個体において骨質量を増加させるために有用である化合物を同定するためにＧＰＲ１１９受容体を用いる方法
本発明は、ＧＰＲ１１９受容体を用いて、個体において骨質量を増加させるために有用な化合物を同定する方法に関する。ＧＰＲ１１９受容体のアゴニストは、骨粗鬆症のような低骨質量によって特徴付けられる状態を治療するためまたは予防するための、および個体において骨質量を増加させるための治療剤として有用である。ＧＰＲ１１９受容体のアゴニストは、個体において骨形成を促進する。ある実施形態において、上記個体はヒトである。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）テスト化合物を宿主細胞と、またはＧプロテイン−結合受容体を含む宿主細胞の膜と接触させる工程であって、該Ｇプロテイン−結合受容体は：
（ｉ）配列番号２のアミノ酸１〜３３５；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５；
（ｉｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５、但し、該受容体は配列番号２のアミノ酸配列を含まない；
（ｉｖ）特異的プライマー配列番号３および配列番号４を用いてヒトＤＮＡ試料にてポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって増幅可能なポリヌクレオチドによってコードされるＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列；
（ｖ）高ストリンジェンシーの条件下で配列番号１の相補体とハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされたＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列；
（ｖｉ）配列番号２の改変体；
（ｖｉｉ）
（ａ’）配列番号２に対して少なくとも約８０％の同一性を有するＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列；および
（ｂ’）配列番号２の少なくとも２０連続アミノ酸を含むＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列；
よりなる群から選択される場合の（ｖｉ）のアミノ酸配列；
（ｖｉｉｉ）配列番号２を有するＧプロテイン−結合受容体の構成的に活性なバージョンのアミノ酸配列；および
（ｉｘ）（ｉ）〜（ｖｉｉｉ）のいずれか１つの生物学的に活性な断片；
よりなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、工程；および、
（ｂ）該受容体の機能性を刺激する該テスト化合物の能力を決定する工程；
を含み、
ここで、該受容体機能性を刺激する該テスト化合物の能力は、該テスト化合物がＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴付けられる状態を治療または予防するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物であることを示す、ＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴付けられる状態を治療または予防するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物を同定する方法。
【請求項２】
請求項１記載の方法の工程を含み、さらに：
（ｃ）工程（ｂ）における前記受容体の機能性を刺激する化合物をイン・ビトロにて脊椎動物腸内分泌細胞と接触させる工程、および、
（ｄ）該化合物が該脊椎動物腸内分泌細胞からのＧＩＰ分泌を刺激するか否かを決定する工程；
を含み、
ここで、該脊椎動物腸内分泌細胞からのＧＩＰ分泌を刺激する該テスト化合物の能力は、テスト化合物がＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴付けられる状態を治療または予防するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物であることを示す、ＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴付けられる状態を治療または予防するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物を同定する方法。
【請求項３】
請求項１記載の方法の工程を含み、さらに：
（ｃ）工程（ｂ）における前記受容体の機能性を刺激する化合物を脊椎動物に投与する工程；および、
（ｄ）該化合物が脊椎動物においてＧＩＰレベルを増加させるか否かを決定する工程；
を含み、
ここで、該脊椎動物におけるＧＩＰレベルを増加させる該テスト化合物の能力は、該化合物がＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴付けられる状態を治療または予防するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物であることを示す、ＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴付けられる状態を治療または予防するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物を同定する方法。
【請求項４】
前記脊椎動物が非−ヒト脊椎動物である請求項３記載の方法。
【請求項５】
請求項１記載の方法の工程を含み、さらに：
（ｃ）工程（ｂ）における前記受容体の機能性を刺激する化合物を脊椎動物に投与する工程；および、
（ｄ）該化合物が脊椎動物において骨質量のレベルを増加させるか否かを決定する工程；
を含み、
ここで、該脊椎動物における骨質量のレベルを増加させる該テスト化合物の能力は、テスト化合物が低骨質量によって特徴付けられる状態を治療または予防するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物であることを示す、低骨質量によって特徴付けられる状態を治療または予防するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物を同定する方法。
【請求項６】
前記脊椎動物が非−ヒト脊椎動物である請求項５記載の方法。
【請求項７】
前記受容体が組換え体である請求項１〜６いずれか１項記載の方法。
【請求項８】
前記宿主細胞が発現ベクターを含み、該発現ベクターがＧプロテイン−結合受容体をコードするポリヌクレオチドを含む請求項１〜７いずれか１項記載の方法。
【請求項９】
前記決定する工程が、第二のメッセンジャーのレベルの決定を介するものである請求項１〜８いずれか１項記載の方法。
【請求項１０】
前記第二のメッセンジャーが環状ＡＭＰ（ｃＡＭＰ）、環状ＧＭＰ（ｃＧＭＰ）、イノシトール１，４，５−三リン酸（ＩＰ３）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、ＭＡＰキナーゼ活性、ＭＡＰＫ／ＥＲＫキナーゼキナーゼ−１（ＭＥＫＫ１）活性およびＣａ２＋よりなる群から選択される請求項９記載の方法。
【請求項１１】
ｃＡＭＰのレベルが増加する請求項１０記載の方法。
【請求項１２】
前記決定する工程が、メラニン保有細胞アッセイの使用を介する前記ＧＰＣＲを含む膜へのＧＴＰγＳ結合の決定を介するもの、または受容体アッセイを介するものである請求項１〜８いずれか１項記載の方法。
【請求項１３】
前記宿主細胞が哺乳動物宿主細胞である請求項１〜１２いずれか１項記載の方法。
【請求項１４】
前記宿主細胞が酵母宿主細胞である請求項１〜１２いずれか１項記載の方法。
【請求項１５】
前記宿主細胞がメラニン保有細胞宿主細胞である請求項１〜１２いずれか１項記載の方法。
【請求項１６】
前記テスト化合物が小分子である請求項１〜１５いずれか１項記載の方法。
【請求項１７】
前記受容体が、配列番号２に対して少なくとも約８０％同一性を有するＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列を含む請求項１〜１６いずれか１項記載の方法。
【請求項１８】
前記受容体が配列番号２のアミノ酸配列を含む請求項１〜１７いずれか１項記載の方法。
【請求項１９】
（ａ）化合物をイン・ビトロにて脊椎動物腸内分泌細胞と接触させる工程であって、該化合物は請求項１記載の方法によって同定されている、工程；および、
（ｂ）該化合物が脊椎動物腸内分泌細胞からのＧＩＰ分泌を刺激するか否かを決定する工程；
を含み、
ここで、該脊椎動物腸内分泌細胞からのＧＩＰ分泌を刺激する該テスト化合物の能力は、さらに、該テスト化合物がＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴づけられる状態を治療または予防するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物であることを示す、ＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴付けられる状態を予防または治療するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物を同定する方法。
【請求項２０】
（ａ）化合物を脊椎動物に投与する工程であって、該化合物は請求項１記載の方法によって同定されている、工程；および、
（ｂ）該化合物が該脊椎動物においてＧＩＰレベルを増加させるか否かを決定する工程；
を含み、
ここで、該脊椎動物においてＧＩＰレベルを増加させる該テスト化合物の能力は、さらに、該テスト化合物がＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴付けられる状態を治療または予防するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物であることを示す、ＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴付けられる状態を予防または治療するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物を同定する方法。
【請求項２１】
前記脊椎動物が非−ヒト脊椎動物である、請求項２０記載の方法。
【請求項２２】
（ａ）化合物を脊椎動物に投与する工程であって、該化合物は請求項１記載の方法によって同定されている、工程；および、
（ｂ）該化合物が該脊椎動物において骨質量のレベルを増加させるか否かを決定する工程；
を含み、
ここで、該脊椎動物において骨質量のレベルを増加させる該テスト化合物の能力は、さらに、該テスト化合物が低骨質量によって特徴付けられる状態を治療または予防するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物であることを示す、低骨質量によって特徴づけられる状態を予防または治療するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物を同定する方法。
【請求項２３】
前記脊椎動物が非−ヒト脊椎動物である請求項２２記載の方法。
【請求項２４】
前記テスト化合物が小分子である請求項１９〜２３いずれか１項記載の方法。
【請求項２５】
（ａ）ＧＰＲ１１９アゴニストをイン・ビトロにて脊椎動物腸内分泌細胞と接触させる工程；および
（ｂ）該ＧＰＲ１１９アゴニストが該脊椎動物腸内分泌細胞からのＧＩＰ分泌を刺激するか否かを決定する工程；
を含み、
ここで、該脊椎動物腸内分泌細胞からのＧＩＰ分泌を刺激する該ＧＰＲ１１９アゴニストの能力は、該ＧＰＲ１１９アゴニストがＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴付けられる状態を治療または予防するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物であることを示す、ＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴づけられる状態を予防または治療するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物を同定する方法。
【請求項２６】
（ａ）ＧＰＲ１１９アゴニストを脊椎動物に投与する工程；および、
（ｂ）該ＧＰＲ１１９アゴニストが該脊椎動物においてＧＩＰレベルを増加させるか否かを決定する工程；
を含み、
ここで、該脊椎動物におけるＧＩＰレベルを増加させる該ＧＰＲ１１９アゴニストの能力が、該ＧＰＲ１１９アゴニストがＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴付けられる状態を治療または予防するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物であることを示す、ＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴付けられる状態を予防または治療するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物を同定する方法。
【請求項２７】
前記脊椎動物が非−ヒト脊椎動物である請求項２６記載の方法。
【請求項２８】
（ａ）ＧＰＲ１１９アゴニストを脊椎動物に投与する工程；および、
（ｂ）該ＧＰＲ１１９アゴニストが脊椎動物において骨質量のレベルを増加させるか否かを決定する工程；
を含み、
ここで、脊椎動物において骨質量のレベルを増加させるＧＰＲ１１９アゴニスト能力が、該ＧＰＲ１１９アゴニストが低骨質量によって特徴付けられる状態を治療または予防するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物であることを示す、低骨質量によって特徴付けられる状態を予防または治療するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物を同定する方法。
【請求項２９】
前記脊椎動物が非−ヒト脊椎動物である請求項２８記載の方法。
【請求項３０】
前記ＧＰＲ１１９アゴニストがヒトＧＰＲ１１９のアゴニストである請求項２５〜２９いずれか１項記載の方法。
【請求項３１】
前記ＧＰＲ１１９アゴニストは選択的ＧＰＲ１１９アゴニストである請求項２５〜３０いずれか１項記載の方法。
【請求項３２】
前記ＧＰＲ１１９アゴニストは１０μＭ、１μＭおよび１００ｎＭよりなる群から選択される値未満のＥＣ５０を有する請求項２５〜３１いずれか１項記載の方法。
【請求項３３】
前記ＧＰＲ１１９アゴニストが小分子である請求項２５〜３２いずれか１項記載の方法。
【請求項３４】
（ａ）テスト化合物の存在下または非存在下にて、Ｇプロテイン−結合受容体を該受容体に対する所望により標識された公知のリガンドと接触させる工程であって、ここで、該Ｇプロテイン−結合受容体は：
（ｉ）配列番号２のアミノ酸１〜３３５；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５；
（ｉｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５、但し、該受容体は配列番号２のアミノ酸配列を含まない；
（ｉｖ）特異的プライマー配列番号３および配列番号４を用いてヒトＤＡＮ試料でのポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって増幅可能なポリヌクレオチドによってコードされるＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列；
（ｖ）高ストリンジェンシーの条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列；
（ｖｉ）配列番号２の改変体；
（ｖｉｉ）
（ａ’）配列番号２に対して少なくとも約８０％同一性を有するＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列；および
（ｂ’）配列番号２の少なくとも２０連続アミノ酸を含むＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列；
よりなる群から選択される場合の（ｖｉ）アミノ酸配列；
（ｖｉｉｉ）配列番号２を有するＧプロテイン−結合受容体の構成的に活性なバージョンのアミノ酸配列；および
（ｉｘ）（ｉ）〜（ｖｉｉｉ）のいずれか１つの生物学的に活性な断片；
よりなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、工程；
（ｂ）該公知のリガンドおよび該受容体の間の複合体を検出する工程；および、
（ｃ）該テスト化合物の非存在下におけるよりも該テスト化合物の存在下において該複合体のより少数が形成されるか否かを決定する工程；
を含み、
ここで、該決定する工程は、該テスト化合物がＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴付けられる状態を治療または予防するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物であることを示す、ＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴付けられる状態を予防または治療するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物を同定する方法。
【請求項３５】
請求項３４記載の方法の工程を含み、さらに：
（ｄ）その存在下でより少数の前記複合体が工程（ｃ）で形成される化合物を、イン・ビトロにて脊椎動物腸内分泌細胞と接触させる工程；および、
（ｅ）該化合物が該脊椎動物腸内分泌細胞からのＧＩＰ分泌を刺激するか否かを決定する工程；
を含み、
ここで、該脊椎動物腸内分泌細胞からのＧＩＰ分泌を刺激する該テスト化合物の能力は、該テスト化合物がＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴付けられる状態を治療または予防するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物であることを示す、ＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴付けられる状態を予防または治療するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物を同定する方法。
【請求項３６】
請求項３４記載の方法の工程を含み、さらに：
（ｄ）その存在下でより少数の前記複合体が工程（ｃ）で形成される化合物を、脊椎動物に投与する工程；および、
（ｅ）該化合物が該脊椎動物においてＧＩＰレベルを増加させるか否かを決定する工程；
を含み、
ここで、該脊椎動物においてＧＩＰレベルを増加させる該テスト化合物の能力は、該テスト化合物がＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴付けられる状態を治療または予防するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物であることを示す、ＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴付けらえる状態を予防または治療するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物を同定する方法。
【請求項３７】
前記脊椎動物が非−ヒト脊椎動物である請求項３６記載の方法。
【請求項３８】
請求項３４記載の方法の工程を含み、さらに：
（ｄ）その存在下でより少数の前記複合体が工程（ｃ）で形成される化合物を脊椎動物に投与する工程；および、
（ｅ）該化合物が脊椎動物において骨質量のレベルを増加させるか否かを判断する工程；
を含み、
ここで、該脊椎動物において骨質量のレベルを増加させる該テスト化合物の能力は、該テスト化合物が、低骨質量によって特徴付けられる状態を治療または予防するのに有用な化合物、または個体によって骨質量を増加させるのに有用な化合物であることを示す、低骨質量によって特徴付けられる状態を予防または治療するのに有用な化合物または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物を同定する方法。
【請求項３９】
前記脊椎動物が非−ヒト脊椎動物である請求項３８記載の方法。
【請求項４０】
前記受容体が組換え体である請求項３４〜３９いずれか１項記載の方法。
【請求項４１】
前記宿主細胞が発現ベクターを含み、該発現ベクターがＧプロテイン−結合受容体をコードするポリヌクレオチドを含む請求項３４〜４０いずれか１項記載の方法。
【請求項４２】
前記公知のリガンドがＧＰＲ１１９アゴニストである請求項３４〜４１いずれか１項記載の方法。
【請求項４３】
前記ＧＰＲ１１９アゴニストがヒトＧＰＲ１１９のアゴニストである請求項４２記載の方法。
【請求項４４】
前記ＧＰＲ１１９アゴニストが、１０μＭ、１μＭおよび１００ｎＭよりなる群から選択される値未満のＥＣ５０を有する請求項４２または４３記載の方法。
【請求項４５】
前記ＧＰＲ１１９アゴニストが小分子である請求項４２〜４４いずれか１項記載の方法。
【請求項４６】
前記テスト化合物が小分子である請求項３４〜４５いずれか１項記載の方法。
【請求項４７】
前記受容体が配列番号２に対して少なくとも約８０％同一性を有するＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列を含む請求項３４〜４６いずれか１項記載の方法。
【請求項４８】
前記受容体が配列番号２のアミノ酸配列を含む請求項３４〜４７いずれか１項記載の方法。
【請求項４９】
Ｇプロテイン−結合受容体を用いることによって特徴付けられる、ＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴付けられる状態を治療および予防するための化合物または個体において骨質量を増加させるための化合物を同定するためにテスト化合物をスクリーニングする方法であって、該Ｇプロテイン−結合受容体は、
（ａ）配列番号２のアミノ酸１〜３３５；
（ｂ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５；
（ｃ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５、ここで、該ＧＰＣＲは配列番号２のアミノ酸配列を含まない；
（ｄ）特異的なプライマー配列番号３および配列番号４を用いてヒトＤＮＡ試料でポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって増幅可能なポリヌクレオチドによってコードされるＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列；
（ｅ）高ストリンジェンシーの条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列；
（ｆ）配列番号２の改変体；
（ｇ）
（ｉ）配列番号２に対して少なくとも約８０％同一性を有するＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列；および
（ｉｉ）配列番号２の少なくとも２０連続アミノ酸を含むＧプロテイン結合受容体のアミノ酸配列
よりなる群から選択される場合の（ｆ）のアミノ酸配列；
（ｈ）配列番号２を有するＧプロテイン−結合受容体の構成的に活性なバージョンのアミノ酸配列；および
（ｉ）（ａ）〜（ｈ）のいずれか１つの生物学的に活性な断片；
よりなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、方法。
【請求項５０】
前記受容体は配列番号２に対して少なくとも約８０％同一性を有するＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列を含む請求項４９記載の方法。
【請求項５１】
前記受容体は配列番号２のアミノ酸配列を含む請求項４９または５０記載の方法。
【請求項５２】
ＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴付けられる状態を予防または治療するための化合物、または個体において骨質量を増加させるための化合物としてのテスト化合物をスクリーニングするためのＧプロテイン−結合受容体の使用であって、該Ｇプロテイン−結合受容体は：
（ａ）配列番号２のアミノ酸１〜３３５；
（ｂ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５；
（ｃ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５、ここで、該ＧＰＣＲは配列番号２のアミノ酸配列を含まない；
（ｄ）特異的プライマー配列番号３および配列番号４を用いてヒトＤＮＡ試料にてポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって増幅可能なポリヌクレオチドによってコードされるＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列；
（ｅ）高ストリンジェンシーの条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列；
（ｆ）配列番号２の改変体；
（ｇ）
（ｉ）配列番号２に対して少なくとも約８０％同一性を有するＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列；および
（ｉｉ）配列番号２の少なくとも２０連続アミノ酸を含むＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列；
よりなる群から選択される場合の（ｆ）アミノ酸配列；
（ｈ）配列番号２を有するＧプロテイン−結合受容体の構成的に活性なバージョンのアミノ酸配列；
（ｉ）（ａ）〜（ｈ）のいずれか１項記載の生物学的に活性な断片；
よりなる群から選択されるアミノ酸配列を含む使用。
【請求項５３】
前記テスト化合物がＧＰＲ１１９アゴニストである請求項５２記載の使用。
【請求項５４】
前記ＧＰＲ１１９アゴニストがヒトＧＰＲ１１９のアゴニストである請求項５３記載の使用。
【請求項５５】
前記ＧＰＲ１１９アゴニストが、１０μＭ、１μＭおよび１００ｎＭよりなる群から選択される値未満のＥＣ５０を有する請求項５３または５４記載の使用。
【請求項５６】
前記テスト化合物が小分子である請求項５２〜５５いずれか１項記載の使用。
【請求項５７】
前記受容体が、配列番号２に対して少なくとも約８０％同一性を有するＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列を含む請求項５２〜５６いずれか１項記載の使用。
【請求項５８】
前記受容体が配列番号２のアミノ酸配列を含む請求項５２〜５７いずれか１項記載の使用。
【請求項５９】
前記受容体が組換え体である請求項５２〜５８いずれか１項記載の使用。
【請求項６０】
（ａ）Ｇプロテイン−結合受容体の機能性を刺激する化合物を、イン・ビトロにて、脊椎動物腸内分泌細胞または、ＧＩＰを分泌することができる細胞と接触させる工程であって、
ここで、該Ｇプロテイン−結合受容体は：
（ｉ）配列番号２のアミノ酸１〜３３５；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５：
（ｉｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５、但し、Ｇプロテイン−結合受容体は配列番号２のアミノ酸配列を含まない；
（ｉｖ）特異的プライマー配列番号３および配列番号４を用いてヒトＤＮＡ試料にてポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって増幅可能なポリヌクレオチドによってコードさせるＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列；
（ｘｉｖ）高ストリンジェンシーの条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列；
（ｘｖ）配列番号２の改変体；
（ｘｖｉ）
（ａ’）配列番号２に対して少なくとも約８０％同一性を有するＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列；
（ｂ’）；配列番号２の少なくとも２０連続アミノ酸を含むＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列；
よりなる群から選択される場合の（ｖｉ）のアミノ酸配列；
（ｖｉｉｉ）配列番号２を有するＧプロテイン−結合受容体の構成的に活性なバージョンのアミノ酸配列；
（ｉｘ）（ｉ）〜（ｖｉｉｉ）のいずれか１つの生物学的に活性な断片；
よりなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、該化合物は請求項１記載の方法によって同定されている、工程；および、
（ｂ）該化合物が該脊椎動物腸内分泌細胞から、または該ＧＩＰを分泌できる細胞からのＧＩＰ分泌を刺激できるか否かを決定する工程；
を含み、
ここで、該脊椎動物腸内分泌細胞からの、または該ＧＩＰを分泌することができる細胞からのＧＩＰ分泌を刺激する該テスト化合物の能力は、さらに、該テスト化合物がＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴付けられる状態を治療または予防するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物であることを示す、ＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴付けられる状態を治療または予防するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物を同定する方法。
【請求項６１】
（ａ）Ｇプロテイン−結合受容体の機能性を刺激する化合物を脊椎動物に投与する工程であって、ここで、該Ｇプロテイン−結合受容体は；
（ｉ）配列番号２のアミノ酸１〜３３５；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５；
（ｉｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５、但し、該Ｇプロテイン−結合受容体は配列番号２のアミノ酸配列を含まない；
（ｉｖ）特異的プライマー配列番号３および配列番号４を用いてヒトＤＮＡ試料にてポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって増幅可能なポリヌクレオチドによってコードされるＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列；
（ｘｖｉｉ）高ストリンジェンシーの条件下で配列番号１の相補体とハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列；
（ｘｖｉｉｉ）配列番号２の改変体；
（ｘｉｘ）
（ａ’）配列番号２に対して少なくとも約８０％同一性を有するＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列；および
（ｂ’）配列番号２の少なくとも２０連続アミノ酸を含むＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列；
よりなる群から選択される場合の（ｖｉ）のアミノ酸配列；
（ｖｉｉｉ）配列番号２を有するＧプロテイン−結合受容体の構成的に活性なバージョンのアミノ酸配列；
（ｉｘ）（ｉ）〜（ｖｉｉｉ）のいずれか１つの生物学的に活性な断片；
よりなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、
該化合物は請求項１記載の方法によって決定されている、工程；および、
（ｂ）該化合物は該脊椎動物においてＧＩＰレベルを増加させるか否かを決定する工程；
を含み、
ここで、該脊椎動物においてＧＩＰレベルを増加させる該テスト化合物の能力は、さらに、該化合物がＧＩＰ分泌促進薬低骨質量によって特徴付けられる状態を治療または予防するのに有用な化合物または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物であることを示す、ＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴付けられる状態を治療または予防するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物を同定する方法。
【請求項６２】
前記脊椎動物が非−ヒト脊椎動物である請求項６１記載の方法。
【請求項６３】
（ａ）Ｇプロテイン−結合受容体の機能性を刺激する化合物を脊椎動物に投与する工程であって、ここで、該Ｇプロテイン−結合受容体は；
（ｉ）配列番号２のアミノ酸１〜３３５；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５；
（ｉｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５、但し、該Ｇプロテイン−結合受容体は配列番号２のアミノ酸配列を含まない；
（ｉｖ）特異的プライマー配列番号３および配列番号４を用いてヒトＤＮＡにてポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって増幅可能なポリヌクレオチドによってコードされるＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列；
（ｘｘ）高ストリンジェンシーの条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列；
（ｘｘｉ）配列番号２の改変体；
（ｘｘｉｉ）
（ａ’）配列番号２に対して少なくとも約８０％同一性を有するＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列；および
（ｂ’）配列番号２の少なくとも２０連続アミノ酸を含むＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列；
よりなる群から選択される場合の（ｖｉ）のアミノ酸配列；
（ｖｉｉｉ）配列番号２を有するＧプロテイン−結合受容体の構成的に活性なバージョンのアミノ酸配列；および
（ｉｘ）（ｉ）〜（ｖｉｉｉ）のいずれか１つの生物学的に活性な断片；
よりなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、
該化合物は請求項１記載の方法によって決定されている、工程、および、
（ｂ）該化合物が脊椎動物において骨質量レベルを増加させるか否かを決定する工程
を含み、
ここで、該脊椎動物における骨質量のレベルを増加させる、該テスト化合物の能力は、さらに、該テスト化合物が低骨質量によって特徴付けられる状態を治療または予防するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物であることを示す、ＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴付けられる状態を治療または予防するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物を同定する方法。
【請求項６４】
前記脊椎動物が非−ヒト脊椎動物である請求項６３記載の方法。
【請求項６５】
前記テスト化合物が小分子である請求項６０〜６４いずれか１項記載の方法。
【請求項６６】
前記受容体が配列番号２に対して少なくとも約８０％同一性を有するＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列を含む請求項６０〜６５いずれか１項記載の方法。
【請求項６７】
前記受容体が配列番号２のアミノ酸配列を含む請求項６０〜６６いずれか１項記載の方法。
【請求項６８】
（ａ）化合物をイン・ビトロにて脊椎動物腸内分泌細胞と接触させる工程であって、該化合物は請求項３４記載の方法によって同定されている工程；および、
（ｂ）該化合物が該脊椎動物腸内分泌細胞からの、またはＧＩＰを分泌することができる細胞からのＧＩＰ分泌を刺激するか否かを決定する；
工程を含み、
該脊椎動物腸内分泌細胞からのＧＩＰ分泌を刺激する該テスト化合物の能力は、さらに、該テスト化合物はＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴付けられる状態を治療または予防するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物であることを示すのを特徴とする、ＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴付けられる状態を治療または予防するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物を同定する方法。
【請求項６９】
（ａ）化合物を脊椎動物に投与する工程であって、該化合物が請求項３４記載の方法によって同定されている、工程；および、
（ｂ）該化合物が該脊椎動物においてＧＩＰレベルを増加させるか否かを決定する工程；
を含み、
ここで、該脊椎動物においてＧＩＰレベルを増加させる該テスト化合物の能力は、さらに、該テスト化合物がＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴付けられる状態を治療または予防するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加するのに有用な化合物であることを示す、ＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴付けられる状態を予防または治療するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加するのに有用な化合物を同定する方法。
【請求項７０】
前記脊椎動物が非−ヒト脊椎動物である請求項６９記載の方法。
【請求項７１】
（ａ）化合物を脊椎動物に投与する工程であって、該化合物は請求項３４記載の方法によって同定されている工程；および、
（ｂ）該テスト化合物が脊椎動物において骨質量のレベルを増加させるか否かを決定する工程；
を含み、
ここで、脊椎動物において骨質量のレベルを増加させるテスト化合物の能力は、さらに、該テスト化合物がＧＩＰ分泌促進薬低骨質量によって特徴付けられる状態を治療または予防するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物であることを示す、ＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴付けられる状態を予防または治療するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物を同定する方法。
【請求項７２】
前記脊椎動物が非−ヒト脊椎動物である請求項７１記載の方法。
【請求項７３】
前記テスト化合物が小分子である請求項６８〜７２いずれか１項記載の方法。
【請求項１】
（ａ）テスト化合物を宿主細胞と、またはＧプロテイン−結合受容体を含む宿主細胞の膜と接触させる工程であって、該Ｇプロテイン−結合受容体は：
（ｉ）配列番号２のアミノ酸１〜３３５；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５；
（ｉｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５、但し、該受容体は配列番号２のアミノ酸配列を含まない；
（ｉｖ）特異的プライマー配列番号３および配列番号４を用いてヒトＤＮＡ試料にてポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって増幅可能なポリヌクレオチドによってコードされるＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列；
（ｖ）高ストリンジェンシーの条件下で配列番号１の相補体とハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされたＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列；
（ｖｉ）配列番号２の改変体；
（ｖｉｉ）
（ａ’）配列番号２に対して少なくとも約８０％の同一性を有するＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列；および
（ｂ’）配列番号２の少なくとも２０連続アミノ酸を含むＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列；
よりなる群から選択される場合の（ｖｉ）のアミノ酸配列；
（ｖｉｉｉ）配列番号２を有するＧプロテイン−結合受容体の構成的に活性なバージョンのアミノ酸配列；および
（ｉｘ）（ｉ）〜（ｖｉｉｉ）のいずれか１つの生物学的に活性な断片；
よりなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、工程；および、
（ｂ）該受容体の機能性を刺激する該テスト化合物の能力を決定する工程；
を含み、
ここで、該受容体機能性を刺激する該テスト化合物の能力は、該テスト化合物がＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴付けられる状態を治療または予防するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物であることを示す、ＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴付けられる状態を治療または予防するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物を同定する方法。
【請求項２】
請求項１記載の方法の工程を含み、さらに：
（ｃ）工程（ｂ）における前記受容体の機能性を刺激する化合物をイン・ビトロにて脊椎動物腸内分泌細胞と接触させる工程、および、
（ｄ）該化合物が該脊椎動物腸内分泌細胞からのＧＩＰ分泌を刺激するか否かを決定する工程；
を含み、
ここで、該脊椎動物腸内分泌細胞からのＧＩＰ分泌を刺激する該テスト化合物の能力は、テスト化合物がＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴付けられる状態を治療または予防するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物であることを示す、ＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴付けられる状態を治療または予防するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物を同定する方法。
【請求項３】
請求項１記載の方法の工程を含み、さらに：
（ｃ）工程（ｂ）における前記受容体の機能性を刺激する化合物を脊椎動物に投与する工程；および、
（ｄ）該化合物が脊椎動物においてＧＩＰレベルを増加させるか否かを決定する工程；
を含み、
ここで、該脊椎動物におけるＧＩＰレベルを増加させる該テスト化合物の能力は、該化合物がＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴付けられる状態を治療または予防するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物であることを示す、ＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴付けられる状態を治療または予防するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物を同定する方法。
【請求項４】
前記脊椎動物が非−ヒト脊椎動物である請求項３記載の方法。
【請求項５】
請求項１記載の方法の工程を含み、さらに：
（ｃ）工程（ｂ）における前記受容体の機能性を刺激する化合物を脊椎動物に投与する工程；および、
（ｄ）該化合物が脊椎動物において骨質量のレベルを増加させるか否かを決定する工程；
を含み、
ここで、該脊椎動物における骨質量のレベルを増加させる該テスト化合物の能力は、テスト化合物が低骨質量によって特徴付けられる状態を治療または予防するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物であることを示す、低骨質量によって特徴付けられる状態を治療または予防するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物を同定する方法。
【請求項６】
前記脊椎動物が非−ヒト脊椎動物である請求項５記載の方法。
【請求項７】
前記受容体が組換え体である請求項１〜６いずれか１項記載の方法。
【請求項８】
前記宿主細胞が発現ベクターを含み、該発現ベクターがＧプロテイン−結合受容体をコードするポリヌクレオチドを含む請求項１〜７いずれか１項記載の方法。
【請求項９】
前記決定する工程が、第二のメッセンジャーのレベルの決定を介するものである請求項１〜８いずれか１項記載の方法。
【請求項１０】
前記第二のメッセンジャーが環状ＡＭＰ（ｃＡＭＰ）、環状ＧＭＰ（ｃＧＭＰ）、イノシトール１，４，５−三リン酸（ＩＰ３）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、ＭＡＰキナーゼ活性、ＭＡＰＫ／ＥＲＫキナーゼキナーゼ−１（ＭＥＫＫ１）活性およびＣａ２＋よりなる群から選択される請求項９記載の方法。
【請求項１１】
ｃＡＭＰのレベルが増加する請求項１０記載の方法。
【請求項１２】
前記決定する工程が、メラニン保有細胞アッセイの使用を介する前記ＧＰＣＲを含む膜へのＧＴＰγＳ結合の決定を介するもの、または受容体アッセイを介するものである請求項１〜８いずれか１項記載の方法。
【請求項１３】
前記宿主細胞が哺乳動物宿主細胞である請求項１〜１２いずれか１項記載の方法。
【請求項１４】
前記宿主細胞が酵母宿主細胞である請求項１〜１２いずれか１項記載の方法。
【請求項１５】
前記宿主細胞がメラニン保有細胞宿主細胞である請求項１〜１２いずれか１項記載の方法。
【請求項１６】
前記テスト化合物が小分子である請求項１〜１５いずれか１項記載の方法。
【請求項１７】
前記受容体が、配列番号２に対して少なくとも約８０％同一性を有するＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列を含む請求項１〜１６いずれか１項記載の方法。
【請求項１８】
前記受容体が配列番号２のアミノ酸配列を含む請求項１〜１７いずれか１項記載の方法。
【請求項１９】
（ａ）化合物をイン・ビトロにて脊椎動物腸内分泌細胞と接触させる工程であって、該化合物は請求項１記載の方法によって同定されている、工程；および、
（ｂ）該化合物が脊椎動物腸内分泌細胞からのＧＩＰ分泌を刺激するか否かを決定する工程；
を含み、
ここで、該脊椎動物腸内分泌細胞からのＧＩＰ分泌を刺激する該テスト化合物の能力は、さらに、該テスト化合物がＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴づけられる状態を治療または予防するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物であることを示す、ＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴付けられる状態を予防または治療するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物を同定する方法。
【請求項２０】
（ａ）化合物を脊椎動物に投与する工程であって、該化合物は請求項１記載の方法によって同定されている、工程；および、
（ｂ）該化合物が該脊椎動物においてＧＩＰレベルを増加させるか否かを決定する工程；
を含み、
ここで、該脊椎動物においてＧＩＰレベルを増加させる該テスト化合物の能力は、さらに、該テスト化合物がＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴付けられる状態を治療または予防するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物であることを示す、ＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴付けられる状態を予防または治療するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物を同定する方法。
【請求項２１】
前記脊椎動物が非−ヒト脊椎動物である、請求項２０記載の方法。
【請求項２２】
（ａ）化合物を脊椎動物に投与する工程であって、該化合物は請求項１記載の方法によって同定されている、工程；および、
（ｂ）該化合物が該脊椎動物において骨質量のレベルを増加させるか否かを決定する工程；
を含み、
ここで、該脊椎動物において骨質量のレベルを増加させる該テスト化合物の能力は、さらに、該テスト化合物が低骨質量によって特徴付けられる状態を治療または予防するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物であることを示す、低骨質量によって特徴づけられる状態を予防または治療するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物を同定する方法。
【請求項２３】
前記脊椎動物が非−ヒト脊椎動物である請求項２２記載の方法。
【請求項２４】
前記テスト化合物が小分子である請求項１９〜２３いずれか１項記載の方法。
【請求項２５】
（ａ）ＧＰＲ１１９アゴニストをイン・ビトロにて脊椎動物腸内分泌細胞と接触させる工程；および
（ｂ）該ＧＰＲ１１９アゴニストが該脊椎動物腸内分泌細胞からのＧＩＰ分泌を刺激するか否かを決定する工程；
を含み、
ここで、該脊椎動物腸内分泌細胞からのＧＩＰ分泌を刺激する該ＧＰＲ１１９アゴニストの能力は、該ＧＰＲ１１９アゴニストがＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴付けられる状態を治療または予防するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物であることを示す、ＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴づけられる状態を予防または治療するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物を同定する方法。
【請求項２６】
（ａ）ＧＰＲ１１９アゴニストを脊椎動物に投与する工程；および、
（ｂ）該ＧＰＲ１１９アゴニストが該脊椎動物においてＧＩＰレベルを増加させるか否かを決定する工程；
を含み、
ここで、該脊椎動物におけるＧＩＰレベルを増加させる該ＧＰＲ１１９アゴニストの能力が、該ＧＰＲ１１９アゴニストがＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴付けられる状態を治療または予防するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物であることを示す、ＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴付けられる状態を予防または治療するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物を同定する方法。
【請求項２７】
前記脊椎動物が非−ヒト脊椎動物である請求項２６記載の方法。
【請求項２８】
（ａ）ＧＰＲ１１９アゴニストを脊椎動物に投与する工程；および、
（ｂ）該ＧＰＲ１１９アゴニストが脊椎動物において骨質量のレベルを増加させるか否かを決定する工程；
を含み、
ここで、脊椎動物において骨質量のレベルを増加させるＧＰＲ１１９アゴニスト能力が、該ＧＰＲ１１９アゴニストが低骨質量によって特徴付けられる状態を治療または予防するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物であることを示す、低骨質量によって特徴付けられる状態を予防または治療するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物を同定する方法。
【請求項２９】
前記脊椎動物が非−ヒト脊椎動物である請求項２８記載の方法。
【請求項３０】
前記ＧＰＲ１１９アゴニストがヒトＧＰＲ１１９のアゴニストである請求項２５〜２９いずれか１項記載の方法。
【請求項３１】
前記ＧＰＲ１１９アゴニストは選択的ＧＰＲ１１９アゴニストである請求項２５〜３０いずれか１項記載の方法。
【請求項３２】
前記ＧＰＲ１１９アゴニストは１０μＭ、１μＭおよび１００ｎＭよりなる群から選択される値未満のＥＣ５０を有する請求項２５〜３１いずれか１項記載の方法。
【請求項３３】
前記ＧＰＲ１１９アゴニストが小分子である請求項２５〜３２いずれか１項記載の方法。
【請求項３４】
（ａ）テスト化合物の存在下または非存在下にて、Ｇプロテイン−結合受容体を該受容体に対する所望により標識された公知のリガンドと接触させる工程であって、ここで、該Ｇプロテイン−結合受容体は：
（ｉ）配列番号２のアミノ酸１〜３３５；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５；
（ｉｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５、但し、該受容体は配列番号２のアミノ酸配列を含まない；
（ｉｖ）特異的プライマー配列番号３および配列番号４を用いてヒトＤＡＮ試料でのポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって増幅可能なポリヌクレオチドによってコードされるＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列；
（ｖ）高ストリンジェンシーの条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列；
（ｖｉ）配列番号２の改変体；
（ｖｉｉ）
（ａ’）配列番号２に対して少なくとも約８０％同一性を有するＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列；および
（ｂ’）配列番号２の少なくとも２０連続アミノ酸を含むＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列；
よりなる群から選択される場合の（ｖｉ）アミノ酸配列；
（ｖｉｉｉ）配列番号２を有するＧプロテイン−結合受容体の構成的に活性なバージョンのアミノ酸配列；および
（ｉｘ）（ｉ）〜（ｖｉｉｉ）のいずれか１つの生物学的に活性な断片；
よりなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、工程；
（ｂ）該公知のリガンドおよび該受容体の間の複合体を検出する工程；および、
（ｃ）該テスト化合物の非存在下におけるよりも該テスト化合物の存在下において該複合体のより少数が形成されるか否かを決定する工程；
を含み、
ここで、該決定する工程は、該テスト化合物がＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴付けられる状態を治療または予防するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物であることを示す、ＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴付けられる状態を予防または治療するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物を同定する方法。
【請求項３５】
請求項３４記載の方法の工程を含み、さらに：
（ｄ）その存在下でより少数の前記複合体が工程（ｃ）で形成される化合物を、イン・ビトロにて脊椎動物腸内分泌細胞と接触させる工程；および、
（ｅ）該化合物が該脊椎動物腸内分泌細胞からのＧＩＰ分泌を刺激するか否かを決定する工程；
を含み、
ここで、該脊椎動物腸内分泌細胞からのＧＩＰ分泌を刺激する該テスト化合物の能力は、該テスト化合物がＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴付けられる状態を治療または予防するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物であることを示す、ＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴付けられる状態を予防または治療するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物を同定する方法。
【請求項３６】
請求項３４記載の方法の工程を含み、さらに：
（ｄ）その存在下でより少数の前記複合体が工程（ｃ）で形成される化合物を、脊椎動物に投与する工程；および、
（ｅ）該化合物が該脊椎動物においてＧＩＰレベルを増加させるか否かを決定する工程；
を含み、
ここで、該脊椎動物においてＧＩＰレベルを増加させる該テスト化合物の能力は、該テスト化合物がＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴付けられる状態を治療または予防するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物であることを示す、ＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴付けらえる状態を予防または治療するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物を同定する方法。
【請求項３７】
前記脊椎動物が非−ヒト脊椎動物である請求項３６記載の方法。
【請求項３８】
請求項３４記載の方法の工程を含み、さらに：
（ｄ）その存在下でより少数の前記複合体が工程（ｃ）で形成される化合物を脊椎動物に投与する工程；および、
（ｅ）該化合物が脊椎動物において骨質量のレベルを増加させるか否かを判断する工程；
を含み、
ここで、該脊椎動物において骨質量のレベルを増加させる該テスト化合物の能力は、該テスト化合物が、低骨質量によって特徴付けられる状態を治療または予防するのに有用な化合物、または個体によって骨質量を増加させるのに有用な化合物であることを示す、低骨質量によって特徴付けられる状態を予防または治療するのに有用な化合物または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物を同定する方法。
【請求項３９】
前記脊椎動物が非−ヒト脊椎動物である請求項３８記載の方法。
【請求項４０】
前記受容体が組換え体である請求項３４〜３９いずれか１項記載の方法。
【請求項４１】
前記宿主細胞が発現ベクターを含み、該発現ベクターがＧプロテイン−結合受容体をコードするポリヌクレオチドを含む請求項３４〜４０いずれか１項記載の方法。
【請求項４２】
前記公知のリガンドがＧＰＲ１１９アゴニストである請求項３４〜４１いずれか１項記載の方法。
【請求項４３】
前記ＧＰＲ１１９アゴニストがヒトＧＰＲ１１９のアゴニストである請求項４２記載の方法。
【請求項４４】
前記ＧＰＲ１１９アゴニストが、１０μＭ、１μＭおよび１００ｎＭよりなる群から選択される値未満のＥＣ５０を有する請求項４２または４３記載の方法。
【請求項４５】
前記ＧＰＲ１１９アゴニストが小分子である請求項４２〜４４いずれか１項記載の方法。
【請求項４６】
前記テスト化合物が小分子である請求項３４〜４５いずれか１項記載の方法。
【請求項４７】
前記受容体が配列番号２に対して少なくとも約８０％同一性を有するＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列を含む請求項３４〜４６いずれか１項記載の方法。
【請求項４８】
前記受容体が配列番号２のアミノ酸配列を含む請求項３４〜４７いずれか１項記載の方法。
【請求項４９】
Ｇプロテイン−結合受容体を用いることによって特徴付けられる、ＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴付けられる状態を治療および予防するための化合物または個体において骨質量を増加させるための化合物を同定するためにテスト化合物をスクリーニングする方法であって、該Ｇプロテイン−結合受容体は、
（ａ）配列番号２のアミノ酸１〜３３５；
（ｂ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５；
（ｃ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５、ここで、該ＧＰＣＲは配列番号２のアミノ酸配列を含まない；
（ｄ）特異的なプライマー配列番号３および配列番号４を用いてヒトＤＮＡ試料でポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって増幅可能なポリヌクレオチドによってコードされるＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列；
（ｅ）高ストリンジェンシーの条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列；
（ｆ）配列番号２の改変体；
（ｇ）
（ｉ）配列番号２に対して少なくとも約８０％同一性を有するＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列；および
（ｉｉ）配列番号２の少なくとも２０連続アミノ酸を含むＧプロテイン結合受容体のアミノ酸配列
よりなる群から選択される場合の（ｆ）のアミノ酸配列；
（ｈ）配列番号２を有するＧプロテイン−結合受容体の構成的に活性なバージョンのアミノ酸配列；および
（ｉ）（ａ）〜（ｈ）のいずれか１つの生物学的に活性な断片；
よりなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、方法。
【請求項５０】
前記受容体は配列番号２に対して少なくとも約８０％同一性を有するＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列を含む請求項４９記載の方法。
【請求項５１】
前記受容体は配列番号２のアミノ酸配列を含む請求項４９または５０記載の方法。
【請求項５２】
ＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴付けられる状態を予防または治療するための化合物、または個体において骨質量を増加させるための化合物としてのテスト化合物をスクリーニングするためのＧプロテイン−結合受容体の使用であって、該Ｇプロテイン−結合受容体は：
（ａ）配列番号２のアミノ酸１〜３３５；
（ｂ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５；
（ｃ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５、ここで、該ＧＰＣＲは配列番号２のアミノ酸配列を含まない；
（ｄ）特異的プライマー配列番号３および配列番号４を用いてヒトＤＮＡ試料にてポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって増幅可能なポリヌクレオチドによってコードされるＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列；
（ｅ）高ストリンジェンシーの条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列；
（ｆ）配列番号２の改変体；
（ｇ）
（ｉ）配列番号２に対して少なくとも約８０％同一性を有するＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列；および
（ｉｉ）配列番号２の少なくとも２０連続アミノ酸を含むＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列；
よりなる群から選択される場合の（ｆ）アミノ酸配列；
（ｈ）配列番号２を有するＧプロテイン−結合受容体の構成的に活性なバージョンのアミノ酸配列；
（ｉ）（ａ）〜（ｈ）のいずれか１項記載の生物学的に活性な断片；
よりなる群から選択されるアミノ酸配列を含む使用。
【請求項５３】
前記テスト化合物がＧＰＲ１１９アゴニストである請求項５２記載の使用。
【請求項５４】
前記ＧＰＲ１１９アゴニストがヒトＧＰＲ１１９のアゴニストである請求項５３記載の使用。
【請求項５５】
前記ＧＰＲ１１９アゴニストが、１０μＭ、１μＭおよび１００ｎＭよりなる群から選択される値未満のＥＣ５０を有する請求項５３または５４記載の使用。
【請求項５６】
前記テスト化合物が小分子である請求項５２〜５５いずれか１項記載の使用。
【請求項５７】
前記受容体が、配列番号２に対して少なくとも約８０％同一性を有するＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列を含む請求項５２〜５６いずれか１項記載の使用。
【請求項５８】
前記受容体が配列番号２のアミノ酸配列を含む請求項５２〜５７いずれか１項記載の使用。
【請求項５９】
前記受容体が組換え体である請求項５２〜５８いずれか１項記載の使用。
【請求項６０】
（ａ）Ｇプロテイン−結合受容体の機能性を刺激する化合物を、イン・ビトロにて、脊椎動物腸内分泌細胞または、ＧＩＰを分泌することができる細胞と接触させる工程であって、
ここで、該Ｇプロテイン−結合受容体は：
（ｉ）配列番号２のアミノ酸１〜３３５；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５：
（ｉｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５、但し、Ｇプロテイン−結合受容体は配列番号２のアミノ酸配列を含まない；
（ｉｖ）特異的プライマー配列番号３および配列番号４を用いてヒトＤＮＡ試料にてポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって増幅可能なポリヌクレオチドによってコードさせるＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列；
（ｘｉｖ）高ストリンジェンシーの条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列；
（ｘｖ）配列番号２の改変体；
（ｘｖｉ）
（ａ’）配列番号２に対して少なくとも約８０％同一性を有するＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列；
（ｂ’）；配列番号２の少なくとも２０連続アミノ酸を含むＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列；
よりなる群から選択される場合の（ｖｉ）のアミノ酸配列；
（ｖｉｉｉ）配列番号２を有するＧプロテイン−結合受容体の構成的に活性なバージョンのアミノ酸配列；
（ｉｘ）（ｉ）〜（ｖｉｉｉ）のいずれか１つの生物学的に活性な断片；
よりなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、該化合物は請求項１記載の方法によって同定されている、工程；および、
（ｂ）該化合物が該脊椎動物腸内分泌細胞から、または該ＧＩＰを分泌できる細胞からのＧＩＰ分泌を刺激できるか否かを決定する工程；
を含み、
ここで、該脊椎動物腸内分泌細胞からの、または該ＧＩＰを分泌することができる細胞からのＧＩＰ分泌を刺激する該テスト化合物の能力は、さらに、該テスト化合物がＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴付けられる状態を治療または予防するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物であることを示す、ＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴付けられる状態を治療または予防するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物を同定する方法。
【請求項６１】
（ａ）Ｇプロテイン−結合受容体の機能性を刺激する化合物を脊椎動物に投与する工程であって、ここで、該Ｇプロテイン−結合受容体は；
（ｉ）配列番号２のアミノ酸１〜３３５；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５；
（ｉｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５、但し、該Ｇプロテイン−結合受容体は配列番号２のアミノ酸配列を含まない；
（ｉｖ）特異的プライマー配列番号３および配列番号４を用いてヒトＤＮＡ試料にてポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって増幅可能なポリヌクレオチドによってコードされるＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列；
（ｘｖｉｉ）高ストリンジェンシーの条件下で配列番号１の相補体とハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列；
（ｘｖｉｉｉ）配列番号２の改変体；
（ｘｉｘ）
（ａ’）配列番号２に対して少なくとも約８０％同一性を有するＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列；および
（ｂ’）配列番号２の少なくとも２０連続アミノ酸を含むＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列；
よりなる群から選択される場合の（ｖｉ）のアミノ酸配列；
（ｖｉｉｉ）配列番号２を有するＧプロテイン−結合受容体の構成的に活性なバージョンのアミノ酸配列；
（ｉｘ）（ｉ）〜（ｖｉｉｉ）のいずれか１つの生物学的に活性な断片；
よりなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、
該化合物は請求項１記載の方法によって決定されている、工程；および、
（ｂ）該化合物は該脊椎動物においてＧＩＰレベルを増加させるか否かを決定する工程；
を含み、
ここで、該脊椎動物においてＧＩＰレベルを増加させる該テスト化合物の能力は、さらに、該化合物がＧＩＰ分泌促進薬低骨質量によって特徴付けられる状態を治療または予防するのに有用な化合物または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物であることを示す、ＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴付けられる状態を治療または予防するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物を同定する方法。
【請求項６２】
前記脊椎動物が非−ヒト脊椎動物である請求項６１記載の方法。
【請求項６３】
（ａ）Ｇプロテイン−結合受容体の機能性を刺激する化合物を脊椎動物に投与する工程であって、ここで、該Ｇプロテイン−結合受容体は；
（ｉ）配列番号２のアミノ酸１〜３３５；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５；
（ｉｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３３５、但し、該Ｇプロテイン−結合受容体は配列番号２のアミノ酸配列を含まない；
（ｉｖ）特異的プライマー配列番号３および配列番号４を用いてヒトＤＮＡにてポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって増幅可能なポリヌクレオチドによってコードされるＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列；
（ｘｘ）高ストリンジェンシーの条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列；
（ｘｘｉ）配列番号２の改変体；
（ｘｘｉｉ）
（ａ’）配列番号２に対して少なくとも約８０％同一性を有するＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列；および
（ｂ’）配列番号２の少なくとも２０連続アミノ酸を含むＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列；
よりなる群から選択される場合の（ｖｉ）のアミノ酸配列；
（ｖｉｉｉ）配列番号２を有するＧプロテイン−結合受容体の構成的に活性なバージョンのアミノ酸配列；および
（ｉｘ）（ｉ）〜（ｖｉｉｉ）のいずれか１つの生物学的に活性な断片；
よりなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、
該化合物は請求項１記載の方法によって決定されている、工程、および、
（ｂ）該化合物が脊椎動物において骨質量レベルを増加させるか否かを決定する工程
を含み、
ここで、該脊椎動物における骨質量のレベルを増加させる、該テスト化合物の能力は、さらに、該テスト化合物が低骨質量によって特徴付けられる状態を治療または予防するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物であることを示す、ＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴付けられる状態を治療または予防するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物を同定する方法。
【請求項６４】
前記脊椎動物が非−ヒト脊椎動物である請求項６３記載の方法。
【請求項６５】
前記テスト化合物が小分子である請求項６０〜６４いずれか１項記載の方法。
【請求項６６】
前記受容体が配列番号２に対して少なくとも約８０％同一性を有するＧプロテイン−結合受容体のアミノ酸配列を含む請求項６０〜６５いずれか１項記載の方法。
【請求項６７】
前記受容体が配列番号２のアミノ酸配列を含む請求項６０〜６６いずれか１項記載の方法。
【請求項６８】
（ａ）化合物をイン・ビトロにて脊椎動物腸内分泌細胞と接触させる工程であって、該化合物は請求項３４記載の方法によって同定されている工程；および、
（ｂ）該化合物が該脊椎動物腸内分泌細胞からの、またはＧＩＰを分泌することができる細胞からのＧＩＰ分泌を刺激するか否かを決定する；
工程を含み、
該脊椎動物腸内分泌細胞からのＧＩＰ分泌を刺激する該テスト化合物の能力は、さらに、該テスト化合物はＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴付けられる状態を治療または予防するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物であることを示すのを特徴とする、ＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴付けられる状態を治療または予防するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物を同定する方法。
【請求項６９】
（ａ）化合物を脊椎動物に投与する工程であって、該化合物が請求項３４記載の方法によって同定されている、工程；および、
（ｂ）該化合物が該脊椎動物においてＧＩＰレベルを増加させるか否かを決定する工程；
を含み、
ここで、該脊椎動物においてＧＩＰレベルを増加させる該テスト化合物の能力は、さらに、該テスト化合物がＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴付けられる状態を治療または予防するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加するのに有用な化合物であることを示す、ＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴付けられる状態を予防または治療するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加するのに有用な化合物を同定する方法。
【請求項７０】
前記脊椎動物が非−ヒト脊椎動物である請求項６９記載の方法。
【請求項７１】
（ａ）化合物を脊椎動物に投与する工程であって、該化合物は請求項３４記載の方法によって同定されている工程；および、
（ｂ）該テスト化合物が脊椎動物において骨質量のレベルを増加させるか否かを決定する工程；
を含み、
ここで、脊椎動物において骨質量のレベルを増加させるテスト化合物の能力は、さらに、該テスト化合物がＧＩＰ分泌促進薬低骨質量によって特徴付けられる状態を治療または予防するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物であることを示す、ＧＩＰ分泌促進薬、低骨質量によって特徴付けられる状態を予防または治療するのに有用な化合物、または個体において骨質量を増加させるのに有用な化合物を同定する方法。
【請求項７２】
前記脊椎動物が非−ヒト脊椎動物である請求項７１記載の方法。
【請求項７３】
前記テスト化合物が小分子である請求項６８〜７２いずれか１項記載の方法。
【図１Ａ】
【図１Ｂ】
【図１Ｃ】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【図１Ｂ】
【図１Ｃ】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【公表番号】特表２００９−５３３０５５（Ｐ２００９−５３３０５５Ａ）
【公表日】平成２１年９月１７日（２００９．９．１７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５０５４４５（Ｐ２００９−５０５４４５）
【出願日】平成１９年４月１０日（２００７．４．１０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００７／００８９０２
【国際公開番号】ＷＯ２００７／１２０６８９
【国際公開日】平成１９年１０月２５日（２００７．１０．２５）
【出願人】（５００４７８０９７）アリーナ ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド (97)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２１年９月１７日（２００９．９．１７）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年４月１０日（２００７．４．１０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００７／００８９０２
【国際公開番号】ＷＯ２００７／１２０６８９
【国際公開日】平成１９年１０月２５日（２００７．１０．２５）
【出願人】（５００４７８０９７）アリーナ ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド (97)
【Ｆターム（参考）】
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