【課題】所望の活性を有する遺伝子生成物をコードする核酸の濃度を増大させる方法の提供。
【解決手段】核酸分子濃度を増大させる方法であって、以下のステップ、すなわち、(a)核酸分子と、核酸を増幅するのに必要な成分を含んでなる水溶液とを含む水性の複数のマイクロカプセルを、油中水型エマルジョンから形成すること、及び(b)該核酸分子の増幅された複製物を形成するために、マイクロカプセル中で核酸分子を増幅させることを含む方法。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
核酸分子濃度を増大させる方法であって、以下のステップ：
(a)核酸分子と、核酸を増幅するのに必要な成分を含んでなる水溶液とを含む水性の複数のマイクロカプセルを、油中水型エマルジョンから形成すること；及び
(b)該核酸分子の増幅された複製物を形成するために、マイクロカプセル中で核酸分子を増幅させること；
を含む上記方法。
【請求項２】
核酸がQβレプリカーゼ増幅、リガーゼ連鎖反応、自己維持配列複製系又は鎖置換増幅によって増幅される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
核酸がポリメラーゼ連鎖反応を用いて増幅される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
油中水型エマルジョンが少なくとも１つの乳化剤を含む、請求項１、２、または３に記載の方法。
【請求項５】
乳化剤が非イオン性界面活性剤である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
乳化剤がソルビタンモノオレエート及びポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートから選択される、請求項４または５に記載の方法。
【請求項７】
乳化剤がアニオン性界面活性剤である、請求項４に記載の方法。
【請求項８】
乳化剤がコール酸ナトリウム、グリココール酸ナトリウム、タウロコール酸ナトリウム、及びデオキシコール酸ナトリウムから選択される、請求項４または７に記載の方法。
【請求項９】
エマルジョンが熱安定性である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
核酸分子がビオチンタグを有する、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
マイクロカプセルが前記核酸分子と結合可能な固相支持体を含み、前記方法が、(c)前記マイクロカプセル中で前記増幅された複製物を該固相支持体に補足するステップを含む、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
固相支持体がビーズである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
ビーズがアビジンまたはストレプトアビジンでコートされている、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
ビーズがポリスチレン、常磁性、及び磁性のビーズから選択される、請求項１２または１３に記載の方法。
【請求項１５】
核酸がポリメラーゼ連鎖反応により増幅され、エマルジョンが熱安定性である、請求項１２〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
核酸分子がゲノムDNAまたはcDNAである、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
複数のマイクロカプセルが形成されるときに、マイクロカプセル当たり平均で１またはそれより少数の核酸分子を含む、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
核酸を含む１以上の遺伝子エレメントから遺伝子産物を産生させる方法であって、以下のステップ：
(a)1以上の遺伝子エレメント及び該遺伝子エレメントから産生された遺伝子産物に連結するために改変された固相支持体と、該固相支持体に連結するために改変されたかつ核酸を含む１以上の遺伝子エレメントとを準備し、及び、該固相支持体と該固相支持体に連結する該遺伝子エレメントとを結合させること；
(b)固相支持体と結合した１以上の遺伝子エレメントを、１以上の遺伝子エレメントから遺伝子産物を産生するのに必要な成分とともに、油中水型エマルジョンから形成される水性マイクロカプセル内に区画化すること；及び
(c)該固相支持体に再び連結される各遺伝子産物を産生させるために、マイクロカプセル内で１以上の遺伝子エレメントを発現させること；
を含み、ただし、前記発現ステップが転写、逆転写、複製又は翻訳を含み、前記遺伝子産物がＤＮＡ、ＲＮＡ又はタンパク質、あるいは非天然塩基を含む核酸又は非天然アミノ酸を含むタンパク質から選択される、上記方法。
【請求項１９】
固相支持体がビーズである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
ビーズがポリスチレン、非磁性、磁性、または常磁性のビーズを含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記１以上の遺伝子エレメントが、該マイクロカプセル内に区画化された遺伝子エレメントのライブラリーを含む、請求項１８〜２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
ビーズが、アビジンまたはストレプトアビジンといった、非常に高い親和力で遺伝子エレメントに結合する物質でコートされている、請求項１８〜２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
増幅によりマイクロカプセル中の核酸濃度を増大させることを含む、請求項１８〜２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
前記増幅が、RNAポリメラーゼによる転写、ポリメラーゼ連鎖反応、Qβレプリカーゼ増幅、リガーゼ連鎖反応、又は自己維持配列複製系及び鎖置換増幅を含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
エマルジョンが熱安定性であり、増幅が熱サイクルを含む、請求項２３または２４に記載の方法。
【請求項２６】
核酸がビーズに連結するためにビオチン化されている、請求項２２に記載の方法。
【請求項２７】
５’-ビオチン化プライマーを用いたＰＣＲ増幅により核酸をビオチン化する、請求項２６に記載の方法。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１５】

【図１６】

【図１７】

【図１８】

【図１９】

【公開番号】特開２０１１−２０６０５６（Ｐ２０１１−２０６０５６Ａ）
【公開日】平成２３年１０月２０日（２０１１．１０．２０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−１０５７６８（Ｐ２０１１−１０５７６８）
【出願日】平成２３年５月１１日（２０１１．５．１１）
【分割の表示】特願２００７−６０９８０（Ｐ２００７−６０９８０）の分割
【原出願日】平成１２年１月６日（２０００．１．６）
【出願人】（５９７１６６５７８）メディカル　リサーチ　カウンシル (60)
【Ｆターム（参考）】