人参の葉および茎からの、抗癌および抗転移活性を有する画分
【課題】造血促進、癌転移抑制、骨髄保護などの活性に作用を有する抗癌薬またはその補助薬用の組成物の提供。
【解決手段】Ｐａｎａｘｇｉｎｓｅｎｇ、Ｐａｎａｘｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｍ、Ｐａｎａｘｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ、Ｐａｎａｘｐｓｅｕｄｏｇｉｎｓｅｎｇ、ＰａｎａｘｊａｐｏｎｉｃｕｍおよびＰａｎａｘｖｉｅｔｎａｍｅｎｓｉｓよりなる群から選択される１種以上であるパナックス属に属する植物の葉および／または茎からの抽出物。抽出物の調製方法は、以下の工程からなる。ａ）人参の葉および／または茎を水中で加熱（水熱処理）して、粗抽出溶液を得る工程；ｂ）任意に、前記粗抽出溶液を濃縮する工程；ｃ）前記粗抽出溶液に含まれる多糖を有機溶媒を用いて沈殿させ、前記多糖を分離する工程；およびｄ）前記有機溶媒を除去して多糖画分を得る工程。
【解決手段】Ｐａｎａｘｇｉｎｓｅｎｇ、Ｐａｎａｘｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｍ、Ｐａｎａｘｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ、Ｐａｎａｘｐｓｅｕｄｏｇｉｎｓｅｎｇ、ＰａｎａｘｊａｐｏｎｉｃｕｍおよびＰａｎａｘｖｉｅｔｎａｍｅｎｓｉｓよりなる群から選択される１種以上であるパナックス属に属する植物の葉および／または茎からの抽出物。抽出物の調製方法は、以下の工程からなる。ａ）人参の葉および／または茎を水中で加熱（水熱処理）して、粗抽出溶液を得る工程；ｂ）任意に、前記粗抽出溶液を濃縮する工程；ｃ）前記粗抽出溶液に含まれる多糖を有機溶媒を用いて沈殿させ、前記多糖を分離する工程；およびｄ）前記有機溶媒を除去して多糖画分を得る工程。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、有効成分としてパナックス（Ｐａｎａｘ）属に属する植物の葉および／または茎からの抽出物を含む組成物、並びに多糖の調製方法に関し、より詳細には、免疫細胞（ナチュラルキラー（ＮＫ）Ｔ細胞、ＮＫ細胞など）を活性化することにより抗癌薬および／または癌転移抑制薬として、また造血促進作用、骨髄保護作用、放射線照射感受性保護作用などにより抗癌薬の補助薬（ａｄｊｕｖａｎｔ）としても作用しうる、パナックス属植物の葉および／または茎から分離された多糖を含む組成物、並びに、パナックス属植物の葉および／または茎を５０〜１８０℃で０．５〜２０時間水中で加熱し、それから多糖を抽出することによる、多糖の調製方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
毎年、アメリカにおける死亡の２０％は癌関連疾患によるものであると報告されている。これらの癌の治療には、通常は化学療法を用いるが、有効であることが知られている抗癌薬はほとんどない。
【０００３】
死亡の多くは、原発癌（ｆｉｒｓｔ ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ）そのものよりも、むしろ癌の転移によるものである（非特許文献１）。多くの実験および臨床試験により、癌転移抑制および癌自体の破壊において、自然免疫が重要な役割を果たしていることが確認されている（非特許文献２）。
【０００４】
ＮＫＴ（ナチュラルキラーＴ）細胞は、α／βＴ細胞の分化した集団（ｓｐｅｃｉａｌｉｚｅｄ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ）であって、ＮＫ系統の受容体を共発現（ｃｏｅｘｐｒｅｓｓ）しており、また効果細胞に対する初期的な補助をもたらし、ある種の免疫応答におけるＴｈ１またはＴｈ２の分化を調節する大量のサイトカインを極めて迅速に分泌するという特異な能力を有している（非特許文献３）。更に、それらは感染性の病原体（ｇｅｒｍｓ ｏｒ ｂａｃｔｅｒｉａ）、例えば癌細胞、寄生虫、リステリア（ｌｉｓｔｅｒｉａｓ）、結核菌などを排除する（非特許文献４）。
【０００５】
ＮＫＴ細胞に加え、ＮＫ細胞、ＬＡＫ細胞およびマクロファージが、癌細胞、ウィルスおよび細菌による感染を効果的に阻害しうる細胞であることが知られている。より詳細には、ＮＫ細胞、ＬＡＫ細胞およびマクロファージを効果的に活性化することにより、癌細胞の増殖とその転移がブロックされることが知られている。また、免疫刺激薬によるＮＫ細胞の活性化により、癌転移による癌細胞の増殖が阻害されることが報告されている（非特許文献５）。
【０００６】
免疫系のこれらの抗癌、抗転移および抗ウィルス機能は、免疫系を活性化する種々のサイトカインの分泌により仲介される。特に、γ−インターフェロン、腫瘍壊死因子−αなどは、抗癌、抗転移および抗ウィルス機能に関連する代表的なサイトカインである。
【０００７】
γ−インターフェロンは、主にＴ細胞で生成され、免疫反応を制御し、またＴおよびＢ細胞、好中球、ＮＫ細胞およびマクロファージを活性化して癌細胞を攻撃させるのに役立つ。そのためγ−インターフェロンは、慢性骨髄性白血病や腎臓癌の治療に用いられる。更に、γ−インターフェロンはＤＮＡ複製および細胞増殖に対し強力な阻害作用を有するので、癌治療のみならず、ウィルス感染や、多剤耐性細菌および真菌感染の、微生物の増殖抑制による治療にも臨床適用される。
【０００８】
腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）−αは、主にマクロファージで生成され、種々の免疫反応（例えば炎症反応）に関与し、特に癌細胞に対して極めて強い毒性を示す。現在、ＴＮＦ−αは、日本における皮膚癌治療薬としての承認が間近であり、臨床試験の結果を待つ段階にある（ｐｅｎｄｉｎｇ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｅｓｔ ｒｅｓｕｌｔｓ）。
【０００９】
しかし、抗癌療法にサイトカインを直接用いると、予期せぬ副作用（炎症、嘔吐など）がもたらされる。そのため、特定のサイトカインのみを用いるよりも、免疫系を全体的に活性化しうる物質を見出すための試験が数多く行われている。
【００１０】
ＮＫ細胞を含む免疫細胞を活性化する天然物は遺憾ながらほとんど知られていないが、例えばＶｉｓｃｕｍ ｃｏｌｏｒａｔｕｍ抽出物由来のレクチン（一部で癌治療の代替療法に用いられている）や、キノコから得られるβ−グルカン系統に属する多糖がある。
【００１１】
ところで、パナックス属に属する植物（いわゆる「人参」）が、通常は白参（収穫後、室温で乾燥したもの）または紅参（収穫後、熱処理したもの）の形態で、強壮薬として用いられている。人参の成分および医学的効果を特徴付けるための多くの研究が行われており、報告されている医学的効果には、老化防止、抗動脈硬化（ａｎｔｉ−ａｒｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）、抗高脂血症、肝機能増強、放射線照射の副作用の除去、免疫系増強、抗血栓、脳機能増強、抗ストレス、血糖低下、血圧低下および抗癌作用が含まれる。これらの作用を誘引する主要な成分は、サポニン群に属することが見出されている。近年の研究は、人参の根から酸性多糖を抽出／分離して、その作用を確認することに焦点を合わせたものである。これらの酸性多糖は、マクロファージを活性化し、マクロファージにγ−インターフェロン生成を促進させて、癌細胞の増殖を阻害することが知られている（特許文献１）。
【００１２】
これまでのところ、いくつかの例を除き、研究の大半は人参の葉や茎ではなく根のみに集中している。人参の根は、少なくとも６年間栽培して医学的効果を示すようになければならないが、人参の葉や茎は、毎年育てられ廃棄されている。従って、人参根と同様に、人参の葉や茎が特定の生理活性物質を含むことが見出されれば、副産物の利用や環境保護の観点から大きな価値となる。
【００１３】
上記したように、人参の葉や茎の利用はいくつかの例（人参葉サポニンを用いる化粧品の製造（特許文献２）、人参葉から塩基性条件下でアグリコンサポニンを得る方法（非特許文献６）、人参葉を含むハーブの抽出物を用いるシャンプーおよびローションの調製（特許文献３）および人参葉を含む清浄な女性用ティッシュの調製（特許文献４））に限られている。
【００１４】
ある種の研究において、人参の葉から得られた多糖が胃潰瘍の治療に有効であることが示されている（非特許文献７）が、人参の葉や茎からの抽出物が、抗癌作用、癌転移抑制作用などを有することを示唆する研究はない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１５】
【特許文献１】韓国特許第１４４１３０号
【特許文献２】韓国出願公開公報第８１−３７３６号
【特許文献３】韓国特許第２３６４１号
【特許文献４】韓国特許第２１４２２３号
【非特許文献】
【００１６】
【非特許文献１】Ｆｉｆｌｅｒ，１９９１ ｃａｎｃｅｒ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ．，Ｂｒ．Ｍｅｄ．Ｂｕｌｌ．４７，１５７−１７７
【非特許文献２】Ｓｃｈａｎｔｚ ｅｔ ａｌ．，ｃａｎｃｅｒ ｉｍｍｕｎｏｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２５．，１４１−１４８，１９８７
【非特許文献３】Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９７．１５；Ａｌｂｅｒｔ Ｂｅｎｄｅｌａｅ ｅｔ ａｌ．ｐ５３５
【非特許文献４】Ｓｅｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２８，ｐ１０６９，１９９６
【非特許文献５】Ｈｅｒｂｅｒｍａｎ，１９８４ Ｊ．ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．８３，１３７−１４０
【非特許文献６】Ｋｏｒｅａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ，３８（４），１９９４，８
【非特許文献７】Ｐｌａｎｔａ Ｍｅｄ．５８，１９９２，４４５−４４８
【非特許文献８】Ｄｕｂｏｉｓ ｅｔ ａｌ，Ａｎａｌ． Ｃｈｅｍ．，２８，３５０，１９５６
【非特許文献９】Ｂｌｕｍｅｎｋｒａｎｔｚ ｅｔ ａｌ，Ａｎａｌ．ｂｉｏｃｈｅｍ．，５４，４８４，１９７３
【非特許文献１０】Ｌｏｗｒｙ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．，Ｃｈｅｍ．，１９３，２６５，１９５１
【非特許文献１１】Ｐｌａｎｔ ｐｈｙｓｉｏｌ．，４９，９２６，１９７２
【非特許文献１２】Ｙｏｏ ｅｔ ａｌ，１９９４ Ｖａｃｃｉｎｅ １２，１７５−１８０
【非特許文献１３】Ｙｏｏ ｅｔ ａｌ， １９９７，Ｊｐｎ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，８８，１８４−１９０
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１７】
本発明者らは、人参の葉および／または茎からの抽出物が、免疫細胞（ＮＫＴ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージなど）を活性化し、またサイトカイン（α−インターフェロン、腫瘍壊死因子−αなど）の分泌を促進して、癌細胞の増殖および転移を抑制し、造血促進作用を補助し、既存の抗癌薬や放射線照射療法における副作用をも低減することを初めて見出した。本発明は、これらの発見に基づいてなされたものである。
【００１８】
従って、本発明の目的は、人参の葉および／または茎から得られ、癌抑制作用、造血促進作用、骨髄保護作用、放射線照射感受性保護作用などを有する抽出物を提供することにある。
【００１９】
本発明の他の目的は、有効成分として前記抽出物を含む組成物を提供することにある。
【００２０】
本発明の更に他の目的は、前記組成物の新規な用途、例えば抗癌薬、癌転移抑制薬、造血促進薬、放射線照射副作用抑制薬、抗癌薬副作用抑制薬、自己免疫疾患治療薬などを提供することにある。
【００２１】
本発明の他の目的は、人参の葉および／または茎から前記抽出物を得る方法を提供することにある。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】本願実験実施例１および比較実施例１による、Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ Ｃ．Ａ．ＭａｙｅｒおよびＰａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｍの葉および茎から得られる多糖の、肺癌の転移に対する抑制作用を示すグラフである。
【図２】本願実験実施例２による、ＭＢ４０１００（人参の葉または茎からの抽出物）の、固形癌に対する抗癌作用を示すグラフである。
【図３】本願実験実施例３による、ＭＢ４０１００の、肺癌の転移に対する予防作用を示すグラフである。
【図４】本願実験実施例４による、ＭＢ４０１００の、肺癌の転移低減に対する作用を示すグラフである。
【図５】本願実験実施例５による、癌細胞に対するＮＫ細胞介在細胞毒性の、ＭＢ４０１００による増強を示すグラフである。
【図６】本願実験実施例６による、人参の葉または茎からの抽出物により誘引される、顆粒球マクロファージコロニー形成単位（ＧＭ−ＣＦＵ）の増加を示すグラフである。
【図７】本願実験実施例７による、抗癌薬により誘引された造血抑制の、ＭＢ４０１００による低減作用（血中白血球数の変化として示されている）を示すグラフである。
【図８】本願実験実施例７による、抗癌薬により誘引された造血抑制の、ＭＢ４０１００による低減作用（血中血漿板数の変化として示されている）を示すグラフである。
【図９】本願実験実施例７による、抗癌薬により誘引された造血抑制の、ＭＢ４０１００による低減作用（脾細胞数の変化として示されている）を示すグラフである。
【図１０】本願実験実施例７による、抗癌薬により誘引された造血抑制の、ＭＢ４０１００による低減作用（骨髄細胞数の変化として示されている）を示すグラフである。
【図１１】本願実験実施例８による、放射線照射に対する、ＭＢ４０１００による保護作用（脾細胞数の変化として示されている）を示すグラフである。
【図１２】本願実験実施例８による、放射線照射に対する、ＭＢ４０１００による保護作用（骨髄細胞数の変化として示されている）を示すグラフである。
【図１３−ａ】本願実験実施例９による、ＭＢ４０１００による免疫細胞の活性化度を示すグラフである。
【図１３−ｂ】本願実験実施例９による、ＭＢ４０１００による免疫細胞の活性化度を示すグラフである。
【図１３−ｃ】本願実験実施例９による、ＭＢ４０１００による免疫細胞の活性化度を示すグラフである。
【図１３−ｄ】本願実験実施例９による、ＭＢ４０１００による免疫細胞の活性化度を示すグラフである。
【図１４−ａ】本願実験実施例９による、ＭＢ４０１００により誘引された抗癌性サイトカインのレベルを示すグラフである。
【図１４−ｂ】本願実験実施例９による、ＭＢ４０１００により誘引された抗癌性サイトカインのレベルを示すグラフである。
【図１５】本願実験実施例１０による、抗癌薬とＭＢ４０１００の同時投与における、ＭＢ４０１００による、抗癌薬の副作用を阻害する作用を示すグラフである。
【図１６】本願実験実施例１０による、抗癌薬とＭＢ４０１００の同時投与による抗癌作用の向上を示すグラフである。
【図１７】本願実験実施例１１による、抗癌薬とＭＢ４０１００の同時投与による抗癌作用の向上を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
本発明による組成物は、有効成分として、パナックス属に属する植物（以降、「パナックス属植物」または時に「人参」と称する）の葉および／または茎を特定の条件下で処理することによって得ることができる抽出物を含む。本発明で用いるこれらのパナックス属植物には、例えばＰａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ Ｃ．Ａ．Ｍａｙｅｒ、Ｐａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｍ、Ｐａｎａｘ ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ、Ｐａｎａｘ ｐｓｅｕｄｏｇｉｎｓｅｎｇ、Ｐａｎａｘ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ、Ｐａｎａｘ ｖｉｅｔｎａｍｅｎｓｉｓ Ｈａ ｅｔ Ｇｒｕｓｈｖ．などが含まれ、本発明においてはこのうち１種以上を用いることができる。
【００２４】
本発明による組成物の形状には、上記抽出物の効果が示される限り特に制限はなく、例えば固相、懸濁液相、乳液相、液相などが含まれる。組成物中の上記抽出物の量についても、上記抽出物が特定の目的のための活性成分として機能する限り特に制限はない。
以下、本発明をより詳細に記述する。
【００２５】
本発明によれば、パナックス属植物の葉および／または茎から抽出物を得るためには、それらの葉および／または茎をまず水（ｐＨ４〜１０）１０〜２０当量中、５０〜１８０℃で０．５〜２０時間加熱する。上記の通り、パナックス属植物はＰａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ Ｃ．Ａ．Ｍａｙｅｒ、Ｐａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｍ、Ｐａｎａｘ ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ、Ｐａｎａｘ ｐｓｅｕｄｏｇｉｎｓｅｎｇ、Ｐａｎａｘ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ、Ｐａｎａｘ ｖｉｅｔｎａｍｅｎｓｉｓ Ｈａ ｅｔ Ｇｒｕｓｈｖ．などのうち１種以上であってよい。この水熱処理の後、人参の葉および／または茎や残渣（ｒｅｍｎａｎｔｓ）を濾過により除去する。微細な浮遊粒子は、精密濾過法（ｆｉｎｅ ｆｉｌｔｅｒｉｎｇ ｐｒｏｃｅｓｓ）および遠心分離により除去する。最終的な濾過法は、孔径０．４５μｍのフィルターや限外濾過器を用いて行ってよく、遠心分離法は、７０００ｒｐｍで３０分行いうる。そのようにして得られた溶液を、それからの多糖の分離を容易にするため、例えば蒸発により濃縮する。濃縮法は、７０℃、７６０ｍｍＨｇにおいて、糖屈折計にて測定した際の溶液濃度が２０ｂｒｉｘになるまで行いうる。濃縮した溶液から多糖を効果的に回収するため、０．１〜１Ｍ、好ましくは０．５〜１ＭのＮａＣｌを濃縮した溶液に添加する。そして、１〜４倍容、好ましくは２〜４倍容のアルコール（メタノール、エタノール、プロパノールなど）またはアセトンを用いて多糖を沈殿させる。沈殿させた多糖を９５％以上のアルコールまたはアセトンで数回洗浄して水および不純物を除去し、その後透析または限外濾過を行い塩およびアルコールを除去する。そのようにして得られた多糖を、熱風乾燥、真空乾燥、凍結乾燥、噴霧乾燥などのうち一種により乾燥させる。
【００２６】
標的とする薬物およびその用途に応じ、精製法をより効率的に選択することができる。例となる方法を以下に示す。
分離および濾過が完了した後、溶液をｐＨ約８．０、０．４Ｍ ＮａＣｌ／１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌに調整し、次いでアニオン交換樹脂のカラム（流速３０ｍｌ／分）にかける。アニオン交換樹脂は、事前に０．４Ｍ ＮａＣｌ／１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌで平衡化し、着色物質や不純物のみが吸着され、多糖は吸着されないようにしておかなければならない。アニオン交換樹脂のカラムを緩衝溶液で十分洗浄する。前記カラムを通過した溶液をｐＨ約６〜７に調整し、次いで吸着剤樹脂のカラム（流速３０〜５０ｍｌ／分）にかける。前記カラムを蒸留水（ＤＷ）で十分洗浄する。３倍エタノール沈殿法（ｔｈｒｅｅ−ｔｉｍｅ ｅｔｈａｎｏｌ ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ）を実施し、全ての多糖がカラムから出たか否かチェックする。流出溶液に３倍容の９５％エタノールを添加して、多糖のみを効率よく沈殿させ、多糖を濃縮する。多糖を回収するため、遠心分離（５０００ｒｐｍ、１５分）および透析を行う。そのようにして得られた溶液をｐＨ８に調整する。その溶液に１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝溶液（ｐＨ８）を添加した後、前記溶液をアニオン交換樹脂のカラム（流速１５〜２０ｍｌ／分）にかける。前記カラムを緩衝溶液で十分洗浄した後、０．５Ｍ ＮａＣｌで溶出させる。溶出液に３倍容のエタノールを添加して多糖を沈殿させ、次いで遠心分離を行いそれらを回収する。回収したペレットを９５％エタノールで２回洗浄した後、透析（分子量カットオフが６０００の透析膜に対して）を行って残存エタノールおよび低分子量の不純物を除去し、次いで凍結乾燥する。
【００２７】
溶媒抽出により得られた抽出物を３回蒸留した（ｔｒｉｐｌｅ ｄｉｓｔｉｌｌｅｄ）水で希釈して濃度を１ｍｇ／ｍｌとし、分析した。その結果、Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ Ｃ．Ａ．Ｍａｙｅｒでは、中性糖の含有量が６８．９％、ウロン酸の含有量が１５．９％、タンパク質の含有量が８．７％であり、Ｐａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｍでは、中性糖の含有量が５７．８％、ウロン酸の含有量が３５％、タンパク質の含有量が５．４％であることが示された。
【００２８】
イオン交換樹脂、吸着剤樹脂などを用いる精巧な（ｅｌａｂｏｒａｔｅ）分離／精製法により得られた抽出物を３回蒸留した水で希釈して濃度を１ｍｇ／ｍｌとし、分析した。その結果、Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ Ｃ．Ａ．Ｍａｙｅｒでは、中性糖の含有量が５１．３％、ウロン酸の含有量が４６．８％、タンパク質の含有量が０．１％（糖の分布は、ラムノース５．９７％、フコース１．２２％、アラビノース１４．８６％、キシロース０．４４％、マンノース１．９３％、グルコース３％、ガラクトース２２．７％、ガラクツロン酸３１．４％、グルクロン酸１４．４％、ＫＤＯ（２−ケト−３−デオキシオクツロソン酸）１．３８％およびＤＨＡ（３−デオキシ−Ｄ−リキソ−２−ヘプツロサール酸）（３−ｄｅｏｘｙ−Ｄ−ｌｙｘｏ−２−ｈｅｐｔｕｌｏｓａｒｉｃ ａｃｉｄ）１．０２％であった）であり、Ｐａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｍでは、中性糖の含有量が４９％、ウロン酸の含有量が５０．８％、タンパク質の含有量が０．２％（糖の分布は、ラムノース９．７％、フコース４．１％、アラビノース８．７％、キシロース０．７％、マンノース１．５％、グルコース１．２％、ガラクトース１２％、ガラクツロン酸４４％、グルクロン酸５％、ＫＤＯ６％およびＤＨＡ１．２％であった）であることが示された。
【００２９】
本発明者は、人参の葉および／または茎からの抽出物は、分子量が６，０００〜３４０，０００Ｄａ、平均分子量が約１２０，０００Ｄａであることを見出した。
【００３０】
また、糖の組成は人参の種類によって変動し、例えば中性糖については３０〜８０％、酸性糖については１０〜６０％、タンパク質については０．０１〜１０％であるが、糖は一般にラムノース、フコース、アラビノース、キシロース、マンノース、グルコース、ガラクトース、ガラクツロン酸、グルクロン酸、ＫＤＯおよびＤＨＡを含んでおり、いずれの抽出物も抗癌、抗転移および／または抗癌薬補助薬作用を示した。
【００３１】
人参の葉および／または茎から上記のようにして得られる抽出物または多糖は、免疫系全体（例えばＮＫＴ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、Ｔ細胞、Ｂ細胞など）を活性化し、また抗癌機能に関連するサイトカインの分泌を促進して、癌細胞の増殖および転移を有意に減少させる。よって、前記組成物を抗癌薬および癌転移抑制薬として用いることができる。また、前記組成物を抗癌薬または放射線照射治療の補助薬（それらの副作用を低減させることによる）として用いることができる。
【００３２】
本発明による組成物は、それ自体で、または担体（医薬の分野において従来許容されているもの）と組み合わせて、従来の投与形態、例えば経口投与剤（丸剤、カプセル剤、液剤、分散液剤など）、注射剤などに処方することができる。経口投与において薬物が胃酸で分解されるのを防ぐため、前記組成物を制酸薬と同時投与したり、腸溶性コーティングのある処方にしてもよい。
【００３３】
人体への多糖の投与量は、有効成分の吸収速度、不活性化速度、排泄速度や、患者の年齢、性別、現在の容体などを検討して、適切に決定しなければならず、一般には、成人に対し１日あたり１００μｇ〜６０００ｍｇ、好ましくは２０〜５０００ｍｇである。
【００３４】
本発明による組成物は、抗癌薬またはその補助薬を更に含んでいてもよく、またそれらと同時投与してもよい。抗癌薬の種類に特に制限はなく、その例にはタキソール（登録商標）およびシスプラチン（登録商標）が含まれる。
【００３５】
以下の実施例を参照して、本発明をより詳細に記載する。ただし、本発明の範囲はそれらに限定されるものではない。
【実施例】
【００３６】
調製実施例１：人参の葉および／または茎からの、多糖粗抽出物の調製
Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ Ｃ．Ａ．Ｍａｙｅｒの葉および／または茎１００ｇを１リットルの水に添加し、それらから活性成分を抽出すべく１００℃で５時間加熱した。濾過により液相を葉および／または茎から分離し、７，０００ｒｐｍで３０分間遠心分離して、それから不溶性の不純物を除去した。上清（多糖を含む）を７０℃、７６０ｍｍＨｇで２０ｂｒｉｘとなるまで濃縮して、１００ｍｌの濃縮溶液を得た。最終濃度１Ｍとなるよう塩化ナトリウムを添加し、次いで３００ｍｌのエタノールを添加した。得られた混合物を１時間放置して沈殿を起こさせた。沈殿物を１００ｍｌの９５％エタノールで洗浄して（２回）不純物を除去し、次いで透析し、更に凍結乾燥して多糖粗抽出物を得た。
【００３７】
Ｐａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｍの葉および／または茎に対しても上記の方法を繰り返し、多糖粗抽出物を得た。
【００３８】
調製実施例２：人参の葉および／または茎からの多糖の調製
Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ Ｃ．Ａ．Ｍａｙｅｒ５００ｇを５リットルの蒸留水に添加し、３時間加熱して抽出溶液を調製した。抽出溶液からスラリーをガーゼで分離した。抽出溶液を７，０００ｒｐｍで２０分間遠心分離して、上清を分離した。上清をｐＨ約８．０、０．４Ｍ ＮａＣｌ／１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌに調整し、次いでアニオン交換樹脂（ＰＡ３１２系強塩基型アニオン交換樹脂、Ｓａｍｙａｎｇ社製）のカラム（流速３０ｍｌ／分）にかけた。アニオン交換樹脂は、事前に０．４Ｍ ＮａＣｌ／１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌで平衡化し、不純物のみが吸着され、多糖は吸着されないようにした。アニオン交換樹脂のカラムを緩衝溶液で十分洗浄し、前記カラムを通過した溶液をｐＨ約６〜７に調整した。得られた溶液を吸着剤樹脂（ＨＰ−２０、三菱製）のカラム（流速３０〜５０ｍｌ／分）にかけた。前記カラムを蒸留水（ＤＷ）で十分洗浄し、次いで３倍エタノール沈殿法を行い、溶液が全てカラムを通過したことを確認した。流出溶液に３倍容の９５％エタノールを添加して、多糖のみを効率よく沈殿させ、多糖を濃縮した。多糖を回収するため、溶液を５０００ｒｐｍで１５分間遠心分離し、次いで透析を行った。得られた溶液をｐＨ８、１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌに調整し、アニオン交換樹脂（Ｑ−セファロース、ファルマシアバイオテック社製）のカラム（流速１５〜２０ｍｌ／分）にかけて吸着させた。カラムを１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝溶液で洗浄し、０．５Ｍ ＮａＣｌで溶出させた。溶液に３倍容のエタノールを添加して多糖を沈殿させた。溶液を５０００ｒｐｍで１５分間遠心分離して沈殿を得た。沈殿を９５％エタノールで２回洗浄して不純物を除去し、透析（分子量カットオフ６０００以下）を行って残存エタノールを除去し、次いで凍結乾燥して多糖を得た。
【００３９】
Ｐａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｍの葉および／または茎に対しても上記の方法を繰り返し、多糖を得た。
【００４０】
調製実施例３：ＭＢ４０１００（人参の葉および／または茎からの抽出物）の調製および注射用溶液の調製
調製実施例２においてアニオン交換樹脂（Ｑ−セファロース）のカラム（流速１５〜２０ｍｌ／分）にかけた、Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ Ｃ．Ａ．Ｍａｙｅｒ由来の溶液をシリカゲル充填カラムにかけて、それから発熱性物質を除去した。３倍容のエタノールを添加して多糖を沈殿させ、遠心分離により多糖を回収し、９５％エタノールで２回洗浄して不純物を除去した。得られた沈殿物（ｓｅｇｍｅｎｔ）を３回蒸留した水に溶解し、透析（分子量カットオフ６０００以下）を行って残存エタノールを除去した。滅菌のため、得られた画分を０．２μｍ濾過システムに付し、発熱性物質を含まない溶液を調製した。この無菌溶液を３ｍｌバイアル中で凍結乾燥して、多糖画分を得た。乾燥多糖画分を生理食塩水に溶解して注射用溶液を調製し、後述の実施例において用いた。Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ Ｃ．Ａ．Ｍａｙｅｒの葉または茎から抽出したこの多糖を「ＭＢ４０１００」と命名した。
【００４１】
実験実施例１：人参の葉および／または茎から得られた抽出物の分析
前記調製実施例において調製した抽出物について成分分析を行った。
糖の総含有量は、標準物質としてガラクトースを用いたフェノール−硫酸法（非特許文献８）により測定した。ウロン酸の含有量は、標準物質としてβ−Ｄ−ガラクツロン酸を用いたｍ−ヒドロキシビフェニル法（非特許文献９）により測定した。タンパク質の含有量は、標準物質としてウシアルブミンを用いたローリー法（非特許文献１０）により測定した。ＫＤＯ（３−デオキシ−Ｄ−マンノ−２−オクツロソン酸）の含有量は、チオバルビツール酸法により測定した。
【００４２】
多糖の分析は、アルジトールアセテートを誘導体とするジョーンズ法（非特許文献１１）を用いて、気−液クロマトグラフィー（ＧＬＣ）法により行った。
【００４３】
調製実施例１で得られた粗抽出物を３回蒸留した水に溶解して濃度を１ｍｇ／ｍｌとし、上記の方法で分析した。その結果、Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ Ｃ．Ａ．Ｍａｙｅｒでは、中性糖の含有量が６８．９％、ウロン酸の含有量が１５．９％、タンパク質の含有量が８．７％であり、Ｐａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｍでは、中性糖の含有量が５７．８％、ウロン酸の含有量が３５％、タンパク質の含有量が５．４％であることが示された。
【００４４】
調製実施例２で得られた粗抽出物を３回蒸留した水に溶解して濃度を１ｍｇ／ｍｌとし、上記の方法で分析した。その結果、Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ Ｃ．Ａ．Ｍａｙｅｒでは、中性糖の含有量が５１．３％、ウロン酸の含有量が４６．８％、タンパク質の含有量が０．１％（糖の組成は、ラムノース５．９７％、フコース１．２２％、アラビノース１４．８６％、キシロース０．４４％、マンノース１．９３％、グルコース３％、ガラクトース２２．７％、ガラクツロン酸３１．４％、グルクロン酸１４．４％、ＫＤＯ１．３８％およびＤＨＡ（ｄ−デオキシ−Ｄ−リキソ−２−ヘプツロサール酸）１．０２％であった）であり、Ｐａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｍでは、中性糖の含有量が４９％、ウロン酸の含有量が５０．８％、タンパク質の含有量が０．２％（糖の組成は、ラムノース９．７％、フコース４．１％、アラビノース８．７％、キシロース０．７％、マンノース１．５％、グルコース１．２％、ガラクトース１２％、ガラクツロン酸４４％、グルクロン酸５％、ＫＤＯ６％およびＤＨＡ１．２％であった）であることが示された。
【００４５】
分子量は、ＧＳ−５２０ＨＱ、ＧＳ−３２０ＨＱおよびＧＳ−２２０ＨＱ （Ｓｈｏｄｅｘ Ａｓａｈｉｐａｃｋ ＧＳシリーズ、昭和電工製）を直列に連結して、ＨＰＬＣで測定した。この測定によれば、人参の葉および／または茎からの抽出物は、分子量が６，０００〜３４０，０００Ｄａ、平均分子量が約１２０，０００Ｄａであった。
【００４６】
糖の組成は人参の葉および茎の種類によって変動し、例えば中性糖については３０〜８０％、酸性糖については１０〜６０％、タンパク質については０．０１〜１０％であるが、糖の組成は一般にラムノース、フコース、アラビノース、キシロース、マンノース、グルコース、ガラクトース、ガラクツロン酸、グルクロン酸、ＫＤＯおよびＤＨＡを含んでおり、いずれの抽出物も抗癌・抗転移作用を示し、また抗癌薬の補助薬機能が見られた。
【００４７】
比較実施例１：Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ Ｃ．Ａ．ＭａｙｅｒおよびＰａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｍから抽出された多糖の活性の比較
各調製実施例で得られた各抽出物の肺癌転移抑制能を測定したところ、Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ Ｃ．Ａ．Ｍａｙｅｒでの抑制率は８８．３％、Ｐａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｍでの抑制率は８３．１％であることが判明した（図１を参照）。以下の実施例においては、Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ Ｃ．Ａ．Ｍａｙｅｒから抽出された多糖であるＭＢ４０１００を用いた。これは、このものが癌転移に対しより高い抑制率を示すことによる。
【００４８】
実験実施例２：ＭＢ４０１００の固形癌に対する抗癌作用
Ｓａｒｃｏｍａ １８０細胞（非上皮性癌細胞株）１×１０６個を、ＢＡＬＢ／ｃマウス（１群あたり２０匹）の鼠径部に注射した。注射より３日後、１０日間にわたり、ＭＢ４０１００を１日１回経口投与（投与量：１０および２０ｍｇ／ｋｇ）し、経口投与の後、癌の大きさを対照群のそれと比較した。ＵＶ２２３７Ｐ細胞（上皮性癌細胞株）に対しても上記の方法を繰り返した。図２に示す通り、非上皮性癌細胞株に関しては、ＭＢ４０１００処理により、癌の大きさが投与量１０ｍｇ／ｋｇでは６０％、投与量２０ｍｇ／ｋｇでは７０％減少した。上皮性癌細胞株に対しては、対応する投与量において、癌の大きさが各々６５％および７８％減少した。
【００４９】
実験実施例３：ＭＢ４０１００の肺癌転移に対する予防作用
７．５％ＦＢＳ、ビタミン溶液、ピルビン酸ナトリウム、非必須アミノ酸およびＬ−グルタミンを含むイーグルスＭＥＭ培地中で、Ｃｏｌｏｎ ２６−Ｍ３．１細胞（高度転移性結腸癌細胞）を培養した。この癌細胞をＢＡＬＢ／ｃマウスに注射し、癌転移度を測定することにより、Ｃｏｌｏｎ ２６−Ｍ３．１細胞の肺癌転移実験を行った（非特許文献１２）。ＭＢ４０１００をＰＢＳに溶解して０．２μｍの滅菌濾紙で濾過し、種々の投与量（５００μｇ、１００μｇ、２０μｇおよび４μｇ）で各マウスに静脈注射した。注射から２日後、前記Ｃｏｌｏｎ ２６−Ｍ３．１細胞を注射（マウス１匹あたり細胞２．５×１０４個）し、癌転移に対する予防作用を評価した。注射から１４日後、マウスを屠殺してその肺をブアン液中に保存した。肺に転移した癌細胞数を計数した。図３に示す通り、静脈注射したＭＢ４０１００は、Ｃｏｌｏｎ ２６−Ｍ３．１の肺への転移を有意に阻害した。
【００５０】
実験実施例４：ＭＢ４０１００の肺癌転移に対する治療作用
７．５％ＦＢＳ、ビタミン溶液、ピルビン酸ナトリウム、非必須アミノ酸およびＬ−グルタミンを含むイーグルスＭＥＭ培地中で、Ｃｏｌｏｎ ２６−Ｍ３．１細胞（高度転移性結腸癌細胞）を培養した。この癌細胞をＣ５７ＢＬ／６マウスおよびＢＡＬＢ／ｃマウスにそれぞれ注射し、癌転移度を測定することにより、Ｃｏｌｏｎ ２６−Ｍ３．１細胞の肺癌転移実験を行った（非特許文献１２）。ＭＢ４０１００をＰＢＳに溶解して０．２μｍの滅菌濾紙で濾過し、種々の投与量で各マウスに静脈注射した。前記Ｃｏｌｏｎ ２６−Ｍ３．１細胞をマウスに注射（マウス１匹あたり細胞２．５×１０４個）し、転移癌の増殖を誘引した。注射から１日後および４日後、各々、５００μｇ、１００μｇおよび２０μｇのＭＢ４０１００をマウスに静脈注射し、癌転移に対する治療作用を測定した。癌細胞の注射から１４日後、マウスを屠殺してその肺を取り出し、ブアン液中に保存した。肺に転移した癌細胞数を顕微鏡を通じて計数した。図４に示す通り、静脈注射したＭＢ４０１００は、投与量に応じて、肺に転移したＣｏｌｏｎ ２６−Ｍ３．１細胞の増殖を有意に阻害した。
【００５１】
実験実施例５：ＭＢ４０１００により活性化された、癌細胞に対するＮＫ細胞介在細胞毒性の測定
ＭＢ４０１００により活性化された、癌細胞に対するＮＫ細胞介在細胞毒性の測定を、放射性同位元素５１Ｃｒの活性を測定することにより評価した（非特許文献１３）。５００μｇ、１００μｇ、２０μｇおよび４μｇのＭＢ４０１００を１群あたり２匹のＢＡＬＢ／ｃマウスにそれぞれ静脈注射した。注射から２日後、マウスの脾細胞を採取した。丸底９６穴プレート中の脾細胞を含む各溶液に、５１Ｃｒ−標識Ｙａｃ−１細胞を、各々エフェクター（脾細胞）：標的（Ｙａｃ−１）細胞比（Ｅ／Ｔ比）１００：１、５０：１、２５：１および１２．５：１で添加した。それらを５％ＣＯ２、３７℃の条件下で６時間培養した。培養後、プレートを１０分間遠心し、次いで各ウェルの上清を綿棒で吸収した。ガンマカウンターを用いて放射性同位元素の量を測定した。ＮＫ細胞により生じた細胞毒性を、下記式：
細胞毒性（％）＝（実験的放出−自然放出）／（最大放出−自然放出）×１００
により放射活性（カウント／分）として算出した。
【００５２】
図５からわかるように、ＭＢ４０１００を注射したマウスの脾細胞におけるＮＫ細胞の活性は、ＭＢ４０１００の濃度に依存して増加し、５００μｇ、１００μｇおよび２０μｇを投与した群では、対照群に比べ各々３〜１０倍に増加した。ＮＫ細胞の活性は通常、Ｅ／Ｔ比に応じて幾分変化するが、この実験実施例におけるＮＫ細胞の活性は、Ｅ／Ｔ比に関係なく有意に増加した。
【００５３】
実験実施例６：顆粒球マクロファージコロニー形成単位（ＧＭ−ＣＦＵ）の形成による造血機能の促進
３５ｍｍペトリ皿（２ｍｍグリッド付き、Ｎａｌｇｅｎ Ｎｕｎｃ製）に、１ｍｌあたり細胞１×１０５個の骨髄細胞を入れ、ＭｅｔｈｏＣｕｌｔ（カナダ国Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ社製）アガー１ｍｌを用いて、種々の濃度のＭＢ４０１００で処理し、インキュベーター中３７℃、５％ＣＯ２の条件下で７日間培養した。対照群にはＭＢ４０１００なしのアガーを用いた。７日間培養後、培養した３５ｍｍペトリ皿を２ｍｍグリッド付き６０ｍｍペトリ皿に乗せ、コロニー数を顕微鏡を通じて計数した。１０μｇ処理群ではコロニー数が１６８であり、対照群と差がなかったが、５０μｇおよび１００μｇ処理群では、対照群に比べ各々コロニー数が３６．６％および３２．５％増加した（図６を参照）。
【００５４】
実験実施例７：ＭＢ４０１００の、抗癌薬による造血抑制のレベルを低減させる作用
抗癌薬（シクロホスファミドなど）は一般に、生体内で免疫抑制薬として機能し、免疫系の細胞数を減少させる。これは抗癌薬の代表的な副作用である。本実施例においては、ＭＢ４０１００の同時投与（シクロホスファミド投与により起こる免疫抑制を低減させることを期待したもの）において免疫細胞数を測定した。
【００５５】
マウスに対しシクロホスファミド（２５０ｍｇ／ｋｇ）を投与し、その２４時間および４８時間後に異なる投与量（１０ｍｇ／ｋｇおよび２０ｍｇ／ｋｇ）のＭＢ４０１００を各々腹腔内投与した（ａｂｄｏｍｉｎａｌｌｙ ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ）。７日後、マウスを屠殺して骨髄細胞および脾細胞を取り出し、これらの細胞数をトリパンブルー排除法で計数した。
【００５６】
遠位眼球静脈（ｅｙｅｂａｌｌ ｄｉｓｔａｌ ｖｅｉｎ）からヘパリン処理ガラス毛細管を用いて末梢血を素早く収集し、Ｋ３−ＥＤＴＡ処理血液収集管（ｂｌｏｏｄ−ｇａｔｈｅｒｉｎｇ ｔｕｂｅ）に回収して、自動血球分析装置（ａｕｔｏｍａｔｉｃ ｇｌｏｂｕｌｅ ａｎａｌｙｚｅｒ）で試験した。
【００５７】
Ａ．シクロホスファミド投与後の白血球（ＷＢＣ）数の変化
自動血球分析装置で測定したところ、正常マウスの遠位眼球静脈から収集した血液中の白血球数は平均７８００であったが、シクロホスファミド投与マウスでは、白血球数は５３００（正常マウスに比べ約３０％減少）であった。一方、シクロホスファミド投与の２日後にＭＢ４０１００を１０ｍｇ／ｋｇおよび２０ｍｇ／ｋｇ投与したマウス群では、白血球数は各々６６００および６４００（シクロホスファミドのみを投与したマウスに比べ約１５％多い）であった。
【００５８】
更に、シクロホスファミド投与の１日後にＭＢ４０１００を投与したマウス群では、白血球数は対照群に比べ１２．１％多かったが、ＭＢ４０１００の濃度に応じた差はなかった。また、シクロホスファミド投与の前後、計２回のＭＢ４０１００投与を受けたマウス群では、白血球数は対照群に比べ約１５％多かった（図７を参照）。
【００５９】
Ｂ．末梢血中の血小板数の変化
シクロホスファミドのみを投与したマウスでは、血小板数は正常マウスに比べ約５６％少なかった。ＭＢ４０１００を投与すると、シクロホスファミドのみを投与したときに比べ血小板数は約６．６％増加し、回復効果を示した。また、ＭＢ４０１００投与がシクロホスファミド投与の前か後かによらず、増加は６〜７％であった（図８を参照）。
【００６０】
Ｃ．脾細胞数の変化
シクロホスファミドのみを投与したマウスでは、脾細胞数は正常マウスに比べ約７２．８％少なかった。一方、シクロホスファミド投与前にＭＢ４０１００を２０ｍｇ／ｋｇ投与すると、シクロホスファミドのみを投与したときに比べ脾細胞数は約２６．８％増加した。また、シクロホスファミド投与後にＭＢ４０１００を１０ｍｇ／ｋｇおよび２０ｍｇ／ｋｇ投与したマウス群では、各々、脾細胞数は約３３％および４３％増加した。以上の結果は、抗癌薬による免疫細胞の抑制を、ＭＢ４０１００が低減しうることをしめすものである（図９を参照）。
【００６１】
Ｄ．骨髄細胞数の変化
シクロホスファミド投与の７日後、屠殺したマウスの骨髄細胞数を計数した。正常マウスの骨髄細胞密度は１ｍｌあたり４１．１×１０６個であったが、シクロホスファミドを投与したマウスの骨髄細胞密度は１ｍｌあたり２９．６×１０６個であった（抗癌薬により２９．２％減少）。しかし、シクロホスファミド投与の２日前にＭＢ４０１００を１０ｍｇ／ｋｇおよび２０ｍｇ／ｋｇ投与したマウス群では、シクロホスファミド投与マウス群に比べ、細胞数が各々１７．１％および１８．１％多かった。また、シクロホスファミド投与後にＭＢ４０１００を２０ｍｇ／ｋｇ投与したマウス群では、細胞数が１０．７８％多かった（図１０を参照）。
【００６２】
実験実施例８：ＭＢ４０１００の、放射線照射に対する保護作用
癌治療においては、しばしば放射線照射療法を抗癌剤投与と併用するが、これは骨髄細胞を破壊し、正常免疫細胞の形成・複製に負の作用を有するので、造血および免疫の機能を低下させる。この実験では、ＭＢ４０１００の同時投与が、放射線照射処理に伴う造血および免疫の機能の低下を低減しうるか否かを試験した。
【００６３】
ＢＡＬＢ／ｃマウス（雄、体重１８〜２２ｇ）にＭＢ４０１００を腹腔内投与し、４８時間後、４．５Ｇｙ（半数致死量（ｓｅｍｉ−ｌｅｔｈａｌ ａｍｏｕｎｔ））のコバルト（６０Ｃｏ）γ線に曝露させた。照射から５日および９日後、いずれにおいても（ｉｒｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ）、マウスを屠殺して骨髄細胞および脾細胞を採取し、各々の細胞数をトリパンブルー排除法で計数した。対照群に対しては、ＭＢ４０１００に代えてＰＢＳを投与した。
【００６４】
Ａ．脾細胞数の変化
正常マウスに４．５Ｇｙ（半数致死照射量）のコバルト（６０Ｃｏ）γ線を照射し、その５日後には、脾細胞数は１ｍｌあたり１５．８×１０４個であり、これは正常マウスの脾細胞数のわずか３％であったが、９日後には１４．８％まで回復した。しかし、照射２日前に１０ｍｇ／ｋｇのＭＢ４０１００を投与したマウス群では、照射５日後の脾細胞数が７．６％であり、９日後には１８．２％まで回復した。
【００６５】
照射２日前に２０ｍｇ／ｋｇのＭＢ４０１００を投与したマウス群では、照射５日後の脾細胞数が４．６％（１０ｍｇ／ｋｇ投与群より少ない）であり、９日後にはそれ以上増えていなかった。また、照射１日後にＭＢ４０１００を投与したマウス群では、脾細胞数は増加していたが、ＭＢ４０１００の濃度に応じた差は見られなかった。照射の前や後にＭＢ４０１００を投与したマウス群では、ＭＢ４０１００を投与していないマウス群に比べ脾細胞数が増加していた（図１１を参照）。
【００６６】
Ｂ．骨髄細胞数の変化
照射５日後、マウスの左大腿部から骨髄細胞を回収したところ、細胞数は正常マウスの５．３％であった。照射９日後には、正常マウスの１１．８％まで増加した。しかし、照射の前や後にＭＢ４０１００を１０ｍｇ／ｋｇおよび２０ｍｇ／ｋｇ投与したマウス群では、未処理マウスに比べ、照射５日後に屠殺したマウスで６〜７％、照射９日後に屠殺したマウスで約１５．７％細胞数が多かった。よって、ＭＢ４０１００は、放射線照射マウスの骨髄細胞の保護を補佐し、造血機能を維持することが確認された（図１２を参照）。
【００６７】
実験実施例９：免疫細胞の活性化および抗癌性サイトカインの生成
Ｃ５７／ＢＬ６マウスにＭＢ４０１００を１０ｍｇ／ｋｇ腹腔内投与し、１時間ごとに脾細胞を採取した。免疫細胞に対し蛍光標識受容体を用いるＦＡＣＳ分析を行った。その結果、免疫性に関連する全ての細胞（ＮＫＴ細胞、ＮＫ細胞、樹状細胞、マクロファージ、ＣＤ４細胞、ＣＤ８細胞、Ｂ細胞など）が活性化され、ＭＢ４０１００投与後約１６時間後に活性化が最大となることが示された。
【００６８】
各免疫細胞から分泌されるサイトカインの量を測定するため、Ｃ５７／ＢＬ６マウスにＭＢ４０１００を１０ｍｇ／ｋｇ腹腔内投与し、１６時間後に脾細胞を採取した。各免疫細胞から分泌されるサイトカインの量を、各免疫細胞に対する蛍光標識受容体および抗サイトカイン抗体を用いて、細胞内染色法で測定した。その結果、ＭＢ４０１００を投与したマウス群では、ＮＫＴ細胞およびＴ細胞から分泌されるＴＮＦ−ａおよびＩＬ−３が増加し、マクロファージおよび樹状細胞から分泌されるＩＬ−１２およびＴＮＦ−ａも増加することが示された（図１４を参照）。
【００６９】
実験実施例１０：抗癌薬と同時投与したＭＢ４０１００の相乗効果（１）
Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、癌細胞株Ｂ１６−ＢＬ１６を皮内注射した（マウス１匹あたり細胞１×１０５個）。癌細胞注射の１日後から、０．２μｍのフィルターで濾過したＭＢ４０１００を、３日おきに４回静脈注射した（マウス１匹あたり１ｍｇおよび２００μｇ）。抗癌薬シスプラチンを静脈注射した（各々マウス１匹あたり１００μｇ、５０μｇおよび２０μｇ）。マウスを、抗癌薬のみ投与したものと、ＭＢ４０１００を抗癌薬と同時に投与したものの２群に分け、癌の大きさおよび重さを測定した。その結果、同時投与群のマウスでは、癌細胞の増殖が約４３％抑制されることが示された。即ち、ＭＢ４０１００をシスプラチンと同時に投与したマウス群では、マウスは活発に動き、正常マウスの体重に回復した。これに対し、５０μｇのシスプラチンのみ投与したマウス群では、重篤な副作用（体重低下、運動減少など）が観測された。この結果、ＭＢ４０１００は、造血系の刺激および免疫反応の活性化に関与すると考えられる（図１５および１６を参照）。
【００７０】
実験実施例１１：抗癌薬と同時投与したＭＢ４０１００の相乗効果（２）
実験対象として胸腺欠損ヌードマウスを用いた。抗癌薬（タキソール）を投与したマウス群、ＭＢ４０１００を投与したマウス群並びにタキソールおよびＭＢ４０１００を同時投与したマウス群において、癌の大きさを測定した。マウスの状態と毒性を考慮し、タキソールは、癌注射の６日後から、３日おきに７回投与した（１２．５ｍｇ／ｋｇ）。ＭＢ４０１００は、癌注射の２日前に１回、癌注射の後は３日おきに（タキソール投与の日とは重複しない）腹腔内投与した（１０ｍｇ／ｋｇ）。使用した細胞株はＰＣ−３であり、マウス１匹あたり細胞２×１０６個を皮下注射した。
【００７１】
癌注射の１４〜３１日後に、癌の大きさを測定した。タキソールおよびＭＢ４０１００を同時投与した群における癌の大きさは、タキソールのみを投与した群における癌の大きさよりも小さかった。このことは、ＭＢ４０１００と抗癌薬の同時投与は、固形癌の抑制に関して相乗効果を有することを示している。
【００７２】
実験実施例１２：錠剤の調製
【００７３】
【表１】
【００７４】
上記処方箋の成分を均一に混合し、次いで打錠機で、１錠あたり５００ｍｇの錠剤となるように圧縮した。
【００７５】
実験実施例１３：散剤の調製
【００７６】
【表２】
【００７７】
上記処方箋の成分を均一に混合し、次いで組み立て装置（ａｓｓｅｍｂｌｙ ｍａｃｈｉｎｅ）で、１カプセルあたり５００ｍｇとなるようにカプセルに充填した。
【産業上の利用可能性】
【００７８】
パナックス属に属する植物の葉および／または茎から抽出される、本発明による抽出物または多糖は、癌転移に対して抑制作用を示し、そのため癌治療薬、癌転移の予防および治療薬、並びに抗癌薬および放射線照射治療用の補助薬として使用できる。
【００７９】
従って、前記抽出物または多糖画分を含む組成物は、免疫系（ＮＫＴ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、Ｔ細胞、Ｂ細胞などを含む）を全体的に活性化し、また抗癌関連サイトカインの分泌を促進する作用を有するので、癌細胞の増殖および転移を有意に抑制するので、前記組成物は、抗癌および抗癌転移薬として、また一般的な抗癌薬または放射線照射治療の補助薬（それらの副作用、例えば白血球数の減少を低減させることによる）として使用できる。
【００８０】
本発明は、その精神および必須の特徴から逸脱することなくいくつかの態様をとりうるので、上記の実施例は、特に指定のない限り、先行する記載の詳細により一切限定されると理解すべきものではなく、むしろ添付の請求の範囲に定義されるその精神および範囲内において広く解釈すべきものであり、従って、請求の範囲内にふくまれるあらゆる変更および修飾、またはそのような範囲の等価物は、添付の請求の範囲に含まれるものとする。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、有効成分としてパナックス（Ｐａｎａｘ）属に属する植物の葉および／または茎からの抽出物を含む組成物、並びに多糖の調製方法に関し、より詳細には、免疫細胞（ナチュラルキラー（ＮＫ）Ｔ細胞、ＮＫ細胞など）を活性化することにより抗癌薬および／または癌転移抑制薬として、また造血促進作用、骨髄保護作用、放射線照射感受性保護作用などにより抗癌薬の補助薬（ａｄｊｕｖａｎｔ）としても作用しうる、パナックス属植物の葉および／または茎から分離された多糖を含む組成物、並びに、パナックス属植物の葉および／または茎を５０〜１８０℃で０．５〜２０時間水中で加熱し、それから多糖を抽出することによる、多糖の調製方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
毎年、アメリカにおける死亡の２０％は癌関連疾患によるものであると報告されている。これらの癌の治療には、通常は化学療法を用いるが、有効であることが知られている抗癌薬はほとんどない。
【０００３】
死亡の多くは、原発癌（ｆｉｒｓｔ ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ）そのものよりも、むしろ癌の転移によるものである（非特許文献１）。多くの実験および臨床試験により、癌転移抑制および癌自体の破壊において、自然免疫が重要な役割を果たしていることが確認されている（非特許文献２）。
【０００４】
ＮＫＴ（ナチュラルキラーＴ）細胞は、α／βＴ細胞の分化した集団（ｓｐｅｃｉａｌｉｚｅｄ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ）であって、ＮＫ系統の受容体を共発現（ｃｏｅｘｐｒｅｓｓ）しており、また効果細胞に対する初期的な補助をもたらし、ある種の免疫応答におけるＴｈ１またはＴｈ２の分化を調節する大量のサイトカインを極めて迅速に分泌するという特異な能力を有している（非特許文献３）。更に、それらは感染性の病原体（ｇｅｒｍｓ ｏｒ ｂａｃｔｅｒｉａ）、例えば癌細胞、寄生虫、リステリア（ｌｉｓｔｅｒｉａｓ）、結核菌などを排除する（非特許文献４）。
【０００５】
ＮＫＴ細胞に加え、ＮＫ細胞、ＬＡＫ細胞およびマクロファージが、癌細胞、ウィルスおよび細菌による感染を効果的に阻害しうる細胞であることが知られている。より詳細には、ＮＫ細胞、ＬＡＫ細胞およびマクロファージを効果的に活性化することにより、癌細胞の増殖とその転移がブロックされることが知られている。また、免疫刺激薬によるＮＫ細胞の活性化により、癌転移による癌細胞の増殖が阻害されることが報告されている（非特許文献５）。
【０００６】
免疫系のこれらの抗癌、抗転移および抗ウィルス機能は、免疫系を活性化する種々のサイトカインの分泌により仲介される。特に、γ−インターフェロン、腫瘍壊死因子−αなどは、抗癌、抗転移および抗ウィルス機能に関連する代表的なサイトカインである。
【０００７】
γ−インターフェロンは、主にＴ細胞で生成され、免疫反応を制御し、またＴおよびＢ細胞、好中球、ＮＫ細胞およびマクロファージを活性化して癌細胞を攻撃させるのに役立つ。そのためγ−インターフェロンは、慢性骨髄性白血病や腎臓癌の治療に用いられる。更に、γ−インターフェロンはＤＮＡ複製および細胞増殖に対し強力な阻害作用を有するので、癌治療のみならず、ウィルス感染や、多剤耐性細菌および真菌感染の、微生物の増殖抑制による治療にも臨床適用される。
【０００８】
腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）−αは、主にマクロファージで生成され、種々の免疫反応（例えば炎症反応）に関与し、特に癌細胞に対して極めて強い毒性を示す。現在、ＴＮＦ−αは、日本における皮膚癌治療薬としての承認が間近であり、臨床試験の結果を待つ段階にある（ｐｅｎｄｉｎｇ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｅｓｔ ｒｅｓｕｌｔｓ）。
【０００９】
しかし、抗癌療法にサイトカインを直接用いると、予期せぬ副作用（炎症、嘔吐など）がもたらされる。そのため、特定のサイトカインのみを用いるよりも、免疫系を全体的に活性化しうる物質を見出すための試験が数多く行われている。
【００１０】
ＮＫ細胞を含む免疫細胞を活性化する天然物は遺憾ながらほとんど知られていないが、例えばＶｉｓｃｕｍ ｃｏｌｏｒａｔｕｍ抽出物由来のレクチン（一部で癌治療の代替療法に用いられている）や、キノコから得られるβ−グルカン系統に属する多糖がある。
【００１１】
ところで、パナックス属に属する植物（いわゆる「人参」）が、通常は白参（収穫後、室温で乾燥したもの）または紅参（収穫後、熱処理したもの）の形態で、強壮薬として用いられている。人参の成分および医学的効果を特徴付けるための多くの研究が行われており、報告されている医学的効果には、老化防止、抗動脈硬化（ａｎｔｉ−ａｒｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）、抗高脂血症、肝機能増強、放射線照射の副作用の除去、免疫系増強、抗血栓、脳機能増強、抗ストレス、血糖低下、血圧低下および抗癌作用が含まれる。これらの作用を誘引する主要な成分は、サポニン群に属することが見出されている。近年の研究は、人参の根から酸性多糖を抽出／分離して、その作用を確認することに焦点を合わせたものである。これらの酸性多糖は、マクロファージを活性化し、マクロファージにγ−インターフェロン生成を促進させて、癌細胞の増殖を阻害することが知られている（特許文献１）。
【００１２】
これまでのところ、いくつかの例を除き、研究の大半は人参の葉や茎ではなく根のみに集中している。人参の根は、少なくとも６年間栽培して医学的効果を示すようになければならないが、人参の葉や茎は、毎年育てられ廃棄されている。従って、人参根と同様に、人参の葉や茎が特定の生理活性物質を含むことが見出されれば、副産物の利用や環境保護の観点から大きな価値となる。
【００１３】
上記したように、人参の葉や茎の利用はいくつかの例（人参葉サポニンを用いる化粧品の製造（特許文献２）、人参葉から塩基性条件下でアグリコンサポニンを得る方法（非特許文献６）、人参葉を含むハーブの抽出物を用いるシャンプーおよびローションの調製（特許文献３）および人参葉を含む清浄な女性用ティッシュの調製（特許文献４））に限られている。
【００１４】
ある種の研究において、人参の葉から得られた多糖が胃潰瘍の治療に有効であることが示されている（非特許文献７）が、人参の葉や茎からの抽出物が、抗癌作用、癌転移抑制作用などを有することを示唆する研究はない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１５】
【特許文献１】韓国特許第１４４１３０号
【特許文献２】韓国出願公開公報第８１−３７３６号
【特許文献３】韓国特許第２３６４１号
【特許文献４】韓国特許第２１４２２３号
【非特許文献】
【００１６】
【非特許文献１】Ｆｉｆｌｅｒ，１９９１ ｃａｎｃｅｒ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ．，Ｂｒ．Ｍｅｄ．Ｂｕｌｌ．４７，１５７−１７７
【非特許文献２】Ｓｃｈａｎｔｚ ｅｔ ａｌ．，ｃａｎｃｅｒ ｉｍｍｕｎｏｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２５．，１４１−１４８，１９８７
【非特許文献３】Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９７．１５；Ａｌｂｅｒｔ Ｂｅｎｄｅｌａｅ ｅｔ ａｌ．ｐ５３５
【非特許文献４】Ｓｅｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２８，ｐ１０６９，１９９６
【非特許文献５】Ｈｅｒｂｅｒｍａｎ，１９８４ Ｊ．ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．８３，１３７−１４０
【非特許文献６】Ｋｏｒｅａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ，３８（４），１９９４，８
【非特許文献７】Ｐｌａｎｔａ Ｍｅｄ．５８，１９９２，４４５−４４８
【非特許文献８】Ｄｕｂｏｉｓ ｅｔ ａｌ，Ａｎａｌ． Ｃｈｅｍ．，２８，３５０，１９５６
【非特許文献９】Ｂｌｕｍｅｎｋｒａｎｔｚ ｅｔ ａｌ，Ａｎａｌ．ｂｉｏｃｈｅｍ．，５４，４８４，１９７３
【非特許文献１０】Ｌｏｗｒｙ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．，Ｃｈｅｍ．，１９３，２６５，１９５１
【非特許文献１１】Ｐｌａｎｔ ｐｈｙｓｉｏｌ．，４９，９２６，１９７２
【非特許文献１２】Ｙｏｏ ｅｔ ａｌ，１９９４ Ｖａｃｃｉｎｅ １２，１７５−１８０
【非特許文献１３】Ｙｏｏ ｅｔ ａｌ， １９９７，Ｊｐｎ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，８８，１８４−１９０
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１７】
本発明者らは、人参の葉および／または茎からの抽出物が、免疫細胞（ＮＫＴ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージなど）を活性化し、またサイトカイン（α−インターフェロン、腫瘍壊死因子−αなど）の分泌を促進して、癌細胞の増殖および転移を抑制し、造血促進作用を補助し、既存の抗癌薬や放射線照射療法における副作用をも低減することを初めて見出した。本発明は、これらの発見に基づいてなされたものである。
【００１８】
従って、本発明の目的は、人参の葉および／または茎から得られ、癌抑制作用、造血促進作用、骨髄保護作用、放射線照射感受性保護作用などを有する抽出物を提供することにある。
【００１９】
本発明の他の目的は、有効成分として前記抽出物を含む組成物を提供することにある。
【００２０】
本発明の更に他の目的は、前記組成物の新規な用途、例えば抗癌薬、癌転移抑制薬、造血促進薬、放射線照射副作用抑制薬、抗癌薬副作用抑制薬、自己免疫疾患治療薬などを提供することにある。
【００２１】
本発明の他の目的は、人参の葉および／または茎から前記抽出物を得る方法を提供することにある。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】本願実験実施例１および比較実施例１による、Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ Ｃ．Ａ．ＭａｙｅｒおよびＰａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｍの葉および茎から得られる多糖の、肺癌の転移に対する抑制作用を示すグラフである。
【図２】本願実験実施例２による、ＭＢ４０１００（人参の葉または茎からの抽出物）の、固形癌に対する抗癌作用を示すグラフである。
【図３】本願実験実施例３による、ＭＢ４０１００の、肺癌の転移に対する予防作用を示すグラフである。
【図４】本願実験実施例４による、ＭＢ４０１００の、肺癌の転移低減に対する作用を示すグラフである。
【図５】本願実験実施例５による、癌細胞に対するＮＫ細胞介在細胞毒性の、ＭＢ４０１００による増強を示すグラフである。
【図６】本願実験実施例６による、人参の葉または茎からの抽出物により誘引される、顆粒球マクロファージコロニー形成単位（ＧＭ−ＣＦＵ）の増加を示すグラフである。
【図７】本願実験実施例７による、抗癌薬により誘引された造血抑制の、ＭＢ４０１００による低減作用（血中白血球数の変化として示されている）を示すグラフである。
【図８】本願実験実施例７による、抗癌薬により誘引された造血抑制の、ＭＢ４０１００による低減作用（血中血漿板数の変化として示されている）を示すグラフである。
【図９】本願実験実施例７による、抗癌薬により誘引された造血抑制の、ＭＢ４０１００による低減作用（脾細胞数の変化として示されている）を示すグラフである。
【図１０】本願実験実施例７による、抗癌薬により誘引された造血抑制の、ＭＢ４０１００による低減作用（骨髄細胞数の変化として示されている）を示すグラフである。
【図１１】本願実験実施例８による、放射線照射に対する、ＭＢ４０１００による保護作用（脾細胞数の変化として示されている）を示すグラフである。
【図１２】本願実験実施例８による、放射線照射に対する、ＭＢ４０１００による保護作用（骨髄細胞数の変化として示されている）を示すグラフである。
【図１３−ａ】本願実験実施例９による、ＭＢ４０１００による免疫細胞の活性化度を示すグラフである。
【図１３−ｂ】本願実験実施例９による、ＭＢ４０１００による免疫細胞の活性化度を示すグラフである。
【図１３−ｃ】本願実験実施例９による、ＭＢ４０１００による免疫細胞の活性化度を示すグラフである。
【図１３−ｄ】本願実験実施例９による、ＭＢ４０１００による免疫細胞の活性化度を示すグラフである。
【図１４−ａ】本願実験実施例９による、ＭＢ４０１００により誘引された抗癌性サイトカインのレベルを示すグラフである。
【図１４−ｂ】本願実験実施例９による、ＭＢ４０１００により誘引された抗癌性サイトカインのレベルを示すグラフである。
【図１５】本願実験実施例１０による、抗癌薬とＭＢ４０１００の同時投与における、ＭＢ４０１００による、抗癌薬の副作用を阻害する作用を示すグラフである。
【図１６】本願実験実施例１０による、抗癌薬とＭＢ４０１００の同時投与による抗癌作用の向上を示すグラフである。
【図１７】本願実験実施例１１による、抗癌薬とＭＢ４０１００の同時投与による抗癌作用の向上を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
本発明による組成物は、有効成分として、パナックス属に属する植物（以降、「パナックス属植物」または時に「人参」と称する）の葉および／または茎を特定の条件下で処理することによって得ることができる抽出物を含む。本発明で用いるこれらのパナックス属植物には、例えばＰａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ Ｃ．Ａ．Ｍａｙｅｒ、Ｐａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｍ、Ｐａｎａｘ ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ、Ｐａｎａｘ ｐｓｅｕｄｏｇｉｎｓｅｎｇ、Ｐａｎａｘ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ、Ｐａｎａｘ ｖｉｅｔｎａｍｅｎｓｉｓ Ｈａ ｅｔ Ｇｒｕｓｈｖ．などが含まれ、本発明においてはこのうち１種以上を用いることができる。
【００２４】
本発明による組成物の形状には、上記抽出物の効果が示される限り特に制限はなく、例えば固相、懸濁液相、乳液相、液相などが含まれる。組成物中の上記抽出物の量についても、上記抽出物が特定の目的のための活性成分として機能する限り特に制限はない。
以下、本発明をより詳細に記述する。
【００２５】
本発明によれば、パナックス属植物の葉および／または茎から抽出物を得るためには、それらの葉および／または茎をまず水（ｐＨ４〜１０）１０〜２０当量中、５０〜１８０℃で０．５〜２０時間加熱する。上記の通り、パナックス属植物はＰａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ Ｃ．Ａ．Ｍａｙｅｒ、Ｐａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｍ、Ｐａｎａｘ ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ、Ｐａｎａｘ ｐｓｅｕｄｏｇｉｎｓｅｎｇ、Ｐａｎａｘ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ、Ｐａｎａｘ ｖｉｅｔｎａｍｅｎｓｉｓ Ｈａ ｅｔ Ｇｒｕｓｈｖ．などのうち１種以上であってよい。この水熱処理の後、人参の葉および／または茎や残渣（ｒｅｍｎａｎｔｓ）を濾過により除去する。微細な浮遊粒子は、精密濾過法（ｆｉｎｅ ｆｉｌｔｅｒｉｎｇ ｐｒｏｃｅｓｓ）および遠心分離により除去する。最終的な濾過法は、孔径０．４５μｍのフィルターや限外濾過器を用いて行ってよく、遠心分離法は、７０００ｒｐｍで３０分行いうる。そのようにして得られた溶液を、それからの多糖の分離を容易にするため、例えば蒸発により濃縮する。濃縮法は、７０℃、７６０ｍｍＨｇにおいて、糖屈折計にて測定した際の溶液濃度が２０ｂｒｉｘになるまで行いうる。濃縮した溶液から多糖を効果的に回収するため、０．１〜１Ｍ、好ましくは０．５〜１ＭのＮａＣｌを濃縮した溶液に添加する。そして、１〜４倍容、好ましくは２〜４倍容のアルコール（メタノール、エタノール、プロパノールなど）またはアセトンを用いて多糖を沈殿させる。沈殿させた多糖を９５％以上のアルコールまたはアセトンで数回洗浄して水および不純物を除去し、その後透析または限外濾過を行い塩およびアルコールを除去する。そのようにして得られた多糖を、熱風乾燥、真空乾燥、凍結乾燥、噴霧乾燥などのうち一種により乾燥させる。
【００２６】
標的とする薬物およびその用途に応じ、精製法をより効率的に選択することができる。例となる方法を以下に示す。
分離および濾過が完了した後、溶液をｐＨ約８．０、０．４Ｍ ＮａＣｌ／１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌに調整し、次いでアニオン交換樹脂のカラム（流速３０ｍｌ／分）にかける。アニオン交換樹脂は、事前に０．４Ｍ ＮａＣｌ／１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌで平衡化し、着色物質や不純物のみが吸着され、多糖は吸着されないようにしておかなければならない。アニオン交換樹脂のカラムを緩衝溶液で十分洗浄する。前記カラムを通過した溶液をｐＨ約６〜７に調整し、次いで吸着剤樹脂のカラム（流速３０〜５０ｍｌ／分）にかける。前記カラムを蒸留水（ＤＷ）で十分洗浄する。３倍エタノール沈殿法（ｔｈｒｅｅ−ｔｉｍｅ ｅｔｈａｎｏｌ ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ）を実施し、全ての多糖がカラムから出たか否かチェックする。流出溶液に３倍容の９５％エタノールを添加して、多糖のみを効率よく沈殿させ、多糖を濃縮する。多糖を回収するため、遠心分離（５０００ｒｐｍ、１５分）および透析を行う。そのようにして得られた溶液をｐＨ８に調整する。その溶液に１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝溶液（ｐＨ８）を添加した後、前記溶液をアニオン交換樹脂のカラム（流速１５〜２０ｍｌ／分）にかける。前記カラムを緩衝溶液で十分洗浄した後、０．５Ｍ ＮａＣｌで溶出させる。溶出液に３倍容のエタノールを添加して多糖を沈殿させ、次いで遠心分離を行いそれらを回収する。回収したペレットを９５％エタノールで２回洗浄した後、透析（分子量カットオフが６０００の透析膜に対して）を行って残存エタノールおよび低分子量の不純物を除去し、次いで凍結乾燥する。
【００２７】
溶媒抽出により得られた抽出物を３回蒸留した（ｔｒｉｐｌｅ ｄｉｓｔｉｌｌｅｄ）水で希釈して濃度を１ｍｇ／ｍｌとし、分析した。その結果、Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ Ｃ．Ａ．Ｍａｙｅｒでは、中性糖の含有量が６８．９％、ウロン酸の含有量が１５．９％、タンパク質の含有量が８．７％であり、Ｐａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｍでは、中性糖の含有量が５７．８％、ウロン酸の含有量が３５％、タンパク質の含有量が５．４％であることが示された。
【００２８】
イオン交換樹脂、吸着剤樹脂などを用いる精巧な（ｅｌａｂｏｒａｔｅ）分離／精製法により得られた抽出物を３回蒸留した水で希釈して濃度を１ｍｇ／ｍｌとし、分析した。その結果、Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ Ｃ．Ａ．Ｍａｙｅｒでは、中性糖の含有量が５１．３％、ウロン酸の含有量が４６．８％、タンパク質の含有量が０．１％（糖の分布は、ラムノース５．９７％、フコース１．２２％、アラビノース１４．８６％、キシロース０．４４％、マンノース１．９３％、グルコース３％、ガラクトース２２．７％、ガラクツロン酸３１．４％、グルクロン酸１４．４％、ＫＤＯ（２−ケト−３−デオキシオクツロソン酸）１．３８％およびＤＨＡ（３−デオキシ−Ｄ−リキソ−２−ヘプツロサール酸）（３−ｄｅｏｘｙ−Ｄ−ｌｙｘｏ−２−ｈｅｐｔｕｌｏｓａｒｉｃ ａｃｉｄ）１．０２％であった）であり、Ｐａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｍでは、中性糖の含有量が４９％、ウロン酸の含有量が５０．８％、タンパク質の含有量が０．２％（糖の分布は、ラムノース９．７％、フコース４．１％、アラビノース８．７％、キシロース０．７％、マンノース１．５％、グルコース１．２％、ガラクトース１２％、ガラクツロン酸４４％、グルクロン酸５％、ＫＤＯ６％およびＤＨＡ１．２％であった）であることが示された。
【００２９】
本発明者は、人参の葉および／または茎からの抽出物は、分子量が６，０００〜３４０，０００Ｄａ、平均分子量が約１２０，０００Ｄａであることを見出した。
【００３０】
また、糖の組成は人参の種類によって変動し、例えば中性糖については３０〜８０％、酸性糖については１０〜６０％、タンパク質については０．０１〜１０％であるが、糖は一般にラムノース、フコース、アラビノース、キシロース、マンノース、グルコース、ガラクトース、ガラクツロン酸、グルクロン酸、ＫＤＯおよびＤＨＡを含んでおり、いずれの抽出物も抗癌、抗転移および／または抗癌薬補助薬作用を示した。
【００３１】
人参の葉および／または茎から上記のようにして得られる抽出物または多糖は、免疫系全体（例えばＮＫＴ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、Ｔ細胞、Ｂ細胞など）を活性化し、また抗癌機能に関連するサイトカインの分泌を促進して、癌細胞の増殖および転移を有意に減少させる。よって、前記組成物を抗癌薬および癌転移抑制薬として用いることができる。また、前記組成物を抗癌薬または放射線照射治療の補助薬（それらの副作用を低減させることによる）として用いることができる。
【００３２】
本発明による組成物は、それ自体で、または担体（医薬の分野において従来許容されているもの）と組み合わせて、従来の投与形態、例えば経口投与剤（丸剤、カプセル剤、液剤、分散液剤など）、注射剤などに処方することができる。経口投与において薬物が胃酸で分解されるのを防ぐため、前記組成物を制酸薬と同時投与したり、腸溶性コーティングのある処方にしてもよい。
【００３３】
人体への多糖の投与量は、有効成分の吸収速度、不活性化速度、排泄速度や、患者の年齢、性別、現在の容体などを検討して、適切に決定しなければならず、一般には、成人に対し１日あたり１００μｇ〜６０００ｍｇ、好ましくは２０〜５０００ｍｇである。
【００３４】
本発明による組成物は、抗癌薬またはその補助薬を更に含んでいてもよく、またそれらと同時投与してもよい。抗癌薬の種類に特に制限はなく、その例にはタキソール（登録商標）およびシスプラチン（登録商標）が含まれる。
【００３５】
以下の実施例を参照して、本発明をより詳細に記載する。ただし、本発明の範囲はそれらに限定されるものではない。
【実施例】
【００３６】
調製実施例１：人参の葉および／または茎からの、多糖粗抽出物の調製
Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ Ｃ．Ａ．Ｍａｙｅｒの葉および／または茎１００ｇを１リットルの水に添加し、それらから活性成分を抽出すべく１００℃で５時間加熱した。濾過により液相を葉および／または茎から分離し、７，０００ｒｐｍで３０分間遠心分離して、それから不溶性の不純物を除去した。上清（多糖を含む）を７０℃、７６０ｍｍＨｇで２０ｂｒｉｘとなるまで濃縮して、１００ｍｌの濃縮溶液を得た。最終濃度１Ｍとなるよう塩化ナトリウムを添加し、次いで３００ｍｌのエタノールを添加した。得られた混合物を１時間放置して沈殿を起こさせた。沈殿物を１００ｍｌの９５％エタノールで洗浄して（２回）不純物を除去し、次いで透析し、更に凍結乾燥して多糖粗抽出物を得た。
【００３７】
Ｐａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｍの葉および／または茎に対しても上記の方法を繰り返し、多糖粗抽出物を得た。
【００３８】
調製実施例２：人参の葉および／または茎からの多糖の調製
Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ Ｃ．Ａ．Ｍａｙｅｒ５００ｇを５リットルの蒸留水に添加し、３時間加熱して抽出溶液を調製した。抽出溶液からスラリーをガーゼで分離した。抽出溶液を７，０００ｒｐｍで２０分間遠心分離して、上清を分離した。上清をｐＨ約８．０、０．４Ｍ ＮａＣｌ／１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌに調整し、次いでアニオン交換樹脂（ＰＡ３１２系強塩基型アニオン交換樹脂、Ｓａｍｙａｎｇ社製）のカラム（流速３０ｍｌ／分）にかけた。アニオン交換樹脂は、事前に０．４Ｍ ＮａＣｌ／１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌで平衡化し、不純物のみが吸着され、多糖は吸着されないようにした。アニオン交換樹脂のカラムを緩衝溶液で十分洗浄し、前記カラムを通過した溶液をｐＨ約６〜７に調整した。得られた溶液を吸着剤樹脂（ＨＰ−２０、三菱製）のカラム（流速３０〜５０ｍｌ／分）にかけた。前記カラムを蒸留水（ＤＷ）で十分洗浄し、次いで３倍エタノール沈殿法を行い、溶液が全てカラムを通過したことを確認した。流出溶液に３倍容の９５％エタノールを添加して、多糖のみを効率よく沈殿させ、多糖を濃縮した。多糖を回収するため、溶液を５０００ｒｐｍで１５分間遠心分離し、次いで透析を行った。得られた溶液をｐＨ８、１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌに調整し、アニオン交換樹脂（Ｑ−セファロース、ファルマシアバイオテック社製）のカラム（流速１５〜２０ｍｌ／分）にかけて吸着させた。カラムを１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝溶液で洗浄し、０．５Ｍ ＮａＣｌで溶出させた。溶液に３倍容のエタノールを添加して多糖を沈殿させた。溶液を５０００ｒｐｍで１５分間遠心分離して沈殿を得た。沈殿を９５％エタノールで２回洗浄して不純物を除去し、透析（分子量カットオフ６０００以下）を行って残存エタノールを除去し、次いで凍結乾燥して多糖を得た。
【００３９】
Ｐａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｍの葉および／または茎に対しても上記の方法を繰り返し、多糖を得た。
【００４０】
調製実施例３：ＭＢ４０１００（人参の葉および／または茎からの抽出物）の調製および注射用溶液の調製
調製実施例２においてアニオン交換樹脂（Ｑ−セファロース）のカラム（流速１５〜２０ｍｌ／分）にかけた、Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ Ｃ．Ａ．Ｍａｙｅｒ由来の溶液をシリカゲル充填カラムにかけて、それから発熱性物質を除去した。３倍容のエタノールを添加して多糖を沈殿させ、遠心分離により多糖を回収し、９５％エタノールで２回洗浄して不純物を除去した。得られた沈殿物（ｓｅｇｍｅｎｔ）を３回蒸留した水に溶解し、透析（分子量カットオフ６０００以下）を行って残存エタノールを除去した。滅菌のため、得られた画分を０．２μｍ濾過システムに付し、発熱性物質を含まない溶液を調製した。この無菌溶液を３ｍｌバイアル中で凍結乾燥して、多糖画分を得た。乾燥多糖画分を生理食塩水に溶解して注射用溶液を調製し、後述の実施例において用いた。Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ Ｃ．Ａ．Ｍａｙｅｒの葉または茎から抽出したこの多糖を「ＭＢ４０１００」と命名した。
【００４１】
実験実施例１：人参の葉および／または茎から得られた抽出物の分析
前記調製実施例において調製した抽出物について成分分析を行った。
糖の総含有量は、標準物質としてガラクトースを用いたフェノール−硫酸法（非特許文献８）により測定した。ウロン酸の含有量は、標準物質としてβ−Ｄ−ガラクツロン酸を用いたｍ−ヒドロキシビフェニル法（非特許文献９）により測定した。タンパク質の含有量は、標準物質としてウシアルブミンを用いたローリー法（非特許文献１０）により測定した。ＫＤＯ（３−デオキシ−Ｄ−マンノ−２−オクツロソン酸）の含有量は、チオバルビツール酸法により測定した。
【００４２】
多糖の分析は、アルジトールアセテートを誘導体とするジョーンズ法（非特許文献１１）を用いて、気−液クロマトグラフィー（ＧＬＣ）法により行った。
【００４３】
調製実施例１で得られた粗抽出物を３回蒸留した水に溶解して濃度を１ｍｇ／ｍｌとし、上記の方法で分析した。その結果、Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ Ｃ．Ａ．Ｍａｙｅｒでは、中性糖の含有量が６８．９％、ウロン酸の含有量が１５．９％、タンパク質の含有量が８．７％であり、Ｐａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｍでは、中性糖の含有量が５７．８％、ウロン酸の含有量が３５％、タンパク質の含有量が５．４％であることが示された。
【００４４】
調製実施例２で得られた粗抽出物を３回蒸留した水に溶解して濃度を１ｍｇ／ｍｌとし、上記の方法で分析した。その結果、Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ Ｃ．Ａ．Ｍａｙｅｒでは、中性糖の含有量が５１．３％、ウロン酸の含有量が４６．８％、タンパク質の含有量が０．１％（糖の組成は、ラムノース５．９７％、フコース１．２２％、アラビノース１４．８６％、キシロース０．４４％、マンノース１．９３％、グルコース３％、ガラクトース２２．７％、ガラクツロン酸３１．４％、グルクロン酸１４．４％、ＫＤＯ１．３８％およびＤＨＡ（ｄ−デオキシ−Ｄ−リキソ−２−ヘプツロサール酸）１．０２％であった）であり、Ｐａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｍでは、中性糖の含有量が４９％、ウロン酸の含有量が５０．８％、タンパク質の含有量が０．２％（糖の組成は、ラムノース９．７％、フコース４．１％、アラビノース８．７％、キシロース０．７％、マンノース１．５％、グルコース１．２％、ガラクトース１２％、ガラクツロン酸４４％、グルクロン酸５％、ＫＤＯ６％およびＤＨＡ１．２％であった）であることが示された。
【００４５】
分子量は、ＧＳ−５２０ＨＱ、ＧＳ−３２０ＨＱおよびＧＳ−２２０ＨＱ （Ｓｈｏｄｅｘ Ａｓａｈｉｐａｃｋ ＧＳシリーズ、昭和電工製）を直列に連結して、ＨＰＬＣで測定した。この測定によれば、人参の葉および／または茎からの抽出物は、分子量が６，０００〜３４０，０００Ｄａ、平均分子量が約１２０，０００Ｄａであった。
【００４６】
糖の組成は人参の葉および茎の種類によって変動し、例えば中性糖については３０〜８０％、酸性糖については１０〜６０％、タンパク質については０．０１〜１０％であるが、糖の組成は一般にラムノース、フコース、アラビノース、キシロース、マンノース、グルコース、ガラクトース、ガラクツロン酸、グルクロン酸、ＫＤＯおよびＤＨＡを含んでおり、いずれの抽出物も抗癌・抗転移作用を示し、また抗癌薬の補助薬機能が見られた。
【００４７】
比較実施例１：Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ Ｃ．Ａ．ＭａｙｅｒおよびＰａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｍから抽出された多糖の活性の比較
各調製実施例で得られた各抽出物の肺癌転移抑制能を測定したところ、Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ Ｃ．Ａ．Ｍａｙｅｒでの抑制率は８８．３％、Ｐａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｍでの抑制率は８３．１％であることが判明した（図１を参照）。以下の実施例においては、Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ Ｃ．Ａ．Ｍａｙｅｒから抽出された多糖であるＭＢ４０１００を用いた。これは、このものが癌転移に対しより高い抑制率を示すことによる。
【００４８】
実験実施例２：ＭＢ４０１００の固形癌に対する抗癌作用
Ｓａｒｃｏｍａ １８０細胞（非上皮性癌細胞株）１×１０６個を、ＢＡＬＢ／ｃマウス（１群あたり２０匹）の鼠径部に注射した。注射より３日後、１０日間にわたり、ＭＢ４０１００を１日１回経口投与（投与量：１０および２０ｍｇ／ｋｇ）し、経口投与の後、癌の大きさを対照群のそれと比較した。ＵＶ２２３７Ｐ細胞（上皮性癌細胞株）に対しても上記の方法を繰り返した。図２に示す通り、非上皮性癌細胞株に関しては、ＭＢ４０１００処理により、癌の大きさが投与量１０ｍｇ／ｋｇでは６０％、投与量２０ｍｇ／ｋｇでは７０％減少した。上皮性癌細胞株に対しては、対応する投与量において、癌の大きさが各々６５％および７８％減少した。
【００４９】
実験実施例３：ＭＢ４０１００の肺癌転移に対する予防作用
７．５％ＦＢＳ、ビタミン溶液、ピルビン酸ナトリウム、非必須アミノ酸およびＬ−グルタミンを含むイーグルスＭＥＭ培地中で、Ｃｏｌｏｎ ２６−Ｍ３．１細胞（高度転移性結腸癌細胞）を培養した。この癌細胞をＢＡＬＢ／ｃマウスに注射し、癌転移度を測定することにより、Ｃｏｌｏｎ ２６−Ｍ３．１細胞の肺癌転移実験を行った（非特許文献１２）。ＭＢ４０１００をＰＢＳに溶解して０．２μｍの滅菌濾紙で濾過し、種々の投与量（５００μｇ、１００μｇ、２０μｇおよび４μｇ）で各マウスに静脈注射した。注射から２日後、前記Ｃｏｌｏｎ ２６−Ｍ３．１細胞を注射（マウス１匹あたり細胞２．５×１０４個）し、癌転移に対する予防作用を評価した。注射から１４日後、マウスを屠殺してその肺をブアン液中に保存した。肺に転移した癌細胞数を計数した。図３に示す通り、静脈注射したＭＢ４０１００は、Ｃｏｌｏｎ ２６−Ｍ３．１の肺への転移を有意に阻害した。
【００５０】
実験実施例４：ＭＢ４０１００の肺癌転移に対する治療作用
７．５％ＦＢＳ、ビタミン溶液、ピルビン酸ナトリウム、非必須アミノ酸およびＬ−グルタミンを含むイーグルスＭＥＭ培地中で、Ｃｏｌｏｎ ２６−Ｍ３．１細胞（高度転移性結腸癌細胞）を培養した。この癌細胞をＣ５７ＢＬ／６マウスおよびＢＡＬＢ／ｃマウスにそれぞれ注射し、癌転移度を測定することにより、Ｃｏｌｏｎ ２６−Ｍ３．１細胞の肺癌転移実験を行った（非特許文献１２）。ＭＢ４０１００をＰＢＳに溶解して０．２μｍの滅菌濾紙で濾過し、種々の投与量で各マウスに静脈注射した。前記Ｃｏｌｏｎ ２６−Ｍ３．１細胞をマウスに注射（マウス１匹あたり細胞２．５×１０４個）し、転移癌の増殖を誘引した。注射から１日後および４日後、各々、５００μｇ、１００μｇおよび２０μｇのＭＢ４０１００をマウスに静脈注射し、癌転移に対する治療作用を測定した。癌細胞の注射から１４日後、マウスを屠殺してその肺を取り出し、ブアン液中に保存した。肺に転移した癌細胞数を顕微鏡を通じて計数した。図４に示す通り、静脈注射したＭＢ４０１００は、投与量に応じて、肺に転移したＣｏｌｏｎ ２６−Ｍ３．１細胞の増殖を有意に阻害した。
【００５１】
実験実施例５：ＭＢ４０１００により活性化された、癌細胞に対するＮＫ細胞介在細胞毒性の測定
ＭＢ４０１００により活性化された、癌細胞に対するＮＫ細胞介在細胞毒性の測定を、放射性同位元素５１Ｃｒの活性を測定することにより評価した（非特許文献１３）。５００μｇ、１００μｇ、２０μｇおよび４μｇのＭＢ４０１００を１群あたり２匹のＢＡＬＢ／ｃマウスにそれぞれ静脈注射した。注射から２日後、マウスの脾細胞を採取した。丸底９６穴プレート中の脾細胞を含む各溶液に、５１Ｃｒ−標識Ｙａｃ−１細胞を、各々エフェクター（脾細胞）：標的（Ｙａｃ−１）細胞比（Ｅ／Ｔ比）１００：１、５０：１、２５：１および１２．５：１で添加した。それらを５％ＣＯ２、３７℃の条件下で６時間培養した。培養後、プレートを１０分間遠心し、次いで各ウェルの上清を綿棒で吸収した。ガンマカウンターを用いて放射性同位元素の量を測定した。ＮＫ細胞により生じた細胞毒性を、下記式：
細胞毒性（％）＝（実験的放出−自然放出）／（最大放出−自然放出）×１００
により放射活性（カウント／分）として算出した。
【００５２】
図５からわかるように、ＭＢ４０１００を注射したマウスの脾細胞におけるＮＫ細胞の活性は、ＭＢ４０１００の濃度に依存して増加し、５００μｇ、１００μｇおよび２０μｇを投与した群では、対照群に比べ各々３〜１０倍に増加した。ＮＫ細胞の活性は通常、Ｅ／Ｔ比に応じて幾分変化するが、この実験実施例におけるＮＫ細胞の活性は、Ｅ／Ｔ比に関係なく有意に増加した。
【００５３】
実験実施例６：顆粒球マクロファージコロニー形成単位（ＧＭ−ＣＦＵ）の形成による造血機能の促進
３５ｍｍペトリ皿（２ｍｍグリッド付き、Ｎａｌｇｅｎ Ｎｕｎｃ製）に、１ｍｌあたり細胞１×１０５個の骨髄細胞を入れ、ＭｅｔｈｏＣｕｌｔ（カナダ国Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ社製）アガー１ｍｌを用いて、種々の濃度のＭＢ４０１００で処理し、インキュベーター中３７℃、５％ＣＯ２の条件下で７日間培養した。対照群にはＭＢ４０１００なしのアガーを用いた。７日間培養後、培養した３５ｍｍペトリ皿を２ｍｍグリッド付き６０ｍｍペトリ皿に乗せ、コロニー数を顕微鏡を通じて計数した。１０μｇ処理群ではコロニー数が１６８であり、対照群と差がなかったが、５０μｇおよび１００μｇ処理群では、対照群に比べ各々コロニー数が３６．６％および３２．５％増加した（図６を参照）。
【００５４】
実験実施例７：ＭＢ４０１００の、抗癌薬による造血抑制のレベルを低減させる作用
抗癌薬（シクロホスファミドなど）は一般に、生体内で免疫抑制薬として機能し、免疫系の細胞数を減少させる。これは抗癌薬の代表的な副作用である。本実施例においては、ＭＢ４０１００の同時投与（シクロホスファミド投与により起こる免疫抑制を低減させることを期待したもの）において免疫細胞数を測定した。
【００５５】
マウスに対しシクロホスファミド（２５０ｍｇ／ｋｇ）を投与し、その２４時間および４８時間後に異なる投与量（１０ｍｇ／ｋｇおよび２０ｍｇ／ｋｇ）のＭＢ４０１００を各々腹腔内投与した（ａｂｄｏｍｉｎａｌｌｙ ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ）。７日後、マウスを屠殺して骨髄細胞および脾細胞を取り出し、これらの細胞数をトリパンブルー排除法で計数した。
【００５６】
遠位眼球静脈（ｅｙｅｂａｌｌ ｄｉｓｔａｌ ｖｅｉｎ）からヘパリン処理ガラス毛細管を用いて末梢血を素早く収集し、Ｋ３−ＥＤＴＡ処理血液収集管（ｂｌｏｏｄ−ｇａｔｈｅｒｉｎｇ ｔｕｂｅ）に回収して、自動血球分析装置（ａｕｔｏｍａｔｉｃ ｇｌｏｂｕｌｅ ａｎａｌｙｚｅｒ）で試験した。
【００５７】
Ａ．シクロホスファミド投与後の白血球（ＷＢＣ）数の変化
自動血球分析装置で測定したところ、正常マウスの遠位眼球静脈から収集した血液中の白血球数は平均７８００であったが、シクロホスファミド投与マウスでは、白血球数は５３００（正常マウスに比べ約３０％減少）であった。一方、シクロホスファミド投与の２日後にＭＢ４０１００を１０ｍｇ／ｋｇおよび２０ｍｇ／ｋｇ投与したマウス群では、白血球数は各々６６００および６４００（シクロホスファミドのみを投与したマウスに比べ約１５％多い）であった。
【００５８】
更に、シクロホスファミド投与の１日後にＭＢ４０１００を投与したマウス群では、白血球数は対照群に比べ１２．１％多かったが、ＭＢ４０１００の濃度に応じた差はなかった。また、シクロホスファミド投与の前後、計２回のＭＢ４０１００投与を受けたマウス群では、白血球数は対照群に比べ約１５％多かった（図７を参照）。
【００５９】
Ｂ．末梢血中の血小板数の変化
シクロホスファミドのみを投与したマウスでは、血小板数は正常マウスに比べ約５６％少なかった。ＭＢ４０１００を投与すると、シクロホスファミドのみを投与したときに比べ血小板数は約６．６％増加し、回復効果を示した。また、ＭＢ４０１００投与がシクロホスファミド投与の前か後かによらず、増加は６〜７％であった（図８を参照）。
【００６０】
Ｃ．脾細胞数の変化
シクロホスファミドのみを投与したマウスでは、脾細胞数は正常マウスに比べ約７２．８％少なかった。一方、シクロホスファミド投与前にＭＢ４０１００を２０ｍｇ／ｋｇ投与すると、シクロホスファミドのみを投与したときに比べ脾細胞数は約２６．８％増加した。また、シクロホスファミド投与後にＭＢ４０１００を１０ｍｇ／ｋｇおよび２０ｍｇ／ｋｇ投与したマウス群では、各々、脾細胞数は約３３％および４３％増加した。以上の結果は、抗癌薬による免疫細胞の抑制を、ＭＢ４０１００が低減しうることをしめすものである（図９を参照）。
【００６１】
Ｄ．骨髄細胞数の変化
シクロホスファミド投与の７日後、屠殺したマウスの骨髄細胞数を計数した。正常マウスの骨髄細胞密度は１ｍｌあたり４１．１×１０６個であったが、シクロホスファミドを投与したマウスの骨髄細胞密度は１ｍｌあたり２９．６×１０６個であった（抗癌薬により２９．２％減少）。しかし、シクロホスファミド投与の２日前にＭＢ４０１００を１０ｍｇ／ｋｇおよび２０ｍｇ／ｋｇ投与したマウス群では、シクロホスファミド投与マウス群に比べ、細胞数が各々１７．１％および１８．１％多かった。また、シクロホスファミド投与後にＭＢ４０１００を２０ｍｇ／ｋｇ投与したマウス群では、細胞数が１０．７８％多かった（図１０を参照）。
【００６２】
実験実施例８：ＭＢ４０１００の、放射線照射に対する保護作用
癌治療においては、しばしば放射線照射療法を抗癌剤投与と併用するが、これは骨髄細胞を破壊し、正常免疫細胞の形成・複製に負の作用を有するので、造血および免疫の機能を低下させる。この実験では、ＭＢ４０１００の同時投与が、放射線照射処理に伴う造血および免疫の機能の低下を低減しうるか否かを試験した。
【００６３】
ＢＡＬＢ／ｃマウス（雄、体重１８〜２２ｇ）にＭＢ４０１００を腹腔内投与し、４８時間後、４．５Ｇｙ（半数致死量（ｓｅｍｉ−ｌｅｔｈａｌ ａｍｏｕｎｔ））のコバルト（６０Ｃｏ）γ線に曝露させた。照射から５日および９日後、いずれにおいても（ｉｒｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ）、マウスを屠殺して骨髄細胞および脾細胞を採取し、各々の細胞数をトリパンブルー排除法で計数した。対照群に対しては、ＭＢ４０１００に代えてＰＢＳを投与した。
【００６４】
Ａ．脾細胞数の変化
正常マウスに４．５Ｇｙ（半数致死照射量）のコバルト（６０Ｃｏ）γ線を照射し、その５日後には、脾細胞数は１ｍｌあたり１５．８×１０４個であり、これは正常マウスの脾細胞数のわずか３％であったが、９日後には１４．８％まで回復した。しかし、照射２日前に１０ｍｇ／ｋｇのＭＢ４０１００を投与したマウス群では、照射５日後の脾細胞数が７．６％であり、９日後には１８．２％まで回復した。
【００６５】
照射２日前に２０ｍｇ／ｋｇのＭＢ４０１００を投与したマウス群では、照射５日後の脾細胞数が４．６％（１０ｍｇ／ｋｇ投与群より少ない）であり、９日後にはそれ以上増えていなかった。また、照射１日後にＭＢ４０１００を投与したマウス群では、脾細胞数は増加していたが、ＭＢ４０１００の濃度に応じた差は見られなかった。照射の前や後にＭＢ４０１００を投与したマウス群では、ＭＢ４０１００を投与していないマウス群に比べ脾細胞数が増加していた（図１１を参照）。
【００６６】
Ｂ．骨髄細胞数の変化
照射５日後、マウスの左大腿部から骨髄細胞を回収したところ、細胞数は正常マウスの５．３％であった。照射９日後には、正常マウスの１１．８％まで増加した。しかし、照射の前や後にＭＢ４０１００を１０ｍｇ／ｋｇおよび２０ｍｇ／ｋｇ投与したマウス群では、未処理マウスに比べ、照射５日後に屠殺したマウスで６〜７％、照射９日後に屠殺したマウスで約１５．７％細胞数が多かった。よって、ＭＢ４０１００は、放射線照射マウスの骨髄細胞の保護を補佐し、造血機能を維持することが確認された（図１２を参照）。
【００６７】
実験実施例９：免疫細胞の活性化および抗癌性サイトカインの生成
Ｃ５７／ＢＬ６マウスにＭＢ４０１００を１０ｍｇ／ｋｇ腹腔内投与し、１時間ごとに脾細胞を採取した。免疫細胞に対し蛍光標識受容体を用いるＦＡＣＳ分析を行った。その結果、免疫性に関連する全ての細胞（ＮＫＴ細胞、ＮＫ細胞、樹状細胞、マクロファージ、ＣＤ４細胞、ＣＤ８細胞、Ｂ細胞など）が活性化され、ＭＢ４０１００投与後約１６時間後に活性化が最大となることが示された。
【００６８】
各免疫細胞から分泌されるサイトカインの量を測定するため、Ｃ５７／ＢＬ６マウスにＭＢ４０１００を１０ｍｇ／ｋｇ腹腔内投与し、１６時間後に脾細胞を採取した。各免疫細胞から分泌されるサイトカインの量を、各免疫細胞に対する蛍光標識受容体および抗サイトカイン抗体を用いて、細胞内染色法で測定した。その結果、ＭＢ４０１００を投与したマウス群では、ＮＫＴ細胞およびＴ細胞から分泌されるＴＮＦ−ａおよびＩＬ−３が増加し、マクロファージおよび樹状細胞から分泌されるＩＬ−１２およびＴＮＦ−ａも増加することが示された（図１４を参照）。
【００６９】
実験実施例１０：抗癌薬と同時投与したＭＢ４０１００の相乗効果（１）
Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、癌細胞株Ｂ１６−ＢＬ１６を皮内注射した（マウス１匹あたり細胞１×１０５個）。癌細胞注射の１日後から、０．２μｍのフィルターで濾過したＭＢ４０１００を、３日おきに４回静脈注射した（マウス１匹あたり１ｍｇおよび２００μｇ）。抗癌薬シスプラチンを静脈注射した（各々マウス１匹あたり１００μｇ、５０μｇおよび２０μｇ）。マウスを、抗癌薬のみ投与したものと、ＭＢ４０１００を抗癌薬と同時に投与したものの２群に分け、癌の大きさおよび重さを測定した。その結果、同時投与群のマウスでは、癌細胞の増殖が約４３％抑制されることが示された。即ち、ＭＢ４０１００をシスプラチンと同時に投与したマウス群では、マウスは活発に動き、正常マウスの体重に回復した。これに対し、５０μｇのシスプラチンのみ投与したマウス群では、重篤な副作用（体重低下、運動減少など）が観測された。この結果、ＭＢ４０１００は、造血系の刺激および免疫反応の活性化に関与すると考えられる（図１５および１６を参照）。
【００７０】
実験実施例１１：抗癌薬と同時投与したＭＢ４０１００の相乗効果（２）
実験対象として胸腺欠損ヌードマウスを用いた。抗癌薬（タキソール）を投与したマウス群、ＭＢ４０１００を投与したマウス群並びにタキソールおよびＭＢ４０１００を同時投与したマウス群において、癌の大きさを測定した。マウスの状態と毒性を考慮し、タキソールは、癌注射の６日後から、３日おきに７回投与した（１２．５ｍｇ／ｋｇ）。ＭＢ４０１００は、癌注射の２日前に１回、癌注射の後は３日おきに（タキソール投与の日とは重複しない）腹腔内投与した（１０ｍｇ／ｋｇ）。使用した細胞株はＰＣ−３であり、マウス１匹あたり細胞２×１０６個を皮下注射した。
【００７１】
癌注射の１４〜３１日後に、癌の大きさを測定した。タキソールおよびＭＢ４０１００を同時投与した群における癌の大きさは、タキソールのみを投与した群における癌の大きさよりも小さかった。このことは、ＭＢ４０１００と抗癌薬の同時投与は、固形癌の抑制に関して相乗効果を有することを示している。
【００７２】
実験実施例１２：錠剤の調製
【００７３】
【表１】
【００７４】
上記処方箋の成分を均一に混合し、次いで打錠機で、１錠あたり５００ｍｇの錠剤となるように圧縮した。
【００７５】
実験実施例１３：散剤の調製
【００７６】
【表２】
【００７７】
上記処方箋の成分を均一に混合し、次いで組み立て装置（ａｓｓｅｍｂｌｙ ｍａｃｈｉｎｅ）で、１カプセルあたり５００ｍｇとなるようにカプセルに充填した。
【産業上の利用可能性】
【００７８】
パナックス属に属する植物の葉および／または茎から抽出される、本発明による抽出物または多糖は、癌転移に対して抑制作用を示し、そのため癌治療薬、癌転移の予防および治療薬、並びに抗癌薬および放射線照射治療用の補助薬として使用できる。
【００７９】
従って、前記抽出物または多糖画分を含む組成物は、免疫系（ＮＫＴ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、Ｔ細胞、Ｂ細胞などを含む）を全体的に活性化し、また抗癌関連サイトカインの分泌を促進する作用を有するので、癌細胞の増殖および転移を有意に抑制するので、前記組成物は、抗癌および抗癌転移薬として、また一般的な抗癌薬または放射線照射治療の補助薬（それらの副作用、例えば白血球数の減少を低減させることによる）として使用できる。
【００８０】
本発明は、その精神および必須の特徴から逸脱することなくいくつかの態様をとりうるので、上記の実施例は、特に指定のない限り、先行する記載の詳細により一切限定されると理解すべきものではなく、むしろ添付の請求の範囲に定義されるその精神および範囲内において広く解釈すべきものであり、従って、請求の範囲内にふくまれるあらゆる変更および修飾、またはそのような範囲の等価物は、添付の請求の範囲に含まれるものとする。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
パナックス属に属する植物の葉および／または茎から得られる抽出物を活性成分として含む抗癌薬またはその補助薬用の組成物。
【請求項２】
前記パナックス属に属する植物は、Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ、Ｐａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｍ、Ｐａｎａｘ ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ、Ｐａｎａｘ ｐｓｅｕｄｏｇｉｎｓｅｎｇ、Ｐａｎａｘ ｊａｐｏｎｉｃｕｍおよびＰａｎａｘ ｖｉｅｔｎａｍｅｎｓｉｓよりなる群から選択される１種以上であることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記抽出物は、多糖を含むことを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記抽出物は、前記葉および／または茎を水中で加熱すること（水熱処理）により得られることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記多糖は、中性糖、ウロン酸および／またはタンパク質を含む糖タンパクからなることを特徴とする請求項３に記載の組成物。
【請求項６】
前記多糖は、ＫＤＯを含むことを特徴とする請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
前記多糖の糖組成は、ラムノース、フコース、アラビノース、キシロース、マンノース、グルコース、ガラクトース、ガラクツロン酸、グルクロン酸、ＫＤＯおよびＤＨＡを含むことを特徴とする請求項５に記載の組成物。
【請求項８】
癌細胞の増殖および転移を抑制する作用を有することを特徴とする請求項１〜７のいずれかに記載の組成物。
【請求項９】
上皮由来または非上皮由来の固形癌に対して治療および／または予防作用を有することを特徴とする請求項１〜７のいずれかに記載の組成物。
【請求項１０】
癌に対して治療および／または予防作用を有することを特徴とする請求項１〜７のいずれかに記載の組成物。
【請求項１１】
造血促進、骨髄保護、免疫促進、放射線照射治療補助、抗ウィルスおよび抗菌活性のうち少なくとも１つを有することを特徴とする請求項１〜７のいずれかに記載の組成物。
【請求項１２】
造血促進活性を有することを特徴とする請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
白血球および血小板の減少を含む、一般的な抗癌薬の副作用を低減する活性を有することを特徴とする請求項１１に記載の組成物。
【請求項１４】
骨髄および脾臓を放射線照射から保護する活性を有することを特徴とする請求項１１に記載の組成物。
【請求項１５】
ＮＫＴ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、Ｔ細胞およびＢ細胞を含む免疫系の活性を促進する活性を有することを特徴とする請求項１１に記載の組成物。
【請求項１６】
ＮＫＴ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、Ｔ細胞およびＢ細胞を活性化し、抗癌物質である腫瘍壊死因子、γ−インターフェロンおよびインターロイキン１を分泌させて抗癌、抗菌および／または抗ウィルス活性を示すことを特徴とする請求項１１に記載の組成物。
【請求項１７】
抗癌薬および／またはその補助薬を更に含むことを特徴とする請求項１〜７のいずれかに記載の組成物。
【請求項１８】
前記抗癌薬は、タキソール、シスプラチンまたはシクロホスファミド、或いはそれらのうち２種以上であることを特徴とする請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
担体または賦形剤を更に含むことを特徴とする請求項１〜７および１７のいずれかに記載の組成物。
【請求項２０】
前記担体または賦形剤は、薬学的に許容される、飲料または食物の形態のものであることを特徴とする請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
活性成分としての請求項１〜７のいずれかの組成物、および薬学的に許容される担体または賦形剤を含む、造血促進、骨髄保護、免疫促進、抗癌薬補助薬、放射線照射治療補助、ウィルスおよび微生物病原体に対する保護、癌予防および癌治療を目的とする医薬組成物。
【請求項２２】
制酸薬を更に含むことを特徴とする請求項２１に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
単回または複数回投与用の、錠剤、散剤、硬または軟カプセル剤、分散液、注射液、乳液および非経口投与形態よりなる群から選ばれる形態であることを特徴とする請求項２２に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
前記活性成分の投与量は、成人の平均体重を基準として１日あたり０．１〜６，０００ｍｇであることを特徴とする請求項２１〜２３のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項２５】
パナックス属に属する植物（以降「人参」と称する）の葉および／または茎から抽出物を調製する方法であって、
ａ）人参の葉および／または茎を水中で加熱（水熱処理）して、粗抽出溶液を得る工程；
ｂ）任意に、前記粗抽出溶液を濃縮する工程；
ｃ）前記粗抽出溶液に含まれる多糖を有機溶媒を用いて沈殿させ、前記多糖を分離する工程；および
ｄ）前記有機溶媒を除去して多糖画分を得る工程
を含む抽出物を調製する方法。
【請求項２６】
前記工程ｃ）およびｄ）の前に、先行する工程で得られた生成物をアニオン交換クロマトグラフィーにより精製し、透析する工程を更に含むことを特徴とする請求項２５に記載の抽出物を調製する方法。
【請求項２７】
前記水熱処理を、５０〜１８０℃で０．５〜２０時間行うことを特徴とする請求項２５に記載の抽出物を調製する方法。
【請求項２８】
前記有機溶媒は、アルコールまたはアセトンであることを特徴とする請求項２５に記載の抽出物を調製する方法。
【請求項２９】
前記アルコールは、エタノール、メタノール、イソプロピルアルコールまたはプロパノールであることを特徴とする請求項２８に記載の抽出物を調製する方法。
【請求項３０】
請求項２５〜２９のいずれかの抽出物を調製する方法により得られる抽出物を含む組成物であって、中性糖の含有量は３０〜８０％、ウロン酸の含有量は１０〜６０％、タンパク質の含有量は０．０１〜１０％であることを特徴とする組成物。
【請求項３１】
前記抽出物は、タンパク質を含まないことを特徴とする請求項３０に記載の組成物。
【請求項３２】
前記抽出物は、パナックス属に属する植物の葉および／または茎の多糖を含み、前記多糖の分子量は、６，０００〜３４０，０００Ｄａであることを特徴とする請求項３０に記載の組成物。
【請求項３３】
前記多糖の糖組成は、ラムノース、フコース、アラビノース、キシロース、マンノース、グルコース、ガラクトース、ガラクツロン酸、グルクロン酸、ＫＤＯおよびＤＨＡを含むことを特徴とする請求項３０〜３２のいずれかに記載の組成物。
【請求項１】
パナックス属に属する植物の葉および／または茎から得られる抽出物を活性成分として含む抗癌薬またはその補助薬用の組成物。
【請求項２】
前記パナックス属に属する植物は、Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ、Ｐａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｍ、Ｐａｎａｘ ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ、Ｐａｎａｘ ｐｓｅｕｄｏｇｉｎｓｅｎｇ、Ｐａｎａｘ ｊａｐｏｎｉｃｕｍおよびＰａｎａｘ ｖｉｅｔｎａｍｅｎｓｉｓよりなる群から選択される１種以上であることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記抽出物は、多糖を含むことを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記抽出物は、前記葉および／または茎を水中で加熱すること（水熱処理）により得られることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記多糖は、中性糖、ウロン酸および／またはタンパク質を含む糖タンパクからなることを特徴とする請求項３に記載の組成物。
【請求項６】
前記多糖は、ＫＤＯを含むことを特徴とする請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
前記多糖の糖組成は、ラムノース、フコース、アラビノース、キシロース、マンノース、グルコース、ガラクトース、ガラクツロン酸、グルクロン酸、ＫＤＯおよびＤＨＡを含むことを特徴とする請求項５に記載の組成物。
【請求項８】
癌細胞の増殖および転移を抑制する作用を有することを特徴とする請求項１〜７のいずれかに記載の組成物。
【請求項９】
上皮由来または非上皮由来の固形癌に対して治療および／または予防作用を有することを特徴とする請求項１〜７のいずれかに記載の組成物。
【請求項１０】
癌に対して治療および／または予防作用を有することを特徴とする請求項１〜７のいずれかに記載の組成物。
【請求項１１】
造血促進、骨髄保護、免疫促進、放射線照射治療補助、抗ウィルスおよび抗菌活性のうち少なくとも１つを有することを特徴とする請求項１〜７のいずれかに記載の組成物。
【請求項１２】
造血促進活性を有することを特徴とする請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
白血球および血小板の減少を含む、一般的な抗癌薬の副作用を低減する活性を有することを特徴とする請求項１１に記載の組成物。
【請求項１４】
骨髄および脾臓を放射線照射から保護する活性を有することを特徴とする請求項１１に記載の組成物。
【請求項１５】
ＮＫＴ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、Ｔ細胞およびＢ細胞を含む免疫系の活性を促進する活性を有することを特徴とする請求項１１に記載の組成物。
【請求項１６】
ＮＫＴ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、Ｔ細胞およびＢ細胞を活性化し、抗癌物質である腫瘍壊死因子、γ−インターフェロンおよびインターロイキン１を分泌させて抗癌、抗菌および／または抗ウィルス活性を示すことを特徴とする請求項１１に記載の組成物。
【請求項１７】
抗癌薬および／またはその補助薬を更に含むことを特徴とする請求項１〜７のいずれかに記載の組成物。
【請求項１８】
前記抗癌薬は、タキソール、シスプラチンまたはシクロホスファミド、或いはそれらのうち２種以上であることを特徴とする請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
担体または賦形剤を更に含むことを特徴とする請求項１〜７および１７のいずれかに記載の組成物。
【請求項２０】
前記担体または賦形剤は、薬学的に許容される、飲料または食物の形態のものであることを特徴とする請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
活性成分としての請求項１〜７のいずれかの組成物、および薬学的に許容される担体または賦形剤を含む、造血促進、骨髄保護、免疫促進、抗癌薬補助薬、放射線照射治療補助、ウィルスおよび微生物病原体に対する保護、癌予防および癌治療を目的とする医薬組成物。
【請求項２２】
制酸薬を更に含むことを特徴とする請求項２１に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
単回または複数回投与用の、錠剤、散剤、硬または軟カプセル剤、分散液、注射液、乳液および非経口投与形態よりなる群から選ばれる形態であることを特徴とする請求項２２に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
前記活性成分の投与量は、成人の平均体重を基準として１日あたり０．１〜６，０００ｍｇであることを特徴とする請求項２１〜２３のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項２５】
パナックス属に属する植物（以降「人参」と称する）の葉および／または茎から抽出物を調製する方法であって、
ａ）人参の葉および／または茎を水中で加熱（水熱処理）して、粗抽出溶液を得る工程；
ｂ）任意に、前記粗抽出溶液を濃縮する工程；
ｃ）前記粗抽出溶液に含まれる多糖を有機溶媒を用いて沈殿させ、前記多糖を分離する工程；および
ｄ）前記有機溶媒を除去して多糖画分を得る工程
を含む抽出物を調製する方法。
【請求項２６】
前記工程ｃ）およびｄ）の前に、先行する工程で得られた生成物をアニオン交換クロマトグラフィーにより精製し、透析する工程を更に含むことを特徴とする請求項２５に記載の抽出物を調製する方法。
【請求項２７】
前記水熱処理を、５０〜１８０℃で０．５〜２０時間行うことを特徴とする請求項２５に記載の抽出物を調製する方法。
【請求項２８】
前記有機溶媒は、アルコールまたはアセトンであることを特徴とする請求項２５に記載の抽出物を調製する方法。
【請求項２９】
前記アルコールは、エタノール、メタノール、イソプロピルアルコールまたはプロパノールであることを特徴とする請求項２８に記載の抽出物を調製する方法。
【請求項３０】
請求項２５〜２９のいずれかの抽出物を調製する方法により得られる抽出物を含む組成物であって、中性糖の含有量は３０〜８０％、ウロン酸の含有量は１０〜６０％、タンパク質の含有量は０．０１〜１０％であることを特徴とする組成物。
【請求項３１】
前記抽出物は、タンパク質を含まないことを特徴とする請求項３０に記載の組成物。
【請求項３２】
前記抽出物は、パナックス属に属する植物の葉および／または茎の多糖を含み、前記多糖の分子量は、６，０００〜３４０，０００Ｄａであることを特徴とする請求項３０に記載の組成物。
【請求項３３】
前記多糖の糖組成は、ラムノース、フコース、アラビノース、キシロース、マンノース、グルコース、ガラクトース、ガラクツロン酸、グルクロン酸、ＫＤＯおよびＤＨＡを含むことを特徴とする請求項３０〜３２のいずれかに記載の組成物。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３−ａ】
【図１３−ｂ】
【図１３−ｃ】
【図１３−ｄ】
【図１４−ａ】
【図１４−ｂ】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３−ａ】
【図１３−ｂ】
【図１３−ｃ】
【図１３−ｄ】
【図１４−ａ】
【図１４−ｂ】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【公開番号】特開２０１１−９３９２８（Ｐ２０１１−９３９２８Ａ）
【公開日】平成２３年５月１２日（２０１１．５．１２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−１６３２（Ｐ２０１１−１６３２）
【出願日】平成２３年１月７日（２０１１．１．７）
【分割の表示】特願２００４−５０６８３２（Ｐ２００４−５０６８３２）の分割
【原出願日】平成１５年５月２８日（２００３．５．２８）
【出願人】（５０４４３５４１６）エムディー バイオアルファ カンパニー リミテッド (6)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２３年５月１２日（２０１１．５．１２）
【国際特許分類】
【出願日】平成２３年１月７日（２０１１．１．７）
【分割の表示】特願２００４−５０６８３２（Ｐ２００４−５０６８３２）の分割
【原出願日】平成１５年５月２８日（２００３．５．２８）
【出願人】（５０４４３５４１６）エムディー バイオアルファ カンパニー リミテッド (6)
【Ｆターム（参考）】
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