本発明は、安定化Ｆｃ領域を有する、抗体等のＦｃ含有ポリペプチドを産生する方法を提供する。本発明はまた、これらの方法に従って産生される安定化Ｆｃポリペプチド、ならびに、かかる抗体を治療薬として使用する方法を提供する。一実施形態において、キメラＦｃ領域を含む安定化ポリペプチドが提供され、上記安定化ポリペプチドは、ＩｇＧ４イソタイプのＩｇＧ抗体からの少なくとも１つのＣＨ２ドメインと、ＩｇＧ１イソタイプのＩｇＧ抗体からの少なくとも１つのＣＨ３ドメインとを含み、上記安定化ポリペプチドは、２９７、２９９、３０７、３０９、３９９、４０９、および４２７（ＥＵ付番慣例）からなる群から選択される１つまたはそれ以上のアミノ酸位置に１つまたはそれ以上の安定化Ｆｃアミノ酸を含む。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
キメラＦｃ領域を含む安定化ポリペプチドであって、前記安定化ポリペプチドは、ＩｇＧ４イソタイプのＩｇＧ抗体からの少なくとも１つのＣＨ２ドメインと、ＩｇＧ１イソタイプのＩｇＧ抗体からの少なくとも１つのＣＨ３ドメインとを含み、前記安定化ポリペプチドは、２９７、２９９、３０７、３０９、３９９、４０９、および４２７（ＥＵ付番慣例）からなる群から選択される１つまたはそれ以上のアミノ酸位置に１つまたはそれ以上の安定化Ｆｃアミノ酸を含む、安定化ポリペプチド。
【請求項２】
前記キメラＦｃ領域は、ヒンジと、前記ＩｇＧ４イソタイプのＩｇＧ抗体からのＣＨ１およびＣＨ２ドメインと、前記ＩｇＧ１イソタイプのＩｇＧ抗体からのＣＨ３ドメインとを含み、前記抗体は、ＥＵ付番のアミノ酸位置２２８にプロリンを含む、請求項１に記載の安定化ポリペプチド。
【請求項３】
ＩｇＧ４抗体のＦｃ領域からのＣＨ２部分を含む安定化ポリペプチドであって、２４０Ｆ、２６２Ｌ、２６４Ｔ、２６６Ｆ、２９７Ｑ、２９９Ａ、２９９Ｋ、３０７Ｐ、３０９Ｋ、３０９Ｍ、３０９Ｐ、３２３Ｆ、３９９Ｓ、および４２７Ｆ（ＥＵ付番慣例）からなる群から選択される１つまたはそれ以上のアミノ酸位置に、１つまたはそれ以上の安定化アミノ酸を含む、安定化ポリペプチド。
【請求項４】
アミノ酸位置２９７にＧｌｎを含む、請求項３に記載の安定化ポリペプチド。
【請求項５】
ＩｇＧ１抗体のＦｃ領域からのＣＨ２部分を含む安定化ポリペプチドであって、２９９Ｋおよび２９７Ｄ（ＥＵ付番慣例）からなる群から選択される１つまたはそれ以上のアミノ酸位置に、１つまたはそれ以上の安定化アミノ酸を含む、安定化ポリペプチド。
【請求項６】
アミノ酸位置２９９にＬｙｓを含む、請求項４に記載の安定化ポリペプチド。
【請求項７】
アミノ酸位置２９９にＬｙｓ、およびアミノ酸位置２９７にＡｓｐを含む、請求項５に記載の安定化ポリペプチド。
【請求項８】
前記Ｆｃ領域は、非グリコシル化されたＦｃ領域である、請求項４に記載の安定化ポリペプチド。
【請求項９】
ＩｇＧ抗体は、ヒト抗体である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の安定化ポリペプチド。
【請求項１０】
前記安定化ポリペプチドの融解温度（Ｔｍ）は、前記安定化アミノ酸を欠く親ポリペプチドと比較して、少なくとも１℃向上される、請求項１〜９のいずれか１項に記載の安定化ポリペプチド。
【請求項１１】
前記安定化Ｆｃポリペプチドの融解温度（Ｔｍ）は、約１℃以上、約２℃以上、約３℃以上、約４℃以上、約５℃以上、約６℃以上、約７℃以上、約８℃以上、約９℃以上、約１０℃以上、約１５℃以上、および約２０℃以上向上される、請求項１０に記載の安定化ポリペプチド。
【請求項１２】
前記融解温度（Ｔｍ）は、中性ｐＨ（約６．５〜約７．５）で向上される、請求項１０に記載の安定化ポリペプチド。
【請求項１３】
前記融解温度（Ｔｍ）は、約６．５以下、約６．０以下、約５．５以下、約５．０以下、約４．５以下、約４．０以下の酸性ｐＨで向上される、請求項１０に記載の安定化ポリペプチド。
【請求項１４】
前記安定化ポリペプチドは、安定化変異を欠く親ポリペプチドと比較して、高収率で発現する、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の安定化ポリペプチド。
【請求項１５】
前記安定化Ｆｃポリペプチドは、約５ｍｇ／Ｌ以上、約１０ｍｇ／Ｌ以上、約１５ｍｇ／Ｌ以上、約２０ｍｇ／Ｌ以上の収率で、細胞培養において発現する、請求項１４に記載の安定化ポリペプチド。
【請求項１６】
前記安定化ポリペプチドの濁度は、前記安定化アミノ酸を欠く親ポリペプチドと比較して低下する、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の安定化ポリペプチド。
【請求項１７】
前記濁度は、約１倍以上、約２倍以上、約３倍以上、約４倍以上、約５倍以上、約６倍以上、約７倍以上、約８倍以上、約９倍以上、約１０倍以上、約１５倍以上、約５０倍以上、および約１００倍以上からなる群から選択される倍数で低下する、請求項１６に記載の安定化ポリペプチド。
【請求項１８】
前記安定化ポリペプチドは、前記安定化変異を欠く親Ｆｃポリペプチドと比較して、低下したエフェクタ機能を有する、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の安定化ポリペプチド。
【請求項１９】
前記低下したエフェクタ機能は、低下したＡＤＣＣ活性である、請求項１８に記載の安定化ポリペプチド。
【請求項２０】
前記低下したエフェクタ機能は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、およびＦｃγＲＩＩＩからなる群から選択されるＦｃ受容体（ＦｃＲ）への低下した結合である、請求項１８に記載の安定化ポリペプチド。
【請求項２１】
前記エフェクタ機能は、約１倍以上、約２倍以上、約３倍以上、約４倍以上、約５倍以上、約６倍以上、約７倍以上、約８倍以上、約９倍以上、約１０倍以上、約１５倍以上、約５０倍以上、および約１００倍以上からなる群から選択される倍数で低下する、請求項１８に記載の安定化ポリペプチド。
【請求項２２】
前記安定化ポリペプチドは、親Ｆｃポリペプチドと比較して、向上した半減期を有する、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の安定化ポリペプチド。
【請求項２３】
前記向上した半減期は、新生児受容体（ＦｃＲｎ）への結合の向上によるものである、請求項２２に記載の安定化ポリペプチド。
【請求項２４】
前記半減期は、約１倍以上、約２倍以上、約３倍以上、約４倍以上、約５倍以上、約６倍以上、約７倍以上、約８倍以上、約９倍以上、約１０倍以上、約１５倍以上、約５０倍以上、および約１００倍以上からなる群から選択される倍数で向上する、請求項２２に記載の安定化ポリペプチド。
【請求項２５】
前記Ｆｃ領域は、２つのポリペプチド鎖を含む二量体Ｆｃ領域である、請求項１〜２４のいずれか１項に記載の安定化ポリペプチド。
【請求項２６】
前記Ｆｃ領域は、一本鎖Ｆｃ領域である、請求項１〜２４のいずれか１項に記載の安定化ポリペプチド。
【請求項２７】
前記Ｆｃ領域の全てのＦｃ部分は、非グリコシル化される、請求項１〜２６のいずれか１項に記載の安定化ポリペプチド。
【請求項２８】
前記非グリコシル化されたＦｃ領域は、前記Ｆｃ領域の位置２９９（ＥＵ付番慣例）に置換を含む、請求項７に記載の安定化ポリペプチド。
【請求項２９】
前記非グリコシル化されたＦｃ領域は、細菌性宿主細胞におけるその産生の結果として、非グリコシル化される、請求項７に記載の安定化ポリペプチド。
【請求項３０】
前記非グリコシル化されたＦｃ領域は、化学的または酵素的手段による脱グリコシル化の結果として、非グリコシル化される、請求項７に記載の安定化ポリペプチド。
【請求項３１】
前記非グリコシル化されたＦｃ領域は、キメラヒンジドメインを含む、請求項７に記載の安定化ポリペプチド。
【請求項３２】
前記キメラヒンジドメインは、アミノ酸位置２２８（ＥＵ付番慣例）の、プロリン残基による置換を含む、請求項３１に記載の安定化ポリペプチド。
【請求項３３】
前記安定化アミノ酸は、独立して、（ｉ）位置２９７の非荷電アミノ酸、ｉｉ）位置２９９の正電荷を持つアミノ酸、（ｉｉｉ）位置３０７の極性のアミノ酸、（ｉｖ）位置３０９の正電荷を持つもしくは極性のアミノ酸、（ｖ）位置３９９の極性のアミノ酸、（ｖｉ）位置４０９の正電荷を持つもしくは極性のアミノ酸、および（ｖｉｉ）位置４２７の極性アミノ酸からなる群から選択される、請求項１に記載の安定化ポリペプチド。
【請求項３４】
少なくとも１つの安定化アミノ酸は、アミノ酸位置２９７（ＥＵ付番）のＧｌｎである、請求項１に記載の安定化ポリペプチド。
【請求項３５】
前記安定化アミノ酸のうちの少なくとも１つは、位置２９９のリシン（Ｋ）またはチロシン（Ｙ）である、請求項１〜３４のいずれか１項に記載の安定化ポリペプチド。
【請求項３６】
前記安定化アミノ酸のうちの少なくとも１つは、位置３０７のプロリン（Ｐ）またはメチオニン（Ｍ）である、請求項１〜３５のいずれか１項に記載の安定化ポリペプチド。
【請求項３７】
前記安定化アミノ酸のうちの少なくとも１つは、位置３０９のプロリン（Ｐ）、メチオニン（Ｍ）、またはリシン（Ｋ）である、請求項１〜３６のいずれか１項に記載の安定化ポリペプチド。
【請求項３８】
前記安定化変異のうちの少なくとも１つは、位置３９９のセリン（Ｓ）である、請求項１〜３７のいずれか１項に記載の安定化ポリペプチド。
【請求項３９】
前記Ｆｃ領域は、結合部位と機能的に結合する、請求項１〜３８のいずれか１項に記載の安定化ポリペプチド。
【請求項４０】
前記結合部位は、抗原結合部位、受容体のリガンド結合部分、またはリガンドの受容体結合部分から選択される、請求項３９に記載の安定化ポリペプチド。
【請求項４１】
前記結合部位は、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、ミニボディ、ジアボディ、トリアボディ、ナノボディ、カメリド抗体、およびＤａｂからなる群から選択される修飾抗体に由来する、請求項３９に記載の安定化ポリペプチド。
【請求項４２】
安定化完全長抗体である、請求項３９に記載の安定化ポリペプチド。
【請求項４３】
前記抗体は、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト抗体、およびヒト化抗体からなる群から選択される、請求項３９に記載の安定化ポリペプチド。
【請求項４４】
前記安定化完全長抗体は、従来の、または安定化ｓｃＦｖ分子に融合される、請求項３９に記載の安定化ポリペプチド。
【請求項４５】
安定化イムノアドヘシンである、請求項３９に記載の安定化ポリペプチド。
【請求項４６】
結合部位は、前記安定化ポリペプチドの前記Ｆｃ領域の表面上に重ねられる、請求項３９に記載の安定化ポリペプチド。
【請求項４７】
前記結合部位は、非免疫グロブリン結合分子に由来する、請求項３９に記載の安定化ポリペプチド。
【請求項４８】
前記非免疫グロブリン結合分子は、アドネクチン、アフィボディ、ＤＡＲＰｉｎ、およびアンチカリンからなる群から選択される、請求項４７に記載の安定化ポリペプチド。
【請求項４９】
受容体の前記リガンド結合部分は、免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーの受容体、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーの受容体、Ｇタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）スーパーファミリーの受容体、チロシンキナーゼ（ＴＫ）受容体スーパーファミリーの受容体、リガンド依存性（ＬＧ）スーパーファミリーの受容体、ケモカイン受容体スーパーファミリーの受容体、ＩＬ−１／トール様受容体（ＴＬＲ）スーパーファミリー、グリアのグリア由来の神経栄養因子（ＧＤＮＦ）受容体ファミリーの受容体、およびサイトカイン受容体スーパーファミリーからなる群から選択される受容体に由来する、請求項４０に記載の安定化ポリペプチド。
【請求項５０】
前記リガンドの受容体結合部分は、阻害性リガンドに由来する、請求項４０に記載の安定化ポリペプチド。
【請求項５１】
前記リガンドの受容体結合部分は、活性化リガンドに由来する、請求項４０に記載の安定化ポリペプチド。
【請求項５２】
前記リガンドは、免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーの受容体、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーの受容体、Ｇタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）スーパーファミリーの受容体、チロシンキナーゼ（ＴＫ）受容体スーパーファミリーの受容体、リガンド依存性（ＬＧ）スーパーファミリーの受容体、ケモカイン受容体スーパーファミリーの受容体、ＩＬ−１／トール様受容体（ＴＬＲ）スーパーファミリー、およびサイトカイン受容体スーパーファミリーからなる群から選択される受容体に結合する、請求項５０または５１に記載の結合ポリペプチド。
【請求項５３】
請求項１〜５２のいずれか１項に記載の安定化ポリペプチドと、薬学的に許容される担体と、を含む組成物。
【請求項５４】
請求項１〜５３のいずれか１項に記載の安定化結合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む、核酸分子。
【請求項５５】
請求項２５に記載の安定化結合ポリペプチドのポリペプチド鎖をコードするヌクレオチド配列を含む、核酸分子。
【請求項５６】
請求項５４または５５に記載の核酸分子を含む、ベクター。
【請求項５７】
請求項５６に記載のベクターを発現する、宿主細胞。
【請求項５８】
本発明の安定化Ｆｃポリペプチドを産生する方法であって、前記安定化Ｆｃポリペプチドが産生されるように、培養培地中で請求項５７に記載の宿主細胞を培養することを含む、方法。
【請求項５８】
非グリコシル化された、キメラＦｃ領域、もしくはその一部を含む親Ｆｃポリペプチドを安定化するための方法であって、前記Ｆｃ領域の少なくとも１つのＦｃ部分の選ばれたアミノ酸を安定化アミノ酸で置換し、前記出発ポリペプチドと比較して、安定性を向上させた安定化Ｆｃポリペプチドを産生することを含み、前記置換は、２９７、２９９、３０７、３０９、３９９、４０９、および４２７（ＥＵ付番慣例）からなる群から選択される前記Ｆｃ部分のアミノ酸位置でなされる、方法。
【請求項５９】
前記キメラＦｃ領域は、前記ＩｇＧ４イソタイプのＩｇＧ抗体からのＣＨ２ドメインと、前記ＩｇＧ１イソタイプのＩｇＧ抗体からのＣＨ３ドメインとを含む、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
前記安定化Ｆｃポリペプチド中に存在するアミノ酸位置およびアミノ酸は、２９７Ｑ、２９９Ａ、２９９Ｋ、３０７Ｐ、３０９Ｋ、３０９Ｍ、３０９Ｐ、３２３Ｆ、３９９Ｅ、３９９Ｓ、４０９Ｋ、４０９Ｍ、および４２７Ｆからなる群から選択される、請求項５８に記載の方法。
【請求項６１】
前記安定化Ｆｃポリペプチドは、位置２９７（ＥＵ付番）にＧｌｎを含む、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
安定化Ｆｃ領域を含むポリペプチドの大規模な製造のための方法であって、
（ａ）少なくとも１つの安定化Ｆｃ部分をポリペプチドに遺伝的に融合し、安定化融合タンパク質を形成することと、
（ｂ）哺乳類宿主細胞に前記安定化融合タンパク質をコードする核酸分子をトランスフェクトすることと、
（ｃ）前記安定化融合タンパク質が発現されるような条件下で、１０Ｌ以上の培養培地中でステップ（ｆ）の前記宿主細胞を培養し、それによって、安定化融合タンパク質を産生することと、を含む、方法。
【請求項６３】
前記安定化Ｆｃ領域は、前記ＩｇＧ４イソタイプのＩｇＧ抗体からのＣＨ２ドメインと、前記ＩｇＧ１イソタイプのＩｇＧ抗体からのＣＨ３ドメインと、を含むキメラＦｃである、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
前記安定化Ｆｃ領域は、アミノ酸位置２９７（ＥＵ付番）にＧｌｎを含む、請求項６２に記載の方法。
【請求項６５】
対象における疾患または障害を治療または予防するための方法であって、前記疾患または障害を患う対象に、請求項５３に記載の組成物を投与し、それによって、疾患または障害を治療または予防することを含む、方法。
【請求項６６】
前記疾患または障害は、炎症性障害、神経系障害、自己免疫障害、および腫瘍性障害からなる群から選択される、請求項６５に記載の方法。

【図２Ａ】

【図７Ａ】

【図７Ｂ】

【図８】

【図１】

【図２Ｂ】

【図２Ｃ】

【図２Ｄ】

【図３Ａ】

【図３Ｂ】

【図４】

【図５】

【図６Ａ】

【図６Ｂ】

【図９】

【図１０Ａ】

【図１０Ｂ】

【図１０Ｃ】

【図１１Ａ】

【図１１Ｂ】

【図１１Ｃ】

【図１１Ｄ】

【図１１Ｅ】

【図１１Ｆ】

【図１１Ｇ】

【図１１Ｈ】

【図１２Ａ】

【図１２Ｂ】

【公表番号】特表２０１２−５１５５５６（Ｐ２０１２−５１５５５６Ａ）
【公表日】平成２４年７月１２日（２０１２．７．１２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５４８１４８（Ｐ２０１１−５４８１４８）
【出願日】平成２２年１月２２日（２０１０．１．２２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０２１８５３
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０８５６８２
【国際公開日】平成２２年７月２９日（２０１０．７．２９）
【出願人】（５９２２２１５２８）バイオジェン・アイデック・エムエイ・インコーポレイテッド (224)
【Ｆターム（参考）】