免疫グロブリン配列を生成する方法
本発明は、細胞関連抗原、より具体的には膜に固定された抗原に対する免疫グロブリン配列を生成する方法に関する。本発明は、本発明の方法により取得可能な免疫グロブリン配列も提供する。具体的には本発明は、ＤＮＡワクチン接種の使用による免疫グロブリン配列の生成に関する。より具体的には本発明は、ＤＮＡワクチン接種による、好ましくは細胞関連抗原、特にＧＰＣＲ及びイオンチャネルを含む多重膜貫通ドメインを有する抗原に指向性を有する免疫グロブリン配列のラクダ科動物における生成に関する。さらには本発明は、細胞関連抗原、より具体的には例えばＧＰＣＲ及びイオンチャネル等の膜に固定された抗原、より好ましくはイオンチャネルに対する上記免疫グロブリン配列に関する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞関連抗原と結合することができる及び／又はこれに対する親和性を有する免疫グロブリン配列を生成する方法であって、
ａ）非ヒト動物に、前記細胞関連抗原、又は前記細胞関連抗原のドメイン若しくは特定部分をコードする核酸を遺伝子ワクチン接種する工程、並びに
ｂ）任意で、該細胞関連抗原を発現する天然細胞若しくはトランスフェクト細胞を含む細胞、細胞由来の膜抽出物、豊富な抗原を内包する小胞若しくは任意の他の膜誘導体、リポソーム、又は該細胞関連抗原を発現するウイルス粒子から選択されるその天然の立体構造で前記抗原を該動物に追加免疫する工程、
ｃ）前記細胞関連抗原と結合することができる及び／又はこれに対する親和性を有する免疫グロブリン配列に関して、前記非ヒト動物に由来する免疫グロブリン配列のセット、コレクション又はライブラリをスクリーニングする工程、
を含む、方法。
【請求項２】
前記細胞関連抗原が、膜貫通抗原、例えばＧＰＣＲ又はイオンチャネルを含むが、これらに限定されない多重貫通ドメインを有する膜貫通抗原から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記非ヒト動物が、脊椎動物、例えばサメ、トカゲ及び哺乳動物、より具体的にはラクダ科動物、例えばラマ及びアルパカから選択される、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
非ヒト動物がラクダ科動物又はラマである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記免疫グロブリン配列が軽鎖可変ドメイン配列又は重鎖可変ドメイン配列である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
免疫グロブリン配列が、従来の四本鎖抗体に由来する重鎖可変ドメイン配列、又は重鎖抗体に由来する重鎖可変ドメイン配列である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
免疫グロブリン配列が、ドメイン抗体（又はドメイン抗体としての使用に好適な免疫グロブリン配列）、単一ドメイン抗体（又は単一ドメイン抗体としての使用に好適な免疫グロブリン配列）、「ｄＡｂ」（又はｄＡｂとしての使用に好適な免疫グロブリン配列）、又はナノボディ（ＶＨＨ配列を含むが、これに限定されない）（又はナノボディとしての使用に好適な免疫グロブリン配列）である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
免疫グロブリン配列がナノボディである、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
ワクチン接種を、無針ジェット注射により、バリスティック法により、タトゥーのような針による注射により、局所適用により、又は任意のＤＮＡ投与方法、その後のｉｎ ｖｉｖｏエレクトロポレーションにより行う、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
ワクチン接種を、ＤＮＡの皮内投与、筋肉内投与又は皮下投与により行う、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
免疫グロブリン配列の該セット、コレクション又はライブラリを、前記非ヒト哺乳動物のこれらの免疫グロブリン配列をコードする細胞を内包する血液、リンパ節、脾臓、骨髄、又は任意の組織から得る、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記細胞関連抗原を、その天然の立体構造で標的の発現が可能である任意の細胞、例えばこれらに限定されないが、Ｃｈｏ、Ｃｏｓ７、Ｈｅｋ２９３、又はラクダ科動物由来細胞等のラマ由来細胞若しくはアルパカ由来細胞から選択される細胞で発現させる、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記細胞関連抗原が膜貫通抗原、例えばＧＰＣＲ及び／又はイオンチャネルである、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記抗原がＣＸＣＲ７、ＣＸＣＲ４及び／又はＰ２Ｘ７から選択される、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
免疫グロブリン配列の該セット、コレクション又はライブラリを、細胞又はウイルスのセット、コレクション又はサンプルで発現させ、前記細胞関連抗原と結合することができる及び／又はこれに対する親和性を有する免疫グロブリン配列を発現する細胞に関して、細胞の前記セット、コレクション又はサンプルをスクリーニングする、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記細胞関連抗原と結合することができる及び／又はこれに対する親和性を有する免疫グロブリン配列をコードする核酸配列を該細胞又は該ウイルスから精製及び／又は単離した後、前記免疫グロブリン配列を発現させる、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
免疫グロブリン配列の該セット、コレクション又はライブラリが核酸配列のセット、コレクション又はライブラリによってコードされ、前記細胞関連抗原と結合することができる及び／又はこれに対する親和性を有する免疫グロブリン配列をコードする核酸配列に関して、核酸配列の前記セット、コレクション又はライブラリをスクリーニングする、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記細胞関連抗原と結合することができる及び／又はこれに対する親和性を有する免疫グロブリン配列をコードする該核酸配列を精製及び／又は単離した後、前記免疫グロブリン配列を発現させる、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記細胞関連抗原と結合することができる及び／又はこれに対する親和性を有する該免疫グロブリン配列を精製及び／又は単離する、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法により取得可能な免疫グロブリン。
【請求項２１】
請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法により取得可能な、イオンチャネルに指向性を有する免疫グロブリン。
【請求項２２】
請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法により取得可能な、Ｐ２Ｘ７に指向性を有する免疫グロブリン。
【請求項２３】
請求項２０、２１又は２２に記載の免疫グロブリン配列を含む組成物。
【請求項１】
細胞関連抗原と結合することができる及び／又はこれに対する親和性を有する免疫グロブリン配列を生成する方法であって、
ａ）非ヒト動物に、前記細胞関連抗原、又は前記細胞関連抗原のドメイン若しくは特定部分をコードする核酸を遺伝子ワクチン接種する工程、並びに
ｂ）任意で、該細胞関連抗原を発現する天然細胞若しくはトランスフェクト細胞を含む細胞、細胞由来の膜抽出物、豊富な抗原を内包する小胞若しくは任意の他の膜誘導体、リポソーム、又は該細胞関連抗原を発現するウイルス粒子から選択されるその天然の立体構造で前記抗原を該動物に追加免疫する工程、
ｃ）前記細胞関連抗原と結合することができる及び／又はこれに対する親和性を有する免疫グロブリン配列に関して、前記非ヒト動物に由来する免疫グロブリン配列のセット、コレクション又はライブラリをスクリーニングする工程、
を含む、方法。
【請求項２】
前記細胞関連抗原が、膜貫通抗原、例えばＧＰＣＲ又はイオンチャネルを含むが、これらに限定されない多重貫通ドメインを有する膜貫通抗原から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記非ヒト動物が、脊椎動物、例えばサメ、トカゲ及び哺乳動物、より具体的にはラクダ科動物、例えばラマ及びアルパカから選択される、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
非ヒト動物がラクダ科動物又はラマである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記免疫グロブリン配列が軽鎖可変ドメイン配列又は重鎖可変ドメイン配列である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
免疫グロブリン配列が、従来の四本鎖抗体に由来する重鎖可変ドメイン配列、又は重鎖抗体に由来する重鎖可変ドメイン配列である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
免疫グロブリン配列が、ドメイン抗体（又はドメイン抗体としての使用に好適な免疫グロブリン配列）、単一ドメイン抗体（又は単一ドメイン抗体としての使用に好適な免疫グロブリン配列）、「ｄＡｂ」（又はｄＡｂとしての使用に好適な免疫グロブリン配列）、又はナノボディ（ＶＨＨ配列を含むが、これに限定されない）（又はナノボディとしての使用に好適な免疫グロブリン配列）である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
免疫グロブリン配列がナノボディである、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
ワクチン接種を、無針ジェット注射により、バリスティック法により、タトゥーのような針による注射により、局所適用により、又は任意のＤＮＡ投与方法、その後のｉｎ ｖｉｖｏエレクトロポレーションにより行う、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
ワクチン接種を、ＤＮＡの皮内投与、筋肉内投与又は皮下投与により行う、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
免疫グロブリン配列の該セット、コレクション又はライブラリを、前記非ヒト哺乳動物のこれらの免疫グロブリン配列をコードする細胞を内包する血液、リンパ節、脾臓、骨髄、又は任意の組織から得る、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記細胞関連抗原を、その天然の立体構造で標的の発現が可能である任意の細胞、例えばこれらに限定されないが、Ｃｈｏ、Ｃｏｓ７、Ｈｅｋ２９３、又はラクダ科動物由来細胞等のラマ由来細胞若しくはアルパカ由来細胞から選択される細胞で発現させる、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記細胞関連抗原が膜貫通抗原、例えばＧＰＣＲ及び／又はイオンチャネルである、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記抗原がＣＸＣＲ７、ＣＸＣＲ４及び／又はＰ２Ｘ７から選択される、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
免疫グロブリン配列の該セット、コレクション又はライブラリを、細胞又はウイルスのセット、コレクション又はサンプルで発現させ、前記細胞関連抗原と結合することができる及び／又はこれに対する親和性を有する免疫グロブリン配列を発現する細胞に関して、細胞の前記セット、コレクション又はサンプルをスクリーニングする、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記細胞関連抗原と結合することができる及び／又はこれに対する親和性を有する免疫グロブリン配列をコードする核酸配列を該細胞又は該ウイルスから精製及び／又は単離した後、前記免疫グロブリン配列を発現させる、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
免疫グロブリン配列の該セット、コレクション又はライブラリが核酸配列のセット、コレクション又はライブラリによってコードされ、前記細胞関連抗原と結合することができる及び／又はこれに対する親和性を有する免疫グロブリン配列をコードする核酸配列に関して、核酸配列の前記セット、コレクション又はライブラリをスクリーニングする、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記細胞関連抗原と結合することができる及び／又はこれに対する親和性を有する免疫グロブリン配列をコードする該核酸配列を精製及び／又は単離した後、前記免疫グロブリン配列を発現させる、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記細胞関連抗原と結合することができる及び／又はこれに対する親和性を有する該免疫グロブリン配列を精製及び／又は単離する、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法により取得可能な免疫グロブリン。
【請求項２１】
請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法により取得可能な、イオンチャネルに指向性を有する免疫グロブリン。
【請求項２２】
請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法により取得可能な、Ｐ２Ｘ７に指向性を有する免疫グロブリン。
【請求項２３】
請求項２０、２１又は２２に記載の免疫グロブリン配列を含む組成物。
【公表番号】特表２０１２−５１２６４６（Ｐ２０１２−５１２６４６Ａ）
【公表日】平成２４年６月７日（２０１２．６．７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５４１５０３（Ｐ２０１１−５４１５０３）
【出願日】平成２１年１２月２１日（２００９．１２．２１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００９／０６７６８７
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０７０１４５
【国際公開日】平成２２年６月２４日（２０１０．６．２４）
【出願人】（５０５１６６２２５）アブリンクス エン．ヴェー． (28)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２４年６月７日（２０１２．６．７）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年１２月２１日（２００９．１２．２１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００９／０６７６８７
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０７０１４５
【国際公開日】平成２２年６月２４日（２０１０．６．２４）
【出願人】（５０５１６６２２５）アブリンクス エン．ヴェー． (28)
【Ｆターム（参考）】
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