二量体化合物および抗ウイルス薬としてのそれらの使用
【課題】ウイルス感染症の予防もしくは治療薬の提供。
【解決手段】一般式（Ｉ）の化合物［式中、Ｒはアミノまたはグアニジノ基であり；Ｒ２はアセチルまたはトリフルオロアセチルであり；ｎおよびｑは同じであっても異なっていてもよく、０、１または２から選択され；かつ、Ｘは置換されていてもよいフェニル、置換されていてもよいナフチルなどである]。
【解決手段】一般式（Ｉ）の化合物［式中、Ｒはアミノまたはグアニジノ基であり；Ｒ２はアセチルまたはトリフルオロアセチルであり；ｎおよびｑは同じであっても異なっていてもよく、０、１または２から選択され；かつ、Ｘは置換されていてもよいフェニル、置換されていてもよいナフチルなどである]。
【発明の詳細な説明】
【発明の背景】
【０００１】
発明の分野
本発明は新規な化学化合物およびそれらの医薬における使用に関する。特に、本発明は新規な二量体化合物、それらの製造方法、それらの医薬製剤、および抗ウイルス薬としてのそれらの使用に関する。
【０００２】
背景技術
他の炭水化物から、シアル酸としても知られるＮ−アセチルノイラミン酸（ＮＡＮＡ）を切断する能力を有する酵素が、多くの微生物に存在している。これらとしては、コレラ菌(Vibrio cholera)、ウエルシュ菌(Clostridium perfringens)、肺炎連鎖球菌(Streptococcus pneumoniae)およびアースロバクター・シアロフィルス(Arthrobacter sialophilus)などの細菌、ならびにインフルエンザウイルス、パラインフルエンザウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、ニューカッスル病ウイルスおよびセンダイウイルスなどのウイルスが挙げられる。これらのウイルスのほとんどはオルトミクソウイルスまたはパラミクソウイルス群に属し、ウイルス粒子の表面にノイラミニダーゼ活性を有している。ノイラミニダーゼを有するこれらの生物の多くは、ヒトおよび／または動物の主要な病原体であり、インフルエンザウイルスおよびニューカッスル病ウイルスなどのいくつかのものは、極めて重大な疾病を引き起こす。
【０００３】
長い間、ノイラミニダーゼの阻害剤によってノイラミニダーゼを有するウイルスによる感染を予防し得ると考えられてきた。知られているノイラミニダーゼ阻害剤のほとんどが、２−デオキシ−２，３−デヒドロ−Ｎ−アセチルノイラミン酸（ＤＡＮＡ）およびそのいくつかの誘導体などのノイラミン酸類似体である(Meindl et al, Virology, 1974 58 457)。本発明者らの国際特許公開番号ＷＯ９１／１６３２０では、ウイルスノイラミニダーゼに有効であるＤＡＮＡの多くの類似体を記載しており、特に、４−グアニジノ−２−デオキシ−２，３−デヒドロ−Ｎ−アセチルノイラミン酸（化合物（Ａ）、コード番号ＧＧ１６７）がＡ型およびＢ型インフルエンザの治療に有用であることを示している(N. Engl. J. Med. , 1997 337 874-880)。その他の特許出願では、密接に関連した種々のシアル酸誘導体が記載されており（例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９５／１８８００、同ＷＯ９５／２０５８３および同ＷＯ９８／０６７１２）、またＧＧ１６７の抗ウイルス性高分子複合体についても記述されている（国際特許出願番号ＰＣＴ／ＡＵ９７／００７７１）。
【０００４】
【化１】
［Ａｃはアセチルを表す］。
【０００５】
国際特許公開ＷＯ００／５５１４９では、１００原子以下の長さの共通のスペーサーまたは連結基と結合した、化合物（Ａ）などの２つのノイラミニダーゼ結合分子を含んでなる二量体化合物を記載している。
【０００６】
本発明者らは今般、本明細書において具体的に開示していないが、国際特許公開ＷＯ００／５５１４９の包括範囲に含まれ、肺滞留時間が長く、強力であるといった驚くほど有利な抗インフルエンザ活性プロフィールを示す新規な化合物種を発見した。
【０００７】
理論に拘束されるものではないが、肺内での滞留時間が長いことについての根拠は、化合物の大きさおよび分子量が気道上皮内での結合が強いために侵入を阻まれていること、および化合物の極性が細胞膜を極めて非効率的にしか通過しないようなものであることによると考えられている。またもう１つの理論として、化合物自体が細胞膜のリン脂質または気道上皮のその他の成分と相互作用し、肺内での滞留時間を延長するというものがある。
【発明の概要】
【０００８】
下記一般式（Ｉ）の化合物、またはその医薬上許容される誘導体：
【化２】
［式中、
Ｒは、アミノまたはグアニジノ基であり；
Ｒ２は、アセチルまたはトリフルオロアセチルであり；
ｎおよびｑは、同じであっても異なっていてもよく、０、１または２から選択され；かつ
Ｘは、置換されていてもよいフェニル、置換されていてもよいナフチル、または置換されていてもよいフェニル−Ｙ−所望により置換されていてもよいフェニル（ここで、Ｙは共有結合、ＣＨ２、ＣＨ２ＣＨ２、ＯまたはＳＯ２から選択される）である、
｛ただし、Ｘがフェニルまたはナフチルであるとき、ｎおよびｑは双方とも２であり、Ｘがフェニル−Ｙ−フェニル（ここで、Ｙは共有結合である）であるとき、ｎおよびｑは双方ともに０ではない｝］。
【発明の具体的説明】
【０００９】
好ましくは、Ｒはグアニジノ基である。
【００１０】
好ましくは、Ｒ２はアセチル基である。
【００１１】
好ましくは、ｎおよびｑは同じである。
【００１２】
好ましくは、Ｘはフェニル（オルト、メタ、またはパラ置換されていてもよい）、ナフチルまたはフェニル−Ｙ−フェニル（各フェニル環は所望によりアルコキシで置換されていてもよい）である。
【００１３】
「置換されていてもよい」とは、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ハロ、ハロアルキル、ハロアルケニル、ハロアルキニル、ハロアリール、ヒドロキシ、アルコキシ、アルケニルオキシ、アリールオキシ、カルボキシ、ベンジルオキシ、ハロアルコキシ、ハロアルケニルオキシ、ハロアリールオキシ、ニトロ、ニトロアルキル、ニトロアルケニル、ニトロアルキニル、ニトロアリール、ニトロヘテロシクリル、アジド、ニトロソ、アミノ、アルキルアミノ、アルケニルアミノ、アルキニルアミノ、アリールアミノ、ベンジルアミノ、アシルアミノ、アシル、アルケニルアシル、アルキニルアシル、アリールアシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アルデヒド、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、スルホニルアミノ、アルキルスルホニルアミノ、アリールスルホニルアミノ、アルキルスルホニルオキシ、アリールスルホニルオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、ヘテロシクリルアミノ、ハロヘテロシクリル、アルキルスルフェニル、アリールスルフェニル、カルボアルコキシ、カルボアリールオキシ、メルカプト、スルホン酸、アルキルチオ、アリールチオおよびアシルチオから選択される１以上の基でさらに置換されていてもされていなくとてもよい基を意味する。
【００１４】
好ましくは、アルキル、アルケニル、アルキニルおよびアルコキシ置換基は６個以上の炭素原子を含有する。
【００１５】
式（Ｉ）の化合物を、式（Ｉ）の化合物のいずれかの１以上の官能基において修飾して、その医薬上許容される誘導体とすることをができることは、当業者ならば明らかであろう。このような誘導体として特に着目されるものは、カルボキシル官能基、ヒドロキシル官能基において、またはアミノ基において修飾された化合物である。従って、目的の化合物としては、式（Ｉ）の化合物の、メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルエステルなどのアルキルエステル、フェニル、ベンゾイルエステルなどのアリールエステル、およびアセチルエステルが挙げられる。
【００１６】
「医薬上許容される誘導体」とは、 式（Ｉ）の化合物の、医薬上許容される塩、エーテル、エステルもしくはかかるエステルの塩、または受容者へ投与した際に式（Ｉ）の化合物または抗ウイルス的に活性な代謝産物もしくはその残渣を提供することができる他のいずれかの化合物を意味する。誘導体として特に着目されるものは、シアル酸カルボキシもしくはグリセロールヒドロキシ基において修飾された化合物、または、アミノおよびグアニジン基において修飾された化合物である。
【００１７】
式（Ｉ）の化合物の医薬上許容される塩としては、医薬上許容される無機および有機酸ならびに塩基から誘導されたものが挙げられる。好適な酸の例としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、過塩素酸、フマル酸、マレイン酸、リン酸、グリコール酸、乳酸、サリチル酸、コハク酸、トルエン−ｐ−スルホン酸、酒石酸、酢酸、クエン酸、メタンスルホン酸、蟻酸、安息香酸、マロン酸、ナフタレン−２−スルホン酸およびベンゼンスルホン酸が挙げられる。シュウ酸などのその他の酸はそれ自体では医薬上許容されるものではないが、本発明の化合物およびそれらの医薬上許容される酸付加塩を得る際に中間体として有用な塩の製造において有用であり得る。
【００１８】
好適な塩基から誘導された塩としては、アルカリ金属（例えば、ナトリウム）、アルカリ土類金属（例えば、マグネシウム）、アンモニウム、およびＮＲ４＋（ここで、ＲはＣ１−４アルキルである）塩が挙げられる。
【００１９】
本発明の化合物は本明細書に記載の方法によって製造することができる。当業者ならば、単量体をアリールスペーサー基と結合させる工程中にノイラミニダーゼ結合分子の１以上の官能基を保護するために保護基を用いる必要があることが明らかであろう。例えば、T. W. Green and P. G. M. Nutsによる"Protective Groups in Organic Synthesis"(John Wiley & Sons, 1991)を参照。式（Ｉ）の化合物の医薬上許容される塩は、公知の手法によって製造することができる。
【００２０】
製造および処理を容易にするため、式（Ｉ）の化合物は結晶状であることが好ましい。
【００２１】
従って、本発明はまた上記の式（Ｉ）の化合物の製造方法であって、下記式（II）の化合物を脱保護することを含んでなる方法も提供する：
【化３】
（式中、Ｒ、Ｒ２、ｎ、ｑおよびｘは上記定義の通りである）。
【００２２】
式（Ｉ）の化合物は抗ウイルス活性を有する。特に、これらの化合物はオルトミクソウイルスおよびパラミクソウイルスのウイルスノイラミニダーゼ、例えば、Ａ型およびＢ型インフルエンザ、パラインフルエンザ、流行性耳下腺炎およびニューカッスル病のウイルスノイラミニダーゼの阻害剤である。
【００２３】
よって、第２の態様において、本発明は、ウイルス感染症、例えば、オルトミクソウイルス感染症およびパラミクソウイルス感染症の治療に有効な治療薬として用いる式（Ｉ）の化合物またはその医薬上許容される誘導体を提供する。
【００２４】
第３の態様において、本発明はウイルス感染症の予防または治療方法であって、式（Ｉ）の化合物またはその医薬上許容される塩もしくは誘導体の有効量を、それを必要とする被験体へ投与することを含んでなる方法を提供する。
【００２５】
好ましくは、ウイルス感染症はオルトミクソウイルス感染症またはパラミクソウイルス感染症である。より好ましくは、ウイルス感染症はＡ型またはＢ型インフルエンザ感染症である。
【００２６】
好ましくは、被験体は哺乳類などの動物であり、より好ましくは、ヒト、またはウマ属に属するもの、例えば、ウマ、ロバまたはラバである。最も好ましくは、哺乳類はヒトである。
【００２７】
第４の態様において、本発明は、ウイルス感染症の治療用の医薬の製造のための、本発明の化合物の使用を提供する。
【００２８】
当業者ならば、本明細書において治療とは、確立された感染症または症候の治療だけでなく感染症に対する予防にも及ぶことは明らかであろう。
【００２９】
また、本発明の化合物は、診断方法、特にインフルエンザウイルスの検出方法、においても用いることができる。かかる方法で使用する場合には、本発明の化合物に、放射性標識、蛍光標識または化学発光標識などの標識を付けることが有利であることがある。
【００３０】
本発明の化合物が好適である診断方法は、例えば、本発明者らの先行する出願ＰＣＴ／ＡＵ９７/００１０９およびＰＣＴ／ＡＵ９７／００７７１に記載されている。
【００３１】
第５の態様において、本発明は、本発明の化合物を、ウイルスを含んでいる疑いがあるサンプルと接触させることを含んでなるウイルス感染症の検出方法を提供する。
【００３２】
さらに、治療用に必要な本発明の化合物の量は選択された化合物だけでなく、投与経路、治療する症状の性質、ならびに患者の年齢および状態によって異なり、最終的には医師または獣医の判断によって行われることが分かるであろう。しかしながら、一般的には好適な用量は１日あたり約０．００１〜１００ｍｇ／体重ｋｇの範囲、好ましくは、０．０１〜１０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲、最も好ましくは、０．１〜１ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である。
【００３３】
処置は、好ましくは、感染前または感染時に開始してウイルスが気道に存在しなくなるまで続ける。しかしながら、本発明の化合物は感染後、例えば、確立された症状の出現後に施与した場合でも有効である。
【００３４】
好適には、処置は１回または２回行い、好ましくは、治療だけならば１回だけ、好ましくは、予防には週１回行う。
【００３５】
本発明の化合物は便宜には、例えば、単位投与形あたり１〜１００ｍｇ、より便宜には、１〜２０ｍｇの有効成分を含有する単位投与形で投与する。
【００３６】
治療に用いる場合には、本発明の化合物を原料化学物質として投与してもよいが、医薬製剤としての有効成分であることが好ましい。
【００３７】
よって、第６の態様においては、本発明は、式（Ｉ）の化合物またはその医薬上許容される塩もしくは誘導体を、１種以上の医薬上許容される担体、および必要に応じて他の治療および／または予防成分とともに含んでなる医薬製剤を提供する。担体は製剤のその他の成分と適合し、その受容者に有害ではないという意味において「許容される」ものでなければならない。
【００３８】
また、本発明の化合物はその他の治療薬および／または予防薬、例えば、その他の抗感染症薬と併用してもよい。特に、本発明の化合物はその他の抗ウイルス薬と併用してもよい。よって、本発明は、第７の態様において、式（Ｉ）の化合物またはその医薬上許容される塩もしくは誘導体を、別の治療上および／または予防上有効な薬剤、特に、抗ウイルス薬とともに含んでなる組み合わせ物を提供する。
【００３９】
上記の組み合わせ物は、便宜には、医薬製剤の形態で用いるために提供され、よって、上記の組み合わせ物をその医薬上許容される担体とともに含んでなるかかる製剤は、本発明のさらなる態様をなす。
【００４０】
かかる組み合わせ物に用いるのに好適な治療薬および／または予防薬としては、他の抗感染症薬、特に、抗菌薬および抗ウイルス薬、例えば、呼吸器感染症の治療に用いられるものが挙げられる。例えば、インフルエンザウイルスに有効である、上記のシアル酸類似体、例えば、ザナミビル(zanamivir)、オセルタミビル(oseltamivir)、アマンタジン(amantadine)、リマンタジン(rimantadine)およびリバビリン(rabavirin)、ならびにＦｌｕＶａｘなどの他の化合物またはワクチンをかかる組み合わせ物に含めてもよい。
【００４１】
かかる組み合わせ物の個々の成分は個別に投与してもよいし、逐次投与してもよいし、または個別の医薬製剤もしくは組み合わせ医薬製剤として同時に投与してもよい。
【００４２】
本発明の化合物を同じウイルスに有効な第２の治療薬および／または予防薬と併用する場合、各化合物の用量は各化合物を単独で用いる際に使用する用量と同じ場合もあるし、異なる場合もある。当業者であれば、適当な用量が容易に分かるであろう。
【００４３】
医薬製剤としては、経口、直腸、経鼻、局所（口内および舌下など）、膣または非経口（筋肉内、皮下および静脈内など）投与に好適なもの、または気道（鼻腔など）への投与、例えば、吸入法または通気法による投与に好適な形態のものが挙げられる。製剤は、必要に応じて、便宜には、個別投与単位で提供してもよく、製薬分野では十分に公知のいずれの方法によって製造してもよい。これらの方法としては、活性化合物を液体担体または微粉固体担体、もしくはその両方と会合させた後、必要に応じて、生成物を所望の製剤に成形する工程が含まれる。
【００４４】
経口投与に好適な医薬製剤は、便宜には、各々が所定量の有効成分を含むカプセル剤、カシェ剤もしくは錠剤などの個別単位として；粉末もしくは顆粒剤として；液剤、懸濁剤としてまたは乳剤として提供してもよい。また、有効成分はボーラス、舐剤またはペースト剤として提供してもよい。経口投与用の錠剤およびカプセル剤には、結合剤、増量剤、滑沢剤、崩壊剤、または湿潤剤などの通常の賦形剤を含めてもよい。錠剤は当技術分野では十分に公知の方法に従ってコーティングしてもよい。経口液体製剤は、例えば、水性もしくは油性懸濁剤、液剤、乳剤、シロップ剤またはエリキシル剤の形態であってもよいし、または使用前に水もしくはその他の好適なビヒクルを用いて構成する乾燥製品として提供してもよい。かかる液体製剤には、沈殿防止剤、乳化剤、非水性ビヒクル（食用油を含んでもよい）、または防腐剤などの慣用の添加剤を含んでもよい。
【００４５】
また、本発明の化合物は、注射、例えば、ボーラス注射、または点滴による非経口投与用に調製してもよく、アンプルに入った単位投与形、充填済みシリンジ、少量注入剤として、または防腐剤を添加した多容量型容器で提供してもよい。組成物は油性もしくは水性ビヒクル中の懸濁剤、液剤、乳剤などの形態をとってもよく、沈殿防止剤、安定剤および／または分粉末などの配合剤を含んでいてもよい。あるいは、有効成分は使用前に好適なビヒクル、例えば、滅菌、パイロジェンフリー水を用いて構成する、滅菌固体の無菌単離によってまたは溶液からの凍結乾燥によって得た粉末形態であってもよい。
【００４６】
表皮への局所投与には、本発明の化合物を軟膏、クリーム剤もしくはローション剤として、または経皮パッチとして調剤してもよい。軟膏およびクリーム剤は、例えば、好適な増粘剤および／またはゲル化剤を添加した水性または油性基剤を用いて調剤してもよい。ローション剤は水性または油性基剤を用いて調剤してよく、また一般には１種以上の乳化剤、安定剤、分粉末、沈殿防止剤、増粘剤、または着色剤も含む。
【００４７】
口腔内局所投与に好適な製剤としては、香味基剤、通常、スクロースおよびアラビアガムまたはトラガカントガム、中に有効成分を含んでなるトローチ剤；ゼラチンまたはスクロースおよびアラビアガムなどの不活性基剤中に有効成分を含んでなる芳香錠；ならびに好適な液体担体中に有効成分を含んでなる口内洗浄剤が挙げられる。
【００４８】
直腸投与に好適な、担体が固体である医薬製剤は、単位用量坐剤として提供するのが最も好ましい。好適な担体としては、ココア脂および当技術分野で一般に用いられるその他の材料が挙げられ、坐剤は、便宜には、活性化合物を軟化または融解した担体と混合した後に冷却し、成形することによって作製すればよい。
【００４９】
膣投与に好適な製剤は、有効成分の他、当技術分野で好適であることが知られている担体を含む膣坐剤、タンポン、クリーム剤、ゲル剤、ペースト剤、フォーム剤またはスプレー剤とし提供してもよい。
【００５０】
経鼻投与をはじめとする気道への投与には、ノイラミニダーゼ阻害剤を、当技術分野において気道への投与に用いられる方法および製剤のいずれによって投与してもよい。
【００５１】
従って、一般的に、本化合物は液剤もしくは懸濁剤の形態または乾燥粉末として投与してもよい。
【００５２】
液剤および懸濁剤は、一般的に、例えば、水単独（例えば、滅菌またはパイロジェンフリー水）または水および生理学上許容される補助溶媒（例えば、エタノール、プロピレングリコールまたはＰＥＧ４００などのポリエチレングリコール）から調製された水性のものである。
【００５３】
かかる液剤または懸濁剤は、その他の賦形剤、例えば、防腐剤（塩化ベンザルコニウムなど）、可溶化剤／界面活性剤、例えば、ポリソルベート（例えば、Ｔｗｅｅｎ ８０、Ｓｐａｎ ８０、塩化ベンザルコニウム）、緩衝剤、等張性調整剤（例えば、塩化ナトリウム）、吸収促進薬および増粘剤をさらに含んでもよい。懸濁剤は、沈殿防止剤（例えば、微晶質セルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム）をさらに含んでもよい。
【００５４】
液剤または懸濁剤は、慣用の手段により、例えば、ドロッパー、ピペットまたはスプレーを用いて鼻腔に直接適用される。これらの製剤は単回または多回投与形で提供してもよい。後者の場合には計量手段が提供されることが望ましい。ドロッパーまたはピペットの場合には、患者が所定量の適当な液剤または懸濁剤を投与することによってなされる。スプレーの場合には、例えば、定量噴霧式噴霧ポンプによってなされる。
【００５５】
また、気道への投与は、化合物がクロロフルオロカーボン（ＣＦＣ）、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタンまたはジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素またはその他の好適なガスなどの好適な噴射剤を加えた加圧パックで提供されるエアゾール製剤によって行ってもよい。また、エアゾールは、便宜には、レシチンなどの界面活性剤を含んでもよい。薬剤の量は定量バルブを設けることで制御することができる。
【００５６】
また、本化合物は乾燥粉末の形態、例えば、化合物とラクトース、デンプン、デンプン誘導体、例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロースおよびポリビニルピロリジン（ＰＶＰ）などの好適な粉末基剤との粉末混合物の形態で提供してもよい。便宜には、粉末担体は鼻腔内でゲルを形成する。この粉末組成物は単位投与形、例えば、カプセルもしくはカートリッジ（例えば、ゼラチン）、またはブリスターパック（これから粉末が吸入器によって投与される）として提供してもよい。
【００５７】
経鼻投与製剤をはじめとする気道への投与を目的とする製剤では、化合物の粒径は一般に小さく、例えば、５ミクロン以下のオーダーである。かかる粒径は当技術分野では公知の手段によって、例えば、微粉末化によって得られる。
【００５８】
所望により、有効成分に徐放性を与えるようにした製剤を用いてもよい。
好ましくは、本発明の化合物を吸入法、通気法または経鼻投与、もしくはその組み合わせによって気道に投与する。
【００５９】
「リレンザ(Relenza)」は「ディスクへラー(Diskhaler)」（GlaxoSmithKlineグループ社の商品名）を介してフリーフロー粉末として経口吸入によって投与される。類似の製剤が本発明に好適であろう。
【００６０】
よって、本発明の第８の態様によれば、上記の製剤を含有する吸入器が提供される。
【００６１】
また、吸入器は定量式エアゾール吸入器の形態であってもよいことは明らかであろう。
【００６２】
本明細書の目的では、「含んでなる(comprising)」とは、「限定されるものではないが、含む(including but not limited to)」を意味すること、「含んでなる(comprises)」も相当の意味を持つことは明らかであろう。
【００６３】
限定されるものではないが、本明細書の中で引用した特許および特許出願をはじめとする刊行物は総て、その個々の刊行物が、参照により、その全内容を示して具体的かつ個々に示されるように本明細書の一部とされる。
【００６４】
発明の詳しい説明
以下、本発明を、単に参照として以下の限定されない実施例により詳細に説明する。
【００６５】
装置による方法
Ａ法（ＬＣ／ＭＳ）
ＭｉｃｒｏｍａｓｓプラットフォームII質量分析計を、陽イオンエレクトロスプレーモードで使用、質量範囲１００〜１０００ａｍｕ（原子質量単位）。
カラム：３．３ｃｍ×４．６ｍｍ ＩＤ、３μｍ ＡＢＺ＋ＰＬＵＳ、
流速：３ｍｌ／分、
注入量：５μｌ、
溶媒Ａ：９５％アセトニトリル＋０．０５％蟻酸、
溶媒Ｂ：０．１％蟻酸＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム、
勾配：０％ Ａ／０．７分、０〜１００％ Ａ／３．５分、１００％ Ａ／１．１分、１００〜０％ Ａ／０．２分。
【００６６】
Ｂ法（ＬＣ／ＭＳ）
Ｗａｔｅｒｓ ＺＱ質量分析計を陽イオンエレクトロスプレーモードで使用、質量範囲１００〜１０００ａｍｕ。
カラム：３．３ｃｍ×４．６ｍｍ ＩＤ、３μｍ ＡＢＺ＋ＰＬＵＳ、
流速：３ｍｌ／分、
注入量：５μｌ、
溶媒Ａ：９５％アセトニトリル＋０．０５％蟻酸、
溶媒Ｂ：０．１％蟻酸＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム、
勾配：０％ Ａ／０．７分、０〜１００％ Ａ／３．５分、１００％ Ａ／１．１分、１００〜０％ Ａ／０．２分。
【００６７】
Ｃ法（自動分取ＨＰＬＣ）
使用した分取カラムはSupelcosil ABZplusであった（１０ｃｍ×２．１２ｃｍ）。
ＵＶ波長：２３０ｎｍ、
注入量：２ｍｌ、
流速：４ｍｌ／分、
溶媒Ａ：アセトニトリル＋０．０５％ＴＦＡ、
溶媒Ｂ：水＋０．１％ＴＦＡ、
勾配：５〜４０％ Ａ／２０分、４０％ Ａ／２０分、４０〜１００％ Ａ／０．３分、１００％ Ａ／１５分、１００〜５％ Ａ／３分。
【００６８】
Ｄ法（マス用自動分取ＨＰＬＣ）
使用した分取カラムはSupelcosil ABZplusであった（１０ｃｍ×２．１２ｃｍ）。
ＵＶ波長：２００〜３２０ｎＭ、
流速：２０ｍｌ／分、
注入量：１ｍｌ、
溶媒Ａ：０．１％蟻酸、
溶媒Ｂ：９５％アセトニトリル＋５％蟻酸、
勾配：１００％ Ａ／１分、１００〜８０％ Ａ／９分、８０〜１％ Ａ／３．５分、１％ Ａ／１．４分、１〜１００％ Ａ／０．１分。
【００６９】
Ｅ法（分取ＨＰＬＣ）
使用した分取カラムはＤｙｎａｍａｘ ６０オングストローム Ｃ１８（２５ｃｍ×４．１４ｃｍ）であった。
ＵＶ波長：２３０ｎｍ、
流速：４０ｍｌ／分、
溶媒Ａ：アセトニトリル＋０．０５％ＴＦＡ、
溶媒Ｂ：水＋０．１％ＴＦＡ、
勾配：０〜５０％ Ａ／２５分、５０〜１００％ Ａ／０．３分、１００％ Ａ／１５分、１００〜０％ Ａ／３分。
【００７０】
Ｆ法（分取ＨＰＬＣ）
使用した分取カラムはKromasil Ｃ１８（２０ｃｍ×５ｃｍ）であった。
ＵＶ波長：２３０ｎｍ、
流速：８０ｍｌ／分、
溶媒Ａ：１％ＴＦＡ、
溶媒Ｂ：８０％アセトニトリル＋１％ＴＦＡ、
勾配：０〜１００％ Ｂ／７０分。
【００７１】
ＨＰＬＣの後、適当な画分を合わせ、減圧下での蒸発により揮発性成分を除去した。水相をアンバークロムＣＧ−１６１樹脂のカラム（１０×２．５ｃｍ）に適用し、水（５００ｍｌ）、次いでアセトニトリル：ＭｅＯＨ：水の２：２：１混合物（５００ｍｌ）で溶出した。
【００７２】
略語
ＴＦＡ トリフルオロ酢酸
ＤＭＡＰ ４−ジメチルアミノピリジン
ＤＣＭ ジクロロメタン
ＥｔＯＡｃ 酢酸エチル
Ｅｔ２Ｏ ジエチルエーテル
ＭｅＯＨ メタノール
ＨＰＬＣ 高速液体クロマトグラフィー
ＤＰＭ ジフェニルメチル
ＳＰＥ 固相抽出
ＮＭＲ 核磁気共鳴
ＬＣ／ＭＳ 液体クロマトグラフィー／質量分析
【実施例】
【００７３】
中間体１
【化４】
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−３−（アセチルアミノ）−４−（｛(Ｅ）−［（tert−ブトキシカルボニル）アミノ］［（tert−ブトキシカルボニル）イミノ］メチル｝アミノ)−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１，２，３−トリヒドロキシプロピル］−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−６−カルボン酸ベンズヒドリル（J. Med. Chem. 1998, 41, 787-797参照）（１２．３８ｇ；１７．７ミリモル）を窒素下、室温にて乾燥アセトニトリル（１３０ｍｌ）に溶かした。この溶液を攪拌し、１，１’−カルボニルジイミダゾール（２．８７ｇ；１７．７ミリモル）を添加した。１６時間後のＬＣ／ＭＳで、最初のトリオールが存在していることが分かったため、さらなる１，１’−カルボニルジイミダゾール（合計０．４９３ｇ；３ミリモル）を添加した。数時間後のＬＣ／ＭＳでは、トリオールが存在しないことが分かった。溶媒を蒸発させ、残渣を１：１酢酸エチル／４０〜６０石油エーテルで溶出するシリカでのフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した。生成物を含む画分を蒸発させた後、ジクロロメタンに溶かし、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、蒸発させ、灰白色の固体として中間体１（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−３−（アセチルアミノ）−４−（｛［（tert−ブトキシカルボニル）アミノ］［（tert−ブトキシカルボニル）イミノ］メチル｝アミノ)−２−｛（Ｓ）−ヒドロキシ［（４Ｒ）−２−オキソ−１，３−ジオキソラン−４−イル］メチル｝−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−６−カルボン酸ベンズヒドリル）（１１．０５ｇ；８６％）を得た。
【００７４】
中間体３
【化５】
中間体１（２．０ｇ，２．７６ｍｍｏｌ）を、無水トルエン（３×２０ｍｌ）との共沸にり乾燥させた後、無水ピリジン（８ｍｌ）に溶かした。これにＤＭＡＰ（１．０１ｇ，８．２９ｍｍｏｌ）およびクロロ蟻酸ｐ−ニトロフェニル（０．６７ｇ，３．３ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温にて一晩攪拌した。さらなる分量のクロロ蟻酸ｐ−ニトロフェニル（０．２８ｇ，１．３８ｍｍｏｌ）を添加し、攪拌を２時間続けた。ＬＣＭＳ（Ｂ法）では、ＭＨ＋＝８９０；ＴＲＥＴ＝４．１９分であり、中間体２と一致した。
【００７５】
この混合物の一部（１．６ｍｌ）を別の反応槽に移し、ＤＭＡＰ（０．２０ｇ，１．６６ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（０．０８ｍｌ，０．５５ｍｏｌ）、次ぎに１，３−ベンゼンジエタンアミン二塩酸塩（６５ｍｇ，０．２７ｍｍｏｌ）［製造については、Chem. Ber., 1984, 117 (4), 1487-1496参照］で処理し、混合物を７０時間攪拌した後、真空濃縮し、ＤＣＭ（１０ｍｌ）と水（５ｍｌ）とで分液した。
疎水性ガラスカートリッジを用いて有機層の分離を行った。ＤＣＭ層を窒素下、ブローダウンにより濃縮した後、５ｇシリカＳＰＥカートリッジに通し、最初にシクロヘキサン：Ｅｔ２Ｏ（１：１）、次ぎにＥｔ２Ｏ、次ぎにＥｔ２Ｏ：ＥｔＯＡｃ（９：１）、次ぎにＥｔ２Ｏ：ＥｔＯＡｃ（５：１）、次ぎにＥｔ２Ｏ：ＥｔＯＡｃ（３：１）、次ぎにＥｔ２Ｏ：ＥｔＯＡｃ（１：１）、最後にＥｔＯＡｃで溶出し、白色の固体として中間体３（０．２９g；６３％収率）を得た。ＬＣ／ＭＳ（Ａ法）では、（Ｍ+２Ｈ+）／２＝８３４；ＴＲＥＴ＝４．５６分であった。
【００７６】
中間体４
【化６】
中間体３（０．２９ｇ，０．２ｍｍｏｌ）をＤＣＭ：アニソールの１０：１混合物（０．８０ｍｌ）に溶かし、ＴＦＡ（０．７３ｍｌ）で処理した。得られた溶液を室温にて２時間攪拌した後、窒素下、ブローダウンにより蒸発乾固した。残渣をジエチルエーテルでトリチュレートし、白色の固体として中間体４のビス−ＴＦＡ塩（０．１４２ｇ，７６％収率）を得た。ＬＣ／ＭＳ（Ｂ法）では、（Ｍ+２Ｈ+）／２＝４６７；ＴＲＥＴ＝２．０５分であった。
【００７７】
中間体５
【化７】
中間体１（０．１０ｇ，０．１４ｍｍｏｌ）を、無水トルエンとの共沸を３回行うことによって乾燥させた後、無水ＤＣＭ（０．５ｍｌ）に溶かした。得られた溶液にＤＭＡＰ（０．００５ｇ，触媒）、続いて１，１’−オキシビス［４−イソシアナトベンゼン］（０．０１２ｇ，０．０４６ｍｍｏｌ）、および３オングストロームモレキュラーシーブペレット数個を添加した。混合物を一晩還流した後、冷却し、５ｇシリカＳＰＥカートリッジにそのまま通した。これをまずＥｔ２Ｏ（１０×２０ｍ１）、次ぎにＥｔＯＡｃ（５×２０ｍｌ）で溶出し、無色のガラスとして中間体５（０．０２５ｇ，３３％収率）を得た。ＬＣ／ＭＳ（Ａ法）では、（Ｍ+２Ｈ+）／２＝８５２；ＴＲＥＴ＝４．５５分であった。
【００７８】
中間体６
【化８】
中間体１（４．０ｇ，５．６ｍｍｏｌ）を、無水トルエンとの共沸より乾燥させた後、無水ＤＣＭ（５ｍｌ）に溶かした。得られた溶液に、窒素下で攪拌しながら、４，４’−メチレンビス［イソシアン酸フェニル］（０．４８ｇ，１．９ｍｍｏｌ）、３オングストロームモレキュラーシーブペレット数個およびＤＭＡＰ（０．２ｇ，触媒）を添加した後、混合物を２０時間還流した。冷却後、混合物を真空濃縮し、シリカでのフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した。溶出はまずＤＣＭ、次ぎにＥｔ２Ｏ、次ぎに連続してＥｔ２Ｏ：ＥｔＯＡｃ（９５：５）、Ｅｔ２Ｏ：ＥｔＯＡｃ（９０：１０）およびＥｔ２Ｏ：ＥｔＯＡｃ（８０：２０）により行い、白色の固体として中間体６（２．６０ｇ，８０％収率）を得た。ＬＣＭＳ（Ｂ法）では、（Ｍ+２Ｈ+）／２＝８５０；ＴＲＥＴ＝４．５７分であった。
【００７９】
中間体７
【化９】
１，４−フェニレンジプロピオン酸（０．５０ｇ，２．２５ｍｍｏｌ）をトルエンと共沸した後、３オングストロームモレキュラーシーブペレット数個を加えてジオキサン（５ｍｌ）に懸濁し、窒素下、１０分間攪拌した。トリエチルアミン（０．６８ｍｌ，４．９０ｍｍｏｌ）、続いてジフェニルホスホリルアジド（０．９６ｍｌ，４．５０ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温にて２時間攪拌した。次いで、温度を８０℃に上げ、混合物を４５分間攪拌した後に冷却し、濾過して、不溶性物質を除去した。固体を石油エーテル（４０〜６０℃）で洗浄し、合わせた濾液を真空濃縮した。得られたオイルを石油エーテル（４０〜６０℃）で抽出し、無色のオイルとして中間体７（０．１２ｇ，２５％収率）を得た。
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ (ppm) 7.12 (s, 4H), 3.45 (t, 4H), 2.83 (t, 4H).
【００８０】
中間体８
【化１０】
完全に保護した中間体８を、中間体５および６の場合と同じ手順に従って、中間体７および１から製造し、その後、以下のように脱保護した：（０．０９ｇ，０．０５ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（０．３７ｍｌ）およびアニソール（０．０３７ｍｌ）の混合物に溶かし、氷浴中で冷却した。混合物をＴＦＡ（０．３７ｍｌ）で処理し、得られた溶液を室温まで温め、次いで、２．５時間攪拌した後、真空濃縮した。混合物をＥｔ２Ｏでトリチュレートし、白色の固体として中間体８のビス−ＴＦＡ塩（０．０５ｇ；９３％収率）を得た。ＬＣ／ＭＳ（Ｂ法）では、（Ｍ+２Ｈ+）／２＝４６７；ＴＲＥＴ＝２．０１分であった。
【００８１】
中間体９
【化１１】
無水トルエン（１００ｍｌ）中、４，４'−エチレンジアニリン（０．５０ｇ，２．３６ｍｍｏｌ）の溶液をトリホスゲン（１．４０ｇ，４．７０ｍｍｏｌ）で処理し、混合物を４時間還流加熱した（１２０℃）。混合物を冷却し、重力下で濾過し、不溶性残渣を除去した。濾液を真空濃縮し、黄色の固体として中間体９（０．５４ｇ，８６％収率）を得た。
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ (ppm) 6.98-7.05 (8H, ABq) および 2.86 (4H, s)
【００８２】
中間体１０
【化１２】
中間体１（０．４０ｇ，０．５６ｍｍｏｌ）を無水トルエンと２回共沸した後、無水ＤＣＭ（０．４ｍｌ）に溶かした。得られた溶液にＤＭＡＰ（０．０２ｇ，触媒)、続いて中間体９（０．０５ｇ，０．１９ｍｍｏｌ）および３オングストロームモレキュラーシーブペレット数個を添加した。混合物を１８時間還流した後、４０ｇシリカＢｉｏｔａｇｅカートリッジにそのまま通した。これをＥｔ２Ｏ：ＥｔＯＡｃ（６：１）で溶出し、白色の固体として中間体１０（０．１０ｇ，３１％収率）を得た。ＬＣ／ＭＳ（Ｂ法）では、（Ｍ+２Ｈ+）／２＝８５８；ＴＲＥＴ＝４．５７分であった。
【００８３】
中間体１１
【化１３】
中間体１（２．０ｇ，２．７６ｍｍｏｌ）を、無水トルエンとの共沸を３回行うことによって乾燥させた後、無水ピリジン（８ｍｌ）に溶かした。これにＤＭＡＰ（１．０１ｇ，８．２９ｍｍｏｌ）およびクロロ蟻酸ｐ−ニトロフェニル（０．６７ｇ，３．３０ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温にて１８時間攪拌した。さらなる分量のクロロ蟻酸ｐ−ニトロフェニル（０．２８ｇ，１．３８ｍｍｏｌ）を添加し、攪拌を２時間続けた。ＬＣ／ＭＳ（Ｂ法）では、ＭＨ＋＝８９０；ＴＲＥＴ＝４．１９分であり、中間体２と一致した。
【００８４】
混合物の一部（１．６ｍｌ）を別の反応槽に移し、ＤＭＡＰ（０．２０ｇ，１．６６ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（０．０８ｍｌ，０．５５ｍｍｏｌ）、次ぎに４，４'−スルホニルビス−ベンジルアミン二塩酸塩（０．１０ｇ，０．２８ｍｍｏｌ）［製造については、J. Chem. Soc., 1946, 466参照]で処理し、混合物を７０時間攪拌した。混合物を真空濃縮し、ＤＣＭ（１０ｍｌ）と水（５ｍｌ）とで分液した。５０ｍｌ疎水性ガラスカートリッジを用いて二相分離を行った。ＤＣＭ層を窒素下、ブローダウンにより濃縮した後、５ｇシリカＳＰＥカートリッジに通し、まずシクロヘキサン：Ｅｔ２Ｏ（１：１）、次ぎにＥｔ２Ｏ、続いてＥｔ２Ｏ：ＥｔＯＡｃ（９：１）、次ぎにＥｔ２Ｏ：ＥｔＯＡｃ（５：１）、次ぎにＥｔ２Ｏ：ＥｔＯＡｃ（３：１）、次ぎにＥｔ２Ｏ：ＥｔＯＡｃ（１：１）、最後にＥｔＯＡｃで溶出し、灰白色の固体として中間体１１（０．１５g；３０％収率）を得た。ＬＣＭＳ（Ａ法）では、（Ｍ+２Ｈ+）／２＝８９０；ＴＲＥＴ＝４．４７分であった。
【００８５】
同様にして、以下のものを製造した。
【００８６】
【表１】
【００８７】
中間体１６
【化１４】
中間体１４（２．７４ｇ，４．７９ｍｍｏｌ）を、無水トルエンとの共沸を４回行うことによって乾燥させた後、無水ピリジン（１３．７５ｍｌ）に溶かした。これにＤＭＡＰ（１．４６ｇ，１１．９８ｍｍｏｌ）およびクロロ蟻酸ｐ−ニトロフェニル（１．０６ｇ，５．２７ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温にて３時間攪拌した。ＬＣＭＳ（Ｂ法）では、ＭＨ＋＝７３８；ＴＲＥＴ＝３．８７分であり、中間体１５と一致した。
次いで、この混合物に追加のピリジン（８．２５ｍｌ）、続いて［１，１'−ビフェニル］−４，４'−ジメタンアミン（０．５１ｇ，２．４ｍｍｏｌ）（J. Med. Chem., 2000, 43, 420-431に従って製造）を添加し、攪拌をさらに１６時間続けた。混合物を真空濃縮し、ＤＣＭ溶液として９０ｇシリカＢｉｏｔａｇｅカートリッジに通した。これをジエチルエーテル、続いてＥｔ２Ｏ：ＥｔＯＡｃ（１：１）、次ぎにＥｔ２Ｏ：ＥｔＯＡｃ（１：２）、最後に ＥｔＯＡｃで溶出し、白色の固体として中間体１６（１．９２ｇ，５７％収率）を得た。ＬＣ／ＭＳ（Ａ法）では、（Ｍ+２Ｈ+）／２＝７０５；ＴＲＥＴ＝３．９６分であった。
【００８８】
中間体１７
【化１５】
中間体１０（０．１ｇ，０．０６ｍｍｏｌ）をガラスバイアルに入ったＤＣＭ：アニソールの１０：１混合物（０．４４ｍｌ）に溶かし、ＴＦＡ（０．０４ｍｌ）で処理した。得られた溶液を室温にて２時間攪拌した後、真空濃縮した。残渣をジエチルエーテルでトリチュレートし、白色の固体として中間体１７のビス−ＴＦＡ塩（０．０６ｇ，８７％収率）を得た。ＬＣ／ＭＳ（Ａ法）では、（Ｍ＋２Ｈ＋）／２＝４９１；ＴＲＥＴ＝２．３８分であった。
【００８９】
同様にして、以下のものを製造した：
【化１６】
【００９０】
【表２】
【００９１】
中間体２３
【化１７】
中間体１６（１．９２ｇ，１．３６ｍｍｏｌ）をＤＣＭ：アニソールの１０：１混合物（２７．５ｍｌ）に溶かし、ＴＦＡ（２５ｍｌ）で処理した。得られた溶液を室温にて２時間攪拌した後、真空濃縮した。残渣をジエチルエーテルでトリチュレートし、白色の固体として中間体２３のビス−ＴＦＡ塩（１．５９ｇ，９４％収率）を得た。ＬＣＭＳ（Ａ法）では、（Ｍ＋２Ｈ＋）／２＝５０５；ＴＲＥＴ＝２．２７分であった。
【００９２】
実施例１
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−３−（アセチルアミノ）−２−｛（１Ｒ，２Ｒ）−１−［（｛［２−（３−｛２−［（｛［（１Ｒ，２Ｒ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−３−（アセチルアミノ）−４−｛［アミノ（イミノ）メチル］アミノ｝−６−カルボキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−２，３−ジヒドロキシプロピル］オキシ｝カルボニル）アミノ］エチル｝フェニル）エチル］アミノ｝カルボニル）オキシ］−２，３−ジヒドロキシプロピル｝−４−｛［アミノ（イミノ）メチル］アミノ｝−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−６−カルボン酸
【化１８】
【００９３】
中間体４（０．１４ｇ，０．１５ｍｍｏｌ）を水（１．２０ｍｌ）およびメタノール（１．２０ｍｌ）の混合物に溶かした。これにトリエチルアミン（０．３０ｍｌ）を添加し、溶液を２時間振盪した後、真空濃縮した。逆相分取ＨＰＬＣ（Ｄ法）により実施例１（０．０４８ｇ；４４％収率）が得られた。ＬＣ／ＭＳ（Ａ法）では、（Ｍ＋２Ｈ＋）／２＝４４１；ＴＲＥＴ＝１．８３分であった。
【００９４】
実施例２
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−３−（アセチルアミノ）−２−｛（１Ｒ，２Ｒ）−１−［（｛［２−（４−｛２−［（｛［（１Ｒ，２Ｒ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−３−（アセチルアミノ）−４−｛［アミノ（イミノ）メチル］アミノ｝−６−カルボキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−２，３−ジヒドロキシプロピル］オキシ｝カルボニル）アミノ］エチル｝フェニル）エチル］アミノ｝カルボニル）オキシ］−２，３−ジヒドロキシプロピル｝−４−｛［アミノ（イミノ）メチル］アミノ｝−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−６カルボン酸
【化１９】
【００９５】
中間体８（０．０３ｇ；０．０６ｍｍｏｌ）を水（１ｍｌ）およびメタノール（１ｍｌ）の混合物に溶かした。これにトリエチルアミン（０．２５ｍｌ）を添加し、溶液を１時間攪拌した後、真空濃縮した。残渣を水溶液としてＣ１８ ＳＰＥカートリッジ（メタノールでプレコンディショニングしたもの）に通した。このカラムをアセトニトリル：水（５：９５）（３×５ｍｌ）、次いでアセトニトリル：水（７．５：９３．５）（３×５ｍｌ）、最後にアセトニトリル：水（１５：８５）（３×５ｍｌ）で溶出し、白色の固体として実施例２（０．００５ｇ；９％収率）を得た。ＬＣ／ＭＳ（Ｂ法）では、（Ｍ＋２Ｈ＋）／２＝４４１；ＴＲＥＴ＝１．７９分であった。
【００９６】
実施例３
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−３−（アセチルアミノ）−２−｛（１Ｒ，２Ｒ）−１−［（｛［４−（２−｛４−［（｛［（ｌＲ，２Ｒ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−３−（アセチルアミノ）−４−｛［アミノ（イミノ）メチル］アミノ｝−６−カルボキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−２，３−ジヒドロキシプロピル］オキシ｝カルボニル）アミノ］フェニル｝エチル）フェニル］アミノ｝カルボニル）オキシ］−２，３−ジヒドロキシプロピル｝−４−｛［アミノ（イミノ）メチル］アミノ｝−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−６−カルボン酸ビスＴＦＡ塩
【化２０】
【００９７】
ジオキサン：水の２：１混合物（３ｍｌ）中、中間体１７（０．０６ｇ，０．０６ｍｍｏｌ）の溶液を、トリエチルアミン（１ｍｌ）で処理し、混合物を室温で１８時間攪拌した。逆相ＨＰＬＣ（Ｃ法）により精製し、白色の固体として実施例３（０．０１ｇ，２２％収率）を得た。ＬＣ／ＭＳ（Ａ法）では、（Ｍ＋２Ｈ＋）／２＝４６５；ＴＲＥＴ＝２．１６分であった。
【００９８】
実施例４
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−３−（アセチルアミノ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−（｛［（｛４−［（４−｛［（｛［（１Ｒ，２Ｒ）−１（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−３−（アセチルアミノ）−４−｛［アミノ（イミノ）メチル］アミノ｝−６−カルボキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−２，３−ジヒドロキシプロピル］オキシ｝−カルボニル）アミノ］メチル｝フェニル）スルホニル］フェニル｝メチル）アミノ］オキシ）−２，３−ジヒドロキシプロピル］−４−｛［アミノ（イミノ）メチル］アミノ｝−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−６−カルボン酸
【化２１】
【００９９】
中間体２０（０．０９ｇ，０．０７ｍｍｏｌ）を水（０．７０ｍｌ）およびメタノール（０．７０ｍｌ）の混合物に溶かした。これにトリエチルアミン（０．１８ｍｌ）を添加し、溶液を２時間振盪した後、真空濃縮した。逆相分取ＨＰＬＣ（Ｄ法）のより、ビス−ＴＦＡ塩として実施例４（０．０１４ｇ，２０％収率）を得た。ＬＣ／ＭＳ（Ｂ法）では、（Ｍ＋２Ｈ＋）／２＝４９７；ＴＲＥＴ＝１．９３分であった。
【０１００】
同様にして、以下のものを製造した。
【０１０１】
【表３】
【０１０２】
実施例５
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−３−（アセチルアミノ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−（｛［（｛４−［（４−｛［（｛［（１Ｒ，２Ｒ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−３−（アセチルアミノ）−４−｛［アミノ（イミノ）メチル］アミノ｝−６−カルボキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−２，３−ジヒドロキシプロピル］オキシ｝カルボニル）アミノ］メチル｝フェニル）オキシ］フェニル｝メチル）アミノ］カルボニル）オキシ）−２，３−ジヒドロキシプロピル］−４−｛［アミノ（イミノ）メチル］アミノ｝−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−６−カルボン酸
【０１０３】
実施例６
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−３−（アセチルアミノ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−（｛［（｛４−［（４−｛［（｛［（１Ｒ，２Ｒ）−１（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−３−（アセチルアミノ）−４−｛［アミノ（イミノ）メチル］アミノ｝−６−カルボキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−２，３−ジヒドロキシプロピル］オキシ｝カルボニル）アミノ］メチル｝フェニル）メチル］フェニル）メチル）アミノ］カルボニル｝オキシ）−２，３−ジヒドロキシプロピル］−４−｛［アミノ（イミノ）メチル］アミノ｝−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−６−カルボン酸
【０１０４】
実施例７
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−３−（アセチルアミノ）−２−｛（１Ｒ，２Ｒ）−１−［（｛［４−（｛４−［（｛［（１Ｒ，２Ｒ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−３−（アセチルアミノ）−４−｛［アミノ（イミノ）メチル］アミノ｝−６−カルボキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−２，３−ジヒドロキシプロピル］オキシ｝カルボニル）アミノ］フェニル｝オキシ）フェニル］アミノ｝カルボニル）オキシ］−２，３−ジヒドロキシプロピル｝−４−｛［アミノ（イミノ）メチル］アミノ｝−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−６−カルボン酸ビスＴＦＡ塩
【化２２】
【０１０５】
中間体１８（０．００５ｇ，０．００４ｍｍｏｌ）を水（１ｍｌ）に溶かし、４０℃で８時間加熱した。混合物を冷却し、５００ｍｇ Ｃ１８ ＳＰＥカートリッジ（メタノールでプレコンディショニングしたもの）に通した。このカラムを水（５ｍｌ）、次いでアセトニトリル：水（１５：８５）（２×５ｍｌ）で溶出した。アセトニトリル含有画分は不純な生成物を含んでいたことから、これらを合わせ、真空濃縮した。この残渣をＴＦＡ１滴を含む水（１ｍｌ）に再溶解し、５００ｍｇ Ｃ１８ ＳＰＥカートリッジ（メタノールでプレコンディショニングしたもの）に再び通した。このカラムをアセトニトリル：水（２：９８）（２×５ｍｌ）、次いでアセトニトリル：水（４：９６）（２×５ｍｌ）、次いでアセトニトリル：水（６：９４）（２×５ｍｌ）、次いでアセトニトリル：水（８：９２）（２×５ｍｌ）、最後にアセトニトリル：水（１０：９０）（２×５ｍｌ）で溶出し、白色の固体として実施例７（０．００２ｇ，４７％収率）を得た。ＬＣ／ＭＳ（Ａ法）では、（Ｍ＋２Ｈ＋）／２＝４５９；ＴＲＥＴ＝２．０１分であった。
【０１０６】
実施例８
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−３−（アセチルアミノ）−２−｛（１Ｒ，２Ｒ）−１−［（｛［４−（｛４−［（｛［（１Ｒ，２Ｒ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−３−（アセチルアミノ）−４−｛［アミノ（イミノ）メチル］アミノ｝−６−カルボキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−２，３−ジヒドロキシプロピル］オキシ｝カルボニル）アミノ］フェニル｝メチル）フェニルアミノ｝カルボニル）オキシ］−２，３−ジヒドロキシプロピル｝−４−｛［アミノ（イミノ）メチル］アミノ｝−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−６−カルボン酸ビスＴＦＡ塩
【化２３】
【０１０７】
中間体１９（１．０ｇ，１．０ｍｍｏｌ）を水（４ｍｌ）およびメタノール（４ｍｌ）の混合物に溶かした。これにトリエチルアミン（１ｍｌ）を添加し、この溶液を３．５時間攪拌した。減圧下での蒸発により揮発性成分を除去し、残った水溶液のｐＨをＴＦＡを添加してｐＨ３に調整した。逆相分取ＨＰＬＣ（方法Ｅ）により、白色の固体として実施例８のビス−ＴＦＡ塩（０．２９ｇ；２４％収率）を得た。ＬＣ／ＭＳ（Ｂ法）では、（Ｍ＋２Ｈ＋）／２＝４５８；ＴＲＥＴ＝２．０８分であった。
【０１０８】
実施例９
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−３−（アセチルアミノ）−２−｛（１Ｒ，２Ｒ）−１−［（｛［（４’−｛［（｛［（１Ｒ，２Ｒ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−３−（アセチルアミノ）−４−｛［アミノ（イミノ）メチル］アミノ｝−６−カルボキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−２，３−ジヒドロキシプロピル］オキシ｝カルボニル）アミノ］メチル｝−１，１’−ビフェニル−４−イル）メチル］アミノ｝カルボニル）オキシ］−２，３−ジヒドロキシプロピル｝−４−｛［アミノ（イミノ）メチル］アミノ｝−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−６−カルボン酸ビスＴＦＡ塩
【化２４】
【０１０９】
中間体２３（１．５９ｇ；１．３ｍｍｏｌ）を水（２８．５ｍｌ）およびメタノール（２８．５ｍｌ）の混合物に溶かした。これにトリエチルアミン（２．８５ｍｌ）を添加し、この溶液を４時間攪拌した。揮発性有機成分を真空下で除去し、残った溶液をＴＦＡを添加してｐＨ２に調整した。逆相分取ＨＰＬＣ（方法Ｆ）により、両性イオンの実施例９（０．７０ｇ；５７％収率）を得た。ＬＣ／ＭＳ（Ａ法）では、（Ｍ＋２Ｈ＋）／２＝４６５；ＴＲＥＴ＝２．００分であった。
【０１１０】
実施例１０：式（Ｉ）の化合物の評価−インフルエンザウイルス複製の阻害
細胞変性作用（ＣＰＥ）アッセイを、基本的にはWatanabe et al.(J. Virological Methods, 1994 48 257)によって記載されたように行った。ＭＤＣＫ細胞を本発明の化合物の連続希釈物の存在下で所定の接種量のウイルス（試験によって、７２時間以内に十分なＣＰＥを引き起こすに足る最少量であり、公開された標準と一致すると考えられる濃度で対照化合物に感受性を示すと判断されたもの）に感染させた。培養物を５％ＣＯ２雰囲気下、３７℃にて最大７２時間インキュベートした。公開された方法（例えば、Watanabe et al. , 1994参照）に従って、ウイルス染色剤、臭化３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウム（ＭＴＴ）の代謝を介して、ＣＰＥの程度、さらにはウイルス複製を調べた。ＣＰＥを５０％阻害した化合物濃度（ＩＤ５０）を曲線の当てはめに関するコンピュータープログラムを用いて算出した。インフルエンザＡ／シドニー／５／９７およびＢ／ハルビン／７／９５ウイルスをアッセイし、その結果を表２に示している。また、ＷＯ００／５５１４９にて明示された化合物および化合物Ａとの比較データも表１に示す。
【０１１１】
【表４】
＊ ＷＯ００／５５１４９から引用
【０１１２】
＋ ＷＯ００／５５１４９に記載のデータはウイルスＡ型Ｈ３Ｎ２単離株Ａ／シドニー／５／９７ではなく、Ｈ３Ｎ２単離株Ａ／ビクトリア／３／７５に関するものである。このようなデータを比較することで、in vitroにおいて数種類の異なるウイルスに対して分析する際、当業者ならば、ある化合物の抗ウイルス力価が異なることが珍しくないことが分かるであろう。例えば、Woods et al(Antimicrob Agents Chemother 1993 37: 1473-9)は、最近の臨床単離株に関するin vitroアッセイにおいて化合物Ａが広範なＥＣ５０値（０．０２〜０．１６μＭ）を示すことを報告している。よって、化合物８がこれまでのＨ３Ｎ２単離株Ａ／ビクトリア／３／７５よりも最近のインフルエンザＡ型Ｈ３Ｎ２単離株Ａ／シドニー／５／９７に関するＣＰＥアッセイにおいて有効であることが分かった。
【０１１３】
表１に示したデータは、化合物Ｅ１〜Ｅ５が、極めて有効な化合物Ａよりも実質的に有効であることに加え、ＷＯ００／５５１４９の化合物８および１０よりもＡ／シドニー／５／９７に対していっそう有効であり、かつ最近のインフルエンザＢ単離株Ｂ／ハルビン／７／９５に対しても実質的に有効であることを示している。
【０１１４】
実施例１１：プラーク減少アッセイ
Mardin Darbyイヌ腎臓（ＭＤＣＫ）細胞を６ウェル組織培養プレートに播種し、常法によって密集するまで増殖させる。インフルエンザウイルスを最少量の０．２％ウシ血清アルブミンを添加したリン酸緩衝生理食塩水で希釈し、各ウェル当たり推定力価５０〜１００プラーク形成単位（ｐｆｕ）とした。５％ＣＯ２雰囲気下、３７℃にて１時間、ＭＤＣＫ細胞に吸着させた後、ウイルス接種材料を吸引し、プラークが形成されるまで（一般に２〜４日）５％ＣＯ２雰囲気下、３７℃にて、室温で培地を固化するのに十分な寒天またはアガロース（一般に１〜２％）を含有するウイルス増殖培地（至適濃度のＢＳＡ、トリプシンおよびインスリン／トランスフェリン／セレンを添加した最少イーグル培地）で置き換える。プラークは計数前に好適な染色剤（例えば、ホルマリン加生理食塩水中０．４％クリスタルバイオレット）を用いて可視化することができる。抗ウイルス力価はプラーク数を未処理の対照値を５０％減少させる被験物質の濃度として表される（ＥＣ５０）。
【０１１５】
【表５】
＊Ａ／ＷＳＮ／３３ ＢＶＬＶ０９（Ｈ１Ｎ１）
Ａ／ビクトリア／３／７５ ＢＶＬＶ０１７（Ｈ３Ｎ２）
Ａ／シドニー／５／９７ ＢＶＬＶ０１５（Ｈ３Ｎ２）
Ａ／ニューカレドニア／２０／９９ ＢＶＬＶ００８（Ｈ１Ｎ１）
Ａ／パナマ／２００７／９９ ＢＶＬＶ００８（Ｈ３Ｎ２）
Ａ／バイエルン／７／９５ ＢＶＬ００６（Ｈ１Ｎ１）
【０１１６】
【表６】
＊Ｂ／ビクトリア／１／６７
Ｂ／ホンコン／５／７２ ＢＶＬＶ０１２
Ｂ／ハルビン／７／９５ ＢＶＬＶ００８
Ｂ／山梨／１６６／９８ ＢＶＬＶ００７
【０１１７】
実施例１２：長時間作用性の評価
齧歯類を麻酔し、目的化合物を気管内経路によって０．８ｍｌ／ｋｇの用量で投与する。次いで、完全に回復するまで齧歯類を垂直位に保つ。投与後、種々の時点、例えば、２、８、２４および４８時間の時点で肺組織における化合物のレベルを分析法によって評価する。この種の化合物の検出に好適なものであればいずれの分析法を用いてもよい。化合物のレベルが特定の分析法の感度の範囲を下回った時間によって肺組織における化合物の滞留時間を決定する。
【０１１８】
選択された化合物のラット肺滞留データを以下に示す。全ての試験では、比較のため、同時投与した内部標準、すなわち、国際特許公報ＷＯ０２／２０５１４の化合物３が含まれることに留意のこと。データは以下に示す構造を持つこの化合物に対する比率として表される。
【化２５】
【０１１９】
比較のため、化合物Ａのデータも示している。標準濃度に対する化合物濃度の比率として表した場合、本発明の化合物は７日時点での滞留が化合物Ａよりも有意に高い。
【０１２０】
【表７】
【０１２１】
【表８】
【０１２２】
実施例１３：長時間作用性および効果の別の評価
マウス感染プロトコールについてはこれまでに記載した（１〜４）。軽く麻酔したマウスの外鼻孔にインフルエンザウイルスを接種する。
【０１２３】
処置法および管理。一用量の化合物を所定の時点で、感染最大１０日前、好ましくは、感染４〜７日前、または感染後、好ましくは、感染直後および感染後最大４８時間の時点で投与する。ほとんどの試験では、効果は、非致死株のインフルエンザを用い、肺におけるウイルス力価の低下によって評価する。感染前に化合物を投与したマウスでは、感染後１日で、または感染後数日で、好ましくは、感染１〜４日後に肺を摘出する。ホモジナイズした肺サンプルを確立された方法によりウイルスについて評価し、ウイルス量の力価を推定し、未処置マウスの肺のウイルス力価と比較する。
【０１２４】
マウス馴化致死株のインフルエンザを用いる試験では、効果は、未処置のマウスと比べた場合の生存率および／または生存数の増加によって評価する。
【０１２５】
参照文献
【表９】
【発明の背景】
【０００１】
発明の分野
本発明は新規な化学化合物およびそれらの医薬における使用に関する。特に、本発明は新規な二量体化合物、それらの製造方法、それらの医薬製剤、および抗ウイルス薬としてのそれらの使用に関する。
【０００２】
背景技術
他の炭水化物から、シアル酸としても知られるＮ−アセチルノイラミン酸（ＮＡＮＡ）を切断する能力を有する酵素が、多くの微生物に存在している。これらとしては、コレラ菌(Vibrio cholera)、ウエルシュ菌(Clostridium perfringens)、肺炎連鎖球菌(Streptococcus pneumoniae)およびアースロバクター・シアロフィルス(Arthrobacter sialophilus)などの細菌、ならびにインフルエンザウイルス、パラインフルエンザウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、ニューカッスル病ウイルスおよびセンダイウイルスなどのウイルスが挙げられる。これらのウイルスのほとんどはオルトミクソウイルスまたはパラミクソウイルス群に属し、ウイルス粒子の表面にノイラミニダーゼ活性を有している。ノイラミニダーゼを有するこれらの生物の多くは、ヒトおよび／または動物の主要な病原体であり、インフルエンザウイルスおよびニューカッスル病ウイルスなどのいくつかのものは、極めて重大な疾病を引き起こす。
【０００３】
長い間、ノイラミニダーゼの阻害剤によってノイラミニダーゼを有するウイルスによる感染を予防し得ると考えられてきた。知られているノイラミニダーゼ阻害剤のほとんどが、２−デオキシ−２，３−デヒドロ−Ｎ−アセチルノイラミン酸（ＤＡＮＡ）およびそのいくつかの誘導体などのノイラミン酸類似体である(Meindl et al, Virology, 1974 58 457)。本発明者らの国際特許公開番号ＷＯ９１／１６３２０では、ウイルスノイラミニダーゼに有効であるＤＡＮＡの多くの類似体を記載しており、特に、４−グアニジノ−２−デオキシ−２，３−デヒドロ−Ｎ−アセチルノイラミン酸（化合物（Ａ）、コード番号ＧＧ１６７）がＡ型およびＢ型インフルエンザの治療に有用であることを示している(N. Engl. J. Med. , 1997 337 874-880)。その他の特許出願では、密接に関連した種々のシアル酸誘導体が記載されており（例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９５／１８８００、同ＷＯ９５／２０５８３および同ＷＯ９８／０６７１２）、またＧＧ１６７の抗ウイルス性高分子複合体についても記述されている（国際特許出願番号ＰＣＴ／ＡＵ９７／００７７１）。
【０００４】
【化１】
［Ａｃはアセチルを表す］。
【０００５】
国際特許公開ＷＯ００／５５１４９では、１００原子以下の長さの共通のスペーサーまたは連結基と結合した、化合物（Ａ）などの２つのノイラミニダーゼ結合分子を含んでなる二量体化合物を記載している。
【０００６】
本発明者らは今般、本明細書において具体的に開示していないが、国際特許公開ＷＯ００／５５１４９の包括範囲に含まれ、肺滞留時間が長く、強力であるといった驚くほど有利な抗インフルエンザ活性プロフィールを示す新規な化合物種を発見した。
【０００７】
理論に拘束されるものではないが、肺内での滞留時間が長いことについての根拠は、化合物の大きさおよび分子量が気道上皮内での結合が強いために侵入を阻まれていること、および化合物の極性が細胞膜を極めて非効率的にしか通過しないようなものであることによると考えられている。またもう１つの理論として、化合物自体が細胞膜のリン脂質または気道上皮のその他の成分と相互作用し、肺内での滞留時間を延長するというものがある。
【発明の概要】
【０００８】
下記一般式（Ｉ）の化合物、またはその医薬上許容される誘導体：
【化２】
［式中、
Ｒは、アミノまたはグアニジノ基であり；
Ｒ２は、アセチルまたはトリフルオロアセチルであり；
ｎおよびｑは、同じであっても異なっていてもよく、０、１または２から選択され；かつ
Ｘは、置換されていてもよいフェニル、置換されていてもよいナフチル、または置換されていてもよいフェニル−Ｙ−所望により置換されていてもよいフェニル（ここで、Ｙは共有結合、ＣＨ２、ＣＨ２ＣＨ２、ＯまたはＳＯ２から選択される）である、
｛ただし、Ｘがフェニルまたはナフチルであるとき、ｎおよびｑは双方とも２であり、Ｘがフェニル−Ｙ−フェニル（ここで、Ｙは共有結合である）であるとき、ｎおよびｑは双方ともに０ではない｝］。
【発明の具体的説明】
【０００９】
好ましくは、Ｒはグアニジノ基である。
【００１０】
好ましくは、Ｒ２はアセチル基である。
【００１１】
好ましくは、ｎおよびｑは同じである。
【００１２】
好ましくは、Ｘはフェニル（オルト、メタ、またはパラ置換されていてもよい）、ナフチルまたはフェニル−Ｙ−フェニル（各フェニル環は所望によりアルコキシで置換されていてもよい）である。
【００１３】
「置換されていてもよい」とは、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ハロ、ハロアルキル、ハロアルケニル、ハロアルキニル、ハロアリール、ヒドロキシ、アルコキシ、アルケニルオキシ、アリールオキシ、カルボキシ、ベンジルオキシ、ハロアルコキシ、ハロアルケニルオキシ、ハロアリールオキシ、ニトロ、ニトロアルキル、ニトロアルケニル、ニトロアルキニル、ニトロアリール、ニトロヘテロシクリル、アジド、ニトロソ、アミノ、アルキルアミノ、アルケニルアミノ、アルキニルアミノ、アリールアミノ、ベンジルアミノ、アシルアミノ、アシル、アルケニルアシル、アルキニルアシル、アリールアシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アルデヒド、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、スルホニルアミノ、アルキルスルホニルアミノ、アリールスルホニルアミノ、アルキルスルホニルオキシ、アリールスルホニルオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、ヘテロシクリルアミノ、ハロヘテロシクリル、アルキルスルフェニル、アリールスルフェニル、カルボアルコキシ、カルボアリールオキシ、メルカプト、スルホン酸、アルキルチオ、アリールチオおよびアシルチオから選択される１以上の基でさらに置換されていてもされていなくとてもよい基を意味する。
【００１４】
好ましくは、アルキル、アルケニル、アルキニルおよびアルコキシ置換基は６個以上の炭素原子を含有する。
【００１５】
式（Ｉ）の化合物を、式（Ｉ）の化合物のいずれかの１以上の官能基において修飾して、その医薬上許容される誘導体とすることをができることは、当業者ならば明らかであろう。このような誘導体として特に着目されるものは、カルボキシル官能基、ヒドロキシル官能基において、またはアミノ基において修飾された化合物である。従って、目的の化合物としては、式（Ｉ）の化合物の、メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルエステルなどのアルキルエステル、フェニル、ベンゾイルエステルなどのアリールエステル、およびアセチルエステルが挙げられる。
【００１６】
「医薬上許容される誘導体」とは、 式（Ｉ）の化合物の、医薬上許容される塩、エーテル、エステルもしくはかかるエステルの塩、または受容者へ投与した際に式（Ｉ）の化合物または抗ウイルス的に活性な代謝産物もしくはその残渣を提供することができる他のいずれかの化合物を意味する。誘導体として特に着目されるものは、シアル酸カルボキシもしくはグリセロールヒドロキシ基において修飾された化合物、または、アミノおよびグアニジン基において修飾された化合物である。
【００１７】
式（Ｉ）の化合物の医薬上許容される塩としては、医薬上許容される無機および有機酸ならびに塩基から誘導されたものが挙げられる。好適な酸の例としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、過塩素酸、フマル酸、マレイン酸、リン酸、グリコール酸、乳酸、サリチル酸、コハク酸、トルエン−ｐ−スルホン酸、酒石酸、酢酸、クエン酸、メタンスルホン酸、蟻酸、安息香酸、マロン酸、ナフタレン−２−スルホン酸およびベンゼンスルホン酸が挙げられる。シュウ酸などのその他の酸はそれ自体では医薬上許容されるものではないが、本発明の化合物およびそれらの医薬上許容される酸付加塩を得る際に中間体として有用な塩の製造において有用であり得る。
【００１８】
好適な塩基から誘導された塩としては、アルカリ金属（例えば、ナトリウム）、アルカリ土類金属（例えば、マグネシウム）、アンモニウム、およびＮＲ４＋（ここで、ＲはＣ１−４アルキルである）塩が挙げられる。
【００１９】
本発明の化合物は本明細書に記載の方法によって製造することができる。当業者ならば、単量体をアリールスペーサー基と結合させる工程中にノイラミニダーゼ結合分子の１以上の官能基を保護するために保護基を用いる必要があることが明らかであろう。例えば、T. W. Green and P. G. M. Nutsによる"Protective Groups in Organic Synthesis"(John Wiley & Sons, 1991)を参照。式（Ｉ）の化合物の医薬上許容される塩は、公知の手法によって製造することができる。
【００２０】
製造および処理を容易にするため、式（Ｉ）の化合物は結晶状であることが好ましい。
【００２１】
従って、本発明はまた上記の式（Ｉ）の化合物の製造方法であって、下記式（II）の化合物を脱保護することを含んでなる方法も提供する：
【化３】
（式中、Ｒ、Ｒ２、ｎ、ｑおよびｘは上記定義の通りである）。
【００２２】
式（Ｉ）の化合物は抗ウイルス活性を有する。特に、これらの化合物はオルトミクソウイルスおよびパラミクソウイルスのウイルスノイラミニダーゼ、例えば、Ａ型およびＢ型インフルエンザ、パラインフルエンザ、流行性耳下腺炎およびニューカッスル病のウイルスノイラミニダーゼの阻害剤である。
【００２３】
よって、第２の態様において、本発明は、ウイルス感染症、例えば、オルトミクソウイルス感染症およびパラミクソウイルス感染症の治療に有効な治療薬として用いる式（Ｉ）の化合物またはその医薬上許容される誘導体を提供する。
【００２４】
第３の態様において、本発明はウイルス感染症の予防または治療方法であって、式（Ｉ）の化合物またはその医薬上許容される塩もしくは誘導体の有効量を、それを必要とする被験体へ投与することを含んでなる方法を提供する。
【００２５】
好ましくは、ウイルス感染症はオルトミクソウイルス感染症またはパラミクソウイルス感染症である。より好ましくは、ウイルス感染症はＡ型またはＢ型インフルエンザ感染症である。
【００２６】
好ましくは、被験体は哺乳類などの動物であり、より好ましくは、ヒト、またはウマ属に属するもの、例えば、ウマ、ロバまたはラバである。最も好ましくは、哺乳類はヒトである。
【００２７】
第４の態様において、本発明は、ウイルス感染症の治療用の医薬の製造のための、本発明の化合物の使用を提供する。
【００２８】
当業者ならば、本明細書において治療とは、確立された感染症または症候の治療だけでなく感染症に対する予防にも及ぶことは明らかであろう。
【００２９】
また、本発明の化合物は、診断方法、特にインフルエンザウイルスの検出方法、においても用いることができる。かかる方法で使用する場合には、本発明の化合物に、放射性標識、蛍光標識または化学発光標識などの標識を付けることが有利であることがある。
【００３０】
本発明の化合物が好適である診断方法は、例えば、本発明者らの先行する出願ＰＣＴ／ＡＵ９７/００１０９およびＰＣＴ／ＡＵ９７／００７７１に記載されている。
【００３１】
第５の態様において、本発明は、本発明の化合物を、ウイルスを含んでいる疑いがあるサンプルと接触させることを含んでなるウイルス感染症の検出方法を提供する。
【００３２】
さらに、治療用に必要な本発明の化合物の量は選択された化合物だけでなく、投与経路、治療する症状の性質、ならびに患者の年齢および状態によって異なり、最終的には医師または獣医の判断によって行われることが分かるであろう。しかしながら、一般的には好適な用量は１日あたり約０．００１〜１００ｍｇ／体重ｋｇの範囲、好ましくは、０．０１〜１０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲、最も好ましくは、０．１〜１ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である。
【００３３】
処置は、好ましくは、感染前または感染時に開始してウイルスが気道に存在しなくなるまで続ける。しかしながら、本発明の化合物は感染後、例えば、確立された症状の出現後に施与した場合でも有効である。
【００３４】
好適には、処置は１回または２回行い、好ましくは、治療だけならば１回だけ、好ましくは、予防には週１回行う。
【００３５】
本発明の化合物は便宜には、例えば、単位投与形あたり１〜１００ｍｇ、より便宜には、１〜２０ｍｇの有効成分を含有する単位投与形で投与する。
【００３６】
治療に用いる場合には、本発明の化合物を原料化学物質として投与してもよいが、医薬製剤としての有効成分であることが好ましい。
【００３７】
よって、第６の態様においては、本発明は、式（Ｉ）の化合物またはその医薬上許容される塩もしくは誘導体を、１種以上の医薬上許容される担体、および必要に応じて他の治療および／または予防成分とともに含んでなる医薬製剤を提供する。担体は製剤のその他の成分と適合し、その受容者に有害ではないという意味において「許容される」ものでなければならない。
【００３８】
また、本発明の化合物はその他の治療薬および／または予防薬、例えば、その他の抗感染症薬と併用してもよい。特に、本発明の化合物はその他の抗ウイルス薬と併用してもよい。よって、本発明は、第７の態様において、式（Ｉ）の化合物またはその医薬上許容される塩もしくは誘導体を、別の治療上および／または予防上有効な薬剤、特に、抗ウイルス薬とともに含んでなる組み合わせ物を提供する。
【００３９】
上記の組み合わせ物は、便宜には、医薬製剤の形態で用いるために提供され、よって、上記の組み合わせ物をその医薬上許容される担体とともに含んでなるかかる製剤は、本発明のさらなる態様をなす。
【００４０】
かかる組み合わせ物に用いるのに好適な治療薬および／または予防薬としては、他の抗感染症薬、特に、抗菌薬および抗ウイルス薬、例えば、呼吸器感染症の治療に用いられるものが挙げられる。例えば、インフルエンザウイルスに有効である、上記のシアル酸類似体、例えば、ザナミビル(zanamivir)、オセルタミビル(oseltamivir)、アマンタジン(amantadine)、リマンタジン(rimantadine)およびリバビリン(rabavirin)、ならびにＦｌｕＶａｘなどの他の化合物またはワクチンをかかる組み合わせ物に含めてもよい。
【００４１】
かかる組み合わせ物の個々の成分は個別に投与してもよいし、逐次投与してもよいし、または個別の医薬製剤もしくは組み合わせ医薬製剤として同時に投与してもよい。
【００４２】
本発明の化合物を同じウイルスに有効な第２の治療薬および／または予防薬と併用する場合、各化合物の用量は各化合物を単独で用いる際に使用する用量と同じ場合もあるし、異なる場合もある。当業者であれば、適当な用量が容易に分かるであろう。
【００４３】
医薬製剤としては、経口、直腸、経鼻、局所（口内および舌下など）、膣または非経口（筋肉内、皮下および静脈内など）投与に好適なもの、または気道（鼻腔など）への投与、例えば、吸入法または通気法による投与に好適な形態のものが挙げられる。製剤は、必要に応じて、便宜には、個別投与単位で提供してもよく、製薬分野では十分に公知のいずれの方法によって製造してもよい。これらの方法としては、活性化合物を液体担体または微粉固体担体、もしくはその両方と会合させた後、必要に応じて、生成物を所望の製剤に成形する工程が含まれる。
【００４４】
経口投与に好適な医薬製剤は、便宜には、各々が所定量の有効成分を含むカプセル剤、カシェ剤もしくは錠剤などの個別単位として；粉末もしくは顆粒剤として；液剤、懸濁剤としてまたは乳剤として提供してもよい。また、有効成分はボーラス、舐剤またはペースト剤として提供してもよい。経口投与用の錠剤およびカプセル剤には、結合剤、増量剤、滑沢剤、崩壊剤、または湿潤剤などの通常の賦形剤を含めてもよい。錠剤は当技術分野では十分に公知の方法に従ってコーティングしてもよい。経口液体製剤は、例えば、水性もしくは油性懸濁剤、液剤、乳剤、シロップ剤またはエリキシル剤の形態であってもよいし、または使用前に水もしくはその他の好適なビヒクルを用いて構成する乾燥製品として提供してもよい。かかる液体製剤には、沈殿防止剤、乳化剤、非水性ビヒクル（食用油を含んでもよい）、または防腐剤などの慣用の添加剤を含んでもよい。
【００４５】
また、本発明の化合物は、注射、例えば、ボーラス注射、または点滴による非経口投与用に調製してもよく、アンプルに入った単位投与形、充填済みシリンジ、少量注入剤として、または防腐剤を添加した多容量型容器で提供してもよい。組成物は油性もしくは水性ビヒクル中の懸濁剤、液剤、乳剤などの形態をとってもよく、沈殿防止剤、安定剤および／または分粉末などの配合剤を含んでいてもよい。あるいは、有効成分は使用前に好適なビヒクル、例えば、滅菌、パイロジェンフリー水を用いて構成する、滅菌固体の無菌単離によってまたは溶液からの凍結乾燥によって得た粉末形態であってもよい。
【００４６】
表皮への局所投与には、本発明の化合物を軟膏、クリーム剤もしくはローション剤として、または経皮パッチとして調剤してもよい。軟膏およびクリーム剤は、例えば、好適な増粘剤および／またはゲル化剤を添加した水性または油性基剤を用いて調剤してもよい。ローション剤は水性または油性基剤を用いて調剤してよく、また一般には１種以上の乳化剤、安定剤、分粉末、沈殿防止剤、増粘剤、または着色剤も含む。
【００４７】
口腔内局所投与に好適な製剤としては、香味基剤、通常、スクロースおよびアラビアガムまたはトラガカントガム、中に有効成分を含んでなるトローチ剤；ゼラチンまたはスクロースおよびアラビアガムなどの不活性基剤中に有効成分を含んでなる芳香錠；ならびに好適な液体担体中に有効成分を含んでなる口内洗浄剤が挙げられる。
【００４８】
直腸投与に好適な、担体が固体である医薬製剤は、単位用量坐剤として提供するのが最も好ましい。好適な担体としては、ココア脂および当技術分野で一般に用いられるその他の材料が挙げられ、坐剤は、便宜には、活性化合物を軟化または融解した担体と混合した後に冷却し、成形することによって作製すればよい。
【００４９】
膣投与に好適な製剤は、有効成分の他、当技術分野で好適であることが知られている担体を含む膣坐剤、タンポン、クリーム剤、ゲル剤、ペースト剤、フォーム剤またはスプレー剤とし提供してもよい。
【００５０】
経鼻投与をはじめとする気道への投与には、ノイラミニダーゼ阻害剤を、当技術分野において気道への投与に用いられる方法および製剤のいずれによって投与してもよい。
【００５１】
従って、一般的に、本化合物は液剤もしくは懸濁剤の形態または乾燥粉末として投与してもよい。
【００５２】
液剤および懸濁剤は、一般的に、例えば、水単独（例えば、滅菌またはパイロジェンフリー水）または水および生理学上許容される補助溶媒（例えば、エタノール、プロピレングリコールまたはＰＥＧ４００などのポリエチレングリコール）から調製された水性のものである。
【００５３】
かかる液剤または懸濁剤は、その他の賦形剤、例えば、防腐剤（塩化ベンザルコニウムなど）、可溶化剤／界面活性剤、例えば、ポリソルベート（例えば、Ｔｗｅｅｎ ８０、Ｓｐａｎ ８０、塩化ベンザルコニウム）、緩衝剤、等張性調整剤（例えば、塩化ナトリウム）、吸収促進薬および増粘剤をさらに含んでもよい。懸濁剤は、沈殿防止剤（例えば、微晶質セルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム）をさらに含んでもよい。
【００５４】
液剤または懸濁剤は、慣用の手段により、例えば、ドロッパー、ピペットまたはスプレーを用いて鼻腔に直接適用される。これらの製剤は単回または多回投与形で提供してもよい。後者の場合には計量手段が提供されることが望ましい。ドロッパーまたはピペットの場合には、患者が所定量の適当な液剤または懸濁剤を投与することによってなされる。スプレーの場合には、例えば、定量噴霧式噴霧ポンプによってなされる。
【００５５】
また、気道への投与は、化合物がクロロフルオロカーボン（ＣＦＣ）、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタンまたはジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素またはその他の好適なガスなどの好適な噴射剤を加えた加圧パックで提供されるエアゾール製剤によって行ってもよい。また、エアゾールは、便宜には、レシチンなどの界面活性剤を含んでもよい。薬剤の量は定量バルブを設けることで制御することができる。
【００５６】
また、本化合物は乾燥粉末の形態、例えば、化合物とラクトース、デンプン、デンプン誘導体、例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロースおよびポリビニルピロリジン（ＰＶＰ）などの好適な粉末基剤との粉末混合物の形態で提供してもよい。便宜には、粉末担体は鼻腔内でゲルを形成する。この粉末組成物は単位投与形、例えば、カプセルもしくはカートリッジ（例えば、ゼラチン）、またはブリスターパック（これから粉末が吸入器によって投与される）として提供してもよい。
【００５７】
経鼻投与製剤をはじめとする気道への投与を目的とする製剤では、化合物の粒径は一般に小さく、例えば、５ミクロン以下のオーダーである。かかる粒径は当技術分野では公知の手段によって、例えば、微粉末化によって得られる。
【００５８】
所望により、有効成分に徐放性を与えるようにした製剤を用いてもよい。
好ましくは、本発明の化合物を吸入法、通気法または経鼻投与、もしくはその組み合わせによって気道に投与する。
【００５９】
「リレンザ(Relenza)」は「ディスクへラー(Diskhaler)」（GlaxoSmithKlineグループ社の商品名）を介してフリーフロー粉末として経口吸入によって投与される。類似の製剤が本発明に好適であろう。
【００６０】
よって、本発明の第８の態様によれば、上記の製剤を含有する吸入器が提供される。
【００６１】
また、吸入器は定量式エアゾール吸入器の形態であってもよいことは明らかであろう。
【００６２】
本明細書の目的では、「含んでなる(comprising)」とは、「限定されるものではないが、含む(including but not limited to)」を意味すること、「含んでなる(comprises)」も相当の意味を持つことは明らかであろう。
【００６３】
限定されるものではないが、本明細書の中で引用した特許および特許出願をはじめとする刊行物は総て、その個々の刊行物が、参照により、その全内容を示して具体的かつ個々に示されるように本明細書の一部とされる。
【００６４】
発明の詳しい説明
以下、本発明を、単に参照として以下の限定されない実施例により詳細に説明する。
【００６５】
装置による方法
Ａ法（ＬＣ／ＭＳ）
ＭｉｃｒｏｍａｓｓプラットフォームII質量分析計を、陽イオンエレクトロスプレーモードで使用、質量範囲１００〜１０００ａｍｕ（原子質量単位）。
カラム：３．３ｃｍ×４．６ｍｍ ＩＤ、３μｍ ＡＢＺ＋ＰＬＵＳ、
流速：３ｍｌ／分、
注入量：５μｌ、
溶媒Ａ：９５％アセトニトリル＋０．０５％蟻酸、
溶媒Ｂ：０．１％蟻酸＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム、
勾配：０％ Ａ／０．７分、０〜１００％ Ａ／３．５分、１００％ Ａ／１．１分、１００〜０％ Ａ／０．２分。
【００６６】
Ｂ法（ＬＣ／ＭＳ）
Ｗａｔｅｒｓ ＺＱ質量分析計を陽イオンエレクトロスプレーモードで使用、質量範囲１００〜１０００ａｍｕ。
カラム：３．３ｃｍ×４．６ｍｍ ＩＤ、３μｍ ＡＢＺ＋ＰＬＵＳ、
流速：３ｍｌ／分、
注入量：５μｌ、
溶媒Ａ：９５％アセトニトリル＋０．０５％蟻酸、
溶媒Ｂ：０．１％蟻酸＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム、
勾配：０％ Ａ／０．７分、０〜１００％ Ａ／３．５分、１００％ Ａ／１．１分、１００〜０％ Ａ／０．２分。
【００６７】
Ｃ法（自動分取ＨＰＬＣ）
使用した分取カラムはSupelcosil ABZplusであった（１０ｃｍ×２．１２ｃｍ）。
ＵＶ波長：２３０ｎｍ、
注入量：２ｍｌ、
流速：４ｍｌ／分、
溶媒Ａ：アセトニトリル＋０．０５％ＴＦＡ、
溶媒Ｂ：水＋０．１％ＴＦＡ、
勾配：５〜４０％ Ａ／２０分、４０％ Ａ／２０分、４０〜１００％ Ａ／０．３分、１００％ Ａ／１５分、１００〜５％ Ａ／３分。
【００６８】
Ｄ法（マス用自動分取ＨＰＬＣ）
使用した分取カラムはSupelcosil ABZplusであった（１０ｃｍ×２．１２ｃｍ）。
ＵＶ波長：２００〜３２０ｎＭ、
流速：２０ｍｌ／分、
注入量：１ｍｌ、
溶媒Ａ：０．１％蟻酸、
溶媒Ｂ：９５％アセトニトリル＋５％蟻酸、
勾配：１００％ Ａ／１分、１００〜８０％ Ａ／９分、８０〜１％ Ａ／３．５分、１％ Ａ／１．４分、１〜１００％ Ａ／０．１分。
【００６９】
Ｅ法（分取ＨＰＬＣ）
使用した分取カラムはＤｙｎａｍａｘ ６０オングストローム Ｃ１８（２５ｃｍ×４．１４ｃｍ）であった。
ＵＶ波長：２３０ｎｍ、
流速：４０ｍｌ／分、
溶媒Ａ：アセトニトリル＋０．０５％ＴＦＡ、
溶媒Ｂ：水＋０．１％ＴＦＡ、
勾配：０〜５０％ Ａ／２５分、５０〜１００％ Ａ／０．３分、１００％ Ａ／１５分、１００〜０％ Ａ／３分。
【００７０】
Ｆ法（分取ＨＰＬＣ）
使用した分取カラムはKromasil Ｃ１８（２０ｃｍ×５ｃｍ）であった。
ＵＶ波長：２３０ｎｍ、
流速：８０ｍｌ／分、
溶媒Ａ：１％ＴＦＡ、
溶媒Ｂ：８０％アセトニトリル＋１％ＴＦＡ、
勾配：０〜１００％ Ｂ／７０分。
【００７１】
ＨＰＬＣの後、適当な画分を合わせ、減圧下での蒸発により揮発性成分を除去した。水相をアンバークロムＣＧ−１６１樹脂のカラム（１０×２．５ｃｍ）に適用し、水（５００ｍｌ）、次いでアセトニトリル：ＭｅＯＨ：水の２：２：１混合物（５００ｍｌ）で溶出した。
【００７２】
略語
ＴＦＡ トリフルオロ酢酸
ＤＭＡＰ ４−ジメチルアミノピリジン
ＤＣＭ ジクロロメタン
ＥｔＯＡｃ 酢酸エチル
Ｅｔ２Ｏ ジエチルエーテル
ＭｅＯＨ メタノール
ＨＰＬＣ 高速液体クロマトグラフィー
ＤＰＭ ジフェニルメチル
ＳＰＥ 固相抽出
ＮＭＲ 核磁気共鳴
ＬＣ／ＭＳ 液体クロマトグラフィー／質量分析
【実施例】
【００７３】
中間体１
【化４】
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−３−（アセチルアミノ）−４−（｛(Ｅ）−［（tert−ブトキシカルボニル）アミノ］［（tert−ブトキシカルボニル）イミノ］メチル｝アミノ)−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１，２，３−トリヒドロキシプロピル］−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−６−カルボン酸ベンズヒドリル（J. Med. Chem. 1998, 41, 787-797参照）（１２．３８ｇ；１７．７ミリモル）を窒素下、室温にて乾燥アセトニトリル（１３０ｍｌ）に溶かした。この溶液を攪拌し、１，１’−カルボニルジイミダゾール（２．８７ｇ；１７．７ミリモル）を添加した。１６時間後のＬＣ／ＭＳで、最初のトリオールが存在していることが分かったため、さらなる１，１’−カルボニルジイミダゾール（合計０．４９３ｇ；３ミリモル）を添加した。数時間後のＬＣ／ＭＳでは、トリオールが存在しないことが分かった。溶媒を蒸発させ、残渣を１：１酢酸エチル／４０〜６０石油エーテルで溶出するシリカでのフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した。生成物を含む画分を蒸発させた後、ジクロロメタンに溶かし、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、蒸発させ、灰白色の固体として中間体１（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−３−（アセチルアミノ）−４−（｛［（tert−ブトキシカルボニル）アミノ］［（tert−ブトキシカルボニル）イミノ］メチル｝アミノ)−２−｛（Ｓ）−ヒドロキシ［（４Ｒ）−２−オキソ−１，３−ジオキソラン−４−イル］メチル｝−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−６−カルボン酸ベンズヒドリル）（１１．０５ｇ；８６％）を得た。
【００７４】
中間体３
【化５】
中間体１（２．０ｇ，２．７６ｍｍｏｌ）を、無水トルエン（３×２０ｍｌ）との共沸にり乾燥させた後、無水ピリジン（８ｍｌ）に溶かした。これにＤＭＡＰ（１．０１ｇ，８．２９ｍｍｏｌ）およびクロロ蟻酸ｐ−ニトロフェニル（０．６７ｇ，３．３ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温にて一晩攪拌した。さらなる分量のクロロ蟻酸ｐ−ニトロフェニル（０．２８ｇ，１．３８ｍｍｏｌ）を添加し、攪拌を２時間続けた。ＬＣＭＳ（Ｂ法）では、ＭＨ＋＝８９０；ＴＲＥＴ＝４．１９分であり、中間体２と一致した。
【００７５】
この混合物の一部（１．６ｍｌ）を別の反応槽に移し、ＤＭＡＰ（０．２０ｇ，１．６６ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（０．０８ｍｌ，０．５５ｍｏｌ）、次ぎに１，３−ベンゼンジエタンアミン二塩酸塩（６５ｍｇ，０．２７ｍｍｏｌ）［製造については、Chem. Ber., 1984, 117 (4), 1487-1496参照］で処理し、混合物を７０時間攪拌した後、真空濃縮し、ＤＣＭ（１０ｍｌ）と水（５ｍｌ）とで分液した。
疎水性ガラスカートリッジを用いて有機層の分離を行った。ＤＣＭ層を窒素下、ブローダウンにより濃縮した後、５ｇシリカＳＰＥカートリッジに通し、最初にシクロヘキサン：Ｅｔ２Ｏ（１：１）、次ぎにＥｔ２Ｏ、次ぎにＥｔ２Ｏ：ＥｔＯＡｃ（９：１）、次ぎにＥｔ２Ｏ：ＥｔＯＡｃ（５：１）、次ぎにＥｔ２Ｏ：ＥｔＯＡｃ（３：１）、次ぎにＥｔ２Ｏ：ＥｔＯＡｃ（１：１）、最後にＥｔＯＡｃで溶出し、白色の固体として中間体３（０．２９g；６３％収率）を得た。ＬＣ／ＭＳ（Ａ法）では、（Ｍ+２Ｈ+）／２＝８３４；ＴＲＥＴ＝４．５６分であった。
【００７６】
中間体４
【化６】
中間体３（０．２９ｇ，０．２ｍｍｏｌ）をＤＣＭ：アニソールの１０：１混合物（０．８０ｍｌ）に溶かし、ＴＦＡ（０．７３ｍｌ）で処理した。得られた溶液を室温にて２時間攪拌した後、窒素下、ブローダウンにより蒸発乾固した。残渣をジエチルエーテルでトリチュレートし、白色の固体として中間体４のビス−ＴＦＡ塩（０．１４２ｇ，７６％収率）を得た。ＬＣ／ＭＳ（Ｂ法）では、（Ｍ+２Ｈ+）／２＝４６７；ＴＲＥＴ＝２．０５分であった。
【００７７】
中間体５
【化７】
中間体１（０．１０ｇ，０．１４ｍｍｏｌ）を、無水トルエンとの共沸を３回行うことによって乾燥させた後、無水ＤＣＭ（０．５ｍｌ）に溶かした。得られた溶液にＤＭＡＰ（０．００５ｇ，触媒）、続いて１，１’−オキシビス［４−イソシアナトベンゼン］（０．０１２ｇ，０．０４６ｍｍｏｌ）、および３オングストロームモレキュラーシーブペレット数個を添加した。混合物を一晩還流した後、冷却し、５ｇシリカＳＰＥカートリッジにそのまま通した。これをまずＥｔ２Ｏ（１０×２０ｍ１）、次ぎにＥｔＯＡｃ（５×２０ｍｌ）で溶出し、無色のガラスとして中間体５（０．０２５ｇ，３３％収率）を得た。ＬＣ／ＭＳ（Ａ法）では、（Ｍ+２Ｈ+）／２＝８５２；ＴＲＥＴ＝４．５５分であった。
【００７８】
中間体６
【化８】
中間体１（４．０ｇ，５．６ｍｍｏｌ）を、無水トルエンとの共沸より乾燥させた後、無水ＤＣＭ（５ｍｌ）に溶かした。得られた溶液に、窒素下で攪拌しながら、４，４’−メチレンビス［イソシアン酸フェニル］（０．４８ｇ，１．９ｍｍｏｌ）、３オングストロームモレキュラーシーブペレット数個およびＤＭＡＰ（０．２ｇ，触媒）を添加した後、混合物を２０時間還流した。冷却後、混合物を真空濃縮し、シリカでのフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した。溶出はまずＤＣＭ、次ぎにＥｔ２Ｏ、次ぎに連続してＥｔ２Ｏ：ＥｔＯＡｃ（９５：５）、Ｅｔ２Ｏ：ＥｔＯＡｃ（９０：１０）およびＥｔ２Ｏ：ＥｔＯＡｃ（８０：２０）により行い、白色の固体として中間体６（２．６０ｇ，８０％収率）を得た。ＬＣＭＳ（Ｂ法）では、（Ｍ+２Ｈ+）／２＝８５０；ＴＲＥＴ＝４．５７分であった。
【００７９】
中間体７
【化９】
１，４−フェニレンジプロピオン酸（０．５０ｇ，２．２５ｍｍｏｌ）をトルエンと共沸した後、３オングストロームモレキュラーシーブペレット数個を加えてジオキサン（５ｍｌ）に懸濁し、窒素下、１０分間攪拌した。トリエチルアミン（０．６８ｍｌ，４．９０ｍｍｏｌ）、続いてジフェニルホスホリルアジド（０．９６ｍｌ，４．５０ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温にて２時間攪拌した。次いで、温度を８０℃に上げ、混合物を４５分間攪拌した後に冷却し、濾過して、不溶性物質を除去した。固体を石油エーテル（４０〜６０℃）で洗浄し、合わせた濾液を真空濃縮した。得られたオイルを石油エーテル（４０〜６０℃）で抽出し、無色のオイルとして中間体７（０．１２ｇ，２５％収率）を得た。
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ (ppm) 7.12 (s, 4H), 3.45 (t, 4H), 2.83 (t, 4H).
【００８０】
中間体８
【化１０】
完全に保護した中間体８を、中間体５および６の場合と同じ手順に従って、中間体７および１から製造し、その後、以下のように脱保護した：（０．０９ｇ，０．０５ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（０．３７ｍｌ）およびアニソール（０．０３７ｍｌ）の混合物に溶かし、氷浴中で冷却した。混合物をＴＦＡ（０．３７ｍｌ）で処理し、得られた溶液を室温まで温め、次いで、２．５時間攪拌した後、真空濃縮した。混合物をＥｔ２Ｏでトリチュレートし、白色の固体として中間体８のビス−ＴＦＡ塩（０．０５ｇ；９３％収率）を得た。ＬＣ／ＭＳ（Ｂ法）では、（Ｍ+２Ｈ+）／２＝４６７；ＴＲＥＴ＝２．０１分であった。
【００８１】
中間体９
【化１１】
無水トルエン（１００ｍｌ）中、４，４'−エチレンジアニリン（０．５０ｇ，２．３６ｍｍｏｌ）の溶液をトリホスゲン（１．４０ｇ，４．７０ｍｍｏｌ）で処理し、混合物を４時間還流加熱した（１２０℃）。混合物を冷却し、重力下で濾過し、不溶性残渣を除去した。濾液を真空濃縮し、黄色の固体として中間体９（０．５４ｇ，８６％収率）を得た。
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ (ppm) 6.98-7.05 (8H, ABq) および 2.86 (4H, s)
【００８２】
中間体１０
【化１２】
中間体１（０．４０ｇ，０．５６ｍｍｏｌ）を無水トルエンと２回共沸した後、無水ＤＣＭ（０．４ｍｌ）に溶かした。得られた溶液にＤＭＡＰ（０．０２ｇ，触媒)、続いて中間体９（０．０５ｇ，０．１９ｍｍｏｌ）および３オングストロームモレキュラーシーブペレット数個を添加した。混合物を１８時間還流した後、４０ｇシリカＢｉｏｔａｇｅカートリッジにそのまま通した。これをＥｔ２Ｏ：ＥｔＯＡｃ（６：１）で溶出し、白色の固体として中間体１０（０．１０ｇ，３１％収率）を得た。ＬＣ／ＭＳ（Ｂ法）では、（Ｍ+２Ｈ+）／２＝８５８；ＴＲＥＴ＝４．５７分であった。
【００８３】
中間体１１
【化１３】
中間体１（２．０ｇ，２．７６ｍｍｏｌ）を、無水トルエンとの共沸を３回行うことによって乾燥させた後、無水ピリジン（８ｍｌ）に溶かした。これにＤＭＡＰ（１．０１ｇ，８．２９ｍｍｏｌ）およびクロロ蟻酸ｐ−ニトロフェニル（０．６７ｇ，３．３０ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温にて１８時間攪拌した。さらなる分量のクロロ蟻酸ｐ−ニトロフェニル（０．２８ｇ，１．３８ｍｍｏｌ）を添加し、攪拌を２時間続けた。ＬＣ／ＭＳ（Ｂ法）では、ＭＨ＋＝８９０；ＴＲＥＴ＝４．１９分であり、中間体２と一致した。
【００８４】
混合物の一部（１．６ｍｌ）を別の反応槽に移し、ＤＭＡＰ（０．２０ｇ，１．６６ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（０．０８ｍｌ，０．５５ｍｍｏｌ）、次ぎに４，４'−スルホニルビス−ベンジルアミン二塩酸塩（０．１０ｇ，０．２８ｍｍｏｌ）［製造については、J. Chem. Soc., 1946, 466参照]で処理し、混合物を７０時間攪拌した。混合物を真空濃縮し、ＤＣＭ（１０ｍｌ）と水（５ｍｌ）とで分液した。５０ｍｌ疎水性ガラスカートリッジを用いて二相分離を行った。ＤＣＭ層を窒素下、ブローダウンにより濃縮した後、５ｇシリカＳＰＥカートリッジに通し、まずシクロヘキサン：Ｅｔ２Ｏ（１：１）、次ぎにＥｔ２Ｏ、続いてＥｔ２Ｏ：ＥｔＯＡｃ（９：１）、次ぎにＥｔ２Ｏ：ＥｔＯＡｃ（５：１）、次ぎにＥｔ２Ｏ：ＥｔＯＡｃ（３：１）、次ぎにＥｔ２Ｏ：ＥｔＯＡｃ（１：１）、最後にＥｔＯＡｃで溶出し、灰白色の固体として中間体１１（０．１５g；３０％収率）を得た。ＬＣＭＳ（Ａ法）では、（Ｍ+２Ｈ+）／２＝８９０；ＴＲＥＴ＝４．４７分であった。
【００８５】
同様にして、以下のものを製造した。
【００８６】
【表１】
【００８７】
中間体１６
【化１４】
中間体１４（２．７４ｇ，４．７９ｍｍｏｌ）を、無水トルエンとの共沸を４回行うことによって乾燥させた後、無水ピリジン（１３．７５ｍｌ）に溶かした。これにＤＭＡＰ（１．４６ｇ，１１．９８ｍｍｏｌ）およびクロロ蟻酸ｐ−ニトロフェニル（１．０６ｇ，５．２７ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温にて３時間攪拌した。ＬＣＭＳ（Ｂ法）では、ＭＨ＋＝７３８；ＴＲＥＴ＝３．８７分であり、中間体１５と一致した。
次いで、この混合物に追加のピリジン（８．２５ｍｌ）、続いて［１，１'−ビフェニル］−４，４'−ジメタンアミン（０．５１ｇ，２．４ｍｍｏｌ）（J. Med. Chem., 2000, 43, 420-431に従って製造）を添加し、攪拌をさらに１６時間続けた。混合物を真空濃縮し、ＤＣＭ溶液として９０ｇシリカＢｉｏｔａｇｅカートリッジに通した。これをジエチルエーテル、続いてＥｔ２Ｏ：ＥｔＯＡｃ（１：１）、次ぎにＥｔ２Ｏ：ＥｔＯＡｃ（１：２）、最後に ＥｔＯＡｃで溶出し、白色の固体として中間体１６（１．９２ｇ，５７％収率）を得た。ＬＣ／ＭＳ（Ａ法）では、（Ｍ+２Ｈ+）／２＝７０５；ＴＲＥＴ＝３．９６分であった。
【００８８】
中間体１７
【化１５】
中間体１０（０．１ｇ，０．０６ｍｍｏｌ）をガラスバイアルに入ったＤＣＭ：アニソールの１０：１混合物（０．４４ｍｌ）に溶かし、ＴＦＡ（０．０４ｍｌ）で処理した。得られた溶液を室温にて２時間攪拌した後、真空濃縮した。残渣をジエチルエーテルでトリチュレートし、白色の固体として中間体１７のビス−ＴＦＡ塩（０．０６ｇ，８７％収率）を得た。ＬＣ／ＭＳ（Ａ法）では、（Ｍ＋２Ｈ＋）／２＝４９１；ＴＲＥＴ＝２．３８分であった。
【００８９】
同様にして、以下のものを製造した：
【化１６】
【００９０】
【表２】
【００９１】
中間体２３
【化１７】
中間体１６（１．９２ｇ，１．３６ｍｍｏｌ）をＤＣＭ：アニソールの１０：１混合物（２７．５ｍｌ）に溶かし、ＴＦＡ（２５ｍｌ）で処理した。得られた溶液を室温にて２時間攪拌した後、真空濃縮した。残渣をジエチルエーテルでトリチュレートし、白色の固体として中間体２３のビス−ＴＦＡ塩（１．５９ｇ，９４％収率）を得た。ＬＣＭＳ（Ａ法）では、（Ｍ＋２Ｈ＋）／２＝５０５；ＴＲＥＴ＝２．２７分であった。
【００９２】
実施例１
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−３−（アセチルアミノ）−２−｛（１Ｒ，２Ｒ）−１−［（｛［２−（３−｛２−［（｛［（１Ｒ，２Ｒ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−３−（アセチルアミノ）−４−｛［アミノ（イミノ）メチル］アミノ｝−６−カルボキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−２，３−ジヒドロキシプロピル］オキシ｝カルボニル）アミノ］エチル｝フェニル）エチル］アミノ｝カルボニル）オキシ］−２，３−ジヒドロキシプロピル｝−４−｛［アミノ（イミノ）メチル］アミノ｝−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−６−カルボン酸
【化１８】
【００９３】
中間体４（０．１４ｇ，０．１５ｍｍｏｌ）を水（１．２０ｍｌ）およびメタノール（１．２０ｍｌ）の混合物に溶かした。これにトリエチルアミン（０．３０ｍｌ）を添加し、溶液を２時間振盪した後、真空濃縮した。逆相分取ＨＰＬＣ（Ｄ法）により実施例１（０．０４８ｇ；４４％収率）が得られた。ＬＣ／ＭＳ（Ａ法）では、（Ｍ＋２Ｈ＋）／２＝４４１；ＴＲＥＴ＝１．８３分であった。
【００９４】
実施例２
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−３−（アセチルアミノ）−２−｛（１Ｒ，２Ｒ）−１−［（｛［２−（４−｛２−［（｛［（１Ｒ，２Ｒ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−３−（アセチルアミノ）−４−｛［アミノ（イミノ）メチル］アミノ｝−６−カルボキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−２，３−ジヒドロキシプロピル］オキシ｝カルボニル）アミノ］エチル｝フェニル）エチル］アミノ｝カルボニル）オキシ］−２，３−ジヒドロキシプロピル｝−４−｛［アミノ（イミノ）メチル］アミノ｝−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−６カルボン酸
【化１９】
【００９５】
中間体８（０．０３ｇ；０．０６ｍｍｏｌ）を水（１ｍｌ）およびメタノール（１ｍｌ）の混合物に溶かした。これにトリエチルアミン（０．２５ｍｌ）を添加し、溶液を１時間攪拌した後、真空濃縮した。残渣を水溶液としてＣ１８ ＳＰＥカートリッジ（メタノールでプレコンディショニングしたもの）に通した。このカラムをアセトニトリル：水（５：９５）（３×５ｍｌ）、次いでアセトニトリル：水（７．５：９３．５）（３×５ｍｌ）、最後にアセトニトリル：水（１５：８５）（３×５ｍｌ）で溶出し、白色の固体として実施例２（０．００５ｇ；９％収率）を得た。ＬＣ／ＭＳ（Ｂ法）では、（Ｍ＋２Ｈ＋）／２＝４４１；ＴＲＥＴ＝１．７９分であった。
【００９６】
実施例３
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−３−（アセチルアミノ）−２−｛（１Ｒ，２Ｒ）−１−［（｛［４−（２−｛４−［（｛［（ｌＲ，２Ｒ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−３−（アセチルアミノ）−４−｛［アミノ（イミノ）メチル］アミノ｝−６−カルボキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−２，３−ジヒドロキシプロピル］オキシ｝カルボニル）アミノ］フェニル｝エチル）フェニル］アミノ｝カルボニル）オキシ］−２，３−ジヒドロキシプロピル｝−４−｛［アミノ（イミノ）メチル］アミノ｝−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−６−カルボン酸ビスＴＦＡ塩
【化２０】
【００９７】
ジオキサン：水の２：１混合物（３ｍｌ）中、中間体１７（０．０６ｇ，０．０６ｍｍｏｌ）の溶液を、トリエチルアミン（１ｍｌ）で処理し、混合物を室温で１８時間攪拌した。逆相ＨＰＬＣ（Ｃ法）により精製し、白色の固体として実施例３（０．０１ｇ，２２％収率）を得た。ＬＣ／ＭＳ（Ａ法）では、（Ｍ＋２Ｈ＋）／２＝４６５；ＴＲＥＴ＝２．１６分であった。
【００９８】
実施例４
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−３−（アセチルアミノ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−（｛［（｛４−［（４−｛［（｛［（１Ｒ，２Ｒ）−１（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−３−（アセチルアミノ）−４−｛［アミノ（イミノ）メチル］アミノ｝−６−カルボキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−２，３−ジヒドロキシプロピル］オキシ｝−カルボニル）アミノ］メチル｝フェニル）スルホニル］フェニル｝メチル）アミノ］オキシ）−２，３−ジヒドロキシプロピル］−４−｛［アミノ（イミノ）メチル］アミノ｝−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−６−カルボン酸
【化２１】
【００９９】
中間体２０（０．０９ｇ，０．０７ｍｍｏｌ）を水（０．７０ｍｌ）およびメタノール（０．７０ｍｌ）の混合物に溶かした。これにトリエチルアミン（０．１８ｍｌ）を添加し、溶液を２時間振盪した後、真空濃縮した。逆相分取ＨＰＬＣ（Ｄ法）のより、ビス−ＴＦＡ塩として実施例４（０．０１４ｇ，２０％収率）を得た。ＬＣ／ＭＳ（Ｂ法）では、（Ｍ＋２Ｈ＋）／２＝４９７；ＴＲＥＴ＝１．９３分であった。
【０１００】
同様にして、以下のものを製造した。
【０１０１】
【表３】
【０１０２】
実施例５
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−３−（アセチルアミノ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−（｛［（｛４−［（４−｛［（｛［（１Ｒ，２Ｒ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−３−（アセチルアミノ）−４−｛［アミノ（イミノ）メチル］アミノ｝−６−カルボキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−２，３−ジヒドロキシプロピル］オキシ｝カルボニル）アミノ］メチル｝フェニル）オキシ］フェニル｝メチル）アミノ］カルボニル）オキシ）−２，３−ジヒドロキシプロピル］−４−｛［アミノ（イミノ）メチル］アミノ｝−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−６−カルボン酸
【０１０３】
実施例６
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−３−（アセチルアミノ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−（｛［（｛４−［（４−｛［（｛［（１Ｒ，２Ｒ）−１（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−３−（アセチルアミノ）−４−｛［アミノ（イミノ）メチル］アミノ｝−６−カルボキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−２，３−ジヒドロキシプロピル］オキシ｝カルボニル）アミノ］メチル｝フェニル）メチル］フェニル）メチル）アミノ］カルボニル｝オキシ）−２，３−ジヒドロキシプロピル］−４−｛［アミノ（イミノ）メチル］アミノ｝−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−６−カルボン酸
【０１０４】
実施例７
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−３−（アセチルアミノ）−２−｛（１Ｒ，２Ｒ）−１−［（｛［４−（｛４−［（｛［（１Ｒ，２Ｒ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−３−（アセチルアミノ）−４−｛［アミノ（イミノ）メチル］アミノ｝−６−カルボキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−２，３−ジヒドロキシプロピル］オキシ｝カルボニル）アミノ］フェニル｝オキシ）フェニル］アミノ｝カルボニル）オキシ］−２，３−ジヒドロキシプロピル｝−４−｛［アミノ（イミノ）メチル］アミノ｝−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−６−カルボン酸ビスＴＦＡ塩
【化２２】
【０１０５】
中間体１８（０．００５ｇ，０．００４ｍｍｏｌ）を水（１ｍｌ）に溶かし、４０℃で８時間加熱した。混合物を冷却し、５００ｍｇ Ｃ１８ ＳＰＥカートリッジ（メタノールでプレコンディショニングしたもの）に通した。このカラムを水（５ｍｌ）、次いでアセトニトリル：水（１５：８５）（２×５ｍｌ）で溶出した。アセトニトリル含有画分は不純な生成物を含んでいたことから、これらを合わせ、真空濃縮した。この残渣をＴＦＡ１滴を含む水（１ｍｌ）に再溶解し、５００ｍｇ Ｃ１８ ＳＰＥカートリッジ（メタノールでプレコンディショニングしたもの）に再び通した。このカラムをアセトニトリル：水（２：９８）（２×５ｍｌ）、次いでアセトニトリル：水（４：９６）（２×５ｍｌ）、次いでアセトニトリル：水（６：９４）（２×５ｍｌ）、次いでアセトニトリル：水（８：９２）（２×５ｍｌ）、最後にアセトニトリル：水（１０：９０）（２×５ｍｌ）で溶出し、白色の固体として実施例７（０．００２ｇ，４７％収率）を得た。ＬＣ／ＭＳ（Ａ法）では、（Ｍ＋２Ｈ＋）／２＝４５９；ＴＲＥＴ＝２．０１分であった。
【０１０６】
実施例８
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−３−（アセチルアミノ）−２−｛（１Ｒ，２Ｒ）−１−［（｛［４−（｛４−［（｛［（１Ｒ，２Ｒ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−３−（アセチルアミノ）−４−｛［アミノ（イミノ）メチル］アミノ｝−６−カルボキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−２，３−ジヒドロキシプロピル］オキシ｝カルボニル）アミノ］フェニル｝メチル）フェニルアミノ｝カルボニル）オキシ］−２，３−ジヒドロキシプロピル｝−４−｛［アミノ（イミノ）メチル］アミノ｝−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−６−カルボン酸ビスＴＦＡ塩
【化２３】
【０１０７】
中間体１９（１．０ｇ，１．０ｍｍｏｌ）を水（４ｍｌ）およびメタノール（４ｍｌ）の混合物に溶かした。これにトリエチルアミン（１ｍｌ）を添加し、この溶液を３．５時間攪拌した。減圧下での蒸発により揮発性成分を除去し、残った水溶液のｐＨをＴＦＡを添加してｐＨ３に調整した。逆相分取ＨＰＬＣ（方法Ｅ）により、白色の固体として実施例８のビス−ＴＦＡ塩（０．２９ｇ；２４％収率）を得た。ＬＣ／ＭＳ（Ｂ法）では、（Ｍ＋２Ｈ＋）／２＝４５８；ＴＲＥＴ＝２．０８分であった。
【０１０８】
実施例９
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−３−（アセチルアミノ）−２−｛（１Ｒ，２Ｒ）−１−［（｛［（４’−｛［（｛［（１Ｒ，２Ｒ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−３−（アセチルアミノ）−４−｛［アミノ（イミノ）メチル］アミノ｝−６−カルボキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−２，３−ジヒドロキシプロピル］オキシ｝カルボニル）アミノ］メチル｝−１，１’−ビフェニル−４−イル）メチル］アミノ｝カルボニル）オキシ］−２，３−ジヒドロキシプロピル｝−４−｛［アミノ（イミノ）メチル］アミノ｝−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−６−カルボン酸ビスＴＦＡ塩
【化２４】
【０１０９】
中間体２３（１．５９ｇ；１．３ｍｍｏｌ）を水（２８．５ｍｌ）およびメタノール（２８．５ｍｌ）の混合物に溶かした。これにトリエチルアミン（２．８５ｍｌ）を添加し、この溶液を４時間攪拌した。揮発性有機成分を真空下で除去し、残った溶液をＴＦＡを添加してｐＨ２に調整した。逆相分取ＨＰＬＣ（方法Ｆ）により、両性イオンの実施例９（０．７０ｇ；５７％収率）を得た。ＬＣ／ＭＳ（Ａ法）では、（Ｍ＋２Ｈ＋）／２＝４６５；ＴＲＥＴ＝２．００分であった。
【０１１０】
実施例１０：式（Ｉ）の化合物の評価−インフルエンザウイルス複製の阻害
細胞変性作用（ＣＰＥ）アッセイを、基本的にはWatanabe et al.(J. Virological Methods, 1994 48 257)によって記載されたように行った。ＭＤＣＫ細胞を本発明の化合物の連続希釈物の存在下で所定の接種量のウイルス（試験によって、７２時間以内に十分なＣＰＥを引き起こすに足る最少量であり、公開された標準と一致すると考えられる濃度で対照化合物に感受性を示すと判断されたもの）に感染させた。培養物を５％ＣＯ２雰囲気下、３７℃にて最大７２時間インキュベートした。公開された方法（例えば、Watanabe et al. , 1994参照）に従って、ウイルス染色剤、臭化３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウム（ＭＴＴ）の代謝を介して、ＣＰＥの程度、さらにはウイルス複製を調べた。ＣＰＥを５０％阻害した化合物濃度（ＩＤ５０）を曲線の当てはめに関するコンピュータープログラムを用いて算出した。インフルエンザＡ／シドニー／５／９７およびＢ／ハルビン／７／９５ウイルスをアッセイし、その結果を表２に示している。また、ＷＯ００／５５１４９にて明示された化合物および化合物Ａとの比較データも表１に示す。
【０１１１】
【表４】
＊ ＷＯ００／５５１４９から引用
【０１１２】
＋ ＷＯ００／５５１４９に記載のデータはウイルスＡ型Ｈ３Ｎ２単離株Ａ／シドニー／５／９７ではなく、Ｈ３Ｎ２単離株Ａ／ビクトリア／３／７５に関するものである。このようなデータを比較することで、in vitroにおいて数種類の異なるウイルスに対して分析する際、当業者ならば、ある化合物の抗ウイルス力価が異なることが珍しくないことが分かるであろう。例えば、Woods et al(Antimicrob Agents Chemother 1993 37: 1473-9)は、最近の臨床単離株に関するin vitroアッセイにおいて化合物Ａが広範なＥＣ５０値（０．０２〜０．１６μＭ）を示すことを報告している。よって、化合物８がこれまでのＨ３Ｎ２単離株Ａ／ビクトリア／３／７５よりも最近のインフルエンザＡ型Ｈ３Ｎ２単離株Ａ／シドニー／５／９７に関するＣＰＥアッセイにおいて有効であることが分かった。
【０１１３】
表１に示したデータは、化合物Ｅ１〜Ｅ５が、極めて有効な化合物Ａよりも実質的に有効であることに加え、ＷＯ００／５５１４９の化合物８および１０よりもＡ／シドニー／５／９７に対していっそう有効であり、かつ最近のインフルエンザＢ単離株Ｂ／ハルビン／７／９５に対しても実質的に有効であることを示している。
【０１１４】
実施例１１：プラーク減少アッセイ
Mardin Darbyイヌ腎臓（ＭＤＣＫ）細胞を６ウェル組織培養プレートに播種し、常法によって密集するまで増殖させる。インフルエンザウイルスを最少量の０．２％ウシ血清アルブミンを添加したリン酸緩衝生理食塩水で希釈し、各ウェル当たり推定力価５０〜１００プラーク形成単位（ｐｆｕ）とした。５％ＣＯ２雰囲気下、３７℃にて１時間、ＭＤＣＫ細胞に吸着させた後、ウイルス接種材料を吸引し、プラークが形成されるまで（一般に２〜４日）５％ＣＯ２雰囲気下、３７℃にて、室温で培地を固化するのに十分な寒天またはアガロース（一般に１〜２％）を含有するウイルス増殖培地（至適濃度のＢＳＡ、トリプシンおよびインスリン／トランスフェリン／セレンを添加した最少イーグル培地）で置き換える。プラークは計数前に好適な染色剤（例えば、ホルマリン加生理食塩水中０．４％クリスタルバイオレット）を用いて可視化することができる。抗ウイルス力価はプラーク数を未処理の対照値を５０％減少させる被験物質の濃度として表される（ＥＣ５０）。
【０１１５】
【表５】
＊Ａ／ＷＳＮ／３３ ＢＶＬＶ０９（Ｈ１Ｎ１）
Ａ／ビクトリア／３／７５ ＢＶＬＶ０１７（Ｈ３Ｎ２）
Ａ／シドニー／５／９７ ＢＶＬＶ０１５（Ｈ３Ｎ２）
Ａ／ニューカレドニア／２０／９９ ＢＶＬＶ００８（Ｈ１Ｎ１）
Ａ／パナマ／２００７／９９ ＢＶＬＶ００８（Ｈ３Ｎ２）
Ａ／バイエルン／７／９５ ＢＶＬ００６（Ｈ１Ｎ１）
【０１１６】
【表６】
＊Ｂ／ビクトリア／１／６７
Ｂ／ホンコン／５／７２ ＢＶＬＶ０１２
Ｂ／ハルビン／７／９５ ＢＶＬＶ００８
Ｂ／山梨／１６６／９８ ＢＶＬＶ００７
【０１１７】
実施例１２：長時間作用性の評価
齧歯類を麻酔し、目的化合物を気管内経路によって０．８ｍｌ／ｋｇの用量で投与する。次いで、完全に回復するまで齧歯類を垂直位に保つ。投与後、種々の時点、例えば、２、８、２４および４８時間の時点で肺組織における化合物のレベルを分析法によって評価する。この種の化合物の検出に好適なものであればいずれの分析法を用いてもよい。化合物のレベルが特定の分析法の感度の範囲を下回った時間によって肺組織における化合物の滞留時間を決定する。
【０１１８】
選択された化合物のラット肺滞留データを以下に示す。全ての試験では、比較のため、同時投与した内部標準、すなわち、国際特許公報ＷＯ０２／２０５１４の化合物３が含まれることに留意のこと。データは以下に示す構造を持つこの化合物に対する比率として表される。
【化２５】
【０１１９】
比較のため、化合物Ａのデータも示している。標準濃度に対する化合物濃度の比率として表した場合、本発明の化合物は７日時点での滞留が化合物Ａよりも有意に高い。
【０１２０】
【表７】
【０１２１】
【表８】
【０１２２】
実施例１３：長時間作用性および効果の別の評価
マウス感染プロトコールについてはこれまでに記載した（１〜４）。軽く麻酔したマウスの外鼻孔にインフルエンザウイルスを接種する。
【０１２３】
処置法および管理。一用量の化合物を所定の時点で、感染最大１０日前、好ましくは、感染４〜７日前、または感染後、好ましくは、感染直後および感染後最大４８時間の時点で投与する。ほとんどの試験では、効果は、非致死株のインフルエンザを用い、肺におけるウイルス力価の低下によって評価する。感染前に化合物を投与したマウスでは、感染後１日で、または感染後数日で、好ましくは、感染１〜４日後に肺を摘出する。ホモジナイズした肺サンプルを確立された方法によりウイルスについて評価し、ウイルス量の力価を推定し、未処置マウスの肺のウイルス力価と比較する。
【０１２４】
マウス馴化致死株のインフルエンザを用いる試験では、効果は、未処置のマウスと比べた場合の生存率および／または生存数の増加によって評価する。
【０１２５】
参照文献
【表９】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）の化合物、またはその医薬上許容される誘導体：
【化１】
［式中、
Ｒは、アミノまたはグアニジノ基であり；
Ｒ２は、アセチルまたはトリフルオロアセチルであり；
ｎおよびｑは、同じであっても異なっていてもよく、０、１または２から選択され；かつ
Ｘは、置換されていてもよいフェニル、置換されていてもよいナフチル、または置換されていてもよいフェニル−Ｙ−置換されていてもよいフェニル（ここで、Ｙは共有結合、ＣＨ２、ＣＨ２ＣＨ２、ＯまたはＳＯ２から選択される）である、
｛ただし、Ｘがフェニルまたはナフチルであるとき、ｎおよびｑは双方とも２であり、Ｘがフェニル−Ｙ−フェニル（ここで、Ｙは共有結合である）であるとき、ｎおよびｑは双方ともに０ではない｝］。
【請求項２】
Ｒがグアニジノ基である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ２がアセチル基である、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
ｎおよびｑが同じである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５】
Ｘ上の所望による置換基がアルコキシである、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
カルボキシル官能基、ヒドロキシル官能基、アミノ基またはグアニジン基の１以上において修飾された誘導体である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
誘導体がアルキルエステル、アリールエステルまたはアセチルエステルである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物の製造方法であって、
式（II）の化合物を脱保護することを含んでなる、方法：
【化２】
［式中、Ｒ、Ｒ２、ｎ、ｑおよびｘは請求項１で定義された通りである。］
【請求項９】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物またはその医薬上許容される塩もしくは誘導体を、１種以上の医薬上許容される担体とともに含んでなる、医薬製剤。
【請求項１０】
１種以上の他の治療および／または予防成分をさらに含んでなる、請求項９に記載の医薬製剤。
【請求項１１】
他の治療および／または予防成分が抗感染症薬である、請求項１０に記載の医薬製剤。
【請求項１２】
抗感染症薬が抗ウイルス薬または抗菌薬である、請求項１１に記載の医薬製剤。
【請求項１３】
抗菌薬または抗ウイルス薬が、呼吸器感染症の治療に用いられるものである、請求項１２に記載の医薬製剤。
【請求項１４】
前記薬剤が、ザナミビル、オセルタミビル、アマンタジン、リマンタジン、リバビリンおよび／またはＦｌｕＶａｘである、請求項１３に記載の医薬製剤。
【請求項１５】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物、または請求項９〜１４のいずれか一項に記載の製剤を含んでなる、吸入器。
【請求項１６】
フリーフロー粉末としての経口投与に適している、請求項１５に記載の吸入器。
【請求項１７】
定量式エアゾール吸入器である、請求項１５に記載の吸入器。
【請求項１８】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物の有効量を、それを必要とする被験体へ投与することを含んでなる、ウイルス感染症の予防または治療方法。
【請求項１９】
ウイルス感染症が、オルトミクソウイルス感染症またはパラミクソウイルス感染症である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
ウイルス感染症が、Ａ型もしくはＢ型インフルエンザ感染症、パラインフルエンザ、流行性耳下腺炎またはニューカッスル病である、請求項１８または１９に記載の方法。
【請求項２１】
投与が、吸入法、通気法もしくは経鼻投与、またはその組み合わせによる気道へのものである、請求項１８〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
ウイルス感染症の予防または治療用の医薬の製造のための、請求項１〜７のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物の使用。
【請求項２３】
ウイルス感染症の予防または治療における、請求項１〜７のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物の使用。
【請求項２４】
抗ウイルス薬としての、請求項１〜７のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物の使用。
【請求項２５】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物を、ウイルスを含んでいる疑いがあるサンプルと接触させることを含んでなる、ウイルス感染症の検出方法。
【請求項１】
一般式（Ｉ）の化合物、またはその医薬上許容される誘導体：
【化１】
［式中、
Ｒは、アミノまたはグアニジノ基であり；
Ｒ２は、アセチルまたはトリフルオロアセチルであり；
ｎおよびｑは、同じであっても異なっていてもよく、０、１または２から選択され；かつ
Ｘは、置換されていてもよいフェニル、置換されていてもよいナフチル、または置換されていてもよいフェニル−Ｙ−置換されていてもよいフェニル（ここで、Ｙは共有結合、ＣＨ２、ＣＨ２ＣＨ２、ＯまたはＳＯ２から選択される）である、
｛ただし、Ｘがフェニルまたはナフチルであるとき、ｎおよびｑは双方とも２であり、Ｘがフェニル−Ｙ−フェニル（ここで、Ｙは共有結合である）であるとき、ｎおよびｑは双方ともに０ではない｝］。
【請求項２】
Ｒがグアニジノ基である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ２がアセチル基である、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
ｎおよびｑが同じである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５】
Ｘ上の所望による置換基がアルコキシである、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
カルボキシル官能基、ヒドロキシル官能基、アミノ基またはグアニジン基の１以上において修飾された誘導体である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
誘導体がアルキルエステル、アリールエステルまたはアセチルエステルである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物の製造方法であって、
式（II）の化合物を脱保護することを含んでなる、方法：
【化２】
［式中、Ｒ、Ｒ２、ｎ、ｑおよびｘは請求項１で定義された通りである。］
【請求項９】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物またはその医薬上許容される塩もしくは誘導体を、１種以上の医薬上許容される担体とともに含んでなる、医薬製剤。
【請求項１０】
１種以上の他の治療および／または予防成分をさらに含んでなる、請求項９に記載の医薬製剤。
【請求項１１】
他の治療および／または予防成分が抗感染症薬である、請求項１０に記載の医薬製剤。
【請求項１２】
抗感染症薬が抗ウイルス薬または抗菌薬である、請求項１１に記載の医薬製剤。
【請求項１３】
抗菌薬または抗ウイルス薬が、呼吸器感染症の治療に用いられるものである、請求項１２に記載の医薬製剤。
【請求項１４】
前記薬剤が、ザナミビル、オセルタミビル、アマンタジン、リマンタジン、リバビリンおよび／またはＦｌｕＶａｘである、請求項１３に記載の医薬製剤。
【請求項１５】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物、または請求項９〜１４のいずれか一項に記載の製剤を含んでなる、吸入器。
【請求項１６】
フリーフロー粉末としての経口投与に適している、請求項１５に記載の吸入器。
【請求項１７】
定量式エアゾール吸入器である、請求項１５に記載の吸入器。
【請求項１８】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物の有効量を、それを必要とする被験体へ投与することを含んでなる、ウイルス感染症の予防または治療方法。
【請求項１９】
ウイルス感染症が、オルトミクソウイルス感染症またはパラミクソウイルス感染症である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
ウイルス感染症が、Ａ型もしくはＢ型インフルエンザ感染症、パラインフルエンザ、流行性耳下腺炎またはニューカッスル病である、請求項１８または１９に記載の方法。
【請求項２１】
投与が、吸入法、通気法もしくは経鼻投与、またはその組み合わせによる気道へのものである、請求項１８〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
ウイルス感染症の予防または治療用の医薬の製造のための、請求項１〜７のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物の使用。
【請求項２３】
ウイルス感染症の予防または治療における、請求項１〜７のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物の使用。
【請求項２４】
抗ウイルス薬としての、請求項１〜７のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物の使用。
【請求項２５】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物を、ウイルスを含んでいる疑いがあるサンプルと接触させることを含んでなる、ウイルス感染症の検出方法。
【公開番号】特開２０１０−２８５４３６（Ｐ２０１０−２８５４３６Ａ）
【公開日】平成２２年１２月２４日（２０１０．１２．２４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−１６１５１５（Ｐ２０１０−１６１５１５）
【出願日】平成２２年７月１６日（２０１０．７．１６）
【分割の表示】特願２００３−５４２１８２（Ｐ２００３−５４２１８２）の分割
【原出願日】平成１４年１１月８日（２００２．１１．８）
【出願人】（５０１３５９７３３）バイオタ、サイアンティフィック、マネージメント、プロプライエタリ、リミテッド (4)
【氏名又は名称原語表記】ＢＩＯＴＡ ＳＣＩＥＮＴＩＦＩＣ ＭＡＮＡＧＥＭＥＮＴ ＰＴＹ ＬＴＤ
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２２年１２月２４日（２０１０．１２．２４）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年７月１６日（２０１０．７．１６）
【分割の表示】特願２００３−５４２１８２（Ｐ２００３−５４２１８２）の分割
【原出願日】平成１４年１１月８日（２００２．１１．８）
【出願人】（５０１３５９７３３）バイオタ、サイアンティフィック、マネージメント、プロプライエタリ、リミテッド (4)
【氏名又は名称原語表記】ＢＩＯＴＡ ＳＣＩＥＮＴＩＦＩＣ ＭＡＮＡＧＥＭＥＮＴ ＰＴＹ ＬＴＤ
【Ｆターム（参考）】
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