ショックを治療する方法であって、哺乳類に治療上有効な量のＢＴＣＳを投与することを含み、該ＢＴＣＳは、ＵＶ波長範囲に見られるピークの吸光度で除算した可視波長に見られる最高ピーク吸光度の値が８．５より大きい方法。
【請求項３９】
前記ＢＴＣＳがＴＳＣである、請求項３６、３７または３８に記載の方法。
【請求項４０】
哺乳類において酸素の拡散率を増加させる方法であって、吸入により、哺乳類に治療上有効な量のＴＳＣを投与することを含む方法。
【請求項４１】
下記構造を有するＢＴＣＳ化合物を含有する吸入器：
ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
式中、
Ｙ＝カチオン、
Ｚ＝前記カチオンと会合される極性基、および
ＴＣＲＯ＝トランスカロテノイド骨格
である。
【請求項４２】
前記ＢＴＣＳ化合物がＴＳＣである、請求項４０に記載の吸入器。
【請求項４３】
オレフィン系ジアルデヒドの異性体混合物をオールトランスアルデヒドに変換する方法であって、前記ジアルデヒドの異性体混合物を溶媒中においてスルフィン酸で異性化することを含む方法。
【請求項４４】
前記スルフィン酸が、式ＲＳＯ２Ｈ（式中、Ｒは、Ｃ１〜Ｃ１０の直鎖もしくは分岐アルキル基またはアリール基である）を有する、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記溶媒が１，４−ジオキサン、テトラヒドロフラン、またはジアルキルエーテル（ここで、アルキル基は、Ｃ１〜Ｃ１０の直鎖または分岐アルキル基である）からなる群から選択される、請求項４３に記載の方法。
【請求項４６】
前記スルフィン酸がパラトルエンスルフィン酸であり、前記溶媒が１，４−ジオキサンである、請求項４３に記載の方法。
【請求項４７】
前記オレフィン系ジアルデヒドが２，７−ジメチル−２，４，６−オクタトリエンジアールである、請求項４３に記載の方法。
【請求項４８】
前記オレフィン系ジアルデヒドが２，７−ジメチル−２，４，６−オクタトリエンジアールであり、前記スルフィン酸がパラトルエンスルフィン酸であり、前記溶媒が１，４−ジオキサンである、請求項４３に記載の方法。
【請求項４９】
虚血を治療する方法であって、治療を必要とする哺乳類に治療上有効な量の次式を有する化合物を投与することを含み、該化合物がＴＳＣでない方法：
ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
式中、
Ｙ＝カチオン、
Ｚ＝前記カチオンと会合される極性基、および
ＴＣＲＯ＝トランスカロテノイド骨格
である。
【請求項５０】
外傷性脳損傷を治療する方法であって、治療を必要とする哺乳類に治療上有効な量の次式を有する化合物を投与することを含み、該化合物がＴＳＣでない方法：
ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
式中、
Ｙ＝カチオン、
Ｚ＝前記カチオンと会合される極性基、および
ＴＣＲＯ＝トランスカロテノイド骨格
である。
【請求項５１】
哺乳類の動作を高める方法であって、前記哺乳類に治療上有効な量の次式を有する化合物を投与することを含む方法：
ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
式中、
Ｙ＝カチオン、
Ｚ＝前記カチオンと会合される極性基、および
ＴＣＲＯ＝トランスカロテノイド骨格
である。
【請求項５２】
糖尿病合併症を治療する方法であって、治療を必要とする哺乳類に治療上有効な量の次式を有する化合物を投与することを含む方法：
ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
式中、
Ｙ＝カチオン、
Ｚ＝前記カチオンと会合される極性基、および
ＴＣＲＯ＝トランスカロテノイド骨格
である。
【請求項５３】
アルツハイマー病を治療する方法であって、治療を必要とする哺乳類に治療上有効な量の次式を有する化合物を投与することを含む方法：
ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
式中、
Ｙ＝カチオン、
Ｚ＝前記カチオンと会合される極性基、および
ＴＣＲＯ＝トランスカロテノイド骨格
である。
【請求項５４】
哺乳類において虚血を治療する方法であって、哺乳類に治療上有効な量のＢＴＣＳを投与することを含み、該ＢＴＣＳは、可視波長で見られる最高ピーク吸光度をＵＶ波長範囲で見られるピーク吸光度で除算した値が８．５より大きい方法。
【請求項５５】
外傷性脳損傷を治療する方法であって、治療を必要とする哺乳類に治療上有効な量のＢＴＣＳを投与することを含み、該ＢＴＣＳは、可視波長で見られる最高ピーク吸光度をＵＶ波長範囲で見られるピーク吸光度で除算した値が８．５より大きい方法。
【請求項５６】
哺乳類において動作を高める方法であって、哺乳類に有効な量のＢＴＣＳを投与することを含み、該ＢＴＣＳは、可視波長で見られる最高ピーク吸光度をＵＶ波長範囲で見られるピーク吸光度で除算した値が８．５より大きい方法。
【請求項５７】
糖尿病を治療する方法であって、治療を必要とする哺乳類に治療上有効な量のＢＴＣＳを投与することを含み、該ＢＴＣＳは、可視波長で見られる最高ピーク吸光度をＵＶ波長範囲で見られるピーク吸光度で除算した値が８．５より大きい方法。
【請求項５８】
アルツハイマー病を治療する方法であって、治療を必要とする哺乳類に治療上有効な量のＢＴＣＳを投与することを含み、該ＢＴＣＳは、可視波長で見られる最高ピーク吸光度をＵＶ波長範囲で見られるピーク吸光度で除算した値が８．５より大きい方法。
【請求項５９】
前記ＢＴＣＳがＴＳＣである、請求項５４、５５、５６、５７または５８に記載の方法。
【請求項１】
下記構造を有する化合物であって、ＴＳＣでない化合物：
ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
式中、
Ｙ＝カチオン、
Ｚ＝前記カチオンと会合される極性基、および
ＴＣＲＯ＝トランスカロテノイド骨格
である。
【請求項２】
Ｙは、ＮＡ＋、Ｋ＋、ＬＩ＋からなる群から選択される一価の金属イオン、またはＲ４Ｎ＋、Ｒ３Ｓ＋（式中、ＲはＨ、またはＣＮＨ２Ｎ＋１（ここで、Ｎは１〜１０である）である）からなる群から選択される有機カチオンである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｚは、カルボキシル（ＣＯＯ−）基、スルフェート基（ＯＳＯ３−）もしくはモノホスフェート基（ＯＰＯ３−）、（ＯＰ（ＯＨ）Ｏ２−）、ジホスフェート基、トリホスフェート基またはそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
ＴＣＲＯは、炭素原子を含有する共役炭素−炭素二重結合および単結合であり、炭素−炭素二重結合を取り巻く４つの単結合はすべて同じ平面に存在し、前記化合物は線状である、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
ＴＣＲＯが次式で表される、請求項１に記載の化合物：
【化１】
式中、
同じであっても異なってもよいＸは、Ｈ、任意にハロゲンを含有する１０個以下の炭素を有する線状もしくは分岐状基、またはハロゲンである。
【請求項６】
ＴＣＲＯが次式で表される、請求項１に記載の化合物：
【化２】
式中、
同じであっても異なってもよいＸは、Ｈ、任意にハロゲンを含有する１０個以下の炭素を有する線状もしくは分岐状基、またはハロゲンである。
【請求項７】
ＴＣＲＯが次式で表される、請求項１に記載の化合物：
【化３】
式中、
同じであっても異なってもよいＸは、Ｈ、任意にハロゲンを含有する１０個以下の炭素を有する線状もしくは分岐状基、またはハロゲンである。
【請求項８】
ＴＣＲＯが次式で表される、請求項１に記載の化合物：
【化４】
式中、
同じであっても異なってもよいＸは、Ｈ、任意にハロゲンを含有する１０個以下の炭素を有する線状もしくは分岐状基、またはハロゲンである。
【請求項９】
下記構造を有するＢＴＣＳを可溶化させる方法であって：
ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
（式中、Ｙ＝カチオン、
Ｚ＝前記カチオンと会合される極性基、および
ＴＣＲＯ＝トランスカロテノイド骨格）
該方法は、
Ａ）炭酸ナトリウムまたは炭酸水素ナトリウムの希釈溶液を調製する工程と、
Ｂ）前記希釈溶液を脱イオン水に添加して、ＰＨを７以上に上げる工程と、
Ｃ）ＢＴＣＳを工程Ｂ）の溶液に添加する工程と
を含む方法。
【請求項１０】
下記構造を有するＢＴＣＳを可溶化させる方法であって：
ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
（式中、Ｙ＝カチオン、
Ｚ＝前記カチオンと会合される極性基、および
ＴＣＲＯ＝トランスカロテノイド骨格）
該方法は、
Ａ）ＢＴＣＳを生理食塩水溶液に添加する工程と、
Ｂ）未溶解物質を除去する工程と
を含む方法。
【請求項１１】
下記構造を有するＢＴＣＳを可溶化させる方法であって：
ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
（式中、Ｙ＝カチオン、
Ｚ＝前記カチオンと会合される極性基、および
ＴＣＲＯ＝トランスカロテノイド骨格）
該方法は、
Ａ）塩基を水に添加して塩基性溶液を作製する工程と、
Ｃ）ＢＴＣＳを前記溶液に添加する工程と
を含む方法。
【請求項１２】
下記構造を有するＢＴＣＳを可溶化させる方法であって：
ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
（式中、Ｙ＝カチオン、
Ｚ＝前記カチオンと会合される極性基、および
ＴＣＲＯ＝トランスカロテノイド骨格）
該方法は、
Ａ）脱塩水を調製する工程、
Ｂ）ＢＴＣＳを工程Ａ）の溶液に添加する工程
を含む方法。
【請求項１３】
前記化合物がトランスナトリウムクロセチネートである、請求項９、１０、１１または１２に記載の方法。
【請求項１４】
哺乳類において酸素の拡散率を増加させる方法であって、哺乳類に治療上有効な量の次式を有する化合物を投与することを含み、該化合物がＴＳＣでない方法：
ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
式中、
Ｙ＝カチオン、
Ｚ＝前記カチオンと会合される極性基、および
ＴＣＲＯ＝トランスカロテノイド骨格
である。
【請求項１５】
前記投与が吸入によるものである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
呼吸疾患を治療する方法であって、治療を必要とする哺乳類に治療上有効な量の次式を有する化合物を投与することを含み、該化合物がＴＳＣでない方法：
ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
式中、
Ｙ＝カチオン、
Ｚ＝前記カチオンと会合される極性基、および
ＴＣＲＯ＝トランスカロテノイド骨格）
である。
【請求項１７】
気腫を治療する方法であって、治療を必要とする哺乳類に治療上有効な量の次式を有する化合物を投与することを含み、該化合物がＴＳＣでない方法：
ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
式中、
Ｙ＝カチオン、
Ｚ＝前記カチオンと会合される極性基、および
ＴＣＲＯ＝トランスカロテノイド骨格
である。
【請求項１８】
出血性ショックを治療する方法であって、治療を必要とする哺乳類に治療上有効な量の次式を有する化合物を投与することを含み、該化合物がＴＳＣでない方法：
ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
式中、
Ｙ＝カチオン、
Ｚ＝前記カチオンと会合される極性基、および
ＴＣＲＯ＝トランスカロテノイド骨格
である。
【請求項１９】
心血管疾患を治療する方法であって、治療を必要とする哺乳類に治療上有効な量の次式を有する化合物を投与することを含み、該化合物がＴＳＣでない方法：
ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
式中、
Ｙ＝カチオン、
Ｚ＝前記カチオンと会合される極性基、および
ＴＣＲＯ＝トランスカロテノイド骨格
である。
【請求項２０】
アテローム性動脈硬化症を治療する方法であって、治療を必要とする哺乳類に治療上有効な量の次式を有する化合物を投与することを含み、該化合物がＴＳＣでない方法：
ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
式中、
Ｙ＝カチオン、
Ｚ＝前記カチオンと会合される極性基、および
ＴＣＲＯ＝トランスカロテノイド骨格
である。
【請求項２１】
喘息を治療する方法であって、治療を必要とする哺乳類に治療上有効な量の次式を有する化合物を投与することを含み、前記化合物がＴＳＣでない方法：
ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
式中、
Ｙ＝カチオン、
Ｚ＝前記カチオンと会合される極性基、および
ＴＣＲＯ＝トランスカロテノイド骨格
である。
【請求項２２】
脊髄障害を治療する方法であって、治療を必要とする哺乳類に治療上有効な量の次式を有する化合物を投与することを含み、該化合物がＴＳＣでない方法：
ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
式中、
Ｙ＝カチオン、
Ｚ＝前記カチオンと会合される極性基、および
ＴＣＲＯ＝トランスカロテノイド骨格
である。
【請求項２３】
脳水腫を治療する方法であって、治療を必要とする哺乳類に治療上有効な量の次式を有する化合物を投与することを含み、前記化合物がＴＳＣでない方法：
ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
式中、
Ｙ＝カチオン、
Ｚ＝前記カチオンと会合される極性基、および
ＴＣＲＯ＝トランスカロテノイド骨格
である。
【請求項２４】
乳頭腫を治療する方法であって、治療を必要とする哺乳類に治療上有効な量の次式を有する化合物を投与することを含み、該化合物がＴＳＣでない方法：
ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
式中、
Ｙ＝カチオン、
Ｚ＝前記カチオンと会合される極性基、および
ＴＣＲＯ＝トランスカロテノイド骨格
である。
【請求項２５】
低酸素症を治療する方法であって、治療を必要とする哺乳類に治療上有効な量の次式を有する化合物を投与することを含み、該化合物がＴＳＣでない方法：
ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
式中、
Ｙ＝カチオン、
Ｚ＝前記カチオンと会合される極性基、および
ＴＣＲＯ＝トランスカロテノイド骨格
である。
【請求項２６】
次式を有するＢＴＣＳ化合物を合成する方法であって：
ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
（式中、Ｙ＝カチオン、
Ｚ＝前記カチオンと会合される極性基、および
ＴＣＲＯ＝トランスカロテノイド骨格）
該方法は、
Ａ）共役炭素−炭素二重結合を含有する対称ジアルデヒドを、トリフェニルホスホランとカップリングさせる工程と、
Ｂ）工程Ａ）の生成物を鹸化する工程と
を含む方法。
【請求項２７】
工程Ａ）のカップリングが、［３−カルボメトキシ−２−ブテン−１−イリデン］トリフェニルホスホランを用いて行われる、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
工程Ａ）の生成物が、ＮＡＯＨとメタノールの溶液を用いて鹸化される、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
工程Ａ）の後に、カップリング反応の所望の生成物を単離する工程が行われる、請求項２６に記載の方法。
【請求項３０】
共役炭素−炭素二重結合を含有する対称ジエステルを鹸化して、ＢＴＣＳを形成する方法であって：
Ａ）共役炭素−炭素二重結合を含有する対称ジエステルを、メタノール、エタノール、プロパノールおよびイソプロパノールからなる群から選択される化合物で可溶化させる工程と、
Ｂ）工程Ａ）の溶液を塩基と混合する工程と
を含む方法。
【請求項３１】
前記塩基がＮＡＯＨ、ＫＯＨおよびＬＩＯＨからなる群から選択される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記ジエステルがメタノールおよびＮＡＯＨを用いて鹸化される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３３】
請求項２６に従って合成されたＢＴＣＳ化合物。
【請求項３４】
可視波長に見られる最高ピークの吸光度をＵＶ波長範囲に見られるピーク吸光度で除算した値が、８．５より大きいＢＴＣＳ化合物。
【請求項３５】
可視波長に見られる最高ピークの吸光度をＵＶ波長範囲に見られるピーク吸光度で除算した値が、８．５より大きいＴＳＣ化合物。
【請求項３６】
哺乳類において酸素の拡散率を増加させる方法であって、哺乳類に治療上有効な量のＢＴＣＳを投与することを含み、該ＢＴＣＳは、可視波長範囲に見られる最高ピーク吸光度をＵＶ波長範囲に見られるピーク吸光度で除算した値が８．５より大きい方法。
【請求項３７】
気腫を治療する方法であって、哺乳類に治療上有効な量のＢＴＣＳを投与することを含み、該ＢＴＣＳは、可視波長範囲に見られる最高ピーク吸光度をＵＶ波長範囲に見られるピーク吸光度で除算した値が８．５より大きい方法。
【請求項３８】
出血性ショックを治療する方法であって、哺乳類に治療上有効な量のＢＴＣＳを投与することを含み、該ＢＴＣＳは、ＵＶ波長範囲に見られるピークの吸光度で除算した可視波長に見られる最高ピーク吸光度の値が８．５より大きい方法。
【請求項３９】
前記ＢＴＣＳがＴＳＣである、請求項３６、３７または３８に記載の方法。
【請求項４０】
哺乳類において酸素の拡散率を増加させる方法であって、吸入により、哺乳類に治療上有効な量のＴＳＣを投与することを含む方法。
【請求項４１】
下記構造を有するＢＴＣＳ化合物を含有する吸入器：
ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
式中、
Ｙ＝カチオン、
Ｚ＝前記カチオンと会合される極性基、および
ＴＣＲＯ＝トランスカロテノイド骨格
である。
【請求項４２】
前記ＢＴＣＳ化合物がＴＳＣである、請求項４０に記載の吸入器。
【請求項４３】
オレフィン系ジアルデヒドの異性体混合物をオールトランスアルデヒドに変換する方法であって、前記ジアルデヒドの異性体混合物を溶媒中においてスルフィン酸で異性化することを含む方法。
【請求項４４】
前記スルフィン酸が、式ＲＳＯ２Ｈ（式中、Ｒは、Ｃ１〜Ｃ１０の直鎖もしくは分岐アルキル基またはアリール基である）を有する、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記溶媒が１，４−ジオキサン、テトラヒドロフラン、またはジアルキルエーテル（ここで、アルキル基は、Ｃ１〜Ｃ１０の直鎖または分岐アルキル基である）からなる群から選択される、請求項４３に記載の方法。
【請求項４６】
前記スルフィン酸がパラトルエンスルフィン酸であり、前記溶媒が１，４−ジオキサンである、請求項４３に記載の方法。
【請求項４７】
前記オレフィン系ジアルデヒドが２，７−ジメチル−２，４，６−オクタトリエンジアールである、請求項４３に記載の方法。
【請求項４８】
前記オレフィン系ジアルデヒドが２，７−ジメチル−２，４，６−オクタトリエンジアールであり、前記スルフィン酸がパラトルエンスルフィン酸であり、前記溶媒が１，４−ジオキサンである、請求項４３に記載の方法。
【請求項４９】
虚血を治療する方法であって、治療を必要とする哺乳類に治療上有効な量の次式を有する化合物を投与することを含み、該化合物がＴＳＣでない方法：
ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
式中、
Ｙ＝カチオン、
Ｚ＝前記カチオンと会合される極性基、および
ＴＣＲＯ＝トランスカロテノイド骨格
である。
【請求項５０】
外傷性脳損傷を治療する方法であって、治療を必要とする哺乳類に治療上有効な量の次式を有する化合物を投与することを含み、該化合物がＴＳＣでない方法：
ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
式中、
Ｙ＝カチオン、
Ｚ＝前記カチオンと会合される極性基、および
ＴＣＲＯ＝トランスカロテノイド骨格
である。
【請求項５１】
哺乳類の動作を高める方法であって、前記哺乳類に治療上有効な量の次式を有する化合物を投与することを含む方法：
ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
式中、
Ｙ＝カチオン、
Ｚ＝前記カチオンと会合される極性基、および
ＴＣＲＯ＝トランスカロテノイド骨格
である。
【請求項５２】
糖尿病合併症を治療する方法であって、治療を必要とする哺乳類に治療上有効な量の次式を有する化合物を投与することを含む方法：
ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
式中、
Ｙ＝カチオン、
Ｚ＝前記カチオンと会合される極性基、および
ＴＣＲＯ＝トランスカロテノイド骨格
である。
【請求項５３】
アルツハイマー病を治療する方法であって、治療を必要とする哺乳類に治療上有効な量の次式を有する化合物を投与することを含む方法：
ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
式中、
Ｙ＝カチオン、
Ｚ＝前記カチオンと会合される極性基、および
ＴＣＲＯ＝トランスカロテノイド骨格
である。
【請求項５４】
哺乳類において虚血を治療する方法であって、哺乳類に治療上有効な量のＢＴＣＳを投与することを含み、該ＢＴＣＳは、可視波長で見られる最高ピーク吸光度をＵＶ波長範囲で見られるピーク吸光度で除算した値が８．５より大きい方法。
【請求項５５】
外傷性脳損傷を治療する方法であって、治療を必要とする哺乳類に治療上有効な量のＢＴＣＳを投与することを含み、該ＢＴＣＳは、可視波長で見られる最高ピーク吸光度をＵＶ波長範囲で見られるピーク吸光度で除算した値が８．５より大きい方法。
【請求項５６】
哺乳類において動作を高める方法であって、哺乳類に有効な量のＢＴＣＳを投与することを含み、該ＢＴＣＳは、可視波長で見られる最高ピーク吸光度をＵＶ波長範囲で見られるピーク吸光度で除算した値が８．５より大きい方法。
【請求項５７】
糖尿病を治療する方法であって、治療を必要とする哺乳類に治療上有効な量のＢＴＣＳを投与することを含み、該ＢＴＣＳは、可視波長で見られる最高ピーク吸光度をＵＶ波長範囲で見られるピーク吸光度で除算した値が８．５より大きい方法。
【請求項５８】
アルツハイマー病を治療する方法であって、治療を必要とする哺乳類に治療上有効な量のＢＴＣＳを投与することを含み、該ＢＴＣＳは、可視波長で見られる最高ピーク吸光度をＵＶ波長範囲で見られるピーク吸光度で除算した値が８．５より大きい方法。
【請求項５９】
前記ＢＴＣＳがＴＳＣである、請求項５４、５５、５６、５７または５８に記載の方法。
【公開番号】特開２０１０−１０６０２９（Ｐ２０１０−１０６０２９Ａ）
【公開日】平成２２年５月１３日（２０１０．５．１３）
【国際特許分類】
【外国語出願】
【出願番号】特願２００９−２７４９８８（Ｐ２００９−２７４９８８）
【出願日】平成２１年１２月２日（２００９．１２．２）
【分割の表示】特願２００３−５７１４２２（Ｐ２００３−５７１４２２）の分割
【原出願日】平成１５年２月２５日（２００３．２．２５）
【出願人】（５０４３２２１３８）ディフュージョン・ファーマシューティカルズ・エルエルシー (8)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２２年５月１３日（２０１０．５．１３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−２７４９８８（Ｐ２００９−２７４９８８）
【出願日】平成２１年１２月２日（２００９．１２．２）
【分割の表示】特願２００３−５７１４２２（Ｐ２００３−５７１４２２）の分割
【原出願日】平成１５年２月２５日（２００３．２．２５）
【出願人】（５０４３２２１３８）ディフュージョン・ファーマシューティカルズ・エルエルシー (8)
【Ｆターム（参考）】
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