光学活性２−ハロカルボン酸化合物の製造方法
【課題】式（２）
（式中、Ｒ２、Ｒ３は水素原子等を、Ｘは臭素原子等を表わす。＊は不斉炭素原子であることを表わす。）
で示される光学活性２−ハロカルボン酸化合物および式（３）
（式中、Ｒ１は低級アルキル基を表わし、Ｒ２、Ｒ３、Ｘおよび＊は上記と同一の意味を表わす。）
で示される光学活性２−ハロカルボン酸エステル化合物の製造方法を提供すること。
【解決手段】式（１）
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＸは上記と同一の意味を表わす。）
で示される２−ハロカルボン酸エステル化合物の一方の光学活性体を優先的に加水分解する能力を有する酵素、または該酵素の産生能を有する微生物の培養物もしくはその処理物を、前記式（１）で示される２−ハロカルボン酸エステル化合物に接触せしめることを特徴とする式（２）で示される光学活性２−ハロカルボン酸化合物および式（３）で示される光学活性２−ハロカルボン酸エステル化合物の製造方法。
（式中、Ｒ２、Ｒ３は水素原子等を、Ｘは臭素原子等を表わす。＊は不斉炭素原子であることを表わす。）
で示される光学活性２−ハロカルボン酸化合物および式（３）
（式中、Ｒ１は低級アルキル基を表わし、Ｒ２、Ｒ３、Ｘおよび＊は上記と同一の意味を表わす。）
で示される光学活性２−ハロカルボン酸エステル化合物の製造方法を提供すること。
【解決手段】式（１）
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＸは上記と同一の意味を表わす。）
で示される２−ハロカルボン酸エステル化合物の一方の光学活性体を優先的に加水分解する能力を有する酵素、または該酵素の産生能を有する微生物の培養物もしくはその処理物を、前記式（１）で示される２−ハロカルボン酸エステル化合物に接触せしめることを特徴とする式（２）で示される光学活性２−ハロカルボン酸化合物および式（３）で示される光学活性２−ハロカルボン酸エステル化合物の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、光学活性２−ハロカルボン酸化合物の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
式（２）
（式中、Ｒ２およびＲ３はそれぞれ同一または相異なって、水素原子、置換されていてもよいアルキル基、置換されていてもよいアルコキシ基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアリールオキシ基、ニトロ基、二置換アミノ基、アルコキシカルボニル基またはハロゲン原子を表わす。ここで、Ｒ２およびＲ３が隣接する炭素原子に結合しているときは、Ｒ２およびＲ３が結合して、その結合炭素原子とともに環を形成してもよい。Ｘは臭素原子またはヨウ素原子を表わす。＊は不斉炭素原子であることを表わす。）
で示される光学活性２−ハロカルボン酸化合物および式（３）
（式中、Ｒ１は低級アルキル基を表わし、Ｒ２、Ｒ３、Ｘおよび＊は上記と同一の意味を表わす。）
で示される光学活性２−ハロカルボン酸エステル化合物は、医薬中間体として有用であることが知られている（例えば特許文献１参照。）。
【０００３】
アルコール性水酸基をハロゲン原子に変換する方法として、アルコール性水酸基を有する化合物に臭化チオニルを作用させる方法が知られている（例えば非特許文献１参照。）が、かかる方法を用いて、式（５）
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３および＊は上記と同一の意味を表わす。）
で示される化合物から上記式（３）で示される光学活性２−ハロカルボン酸エステル化合物を製造することを試みたところ、ハロゲン化反応は進行するものの、同時にラセミ化反応も進行することがわかった。
【０００４】
【特許文献１】国際公開パンフレット第００／６３１９７号
【非特許文献１】Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．，８７（１９７１）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
このような状況のもと、本発明者らは、式（２）で示される光学活性２−ハロカルボン酸化合物および式（３）で示される光学活性２−ハロカルボン酸エステル化合物の製造方法を開発すべく検討したところ、式（１）
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＸは上記と同一の意味を表わす。）
で示される２−ハロカルボン酸エステル化合物の一方の光学活性体を優先的に加水分解する能力を有する酵素、または該酵素の産生能を有する微生物の培養物もしくはその処理物を、前記式（１）で示される２−ハロカルボン酸エステル化合物に接触せしめることにより、目的とする式（２）で示される光学活性２−ハロカルボン酸化合物および式（３）で示される光学活性２−ハロカルボン酸エステル化合物を得ることができることを見いだし、本発明に至った。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
すなわち、本発明は、式（１）
（式中、Ｒ１は低級アルキル基を表わし、Ｒ２およびＲ３はそれぞれ同一または相異なって、水素原子、置換されていてもよいアルキル基、置換されていてもよいアルコキシ基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアリールオキシ基、ニトロ基、二置換アミノ基、アルコキシカルボニル基またはハロゲン原子を表わす。ここで、Ｒ２およびＲ３が隣接する炭素原子に結合しているときは、Ｒ２およびＲ３が結合して、その結合炭素原子とともに環を形成してもよい。Ｘは臭素原子またはヨウ素原子を表わす。）
で示される２−ハロカルボン酸エステル化合物の一方の光学活性体を優先的に加水分解する能力を有する酵素、または該酵素の産生能を有する微生物の培養物もしくはその処理物を、前記式（１）で示される２−ハロカルボン酸エステル化合物に接触せしめることを特徴とする式（２）
（式中、Ｒ２、Ｒ３およびＸは上記と同一の意味を表わし、＊は不斉炭素原子であることを表わす。）
で示される光学活性２−ハロカルボン酸化合物および式（３）
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｘおよび＊は上記と同一の意味を表わす。）
で示される光学活性２−ハロカルボン酸エステル化合物の製造方法を提供するものである。
【発明の効果】
【０００７】
本発明によれば、光学活性２−ハロカルボン酸化合物および光学活性２−ハロカルボン酸エステル化合物を製造することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
式（１）
式（１）
で示される２−ハロカルボン酸エステル化合物（以下、２−ハロカルボン酸エステル化合物（１）と略記する。）の式中、Ｒ１は低級アルキル基を表わす。低級アルキル基としては、例えばメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基等の炭素数１〜４のアルキル基が挙げられる。
【０００９】
また、上記式（１）中、Ｒ２およびＲ３はそれぞれ同一または相異なって、水素原子、置換されていてもよいアルキル基、置換されていてもよいアルコキシ基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアリールオキシ基、ニトロ基、二置換アミノ基、アルコキシカルボニル基またはハロゲン原子を表わす。
【００１０】
置換されていてもよいアルキル基としては、例えばメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｎ−ヘキシル基、ｎ−ヘプチル基、４−ヘプチル基、ｎ−オクチル基、シクロヘキシル基等の炭素数１〜８の直鎖状、分枝鎖状もしくは環状の無置換アルキル基およびこれら無置換アルキル基の一つもしくは二つ以上の水素原子が置換基で置換された置換アルキル基が挙げられる。置換アルキル基の置換基としては、例えばメトキシ基、エトキシ基等のアルコキシ基、例えばフェニル基、ナフチル基等のアリール基、例えばＮ−メチルアミノ基、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ基、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ基等の置換アミノ基、例えばフッ素原子、塩素原子、臭素原子等のハロゲン原子、水酸基、シアノ基等が挙げられ、かかる置換アルキル基としては、例えばメトキシメチル基、２−メトキシエチル基、トリフルオロメチル基、ベンジル基、２−（Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ）エチル基等が挙げられる。置換されていてもよいアルコキシ基としては、前記置換されていてもよいアルキル基と酸素原子とから構成されるものが挙げられ、具体的には、メトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基、ｔｅｒｔ−ブトキシ基、メトキシメトキシ基、２−メトキシエトキシ基、トリフルオロメトキシ基、ベンジルオキシ基、２−（Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ）エトキシ基等が挙げられる。
【００１１】
置換されていてもよいアリール基としては、例えばフェニル基、ナフチル基等の無置換アリール基およびこれら無置換アリール基を構成する芳香環の一つまたは二つ以上の水素原子が、例えば前記アルキル基、前記アルコキシ基等の置換基で置換された、例えば２−メチルフェニル基、３−メチルフェニル基、４−メチルフェニル基、２−メトキシフェニル基、３−メトキシフェニル基、４−メトキシフェニル基等が挙げられる。置換されていてもよいアリールオキシ基としては、前記置換されていてもよいアリール基と酸素原子とから構成されるもの、例えばフェノキシ基、ナフトキシ基、２−メチルフェノキシ基、３−メチルフェノキシ基、４−メチルフェノキシ基、２−メトキシフェノキシ基、３−メトキシフェノキシ基、４−メトキシフェノキシ基等が挙げられる。二置換アミノ基としては、例えばジメチルアミノ基、ジエチルアミノ基、メチルエチルアミノ基等の二個の前記低級アルキル基等で置換されたアミノ基が挙げられる。アルコキシカルボニル基としては、例えばメトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、ｎ−プロポキシカルボニル基等が挙げられる。ハロゲン原子としては、例えばフッ素原子、塩素原子、臭素原子等が挙げられる。
【００１２】
また、Ｒ２およびＲ３が隣接する炭素原子に結合しているときは、Ｒ２およびＲ３が結合して、その結合炭素原子とともに環を形成してもよく、かかる環構造としては、例えばシクロペンテン環、シクロヘキセン環、ベンゼン環等が挙げられる。さらに、上記式（１）中、Ｘは臭素原子またはヨウ素原子を表わす。
【００１３】
かかる２−ハロカルボン酸エステル化合物（１）としては、例えば２−ブロモ−５−フェニルペンタン酸メチル、２−ブロモ−５−（２−メチルフェニル）ペンタン酸メチル、２−ブロモ−５−（３−メチルフェニル）ペンタン酸メチル、２−ブロモ−５−（４−メチルフェニル）ペンタン酸メチル、２−ブロモ−５−（４−エチルフェニル）ペンタン酸メチル、２−ブロモ−５−（２−メトキシフェニル）ペンタン酸メチル、２−ブロモ−５−（３−メトキシフェニル）ペンタン酸メチル、２−ブロモ−５−（４−メトキシフェニル）ペンタン酸メチル、２−ブロモ−５−（４−エトキシフェニル）ペンタン酸メチル、２−ブロモ−５−（４−ｔｅｒｔ−ブトキシフェニル）ペンタン酸メチル、２−ブロモ−５−（２，４−ジメチルフェニル）ペンタン酸メチル、２−ブロモ−５−（２，４−ジメトキシフェニル）ペンタン酸メチル、２−ブロモ−５−（２−クロロフェニル）ペンタン酸メチル、２−ブロモ−５−（４−フルオロフェニル）ペンタン酸メチル、２−ブロモ−５−（４−クロロフェニル）ペンタン酸メチル、２−ブロモ−５−（４−ブロモフェニル）ペンタン酸メチル、２−ブロモ−５−（３−ニトロフェニル）ペンタン酸メチル、２−ブロモ−５−（４−フェノキシフェニル）ペンタン酸メチル、２−ブロモ−５−（４−ジメチルアミノフェニル）ペンタン酸メチル、２−ブロモ−５−（４−メトキシカルボニルフェニル）ペンタン酸メチル、
【００１４】
２−ブロモ−５−フェニルペンタン酸エチル、２−ブロモ−５−（２−メチルフェニル）ペンタン酸エチル、２−ブロモ−５−（３−メチルフェニル）ペンタン酸エチル、２−ブロモ−５−（４−メチルフェニル）ペンタン酸エチル、２−ブロモ−５−（４−エチルフェニル）ペンタン酸エチル、２−ブロモ−５−（２−メトキシフェニル）ペンタン酸エチル、２−ブロモ−５−（３−メトキシフェニル）ペンタン酸エチル、２−ブロモ−５−（４−メトキシフェニル）ペンタン酸エチル、２−ブロモ−５−（４−エトキシフェニル）ペンタン酸エチル、２−ブロモ−５−（４−ｔｅｒｔ−ブトキシフェニル）ペンタン酸エチル、２−ブロモ−５−（２，４−ジメチルフェニル）ペンタン酸エチル、２−ブロモ−５−（２，４−ジメトキシフェニル）ペンタン酸エチル、２−ブロモ−５−（２−クロロフェニル）ペンタン酸エチル、２−ブロモ−５−（４−フルオロフェニル）ペンタン酸エチル、２−ブロモ−５−（４−クロロフェニル）ペンタン酸エチル、２−ブロモ−５−（４−ブロモフェニル）ペンタン酸エチル、２−ブロモ−５−（３−ニトロフェニル）ペンタン酸エチル、２−ブロモ−５−（４−フェノキシフェニル）ペンタン酸エチル、２−ブロモ−５−（４−ジメチルアミノフェニル）ペンタン酸エチル、２−ブロモ−５−（４−メトキシカルボニルフェニル）ペンタン酸エチル、
【００１５】
２−ブロモ−５−フェニルペンタン酸ｎ−プロピル、２−ブロモ−５−（２−メチルフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、２−ブロモ−５−（３−メチルフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、２−ブロモ−５−（４−メチルフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、２−ブロモ−５−（４−エチルフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、２−ブロモ−５−（２−メトキシフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、２−ブロモ−５−（３−メトキシフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、２−ブロモ−５−（４−メトキシフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、２−ブロモ−５−（４−エトキシフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、２−ブロモ−５−（４−ｔｅｒｔ−ブトキシフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、２−ブロモ−５−（２，４−ジメチルフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、２−ブロモ−５−（２，４−ジメトキシフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、２−ブロモ−５−（２−クロロフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、２−ブロモ−５−（４−フルオロフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、２−ブロモ−５−（４−クロロフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、２−ブロモ−５−（４−ブロモフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、２−ブロモ−５−（３−ニトロフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、２−ブロモ−５−（４−フェノキシフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、２−ブロモ−５−（４−ジメチルアミノフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、２−ブロモ−５−（４−メトキシカルボニルフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、
【００１６】
２−ブロモ−５−フェニルペンタン酸イソプロピル、２−ブロモ−５−（２−メチルフェニル）ペンタン酸イソプロピル、２−ブロモ−５−（３−メチルフェニル）ペンタン酸イソプロピル、２−ブロモ−５−（４−メチルフェニル）ペンタン酸イソプロピル、２−ブロモ−５−（４−エチルフェニル）ペンタン酸イソプロピル、２−ブロモ−５−（２−メトキシフェニル）ペンタン酸イソプロピル、２−ブロモ−５−（３−メトキシフェニル）ペンタン酸イソプロピル、２−ブロモ−５−（４−メトキシフェニル）ペンタン酸イソプロピル、２−ブロモ−５−（４−エトキシフェニル）ペンタン酸イソプロピル、２−ブロモ−５−（４−ｔｅｒｔ−ブトキシフェニル）ペンタン酸イソプロピル、２−ブロモ−５−（２，４−ジメチルフェニル）ペンタン酸イソプロピル、２−ブロモ−５−（２，４−ジメトキシフェニル）ペンタン酸イソプロピル、２−ブロモ−５−（２−クロロフェニル）ペンタン酸イソプロピル、２−ブロモ−５−（４−フルオロフェニル）ペンタン酸イソプロピル、２−ブロモ−５−（４−クロロフェニル）ペンタン酸イソプロピル、２−ブロモ−５−（４−ブロモフェニル）ペンタン酸イソプロピル、２−ブロモ−５−（３−ニトロフェニル）ペンタン酸イソプロピル、２−ブロモ−５−（４−フェノキシフェニル）ペンタン酸イソプロピル、２−ブロモ−５−（４−ジメチルアミノフェニル）ペンタン酸イソプロピル、２−ブロモ−５−（４−メトキシカルボニルフェニル）ペンタン酸イソプロピル、
【００１７】
２−ブロモ−５−フェニルペンタン酸ｎ−ブチル、２−ブロモ−５−（２−メチルフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、２−ブロモ−５−（３−メチルフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、２−ブロモ−５−（４−メチルフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、２−ブロモ−５−（４−エチルフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、２−ブロモ−５−（２−メトキシフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、２−ブロモ−５−（３−メトキシフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、２−ブロモ−５−（４−メトキシフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、２−ブロモ−５−（４−エトキシフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、２−ブロモ−５−（４−ｔｅｒｔ−ブトキシフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、２−ブロモ−５−（２，４−ジメチルフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、２−ブロモ−５−（２，４−ジメトキシフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、２−ブロモ−５−（２−クロロフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、２−ブロモ−５−（４−フルオロフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、２−ブロモ−５−（４−クロロフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、２−ブロモ−５−（４−ブロモフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、２−ブロモ−５−（３−ニトロフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、２−ブロモ−５−（４−フェノキシフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、２−ブロモ−５−（４−ジメチルアミノフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、２−ブロモ−５−（４−メトキシカルボニルフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、
【００１８】
２−ヨード−５−フェニルペンタン酸メチル、２−ヨード−５−（２−メチルフェニル）ペンタン酸メチル、２−ヨード−５−（３−メチルフェニル）ペンタン酸メチル、２−ヨード−５−（４−メチルフェニル）ペンタン酸メチル、２−ヨード−５−（４−エチルフェニル）ペンタン酸メチル、２−ヨード−５−（２−メトキシフェニル）ペンタン酸メチル、２−ヨード−５−（３−メトキシフェニル）ペンタン酸メチル、２−ヨード−５−（４−メトキシフェニル）ペンタン酸メチル、２−ヨード−５−（４−エトキシフェニル）ペンタン酸メチル、２−ヨード−５−（４−ｔｅｒｔ−ブトキシフェニル）ペンタン酸メチル、２−ヨード−５−（２，４−ジメチルフェニル）ペンタン酸メチル、２−ヨード−５−（２，４−ジメトキシフェニル）ペンタン酸メチル、２−ヨード−５−（２−クロロフェニル）ペンタン酸メチル、２−ヨード−５−（４−フルオロフェニル）ペンタン酸メチル、２−ヨード−５−（４−クロロフェニル）ペンタン酸メチル、２−ヨード−５−（４−ブロモフェニル）ペンタン酸メチル、２−ヨード−５−（３−ニトロフェニル）ペンタン酸メチル、２−ヨード−５−（４−フェノキシフェニル）ペンタン酸メチル、２−ヨード−５−（４−ジメチルアミノフェニル）ペンタン酸メチル、２−ヨード−５−（４−メトキシカルボニルフェニル）ペンタン酸メチル等が挙げられる。
【００１９】
本発明は、２−ハロカルボン酸エステル化合物（１）の一方の光学活性体を優先的に加水分解する能力を有する酵素、または該酵素の産生能を有する微生物の培養物もしくはその処理物を、２−ハロカルボン酸エステル化合物（１）に接触せしめ、式（２）
（式中、Ｒ２、Ｒ３およびＸは上記と同一の意味を表わし、＊は不斉炭素原子であることを表わす。）
で示される光学活性２−ハロカルボン酸化合物（以下、光学活性２−ハロカルボン酸化合物（２）と略記する。）および式（３）
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｘおよび＊は上記と同一の意味を表わす。）
で示される光学活性２−ハロカルボン酸エステル化合物（以下、光学活性２−ハロカルボン酸エステル化合物（３）と略記する。）を製造するものである。
【００２０】
まず、２−ハロカルボン酸エステル化合物（１）の一方の光学活性体を優先的に加水分解する能力を有する酵素（以下、本酵素と称することもある。）について説明する。かかる本酵素としては、例えばアルスロバクター（Arthrobacter）属に属する微生物、アスペルギルス（Aspergillus）属に属する微生物、バークホルデリア（Burkholderia）属に属する微生物、クロモバクテリウム（Chromobacterium）属に属する微生物、フミコーラ（Humicola）属に属する微生物、ペニシリウム（Penicillium）属に属する微生物、シュードモナス（Pseudomonas）属に属する微生物、リゾプス（Rhizopus）属に属する微生物等を起源とする加水分解酵素が挙げられ、アルスロバクター（Arthrobacter）属に属する微生物、アスペルギルス（Aspergillus）属に属する微生物、クロモバクテリウム（Chromobacterium）属に属する微生物またはフミコーラ（Humicola）属に属する微生物を起源とする酵素が好ましい。
【００２１】
さらに具体的には、アルスロバクター・ラモサス（Arthrobacter ramosus）、アスペルギルス・フラバス（Aspergillus flavus）、バークホルデリア・セパシア（Burkholderia cepacia）、バークホルデリア・エスピー（Burkholderia sp.）、クロモバクテリウム・エスピー（Chromobacterium sp.）、フミコーラ・エスピー（Humicola sp.）、ペニシリウム・ロケフォルティ（Penicillium roqueforti）、シュードモナス・フルオレッセンス（Pseudomonas fluorescens）、シュードモナス・エスピー（Pseudomonas sp.）、シュードモナス・セパシア（Pseudomonas cepacia）、リゾプス・ニヴェウス（Rhizopus niveus）等の微生物を起源とする酵素が挙げられ、アルスロバクター・ラモサス（Arthrobacter ramosus）、アスペルギルス・フラバス（Aspergillus flavus）、クロモバクテリウム・エスピー（Chromobacterium sp.）またはフミコーラ・エスピー（Humicola sp.）の微生物を起源とする酵素が好ましい。
【００２２】
また、これら微生物に突然変異剤を作用させたり、紫外線照射処理したりすることにより誘導された突然変異体由来の酵素であって、２−ハロカルボン酸エステル化合物（１）の一方の光学活性体を優先的に加水分解する能力を有する酵素も用いることができる。また、前記微生物が有する本酵素をコードする遺伝子が導入され形質転換された組換え微生物により産生される酵素や遺伝子工学的手法により上記本酵素のアミノ酸配列中の特定のアミノ酸が１個ないしは数個、欠失、付加あるいは置換されてなる変異型酵素であって、２−ハロカルボン酸エステル化合物（１）の一方の光学活性体を優先的に加水分解する能力を有する酵素も用いることができる。
【００２３】
本酵素をコードする遺伝子が導入され形質転換された組換え微生物を作製する方法としては、例えばＪ．Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｅ．Ｆ．Ｆｒｉｔｓｃｈ，Ｔ．Ｍａｎｉａｔｉｓ著，モレキュラー クローニング 第２版（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ ２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ）、コールド スプリング ハーバー ラボラトリー（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）発行，１９８９年等に記載の通常の遺伝子工学的手法に準じた方法が挙げられる。さらに具体的には、例えば特開２００１−４６０８４号公報、特開平１０−２１０９７５号公報、特開平５−５６７８７号公報等に記載の方法に準じた方法が挙げられる。かかる方法により作製される組換え微生物によって産生される酵素としては、例えばアスペルギルス・フラバス（Aspergillus flavus）ＡＴＣＣ１１４９２株由来のエステラーゼ（特開平２００１−４６０８４号公報）、バークホルデリア・セパシア（Burkholderia cepacia）ＳＣ−２０株（ＦＥＲＭ Ｐ−１７４０６）由来のリパーゼ（特開平１０−２１０９７５号公報）、アルスロバクター（Arthrobacter）ＳＣ−６−９８−２８株（ＦＥＲＭ ＢＰ−３６５８）由来のエステラーゼ（特開平５−５６７８７号公報）等が挙げられる。
【００２４】
また、遺伝子工学的手法による変異型酵素を作製する方法としては、例えばＯｌｆｅｒｔ Ｌａｎｄｔらの方法（Ｇｅｎｅ ９６ １２５−１２８ １９９０）等が挙げられる。さらに具体的には、特開平７−２１３２８０号公報等に記載の方法に準じた方法が挙げられる。かかる方法により作製される変異型酵素としては、例えばクロモバクテリウム（Chromobacterium）ＳＣ−ＹＭ−１株由来のエステラーゼから作製される変異型エステラーゼまたはリパーゼ等が挙げられる。
【００２５】
２−ハロカルボン酸エステル化合物（１）の一方の光学活性体を優先的に加水分解する能力を有し、Ｓ体の光学活性２−ハロカルボン酸化合物（２）およびＲ体の光学活性２−ハロカルボン酸エステル化合物（３）を選択的に生成する酵素としては、例えばリパーゼＮ「アマノ」 （Rhizopus niveus由来）、リパーゼＡＫ（Pseudomonas fluorescens由来）（以上、天野エンザイム社製）、キラザイムＬ−１（Burkholderia sp.由来）、キラザイムＬ−８（Humicola sp.由来）（以上、ベーリンガー・マンハイム（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ）社製）、アルスロバクター（Arthrobacter）ＳＣ−６−９８−２８株（ＦＥＲＭ ＢＰ−３６５８）由来のエステラーゼ、バークホルデリア・セパシア（Burkholderia cepacia）ＳＣ−２０株（ＦＥＲＭ Ｐ−１７４０６）由来のリパーゼ等が挙げられる。
【００２６】
また、２−ハロカルボン酸エステル化合物（１）の一方の光学活性体を優先的に加水分解する能力を有し、Ｒ体の光学活性２−ハロカルボン酸化合物（２）およびＳ体の光学活性２−ハロカルボン酸エステル化合物（３）を選択的に生成する酵素としては、例えばリパーゼＡＨ（Pseudomonas cepacia由来）、リパーゼＲ「アマノ」（Penicilum roqueforti由来）、リパーゼＰＳ「アマノ」（Burkholderia cepacia由来）（以上、天野エンザイム社製）、キラザイムＬ−６（Pseudomonas sp.由来）（ベーリンガー・マンハイム（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ）社製）、アスペルギルス・フラバス（Aspergillus flavus）ＡＴＣＣ１１４９２株由来のエステラーゼ、クロモバクテリウム（Chromobacterium）ＳＣ−ＹＭ−１株由来のエステラーゼ等が挙げられる。
【００２７】
これら微生物は、通常用いられる培養方法により培養することができる。用いられる培地としては、通常の微生物培養に使用される炭素源、窒素源、有機塩、無機塩等を適宜含有する各種の微生物を培養するための培地が挙げられる。炭素源としては、例えばグルコース、スクロース、グリセロール、でんぷん、有機酸、廃糖蜜等が挙げられ、窒素源としては、例えば、酵母エキス、肉エキス、ペプトン、カザミノ酸、麦芽エキス、大豆粉、コーンスティプリカー（ｃｏｒｎ ｓｔｅｅｐ ｌｉｑｕｏｒ）、綿実粉、乾燥酵母、硫安、硝酸ナトリウム等が挙げられ、有機塩および無機塩としては、例えば塩化ナトリウム、塩化カリウム、炭酸ナトリウム、リン酸２水素１カリウム、リン酸１水素２カリウム、炭酸カルシウム、酢酸アンモニウム、硫酸マグネシウム、硫酸銅、硫酸亜鉛、硫酸第１鉄、塩化コバルト等が挙げられる。
【００２８】
培養方法としては、例えば固体培養、液体培養（例えば試験管培養、フラスコ培養、ジャーファーメンター培養等）等が挙げられる。培養温度および培養液のｐＨは、前記微生物が生育する範囲であれば特に限定されるものではないが、培養温度としては、約１５〜４５℃の範囲、培養液のｐＨとしては、約４〜８の範囲が好ましい。培養時間は、培養条件により適宜選択することができ、通常約１〜７日間の範囲である。
【００２９】
かくして微生物の培養物が得られ、前記のとおり、得られた培養物をそのまま用いてもよいし、該培養物を精製して酵素を得、得られた酵素を用いてもよい。培養物を精製する方法としては、通常用いられる酵素の精製方法が挙げられる。例えば超音波処理、ダイノミル処理あるいはフレンチプレス処理等により前記培養物中の菌体を破砕した後、遠心分離等により不溶物を除去し、例えば陽イオン交換カラムクロマトグラフィー、陰イオン交換カラムクロマトグラフィー、疎水カラムクロマトグラフィー、ゲル濾過カラムクロマトグラフィー等のカラムクロマトグラフィー処理する方法が挙げられる。なお、かかるカラムクロマトグラフィー処理に使用する担体としては、例えばＤＥＡＥ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ｆａｓｔｆｌｏｗ（アマシャム・ファルマシア・バイオテク社製）、Ｂｕｔｙｌ−Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ６５０Ｓ（東洋曹達工業株式会社製）等が挙げられる。
【００３０】
かかる酵素またはその培養物の処理物としては、例えば培養して得られた菌体を凍結乾燥処理したもの、例えばアセトン、エタノール等の有機溶媒で処理したもの、例えばアルカリ処理したもの、例えば物理的にもしくは酵素的に破砕処理したもの、これらのものから分離・抽出された粗酵素等が挙げられる。また、これらを、公知の方法により固定化処理したものを用いてもよい。固定化処理方法としては、例えばシリカゲル、セラミック等の無機担体や、例えばセルロース、イオン交換樹脂等の担体に吸着させる担体結合方法、例えばポリアクリルアミド法、含硫多糖ゲル法（例えばカラギーナンゲル法）、アルギン酸ゲル法、寒天ゲル法等が挙げられる。
【００３１】
続いて、２−ハロカルボン酸エステル化合物（１）の一方の光学活性体を優先的に加水分解する能力を有する酵素、または該酵素の産生能を有する微生物の培養物もしくはその処理物を、２−ハロカルボン酸エステル化合物（１）に接触せしめ、光学活性２−ハロカルボン酸化合物（２）および光学活性２−ハロカルボン酸エステル化合物（３）を製造する方法について説明する。
【００３２】
かかる本酵素は、目的とする光学活性２−ハロカルボン酸化合物（２）および光学活性２−ハロカルボン酸エステル化合物（３）の立体配置に応じて適宜選択すればよい。
【００３３】
２−ハロカルボン酸エステル化合物（１）に接触させる酵素の使用量は、例えば精製酵素、粗酵素、または市販の酵素を用いる場合には、２−ハロカルボン酸エステル化合物（１）に対して、通常０．００１〜２重量倍、好ましくは０．００２〜０．５重量倍であり、微生物培養物、菌体、またはそれらの処理物を用いる場合には、２−ハロカルボン酸エステル化合物（１）に対して、通常０．０１〜２００重量倍程度、好ましくは０．１〜５０重量倍程度である。
【００３４】
２−ハロカルボン酸エステル化合物（１）と酵素とは、通常水中で混合、接触させられる。かかる水の使用量は、２−ハロカルボン酸エステル化合物に対して、通常０．５モル倍以上であり、その上限は特に制限されず、例えば溶媒として大過剰量用いてもよい。また、緩衝剤の共存下に、２−ハロカルボン酸エステル化合物（１）と酵素とを接触させてもよく、緩衝剤としては、例えばリン酸ナトリウム、リン酸カリウム等のリン酸アルカリ金属塩、例えば酢酸ナトリウム、酢酸カリウム等の酢酸アルカリ金属塩等が挙げられる。かかる緩衝剤の使用量は、用いた緩衝剤が有効に機能する量であれば特に限定されない。
【００３５】
また、有機溶媒の共存下に、２−ハロカルボン酸エステル化合物（１）と酵素とを接触させてもよく、有機溶媒としては、例えばｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、イソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン等のエーテル系溶媒、例えばトルエン、ヘキサン、シクロヘキサン、ヘプタン、オクタン、イソオクタン等の炭化水素系溶媒、例えばメタノール、エタノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、イソブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノール等のアルコール系溶媒、ジメチルスルホキシド等のスルホキシド系溶媒、例えばアセトン等のケトン系溶媒、例えばアセトニトリル等のニトリル系溶媒、例えばＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド等のアミド系溶媒等の単独もしくは混合溶媒が挙げられる。かかる有機溶媒の使用量は、２−ハロカルボン酸エステル化合物（１）に対して、通常２００重量倍以下、好ましくは１００重量倍以下である。
【００３６】
反応温度は、高すぎると酵素の安定性が低下する傾向にあり、また低すぎると反応速度が低下する傾向にあるため、通常５〜６５℃程度、好ましくは２０〜５０℃程度である。
【００３７】
また、反応系内のｐＨは、反応が進行する範囲であれば適宜変化させることができるが、通常ｐＨ４〜１０の範囲、好ましくはｐＨ６〜８の範囲で反応が実施される。反応の進行に伴い、反応系内のｐＨが変化する場合には、例えば塩基を加え、反応系内のｐＨを適宜選択された範囲内に調整しながら反応を実施してもよい。かかる塩基としては、例えば水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等のアルカリ金属水酸化物、例えば炭酸ナトリウム、炭酸カリウム等のアルカリ金属炭酸塩、例えば炭酸カルシウム等のアルカリ土類金属炭酸塩、例えば炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム等のアルカリ金属炭酸水素塩、例えばリン酸２水素１ナトリウム、リン酸１水素２ナトリウム、リン酸２水素１カリウム、リン酸１水素２カリウム等のアルカリ金属リン酸水素塩、例えばトリエチルアミン、ピリジン等の有機塩基、アンモニア等が挙げられる。かかる塩基は、単独もしくは２種類以上を混合して用いてもよい。かかる塩基は、そのまま用いてもよいし、水溶液として用いてもよい。また、前記有機溶媒もしくは有機溶媒と水との混合溶媒に、溶解もしくは懸濁させて用いてもよい。
【００３８】
２−ハロカルボン酸エステル化合物（１）と本酵素とを接触させることにより、２−ハロカルボン酸エステル化合物（１）の一方の光学活性体を優先的に加水分解され、光学活性２−ハロカルボン酸化合物（２）および光学活性２−ハロカルボン酸エステル化合物（３）が得られる。光学活性２−ハロカルボン酸化合物（２）は、比較的水に溶けやすく、光学活性２−ハロカルボン酸エステル化合物（３）は、比較的水に溶けにくいため、反応終了後、反応液に、必要に応じて水に不溶の有機溶媒を加え、分液処理することにより、光学活性２−ハロカルボン酸化合物を含む水層と光学活性２−ハロカルボン酸エステル化合物を含む有機層とを得ることができ、生成した光学活性２−ハロカルボン酸化合物（２）と光学活性２−ハロカルボン酸エステル化合物（３）とを、容易に分離することができる。なお、反応液中に不溶分が存在する場合には、分液処理の前もしくは後にかかる不溶分を濾別することが好ましい。
【００３９】
水に不溶の有機溶媒としては、例えばｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、イソプロピルエーテル等のエーテル系溶媒、例えばトルエン、ヘキサン、シクロヘキサン、ヘプタン、オクタン、イソオクタン等の炭化水素系溶媒、例えばジクロロメタン、ジクロロエタン、クロロホルム、クロロベンゼン、ジクロロベンゼン等のハロゲン化炭化水素系溶媒、例えば酢酸エチル、酢酸ｎ−ブチル等のエステル系溶媒等の単独もしくは混合溶媒が挙げられ、その使用量は特に制限されない。
【００４０】
得られた光学活性２−ハロカルボン酸化合物を含む水層を濃縮処理することにより、光学活性２−ハロカルボン酸化合物（２）を取り出すことができる。取り出した光学活性２−ハロカルボン酸化合物（２）は、例えば再結晶、カラムクロマトグラフィー等の通常の精製手段によりさらに精製してもよい。
【００４１】
かくして得られる光学活性２−ハロカルボン酸化合物（２）としては、例えば光学活性２−ブロモ−５−フェニルペンタン酸、光学活性２−ブロモ−５−（２−メチルフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ブロモ−５−（３−メチルフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ブロモ−５−（４−メチルフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ブロモ−５−（４−エチルフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ブロモ−５−（２−メトキシフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ブロモ−５−（３−メトキシフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ブロモ−５−（４−メトキシフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ブロモ−５−（４−エトキシフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ブロモ−５−（４−ｔｅｒｔ−ブトキシフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ブロモ−５−（２，４−ジメチルフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ブロモ−５−（２，４−ジメトキシフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ブロモ−５−（２−クロロフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ブロモ−５−（４−フルオロフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ブロモ−５−（４−クロロフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ブロモ−５−（４−ブロモフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ブロモ−５−（３−ニトロフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ブロモ−５−（４−フェノキシフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ブロモ−５−（４−ジメチルアミノフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ブロモ−５−（４−メトキシカルボニルフェニル）ペンタン酸、
【００４２】
光学活性２−ヨード−５−フェニルペンタン酸、光学活性２−ヨード−５−（２−メチルフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ヨード−５−（３−メチルフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ヨード−５−（４−メチルフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ヨード−５−（４−エチルフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ヨード−５−（２−メトキシフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ヨード−５−（３−メトキシフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ヨード−５−（４−メトキシフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ヨード−５−（４−エトキシフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ヨード−５−（４−ｔｅｒｔ−ブトキシフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ヨード−５−（２，４−ジメチルフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ヨード−５−（２，４−ジメトキシフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ヨード−５−（２−クロロフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ヨード−５−（４−フルオロフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ヨード−５−（４−クロロフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ヨード−５−（４−ブロモフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ヨード−５−（３−ニトロフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ヨード−５−（４−フェノキシフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ヨード−５−（４−ジメチルアミノフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ヨード−５−（４−メトキシカルボニルフェニル）ペンタン酸等が挙げられる。
【００４３】
また、得られた光学活性２−ハロカルボン酸エステル化合物（３）を含む有機層を濃縮処理することにより、光学活性２−ハロカルボン酸エステル化合物（３）を取り出すことができる。取り出した光学活性２−ハロカルボン酸エステル化合物（３）は、例えば再結晶、カラムクロマトグラフィー等の通常の精製手段により、さらに精製してもよい。
【００４４】
かくして得られる光学活性２−ハロカルボン酸エステル化合物（３）としては、例えば光学活性２−ブロモ−５−フェニルペンタン酸メチル、光学活性２−ブロモ−５−（２−メチルフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ブロモ−５−（３−メチルフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−メチルフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−エチルフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ブロモ−５−（２−メトキシフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ブロモ−５−（３−メトキシフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−メトキシフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−エトキシフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−ｔｅｒｔ−ブトキシフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ブロモ−５−（２，４−ジメチルフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ブロモ−５−（２，４−ジメトキシフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ブロモ−５−（２−クロロフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−フルオロフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−クロロフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−ブロモフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ブロモ−５−（３−ニトロフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−フェノキシフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−ジメチルアミノフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−メトキシカルボニルフェニル）ペンタン酸メチル、
【００４５】
光学活性２−ブロモ−５−フェニルペンタン酸エチル、光学活性２−ブロモ−５−（２−メチルフェニル）ペンタン酸エチル、光学活性２−ブロモ−５−（３−メチルフェニル）ペンタン酸エチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−メチルフェニル）ペンタン酸エチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−エチルフェニル）ペンタン酸エチル、光学活性２−ブロモ−５−（２−メトキシフェニル）ペンタン酸エチル、光学活性２−ブロモ−５−（３−メトキシフェニル）ペンタン酸エチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−メトキシフェニル）ペンタン酸エチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−エトキシフェニル）ペンタン酸エチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−ｔｅｒｔ−ブトキシフェニル）ペンタン酸エチル、光学活性２−ブロモ−５−（２，４−ジメチルフェニル）ペンタン酸エチル、光学活性２−ブロモ−５−（２，４−ジメトキシフェニル）ペンタン酸エチル、光学活性２−ブロモ−５−（２−クロロフェニル）ペンタン酸エチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−フルオロフェニル）ペンタン酸エチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−クロロフェニル）ペンタン酸エチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−ブロモフェニル）ペンタン酸エチル、光学活性２−ブロモ−５−（３−ニトロフェニル）ペンタン酸エチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−フェノキシフェニル）ペンタン酸エチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−ジメチルアミノフェニル）ペンタン酸エチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−メトキシカルボニルフェニル）ペンタン酸エチル、
【００４６】
光学活性２−ブロモ−５−フェニルペンタン酸ｎ−プロピル、光学活性２−ブロモ−５−（２−メチルフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、光学活性２−ブロモ−５−（３−メチルフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、光学活性２−ブロモ−５−（４−メチルフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、光学活性２−ブロモ−５−（４−エチルフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、光学活性２−ブロモ−５−（２−メトキシフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、光学活性２−ブロモ−５−（３−メトキシフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、光学活性２−ブロモ−５−（４−メトキシフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、光学活性２−ブロモ−５−（４−エトキシフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、光学活性２−ブロモ−５−（４−ｔｅｒｔ−ブトキシフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、光学活性２−ブロモ−５−（２，４−ジメチルフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、光学活性２−ブロモ−５−（２，４−ジメトキシフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、光学活性２−ブロモ−５−（２−クロロフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、光学活性２−ブロモ−５−（４−フルオロフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、光学活性２−ブロモ−５−（４−クロロフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、光学活性２−ブロモ−５−（４−ブロモフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、光学活性２−ブロモ−５−（３−ニトロフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、光学活性２−ブロモ−５−（４−フェノキシフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、光学活性２−ブロモ−５−（４−ジメチルアミノフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、光学活性２−ブロモ−５−（４−メトキシカルボニルフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、
【００４７】
光学活性２−ブロモ−５−フェニルペンタン酸イソプロピル、光学活性２−ブロモ−５−（２−メチルフェニル）ペンタン酸イソプロピル、光学活性２−ブロモ−５−（３−メチルフェニル）ペンタン酸イソプロピル、光学活性２−ブロモ−５−（４−メチルフェニル）ペンタン酸イソプロピル、光学活性２−ブロモ−５−（４−エチルフェニル）ペンタン酸イソプロピル、光学活性２−ブロモ−５−（２−メトキシフェニル）ペンタン酸イソプロピル、光学活性２−ブロモ−５−（３−メトキシフェニル）ペンタン酸イソプロピル、光学活性２−ブロモ−５−（４−メトキシフェニル）ペンタン酸イソプロピル、光学活性２−ブロモ−５−（４−エトキシフェニル）ペンタン酸イソプロピル、光学活性２−ブロモ−５−（４−ｔｅｒｔ−ブトキシフェニル）ペンタン酸イソプロピル、光学活性２−ブロモ−５−（２，４−ジメチルフェニル）ペンタン酸イソプロピル、光学活性２−ブロモ−５−（２，４−ジメトキシフェニル）ペンタン酸イソプロピル、光学活性２−ブロモ−５−（２−クロロフェニル）ペンタン酸イソプロピル、光学活性２−ブロモ−５−（４−フルオロフェニル）ペンタン酸イソプロピル、光学活性２−ブロモ−５−（４−クロロフェニル）ペンタン酸イソプロピル、光学活性２−ブロモ−５−（４−ブロモフェニル）ペンタン酸イソプロピル、光学活性２−ブロモ−５−（３−ニトロフェニル）ペンタン酸イソプロピル、光学活性２−ブロモ−５−（４−フェノキシフェニル）ペンタン酸イソプロピル、光学活性２−ブロモ−５−（４−ジメチルアミノフェニル）ペンタン酸イソプロピル、光学活性２−ブロモ−５−（４−メトキシカルボニルフェニル）ペンタン酸イソプロピル、
【００４８】
光学活性２−ブロモ−５−フェニルペンタン酸ｎ−ブチル、光学活性２−ブロモ−５−（２−メチルフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、光学活性２−ブロモ−５−（３−メチルフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−メチルフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−エチルフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、光学活性２−ブロモ−５−（２−メトキシフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、光学活性２−ブロモ−５−（３−メトキシフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−メトキシフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−エトキシフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−ｔｅｒｔ−ブトキシフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、光学活性２−ブロモ−５−（２，４−ジメチルフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、光学活性２−ブロモ−５−（２，４−ジメトキシフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、光学活性２−ブロモ−５−（２−クロロフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−フルオロフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−クロロフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−ブロモフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、光学活性２−ブロモ−５−（３−ニトロフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−フェノキシフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−ジメチルアミノフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−メトキシカルボニルフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、
【００４９】
光学活性２−ヨード−５−フェニルペンタン酸メチル、光学活性２−ヨード−５−（２−メチルフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ヨード−５−（３−メチルフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ヨード−５−（４−メチルフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ヨード−５−（４−エチルフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ヨード−５−（２−メトキシフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ヨード−５−（３−メトキシフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ヨード−５−（４−メトキシフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ヨード−５−（４−エトキシフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ヨード−５−（４−ｔｅｒｔ−ブトキシフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ヨード−５−（２，４−ジメチルフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ヨード−５−（２，４−ジメトキシフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ヨード−５−（２−クロロフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ヨード−５−（４−フルオロフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ヨード−５−（４−クロロフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ヨード−５−（４−ブロモフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ヨード−５−（３−ニトロフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ヨード−５−（４−フェノキシフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ヨード−５−（４−ジメチルアミノフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ヨード−５−（４−メトキシカルボニルフェニル）ペンタン酸メチル等が挙げられる。
【００５０】
なお、２−ハロカルボン酸エステル化合物（１）は、例えば式（４）
（式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は上記と同一の意味を表わす。）
で示される化合物と臭化チオニルとを反応させる方法（例えばＲ．Ｃ．Ｌａｒｏｃｋ著，Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，２ｎｄ Ｅｄ．，ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９９）等参照）、例えば塩酸、臭化水素水、硫酸水溶液等の酸の水溶液中で、式（５）
（式中、Ｒ２およびＲ３は上記と同一の意味を表わす。）
で示される化合物に、例えば亜硝酸ナトリウム等のジアゾ化剤を作用させた後、さらに例えば臭化カリウム、臭化ナトリウム、臭化リチウム水溶液等のアルカリ金属臭化物を作用させ（例えばＳｙｎｔｈｅｓｉｓ，５８３（１９９９）、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．，８７（１９７１）等参照）、得られる式（６）
（式中、Ｒ２およびＲ３は上記と同一の意味を表わす。）
で示される化合物を、通常の方法によりエステル化する方法等により製造することができる。式（５）で示される化合物は、例えばＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ａｓｙｍｍｅｔｒｙ，６，１９１９（１９９５）等に記載された方法に準じて製造することができる。
【実施例】
【００５１】
以下、実施例により、本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
【００５２】
実施例１〜１２
表１に示した酵素１０ｍｇを、１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）１ｍｌに加えた。これに、参考例１で得た２−ブロモ−５−（４−メトキシフェニル）ペンタン酸メチル３ｍｇをメタノールに溶解させた溶液１００μＬを加え、室温で、表２に記載の所定時間撹拌、反応させた。反応終了後、光学活性２−ブロモ−５−（４−メトキシフェニル）ペンタン酸および光学活性２−ブロモ−５−（４−メトキシフェニル）ペンタン酸メチルを含む反応液０.７ｍＬを採取し、不溶物を濾別した。その後、アセトニトリル１.５ｍＬで希釈し、高速液体クロマトグラフィー（転化率算出には、ＳＵＭＩＰＡＸ ＯＤＳ Ａ−２１２カラム（６ｍｍφ×１５ｃｍ，５μｍ；住化分析センター社製）を、光学純度算出には、ＣＨＩＲＡＬＣＥＬ ＡＤ−ＲＨカラム（４．６ｍｍφ×２５ｃｍ，５μｍ；ダイセル化学社製）をそれぞれ使用）にて分析し、転化率および光学純度を求めた。結果を表２に示す。
【００５３】
【表１】
【００５４】
【表２】
【００５５】
参考例１
２−ヒドロキシ−５−（４−メトキシフェニル）ペンタン酸メチル１ｇおよびヘキサメチルリン酸トリアミド１０ｍＬとを混合した。室温で、これに、臭化チオニル１．５ｍＬを加え、４０時間攪拌、反応させた。反応終了後、反応液を水１００ｍＬ中に注加し、トルエンで３回抽出処理した。得られた有機層を、１Ｎ塩酸、５重量％炭酸水素ナトリウム水溶液、さらに水で順次洗浄処理した。洗浄後の有機層を、減圧条件下で濃縮処理した。得られた濃縮残渣をシリカゲルクロマトグラフィにて精製処理し、２−ブロモ−５−（４−メトキシフェニル）ペンタン酸メチル１．２ｇを得た。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、光学活性２−ハロカルボン酸化合物の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
式（２）
（式中、Ｒ２およびＲ３はそれぞれ同一または相異なって、水素原子、置換されていてもよいアルキル基、置換されていてもよいアルコキシ基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアリールオキシ基、ニトロ基、二置換アミノ基、アルコキシカルボニル基またはハロゲン原子を表わす。ここで、Ｒ２およびＲ３が隣接する炭素原子に結合しているときは、Ｒ２およびＲ３が結合して、その結合炭素原子とともに環を形成してもよい。Ｘは臭素原子またはヨウ素原子を表わす。＊は不斉炭素原子であることを表わす。）
で示される光学活性２−ハロカルボン酸化合物および式（３）
（式中、Ｒ１は低級アルキル基を表わし、Ｒ２、Ｒ３、Ｘおよび＊は上記と同一の意味を表わす。）
で示される光学活性２−ハロカルボン酸エステル化合物は、医薬中間体として有用であることが知られている（例えば特許文献１参照。）。
【０００３】
アルコール性水酸基をハロゲン原子に変換する方法として、アルコール性水酸基を有する化合物に臭化チオニルを作用させる方法が知られている（例えば非特許文献１参照。）が、かかる方法を用いて、式（５）
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３および＊は上記と同一の意味を表わす。）
で示される化合物から上記式（３）で示される光学活性２−ハロカルボン酸エステル化合物を製造することを試みたところ、ハロゲン化反応は進行するものの、同時にラセミ化反応も進行することがわかった。
【０００４】
【特許文献１】国際公開パンフレット第００／６３１９７号
【非特許文献１】Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．，８７（１９７１）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
このような状況のもと、本発明者らは、式（２）で示される光学活性２−ハロカルボン酸化合物および式（３）で示される光学活性２−ハロカルボン酸エステル化合物の製造方法を開発すべく検討したところ、式（１）
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＸは上記と同一の意味を表わす。）
で示される２−ハロカルボン酸エステル化合物の一方の光学活性体を優先的に加水分解する能力を有する酵素、または該酵素の産生能を有する微生物の培養物もしくはその処理物を、前記式（１）で示される２−ハロカルボン酸エステル化合物に接触せしめることにより、目的とする式（２）で示される光学活性２−ハロカルボン酸化合物および式（３）で示される光学活性２−ハロカルボン酸エステル化合物を得ることができることを見いだし、本発明に至った。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
すなわち、本発明は、式（１）
（式中、Ｒ１は低級アルキル基を表わし、Ｒ２およびＲ３はそれぞれ同一または相異なって、水素原子、置換されていてもよいアルキル基、置換されていてもよいアルコキシ基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアリールオキシ基、ニトロ基、二置換アミノ基、アルコキシカルボニル基またはハロゲン原子を表わす。ここで、Ｒ２およびＲ３が隣接する炭素原子に結合しているときは、Ｒ２およびＲ３が結合して、その結合炭素原子とともに環を形成してもよい。Ｘは臭素原子またはヨウ素原子を表わす。）
で示される２−ハロカルボン酸エステル化合物の一方の光学活性体を優先的に加水分解する能力を有する酵素、または該酵素の産生能を有する微生物の培養物もしくはその処理物を、前記式（１）で示される２−ハロカルボン酸エステル化合物に接触せしめることを特徴とする式（２）
（式中、Ｒ２、Ｒ３およびＸは上記と同一の意味を表わし、＊は不斉炭素原子であることを表わす。）
で示される光学活性２−ハロカルボン酸化合物および式（３）
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｘおよび＊は上記と同一の意味を表わす。）
で示される光学活性２−ハロカルボン酸エステル化合物の製造方法を提供するものである。
【発明の効果】
【０００７】
本発明によれば、光学活性２−ハロカルボン酸化合物および光学活性２−ハロカルボン酸エステル化合物を製造することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
式（１）
式（１）
で示される２−ハロカルボン酸エステル化合物（以下、２−ハロカルボン酸エステル化合物（１）と略記する。）の式中、Ｒ１は低級アルキル基を表わす。低級アルキル基としては、例えばメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基等の炭素数１〜４のアルキル基が挙げられる。
【０００９】
また、上記式（１）中、Ｒ２およびＲ３はそれぞれ同一または相異なって、水素原子、置換されていてもよいアルキル基、置換されていてもよいアルコキシ基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアリールオキシ基、ニトロ基、二置換アミノ基、アルコキシカルボニル基またはハロゲン原子を表わす。
【００１０】
置換されていてもよいアルキル基としては、例えばメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｎ−ヘキシル基、ｎ−ヘプチル基、４−ヘプチル基、ｎ−オクチル基、シクロヘキシル基等の炭素数１〜８の直鎖状、分枝鎖状もしくは環状の無置換アルキル基およびこれら無置換アルキル基の一つもしくは二つ以上の水素原子が置換基で置換された置換アルキル基が挙げられる。置換アルキル基の置換基としては、例えばメトキシ基、エトキシ基等のアルコキシ基、例えばフェニル基、ナフチル基等のアリール基、例えばＮ−メチルアミノ基、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ基、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ基等の置換アミノ基、例えばフッ素原子、塩素原子、臭素原子等のハロゲン原子、水酸基、シアノ基等が挙げられ、かかる置換アルキル基としては、例えばメトキシメチル基、２−メトキシエチル基、トリフルオロメチル基、ベンジル基、２−（Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ）エチル基等が挙げられる。置換されていてもよいアルコキシ基としては、前記置換されていてもよいアルキル基と酸素原子とから構成されるものが挙げられ、具体的には、メトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基、ｔｅｒｔ−ブトキシ基、メトキシメトキシ基、２−メトキシエトキシ基、トリフルオロメトキシ基、ベンジルオキシ基、２−（Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ）エトキシ基等が挙げられる。
【００１１】
置換されていてもよいアリール基としては、例えばフェニル基、ナフチル基等の無置換アリール基およびこれら無置換アリール基を構成する芳香環の一つまたは二つ以上の水素原子が、例えば前記アルキル基、前記アルコキシ基等の置換基で置換された、例えば２−メチルフェニル基、３−メチルフェニル基、４−メチルフェニル基、２−メトキシフェニル基、３−メトキシフェニル基、４−メトキシフェニル基等が挙げられる。置換されていてもよいアリールオキシ基としては、前記置換されていてもよいアリール基と酸素原子とから構成されるもの、例えばフェノキシ基、ナフトキシ基、２−メチルフェノキシ基、３−メチルフェノキシ基、４−メチルフェノキシ基、２−メトキシフェノキシ基、３−メトキシフェノキシ基、４−メトキシフェノキシ基等が挙げられる。二置換アミノ基としては、例えばジメチルアミノ基、ジエチルアミノ基、メチルエチルアミノ基等の二個の前記低級アルキル基等で置換されたアミノ基が挙げられる。アルコキシカルボニル基としては、例えばメトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、ｎ−プロポキシカルボニル基等が挙げられる。ハロゲン原子としては、例えばフッ素原子、塩素原子、臭素原子等が挙げられる。
【００１２】
また、Ｒ２およびＲ３が隣接する炭素原子に結合しているときは、Ｒ２およびＲ３が結合して、その結合炭素原子とともに環を形成してもよく、かかる環構造としては、例えばシクロペンテン環、シクロヘキセン環、ベンゼン環等が挙げられる。さらに、上記式（１）中、Ｘは臭素原子またはヨウ素原子を表わす。
【００１３】
かかる２−ハロカルボン酸エステル化合物（１）としては、例えば２−ブロモ−５−フェニルペンタン酸メチル、２−ブロモ−５−（２−メチルフェニル）ペンタン酸メチル、２−ブロモ−５−（３−メチルフェニル）ペンタン酸メチル、２−ブロモ−５−（４−メチルフェニル）ペンタン酸メチル、２−ブロモ−５−（４−エチルフェニル）ペンタン酸メチル、２−ブロモ−５−（２−メトキシフェニル）ペンタン酸メチル、２−ブロモ−５−（３−メトキシフェニル）ペンタン酸メチル、２−ブロモ−５−（４−メトキシフェニル）ペンタン酸メチル、２−ブロモ−５−（４−エトキシフェニル）ペンタン酸メチル、２−ブロモ−５−（４−ｔｅｒｔ−ブトキシフェニル）ペンタン酸メチル、２−ブロモ−５−（２，４−ジメチルフェニル）ペンタン酸メチル、２−ブロモ−５−（２，４−ジメトキシフェニル）ペンタン酸メチル、２−ブロモ−５−（２−クロロフェニル）ペンタン酸メチル、２−ブロモ−５−（４−フルオロフェニル）ペンタン酸メチル、２−ブロモ−５−（４−クロロフェニル）ペンタン酸メチル、２−ブロモ−５−（４−ブロモフェニル）ペンタン酸メチル、２−ブロモ−５−（３−ニトロフェニル）ペンタン酸メチル、２−ブロモ−５−（４−フェノキシフェニル）ペンタン酸メチル、２−ブロモ−５−（４−ジメチルアミノフェニル）ペンタン酸メチル、２−ブロモ−５−（４−メトキシカルボニルフェニル）ペンタン酸メチル、
【００１４】
２−ブロモ−５−フェニルペンタン酸エチル、２−ブロモ−５−（２−メチルフェニル）ペンタン酸エチル、２−ブロモ−５−（３−メチルフェニル）ペンタン酸エチル、２−ブロモ−５−（４−メチルフェニル）ペンタン酸エチル、２−ブロモ−５−（４−エチルフェニル）ペンタン酸エチル、２−ブロモ−５−（２−メトキシフェニル）ペンタン酸エチル、２−ブロモ−５−（３−メトキシフェニル）ペンタン酸エチル、２−ブロモ−５−（４−メトキシフェニル）ペンタン酸エチル、２−ブロモ−５−（４−エトキシフェニル）ペンタン酸エチル、２−ブロモ−５−（４−ｔｅｒｔ−ブトキシフェニル）ペンタン酸エチル、２−ブロモ−５−（２，４−ジメチルフェニル）ペンタン酸エチル、２−ブロモ−５−（２，４−ジメトキシフェニル）ペンタン酸エチル、２−ブロモ−５−（２−クロロフェニル）ペンタン酸エチル、２−ブロモ−５−（４−フルオロフェニル）ペンタン酸エチル、２−ブロモ−５−（４−クロロフェニル）ペンタン酸エチル、２−ブロモ−５−（４−ブロモフェニル）ペンタン酸エチル、２−ブロモ−５−（３−ニトロフェニル）ペンタン酸エチル、２−ブロモ−５−（４−フェノキシフェニル）ペンタン酸エチル、２−ブロモ−５−（４−ジメチルアミノフェニル）ペンタン酸エチル、２−ブロモ−５−（４−メトキシカルボニルフェニル）ペンタン酸エチル、
【００１５】
２−ブロモ−５−フェニルペンタン酸ｎ−プロピル、２−ブロモ−５−（２−メチルフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、２−ブロモ−５−（３−メチルフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、２−ブロモ−５−（４−メチルフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、２−ブロモ−５−（４−エチルフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、２−ブロモ−５−（２−メトキシフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、２−ブロモ−５−（３−メトキシフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、２−ブロモ−５−（４−メトキシフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、２−ブロモ−５−（４−エトキシフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、２−ブロモ−５−（４−ｔｅｒｔ−ブトキシフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、２−ブロモ−５−（２，４−ジメチルフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、２−ブロモ−５−（２，４−ジメトキシフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、２−ブロモ−５−（２−クロロフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、２−ブロモ−５−（４−フルオロフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、２−ブロモ−５−（４−クロロフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、２−ブロモ−５−（４−ブロモフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、２−ブロモ−５−（３−ニトロフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、２−ブロモ−５−（４−フェノキシフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、２−ブロモ−５−（４−ジメチルアミノフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、２−ブロモ−５−（４−メトキシカルボニルフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、
【００１６】
２−ブロモ−５−フェニルペンタン酸イソプロピル、２−ブロモ−５−（２−メチルフェニル）ペンタン酸イソプロピル、２−ブロモ−５−（３−メチルフェニル）ペンタン酸イソプロピル、２−ブロモ−５−（４−メチルフェニル）ペンタン酸イソプロピル、２−ブロモ−５−（４−エチルフェニル）ペンタン酸イソプロピル、２−ブロモ−５−（２−メトキシフェニル）ペンタン酸イソプロピル、２−ブロモ−５−（３−メトキシフェニル）ペンタン酸イソプロピル、２−ブロモ−５−（４−メトキシフェニル）ペンタン酸イソプロピル、２−ブロモ−５−（４−エトキシフェニル）ペンタン酸イソプロピル、２−ブロモ−５−（４−ｔｅｒｔ−ブトキシフェニル）ペンタン酸イソプロピル、２−ブロモ−５−（２，４−ジメチルフェニル）ペンタン酸イソプロピル、２−ブロモ−５−（２，４−ジメトキシフェニル）ペンタン酸イソプロピル、２−ブロモ−５−（２−クロロフェニル）ペンタン酸イソプロピル、２−ブロモ−５−（４−フルオロフェニル）ペンタン酸イソプロピル、２−ブロモ−５−（４−クロロフェニル）ペンタン酸イソプロピル、２−ブロモ−５−（４−ブロモフェニル）ペンタン酸イソプロピル、２−ブロモ−５−（３−ニトロフェニル）ペンタン酸イソプロピル、２−ブロモ−５−（４−フェノキシフェニル）ペンタン酸イソプロピル、２−ブロモ−５−（４−ジメチルアミノフェニル）ペンタン酸イソプロピル、２−ブロモ−５−（４−メトキシカルボニルフェニル）ペンタン酸イソプロピル、
【００１７】
２−ブロモ−５−フェニルペンタン酸ｎ−ブチル、２−ブロモ−５−（２−メチルフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、２−ブロモ−５−（３−メチルフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、２−ブロモ−５−（４−メチルフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、２−ブロモ−５−（４−エチルフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、２−ブロモ−５−（２−メトキシフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、２−ブロモ−５−（３−メトキシフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、２−ブロモ−５−（４−メトキシフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、２−ブロモ−５−（４−エトキシフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、２−ブロモ−５−（４−ｔｅｒｔ−ブトキシフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、２−ブロモ−５−（２，４−ジメチルフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、２−ブロモ−５−（２，４−ジメトキシフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、２−ブロモ−５−（２−クロロフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、２−ブロモ−５−（４−フルオロフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、２−ブロモ−５−（４−クロロフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、２−ブロモ−５−（４−ブロモフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、２−ブロモ−５−（３−ニトロフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、２−ブロモ−５−（４−フェノキシフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、２−ブロモ−５−（４−ジメチルアミノフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、２−ブロモ−５−（４−メトキシカルボニルフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、
【００１８】
２−ヨード−５−フェニルペンタン酸メチル、２−ヨード−５−（２−メチルフェニル）ペンタン酸メチル、２−ヨード−５−（３−メチルフェニル）ペンタン酸メチル、２−ヨード−５−（４−メチルフェニル）ペンタン酸メチル、２−ヨード−５−（４−エチルフェニル）ペンタン酸メチル、２−ヨード−５−（２−メトキシフェニル）ペンタン酸メチル、２−ヨード−５−（３−メトキシフェニル）ペンタン酸メチル、２−ヨード−５−（４−メトキシフェニル）ペンタン酸メチル、２−ヨード−５−（４−エトキシフェニル）ペンタン酸メチル、２−ヨード−５−（４−ｔｅｒｔ−ブトキシフェニル）ペンタン酸メチル、２−ヨード−５−（２，４−ジメチルフェニル）ペンタン酸メチル、２−ヨード−５−（２，４−ジメトキシフェニル）ペンタン酸メチル、２−ヨード−５−（２−クロロフェニル）ペンタン酸メチル、２−ヨード−５−（４−フルオロフェニル）ペンタン酸メチル、２−ヨード−５−（４−クロロフェニル）ペンタン酸メチル、２−ヨード−５−（４−ブロモフェニル）ペンタン酸メチル、２−ヨード−５−（３−ニトロフェニル）ペンタン酸メチル、２−ヨード−５−（４−フェノキシフェニル）ペンタン酸メチル、２−ヨード−５−（４−ジメチルアミノフェニル）ペンタン酸メチル、２−ヨード−５−（４−メトキシカルボニルフェニル）ペンタン酸メチル等が挙げられる。
【００１９】
本発明は、２−ハロカルボン酸エステル化合物（１）の一方の光学活性体を優先的に加水分解する能力を有する酵素、または該酵素の産生能を有する微生物の培養物もしくはその処理物を、２−ハロカルボン酸エステル化合物（１）に接触せしめ、式（２）
（式中、Ｒ２、Ｒ３およびＸは上記と同一の意味を表わし、＊は不斉炭素原子であることを表わす。）
で示される光学活性２−ハロカルボン酸化合物（以下、光学活性２−ハロカルボン酸化合物（２）と略記する。）および式（３）
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｘおよび＊は上記と同一の意味を表わす。）
で示される光学活性２−ハロカルボン酸エステル化合物（以下、光学活性２−ハロカルボン酸エステル化合物（３）と略記する。）を製造するものである。
【００２０】
まず、２−ハロカルボン酸エステル化合物（１）の一方の光学活性体を優先的に加水分解する能力を有する酵素（以下、本酵素と称することもある。）について説明する。かかる本酵素としては、例えばアルスロバクター（Arthrobacter）属に属する微生物、アスペルギルス（Aspergillus）属に属する微生物、バークホルデリア（Burkholderia）属に属する微生物、クロモバクテリウム（Chromobacterium）属に属する微生物、フミコーラ（Humicola）属に属する微生物、ペニシリウム（Penicillium）属に属する微生物、シュードモナス（Pseudomonas）属に属する微生物、リゾプス（Rhizopus）属に属する微生物等を起源とする加水分解酵素が挙げられ、アルスロバクター（Arthrobacter）属に属する微生物、アスペルギルス（Aspergillus）属に属する微生物、クロモバクテリウム（Chromobacterium）属に属する微生物またはフミコーラ（Humicola）属に属する微生物を起源とする酵素が好ましい。
【００２１】
さらに具体的には、アルスロバクター・ラモサス（Arthrobacter ramosus）、アスペルギルス・フラバス（Aspergillus flavus）、バークホルデリア・セパシア（Burkholderia cepacia）、バークホルデリア・エスピー（Burkholderia sp.）、クロモバクテリウム・エスピー（Chromobacterium sp.）、フミコーラ・エスピー（Humicola sp.）、ペニシリウム・ロケフォルティ（Penicillium roqueforti）、シュードモナス・フルオレッセンス（Pseudomonas fluorescens）、シュードモナス・エスピー（Pseudomonas sp.）、シュードモナス・セパシア（Pseudomonas cepacia）、リゾプス・ニヴェウス（Rhizopus niveus）等の微生物を起源とする酵素が挙げられ、アルスロバクター・ラモサス（Arthrobacter ramosus）、アスペルギルス・フラバス（Aspergillus flavus）、クロモバクテリウム・エスピー（Chromobacterium sp.）またはフミコーラ・エスピー（Humicola sp.）の微生物を起源とする酵素が好ましい。
【００２２】
また、これら微生物に突然変異剤を作用させたり、紫外線照射処理したりすることにより誘導された突然変異体由来の酵素であって、２−ハロカルボン酸エステル化合物（１）の一方の光学活性体を優先的に加水分解する能力を有する酵素も用いることができる。また、前記微生物が有する本酵素をコードする遺伝子が導入され形質転換された組換え微生物により産生される酵素や遺伝子工学的手法により上記本酵素のアミノ酸配列中の特定のアミノ酸が１個ないしは数個、欠失、付加あるいは置換されてなる変異型酵素であって、２−ハロカルボン酸エステル化合物（１）の一方の光学活性体を優先的に加水分解する能力を有する酵素も用いることができる。
【００２３】
本酵素をコードする遺伝子が導入され形質転換された組換え微生物を作製する方法としては、例えばＪ．Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｅ．Ｆ．Ｆｒｉｔｓｃｈ，Ｔ．Ｍａｎｉａｔｉｓ著，モレキュラー クローニング 第２版（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ ２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ）、コールド スプリング ハーバー ラボラトリー（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）発行，１９８９年等に記載の通常の遺伝子工学的手法に準じた方法が挙げられる。さらに具体的には、例えば特開２００１−４６０８４号公報、特開平１０−２１０９７５号公報、特開平５−５６７８７号公報等に記載の方法に準じた方法が挙げられる。かかる方法により作製される組換え微生物によって産生される酵素としては、例えばアスペルギルス・フラバス（Aspergillus flavus）ＡＴＣＣ１１４９２株由来のエステラーゼ（特開平２００１−４６０８４号公報）、バークホルデリア・セパシア（Burkholderia cepacia）ＳＣ−２０株（ＦＥＲＭ Ｐ−１７４０６）由来のリパーゼ（特開平１０−２１０９７５号公報）、アルスロバクター（Arthrobacter）ＳＣ−６−９８−２８株（ＦＥＲＭ ＢＰ−３６５８）由来のエステラーゼ（特開平５−５６７８７号公報）等が挙げられる。
【００２４】
また、遺伝子工学的手法による変異型酵素を作製する方法としては、例えばＯｌｆｅｒｔ Ｌａｎｄｔらの方法（Ｇｅｎｅ ９６ １２５−１２８ １９９０）等が挙げられる。さらに具体的には、特開平７−２１３２８０号公報等に記載の方法に準じた方法が挙げられる。かかる方法により作製される変異型酵素としては、例えばクロモバクテリウム（Chromobacterium）ＳＣ−ＹＭ−１株由来のエステラーゼから作製される変異型エステラーゼまたはリパーゼ等が挙げられる。
【００２５】
２−ハロカルボン酸エステル化合物（１）の一方の光学活性体を優先的に加水分解する能力を有し、Ｓ体の光学活性２−ハロカルボン酸化合物（２）およびＲ体の光学活性２−ハロカルボン酸エステル化合物（３）を選択的に生成する酵素としては、例えばリパーゼＮ「アマノ」 （Rhizopus niveus由来）、リパーゼＡＫ（Pseudomonas fluorescens由来）（以上、天野エンザイム社製）、キラザイムＬ−１（Burkholderia sp.由来）、キラザイムＬ−８（Humicola sp.由来）（以上、ベーリンガー・マンハイム（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ）社製）、アルスロバクター（Arthrobacter）ＳＣ−６−９８−２８株（ＦＥＲＭ ＢＰ−３６５８）由来のエステラーゼ、バークホルデリア・セパシア（Burkholderia cepacia）ＳＣ−２０株（ＦＥＲＭ Ｐ−１７４０６）由来のリパーゼ等が挙げられる。
【００２６】
また、２−ハロカルボン酸エステル化合物（１）の一方の光学活性体を優先的に加水分解する能力を有し、Ｒ体の光学活性２−ハロカルボン酸化合物（２）およびＳ体の光学活性２−ハロカルボン酸エステル化合物（３）を選択的に生成する酵素としては、例えばリパーゼＡＨ（Pseudomonas cepacia由来）、リパーゼＲ「アマノ」（Penicilum roqueforti由来）、リパーゼＰＳ「アマノ」（Burkholderia cepacia由来）（以上、天野エンザイム社製）、キラザイムＬ−６（Pseudomonas sp.由来）（ベーリンガー・マンハイム（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ）社製）、アスペルギルス・フラバス（Aspergillus flavus）ＡＴＣＣ１１４９２株由来のエステラーゼ、クロモバクテリウム（Chromobacterium）ＳＣ−ＹＭ−１株由来のエステラーゼ等が挙げられる。
【００２７】
これら微生物は、通常用いられる培養方法により培養することができる。用いられる培地としては、通常の微生物培養に使用される炭素源、窒素源、有機塩、無機塩等を適宜含有する各種の微生物を培養するための培地が挙げられる。炭素源としては、例えばグルコース、スクロース、グリセロール、でんぷん、有機酸、廃糖蜜等が挙げられ、窒素源としては、例えば、酵母エキス、肉エキス、ペプトン、カザミノ酸、麦芽エキス、大豆粉、コーンスティプリカー（ｃｏｒｎ ｓｔｅｅｐ ｌｉｑｕｏｒ）、綿実粉、乾燥酵母、硫安、硝酸ナトリウム等が挙げられ、有機塩および無機塩としては、例えば塩化ナトリウム、塩化カリウム、炭酸ナトリウム、リン酸２水素１カリウム、リン酸１水素２カリウム、炭酸カルシウム、酢酸アンモニウム、硫酸マグネシウム、硫酸銅、硫酸亜鉛、硫酸第１鉄、塩化コバルト等が挙げられる。
【００２８】
培養方法としては、例えば固体培養、液体培養（例えば試験管培養、フラスコ培養、ジャーファーメンター培養等）等が挙げられる。培養温度および培養液のｐＨは、前記微生物が生育する範囲であれば特に限定されるものではないが、培養温度としては、約１５〜４５℃の範囲、培養液のｐＨとしては、約４〜８の範囲が好ましい。培養時間は、培養条件により適宜選択することができ、通常約１〜７日間の範囲である。
【００２９】
かくして微生物の培養物が得られ、前記のとおり、得られた培養物をそのまま用いてもよいし、該培養物を精製して酵素を得、得られた酵素を用いてもよい。培養物を精製する方法としては、通常用いられる酵素の精製方法が挙げられる。例えば超音波処理、ダイノミル処理あるいはフレンチプレス処理等により前記培養物中の菌体を破砕した後、遠心分離等により不溶物を除去し、例えば陽イオン交換カラムクロマトグラフィー、陰イオン交換カラムクロマトグラフィー、疎水カラムクロマトグラフィー、ゲル濾過カラムクロマトグラフィー等のカラムクロマトグラフィー処理する方法が挙げられる。なお、かかるカラムクロマトグラフィー処理に使用する担体としては、例えばＤＥＡＥ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ｆａｓｔｆｌｏｗ（アマシャム・ファルマシア・バイオテク社製）、Ｂｕｔｙｌ−Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ６５０Ｓ（東洋曹達工業株式会社製）等が挙げられる。
【００３０】
かかる酵素またはその培養物の処理物としては、例えば培養して得られた菌体を凍結乾燥処理したもの、例えばアセトン、エタノール等の有機溶媒で処理したもの、例えばアルカリ処理したもの、例えば物理的にもしくは酵素的に破砕処理したもの、これらのものから分離・抽出された粗酵素等が挙げられる。また、これらを、公知の方法により固定化処理したものを用いてもよい。固定化処理方法としては、例えばシリカゲル、セラミック等の無機担体や、例えばセルロース、イオン交換樹脂等の担体に吸着させる担体結合方法、例えばポリアクリルアミド法、含硫多糖ゲル法（例えばカラギーナンゲル法）、アルギン酸ゲル法、寒天ゲル法等が挙げられる。
【００３１】
続いて、２−ハロカルボン酸エステル化合物（１）の一方の光学活性体を優先的に加水分解する能力を有する酵素、または該酵素の産生能を有する微生物の培養物もしくはその処理物を、２−ハロカルボン酸エステル化合物（１）に接触せしめ、光学活性２−ハロカルボン酸化合物（２）および光学活性２−ハロカルボン酸エステル化合物（３）を製造する方法について説明する。
【００３２】
かかる本酵素は、目的とする光学活性２−ハロカルボン酸化合物（２）および光学活性２−ハロカルボン酸エステル化合物（３）の立体配置に応じて適宜選択すればよい。
【００３３】
２−ハロカルボン酸エステル化合物（１）に接触させる酵素の使用量は、例えば精製酵素、粗酵素、または市販の酵素を用いる場合には、２−ハロカルボン酸エステル化合物（１）に対して、通常０．００１〜２重量倍、好ましくは０．００２〜０．５重量倍であり、微生物培養物、菌体、またはそれらの処理物を用いる場合には、２−ハロカルボン酸エステル化合物（１）に対して、通常０．０１〜２００重量倍程度、好ましくは０．１〜５０重量倍程度である。
【００３４】
２−ハロカルボン酸エステル化合物（１）と酵素とは、通常水中で混合、接触させられる。かかる水の使用量は、２−ハロカルボン酸エステル化合物に対して、通常０．５モル倍以上であり、その上限は特に制限されず、例えば溶媒として大過剰量用いてもよい。また、緩衝剤の共存下に、２−ハロカルボン酸エステル化合物（１）と酵素とを接触させてもよく、緩衝剤としては、例えばリン酸ナトリウム、リン酸カリウム等のリン酸アルカリ金属塩、例えば酢酸ナトリウム、酢酸カリウム等の酢酸アルカリ金属塩等が挙げられる。かかる緩衝剤の使用量は、用いた緩衝剤が有効に機能する量であれば特に限定されない。
【００３５】
また、有機溶媒の共存下に、２−ハロカルボン酸エステル化合物（１）と酵素とを接触させてもよく、有機溶媒としては、例えばｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、イソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン等のエーテル系溶媒、例えばトルエン、ヘキサン、シクロヘキサン、ヘプタン、オクタン、イソオクタン等の炭化水素系溶媒、例えばメタノール、エタノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、イソブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノール等のアルコール系溶媒、ジメチルスルホキシド等のスルホキシド系溶媒、例えばアセトン等のケトン系溶媒、例えばアセトニトリル等のニトリル系溶媒、例えばＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド等のアミド系溶媒等の単独もしくは混合溶媒が挙げられる。かかる有機溶媒の使用量は、２−ハロカルボン酸エステル化合物（１）に対して、通常２００重量倍以下、好ましくは１００重量倍以下である。
【００３６】
反応温度は、高すぎると酵素の安定性が低下する傾向にあり、また低すぎると反応速度が低下する傾向にあるため、通常５〜６５℃程度、好ましくは２０〜５０℃程度である。
【００３７】
また、反応系内のｐＨは、反応が進行する範囲であれば適宜変化させることができるが、通常ｐＨ４〜１０の範囲、好ましくはｐＨ６〜８の範囲で反応が実施される。反応の進行に伴い、反応系内のｐＨが変化する場合には、例えば塩基を加え、反応系内のｐＨを適宜選択された範囲内に調整しながら反応を実施してもよい。かかる塩基としては、例えば水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等のアルカリ金属水酸化物、例えば炭酸ナトリウム、炭酸カリウム等のアルカリ金属炭酸塩、例えば炭酸カルシウム等のアルカリ土類金属炭酸塩、例えば炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム等のアルカリ金属炭酸水素塩、例えばリン酸２水素１ナトリウム、リン酸１水素２ナトリウム、リン酸２水素１カリウム、リン酸１水素２カリウム等のアルカリ金属リン酸水素塩、例えばトリエチルアミン、ピリジン等の有機塩基、アンモニア等が挙げられる。かかる塩基は、単独もしくは２種類以上を混合して用いてもよい。かかる塩基は、そのまま用いてもよいし、水溶液として用いてもよい。また、前記有機溶媒もしくは有機溶媒と水との混合溶媒に、溶解もしくは懸濁させて用いてもよい。
【００３８】
２−ハロカルボン酸エステル化合物（１）と本酵素とを接触させることにより、２−ハロカルボン酸エステル化合物（１）の一方の光学活性体を優先的に加水分解され、光学活性２−ハロカルボン酸化合物（２）および光学活性２−ハロカルボン酸エステル化合物（３）が得られる。光学活性２−ハロカルボン酸化合物（２）は、比較的水に溶けやすく、光学活性２−ハロカルボン酸エステル化合物（３）は、比較的水に溶けにくいため、反応終了後、反応液に、必要に応じて水に不溶の有機溶媒を加え、分液処理することにより、光学活性２−ハロカルボン酸化合物を含む水層と光学活性２−ハロカルボン酸エステル化合物を含む有機層とを得ることができ、生成した光学活性２−ハロカルボン酸化合物（２）と光学活性２−ハロカルボン酸エステル化合物（３）とを、容易に分離することができる。なお、反応液中に不溶分が存在する場合には、分液処理の前もしくは後にかかる不溶分を濾別することが好ましい。
【００３９】
水に不溶の有機溶媒としては、例えばｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、イソプロピルエーテル等のエーテル系溶媒、例えばトルエン、ヘキサン、シクロヘキサン、ヘプタン、オクタン、イソオクタン等の炭化水素系溶媒、例えばジクロロメタン、ジクロロエタン、クロロホルム、クロロベンゼン、ジクロロベンゼン等のハロゲン化炭化水素系溶媒、例えば酢酸エチル、酢酸ｎ−ブチル等のエステル系溶媒等の単独もしくは混合溶媒が挙げられ、その使用量は特に制限されない。
【００４０】
得られた光学活性２−ハロカルボン酸化合物を含む水層を濃縮処理することにより、光学活性２−ハロカルボン酸化合物（２）を取り出すことができる。取り出した光学活性２−ハロカルボン酸化合物（２）は、例えば再結晶、カラムクロマトグラフィー等の通常の精製手段によりさらに精製してもよい。
【００４１】
かくして得られる光学活性２−ハロカルボン酸化合物（２）としては、例えば光学活性２−ブロモ−５−フェニルペンタン酸、光学活性２−ブロモ−５−（２−メチルフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ブロモ−５−（３−メチルフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ブロモ−５−（４−メチルフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ブロモ−５−（４−エチルフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ブロモ−５−（２−メトキシフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ブロモ−５−（３−メトキシフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ブロモ−５−（４−メトキシフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ブロモ−５−（４−エトキシフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ブロモ−５−（４−ｔｅｒｔ−ブトキシフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ブロモ−５−（２，４−ジメチルフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ブロモ−５−（２，４−ジメトキシフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ブロモ−５−（２−クロロフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ブロモ−５−（４−フルオロフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ブロモ−５−（４−クロロフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ブロモ−５−（４−ブロモフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ブロモ−５−（３−ニトロフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ブロモ−５−（４−フェノキシフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ブロモ−５−（４−ジメチルアミノフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ブロモ−５−（４−メトキシカルボニルフェニル）ペンタン酸、
【００４２】
光学活性２−ヨード−５−フェニルペンタン酸、光学活性２−ヨード−５−（２−メチルフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ヨード−５−（３−メチルフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ヨード−５−（４−メチルフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ヨード−５−（４−エチルフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ヨード−５−（２−メトキシフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ヨード−５−（３−メトキシフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ヨード−５−（４−メトキシフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ヨード−５−（４−エトキシフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ヨード−５−（４−ｔｅｒｔ−ブトキシフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ヨード−５−（２，４−ジメチルフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ヨード−５−（２，４−ジメトキシフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ヨード−５−（２−クロロフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ヨード−５−（４−フルオロフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ヨード−５−（４−クロロフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ヨード−５−（４−ブロモフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ヨード−５−（３−ニトロフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ヨード−５−（４−フェノキシフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ヨード−５−（４−ジメチルアミノフェニル）ペンタン酸、光学活性２−ヨード−５−（４−メトキシカルボニルフェニル）ペンタン酸等が挙げられる。
【００４３】
また、得られた光学活性２−ハロカルボン酸エステル化合物（３）を含む有機層を濃縮処理することにより、光学活性２−ハロカルボン酸エステル化合物（３）を取り出すことができる。取り出した光学活性２−ハロカルボン酸エステル化合物（３）は、例えば再結晶、カラムクロマトグラフィー等の通常の精製手段により、さらに精製してもよい。
【００４４】
かくして得られる光学活性２−ハロカルボン酸エステル化合物（３）としては、例えば光学活性２−ブロモ−５−フェニルペンタン酸メチル、光学活性２−ブロモ−５−（２−メチルフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ブロモ−５−（３−メチルフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−メチルフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−エチルフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ブロモ−５−（２−メトキシフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ブロモ−５−（３−メトキシフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−メトキシフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−エトキシフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−ｔｅｒｔ−ブトキシフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ブロモ−５−（２，４−ジメチルフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ブロモ−５−（２，４−ジメトキシフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ブロモ−５−（２−クロロフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−フルオロフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−クロロフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−ブロモフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ブロモ−５−（３−ニトロフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−フェノキシフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−ジメチルアミノフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−メトキシカルボニルフェニル）ペンタン酸メチル、
【００４５】
光学活性２−ブロモ−５−フェニルペンタン酸エチル、光学活性２−ブロモ−５−（２−メチルフェニル）ペンタン酸エチル、光学活性２−ブロモ−５−（３−メチルフェニル）ペンタン酸エチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−メチルフェニル）ペンタン酸エチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−エチルフェニル）ペンタン酸エチル、光学活性２−ブロモ−５−（２−メトキシフェニル）ペンタン酸エチル、光学活性２−ブロモ−５−（３−メトキシフェニル）ペンタン酸エチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−メトキシフェニル）ペンタン酸エチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−エトキシフェニル）ペンタン酸エチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−ｔｅｒｔ−ブトキシフェニル）ペンタン酸エチル、光学活性２−ブロモ−５−（２，４−ジメチルフェニル）ペンタン酸エチル、光学活性２−ブロモ−５−（２，４−ジメトキシフェニル）ペンタン酸エチル、光学活性２−ブロモ−５−（２−クロロフェニル）ペンタン酸エチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−フルオロフェニル）ペンタン酸エチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−クロロフェニル）ペンタン酸エチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−ブロモフェニル）ペンタン酸エチル、光学活性２−ブロモ−５−（３−ニトロフェニル）ペンタン酸エチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−フェノキシフェニル）ペンタン酸エチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−ジメチルアミノフェニル）ペンタン酸エチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−メトキシカルボニルフェニル）ペンタン酸エチル、
【００４６】
光学活性２−ブロモ−５−フェニルペンタン酸ｎ−プロピル、光学活性２−ブロモ−５−（２−メチルフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、光学活性２−ブロモ−５−（３−メチルフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、光学活性２−ブロモ−５−（４−メチルフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、光学活性２−ブロモ−５−（４−エチルフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、光学活性２−ブロモ−５−（２−メトキシフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、光学活性２−ブロモ−５−（３−メトキシフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、光学活性２−ブロモ−５−（４−メトキシフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、光学活性２−ブロモ−５−（４−エトキシフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、光学活性２−ブロモ−５−（４−ｔｅｒｔ−ブトキシフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、光学活性２−ブロモ−５−（２，４−ジメチルフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、光学活性２−ブロモ−５−（２，４−ジメトキシフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、光学活性２−ブロモ−５−（２−クロロフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、光学活性２−ブロモ−５−（４−フルオロフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、光学活性２−ブロモ−５−（４−クロロフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、光学活性２−ブロモ−５−（４−ブロモフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、光学活性２−ブロモ−５−（３−ニトロフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、光学活性２−ブロモ−５−（４−フェノキシフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、光学活性２−ブロモ−５−（４−ジメチルアミノフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、光学活性２−ブロモ−５−（４−メトキシカルボニルフェニル）ペンタン酸ｎ−プロピル、
【００４７】
光学活性２−ブロモ−５−フェニルペンタン酸イソプロピル、光学活性２−ブロモ−５−（２−メチルフェニル）ペンタン酸イソプロピル、光学活性２−ブロモ−５−（３−メチルフェニル）ペンタン酸イソプロピル、光学活性２−ブロモ−５−（４−メチルフェニル）ペンタン酸イソプロピル、光学活性２−ブロモ−５−（４−エチルフェニル）ペンタン酸イソプロピル、光学活性２−ブロモ−５−（２−メトキシフェニル）ペンタン酸イソプロピル、光学活性２−ブロモ−５−（３−メトキシフェニル）ペンタン酸イソプロピル、光学活性２−ブロモ−５−（４−メトキシフェニル）ペンタン酸イソプロピル、光学活性２−ブロモ−５−（４−エトキシフェニル）ペンタン酸イソプロピル、光学活性２−ブロモ−５−（４−ｔｅｒｔ−ブトキシフェニル）ペンタン酸イソプロピル、光学活性２−ブロモ−５−（２，４−ジメチルフェニル）ペンタン酸イソプロピル、光学活性２−ブロモ−５−（２，４−ジメトキシフェニル）ペンタン酸イソプロピル、光学活性２−ブロモ−５−（２−クロロフェニル）ペンタン酸イソプロピル、光学活性２−ブロモ−５−（４−フルオロフェニル）ペンタン酸イソプロピル、光学活性２−ブロモ−５−（４−クロロフェニル）ペンタン酸イソプロピル、光学活性２−ブロモ−５−（４−ブロモフェニル）ペンタン酸イソプロピル、光学活性２−ブロモ−５−（３−ニトロフェニル）ペンタン酸イソプロピル、光学活性２−ブロモ−５−（４−フェノキシフェニル）ペンタン酸イソプロピル、光学活性２−ブロモ−５−（４−ジメチルアミノフェニル）ペンタン酸イソプロピル、光学活性２−ブロモ−５−（４−メトキシカルボニルフェニル）ペンタン酸イソプロピル、
【００４８】
光学活性２−ブロモ−５−フェニルペンタン酸ｎ−ブチル、光学活性２−ブロモ−５−（２−メチルフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、光学活性２−ブロモ−５−（３−メチルフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−メチルフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−エチルフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、光学活性２−ブロモ−５−（２−メトキシフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、光学活性２−ブロモ−５−（３−メトキシフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−メトキシフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−エトキシフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−ｔｅｒｔ−ブトキシフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、光学活性２−ブロモ−５−（２，４−ジメチルフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、光学活性２−ブロモ−５−（２，４−ジメトキシフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、光学活性２−ブロモ−５−（２−クロロフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−フルオロフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−クロロフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−ブロモフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、光学活性２−ブロモ−５−（３−ニトロフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−フェノキシフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−ジメチルアミノフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、光学活性２−ブロモ−５−（４−メトキシカルボニルフェニル）ペンタン酸ｎ−ブチル、
【００４９】
光学活性２−ヨード−５−フェニルペンタン酸メチル、光学活性２−ヨード−５−（２−メチルフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ヨード−５−（３−メチルフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ヨード−５−（４−メチルフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ヨード−５−（４−エチルフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ヨード−５−（２−メトキシフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ヨード−５−（３−メトキシフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ヨード−５−（４−メトキシフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ヨード−５−（４−エトキシフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ヨード−５−（４−ｔｅｒｔ−ブトキシフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ヨード−５−（２，４−ジメチルフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ヨード−５−（２，４−ジメトキシフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ヨード−５−（２−クロロフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ヨード−５−（４−フルオロフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ヨード−５−（４−クロロフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ヨード−５−（４−ブロモフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ヨード−５−（３−ニトロフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ヨード−５−（４−フェノキシフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ヨード−５−（４−ジメチルアミノフェニル）ペンタン酸メチル、光学活性２−ヨード−５−（４−メトキシカルボニルフェニル）ペンタン酸メチル等が挙げられる。
【００５０】
なお、２−ハロカルボン酸エステル化合物（１）は、例えば式（４）
（式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は上記と同一の意味を表わす。）
で示される化合物と臭化チオニルとを反応させる方法（例えばＲ．Ｃ．Ｌａｒｏｃｋ著，Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，２ｎｄ Ｅｄ．，ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９９）等参照）、例えば塩酸、臭化水素水、硫酸水溶液等の酸の水溶液中で、式（５）
（式中、Ｒ２およびＲ３は上記と同一の意味を表わす。）
で示される化合物に、例えば亜硝酸ナトリウム等のジアゾ化剤を作用させた後、さらに例えば臭化カリウム、臭化ナトリウム、臭化リチウム水溶液等のアルカリ金属臭化物を作用させ（例えばＳｙｎｔｈｅｓｉｓ，５８３（１９９９）、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．，８７（１９７１）等参照）、得られる式（６）
（式中、Ｒ２およびＲ３は上記と同一の意味を表わす。）
で示される化合物を、通常の方法によりエステル化する方法等により製造することができる。式（５）で示される化合物は、例えばＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ａｓｙｍｍｅｔｒｙ，６，１９１９（１９９５）等に記載された方法に準じて製造することができる。
【実施例】
【００５１】
以下、実施例により、本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
【００５２】
実施例１〜１２
表１に示した酵素１０ｍｇを、１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）１ｍｌに加えた。これに、参考例１で得た２−ブロモ−５−（４−メトキシフェニル）ペンタン酸メチル３ｍｇをメタノールに溶解させた溶液１００μＬを加え、室温で、表２に記載の所定時間撹拌、反応させた。反応終了後、光学活性２−ブロモ−５−（４−メトキシフェニル）ペンタン酸および光学活性２−ブロモ−５−（４−メトキシフェニル）ペンタン酸メチルを含む反応液０.７ｍＬを採取し、不溶物を濾別した。その後、アセトニトリル１.５ｍＬで希釈し、高速液体クロマトグラフィー（転化率算出には、ＳＵＭＩＰＡＸ ＯＤＳ Ａ−２１２カラム（６ｍｍφ×１５ｃｍ，５μｍ；住化分析センター社製）を、光学純度算出には、ＣＨＩＲＡＬＣＥＬ ＡＤ−ＲＨカラム（４．６ｍｍφ×２５ｃｍ，５μｍ；ダイセル化学社製）をそれぞれ使用）にて分析し、転化率および光学純度を求めた。結果を表２に示す。
【００５３】
【表１】
【００５４】
【表２】
【００５５】
参考例１
２−ヒドロキシ−５−（４−メトキシフェニル）ペンタン酸メチル１ｇおよびヘキサメチルリン酸トリアミド１０ｍＬとを混合した。室温で、これに、臭化チオニル１．５ｍＬを加え、４０時間攪拌、反応させた。反応終了後、反応液を水１００ｍＬ中に注加し、トルエンで３回抽出処理した。得られた有機層を、１Ｎ塩酸、５重量％炭酸水素ナトリウム水溶液、さらに水で順次洗浄処理した。洗浄後の有機層を、減圧条件下で濃縮処理した。得られた濃縮残渣をシリカゲルクロマトグラフィにて精製処理し、２−ブロモ−５−（４−メトキシフェニル）ペンタン酸メチル１．２ｇを得た。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（１）
（式中、Ｒ１は低級アルキル基を表わし、Ｒ２およびＲ３はそれぞれ同一または相異なって、水素原子、置換されていてもよいアルキル基、置換されていてもよいアルコキシ基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアリールオキシ基、ニトロ基、二置換アミノ基、アルコキシカルボニル基またはハロゲン原子を表わす。ここで、Ｒ２およびＲ３が隣接する炭素原子に結合しているときは、Ｒ２およびＲ３が結合して、その結合炭素原子とともに環を形成してもよい。Ｘは臭素原子またはヨウ素原子を表わす。）
で示される２−ハロカルボン酸エステル化合物の一方の光学活性体を優先的に加水分解する能力を有する酵素、または該酵素の産生能を有する微生物の培養物もしくはその処理物を、前記式（１）で示される２−ハロカルボン酸エステル化合物に接触せしめることを特徴とする式（２）
（式中、Ｒ２、Ｒ３およびＸは上記と同一の意味を表わし、＊は不斉炭素原子であることを表わす。）
で示される光学活性２−ハロカルボン酸化合物および式（３）
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｘおよび＊は上記と同一の意味を表わす。）
で示される光学活性２−ハロカルボン酸エステル化合物の製造方法。
【請求項２】
酵素が、アルスロバクター(Arthrobacter)属、アスペルギルス(Aspergillus)属、バークホルデリア(Burkholderia)属、クロモバクテリウム(Chromobacterium)属、フミコーラ(Humicola)属、またはシュードモナス(Pseudomonas)属の微生物を起源とする酵素である請求項１に記載の光学活性２−ハロカルボン酸化合物および光学活性２−ハロカルボン酸エステル化合物の製造方法。
【請求項３】
酵素が、アクロモバクター・ラモサス（Achromobacter ramosus）、アスペルギルス・フラヴァス（Aspergillus flavus）、バークホルデリア・セパシア（Burkholderia cepacia）、バークホルデリア・エスピー（Burkholderia sp.）、クロモバクテリウム・エスピー（Chromobacterium sp.）、フミコーラ・エスピー（Humicola sp.）、シュードモナス・エスピー（Pseudomonas sp.）またはシュードモナス・セパシア（Pseudomonas cepacia）の微生物を起源とする酵素である請求項１に記載の光学活性２−ハロカルボン酸化合物および光学活性２−ハロカルボン酸エステル化合物の製造方法。
【請求項１】
式（１）
（式中、Ｒ１は低級アルキル基を表わし、Ｒ２およびＲ３はそれぞれ同一または相異なって、水素原子、置換されていてもよいアルキル基、置換されていてもよいアルコキシ基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアリールオキシ基、ニトロ基、二置換アミノ基、アルコキシカルボニル基またはハロゲン原子を表わす。ここで、Ｒ２およびＲ３が隣接する炭素原子に結合しているときは、Ｒ２およびＲ３が結合して、その結合炭素原子とともに環を形成してもよい。Ｘは臭素原子またはヨウ素原子を表わす。）
で示される２−ハロカルボン酸エステル化合物の一方の光学活性体を優先的に加水分解する能力を有する酵素、または該酵素の産生能を有する微生物の培養物もしくはその処理物を、前記式（１）で示される２−ハロカルボン酸エステル化合物に接触せしめることを特徴とする式（２）
（式中、Ｒ２、Ｒ３およびＸは上記と同一の意味を表わし、＊は不斉炭素原子であることを表わす。）
で示される光学活性２−ハロカルボン酸化合物および式（３）
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｘおよび＊は上記と同一の意味を表わす。）
で示される光学活性２−ハロカルボン酸エステル化合物の製造方法。
【請求項２】
酵素が、アルスロバクター(Arthrobacter)属、アスペルギルス(Aspergillus)属、バークホルデリア(Burkholderia)属、クロモバクテリウム(Chromobacterium)属、フミコーラ(Humicola)属、またはシュードモナス(Pseudomonas)属の微生物を起源とする酵素である請求項１に記載の光学活性２−ハロカルボン酸化合物および光学活性２−ハロカルボン酸エステル化合物の製造方法。
【請求項３】
酵素が、アクロモバクター・ラモサス（Achromobacter ramosus）、アスペルギルス・フラヴァス（Aspergillus flavus）、バークホルデリア・セパシア（Burkholderia cepacia）、バークホルデリア・エスピー（Burkholderia sp.）、クロモバクテリウム・エスピー（Chromobacterium sp.）、フミコーラ・エスピー（Humicola sp.）、シュードモナス・エスピー（Pseudomonas sp.）またはシュードモナス・セパシア（Pseudomonas cepacia）の微生物を起源とする酵素である請求項１に記載の光学活性２−ハロカルボン酸化合物および光学活性２−ハロカルボン酸エステル化合物の製造方法。
【公開番号】特開２００６−２１７８０５（Ｐ２００６−２１７８０５Ａ）
【公開日】平成１８年８月２４日（２００６．８．２４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００５−３１３６０（Ｐ２００５−３１３６０）
【出願日】平成１７年２月８日（２００５．２．８）
【出願人】（０００００２０９３）住友化学株式会社 (8,981)
【出願人】（０００００２９１２）大日本住友製薬株式会社 (332)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１８年８月２４日（２００６．８．２４）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年２月８日（２００５．２．８）
【出願人】（０００００２０９３）住友化学株式会社 (8,981)
【出願人】（０００００２９１２）大日本住友製薬株式会社 (332)
【Ｆターム（参考）】
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