【課題】ＣｐＧモチーフを含む免疫刺激性の核酸、および、それらの免疫刺激における使用方法の提供。
【解決手段】次式：５’−（Ｚ１）ＫＸ１Ｙ１Ｒ１Ｘ２Ｙ２Ｒ２Ｘ３Ｙ３Ｒ３（Ｚ２）Ｌ（Ｇ）Ｎ（Ｚ３）Ｍ−３’[式中、Ｘ１は、あらゆるヌクレオチド（ただしｄＧを除く）であり、Ｘ２およびＸ３は、あらゆるヌクレオチドであり、Ｙ１、Ｙ２およびＹ３は、ｄＣ、５−メチル−ｄＣ、５−ヒドロキシ−ｄＣ、または、５−フルオロ−ｄＣであり、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、ｄＧ、ｄＩ、６−チオ−ｄＧ、または、７−デアザ−ｄＧであり、Ｚ１、Ｚ２およびＺ３は、あらゆるヌクレオチドであり、ここで、Ｋ、ＬおよびＭは、それぞれ独立して０〜１０を示し、Ｎは、４〜１０であＲ]で示される免疫刺激性オリゴヌクレオチド。

【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、免疫応答の誘導に関し、具体的には免疫刺激性オリゴヌクレオチド、および、それらの免疫応答を誘導することにおける使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
序論
細菌のＤＮＡは、Ｂ細胞およびナチュラルキラー細胞を活性化するための免疫刺激性の作用を有するが、脊椎動物のＤＮＡはそれらがない（Ｔｏｋｕｎａｇａ，Ｔ．等，１９８８．Ｊｐｎ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．７９：６８２〜６８６；Ｔｏｋｕｎａｇａ，Ｔ．等，１９８４，ＪＮＣＩ ７２：９５５〜９６２；Ｍｅｓｓｉｎａ，Ｊ．Ｐ．等，１９９１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：１７５９〜１７６４；および、Ｋｒｉｅｇ，１９９８，Ｉｎ：Ａｐｐｌｉｅｄ Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｃ．Ａ．ＳｔｅｉｎおよびＡ．Ｍ．Ｋｒｉｅｇ，（編集），ジョン・ワイリー・アンド・サンズ社（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．），ニューヨーク，ニューヨーク州，４３１〜４４８頁に総論されている）。現在、これらの細菌のＤＮＡの免疫刺激性の作用は、細菌のＤＮＡに共通の特定の塩基の構成（ＣｐＧモチーフ）中の非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドが存在する結果であると理解されているが、脊椎動物のＤＮＡにおいては、これらはメチル化されており、過小評価されている（Ｋｒｉｅｇ等，１９９５ Ｎａｔｕｒｅ ３７４：５４６〜５４９；Ｋｒｉｅｇ，１９９９ Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ ９３３２１：１〜１０）。細菌のＤＮＡの免疫刺激性の作用は、これらのＣｐＧモチーフを含む合成オリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）を用いて模擬することができる。このようなＣｐＧのＯＤＮは、ヒトおよびマウスの白血球に対して高い刺激作用を有し、Ｂ細胞増殖；サイトカイン、および、免疫グロブリン分泌；ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の溶解作用、および、ＩＦＮ−γ分泌；および、Ｔｈ１様Ｔ細胞応答の発達を促進することにおいて重要な、共刺激分子を発現してサイトカイン、特にＴｈ１様サイトカインを分泌させるための樹状細胞（ＤＣ）およびその他の抗原提示細胞の活性化を誘導する。このような天然型のホスホジエステル主鎖のＣｐＧのＯＤＮの免疫刺激性の作用は、ＣｐＧモチーフがメチル化されてＧｐＣに変化したり、または、その他の方法で除去または改変されると劇的に減少するという点で、このような作用は高度にＣｐＧ特異的である（Ｋｒｉｅｇ等，１９９５ Ｎａｔｕｒｅ ３７４：５４６〜５４９；Ｈａｒｔｍａｎｎ等，１９９９ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ＵＳＡ ９６：９３０５〜１０）。ＣｐＧの刺激から生じる強力だがバランスの取れた細胞性および体液性免疫応答は、侵入する病原体や癌細胞に対する体自身の天然の防御系を反映している。従って、ＣｐＧを含むオリゴヌクレオチドは、この先天性免疫の防御機構に依存しており、それらに特有の天然の免疫療法に関する経路を利用する可能性がある。従ってこれらは、癌、感染症、アレルギー、喘息およびその他の障害を治療し、癌化学療法後の日和見感染に対する防御を促進するのに用いることができる。
【０００３】
近年、ＣｐＧオリゴヌクレオチドのいくつかの様々なクラスが説明されている。１つのクラスは、Ｂ細胞の活性化に関して有力だが、ＩＦＮ−γの誘導およびＮＫ細胞の活性化においては比較的弱い；このクラスは、Ｂクラスと名付けられている。ＢクラスのＣｐＧオリゴヌクレオチドは、典型的には、完全に安定化されており、所定の好ましい塩基の構成内に非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドを含む。例えば、米国特許第６，１９４，３８８号；６，２０７，６４６号；６，２１４，８０６号；６，２１８，３７１号；６，２３９，１１６号；および、６，３３９，０６８号を参照。ＣｐＧオリゴヌクレオチドのその他のクラスは、Ｂ細胞およびＮＫ細胞を活性化し、ＩＦＮ−γを誘導する；このクラスは、Ｃクラスと名付けられている。最初に特徴付けられたＣクラスのＣｐＧオリゴヌクレオチドは、典型的には、完全に安定化されており、Ｂクラスタイプの配列、および、ＧＣリッチなパリンドローム、または、パリンドロームに近い形態などを含む。このクラスは、２００２年８月１９日付けで出願された米国特許出願第１０／２２４，５２３号、および、関連のＰＣＴ特許出願ＰＣＴ／ＵＳ０２／２６４６８（国際公報番号ＷＯ０３／０１５７１１として公開された）で説明されている。第三のクラスは、Ａクラスである。ＡクラスのＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、いずれも２０００年９月２７日付けで出願された米国特許第６，９４９，５２０号、および、ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ００／２６５２７（国際公報番号ＷＯ０１／２２９９０として公開された）で説明されている（その内容を参照により本発明に含める）。これらのオリゴヌクレオチドは、高レベルのインターフェロン−αを誘導する能力を特徴とし、同時にＢ細胞の活性化に最小限の作用しか与えない。
【発明の開示】
【０００４】
要約
一形態において、本発明は、被検体において、癌、感染症、喘息、アレルギー、アレルギー性鼻炎、または、自己免疫疾患を治療する医薬品を製造するための、本発明の改変されたＡクラスのオリゴヌクレオチドの使用を提供する。
【０００５】
一形態において、本発明は、癌、感染症、喘息、アレルギー、アレルギー性鼻炎、または、自己免疫疾患の治療に有用な組成物を提供する。この形態に係る組成物は、本発明のＡクラスの修飾オリゴヌクレオチド、および、癌、感染症、喘息、アレルギー、アレルギー性鼻炎、または、自己免疫疾患治療薬または物質を含む。
【０００６】
また、本発明の一形態として、免疫応答を刺激するための本発明のオリゴヌクレオチドの使用も提供される。
本発明の一形態は、以下の式で示される免疫刺激性オリゴヌクレオチドであり：
（配列番号７０）５’−（Ｚ_１）_ＫＸ_１Ｙ_１Ｒ_１Ｘ_２Ｙ_２Ｒ_２Ｘ_３Ｙ_３Ｒ_３（Ｚ_２）_Ｌ（Ｇ）_Ｎ（Ｚ_３）_Ｍ−３’
式中、Ｘ_１は、あらゆるヌクレオチドであり（ただしデオキシグアノシン（ｄＧ）を除く）、Ｘ_２およびＸ_３は、あらゆるヌクレオチドであり、Ｙ_１、Ｙ_２およびＹ_３は、デオキシシチジン（ｄＣ）、５−メチル−ｄＣ、５−ヒドロキシ−ｄＣ、または、５−フルオロ−ｄＣであり、Ｒ_１、Ｒ_２およびＲ_３は、ｄＧ、デオキシイノシン（ｄＩ）、６−チオ−ｄＧ、または、７−デアザ−ｄＧであり、Ｚ_１、Ｚ_２およびＺ_３は、あらゆるヌクレオチドであり、ここで、Ｋ、ＬおよびＭは、それぞれ独立して０〜１０を示し、Ｎは、４〜１０であり、ここで本免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、長さが１６個未満のヌクレオチドである。一実施態様において、Ｘ_１は、Ｔ、ｄＵ、ｄＩ、または、ｄＡである。その他の実施態様において、Ｘ_２は、Ｔ、ｄＵ、ｄＡ、または、７−デアザ−ｄＡである。さらにその他の実施態様において、Ｘ_３は、Ｔ、ｄＵ、ｄＡ、または、７−デアザ−ｄＡである。さらにその他の実施態様において、Ｚ_１は、ｄＧ、ｄＴ、ｄＵ、ｄＩ、または、７−デアザ−ｄＧである。一実施態様において、Ｚ_２は、Ｔである。その他の実施態様において、Ｚ_３は、Ｔである。一実施態様において、本免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、６個未満のホスホロチオエート結合を含む。その他の実施態様において、本免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、４個のホスホロチオエート結合を含む。一実施態様において、Ｘ_２およびＸ_３は、相補的ヌクレオチドである。その他の実施態様において、ＷＯＷＯＸ_３Ｙ_３Ｒ_３は、パリンドロームを形成するか、または、パリンドロームに近い形態を形成する。一実施態様において、Ｋは、０〜１０個のヌクレオチドを示す。その他の実施態様において、Ｋは、０〜２個のヌクレオチドを示す。さらにその他の実施態様において、Ｌは、０〜１０個のヌクレオチドを示す。さらにその他の実施態様において、Ｌは、０〜２個のヌクレオチドを示す。一実施態様において、Ｍは、０〜１０個のヌクレオチドを示す。その他の実施態様において、Ｍは、０〜２個のヌクレオチドを示す。一実施態様において、Ｎは、２〜４０個のヌクレオチドを示す。その他の実施態様において、Ｎは、５個のヌクレオチドを示す。さらにその他の実施態様において、Ｎは、４個のヌクレオチドを示す。
【０００７】
一実施態様において、本免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、長さが少なくとも６個、および、１１個未満のヌクレオチドのパリンドロームを有するドメインを含み、加えてホスホジエステルまたはホスホジエステル様インターヌクレオチド結合を有する少なくとも３個のＹＲジヌクレオチドを含み、ここでＹは、ｄＣ、５−メチル−ｄＣ、５−ヒドロキシ−ｄＣ、または、５−フルオロ−ｄＣであり、Ｒは、ポリＧドメインに直接的または間接的に連結したｄＧ、ｄＩ、６−チオ−ｄＧ、または、７−デアザ−ｄＧであり、ここで該ポリＧドメインは、少なくとも３個、および、８個未満の連続したＧを含み、ここで該パリンドロームを有するドメインが間接的にポリＧドメインに連結している場合、この間接的な連結は、１〜１０個のヌクレオチドのヌクレオチド配列、または、非ヌクレオチドリンカーで構成され、ここで該オリゴヌクレオチドは、１８個未満のヌクレオチドの長さを有する。その他の実施態様において、本オリゴヌクレオチドは、少なくとも２個、および、６個未満の安定化されたインターヌクレオチド結合を含む。さらにその他の実施態様において、本オリゴヌクレオチドは、４個の安定化されたインターヌクレオチド結合を有する。一実施態様において、このような安定化されたインターヌクレオチド結合は、ホスホロチオエート結合である。その他の実施態様において、本オリゴヌクレオチドは、５’ＧＧを含まない。一実施態様において、パリンドロームを有するドメインヌクレオチドは、ホスホジエステルインターヌクレオチド結合を有する。その他の実施態様において、パリンドロームを有するドメインは、９個未満のヌクレオチドを有する。さらにその他の実施態様において、本オリゴヌクレオチドは、パリンドロームを有するドメインの５’に、１個またはそれより多くのヌクレオチドを含む。
【０００８】
一実施態様において、本免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、長さが少なくとも６個、および、１１個未満のヌクレオチドのパリンドロームを有するドメインを含み、加えて、ホスホジエステルまたはホスホジエステル様インターヌクレオチド結合を有する少なくとも３個のＹ’Ｒ’ジヌクレオチドを含み、ここでＹ’は、５−メチル−ｄＣ、５−ヒドロキシ−ｄＣ、または、５−フルオロ−ｄＣであり、Ｒは、ポリＧドメインに直接的または間接的に連結したｄＩ、ｄＧ、６−チオ−ｄＧ、または、７−デアザ−ｄＧであり、ここで該ポリＧドメインは、少なくとも３個、および、８個未満の連続したＧを含み、ここで該パリンドロームを有するドメインが間接的にポリＧドメインに連結している場合、この間接的な連結は、１〜１０個のヌクレオチドのヌクレオチド配列、または、非ヌクレオチドリンカーで構成される。
【０００９】
本発明のその他の形態は、以下の式：
（配列番号７１）５’−（Ｚ_１）_ＫＸ_１Ｙ_１Ｒ_１Ｘ_２Ｙ_２Ｒ_２Ｘ_３Ｙ_３Ｒ_３（Ｚ_２）_ＬＱ−３’
で示される免疫刺激性オリゴヌクレオチドであり、式中、Ｘ_１は、あらゆるヌクレオチド（ただしｄＧを除く）であり、Ｘ_２およびＸ_３は、あらゆるヌクレオチドであり、Ｙ_１、Ｙ_２およびＹ_３は、ｄＣ、５−メチル−ｄＣ、５−ヒドロキシ−ｄＣ、または、５−フルオロ−ｄＣであり、Ｒ_１、Ｒ_２およびＲ_３は、ｄＧ、ｄＩ、６−チオ−ｄＧ、または、７−デアザ−ｄＧであり、Ｚ_１およびＺ_２は、あらゆるヌクレオチドであり、Ｑは、親油性成分であり、ここでＫおよびＬは、それぞれ独立して０〜１０を示し、ここで該免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、長さが１６個未満のヌクレオチドである。
【００１０】
本発明のその他の形態において、本免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、製薬用キャリアーと共に本発明の免疫刺激性オリゴヌクレオチドのいずれかを含む組成物として有用である。一実施態様において、本免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、配列番号３、配列番号４、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、または、配列番号４３である。
【００１１】
本発明のその他の形態は、被検体において免疫応答を刺激する方法であり、本方法は、このような治療が必要な被検体に、本発明の組成物のいずれかを投与することによってなされる。一実施態様において、上記治療が必要な被検体は、癌、感染症、喘息、アレルギー、アレルギー性鼻炎、または、自己免疫疾患を有するか、または、それらを有する危険性がある被検体である。その他の実施態様において、上記被検体は、これまで従来の治療的処置に応答しなかった被検体である。さらにその他の実施態様において、本組成物は、静脈内投与される。さらにその他の実施態様において、本組成物は、皮下投与される。一実施態様において、上記被検体は、感染症を有する、または、その危険性がある被検体である。その他の実施態様において、このような感染症は、ウイルス性疾患である。さらにその他の実施態様において、このようなウイルス性疾患は、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、サイトメガロウイルス、（ＣＭＶ）、パピローマウイルス、ＨＩＶ、または、単純疱疹ウイルス（ＨＳＶ）である。さらにその他の実施態様において、このような感染症は、リーシュマニア、リステリア、または、炭疽である。その他の実施態様において、上記被検体は、抗癌治療を受けた被検体である。その他の実施態様において、このような抗癌治療は、放射線、化学療法、ワクチンによる化学療法、ワクチン（例えば、インビトロで調製された樹状細胞ワクチン、または、癌抗原ワクチン）、または、抗体に基づく治療である。その他の実施態様において、上記被検体は、抗ウイルス薬で治療される被検体である。
【００１２】
一形態において、本発明は、癌、感染症、喘息、アレルギー、アレルギー性鼻炎、または、自己免疫疾患を有する被検体の治療方法を提供する。本発明のこの形態に係る方法は、癌、感染症、喘息、アレルギー、アレルギー性鼻炎、または、自己免疫疾患を有する被検体に、被検体を治療するのに有効な量の本発明の組成物と、抗癌治療、感染症の治療、喘息の治療、アレルギーの治療、アレルギー性鼻炎の治療または自己免疫疾患の治療とを投与する工程を含む。
【００１３】
また、免疫応答を刺激するための本発明のオリゴヌクレオチドの医薬品を製造する方法も提供される。
限定のそれぞれは、本発明の様々な実施態様を含んでいてもよい。従って当然ながら、本発明のそれぞれの形態には、いずれか１つの構成要素、または、構成要素の組み合わせに関する本発明のそれぞれの限定を含めることができる。本発明は、その用途において、以下の説明に記載の、または、図面で説明されている要素の構築および配置に関する詳細に限定されない。本発明は、それ以外の実施態様でもよいし、様々な方法で実施してもよいし、または、行ってもよい。また本明細書において用いられる言い回しおよび用語は説明のためであり、制限するものとみなされるべきではない。本明細書において、「〜が挙げられる（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「〜を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、または「〜を有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「〜を含む（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、「〜に関与する（ｉｎｖｏｌｖｉｎｇ）」およびそれらの変形型の使用は、その後に列挙した事項およびそれらの等価物、加えて追加の事項を包含することを意味する。
【００１４】
詳細な説明
本発明は、一形態において免疫刺激性オリゴヌクレオチドの特定のサブクラスが、免疫刺激性の作用の媒介において極めて有効であるという発見に関与する。これらのオリゴヌクレオチドは、癌、感染症、アレルギー、喘息およびその他の障害を治療するために免疫系を刺激するための治療的および予防的な有用性を有する。
【００１５】
Ａクラスの免疫刺激性ＣｐＧオリゴヌクレオチド（例えば配列番号２のオリゴヌクレオチド）は、それらの極めて効率的なＩＦＮ−α分泌の誘導、それと同時に低いＢ細胞への刺激を特徴とする。配列番号２は、ホスホロチオエート（Ｇ）_ｎストレッチによって固定されたパリンドロームのホスホジエステルＣｐＧ配列で構成される：Ｇ^＊Ｇ^＊Ｇ−Ｇ−Ａ−Ｃ−Ｇ−Ａ−Ｃ−Ｇ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ｔ−Ｇ−Ｇ^＊Ｇ^＊Ｇ^＊Ｇ^＊Ｇ^＊Ｇ（配列番号２）。（^＊は、ホスホロチオエートであり、−は、ホスホジエステルである）。３’および５’末端がホスホロチオエートで修飾され、中心部分がホスホジエステルであるＡクラスのオリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドの両末端に少なくとも４個のＧ残基からなる伸長部分を有する。分子間に、高分子量の集合体を発生させる４分子が形成されるため、Ｇリッチなオリゴヌクレオチドの開発は困難であった。このクラスの化合物の生物物理学的な特性に関する問題としては、凝集しやすい傾向、低い溶解性、品質管理の困難さ、および、ＰＫの研究で用いられる固相抽出（ＳＰＥ）が挙げられる。
【００１６】
オリゴヌクレオチドにおける（Ｇ）_ｎストレッチにおいて、ｎが４以上の場合、分子間の４分子形成が生じ、それにより均一ではない高分子量の集合体が生成することがわかっている。（Ｇ）_ｎストレッチを有するオリゴヌクレオチドの取り込みは、凝集していないオリゴヌクレオチドよりも約２０〜４０倍高く、さらに、細胞内の局在性も異なっているようである。これらの観察が生物活性とどのように相関しているかは理解されていない。
【００１７】
配列番号２のようなＡクラスのオリゴヌクレオチドに対して類似の効力を有するが、より好都合な生物物理学的な特性を有する新規の免疫刺激性オリゴヌクレオチドを発見しようとする試みにおいて、３’にのみ（Ｇ）_ｎストレッチを有する一連のオリゴヌクレオチドが本発明に従って開発された。これらのＡクラスの修飾オリゴヌクレオチドは、強化された細胞による取り込みには関与するが、より高分子量の集合体生成に関与しない分子内の４分子を形成することができる。従って、このようなオリゴヌクレオチドは、生体に関連した環境下で改善された溶解性を示す。５’ＴＣＧモチーフを有するオリゴヌクレオチドは一般的にＴＬＲ９によって認識される；それゆえに新規のパリンドロームは、５’ＴＣＧにＴＬＲ９認識配列が含まれるように設計されている。それにより、分子間の４分子１つあたり複数のＴＬＲ９認識配列が存在させることが可能である。またこれらのオリゴヌクレオチドは、安定性が比較的低いインターヌクレオチド結合有していてもよく、このような場合、それらのＴＬＲ９活性を刺激する能力が高くなる可能性がある。
【００１８】
従って、本発明は、一形態において、本明細書で「修飾されたＡクラスの」オリゴヌクレオチドと称されるＡクラスのオリゴヌクレオチドのサブクラスは、短くしたパリンドローム配列を有し、ホスホロチオエート残基が少なく、５’Ｇ−リッチドメインを含まないという発見に関与する。表Ｉ（下記参照）に、典型的なＡクラスの修飾オリゴヌクレオチドを示す。驚くべきことに、これらのＡクラスの修飾オリゴヌクレオチド（例えば配列番号３）は、その配列が誘導される典型的なＡクラスのオリゴヌクレオチド配列番号２のように高レベルの、または、それよりも高レベルのＩＦＮ−α誘導を示した。本発明の修飾されたＡクラスの免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、以下の式Ｉで示される：
（配列番号７０）５’−（Ｚ_１）_ＫＸ_１Ｙ_１Ｒ_１Ｘ_２Ｙ_２Ｒ_２Ｘ_３Ｙ_３Ｒ_３（Ｚ_２）_Ｌ（Ｇ）_Ｎ（Ｚ_３）_Ｍ−３’
式中、Ｘ_１は、あらゆるヌクレオチドであり（ただしデオキシグアノシン（ｄＧ）を除く）、Ｘ_２およびＸ_３は、あらゆるヌクレオチドであり、Ｙ_１、Ｙ_２およびＹ_３は、デオキシシチジン、または、修飾デオキシシチジン（ｄＣ）であり、Ｒ_１、Ｒ_２およびＲ_３は、デオキシグアノシン、または、修飾デオキシグアノシンである。従って、ＹＲジヌクレオチドは、ＣＧ（ＣｐＧ）ジヌクレオチドであり得る。Ｚ_１、Ｚ_２およびＺ_３は、あらゆるヌクレオチドであり；Ｋ、ＬおよびＭは、それぞれ独立して０〜１０個のヌクレオチドを示し、これらはどのようなヌクレオチドであってもよく、Ｎは、４〜１０個のヌクレオチドである。
【００１９】
一実施態様において、Ｘ_１は、Ｔ、デオキシウラシル（ｄＵ）、デオキシイノシン（Ｉ）、または、デオキシアデニン（ｄＡ）である。その他の実施態様において、Ｘ_２は、Ｔ、ｄＵ、ｄＡ、または、７−デアザ−ｄＡである。さらにその他の実施態様において、Ｘ_３は、Ｔ、ｄＵ、ｄＡ、または、７−デアザ−ｄＡである。その他の実施態様において、Ｚ_１は、ｄＧ、ｄＴ、ｄＵ、ｄＩ、または、７−デアザ−ｄＧである。一実施態様において、Ｚ_２は、Ｔである。その他の実施態様において、Ｚ_３は、Ｔである。〆本免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、典型的には、６個またはそれより少ないホスホロチオエート結合を含む（ただしこれらに限定されない）。一実施態様において、Ｘ_２およびＸ_３は、相補的ヌクレオチドである。
【００２０】
一実施態様において、本免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、長さが少なくとも６個、および、１１個未満のヌクレオチドのパリンドロームを有するドメインを含む。「パリンドロームを有するドメイン」は、逆繰返し配列を含むドメインを意味するものとし、ここで逆繰返し配列とは、すなわちＡＢＣＤＥＥ’Ｄ’Ｃ’Ｂ’Ａ’のような配列である（式中ＡおよびＡ’、ＢおよびＢ’、ＣおよびＣ’、ＤおよびＤ’およびＥおよびＥ’は、通常のワトソン−クリック塩基対を形成することができる塩基である）。このような配列は、本明細書において「パリンドローム」と述べられる。いくつかの実施態様において、パリンドロームを有するドメインは、パリンドロームというよりむしろパリンドロームに近い形態を含む。本明細書で用いられる「パリンドロームに近い形態」は、完全なパリンドロームの配列ではない配列を意味する。インビボにおいて、パリンドロームの配列、および、パリンドロームに近い形態の配列は、二本鎖構造を形成する可能性がある。一実施態様において、配列Ｙ_１Ｒ_１Ｘ_２Ｙ_２Ｒ_２Ｘ_３Ｙ_３Ｒ_３は、パリンドロームを形成するか、または、パリンドロームに近い形態を形成する。いくつかの実施態様において、パリンドロームの配列、または、パリンドロームに近い配列は、ホスホジエステルまたはホスホジエステル様インターヌクレオチド結合を有する少なくとも３個のＹＲジヌクレオチドを含んでいてもよい。いくつかの実施態様において、パリンドローム、または、パリンドロームに近い形態を有するドメインのインターヌクレオチド結合は、ホスホジエステル結合である。このようなパリンドローム、または、パリンドロームに近い形態の配列は、本オリゴヌクレオチドの５’末端の最も先端に生じる可能性がある。あるいは本オリゴヌクレオチドは、パリンドロームを有するドメインの５’に、１個またはそれより多くのヌクレオチドを含む。
【００２１】
パリンドロームを有するドメインは、ポリＧドメインに、直接的または間接的のいずれかで連結され得る。本明細書で用いられる用語「直接的に連結される」とは、パリンドロームを有するドメインとポリＧドメインとの間に介在配列がないオリゴヌクレオチドを意味する。用語「間接的に連結される」とは、パリンドロームを有するドメインとポリＧドメインとの間がリンカーで分離されているオリゴヌクレオチドを意味する。いくつかの実施態様において、ポリＧドメインは、少なくとも３個、および、８個未満の連続したＧを含む。該パリンドロームを有するドメインが間接的にポリＧドメインに連結している場合、この間接的な連結は、１〜１０個のヌクレオチドのヌクレオチド配列、または、非ヌクレオチドリンカーで構成される。ヌクレオチドではないリンカーは、追加のスペーサー、例えばトリまたはテトラエチレングリコールリン酸成分を用いて製造することができる（Ｄｕｒａｎｄ，Ｍ．等，Ｔｒｉｐｌｅ−ｈｅｌｉｘ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｂｙ ａｎ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｏｎｅ（ｄＡ）１２ ａｎｄ ｔｗｏ（ｄＴ）１２ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｂｒｉｄｇｅｄ ｂｙ ｔｗｏ ｈｅｘａｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ ｃｈａｉｎｓ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（１９９２），３１（３８），９１９７〜２０４，米国特許第５６５８７３８号、および、米国特許第５６６８２６５号）。あるいは、ヌクレオチドではないリンカーは、エタンジオール、プロパンジオールから誘導されてもよいし、または、標準的なホスホアミダイトの化学を用いて脱塩基デオキシリボース（ｄスペーサー）単位から誘導されてもよい（Ｆｏｎｔａｎｅｌ，Ｍａｒｉｅ Ｌａｕｒｅｎｃｅ等，Ｓｔｅｒｉｃａｌ ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｂｙ Ｔ４ ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｋｉｎａｓｅ ｏｆ ｎｏｎ−ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｉｃ ｍｏｉｅｔｉｅｓ ５’−ａｔｔａｃｈｅｄ ｔｏ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ；Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（１９９４），２２（１１），２０２２〜７）。
【００２２】
Ａクラスの修飾オリゴヌクレオチドは、安定化されたインターヌクレオチド結合を含み、これは、これらは、部分的に分解に対する耐性を有すること（例えば、安定化されていること）を意味する。本オリゴヌクレオチドは、典型的には、少なくとも２個、および、６個未満の安定化されたインターヌクレオチド結合を含むが、これらに限定されない。安定化されたオリゴヌクレオチド分子は、インビボでの分解（例えば、エキソまたはエンドヌクレアーゼを介した分解）に対して比較的耐性を有するオリゴヌクレオチドを意味するものとする。核酸の安定化は、主鎖の修飾によって達成することができる。ホスホロチオエート結合を有するオリゴヌクレオチドは、最大限の活性、および、細胞内エキソおよびエンドヌクレアーゼによる分解からのオリゴヌクレオチドの保護を提供する。その他の修飾オリゴヌクレオチドとしては、ホスホジエステルで修飾された核酸、ホスホジエステルとホスホロチオエート核酸との組み合わせ、メチルホスホナート、メチルホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ｐ−エトキシ、および、それらの組み合わせが挙げられる。
【００２３】
ホスホロチオエートのような修飾された主鎖は、ホスホロアミデートまたはＨ−ホスホナートの化学のいずれかを用いた自動式の技術を利用して合成してもよい。アリールおよびアルキルホスホナートは、例えば、米国特許第４，４６９，８６３号で説明されているようにして製造することができる；および、アルキルホスホトリエステル（ここで電荷を有する酸素部分は、米国特許第号５，０２３，２４３、および、欧州特許第０９２，５７４号で説明されているようにアルキル化される）は、市販の試薬を用いた自動式の固相合成によって製造することができる。その他のＤＮＡ主鎖の修飾および置換の作成方法が説明されている（例えば、Ｕｈｌｍａｎｎ，Ｅ．およびＰｅｙｍａｎ，Ａ．，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．９０：５４４，１９９０；Ｇｏｏｄｃｈｉｌｄ，Ｊ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．１：１６５，１９９０）。
【００２４】
その他の安定化されたオリゴヌクレオチドは、以下を含む：非イオン性ＤＮＡ類似体、例えばアルキル−およびアリールホスファート（ここで電荷を有するホスホナートの酸素が、アルキルまたはアリール基で置換される）、ホスホジエステル、および、アルキルホスホトリエステル（ここで電荷を有する酸素部分が、アルキル化される）。また、いずれかの末端に、または、両方の末端にテトラエチレングリコールまたはヘキサエチレングリコールのようなジオールを含む核酸も、実質的にヌクレアーゼ分解に対する耐性を有することが示されている。
【００２５】
安定化されたインターヌクレオチド結合は、典型的には、Ｇ−リッチドメインのようなパリンドロームの外側の配列の一部で起こる。
表１に、式Ｉで示される免疫刺激性オリゴヌクレオチドのいくつかの典型例を示す：
【００２６】
【表１】

【００２７】
当業者であれば、このＡクラスの修飾オリゴヌクレオチドのファミリーに属するその他のオリゴヌクレオチドの配列を決定することができると予想される。
本発明のその他の形態において、Ａクラスの修飾オリゴヌクレオチドは、ポリＧドメインの代わりに親油性成分を有する。本明細書で用いられる「親油性成分」は、Ａクラスの修飾オリゴヌクレオチドの３’末端に共有結合で結合した親油性基である。親油性基は、一般的に、コレステリル、改変されたコレステリル、コレステロール誘導体、還元されたコレステロール、置換されたコレステロール、コレスタン、Ｃ_１６アルキル鎖、胆汁酸、コール酸、タウロコール酸、デオキシコレート、オレイルリトコール酸、オレオイルコレイン酸（ｏｌｅｏｙｌ ｃｈｏｌｅｎｉｃ ａｃｉｄ）、グリコリピド、リン脂質、スフィンゴ脂質、イソプレノイド、例えばステロイド、ビタミン、例えばビタミンＥ、飽和脂肪酸、不飽和脂肪酸、脂肪酸エステル、例えばトリグリセリド、ピレン、ポルフィリン、テキサフィリン、アダマンタン、アクリジン、ビオチン、クマリン、フルオレセイン、ローダミン、テキサスレッド、ジゴキシゲニン、ジメトキシトリチル、ｔ−ブチルジメチルシリル、ｔ−ブチルジフェニルシリル、シアニン色素（例えば、Ｃｙ３またはＣｙ５）、ヘキスト（Ｈｏｅｃｈｓｔ）３３２５８色素、ソラレン、または、イブプロフェンであり得る。具体的な実施態様において、親油性成分は、コレステリル、パルミチル、および、脂肪酸アシルから選択される。一実施態様において、親油性成分は、コレステリルである。本発明の免疫刺激性オリゴヌクレオチドにこのような親油性成分を１個またはそれより多く含むことは、それらにヌクレアーゼによる分解に対するさらに追加の安定性を付与すると考えられる。単一の本発明の免疫刺激性オリゴヌクレオチド中に２個またはそれより多くの親油性成分が存在する場合、それぞれの親油性成分は、独立してその他のあらゆるものから選択することができる。
【００２８】
一実施態様において、親油性基は、Ａクラスの修飾オリゴヌクレオチドのヌクレオチドの２’位に結合している。その代わりに、または、それに加えて、親油性基は、Ａクラスの修飾オリゴヌクレオチドのヌクレオチドの複素環式の核酸塩基に連結していてもよい。親油性成分は、あらゆる適切な直接または間接的な結合を介して、Ａクラスの修飾オリゴヌクレオチドに共有結合で連結していてもよい。一実施態様において、上記結合は直接的な結合であり、エステルまたはアミド結合である。一実施態様において、上記結合は間接的な結合であり、ここで含まれるスペーサー成分は、例えば１個またはそれより多くの脱塩基ヌクレオチド残基、オリゴエチレングリコール、例えばトリエチレングリコール（スペーサー９）、または、ヘキサエチレングリコール（スペーサー１８）、または、アルカン−ジオール、例えばブタンジオールである。
【００２９】
本免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、一般的に、４個〜１００個のヌクレオチドの範囲の長さを有する。いくつかの実施態様において、その長さは、４〜４０、１３〜１００、１３〜４０、１３〜３０、１５〜５０、または、１５〜３０個のヌクレオチドの範囲、または、その間のあらゆる整数の範囲である。本オリゴヌクレオチドは、長さが１００個のヌクレオチドよりも長くてもよい。例えばこれらは、長さが１２０、１５０または２００個のヌクレオチドより短くてもよい。いくつかの実施態様において、本免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、１５個のヌクレオチド、または、それより短いヌクレオチドである。好ましい実施態様において、本免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、長さが１６個未満のヌクレオチドである。
【００３０】
用語「核酸」および「オリゴヌクレオチド」は、同じ意味で用いられ、複数のヌクレオチド（すなわち、リン酸基、および、交換可能な有機塩基（置換されたピリミジン（例えば、シトシン（Ｃ）、チミン（Ｔ）、または、ウラシル（Ｕ））、または、置換プリン（例えば、アデニン（Ａ）、または、グアニン（Ｇ））のいずれか）に連結した糖（例えば、リボース、または、デオキシリボース）を含む分子）を意味する。本明細書で用いられる用語「核酸」および「オリゴヌクレオチド」は、オリゴリボヌクレオチド、加えて、オリゴデオキシリボヌクレオチドを意味する。用語「核酸」および「オリゴヌクレオチド」はさらに、ポリヌクレオシド（すなわち、リン酸を除いたポリヌクレオチド）、および、その他のあらゆる有機塩基を含むポリマーも含むものとする。核酸分子は、既存の核酸源（例えば、ゲノムまたはｃＤＮＡ）から得ることができるが、好ましくは合成である（例えば、核酸合成よって生産されたもの）。オリゴヌクレオチドという用語は、一般的に、比較的短い分子を意味し、すなわち長さが１００個またはそれ未満のヌクレオチドを意味する。
【００３１】
用語「核酸」および「オリゴヌクレオチド」は、例えば塩基および／または糖類に置換または修飾を含む核酸またはオリゴヌクレオチドも包含する。例えば、これには、２’位のヒドロキシル基以外、および、５’位のリン酸基またはヒドロキシ基以外で、低分子量の有機性の基に共有結合で結合した主鎖の糖類を有する核酸も含まれる。従って、修飾核酸は、２’−Ｏ−アルキル化リボース基を含んでいてもよい。加えて修飾核酸は、リボースの代わりに、アラビノース、または、２’−フルオロアラビノースのような糖類を含んでいてもよい。従って、このような核酸は、主鎖の組成がヘテロジニアスであってもよく、すなわち一つに連結したポリマー単位のあらゆる可能性のある組み合わせを含んでいてもよく、例えばペプチド核酸である（これは、核酸塩基を含むアミノ酸主鎖を有する）。以下でその他の例をより詳細に説明する。
【００３２】
本発明の免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、天然のＲＮＡおよびＤＮＡと比べて、ホスホジエステルインターヌクレオシド架橋、β−Ｄ−リボース単位、および／または、天然のヌクレオシド塩基（アデニン、グアニン、シトシン、チミン、ウラシル）などの様々な化学修飾および置換を包含していてもよい。化学修飾の例は、当業者既知であり、例えば、Ｕｈｌｍａｎｎ Ｅ等（１９９０）Ｃｈｅｍ Ｒｅｖ ９０：５４３；“Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｆｏｒ Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ａｎａｌｏｇｓ” Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ＆ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ｓ．Ａｇｒａｗａｌ，Ｅｄ，ヒューマナ・プレス（Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ），トトワ，米国，１９９３；Ｃｒｏｏｋｅ ＳＴ等（１９９６）Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｔｏｘｉｃｏｌ ３６：１０７〜１２９；および、Ｈｕｎｚｉｋｅｒ Ｊ等（１９９５）Ｍｏｄ Ｓｙｎｔｈ Ｍｅｔｈｏｄｓ ７：３３１〜４１７で説明されている。本発明に係るオリゴヌクレオチドは、１種またはそれより多くの修飾を有していてもよく、ここでそれぞれの修飾は、天然のＤＮＡまたはＲＮＡで構成される同じ配列のオリゴヌクレオチドと比べて、特定のホスホジエステルインターヌクレオシド架橋に、および／または、特定のβ−Ｄ−リボース単位、および／または、特定の天然のヌクレオシド塩基の位置に位置する。
【００３３】
例えば、本オリゴヌクレオチドは、１種またはそれより多くの修飾を含んでもよく、ここでそれぞれの修飾は、独立して、以下から選択される：
ａ）ヌクレオシドの３’および／または５’末端に位置するホスホジエステルインターヌクレオシド架橋の、修飾インターヌクレオシド架橋での置換、
ｂ）ヌクレオシドの３’および／または５’末端に位置するホスホジエステル架橋のデホスホ架橋での置換、
ｃ）糖リン酸主鎖からの糖リン酸単位のその他の単位での置換、
ｄ）β−Ｄ−リボース単位の修飾糖単位での置換、および、
ｅ）天然のヌクレオシド塩基の修飾ヌクレオシド塩基での置換。
【００３４】
より詳細なオリゴヌクレオチドの化学修飾の例は、以下の通りである。
本オリゴヌクレオチドは、上記ａまたはｂで説明されている結合のような修飾インターヌクレオチド結合を含んでいてもよい。これらの修飾された結合は、部分的に分解に対する耐性を有する可能性がある（例えば、安定化されている）。安定化されたオリゴヌクレオチド分子は、このような修飾に起因するインビボでの分解（例えば、エキソまたはエンドヌクレアーゼによる分解）に対する耐性を比較的有するオリゴヌクレオチドである。いくつかの実施態様において、ホスホロチオエート結合を有するオリゴヌクレオチドは、可能性がある最大限の活性を提供し、オリゴヌクレオチドを細胞内エキソおよびエンドヌクレアーゼによる分解から保護する可能性がある。典型的には、Ａクラスのオリゴヌクレオチドは、分子の５’および３’部分に位置するホスホロチオエート、またはその他の安定化された結合を有する。いくつかの実施態様において、３’ポリＧドメインは、完全に安定化されている。
【００３５】
ヌクレオシドの３’および／または５’末端に位置するホスホジエステルインターヌクレオシド架橋は、修飾インターヌクレオシド架橋で置き換えることができ、ここでこの修飾インターヌクレオシド架橋は、例えば、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ＮＲ^１Ｒ^２−ホスホロアミデート、ボラノホスフェート、α−ヒドロキシベンジルホスホナート、リン酸塩−（Ｃ_１〜Ｃ_２１）−Ｏ−アルキルエステル、リン酸−［（Ｃ_６〜Ｃ_１２）アリール−（Ｃ_１〜Ｃ_２１）−Ｏ−アルキル］エステル、（Ｃ_１〜Ｃ_８）アルキルホスホナート、および／または、（Ｃ_６〜Ｃ_１２）アリールホスホナート架橋、（Ｃ_７〜Ｃ_１２）−α−ヒドロキシメチル−アリール（例えば、ＷＯ９５／０１３６３で開示された）から選択され、ここで（Ｃ_６〜Ｃ_１２）アリール、（Ｃ_６〜Ｃ_２０）アリール、および、（Ｃ_６〜Ｃ_１４）アリールは、任意に、ハロゲン、アルキル、アルコキシ、ニトロ、シアノで置換されていてもよく、ここでＲ^１およびＲ^２は、互いに独立して、水素、（Ｃ_１〜Ｃ_１８）−アルキル、（Ｃ_６〜Ｃ_２０）−アリール、（Ｃ_６〜Ｃ_１４）−アリール−（Ｃ_１〜Ｃ_８）−アルキル、好ましくは水素、（Ｃ_１〜Ｃ_８）−アルキル、好ましくは（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルキル、および／または、メトキシエチルであるか、または、Ｒ^１およびＲ^２は、それらを有する窒素原子と共に、５〜６員環の複素環を形成し、この複素環はさらに、Ｏ、ＳおよびＮからなる群より選択されるさらなるヘテロ原子を含んでいてもよい。
【００３６】
ヌクレオシドの３’および／または５’末端に位置するホスホジエステル架橋の、デホスホ架橋によるでの交換（デホスホ架橋は、例えば、Ｕｈｌｍａｎｎ ＥおよびＰｅｙｍａｎ Ａ ｉｎ “Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ”，第２０巻，“Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｆｏｒ Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ａｎａｌｏｇｓ”，Ｓ．Ａｇｒａｗａｌ編集，ヒューマナ・プレス，トトワ１９９３，第１６章，３５５ｆｆ頁で説明されている）において、デホスホ架橋は、例えば、デホスホ架橋ホルムアセタール、３’−チオホルムアセタール、メチルヒドロキシルアミン、オキシム、メチレンジメチル−ヒドラゾ、ジメチレンスルホン、および／または、シリル基から選択される。
【００３７】
糖リン酸単位（すなわち、β−Ｄ−リボース、および、ホスホジエステルインターヌクレオシド架橋が一緒になって糖リン酸単位を形成する）は、糖リン酸主鎖を形成しており（すなわち糖リン酸主鎖が糖リン酸単位で構成される）、この単位は、その他の単位で置き換えることができ、ここでその他の単位は、例えば「モルホリノ誘導体」オリゴマー（例えば、Ｓｔｉｒｃｈａｋ ＥＰ等（１９８９）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ １７：６１２９〜４１で説明されているようなもの）を構築するのに適した単位であり、すなわち、例えばモルホリノ誘導体単位で置換することができ；または、ポリアミド核酸（「ＰＮＡ」；例えば、Ｎｉｅｌｓｅｎ ＰＥ等（１９９４）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ Ｃｈｅｍ ５：３〜７で説明されている通り）を構築するのに適した単位であり、すなわち、例えば、ＰＮＡ主鎖単位で、例えば２−アミノエチルグリシンで置換することができる。本オリゴヌクレオチドは、その他の炭水化物主鎖の修飾および置換を有していてもよく、例えばリン酸基を含むペプチド核酸（ＰＨＯＮＡ）、ロックト核酸（ＬＮＡ）、および、アルキルリンカーまたはアミノリンカーを含む主鎖部分を有するオリゴヌクレオチドである。アルキルリンカーは、分枝状でもよいし、または非分枝状でもよく、置換されていもよいし、または非置換でもよく、さらに、光学的に純粋であってもよいし、または、ラセミ混合物であってもよい。
【００３８】
β−リボース単位、または、β−Ｄ−２’−デオキシリボース単位は、修飾糖単位で置き換えることができ、ここでこの修飾糖単位は、例えば、β−Ｄ−リボース、α−Ｄ−２’−デオキシリボース、Ｌ−２’−デオキシリボース、２’−Ｆ−２’−デオキシリボース、２’−Ｆ−アラビノース、２’−Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−リボースから選択され、好ましくは２’−Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−リボースは、２’−Ｏ−メチルリボース、２’−Ｏ−（Ｃ_２〜Ｃ_６）アルケニル−リボース、２’−［Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル］−リボース、２’−ＮＨ_２−２’−デオキシリボース、β−Ｄ−キシロ−フラノース、α−アラビノフラノース、２，４−ジデオキシ−β−Ｄ−エリスロ−ヘキソ−ピラノース、および、炭素環（例えば、Ｆｒｏｅｈｌｅｒ Ｊ．（１９９２）Ａｍ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ １１４：８３２０で説明されている）、および／または、鎖が開環した糖の類似体（例えば、Ｖａｎｄｅｎｄｒｉｅｓｓｃｈｅ等（１９９３）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ４９：７２２３で説明されている）、および／または、ビシクロ環を有する糖の類似体（例えば、Ｔａｒｋｏｖ Ｍ等（１９９３）Ｈｅｌｖ Ｃｈｉｍ Ａｃｔａ ７６：４８１で説明されている）である。
【００３９】
いくつかの実施態様において、具体的にはホスホジエステルまたはホスホジエステル様インターヌクレオシド結合で連結したヌクレオチドの一方または両方において、上記糖が２’−Ｏ−メチルリボースである。
【００４０】
また核酸としては、置換プリンおよびピリミジンも挙げられ、例えばＣ−５プロピンピリミジン、および、７−デアザ−７−置換プリンで修飾された塩基である。Ｗａｇｎｅｒ ＲＷ等（１９９６）Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １４：８４０〜４。プリンおよびピリミジンとしては、これらに限定されないが、アデニン、シトシン、グアニン、および、チミン、および、その他の天然に存在する、および、天然に存在しない核酸塩基、置換および非置換の芳香族成分が挙げられる。
【００４１】
修飾塩基とは、Ｔ、Ｃ、Ｇ、ＡおよびＵのような一般的にＤＮＡおよびＲＮＡに見出される天然に存在する塩基とは化学的に異なっているが、基本的な化学構造はこれらの天然に存在する塩基と共通しているあらゆる塩基である。修飾ヌクレオシド塩基は、例えば、ヒポキサンチン、ウラシル、ジヒドロウラシル、プソイドウラシル、２−チオウラシル、４−チオウラシル、５−アミノウラシル、５−（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキルウラシル、５−（Ｃ_２〜Ｃ_６）−アルケニルウラシル、５−（Ｃ_２〜Ｃ_６）−アルキニルウラシル、５−（ヒドロキシメチル）ウラシル、５−クロロウラシル、５−フルオロウラシル、５−ブロモウラシル、５−ヒドロキシシトシン、５−（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキルシトシン、５−（Ｃ_２〜Ｃ_６）−アルケニルシトシン、５−（Ｃ_２〜Ｃ_６）−アルキニルシトシン、５−クロロシトシン、５−フルオロシトシン、５−ブロモシトシン、Ｎ^２−ジメチルグアニン、２，４−ジアミノ−プリン、８−アザプリン、置換された７−デアザプリン、好ましくは７−デアザ−７置換プリン、および／または、７−デアザ−８置換プリン、５−ヒドロキシメチルシトシン、Ｎ４−アルキルシトシン、例えば、Ｎ４−エチルシトシン、５−ヒドロキシデオキシシチジン、５−ヒドロキシメチルデオキシシチジン、Ｎ４−アルキルデオキシシチジン、例えば、Ｎ４−エチルデオキシシチジン、６−チオデオキシグアノシン、および、ニトロピロールのデオキシリボヌクレオシド、Ｃ５−プロピニルピリミジン、および、ジアミノプリン、例えば２，６−ジアミノプリン、イノシン、５−メチルシトシン、２−アミノプリン、２−アミノ−６−クロロプリン、ヒポキサンチン、または天然のヌクレオシド塩基のその他の改変型から選択されたものでもよい。この一覧は典型的なものを意味しており、これらに限定するとは解釈されない。
【００４２】
本明細書に記載されている式において、一連の修飾塩基を定義する。例えばＹという文字は、ヌクレオチドを意味するために用いられ、この場合このヌクレオチドは、シトシンまたは修飾シトシンである。本明細書で用いられる修飾シトシンとは、天然に存在する、または、天然に存在しないシトシンのピリミジン塩基類似体であって、オリゴヌクレオチドの免疫刺激活性を損なうことなくこの塩基を置き換えることができるものである。修飾シトシンとしては、これらに限定されないが、５−置換シトシン（例えば、５−メチル−シトシン、５−フルオロ−シトシン、５−クロロ−シトシン、５−ブロモ−シトシン、５−フルオロ−シトシン５−ヨード−シトシン、５−ヒドロキシ−シトシン、５−ヒドロキシメチル−シトシン、５−ジフルオロメチル−シトシン、および、非置換または置換された５−アルキニル−シトシン）、６−置換シトシン、Ｎ４−置換シトシン（例えば、Ｎ４−エチル−シトシン）、５−アザ−シトシン、２−メルカプト−シトシン、イソシトシン、プソイドイソシトシン、縮合環系を有するシトシン類似体（例えば、Ｎ，Ｎ’−プロピレンシトシン、または、フェノキサジン）、および、ウラシル、および、その誘導体（例えば、５−フルオロ−ウラシル、５−ブロモ−ウラシル、５−ブロモビニル−ウラシル、４−チオ−ウラシル、５−ヒドロキシ−ウラシル、５−プロピニル−ウラシル）が挙げられる。具体的な実施態様において、式ＩのＹ_１、Ｙ_２およびＹ_３に相当する修飾シトシン残基は、それぞれ独立して、シトシン、または、５−置換シトシン、例えば５−メチル−シトシン、５−ヒドロキシ−シトシン、または、５−フルオロ−シトシンである。本発明のその他の実施態様において、シトシン塩基は、万能な塩基（例えば、３−ニトロピロール、Ｐ−塩基）、芳香環系（例えば、フルオロベンゼン、または、ジフルオロベンゼン）、または、水素原子（ｄスペーサー）で置換されている。
【００４３】
Ｒという文字は、グアニン、または、修飾グアニン塩基を意味するものとして用いられる。本明細書で用いられる修飾グアニンは、オリゴヌクレオチドの免疫刺激活性を損なうことなくこの塩基を置き換えることができるグアニンの天然に存在する、または、天然に存在しないプリン塩基の類似体である。修飾グアニンとしては、これらに限定されないが、７−デアザ−グアニン、７−デアザ−７−置換グアニン（例えば、７−デアザ−７−（Ｃ_２〜Ｃ_６）アルキニルグアニン）、７−デアザ−８−置換グアニン、ヒポキサンチン、Ｎ２−置換グアニン（例えば、Ｎ２−メチル−グアニン）、５−アミノ−３−メチル−３Ｈ，６Ｈ−チアゾロ［４，５−ｄ］ピリミジン−２，７−ジオン、２，６−ジアミノプリン、２−アミノプリン、プリン、インドール、アデニン、置換アデニン（例えば、Ｎ６−メチル−アデニン、８−オキソ−アデニン）８−置換グアニン（例えば、８−ヒドロキシグアニン、および、８−ブロモグアニン）、および、６−チオグアニンが挙げられる。本発明のその他の実施態様において、このようなグアニン塩基は、万能な塩基（例えば、４−メチル−インドール、５−ニトロ−インドール、および、Ｋ−塩基）、芳香環系（例えば、ベンズイミダゾール、または、ジクロロ−ベンズイミダゾール、１−メチル−１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−カルボン酸アミド）、または、水素原子（ｄスペーサー）で置換されている。いくつかの実施態様において、式ＩのＲ_１、Ｒ_２およびＲ_３に相当する修飾グアニンは、それぞれ独立して、グアニン、イノシン（Ｉ）、６−チオ−グアニン、または、７−デアザ−グアニンである。
【００４４】
本発明のオリゴヌクレオチドは、親油性ヌクレオチド類似体を含んでいてもよい。いくつかの形態において、Ａクラスの修飾オリゴヌクレオチドは、配列Ｒ_４Ｐｙ−ＰｕＲ_５を含み、ここでＲ_４およびＲ_５はそれぞれ親油性の置換されたヌクレオチド類似体であり、Ｐｙは、ピリミジンヌクレオチドであり、Ｐｕは、プリンまたは脱塩基残基である。好ましい親油性ヌクレオチド類似体は、例えば５−クロロ−ウラシル、５−ブロモ−ウラシル、５−ヨード−ウラシル、５−エチル−ウラシル、５−プロピル−ウラシル、２，４−ジフルオロ−トルエン、および、３−ニトロピロールである。
【００４５】
本発明における使用に関して、本発明のオリゴヌクレオチドは、当業界周知の多数の手法のいずれかを用いてデノボ合成することができる。例えば、β−シアノエチルホスホアミダイト法である（Ｂｅａｕｃａｇｅ，Ｓ．Ｌ．，およびＣａｒｕｔｈｅｒｓ，Ｍ．Ｈ．，Ｔｅｔ．Ｌｅｔ．２２：１８５９，１９８１）；ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ Ｈ−ｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ ｍｅｔｈｏｄ（Ｇａｒｅｇｇ等，Ｔｅｔ．Ｌｅｔ．２７：４０５１〜４０５４，１９８６；Ｆｒｏｅｈｌｅｒ等，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．１４：５３９９〜５４０７，１９８６；Ｇａｒｅｇｇ等，Ｔｅｔ．Ｌｅｔ．２７：４０５５〜４０５８，１９８６，Ｇａｆｆｎｅｙ等，Ｔｅｔ．Ｌｅｔ．２９：２６１９〜２６２２，１９８８）。これらの化学的方法は、市販の様々な自動式の核酸シンセサイザーによって行うことができる。これらのオリゴヌクレオチドは、合成オリゴヌクレオチドと称される。単離されたオリゴヌクレオチドとは、一般的に、自然状態で通常付随する構成要素から分離されたオリゴヌクレオチドを意味する。一例として、単離されたオリゴヌクレオチドは、細胞、細胞核、ミトコンドリア、または、クロマチンから分離されたオリゴヌクレオチドであり得る。
【００４６】
本オリゴヌクレオチド内のインターヌクレオチド結合は、（ヌクレアーゼに対して）安定化されていない結合でもよいし、または、安定化された結合でもよく、好ましくはホスホジエステル（安定化されていない）、ホスホロチオエート（安定化された）、または、その他の電荷を有する主鎖である。Ｙ−Ｒにおけるインターヌクレオチド結合がホスホロチオエートである場合、この結合のキラリティーはランダムであってもよいし、または、好ましくは、Ｒｐ立体配置のホスホロチオエート結合である。
【００４７】
ホスホロチオエートのような修飾された主鎖は、ホスホロアミデートまたはＨ−ホスホナートの化学のいずれかを用いた自動式の技術を用いて合成してもよい。アリールおよびアルキルホスホナートは、例えば、米国特許第４，４６９，８６３号で説明されているようにして製造することができる；および、アルキルホスホトリエステル（ここで電荷を有する酸素部分は、米国特許第号５，０２３，２４３、および、欧州特許第０９２，５７４号で説明されているようにアルキル化される）は、市販の試薬を用いた自動式の固相合成によって製造することができる。その他のＤＮＡ主鎖の修飾および置換の作成方法が説明されている（例えば、Ｕｈｌｍａｎｎ，Ｅ．およびＰｅｙｍａｎ，Ａ．，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．９０：５４４，１９９０；Ｇｏｏｄｃｈｉｌｄ，Ｊ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．１：１６５，１９９０）。
【００４８】
従って、感染症、癌、アレルギー、喘息、自己免疫または炎症性疾患を有する、または、それらを発症させる危険性がある被検体の治療に関する本発明のいくつかの形態において、Ａクラスの修飾オリゴヌクレオチドは有用である。本明細書で用いられるように、治療する、治療される、または、〜を治療すること、という用語は、感染症、癌、アレルギー、喘息、自己免疫または炎症性疾患のような障害に関して用いられる場合、上記病気（例えば、病原体への感染）の発症に対する被検体の耐性を高める、または、言い換えれば、被検体が、上記病気を発症させる（例えば、病原体への感染を起こす）可能性を低くするような予防的治療を意味し、加えて、被検体が病気を発症させた後に闘病するための治療（例えば、感染を減らす、または、排除する）、または、上記病気が悪化するのを防ぐための治療も意味する。
【００４９】
一実施態様において、Ａクラスの修飾オリゴヌクレオチドは、これまで従来の治療的処置に応答しなかった被検体を治療するのに有用である。このような被検体は、治療に反応したことがなかった人でもよいし、または、これまでの有効な治療にすでに応答しなくなった人でもよい。その他の実施態様において、上記被検体は、これまでこれらのまたはその他の化合物での治療を受けたことない被検体である。
【００５０】
本明細書で用いられる「被検体」は、脊椎動物を意味する。様々な実施態様において、上記被検体は、ヒト、ヒト以外の霊長類、または、その他の哺乳動物である。具体的な実施態様において、上記被検体は、マウス、ラット、モルモット、ウサギ、ネコ、イヌ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ウシ、または、ウマである。
【００５１】
本発明のＡクラスの修飾オリゴヌクレオチドは、単独で、または、抗原と共に投与することができる。抗原は、本発明のＡクラスの修飾オリゴヌクレオチドと分離していてもよいし、または、それと共有結合で連結していてもよい。一実施態様において、本発明の組成物そのものに抗原は含まれない。この実施態様において、抗原は、本発明の組成物と別々に、または、本発明の組成物と共にのいずれかで被検体に投与することができる。別々の投与には、時間が別々の投与、位置または投与経路が別々の投与、または、時間と位置または投与経路の両方が別々の投与が含まれる。本発明の組成物および抗原が別々の時間に投与される場合、抗原は、本発明の組成物の前に投与してもよいし、または、その後に投与してもよい。一実施態様において、抗原は、本発明の組成物を投与してから４８時間〜４週間後に投与される。また本方法は、抗原および組成物の最初の投与後に、抗原単独、組成物単独、または、抗原と組成物とを併用した１種またはそれより多くのブースターを投与することも考慮する。
【００５２】
また本発明は、被検体に本発明の組成物（ここで本組成物は抗原を含まない）を投与することによって、被検体が将来的に未知の抗原と遭遇することに対して準備することも考慮する。この実施態様によれば、被検体の免疫系は、後になって例えば環境または職業上の曝露によって被検体が遭遇する抗原に対してより強力な応答が生じるように準備される。このような方法は、例えば微生物因子に晒される可能性が高い旅行者、医療従事者および兵士のために用いることができる。
【００５３】
本発明のＡクラスの修飾オリゴヌクレオチドは、単独で投与してもよいし、または、その他の医薬品と共に投与してもよい。一形態において、本発明は、感染の治療に有用な組成物を提供する。この形態に係る組成物は、本発明のＡクラスの修飾オリゴヌクレオチド、および、抗感染薬を含む。
【００５４】
「感染症を有する被検体」は、感染性微生物が体表から、局所的に、または、全身に被検体に侵入することによって生じる障害を有する被検体である。感染性微生物としては、上述のようなウイルス、細菌、真菌または寄生体が挙げられる。そのようなものとして、ウイルスの侵入によって引き起こされる感染症は、「ウイルス性疾患」と定義される。本明細書で用いられる感染症を発症する「危険性がある被検体」とは、微生物に晒されるあらゆる危険性を有する被検体であり、例えば感染した被検体と接触する人、または、特定の微生物が発見されている場所に旅行する人である。例えば、危険性を有する被検体は、特定の微生物が発見されている地域への旅行を計画している被検体の場合もあるし、または、微生物が認識されている地域に住むあらゆる被検体の場合もある。感染症を発症する危険性がある被検体としては、微生物（例えばインフルエンザ）に晒される全般的な危険を有するが、本発明の治療中に進行中の病気を有さない被検体が挙げられ、加えて、被検体を特定の微生物に晒す医療的または環境的な要因のために感染症を発症する具体的な危険があるとみなされる被検体もが挙げられる。
【００５５】
感染のための医薬品としては、これらに限定されないが、抗菌剤、抗ウイルス剤、抗真菌剤、および、抗寄生虫剤が挙げられる。「抗感染薬物質」、「抗生物質」、「抗菌剤」、「抗ウイルス剤」、「抗真菌剤」、「抗寄生虫剤」および「駆虫薬」のような成句は、当業者にとって十分に確立された意味を有し、標準的な医療の教本で定義されている。簡単に言えば、抗菌剤は細菌を死滅させるか、または、阻害するものであり、例えば、抗生物質、加えて、類似の機能を有するその他の合成または天然の化合物が挙げられる。抗ウイルス剤は、自然源から単離してもよいし、または、合成してもよく、これらは、ウイルスを死滅または阻害させるのに有用である。抗真菌剤は、体表の真菌感染、加えて、日和見性および一次的な全身性真菌感染を治療するのに用いられる。抗寄生虫剤は、寄生体を死滅させるか、または、阻害する。多くの抗生物質は、微生物のような細胞で二次代謝産物として生産される低分子量の分子である。一般的に、抗生物質は、微生物に特異的であるが、宿主細胞には存在しない１種またはそれより多くの機能または構造を妨害する。
【００５６】
抗感染治療が有する問題の１つは、抗感染薬物質で治療される宿主に生じる副作用である。例えば、多くの抗感染因子は、広範囲の微生物を死滅または阻害することができるが、特定の型の種に特異的ではない。これらのタイプの抗感染因子を用いた治療によって、感染性微生物と同様に宿主内に生息する正常な微生物フローラの死滅も招く。微生物フローラは感染性の病原体と競合して、それらに対するバリアとしてとして機能するため、微生物フローラの損失により病気の合併症が起こり、宿主がその他の病原体に感染しやすくなる可能性がある。微生物以外の細胞、または、宿主の組織に対するこれらの化学物質の特異的または非特異的な作用の結果として、その他の副作用が発生する可能性もある。
【００５７】
抗感染剤の広範な使用に伴うその他の問題は、微生物の抗生物質耐性株が発生することである。すでに、バンコマイシン耐性エンテロコッカス属、ペニシリン耐性肺炎球菌、多剤耐性黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）、および、多剤耐性結核菌株が発生しており、主要な臨床上の問題になりつつある。抗感染剤の広範な使用は、多くの抗生物質耐性細菌株を生産する可能性が高いと予想される。結果として、これらの微生物と闘うための新規の感染を防ぐ方策が必要であると予想される。
【００５８】
多様な細菌を死滅または阻害するのに有効な抗菌性抗生物質は、広域抗生物質と称される。グラム陽性またはグラム陰性のクラスの細菌に対しては、それ以外のタイプの抗菌性抗生物質が圧倒的に有効である。これらのタイプの抗生物質は、狭域抗生物質と称される。一種の生物または病気に対して有効であるが、その他のタイプの細菌に対しては有効ではないその他の抗生物質は、限定域（ｌｉｍｉｔｅｄ−ｓｐｅｃｔｒｕｍ）抗生物質と称される。
【００５９】
抗菌剤は、それらの主要な作用機序に基づいて分類される場合がある。一般的に、抗菌剤は、細胞壁合成阻害剤、細胞膜阻害剤、タンパク質合成阻害剤、核酸合成または機能の阻害剤、および、競合的阻害剤である。細胞壁合成阻害剤は、細胞壁合成プロセスにおける工程、および、一般的には細菌のペプチドグリカンの合成における工程を阻害する。細胞壁合成阻害剤としては、β−ラクタム抗生物質、天然ペニシリン、半合成のペニシリン、アンピシリン、クラブラン酸、セファロスポリン、および、バシトラシンが挙げられる。
【００６０】
β−ラクタムは、ペプチドグリカン合成の最後の工程を阻害する４員環のβ−ラクタム環を含む抗生物質である。β−ラクタム抗生物質は、合成してもよいし、または、天然のものでもよい。ペニシリウム属によって生産されるβ−ラクタム系抗生物質は、ペニシリンＧまたはペニシリンＶのような天然ペニシリンである。これらは、ペニシリウム・クリソゲヌム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｈｒｙｓｏｇｅｎｕｍ）の発酵によって生産される。天然ペニシリンは、狭域の活性を有し、一般的に、連鎖球菌属、淋菌およびブドウ球菌属に対して有効である。グラム陽性菌に対しても有効なその他のタイプの天然ペニシリンとしては、ペニシリンＦ、Ｘ、Ｋ、および、Ｏが挙げられる。
【００６１】
半合成ペニシリンは、一般的に、糸状菌によって生産される６−アミノペニシラン酸分子の改変型である。６−アミノペニシラン酸を側鎖の付加で修飾することによって、天然ペニシリンよりも広域の活性を有するか、または、様々なその他の有利な特性を有するペニシリンを得ることができる。一部のタイプの半合成ペニシリンは、グラム陽性およびグラム陰性菌に対して広域の活性を有するが、ペニシリナーゼによって不活性化される。これらの半合成ペニシリンとしては、アンピシリン、カルベニシリン、オキサシリン、アズロシリン、メズロシリン、および、ピペラシリンが挙げられる。その他のタイプの半合成ペニシリンは、グラム陽性菌に対して狭域の活性を有するが、ペニシリナーゼによって不活性化されないような特性を発達させている。このようなものとしては、例えば、メチシリン、ジクロキサシリン、および、ナフシリンが挙げられる。広域な活性を有する半合成ペニシリンのうちいくつかは、クラブラン酸およびスルバクタムのようなβ−ラクタマーゼ阻害剤と組み合わせて用いることができる。β−ラクタマーゼ阻害剤は抗菌作用を有さないが、これらはペニシリナーゼを阻害する機能を有するため、半合成ペニシリンを分解から保護する。
【００６２】
その他のタイプのβ−ラクタム抗生物質は、セファロスポリンである。これは、細菌のβ−ラクタマーゼによる分解を受けやすいため、必ずしも単独で有効とは限らない。しかしながらセファロスポリンは、ペニシリナーゼに対して耐性である。これは、様々なグラム陽性およびグラム陰性菌に対して有効である。セファロスポリンとしては、これらに限定されないが、セファロチン、セファピリン、セファレキシン、セファマンドール、セファクロル、セファゾリン、セフロキシン、セフォキシチン、セフォタキシム、セフスロジン、セフェタメト、セフィキシム、セフトリアキソン、セフォペラゾン、セフタジジン、および、モクサラクタムが挙げられる。
【００６３】
バシトラシンは、ムロペプチドサブユニットまたはペプチドグリカンを膜の外側に送達する分子から、これらサブユニットの放出を阻害することによって細胞壁合成を阻害する抗生物質のその他のクラスである。バシトラシンはグラム陽性菌に対して有効であるが、その高い毒性のために、一般的に使用が外用投与に限定されている。
【００６４】
カルバペネムは、細胞壁合成を阻害することができる広域の活性を有するその他のβ−ラクタム系抗生物質である。カルバペネムの例としては、これらに限定されないが、イミペネムが挙げられる。またモノバクタム系も広域の活性を有するβ−ラクタム系抗生物質であり、例えばユーズトレオナム（ｅｕｚｔｒｅｏｎａｍ）が挙げられる。またストレプトマイセスによって生産される抗生物質であるバンコマイシンも、細胞膜合成を阻害することによりグラム陽性菌に対して有効である。
【００６５】
抗菌剤のその他のクラスは、細胞膜阻害剤である抗菌剤である。これらの化合物は、細菌の膜の構造を破壊するか、または、その機能を阻害する。細胞膜阻害剤である抗菌剤が有する一つの問題は、これらは、細菌および真核細胞の膜においてリン脂質が類似しているために、細菌に加えて真核細胞においても作用を生じる可能性があることである。従ってこれらの化合物は、これらの化合物を全身投与で使用することが許容されるのに十分な程度特異的であることはまれであり、局所投与のために高用量を使用することを妨げる。
【００６６】
臨床的に有用な細胞膜阻害剤の１つは、ポリミキシンである。ポリミキシンは、膜のリン脂質に結合することによって膜の機能を妨げる。ポリミキシンは、主としてグラム陰性菌に対して有効であり、一般的に、重度のシュードモナス感染、または、毒性が少ない抗生物質に対して耐性のシュードモナス感染に用いられる。この化合物の全身投与に伴う重篤な副作用としては、腎臓およびその他の臓器に対するダメージが挙げられる。
【００６７】
その他の細胞膜阻害剤としては、アンホテリシンＢ、および、ナイスタチンが挙げられ、これらは主として全身性真菌感染およびカンジダ酵母感染の治療で用いられる抗真菌剤である。イミダゾールは、細胞膜阻害剤である抗生物質のその他のクラスである。イミダゾールは抗菌剤、加えて抗真菌剤として用いられ、例えば酵母感染、皮膚糸状菌感染、および、全身性真菌感染の治療に用いられる。イミダゾールとしては、これらに限定されないが、クロトリマゾール、ミコナゾール、ケトコナゾール、イトラコナゾール、および、フルコナゾールが挙げられる。
【００６８】
多くの抗菌剤は、タンパク質合成阻害剤である。これらの化合物は、細菌が構造タンパク質および酵素を合成することを妨げるため、細菌細胞増殖もしくは機能の阻害、または、細胞死を引き起こす。一般的にこれらの化合物は、転写または翻訳プロセスを妨害する。転写をブロックする抗菌剤としては、これらに限定されないが、リファンピン、および、エタンブトールが挙げられる。リファンピンは、酵素ＲＮＡポリメラーゼを阻害するものであり、これは広域な活性を有し、グラム陽性およびグラム陰性菌、加えてヒト型結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）に対して有効である。エタンブトールは、ヒト型結核菌に対して有効である。
【００６９】
翻訳をブロックする抗菌剤は、細菌のリボソームを阻害して、ｍＲＮＡがタンパク質に翻訳されるのを妨げることができる。一般的に、このクラスの化合物としては、これらに限定されないが、テトラサイクリン、クロラムフェニコール、マクロライド系（例えば、エリスロマイシン）、および、アミノグルコシド系（例えば、ストレプトマイシン）が挙げられる。
【００７０】
アミノグルコシド系は、細菌ストレプトマイセスによって生産される抗生物質のクラスであり、例えばストレプトマイシン、カナマイシン、トブラマイシン、アミカシン、および、ゲンタマイシンが挙げられる。アミノグルコシド系は、グラム陽性およびグラム陰性菌によって引き起こされる多種多様の細菌感染に対して用いられてきた。ストレプトマイシンは、結核治療の主要な薬物として広範囲にわたり用いられてきた。ゲンタマイシンは、シュードモナス感染などの多くのグラム陽性およびグラム陰性菌株に対して、特にトブラマイシンと組み合わせて用いられる。カナマイシンは、ペニシリン耐性ブドウ球菌のような多くのグラム陽性菌に対して用いられる。それらの使用を臨床的に限定してきたアミノグルコシド系の副作用の１つは、有効性を得るのに必須な投与量だと、持続的に使用することによって、腎臓機能を損ない、聴覚消失症を発症する聴覚神経へのダメージを引き起こすことが認められていることである。
【００７１】
その他のタイプの翻訳を阻害するタイプの抗菌剤は、テトラサイクリンである。テトラサイクリンは、広域な活性を有する抗生物質のクラスの１つであり、これらは、様々なグラム陽性およびグラム陰性菌に対して有効である。テトラサイクリンの例としては、テトラサイクリン、ミノサイクリン、ドキシサイクリン、および、クロルテトラサイクリンが挙げられる。これらは、多くのタイプの細菌の治療に重要であるが、特にライム病の治療において重要である。これらは毒性が低く、直接の副作用が最小であることから、テトラサイクリンは医学界で濫用、誤用され続け、問題となっている。例えば、それらの過剰使用は、耐性の出現が蔓延する原因となっている。
【００７２】
マクロライド系のような抗菌剤は５０Ｓリボゾームサブユニットに可逆的に結合して、ペプチジルトランスフェラーゼによってタンパク質の伸長を阻害するか、または、細菌のリボソームからの非荷電性ｔＲＮＡの放出を妨害するか、または、その両方を行う。これらの化合物としては、エリスロマイシン、ロキシスロマイシン、クラリスロマイシン、オレアンドマイシン、および、アジスロマイシンが挙げられる。エリスロマイシンは、ほとんどのグラム陽性菌、ナイセリア属、レジオネラ属、および、ヘモフィルス属に対して活性を有するが、腸内細菌科に対しては活性を有さない。リンコマイシンおよびクリンダマイシンは、タンパク質合成中にペプチド結合の形成をブロックするものであり、グラム陽性菌に対して用いられる。
【００７３】
その他のタイプの翻訳阻害剤は、クロラムフェニコールである。クロラムフェニコールは、７０Ｓリボソームに結合して細菌の酵素ペプチジルトランスフェラーゼを阻害し、それによってタンパク質合成中にポリペプチド鎖の成長を予防する。クロラムフェニコールに伴う１つの重篤な副作用は、再生不良性貧血である。再生不良性貧血は、細菌を治療するのに有効なクロラムフェニコール投与で少ない比率の患者（１／５０，０００）に発生する。クロラムフェニコールは、かつては頻繁に処方された抗生物質であったが、貧血による死亡が認められたために現在ではめったに用いられない。しかしながらクロラムフェニコールは、その有効性のために生命を脅かす状況（例えば、腸チフス）では未だに使用されている。
【００７４】
いくつかの抗菌剤は、核酸合成または機能を崩壊させるが、例えばＤＮＡまたはＲＮＡのメッセージが読めなくなるようにＤＮＡまたはＲＮＡに結合する。このようなものとしては、これらに限定されないが、キノロン類およびコトリモキサゾール類（いずれも合成化学物質）、および、リファマイシン（天然または半合成の化学物質）が挙げられる。キノロンは、細菌が自身の環状ＤＮＡを生産するのに必要な酵素であるＤＮＡジャイレースを阻害することによって細菌のＤＮＡ複製をブロックする。これらは広域の活性を有し、例えば、ノルフロキサシン、シプロフロキサシン、エノキサシン、ナリジクス酸、および、テマフロキサシンが挙げられる。ナリジクス酸は、殺菌性の物質であり、これは、ＤＮＡ複製に必須であるＤＮＡジャイレース酵素（トポイソメラーゼ）に結合し、スーパーコイルを緩めて改質し、ＤＮＡジャイレース活性を阻害することができる。ナリジクス酸の主要な用途は、下部尿路感染症（ＵＴＩ）の治療にあるなぜならナリジクス酸は、ＵＴＩに共通の原因である大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、エンテロバクター・エロゲネス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）、肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、および、プロテウス属にような数種のタイプのグラム陰性菌に対して有効である。コトリモキサゾールは、スルファメトキサゾールとリメトプリムとの組み合わせであり、これは、ＤＮＡヌクレオチドを作製するのに必要な細菌の葉酸合成をブロックする。リファンピシンは、グラム陽性菌（例えば、ヒト型結核菌、および、髄膜炎を引き起こすナイセリア・メニンギチジス（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ））、および、一部のグラム陰性菌に対して活性なリファマイシン誘導体である。リファンピシンは、ポリメラーゼのベータサブユニットに結合し、ポリメラーゼを活性化するのに必要な最初のヌクレオチドの付加をブロックすることによって、ｍＲＮＡ合成をブロックすることができる。
【００７５】
抗菌剤のその他のクラスは、細菌の酵素の競合的阻害剤として機能する化合物である。競合的阻害剤は、ほぼ全てが構造的に細菌の増殖因子に類似しており、結合に関して競合するが、細胞における代謝機能は行わない。これらの化合物としては、スルホンアミド類、および、さらにより強力で広域の抗菌活性を有するスルファニルアミドの化学修飾された形態が挙げられる。スルホンアミド類（例えば、ガントリシンおよびリメトプリム）は、肺炎連鎖球菌、ベータ−溶血性連鎖球菌、および、大腸菌の治療に有用であり、これらは、大腸菌によって引き起こされる合併症のないＵＴＩの治療、および、髄膜炎菌性髄膜炎の治療で用いられている。
【００７６】
抗ウイルス剤は、ウイルスによる細胞の感染、または、細胞内でのウイルス複製を防ぐ化合物である。抗ウイルス薬物は、抗菌性薬物よりもずっと少ないが、これはなぜなら、ウイルス複製のプロセスは、宿主細胞内でのＤＮＡ複製と密接に関連するため、非特異的な抗ウイルス剤は宿主にとって毒性であることが多いためである。ウイルス感染のプロセスには、抗ウイルス剤によってブロックまたは阻害することができる段階がいくつかある。これらの段階としては、ウイルスの宿主細胞への付着（免疫グロブリン、または、結合ペプチド）、ウイルスの脱殻（例えば、アマンタジン）、ウイルスｍＲＮＡの合成または翻訳（例えば、インターフェロン）、ウイルスＲＮＡまたはＤＮＡの複製（例えば、ヌクレオシド類似体）、新しいウイルスタンパク質の成熟（例えば、プロテアーゼ阻害剤）、および、ウイルスの出芽および放出が挙げられる。
【００７７】
その他の抗ウイルス剤の種類は、ヌクレオシド類似体である。ヌクレオシド類似体とは、ヌクレオシドに類似しているが、不完全な、または、一般的ではないデオキシリボースまたはリボース基を有する合成化合物である。ヌクレオシド類似体が細胞内に入ると、これらはリン酸化されて三リン酸の形態になるため、ウイルスＤＮＡまたはＲＮＡへの取り込みに関して正常なヌクレオチドと競合する。ヌクレオシド類似体の三リン酸の形態が成長中の核酸鎖に組み込まれると、それらはウイルスポリメラーゼと不可逆的な結合を引き起こすため、鎖がそこで終結する。ヌクレオシド類似体としては、これらに限定されないが、アシクロビル（単純疱疹ウイルス、および、水痘−帯状疱疹ウイルスの治療に用いられる）、ガンシクロビル（サイトメガロウイルスの治療に有用）、イドクスウリジン、リバビリン（呼吸器系合胞体ウイルスの治療に有用）、ジデオキシイノシン、ジデオキシシチジン、および、ジドブジン（アジドチミジン）が挙げられる。
【００７８】
抗ウイルス剤のその他のクラスとしては、インターフェロンのようなサイトカインが挙げられる。インターフェロンは、ウイルスに感染した細胞、加えて免疫細胞によって分泌されるサイトカインである。インターフェロンは、感染した細胞に隣接する細胞上の特異的な受容体に結合することによって作用し、細胞に、ウイルスによる感染からその細胞が保護されるような変化をもたらす。またαおよびβ−インターフェロンは、感染した細胞の表面でクラスＩおよびクラスＩＩ ＭＨＣ分子の発現も誘導し、それにより、宿主の免疫細胞に認識させるための抗原提示の増加が起こる。αおよびβ−インターフェロンは組換えの形態として入手することができ、慢性Ｂ型およびＣ型肝炎感染の治療に用いられてきた。インターフェロンは、抗ウイルス治療に有効な投与量で、発熱、倦怠感および体重減少のような重度の副作用が生じる。
【００７９】
免疫グロブリン療法は、ウイルス感染の予防に用いられる。ウイルス感染のための免疫グロブリン療法は、抗原特異性によるのではないという点で細菌感染の場合とは異なり、このような免疫グロブリン療法は、細胞外のビリオンに結合して、それらがウイルス感染を受けやすい細胞に付着し侵入することを予防することにより作用する。このような治療は、宿主中に抗体が存在する期間中はウイルス感染の予防において有効性を示す。一般的に、２タイプの免疫グロブリン療法があり、一方は、通常の免疫グロブリン療法であり、もう一方は、高力価免疫グロブリン療法である。通常の免疫グロブリン療法は、正常な血液ドナーの血清から調製されプールされた抗体製品を利用する。このプールした製品は、Ａ型肝炎、パルボウイルス、エンテロウイルス（特に新生児における）のような多様なヒトウイルスに対して低力価の抗体を含む。高力価免疫グロブリン療法は、特定のウイルスに対して高力価の抗体を有する個体の血清から調製された抗体を利用する。従ってこのような抗体は、特定のウイルスに対して用いられる。高力価免疫グロブリンの例としては、帯状疱疹免疫グロブリン（免疫無防備状態の子供および新生児における水痘の予防に有用）、ヒト狂犬病免疫グロブリン（狂犬病の動物に噛まれた被検体の曝露後予防において有用）、Ｂ型肝炎免疫グロブリン（特にウイルスに晒された被検体におけるＢ型肝炎ウィルスの予防において有用）、および、ＲＳＶ免疫グロブリン（呼吸器系合胞体ウイルス感染の治療において有用）が挙げられる。
【００８０】
当業界既知の抗ウイルス剤または医薬品としては、これらに限定されないが、エースマンナン；アシクロビル；アシクロビルナトリウム；アデフォビル；アロブジン；アルビルセプトスドトックス（Ａｌｖｉｒｃｅｐｔ Ｓｕｄｏｔｏｘ）；塩酸アマンタジン；アラノチン；アリルドン；メシル酸アテビルジン；アブリジン；シドフォビル；シパムフィリン；塩酸シタラビン；メシル酸デラビルジン；デシクロビル；ジダノシン；ジソキサリル；エドクスジン；エンビラデン；エンビロキシム；ファミシクロビル；塩酸ファモチン；フィアシタビン；フィアルリジン；フォサリレート（Ｆｏｓａｒｉｌａｔｅ）；ホスカルネットナトリウム；ホスフォネットナトリウム（Ｆｏｓｆｏｎｅｔ Ｓｏｄｉｕｍ）；ガンシクロビル；ガンシクロビルナトリウム；イドクスウリジン；ケトキサール；ラミブジン；ロブカビル；塩酸メモチン；メチサゾン；ネビラピン；ペンシクロビル；ピロダビル；リバビリン；塩酸リマンタジン；メシル酸サキナビル；塩酸ソマンタジン；ソリブジン；スタトロン（Ｓｔａｔｏｌｏｎ）；スタブジン；塩酸チロロン；トリフルリジン；塩酸バラシクロビル；ビダラビン；リン酸ビダラビン；ビダラビンリン酸ナトリウム；ビロキシム；ザルシタビン；ジドブジン；および、ジンビロキシムが挙げられる。
【００８１】
抗真菌剤は、感染性の真菌類の治療および予防に有用である。抗真菌剤は、それらの作用機序によって分類されることがある。いくつかの抗真菌剤は、グルコースシンターゼを阻害することによって細胞壁阻害剤として機能する。このようなものとしては、これらに限定されないが、バシウンギン（ｂａｓｉｕｎｇｉｎ）／ＥＣＢが挙げられる。その他の抗真菌剤は、膜の完全性を不安定にすることによって作用する。このようなものとしては、これらに限定されないが、イミダゾール、例えばクロトリマゾール、セルタコンゾール（ｓｅｒｔａｃｏｎｚｏｌｅ）、フルコナゾール、イトラコナゾール、ケトコナゾール、ミコナゾール、および、ボリコナゾール（ｖｏｒｉｃｏｎａｃｏｌｅ）が挙げられ、加えて、ＦＫ４６３、アンホテリシンＢ、ＢＡＹ３８−９５０２、ＭＫ９９１、プラジミシン、ＵＫ２９２、ブテナフィン、および、テルビナフィンも挙げられる。その他の抗真菌剤は、キチンを分解することによって（例えば、キチナーゼ）、または、免疫抑制（５０１クリーム）によって機能する。
【００８２】
駆虫薬は、寄生体を直接的にを殺す物質である。このような化合物は当業界既知であり、一般的に市販されている。ヒトへの投与に有用な駆虫薬の例としては、これらに限定されないが、アルベンダゾール、アンホテリシンＢ、ベンズニダゾール、ビチオノール、塩酸クロロキン、リン酸クロロキン、クリンダマイシン、デヒドロエメチン、ジエチルカルバマジン、フランカルボン酸ジロキサニド、エフロールニチン、フラゾリダオン（ｆｕｒａｚｏｌｉｄａｏｎｅ）、糖質コルチコイド、ハロファントリン、ヨードキノール、イベルメクチン、メベンダゾール、メフロキン、メグルミンアンチモニエート、メラルソプロール、メトリホネート、メトロニダゾール、ニクロサミド、ニフルチモックス、オキサムニキン、パロモマイシン、ペンタミジンイセチオネート、ピペラジン、プラジカンテル、リン酸プリマキン、プログアニル、パモ酸ピランテル、ピリメタミン（ｐｙｒｉｍｅｔｈａｎｍｉｎｅ）−スルホンアミド類、ピリメタミン−スルファドキシン、塩酸キナクリン、硫酸キニン、グルコン酸キニジン、スピラマイシン、スチボグルコン酸ナトリウム（グルコン酸アンチモンナトリウム）、スラミン、テトラサイクリン、ドキシサイクリン、チアベンダゾール、チニダゾール、トリメトプリム−スルファメトキサゾール、および、トリパルサミドが挙げられる。
【００８３】
またＡクラスの修飾オリゴヌクレオチドは、自己免疫疾患を治療および予防することにも有用である。自己免疫疾患は、被検体自身の抗体と宿主組織とが反応する病気のクラス、または、免疫エフェクターＴ細胞が内因性の自己ペプチドと自己反応し、組織の破壊を引き起こす病気のクラスである。従って、被検体自身の抗原（自己抗原と称される）に対して免疫応答が発生する。自己免疫疾患としては、これらに限定されないが、リウマチ様関節炎、クローン病、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、自己免疫性脳脊髄炎、重症筋無力症（ＭＧ）、橋本甲状腺炎、グッドパスチャー症候群、天疱瘡（例えば、尋常性天疱瘡）、グレーブス病、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性血小板減少性紫斑病、抗コラーゲン抗体を有する強皮症、混合性結合組織病、多発性筋炎、悪性貧血、特発性アジソン病、自己免疫に関連する不妊症、腎炎（例えば、半月形糸球体腎炎、増殖性糸球体腎炎）、水疱性類天疱瘡、シェーグレン症候群、インスリン耐性、および、自己免疫性糖尿病が挙げられる。
【００８４】
本明細書で用いられる「自己抗原」は、正常な宿主組織の抗原を意味する。正常な宿主組織は、癌細胞を含まない。従って、自己抗原に対して発生した免疫応答は、自己免疫疾患の状況では望ましくない免疫応答であり、正常な組織の破壊および損傷に寄与するが、それに対して癌抗原に対して発生した免疫応答は、望ましい免疫応答であり、腫瘍または癌の破壊に寄与する。従って、本発明の自己免疫障害を治療することを目的とする形態のいくつかにおいて、本オリゴヌクレオチドが、自己抗原と共に投与されること、具体的には自己免疫障害の標的である自己抗原と共に投与されることは推奨されない。
【００８５】
その他の例において、Ａクラスの修飾オリゴヌクレオチドは、低用量の自己抗原と共に送達してもよい。多数の動物実験によって、低用量の抗原の粘膜投与が、免疫低応答状態または「寛容」を引き起こす可能性があることが実証されてきた。その活性なメカニズムは、Ｔｈ１から離れて主にＴｈ２およびＴｈ３（すなわちＴＧＦ−β優勢）応答に向かうサイトカインが介在する免疫偏向のようである。また低用量の抗原送達を用いる活性な抑制も、無関係の免疫応答（バイスタンダー（ｂｙｓｔａｎｄｅｒ）抑制）を抑制することができ、これは、自己免疫疾患（例えばリウマチ様関節炎およびＳＬＥ）の治療において非常に興味深い。バイスタンダー抑制は、炎症誘発性およびＴｈ１サイトカインが抗原特異または抗原非特異いずれかで放出されるような局所環境における、Ｔｈ１を逆調節するサプレッサーサイトカインの分泌に関与する。本明細書で用いられる「寛容」とは、この現象を意味するために用いられる。実際に、経口寛容は、動物における多数の自己免疫疾患の治療：例えば、実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）、実験性自己免疫性筋無力症、コラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）、および、インスリン依存性糖尿病などの治療において有効であった。これらのモデルにおいて、自己免疫疾患の予防および抑制は、抗原特異的な体液性および細胞性応答におけるＴｈ１からＴｈ２／Ｔｈ３応答へのシフトに関連する。
【００８６】
本発明の組成物および方法は、単独で用いてもよいし、または、癌治療に有用なその他の物質および方法と共に用いてもよい。一形態において、本発明は、癌を有する被検体の治療方法を提供する。本発明のこの形態に係る方法は、癌を有する被検体に、このような被検体を治療するのに有効な量の本発明の組成物を投与する工程を含む。
【００８７】
癌を有する被検体とは、検出可能な癌細胞を有する被検体である。癌は、悪性の癌の場合もあるし、または、良性の癌の場合もある。本明細書で用いられる「癌」は、体内の臓器およびシステムの正常な機能を妨害する制御不能な細胞増殖を意味する。癌は、その元の位置から移動して正常な臓器に転移し、最終的に影響を受けた臓器の機能が劣化することによって被検体を死亡させる。白血病のような造血系の癌は、被検体の正常な造血組織の区画に侵入して、それによって造血不能に陥り（貧血、血小板減少症、および、好中球減少症の形態で）、最終的には死をもたらす可能性がある。「癌を発症する危険性がある被検体」とは、癌の家族歴、発癌性物質などに晒されることといった要因のために癌を発症させる見込みが正常な被検体よりも高い被検体のことである。
【００８８】
転移は、原発腫瘍から体のその他の部分への癌細胞の内転移によって生じた原発腫瘍の位置とは異なる癌細胞の領域である。原発腫瘍の質量を診断する時に、転移の存在に関して被検体はをモニターすることが可能である。転移は、ほとんどの場合、核磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）でのスキャン、コンピュータ断層撮影法（ＣＴ）でのスキャン、血液および血小板の計数、肝臓機能の研究、胸部Ｘ線、および、骨のスキャンそれぞれ単独で、または、それらと特定の症状のモニターとを併用することによって検出される。
【００８９】
癌としては、これらに限定されないが、基底細胞癌腫、胆道癌；膀胱癌；骨癌；脳および中枢神経系（ＣＮＳ）の癌；乳癌；子宮頚癌；絨毛上皮腫；結腸および直腸癌；結合組織癌；消化器系癌；子宮内膜癌；食道癌；眼癌；頭頸部癌；上皮内新生物；腎臓癌；喉頭癌；白血病；肝臓癌；肺癌（例えば、小細胞および非小細胞）；リンパ腫、例えばホジキンおよび非ホジキンリンパ腫；黒色腫；骨髄腫；神経芽細胞腫；口腔癌（例えば、唇、舌、口腔および咽頭）；卵巣癌；膵臓癌；前立腺癌；網膜芽腫；横紋筋肉腫；直腸癌；呼吸器系の癌；肉腫；皮膚癌；胃癌；精巣癌；甲状腺癌；子宮癌；泌尿器系の癌、加えてその他の癌腫、腺癌および肉腫が挙げられる。
【００９０】
また本発明の免疫刺激性組成物は、抗癌治療と共に投与してもよい。抗癌治療としては、癌治療薬、放射線、および、外科手術が挙げられる。本明細書で用いられる「癌治療薬」は、被検体に癌治療の目的で投与される物質を意味する。本明細書で用いられる「癌を治療すること」は、癌の発症を予防すること、癌の症状を低減すること、および／または、すでに発症した癌の成長を阻害することを含む。その他の形態において、癌治療薬は、癌を発症する危険性がある被検体に、癌を発症させる危険を減少させる目的で投与される。本明細書において様々なタイプの癌治療のための医薬品を説明する。本明細書の目的において、癌治療薬は、化学療法剤、免疫療法剤、癌ワクチン、ホルモン療法、および、生体応答調整物質に分類される。
【００９１】
化学療法剤は、メトトレキセート、ビンクリスチン、アドリアマイシン、シスプラチン、糖を含まないクロロエチルニトロソウレア、５−フルオロウラシル、マイトマイシンＣ、ブレオマイシン、ドキソルビシン、ダカルバジン、タキソール、フラジリン（ｆｒａｇｙｌｉｎｅ）、メグルミン（ｍｅｇｌａｍｉｎｅ）ＧＬＡ、バルルビシン、カルムスタイン（ｃａｒｍｕｓｔａｉｎｅ）、および、ポリフェルポサン（ｐｏｌｉｆｅｒｐｏｓａｎ）、ＭＭＩ２７０、ＢＡＹ１２−９５６６、ＲＡＳファメシルトランスフェラーゼ阻害剤（ＲＡＳ ｆａｍｅｓｙｌ ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）、ファメシルトランスフェラーゼ阻害剤、ＭＭＰ、ＭＴＡ／ＬＹ２３１５１４、ＬＹ２６４６１８／ロメテキソール（Ｌｏｍｅｔｅｘｏｌ）、グラモレック（Ｇｌａｍｏｌｅｃ）、ＣＩ−９９４、ＴＮＰ−４７０、ハイカムチン／トポテカン、ＰＫＣ４１２、バルスポダール／ＰＳＣ８３３、ノバントロン／ミトロキサントロン（Ｍｉｔｒｏｘａｎｔｒｏｎｅ）、メタレット（Ｍｅｔａｒｅｔ）／スラミン、バチマスタット（Ｂａｔｉｍａｓｔａｔ）、Ｅ７０７０、ＢＣＨ−４５５６、ＣＳ−６８２、９−ＡＣ、ＡＧ３３４０、ＡＧ３４３３、Ｉｎｃｅｌ／ＶＸ−７１０、ＶＸ−８５３、ＺＤ０１０１、ＩＳＩ６４１、ＯＤＮ６９８、ＴＡ２５１６／マーミスタット（Ｍａｒｍｉｓｔａｔ）、ＢＢ２５１６／マーミスタット、ＣＤＰ８４５、Ｄ２１６３、ＰＤ１８３８０５、ＤＸ８９５１ｆ、レモナール（Ｌｅｍｏｎａｌ）ＤＰ２２０２、ＦＫ３１７、ピシバニール／ＯＫ−４３２、ＡＤ３２／バルルビシン、メタストロン／ストロンチウム誘導体、テモダール／テモゾロマイド、エバセット（Ｅｖａｃｅｔ）／リポソーマルドキソルビシン、ユータキサン（Ｙｅｗｔａｘａｎ）／パクリタキセル、タキソール／パクリタキセル、キセロード（Ｘｅｌｏａｄ）／カペシタビン、フルツロン／ドキシフルリジン、シクロパックス（Ｃｙｃｌｏｐａｘ）／経口パクリタキセル、経口タキソイド、ＳＰＵ−０７７／シスプラチン、ＨＭＲ１２７５／フラボピリドール（ｆｌａｖｏｐｉｒｉｄｏｌ）、ＣＰ−３５８（７７４）／ＥＧＦＲ、ＣＰ−６０９（７５４）／ＲＡＳ腫瘍遺伝子阻害剤、ＢＭＳ−１８２７５１／経口白金、ＵＦＴ（テガフール／ウラシル）、エルガミゾール（Ｅｒｇａｍｉｓｏｌ）／レバミソール、エニルウラシル／７７６Ｃ８５／５ＦＵエンハンサー、カンプト／レバミソール、カンプトサール（Ｃａｍｐｔｏｓａｒ）／イリノテカン、ツモデックス（Ｔｕｍｏｄｅｘ）／ラリトレキセド（Ｒａｌｉｔｒｅｘｅｄ）、ロイスタチン／クラドリビン、パキセクス（Ｐａｘｅｘ）／パクリタキセル、ドキシル／リポソーマルドキソルビシン、カエリクス（Ｃａｅｌｙｘ）／リポソーマルドキソルビシン、フルダラ／フルダラビン、ファルマルビシン（Ｐｈａｒｍａｒｕｂｉｃｉｎ）／エピルビシン、デポサイト（ＤｅｐｏＣｙｔ）、ＺＤ１８３９、ＬＵ７９５５３／ビス−ナフタルイミド、ＬＵ１０３７９３／ドラスタイン（Ｄｏｌａｓｔａｉｎ）、カエチクス（Ｃａｅｔｙｘ）／リポソーマルドキソルビシン、ジェムザール／ゲムシタビン、ＺＤ０４７３／アノーメッド（Ａｎｏｒｍｅｄ）、ＹＭ１１６、ヨウ素種（Ｉｏｄｉｎｅ ｓｅｅｄ）、ＣＤＫ４およびＣＤＫ２阻害剤、ＰＡＲＰ阻害剤、Ｄ４８０９／デキシフォサミド（Ｄｅｘｉｆｏｓａｍｉｄｅ）、アイフェス（Ｉｆｅｓ）／メスネックス（Ｍｅｓｎｅｘ）／イフォサミド（Ｉｆｏｓａｍｉｄｅ）、ブモン（Ｖｕｍｏｎ）／テニポシド、パラプラチン／カルボプラチン、プランチノール（Ｐｌａｎｔｉｎｏｌ）／シスプラチン、ベペシド（Ｖｅｐｅｓｉｄｅ）／エトポシド、ＺＤ９３３１、タキソテール／ドセタキセル、グアニンアラビノシドのプロドラッグ、タキサン類似体、ニトロソウレア類、アルキル化剤、例えばメルフェラン（ｍｅｌｐｈｅｌａｎ）、および、シクロホスファミド、アミノグルテチミド、アスパラギナーゼ、ブスルファン、カルボプラチン、クロロムブシル（Ｃｈｌｏｒｏｍｂｕｃｉｌ）、塩酸シタラビン、ダクチノマイシン、塩酸ダウノルビシン、リン酸エストラムスチンナトリウム、エトポシド（ＶＰ１６−２１３）、フロクシウリジン、フルオロウラシル（５−ＦＵ）、フルタミド、ヒドロキシ尿素（ヒドロキシカルバミド）、イフォスファミド、インターフェロンアルファ−２ａ、アルファ−２ｂ、酢酸ロイプロリド（ＬＨＲＨ−放出因子類似体）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、塩酸メクロレタミン（ナイトロジェンマスタード）、メルカプトプリン、メスナ（Ｍｅｓｎａ）、ミトタン（ｏ．ｐ’−ＤＤＤ）、塩酸ミトキサントロン、オクトレオチド、プリカマイシン、塩酸プロカルバジン、ストレプトゾシン、クエン酸タモキシフェン、チオグアニン、チオテパ、硫酸ビンブラスチン、アムサクリン（ｍ−ＡＭＳＡ）、アザシチジン、エリスロポエチン、ヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ）、インターロイキン２、ミトグアゾン（Ｍｉｔｏｇｕａｚｏｎｅ）（メチル−ＧＡＧ；メチルグリオキサールビス−グアニルヒドラゾン；ＭＧＢＧ）、ペントスタチン（２’デオキシコホルマイシン）、セムスチン（メチル−ＣＣＮＵ）、テニポシド（ＶＭ−２６）、および、硫酸ビンデシンからなる群より選択してもよい（ただしこれらに限定されない）。
【００９２】
免疫療法剤は、３６２２Ｗ９４、４Ｂ５、ＡＮＡ Ａｂ、抗ＦＬＫ−２、抗ＶＥＧＦ、ＡＴＲＡＧＥＮ、アバスチン（ベバシズマブ；ジェネンテック（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ））、ＢＡＢＳ、ＢＥＣ２、ベクサー（ＢＥＸＸＡＲ）（トシツモマブ；グラクソ・スミスクライン（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ））、Ｃ２２５、キャンパス（ＣＡＭＰＡＴＨ）（アレムトツマブ（ａｌｅｍｔｕｚｕｍａｂ）；ジェンザイム社（Ｇｅｎｚｙｍｅ Ｃｏｒｐ．）、シーサイド（ＣＥＡＣＩＤＥ）、ＣＭＡ６７６、ＥＭＤ−７２０００、セツキシマブ（セツキシマブ；イムクローン・システムズ社（ＩｍＣｌｏｎｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．））、グリオマブ（Ｇｌｉｏｍａｂ）−Ｈ、ＧＮＩ−２５０、ハーセプチン（トラスツズマブ；ジェネンテック）、ＩＤＥＣ−Ｙ２Ｂ８、ＩｍｍｕＲＡＩＴ−ＣＥＡ、ｉｏｒ ｃ５、ｉｏｒ ｅｇｆ．ｒ３、ｉｏｒ ｔ６、ＬＤＰ−０３、リンフォサイド（ＬｙｍｐｈｏＣｉｄｅ）、ＭＤＸ−１１、ＭＤＸ−２２、ＭＤＸ−２１０、ＭＤＸ−２２０、ＭＤＸ−２６０、ＭＤＸ−４４７、メリミューン（ＭＥＬＩＭＭＵＮＥ）−１、メリミューン−２、モノファーム（Ｍｏｎｏｐｈａｒｍ）−Ｃ、ノボＭＡｂ（ＮｏｖｏＭＡｂ）−Ｇ２、オンコリム（Ｏｎｃｏｌｙｍ）、ＯＶ１０３、オバレックス（ＯｖａＲｅｘ）、パノレックス（Ｐａｎｏｒｅｘ）、プレターゲット（Ｐｒｅｔａｒｇｅｔ）、クアドラメット、リブタキシン（Ｒｉｂｕｔａｘｉｎ）、リツキサン（リツキシマブ；ジェネンテック（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ））、ＳＭＡＲＴ１Ｄ１０Ａｂ、ＳＭＡＲＴ ＡＢＬ３６４Ａｂ、ＳＭＡＲＴ Ｍ１９５、ＴＮＴ、および、ＺＥＮＡＰＡＸ（ダクリズマブ；ロシュ（Ｒｏｃｈｅ））からなる群より選択してもよい（ただしこれらに限定されない）。
【００９３】
癌ワクチンは、ＥＧＦ、抗イディオタイプ癌ワクチン、Ｇｐ７５抗原、ＧＭＫ黒色腫ワクチン、ＭＧＶガングリオシド結合ワクチン、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、オバレックス（ＯｖａＲｅｘ）、Ｍ−Ｖａｘ、Ｏ−Ｖａｘ、Ｌ−Ｖａｘ、ＳＴｎ−ＫＨＬセラトープ（Ｔｈｅｒａｔｏｐｅ）、ＢＬＰ２５（ＭＵＣ−１）、リポソーマルイディオタイプワクチン（ｌｉｐｏｓｏｍａｌ ｉｄｉｏｔｙｐｉｃ ｖａｃｃｉｎｅ）、メラシン（Ｍｅｌａｃｉｎｅ）、ペプチド抗原ワクチン、毒素／抗原ワクチン、ＭＶＡベースのワクチン、ＰＡＣＩＳ、ＢＣＧワクチン、ＴＡ−ＨＰＶ、ＴＡ−ＣＩＮ、ＤＩＳＣ−ウイルス、および、イムシスト（ＩｍｍｕＣｙｓｔ）／テラシス（ＴｈｅｒａＣｙｓ）からなる群より選択してもよい（ただしこれらに限定されない）。
【００９４】
本発明の組成物および方法は、単独で用いてもよいし、または、アレルギーの治療に有用なその他の物質および方法と共に用いてもよい。一形態において、本発明は、アレルギー状態を示す被検体の治療方法を提供する。本発明のこの形態に係る方法は、アレルギー状態を示す被検体に、このような被検体を治療するのに有効な量の本発明の組成物を投与する工程を含む。
【００９５】
一形態において、本発明は、アレルギー状態を示す被検体の治療方法を提供する。本発明のこの形態に係る方法は、アレルギー状態を示す被検体を治療するために、アレルギー状態を示す被検体に、有効量の本発明の組成物、および、抗アレルギー治療剤を投与する工程を含む。
【００９６】
一形態において、本発明は、被検体において、アレルギー状態を治療する医薬品を製造するための、本発明のＡクラスの修飾オリゴヌクレオチドの使用を提供する。
一形態において、本発明は、アレルギー状態の治療に有用な組成物を提供する。この形態に係る組成物は、本発明のＡクラスの修飾オリゴヌクレオチド、および、アレルギー治療薬を含む。
【００９７】
「アレルギー状態を示す被検体」は、現在アレルゲンに反応して起こるアレルギー反応を示す、または、そのような状態を以前に経験したことがある被検体を意味することとする。「アレルギー状態」または「アレルギー」は、物質（アレルゲン）に対する後天性の過敏症を意味する。アレルギー状態としては、これらに限定されないが、湿疹、アレルギー性鼻炎、または、鼻感冒、枯草熱、アレルギー性結膜炎、気管支喘息、じんましん（ｈｉｖｅｓ）、および、食物アレルギー、その他のアトピー性の状態、例えばアトピー性皮膚炎；アナフィラキシー；薬物アレルギー；および、血管性浮腫が挙げられる。
【００９８】
アレルギーは、典型的には、アレルゲンに対する免疫グロブリンの特定のクラス、ＩｇＥからの抗体生産を伴う一次的な状態である。また、一般的な空気アレルゲンに対してＩｇＥが媒介する応答が発生することは、喘息の発症に対する素因を示すファクターの一つでもある。アレルゲンが、好塩基球（血液中を循環する）または肥満細胞（固形組織全体に分散している）の表面上でＩｇＥＦｃ受容体（Ｆｃ□Ｒ）に結合した特異的なＩｇＥに遭遇すると、その細胞は活性化され、ヒスタミン、セロトニン、および、脂質媒介物質のような媒介物質の生産および放出が起こる。
【００９９】
アレルギー反応は、組織を感作するＩｇＥ型の免疫グロブリンが外来のアレルゲンと反応すると起こる。ＩｇＥ抗体が肥満細胞および／または好塩基球に結合すると、これらの特殊化した細胞は、アレルゲンが抗体分子の末端と架橋を形成することによって刺激されてアレルギー反応の化学媒介物質（血管作動性アミン）を放出する。ヒトにおけるアレルギー反応の最もよく知られた媒介物質のなかでも、ヒスタミン、血小板活性化因子、アラキドン酸代謝産物、および、セロトニンが挙げられる。ヒスタミンおよびその他の血管作動性アミンは、通常、肥満細胞および塩基好性白血球中に保存される。肥満細胞は動物組織全体に分散しており、好塩基球は血管系内を循環している。これらの細胞は、ＩｇＥ結合を含む特殊化した一連の現象が起こり、その放出を開始させない限り、細胞内でヒスタミンを製造し保存する。
【０１００】
アレルギー反応の症状は、ＩｇＥが抗原と反応する体の部位に応じて様々である。このような反応が気道上皮上で起こると、その症状は、一般的に、くしゃみ、咳、および、喘息の反応である。食物アレルギーの場合のように消化管内でこのような相互作用が起こると、腹痛、および、下痢が起こることが多い。例えば蜂に刺された後、または、アレルギー性の被検体にペニシリンを投与した後のような全身性のアレルギー反応は重篤になる可能性があり、生命を脅かすことが多い。
【０１０１】
アレルギーは、Ｔｈ２型の免疫応答に関連しており、これは、少なくとも部分的にＴｈ２サイトカインＩＬ−４およびＩＬ−５、加えてＩｇＥに切り換える抗体のアイソタイプを特徴とする。Ｔｈ１およびＴｈ２型の免疫応答は、相互に逆調節性であることによって、免疫応答をＴｈ１型の免疫応答にそらして、アレルギーを含むＴｈ２型の免疫応答を予防または改善することができる。従って、本発明のＡクラスの修飾オリゴヌクレオチドは、免疫応答をＴｈ１型の免疫応答にそらすことができるため、このような修飾オリゴヌクレオチドはそれ自身アレルギー状態を有する被検体を治療するのに有用である。その代わりに、または、それに加えて、本発明のＡクラスの修飾オリゴヌクレオチドとアレルゲンとを併用して、アレルギー状態を有する被検体を治療することができる。
【０１０２】
また本発明の免疫刺激性組成物は、抗アレルギー治療剤と共に投与してもよい。従来のアレルギーの治療または予防方法には、アレルギー治療薬の使用または脱感作療法が含まれていた。アレルギーを治療または予防するための開発中の療法のいくつかとしては、抗ＩｇＥ抗体の中和の使用がある。アレルギー反応の化学媒介物質の作用をブロックする抗ヒスタミン剤およびその他の薬物は、アレルギーの症状の辛さを調節するのには役立つが、アレルギー反応を予防せず、その後に起こるアレルギー性応答に対する作用もない。脱感作療法は、アレルゲンに対するＩｇＧ型の応答を誘導するために、一般的には皮下注射で少ない用量のアレルゲンを投与することによって行われる。ＩｇＧ抗体の存在は、ＩｇＥ抗体の誘導により生じた媒介物質の生産を阻害するのに役立つと考えられている。重篤な反応の誘導を回避するために、最初のうちは被検体は極めて低用量のアレルゲンで治療され、その後用量を徐々に増加させる。このタイプの治療は、被検体は、実際にアレルギー性応答を引き起こす化合物投与され、重篤なアレルギー反応が生じる可能性があるため危険である。
【０１０３】
アレルギー治療薬としては、これらに限定されないが、抗ヒスタミン剤、コルチコステロイド、および、プロスタグランジン誘導物質が挙げられる。抗ヒスタミン剤は、肥満細胞または好塩基球によって放出されたヒスタミンを中和するように作用する化合物である。これらの化合物は当業界周知であり、一般的にアレルギー治療に頻繁に使用されている。抗ヒスタミン剤としては、これらに限定されないが、アクリバスチン、アステミゾール、アゼタジン（ａｚａｔａｄｉｎｅ）、アゼラスチン、ベタタスチン（ｂｅｔａｔａｓｔｉｎｅ）、ブロムフェニルアミン、ブクリジン（ｂｕｃｌｉｚｉｎｅ）、セチリジン、セチリジン類似体、クロルフェニラミン、クレマスチン、ＣＳ５６０、シプロヘプタジン、デスロラタジン、デキスクロルフェニルアミン、エバスチン、エピナスチン、フェキソフェナジン、ＨＳＲ６０９、ヒドロキシジン、レボカバスチン、ロラチジン（ｌｏｒａｔｉｄｉｎｅ）、メトスコポラミン、ミゾラスチン、ノラステミゾール（ｎｏｒａｓｔｅｍｉｚｏｌｅ）、フェニンダミン、プロメタジン、ピリラミン、テルフェナジン、および、トラニラストが挙げられる。
【０１０４】
コルチコステロイドとしては、これらに限定されないが、メチルプレドニゾロン、ブレドニゾロン、プレドニゾン、ベクロメタゾン、ブデソニド、デキサメタゾン、フルニソリド、プロピオン酸フルチカゾン、および、トリアムシノロンが挙げられる。デキサメタゾンは抗炎症性作用を有するコルチコステロイドであるが、デキサメタゾンは極めて吸収されやすく、有効量で長期にわたる抑制性の副作用を示すため、アレルギーまたは喘息の治療に吸入される形態でデキサメタゾンが定期的に用いられることはない。しかしながら、デキサメタゾンは、本発明の組成物と組み合わせて投与すれば、デキサメタゾンを低用量で投与することができ、従って副作用を減少させることができるため、本発明に従ってアレルギーまたは喘息を治療するのに用いることができる。コルチコステロイド使用に伴う副作用のいくつかとしては、咳、発声困難、口腔カンジダ症（カンジダ症）、および、より高用量では、全身性の作用、例えば副腎抑制、グルコース不耐性、骨粗しょう症、無菌性骨壊死、白内障の形成、成長抑制、高血圧、筋衰弱、皮膚の薄化、および、易傷性が挙げられる。Ｂａｒｎｅｓ ＆ Ｐｅｔｅｒｓｏｎ（１９９３）Ａｍ Ｒｅｖ Ｒｅｓｐｉｒ Ｄｉｓ １４８：Ｓ１−Ｓ２６；および、Ｋａｍａｄａ ＡＫ等（１９９６）Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ １５３：１７３９〜４８。
【０１０５】
本発明の組成物および方法は、単独で用いてもよいし、または、喘息の治療に有用なその他の物質および方法と共に用いてもよい。一形態において、本発明は、喘息を有する被検体の治療方法を提供する。本発明のこの形態に係る方法は、喘息を有する被検体に、このような被検体を治療するのに有効な量の本発明の組成物を投与する工程を含む。
【０１０６】
一形態において、本発明は、喘息を有する被検体の治療方法を提供する。本発明のこの形態に係る方法は、喘息を有する被検体に、このような被検体を治療するのに有効な量の本発明の組成物、および、抗喘息治療剤を投与する工程を含む。
【０１０７】
一形態において、本発明は、被検体において、喘息を治療する医薬品を製造するための、本発明のＡクラスの修飾オリゴヌクレオチドの使用を提供する。
一形態において、本発明は、喘息の治療に有用な組成物を提供する。この形態に係る組成物は、本発明のＡクラスの修飾オリゴヌクレオチド、および、喘息治療薬を含む。
【０１０８】
本明細書で用いられる「喘息」は、炎症および気道狭窄、ならびに、気道における吸入された物質への反応性の増加を特徴とする呼吸器系の障害を意味する。喘息は、それ単独ではなく、アトピー性の状態、または、アレルギー状態に伴って生じることが多い。喘息の症状としては、気道閉塞による再発性の喘鳴、息切れ、胸部圧迫感および咳が挙げられる。喘息に伴う気道炎症は、気道上皮の剥脱、基底膜下でのコラーゲン沈着、浮腫、肥満細胞の活性化、好中球、好酸球およびリンパ球などの炎症性細胞の浸潤のような多数の生理学的な変化を観察することによって検出することができる。喘息患者は、気道炎症の結果として、気道過敏症、空気流が限定されること、呼吸器の症状、および、病気の慢性化にかかることが多い。空気流の限定としては、急性の気管支収縮、気道浮腫、粘液栓の形成、および、気道リモデリングが挙げられ、それにより気管支閉塞を引き起こすことが多いことを特徴とする。喘息の一部の例においては、基底膜下で線維症が発生して、肺機能に持続的な異常をもたらす可能性がある。
【０１０９】
過去数年間にわたる調査では、喘息は、炎症性細胞、媒介物質、ならびに、気道に存在するその他の細胞および組織間の複雑な相互作用の結果生じる可能性が高いことが明らかになった。肥満細胞、好酸球、上皮細胞、マクロファージ、および、活性化Ｔ細胞はいずれも、喘息に関連する炎症性のプロセスにおいて重要な役割を果たす。Ｄｊｕｋａｎｏｖｉｃ Ｒ等（１９９０）Ａｍ Ｒｅｖ Ｒｅｓｐｉｒ Ｄｉｓ １４２：４３４〜４５７。これらの細胞は、局所組織に直接的または間接的に作用することができる予め形成された、および、新たに合成された媒介物質の分泌によって気道の機能に影響を与えることができると考えられる。また、Ｔリンパ球（Ｔｈ２）の部分集団は、選択的なサイトカインを放出することによって気道におけるアレルギー性炎症の調節に重要な役割を果たし、病気の慢性化を確立することも認識されている。Ｒｏｂｉｎｓｏｎ ＤＳ等（１９９２）Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ３２６：２９８〜３０４。
【０１１０】
喘息は、発達中の様々な段階で発生する複合的な障害であり、急性、亜急性または慢性のように症状の程度に基づいて分類することができる。急性の炎症性応答は、初期に細胞が気道へ補充されることに関連する。亜急性の炎症性応答は、細胞の補充、それに加えて、より持続的な炎症パターンを引き起こす常在する細胞の活性化に関与する。慢性の炎症性応答は、持続的なレベルの細胞損傷、および、進行中の修復プロセスを特徴とし、気道内で永続的な異常を引き起こす可能性がある。
【０１１１】
「喘息を有する被検体」は、炎症および気道狭窄、ならびに、気道における吸入用薬剤への反応性の増加を特徴とする呼吸器系の障害を有する被検体である。喘息の開始に関連する因子としては、これらに限定されないが、アレルゲン、冷温、運動、ウイルス感染、および、ＳＯ_２が挙げられる。
【０１１２】
上述したように、喘息は、Ｔｈ２型の免疫応答に関連する可能性があり、このＴｈ２型の免疫応答は、少なくとも部分的にＴｈ２サイトカインＩＬ−４、および、ＩＬ−５、加えてＩｇＥに切り換える抗体のアイソタイプを特徴とする。Ｔｈ１およびＴｈ２型の免疫応答は、相互に逆調節性であることによって、免疫応答をＴｈ１型の免疫応答にそらして、アレルギーを含むＴｈ２型の免疫応答を予防または改善することができる。従って、本発明の修飾オリゴヌクレオチド類似体は、免疫応答をそらすＴｈ１型の免疫応答にことができるため、それ自身、喘息を有する被検体を治療するのに有用である。その代わりに、または、それに加えて、本発明の修飾オリゴヌクレオチド類似体は、アレルゲンと組み合わせて、喘息を有する被検体を治療するのに用いることができる。
【０１１３】
また本発明の免疫刺激性組成物は、喘息治療薬と共に投与してもよい。従来の喘息の治療または予防方法は、抗アレルギー治療薬（上述の）、および、吸入用薬剤などの多数のその他の物質の使用が必要であった。
【０１１４】
喘息の治療のための薬物療法は、一般的に、２つのカテゴリー、すなわち迅速に緩和するタイプの薬物療法、および、長期にわたりコントロールするタイプの薬物療法に分けられる。長期にわたりコントロールするタイプの薬物療法は、持続性の喘息のコントロールを達成し、それを維持するために喘息の患者に毎日施される。長期にわたりコントロールするタイプの薬物療法としては、抗炎症薬、例えばコルチコステロイド、クロモリンナトリウム、および、ネドクロミル；持続型の気管支拡張剤、例えば持続型のβ_２−アゴニスト、および、メチルキサンチン；および、ロイコトリエン調節剤が挙げられる。迅速に緩和するタイプの薬物療法としては、短時間作用型のβ_２アゴニスト、抗コリン作動薬、および、全身性コルチコステロイドが挙げられる。これらの薬物それぞれに伴う多くの副作用があり、喘息を予防すること、または、喘息を完全に治療することができる薬物は、単独でも、または、組み合わせても存在しない。
【０１１５】
喘息治療薬としては、これらに限定されないが、ＰＤＥ−４阻害剤、気管支拡張剤／ベータ−２アゴニスト、Ｋ＋チャネル開口薬、ＶＬＡ−４アンタゴニスト、ニューロキンアンタゴニスト、トロンボキサンＡ２（ＴＸＡ２）合成阻害剤、キサンチン、アラキドン酸アンタゴニスト、５リポキシゲナーゼ阻害剤、ＴＸＡ２受容体アンタゴニスト、ＴＸＡ２アンタゴニスト、５−リポキシ活性化タンパク質の阻害剤、および、プロテアーゼ阻害剤が挙げられる。
【０１１６】
気管支拡張剤／β_２アゴニストは、気管支拡張または平滑筋の弛緩を引き起こす化合物クラスである。気管支拡張剤／β_２アゴニストとしては、これらに限定されないが、サルメテロール、サルブタモール、アルブテロール、テルブタリン、Ｄ２５２２／ホルモテロール、フェノテロール、ビトルテロール、ピルブテロール（ｐｉｒｂｕｅｒｏｌ）メチルキサンチン、および、オルシプリナリンが挙げられる。持続型β_２アゴニスト、および、気管支拡張剤は、抗炎症性の治療に加えて、長期間の症状の予防に用いられる化合物である。持続型β_２アゴニストとしては、これらに限定されないが、サルメテロール、および、アルブテロールが挙げられる。これらの化合物は、コルチコステロイドと併用されることが一般的であり、炎症の治療薬と併用することなく用いられることは通常ない。これらは、頻脈、骨格筋の震え、低カリウム血症、および、過量でのＱＴｃ間隔の延長のような副作用を伴うことがあった。
【０１１７】
例えばテオフィリンなどのメチルキサンチンは、症状の長期間のコントロールおよび予防に用いられてきた。これらの化合物は、ホスホジエステラーゼ阻害によって生じる気管支拡張を引き起こし、さらにアデノシン拮抗作用によって生じる可能性もある。これらのタイプの化合物が有する具体的な問題は、用量依存性の急性毒性である。結果として、代謝クリアランスの個人差から生じる毒性、および、制限された治療域を考慮するために、血清濃度を定期的にモニターしなければならない。副作用としては、頻脈、頻拍性不整脈、吐き気、および、嘔吐、中枢神経系の刺激、頭痛、発作、吐血、高血糖症、および、低カリウム血症が挙げられる。短時間作用型のβ_２アゴニストとしては、これらに限定されないが、アルブテロール、ビトルテロール、ピルブテロール、および、テルブタリンが挙げられる。短時間作用型のβ_２アゴニスト投与に伴う有害作用のいくつかとしては、頻脈、骨格筋の震え、低カリウム血症、乳酸の増加、頭痛、および、高血糖症が挙げられる。
【０１１８】
クロモリンナトリウムおよびネドクロミルは、主として、運動またはアレルゲンに起因するアレルギーの症状から生じる喘息の症状を予防するために長期にわたりコントロールするタイプの薬物療法として用いられる。これらの化合物は、塩素チャネルの機能を妨害することによってアレルゲンに対する初期および後期の反応をブロックすると考えられる。さらにこれらは、肥満細胞膜も安定化させ、媒介物質の活性化、および、それらのイノシネオフィル（ｉｎｏｓｉｎｅｏｐｈｉｌ）および上皮細胞からの放出を阻害する。最大の効果を達成するには、一般的に４〜６週間の投与が必要である。
【０１１９】
抗コリン作用薬は、一般的に、急性気管支痙攣の軽減に用いられる。これらの化合物は、ムスカリン様コリン作用性受容体の競合阻害によって機能すると考えられる。抗コリン作用薬としては、これらに限定されないが、臭化イプラトロピウムが挙げられる。これらの化合物は、コリン作用が介在する気管支痙攣のみに拮抗し、抗原に対するいかなる反応も改変することはない。副作用としては、口の渇き、および、呼吸分泌物、人によっては喘鳴の増加が挙げられ、さらに、目に噴霧された場合は視力障害もある。
【０１２０】
また本発明のＡクラスの修飾オリゴヌクレオチドは、気道リモデリングを治療するのにも有用な可能性がある。気道リモデリングは、気道における平滑筋細胞増殖および／または粘膜下の肥厚によって生じ、最終的には気道狭窄を引き起こし、空気流が制限される。本発明のＡクラスの修飾オリゴヌクレオチドは、さらなるリモデリングを予防することが可能であり、場合によってはリモデリングプロセスによって生じる組織形成をさらに減少させることもあり得る。
【０１２１】
一形態において、本発明は、免疫系の不全を有する被検体の治療方法を提供する。本発明のこの形態に係る方法は、被検体に、被検体を治療するのに有効な量の本発明の組成物を投与する工程を含む。本明細書で用いられる「免疫系の不全」は、被検体の免疫系が通常の能力で機能しない病気または障害、または、被検体の免疫応答を高めること、例えば被検体の腫瘍もしくは癌または感染を除去することが有効性を示す可能性がある病気または障害を意味する。免疫不全を有する被検体としては、後天性免疫不全を有する被検体、加えて、先天性免疫不全を有する被検体が挙げられる。後天性免疫不全を有する被検体としては、これらに限定されないが、慢性炎症性の状態を有する被検体、慢性腎機能不全または腎不全を有する被検体、感染を有する被検体、癌を有する被検体、免疫抑制薬を摂取している被検体、その他の免疫抑制治療を受けている被検体、および、栄養不良の被検体が挙げられる。一実施態様において、上記被検体は、抑制されたＣＤ４＋Ｔ細胞群を有する。一実施態様において、上記被検体は、ヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ）に感染しているか、または、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）を有する。従って、本発明のこの形態に係る方法は、より強力な免疫応答が必要な被検体において免疫応答を高める、または、免疫応答を発生させる能力を高める方法を提供する。
【０１２２】
また本発明の組成物は、非核酸アジュバントと共に投与してもよい。非核酸アジュバントとは、本明細書において説明されるＡクラスの修飾オリゴヌクレオチド以外の、体液性および／または細胞性免疫応答を刺激することができるあらゆる分子または化合物である。非核酸アジュバントとしては、例えば、持続作用をもたらすアジュバント、 免疫を刺激するアジュバント、および、持続作用をもたらし免疫系を刺激するアジュバントが挙げられる。
【０１２３】
またＡクラスの修飾オリゴヌクレオチドは、粘膜アジュバントとしても有用である。これまでに、全身性および粘膜の免疫はいずれも、ＣｐＧオリゴヌクレオチドの粘膜送達により誘導されることが発見されている。従って、本オリゴヌクレオチドは、その他の粘膜アジュバントと組み合わせて投与してもよい。
【０１２４】
また免疫応答は、Ａクラスの修飾オリゴヌクレオチドと共に、サイトカインの共投与または共直線性の発現（Ｂｕｅｌｅｒ ＆ Ｍｕｌｌｉｇａｎ，１９９６；Ｃｈｏｗ等，１９９７；Ｇｅｉｓｓｌｅｒ等，１９９７；Ｉｗａｓａｋｉ等，１９９７；Ｋｉｍ等，１９９７）、または、共刺激分子、例えばＢ７（Ｉｗａｓａｋｉ等，１９９７；Ｔｓｕｊｉ等，１９９７）によって誘導または増大させることができる。サイトカインという用語は、ナノ〜ピコモル濃度で体液性の調節因子として作用し、正常な状態または病的な状態のいずれにおいても個体の細胞および組織の機能的な活性を調節する可溶性タンパク質およびペプチドの多様な群の一般名として用いられる。このようなタンパク質はまた、細胞間の相互作用にも直接介在しており、細胞外の環境で起こるプロセスを調節する。サイトカインの例としては、これらに限定されないが、ＩＰ−１０、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）、ＩＦＮ−α、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、ＴＧＦ−β、ＦＬＴ−３リガンド、および、ＣＤ４０リガンドが挙げられる。サイトカインに加えて、ＣｐＧオリゴヌクレオチドを、所定のサイトカインに対する抗体、例えば抗ＩＬ−１０および抗ＴＧＦ−β、加えてＣｏｘ阻害剤、すなわちＣＯＸ−１およびＣＯＸ−２阻害剤と組み合わせて用いてもよい。
【０１２５】
また本発明のＡクラスの修飾オリゴヌクレオチドは、樹状細胞の生存、分化、活性化および成熟の改善にも有用である。本免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、樹状細胞の細胞生存、分化、活性化および成熟を促進する特有の能力を有する。
【０１２６】
また本発明のＡクラスの修飾オリゴヌクレオチドは、ナチュラルキラー細胞の溶解作用、および、抗体依存性細胞障害（ＡＤＣＣ）も増加させる。ＡＤＣＣは、Ａクラスの修飾オリゴヌクレオチドを、癌細胞のような細胞標的に特異的な抗体と併用して行うことができる。このような抗体と共にＡクラスの修飾オリゴヌクレオチドが被検体に投与されると、腫瘍細胞を殺すように被検体の免疫系が誘導される。ＡＤＣＣ法において有用な抗体としては、体内の細胞と相互作用する抗体が挙げられる。このような細胞標的に特異的な抗体の多くは当業界において説明されており、多くは市販されている。一実施態様において、このような抗体は、ＩｇＧ抗体である。
【０１２７】
特定の形態において、本発明は、エピトープ拡散を強化する方法を提供する。本明細書で用いられる「エピトープ拡散（ｅｐｉｔｏｐｅ ｓｐｒｅａｄｉｎｇ）」は、最初に目標となった自己または外来タンパク質に対して向けられた優勢なエピトープに特異的な免疫応答からの、そのタンパク質（分子内の拡散）において、または、その他のタンパク質（分子間の拡散）において亜優占種の、および／または潜在的なエピトープへの、エピトープの特異性の多様化を意味する。エピトープ拡散によって、複数のエピトープ特異的な免疫応答が起こる。
【０１２８】
このような免疫応答は、初期の拡大相（この相は、自己免疫疾患のような場合は有害にもなり得るし、または、ワクチン接種のような場合は有益になり得る）、および、免疫系をホメオスタシスに戻し、記憶を生成する後期のダウンレギュレート相からなる。エピトープ拡散は、どちらの相においても重要な要素である可能性がある。腫瘍の場合におけるエピトープ拡散を強化すれば、被検体の免疫系において、最初のうちは元の治療手順に応答して免疫系によって認識されない標的エピトープを追って決定することが可能になり、同時に、腫瘍群中の変異体が逸散する可能性を低くするため、病気の進行に影響を与えることができる。
【０１２９】
本発明のオリゴヌクレオチドは、癌、ウイルスおよび細菌感染、ならびにアレルギーのような治療上有益な適応症におけるエピトープ拡散を促進するのに有用であり得る。一実施態様において、本方法は、被検体に、抗原およびアジュバントを含むワクチンを投与する工程、および、続いて、被検体に、少なくとも２種の用量の本発明のＡクラスの修飾オリゴヌクレオチドを、複数のエピトープ特異的な免疫応答を誘導するのに有効な量で投与することを含む。一実施態様において、本方法は、被検体に、腫瘍抗原およびアジュバントを含むワクチンを投与する工程、および、続いて、被検体に、少なくとも２種の用量の本発明のＡクラスの修飾オリゴヌクレオチドを、複数のエピトープ特異的な免疫応答を誘導するのに有効な量で投与することを含む。一実施態様において、本方法は、被検体において免疫系における抗原曝露が生じる治療手順を適用すること、続いて、複数のエピトープ特異的な免疫応答を誘導するために、すなわちエピトープ拡散を促進するために、本発明の免疫刺激性オリゴヌクレオチドを少なくとも２回投与することを含む。様々な実施態様において、このような治療手順は、外科手術、放射線、化学療法、その他の癌治療薬、ワクチン、または、癌ワクチンである。
【０１３０】
このような治療手順は、それに続く免疫刺激剤による治療に加えて、免疫刺激剤を併用して実施してもよい。例えば治療手順がワクチンの場合、ワクチンは、アジュバントと共に投与してもよい。ワクチンとアジュバントとの組み合わせは、混合物であってもよいし、または、投与を分けてもよく、すなわち注射によって（すなわち、同じドレナージ領域に）投与してもよい。投与は、必ずしも同時に行わななくてもよい。異なる時間に注射で投与される場合、そのタイミングは、アジュバントの予備的な注射、それに続くワクチン製剤の注射に関連する可能性がある。
【０１３１】
治療手順が実施された後、免疫刺激剤による単剤療法が開始される。最適化された頻度、持続時間および投与部位は標的およびその他の因子に依存すると予想されるが、例えば、６ヶ月〜２年の期間中に１月に１回〜２回の投与であり得る。あるいは、毎日、毎週、または、２週間に１回のペースで投与してもよいし、または、１日、１週または１月の間に複数回投与してもよい。場合によっては、投与期間は治療の長さに依存する場合があり、例えば、１週間、１ヶ月後に終了してもよいし、１年後、または、数年後に終了してもよい。その他の例において、単剤療法は、例えば点滴静注を用いて連続的に行ってもよい。免疫刺激剤は、標的に共通のドレナージ領域に投与してもよい。
【０１３２】
治療での使用の際には、化合物の活性、投与方式、免疫化の目的（すなわち、予防目的か、または、治療目的か）、障害の性質および重症度、被検体の年齢および体重に応じて様々な用量が被検体の治療に必要な場合がある。所定用量の投与は、別個になった用量単位の形態での１回の投与、または、数回のより少量の用量単位のいずれで行ってもよい。抗原特異的な免疫応答を高めるためには、週単位または月単位で間隔を置いた特定のインターバルで複数回の用量を投与することが一般的である。
【０１３３】
本明細書で示された教示と合わせて、特定の被検体を治療するために、様々な活性な化合物から選択すること、および、効力、相対的生物学的利用率、患者の体重、有害な副作用の重症度、および、好ましい投与様式のような要因を検討することによって、実質的な毒性を引き起こさず、さらに極めて有効な予防または治療的処置の処方計画を計画することができる。あらゆる特定の適用に対する有効量は、治療される病気または状態、投与される具体的な治療剤、被検体の大きさ、または、病気または状態の重症度のような要因に応じて様々であってよい。当業者であれば、特定の核酸および／またはその他の治療剤の有効量を、余計な実験を行うことなく経験的に決定することができる。
【０１３４】
本明細書において説明される化合物の被検体への用量は、典型的には約０．１μｇ〜１０，０００ｍｇ、より典型的には約１μｇ／日〜８０００ｍｇ、最も典型的には約１０μｇ〜１００μｇの範囲である。被検体の体重に関して述べれば、典型的な投与量は、約０．１μｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ／日、より典型的には約１〜１０ｍｇ／ｋｇ／日、最も典型的には約１〜５ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である。
【０１３５】
核酸および／またはその他の化合物を含む本医薬組成物は、薬物療法を施すためのあらゆる適切な経路によって投与することができる。様々な投与経路が利用可能である。当然ながら、選択された具体的な様式は、具体的な物質または選択された物質、治療される具体的な状態、および、治療効果に必要な用量に依存すると予想される。一般的に言えば、本発明の方法は、医学上許容できるどのような投与様式を用いて実施してもよく、すなわちこの投与様式とは、臨床的に許容できない有害作用を引き起こすことなく有効なレベルの免疫応答を生じるあらゆる様式を意味する。本明細書において、好ましい投与様式を考察する。治療に使用するために、核酸および／またはその他の治療剤の有効量は、望ましい表面（例えば粘膜、全身）に上記物質が送達されるあらゆる様式で被検体に投与することができる。
【０１３６】
本発明の医薬組成物の投与は、当業者既知のどのような手段で達成してもよい。投与経路としては、これらに限定されないが、経口、非経口、静脈内、筋肉内、腹膜内、鼻腔内、舌下、気管内、吸入法、皮下、眼、膣および直腸投与が挙げられる。喘息またはアレルギーを治療または予防するためには、このような化合物は、好ましくは、吸入、摂取によって、または、全身性の経路によって投与してもよい。全身性の経路としては、経口および非経口の経路が挙げられる。いくつかの実施態様において、吸入による薬物療法は、主として喘息患者において炎症部位である肺へ直接送達されるために好ましい。吸入法による投与には、数種のタイプの装置が定期的に用いられる。これらのタイプの装置としては、定量吸入器（ＭＤＩ）、吸気作動式ＭＤＩ、乾燥粉末吸入器（ＤＰＩ）、ＭＤＩおよびネブライザーと組み合わせたスペーサー／ホールディングチャンバーが挙げられる。
【０１３７】
本発明の治療剤は、ベクターを用いて、特定の組織、細胞型もしくは免疫系へ、またはそのの両方に送達することができる。「ベクター」とは、最も広い意味で、本組成物の標的細胞への移動を容易にすることができるあらゆる媒体のことである。ベクターは、一般的に、免疫刺激性の核酸、抗体、抗原および／または障害に特異的な医薬品を、ベクター非存在下で生じ得る分解の程度に比べて低い分解の程度で標的細胞に輸送する。
【０１３８】
一般的に、本発明において有用なベクターは、２つのクラス：生物学的なベクター、および、化学的／物理的なベクターに分類される。生物学的なベクター、および、化学的／物理的なベクターは、本発明の治療剤の送達および／または取り込みにおいて有用である。
【０１３９】
ほとんどの生物学的なベクターは、核酸の送達に用いられ、これは、免疫刺激性の核酸そのもの、または、免疫刺激性の核酸を含む治療剤の送達において最も適切であると思われる。
【０１４０】
本明細書において考察される生物学的なベクターに加えて、化学的／物理的なベクターを用いて、免疫刺激性の核酸、抗体、抗原、および、障害に特異的な医薬品などの治療剤を送達してもよい。本明細書で用いられるように、「化学的／物理的なベクター」とは、核酸および／またはその他の医薬品を運搬することができる、細菌学的な源またはウイルス源から誘導されたもの以外の天然または合成分子を意味する。
【０１４１】
本発明の好ましい化学的／物理的なベクターは、コロイド分散系である。コロイド分散系としては、水中油型エマルジョン、ミセル、混合ミセル、および、リポソームなどの脂質ベースの系が挙げられる。本発明の好ましいコロイド系は、リポソームである。リポソームは、インビボまたはインビトロでの送達ベクターとして有用な人工膜装置である。サイズが０．２〜４．０μｍの範囲である一枚膜リポソーム（ｌａｒｇｅ ｕｎｉｌａｍｅｌｌａｒ ｖｅｓｉｃｌｅ）（ＬＵＶ）が、大きい高分子を封入することができることが示されている。その水性の内部に、ＲＮＡ、ＤＮＡおよび無傷のビリオンを封入して、それらを生物学的に活性な形態で細胞に送達することができる。Ｆｒａｌｅｙ等（１９８１）Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｓｃｉ ６：７７。
【０１４２】
リポソームをモノクローナル抗体、糖、グリコリピドまたはタンパク質のような特異的なリガンドにカップリングすることによって、リポソームを特定の組織に標的化することができる。リポソームを免疫細胞に標的化するのに有用な可能性があるリガンドとしては、これらに限定されないが、免疫細胞に特異的な受容体と相互作用する分子の完全体または断片、および、抗体のような、免疫細胞の細胞表面のマーカーと相互作用する分子が挙げられる。このようなリガンドは、当業者周知の結合分析によって容易に同定することができる。さらに他の実施態様において、このようなリポソームは、リポソームを上記で考察された免疫療法のための抗体の１種にカップリングすることによって癌に標的化することもできる。加えて、上記ベクターを核を標的とするペプチドにカップリングして、ベクターを宿主細胞の細胞核に向かわせることもできる。
【０１４３】
トランスフェクションのための脂質調合物が、キアゲン（ＱＩＡＧＥＮ）から市販されており、例えば、ＥＦＦＥＣＴＥＮＥ^ＴＭ（特殊なＤＮＡ濃縮エンハンサーを有する非リポソーム性の脂質）、および、ＳＵＰＥＲＦＥＣＴ^ＴＭ（新規の活性なデンドリマー技術）がある。
【０１４４】
リポソームは、ギブコ・ＢＲＬ（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ）から例えばＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ^ＴＭ、および、ＬＩＰＯＦＥＣＴＡＣＥ^ＴＭとして市販されており、これらは、Ｎ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）−プロピル］−Ｎ、Ｎ、Ｎ−トリメチルアンモニウム塩化物（ＤＯＴＭＡ）、および、ジメチルジオクタデシルアンモニウム臭化物（ＤＤＡＢ）のようなカチオン脂質の形態から形成される。リポソームの製造方法は当業界周知であり、多くの出版物で説明されている。またリポソームは、Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ Ｇ（１９８５）Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ３：２３５〜２４１でも総論されている。
【０１４５】
所定のカチオン脂質、例えば、具体的にはＮ−［１−（２，３ジオレイルオキシ）−プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムメチル硫酸塩（ＤＯＴＡＰ）は、本発明の修飾オリゴヌクレオチド類似体と組み合わせると特に有利であるとみられる。
【０１４６】
一実施態様において、このような媒体は、哺乳動物であるレシピエントへの埋め込みまたは投与に適している生体適合性の微粒子またはインプラントである。この方法に従って有用な生浸食性の（ｂｉｏｅｒｏｄｉｂｌｅ）インプラントの典型例は、ＰＣＴ国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ／０３３０７号（公報番号ＷＯ９５／２４９２９、名称は「Ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ Ｇｅｎｅ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍ」）で説明されているＰＣＴ／ＵＳ／０３０７は、適切なプロモーターの制御下で外因性遺伝子を包含させるための、生体適合性の、好ましくは生分解性高分子マトリックスを説明している。このような高分子マトリックスを用いて、被検体内での治療剤の持続放出を達成することができる。
【０１４７】
好ましくは、高分子マトリックスは、マイクロスフェア（ここで核酸および／またはその他の治療剤は、固体の高分子マトリックス内全体に分散される）、または、マイクロカプセル（ここで核酸および／またはその他の治療剤は、高分子シェルのコア内に保存される）のような微粒子の形態である。治療剤を包含させるためのその他の高分子マトリックスの形態としては、フィルム、コーティング、ゲル、インプラント、および、ステントが挙げられる。高分子マトリックス装置のサイズおよび組成は、マトリックスが導入される組織中で好都合な解離動態が生じるように選択される。高分子マトリックスのサイズはさらに、用いられる送達方法に従って選択され、このような送達方法は、典型的には、組織への注射、または、鼻および／または肺の領域へのエアロゾルによる懸濁液の投与である。好ましくは、エアロゾル経路が用いられる場合、高分子マトリックス、ならびに核酸および／またはその他の治療剤は、界面活性剤である媒体に包含される。高分子マトリックスの組成を、好都合な分解速度を有し、さらに、生体接着性の材料から形成されるように選択することによって、マトリックスが傷害を受けた鼻および／または肺の表面に投与される場合に移動の有効性が高くすることができる。またマトリックスの組成は、崩壊するのではなく、長期間にわたり拡散によって放出されるように選択してもよい。いくつかの好ましい実施態様において、本核酸は、インプラントによって被検体に投与され、一方その他の治療剤は短時間で投与される。経口送達または粘膜への送達のような送達に適した生体適合性のマイクロスフェアが、Ｃｈｉｃｋｅｒｉｎｇ等（１９９６）Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｂｉｏｅｎｇ ５２：９６〜１０１、および、Ｍａｔｈｉｏｗｉｔｚ Ｅ等（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ ３８６：４１０〜４１４、および、ＰＣＴ特許出願ＷＯ９７／０３７０２で開示されている。
【０１４８】
非生分解性および生分解性高分子マトリックスのどちらを用いても、本核酸および／またはその他の治療剤を被検体に送達することができる。好ましくは、生分解性のマトリックスである。このような高分子は、天然高分子でもよいし、または、合成高分子でもよい。このような高分子は、望ましい放出がなされる期間に基づいて選択され、一般的に数時間から数年の規模であり、または、それより長くてもよい。典型的には、数時間から３〜１２ヶ月の範囲の期間にわたる放出が、本核酸物質にとって最も望ましい。このような高分子は、任意に、水中でその重量の約９０％まで吸収することができるヒドロゲルの形態でもよいし、さらに、任意に、多価イオン、またはその他のポリマーで架橋されていてもよい。
【０１４９】
特に興味深い生体接着性ポリマーとしては、Ｈ．Ｓ．Ｓａｗｈｎｅｙ，Ｃ．Ｐ．ＰａｔｈａｋおよびＪ．Ａ．Ｈｕｂｅｌｌ ｉｎ Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，（１９９３）２６：５８１〜５８７（その教示は、本明細書に包含される）で説明されている生浸食性のヒドロゲルが挙げられる。このようなものとしては、ポリヒアルロン酸、カゼイン、ゼラチン、グルチン、ポリ無水物、ポリアクリル酸、アルギン酸塩、キトサン、ポリ（メチルメタクリラート）、ポリ（エチルメタクリラート）、ポリ（ブチルメタクリラート）、ポリ（イソブチルメタクリラート）、ポリ（ヘキシルメタクリラート）、ポリ（イソデシルメタクリラート）、ポリ（ラウリルメタクリラート）、ポリ（フェニルメタクリラート）、ポリ（メチルアクリラート）、ポリ（イソプロピルアクリラート）、ポリ（イソブチルアクリラート）、および、ポリ（オクタデシルアクリラート）が挙げられる。
【０１５０】
治療剤が核酸である場合、凝集剤の使用も望ましい場合がある。また凝集剤は、単独で用いてもよいし、または、生物学的または化学的／物理的なベクターと組み合わせて用いてもよい。本明細書で用いられる「凝集剤」は、核酸の負電荷を中和することによって、核酸を微細な顆粒に圧縮できるようにする物質を意味し、例えばヒストンである。核酸を圧縮すると、標的細胞による核酸の取り込みが容易になる。凝集剤は、単独で用いてもよく、すなわち細胞により効率的に取り込まれるような形態で核酸を送達することができ、または、より好ましくは、１種またはそれより多くの上述のベクターと組み合わせて用いてもよい。
【０１５１】
核酸の取り込みを容易にするのに用いることができるその他の典型的な組成物としては、リン酸カルシウム、およびその他の細胞内輸送の化学的媒介物質、マイクロインジェクション用の組成物、エレクトロポレーションおよび相同組換え用の組成物（例えば、標的細胞の染色体内の予め選択された位置に核酸を統合するための組成物）が挙げられる。
【０１５２】
このような化合物は、単独で（例えば、塩類溶液または緩衝液中で）投与してもよいし、または、当業界既知のあらゆる運搬手段を用いて投与してもよい。例えば以下の運搬手段が説明されている：渦巻型の手段（ｃｏｃｈｌｅａｔｅ）（Ｇｏｕｌｄ−Ｆｏｇｅｒｉｔｅ等，１９９４，１９９６）；Ｅｍｕｌｓｏｍｅｓ（Ｖａｎｃｏｔｔ等，１９９８，Ｌｏｗｅｌｌ等，１９９７）；ＩＳＣＯＭ（Ｍｏｗａｔ等，１９９３，Ｃａｒｌｓｓｏｎ等，１９９１，Ｈｕ ｅｔ．，１９９８，Ｍｏｒｅｉｎ等，１９９９）；リポソーム（Ｃｈｉｌｄｅｒｓ等，１９９９，Ｍｉｃｈａｌｅｋ等，１９８９，１９９２，ｄｅ Ｈａａｎ １９９５ａ，１９９５ｂ）；生細菌のベクター（例えば、サルモネラ、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、カルメット−ゲラン杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｃａｌｍｅｔｔｅ−Ｇｕeｒｉｎ）、シゲラ、乳酸菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ））（Ｈｏｎｅ等，１９９６，Ｐｏｕｗｅｌｓ等，１９９８，Ｃｈａｔｆｉｅｌｄ等，１９９３，Ｓｔｏｖｅｒ等，１９９１，Ｎｕｇｅｎｔ等，１９９８）；非ウイルスベクター（例えば、ワクシニア、アデノウイルス、単純ヘルペス）（Ｇａｌｌｉｃｈａｎ等，１９９３，１９９５，Ｍｏｓｓ等，１９９６，Ｎｕｇｅｎｔ等，１９９８，Ｆｌｅｘｎｅｒ等，１９８８，Ｍｏｒｒｏｗ等，１９９９）；マイクロスフェア（Ｇｕｐｔａ等，１９９８，Ｊｏｎｅｓ等，１９９６，Ｍａｌｏｙ等，１９９４，Ｍｏｏｒｅ等，１９９５，Ｏ’Ｈａｇａｎ等，１９９４，Ｅｌｄｒｉｄｇｅ等，１９８９）；核酸ワクチン（Ｆｙｎａｎ等，１９９３，Ｋｕｋｌｉｎ等，１９９７，Ｓａｓａｋｉ等，１９９８，Ｏｋａｄａ等，１９９７，Ｉｓｈｉｉ等，１９９７）；ポリマー（例えば、カルボキシメチルセルロース、キトサン）（Ｈａｍａｊｉｍａ等，１９９８，Ｊａｂｂａｌ−Ｇｉｌｌ等，１９９８）；ポリマーリング（ｐｏｌｙｍｅｒ ｒｉｎｇ）（Ｗｙａｔｔ等，１９９８）；プロテオソーム（Ｖａｎｃｏｔｔ等，１９９８，Ｌｏｗｅｌｌ等，１９８８，１９９６，１９９７）；フッ化ナトリウム（Ｈａｓｈｉ等，１９９８）；トランスジェニック植物（Ｔａｃｋｅｔ等，１９９８，Ｍａｓｏｎ等，１９９８，Ｈａｑ等，１９９５）；ビロゾーム（ｖｉｒｏｓｏｍｅ）（Ｇｌｕｃｋ等，１９９２，Ｍｅｎｇｉａｒｄｉ等，１９９５，Ｃｒｙｚ等，１９９８）；および、ウイルス様粒子（Ｊｉａｎｇ等，１９９９，Ｌｅｉｂｌ等，１９９８）。
【０１５３】
本発明の調合物は、製薬上許容できる溶液の形態で投与され、このような溶液には、慣例的手順で、製薬上許容できるの濃度の塩、緩衝剤、保存剤、適合性のキャリアー、アジュバント、および、任意にその他の治療用成分を含ませることができる。
【０１５４】
製薬上許容できるキャリアーという用語は、ヒトまたはその他の脊椎動物に投与するのに適した１種またはそれより多くの適合性の固形または液状充填剤、希釈剤、または、カプセル封入剤を意味する。キャリアーという用語は、活性成分の適用が容易になるようにそれらが混合される、天然または合成の有機または無機物質成分を意味する。また本医薬組成物のコンポーネントは、望ましい薬剤の効率を実質的に損なう可能性がある相互作用が起こらないように本発明の化合物と混合してもよいし、これらのコンポーネントを互いに混合してもよい。
【０１５５】
経口投与のためには、上記化合物（すなわち、核酸、抗原、抗体、および、その他の治療剤）は、活性な化合物と当業界周知の製薬上許容できるキャリアーとを混合することによって容易に製剤化することができる。このようなキャリアーによって、本発明の化合物を、治療しようとする被検体が経口摂取するための錠剤、丸剤、糖衣錠、カプセル、液体、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁液などとして製剤化することが可能になる。経口で使用するための医薬製剤は、固形賦形剤として得ることができ、任意に、得られた混合物を粉砕して、必要に応じて適切な助剤を添加した後に顆粒の混合物を加工して、錠剤または糖衣錠コアを形成してもよい。適切な賦形剤は、具体的には、糖類のような充填剤、例えばラクトース、スクロース、マンニトール、または、ソルビトール；セルロース調製物、例えばトウモロコシデンプン、コムギデンプン、米デンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、および／または、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）である。必要に応じて崩壊剤を添加してもよく、このような崩壊剤としては、架橋されたポリビニルピロリドン、寒天、または、アルギン酸もしくはそれらの塩、例えばアルギン酸ナトリウムが挙げられる。任意に、経口製剤はまた、製剤中の酸性状態を中和するための塩類溶液または緩衝液中で製剤化してもよいし、または、キャリアーをまったく用いないで投与してもよい。
【０１５６】
糖衣錠コアには、適切なコーティングが提供される。この目的のために、濃縮した糖溶液を用いてもよく、このような濃縮した糖溶液は、任意に、アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カーボポール（Ｃａｒｂｏｐｏｌ）ゲル、ポリエチレングリコール、および／または、二酸化チタン、ラッカー液、および、適切な有機溶媒または溶媒混合物を含んでいてもよい。識別するために、または、異なる活性な化合物の用量の組み合わせを特徴付けるために、錠剤または糖衣錠のコーティングに染料または顔料を添加してもよい。
【０１５７】
経口で用いることができる医薬製剤としては、ゼラチンで作製されたプッシュフィット式カプセル、加えて、ゼラチン、ならびに、グリセロールまたはソルビトールのような可塑剤で作製された軟質の封入カプセルが挙げられる。プッシュフィット式カプセルは、活性成分を、充填剤、例えばラクトース、結合剤、例えばスターチ、および／または、潤滑剤、例えばタルクまたはステアリン酸マグネシウム、および、任意に安定剤と混合された形態で含んでいてもよい。ソフトカプセル中において、活性な化合物は、脂肪油、流動パラフィンまたは、液状のポリエチレングリコールのような適切な液体に溶解または懸濁させてあってもよい。それに加えて安定剤を添加してもよい。また経口投与用に製剤化されたマイクロスフェアを用いてもよい。このようなマイクロスフェアは、当業界においてよく定義されている。経口投与のための製剤はいずれも、このような投与法に適した投与量で用いられる必要がある。
【０１５８】
口腔投与のためには、本組成物は、従来の方式で製剤化された錠剤またはロゼンジの形態をとっていてもよい。
吸入法による投与の場合、本発明に従って使用するための上記化合物は、適切な噴射剤、例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素、またはその他の適切なガスを使用して、加圧パックまたはネブライザーからエアロゾルスプレーを噴霧する形態で送達することが都合のよい形態であり得る。加圧エアロゾルの場合、定量を送達するためのバルブを設けることによって投与単位を決定してもよい。吸入器または吹き付け器に使用するための、例えばゼラチン製のカプセルおよびカートリッジは、上記化合物、および、適切な粉末ベース（例えばラクトースまたはスターチ）の粉末混合物を含ませて製剤化してもよい。
【０１５９】
上記化合物は、それらを全身に送達することが望ましい場合、注射、例えば大量注射または持続点滴による非経口投与のために製剤化してもよい。注射用製剤は、１回投与量の場合は例えばアンプルの形態で提供してもよいし、または、保存剤を添加した複数回投与用の容器の形態で提供してもよい。本組成物は、油性または水性媒体中の懸濁液、溶液またはエマルジョンのような形態をとることもでき、さらに、懸濁剤、安定剤および／または分散剤のような成形剤を含んでいてもよい。
【０１６０】
非経口投与のための医薬製剤としては、水溶性の形態の活性な化合物の水溶液が挙げられる。加えて、活性な化合物の懸濁液は、適切な油性懸濁注射液として製造してもよい。適切な親油性溶媒または媒体としては、脂肪油、例えばゴマ油、または、合成脂肪酸エステル、例えばオレイン酸エチル、もしくは、トリグリセリド、または、リポソームが挙げられる。水性懸濁注射液は、懸濁液の粘度を高める物質を含んでいてもよく、このような物質としては、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、または、デキストランが挙げられる。任意に、懸濁液はまた、適切な安定剤、または、上記化合物の溶解性を高める物質を含んでいてもよく、それにより高度に濃縮された溶液の製造が可能になる。
【０１６１】
あるいは、活性な化合物は、使用前に適切な媒体（例えば滅菌パイロジェンフリー水）と共に構成するために、粉末形態であってもよい。
また上記化合物は、直腸または膣用の組成物として製剤化してもよく、このような製剤としては、例えば、カカオバターまたはその他のグリセリドのような従来の坐剤基剤を含む坐剤または保留浣腸が挙げられる。
【０１６２】
これまで説明した製剤に加えて、上記化合物はまた、デポ製剤として製剤化してもよい。このような持続型製剤は、適切な高分子材料または疎水性材料（例えば、許容できる油中のエマルジョンとして）、または、イオン交換樹脂を用いて製剤化してもよいし、または、難溶性の誘導体（例えば難溶性の塩）として製剤化してもよい。
【０１６３】
また本医薬組成物は、適切な固相またはゲル相キャリアー、または、賦形剤を含んでもよい。このようなキャリアーまたは賦形剤の例としては、これらに限定されないが、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、様々な糖類、スターチ、セルロース誘導体、ゼラチン、および、ポリエチレングリコールのようなポリマーが挙げられる。
【０１６４】
適切な液状または固形医薬製剤の形態は、例えば、吸入のための水溶液または食塩水の形態、マイクロカプセル化の形態、渦巻（ｅｎｃｏｃｈｌｅａｔｅｄ）の形態、顕微鏡レベルの金粒子上に被覆された形態、リポソーム中に内包された形態、噴霧された形態、エアロゾルの形態、皮膚に埋め込むためのペレットの形態、または、皮膚を引っ掻くために鋭利な物体上に乾燥させた形態である。また本医薬組成物は、顆粒、粉末、錠剤、コーティング錠剤、（マイクロ）カプセル、坐剤、シロップ、エマルジョン、懸濁液、クリーム、ドロップ、または、活性な化合物を長期にわたって放出させる製剤の形態が挙げられ、その製造において、賦形剤および添加剤、および／または、助剤、例えば崩壊剤、結合剤、コーティング剤、膨張剤、潤滑剤、矯味矯臭薬剤、甘味料、または、可溶化剤が、上述したように習慣的に用いられる。本医薬組成物は、様々な薬物送達システムへの使用に適している。薬物送達方法の簡単な総論としては、Ｌａｎｇｅｒ Ｒ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７〜１５３３を参照（参照することにより本明細書に含まれる）。
【０１６５】
本核酸、ならびに任意にその他の治療剤および／または抗原は、そのままの（純粋な）形態で投与してもよいし、または、製薬上許容できる塩の形態で投与してもよい。医薬品で用いられる場合、このような塩は製薬上許容できるものと予想されるが、製薬上許容できる塩以外のものも、それらの製薬上許容できる塩を製造するために都合よく用いられる可能性がある。このような塩としては、これらに限定されないが、以下の酸から製造された塩が挙げられる：塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、マレイン酸、酢酸、サリチル酸、ｐ−トルエンスルホン酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、ギ酸、マロン酸、コハク酸、ナフタレン−２−スルホン酸、および、ベンゼンスルホン酸。また、このような塩は、アルカリ金属またはアルカリ土類塩として製造することもでき、例えば、カルボン酸基のナトリウム、カリウムまたはカルシウム塩として製造することもできる。
【０１６６】
適切な緩衝剤としては、酢酸および塩（１〜２％ｗ／ｖ）；クエン酸および塩（１〜３％ｗ／ｖ）；ホウ酸および塩（０．５〜２．５％ｗ／ｖ）；および、リン酸および塩（０．８〜２％ｗ／ｖ）が挙げられる。適切な保存剤としては、塩化ベンザルコニウム（０．００３〜０．０３％ｗ／ｖ）；クロロブタノール（０．３〜０．９％ｗ／ｖ）；パラベン（０．０１〜０．２５％ｗ／ｖ）、および、チメロサール（０．００４〜０．０２％ｗ／ｖ）が挙げられる。
【０１６７】
本組成物は、１回投与量で提供されることが都合がよい場合があり、これは、薬学分野において周知の方法のいずれかによって製造することができる。いずれの方法も、上記化合物を、１種またはそれより多くの付属的な成分を構成するキャリアーに接触させる工程を含む。一般的に、本組成物は、上記化合物を、液状キャリアー、微粉化した固形キャリアー、または、その両方に均一かつ密接に接触させ、続いて、必要に応じて生成物を成形することによって製造される。液体の用量単位は、バイアルまたはアンプルである。固体の用量単位は、錠剤、カプセルおよび坐剤である。
【０１６８】
その他の送達システムとしては、徐放性、遅延放出、または、持続放出型の送達システムが挙げられる。このようなシステムによって、上記化合物の繰り返しの投与を避けることができるため、被検体および医師にとっての利便性を高めることができる。多くのタイプの放出送達システムが利用可能であり、当業者既知である。これらの例としては、ポリマーベースのシステム、例えばポリ（ラクチド−グリコリド）、コポリオキサラート、ポリカプロラクトン、ポリエステルアミド、ポリオルトエステル、ポリヒドロキシ酪酸、および、ポリ無水物が挙げられる。例えば米国特許第５，０７５，１０９号で、薬物を含む前述のポリマーのマイクロカプセルが説明されている。また送達システムとしてはさらに、以下のような非ポリマーシステムも挙げられる：ステロールなどの脂質、例えばコレステロール、コレステロールエステル、および、脂肪酸、または、中性脂肪、例えばモノ、ジおよびトリグリセリド；ヒドロゲル放出システム；シラスティック（Ｓｉｌａｓｔｉｃ）システム；ペプチドベースのシステム；ワックスコーティング；従来の結合剤および賦形剤を用いた圧縮錠剤；部分的に融合したインプラント；など。具体的には、これらに限定されないが、例えば以下が挙げられる：（ａ）例えば米国特許第４，４５２，７７５号、４，６７５，１８９号および５，７３６，１５２号で説明されているような、本発明の物質がマトリックス内に含まれる形態の浸食性のシステム、および、（ｂ）例えば米国特許第３，８５４，４８０号、５，１３３，９７４号および５，４０７，６８６号で説明されているような、ポリマーから活性成分が制御された速度で透過する拡散性のシステム。加えて、ポンプベースの硬質の送達システムを用いることができ、そのうちのいくつかは、埋め込みに適応されている。
【０１６９】
以下の実施例を用いて本発明をさらに説明するが、さらに制限するものとして解釈すべきではない。本願中で引用された全ての参考文献の全内容（例えば参考文献、発行された特許、公開された特許出願、および、同時係属中の特許出願など）は、参照により明示的に開示に含まれる。
【実施例】
【０１７０】
実施例１
配列番号２のＡクラスのＯＤＮの誘導体化により、インビトロでＩＦＮ−αを誘導する能力が高められたＯＤＮが生じる
配列番号２のＧ−リッチな混合型の主鎖オリゴヌクレオチドは、ＩＦＮ−α分泌の誘導において極めて有効であり、従って、癌および感染症のような強いＩＦＮ−α応答が有益となると予想されるヒトの病気を治療するのに使用可能であることが実証された。しかしながら、このオリゴヌクレオチドの開発は、このクラスの化合物の生物物理学的な特性に関連する所定の問題、例えば凝集しやすい傾向、低い溶解性、品質管理における難点、および、ＰＫの研究で用いられる固相抽出（ＳＰＥ）によって阻まれてきた。配列番号２は、その極めて効率的なＩＦＮ−α分泌の誘導、それと同時に低いＢ細胞への刺激を特徴とする。そのようなものとして、このようなオリゴヌクレオチドは、Ａクラスのオリゴヌクレオチドとして分類される。配列番号２は、ホスホロチオエート（Ｇ）_ｎストレッチによって固定されたパリンドロームのホスホジエステルＣｐＧ配列（ＡＣＧ ＡＣＧ ＴＣＧ Ｔ）からなる：
配列番号２：５’−Ｇ^＊Ｇ^＊Ｇ−Ｇ−Ａ−Ｃ−Ｇ−Ａ−Ｃ−Ｇ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−Ｔ−Ｇ−Ｇ^＊Ｇ^＊Ｇ^＊Ｇ^＊Ｇ^＊Ｇ
（^＊は、ホスホロチオエートであり、−は、ホスホジエステルである）。
【０１７１】
配列番号２の効力を有するが、このＧ−リッチなＯＤＮと比較してより好都合な生物物理学的な特性を有する新規のオリゴヌクレオチドを発見しようとする試みにおいて、Ｇ含量が少なく、ホスホロチオエート結合の数も少ない一連のオリゴヌクレオチドを設計し、試験した。
【０１７２】
５’−ＴＣＧモチーフを有するＯＤＮは、通常、ＴＬＲ９によって認識される。それゆえに、配列番号２の１０個のヌクレオチド、ＡＣＧ ＡＣＧ ＴＣＧ Ｔ パリンドロームを、８個のヌクレオチドからなるパリンドローム、ＴＣＧ ＡＣＧ ＴＣＧ Ｔ（表２の配列番号３を参照）に変換した。この短くしたＯＤＮを試験するために、ヒト末梢血液の単核細胞（ＰＢＭＣ）を健康なドナーから単離し、平板培養し、インビトロで様々な試験およびコントロール免疫促進剤で４８時間刺激した。４８時間後、上清を回収し、続いてＥＬＩＳＡ分析で解析した。驚くべきことに、配列番号３のＯＤＮに存在するこの短くしたパリンドローム配列は、配列番号２の１０個のヌクレオチドからなるパリンドローム全部を含む配列と比較してかなり高いＩＦＮ−α誘導を示した。配列番号３（長さが１５個のヌクレオチド）によるＩＦＮ−α分泌の誘導は、配列番号２（長さが２１個のヌクレオチド）による誘導（図１ｄ）と同等であるか（図１ａ〜１ｃ）、または、それよりも優れていた。また配列番号２および３も、ＩＦＮ−αの誘導に関して、Ｂクラス（配列番号４）、および、二重のパリンドロームのＣまたはＰクラス（配列番号１、６８、６９）よりもより優れていた。
【０１７３】
図１ｅは、配列番号３のＴＬＲ９を刺激する能力を示す。ヒトＴＬＲ９、または、マウスのＴＬＲ９を発現する安定してトランスフェクションされたＨＥＫ２９３細胞は、前述したとおりである。簡単に言えば、ＨＥＫ２９３細胞を、エレクトロポレーションによって、それぞれＴＬＲおよび６ｘＮＦ−_ＫＢ−ルシフェラーゼレポータープラスミドを発現するベクターでトランスフェクションした。加湿したインキュベーター中で、安定な形質転換体（３×１０^４細胞／ウェル）を、ＯＤＮと共に３７℃で１６時間インキュベートした。各データポイントは、３連で測定された。細胞を溶解させ、ルシフェラーゼ遺伝子活性に関して分析した（パーキン・エルマー（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ，ザヴェンテム，ベルギー）製のブライトライト（ＢｒｉｔｅＬｉｔｅ）キットを用いた）。ＯＤＮを添加していない培地のレポーター遺伝子活性を参照値として、刺激の指標を計算した。シグマ・プロット・プログラム（ＳＳＰＳ Ｉｎｃ．）を用いてＳ字形の回帰曲線（４つのパラメーター）を用いてＥＣ_５０値を計算した。ここでも、配列番号３は、配列番号２より長いパリンドロームを有するＯＤＮよりも大規模にＴＬＲ９活性を刺激した。
【０１７４】
配列番号２の多数の誘導体を作製し、それらのＩＦＮ−αおよびＩＬ−１０を誘導する能力に関して試験した。配列番号３に加えて、１種の切断され易いＯＤＮ（配列番号３２）、および、その全てがホスホロチオエートになった同等物（配列番号３３）、配列番号２のパリンドローム全部を含むＯＤＮ（配列番号３４）、および、２種のパリンドローム配列が欠失したＯＤＮ（配列番号３５〜３６）、および、３種のＧ_５配列が介在したＯＤＮ（配列番号３８）、または、Ｇ_４に減らした配列が介在したＯＤＮ（配列番号３７および３９）（表２を参照）も試験した。図２ａで示されるように、配列番号３に類似した配列を有する切断され易いオリゴヌクレオチド（配列番号３２）は、最大のＩＦＮ−α刺激をもたらした。配列番号３４は、配列番号２の完全なパリンドローム配列を有していたとしても、配列番号２よりも活性が低かった。単独のＧ_４配列は活性化には不十分であり、同様に配列番号３７も不活性化ではなかったが、配列番号３９は活性であった。図２ｂで示されるように、配列番号３２以外は、いずれのＯＤＮも有意なＩＬ−１０を誘導することができず、驚くべきことに配列番号３９が極めて強いＩＬ−１０誘導を示した。
【０１７５】
図２に示されるデータに基づいて多数のオリゴヌクレオチドを設計した（配列番号７〜３１）。これらのなかでも、配列番号１３が、ＩＦＮ−α（図３ａ〜３ｃ）およびＩＰ−１０（図３ｄ〜３ｆ）の両方を誘導する最も強い能力を示した。
【０１７６】
【表２】

【０１７７】
実施例２
新規のＡクラスのＯＤＮの親油性の誘導体作製
配列番号３の親油性の誘導体を誘導し、それらのＩＦＮ−αを誘導する能力に関して試験した。図４に、ＯＤＮの３’末端にヘキサデシルグリセリルエーテル、または、トリエチレングリコールを付加する工程の略図を示す。３’ポリＧモチーフの代わりに親油性のタグを有する配列番号３の２種の誘導体、すなわちヘキサデシルグリセリルエーテル成分を有する配列番号４０、および、トリエチレングリコール成分を有する配列番号４１を合成した（表２を参照）。次にこれらのＯＤＮをインビトロでＩＦＮ−αを誘導する能力に関して試験した。図５で示されるように、ヘキサデシルグリセリルエーテルタグを有するＯＤＮは、トリエチレングリコールタグを有するＯＤＮよりも優れた活性を示したが、どちらも配列番号２ほど多くのＩＦＮ−αを誘導しなかった。タグで修飾されたＯＤＮ（配列番号４１）の活性が低い理由は、それらの細胞への取り込みが、Ｇ−リッチ（配列番号３９）ＯＤＮ、または、親油性に修飾されたＯＤＮ（配列番号４０および配列番号４２）と比較して少ないことに起因する可能性がある。３’の修飾（タグ、ｈｅｘまたはｃｈｏｌ）による３’−エキソヌクレアーゼに対するＯＤＮの安定化単独では、優れた生物活性を得るには不十分であることを示すために、タグで修飾されたＯＤＮをコントロールとして選択した。
【０１７８】
図６に、ＯＤＮにコレステロールタグを付加する工程の略図を示す。コレステロールタグを用いて配列番号３の３種の誘導体を合成した。配列番号４２は、３’ポリＧモチーフの代わりにコレステロールタグを有し、ＯＤＮの末端結合は、ホスホロチオエート結合である。配列番号４３は、ホスホジエステル主鎖、および、３’コレステロールタグを有する。配列番号４４は、ホスホジエステル主鎖を有し、さらに５’および３’の両方にコレステロールタグを有する。ヒト末梢血液の単核細胞（ＰＢＭＣ）を健康なドナーから単離し、平板培養し、インビトロで様々な試験およびコントロール免疫促進剤で４８時間刺激した。４８時間後、上清を回収し、続いて、ＥＬＩＳＡ分析で解析した（図７ａ）。配列番号４３は、配列番号３または配列番号６のＣクラスのＣｐＧのＯＤＮの誘導に匹敵するレベルのＩＦＮ−αを誘導した。配列番号４２はかなり少ないＩＦＮ−αしか誘導せず、配列番号４４は、有意な量のＩＦＮ−αを誘導しなかった。この工程をＩＦＮ−α（図７ｂ）、および、ＩＬ−１０（図７ｃ）にも繰り返した。配列番号４２または４３はいずれも、有意な量のＩＬ−１０を誘導しなかった。
【０１７９】
実施例３
配列番号３のＡクラスの修飾ＯＤＮによるインビボでのサイトカイン誘導は、投与経路に依存する
インビボで免疫応答を誘導する配列番号３の能力を試験するために、Ｂａｌｂ／ｃマウスに、配列番号２〜４、加えて配列番号５０のその他のＡクラスのＯＤＮ、および、配列番号５１のネガティブコントロールＯＤＮを注射した。ＯＤＮは、皮下（ＳＣ）、静脈内（ＩＶ）または腹腔内（ＩＰ）に既定量のＯＤＮ（５００μｇ）を、または、肺内（ＩＰｕｌ）に既定量のＯＤＮ（２５０μｇ）を投与した。図８〜１０はそれぞれ、それにより生じたＩＰ−１０、ＩＬ−１２およびＩＬ−６のサイトカイン／ケモカインの刺激を示す。動物を３時間目（塗りつぶしのバー）、または、８時間目（斜線のバー）採血した。ＳＣ、ＩＰおよびＩＰｕｌ経路で投与した場合、配列番号３が、配列番号２および配列番号５０と比較して最も有効であったが、ＩＰおよびＩＰｕｌ経路によるＩＬ−６誘導の場合は、３種全てのＡクラスのＯＤＮが等しく有力であった。ＩＶ経路によるＩＰ−１０誘導を促進することにおいて、配列番号２は、試験された残りのＡクラスのＯＤＮ、加えて配列番号４のＢクラスのＯＤＮより優れていた。
【０１８０】
実施例４
配列番号３のＯＤＮの分子間の相互作用
オリゴヌクレオチド内の（Ｇ）_ｎストレッチ（ここでｎは４以上）により、不均一な高分子量の集合体が生成する分子間の４分子が形成されることがわかっている。（Ｇ）_ｎストレッチを有するオリゴヌクレオチドの取り込みは、凝集していないオリゴヌクレオチドよりも約２０〜４０倍高く、細胞内の局在性も異なっているようである。これらの観察がどのように生物活性と相関しているかはわかっていない。
【０１８１】
キャピラリーゲル電気泳動（ＣＧＥ）、および、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦマススペクトロメトリーで解析したところ、配列番号３のＯＤＮは、部分的な二量体形成を示した。ＵＶ−熱による変性から２つの変遷が明らかになり、これは、溶液中に２種の異なる構造的な種が存在することを示唆している。第一の種は、８２℃のＴｍで溶融し、第二の種は、４１℃のＴｍで溶融する。第一の種の溶融（８２℃）は、ＯＤＮ溶液が加熱されたときだけ観察されたが、それまでに加熱したＯＤＮ溶液を冷却するときには観察されなかった。サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって解析したところ、配列番号２は、高分子構造に凝集したことを示し、それによりＳＥＣにおいて多数の異なるピークを生じた。驚くべきことに、配列番号３は、ＧＧＧＧＧモチーフを含むにもかかわらず、低分子量の範囲（単量体または二量体の可能性がある）にしかピークを示さなかったが、原則的にそれでもなお分子内の４分子形成が生じる可能性がある。総合すると、配列番号３のＯＤＮは、５’−Ｔヌクレオチドによって安定化されているが、例えば配列番号２に存在する５’−Ａヌクレオチドによっては安定化されない（または、安定化が有意に低い）分子内の４分子を形成するようである。分子内構造は、ワトソン−クリックではない塩基対で安定化された２つの配列番号３の分子からなる。場合によっては、類似の分子内の４分子構造に折り畳まれ、高いＩＦＮ−α誘導を引き起こすと予想されるその代わりの配列を設計することも可能である。同様に、４分子形成を促進するＧまたはＴの代替ヌクレオシド（例えば、イノシン）での交換も、活性なＯＤＮを生じる可能性がある。
【０１８２】
表３に、Ａクラスの修飾ＯＤＮおよびその他のＯＤＮの一覧を提供する。
【０１８３】
【表３−１】

【０１８４】
【表３−２】

【０１８５】
等価物
以上に記載された明細書は、当業者が本発明を実施するのに十分であるとみなされる。実施例は、本発明の一形態の単なる説明として意図されており、その他の機能的に同等な実施態様も本発明の範囲内であるため、本発明は、提供された実施例によってその範囲が限定されないこととする。本明細書において示され説明されたものに加えて、本発明の様々な改変が、当業者であれば前述の説明から十分明らかであると思われ、それらは添付の請求項の範囲内に含まれる。本発明の利点および目的が、必ず本発明の各実施態様に包含されるわけではない。
【０１８６】
図面は説明のためだけに示されるのであり、本明細書において開示された本発明の実施に必須ではない。
【図面の簡単な説明】
【０１８７】
【図１ａ】図１は、短くしたＡクラスのオリゴヌクレオチド（配列番号３）によってＩＦＮ−αが誘導されることを実証する５つのグラフである。この短くしたＡクラスのオリゴヌクレオチドの活性を、それから誘導されたより長いＡクラスのオリゴヌクレオチド（配列番号２）、加えてＢクラスのＯＤＮ（配列番号４）、ＣクラスのＯＤＮ（配列番号１および６８）、ＰクラスのＯＤＮ（配列番号６９）、および、ネガティブコントロールＯＤＮ（配列番号５）の活性と比較した。図１ａ〜１ｄにおいて、ｙ軸は、ＩＦＮ−α（ｐｇ／ｍｌ）を示し、ｘ軸は、ＯＤＮ濃度（μＭ）を示す。図１ｅは、オリゴのＴＬＲ９活性を刺激する能力の比較を示す。ｙ軸は、刺激の指標を示し、ｘ軸は、ＯＤＮ濃度（１０^ｘμＭ）を示す。
【図１ｂ】図１は、短くしたＡクラスのオリゴヌクレオチド（配列番号３）によってＩＦＮ−αが誘導されることを実証する５つのグラフである。
【図１ｃ】図１は、短くしたＡクラスのオリゴヌクレオチド（配列番号３）によってＩＦＮ−αが誘導されることを実証する５つのグラフである。
【図１ｄ】図１は、短くしたＡクラスのオリゴヌクレオチド（配列番号３）によってＩＦＮ−αが誘導されることを実証する５つのグラフである。
【図１ｅ】オリゴのＴＬＲ９活性を刺激する能力の比較を示す。ｙ軸は、刺激の指標を示し、ｘ軸は、ＯＤＮ濃度（１０^ｘμＭ）を示す。
【図２ａ】図２は、ＥＬＩＳＡ分析によって測定された多数の配列番号３の誘導体（配列番号３２〜３９）によるＩＦＮ−αの誘導（図２ａ）、および、ＩＰ−１０の誘導（図２ｂ）を実証する２つのグラフである。ｙ軸は、サイトカイン濃度であり、ｘ軸は、ＯＤＮ濃度（μＭ）である。
【図２ｂ】ＩＰ−１０の誘導。
【図３ａ】図３は、ＥＬＩＳＡ分析によって測定された多数の配列番号３の誘導体（配列番号７〜３１）によるＩＦＮ−αの誘導（図３ａ−３ｃ）、および、ＩＰ−１０の誘導（図３ｄ−３ｆ）を実証する６つのグラフである。
【図３ｂ】ＩＦＮ−αの誘導。
【図３ｃ】ＩＦＮ−αの誘導。
【図３ｄ】ＩＰ−１０の誘導。
【図３ｅ】ＩＰ−１０の誘導。
【図３ｆ】ＩＰ−１０の誘導。
【図４】図４は、３’ポリＧモチーフの代わりに、ヘキサデシルグリセリルエーテル、または、トリエチレングリコールのいずれかを用いた親油性ＯＤＮ誘導体の製造方法を説明する図面である。
【図５】図５は、配列番号３の２種の誘導体、すなわちヘキサデシルグリセリルエーテル成分を有する配列番号４０、および、トリエチレングリコール成分を有する配列番号４１の活性を示すグラフである。配列番号５２は、同じ配列を有するが親油性成分を含まないコントロールＯＤＮである。またその活性は、従来のＡクラスのＯＤＮ（配列番号２）、および、ネガティブコントロールＯＤＮ（配列番号５）とも比較される。ｙ軸は、ＩＦＮ−α濃度（ｐｇ／ｍｌ）であり、ｘ軸は、ＯＤＮ濃度（μＭ）である。
【図６】図６は、コレステロールを有する親油性ＯＤＮ誘導体の構造を説明する図面である。
【図７ａ】図７は、図５のデータに示されているが、３’ポリＧモチーフの代わりにコレステロール成分が用いられた配列番号３の２種の誘導体の活性を示す３つのグラフである。配列番号４３は、ホスホジエステル主鎖、および、３’コレステロールタグを有するが、配列番号４２は、末端の結合におけるホスホロチオエート結合、および、３’コレステロールによって安定化されている。配列番号４４は、３’と５’末端の両方にホスホジエステル主鎖、および、コレステロールタグを有する。図７ａおよび７ｂは、ＩＦＮ−α誘導を示す。その活性を、従来のＡクラスのＯＤＮ（配列番号２）、ＢクラスのＯＤＮ（配列番号４）、その他の短くしたＡクラスのＯＤＮ（配列番号３）、および、ネガティブコントロールＯＤＮ（配列番号５）とも比較する。図７ｃは、ＩＬ−１０誘導を示す。ｙ軸は、サイトカイン濃度であり、ｘ軸は、ＯＤＮ濃度（μＭ）である。
【図７ｂ】ＩＦＮ−α誘導。
【図７ｃ】ＩＬ−１０誘導。
【図８】図８は、配列番号３のインビボで様々な投与経路によってＩＰ−１０を誘導する能力を示す４つのグラフである。Ｂａｌｂ／ｃマウスに、皮下（ＳＣ）、静脈内（ＩＶ）または腹膜内（ＩＰ）に既定量のＯＤＮ（５００μｇ）を注射し、３時間目に採血し（塗りつぶしのバー）、または、肺内に既定量のＯＤＮ（２５０μｇ）を注射し、８時間目に採血した（斜線のバー）。ｙ軸は、ＩＰ−１０濃度（ｎｇ／ｍｌ）であり、ｘ軸は、用いられたＯＤＮを示す。
【図９】図９は、配列番号３のインビボで様々な投与経路によってＩＬ−１２を誘導する能力を示す４つのグラフである。Ｂａｌｂ／ｃマウスに、皮下、静脈内または腹腔内に既定量のＯＤＮ（５００μｇ）を注射し、３時間目に採血し（塗りつぶしのバー）、または、肺内に既定量のＯＤＮ（２５０μｇ）を注射し、８時間目に採血した（斜線のバー）。ｙ軸は、ＩＬ−１２の濃度（ｎｇ／ｍｌ）であり、ｘ軸は、用いられたＯＤＮを示す。
【図１０】図１０は、配列番号の３インビボで様々な投与経路によってＩＬ−６を誘導するの能力を示す４つのグラフである。この活性を、ＢクラスのＯＤＮ（配列番号４）、従来のＡクラスのＯＤＮ（配列番号２）、短いコレステロールで修飾したＯＤＮ（配列番号５０）、および、コントロールＯＤＮ（配列番号５１）の活性と比較した。Ｂａｌｂ／ｃマウスに、皮下、静脈内または腹腔内に既定量のＯＤＮ（５００μｇ）を注射し、３時間目に採血し（塗りつぶしのバー）、または、肺内に既定量のＯＤＮ（２５０μｇ）を注射し、８時間目に採血した（斜線のバー）。ｙ軸は、ＩＬ−６の濃度（ｎｇ／ｍｌ）であり、ｘ軸は、用いられたＯＤＮを示す。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式：
５’−（Ｚ_１）_ＫＸ_１Ｙ_１Ｒ_１Ｘ_２Ｙ_２Ｒ_２Ｘ_３Ｙ_３Ｒ_３（Ｚ_２）_Ｌ（Ｇ）_Ｎ（Ｚ_３）_Ｍ−３’（配列番号７０）
で示される免疫刺激性オリゴヌクレオチドであって、
式中、Ｘ_１は、あらゆるヌクレオチド（ただしｄＧを除く）であり、Ｘ_２およびＸ_３は、あらゆるヌクレオチドであり、Ｙ_１、Ｙ_２およびＹ_３は、ｄＣ、５−メチル−ｄＣ、５−ヒドロキシ−ｄＣ、または、５−フルオロ−ｄＣであり、Ｒ_１、Ｒ_２およびＲ_３は、ｄＧ、ｄＩ、６−チオ−ｄＧ、または、７−デアザ−ｄＧであり、Ｚ_１、Ｚ_２およびＺ_３は、あらゆるヌクレオチドであり、ここで、Ｋ、ＬおよびＭは、それぞれ独立して０〜１０を示し、Ｎは、４〜１０であり、ここで、該免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、長さが１６個未満のヌクレオチドである、上記オリゴヌクレオチド。
【請求項２】
Ｘ_１が、Ｔ、ｄＵ、ｄＩまたはｄＡを含み；Ｘ_２が、Ｔ、ｄＵ、ｄＡ、または、７−デアザ−ｄＡを含み；Ｚ_１が、ｄ６、ｄｔ、ｄＵ、ｄＩ、または、７−デアザ−ｄＧを含み；Ｚ_２が、Ｔを含み、Ｚ_３が、Ｔを含む、請求項１に記載の免疫刺激性オリゴヌクレオチド。
【請求項３】
前記免疫刺激性オリゴヌクレオチドが、６個未満のホスホロチオエート結合を含む、請求項１に記載の免疫刺激性オリゴヌクレオチド。
【請求項４】
前記免疫刺激性オリゴヌクレオチドが、４個のホスホロチオエート結合を含む、請求項１に記載の免疫刺激性オリゴヌクレオチド。
【請求項５】
前記配列Ｙ_１Ｒ_１Ｘ_２Ｙ_２Ｒ_２Ｘ_３Ｙ_３Ｒ_３が、パリンドロームを形成するか、または、パリンドロームに近い形態を形成する、請求項１に記載の免疫刺激性オリゴヌクレオチド。
【請求項６】
長さが少なくとも６個、および、１１個未満のヌクレオチドのパリンドロームを有するドメインをさらに含み、加えて、ホスホジエステルまたはホスホジエステル様インターヌクレオチド結合を有する少なくとも３個のＹＲジヌクレオチドを含み、ここでＹは、ｄＣ、５−メチル−ｄＣ、５−ヒドロキシ−ｄＣ、または、５−フルオロ−ｄＣであり、Ｒは、ポリＧドメインに直接的または間接的に連結したｄＧ、ｄＩ、６−チオ−ｄＧ、または、７−デアザ−ｄＧであり、ここで該ポリＧドメインは、少なくとも３個、および、８個未満の連続したＧを含み、ここで該パリンドロームを有するドメインが間接的にポリＧドメインに連結している場合、この間接的な連結は、１〜１０個のヌクレオチドのヌクレオチド配列、または、非ヌクレオチドリンカーで構成され、ここで該オリゴヌクレオチドは、１８個未満のヌクレオチドの長さを有する、請求項１に記載の免疫刺激性オリゴヌクレオチド。
【請求項７】
前記オリゴヌクレオチドが、少なくとも２個、および、６個未満の安定化されたインターヌクレオチド結合を含む、請求項６に記載の免疫刺激性オリゴヌクレオチド。
【請求項８】
前記安定化されたインターヌクレオチド結合が、ホスホロチオエート結合である、請求項６に記載の免疫刺激性オリゴヌクレオチド。
【請求項９】
前記パリンドロームを有するドメインの各ヌクレオチドが、ホスホジエステルインターヌクレオチド結合を有する、請求項６に記載の免疫刺激性オリゴヌクレオチド。
【請求項１０】
長さが少なくとも６個、および、１１個未満のヌクレオチドのパリンドロームを有するドメインをさらに含み、加えて、ホスホジエステルまたはホスホジエステル様インターヌクレオチド結合を有する少なくとも３個のＹ’Ｒ’ジヌクレオチドを含み、ここでＹ’は、５−メチル−ｄＣ、５−ヒドロキシ−ｄＣ、または、５−フルオロ−ｄＣであり、Ｒは、ポリＧドメインに直接的または間接的に連結したｄＩ、ｄＧ、６−チオ−ｄＧ、または、７−デアザ−ｄＧであり、ここで該ポリＧドメインは、少なくとも３個、および、８個未満の連続したＧを含み、ここで該パリンドロームを有するドメインが間接的にポリＧドメインに連結している場合、この間接的な連結は、１〜１０個のヌクレオチドのヌクレオチド配列、または、非ヌクレオチドリンカーで構成される、請求項１に記載の免疫刺激性オリゴヌクレオチド。
【請求項１１】
以下の式：
５’−（Ｚ_１）_ＫＸ_１Ｙ_１Ｒ_１Ｘ_２Ｙ_２Ｒ_２Ｘ_３Ｙ_３Ｒ_３（Ｚ_２）_ＬＱ−３’（配列番号７１）
で示される免疫刺激性オリゴヌクレオチドであって、
式中、Ｘ_１は、あらゆるヌクレオチド（ただしｄＧを除く）であり、Ｘ_２およびＸ_３は、あらゆるヌクレオチドであり、Ｙ_１およびＹ_２は、ｄＣ、５−メチル−ｄＣ、５−ヒドロキシ−ｄＣ、または、５−フルオロ−ｄＣであり、Ｒ_１、Ｒ_２およびＲ_３は、ｄＧ、ｄＩ、６−チオ−ｄＧ、または、７−デアザ−ｄＧであり、Ｚ_１およびＺ_２は、あらゆるヌクレオチドであり、Ｑは、親油性成分であり、ここでＫ、ＬおよびＭは、それぞれ独立して０〜１０を示し、Ｎは、４〜１０であり、ここで、該免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、長さが１６個未満のヌクレオチドである、上記オリゴヌクレオチド。
【請求項１２】
請求項１に記載の免疫刺激性オリゴヌクレオチドのいずれか一種、および、製薬用キャリアーを含む組成物。
【請求項１３】
前記免疫刺激性オリゴヌクレオチド配列が、配列番号３；配列番号４；配列番号７；配列番号８；配列番号９；配列番号１０；配列番号１１；配列番号１２；配列番号１３；配列番号１４；配列番号１５；配列番号１６；配列番号１７；配列番号１８；配列番号２９；配列番号３０；配列番号３４；配列番号３５；配列番号３６；配列番号３７；配列番号３８；配列番号３９；配列番号４０；配列番号４１；配列番号４２；配列番号４３；配列番号４５；配列番号４６；配列番号４７；配列番号４８；配列番号４９を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１４】
被検体において免疫応答を刺激する方法であって、このような治療が必要な被検体に、請求項１に記載の組成物を投与することを含む、上記方法。
【請求項１５】
前記治療が必要な被検体が、癌、感染症、喘息、アレルギー、アレルギー性鼻炎、または、自己免疫疾患を有するか、または、それらを有する危険性がある、請求項１に記載の方法。

【図１ａ】

【図１ｂ】

【図１ｃ】

【図１ｄ】

【図１ｅ】

【図２ａ】

【図２ｂ】

【図３ａ】

【図３ｂ】

【図３ｃ】

【図３ｄ】

【図３ｅ】

【図３ｆ】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７ａ】

【図７ｂ】

【図７ｃ】

【図８】

【図９】

【図１０】

【公開番号】特開２００９−３５５３０（Ｐ２００９−３５５３０Ａ）
【公開日】平成２１年２月１９日（２００９．２．１９）
【国際特許分類】
【外国語出願】
【出願番号】特願２００８−１２９７６２（Ｐ２００８−１２９７６２）
【出願日】平成２０年５月１６日（２００８．５．１６）
【出願人】（５０８１４７６６９）コーリー　ファーマシューティカル　グループ，インコーポレイテッド (24)
【出願人】（５０２１０２０５１）コーリー　ファーマシューティカル　ゲーエムベーハー (21)
【Ｆターム（参考）】