低粘度のタンパク質製剤およびその用途
タンパク質製剤およびタンパク質製剤の粘度を低下させる方法を提供する。タンパク質製剤の粘度を低下させる方法は、塩化カルシウムまたは塩化マグネシウムなどの粘度低下剤をタンパク質製剤に添加することを含む。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この分野は、タンパク質製剤、より詳細には、粘度の低下したタンパク質製剤に関する。
【０００２】
本出願は、本明細書に全体を参考として援用した２００５年１２月２１日出願の米国仮出願第６０／７５２６６０号の優先権を主張する。
【背景技術】
【０００３】
生物工学をベースにした３７１種を上回る新薬が産業界では計画されている。このような生物工学をベースにした医薬品には、酵素、可溶性受容体、リガンド、血液タンパク質およびモノクローナル抗体などの治療用タンパク質が含まれる。タンパク質をベースにした治療、特にモノクローナル抗体をベースにした治療は、癌、アレルギー性疾患、喘息および臓器移植などの疾患を治療するための重要な方法となってきた。２００３年末には、１４種の抗体をベースにした治療が、様々なヒト疾患を治療するために米国食品医薬品局によって承認された。
【０００４】
抗体をベースにした治療は通常、定期的に投与され、注射には数ｍｇ／ｋｇの用量を必要とする。皮下注射は、これらの治療の一般的な投与経路である。皮下注射に使用するのは少量なので（通常１．０ｍＬ〜１．２ｍＬ）、高用量抗体治療では、この投与経路には高濃度のタンパク質製剤（例えば、５０ｍｇ／ｍｌ〜３００ｍｇ／ｍｌ）が必要である。
【０００５】
高いタンパク質濃度は、タンパク質の物理的および化学的安定性に関する難題であり、タンパク質製剤の製造、保存および送達を困難にする。１つの問題は、タンパク質が加工および／保存中に粒子を形成しやすいことで、さらに加工する間に操作を困難にする。この問題を回避するために、界面活性剤および／または糖類をタンパク質製剤に添加してきた。界面活性剤および糖類はタンパク質の粒子形成の程度を低下させるが、濃縮タンパク質製剤の操作および投与に関連した別の問題、すなわち、粘度の高さには対処できない。実際に、糖類は、タンパク質内またはタンパク質間の分子間相互作用を増強し、タンパク質製剤の粘度を高める可能性がある。
【０００６】
タンパク質製剤の粘度が高いと、患者に薬剤を送達する間にプロセシングされ、不利益な結果をもたらす。したがって、製造、保存および投与に適した適度に粘度の低い比較的高濃度のタンパク質製剤を開発することが当業界では必要とされている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本出願は、適切な濃度の粘度低下剤を含まない対応するタンパク質製剤と比較して粘度が低下したタンパク質製剤およびこのような粘度の低下したタンパク質製剤（低粘度製剤）の製造方法に関する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
一態様では、本発明は、タンパク質製剤に粘度低下剤を添加し、それによって粘度低下剤を含まないタンパク質製剤と比較してタンパク質製剤の粘度を低下させることにより、タンパク質製剤の粘度を低下させる方法に関する。一実施形態では、この方法は、粘度低下剤を添加する前にタンパク質製剤の粘度を測定することを含む。別の実施形態では、この方法は、粘度低下剤添加後にタンパク質製剤の粘度を測定することを含む。さらに別の実施形態では、この方法は、粘度低下剤の添加前後にタンパク質製剤の粘度を測定することを含む。ある実施形態では、粘度低下剤は、タンパク質製剤の粘度を、粘度低下剤を含まずに製剤化された製剤の粘度と比較して少なくとも５％低下させる。
【０００９】
いくつかの実施形態では、粘度低下剤は塩化カルシウムまたは塩化マグネシウムである。粘度低下剤は、タンパク質製剤に悪い影響を与えないように低濃度で添加する。粘度低下剤は一般的に、最終濃度が約１ｍＭと約５０ｍＭの間となるようにタンパク質製剤に添加する。いくつかの実施形態では、粘度低下剤は、最終濃度が約５ｍＭと約２５ｍＭの間となるようにタンパク質製剤に添加する。ある実施形態では、粘度低下剤は、最終濃度が約１ｍＭと約２０ｍＭの間となるようにタンパク質製剤に添加する。ある実施形態では、粘度低下剤は、最終濃度が約０．５ｍＭと約１４ｍＭの間となるようにタンパク質製剤に添加する。別の実施形態では、タンパク質は、抗体、Ｉｇ融合タンパク質、受容体、リガンド、転写因子、酵素、またはその生物活性断片である。いくつかの実施形態では、タンパク質は抗ミオスタチン抗体、抗ＩＬ−１２抗体、または抗ＩＬ−１３抗体である。
【００１０】
別の態様では、本発明は、低粘度タンパク質製剤に関する。低粘度タンパク質製剤は、タンパク質、粘度低下剤および緩衝剤を含む。いくつかの実施形態では、粘度低下剤は塩化カルシウムまたは塩化マグネシウムである。粘度低下剤は一般的に、最終濃度が約１ｍＭと約５０ｍＭの間となるようにタンパク質製剤に添加する。いくつかの実施形態では、粘度低下剤は、最終濃度が約５ｍＭと約２５ｍＭの間となるようにタンパク質製剤に添加する。ある実施形態では、粘度低下剤は、最終濃度が約１ｍＭと約１５ｍＭの間となるようにタンパク質製剤に添加する。その他のある実施形態では、粘度低下剤は、最終濃度が約０．５ｍＭと約１４ｍＭの間となるようにタンパク質製剤に添加する。粘度低下剤を約０．５ｍＭから約５０ｍＭの間の濃度でタンパク質製剤に添加する場合、塩化ナトリウムおよび二硫酸ナトリウムは粘度低下剤として使用されない。タンパク質製剤のｐＨは一般的に、約５．５と約６．５の間である。ある実施形態では、タンパク質は、抗体、Ｉｇ融合タンパク質、受容体、リガンド、転写因子、酵素、またはその生物活性断片である。ある実施形態では、タンパク質製剤はキットとして提供される。このようなキットには、タンパク質製剤を使用するための指示書を含めることができる。
【００１１】
ある実施形態では、低粘度タンパク質製剤は、低粘度抗ミオスタチン抗体製剤である。一実施形態では、抗ミオスタチン抗体はモノクローナル抗体である。別の実施形態では、抗ミオスタチン抗体は、ヒト化モノクローナル抗体（例えば、部分的にヒト化した、または完全にヒト化したモノクローナル抗体）である。ある実施形態では、抗ミオスタチン抗体はＭＹＯ−０２２、ＭＹＯ−０２８またはＭＹＯ−０２９である。抗ミオスタチン抗体は一般的に、約２５ｍｇ／ｍｌから約４００ｍｇ／ｍｌの間の濃度で使用される。粘度低下剤は一般的に、最終濃度が約１ｍＭと約５０ｍＭの間となるように低粘度抗ミオスタチン抗体製剤に添加する。いくつかの実施形態では、粘度低下剤は、最終濃度が約５ｍＭと約２５ｍＭの間となるように抗ミオスタチン抗体に添加する。ある実施形態では、粘度低下剤は、最終濃度が約１ｍＭと約１５ｍＭの間となるように抗ミオスタチン抗体製剤に添加する。ある実施形態では、粘度低下剤は、最終濃度が０．５ｍＭと１４ｍＭの間となるように抗ミオスタチン抗体製剤に添加する。粘度低下剤を約０．５ｍＭから約５０ｍＭの間の濃度で抗ミオスタチン抗体製剤に添加する場合、塩化ナトリウムおよび二硫酸ナトリウムは粘度低下剤として使用されない。低粘度抗ミオスタチン抗体製剤のｐＨは一般的に、約５．５と約６．５の間である。一実施形態では、ヒスチジンは低粘度ミオスタチン抗体製剤を緩衝化するために使用される。低粘度ミオスタチン抗体製剤はまた、１種または複数の凍結保護物質、１種または複数の界面活性剤、１種または複数の抗酸化剤、あるいはそれらの組合せを含むことができる。いくつかの実施形態では、低粘度抗ミオスタチン製剤は、復元した製剤である。ミオスタチン抗体は、医薬組成物として本明細書で記載した通りに製剤化することができ、限定はしないが、筋ジストロフィー、筋肉減少症、悪液質およびＩＩ型糖尿病などの障害を治療するために使用される。ある実施形態では、低粘度抗ミオスタチン抗体製剤はキットとして提供される。このようなキットには、抗体製剤を使用するための指示書を含めることができる。
【００１２】
ある実施形態では、低粘度タンパク質製剤は、低粘度抗ＩＬ−１２抗体製剤である。一実施形態では、抗ＩＬ−１２抗体はモノクローナル抗体である。別の実施形態では、抗ＩＬ−１２抗体は、ヒト化モノクローナル抗体（例えば、部分的にヒト化した、または完全にヒト化したモノクローナル抗体）である。ある実施形態では、抗ＩＬ−１２抗体はＪ６９５である。抗ＩＬ−１２抗体は一般的に、製剤中において約２５ｍｇ／ｍｌから約４００ｍｇ／ｍｌの間の濃度で使用される。粘度低下剤は一般的に、最終濃度が約１ｍＭと約５０ｍＭの間となるように抗ＩＬ−１２抗体製剤に添加する。いくつかの実施形態では、粘度低下剤は、最終濃度が約５ｍＭと約２５ｍＭの間となるように抗ＩＬ−１２抗体製剤に添加する。ある実施形態では、粘度低下剤は、最終濃度が約１ｍＭと約１５ｍＭの間となるように抗ＩＬ−１２抗体製剤に添加する。その他のある実施形態では、粘度低下剤は、最終濃度が約０．５ｍＭと約１４ｍＭの間となるように抗ＩＬ−１２抗体製剤に添加する。粘度低下剤を約０．５ｍＭから約５０ｍＭの間の濃度で抗ＩＬ−１２抗体製剤に添加する場合、塩化ナトリウムおよび二硫酸ナトリウムは粘度低下剤として使用されない。低粘度抗ＩＬ−１２抗体製剤のｐＨは一般的に、約５．５と約６．５の間である。ある実施形態では、ヒスチジンは低粘度ＩＬ−１２抗体製剤において緩衝剤として使用される。低粘度抗ＩＬ−１２抗体製剤はまた、１種または複数の凍結保護物質、１種または複数の界面活性剤、１種または複数の抗酸化剤、あるいはそれらの組合せを含むことができる。いくつかの実施形態では、低粘度抗ＩＬ−１２抗体製剤は、復元された製剤である。抗ＩＬ−１２抗体は、医薬組成物として使用するために本明細書で記載した通りに製剤化することができ、限定はしないが、関節リウマチ、クローン病、乾癬および乾癬性関節炎などの障害を治療するために使用される。ある実施形態では、低粘度抗ＩＬ−１２抗体製剤はキットの一部として提供される。このようなキットには、抗ＩＬ−１２抗体製剤を使用するための指示書を含めることができる。
【００１３】
ある実施形態では、低粘度タンパク質製剤は、抗ＩＬ−１３抗体製剤である。一実施形態では、抗ＩＬ−１３抗体はモノクローナル抗体である。別の実施形態では、抗ＩＬ−１３抗体は、ヒト化モノクローナル抗体（例えば、部分的にヒト化した、または完全にヒト化している）である。ある実施形態では、抗ＩＬ−１３抗体はＩＭＡ−６３８である。抗ＩＬ−１３抗体は一般的に、製剤中において約２５ｍｇ／ｍｌから約４００ｍｇ／ｍｌの間の濃度で使用される。粘度低下剤は一般的に、低粘度抗ＩＬ−１３抗体製剤を製造するために、最終濃度が約１ｍＭと約５０ｍＭの間となるように添加する。いくつかの実施形態では、粘度低下剤は、最終濃度が約５ｍＭと約２５ｍＭの間となるように抗ＩＬ−１３抗体製剤に添加する。ある実施形態では、粘度低下剤は、最終濃度が約１ｍＭと約１５ｍＭの間となるように抗ＩＬ−１３抗体製剤に添加する。その他のある実施形態では、粘度低下剤は、最終濃度が約０．５ｍＭと約１４ｍＭの間となるように抗ＩＬ−１３抗体製剤に添加する。粘度低下剤を約０．５ｍＭから約５０ｍＭの間の濃度で抗ＩＬ−１３抗体製剤に添加する場合、塩化ナトリウムおよび二硫酸ナトリウムは粘度低下剤として使用されない。低粘度抗ＩＬ−１３抗体製剤のｐＨは一般的に、約５．５と約６．５の間である。一実施形態では、ヒスチジンは低粘度ＩＬ−１３抗体製剤において緩衝剤として使用される。低粘度抗ＩＬ−１３抗体製剤はまた、１種または複数の凍結保護物質、１種または複数の界面活性剤、１種または複数の抗酸化剤、あるいはそれらの組合せを含むことができる。いくつかの実施形態では、低粘度抗ＩＬ−１３製剤は、復元された製剤である。抗ＩＬ−１３抗体は、医薬組成物としての低粘度製剤に製剤化することができ、例えば、限定はしないが、呼吸障害（例えば、喘息）、アトピー障害（例えば、アレルギー性鼻炎）、皮膚（例えば、アトピー性皮膚炎）、胃腸器官（例えば、炎症性腸疾患（ＩＢＤ））の炎症および／または自己免疫症状、ならびに繊維性障害および癌障害を治療するために使用することができる。ある実施形態では、低粘度抗ＩＬ−１３抗体製剤はキットとして提供される。このようなキットには、低粘度抗ＩＬ−１３抗体製剤を使用するための指示書を含めることができる。
【００１４】
特に定義しなければ、本明細書で使用した技術的および科学的用語は全て、本発明が属する業界の当業者によって通常理解されるものと同様の意味を有する。本明細書で記載したものと類似または同等の方法および材料を本発明の実施または試験に使用することができるが、適切な方法および材料を以下に記載する。本明細書で記載した出版物、特許明細書、特許およびその他の参考文献は、全体を参考により援用する。さらに、材料、方法および実施例は、例示のためのみであって、限定するものではない。
【００１５】
本発明のその他の特性および利点は、詳細な説明、図面および特許請求の範囲から明らかとなるだろう。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
タンパク質製剤の粘度は、安定性、加工、保存に対して、薬剤として使用する場合にはタンパク質製剤の患者への薬剤送達に対して影響を及ぼす。このような影響には、限定はしないが、濃度ならびに限外濾過およびダイアフィルトレーションによる緩衝液交換（膜流束は粘度が増加するにつれて減少し、それによって加工時間がより長くなり得る）、滅菌濾過（粘稠な溶液を滅菌濾過するには長時間を必要とし、場合によっては、非常に粘稠な溶液は微小な孔の膜、例えば、０．２２μｍ膜を通過しない）、試料操作性（例えば、ピペッティングおよびシリンジへの吸い込みが困難である）、復元後の保存バイアルからの回収、安定性、皮下または筋肉内投与のための針通過が含まれる。
【００１７】
本明細書では、同定されたタンパク質製剤の粘度を低下させる方法を提供する。この方法は、粘度が低下したタンパク質製剤（「低粘度製剤」または「低粘度タンパク質製剤」）を調製するのに適している。これらの低粘度タンパク質製剤には、関心があるタンパク質および粘度低下剤が含まれる。
【００１８】
タンパク質製剤の粘度を低下させる方法
本明細書で使用した「粘度」という用語は、「運動力学的粘度」または「絶対粘度」であってよい。「運動力学的粘度」とは、重力の影響下での流体の流動抵抗の測定値である。同量の２種類の流体を同一のキャピラリー粘度計に入れ、重力によって流れさせる場合、粘稠な流体はキャピラリーを通過して流れるのに粘度の低い流体よりも長い時間がかかる。１種類の流体が完全に流れるのに１００秒かかり、別の流体が２００秒かかる場合、運動力学的粘度の尺度では２番目の流体の粘度は、１番目の流体の２倍である。時々「動的」または「単純粘度」と称される「絶対粘度」は、運動力学的粘度および流体密度の積である。運動力学的粘度のディメンションはＬ２／Ｔで、Ｌは長さであり、Ｔは時間である。一般的に、運動力学的粘度はセンチストーク（ｃＳｔ）で表される。動力学的粘度のＳＩ単位は、ｍｍ２／ｓであり、これは１ｃＳｔである。絶対粘度は、センチポアズ（ｃＰ）の単位で表される。絶対粘度のＳＩ単位は、ミリパスカル−秒（ｍＰａ−ｓ）であり、１ｃＰ＝１ｍＰａ−ｓである。
【００１９】
タンパク質製剤の粘度は、製剤に粘度低下剤を添加することによって低下させることができる。粘度低下剤を比較的低濃度で添加する場合がある。粘度低下剤を含む製剤の粘度は、粘度低下剤を含まない製剤の粘度と比較して低下している。粘度低下剤の添加が、粘度低下剤を含まない対応する製剤と比較して、または粘度低下剤を選択された濃度では含まない製剤と比較して、製剤の粘度の低下をもたらす場合、粘度低下剤を（例えば、選択した濃度で）含有する製剤、このような製剤は低粘度製剤である。ある低粘度製剤では、粘度低下剤は一般的にタンパク質製剤の粘度を、粘度低下剤を含まない、または低量で含有するタンパク質製剤の粘度と比較して約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％および約９０％減少させる。粘度低下剤が、タンパク質製剤の粘度を、粘度低下剤を含まない、または低量で含有するタンパク質製剤の粘度と比較して少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％および少なくとも９０％減少させる場合がある。ある実施形態では、タンパク質製剤の粘度は、粘度低下剤の添加前に測定する。その他の実施形態では、タンパク質製剤の粘度は、粘度低下剤の添加後に測定する。このような測定は、タンパク質製剤に粘度低下剤添加の数時間後（例えば、１〜２３時間）、数日後（例えば、１〜１０日間）、数週間後（例えば、１〜５週間）または数ヶ月後（例えば、１〜１２ヶ月）、または数年後（例えば、１〜２年、１〜３年）に行うことができる。さらに他の実施形態では、タンパク質製剤の粘度は、粘度低下剤の添加の前後に測定する。粘度測定法は、当業界では周知であり、例えば、キャピラリー粘度計の使用またはコーンプレートレオメータが含まれる。
【００２０】
一実施形態では、粘度低下剤は、塩化カルシウム、塩化マグネシウム、リン酸ナトリウムまたは塩酸アルギニンなどの塩である。本明細書で記載した方法では、粘度低下剤は、最終濃度が約０．５ｍＭと約１００ｍＭの間となるようにタンパク質製剤に添加する。一実施形態では、粘度低下剤は、最終濃度が約５ｍＭと約２０ｍＭの間となるようにタンパク質製剤に添加する。別の実施形態では、粘度低下剤は、最終濃度が約０．５ｍＭと約１４ｍＭの間となるようにタンパク質製剤に添加する。ある実施形態では、粘度低下剤は、最終濃度が約０．５ｍＭと約２０ｍＭ以下、または１９ｍＭ以下、または１８ｍＭ以下、または１７ｍＭ以下、または１６ｍＭ以下、または１５ｍＭ以下、または１４ｍＭ以下、または１３ｍＭ以下、または１２ｍＭ以下、または１１ｍＭ以下、または１０ｍＭの間となるようにタンパク質製剤に添加される。一般的に、粘度低下剤が最終濃度約０．５ｍＭから約２５ｍＭの間でタンパク質製剤に添加する場合、粘度低下剤は塩化カルシウムおよび塩化マグネシウムであるが、塩化ナトリウムまたは二硫酸ナトリウムではない。ある実施形態では、粘度低下剤は、タンパク質製剤に悪い影響を与えないように低濃度で添加する。例えば、塩化カルシウムまたは塩化マグネシウムの濃度が２０ｍＭ以上の場合、タンパク質は低い保存温度（例えば、２〜８℃）でゲルを形成し得る。したがって、粘度低下剤の濃度は一般的に、低粘度製剤の予定保存温度で粘度が低下するように選択される。
【００２１】
製剤
低粘度タンパク質製剤の組成は、いくつかの要素を考慮することによって決定される。これらの要素には、限定はしないが、タンパク質の性質（例えば、受容体、抗体、Ｉｇ融合タンパク質、酵素）、タンパク質の濃度、所望するｐＨ範囲、どのようにタンパク質製剤を保存するか（例えば、温度）、タンパク質製剤を保存する期間、どのように製剤を患者に投与するかが含まれる。適切な粘度低下剤の選択は、部分的には、製剤中のタンパク質のためのこのような必要性に基づいて行われる。
【００２２】
タンパク質
製剤化する関心のあるタンパク質には、限定はしないが、タンパク質、例えば、ミオスタチン／ＧＤＦ−８、インターロイキン（ＩＬ）、例えば、ＩＬ−１からＩＬ−１５、ヒト成長ホルモンおよびウシ成長ホルモンなどの成長ホルモン、成長ホルモン放出因子、副甲状腺ホルモン、甲状腺刺激ホルモン、ウリカーゼ、ビクニン、ビリルビンオキシダーゼ、サブチリシン、リポタンパク質、α−１−アンチトリプシン、インシュリンＡ鎖、インシュリンＢ鎖、プロインシュリン、卵胞刺激ホルモン、カルシトニン、黄体形成ホルモン、グルカゴン、第ＶＩＩａ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＶＩＩＩＣ因子、第ＩＸ因子、組織因子、フォンウィルブランド因子、プロテインＣなどの血液凝固抑制因子、心房性ナトリウム利尿因子、肺サーファクタント、プラスミノーゲン活性化因子、例えば、ウロキナーゼまたは組織型プラスミノーゲン活性化因子（ｔ−ＰＡ）、ボンバジン、トロンビン、プラスミン、ミニプラスミン、ミクロプラスミン、腫瘍壊死因子αおよびβ、エンケファリナーゼ、ＲＡＮＴＥＳ（Ｔ細胞発現および分泌の正常な活性化に対する調節）、ヒトマクロファージ炎症性タンパク質（ＭＩＰ−１−α）、ヒト血清アルブミンなどの血清アルブミン、ミュラー管抑制因子、リラキシンＡ鎖、リラキシンＢ鎖、プロレラキシン、マウスゴナドトロピン関連ペプチド、ＤＮアーゼ、インヒビン、アクチビン、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、胎盤増殖因子（ＰＩＧＦ）、ホルモンまたは成長因子の受容体、インテグリン、プロテインＡまたはプロテインＤ、リューマチ因子、骨由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）などの神経栄養因子、ニューロトロフィン−３、−４、−５もしくは−６（ＮＴ−３、ＮＴ−４、ＮＴ−５もしくはＮＴ−６）またはＮＧＦ−βなどの神経成長因子、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、ａＦＧＦおよびｂＦＧＦなどの繊維芽細胞成長因子、上皮成長因子（ＥＧＦ）、ＴＧＦ−αおよびＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２、ＴＧＦ−β３、ＴＧＦ−β４もしくはＴＧＦ−β５を含むＴＧＦ−βなどのトランスフォーミング成長因子（ＴＧＦ）、インシュリン様成長因子−Ｉおよび−ＩＩ（ＩＧＦ−ＩおよびＩＧＦ−ＩＩ）、ｄｅｓ（１−３）−ＩＧＦ−Ｉ（脳ＩＧＦ−Ｉ）、インシュリン様成長因子結合タンパク質、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２８、ＣＤ３４およびＣＤ４５などのＣＤタンパク質、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、骨誘導性因子、免疫毒素、骨形態形成タンパク質（ＢＭＰ）、インターフェロン−α、−βおよび−γなどのインターフェロン、コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、例えば、Ｍ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦおよびＧ−ＣＳＦ、スーパーオキシドジスムターゼ、Ｔ細胞受容体、ＥＧＦ受容体、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３もしくはＨＥＲ４受容体などのＨＥＲ受容体ファミリーの構成要素、ＬＦＡ−１、ＶＬＡ−４、ＩＣＡＭ−１およびＶＣＡＭなどの細胞接着分子、ＩｇＥ、血液型抗原、ｆｌｋ２／ｆｌｔ３受容体、肥満（ＯＢ）受容体、崩壊促進因子（ＤＡＦ）、ＨＩＶｇａｇ、ｅｎｖ、ｐｏｌ、ｔａｔまたはｒｅｖタンパク質などのウイルス抗原、ホーミング受容体、アドレシン、イムノアドヘシンおよび生物活性断片、あるいは前記に挙げたポリペプチドのいずれかの変種が含まれる。いくつかの製剤では、複数のタンパク質種または断片が製剤に含まれる。
【００２３】
「生物活性断片」という用語は、由来するタンパク質の機能の少なくとも１種を保持しているタンパク質の断片を意味する。抗体の生物活性断片には、抗体の抗原結合断片が含まれ、受容体の生物学的断片には、そのリガンドに依然として結合できる受容体の断片が含まれ、リガンドの生物活性断片には、その受容体に依然として結合できるリガンドの一部が含まれ、酵素の生物活性断片には、完全長酵素によって触媒される反応を依然として触媒できる酵素の一部が含まれる。一実施形態では、生物活性断片は、由来するタンパク質の機能の少なくとも約５％を保持している。タンパク質の機能は、当業界で公知の方法（例えば、抗体−抗原相互作用の試験、リガンド−受容体相互作用の試験、酵素活性の試験、転写活性の試験、またはＤＮＡ−タンパク質相互作用の試験）によって測定することができる。この断片は、例えば、由来するタンパク質のある種の特性（例えば、特異的リガンドへの結合）を保持していることができるが、由来するタンパク質によって惹起される細胞応答を引き起こさない治療上有用な断片である場合もある。
【００２４】
ある実施形態では、製剤化すべきタンパク質は抗体である。抗体は、前述のタンパク質の１つに結合できる抗体であってよい。本明細書で使用した「抗体」という用語には、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、ポリエピトープ特異性を備えた抗体組成物、二重特異性抗体、ダイアボディーまたは抗体のその他の精製調製物および組換え抗体が含まれる。抗体は、例えば、任意のアイソタイプ（ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭなど）の完全な抗体または関心のある抗原に結合するそれらの断片であることができる。本発明で使用される抗体の具体的な例では、製剤化する抗体は、ＩｇＧアイソタイプを有する抗体である。抗体は、従来の、またはその他の技術を使用して断片化することができ、断片は関心のある抗原に対する結合についてスクリーニングされる。一般的に、抗体断片には、完全な抗体の抗原結合領域および／または様々な領域が含まれる。したがって、抗体断片という用語には、選択されたタンパク質に選択的に結合できる、タンパク質分解酵素によって切断された、または組換え技術によって調製された抗体分子部分の一部が含まれる。このようなタンパク質分解および／または組換え断片の非限定的例には、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、Ｆｖおよびペプチドリンカーによって結合したＶ［Ｌ］および／またはＶ［Ｈ］ドメインを含有する一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）が含まれる。ｓｃＦｖは、二種類以上の結合部位を有する抗体を形成するために共有的または非共有的に結合することができる。
【００２５】
いくつかの実施形態では、抗体はヒト化モノクローナル抗体である。本明細書で使用した「ヒト化モノクローナル抗体」という用語は、同等のヒトモノクローナル抗体（ドナー）で見い出される少なくとも１種または複数のアミノ酸残基を含有するように改変された非ヒト由来のモノクローナル抗体（レシピエント）である。「完全なヒト化モノクローナル抗体」とは、同等のヒトモノクローナル抗体の抗原結合部位で見い出されるアミノ酸残基全てを含有するように改変された非ヒト由来のモノクローナル抗体である。ヒト化抗体はまた、レシピエント抗体またはドナー抗体のいずれにも見い出されない残基を含んでいてよい。抗体機能をさらに改良し、最適化するために、これらの変更を行うことができる。ヒト化抗体はまた、所望によりヒトイムノグロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部を含んでよい。
【００２６】
ある実施形態では、低粘度製剤で使用される抗体は、抗ミオスタチン抗体（例えば、ＭＹＯ−０２２、ＭＹＯ−０２８（図６）、ＭＹＯ−０２９（図７））である。ＭＹＯ−０２２、ＭＹＯ−０２８およびＭＹＯ−０２９抗体は、本明細書に参考として援用した米国特許出願番号第１０／６８８９２５号（公開番号２００４／０１４２３８２）に記載されている。その他の実施形態では、抗体はＩＬ−１２抗体（例えば、Ｊ６９５（図８））である。Ｊ６９５抗体は、本明細書に参考として援用した米国特許第６９１４１２８号に記載されている。さらに別の実施形態では、抗体はＩＬ−１３抗体（例えば、ＩＭＡ−６３８（図９）、ＣＡＴ−３５４）である。抗ＩＬ−１３抗体は、本明細書に参考として援用した米国特許出願番号第１１／１４９３０９号に記載されている。
【００２７】
いくつかの実施形態では、製剤化するタンパク質は融合タンパク質である。一実施形態では、融合タンパク質はイムノグロブリン（Ｉｇ）融合タンパク質である。特定の実施形態では、融合タンパク質はＩｇＧ重鎖定常領域を含む。別の実施形態では、融合タンパク質はヒトイムノグロブリンＣγ１のヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３領域に対応するアミノ酸配列を含む。Ｉｇ融合タンパク質の例には、ＣＴＬＡ４ＩｇおよびＶＣＡＭ２Ｄ−ＩｇＧが含まれる。融合タンパク質の製造方法は、当業界で公知である（例えば、米国特許第６８８７４７１号および第６４８２４０９号）。
【００２８】
ある実施形態では、製剤化するタンパク質は、第ＶＩＩ因子ポリペプチドまたは抗ＩｇＥ抗体を含まないタンパク質である。
【００２９】
低粘度製剤は、特定の障害を治療するために必要なので、複数のタンパク質を含有し得る。他のタンパク質は、通常、製剤中のその他のタンパク質に対して補足的な活性を有し、製剤中のその他のタンパク質に悪影響を及ぼさない。例えば、ミオスタチンに結合する２種以上の抗体、ＩＬ−１２に結合する２種以上の抗体またはＩＬ−１３に結合する２種以上の抗体を含有する単一の製剤を提供することが望ましいことがあり得る。さらに、タンパク質製剤はまた、低粘度タンパク質製剤を最大限に利用するために使用される非タンパク質物質を含有することができる。例えば、スクロースは、溶液中におけるタンパク質の安定性および溶解性を高めるために添加することができ、ヒスチジンは適切な緩衝能力をもたらすために添加することができる。このような追加物質は、粘度低下剤を添加する前のタンパク質製剤の一部とするか、または低粘度製剤の製造プロセスにおいて添加することができる。
【００３０】
ある実施形態では、製剤において使用する前に、製剤化するタンパク質は本質的に純粋であり、かつ／または本質的に均一である（すなわち、混入タンパク質などを実質的に含まない）。「本質的に純粋な」タンパク質という用語は、選択されたタンパク質画分を少なくとも約９０重量％、例えば、選択されたタンパク質画分を少なくとも約９５重量％を含む組成物を意味する。「本質的に均一な」タンパク質という用語は、様々な安定化剤および水溶液の水の重量を除いて、選択されたタンパク質画分を少なくとも約９９重量％を含む組成物を意味する。
【００３１】
低粘度製剤におけるタンパク質の濃度
低粘度製剤におけるタンパク質の濃度は、製剤の最終的用途に左右される。本明細書で記載した製剤中におけるタンパク質濃度は一般的に、約１０ｍｇ／ｍｌと約３００ｍｇ／ｍｌの間、例えば、約１０ｍｇ／ｍｌと約１００ｍｇ／ｍｌの間、約２５ｍｇ／ｍｌと約１００ｍｇ／ｍｌ、約５０ｍｇ／ｍｌと約１００ｍｇ／ｍｌ、約７５ｍｇ／ｍｌと約１００ｍｇ／ｍｌ、約１００ｍｇ／ｍｌと約２００ｍｇ／ｍｌ、約１２５ｍｇ／ｍｌと約２００ｍｇ／ｍｌ、約１５０ｍｇ／ｍｌと約２００ｍｇ／ｍｌ、約２００ｍｇ／ｍｌと約３００ｍｇ／ｍｌおよび約２５０ｍｇ／ｍｌと約３００ｍｇ／ｍｌである。例えば、本明細書で記載した製剤中におけるタンパク質濃度は、１０ｍｇ／ｍｌと３００ｍｇ／ｍｌの間、例えば、１０ｍｇ／ｍｌと１００ｍｇ／ｍｌの間、２５ｍｇ／ｍｌと１００ｍｇ／ｍｌの間、５０ｍｇ／ｍｌと１００ｍｇ／ｍｌの間、７５ｍｇ／ｍｌと１００ｍｇ／ｍｌの間、１００ｍｇ／ｍｌと２００ｍｇ／ｍｌの間、１２５ｍｇ／ｍｌと２００ｍｇ／ｍｌの間、１５０ｍｇ／ｍｌと２００ｍｇ／ｍｌの間、２００ｍｇ／ｍｌと３００ｍｇ／ｍｌの間、および２５０ｍｇ／ｍｌと３００ｍｇ／ｍｌの間である。「間」という用語は、最小および最大濃度を含むものとする。
【００３２】
低粘度タンパク質製剤は、治療目的で使用することができる。したがって、治療適用のために使用される製剤中のタンパク質の濃度は、患者に許容され、患者にとって治療価値がある投与量および容量のタンパク質を提供することに基づいて決定される。低粘度製剤が注射によって投与される場合、タンパク質濃度は、注射容量（通常、１．０ｍＬ〜１．２ｍＬ）に左右される。タンパク質をベースにした治療は、１週間当たり、１ヶ月当たり、または数ヶ月当たり数ｍｇ／ｋｇの用量を必要とし得る。したがって、タンパク質を２〜３ｍｇ／ｋｇ患者の体重で提供し、患者の平均体重が７５ｋｇである場合、タンパク質１５０ｍｇ〜２２５ｍｇを注射容量１．０ｍＬ〜１．２ｍＬに入れて送達することが必要である。あるいは、製剤は、治療毎に複数の注射部位で送達するために適した濃度で提供する。
【００３３】
製剤中のタンパク質濃度が増加するにつれて、タンパク質製剤の粘度はまた、上昇するようである。製剤の粘度が上昇すると、製剤の投与がより困難になる。したがって、粘度の上昇がその利用能力に影響を及ぼす場合、タンパク質製剤の粘度を低下させることが必要である。
【００３４】
粘度低下剤
比較的低濃度のある種の粘度低下剤をタンパク質製剤に添加するとタンパク質製剤の粘度が低下することが発見された。本明細書で使用した「粘度低下剤」という用語には、粘度低下剤を含有しないか、または少量含有するタンパク質製剤と比較して、タンパク質製剤の粘度を低下させる任意の薬剤が含まれる。例えば、粘度低下剤は一般的に、タンパク質製剤の粘度を、粘度低下剤を含まない、または少量で含有するタンパク質製剤の粘度と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約９０％または約９５％低下させる。例えば、粘度低下剤は一般的に、タンパク質製剤の粘度を、粘度低下剤を含まない、または少量で含有するタンパク質製剤の粘度と比較して、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、９０％または９５％低下させる。粘度低下剤の非限定的例には、塩化カルシウム、塩化マグネシウム、塩酸アルギニン、塩化ナトリウム、チオシアン酸ナトリウム、チオシアン酸アンモニウム、硫酸アンモニウム、リン酸ナトリウムおよび塩化アンモニウムが含まれる。
【００３５】
一実施形態では、粘度低下剤は塩化カルシウムである。別の実施形態では、粘度低下剤は塩化マグネシウムである。他の実施形態では、複数の粘度低下剤をタンパク質製剤に添加する。
【００３６】
粘度低下剤は一般的に、最終濃度が１ｍＭから約１５０ｍＭの間、例えば、約１ｍＭと約５０ｍＭの間、約２ｍＭと約４０ｍＭの間、約３ｍＭと約３０ｍＭの間、約４ｍＭと約２５ｍＭの間、約５ｍＭと約２０ｍＭの間、約５ｍＭと約２５ｍＭの間、約５ｍＭと約３０ｍＭの間、約５ｍＭと約４０ｍＭの間、および約５ｍＭと約５０ｍＭの間となるようにタンパク質製剤に添加する。ある実施形態では、粘度低下剤は、最終濃度が１４ｍＭ未満、１３ｍＭ未満、１２ｍＭ未満、１１ｍＭ未満、１０ｍＭ未満、９ｍＭ未満、８ｍＭ未満、７ｍＭ未満、６ｍＭ未満、５ｍＭ未満、４ｍＭ未満、３ｍＭ未満、または２ｍＭ未満であるようにタンパク質製剤に添加する。その他の実施形態では、粘度低下剤は、最終濃度が０．５ｍＭと約１４ｍＭの間、０．５ｍＭと１３ｍＭの間、０．５ｍＭと１２ｍＭの間、０．５ｍＭと１１ｍＭの間、０．５ｍＭと１０ｍＭの間、０．５ｍＭと９ｍＭの間、０．５ｍＭと８ｍＭの間、０．５ｍＭと７ｍＭの間、０．５ｍＭと６ｍＭの間または約０．５ｍＭと約５ｍＭの間となるようにタンパク質製剤に添加する。一実施形態では、粘度低下剤は、製剤中の最終濃度が約５ｍＭと約２０ｍＭの間である塩化カルシウムである。別の実施形態では、粘度低下剤は、製剤中の最終濃度が約５ｍＭと約１４ｍＭの間である塩化カルシウムである。その他の実施形態では、粘度低下剤は、製剤中の最終濃度が約５ｍＭと約２０ｍＭの間である塩化マグネシウムである。別の実施形態では、粘度低下剤は、製剤中の最終濃度が約５ｍＭと約１４ｍＭの間である塩化マグネシウムである。
【００３７】
タンパク質製剤の粘度は、例えば、キャピラリー粘度計またはコーンプレートレオメータの使用を含む当業界で公知の任意の適切な方法によって測定することができる。
【００３８】
緩衝剤
本明細書で使用した「緩衝剤」という用語には、溶液、例えば、製剤の所望する範囲のｐＨを維持する薬剤が含まれる。本明細書で記載した製剤のｐＨは一般的に、約ｐＨ５．０から約９．０の間、例えば、約ｐＨ５．５から約６．５の間、約ｐＨ５．５から約ｐＨ６．０の間、約ｐＨ６．０から約ｐＨ６．５の間、ｐＨ５．５、ｐＨ６．０またはｐＨ６．５である。一般的に、溶液をｐＨ５．０から６．５の間に維持することができる緩衝剤を使用する。本明細書で記載した製剤で使用できる緩衝剤の非限定的例には、ヒスチジン、コハク酸、グルコン酸、トリス（トロメタモール）、リン酸、クエン酸、２−モルホリノエタンスルホン酸（ＭＥＳ）、リン酸ナトリウム、酢酸ナトリウムおよびカコジル酸が含まれる。
【００３９】
ヒスチジンは、皮下、筋肉内または腹腔内注射によって投与される低粘度製剤に一般的に存在する緩衝剤である。この緩衝剤の濃度は約５ｍＭと３０ｍＭの間である。一実施形態では、製剤の緩衝剤は、濃度が約５ｍＭから約２０ｍＭの間のヒスチジンである。
【００４０】
賦形剤
タンパク質、粘度低下剤および緩衝剤に加えて、本明細書で記載した粘度の低下した製剤はまた、その他の物質を含有してよい。このような物質には、限定はしないが、凍結保護物質、凍結乾燥保護物質、界面活性剤、充填剤、抗酸化剤および安定化剤が含まれる。一実施形態では、本明細書で記載した低粘度タンパク質製剤には、凍結保護物質、凍結乾燥保護物質、界面活性剤、充填剤、抗酸化剤および安定化剤およびそれらの組合せからなる群から選択された賦形剤が含まれる。
【００４１】
本明細書で使用した「凍結保護物質」という用語には、例えば、タンパク質表面から優先的に除去されることによって、製剤中のタンパク質に凍結によって誘発される負荷に対する安定性をもたらす薬剤が含まれる。凍結保護物質はまた、１次および２次乾燥中および長期の製品保存中の保護をもたらすことができる。凍結保護物質の非限定的な例には、糖、例えば、スクロース、グルコース、トレハロース、マンニトール、マンノースおよびラクトース、高分子、例えば、デキストラン、ヒドロキシエチル澱粉およびポリエチレングリコール、界面活性剤、例えば、ポリソルベート（例えば、ＰＳ−２０またはＰＳ−８０）およびアミノ酸、例えば、グリシン、アルギニン、ロイシンおよびセリンが含まれる。生体系で毒性が低い凍結保護物質が一般的に使用される。製剤に含める場合、凍結保護物質は一般的に、最終濃度が約０．１％と約１０％（重量／容量）の間、例えば、約０．５％と約１０％の間、約０．５％と約５％の間、約０．５％と約２％の間、約１％と約５％の間または約５％と約１０％の間となるように添加する。一実施形態では、凍結保護物質は、濃度が約０．５％と約１０％（重量／容量）の間であるスクロースである。
【００４２】
一実施形態では、凍結乾燥保護物質を本明細書で記載した製剤に添加する。本明細書で使用した「凍結乾燥保護物質」という用語には、例えば、アモルファスガラス状基質を提供することによって、水素結合によってタンパク質と結合することによって、凍結乾燥または脱水プロセス（１回目および２回目の凍結乾燥）中のタンパク質に安定性をもたらし、乾燥プロセス中に除去される水分子を置換する薬剤が含まれる。これは、タンパク質構造を維持し、凍結乾燥過程中のタンパク質分解を最低限に抑え、長期間の製品安定性を改善するのに役立つ。凍結乾燥保護物質の非限定的例には、糖類、例えば、スクロースまたはトレハロース、アミノ酸、例えば、グルタミン酸一ナトリウム、非結晶性グリシンまたはヒスチジン、メチルアミン、例えば、ベタイン、リオトロピック塩、例えば、硫酸マグネシウム、ポリオール、例えば、３価以上の糖アルコール、例えば、グリセリン、エリスリトール、グリセロール、アラビトール、キシリトール、ソルビトールおよびマンニトール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、プルロニックおよびそれらの組合せが含まれる。製剤に添加する凍結乾燥保護物質の量は一般的に、タンパク質製剤が凍結乾燥される場合、タンパク質の許容できない量の分解／凝集が生じない量である。凍結乾燥保護物質が糖（例えば、スクロースまたはトレハロース）であり、タンパク質が抗体である場合、低粘度タンパク質製剤中の凍結乾燥保護物質濃度の非限定的例は、約１０ｍＭから約４００ｍＭ、約３０ｍＭから約３００ｍＭおよび約５０ｍＭから約１００ｍＭである。
【００４３】
ある実施形態では、界面活性剤は本明細書で記載した製剤に含まれる。本明細書で使用した「界面活性剤」という用語には、空気−液体界面での吸着によって液体の表面張力を低下させる薬剤が含まれる。界面活性剤の例には、限定はしないが、非イオン性界面活性剤、例えば、ポリソルベート（例えば、ポリソルベート８０またはポリソルベート２０）、ポロキサマー（例えば、ポロキサマー１８８）、トリトン（商標）（例えば、トリトン（商標）Ｘ−１００）、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、オクチルグリコシドナトリウム、ラウリル−スルホベタイン、ミリスチル−スルホベタイン、リノレイル−スルホベタイン、ステアリル−スルホベタイン、ラウリル−サルコシン、ミリスチル−サルコシン、リノレイル−サルコシン、ステアリル−サルコシン、リノレイル−ベタイン、ミリスチル−ベタイン、セチル−ベタイン、ラウロアミドプロピル−ベタイン、コカミドプロピル−ベタイン、リノレアミドプロピル−ベタイン、ミリスタミドプロピル−ベタイン、パルミドプロピル−ベタイン、イソステアラミドプロピル−ベタイン（例えば、ラウロアミドプロピル）、ミリスタミドプロピル−、パルミドプロピル−もしくはイソステアラミドプロピル−ジメチルアミン、メチルココイルタウリン酸ナトリウムもしくはメチルオレイルタウリン酸二ナトリウムおよびＭｏｎａｑｕａｔ（商標）系（Ｍｏｎａ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、Ｉｎｃ．、Ｐａｔｅｒｓｏｎ、Ｎ．Ｊ．）、ポリエチルグリコール、ポリプロピルグリコールならびにエチレンおよびプロピレングリコールの共重合体（例えば、プルロニック、ＰＦ６８）が含まれる。添加する界面活性剤の量は、高分子量（ＨＭＷ）種または低分子量（ＬＭＷ）種の割合を測定するために、例えば、ＳＥＣ−ＨＰＬＣを使用して測定した場合に許容できるレベルで復元タンパク質の凝集を維持して、本明細書で記載したタンパク質製剤の凍結乾燥物の復元後の粒子形成を最小限に抑えるようにする。例えば、界面活性剤は（液体または凍結乾燥前の）製剤中に、約０．００１〜０．５％、例えば、約０．０５〜０．３％の量で存在することができる。
【００４４】
いくつかの実施形態では、充填剤が低粘度製剤に含まれる。本明細書で使用した「充填剤」という用語には、医薬製品と直接相互作用することなく凍結乾燥した製品の構造を形成する薬剤が含まれる。薬剤として整った塊を形成することに加えて、充填剤はまた、崩壊温度の変更について有益な品質を付与し、凍結解凍保護をもたらし、長期間保存におけるタンパク質の安定性を高める。充填剤の非限定的例には、マンニトール、グリシン、ラクトースおよびスクロースが含まれる。充填剤は、結晶（例えば、グリシン、マンニトールもしくは塩化ナトリウム）またはアモルファス（例えば、デキストランまたはヒドロキシエチル澱粉）であってよく、一般的に製剤中において０．５％から１０％の量で使用される。
【００４５】
その他の薬学的に許容される担体、賦形剤または安定化剤、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ「Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ」２０版、Ｇｅｎｎａｒｏ著、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ（２０００）に記載されたものも、製剤の所望する特性に悪影響を及ぼさないならば、本明細書で記載したタンパク質製剤に含めてよい。許容される担体、賦形剤または安定化剤は、使用した投与量および濃度でレシピエント（例えば、患者）に対して非毒性であり、追加的緩衝剤、保存剤、供溶媒、アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化剤、ＥＤＴＡなどのキレート剤、金属複合体（例えば、Ｚｎ−タンパク質複合体）、ポリエステルなどの生分解性重合体、ナトリウムなどの塩形成対イオン、多価糖アルコール、アミノ酸、例えば、アラニン、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、リシン、オルニチン、ロイシン、２−フェニルアラニン、グルタミン酸およびトレオニン、有機糖または糖アルコール、例えば、ラクチトール、スタキオース、マンノース、ソルボース、キシロース、リボース、リビトール、ミオイニシトース（ｍｙｏｉｎｉｓｉｔｏｓｅ）、ミオイニシトール、ガラクトース、ガラクチトール、グリセロール、サイクリトール（例えば、イノシトール）、ポリエチレングリコール、硫黄を含有する低下剤、例えば、尿素、グルタチオン、チオクト酸、チオグリコール酸ナトリウム、チオグリセロール、α−モノチオグリセロールおよびチオ硫酸ナトリウム、低分子量タンパク質、例えば、ヒト血清アルブミン、ウシ血清アルブミン、ゼラチンまたはその他のイムノグロブリン、および親水性重合体、例えば、ポリビニルピロリドンを含む。
【００４６】
タンパク質製剤例
ＭＹＯ−０２９
一実施形態では、ＭＹＯ−０２９低粘度製剤は、ＭＹＯ−０２９抗体を１ｍｇ／ｍｌから３００ｍｇ／ｍｌ使用して製剤化することができる。ＭＹＯ−０２９製剤は一般的に、塩化カルシウムまたは塩化マグネシウムを約１ｍＭと約５０ｍＭの間含む。この製剤は、ヒスチジンを約５ｍＭから約２５ｍＭ含むことができる。この製剤は、スクロースまたはトレハロースを約１％から約５％（ｗ／ｖ）含むことができる。場合によっては、この製剤は、メチオニンを約１０ｍＭから約２５ｍＭ含むことができる。ある種のＭＹＯ−０２９製剤では、ポリソルベート−２０またはポリソルベート−８０を０．０５〜０．２％（ｗ／ｖ）を添加する。製剤のｐＨは一般的に、５．５と６．５の間である。具体的な例では、ＭＹＯ−０２９製剤には、ＭＹＯ−０２９抗体１５０ｍｇ／ｍｌ、塩化カルシウムまたは塩化マグネシウム１０ｍＭ、ヒスチジン２０ｍＭ、スクロース４％が含まれ、ｐＨは６．０である。別の具体的な例では、ＭＹＯ−０２９製剤には、ＭＹＯ−０２９抗体７５ｍｇ／ｍｌ、塩化カルシウムまたは塩化マグネシウム５ｍＭ、ヒスチジン１０ｍＭ、メチオニン１０ｍＭ、スクロース２％が含まれ、ｐＨは６．０である。別の具体的な例では、ＭＹＯ−０２９製剤には、ＭＹＯ−０２９抗体１５０ｍｇ／ｍｌ、塩化カルシウムまたは塩化マグネシウム１０ｍＭ、ヒスチジン２０ｍＭ、メチオニン２０ｍＭ、スクロース４％、ポリソルベート−８０、０．２％が含まれ、ｐＨは６．０である。
【００４７】
ＭＹＯ−０２８
ＭＹＯ−０２８低粘度製剤は、ＭＹＯ−０２８抗体を１ｍｇ／ｍｌから３００ｍｇ／ｍｌ使用して製剤化することができる。ＭＹＯ−０２８製剤は一般的に、塩化カルシウムまたは塩化マグネシウムを約１ｍＭと約５０ｍＭの間含む。この製剤は、ヒスチジンを約５ｍＭと約２５ｍＭの間含むことができる。この製剤は、スクロースまたはトレハロースを約１％と約５％（ｗ／ｖ）の間含むことができる。ＭＹＯ−０２８製剤のｐＨは一般的に、約５．５と約６．５の間である。具体的な一例では、ＭＹＯ−０２８抗体製剤には、抗体５０ｈｓ ｍｇ／ｍｌ、ヒスチジン１０ｍＭ、スクロース５％が含まれ、ｐＨは６．５である。別の具体的な例では、ＭＹＯ−０２８抗体製剤には、抗体５０ｍｇ／ｍｌ、塩化カルシウムまたは塩化マグネシウム１０ｍＭ、ヒスチジン１０ｍＭ、スクロース５％が含まれ、ｐＨは６．５である。
【００４８】
Ｊ６９５
Ｊ６９５低粘度製剤は、Ｊ６９５抗体を１ｍｇ／ｍｌから３００ｍｇ／ｍｌ使用して製剤化することができる。Ｊ６９５製剤は一般的に、塩化カルシウムまたは塩化マグネシウムを約１ｍＭと約５０ｍＭの間含む。この製剤は、ヒスチジンを約５ｍＭから約２５ｍＭ含むことができる。この製剤は、スクロースまたはトレハロースを約１％から約５％（ｗ／ｖ）含むことができる。場合によっては、この製剤は、メチオニンを約１０ｍＭから約２５ｍＭ含むことができる。あるＪ６９５製剤では、マンニトールを約１％と約５％（ｗ／ｖ）の間添加する。製剤のｐＨは一般的に、５．５と６．５の間である。具体的な例では、Ｊ６９５抗体製剤には、Ｊ６９５抗体１００ｍｇ／ｍｌ、ヒスチジン１０ｍＭ、メチオニン１０ｍＭ、マンニトール４％、スクロース１％が含まれ、ｐＨは６．０である。別の具体的な例では、Ｊ６９５抗体製剤には、Ｊ６９５抗体１００ｍｇ／ｍｌ、ヒスチジン１０ｍＭ、メチオニン１０ｍＭ、塩化カルシウムまたは塩化マグネシウム５ｍＭ、マンニトール４％、スクロース１％が含まれ、ｐＨは６．０である。別の具体的な例では、Ｊ６９５抗体製剤には、Ｊ６９５抗体１００ｍｇ／ｍｌ、ヒスチジン１０ｍＭ、メチオニン１０ｍＭ、塩化カルシウムまたは塩化マグネシウム１０ｍＭ、マンニトール４％、スクロース１％が含まれ、ｐＨは６．０である。
【００４９】
ＩＭＡ−６３８
ＩＭＡ−６３８タンパク質製剤は、ＩＭＡ−６３８抗体を１ｍｇ／ｍｌから３００ｍｇ／ｍｌ使用して製剤化することができる。ＩＭＡ−６３８を含有する低粘度製剤は一般的に、塩化カルシウムまたは塩化マグネシウムを約１ｍＭと約５０ｍＭの間含む。この製剤は、ヒスチジンを約５ｍＭから約２５ｍＭ含むことができる。この製剤はまた、スクロースまたはトレハロースを約１％から約１０％（ｗ／ｖ）含むことができる。製剤のｐＨは一般的に、５．５と６．５の間である。具体的な例では、ＩＭＡ−６３８抗体製剤には、ＩＭＡ−６３８抗体５０ｍｇ／ｍｌ、ヒスチジン１０ｍＭ、スクロース５％が含まれ、ｐＨは６．０である。別の具体的な例では、ＩＭＡ−６３８抗体製剤には、ＩＭＡ−６３８抗体１００ｍｇ／ｍｌ、ヒスチジン２０ｍＭ、スクロース１０％が含まれ、ｐＨは６．０である。別の具体的な例では、ＩＭＡ−６３８抗体製剤には、ＩＭＡ−６３８抗体５０ｍｇ／ｍｌ、塩化カルシウムまたは塩化マグネシウム５ｍＭ、ヒスチジン１０ｍＭ、スクロース１０％が含まれ、ｐＨは６．０である。さらに別の具体的な例では、ＩＭＡ−６３８抗体製剤には、ＩＭＡ−６３８抗体１００ｍｇ／ｍｌ、塩化カルシウムまたは塩化マグネシウム１０ｍＭ、ヒスチジン２０ｍＭ、スクロース１０％が含まれ、ｐＨは６．０である。
【００５０】
保存法
本明細書で記載した低粘度タンパク質製剤は、当業者に公知の任意の適切な方法によって保存することができる。保存用の低粘度製剤の調製法の非限定的な例には、タンパク質製剤の凍結、凍結乾燥および噴霧乾燥が含まれる。
【００５１】
低粘度製剤は保存のために凍結することもある。したがって、製剤は、凍結解凍過程を行う場合を含めて、このような条件下で比較的安定であることが望ましい。製剤の凍結保存への適切さを決定する１方法は、試料製剤に少なくとも２回、例えば、３回から１０回（例えば、−２０℃または−８０℃において）凍結（例えば、室温で急速解凍するか、または氷上でゆっくり解凍することによって）解凍を繰り返し、凍結解凍過程後蓄積するＬＭＷ種および／またはＨＭＷ種の量を測定し、凍結解凍過程前の試料中に存在するＬＭＷ種またはＨＭＷ種の量と比較することである。ＬＭＷ種またはＨＭＷ種の増加は、製剤の一部として保存されたタンパク質の安定性の低下を示している。サイズ排除高速液体クロマトグラフィー（ＳＥＣ−ＨＰＬＣ）を使用して、ＬＭＷおよびＨＭＷ種の存在を測定することができる。適切な製剤は、所望しないＨＭＷ種またはＬＭＷ種を蓄積してもよいが、ＨＭＷ種またはＬＭＷ種の存在が製剤を企図する用途に適さなくする範囲であってはならない。
【００５２】
製剤を液体として保存する場合もある。したがって、液体製剤は、様々な温度を含めて、このような条件下で比較的安定であることが望ましい。液体保存への製剤の適合性を決定する一方法は、数種の温度（例えば、２〜８℃、１５℃、２０℃、２５℃、３０℃、３５℃、４０℃および５０℃）で試料製剤を保存し、経時的に蓄積するＨＭＷ種および／またはＬＭＷ種の量（例えば、割合の変化）をモニターすることである。さらに、タンパク質の電荷プロファイルは、陽イオン交換高速液体クロマトグラフィー（ＣＥＸ−ＨＰＬＣ）によってモニターすることができる。
【００５３】
一般的に、高分子量種または低分子量種の割合は、測定法および測定されるパラメータに適しているので、製剤中の総タンパク質含量の割合として、または経時的な（すなわち、保存中の）割合増加の変化として測定される。一般的に、また非限定的な例では、高分子量種または低分子量種のタンパク質の低粘度製剤中の割合の変化は、測定したパラメータ（例えば、時間、温度、製剤化、凍結乾燥または振盪中の他の化合物）に関して１０％以下、例えば、約８％以下、約５％以下、または約３％以下である。
【００５４】
あるいは、製剤は凍結乾燥後に保存することができる。本明細書で使用した「凍結乾燥」という用語は、乾燥する物質をまず凍結し、その後真空環境で昇華することによって氷または凍結した溶媒を除去するプロセスを意味する。賦形剤（例えば、凍結乾燥保護物質）を、凍結乾燥製品の保存時の安定性を高めるために、凍結乾燥する製剤に含めることができる。本明細書で使用した「復元製剤」という用語は、タンパク質が希釈剤中に分散されるように凍結乾燥タンパク質製剤を希釈剤に溶解することによって調製した製剤を意味する。本明細書では「希釈剤」という用語は、薬学的に許容され（ヒトに投与しても安全で、非毒性である）、液体製剤、例えば、凍結乾燥後に復元された製剤を調製するために有用な物質である。希釈剤の非限定的な例には、滅菌水、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、ｐＨ緩衝溶液（例えば、リン酸緩衝生理食塩水）、滅菌生理食塩水溶液、リンゲル液、デキストロース溶液、塩および／または緩衝剤の水溶液が含まれる。
【００５５】
凍結乾燥後の製剤のタンパク質成分の安定性について低粘度製剤を試験することは、製剤の安定性を測定するのに有用である。この方法は、試料製剤を凍結する代わりに凍結乾燥し、希釈剤を使用して復元し、復元製剤のＬＭＷ種および／またはＨＭＷ種の存在について試験すること以外は凍結について前述した方法と同様である。凍結乾燥しなかった対応する試料製剤と比較して、凍結乾燥した試料中のＬＭＷ種またはＨＭＷ種の増加は、凍結乾燥試料における安定性の低下を示唆している。
【００５６】
製剤を噴霧乾燥し、その後保存する場合もある。噴霧乾燥のために、液体製剤を乾燥ガス流の存在下でエアロゾル化する。水分を製剤液滴からガス流に除去すると、薬物製剤の乾燥粒子が生じる。（１）噴霧乾燥脱水中においてタンパク質を保護し、（２）噴霧乾燥後の保存中においてタンパク質を保護し、かつ／または（３）エアロゾル化に適した溶液特性をもたらすために、賦形剤を製剤中に含めてよい。この方法は、試料製剤を凍結する代わりに噴霧乾燥し、希釈剤中に復元し、復元製剤のＬＭＷ種および／またはＨＭＷ種の存在について試験すること以外は凍結について前述したものと同様である。噴霧乾燥しなかった対応する試料製剤と比較して、噴霧乾燥した試料中のＬＭＷ種またはＨＭＷ種の増加は、噴霧乾燥試料における安定性の低下を示唆している。
【００５７】
治療方法
本明細書で記載した低粘度製剤は、それらを必要とする患者の疾患または障害の治療および／または予防における医薬組成物として有用である。「治療」という用語は、治療的処置および予防的または防御的処置の両方を意味する。治療には、障害、障害の症状または障害になりやすい素因を治療、治癒、軽減、除去、改変、回復、緩和、改善するか、または影響を及ぼす目的で、障害、障害の症状を有するか、障害の危険性があるか、または障害になりやすい素因がある患者の体、単離組織、または細胞への低粘度製剤の適用または投与が含まれる。「治療を必要とする」ものには、既に障害を有するもの、ならびに予防すべき障害のあるものが含まれる。「障害」という用語は、本明細書で記載したタンパク質製剤による治療が有益な任意の状態のことである。これには、対象（患者）を問題の障害に罹りやすくする病理学的状態を含む慢性および急性の障害または疾患が含まれる。本明細書で記載した製剤を使用して治療する障害の非限定的例には、自己免疫疾患、炎症性障害、筋肉消耗性障害、アレルギー、癌、筋ジストロフィー、筋肉減少症、悪液質、ＩＩ型糖尿病、関節リウマチ、クローン病、乾癬、乾癬性関節炎、喘息、皮膚炎、アレルギー性鼻炎、慢性閉塞性肺疾患、好酸球増加症、線維症および粘液産生過剰が含まれる。
【００５８】
一実施形態では、医薬組成物としての使用に適した低粘度製剤には、抗ミオスタチン抗体および粘度低下剤が含まれる。一実施形態では、抗ミオスタチン抗体はＭＹＯ−０２９である。その他の実施形態では、抗ミオスタチン抗体はＭＹＯ−０２２またはＭＹＯ−０２８である。抗ミオスタチン抗体は一般的に、製剤中における濃度は約０．５ｍｇ／ｍｌと約３００ｍｇ／ｍｌの間である。別の実施形態では、粘度低下剤の医薬組成物中における最終濃度は、約０．５ｍＭと２０ｍＭの間である。別の実施形態では、粘度低下剤の医薬組成物中における最終濃度は、約０．５ｍＭと１４ｍＭの間である。別の実施形態では、医薬組成物は抗ミオスタチン抗体、粘度低下剤および緩衝剤を含み、製剤のｐＨは約５．５と約６．５の間である。本明細書で記載した医薬品組成物はまた、その他のタンパク質、薬物および／または賦形剤を含有してよい。特に、問題となる障害の治療に有用なその他のタンパク質または物質を製剤に添加することができる。抗ミオスタチン抗体を含有する医薬組成物は、限定はしないが、筋肉消耗性障害、筋ジストロフィー、筋肉減少症、悪液質およびＩＩ型糖尿病などの障害の治療または予防に有用である。
【００５９】
別の実施形態では、医薬組成物は、抗ＩＬ−１２抗体および粘度低下製剤を含む。一実施形態では、抗ＩＬ−１２抗体はＪ６９５である。抗ＩＬ−１２抗体は一般的に、製剤中における濃度は約０．５ｍｇ／ｍｌと約３００ｍｇ／ｍｌの間である。別の実施形態では、粘度低下剤の医薬組成物中における最終濃度は、約０．５ｍＭと２０ｍＭの間である。別の実施形態では、粘度低下剤の医薬組成物中における最終濃度は、約０．５ｍＭと１４ｍＭの間である。別の実施形態では、医薬組成物は抗ＩＬ−１２抗体、粘度低下剤および緩衝剤を含み、製剤のｐＨは約５．５と約６．５の間である。本明細書で記載した医薬品組成物はまた、その他のタンパク質、薬物および／または賦形剤を含有してよい。特に、問題となる障害の治療に有用なその他のタンパク質または物質を製剤に添加することができる。抗ＩＬ−１２抗体を含有する医薬組成物は、限定はしないが、自己免疫疾患、炎症性障害、関節リウマチ、クローン病、乾癬および乾癬性関節炎などの障害の治療または予防に有用である。
【００６０】
別の実施形態では、医薬組成物は、抗ＩＬ−１３抗体および粘度低下製剤を含む。一実施形態では、抗ＩＬ−１３抗体はＩＭＡ−６３８である。抗ＩＬ−１３抗体は一般的に、製剤中における濃度は約０．５ｍｇ／ｍｌと約３００ｍｇ／ｍｌの間である。別の実施形態では、粘度低下剤の医薬組成物中における最終濃度は、約０．５ｍＭと２０ｍＭの間である。別の実施形態では、粘度低下剤の医薬組成物中における最終濃度は、約０．５ｍＭと１４ｍＭの間である。別の実施形態では、医薬組成物は抗ＩＬ−１３抗体、粘度低下剤および緩衝剤を含み、製剤のｐＨは約５．５と約６．５の間である。本明細書で記載した医薬品組成物はまた、その他のタンパク質、薬物および／または賦形剤を含有してよい。特に、問題となる障害の治療に有用なその他のタンパク質または物質を製剤に添加することができる。抗ＩＬ−１３抗体を含有する医薬組成物は、限定はしないが、喘息性障害、アトピー性疾患、慢性閉塞性肺疾患、気管炎症が関与する症状、好酸球増加症、線維症および粘液産生過剰症、炎症状態、自己免疫状態、腫瘍または癌およびウイルス感染などの障害の治療または予防に有用である。
【００６１】
投与
本明細書で記載した低粘度製剤は、当業界で公知の方法を使用して、例えば、皮下、静脈内、腹腔内、筋肉内、動脈内、病巣内もしくは関節内経路による注射もしくは注入などの適切な方法での単回もしくは複数回の大量瞬時投与または長期間にわたる注入、局所投与、吸入あるいは持続放出手段または徐放手段によって、治療を必要とする対象に投与することができる。製剤を凍結乾燥する場合、投与前に、凍結乾燥した材料をまず適切な液体で復元する。凍結乾燥した材料を、例えば、ＢＷＦＩ、リン酸緩衝生理食塩水、または凍結乾燥前のタンパク質が入った同様の製剤で復元することができる。
【００６２】
非経口用組成物は、投与が容易で、投薬が均一となる投与単位形態に調製することができる。本明細書で使用した「投与単位形態」とは、治療する対象のための単位投与に適した物理的に分離された単位のことで、各単位は、選択された医薬担体と関連して所望する治療効果を生じるように計算された予め決定された量の活性化合物を含有する。
【００６３】
定量噴霧式吸入器などの吸入方法の場合、器具は、適切な量の製剤を送達するように設計される。吸入によって投与するために、化合物は、適切な噴射剤、例えば、二酸化炭素などのガスを含有する加圧容器もしくはディスペンサーまたは噴霧器からエアロゾルスプレーの形態で送達される。あるいは、吸入投与形態は、乾燥粉末吸入器を使用して乾燥粉末として提供することができる。
【００６４】
低粘度製剤はまた、例えば、コアセルベーション技術によって、もしくは界面重合化によって調製されたマイクロカプセル、例えば、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチン−マイクロカプセルおよびポリ−（メチルメタクリレート）マイクロカプセルのそれぞれ、コロイド状薬剤送達系（例えば、リポソーム、アルブミン小球体、マイクロエマルジョン、ナノ粒子およびナノカプセル）またはマクロエマルジョンに捕捉することができる。このような技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、２０版（前述）に開示されている。
【００６５】
本明細書で記載したタンパク質製剤の持続放出調製物も調製できる。持続放出調製物の適切な例には、タンパク質製剤を含有する固形疎水性重合体の半透過性基質が含まれる。持続放出基質の例には、ポリエステル、ハイドロゲル（例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）またはポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド、Ｌ−グルタミン酸とγ−エチル−Ｌ−グルタメートの共重合体、非分解性エチレン−ビニルアセテート、分解性乳酸−グリコール酸共重合体およびポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸が含まれる。本明細書で記載したタンパク質の持続放出製剤は、例えば、ポリ乳酸グリコール酸共重合体（ＰＬＧＡ）を使用して、その生体適合性および広範囲の生分解性特性によって開発された。ＰＬＧＡ、乳酸およびグリコール酸の分解産物は、ヒト体内で迅速に除去され得る。さらに、この重合体の分解性は、その分子量および組成に応じて数月から数年に調節することができる。リポソーム組成物はまた、本明細書で開示したタンパク質または抗体を製剤化するために使用することができる。
【００６６】
投与
製剤の毒性および治療効果は、当業界で公知の薬学的方法によって、例えば、細胞培養物または実験動物を使用して、例えば、ＬＤ５０（集団の５０％が致死する用量）およびＥＤ５０（集団の５０％に治療効果のある用量）を測定して、測定することができる。毒性と治療効果の間の用量比は、治療係数であり、ＬＤ５０／ＥＤ５０として表すことができる。
【００６７】
細胞培養測定法および動物実験から得られたデータは、ヒトで用いる様々な投薬量の製剤化に使用することができる。このような製剤の投薬量は一般的に、ほとんど、または全く毒性の無いＥＤ５０を含む循環濃度の範囲内である。投薬量は、使用した剤形および利用する投与経路に応じて、この範囲内で変化させることができる。本発明の方法で使用した任意の製剤化のために、治療有効量を細胞培養測定法から最初に概算することができる。用量は、細胞培養物で測定したようなＩＣ５０（すなわち、症状の最大阻害の半分を実現する試験化合物の濃度）を含む循環血漿濃度範囲を実現するために、動物モデルで処方することができる。このような情報は、ヒトにおいて有用な用量をより正確に決定するために使用することができる。血漿中のレベルは、例えば、高速液体クロマトグラフィーによって測定することができる。
【００６８】
製剤のタンパク質の適切な投薬量は、治療する障害の種類、障害の重症度および経過、薬剤の投与が予防目的であるか、または治療目的であるか、先行治療、患者の既往症および薬剤に対する応答ならびに主治医の自由裁量に左右される。製剤は一般的に、投薬量が約０．１ｍｇタンパク質／ｋｇ体重から１００ｍｇタンパク質／ｋｇ体重の間となるように送達される。製剤は、一度に、または一連の治療によって患者に投与される。一実施形態では、ミオスタチン抗体（例えば、ＭＹＯ−２２、ＭＹＯ−２８、ＭＹＯ−０２９）製剤は、それらを必要とする患者に、１ｍｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇ体重の投薬量で送達される。別の実施形態では、ＩＬ−１２抗体製剤は、それらを必要とする患者に、１ｍｇ／ｋｇから５ｍｇ／ｋｇ体重の投薬量で送達される。他の実施形態では、ＩＬ−１３抗体製剤は、それらを必要とする患者に、約０．５ｍｇ／ｋｇから約５ｍｇ／ｋｇ患者体重の投薬量で送達される。
【００６９】
ｉｎ ｖｉｔｒｏ投与で使用される製剤は、滅菌されていなければならない。製剤は、液体の製剤化または凍結乾燥および復元の前後に、例えば、滅菌濾過膜による濾過によって滅菌することができる。本明細書で開示した治療組成物は一般的に、滅菌処理口を有する容器、例えば、静脈内溶液バッグ、または皮下注射針によって貫通可能な栓を有するバイアルに入れる。
【００７０】
製造に関する物品
別の実施形態では、本明細書で記載した製剤を含有し、その使用指示書を一般的に提供する製造に関する物品が提供される。製造に関する物品には、製剤を含有するために適した容器が含まれる。適切な容器には、限定はしないが、瓶、バイアル（例えば、２室式バイアル）、シリンジ（例えば、１室または２室式シリンジ）、試験管、噴霧器、吸入器（例えば、定量噴霧式吸入器または乾燥粉末吸入器）または貯蔵物が含まれる。容器は、様々な材料、例えば、ガラス、金属またはプラスティック（例えば、ポリカーボネート、ポリスチレン、ポリプロピレン）から形成することができる。容器は、製剤を保持し、ラベルが貼ってあるか、付随しており、この容器には復元および／または使用のための指示を表示することができる。このラベルはさらに、製剤が皮下投与のために有用であるか、また企図されていることを表示することができる。製剤を保持している容器は、製剤の投与を繰り返すことが可能な（例えば、２〜６回）多重使用バイアルであってよい。製造に関する物品はさらに、適切な希釈剤（例えば、ＷＦＩ、ＮａＣｌ０．９％、ＢＷＦＩまたはリン酸緩衝生理食塩水）を含む第２の容器を含むことができる。製造に関する物品がタンパク質製剤の凍結乾燥物を含む場合、希釈剤と凍結乾燥製剤を混合することによって、復元製剤中において一般的に少なくとも２０ｍｇ／ｍｌの最終タンパク質濃度がもたらされる。製剤に関する物品はさらに、その他の緩衝剤、希釈剤、フィルター、針、シリンジおよび使用指示書を備えたパッケージ挿入物を含む、商用および使用者の立場から所望されるその他の材料を含むことができる。
【００７１】
本発明は、以下の実施例によってさらに例示される。これらの実施例は、例示の目的のためのみに提供される。これらは、いかなる方法によっても本発明の範囲および内容を制限するものではない。
【実施例】
【００７２】
（実施例１）
抗体製剤の粘度
抗β−アミロイドペプチド（抗ＡＢ）、抗ＩＬ−１３、抗ＩＬ−１２（Ｊ６９５）および抗ミオスタチン（ＭＹＯ−０２９）抗体は、表１に記載したように製剤化した。これらの抗体製剤の粘度は、Ａｎｔｏｎ Ｐａａｒ Ｐｈｙｓｉｃａ ＭＣＲ３０１コーンプレートレオメータを使用して測定した。具体的には、ＣＰ２５−１（直径２４．９７１ｍｍ、角度１．００２゜）コーンを測定全てに使用し、剪断速度は１００秒間常に８９８ １／ｓであった。測定は１０秒間隔で行った。粘度測定は、内蔵式ペルティエ温度制御単位を使用して、４℃および２５℃の両方で実施した。プレートに載置する液体試料は９０μｌであった。各試料は、３連で分析した。
【００７３】
以下の表１には、様々な濃度および様々な製剤中における様々な抗体の粘度を挙げる。
【００７４】
【表１】
【００７５】
表１に示したデータは、抗ミオスタチン（ＭＹＯ−０２９）の粘度が表に挙げたその他の抗体と比較して著しく高いことを示している。抗体全ての粘度は、４℃で増加した。この増加は、ＭＹＯ−０２９では相対的にかなり高い。
【００７６】
（実施例２）
ＭＹＯ−０２９抗体製剤の粘度に対する様々な塩の影響
ＭＹＯ−０２９抗体を、濃度７３ｍｇ／ｍｌで、ヒスチジン１０ｍＭ、スクロース２％、ｐＨ６．０において製剤化した。塩（例えば、塩化カルシウム、塩化マグネシウム、塩化ナトリウムおよびリン酸二水素ナトリウム）の濃縮溶液を、ピペットを使用してＭＹＯ−０２９抗体製剤中に希釈した。ＭＹＯ−０２９抗体製剤の粘度に対するこれらの塩の影響を実施例１で説明したように測定した。これらのデータを図１に示す。
【００７７】
約５ｍＭから約２０ｍＭまでの濃度範囲のＭｇＣｌ２およびＣａＣｌ２はいずれも、ＭＹＯ−０２９抗体製剤の粘度を著しく低下させた。一方、ＮａＣｌおよびＮａＨ２ＳＯ４は、この範囲ではほとんど影響を及ぼさなかった。
【００７８】
したがって、約５ｍＭから約２０ｍＭまでの濃度の塩化カルシウムおよび塩化マグネシウムは、塩化ナトリウムおよび硫酸二水素ナトリウムとは異なり、ＭＹＯ−０２９抗体製剤の効果的な粘度低下剤である。
【００７９】
（実施例３）
Ｊ６９５抗体製剤の粘度に対する塩化カルシウムの影響
Ｊ６９５抗体製剤の粘度は、Ｊ６９５抗体の２種類の異なる濃度、すなわち、１００ｍｇ／ｍｌおよび３００ｍｇ／ｍｌで測定する。
【００８０】
高濃度のＪ６９５抗体製剤の粘度は、低濃度のＪ６９５抗体製剤の粘度よりも高くなるだろう。
【００８１】
塩化カルシウムは、最終濃度が約５ｍＭから２０ｍＭになるまで、３００ｍｇ／ｍｌのＪ６９５抗体製剤に添加する。この場合、抗体製剤の粘度は、塩化カルシウムを含まないＪ６９５製剤と比較して低下していることが予測される。
【００８２】
したがって、約５ｍＭから約２０ｍＭまでの濃度の塩化カルシウムは、Ｊ６９５抗体製剤のための粘度低下剤として効果的である。
【００８３】
（実施例４）
ＭＹＯ−０２８抗体製剤の粘度に対する塩化カルシウムの影響
別の抗ミオスタチン抗体、ＭＹＯ−０２８は、Ｃｅｎｔｒｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａｆｅｅ（登録商標）−４を使用して濃度９５ｍｇ／ｍＬまで濃縮した。塩化カルシウムを以下の表２に従ってＭＹＯ−０２８に添加した。
【００８４】
【表２】
【００８５】
ＭＹＯ−０２８をヒスチジン１０ｍＭ、スクロース５％、ｐＨ６．５において９５ｍｇ／ｍＬで製剤化した。ＣａＣｌ２溶液は、ヒスチジン１０ｍＭ、スクロース２％、ＣａＣｌ２ ２Ｍから構成される。緩衝溶液は、ヒスチジン１０ｍＭ、スクロース５％、ｐＨ６．５から構成される。
【００８６】
これらのＭＹＯ−０２８抗体製剤の粘度は、実施例１で記載したのと同様のレオメータ法を使用し、留去を防止するために溶媒捕捉装置をさらに使用して、プレート上にＭＹＯ−０２８の液体試料１００μｌを載置して測定し、試験は室温で実施した。
【００８７】
これらの実験のデータを図２に示す。
【００８８】
ＣａＣｌ２を添加すると、ＣａＣｌ２２５ｍＭおよび５０ｍＭでのＭＹＯ−０２８抗体製剤の粘度は、ＣａＣｌ２を含まないＭＹＯ−０２８製剤と比較して低下した。これらのデータは、タンパク質製剤の粘度を低下させる、例えば、低粘度抗体製剤を製剤化するための薬剤として使用するためのＣａＣｌ２の適合性を示している。
【００８９】
（実施例５）
ＩＭＡ−６３８抗体製剤の粘度に対する塩化カルシウムの影響
ＩＭＡ−６３８抗体製剤の粘度に対する塩化カルシウムの影響を試験するために、様々な量の塩化カルシウムをピペットでＩＬ−１３抗体、ＩＭＡ−６３８の一定量に添加した。ＩＭＡ−６３８抗体の一定量のタンパク質濃度は約１５０ｍｇ／ｍＬであった。図３は、ＩＭＡ−６３８抗体製剤の粘度に対する塩化カルシウムの影響を図示している。
【００９０】
ＩＭＡ−６３８の粘度は、ＭＹＯ−０２９で認められたのと同様の粘度の低下は示さなかった。これらのデータは、タンパク質製剤と使用するために適切な粘度低下剤の同定方法を示している。
【００９１】
（実施例６）
ＭＹＯ−０２９抗体の安定性に対する塩化カルシウムの影響
化合物（すなわち、粘度低下剤、例えば、ＣａＣｌ２）のタンパク質製剤への添加は、凍結解凍によって引き起こされる負荷に対する分子の安定性に影響を及ぼす可能性がある。この影響は、凍結解凍中のタンパク質の安定性に有害であるか、有益であるか、または影響を与えない可能性がある。
【００９２】
凍結解凍によって引き起こされるＭＹＯ−０２９抗体の分解に対する薬剤（すなわち、ＣａＣｌ２）の影響を評価するために、ＣａＣｌ２５ｍＭの存在下または非存在下で、この分子を−８０℃および３７℃で１０回凍結融解を繰り返し行った。ＭＹＯ−０２９薬剤物質は、限外濾過およびダイアフィルトレーションによって、塩化カルシウムの存在下または非存在下で、ヒスチジン１０ｍＭ、スクロース２％中に製剤化した。最終タンパク質濃度は、約７５ｍｇ／ｍＬであった。一定量２０μｌを−８０℃で凍結し、室温で解凍した。５回および１０回の凍結解凍のために、これを繰り返した。試料を製剤用緩衝液で２５倍に希釈し、タンパク質濃度は２８０ｎｍの吸光度を測定することによって、高分子量生成物の割合（％ＨＭＷ）はＳＥＣ−ＨＰＬＣによって分析した。
【００９３】
凍結解凍によって引き起こされる分解の影響は、（ｉ）タンパク質回収率（２８０ｎｍでの吸光度）、および（ｉｉ）サイズ排除高速液体クロマトグラフィー（ＳＥＣ−ＨＰＬＣ）によって測定される高分子量（％ＨＭＷ）形成の割合によって評価した。ＨＭＷ形成は、この分子の最も一般的な分解経路である。これらの研究の結果を図４Ａおよび図４Ｂに示す。
【００９４】
ＣａＣｌ２を含まない対応する対照試料と比較して、製剤にＣａＣｌ２５ｍＭを添加しても、タンパク質回収または％ＨＭＷ形成には何ら影響はなかった。したがって、塩化カルシウムの添加は、ＭＹＯ−０２９抗体製剤の安定性には影響を及ぼさないようである。これは、タンパク質製剤、例えば、低粘度抗体製剤において粘度低下剤として使用するためのＣａＣｌ２の適合性を示している。
【００９５】
（実施例７）
ＭＹＯ−０２９抗体製剤の安定性に対する塩化カルシウムの影響
ＣａＣｌ２のタンパク質製剤への添加は、長期にわたる分子の液体安定性に影響を及ぼす可能性がある。この影響は、保存中のタンパク質の安定性に有害であるか、有益であるか、または影響を与えない可能性がある。
【００９６】
熱誘導分解に対するＭＹＯ−０２９の液体安定性に対するこの薬剤の影響を評価するために、ＭＹＯ−０２９を含有する製剤を５０℃で７日間まで保存した。一定量を様々な時点で採取し、２８０ｎｍの吸光度によってタンパク質濃度を分析し、％ＨＭＷはＳＥＣ−ＨＰＬＣによって分析した。これらのデータを図５Ａおよび図５Ｂに示す。
【００９７】
対照試料と比較して、ＣａＣｌ２の製剤への添加は、５０℃で保存した液体タンパク質の安定性に悪い影響は及ぼさなかった。薬剤物質におけるＨＭＷの割合はまた、ＣａＣｌ２を含有する材料ではわずかに少ないようであった。これらのデータはさらに、粘度低下剤としてのＣａＣｌ２の使用の適合性を示している。これらはまた、例えば、薬剤が製剤中におけるタンパク質の安定性に影響を及ぼすかどうかに関して、タンパク質製剤の粘度を低下させる薬剤の適合性を決定する方法を示している。
【００９８】
（実施例８）
凍結乾燥したＭＹＯ−０２９の安定性に対する塩化カルシウムの影響
ＣａＣｌ２などの薬剤のタンパク質製剤への添加は、長期にわたってタンパク質の凍結乾燥剤形に影響を及ぼす可能性がある。この影響は、保存中のタンパク質の安定性に有害であるか、有益であるか、または影響を与えない可能性がある。
【００９９】
凍結乾燥したＭＹＯ−０２９の安定性に対するこの賦形剤の影響を評価するために、この分子を含有する製剤をＣａＣｌ２５ｍＭと共に、または共にせずに（対照）凍結乾燥し、５０℃および４℃で４週間保存を行った。バイアルを週に１度取り出して、２８０℃の吸光度によってタンパク質濃度を、ＳＥＣ−ＨＰＬＣによってＨＭＷの割合を、陽イオン交換高速液体クロマトグラフィー（ＣＥＸ−ＨＰＬＣ）によって電荷分布を分析した。バイアルから取り出した量および粘度（１時点のみ）も測定した。
【０１００】
Ａ．復元した薬剤製品の粘度
ＭＹＯ−０２９薬剤製品の約１５０ｍｇ／ｍＬでの粘度（実施例１と実質的に同様の方法で測定）は、塩化カルシウム５ｍＭが製剤中に存在すると低下する。
【０１０１】
Ｂ．バイアルから取り出す量
１ｍＬシリンジおよび２１Ｇ針でバイアルから取り出すことができる薬剤製品の量は、ＣａＣｌ２が製剤中に存在すると改善される。
【０１０２】
Ｃ．タンパク質濃度
対照と比較して、製剤にＣａＣｌ２を添加してもタンパク質回収率に影響はない。
【０１０３】
Ｄ．高分子量
ＣａＣｌ２５ｍＭは、４℃で４週間保存した後に形成されるＨＭＷ種の割合にあまり大きな影響を及ぼさないだろう。しかし、５０℃では、ＨＭＷ形成率は、対照と比較して著しく低下することが予測される。
【０１０４】
Ｅ．電荷分布
安定時点は、ＣＥＸ−ＨＰＬＣ、タンパク質中の電荷の違いを研究するために使用されるクロマトグラフィー装置によって分析される。ＣＥＸ−ＨＰＬＣでは、負に荷電した分子は正に荷電し分子よりも早く溶出する。この方法を使用して、アスパラギン残基のアスパラギン酸またはイソアスパラギン酸への脱アミド化を検出する。脱アミド化によって、タンパク質の正味の負の電荷の増加が生じ、ＨＰＬＣカラムから早く溶出するだろう。この実験では、塩化カルシウムの影響がタンパク質分解に及び、対照で観察されたものとは異なる電荷の変化が生じる。塩化カルシウムを含まない対照と比較して、同様の電荷変化が長期にわたって生じることが予測される。したがって、ＣａＣｌ２は、両方の保存温度でＭＹＯ−０２９の電荷分布に影響を及ぼさないことが予測される。
【０１０５】
要約すると、対照試料と比較して、ＣａＣｌ２の製剤への添加は、４℃および５０℃で保存した場合、凍結乾燥状態の塩化カルシウムを含まない実験対照に対して、製剤中のタンパク質の安定性にあまり悪い影響は及ぼさないだろう。場合によって、ＣａＣｌ２はタンパク質の安定性に有益であることが見い出された。
【０１０６】
その他の実施形態
本発明はその詳細な説明に関連して説明されるが、前記の説明は例示のためであって本発明の範囲を限定するものではなく、添付の請求項の範囲によって定義されることを理解されたい。その他の態様、利点および変更は、以下の特許請求の範囲内にある。
【図面の簡単な説明】
【０１０７】
【図１】様々な塩の濃度を増加させて抗ミオスタチン（ＭＹＯ−０２９）抗体製剤の粘度に対する影響を測定するために実施した実験の結果を示したグラフである。
【図２】塩化カルシウムの濃度を増加させて抗ミオスタチン（ＭＹＯ−０２８）抗体製剤の粘度に対する影響を測定するために実施した実験の結果を示した棒グラフである。
【図３】塩化カルシウムの濃度を増加させて抗ＩＬ−１３（ＩＭＡ−６３８）抗体製剤の粘度に対する影響を測定するために実施した実験の結果を示すグラフである。
【図４Ａ】塩化カルシウムの存在下または非存在下で、抗ミオスタチン（ＭＹＯ−０２９）抗体の凍結解凍誘導性分解の影響を試験するために実施した実験の結果を示した棒グラフである。分解は、２８０ｎｍでの吸光度を計測することによって測定されたタンパク質回収率によって評価された。
【図４Ｂ】塩化カルシウムの存在下または非存在下で、抗ミオスタチン（ＭＹＯ−０２９）抗体の凍結解凍誘導性分解の影響を試験するために実施した実験の結果を示した棒グラフである。分解は、サイズ排除高速液体クロマトグラフィー（ＳＥＣ−ＨＰＬＣ）によって測定された高分子重量種（％ＨＭＷ）形成の割合によって評価された。
【図５Ａ】塩化カルシウムの存在または非存在（対照）の、４０℃で７日間まで保存した抗ミオスタチン（ＭＹＯ−０２９）抗体の液体安定性に対する影響を試験するために実施した実験の結果を示した棒グラフである。ＭＹＯ−０２９抗体の液体安定性は、２８０ｎｍでの吸光度を計測することによって決定された。
【図５Ｂ】塩化カルシウムの存在または非存在（対照）の、４０℃で７日間まで保存した抗ミオスタチン（ＭＹＯ−０２９）抗体の液体安定性に対する影響を試験するために実施した実験の結果を示した棒グラフである。ＭＹＯ−０２９抗体の液体安定性は、ＳＥＣ−ＨＰＬＣによって測定されたようにＨＭＷ形成を測定することによって決定された。
【図６】ＭＹＯ−０２８抗体重鎖（配列番号１）および軽鎖（配列番号２）のアミノ酸配列を表した図である。
【図７】ＭＹＯ−０２９抗体重鎖（配列番号３）および軽鎖（配列番号４）のアミノ酸配列を表した図である。
【図８】Ｊ６９５抗体重鎖（配列番号５）および軽鎖（配列番号６）のアミノ酸配列を表した図である。
【図９】ＩＭＡ−６３８抗体重鎖（配列番号７）および軽鎖（配列番号８）のアミノ酸配列を表した図である。重鎖ＤＮＡ配列によってコードされた最後のアミノ酸残基、Ｌｙｓ４４８は、ＩＭＡ−６３８の成熟した分泌型に少量で認められるのみで、おそらくＣＨＯ細胞性プロテアーゼによって細胞内でプロセシングされる間に大半のモノクローナル抗体から除去されるのだろう。したがって、ＩＭＡ−６３８重鎖のカルボキシ末端はＧｌｙ４４７である。カルボキシ末端リシンのプロセシングは、組換え体および血漿由来抗体で認められ、それらの機能に影響を及ぼさないと考えられる。
【技術分野】
【０００１】
この分野は、タンパク質製剤、より詳細には、粘度の低下したタンパク質製剤に関する。
【０００２】
本出願は、本明細書に全体を参考として援用した２００５年１２月２１日出願の米国仮出願第６０／７５２６６０号の優先権を主張する。
【背景技術】
【０００３】
生物工学をベースにした３７１種を上回る新薬が産業界では計画されている。このような生物工学をベースにした医薬品には、酵素、可溶性受容体、リガンド、血液タンパク質およびモノクローナル抗体などの治療用タンパク質が含まれる。タンパク質をベースにした治療、特にモノクローナル抗体をベースにした治療は、癌、アレルギー性疾患、喘息および臓器移植などの疾患を治療するための重要な方法となってきた。２００３年末には、１４種の抗体をベースにした治療が、様々なヒト疾患を治療するために米国食品医薬品局によって承認された。
【０００４】
抗体をベースにした治療は通常、定期的に投与され、注射には数ｍｇ／ｋｇの用量を必要とする。皮下注射は、これらの治療の一般的な投与経路である。皮下注射に使用するのは少量なので（通常１．０ｍＬ〜１．２ｍＬ）、高用量抗体治療では、この投与経路には高濃度のタンパク質製剤（例えば、５０ｍｇ／ｍｌ〜３００ｍｇ／ｍｌ）が必要である。
【０００５】
高いタンパク質濃度は、タンパク質の物理的および化学的安定性に関する難題であり、タンパク質製剤の製造、保存および送達を困難にする。１つの問題は、タンパク質が加工および／保存中に粒子を形成しやすいことで、さらに加工する間に操作を困難にする。この問題を回避するために、界面活性剤および／または糖類をタンパク質製剤に添加してきた。界面活性剤および糖類はタンパク質の粒子形成の程度を低下させるが、濃縮タンパク質製剤の操作および投与に関連した別の問題、すなわち、粘度の高さには対処できない。実際に、糖類は、タンパク質内またはタンパク質間の分子間相互作用を増強し、タンパク質製剤の粘度を高める可能性がある。
【０００６】
タンパク質製剤の粘度が高いと、患者に薬剤を送達する間にプロセシングされ、不利益な結果をもたらす。したがって、製造、保存および投与に適した適度に粘度の低い比較的高濃度のタンパク質製剤を開発することが当業界では必要とされている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本出願は、適切な濃度の粘度低下剤を含まない対応するタンパク質製剤と比較して粘度が低下したタンパク質製剤およびこのような粘度の低下したタンパク質製剤（低粘度製剤）の製造方法に関する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
一態様では、本発明は、タンパク質製剤に粘度低下剤を添加し、それによって粘度低下剤を含まないタンパク質製剤と比較してタンパク質製剤の粘度を低下させることにより、タンパク質製剤の粘度を低下させる方法に関する。一実施形態では、この方法は、粘度低下剤を添加する前にタンパク質製剤の粘度を測定することを含む。別の実施形態では、この方法は、粘度低下剤添加後にタンパク質製剤の粘度を測定することを含む。さらに別の実施形態では、この方法は、粘度低下剤の添加前後にタンパク質製剤の粘度を測定することを含む。ある実施形態では、粘度低下剤は、タンパク質製剤の粘度を、粘度低下剤を含まずに製剤化された製剤の粘度と比較して少なくとも５％低下させる。
【０００９】
いくつかの実施形態では、粘度低下剤は塩化カルシウムまたは塩化マグネシウムである。粘度低下剤は、タンパク質製剤に悪い影響を与えないように低濃度で添加する。粘度低下剤は一般的に、最終濃度が約１ｍＭと約５０ｍＭの間となるようにタンパク質製剤に添加する。いくつかの実施形態では、粘度低下剤は、最終濃度が約５ｍＭと約２５ｍＭの間となるようにタンパク質製剤に添加する。ある実施形態では、粘度低下剤は、最終濃度が約１ｍＭと約２０ｍＭの間となるようにタンパク質製剤に添加する。ある実施形態では、粘度低下剤は、最終濃度が約０．５ｍＭと約１４ｍＭの間となるようにタンパク質製剤に添加する。別の実施形態では、タンパク質は、抗体、Ｉｇ融合タンパク質、受容体、リガンド、転写因子、酵素、またはその生物活性断片である。いくつかの実施形態では、タンパク質は抗ミオスタチン抗体、抗ＩＬ−１２抗体、または抗ＩＬ−１３抗体である。
【００１０】
別の態様では、本発明は、低粘度タンパク質製剤に関する。低粘度タンパク質製剤は、タンパク質、粘度低下剤および緩衝剤を含む。いくつかの実施形態では、粘度低下剤は塩化カルシウムまたは塩化マグネシウムである。粘度低下剤は一般的に、最終濃度が約１ｍＭと約５０ｍＭの間となるようにタンパク質製剤に添加する。いくつかの実施形態では、粘度低下剤は、最終濃度が約５ｍＭと約２５ｍＭの間となるようにタンパク質製剤に添加する。ある実施形態では、粘度低下剤は、最終濃度が約１ｍＭと約１５ｍＭの間となるようにタンパク質製剤に添加する。その他のある実施形態では、粘度低下剤は、最終濃度が約０．５ｍＭと約１４ｍＭの間となるようにタンパク質製剤に添加する。粘度低下剤を約０．５ｍＭから約５０ｍＭの間の濃度でタンパク質製剤に添加する場合、塩化ナトリウムおよび二硫酸ナトリウムは粘度低下剤として使用されない。タンパク質製剤のｐＨは一般的に、約５．５と約６．５の間である。ある実施形態では、タンパク質は、抗体、Ｉｇ融合タンパク質、受容体、リガンド、転写因子、酵素、またはその生物活性断片である。ある実施形態では、タンパク質製剤はキットとして提供される。このようなキットには、タンパク質製剤を使用するための指示書を含めることができる。
【００１１】
ある実施形態では、低粘度タンパク質製剤は、低粘度抗ミオスタチン抗体製剤である。一実施形態では、抗ミオスタチン抗体はモノクローナル抗体である。別の実施形態では、抗ミオスタチン抗体は、ヒト化モノクローナル抗体（例えば、部分的にヒト化した、または完全にヒト化したモノクローナル抗体）である。ある実施形態では、抗ミオスタチン抗体はＭＹＯ−０２２、ＭＹＯ−０２８またはＭＹＯ−０２９である。抗ミオスタチン抗体は一般的に、約２５ｍｇ／ｍｌから約４００ｍｇ／ｍｌの間の濃度で使用される。粘度低下剤は一般的に、最終濃度が約１ｍＭと約５０ｍＭの間となるように低粘度抗ミオスタチン抗体製剤に添加する。いくつかの実施形態では、粘度低下剤は、最終濃度が約５ｍＭと約２５ｍＭの間となるように抗ミオスタチン抗体に添加する。ある実施形態では、粘度低下剤は、最終濃度が約１ｍＭと約１５ｍＭの間となるように抗ミオスタチン抗体製剤に添加する。ある実施形態では、粘度低下剤は、最終濃度が０．５ｍＭと１４ｍＭの間となるように抗ミオスタチン抗体製剤に添加する。粘度低下剤を約０．５ｍＭから約５０ｍＭの間の濃度で抗ミオスタチン抗体製剤に添加する場合、塩化ナトリウムおよび二硫酸ナトリウムは粘度低下剤として使用されない。低粘度抗ミオスタチン抗体製剤のｐＨは一般的に、約５．５と約６．５の間である。一実施形態では、ヒスチジンは低粘度ミオスタチン抗体製剤を緩衝化するために使用される。低粘度ミオスタチン抗体製剤はまた、１種または複数の凍結保護物質、１種または複数の界面活性剤、１種または複数の抗酸化剤、あるいはそれらの組合せを含むことができる。いくつかの実施形態では、低粘度抗ミオスタチン製剤は、復元した製剤である。ミオスタチン抗体は、医薬組成物として本明細書で記載した通りに製剤化することができ、限定はしないが、筋ジストロフィー、筋肉減少症、悪液質およびＩＩ型糖尿病などの障害を治療するために使用される。ある実施形態では、低粘度抗ミオスタチン抗体製剤はキットとして提供される。このようなキットには、抗体製剤を使用するための指示書を含めることができる。
【００１２】
ある実施形態では、低粘度タンパク質製剤は、低粘度抗ＩＬ−１２抗体製剤である。一実施形態では、抗ＩＬ−１２抗体はモノクローナル抗体である。別の実施形態では、抗ＩＬ−１２抗体は、ヒト化モノクローナル抗体（例えば、部分的にヒト化した、または完全にヒト化したモノクローナル抗体）である。ある実施形態では、抗ＩＬ−１２抗体はＪ６９５である。抗ＩＬ−１２抗体は一般的に、製剤中において約２５ｍｇ／ｍｌから約４００ｍｇ／ｍｌの間の濃度で使用される。粘度低下剤は一般的に、最終濃度が約１ｍＭと約５０ｍＭの間となるように抗ＩＬ−１２抗体製剤に添加する。いくつかの実施形態では、粘度低下剤は、最終濃度が約５ｍＭと約２５ｍＭの間となるように抗ＩＬ−１２抗体製剤に添加する。ある実施形態では、粘度低下剤は、最終濃度が約１ｍＭと約１５ｍＭの間となるように抗ＩＬ−１２抗体製剤に添加する。その他のある実施形態では、粘度低下剤は、最終濃度が約０．５ｍＭと約１４ｍＭの間となるように抗ＩＬ−１２抗体製剤に添加する。粘度低下剤を約０．５ｍＭから約５０ｍＭの間の濃度で抗ＩＬ−１２抗体製剤に添加する場合、塩化ナトリウムおよび二硫酸ナトリウムは粘度低下剤として使用されない。低粘度抗ＩＬ−１２抗体製剤のｐＨは一般的に、約５．５と約６．５の間である。ある実施形態では、ヒスチジンは低粘度ＩＬ−１２抗体製剤において緩衝剤として使用される。低粘度抗ＩＬ−１２抗体製剤はまた、１種または複数の凍結保護物質、１種または複数の界面活性剤、１種または複数の抗酸化剤、あるいはそれらの組合せを含むことができる。いくつかの実施形態では、低粘度抗ＩＬ−１２抗体製剤は、復元された製剤である。抗ＩＬ−１２抗体は、医薬組成物として使用するために本明細書で記載した通りに製剤化することができ、限定はしないが、関節リウマチ、クローン病、乾癬および乾癬性関節炎などの障害を治療するために使用される。ある実施形態では、低粘度抗ＩＬ−１２抗体製剤はキットの一部として提供される。このようなキットには、抗ＩＬ−１２抗体製剤を使用するための指示書を含めることができる。
【００１３】
ある実施形態では、低粘度タンパク質製剤は、抗ＩＬ−１３抗体製剤である。一実施形態では、抗ＩＬ−１３抗体はモノクローナル抗体である。別の実施形態では、抗ＩＬ−１３抗体は、ヒト化モノクローナル抗体（例えば、部分的にヒト化した、または完全にヒト化している）である。ある実施形態では、抗ＩＬ−１３抗体はＩＭＡ−６３８である。抗ＩＬ−１３抗体は一般的に、製剤中において約２５ｍｇ／ｍｌから約４００ｍｇ／ｍｌの間の濃度で使用される。粘度低下剤は一般的に、低粘度抗ＩＬ−１３抗体製剤を製造するために、最終濃度が約１ｍＭと約５０ｍＭの間となるように添加する。いくつかの実施形態では、粘度低下剤は、最終濃度が約５ｍＭと約２５ｍＭの間となるように抗ＩＬ−１３抗体製剤に添加する。ある実施形態では、粘度低下剤は、最終濃度が約１ｍＭと約１５ｍＭの間となるように抗ＩＬ−１３抗体製剤に添加する。その他のある実施形態では、粘度低下剤は、最終濃度が約０．５ｍＭと約１４ｍＭの間となるように抗ＩＬ−１３抗体製剤に添加する。粘度低下剤を約０．５ｍＭから約５０ｍＭの間の濃度で抗ＩＬ−１３抗体製剤に添加する場合、塩化ナトリウムおよび二硫酸ナトリウムは粘度低下剤として使用されない。低粘度抗ＩＬ−１３抗体製剤のｐＨは一般的に、約５．５と約６．５の間である。一実施形態では、ヒスチジンは低粘度ＩＬ−１３抗体製剤において緩衝剤として使用される。低粘度抗ＩＬ−１３抗体製剤はまた、１種または複数の凍結保護物質、１種または複数の界面活性剤、１種または複数の抗酸化剤、あるいはそれらの組合せを含むことができる。いくつかの実施形態では、低粘度抗ＩＬ−１３製剤は、復元された製剤である。抗ＩＬ−１３抗体は、医薬組成物としての低粘度製剤に製剤化することができ、例えば、限定はしないが、呼吸障害（例えば、喘息）、アトピー障害（例えば、アレルギー性鼻炎）、皮膚（例えば、アトピー性皮膚炎）、胃腸器官（例えば、炎症性腸疾患（ＩＢＤ））の炎症および／または自己免疫症状、ならびに繊維性障害および癌障害を治療するために使用することができる。ある実施形態では、低粘度抗ＩＬ−１３抗体製剤はキットとして提供される。このようなキットには、低粘度抗ＩＬ−１３抗体製剤を使用するための指示書を含めることができる。
【００１４】
特に定義しなければ、本明細書で使用した技術的および科学的用語は全て、本発明が属する業界の当業者によって通常理解されるものと同様の意味を有する。本明細書で記載したものと類似または同等の方法および材料を本発明の実施または試験に使用することができるが、適切な方法および材料を以下に記載する。本明細書で記載した出版物、特許明細書、特許およびその他の参考文献は、全体を参考により援用する。さらに、材料、方法および実施例は、例示のためのみであって、限定するものではない。
【００１５】
本発明のその他の特性および利点は、詳細な説明、図面および特許請求の範囲から明らかとなるだろう。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
タンパク質製剤の粘度は、安定性、加工、保存に対して、薬剤として使用する場合にはタンパク質製剤の患者への薬剤送達に対して影響を及ぼす。このような影響には、限定はしないが、濃度ならびに限外濾過およびダイアフィルトレーションによる緩衝液交換（膜流束は粘度が増加するにつれて減少し、それによって加工時間がより長くなり得る）、滅菌濾過（粘稠な溶液を滅菌濾過するには長時間を必要とし、場合によっては、非常に粘稠な溶液は微小な孔の膜、例えば、０．２２μｍ膜を通過しない）、試料操作性（例えば、ピペッティングおよびシリンジへの吸い込みが困難である）、復元後の保存バイアルからの回収、安定性、皮下または筋肉内投与のための針通過が含まれる。
【００１７】
本明細書では、同定されたタンパク質製剤の粘度を低下させる方法を提供する。この方法は、粘度が低下したタンパク質製剤（「低粘度製剤」または「低粘度タンパク質製剤」）を調製するのに適している。これらの低粘度タンパク質製剤には、関心があるタンパク質および粘度低下剤が含まれる。
【００１８】
タンパク質製剤の粘度を低下させる方法
本明細書で使用した「粘度」という用語は、「運動力学的粘度」または「絶対粘度」であってよい。「運動力学的粘度」とは、重力の影響下での流体の流動抵抗の測定値である。同量の２種類の流体を同一のキャピラリー粘度計に入れ、重力によって流れさせる場合、粘稠な流体はキャピラリーを通過して流れるのに粘度の低い流体よりも長い時間がかかる。１種類の流体が完全に流れるのに１００秒かかり、別の流体が２００秒かかる場合、運動力学的粘度の尺度では２番目の流体の粘度は、１番目の流体の２倍である。時々「動的」または「単純粘度」と称される「絶対粘度」は、運動力学的粘度および流体密度の積である。運動力学的粘度のディメンションはＬ２／Ｔで、Ｌは長さであり、Ｔは時間である。一般的に、運動力学的粘度はセンチストーク（ｃＳｔ）で表される。動力学的粘度のＳＩ単位は、ｍｍ２／ｓであり、これは１ｃＳｔである。絶対粘度は、センチポアズ（ｃＰ）の単位で表される。絶対粘度のＳＩ単位は、ミリパスカル−秒（ｍＰａ−ｓ）であり、１ｃＰ＝１ｍＰａ−ｓである。
【００１９】
タンパク質製剤の粘度は、製剤に粘度低下剤を添加することによって低下させることができる。粘度低下剤を比較的低濃度で添加する場合がある。粘度低下剤を含む製剤の粘度は、粘度低下剤を含まない製剤の粘度と比較して低下している。粘度低下剤の添加が、粘度低下剤を含まない対応する製剤と比較して、または粘度低下剤を選択された濃度では含まない製剤と比較して、製剤の粘度の低下をもたらす場合、粘度低下剤を（例えば、選択した濃度で）含有する製剤、このような製剤は低粘度製剤である。ある低粘度製剤では、粘度低下剤は一般的にタンパク質製剤の粘度を、粘度低下剤を含まない、または低量で含有するタンパク質製剤の粘度と比較して約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％および約９０％減少させる。粘度低下剤が、タンパク質製剤の粘度を、粘度低下剤を含まない、または低量で含有するタンパク質製剤の粘度と比較して少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％および少なくとも９０％減少させる場合がある。ある実施形態では、タンパク質製剤の粘度は、粘度低下剤の添加前に測定する。その他の実施形態では、タンパク質製剤の粘度は、粘度低下剤の添加後に測定する。このような測定は、タンパク質製剤に粘度低下剤添加の数時間後（例えば、１〜２３時間）、数日後（例えば、１〜１０日間）、数週間後（例えば、１〜５週間）または数ヶ月後（例えば、１〜１２ヶ月）、または数年後（例えば、１〜２年、１〜３年）に行うことができる。さらに他の実施形態では、タンパク質製剤の粘度は、粘度低下剤の添加の前後に測定する。粘度測定法は、当業界では周知であり、例えば、キャピラリー粘度計の使用またはコーンプレートレオメータが含まれる。
【００２０】
一実施形態では、粘度低下剤は、塩化カルシウム、塩化マグネシウム、リン酸ナトリウムまたは塩酸アルギニンなどの塩である。本明細書で記載した方法では、粘度低下剤は、最終濃度が約０．５ｍＭと約１００ｍＭの間となるようにタンパク質製剤に添加する。一実施形態では、粘度低下剤は、最終濃度が約５ｍＭと約２０ｍＭの間となるようにタンパク質製剤に添加する。別の実施形態では、粘度低下剤は、最終濃度が約０．５ｍＭと約１４ｍＭの間となるようにタンパク質製剤に添加する。ある実施形態では、粘度低下剤は、最終濃度が約０．５ｍＭと約２０ｍＭ以下、または１９ｍＭ以下、または１８ｍＭ以下、または１７ｍＭ以下、または１６ｍＭ以下、または１５ｍＭ以下、または１４ｍＭ以下、または１３ｍＭ以下、または１２ｍＭ以下、または１１ｍＭ以下、または１０ｍＭの間となるようにタンパク質製剤に添加される。一般的に、粘度低下剤が最終濃度約０．５ｍＭから約２５ｍＭの間でタンパク質製剤に添加する場合、粘度低下剤は塩化カルシウムおよび塩化マグネシウムであるが、塩化ナトリウムまたは二硫酸ナトリウムではない。ある実施形態では、粘度低下剤は、タンパク質製剤に悪い影響を与えないように低濃度で添加する。例えば、塩化カルシウムまたは塩化マグネシウムの濃度が２０ｍＭ以上の場合、タンパク質は低い保存温度（例えば、２〜８℃）でゲルを形成し得る。したがって、粘度低下剤の濃度は一般的に、低粘度製剤の予定保存温度で粘度が低下するように選択される。
【００２１】
製剤
低粘度タンパク質製剤の組成は、いくつかの要素を考慮することによって決定される。これらの要素には、限定はしないが、タンパク質の性質（例えば、受容体、抗体、Ｉｇ融合タンパク質、酵素）、タンパク質の濃度、所望するｐＨ範囲、どのようにタンパク質製剤を保存するか（例えば、温度）、タンパク質製剤を保存する期間、どのように製剤を患者に投与するかが含まれる。適切な粘度低下剤の選択は、部分的には、製剤中のタンパク質のためのこのような必要性に基づいて行われる。
【００２２】
タンパク質
製剤化する関心のあるタンパク質には、限定はしないが、タンパク質、例えば、ミオスタチン／ＧＤＦ−８、インターロイキン（ＩＬ）、例えば、ＩＬ−１からＩＬ−１５、ヒト成長ホルモンおよびウシ成長ホルモンなどの成長ホルモン、成長ホルモン放出因子、副甲状腺ホルモン、甲状腺刺激ホルモン、ウリカーゼ、ビクニン、ビリルビンオキシダーゼ、サブチリシン、リポタンパク質、α−１−アンチトリプシン、インシュリンＡ鎖、インシュリンＢ鎖、プロインシュリン、卵胞刺激ホルモン、カルシトニン、黄体形成ホルモン、グルカゴン、第ＶＩＩａ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＶＩＩＩＣ因子、第ＩＸ因子、組織因子、フォンウィルブランド因子、プロテインＣなどの血液凝固抑制因子、心房性ナトリウム利尿因子、肺サーファクタント、プラスミノーゲン活性化因子、例えば、ウロキナーゼまたは組織型プラスミノーゲン活性化因子（ｔ−ＰＡ）、ボンバジン、トロンビン、プラスミン、ミニプラスミン、ミクロプラスミン、腫瘍壊死因子αおよびβ、エンケファリナーゼ、ＲＡＮＴＥＳ（Ｔ細胞発現および分泌の正常な活性化に対する調節）、ヒトマクロファージ炎症性タンパク質（ＭＩＰ−１−α）、ヒト血清アルブミンなどの血清アルブミン、ミュラー管抑制因子、リラキシンＡ鎖、リラキシンＢ鎖、プロレラキシン、マウスゴナドトロピン関連ペプチド、ＤＮアーゼ、インヒビン、アクチビン、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、胎盤増殖因子（ＰＩＧＦ）、ホルモンまたは成長因子の受容体、インテグリン、プロテインＡまたはプロテインＤ、リューマチ因子、骨由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）などの神経栄養因子、ニューロトロフィン−３、−４、−５もしくは−６（ＮＴ−３、ＮＴ−４、ＮＴ−５もしくはＮＴ−６）またはＮＧＦ−βなどの神経成長因子、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、ａＦＧＦおよびｂＦＧＦなどの繊維芽細胞成長因子、上皮成長因子（ＥＧＦ）、ＴＧＦ−αおよびＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２、ＴＧＦ−β３、ＴＧＦ−β４もしくはＴＧＦ−β５を含むＴＧＦ−βなどのトランスフォーミング成長因子（ＴＧＦ）、インシュリン様成長因子−Ｉおよび−ＩＩ（ＩＧＦ−ＩおよびＩＧＦ−ＩＩ）、ｄｅｓ（１−３）−ＩＧＦ−Ｉ（脳ＩＧＦ−Ｉ）、インシュリン様成長因子結合タンパク質、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２８、ＣＤ３４およびＣＤ４５などのＣＤタンパク質、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、骨誘導性因子、免疫毒素、骨形態形成タンパク質（ＢＭＰ）、インターフェロン−α、−βおよび−γなどのインターフェロン、コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、例えば、Ｍ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦおよびＧ−ＣＳＦ、スーパーオキシドジスムターゼ、Ｔ細胞受容体、ＥＧＦ受容体、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３もしくはＨＥＲ４受容体などのＨＥＲ受容体ファミリーの構成要素、ＬＦＡ−１、ＶＬＡ−４、ＩＣＡＭ−１およびＶＣＡＭなどの細胞接着分子、ＩｇＥ、血液型抗原、ｆｌｋ２／ｆｌｔ３受容体、肥満（ＯＢ）受容体、崩壊促進因子（ＤＡＦ）、ＨＩＶｇａｇ、ｅｎｖ、ｐｏｌ、ｔａｔまたはｒｅｖタンパク質などのウイルス抗原、ホーミング受容体、アドレシン、イムノアドヘシンおよび生物活性断片、あるいは前記に挙げたポリペプチドのいずれかの変種が含まれる。いくつかの製剤では、複数のタンパク質種または断片が製剤に含まれる。
【００２３】
「生物活性断片」という用語は、由来するタンパク質の機能の少なくとも１種を保持しているタンパク質の断片を意味する。抗体の生物活性断片には、抗体の抗原結合断片が含まれ、受容体の生物学的断片には、そのリガンドに依然として結合できる受容体の断片が含まれ、リガンドの生物活性断片には、その受容体に依然として結合できるリガンドの一部が含まれ、酵素の生物活性断片には、完全長酵素によって触媒される反応を依然として触媒できる酵素の一部が含まれる。一実施形態では、生物活性断片は、由来するタンパク質の機能の少なくとも約５％を保持している。タンパク質の機能は、当業界で公知の方法（例えば、抗体−抗原相互作用の試験、リガンド−受容体相互作用の試験、酵素活性の試験、転写活性の試験、またはＤＮＡ−タンパク質相互作用の試験）によって測定することができる。この断片は、例えば、由来するタンパク質のある種の特性（例えば、特異的リガンドへの結合）を保持していることができるが、由来するタンパク質によって惹起される細胞応答を引き起こさない治療上有用な断片である場合もある。
【００２４】
ある実施形態では、製剤化すべきタンパク質は抗体である。抗体は、前述のタンパク質の１つに結合できる抗体であってよい。本明細書で使用した「抗体」という用語には、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、ポリエピトープ特異性を備えた抗体組成物、二重特異性抗体、ダイアボディーまたは抗体のその他の精製調製物および組換え抗体が含まれる。抗体は、例えば、任意のアイソタイプ（ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭなど）の完全な抗体または関心のある抗原に結合するそれらの断片であることができる。本発明で使用される抗体の具体的な例では、製剤化する抗体は、ＩｇＧアイソタイプを有する抗体である。抗体は、従来の、またはその他の技術を使用して断片化することができ、断片は関心のある抗原に対する結合についてスクリーニングされる。一般的に、抗体断片には、完全な抗体の抗原結合領域および／または様々な領域が含まれる。したがって、抗体断片という用語には、選択されたタンパク質に選択的に結合できる、タンパク質分解酵素によって切断された、または組換え技術によって調製された抗体分子部分の一部が含まれる。このようなタンパク質分解および／または組換え断片の非限定的例には、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、Ｆｖおよびペプチドリンカーによって結合したＶ［Ｌ］および／またはＶ［Ｈ］ドメインを含有する一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）が含まれる。ｓｃＦｖは、二種類以上の結合部位を有する抗体を形成するために共有的または非共有的に結合することができる。
【００２５】
いくつかの実施形態では、抗体はヒト化モノクローナル抗体である。本明細書で使用した「ヒト化モノクローナル抗体」という用語は、同等のヒトモノクローナル抗体（ドナー）で見い出される少なくとも１種または複数のアミノ酸残基を含有するように改変された非ヒト由来のモノクローナル抗体（レシピエント）である。「完全なヒト化モノクローナル抗体」とは、同等のヒトモノクローナル抗体の抗原結合部位で見い出されるアミノ酸残基全てを含有するように改変された非ヒト由来のモノクローナル抗体である。ヒト化抗体はまた、レシピエント抗体またはドナー抗体のいずれにも見い出されない残基を含んでいてよい。抗体機能をさらに改良し、最適化するために、これらの変更を行うことができる。ヒト化抗体はまた、所望によりヒトイムノグロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部を含んでよい。
【００２６】
ある実施形態では、低粘度製剤で使用される抗体は、抗ミオスタチン抗体（例えば、ＭＹＯ−０２２、ＭＹＯ−０２８（図６）、ＭＹＯ−０２９（図７））である。ＭＹＯ−０２２、ＭＹＯ−０２８およびＭＹＯ−０２９抗体は、本明細書に参考として援用した米国特許出願番号第１０／６８８９２５号（公開番号２００４／０１４２３８２）に記載されている。その他の実施形態では、抗体はＩＬ−１２抗体（例えば、Ｊ６９５（図８））である。Ｊ６９５抗体は、本明細書に参考として援用した米国特許第６９１４１２８号に記載されている。さらに別の実施形態では、抗体はＩＬ−１３抗体（例えば、ＩＭＡ−６３８（図９）、ＣＡＴ−３５４）である。抗ＩＬ−１３抗体は、本明細書に参考として援用した米国特許出願番号第１１／１４９３０９号に記載されている。
【００２７】
いくつかの実施形態では、製剤化するタンパク質は融合タンパク質である。一実施形態では、融合タンパク質はイムノグロブリン（Ｉｇ）融合タンパク質である。特定の実施形態では、融合タンパク質はＩｇＧ重鎖定常領域を含む。別の実施形態では、融合タンパク質はヒトイムノグロブリンＣγ１のヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３領域に対応するアミノ酸配列を含む。Ｉｇ融合タンパク質の例には、ＣＴＬＡ４ＩｇおよびＶＣＡＭ２Ｄ−ＩｇＧが含まれる。融合タンパク質の製造方法は、当業界で公知である（例えば、米国特許第６８８７４７１号および第６４８２４０９号）。
【００２８】
ある実施形態では、製剤化するタンパク質は、第ＶＩＩ因子ポリペプチドまたは抗ＩｇＥ抗体を含まないタンパク質である。
【００２９】
低粘度製剤は、特定の障害を治療するために必要なので、複数のタンパク質を含有し得る。他のタンパク質は、通常、製剤中のその他のタンパク質に対して補足的な活性を有し、製剤中のその他のタンパク質に悪影響を及ぼさない。例えば、ミオスタチンに結合する２種以上の抗体、ＩＬ−１２に結合する２種以上の抗体またはＩＬ−１３に結合する２種以上の抗体を含有する単一の製剤を提供することが望ましいことがあり得る。さらに、タンパク質製剤はまた、低粘度タンパク質製剤を最大限に利用するために使用される非タンパク質物質を含有することができる。例えば、スクロースは、溶液中におけるタンパク質の安定性および溶解性を高めるために添加することができ、ヒスチジンは適切な緩衝能力をもたらすために添加することができる。このような追加物質は、粘度低下剤を添加する前のタンパク質製剤の一部とするか、または低粘度製剤の製造プロセスにおいて添加することができる。
【００３０】
ある実施形態では、製剤において使用する前に、製剤化するタンパク質は本質的に純粋であり、かつ／または本質的に均一である（すなわち、混入タンパク質などを実質的に含まない）。「本質的に純粋な」タンパク質という用語は、選択されたタンパク質画分を少なくとも約９０重量％、例えば、選択されたタンパク質画分を少なくとも約９５重量％を含む組成物を意味する。「本質的に均一な」タンパク質という用語は、様々な安定化剤および水溶液の水の重量を除いて、選択されたタンパク質画分を少なくとも約９９重量％を含む組成物を意味する。
【００３１】
低粘度製剤におけるタンパク質の濃度
低粘度製剤におけるタンパク質の濃度は、製剤の最終的用途に左右される。本明細書で記載した製剤中におけるタンパク質濃度は一般的に、約１０ｍｇ／ｍｌと約３００ｍｇ／ｍｌの間、例えば、約１０ｍｇ／ｍｌと約１００ｍｇ／ｍｌの間、約２５ｍｇ／ｍｌと約１００ｍｇ／ｍｌ、約５０ｍｇ／ｍｌと約１００ｍｇ／ｍｌ、約７５ｍｇ／ｍｌと約１００ｍｇ／ｍｌ、約１００ｍｇ／ｍｌと約２００ｍｇ／ｍｌ、約１２５ｍｇ／ｍｌと約２００ｍｇ／ｍｌ、約１５０ｍｇ／ｍｌと約２００ｍｇ／ｍｌ、約２００ｍｇ／ｍｌと約３００ｍｇ／ｍｌおよび約２５０ｍｇ／ｍｌと約３００ｍｇ／ｍｌである。例えば、本明細書で記載した製剤中におけるタンパク質濃度は、１０ｍｇ／ｍｌと３００ｍｇ／ｍｌの間、例えば、１０ｍｇ／ｍｌと１００ｍｇ／ｍｌの間、２５ｍｇ／ｍｌと１００ｍｇ／ｍｌの間、５０ｍｇ／ｍｌと１００ｍｇ／ｍｌの間、７５ｍｇ／ｍｌと１００ｍｇ／ｍｌの間、１００ｍｇ／ｍｌと２００ｍｇ／ｍｌの間、１２５ｍｇ／ｍｌと２００ｍｇ／ｍｌの間、１５０ｍｇ／ｍｌと２００ｍｇ／ｍｌの間、２００ｍｇ／ｍｌと３００ｍｇ／ｍｌの間、および２５０ｍｇ／ｍｌと３００ｍｇ／ｍｌの間である。「間」という用語は、最小および最大濃度を含むものとする。
【００３２】
低粘度タンパク質製剤は、治療目的で使用することができる。したがって、治療適用のために使用される製剤中のタンパク質の濃度は、患者に許容され、患者にとって治療価値がある投与量および容量のタンパク質を提供することに基づいて決定される。低粘度製剤が注射によって投与される場合、タンパク質濃度は、注射容量（通常、１．０ｍＬ〜１．２ｍＬ）に左右される。タンパク質をベースにした治療は、１週間当たり、１ヶ月当たり、または数ヶ月当たり数ｍｇ／ｋｇの用量を必要とし得る。したがって、タンパク質を２〜３ｍｇ／ｋｇ患者の体重で提供し、患者の平均体重が７５ｋｇである場合、タンパク質１５０ｍｇ〜２２５ｍｇを注射容量１．０ｍＬ〜１．２ｍＬに入れて送達することが必要である。あるいは、製剤は、治療毎に複数の注射部位で送達するために適した濃度で提供する。
【００３３】
製剤中のタンパク質濃度が増加するにつれて、タンパク質製剤の粘度はまた、上昇するようである。製剤の粘度が上昇すると、製剤の投与がより困難になる。したがって、粘度の上昇がその利用能力に影響を及ぼす場合、タンパク質製剤の粘度を低下させることが必要である。
【００３４】
粘度低下剤
比較的低濃度のある種の粘度低下剤をタンパク質製剤に添加するとタンパク質製剤の粘度が低下することが発見された。本明細書で使用した「粘度低下剤」という用語には、粘度低下剤を含有しないか、または少量含有するタンパク質製剤と比較して、タンパク質製剤の粘度を低下させる任意の薬剤が含まれる。例えば、粘度低下剤は一般的に、タンパク質製剤の粘度を、粘度低下剤を含まない、または少量で含有するタンパク質製剤の粘度と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約９０％または約９５％低下させる。例えば、粘度低下剤は一般的に、タンパク質製剤の粘度を、粘度低下剤を含まない、または少量で含有するタンパク質製剤の粘度と比較して、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、９０％または９５％低下させる。粘度低下剤の非限定的例には、塩化カルシウム、塩化マグネシウム、塩酸アルギニン、塩化ナトリウム、チオシアン酸ナトリウム、チオシアン酸アンモニウム、硫酸アンモニウム、リン酸ナトリウムおよび塩化アンモニウムが含まれる。
【００３５】
一実施形態では、粘度低下剤は塩化カルシウムである。別の実施形態では、粘度低下剤は塩化マグネシウムである。他の実施形態では、複数の粘度低下剤をタンパク質製剤に添加する。
【００３６】
粘度低下剤は一般的に、最終濃度が１ｍＭから約１５０ｍＭの間、例えば、約１ｍＭと約５０ｍＭの間、約２ｍＭと約４０ｍＭの間、約３ｍＭと約３０ｍＭの間、約４ｍＭと約２５ｍＭの間、約５ｍＭと約２０ｍＭの間、約５ｍＭと約２５ｍＭの間、約５ｍＭと約３０ｍＭの間、約５ｍＭと約４０ｍＭの間、および約５ｍＭと約５０ｍＭの間となるようにタンパク質製剤に添加する。ある実施形態では、粘度低下剤は、最終濃度が１４ｍＭ未満、１３ｍＭ未満、１２ｍＭ未満、１１ｍＭ未満、１０ｍＭ未満、９ｍＭ未満、８ｍＭ未満、７ｍＭ未満、６ｍＭ未満、５ｍＭ未満、４ｍＭ未満、３ｍＭ未満、または２ｍＭ未満であるようにタンパク質製剤に添加する。その他の実施形態では、粘度低下剤は、最終濃度が０．５ｍＭと約１４ｍＭの間、０．５ｍＭと１３ｍＭの間、０．５ｍＭと１２ｍＭの間、０．５ｍＭと１１ｍＭの間、０．５ｍＭと１０ｍＭの間、０．５ｍＭと９ｍＭの間、０．５ｍＭと８ｍＭの間、０．５ｍＭと７ｍＭの間、０．５ｍＭと６ｍＭの間または約０．５ｍＭと約５ｍＭの間となるようにタンパク質製剤に添加する。一実施形態では、粘度低下剤は、製剤中の最終濃度が約５ｍＭと約２０ｍＭの間である塩化カルシウムである。別の実施形態では、粘度低下剤は、製剤中の最終濃度が約５ｍＭと約１４ｍＭの間である塩化カルシウムである。その他の実施形態では、粘度低下剤は、製剤中の最終濃度が約５ｍＭと約２０ｍＭの間である塩化マグネシウムである。別の実施形態では、粘度低下剤は、製剤中の最終濃度が約５ｍＭと約１４ｍＭの間である塩化マグネシウムである。
【００３７】
タンパク質製剤の粘度は、例えば、キャピラリー粘度計またはコーンプレートレオメータの使用を含む当業界で公知の任意の適切な方法によって測定することができる。
【００３８】
緩衝剤
本明細書で使用した「緩衝剤」という用語には、溶液、例えば、製剤の所望する範囲のｐＨを維持する薬剤が含まれる。本明細書で記載した製剤のｐＨは一般的に、約ｐＨ５．０から約９．０の間、例えば、約ｐＨ５．５から約６．５の間、約ｐＨ５．５から約ｐＨ６．０の間、約ｐＨ６．０から約ｐＨ６．５の間、ｐＨ５．５、ｐＨ６．０またはｐＨ６．５である。一般的に、溶液をｐＨ５．０から６．５の間に維持することができる緩衝剤を使用する。本明細書で記載した製剤で使用できる緩衝剤の非限定的例には、ヒスチジン、コハク酸、グルコン酸、トリス（トロメタモール）、リン酸、クエン酸、２−モルホリノエタンスルホン酸（ＭＥＳ）、リン酸ナトリウム、酢酸ナトリウムおよびカコジル酸が含まれる。
【００３９】
ヒスチジンは、皮下、筋肉内または腹腔内注射によって投与される低粘度製剤に一般的に存在する緩衝剤である。この緩衝剤の濃度は約５ｍＭと３０ｍＭの間である。一実施形態では、製剤の緩衝剤は、濃度が約５ｍＭから約２０ｍＭの間のヒスチジンである。
【００４０】
賦形剤
タンパク質、粘度低下剤および緩衝剤に加えて、本明細書で記載した粘度の低下した製剤はまた、その他の物質を含有してよい。このような物質には、限定はしないが、凍結保護物質、凍結乾燥保護物質、界面活性剤、充填剤、抗酸化剤および安定化剤が含まれる。一実施形態では、本明細書で記載した低粘度タンパク質製剤には、凍結保護物質、凍結乾燥保護物質、界面活性剤、充填剤、抗酸化剤および安定化剤およびそれらの組合せからなる群から選択された賦形剤が含まれる。
【００４１】
本明細書で使用した「凍結保護物質」という用語には、例えば、タンパク質表面から優先的に除去されることによって、製剤中のタンパク質に凍結によって誘発される負荷に対する安定性をもたらす薬剤が含まれる。凍結保護物質はまた、１次および２次乾燥中および長期の製品保存中の保護をもたらすことができる。凍結保護物質の非限定的な例には、糖、例えば、スクロース、グルコース、トレハロース、マンニトール、マンノースおよびラクトース、高分子、例えば、デキストラン、ヒドロキシエチル澱粉およびポリエチレングリコール、界面活性剤、例えば、ポリソルベート（例えば、ＰＳ−２０またはＰＳ−８０）およびアミノ酸、例えば、グリシン、アルギニン、ロイシンおよびセリンが含まれる。生体系で毒性が低い凍結保護物質が一般的に使用される。製剤に含める場合、凍結保護物質は一般的に、最終濃度が約０．１％と約１０％（重量／容量）の間、例えば、約０．５％と約１０％の間、約０．５％と約５％の間、約０．５％と約２％の間、約１％と約５％の間または約５％と約１０％の間となるように添加する。一実施形態では、凍結保護物質は、濃度が約０．５％と約１０％（重量／容量）の間であるスクロースである。
【００４２】
一実施形態では、凍結乾燥保護物質を本明細書で記載した製剤に添加する。本明細書で使用した「凍結乾燥保護物質」という用語には、例えば、アモルファスガラス状基質を提供することによって、水素結合によってタンパク質と結合することによって、凍結乾燥または脱水プロセス（１回目および２回目の凍結乾燥）中のタンパク質に安定性をもたらし、乾燥プロセス中に除去される水分子を置換する薬剤が含まれる。これは、タンパク質構造を維持し、凍結乾燥過程中のタンパク質分解を最低限に抑え、長期間の製品安定性を改善するのに役立つ。凍結乾燥保護物質の非限定的例には、糖類、例えば、スクロースまたはトレハロース、アミノ酸、例えば、グルタミン酸一ナトリウム、非結晶性グリシンまたはヒスチジン、メチルアミン、例えば、ベタイン、リオトロピック塩、例えば、硫酸マグネシウム、ポリオール、例えば、３価以上の糖アルコール、例えば、グリセリン、エリスリトール、グリセロール、アラビトール、キシリトール、ソルビトールおよびマンニトール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、プルロニックおよびそれらの組合せが含まれる。製剤に添加する凍結乾燥保護物質の量は一般的に、タンパク質製剤が凍結乾燥される場合、タンパク質の許容できない量の分解／凝集が生じない量である。凍結乾燥保護物質が糖（例えば、スクロースまたはトレハロース）であり、タンパク質が抗体である場合、低粘度タンパク質製剤中の凍結乾燥保護物質濃度の非限定的例は、約１０ｍＭから約４００ｍＭ、約３０ｍＭから約３００ｍＭおよび約５０ｍＭから約１００ｍＭである。
【００４３】
ある実施形態では、界面活性剤は本明細書で記載した製剤に含まれる。本明細書で使用した「界面活性剤」という用語には、空気−液体界面での吸着によって液体の表面張力を低下させる薬剤が含まれる。界面活性剤の例には、限定はしないが、非イオン性界面活性剤、例えば、ポリソルベート（例えば、ポリソルベート８０またはポリソルベート２０）、ポロキサマー（例えば、ポロキサマー１８８）、トリトン（商標）（例えば、トリトン（商標）Ｘ−１００）、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、オクチルグリコシドナトリウム、ラウリル−スルホベタイン、ミリスチル−スルホベタイン、リノレイル−スルホベタイン、ステアリル−スルホベタイン、ラウリル−サルコシン、ミリスチル−サルコシン、リノレイル−サルコシン、ステアリル−サルコシン、リノレイル−ベタイン、ミリスチル−ベタイン、セチル−ベタイン、ラウロアミドプロピル−ベタイン、コカミドプロピル−ベタイン、リノレアミドプロピル−ベタイン、ミリスタミドプロピル−ベタイン、パルミドプロピル−ベタイン、イソステアラミドプロピル−ベタイン（例えば、ラウロアミドプロピル）、ミリスタミドプロピル−、パルミドプロピル−もしくはイソステアラミドプロピル−ジメチルアミン、メチルココイルタウリン酸ナトリウムもしくはメチルオレイルタウリン酸二ナトリウムおよびＭｏｎａｑｕａｔ（商標）系（Ｍｏｎａ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、Ｉｎｃ．、Ｐａｔｅｒｓｏｎ、Ｎ．Ｊ．）、ポリエチルグリコール、ポリプロピルグリコールならびにエチレンおよびプロピレングリコールの共重合体（例えば、プルロニック、ＰＦ６８）が含まれる。添加する界面活性剤の量は、高分子量（ＨＭＷ）種または低分子量（ＬＭＷ）種の割合を測定するために、例えば、ＳＥＣ−ＨＰＬＣを使用して測定した場合に許容できるレベルで復元タンパク質の凝集を維持して、本明細書で記載したタンパク質製剤の凍結乾燥物の復元後の粒子形成を最小限に抑えるようにする。例えば、界面活性剤は（液体または凍結乾燥前の）製剤中に、約０．００１〜０．５％、例えば、約０．０５〜０．３％の量で存在することができる。
【００４４】
いくつかの実施形態では、充填剤が低粘度製剤に含まれる。本明細書で使用した「充填剤」という用語には、医薬製品と直接相互作用することなく凍結乾燥した製品の構造を形成する薬剤が含まれる。薬剤として整った塊を形成することに加えて、充填剤はまた、崩壊温度の変更について有益な品質を付与し、凍結解凍保護をもたらし、長期間保存におけるタンパク質の安定性を高める。充填剤の非限定的例には、マンニトール、グリシン、ラクトースおよびスクロースが含まれる。充填剤は、結晶（例えば、グリシン、マンニトールもしくは塩化ナトリウム）またはアモルファス（例えば、デキストランまたはヒドロキシエチル澱粉）であってよく、一般的に製剤中において０．５％から１０％の量で使用される。
【００４５】
その他の薬学的に許容される担体、賦形剤または安定化剤、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ「Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ」２０版、Ｇｅｎｎａｒｏ著、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ（２０００）に記載されたものも、製剤の所望する特性に悪影響を及ぼさないならば、本明細書で記載したタンパク質製剤に含めてよい。許容される担体、賦形剤または安定化剤は、使用した投与量および濃度でレシピエント（例えば、患者）に対して非毒性であり、追加的緩衝剤、保存剤、供溶媒、アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化剤、ＥＤＴＡなどのキレート剤、金属複合体（例えば、Ｚｎ−タンパク質複合体）、ポリエステルなどの生分解性重合体、ナトリウムなどの塩形成対イオン、多価糖アルコール、アミノ酸、例えば、アラニン、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、リシン、オルニチン、ロイシン、２−フェニルアラニン、グルタミン酸およびトレオニン、有機糖または糖アルコール、例えば、ラクチトール、スタキオース、マンノース、ソルボース、キシロース、リボース、リビトール、ミオイニシトース（ｍｙｏｉｎｉｓｉｔｏｓｅ）、ミオイニシトール、ガラクトース、ガラクチトール、グリセロール、サイクリトール（例えば、イノシトール）、ポリエチレングリコール、硫黄を含有する低下剤、例えば、尿素、グルタチオン、チオクト酸、チオグリコール酸ナトリウム、チオグリセロール、α−モノチオグリセロールおよびチオ硫酸ナトリウム、低分子量タンパク質、例えば、ヒト血清アルブミン、ウシ血清アルブミン、ゼラチンまたはその他のイムノグロブリン、および親水性重合体、例えば、ポリビニルピロリドンを含む。
【００４６】
タンパク質製剤例
ＭＹＯ−０２９
一実施形態では、ＭＹＯ−０２９低粘度製剤は、ＭＹＯ−０２９抗体を１ｍｇ／ｍｌから３００ｍｇ／ｍｌ使用して製剤化することができる。ＭＹＯ−０２９製剤は一般的に、塩化カルシウムまたは塩化マグネシウムを約１ｍＭと約５０ｍＭの間含む。この製剤は、ヒスチジンを約５ｍＭから約２５ｍＭ含むことができる。この製剤は、スクロースまたはトレハロースを約１％から約５％（ｗ／ｖ）含むことができる。場合によっては、この製剤は、メチオニンを約１０ｍＭから約２５ｍＭ含むことができる。ある種のＭＹＯ−０２９製剤では、ポリソルベート−２０またはポリソルベート−８０を０．０５〜０．２％（ｗ／ｖ）を添加する。製剤のｐＨは一般的に、５．５と６．５の間である。具体的な例では、ＭＹＯ−０２９製剤には、ＭＹＯ−０２９抗体１５０ｍｇ／ｍｌ、塩化カルシウムまたは塩化マグネシウム１０ｍＭ、ヒスチジン２０ｍＭ、スクロース４％が含まれ、ｐＨは６．０である。別の具体的な例では、ＭＹＯ−０２９製剤には、ＭＹＯ−０２９抗体７５ｍｇ／ｍｌ、塩化カルシウムまたは塩化マグネシウム５ｍＭ、ヒスチジン１０ｍＭ、メチオニン１０ｍＭ、スクロース２％が含まれ、ｐＨは６．０である。別の具体的な例では、ＭＹＯ−０２９製剤には、ＭＹＯ−０２９抗体１５０ｍｇ／ｍｌ、塩化カルシウムまたは塩化マグネシウム１０ｍＭ、ヒスチジン２０ｍＭ、メチオニン２０ｍＭ、スクロース４％、ポリソルベート−８０、０．２％が含まれ、ｐＨは６．０である。
【００４７】
ＭＹＯ−０２８
ＭＹＯ−０２８低粘度製剤は、ＭＹＯ−０２８抗体を１ｍｇ／ｍｌから３００ｍｇ／ｍｌ使用して製剤化することができる。ＭＹＯ−０２８製剤は一般的に、塩化カルシウムまたは塩化マグネシウムを約１ｍＭと約５０ｍＭの間含む。この製剤は、ヒスチジンを約５ｍＭと約２５ｍＭの間含むことができる。この製剤は、スクロースまたはトレハロースを約１％と約５％（ｗ／ｖ）の間含むことができる。ＭＹＯ−０２８製剤のｐＨは一般的に、約５．５と約６．５の間である。具体的な一例では、ＭＹＯ−０２８抗体製剤には、抗体５０ｈｓ ｍｇ／ｍｌ、ヒスチジン１０ｍＭ、スクロース５％が含まれ、ｐＨは６．５である。別の具体的な例では、ＭＹＯ−０２８抗体製剤には、抗体５０ｍｇ／ｍｌ、塩化カルシウムまたは塩化マグネシウム１０ｍＭ、ヒスチジン１０ｍＭ、スクロース５％が含まれ、ｐＨは６．５である。
【００４８】
Ｊ６９５
Ｊ６９５低粘度製剤は、Ｊ６９５抗体を１ｍｇ／ｍｌから３００ｍｇ／ｍｌ使用して製剤化することができる。Ｊ６９５製剤は一般的に、塩化カルシウムまたは塩化マグネシウムを約１ｍＭと約５０ｍＭの間含む。この製剤は、ヒスチジンを約５ｍＭから約２５ｍＭ含むことができる。この製剤は、スクロースまたはトレハロースを約１％から約５％（ｗ／ｖ）含むことができる。場合によっては、この製剤は、メチオニンを約１０ｍＭから約２５ｍＭ含むことができる。あるＪ６９５製剤では、マンニトールを約１％と約５％（ｗ／ｖ）の間添加する。製剤のｐＨは一般的に、５．５と６．５の間である。具体的な例では、Ｊ６９５抗体製剤には、Ｊ６９５抗体１００ｍｇ／ｍｌ、ヒスチジン１０ｍＭ、メチオニン１０ｍＭ、マンニトール４％、スクロース１％が含まれ、ｐＨは６．０である。別の具体的な例では、Ｊ６９５抗体製剤には、Ｊ６９５抗体１００ｍｇ／ｍｌ、ヒスチジン１０ｍＭ、メチオニン１０ｍＭ、塩化カルシウムまたは塩化マグネシウム５ｍＭ、マンニトール４％、スクロース１％が含まれ、ｐＨは６．０である。別の具体的な例では、Ｊ６９５抗体製剤には、Ｊ６９５抗体１００ｍｇ／ｍｌ、ヒスチジン１０ｍＭ、メチオニン１０ｍＭ、塩化カルシウムまたは塩化マグネシウム１０ｍＭ、マンニトール４％、スクロース１％が含まれ、ｐＨは６．０である。
【００４９】
ＩＭＡ−６３８
ＩＭＡ−６３８タンパク質製剤は、ＩＭＡ−６３８抗体を１ｍｇ／ｍｌから３００ｍｇ／ｍｌ使用して製剤化することができる。ＩＭＡ−６３８を含有する低粘度製剤は一般的に、塩化カルシウムまたは塩化マグネシウムを約１ｍＭと約５０ｍＭの間含む。この製剤は、ヒスチジンを約５ｍＭから約２５ｍＭ含むことができる。この製剤はまた、スクロースまたはトレハロースを約１％から約１０％（ｗ／ｖ）含むことができる。製剤のｐＨは一般的に、５．５と６．５の間である。具体的な例では、ＩＭＡ−６３８抗体製剤には、ＩＭＡ−６３８抗体５０ｍｇ／ｍｌ、ヒスチジン１０ｍＭ、スクロース５％が含まれ、ｐＨは６．０である。別の具体的な例では、ＩＭＡ−６３８抗体製剤には、ＩＭＡ−６３８抗体１００ｍｇ／ｍｌ、ヒスチジン２０ｍＭ、スクロース１０％が含まれ、ｐＨは６．０である。別の具体的な例では、ＩＭＡ−６３８抗体製剤には、ＩＭＡ−６３８抗体５０ｍｇ／ｍｌ、塩化カルシウムまたは塩化マグネシウム５ｍＭ、ヒスチジン１０ｍＭ、スクロース１０％が含まれ、ｐＨは６．０である。さらに別の具体的な例では、ＩＭＡ−６３８抗体製剤には、ＩＭＡ−６３８抗体１００ｍｇ／ｍｌ、塩化カルシウムまたは塩化マグネシウム１０ｍＭ、ヒスチジン２０ｍＭ、スクロース１０％が含まれ、ｐＨは６．０である。
【００５０】
保存法
本明細書で記載した低粘度タンパク質製剤は、当業者に公知の任意の適切な方法によって保存することができる。保存用の低粘度製剤の調製法の非限定的な例には、タンパク質製剤の凍結、凍結乾燥および噴霧乾燥が含まれる。
【００５１】
低粘度製剤は保存のために凍結することもある。したがって、製剤は、凍結解凍過程を行う場合を含めて、このような条件下で比較的安定であることが望ましい。製剤の凍結保存への適切さを決定する１方法は、試料製剤に少なくとも２回、例えば、３回から１０回（例えば、−２０℃または−８０℃において）凍結（例えば、室温で急速解凍するか、または氷上でゆっくり解凍することによって）解凍を繰り返し、凍結解凍過程後蓄積するＬＭＷ種および／またはＨＭＷ種の量を測定し、凍結解凍過程前の試料中に存在するＬＭＷ種またはＨＭＷ種の量と比較することである。ＬＭＷ種またはＨＭＷ種の増加は、製剤の一部として保存されたタンパク質の安定性の低下を示している。サイズ排除高速液体クロマトグラフィー（ＳＥＣ−ＨＰＬＣ）を使用して、ＬＭＷおよびＨＭＷ種の存在を測定することができる。適切な製剤は、所望しないＨＭＷ種またはＬＭＷ種を蓄積してもよいが、ＨＭＷ種またはＬＭＷ種の存在が製剤を企図する用途に適さなくする範囲であってはならない。
【００５２】
製剤を液体として保存する場合もある。したがって、液体製剤は、様々な温度を含めて、このような条件下で比較的安定であることが望ましい。液体保存への製剤の適合性を決定する一方法は、数種の温度（例えば、２〜８℃、１５℃、２０℃、２５℃、３０℃、３５℃、４０℃および５０℃）で試料製剤を保存し、経時的に蓄積するＨＭＷ種および／またはＬＭＷ種の量（例えば、割合の変化）をモニターすることである。さらに、タンパク質の電荷プロファイルは、陽イオン交換高速液体クロマトグラフィー（ＣＥＸ−ＨＰＬＣ）によってモニターすることができる。
【００５３】
一般的に、高分子量種または低分子量種の割合は、測定法および測定されるパラメータに適しているので、製剤中の総タンパク質含量の割合として、または経時的な（すなわち、保存中の）割合増加の変化として測定される。一般的に、また非限定的な例では、高分子量種または低分子量種のタンパク質の低粘度製剤中の割合の変化は、測定したパラメータ（例えば、時間、温度、製剤化、凍結乾燥または振盪中の他の化合物）に関して１０％以下、例えば、約８％以下、約５％以下、または約３％以下である。
【００５４】
あるいは、製剤は凍結乾燥後に保存することができる。本明細書で使用した「凍結乾燥」という用語は、乾燥する物質をまず凍結し、その後真空環境で昇華することによって氷または凍結した溶媒を除去するプロセスを意味する。賦形剤（例えば、凍結乾燥保護物質）を、凍結乾燥製品の保存時の安定性を高めるために、凍結乾燥する製剤に含めることができる。本明細書で使用した「復元製剤」という用語は、タンパク質が希釈剤中に分散されるように凍結乾燥タンパク質製剤を希釈剤に溶解することによって調製した製剤を意味する。本明細書では「希釈剤」という用語は、薬学的に許容され（ヒトに投与しても安全で、非毒性である）、液体製剤、例えば、凍結乾燥後に復元された製剤を調製するために有用な物質である。希釈剤の非限定的な例には、滅菌水、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、ｐＨ緩衝溶液（例えば、リン酸緩衝生理食塩水）、滅菌生理食塩水溶液、リンゲル液、デキストロース溶液、塩および／または緩衝剤の水溶液が含まれる。
【００５５】
凍結乾燥後の製剤のタンパク質成分の安定性について低粘度製剤を試験することは、製剤の安定性を測定するのに有用である。この方法は、試料製剤を凍結する代わりに凍結乾燥し、希釈剤を使用して復元し、復元製剤のＬＭＷ種および／またはＨＭＷ種の存在について試験すること以外は凍結について前述した方法と同様である。凍結乾燥しなかった対応する試料製剤と比較して、凍結乾燥した試料中のＬＭＷ種またはＨＭＷ種の増加は、凍結乾燥試料における安定性の低下を示唆している。
【００５６】
製剤を噴霧乾燥し、その後保存する場合もある。噴霧乾燥のために、液体製剤を乾燥ガス流の存在下でエアロゾル化する。水分を製剤液滴からガス流に除去すると、薬物製剤の乾燥粒子が生じる。（１）噴霧乾燥脱水中においてタンパク質を保護し、（２）噴霧乾燥後の保存中においてタンパク質を保護し、かつ／または（３）エアロゾル化に適した溶液特性をもたらすために、賦形剤を製剤中に含めてよい。この方法は、試料製剤を凍結する代わりに噴霧乾燥し、希釈剤中に復元し、復元製剤のＬＭＷ種および／またはＨＭＷ種の存在について試験すること以外は凍結について前述したものと同様である。噴霧乾燥しなかった対応する試料製剤と比較して、噴霧乾燥した試料中のＬＭＷ種またはＨＭＷ種の増加は、噴霧乾燥試料における安定性の低下を示唆している。
【００５７】
治療方法
本明細書で記載した低粘度製剤は、それらを必要とする患者の疾患または障害の治療および／または予防における医薬組成物として有用である。「治療」という用語は、治療的処置および予防的または防御的処置の両方を意味する。治療には、障害、障害の症状または障害になりやすい素因を治療、治癒、軽減、除去、改変、回復、緩和、改善するか、または影響を及ぼす目的で、障害、障害の症状を有するか、障害の危険性があるか、または障害になりやすい素因がある患者の体、単離組織、または細胞への低粘度製剤の適用または投与が含まれる。「治療を必要とする」ものには、既に障害を有するもの、ならびに予防すべき障害のあるものが含まれる。「障害」という用語は、本明細書で記載したタンパク質製剤による治療が有益な任意の状態のことである。これには、対象（患者）を問題の障害に罹りやすくする病理学的状態を含む慢性および急性の障害または疾患が含まれる。本明細書で記載した製剤を使用して治療する障害の非限定的例には、自己免疫疾患、炎症性障害、筋肉消耗性障害、アレルギー、癌、筋ジストロフィー、筋肉減少症、悪液質、ＩＩ型糖尿病、関節リウマチ、クローン病、乾癬、乾癬性関節炎、喘息、皮膚炎、アレルギー性鼻炎、慢性閉塞性肺疾患、好酸球増加症、線維症および粘液産生過剰が含まれる。
【００５８】
一実施形態では、医薬組成物としての使用に適した低粘度製剤には、抗ミオスタチン抗体および粘度低下剤が含まれる。一実施形態では、抗ミオスタチン抗体はＭＹＯ−０２９である。その他の実施形態では、抗ミオスタチン抗体はＭＹＯ−０２２またはＭＹＯ−０２８である。抗ミオスタチン抗体は一般的に、製剤中における濃度は約０．５ｍｇ／ｍｌと約３００ｍｇ／ｍｌの間である。別の実施形態では、粘度低下剤の医薬組成物中における最終濃度は、約０．５ｍＭと２０ｍＭの間である。別の実施形態では、粘度低下剤の医薬組成物中における最終濃度は、約０．５ｍＭと１４ｍＭの間である。別の実施形態では、医薬組成物は抗ミオスタチン抗体、粘度低下剤および緩衝剤を含み、製剤のｐＨは約５．５と約６．５の間である。本明細書で記載した医薬品組成物はまた、その他のタンパク質、薬物および／または賦形剤を含有してよい。特に、問題となる障害の治療に有用なその他のタンパク質または物質を製剤に添加することができる。抗ミオスタチン抗体を含有する医薬組成物は、限定はしないが、筋肉消耗性障害、筋ジストロフィー、筋肉減少症、悪液質およびＩＩ型糖尿病などの障害の治療または予防に有用である。
【００５９】
別の実施形態では、医薬組成物は、抗ＩＬ−１２抗体および粘度低下製剤を含む。一実施形態では、抗ＩＬ−１２抗体はＪ６９５である。抗ＩＬ−１２抗体は一般的に、製剤中における濃度は約０．５ｍｇ／ｍｌと約３００ｍｇ／ｍｌの間である。別の実施形態では、粘度低下剤の医薬組成物中における最終濃度は、約０．５ｍＭと２０ｍＭの間である。別の実施形態では、粘度低下剤の医薬組成物中における最終濃度は、約０．５ｍＭと１４ｍＭの間である。別の実施形態では、医薬組成物は抗ＩＬ−１２抗体、粘度低下剤および緩衝剤を含み、製剤のｐＨは約５．５と約６．５の間である。本明細書で記載した医薬品組成物はまた、その他のタンパク質、薬物および／または賦形剤を含有してよい。特に、問題となる障害の治療に有用なその他のタンパク質または物質を製剤に添加することができる。抗ＩＬ−１２抗体を含有する医薬組成物は、限定はしないが、自己免疫疾患、炎症性障害、関節リウマチ、クローン病、乾癬および乾癬性関節炎などの障害の治療または予防に有用である。
【００６０】
別の実施形態では、医薬組成物は、抗ＩＬ−１３抗体および粘度低下製剤を含む。一実施形態では、抗ＩＬ−１３抗体はＩＭＡ−６３８である。抗ＩＬ−１３抗体は一般的に、製剤中における濃度は約０．５ｍｇ／ｍｌと約３００ｍｇ／ｍｌの間である。別の実施形態では、粘度低下剤の医薬組成物中における最終濃度は、約０．５ｍＭと２０ｍＭの間である。別の実施形態では、粘度低下剤の医薬組成物中における最終濃度は、約０．５ｍＭと１４ｍＭの間である。別の実施形態では、医薬組成物は抗ＩＬ−１３抗体、粘度低下剤および緩衝剤を含み、製剤のｐＨは約５．５と約６．５の間である。本明細書で記載した医薬品組成物はまた、その他のタンパク質、薬物および／または賦形剤を含有してよい。特に、問題となる障害の治療に有用なその他のタンパク質または物質を製剤に添加することができる。抗ＩＬ−１３抗体を含有する医薬組成物は、限定はしないが、喘息性障害、アトピー性疾患、慢性閉塞性肺疾患、気管炎症が関与する症状、好酸球増加症、線維症および粘液産生過剰症、炎症状態、自己免疫状態、腫瘍または癌およびウイルス感染などの障害の治療または予防に有用である。
【００６１】
投与
本明細書で記載した低粘度製剤は、当業界で公知の方法を使用して、例えば、皮下、静脈内、腹腔内、筋肉内、動脈内、病巣内もしくは関節内経路による注射もしくは注入などの適切な方法での単回もしくは複数回の大量瞬時投与または長期間にわたる注入、局所投与、吸入あるいは持続放出手段または徐放手段によって、治療を必要とする対象に投与することができる。製剤を凍結乾燥する場合、投与前に、凍結乾燥した材料をまず適切な液体で復元する。凍結乾燥した材料を、例えば、ＢＷＦＩ、リン酸緩衝生理食塩水、または凍結乾燥前のタンパク質が入った同様の製剤で復元することができる。
【００６２】
非経口用組成物は、投与が容易で、投薬が均一となる投与単位形態に調製することができる。本明細書で使用した「投与単位形態」とは、治療する対象のための単位投与に適した物理的に分離された単位のことで、各単位は、選択された医薬担体と関連して所望する治療効果を生じるように計算された予め決定された量の活性化合物を含有する。
【００６３】
定量噴霧式吸入器などの吸入方法の場合、器具は、適切な量の製剤を送達するように設計される。吸入によって投与するために、化合物は、適切な噴射剤、例えば、二酸化炭素などのガスを含有する加圧容器もしくはディスペンサーまたは噴霧器からエアロゾルスプレーの形態で送達される。あるいは、吸入投与形態は、乾燥粉末吸入器を使用して乾燥粉末として提供することができる。
【００６４】
低粘度製剤はまた、例えば、コアセルベーション技術によって、もしくは界面重合化によって調製されたマイクロカプセル、例えば、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチン−マイクロカプセルおよびポリ−（メチルメタクリレート）マイクロカプセルのそれぞれ、コロイド状薬剤送達系（例えば、リポソーム、アルブミン小球体、マイクロエマルジョン、ナノ粒子およびナノカプセル）またはマクロエマルジョンに捕捉することができる。このような技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、２０版（前述）に開示されている。
【００６５】
本明細書で記載したタンパク質製剤の持続放出調製物も調製できる。持続放出調製物の適切な例には、タンパク質製剤を含有する固形疎水性重合体の半透過性基質が含まれる。持続放出基質の例には、ポリエステル、ハイドロゲル（例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）またはポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド、Ｌ−グルタミン酸とγ−エチル−Ｌ−グルタメートの共重合体、非分解性エチレン−ビニルアセテート、分解性乳酸−グリコール酸共重合体およびポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸が含まれる。本明細書で記載したタンパク質の持続放出製剤は、例えば、ポリ乳酸グリコール酸共重合体（ＰＬＧＡ）を使用して、その生体適合性および広範囲の生分解性特性によって開発された。ＰＬＧＡ、乳酸およびグリコール酸の分解産物は、ヒト体内で迅速に除去され得る。さらに、この重合体の分解性は、その分子量および組成に応じて数月から数年に調節することができる。リポソーム組成物はまた、本明細書で開示したタンパク質または抗体を製剤化するために使用することができる。
【００６６】
投与
製剤の毒性および治療効果は、当業界で公知の薬学的方法によって、例えば、細胞培養物または実験動物を使用して、例えば、ＬＤ５０（集団の５０％が致死する用量）およびＥＤ５０（集団の５０％に治療効果のある用量）を測定して、測定することができる。毒性と治療効果の間の用量比は、治療係数であり、ＬＤ５０／ＥＤ５０として表すことができる。
【００６７】
細胞培養測定法および動物実験から得られたデータは、ヒトで用いる様々な投薬量の製剤化に使用することができる。このような製剤の投薬量は一般的に、ほとんど、または全く毒性の無いＥＤ５０を含む循環濃度の範囲内である。投薬量は、使用した剤形および利用する投与経路に応じて、この範囲内で変化させることができる。本発明の方法で使用した任意の製剤化のために、治療有効量を細胞培養測定法から最初に概算することができる。用量は、細胞培養物で測定したようなＩＣ５０（すなわち、症状の最大阻害の半分を実現する試験化合物の濃度）を含む循環血漿濃度範囲を実現するために、動物モデルで処方することができる。このような情報は、ヒトにおいて有用な用量をより正確に決定するために使用することができる。血漿中のレベルは、例えば、高速液体クロマトグラフィーによって測定することができる。
【００６８】
製剤のタンパク質の適切な投薬量は、治療する障害の種類、障害の重症度および経過、薬剤の投与が予防目的であるか、または治療目的であるか、先行治療、患者の既往症および薬剤に対する応答ならびに主治医の自由裁量に左右される。製剤は一般的に、投薬量が約０．１ｍｇタンパク質／ｋｇ体重から１００ｍｇタンパク質／ｋｇ体重の間となるように送達される。製剤は、一度に、または一連の治療によって患者に投与される。一実施形態では、ミオスタチン抗体（例えば、ＭＹＯ−２２、ＭＹＯ−２８、ＭＹＯ−０２９）製剤は、それらを必要とする患者に、１ｍｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇ体重の投薬量で送達される。別の実施形態では、ＩＬ−１２抗体製剤は、それらを必要とする患者に、１ｍｇ／ｋｇから５ｍｇ／ｋｇ体重の投薬量で送達される。他の実施形態では、ＩＬ−１３抗体製剤は、それらを必要とする患者に、約０．５ｍｇ／ｋｇから約５ｍｇ／ｋｇ患者体重の投薬量で送達される。
【００６９】
ｉｎ ｖｉｔｒｏ投与で使用される製剤は、滅菌されていなければならない。製剤は、液体の製剤化または凍結乾燥および復元の前後に、例えば、滅菌濾過膜による濾過によって滅菌することができる。本明細書で開示した治療組成物は一般的に、滅菌処理口を有する容器、例えば、静脈内溶液バッグ、または皮下注射針によって貫通可能な栓を有するバイアルに入れる。
【００７０】
製造に関する物品
別の実施形態では、本明細書で記載した製剤を含有し、その使用指示書を一般的に提供する製造に関する物品が提供される。製造に関する物品には、製剤を含有するために適した容器が含まれる。適切な容器には、限定はしないが、瓶、バイアル（例えば、２室式バイアル）、シリンジ（例えば、１室または２室式シリンジ）、試験管、噴霧器、吸入器（例えば、定量噴霧式吸入器または乾燥粉末吸入器）または貯蔵物が含まれる。容器は、様々な材料、例えば、ガラス、金属またはプラスティック（例えば、ポリカーボネート、ポリスチレン、ポリプロピレン）から形成することができる。容器は、製剤を保持し、ラベルが貼ってあるか、付随しており、この容器には復元および／または使用のための指示を表示することができる。このラベルはさらに、製剤が皮下投与のために有用であるか、また企図されていることを表示することができる。製剤を保持している容器は、製剤の投与を繰り返すことが可能な（例えば、２〜６回）多重使用バイアルであってよい。製造に関する物品はさらに、適切な希釈剤（例えば、ＷＦＩ、ＮａＣｌ０．９％、ＢＷＦＩまたはリン酸緩衝生理食塩水）を含む第２の容器を含むことができる。製造に関する物品がタンパク質製剤の凍結乾燥物を含む場合、希釈剤と凍結乾燥製剤を混合することによって、復元製剤中において一般的に少なくとも２０ｍｇ／ｍｌの最終タンパク質濃度がもたらされる。製剤に関する物品はさらに、その他の緩衝剤、希釈剤、フィルター、針、シリンジおよび使用指示書を備えたパッケージ挿入物を含む、商用および使用者の立場から所望されるその他の材料を含むことができる。
【００７１】
本発明は、以下の実施例によってさらに例示される。これらの実施例は、例示の目的のためのみに提供される。これらは、いかなる方法によっても本発明の範囲および内容を制限するものではない。
【実施例】
【００７２】
（実施例１）
抗体製剤の粘度
抗β−アミロイドペプチド（抗ＡＢ）、抗ＩＬ−１３、抗ＩＬ−１２（Ｊ６９５）および抗ミオスタチン（ＭＹＯ−０２９）抗体は、表１に記載したように製剤化した。これらの抗体製剤の粘度は、Ａｎｔｏｎ Ｐａａｒ Ｐｈｙｓｉｃａ ＭＣＲ３０１コーンプレートレオメータを使用して測定した。具体的には、ＣＰ２５−１（直径２４．９７１ｍｍ、角度１．００２゜）コーンを測定全てに使用し、剪断速度は１００秒間常に８９８ １／ｓであった。測定は１０秒間隔で行った。粘度測定は、内蔵式ペルティエ温度制御単位を使用して、４℃および２５℃の両方で実施した。プレートに載置する液体試料は９０μｌであった。各試料は、３連で分析した。
【００７３】
以下の表１には、様々な濃度および様々な製剤中における様々な抗体の粘度を挙げる。
【００７４】
【表１】
【００７５】
表１に示したデータは、抗ミオスタチン（ＭＹＯ−０２９）の粘度が表に挙げたその他の抗体と比較して著しく高いことを示している。抗体全ての粘度は、４℃で増加した。この増加は、ＭＹＯ−０２９では相対的にかなり高い。
【００７６】
（実施例２）
ＭＹＯ−０２９抗体製剤の粘度に対する様々な塩の影響
ＭＹＯ−０２９抗体を、濃度７３ｍｇ／ｍｌで、ヒスチジン１０ｍＭ、スクロース２％、ｐＨ６．０において製剤化した。塩（例えば、塩化カルシウム、塩化マグネシウム、塩化ナトリウムおよびリン酸二水素ナトリウム）の濃縮溶液を、ピペットを使用してＭＹＯ−０２９抗体製剤中に希釈した。ＭＹＯ−０２９抗体製剤の粘度に対するこれらの塩の影響を実施例１で説明したように測定した。これらのデータを図１に示す。
【００７７】
約５ｍＭから約２０ｍＭまでの濃度範囲のＭｇＣｌ２およびＣａＣｌ２はいずれも、ＭＹＯ−０２９抗体製剤の粘度を著しく低下させた。一方、ＮａＣｌおよびＮａＨ２ＳＯ４は、この範囲ではほとんど影響を及ぼさなかった。
【００７８】
したがって、約５ｍＭから約２０ｍＭまでの濃度の塩化カルシウムおよび塩化マグネシウムは、塩化ナトリウムおよび硫酸二水素ナトリウムとは異なり、ＭＹＯ−０２９抗体製剤の効果的な粘度低下剤である。
【００７９】
（実施例３）
Ｊ６９５抗体製剤の粘度に対する塩化カルシウムの影響
Ｊ６９５抗体製剤の粘度は、Ｊ６９５抗体の２種類の異なる濃度、すなわち、１００ｍｇ／ｍｌおよび３００ｍｇ／ｍｌで測定する。
【００８０】
高濃度のＪ６９５抗体製剤の粘度は、低濃度のＪ６９５抗体製剤の粘度よりも高くなるだろう。
【００８１】
塩化カルシウムは、最終濃度が約５ｍＭから２０ｍＭになるまで、３００ｍｇ／ｍｌのＪ６９５抗体製剤に添加する。この場合、抗体製剤の粘度は、塩化カルシウムを含まないＪ６９５製剤と比較して低下していることが予測される。
【００８２】
したがって、約５ｍＭから約２０ｍＭまでの濃度の塩化カルシウムは、Ｊ６９５抗体製剤のための粘度低下剤として効果的である。
【００８３】
（実施例４）
ＭＹＯ−０２８抗体製剤の粘度に対する塩化カルシウムの影響
別の抗ミオスタチン抗体、ＭＹＯ−０２８は、Ｃｅｎｔｒｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａｆｅｅ（登録商標）−４を使用して濃度９５ｍｇ／ｍＬまで濃縮した。塩化カルシウムを以下の表２に従ってＭＹＯ−０２８に添加した。
【００８４】
【表２】
【００８５】
ＭＹＯ−０２８をヒスチジン１０ｍＭ、スクロース５％、ｐＨ６．５において９５ｍｇ／ｍＬで製剤化した。ＣａＣｌ２溶液は、ヒスチジン１０ｍＭ、スクロース２％、ＣａＣｌ２ ２Ｍから構成される。緩衝溶液は、ヒスチジン１０ｍＭ、スクロース５％、ｐＨ６．５から構成される。
【００８６】
これらのＭＹＯ−０２８抗体製剤の粘度は、実施例１で記載したのと同様のレオメータ法を使用し、留去を防止するために溶媒捕捉装置をさらに使用して、プレート上にＭＹＯ−０２８の液体試料１００μｌを載置して測定し、試験は室温で実施した。
【００８７】
これらの実験のデータを図２に示す。
【００８８】
ＣａＣｌ２を添加すると、ＣａＣｌ２２５ｍＭおよび５０ｍＭでのＭＹＯ−０２８抗体製剤の粘度は、ＣａＣｌ２を含まないＭＹＯ−０２８製剤と比較して低下した。これらのデータは、タンパク質製剤の粘度を低下させる、例えば、低粘度抗体製剤を製剤化するための薬剤として使用するためのＣａＣｌ２の適合性を示している。
【００８９】
（実施例５）
ＩＭＡ−６３８抗体製剤の粘度に対する塩化カルシウムの影響
ＩＭＡ−６３８抗体製剤の粘度に対する塩化カルシウムの影響を試験するために、様々な量の塩化カルシウムをピペットでＩＬ−１３抗体、ＩＭＡ−６３８の一定量に添加した。ＩＭＡ−６３８抗体の一定量のタンパク質濃度は約１５０ｍｇ／ｍＬであった。図３は、ＩＭＡ−６３８抗体製剤の粘度に対する塩化カルシウムの影響を図示している。
【００９０】
ＩＭＡ−６３８の粘度は、ＭＹＯ−０２９で認められたのと同様の粘度の低下は示さなかった。これらのデータは、タンパク質製剤と使用するために適切な粘度低下剤の同定方法を示している。
【００９１】
（実施例６）
ＭＹＯ−０２９抗体の安定性に対する塩化カルシウムの影響
化合物（すなわち、粘度低下剤、例えば、ＣａＣｌ２）のタンパク質製剤への添加は、凍結解凍によって引き起こされる負荷に対する分子の安定性に影響を及ぼす可能性がある。この影響は、凍結解凍中のタンパク質の安定性に有害であるか、有益であるか、または影響を与えない可能性がある。
【００９２】
凍結解凍によって引き起こされるＭＹＯ−０２９抗体の分解に対する薬剤（すなわち、ＣａＣｌ２）の影響を評価するために、ＣａＣｌ２５ｍＭの存在下または非存在下で、この分子を−８０℃および３７℃で１０回凍結融解を繰り返し行った。ＭＹＯ−０２９薬剤物質は、限外濾過およびダイアフィルトレーションによって、塩化カルシウムの存在下または非存在下で、ヒスチジン１０ｍＭ、スクロース２％中に製剤化した。最終タンパク質濃度は、約７５ｍｇ／ｍＬであった。一定量２０μｌを−８０℃で凍結し、室温で解凍した。５回および１０回の凍結解凍のために、これを繰り返した。試料を製剤用緩衝液で２５倍に希釈し、タンパク質濃度は２８０ｎｍの吸光度を測定することによって、高分子量生成物の割合（％ＨＭＷ）はＳＥＣ−ＨＰＬＣによって分析した。
【００９３】
凍結解凍によって引き起こされる分解の影響は、（ｉ）タンパク質回収率（２８０ｎｍでの吸光度）、および（ｉｉ）サイズ排除高速液体クロマトグラフィー（ＳＥＣ−ＨＰＬＣ）によって測定される高分子量（％ＨＭＷ）形成の割合によって評価した。ＨＭＷ形成は、この分子の最も一般的な分解経路である。これらの研究の結果を図４Ａおよび図４Ｂに示す。
【００９４】
ＣａＣｌ２を含まない対応する対照試料と比較して、製剤にＣａＣｌ２５ｍＭを添加しても、タンパク質回収または％ＨＭＷ形成には何ら影響はなかった。したがって、塩化カルシウムの添加は、ＭＹＯ−０２９抗体製剤の安定性には影響を及ぼさないようである。これは、タンパク質製剤、例えば、低粘度抗体製剤において粘度低下剤として使用するためのＣａＣｌ２の適合性を示している。
【００９５】
（実施例７）
ＭＹＯ−０２９抗体製剤の安定性に対する塩化カルシウムの影響
ＣａＣｌ２のタンパク質製剤への添加は、長期にわたる分子の液体安定性に影響を及ぼす可能性がある。この影響は、保存中のタンパク質の安定性に有害であるか、有益であるか、または影響を与えない可能性がある。
【００９６】
熱誘導分解に対するＭＹＯ−０２９の液体安定性に対するこの薬剤の影響を評価するために、ＭＹＯ−０２９を含有する製剤を５０℃で７日間まで保存した。一定量を様々な時点で採取し、２８０ｎｍの吸光度によってタンパク質濃度を分析し、％ＨＭＷはＳＥＣ−ＨＰＬＣによって分析した。これらのデータを図５Ａおよび図５Ｂに示す。
【００９７】
対照試料と比較して、ＣａＣｌ２の製剤への添加は、５０℃で保存した液体タンパク質の安定性に悪い影響は及ぼさなかった。薬剤物質におけるＨＭＷの割合はまた、ＣａＣｌ２を含有する材料ではわずかに少ないようであった。これらのデータはさらに、粘度低下剤としてのＣａＣｌ２の使用の適合性を示している。これらはまた、例えば、薬剤が製剤中におけるタンパク質の安定性に影響を及ぼすかどうかに関して、タンパク質製剤の粘度を低下させる薬剤の適合性を決定する方法を示している。
【００９８】
（実施例８）
凍結乾燥したＭＹＯ−０２９の安定性に対する塩化カルシウムの影響
ＣａＣｌ２などの薬剤のタンパク質製剤への添加は、長期にわたってタンパク質の凍結乾燥剤形に影響を及ぼす可能性がある。この影響は、保存中のタンパク質の安定性に有害であるか、有益であるか、または影響を与えない可能性がある。
【００９９】
凍結乾燥したＭＹＯ−０２９の安定性に対するこの賦形剤の影響を評価するために、この分子を含有する製剤をＣａＣｌ２５ｍＭと共に、または共にせずに（対照）凍結乾燥し、５０℃および４℃で４週間保存を行った。バイアルを週に１度取り出して、２８０℃の吸光度によってタンパク質濃度を、ＳＥＣ−ＨＰＬＣによってＨＭＷの割合を、陽イオン交換高速液体クロマトグラフィー（ＣＥＸ−ＨＰＬＣ）によって電荷分布を分析した。バイアルから取り出した量および粘度（１時点のみ）も測定した。
【０１００】
Ａ．復元した薬剤製品の粘度
ＭＹＯ−０２９薬剤製品の約１５０ｍｇ／ｍＬでの粘度（実施例１と実質的に同様の方法で測定）は、塩化カルシウム５ｍＭが製剤中に存在すると低下する。
【０１０１】
Ｂ．バイアルから取り出す量
１ｍＬシリンジおよび２１Ｇ針でバイアルから取り出すことができる薬剤製品の量は、ＣａＣｌ２が製剤中に存在すると改善される。
【０１０２】
Ｃ．タンパク質濃度
対照と比較して、製剤にＣａＣｌ２を添加してもタンパク質回収率に影響はない。
【０１０３】
Ｄ．高分子量
ＣａＣｌ２５ｍＭは、４℃で４週間保存した後に形成されるＨＭＷ種の割合にあまり大きな影響を及ぼさないだろう。しかし、５０℃では、ＨＭＷ形成率は、対照と比較して著しく低下することが予測される。
【０１０４】
Ｅ．電荷分布
安定時点は、ＣＥＸ−ＨＰＬＣ、タンパク質中の電荷の違いを研究するために使用されるクロマトグラフィー装置によって分析される。ＣＥＸ−ＨＰＬＣでは、負に荷電した分子は正に荷電し分子よりも早く溶出する。この方法を使用して、アスパラギン残基のアスパラギン酸またはイソアスパラギン酸への脱アミド化を検出する。脱アミド化によって、タンパク質の正味の負の電荷の増加が生じ、ＨＰＬＣカラムから早く溶出するだろう。この実験では、塩化カルシウムの影響がタンパク質分解に及び、対照で観察されたものとは異なる電荷の変化が生じる。塩化カルシウムを含まない対照と比較して、同様の電荷変化が長期にわたって生じることが予測される。したがって、ＣａＣｌ２は、両方の保存温度でＭＹＯ−０２９の電荷分布に影響を及ぼさないことが予測される。
【０１０５】
要約すると、対照試料と比較して、ＣａＣｌ２の製剤への添加は、４℃および５０℃で保存した場合、凍結乾燥状態の塩化カルシウムを含まない実験対照に対して、製剤中のタンパク質の安定性にあまり悪い影響は及ぼさないだろう。場合によって、ＣａＣｌ２はタンパク質の安定性に有益であることが見い出された。
【０１０６】
その他の実施形態
本発明はその詳細な説明に関連して説明されるが、前記の説明は例示のためであって本発明の範囲を限定するものではなく、添付の請求項の範囲によって定義されることを理解されたい。その他の態様、利点および変更は、以下の特許請求の範囲内にある。
【図面の簡単な説明】
【０１０７】
【図１】様々な塩の濃度を増加させて抗ミオスタチン（ＭＹＯ−０２９）抗体製剤の粘度に対する影響を測定するために実施した実験の結果を示したグラフである。
【図２】塩化カルシウムの濃度を増加させて抗ミオスタチン（ＭＹＯ−０２８）抗体製剤の粘度に対する影響を測定するために実施した実験の結果を示した棒グラフである。
【図３】塩化カルシウムの濃度を増加させて抗ＩＬ−１３（ＩＭＡ−６３８）抗体製剤の粘度に対する影響を測定するために実施した実験の結果を示すグラフである。
【図４Ａ】塩化カルシウムの存在下または非存在下で、抗ミオスタチン（ＭＹＯ−０２９）抗体の凍結解凍誘導性分解の影響を試験するために実施した実験の結果を示した棒グラフである。分解は、２８０ｎｍでの吸光度を計測することによって測定されたタンパク質回収率によって評価された。
【図４Ｂ】塩化カルシウムの存在下または非存在下で、抗ミオスタチン（ＭＹＯ−０２９）抗体の凍結解凍誘導性分解の影響を試験するために実施した実験の結果を示した棒グラフである。分解は、サイズ排除高速液体クロマトグラフィー（ＳＥＣ−ＨＰＬＣ）によって測定された高分子重量種（％ＨＭＷ）形成の割合によって評価された。
【図５Ａ】塩化カルシウムの存在または非存在（対照）の、４０℃で７日間まで保存した抗ミオスタチン（ＭＹＯ−０２９）抗体の液体安定性に対する影響を試験するために実施した実験の結果を示した棒グラフである。ＭＹＯ−０２９抗体の液体安定性は、２８０ｎｍでの吸光度を計測することによって決定された。
【図５Ｂ】塩化カルシウムの存在または非存在（対照）の、４０℃で７日間まで保存した抗ミオスタチン（ＭＹＯ−０２９）抗体の液体安定性に対する影響を試験するために実施した実験の結果を示した棒グラフである。ＭＹＯ−０２９抗体の液体安定性は、ＳＥＣ−ＨＰＬＣによって測定されたようにＨＭＷ形成を測定することによって決定された。
【図６】ＭＹＯ−０２８抗体重鎖（配列番号１）および軽鎖（配列番号２）のアミノ酸配列を表した図である。
【図７】ＭＹＯ−０２９抗体重鎖（配列番号３）および軽鎖（配列番号４）のアミノ酸配列を表した図である。
【図８】Ｊ６９５抗体重鎖（配列番号５）および軽鎖（配列番号６）のアミノ酸配列を表した図である。
【図９】ＩＭＡ−６３８抗体重鎖（配列番号７）および軽鎖（配列番号８）のアミノ酸配列を表した図である。重鎖ＤＮＡ配列によってコードされた最後のアミノ酸残基、Ｌｙｓ４４８は、ＩＭＡ−６３８の成熟した分泌型に少量で認められるのみで、おそらくＣＨＯ細胞性プロテアーゼによって細胞内でプロセシングされる間に大半のモノクローナル抗体から除去されるのだろう。したがって、ＩＭＡ−６３８重鎖のカルボキシ末端はＧｌｙ４４７である。カルボキシ末端リシンのプロセシングは、組換え体および血漿由来抗体で認められ、それらの機能に影響を及ぼさないと考えられる。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
タンパク質製剤の粘度を低下させる方法であって、
（ａ）タンパク質製剤を提供し、
（ｂ）塩化カルシウムまたは塩化マグネシウムをタンパク質製剤に約０．５ｍＭと約２０ｍＭの間の濃度となるまで添加することを含み、ここで塩化カルシウムまたは塩化マグネシウムを含むタンパク質製剤の粘度が粘度低下剤を含まないタンパク質製剤の粘度と比較して低下している、方法。
【請求項２】
タンパク質が抗体、Ｉｇ融合タンパク質、受容体、転写因子、酵素、リガンドおよびその生物活性断片からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
タンパク質が抗体またはその生物活性断片である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
タンパク質がＩｇ融合タンパク質である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
タンパク質が抗体であり、抗体が抗ミオスタチン抗体、抗ＩＬ−１２抗体、または抗ＩＬ−１３抗体である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
抗ミオスタチン抗体がＭＹＯ−０２９であり、抗ＩＬ−１２抗体がＪ６９５であり、抗ＩＬ−１３抗体がＩＭＡ−６３８である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
タンパク質製剤の粘度が、粘度低下剤を含まない製剤の粘度と比較して少なくとも約５％低下している、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
（ｉ）タンパク質、
（ｉｉ）製剤中の濃度が約５ｍＭと約２０ｍＭの間であり、塩化ナトリウムまたは硫酸二水素ナトリウムではない粘度低下剤、および
（ｉｉｉ）緩衝剤
を含み、製剤のｐＨが約５．５〜６．５である低粘度製剤。
【請求項９】
タンパク質が抗体、Ｉｇ融合タンパク質、受容体、転写因子、酵素、リガンドおよびその生物活性断片からなる群から選択される、請求項８に記載の低粘度製剤。
【請求項１０】
タンパク質が抗体またはその生物活性断片である、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
タンパク質がＩｇ融合タンパク質である、請求項８に記載の方法。
【請求項１２】
粘度低下剤が塩化カルシウムまたは塩化マグネシウムである、請求項８に記載のタンパク質製剤。
【請求項１３】
（ｉ）抗ミオスタチン抗体またはそれらのミオスタチン結合断片、
（ｉｉ）粘度低下剤、および
（ｉｉｉ）緩衝剤
を含み、製剤のｐＨが約５．５〜６．５である、抗ミオスタチン抗体製剤。
【請求項１４】
抗ミオスタチン抗体がモノクローナル抗体である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
抗ミオスタチン抗体がヒト化モノクローナル抗体である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
抗ミオスタチン抗体がミオスタチンに、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）による測定で約６×１０−１１ＭのＫｄで結合する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
抗ミオスタチン抗体がＭＹＯ−０２２、ＭＹＯ−０２８およびＭＹＯ−０２９からなる群から選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１８】
製剤中の抗ミオスタチンの濃度が約２５ｍｇ／ｍｌから約４００ｍｇ／ｍｌである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１９】
粘度低下剤が塩化カルシウムまたは塩化マグネシウムである、請求項１３に記載の方法。
【請求項２０】
粘度低下剤が濃度約５ｍＭから約２０ｍＭの塩化カルシウムである、請求項１３に記載の方法。
【請求項２１】
緩衝剤が製剤中の濃度約４ｍＭから約６０ｍＭのヒスチジン緩衝剤である、請求項１３に記載の方法。
【請求項２２】
製剤が凍結保護物質をさらに含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項２３】
凍結保護物質が製剤中の濃度約０．５％から約５％（重量／容量）のスクロースまたはトレハロースである、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
製剤が製剤中の濃度約０％から約０．２％（重量／容量）の界面活性剤をさらに含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項２５】
界面活性剤がポリソルベート−２０またはポリソルベート−８０である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
製剤が抗酸化剤をさらに含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項２７】
抗酸化剤がメチオニンであり、製剤中のメチオニンの濃度が約２ｍＭと約２０ｍＭの間である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
（ｉ）抗ミオスタチン抗体が濃度約２０ｍｇ／ｍｌから約４００ｍｇ／ｍｌの完全にヒト化された抗ミオスタチン抗体であり、
（ｉｉ）粘度低下剤が濃度約５ｍＭから２０ｍＭの塩化カルシウムまたは塩化マグネシウムであり、
（ｉｉｉ）緩衝剤が濃度約５ｍＭから約２０ｍＭのヒスチジン緩衝剤であり、
製剤のｐＨが約６．０である、請求項１３に記載の抗ミオスタチン抗体製剤。
【請求項２９】
凍結乾燥されている、請求項１３に記載の製剤。
【請求項３０】
製剤の粘度が、粘度低下剤を含まない製剤と比較して少なくとも約５％低下している、請求項１３に記載の製剤。
【請求項３１】
筋ジストロフィー、筋肉減少症、悪液質およびＩＩ型糖尿病からなる群から選択された障害の治療のための医薬組成物であって、請求項９の抗ミオスタチン抗体製剤を含む医薬組成物。
【請求項３２】
筋ジストロフィー、筋肉減少症、悪液質およびＩＩ型糖尿病からなる群から選択された障害の治療方法であって、
（ｉ）抗ミオスタチン抗体またはそれらのミオスタチン結合断片、
（ｉｉ）粘度低下剤、および
（ｉｉｉ）緩衝剤
を含み、製剤のｐＨが約５．５〜６．５である、薬剤として有効な量の抗体製剤を投与することを含む方法。
【請求項３３】
抗体製剤が、注射、静脈注入、または噴霧器による、もしくは乾燥粉末としての肺投与によって投与される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
請求項１に記載の製剤を含有する容器を含むキット。
【請求項３５】
前記製剤を投与するための指示書をさらに含む、請求項３４に記載のキット。
【請求項３６】
タンパク質製剤の粘度を低下させる方法であって、
（ｉ）タンパク質製剤を提供し、
（ｉｉ）粘度低下剤をタンパク質製剤に添加することを含み、ここで粘度低下剤が塩化カルシウムまたは塩化マグネシウムであり、製剤中の粘度低下剤の濃度が約１ｍＭと約２５ｍＭの間であるところの、方法。
【請求項３７】
低粘度タンパク質製剤を同定する方法であって、
（ｉ）タンパク質製剤を提供し、
（ｉｉ）粘度低下剤をタンパク質製剤に添加し、ここで粘度低下剤が塩化カルシウムまたは塩化マグネシウムであり、製剤中の粘度低下剤の濃度が約１ｍＭと約２５ｍＭの間であり、それによって可能性のある低粘度製剤を形成し、
（ｉｉｉ）可能性のある低粘度タンパク質製剤の粘度を測定することを含み、
ここで、可能性のある低粘度タンパク質製剤の粘度が粘度低下剤を含まないタンパク質製剤の粘度と比較して低下している場合、該製剤は低粘度製剤であるところの、方法。
【請求項３８】
タンパク質製剤の安定性を測定することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３９】
タンパク質製剤の安定性を測定することをさらに含む、請求項３７に記載の方法。
【請求項４０】
タンパク質製剤の安定性が、タンパク質製剤を凍結解凍した後、タンパク質製剤を５０℃で１〜７日間保存した後、または凍結乾燥した後に測定される、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
安定性が、高分子量種の割合、低分子量種の割合、または対照と比較したタンパク質製剤の電荷分布を測定することによって決定される、請求項３９に記載の方法。
【請求項１】
タンパク質製剤の粘度を低下させる方法であって、
（ａ）タンパク質製剤を提供し、
（ｂ）塩化カルシウムまたは塩化マグネシウムをタンパク質製剤に約０．５ｍＭと約２０ｍＭの間の濃度となるまで添加することを含み、ここで塩化カルシウムまたは塩化マグネシウムを含むタンパク質製剤の粘度が粘度低下剤を含まないタンパク質製剤の粘度と比較して低下している、方法。
【請求項２】
タンパク質が抗体、Ｉｇ融合タンパク質、受容体、転写因子、酵素、リガンドおよびその生物活性断片からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
タンパク質が抗体またはその生物活性断片である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
タンパク質がＩｇ融合タンパク質である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
タンパク質が抗体であり、抗体が抗ミオスタチン抗体、抗ＩＬ−１２抗体、または抗ＩＬ−１３抗体である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
抗ミオスタチン抗体がＭＹＯ−０２９であり、抗ＩＬ−１２抗体がＪ６９５であり、抗ＩＬ−１３抗体がＩＭＡ−６３８である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
タンパク質製剤の粘度が、粘度低下剤を含まない製剤の粘度と比較して少なくとも約５％低下している、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
（ｉ）タンパク質、
（ｉｉ）製剤中の濃度が約５ｍＭと約２０ｍＭの間であり、塩化ナトリウムまたは硫酸二水素ナトリウムではない粘度低下剤、および
（ｉｉｉ）緩衝剤
を含み、製剤のｐＨが約５．５〜６．５である低粘度製剤。
【請求項９】
タンパク質が抗体、Ｉｇ融合タンパク質、受容体、転写因子、酵素、リガンドおよびその生物活性断片からなる群から選択される、請求項８に記載の低粘度製剤。
【請求項１０】
タンパク質が抗体またはその生物活性断片である、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
タンパク質がＩｇ融合タンパク質である、請求項８に記載の方法。
【請求項１２】
粘度低下剤が塩化カルシウムまたは塩化マグネシウムである、請求項８に記載のタンパク質製剤。
【請求項１３】
（ｉ）抗ミオスタチン抗体またはそれらのミオスタチン結合断片、
（ｉｉ）粘度低下剤、および
（ｉｉｉ）緩衝剤
を含み、製剤のｐＨが約５．５〜６．５である、抗ミオスタチン抗体製剤。
【請求項１４】
抗ミオスタチン抗体がモノクローナル抗体である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
抗ミオスタチン抗体がヒト化モノクローナル抗体である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
抗ミオスタチン抗体がミオスタチンに、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）による測定で約６×１０−１１ＭのＫｄで結合する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
抗ミオスタチン抗体がＭＹＯ−０２２、ＭＹＯ−０２８およびＭＹＯ−０２９からなる群から選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１８】
製剤中の抗ミオスタチンの濃度が約２５ｍｇ／ｍｌから約４００ｍｇ／ｍｌである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１９】
粘度低下剤が塩化カルシウムまたは塩化マグネシウムである、請求項１３に記載の方法。
【請求項２０】
粘度低下剤が濃度約５ｍＭから約２０ｍＭの塩化カルシウムである、請求項１３に記載の方法。
【請求項２１】
緩衝剤が製剤中の濃度約４ｍＭから約６０ｍＭのヒスチジン緩衝剤である、請求項１３に記載の方法。
【請求項２２】
製剤が凍結保護物質をさらに含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項２３】
凍結保護物質が製剤中の濃度約０．５％から約５％（重量／容量）のスクロースまたはトレハロースである、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
製剤が製剤中の濃度約０％から約０．２％（重量／容量）の界面活性剤をさらに含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項２５】
界面活性剤がポリソルベート−２０またはポリソルベート−８０である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
製剤が抗酸化剤をさらに含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項２７】
抗酸化剤がメチオニンであり、製剤中のメチオニンの濃度が約２ｍＭと約２０ｍＭの間である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
（ｉ）抗ミオスタチン抗体が濃度約２０ｍｇ／ｍｌから約４００ｍｇ／ｍｌの完全にヒト化された抗ミオスタチン抗体であり、
（ｉｉ）粘度低下剤が濃度約５ｍＭから２０ｍＭの塩化カルシウムまたは塩化マグネシウムであり、
（ｉｉｉ）緩衝剤が濃度約５ｍＭから約２０ｍＭのヒスチジン緩衝剤であり、
製剤のｐＨが約６．０である、請求項１３に記載の抗ミオスタチン抗体製剤。
【請求項２９】
凍結乾燥されている、請求項１３に記載の製剤。
【請求項３０】
製剤の粘度が、粘度低下剤を含まない製剤と比較して少なくとも約５％低下している、請求項１３に記載の製剤。
【請求項３１】
筋ジストロフィー、筋肉減少症、悪液質およびＩＩ型糖尿病からなる群から選択された障害の治療のための医薬組成物であって、請求項９の抗ミオスタチン抗体製剤を含む医薬組成物。
【請求項３２】
筋ジストロフィー、筋肉減少症、悪液質およびＩＩ型糖尿病からなる群から選択された障害の治療方法であって、
（ｉ）抗ミオスタチン抗体またはそれらのミオスタチン結合断片、
（ｉｉ）粘度低下剤、および
（ｉｉｉ）緩衝剤
を含み、製剤のｐＨが約５．５〜６．５である、薬剤として有効な量の抗体製剤を投与することを含む方法。
【請求項３３】
抗体製剤が、注射、静脈注入、または噴霧器による、もしくは乾燥粉末としての肺投与によって投与される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
請求項１に記載の製剤を含有する容器を含むキット。
【請求項３５】
前記製剤を投与するための指示書をさらに含む、請求項３４に記載のキット。
【請求項３６】
タンパク質製剤の粘度を低下させる方法であって、
（ｉ）タンパク質製剤を提供し、
（ｉｉ）粘度低下剤をタンパク質製剤に添加することを含み、ここで粘度低下剤が塩化カルシウムまたは塩化マグネシウムであり、製剤中の粘度低下剤の濃度が約１ｍＭと約２５ｍＭの間であるところの、方法。
【請求項３７】
低粘度タンパク質製剤を同定する方法であって、
（ｉ）タンパク質製剤を提供し、
（ｉｉ）粘度低下剤をタンパク質製剤に添加し、ここで粘度低下剤が塩化カルシウムまたは塩化マグネシウムであり、製剤中の粘度低下剤の濃度が約１ｍＭと約２５ｍＭの間であり、それによって可能性のある低粘度製剤を形成し、
（ｉｉｉ）可能性のある低粘度タンパク質製剤の粘度を測定することを含み、
ここで、可能性のある低粘度タンパク質製剤の粘度が粘度低下剤を含まないタンパク質製剤の粘度と比較して低下している場合、該製剤は低粘度製剤であるところの、方法。
【請求項３８】
タンパク質製剤の安定性を測定することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３９】
タンパク質製剤の安定性を測定することをさらに含む、請求項３７に記載の方法。
【請求項４０】
タンパク質製剤の安定性が、タンパク質製剤を凍結解凍した後、タンパク質製剤を５０℃で１〜７日間保存した後、または凍結乾燥した後に測定される、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
安定性が、高分子量種の割合、低分子量種の割合、または対照と比較したタンパク質製剤の電荷分布を測定することによって決定される、請求項３９に記載の方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４Ａ】
【図４Ｂ】
【図５Ａ】
【図５Ｂ】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図２】
【図３】
【図４Ａ】
【図４Ｂ】
【図５Ａ】
【図５Ｂ】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【公表番号】特表２００９−５２１４８２（Ｐ２００９−５２１４８２Ａ）
【公表日】平成２１年６月４日（２００９．６．４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−５４７６３８（Ｐ２００８−５４７６３８）
【出願日】平成１８年１２月２１日（２００６．１２．２１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０４９１２９
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０７６０６２
【国際公開日】平成１９年７月５日（２００７．７．５）
【出願人】（５９１０１１５０２）ワイス (573)
【氏名又は名称原語表記】Ｗｙｅｔｈ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２１年６月４日（２００９．６．４）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年１２月２１日（２００６．１２．２１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０４９１２９
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０７６０６２
【国際公開日】平成１９年７月５日（２００７．７．５）
【出願人】（５９１０１１５０２）ワイス (573)
【氏名又は名称原語表記】Ｗｙｅｔｈ
【Ｆターム（参考）】
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