免疫測定装置、免疫測定法、免疫測定プログラム
【課題】Ｂ／Ｆ分離処理を含む免疫測定技術において、Ｂ／Ｆ分離に用いるノズルが不溶物により詰まるという問題を解決する。
【解決手段】反応容器内の抗体結合担体又は抗原結合担体に反応した抗原又は抗体と未反応な遊離抗原又は遊離抗体を洗浄し前記未反応な遊離抗原又は遊離抗体を吸引部（ノズル）により吸引することで分離するＢ／Ｆ分離部を備えた免疫測定装置であって、前記Ｂ／Ｆ分離部の前段に、前記反応容器に光照射を行う発光部と、反応容器の透過光を測定する受光部と、を備えた測光部と、前記受光部における受光強度に基づいて、前記吸引部の詰まりの原因となる不溶物の有無を判定する不溶物判定部と、を有することを特徴とする免疫測定装置。
【解決手段】反応容器内の抗体結合担体又は抗原結合担体に反応した抗原又は抗体と未反応な遊離抗原又は遊離抗体を洗浄し前記未反応な遊離抗原又は遊離抗体を吸引部（ノズル）により吸引することで分離するＢ／Ｆ分離部を備えた免疫測定装置であって、前記Ｂ／Ｆ分離部の前段に、前記反応容器に光照射を行う発光部と、反応容器の透過光を測定する受光部と、を備えた測光部と、前記受光部における受光強度に基づいて、前記吸引部の詰まりの原因となる不溶物の有無を判定する不溶物判定部と、を有することを特徴とする免疫測定装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｂ／Ｆ分離を含む免疫測定技術に関し、特に、Ｂ／Ｆ分離の不溶物判定技術に関する。
【背景技術】
【０００２】
図１は、Ｂ／Ｆ（Ｂｏｕｎｄ／Ｆｒｅｅ）分離を必要とするヘテロジニアスな免疫測定法の流れの概要の一例を示す図である。抗原（Ａｎｔｉｇｅｎ）または抗体（Ａｎｔｉｂｏｄｙ）などの免疫測定法として、競合法あるいはサンドイッチ法等が知られている。これは、反応液３で満たされた反応容器（セル等）１内で抗原抗体反応（免疫反応）を行わせ、この磁性粒子やポリスチレン粒子、プレートなどに固相化された抗原・抗体と複合体を形成するコンジュゲートに予め標識されている酵素を結合させることにより抗原・抗体を検出する方法である。この方法では、固相化抗原・抗体に反応した抗体・抗原と複合体を形成したコンジュゲートのみを反応容器１内に残し、反応しなかった抗原・抗体と複合体を形成していないコンジュゲートは反応容器１内から除去する。
【０００３】
ヘテロジニアスな免疫測定法では、この除去操作が必要であり、一般にＢ／Ｆ分離という。通常はこのＢ／Ｆ分離のために、抗原抗体反応を行う抗原１０３あるいは抗体１０１を反応容器１内の担体に予め固定しておく（図１（ａ）、この場合には、抗原１０３の量を測定する。）。担体として例えば磁性粒子１０５を用いる場合、抗体１０１を表面に固定した磁性粒子１０５に、測定対象となる特定の抗原１０３を含む溶液を添加し、１次免疫反応を反応容器１内で行わせた後に（図１（ｂ）、磁性粒子１０５に固定された抗体１０１に抗原１０３を結合させる。）、反応容器１に磁石５を接触あるいは接近させることで、反応容器１内の内側壁に抗体１０１と抗原１０３とが結合された磁性粒子１０５が捕捉される（図１（ｃ））。
【０００４】
図１（ｃ）に示す状態で、反応容器１の内側壁に捕捉されなかった不純物を含む非磁性成分（図では未反応の抗原１０３ａ等）を、吸引ノズル７で吸引除去するとともに洗浄液を吐出部１１から吐出する。磁石５を反応容器１から十分に離して洗浄液を洗浄液吐出部１１から分注すると、反応生成物は反応容器１内側壁から離れ、磁性粒子１０５全体に洗浄液が行き渡り、前記の吸引のみでは除去しきれなかった不純物（ｆｒｅｅの抗原・抗体等）を剥離することができる。図１（ｄ）に示すように、酵素標識抗体１０７（抗体１０９に酵素１１１が結合したもの）を添加して２次免疫反応をさせると、結合磁性粒子１０５に固定された抗体１０１に抗原１０３を結合させた複合体に、酵素標識抗体１０７が結合する（複合体Ｘが形成される）。ここで、未反応の酵素標識抗体１０７ａを除去するために、図１（ｅ）に示すように、再び磁石５を反応容器１に接触あるいは接近させると、反応容器１内側壁に反応生成物（複合体Ｘ）が捕捉され、さらに前記と同様に吸引ノズル７によって不純物等（未反応の酵素標識抗体１０７ａを含む）を含んだ洗浄液を吸引ノズル７で吸引除去する洗浄液を吐出部１１から吐出する。
【０００５】
この操作を繰り返すことで反応生成物の洗浄効果が高まり、予め酵素を標識しているコンジュゲートと抗原抗体とからなる複合体Ｘのみを残すことができる。従って、高精度な分析結果（抗原１０３の濃度、量等を求めるための分析結果）を得ることができる。尚、洗浄液を分注した後に攪拌作業を実施すれば、さらなる洗浄効果の向上が期待できる。次いで、図１（ｆ）に示すように、発光基質１１３を反応液に添加する。すると、発光基質１１３が酵素標識抗体１０７により消費され、その際にシグナルを発する。このようにして、複合体Ｘのシグナルを分析することができる。例えば抗原１０３の数が多いほど、消費される基質数が多くなるため、図１（ｆ）の状態でシグナルを測定することで、シグナル量に依存する抗原又は抗体の量（濃度）を測定することができ、検体中の対象物質の濃度を知ることができる。
【０００６】
ここで、このＢ／Ｆ分離を確実に行うことにより、免疫測定法におけるシグナルのバックグラウンドは小さくなり、測定の感度と精度を高めることができる。
【０００７】
従来、Ｂ／Ｆ分離の確実性を増すために洗浄回数を増加させることは、測定の高速化や高スループット化を妨げるという問題があった。このため、最短の動作で最大の分離効率を得るための種々の発明がなされてきた。その一例としては、Ｂ／Ｆ分離に用いる洗浄液の組成の改良や、洗浄液残りの低減などが挙げられる。
【０００８】
下記特許文献１は、担体表面に固定された分子と溶液中の分子を結合させる抗原抗体反応において、洗浄液の吐出と排出の繰返しによって未結合の分子を除去するＢ／Ｆ分離を行う際の洗浄を、１回目は所定の濃度の洗浄液となるような吐出とその後の排出を行い、２回目以降は前の回よりも濃くない洗浄液になるような吐出とその後の排出を行い、最終回は、初回の濃度より薄い洗浄液になるような吐出とその後の排出とを行うものである。これにより、全体としては洗浄液量を減らして効率よく洗浄を行い、かつ、洗浄液残存の影響を低減することができる。
【０００９】
また、下記特許文献２に記載の乳び・溶血検体検出装置においては、検体を分析する分析処理の前に前記検体の画像情報を検出する撮像部と、検出した前記画像情報に基づき、前記検体の色から前記検体の乳び状態または溶血状態を検出する乳び・溶血検体検出部と、を備えるものである。検体の画像情報を利用して検体の色から前記検体の乳び状態または溶血状態を検出することで、高い精度で、かつ、効率良く、検体の状態を検出することができる。例えば、検体の色が黄色の場合を正常状態として設定し、ティーチングにより判定処理を行う。例えば検体の色が赤色、桃色、橙色など、正常状態よりも赤みがかっている場合には溶血状態と判定する。一方、検体の色が桃色や乳白色など、正常状態よりも白濁している場合には乳び状態と判定することができる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】特開２００９−１６２７３３号公報
【特許文献２】特開２０１０−２８１６０４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
しかしながら、特許文献１に記載の技術を用いた場合に、Ｂ／Ｆ分離後の吸引工程において、ノズルが不溶物により詰まるという問題が生じていた。また、特許文献２に記載の技術では、検体の画像情報に基づいて白濁の度合いを検査しているが、目視の場合と同様に、検出精度があまり良くないという問題もある。
【００１２】
また、Ｂ／Ｆ分離工程における問題点として、例えば、ＨＣＶ（Ｃ型肝炎ウイルス）コア抗原などの測定系においては、ウイルス内のコア抗原を表出させるために、界面活性剤を含む酸やアルカリによる変性前処理が必要となる。この前処理を、高タンパク血症の検体で行うと、不可逆的なタンパク変性が生じ多様な不溶物が発生するという問題がある。
【００１３】
かかる処理により生じた変性物や血漿（または血清)のフィブリン塊、尿・便中の不純物などの不溶物がＢ／Ｆ分離の際に用いる吸引ノズル７を詰まらせるという現象が生じ、Ｂ／Ｆ分離処理部を含む装置の不良・トラブルが発生するという問題がある。
【００１４】
また、Ｂ／Ｆ分離処理が不完全になることで、測定結果が偽陽性になったり、偽陰性になったりすることにより、医療過誤の要因となるという問題もあった。
【００１５】
本発明は、Ｂ／Ｆ分離処理を含む免疫測定技術において、Ｂ／Ｆ分離に用いるノズルが不溶物により詰まるという問題を解決することを目的とする。また、不溶物の検出精度を向上させることを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
上記目的を達成するために、本発明のＢ／Ｆ分離を含む免疫測定装置においては、Ｂ／Ｆ分離部の前段に、不溶物検出部とその測光結果に基づいて不溶物の有無を判定する不溶物判定部とを設け、当該不溶物判定部において、前記Ｂ／Ｆ分離部において反応容器の内側壁に捕捉されなかった不純物を含む非磁性成分（不溶物）により、ノズルで吸引する際のノズルの詰まりが生じうるか否かを光の透過率に基づいて予め判定し、ノズル詰まりが生じない程度の透過率が得られなかった場合には、そのサンプルは、不溶物によりノズルを詰まらす可能性が高いと判定することを特徴とする。
【００１７】
Ｂ／Ｆ分離部によるノズル吸引より前に、不溶物の有無を判定することで、不溶物に起因するノズル詰まりを防止し、また、不溶物に起因するＢ／Ｆ分離処理が不完全になることを抑制して、抗原濃度などの測定結果が偽陽性になったり、偽陰性になったりすることによる、医療過誤の要因を少なくすることができる。
【００１８】
例えば、Ｂ／Ｆ分離における免疫測定装置のトラブルまたは、医療過誤を回避するために、Ｂ／Ｆ分離工程前で反応容器に光等を照射し、対向側に配置された受光素子（フォトダイオードなど）により、吸光度変化(またはフォトダイオードの電庄変化)に基づいて、反応容器内の不溶物の有無の判定を行う。この不溶物の判定には、吸光度(または電圧)の積算値やピーク値などを使用することができる。そして、不溶物が有と判定された場合は、Ｂ／Ｆ分離工程に入る前にその試料を排出または廃棄する。尚、光源としてＬＥＤを用いる場合には、赤(波長６３５ｎｍ付近)、緑(波長５２５ｎｍ付近)、青(波長４７０ｎｍ付近)の全て又はいずれかを使用することができる。光源としては、可視光域を含む波長帯を有する光を用いることができる。
【００１９】
本発明の一観点によれば、反応容器内の抗体結合磁性粒子又は抗原結合磁性粒子に反応した抗原又は抗体と未反応な遊離抗原又は遊離抗体を洗浄し、前記未反応な遊離抗原又は遊離抗体を吸引部（ノズル）により吸引することで分離するＢ／Ｆ分離部を備えた免疫測定装置であって、前記Ｂ／Ｆ分離部の前段に、前記反応容器に光照射を行う発光部と、反応容器の透過光を測定する受光部と、を備えた測光部と、前記受光部における受光強度に基づいて、前記吸引部の詰まりの原因となる不溶物の有無を判定する不溶物判定部と、を有することを特徴とする免疫測定装置が提供される。
【００２０】
さらに、不溶物の有無を判定するしきい値を格納するしきい値格納部を設け、前記不溶物判定部は、前記受光部の受光強度と、前記しきい値との大小関係に基づいて、不溶物の有無を判定することを特徴とすることが好ましい。しきい値として、吸光度（または電圧）の積算値を用いることが好ましい。前記発光部の光源として、ＬＥＤを用いることが好ましい。前記ＬＥＤとして、赤色ＬＥＤを用いることが好ましい。共存物質が混入している場合でも、赤色ＬＥＤであれば、しきい値を超えない試料を、不溶物の入っている試料と判定しない。
【００２１】
前記受光部は、赤色を検出波長帯に含む第１の受光素子と、赤色を検出波長帯に含む第２の受光素子であって、赤色以外をフィルタリングするフィルタ部を受光面側に設け第２の受光素子との受光強度の差異に基づいて、前記不溶物判定部が不溶物の判定を行うことが好ましい。第１受光素子で不溶物とされても、第２受光素子で赤色とされた場合には、ヘモグロビンの共存物質として、不溶物と判定しない。
【００２２】
前記しきい値は、モデル検体として、前記吸引部の開口径に近似した粒径を有する沈殿物を入れた反応容器における第１の受光強度と、沈殿物を入れていない反応容器における第２の受光強度との間の値として決められることが好ましい。
【００２３】
前記吸引部の詰まりの原因となる不溶物の有無を判定する不溶物判定部は、前記受光部における受光強度に依存するパラメータの積算値に基づいて、不溶物の有無を判定することが好ましい。
【００２４】
前記測光部は、前記発光部と前記受光部とが対向する位置に配置され、前記反応容器を鉛直方向にスキャンさせる操作部を有していることが好ましい。これにより積算値を求めることができる。
【００２５】
前記測光部の近傍に、前記不溶物判定部が不溶物有りと判定した前記反応容器を排出または廃棄する廃棄部を備えることが好ましい。
【００２６】
本発明の他の観点によれば、反応容器内の抗体又は抗原結合磁性粒子に反応した抗原又は抗体と未反応な遊離抗原又は抗体を洗浄し吸引部（ノズル）により吸引することで分離するＢ／Ｆ分離処理を含む免疫測定法であって、前記Ｂ／Ｆ分離ステップの前ステップとして、前記反応容器に光照射を行う発光部と、反応容器の透過光を測定する受光部と、を備えた測光ステップと、前記受光部における受光強度に基づいて、前記吸引部の詰まりの原因となる不溶物の有無を判定する不溶物判定ステップと、を有することを特徴とする免疫測定法が提供される。
【００２７】
また、本発明は、上記に記載の免疫測定法をコンピュータに実行させるためのプログラム、当該プログラムを記録するコンピュータ読み取り可能な記録媒体であっても良い。
【発明の効果】
【００２８】
本発明によれば、Ｂ／Ｆ分離を含む免疫測定装置において、Ｂ／Ｆ分離処理における不溶物に起因するノズル詰まりを防止することができる。
【００２９】
また、不溶物に起因するＢ／Ｆ分離処理が不完全になることを抑制して、対象物質の濃度などの測定結果が偽陽性になったり、偽陰性になったりすることによる、医療過誤の要因を少なくすることができる。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１】本発明の一実施の形態によるＢ／Ｆ分離を含む免疫測定法の流れを示す概要図である。
【図２Ａ】本発明の一実施の形態による免疫測定装置の概略構成を示す斜視図である。
【図２Ｂ】本発明の一実施の形態による免疫測定装置の概略構成を示す分解斜視図である。
【図３】本発明の一実施の形態による免疫測定装置の概略構成を示す平面図である。
【図４】本発明の一実施の形態による免疫測定装置の要部の概略構成を示す図である。
【図５】本発明の一実施の形態による免疫測定装置のうち、不溶物測定部の概略構成を示す図である。
【図６】本発明の一実施の形態による免疫測定装置の概略構成例を示す機能ブロック図である。
【図７】実施例１の標準モデル検体を用いた測光結果を示す図であり、（ａ）は赤色ＬＥＤを、（ｂ）は緑色ＬＥＤを、（ｃ）は青色ＬＥＤを用いた場合の、受光部（フォトダイオード）の受光強度に依存する電圧と、反応容器のｚ方向へのスキャンタイミングとの関係を示す図である。
【図８】実施例１の標準モデル検体を用いた測光結果を示す図であり、（ａ）は赤色ＬＥＤを、（ｂ）は緑色ＬＥＤを、（ｃ）は青色ＬＥＤを用いた場合の、受光部（フォトダイオード）の受光強度に依存する吸光度と、反応容器のｚ方向へのスキャンタイミングとの関係を示す図である。
【図９】実施例２のモデル検体を用いた免疫測定に用いられる反応容器群の一例を示す図である。
【図１０】実施例２のモデル検体を用いた測光結果を示す図であり、（ａ）は赤色ＬＥＤを、（ｂ）は緑色ＬＥＤを、（ｃ）は青色ＬＥＤを用いた場合の、受光部（フォトダイオード）の受光強度に依存する電圧と、反応容器のｚ方向へのスキャンタイミングとの関係を示す図である。
【図１１】実施例２のモデル検体を用いた測光結果を示す図であり、（ａ）は赤色ＬＥＤを、（ｂ）は緑色ＬＥＤを、（ｃ）は青色ＬＥＤを用いた場合の、受光部（フォトダイオード）の受光強度に依存する吸光度と反応容器のｚ方向へのスキャンタイミングとの関係を示す図である。
【図１２】実施例３の実検体を用いた免疫測定に用いられる反応容器群の一例を示す図である。
【図１３】実施例３の実検体を用いた測光結果を示す図であり、（ａ）は赤色ＬＥＤを、（ｂ）は緑色ＬＥＤを、（ｃ）は青色ＬＥＤを用いた場合の、受光部（フォトダイオード）の受光強度に依存する電圧と、反応容器のｚ方向へのスキャンタイミングとの関係を示す図である。
【図１４】実施例３の実検体を用いた測光結果を示す図であり、（ａ）は赤色ＬＥＤを、（ｂ）は緑色ＬＥＤを、（ｃ）は青色ＬＥＤを用いた場合の、受光部（フォトダイオード）の受光強度に依存する吸光度と反応容器のｚ方向へのスキャンタイミングとの関係を示す図である。
【図１５】実施例４の共存物質を含む検体の測光結果を示す図であり、（ａ）は赤色ＬＥＤを、（ｂ）は緑色ＬＥＤを、（ｃ）は青色ＬＥＤを用いた場合の、受光部（フォトダイオード）の受光強度に依存する電圧と、反応容器のｚ方向へのスキャンタイミングとの関係を示す図である。
【図１６】実施例４の共存物質を含む検体の測光結果を用いた測光結果を示す図であり、（ａ）は赤色ＬＥＤを、（ｂ）は緑色ＬＥＤを、（ｃ）は青色ＬＥＤを用いた場合の、吸光度と反応容器のｚ方向へのスキャンタイミングとの関係を示す図である。
【図１７】実施例５の免疫測定装置を用いた場合の測光結果を示す図であり、赤色ＬＥＤを用い、（ａ）はＢＧＧ依存性、（ｂ）は沈殿物の量依存性、（ｃ）は検体依存性の、受光部（フォトダイオード）の受光強度に依存する電圧と、反応容器のｚ方向へのスキャンタイミングとの関係を示す図である。
【図１８】実施例５の免疫測定装置を用いた場合の測光結果を示す図であり、赤色ＬＥＤを用い、（ａ）はＢＧＧ依存性、（ｂ）は沈殿物の量依存性、（ｃ）は検体依存性の、吸光度と反応容器のｚ方向へのスキャンタイミングとの関係を示す図である。
【図１９】実施例６の免疫測定装置を用いた共存の物質のモデル検体として血漿／血清の実検体を用いた場合の測光結果を示す図であり、赤色ＬＥＤを用い、（ａ）は共存物質のモデル検体、（ｂ）は乳び血漿、（ｃ）はＨｂ血漿の、受光部（フォトダイオード）の受光強度に依存する電圧と、反応容器のｚ方向へのスキャンタイミングとの関係を示す図である。
【図２０】実施例６の免疫測定装置を用いた共存の物質のモデル検体として血漿／血清の実検体を用いた場合の測光結果を示す図であり、赤色ＬＥＤを用い、（ａ）は共存物質のモデル検体、（ｂ）は乳び血漿、（ｃ）はＨｂ血漿の、受光部（フォトダイオード）の吸光度と、反応容器のｚ方向へのスキャンタイミングとの関係を示す図である。
【図２１】１ステップ法による免疫測定法の流れを示すフローチャート図である。
【図２２】ディレイド１ステップ法による免疫測定法の流れを示すフローチャート図である。
【図２３】２ステップ法（１）による免疫測定法の流れを示すフローチャート図である。
【図２４】２ステップ法（２）による免疫測定法の流れを示すフローチャート図である。
【図２５】前処理付き２ステップ法による免疫測定法の流れを示すフローチャート図である。
【図２６】前希釈付き２ステップ法による免疫測定法の流れを示すフローチャート図である。
【発明を実施するための形態】
【００３１】
以下、本発明の実施の形態による不溶物判定技術について図面を参照しながら説明を行う。
Ｂ／Ｆ分離を必要とするヘテロジニアスアッセイ系において、Ｂ／Ｆ分離とは抗体(または抗原)結合磁性粒子に反応した抗原(または抗体)と未反応な遊離抗原(または抗体)を
洗浄分離する方法である。
【００３２】
まず、本発明の一実施の形態によるＢ／Ｆ分離部と測光部とを有する免疫測定装置について説明する。図１は、本発明の一実施の形態によるＢ／Ｆ分離を含む免疫測定の流れを示す概要図である。図１については前述したため、説明を省略する。
【００３３】
図２Ａは、本発明の一実施の形態による免疫測定装置の概略構成を示す斜視図である。図２Ｂは、本発明の一実施の形態による免疫測定装置の概略構成を示す分解斜視図である。
【００３４】
また、本実施の形態による免疫測定装置Ａには、反応容器１を１本ずつ自動的に装置に供給するオートセルフィーダー３７と、インキュベーションを行うためのインキュベーションテーブル３９と、Ｂ／Ｆ分離処理を行うためのＢ／Ｆ分離機構４１と、不溶物の検出を行う検出ユニット（不溶物検出部）４５と、を有する。
【００３５】
図３は、本発明の一実施の形態による免疫測定装置の概略構成例を示す平面図である。図３に示すように、本発明の一実施の形態による免疫測定装置Ａを上面からみると、例えば、反応容器１内に検体を分注するサンプル分注部２０と試薬を分注する試薬分注部（１）５０または（２）２３、検体・試薬が分注された反応容器１内の１次または２次免疫反応液を攪拌する反応容器攪拌部４７または５５ａと、１次または２次免疫反応を行うインキュベーションテーブル（１）４３及び（２）４４と、試薬を保冷する試薬保冷部５１と、反応容器を搬送する反応容器搬送部５７と、試薬ノズル洗浄槽６１と、不溶物の検出を行う不溶物検出部（測光部）６３と、測光部６３で不溶物が検出され排出または廃棄すべき検体を反応容器１毎排出または廃棄する廃棄部６４と、測光部６３で不溶物が検出されずに排出または廃棄しないでＢ／Ｆ分離をすべき検体のＢ／Ｆ分離処理を行うＢ／Ｆ分離部６５と、Ｂ／Ｆ分離処理における洗浄液１、２を吐出するＢ／Ｆ分注部（１）６７、（２）６９と、Ｂ／Ｆ洗浄部６５ａと、試薬ノズルを洗浄する試薬ノズル洗浄槽７０と、シグナルを検出する検出部９７と、シグナル検出後の反応容器１毎を廃棄する廃棄部６４と、を有している。尚、上記構成のうちのいずれかを他の構成で置換したり、一部の構成を他の装置に持たせたりすることが可能である。
【００３６】
装置の動作について説明する。
図４は、本発明の一実施の形態による免疫測定装置の要部の概略構成を示す図である。図４（ａ）に示すように、反応容器搬送部５７により、反応容器１が測光部６３内に挿入され、Ｚ軸方向に移動させながらＬＥＤ発光の透過光を受光素子により測定して、不溶物量に依存する受光素子の電圧又は吸光度を求める。求めた電圧又は吸光度に基づいて、あるしきい値を超える反応容器は、透明であり不溶物なしとして、検体として利用することができる。あるしきい値を超えない反応容器は、不溶物ありと判断して、検体として利用できないため、廃棄部６４に排出または廃棄する。
【００３７】
図５は、本発明の一実施の形態による免疫測定装置のうち、不溶物検出部（測光部）６３の詳細な構成例を示す図である。反応容器搬送部５７は、反応容器１を把持し、上下（Ｚ軸）方向に移動させることができる。不溶物検出部６３は、空洞６３ａを有しており、空洞６３ａの内壁の反応容器１を挟んで対向する位置に、発光部（ＬＥＤ）８１と、受光部（フォトダイオード、ＰＤ）８５と、を配置している。そして、ＬＥＤ（発光部）８１からの発光は、反応容器１の中心部を透過してＰＤ（受光部）８５に照射される。照射された光は、ＰＤ８５において、受光する光量に依存する電圧に変換され、吸光度を求めることができる。電圧が高いほど、検体中の不溶物が少ない、すなわち吸光度が低い。従って、受光素子の電圧又は吸光度により、検体中の不溶物量を推定することができる。
【００３８】
図６は、本発明の一実施の形態による免疫測定装置の概略構成例を示す機能ブロック図である。まず、反応容器１内の検体は、前処理部９１において前処理が行われ、次いで、１次免疫反応後、不溶物検出部６３で測光される。次いで、不溶物検出部６３における測光結果に基づいて、不溶物判定部９５でノズルの詰まりが生じるような不溶物の有無を判定し、そのような不溶物がない場合には、Ｂ／Ｆ分離部６５でＢ／Ｆ（１）分離を行う。次いで、２次免疫反応後、Ｂ／Ｆ分離部６５でＢ／Ｆ（２）分離を行い、検出部９７でシグナル量の分析を行い、抗原、抗体の定量及び定性分析を行う。ここで、不溶物判定部９５は、しきい値記憶部９６に予め記憶していたしきい値又はしきい値入力部９８から入力されたしきい値等との比較結果に基づいてノズル詰まりの可能性を判定する。
【００３９】
次に、不溶物判定の具体的な処理内容について説明する。
ノズル径が０．６〜０．８ｍｍであるため、それよりも少し大きい径を持つ沈殿物を入れた標準モデル検体を、ノズルを詰まらせる不溶物の標準試料として用いることができる。
【００４０】
[実施例１]
図７は、反応容器１のｚ軸に沿ったスキャンのタイミングと赤ＬＥＤ、緑ＬＥＤ、青ＬＥＤのそれぞれにおけるＰＤの出力電圧（ＬＥＤ光の透過率に対応）の関係を、沈殿物無し、少量から多量のそれぞれについて測定した図である。図７より沈殿物の程度におけるスキャン期間中の電圧の和（電圧積算値）を求めることができる。同様に、ＬＥＤ（緑）、ＬＥＤ（青）についてもスキャン期間中の電圧の和（電圧積算値）を求めると表１のようになる。０．５ｍｓにて、例えば２８８ポイントを測光している。実装置のデータでＬＥＤの切替えをする際は、２８８ポイントを測光するＬＥＤの数で割った分、つまり赤と緑の２つであれば１４４ポイントずつになる。測光部のみの簡易装置では、各波長において２８８ポイントを測光することが可能である。
【００４１】
【表１】
【００４２】
【表２】
【００４３】
表１では、ＬＥＤ（赤）、ＬＥＤ（緑）、ＬＥＤ（青）のいずれの場合でも、スキャン中の電圧の和（電圧積算値）は、沈殿物の量とともに減少することがわかる。ここで、沈殿物無しと少量との間にノズル詰まりに関する電圧積算値のしきい値があることから、表２に示すように、各色のＬＥＤにおけるノズル詰まりに関する電圧積算値のしきい値は、それぞれ、３５０００、２５０００、２００００と求めることができる。これらのしきい値以下であると、ノズル詰まりが生じることになる。
【００４４】
このしきい値が、以下に説明する同様の検体における、ノズルを詰まらせるか否かの判定の基準値となる。この基準値を、しきい値記憶部９６に記憶しておく。或いは、しきい値入力部９８から入力しておく。
【００４５】
図８は、標準モデル検体を用いた測光結果を示す図であり、図７に対応する図である。図８（ａ）は赤色ＬＥＤを、（ｂ）は緑色ＬＥＤを、（ｃ）は青色ＬＥＤを用いた場合の、受光部（フォトダイオード）の受光強度に依存する吸光度と、反応容器のｚ方向へのスキャンタイミングとの関係を示す図である。図８より沈殿物の量におけるスキャン中の吸光度の積算値を求めることができる。同様に、ＬＥＤ（緑）、ＬＥＤ（青）についてもスキャン中の吸光度の和（積算値）を求めると表３のようになる。沈殿物の有無における積算値のしきい値が求まる。同様に、ＬＥＤ（緑）、ＬＥＤ（青）についても求めると以下のようになる。
【００４６】
【表３】
【００４７】
【表４】
【００４８】
吸光度を基準にする場合には、ＬＥＤ（赤）、ＬＥＤ（緑）、ＬＥＤ（青）のしきい値は、表４に示すように１５００００、１６００００、３５００００であることがわかる。これらのしきい値以上であると、ノズル詰まりが生じることになる。
【００４９】
このしきい値も、以下に説明する同様の検体における、ノズルを詰まらせるか否かの判定の基準値となる。この基準値を、しきい値記憶部９６に記憶しておく。或いは、しきい値入力部９８から入力しておく。
【００５０】
[実施例２]
図９は、モデル検体を用いた免疫反応に用いられる反応容器群の一例を示す図である。
【００５１】
モデル検体１として、ヒト正常血清(ＮＨＳ)にＢｏｖｉｎｅ γＧ（ＢＧＧ）を添加し、疑似的高タンパク血清を作製し、前処理を実施したものを用いた。図９の左側の反応容器から順番に、ＮＨＳ、＋０．５％ＢＧＧ、＋１％ＢＧＧ、＋２％ＢＧＧ、＋４％ＢＧＧ、＋６％ＢＧＧ、＋８％ＢＧＧ、＋１０％ＢＧＧの酸・アルカリ前処理後の様子を示す図であり、ある反応容器には不溶物の白濁が発生していることがわかる。不溶物の検出は、ＬＥＤ光を反応容器の底部から上部に向けて走査照射し受光素子により受光させて、反応容器を透過する透過光量に依存する受光素子の電圧の値を積算する。
【００５２】
【表５】
【００５３】
【表６】
【００５４】
表５は、ＬＥＤ（赤）、ＬＥＤ（緑）、ＬＥＤ（青）に関する、ＮＨＳ、＋０．５％ＢＧＧ、＋１％ＢＧＧ、＋２％ＢＧＧ、＋４％ＢＧＧ、＋６％ＢＧＧ、＋８％ＢＧＧ、＋１０％ＢＧＧのスキャン中の電圧の和（電圧積算値）を示す表である。表６より、ＬＥＤ（赤）、ＬＥＤ（緑）、ＬＥＤ（青）に関するしきい値として、３５０００、２５０００、２００００がしきい値記憶部９６に記憶されている（表２と同じ値）。このしきい値を参照して、実際に図１０で求めた値から、それぞれ、しきい値以上の電圧積算値は、ＬＥＤ（赤）で＋１％ＢＧＧ、ＬＥＤ（緑）で＋０．５％ＢＧＧ、ＬＥＤ（青）でも＋０．５％ＢＧＧとなり、これらの結果より、＋１％ＢＧＧから＋０．５％ＢＧＧの検体は、ノズルを詰まらせない可能性が高い検体であると判断することができる。この測光結果より、安全を見込めば＋０．５％ＢＧＧの検体までをＢ／Ｆ分離処理に用い、それ以上の高濃度のＢＧＧ検体は排出または破棄することになる。
【００５５】
図１１は、モデル検体を用いた測光結果を示す図であり、（ａ）は赤色ＬＥＤを、（ｂ）は緑色ＬＥＤを、（ｃ）は青色ＬＥＤを用いた場合の、吸光度と反応容器のｚ方向へのスキャンタイミングとの関係を示す図である。
【００５６】
【表７】
【００５７】
【表８】
【００５８】
表７は、ＬＥＤ（赤）、ＬＥＤ（緑）、ＬＥＤ（青）に関する、ＮＨＳ、＋０．５％ＢＧＧ、＋１％ＢＧＧ、＋２％ＢＧＧ、＋４％ＢＧＧ、＋６％ＢＧＧ、＋８％ＢＧＧ、＋１０％ＢＧＧのスキャン中の吸光度積算値を示す表である。表８よりＬＥＤ（赤）、ＬＥＤ（緑）、ＬＥＤ（青）に関するしきい値として、１５００００、１６００００、３５００００がしきい値記憶部９６に記憶されている（表４と同じ値）。このしきい値を参照して、実際に図１１で求めた値から、それぞれ、しきい値以下の吸光度積算値は、ＬＥＤ（赤）で＋１％ＢＧＧ、ＬＥＤ（緑）で＋０．５％ＢＧＧ、ＬＥＤ（青）でも＋０．５％ＢＧＧとなり、これらの結果より、＋１％ＢＧＧから＋０．５％ＢＧＧの検体は、ノズルを詰まらせない可能性が高い検体であると判断することができる。この測光結果より、安全を見込めば＋０．５％ＢＧＧの検体までをＢ／Ｆ分離処理に用い、それ以上の高濃度のＢＧＧ検体は排出または廃棄することになる。電圧積算値でも吸光度の積算値でも同様の結果が得られている。
【００５９】
このようにして、ＮＨＳ、＋０．５％ＢＧＧの各検体について、実際にＢ／Ｆ分離でノズルを詰まらせることなく処理を行うことができることがわかる。すなわち、これらの検体は、ノズル詰まりを生じさせないものであり、Ｂ／Ｆ分離を行っても良い検体であると言える。
【００６０】
[実施例３]
図１２は、実検体を用いた免疫反応に用いられる反応容器群の一例を示す図である。
【００６１】
実検体として、高タンパク血漿検体を用いている。図１２の左側の反応容器から順番に、ヒト正常血清、残り６反応容器が、酸・アルカリ前処理後、多様な不溶物が発生した様子を示しており（左から＃４、＃６、＃３９、＃４３、＃７２、＃８２である）、不溶物の白濁が発生していることがわかる。不溶物の検出はＬＥＤ光を反応容器に走査照射し受光させて、光量に依存する受光素子の電圧の値を積算する。
【００６２】
図１３は、実検体を用いた測光結果を示す図であり、（ａ）は赤色ＬＥＤを、（ｂ）は緑色ＬＥＤを、（ｃ）は青色ＬＥＤを用いた場合の、受光部（フォトダイオード）の受光強度に依存する電圧と、反応容器のｚ方向へのスキャンタイミングとの関係を示す図である。
【００６３】
図１３より、各種検体におけるスキャン中の電圧の和（電圧積算値）を求めることができる（表９）。
【００６４】
【表９】
【００６５】
【表１０】
【００６６】
また、表１０は、表２に対応する表である。表９と表１０より、この検体では、ＮＨＳ以外の検体では、しきい値以下の電圧積算を有しており、これらの検体は不溶物を含みノズルを詰まらせる可能性がある検体であることがわかる。
【００６７】
図１４は、実検体を用いた測光結果を示す図であり、（ａ）は赤色ＬＥＤを、（ｂ）は緑色ＬＥＤを、（ｃ）は青色ＬＥＤを用いた場合の、吸光度と反応容器のｚ方向へのスキャンタイミングとの関係を示す図である。図１４より、各種検体におけるスキャン中の吸光度の積算値を求めることができる（表１１）。
【００６８】
【表１１】
【００６９】
【表１２】
【００７０】
また、表１２は、表４に対応する表である。表１１と表１２より、この検体では、ＮＨＳ以外の検体では、しきい値以上の吸光度積算値を有しており、これらの検体は不溶物を含みノズルを詰まらせる可能性がある検体であることがわかる。この結果は、図１３の結果と同様である。
【００７１】
以上のように、ノズル径よりも少しだけ大きい径を有する沈殿物に関する、積算電圧、又は、吸光度積算値に基づいて求めたしきい値を記憶しておき、このしきい値に基づいて、実際の検体のＢ／Ｆ分離処理前の測光処理においてその検体の積算値が上記しきい値よりも大きいか否かに基づいて、ノズルを詰まらせるような検体であるか否かを測光部において判定することができる。
【００７２】
従って、Ｂ／Ｆ分離処理前に、非破壊的に検体内の不溶物の有無を調べることができ、Ｂ／Ｆ分離処理におけるノズル詰まりを未然に防止することができる。
【００７３】
このように、Ｂ／Ｆ分離を含む免疫測定装置において、Ｂ／Ｆ分離処理における不溶物に起因するノズル詰まりを防止し、また、不溶物に起因するＢ／Ｆ分離処理が不完全になることを抑制して、対象物質の濃度などの測定結果が偽陽性になったり、偽陰性になったりすることによる、医療過誤の要因を少なくすることができる。
【００７４】
次に、共存物質の影響について説明する。検体には、直接型ビリルビン(Ｂｉｌ−Ｆ)、抱合型ビリルビン(Ｂｉｌ−Ｃ)、乳び、溶血（Ｈｂ）の共存物質が混入している場合が多く、これらが不溶物検出処理に影響を与える可能性がある。以下に、共存物質の影響を考慮した免疫測定技術の例について説明する。
【００７５】
[実施例４]
図１５は、共存物質を含む検体の測光結果を示す図であり、（ａ）は赤色ＬＥＤを、（ｂ）は緑色ＬＥＤを、（ｃ）は青色ＬＥＤを用いた場合の、受光部（フォトダイオード）の受光強度に依存する電圧と、反応容器のｚ方向へのスキャンタイミングとの関係を示す図である。共存物質としては、ＮＨＳ、Ｂｉｌ−Ｆ・Ｌ（約４ｍｇ／ｄＬ）、Ｂｉｌ−Ｆ・Ｈ（約２０ｍｇ／ｄＬ）、Ｂｉｌ−Ｃ・Ｌ（約４ｍｇ／ｄＬ）、Ｂｉｌ−Ｃ・Ｈ（約２０ｍｇ／ｄＬ）、乳び・Ｌ（約２８０濁度）、乳び・Ｈ（約１４００濁度）、Ｈｂ・Ｌ（約９５ｍｇ／ｄＬ）、Ｈｂ・Ｈ（約４８０ｍｇ／ｄＬ）を例として測定している。
【００７６】
【表１３】
【００７７】
【表１４】
【００７８】
表１３は測定結果を示すものであり、表１４は表２に対応し、電圧変換の場合のしきい値を示す。
表１３は、電圧積算の結果を示す図である。この表１３を見るとわかるように、ＬＥＤ（緑）、ＬＥＤ（青）では、しきい値を超えないものが多く、実際には共存物質は検体中に含まれてＢ／Ｆ分離処理が行われるべきであるにもかかわらず、共存物質が含まれることでしきい値以下の積算値とされて排出または廃棄対象となってしまうという問題がある。
【００７９】
そこで、光源のＬＥＤとしては、ＬＥＤ（赤）を用いることが好ましい。さらに、ＬＥＤ（赤）を用いても、Ｈｂ・Ｌ、Ｈｂ・Ｈは、しきい値で、共存物質であるか否かを判定できない。そこで、測光部６３の第１のＰＤ８５（可視光用）に加えて、同様の第２のＰＤに赤色のみを透過するフィルタを付けることで赤色であることを検出し（或いは目視により検出し）、２つの第１及び第２のＰＤの測定結果から、第１のＰＤでしきい値以下であるが、第２のＰＤで赤色であることを検出すると、これを、Ｈｂ・Ｌ、Ｈｂ・Ｈの共存物質と判定するようにすると良い。このようにすれば、共存物質を含む検体を不溶物として除去することを防止することができる。目視で判定することもできる。
【００８０】
図１６は、共存物質を含む検体の測光結果を示す図であり、（ａ）は赤色ＬＥＤを、（ｂ）は緑色ＬＥＤを、（ｃ）は青色ＬＥＤを用いた場合の、吸光度と反応容器のｚ方向へのスキャンタイミングとの関係を示す図である。
【００８１】
【表１５】
【００８２】
【表１６】
【００８３】
表１５は測定結果を示すものであり、表１６は表４に対応し、吸光度の場合のしきい値を示す。
ＬＥＤ（緑）、ＬＥＤ（青）では、しきい値を超えるものが多く、実際には共存物質は検体中に含まれてＢ／Ｆ分離処理が行われるべきであるにもかかわらず、共存物質が含まれることでしきい値以上の吸光度積算値とされて排出または廃棄対象となってしまうという問題がある。そこで、上記の場合と同様に、ＬＥＤとしては、ＬＥＤ（赤）を用いることが好ましい。さらに、ＬＥＤ（赤）を用いても、Ｈｂ・Ｌ、Ｈｂ・Ｈは、しきい値で、共存物質であるか否かを判定できない。そこで、測光部６３の第１のＰＤ８５（可視光用）に加えて、同様の第２のＰＤに赤色のみを透過するフィルタを付けることで赤色であることを検出し（或いは目視により検出し）、２つの第１及び第２のＰＤの測定結果から、第１のＰＤでしきい値以下であるが、第２のＰＤで赤色であることを検出すると、これを、Ｈｂ・Ｌ、Ｈｂ・Ｈの共存物質と判定するようにしても良い。このようにすれば、吸光度測定の場合でも、共存物質を含む検体を不溶物として除去することを防止することができる。
【００８４】
[実施例５]
図１７は、免疫測定装置（実装置）を用いた測光結果の図であり、赤色ＬＥＤを用いた場合における、（ａ）はＮＨＳ、＋０．５％ＢＧＧ、＋１％ＢＧＧ、＋２％ＢＧＧ、＋４％ＢＧＧ、＋６％ＢＧＧ、＋８％ＢＧＧ、＋１０％ＢＧＧのスキャン中の電圧の和（電圧積算値）を示す表である。（ｂ）は、沈殿物なし、少から多の場合の測定結果を示す図であり、（ｃ）は、ＮＨＳと、種々の検体の測定結果を示す図である。
【００８５】
【表１７】
【００８６】
【表１８】
【００８７】
表１８は、沈殿物０（ＮＨＳ）と少の場合の間の２００００にしきい値を設定する。そして、表１７に示す測定結果より、＋１％ＢＧＧの場合が、ノズルの詰まらせない限界であると判定することができる。さらに、＃４から＃８２までの表示されている全ての検体がしきい値を超えておらず、不溶物によるノズル詰まりを生じさせる可能性がある検体であることがわかる。
【００８８】
図１８は、免疫測定装置を用いた測光結果の図であり、（ａ）はＮＨＳ、＋０．５％ＢＧＧ、＋１％ＢＧＧ、＋２％ＢＧＧ、＋４％ＢＧＧ、＋６％ＢＧＧ、＋８％ＢＧＧ、＋１０％ＢＧＧのスキャン中の吸光度の和（吸光度積算値）を示す表である。（ｂ）は、沈殿物なし、少から多の場合の測定結果を示す図であり、（ｃ）は、ＮＨＳと、種々の検体の測定結果を示す図である。
【００８９】
【表１９】
【００９０】
【表２０】
【００９１】
同様に沈殿物０と少との間の吸光度のしきい値として４０００００が求められる（表２０）。この値を元に、表１９に示すように、＋１％ＢＧＧの場合が、ノズルの詰まらせない限界であると判定することができる。さらに、＃４から＃８２までの表示されている全ての検体がしきい値を超えており、不溶物によるノズル詰まりを生じさせる検体であることがわかる。
【００９２】
[実施例６]
図１９は、免疫測定装置を用いた共存物質のモデル検体として血漿／血清の実検体を用いた場合の測光結果を示す図であり、（ａ）共存物質のモデル検体、（ｂ）は乳び血漿、（ｃ）はＨｂ血漿の、受光部（フォトダイオード）の電圧と、反応容器のｚ方向へのスキャンタイミングとの関係を示す図である。
【００９３】
【表２１】
【００９４】
【表２２】
【００９５】
上記で求めた表１８の、沈殿物０（ＮＨＳ）と１個の場合の間の２００００をしきい値とすると、表２１のうち、Ｈｂ・Ｈ以外は全て、不溶物でないと判断される。尚、Ｈｂ・Ｈは、本来は共存物質であるが、上記と同様に、ＬＥＤ（赤）を用いても、Ｈｂ・Ｌ、Ｈｂ・Ｈは、しきい値で、共存物質であるか否かを判定できない。そこで、測光部６３の第１のＰＤ８５（可視光用）に加えて、同様の第２のＰＤに赤色のみを透過するフィルタを付けることで赤色であることを検出し（或いは目視により検出し）、２つの第１及び第２のＰＤの測定結果から、第１のＰＤでしきい値以下であるが、第２のＰＤで赤色であることを検出すると、これを、Ｈｂ・Ｌ、Ｈｂ・Ｈの共存物質と判定するようにしても良い。
【００９６】
また、図２０は、免疫測定装置を用いた共存物質のモデル検体として血漿／血清の実検体を用いた場合の測光結果を示す図であり、赤色ＬＥＤを用い、（ａ）共存物質のモデル検体、（ｂ）は乳び血漿、（ｃ）はＨｂ血漿の、受光部（フォトダイオード）の吸光度と、反応容器のｚ方向へのスキャンタイミングとの関係を示す図である。
【００９７】
【表２３】
【００９８】
【表２４】
【００９９】
この場合には、表２４に示す４０００００のしきい値（表２０に対応）を利用して、全ての血清・血漿、等の共存物質を、ノズル詰まりのない物質として判定することができる。
【０１００】
[実施例７]
次に、実際の装置を用いて検体を測定するための処理の流れについて、いくつかの例について、より具体的に説明する。
【０１０１】
図２１は、１ステップ法による免疫測定法の流れを示すフローチャート図である。
この１ステップ法では、酵素標識物、サンプル（検体）、磁性粒子を分注し（ステップＳ１）、攪拌／インキュベーション（３７℃）を行い（ステップＳ２）、次いで、不溶物測光（ＬＥＤ）：する・しないの選択を行い（ステップＳ３）、不溶物測光をする場合で測光結果が不溶物無しであれば、Ｂ／Ｆ分離洗浄操作（集磁、反応液吸引／洗浄液分注、攪拌）を行う（ステップＳ４）。次いで、発光試薬１を入れて攪拌を行い（ステップＳ５）、発光試薬２（基質）を入れ（ステップＳ６）、発光量の測定を行う（ステップＳ７）。これにより、Ｂ／Ｆ分離処理前にノズル詰まりの可能性を判定し、ノズル詰まりを未然に防ぐことが出来る。
【０１０２】
[実施例８]
図２２は、ディレイド１ステップ法による免疫測定法の流れを示すフローチャート図である。すなわち、免疫反応溶液、サンプル（検体）、磁性粒子を分注する（ステップＳ１１）。次いで、攪拌／インキュベーション（３７℃）を行い（ステップＳ１２）、酵素標識物を添加し（ステップＳ１３）、攪拌／インキュベーション（３７℃）を行う（ステップＳ１４）。次いで、不溶物の測光処理（ＬＥＤ）をする・しないの選択を行い（ステップＳ１５）、不溶物測光をする場合で測光結果が不溶物無しであれば、Ｂ／Ｆ分離洗浄操作（集磁、反応液吸引／洗浄液分注、攪拌）を行う（ステップＳ１６）。さらに、発光試薬１を添加して攪拌し（ステップＳ１７）、発光試薬２（基質）を入れて（ステップＳ１８）、発光量の測定を行う（ステップＳ１９）。これにより、Ｂ／Ｆ分離処理前にノズル詰まりの可能性を判定し、ノズル詰まりを未然に防ぐことが出来る。
【０１０３】
[実施例９]
図２３は、２ステップ法（１）による免疫測定法の流れを示すフローチャート図である。免疫反応溶液、サンプル（検体）、磁性粒子を分注し（ステップＳ２１）、攪拌／インキュベーション（３７℃）を行う（ステップＳ２２）。次いで、不溶物の測光処理（ＬＥＤ）をする・しないの選択を行い（ステップＳ２３）、不溶物測光をする場合で測光結果が不溶物無しであれば、Ｂ／Ｆ分離洗浄操作（集磁、反応液吸引／洗浄液分注、攪拌）を行う（ステップＳ２４）。酵素標識希釈液と酵素標識物を添加する（ステップＳ２５）。さらに、攪拌／インキュベーション（３７℃）を行い（ステップＳ２６）、Ｂ／Ｆ分離洗浄操作（集磁、反応液吸引／洗浄液分注、攪拌）を行う（ステップＳ２７）。次いで、発光試薬１を入れ攪拌し（ステップＳ２８）、発光試薬２（基質）を用いて（ステップＳ２９）、発光量の測定を行う（ステップＳ３０）。これにより、Ｂ／Ｆ分離処理前にノズル詰まりの可能性を判定し、ノズル詰まりを未然に防ぐことが出来る。
【０１０４】
[実施例１０]
図２４は、２ステップ法（２）による免疫測定法の流れを示すフローチャート図である。まず、免疫反応溶液１、免疫反応溶液２を分注し（ステップＳ３１）、攪拌した後、サンプル（検体）、磁性粒子を混ぜる（ステップＳ３２）。次いで、攪拌／インキュベーション（３７℃）を行う（ステップＳ３３）。次いで、不溶物の測光処理（ＬＥＤ）をする・しないの選択を行い（ステップＳ３４）、不溶物測光をする場合で測光結果が不溶物無しであれば、Ｂ／Ｆ分離洗浄操作（集磁、反応液吸引／洗浄液分注、攪拌）を行う（ステップＳ３５）。次いで酵素標識希釈液、酵素標識物を混ぜて（ステップＳ３６）、攪拌／インキュベーション（３７℃）を行う（ステップＳ３７）。次いで、Ｂ／Ｆ分離洗浄操作（集磁、反応液吸引／洗浄液分注、攪拌）を行い（ステップＳ３８）、発光試薬１を加えて攪拌する（ステップＳ３９）。そして、発光試薬２（基質）を用いて（ステップＳ４０）、発光量の測定を行う（ステップＳ４１）。これにより、Ｂ／Ｆ分離処理前にノズル詰まりの可能性を判定し、ノズル詰まりを未然に防ぐことが出来る。
【０１０５】
[実施例１１]
図２５は、前処理付き２ステップ法による免疫測定法の流れを示すフローチャート図である。この方法は、前処理の自動化を含む２ステップ法である。
【０１０６】
まず、前処理液と、サンプル（検体）とを用い（ステップＳ５１）攪拌／インキュベーション（３７℃）を行う（ステップＳ５２）。次いで、免疫反応溶液を混ぜて（ステップＳ５３）、攪拌し、磁性粒子を混ぜて（ステップＳ５４）、攪拌／インキュベーション（３７℃）を行う（ステップＳ５５）。次いで、不溶物の測光処理（ＬＥＤ）をする・しないの選択を行い（ステップＳ５６）、不溶物測光をする場合で測光結果が不溶物無しであれば、Ｂ／Ｆ分離洗浄操作（集磁、反応液吸引／洗浄液分注、攪拌）を行う（ステップＳ５７）。次いで、酵素標識希釈液、酵素標識物を用い（ステップＳ５８）、攪拌／インキュベーション（３７℃）を行う（ステップＳ５９）。次いで、Ｂ／Ｆ分離洗浄操作（集磁、反応液吸引／洗浄液分注、攪拌）を行う（ステップＳ６０）。さらに、発光試薬１を混ぜて（ステップＳ６１）攪拌し、発光試薬２（基質）を用いて（ステップＳ６２）、発光量の測定を行う（ステップＳ６３）。これにより、Ｂ／Ｆ分離処理前にノズル詰まりの可能性を判定し、ノズル詰まりを未然に防ぐことが出来る。
【０１０７】
[実施例１２]
図２６は、前希釈付き２ステップ法による免疫測定法の流れを示すフローチャート図である。
【０１０８】
まず、検体希釈液とサンプル（検体）を分注し（ステップＳ７１）、攪拌した後、免疫反応液、希釈済み検体を混ぜて（ステップＳ７２）攪拌する。次いで、磁性粒子を加え（ステップＳ７３）、攪拌／インキュベーション（３７℃）を行う（ステップＳ７４）。次いで、不溶物の測光処理（ＬＥＤ）をする・しないの選択を行い（ステップＳ７５）、不溶物測光をする場合で測光結果が不溶物無しであれば、Ｂ／Ｆ分離洗浄操作（集磁、反応液吸引／洗浄液分注、攪拌）を行う（ステップＳ７６）。次いで、酵素標識希釈液、酵素標識物を混ぜ（ステップＳ７７）、攪拌／インキュベーション（３７℃）を行う（ステップＳ７８）。さらに、Ｂ／Ｆ分離洗浄操作（集磁、反応液吸引／洗浄液分注、攪拌）を行い（ステップＳ７９）、発光試薬１を混ぜて攪拌する（ステップＳ８０）。発光試薬２（基質）を用いて（ステップＳ８１）、発光量の測定を行う（ステップＳ８２）。これにより、Ｂ／Ｆ分離処理前にノズル詰まりの可能性を判定し、ノズル詰まりを未然に防ぐことが出来る。
【０１０９】
以上に説明したように、本実施の形態による免疫測定装置によれば、前処理の有無、項目試薬数、などに依存せずに、種々の方法において、非破壊的に、不溶物の検出を行った後に、Ｂ／Ｆ処理を行うため、Ｂ／Ｆ分離を含む免疫測定装置において、Ｂ／Ｆ分離処理における不溶物に起因するノズル詰まりを防止し、また、不溶物に起因するＢ／Ｆ分離処理が不完全になることを抑制して、対象物質の濃度などの測定結果が偽陽性になったり、偽陰性になったりすることによる、医療過誤の要因を少なくすることができる。
【０１１０】
上記の実施の形態において、添付図面に図示されている構成等については、これらに限定されるものではなく、本発明の効果を発揮する範囲内で適宜変更することが可能である。その他、本発明の目的の範囲を逸脱しない限りにおいて適宜変更して実施することが可能である。
【産業上の利用可能性】
【０１１１】
本発明は、免疫測定技術に用いることができる。
【符号の説明】
【０１１２】
１…反応容器、３…反応液、５…磁石、７…吸引ノズル、１１…吐出部、２１…項目試薬保冷庫、２３…サンプル分注機構、２５…検体搬送部、２７…アルカリ・Ｂ／Ｆ洗浄液、
３１…基質保冷庫、３３…廃棄容器、３５…メイン扉、３７…オートセルフィーダー、３９…インキュベーションテーブル、４１…Ｂ／Ｆ分離機構、４５…検出ユニット、５７…反応容器搬送部、６１…試薬ノズル洗浄槽、６３…不溶物検出部（測光部）、６３ａ…空洞、６４…廃棄部、６５…Ｂ／Ｆ分離部、８１…ＬＥＤ、８５…ＰＤ、９１…前処理部、９５…不溶物判定部、９６…しきい値記憶部、９７…検出部、９８…しきい値入力部。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｂ／Ｆ分離を含む免疫測定技術に関し、特に、Ｂ／Ｆ分離の不溶物判定技術に関する。
【背景技術】
【０００２】
図１は、Ｂ／Ｆ（Ｂｏｕｎｄ／Ｆｒｅｅ）分離を必要とするヘテロジニアスな免疫測定法の流れの概要の一例を示す図である。抗原（Ａｎｔｉｇｅｎ）または抗体（Ａｎｔｉｂｏｄｙ）などの免疫測定法として、競合法あるいはサンドイッチ法等が知られている。これは、反応液３で満たされた反応容器（セル等）１内で抗原抗体反応（免疫反応）を行わせ、この磁性粒子やポリスチレン粒子、プレートなどに固相化された抗原・抗体と複合体を形成するコンジュゲートに予め標識されている酵素を結合させることにより抗原・抗体を検出する方法である。この方法では、固相化抗原・抗体に反応した抗体・抗原と複合体を形成したコンジュゲートのみを反応容器１内に残し、反応しなかった抗原・抗体と複合体を形成していないコンジュゲートは反応容器１内から除去する。
【０００３】
ヘテロジニアスな免疫測定法では、この除去操作が必要であり、一般にＢ／Ｆ分離という。通常はこのＢ／Ｆ分離のために、抗原抗体反応を行う抗原１０３あるいは抗体１０１を反応容器１内の担体に予め固定しておく（図１（ａ）、この場合には、抗原１０３の量を測定する。）。担体として例えば磁性粒子１０５を用いる場合、抗体１０１を表面に固定した磁性粒子１０５に、測定対象となる特定の抗原１０３を含む溶液を添加し、１次免疫反応を反応容器１内で行わせた後に（図１（ｂ）、磁性粒子１０５に固定された抗体１０１に抗原１０３を結合させる。）、反応容器１に磁石５を接触あるいは接近させることで、反応容器１内の内側壁に抗体１０１と抗原１０３とが結合された磁性粒子１０５が捕捉される（図１（ｃ））。
【０００４】
図１（ｃ）に示す状態で、反応容器１の内側壁に捕捉されなかった不純物を含む非磁性成分（図では未反応の抗原１０３ａ等）を、吸引ノズル７で吸引除去するとともに洗浄液を吐出部１１から吐出する。磁石５を反応容器１から十分に離して洗浄液を洗浄液吐出部１１から分注すると、反応生成物は反応容器１内側壁から離れ、磁性粒子１０５全体に洗浄液が行き渡り、前記の吸引のみでは除去しきれなかった不純物（ｆｒｅｅの抗原・抗体等）を剥離することができる。図１（ｄ）に示すように、酵素標識抗体１０７（抗体１０９に酵素１１１が結合したもの）を添加して２次免疫反応をさせると、結合磁性粒子１０５に固定された抗体１０１に抗原１０３を結合させた複合体に、酵素標識抗体１０７が結合する（複合体Ｘが形成される）。ここで、未反応の酵素標識抗体１０７ａを除去するために、図１（ｅ）に示すように、再び磁石５を反応容器１に接触あるいは接近させると、反応容器１内側壁に反応生成物（複合体Ｘ）が捕捉され、さらに前記と同様に吸引ノズル７によって不純物等（未反応の酵素標識抗体１０７ａを含む）を含んだ洗浄液を吸引ノズル７で吸引除去する洗浄液を吐出部１１から吐出する。
【０００５】
この操作を繰り返すことで反応生成物の洗浄効果が高まり、予め酵素を標識しているコンジュゲートと抗原抗体とからなる複合体Ｘのみを残すことができる。従って、高精度な分析結果（抗原１０３の濃度、量等を求めるための分析結果）を得ることができる。尚、洗浄液を分注した後に攪拌作業を実施すれば、さらなる洗浄効果の向上が期待できる。次いで、図１（ｆ）に示すように、発光基質１１３を反応液に添加する。すると、発光基質１１３が酵素標識抗体１０７により消費され、その際にシグナルを発する。このようにして、複合体Ｘのシグナルを分析することができる。例えば抗原１０３の数が多いほど、消費される基質数が多くなるため、図１（ｆ）の状態でシグナルを測定することで、シグナル量に依存する抗原又は抗体の量（濃度）を測定することができ、検体中の対象物質の濃度を知ることができる。
【０００６】
ここで、このＢ／Ｆ分離を確実に行うことにより、免疫測定法におけるシグナルのバックグラウンドは小さくなり、測定の感度と精度を高めることができる。
【０００７】
従来、Ｂ／Ｆ分離の確実性を増すために洗浄回数を増加させることは、測定の高速化や高スループット化を妨げるという問題があった。このため、最短の動作で最大の分離効率を得るための種々の発明がなされてきた。その一例としては、Ｂ／Ｆ分離に用いる洗浄液の組成の改良や、洗浄液残りの低減などが挙げられる。
【０００８】
下記特許文献１は、担体表面に固定された分子と溶液中の分子を結合させる抗原抗体反応において、洗浄液の吐出と排出の繰返しによって未結合の分子を除去するＢ／Ｆ分離を行う際の洗浄を、１回目は所定の濃度の洗浄液となるような吐出とその後の排出を行い、２回目以降は前の回よりも濃くない洗浄液になるような吐出とその後の排出を行い、最終回は、初回の濃度より薄い洗浄液になるような吐出とその後の排出とを行うものである。これにより、全体としては洗浄液量を減らして効率よく洗浄を行い、かつ、洗浄液残存の影響を低減することができる。
【０００９】
また、下記特許文献２に記載の乳び・溶血検体検出装置においては、検体を分析する分析処理の前に前記検体の画像情報を検出する撮像部と、検出した前記画像情報に基づき、前記検体の色から前記検体の乳び状態または溶血状態を検出する乳び・溶血検体検出部と、を備えるものである。検体の画像情報を利用して検体の色から前記検体の乳び状態または溶血状態を検出することで、高い精度で、かつ、効率良く、検体の状態を検出することができる。例えば、検体の色が黄色の場合を正常状態として設定し、ティーチングにより判定処理を行う。例えば検体の色が赤色、桃色、橙色など、正常状態よりも赤みがかっている場合には溶血状態と判定する。一方、検体の色が桃色や乳白色など、正常状態よりも白濁している場合には乳び状態と判定することができる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】特開２００９−１６２７３３号公報
【特許文献２】特開２０１０−２８１６０４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
しかしながら、特許文献１に記載の技術を用いた場合に、Ｂ／Ｆ分離後の吸引工程において、ノズルが不溶物により詰まるという問題が生じていた。また、特許文献２に記載の技術では、検体の画像情報に基づいて白濁の度合いを検査しているが、目視の場合と同様に、検出精度があまり良くないという問題もある。
【００１２】
また、Ｂ／Ｆ分離工程における問題点として、例えば、ＨＣＶ（Ｃ型肝炎ウイルス）コア抗原などの測定系においては、ウイルス内のコア抗原を表出させるために、界面活性剤を含む酸やアルカリによる変性前処理が必要となる。この前処理を、高タンパク血症の検体で行うと、不可逆的なタンパク変性が生じ多様な不溶物が発生するという問題がある。
【００１３】
かかる処理により生じた変性物や血漿（または血清)のフィブリン塊、尿・便中の不純物などの不溶物がＢ／Ｆ分離の際に用いる吸引ノズル７を詰まらせるという現象が生じ、Ｂ／Ｆ分離処理部を含む装置の不良・トラブルが発生するという問題がある。
【００１４】
また、Ｂ／Ｆ分離処理が不完全になることで、測定結果が偽陽性になったり、偽陰性になったりすることにより、医療過誤の要因となるという問題もあった。
【００１５】
本発明は、Ｂ／Ｆ分離処理を含む免疫測定技術において、Ｂ／Ｆ分離に用いるノズルが不溶物により詰まるという問題を解決することを目的とする。また、不溶物の検出精度を向上させることを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
上記目的を達成するために、本発明のＢ／Ｆ分離を含む免疫測定装置においては、Ｂ／Ｆ分離部の前段に、不溶物検出部とその測光結果に基づいて不溶物の有無を判定する不溶物判定部とを設け、当該不溶物判定部において、前記Ｂ／Ｆ分離部において反応容器の内側壁に捕捉されなかった不純物を含む非磁性成分（不溶物）により、ノズルで吸引する際のノズルの詰まりが生じうるか否かを光の透過率に基づいて予め判定し、ノズル詰まりが生じない程度の透過率が得られなかった場合には、そのサンプルは、不溶物によりノズルを詰まらす可能性が高いと判定することを特徴とする。
【００１７】
Ｂ／Ｆ分離部によるノズル吸引より前に、不溶物の有無を判定することで、不溶物に起因するノズル詰まりを防止し、また、不溶物に起因するＢ／Ｆ分離処理が不完全になることを抑制して、抗原濃度などの測定結果が偽陽性になったり、偽陰性になったりすることによる、医療過誤の要因を少なくすることができる。
【００１８】
例えば、Ｂ／Ｆ分離における免疫測定装置のトラブルまたは、医療過誤を回避するために、Ｂ／Ｆ分離工程前で反応容器に光等を照射し、対向側に配置された受光素子（フォトダイオードなど）により、吸光度変化(またはフォトダイオードの電庄変化)に基づいて、反応容器内の不溶物の有無の判定を行う。この不溶物の判定には、吸光度(または電圧)の積算値やピーク値などを使用することができる。そして、不溶物が有と判定された場合は、Ｂ／Ｆ分離工程に入る前にその試料を排出または廃棄する。尚、光源としてＬＥＤを用いる場合には、赤(波長６３５ｎｍ付近)、緑(波長５２５ｎｍ付近)、青(波長４７０ｎｍ付近)の全て又はいずれかを使用することができる。光源としては、可視光域を含む波長帯を有する光を用いることができる。
【００１９】
本発明の一観点によれば、反応容器内の抗体結合磁性粒子又は抗原結合磁性粒子に反応した抗原又は抗体と未反応な遊離抗原又は遊離抗体を洗浄し、前記未反応な遊離抗原又は遊離抗体を吸引部（ノズル）により吸引することで分離するＢ／Ｆ分離部を備えた免疫測定装置であって、前記Ｂ／Ｆ分離部の前段に、前記反応容器に光照射を行う発光部と、反応容器の透過光を測定する受光部と、を備えた測光部と、前記受光部における受光強度に基づいて、前記吸引部の詰まりの原因となる不溶物の有無を判定する不溶物判定部と、を有することを特徴とする免疫測定装置が提供される。
【００２０】
さらに、不溶物の有無を判定するしきい値を格納するしきい値格納部を設け、前記不溶物判定部は、前記受光部の受光強度と、前記しきい値との大小関係に基づいて、不溶物の有無を判定することを特徴とすることが好ましい。しきい値として、吸光度（または電圧）の積算値を用いることが好ましい。前記発光部の光源として、ＬＥＤを用いることが好ましい。前記ＬＥＤとして、赤色ＬＥＤを用いることが好ましい。共存物質が混入している場合でも、赤色ＬＥＤであれば、しきい値を超えない試料を、不溶物の入っている試料と判定しない。
【００２１】
前記受光部は、赤色を検出波長帯に含む第１の受光素子と、赤色を検出波長帯に含む第２の受光素子であって、赤色以外をフィルタリングするフィルタ部を受光面側に設け第２の受光素子との受光強度の差異に基づいて、前記不溶物判定部が不溶物の判定を行うことが好ましい。第１受光素子で不溶物とされても、第２受光素子で赤色とされた場合には、ヘモグロビンの共存物質として、不溶物と判定しない。
【００２２】
前記しきい値は、モデル検体として、前記吸引部の開口径に近似した粒径を有する沈殿物を入れた反応容器における第１の受光強度と、沈殿物を入れていない反応容器における第２の受光強度との間の値として決められることが好ましい。
【００２３】
前記吸引部の詰まりの原因となる不溶物の有無を判定する不溶物判定部は、前記受光部における受光強度に依存するパラメータの積算値に基づいて、不溶物の有無を判定することが好ましい。
【００２４】
前記測光部は、前記発光部と前記受光部とが対向する位置に配置され、前記反応容器を鉛直方向にスキャンさせる操作部を有していることが好ましい。これにより積算値を求めることができる。
【００２５】
前記測光部の近傍に、前記不溶物判定部が不溶物有りと判定した前記反応容器を排出または廃棄する廃棄部を備えることが好ましい。
【００２６】
本発明の他の観点によれば、反応容器内の抗体又は抗原結合磁性粒子に反応した抗原又は抗体と未反応な遊離抗原又は抗体を洗浄し吸引部（ノズル）により吸引することで分離するＢ／Ｆ分離処理を含む免疫測定法であって、前記Ｂ／Ｆ分離ステップの前ステップとして、前記反応容器に光照射を行う発光部と、反応容器の透過光を測定する受光部と、を備えた測光ステップと、前記受光部における受光強度に基づいて、前記吸引部の詰まりの原因となる不溶物の有無を判定する不溶物判定ステップと、を有することを特徴とする免疫測定法が提供される。
【００２７】
また、本発明は、上記に記載の免疫測定法をコンピュータに実行させるためのプログラム、当該プログラムを記録するコンピュータ読み取り可能な記録媒体であっても良い。
【発明の効果】
【００２８】
本発明によれば、Ｂ／Ｆ分離を含む免疫測定装置において、Ｂ／Ｆ分離処理における不溶物に起因するノズル詰まりを防止することができる。
【００２９】
また、不溶物に起因するＢ／Ｆ分離処理が不完全になることを抑制して、対象物質の濃度などの測定結果が偽陽性になったり、偽陰性になったりすることによる、医療過誤の要因を少なくすることができる。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１】本発明の一実施の形態によるＢ／Ｆ分離を含む免疫測定法の流れを示す概要図である。
【図２Ａ】本発明の一実施の形態による免疫測定装置の概略構成を示す斜視図である。
【図２Ｂ】本発明の一実施の形態による免疫測定装置の概略構成を示す分解斜視図である。
【図３】本発明の一実施の形態による免疫測定装置の概略構成を示す平面図である。
【図４】本発明の一実施の形態による免疫測定装置の要部の概略構成を示す図である。
【図５】本発明の一実施の形態による免疫測定装置のうち、不溶物測定部の概略構成を示す図である。
【図６】本発明の一実施の形態による免疫測定装置の概略構成例を示す機能ブロック図である。
【図７】実施例１の標準モデル検体を用いた測光結果を示す図であり、（ａ）は赤色ＬＥＤを、（ｂ）は緑色ＬＥＤを、（ｃ）は青色ＬＥＤを用いた場合の、受光部（フォトダイオード）の受光強度に依存する電圧と、反応容器のｚ方向へのスキャンタイミングとの関係を示す図である。
【図８】実施例１の標準モデル検体を用いた測光結果を示す図であり、（ａ）は赤色ＬＥＤを、（ｂ）は緑色ＬＥＤを、（ｃ）は青色ＬＥＤを用いた場合の、受光部（フォトダイオード）の受光強度に依存する吸光度と、反応容器のｚ方向へのスキャンタイミングとの関係を示す図である。
【図９】実施例２のモデル検体を用いた免疫測定に用いられる反応容器群の一例を示す図である。
【図１０】実施例２のモデル検体を用いた測光結果を示す図であり、（ａ）は赤色ＬＥＤを、（ｂ）は緑色ＬＥＤを、（ｃ）は青色ＬＥＤを用いた場合の、受光部（フォトダイオード）の受光強度に依存する電圧と、反応容器のｚ方向へのスキャンタイミングとの関係を示す図である。
【図１１】実施例２のモデル検体を用いた測光結果を示す図であり、（ａ）は赤色ＬＥＤを、（ｂ）は緑色ＬＥＤを、（ｃ）は青色ＬＥＤを用いた場合の、受光部（フォトダイオード）の受光強度に依存する吸光度と反応容器のｚ方向へのスキャンタイミングとの関係を示す図である。
【図１２】実施例３の実検体を用いた免疫測定に用いられる反応容器群の一例を示す図である。
【図１３】実施例３の実検体を用いた測光結果を示す図であり、（ａ）は赤色ＬＥＤを、（ｂ）は緑色ＬＥＤを、（ｃ）は青色ＬＥＤを用いた場合の、受光部（フォトダイオード）の受光強度に依存する電圧と、反応容器のｚ方向へのスキャンタイミングとの関係を示す図である。
【図１４】実施例３の実検体を用いた測光結果を示す図であり、（ａ）は赤色ＬＥＤを、（ｂ）は緑色ＬＥＤを、（ｃ）は青色ＬＥＤを用いた場合の、受光部（フォトダイオード）の受光強度に依存する吸光度と反応容器のｚ方向へのスキャンタイミングとの関係を示す図である。
【図１５】実施例４の共存物質を含む検体の測光結果を示す図であり、（ａ）は赤色ＬＥＤを、（ｂ）は緑色ＬＥＤを、（ｃ）は青色ＬＥＤを用いた場合の、受光部（フォトダイオード）の受光強度に依存する電圧と、反応容器のｚ方向へのスキャンタイミングとの関係を示す図である。
【図１６】実施例４の共存物質を含む検体の測光結果を用いた測光結果を示す図であり、（ａ）は赤色ＬＥＤを、（ｂ）は緑色ＬＥＤを、（ｃ）は青色ＬＥＤを用いた場合の、吸光度と反応容器のｚ方向へのスキャンタイミングとの関係を示す図である。
【図１７】実施例５の免疫測定装置を用いた場合の測光結果を示す図であり、赤色ＬＥＤを用い、（ａ）はＢＧＧ依存性、（ｂ）は沈殿物の量依存性、（ｃ）は検体依存性の、受光部（フォトダイオード）の受光強度に依存する電圧と、反応容器のｚ方向へのスキャンタイミングとの関係を示す図である。
【図１８】実施例５の免疫測定装置を用いた場合の測光結果を示す図であり、赤色ＬＥＤを用い、（ａ）はＢＧＧ依存性、（ｂ）は沈殿物の量依存性、（ｃ）は検体依存性の、吸光度と反応容器のｚ方向へのスキャンタイミングとの関係を示す図である。
【図１９】実施例６の免疫測定装置を用いた共存の物質のモデル検体として血漿／血清の実検体を用いた場合の測光結果を示す図であり、赤色ＬＥＤを用い、（ａ）は共存物質のモデル検体、（ｂ）は乳び血漿、（ｃ）はＨｂ血漿の、受光部（フォトダイオード）の受光強度に依存する電圧と、反応容器のｚ方向へのスキャンタイミングとの関係を示す図である。
【図２０】実施例６の免疫測定装置を用いた共存の物質のモデル検体として血漿／血清の実検体を用いた場合の測光結果を示す図であり、赤色ＬＥＤを用い、（ａ）は共存物質のモデル検体、（ｂ）は乳び血漿、（ｃ）はＨｂ血漿の、受光部（フォトダイオード）の吸光度と、反応容器のｚ方向へのスキャンタイミングとの関係を示す図である。
【図２１】１ステップ法による免疫測定法の流れを示すフローチャート図である。
【図２２】ディレイド１ステップ法による免疫測定法の流れを示すフローチャート図である。
【図２３】２ステップ法（１）による免疫測定法の流れを示すフローチャート図である。
【図２４】２ステップ法（２）による免疫測定法の流れを示すフローチャート図である。
【図２５】前処理付き２ステップ法による免疫測定法の流れを示すフローチャート図である。
【図２６】前希釈付き２ステップ法による免疫測定法の流れを示すフローチャート図である。
【発明を実施するための形態】
【００３１】
以下、本発明の実施の形態による不溶物判定技術について図面を参照しながら説明を行う。
Ｂ／Ｆ分離を必要とするヘテロジニアスアッセイ系において、Ｂ／Ｆ分離とは抗体(または抗原)結合磁性粒子に反応した抗原(または抗体)と未反応な遊離抗原(または抗体)を
洗浄分離する方法である。
【００３２】
まず、本発明の一実施の形態によるＢ／Ｆ分離部と測光部とを有する免疫測定装置について説明する。図１は、本発明の一実施の形態によるＢ／Ｆ分離を含む免疫測定の流れを示す概要図である。図１については前述したため、説明を省略する。
【００３３】
図２Ａは、本発明の一実施の形態による免疫測定装置の概略構成を示す斜視図である。図２Ｂは、本発明の一実施の形態による免疫測定装置の概略構成を示す分解斜視図である。
【００３４】
また、本実施の形態による免疫測定装置Ａには、反応容器１を１本ずつ自動的に装置に供給するオートセルフィーダー３７と、インキュベーションを行うためのインキュベーションテーブル３９と、Ｂ／Ｆ分離処理を行うためのＢ／Ｆ分離機構４１と、不溶物の検出を行う検出ユニット（不溶物検出部）４５と、を有する。
【００３５】
図３は、本発明の一実施の形態による免疫測定装置の概略構成例を示す平面図である。図３に示すように、本発明の一実施の形態による免疫測定装置Ａを上面からみると、例えば、反応容器１内に検体を分注するサンプル分注部２０と試薬を分注する試薬分注部（１）５０または（２）２３、検体・試薬が分注された反応容器１内の１次または２次免疫反応液を攪拌する反応容器攪拌部４７または５５ａと、１次または２次免疫反応を行うインキュベーションテーブル（１）４３及び（２）４４と、試薬を保冷する試薬保冷部５１と、反応容器を搬送する反応容器搬送部５７と、試薬ノズル洗浄槽６１と、不溶物の検出を行う不溶物検出部（測光部）６３と、測光部６３で不溶物が検出され排出または廃棄すべき検体を反応容器１毎排出または廃棄する廃棄部６４と、測光部６３で不溶物が検出されずに排出または廃棄しないでＢ／Ｆ分離をすべき検体のＢ／Ｆ分離処理を行うＢ／Ｆ分離部６５と、Ｂ／Ｆ分離処理における洗浄液１、２を吐出するＢ／Ｆ分注部（１）６７、（２）６９と、Ｂ／Ｆ洗浄部６５ａと、試薬ノズルを洗浄する試薬ノズル洗浄槽７０と、シグナルを検出する検出部９７と、シグナル検出後の反応容器１毎を廃棄する廃棄部６４と、を有している。尚、上記構成のうちのいずれかを他の構成で置換したり、一部の構成を他の装置に持たせたりすることが可能である。
【００３６】
装置の動作について説明する。
図４は、本発明の一実施の形態による免疫測定装置の要部の概略構成を示す図である。図４（ａ）に示すように、反応容器搬送部５７により、反応容器１が測光部６３内に挿入され、Ｚ軸方向に移動させながらＬＥＤ発光の透過光を受光素子により測定して、不溶物量に依存する受光素子の電圧又は吸光度を求める。求めた電圧又は吸光度に基づいて、あるしきい値を超える反応容器は、透明であり不溶物なしとして、検体として利用することができる。あるしきい値を超えない反応容器は、不溶物ありと判断して、検体として利用できないため、廃棄部６４に排出または廃棄する。
【００３７】
図５は、本発明の一実施の形態による免疫測定装置のうち、不溶物検出部（測光部）６３の詳細な構成例を示す図である。反応容器搬送部５７は、反応容器１を把持し、上下（Ｚ軸）方向に移動させることができる。不溶物検出部６３は、空洞６３ａを有しており、空洞６３ａの内壁の反応容器１を挟んで対向する位置に、発光部（ＬＥＤ）８１と、受光部（フォトダイオード、ＰＤ）８５と、を配置している。そして、ＬＥＤ（発光部）８１からの発光は、反応容器１の中心部を透過してＰＤ（受光部）８５に照射される。照射された光は、ＰＤ８５において、受光する光量に依存する電圧に変換され、吸光度を求めることができる。電圧が高いほど、検体中の不溶物が少ない、すなわち吸光度が低い。従って、受光素子の電圧又は吸光度により、検体中の不溶物量を推定することができる。
【００３８】
図６は、本発明の一実施の形態による免疫測定装置の概略構成例を示す機能ブロック図である。まず、反応容器１内の検体は、前処理部９１において前処理が行われ、次いで、１次免疫反応後、不溶物検出部６３で測光される。次いで、不溶物検出部６３における測光結果に基づいて、不溶物判定部９５でノズルの詰まりが生じるような不溶物の有無を判定し、そのような不溶物がない場合には、Ｂ／Ｆ分離部６５でＢ／Ｆ（１）分離を行う。次いで、２次免疫反応後、Ｂ／Ｆ分離部６５でＢ／Ｆ（２）分離を行い、検出部９７でシグナル量の分析を行い、抗原、抗体の定量及び定性分析を行う。ここで、不溶物判定部９５は、しきい値記憶部９６に予め記憶していたしきい値又はしきい値入力部９８から入力されたしきい値等との比較結果に基づいてノズル詰まりの可能性を判定する。
【００３９】
次に、不溶物判定の具体的な処理内容について説明する。
ノズル径が０．６〜０．８ｍｍであるため、それよりも少し大きい径を持つ沈殿物を入れた標準モデル検体を、ノズルを詰まらせる不溶物の標準試料として用いることができる。
【００４０】
[実施例１]
図７は、反応容器１のｚ軸に沿ったスキャンのタイミングと赤ＬＥＤ、緑ＬＥＤ、青ＬＥＤのそれぞれにおけるＰＤの出力電圧（ＬＥＤ光の透過率に対応）の関係を、沈殿物無し、少量から多量のそれぞれについて測定した図である。図７より沈殿物の程度におけるスキャン期間中の電圧の和（電圧積算値）を求めることができる。同様に、ＬＥＤ（緑）、ＬＥＤ（青）についてもスキャン期間中の電圧の和（電圧積算値）を求めると表１のようになる。０．５ｍｓにて、例えば２８８ポイントを測光している。実装置のデータでＬＥＤの切替えをする際は、２８８ポイントを測光するＬＥＤの数で割った分、つまり赤と緑の２つであれば１４４ポイントずつになる。測光部のみの簡易装置では、各波長において２８８ポイントを測光することが可能である。
【００４１】
【表１】
【００４２】
【表２】
【００４３】
表１では、ＬＥＤ（赤）、ＬＥＤ（緑）、ＬＥＤ（青）のいずれの場合でも、スキャン中の電圧の和（電圧積算値）は、沈殿物の量とともに減少することがわかる。ここで、沈殿物無しと少量との間にノズル詰まりに関する電圧積算値のしきい値があることから、表２に示すように、各色のＬＥＤにおけるノズル詰まりに関する電圧積算値のしきい値は、それぞれ、３５０００、２５０００、２００００と求めることができる。これらのしきい値以下であると、ノズル詰まりが生じることになる。
【００４４】
このしきい値が、以下に説明する同様の検体における、ノズルを詰まらせるか否かの判定の基準値となる。この基準値を、しきい値記憶部９６に記憶しておく。或いは、しきい値入力部９８から入力しておく。
【００４５】
図８は、標準モデル検体を用いた測光結果を示す図であり、図７に対応する図である。図８（ａ）は赤色ＬＥＤを、（ｂ）は緑色ＬＥＤを、（ｃ）は青色ＬＥＤを用いた場合の、受光部（フォトダイオード）の受光強度に依存する吸光度と、反応容器のｚ方向へのスキャンタイミングとの関係を示す図である。図８より沈殿物の量におけるスキャン中の吸光度の積算値を求めることができる。同様に、ＬＥＤ（緑）、ＬＥＤ（青）についてもスキャン中の吸光度の和（積算値）を求めると表３のようになる。沈殿物の有無における積算値のしきい値が求まる。同様に、ＬＥＤ（緑）、ＬＥＤ（青）についても求めると以下のようになる。
【００４６】
【表３】
【００４７】
【表４】
【００４８】
吸光度を基準にする場合には、ＬＥＤ（赤）、ＬＥＤ（緑）、ＬＥＤ（青）のしきい値は、表４に示すように１５００００、１６００００、３５００００であることがわかる。これらのしきい値以上であると、ノズル詰まりが生じることになる。
【００４９】
このしきい値も、以下に説明する同様の検体における、ノズルを詰まらせるか否かの判定の基準値となる。この基準値を、しきい値記憶部９６に記憶しておく。或いは、しきい値入力部９８から入力しておく。
【００５０】
[実施例２]
図９は、モデル検体を用いた免疫反応に用いられる反応容器群の一例を示す図である。
【００５１】
モデル検体１として、ヒト正常血清(ＮＨＳ)にＢｏｖｉｎｅ γＧ（ＢＧＧ）を添加し、疑似的高タンパク血清を作製し、前処理を実施したものを用いた。図９の左側の反応容器から順番に、ＮＨＳ、＋０．５％ＢＧＧ、＋１％ＢＧＧ、＋２％ＢＧＧ、＋４％ＢＧＧ、＋６％ＢＧＧ、＋８％ＢＧＧ、＋１０％ＢＧＧの酸・アルカリ前処理後の様子を示す図であり、ある反応容器には不溶物の白濁が発生していることがわかる。不溶物の検出は、ＬＥＤ光を反応容器の底部から上部に向けて走査照射し受光素子により受光させて、反応容器を透過する透過光量に依存する受光素子の電圧の値を積算する。
【００５２】
【表５】
【００５３】
【表６】
【００５４】
表５は、ＬＥＤ（赤）、ＬＥＤ（緑）、ＬＥＤ（青）に関する、ＮＨＳ、＋０．５％ＢＧＧ、＋１％ＢＧＧ、＋２％ＢＧＧ、＋４％ＢＧＧ、＋６％ＢＧＧ、＋８％ＢＧＧ、＋１０％ＢＧＧのスキャン中の電圧の和（電圧積算値）を示す表である。表６より、ＬＥＤ（赤）、ＬＥＤ（緑）、ＬＥＤ（青）に関するしきい値として、３５０００、２５０００、２００００がしきい値記憶部９６に記憶されている（表２と同じ値）。このしきい値を参照して、実際に図１０で求めた値から、それぞれ、しきい値以上の電圧積算値は、ＬＥＤ（赤）で＋１％ＢＧＧ、ＬＥＤ（緑）で＋０．５％ＢＧＧ、ＬＥＤ（青）でも＋０．５％ＢＧＧとなり、これらの結果より、＋１％ＢＧＧから＋０．５％ＢＧＧの検体は、ノズルを詰まらせない可能性が高い検体であると判断することができる。この測光結果より、安全を見込めば＋０．５％ＢＧＧの検体までをＢ／Ｆ分離処理に用い、それ以上の高濃度のＢＧＧ検体は排出または破棄することになる。
【００５５】
図１１は、モデル検体を用いた測光結果を示す図であり、（ａ）は赤色ＬＥＤを、（ｂ）は緑色ＬＥＤを、（ｃ）は青色ＬＥＤを用いた場合の、吸光度と反応容器のｚ方向へのスキャンタイミングとの関係を示す図である。
【００５６】
【表７】
【００５７】
【表８】
【００５８】
表７は、ＬＥＤ（赤）、ＬＥＤ（緑）、ＬＥＤ（青）に関する、ＮＨＳ、＋０．５％ＢＧＧ、＋１％ＢＧＧ、＋２％ＢＧＧ、＋４％ＢＧＧ、＋６％ＢＧＧ、＋８％ＢＧＧ、＋１０％ＢＧＧのスキャン中の吸光度積算値を示す表である。表８よりＬＥＤ（赤）、ＬＥＤ（緑）、ＬＥＤ（青）に関するしきい値として、１５００００、１６００００、３５００００がしきい値記憶部９６に記憶されている（表４と同じ値）。このしきい値を参照して、実際に図１１で求めた値から、それぞれ、しきい値以下の吸光度積算値は、ＬＥＤ（赤）で＋１％ＢＧＧ、ＬＥＤ（緑）で＋０．５％ＢＧＧ、ＬＥＤ（青）でも＋０．５％ＢＧＧとなり、これらの結果より、＋１％ＢＧＧから＋０．５％ＢＧＧの検体は、ノズルを詰まらせない可能性が高い検体であると判断することができる。この測光結果より、安全を見込めば＋０．５％ＢＧＧの検体までをＢ／Ｆ分離処理に用い、それ以上の高濃度のＢＧＧ検体は排出または廃棄することになる。電圧積算値でも吸光度の積算値でも同様の結果が得られている。
【００５９】
このようにして、ＮＨＳ、＋０．５％ＢＧＧの各検体について、実際にＢ／Ｆ分離でノズルを詰まらせることなく処理を行うことができることがわかる。すなわち、これらの検体は、ノズル詰まりを生じさせないものであり、Ｂ／Ｆ分離を行っても良い検体であると言える。
【００６０】
[実施例３]
図１２は、実検体を用いた免疫反応に用いられる反応容器群の一例を示す図である。
【００６１】
実検体として、高タンパク血漿検体を用いている。図１２の左側の反応容器から順番に、ヒト正常血清、残り６反応容器が、酸・アルカリ前処理後、多様な不溶物が発生した様子を示しており（左から＃４、＃６、＃３９、＃４３、＃７２、＃８２である）、不溶物の白濁が発生していることがわかる。不溶物の検出はＬＥＤ光を反応容器に走査照射し受光させて、光量に依存する受光素子の電圧の値を積算する。
【００６２】
図１３は、実検体を用いた測光結果を示す図であり、（ａ）は赤色ＬＥＤを、（ｂ）は緑色ＬＥＤを、（ｃ）は青色ＬＥＤを用いた場合の、受光部（フォトダイオード）の受光強度に依存する電圧と、反応容器のｚ方向へのスキャンタイミングとの関係を示す図である。
【００６３】
図１３より、各種検体におけるスキャン中の電圧の和（電圧積算値）を求めることができる（表９）。
【００６４】
【表９】
【００６５】
【表１０】
【００６６】
また、表１０は、表２に対応する表である。表９と表１０より、この検体では、ＮＨＳ以外の検体では、しきい値以下の電圧積算を有しており、これらの検体は不溶物を含みノズルを詰まらせる可能性がある検体であることがわかる。
【００６７】
図１４は、実検体を用いた測光結果を示す図であり、（ａ）は赤色ＬＥＤを、（ｂ）は緑色ＬＥＤを、（ｃ）は青色ＬＥＤを用いた場合の、吸光度と反応容器のｚ方向へのスキャンタイミングとの関係を示す図である。図１４より、各種検体におけるスキャン中の吸光度の積算値を求めることができる（表１１）。
【００６８】
【表１１】
【００６９】
【表１２】
【００７０】
また、表１２は、表４に対応する表である。表１１と表１２より、この検体では、ＮＨＳ以外の検体では、しきい値以上の吸光度積算値を有しており、これらの検体は不溶物を含みノズルを詰まらせる可能性がある検体であることがわかる。この結果は、図１３の結果と同様である。
【００７１】
以上のように、ノズル径よりも少しだけ大きい径を有する沈殿物に関する、積算電圧、又は、吸光度積算値に基づいて求めたしきい値を記憶しておき、このしきい値に基づいて、実際の検体のＢ／Ｆ分離処理前の測光処理においてその検体の積算値が上記しきい値よりも大きいか否かに基づいて、ノズルを詰まらせるような検体であるか否かを測光部において判定することができる。
【００７２】
従って、Ｂ／Ｆ分離処理前に、非破壊的に検体内の不溶物の有無を調べることができ、Ｂ／Ｆ分離処理におけるノズル詰まりを未然に防止することができる。
【００７３】
このように、Ｂ／Ｆ分離を含む免疫測定装置において、Ｂ／Ｆ分離処理における不溶物に起因するノズル詰まりを防止し、また、不溶物に起因するＢ／Ｆ分離処理が不完全になることを抑制して、対象物質の濃度などの測定結果が偽陽性になったり、偽陰性になったりすることによる、医療過誤の要因を少なくすることができる。
【００７４】
次に、共存物質の影響について説明する。検体には、直接型ビリルビン(Ｂｉｌ−Ｆ)、抱合型ビリルビン(Ｂｉｌ−Ｃ)、乳び、溶血（Ｈｂ）の共存物質が混入している場合が多く、これらが不溶物検出処理に影響を与える可能性がある。以下に、共存物質の影響を考慮した免疫測定技術の例について説明する。
【００７５】
[実施例４]
図１５は、共存物質を含む検体の測光結果を示す図であり、（ａ）は赤色ＬＥＤを、（ｂ）は緑色ＬＥＤを、（ｃ）は青色ＬＥＤを用いた場合の、受光部（フォトダイオード）の受光強度に依存する電圧と、反応容器のｚ方向へのスキャンタイミングとの関係を示す図である。共存物質としては、ＮＨＳ、Ｂｉｌ−Ｆ・Ｌ（約４ｍｇ／ｄＬ）、Ｂｉｌ−Ｆ・Ｈ（約２０ｍｇ／ｄＬ）、Ｂｉｌ−Ｃ・Ｌ（約４ｍｇ／ｄＬ）、Ｂｉｌ−Ｃ・Ｈ（約２０ｍｇ／ｄＬ）、乳び・Ｌ（約２８０濁度）、乳び・Ｈ（約１４００濁度）、Ｈｂ・Ｌ（約９５ｍｇ／ｄＬ）、Ｈｂ・Ｈ（約４８０ｍｇ／ｄＬ）を例として測定している。
【００７６】
【表１３】
【００７７】
【表１４】
【００７８】
表１３は測定結果を示すものであり、表１４は表２に対応し、電圧変換の場合のしきい値を示す。
表１３は、電圧積算の結果を示す図である。この表１３を見るとわかるように、ＬＥＤ（緑）、ＬＥＤ（青）では、しきい値を超えないものが多く、実際には共存物質は検体中に含まれてＢ／Ｆ分離処理が行われるべきであるにもかかわらず、共存物質が含まれることでしきい値以下の積算値とされて排出または廃棄対象となってしまうという問題がある。
【００７９】
そこで、光源のＬＥＤとしては、ＬＥＤ（赤）を用いることが好ましい。さらに、ＬＥＤ（赤）を用いても、Ｈｂ・Ｌ、Ｈｂ・Ｈは、しきい値で、共存物質であるか否かを判定できない。そこで、測光部６３の第１のＰＤ８５（可視光用）に加えて、同様の第２のＰＤに赤色のみを透過するフィルタを付けることで赤色であることを検出し（或いは目視により検出し）、２つの第１及び第２のＰＤの測定結果から、第１のＰＤでしきい値以下であるが、第２のＰＤで赤色であることを検出すると、これを、Ｈｂ・Ｌ、Ｈｂ・Ｈの共存物質と判定するようにすると良い。このようにすれば、共存物質を含む検体を不溶物として除去することを防止することができる。目視で判定することもできる。
【００８０】
図１６は、共存物質を含む検体の測光結果を示す図であり、（ａ）は赤色ＬＥＤを、（ｂ）は緑色ＬＥＤを、（ｃ）は青色ＬＥＤを用いた場合の、吸光度と反応容器のｚ方向へのスキャンタイミングとの関係を示す図である。
【００８１】
【表１５】
【００８２】
【表１６】
【００８３】
表１５は測定結果を示すものであり、表１６は表４に対応し、吸光度の場合のしきい値を示す。
ＬＥＤ（緑）、ＬＥＤ（青）では、しきい値を超えるものが多く、実際には共存物質は検体中に含まれてＢ／Ｆ分離処理が行われるべきであるにもかかわらず、共存物質が含まれることでしきい値以上の吸光度積算値とされて排出または廃棄対象となってしまうという問題がある。そこで、上記の場合と同様に、ＬＥＤとしては、ＬＥＤ（赤）を用いることが好ましい。さらに、ＬＥＤ（赤）を用いても、Ｈｂ・Ｌ、Ｈｂ・Ｈは、しきい値で、共存物質であるか否かを判定できない。そこで、測光部６３の第１のＰＤ８５（可視光用）に加えて、同様の第２のＰＤに赤色のみを透過するフィルタを付けることで赤色であることを検出し（或いは目視により検出し）、２つの第１及び第２のＰＤの測定結果から、第１のＰＤでしきい値以下であるが、第２のＰＤで赤色であることを検出すると、これを、Ｈｂ・Ｌ、Ｈｂ・Ｈの共存物質と判定するようにしても良い。このようにすれば、吸光度測定の場合でも、共存物質を含む検体を不溶物として除去することを防止することができる。
【００８４】
[実施例５]
図１７は、免疫測定装置（実装置）を用いた測光結果の図であり、赤色ＬＥＤを用いた場合における、（ａ）はＮＨＳ、＋０．５％ＢＧＧ、＋１％ＢＧＧ、＋２％ＢＧＧ、＋４％ＢＧＧ、＋６％ＢＧＧ、＋８％ＢＧＧ、＋１０％ＢＧＧのスキャン中の電圧の和（電圧積算値）を示す表である。（ｂ）は、沈殿物なし、少から多の場合の測定結果を示す図であり、（ｃ）は、ＮＨＳと、種々の検体の測定結果を示す図である。
【００８５】
【表１７】
【００８６】
【表１８】
【００８７】
表１８は、沈殿物０（ＮＨＳ）と少の場合の間の２００００にしきい値を設定する。そして、表１７に示す測定結果より、＋１％ＢＧＧの場合が、ノズルの詰まらせない限界であると判定することができる。さらに、＃４から＃８２までの表示されている全ての検体がしきい値を超えておらず、不溶物によるノズル詰まりを生じさせる可能性がある検体であることがわかる。
【００８８】
図１８は、免疫測定装置を用いた測光結果の図であり、（ａ）はＮＨＳ、＋０．５％ＢＧＧ、＋１％ＢＧＧ、＋２％ＢＧＧ、＋４％ＢＧＧ、＋６％ＢＧＧ、＋８％ＢＧＧ、＋１０％ＢＧＧのスキャン中の吸光度の和（吸光度積算値）を示す表である。（ｂ）は、沈殿物なし、少から多の場合の測定結果を示す図であり、（ｃ）は、ＮＨＳと、種々の検体の測定結果を示す図である。
【００８９】
【表１９】
【００９０】
【表２０】
【００９１】
同様に沈殿物０と少との間の吸光度のしきい値として４０００００が求められる（表２０）。この値を元に、表１９に示すように、＋１％ＢＧＧの場合が、ノズルの詰まらせない限界であると判定することができる。さらに、＃４から＃８２までの表示されている全ての検体がしきい値を超えており、不溶物によるノズル詰まりを生じさせる検体であることがわかる。
【００９２】
[実施例６]
図１９は、免疫測定装置を用いた共存物質のモデル検体として血漿／血清の実検体を用いた場合の測光結果を示す図であり、（ａ）共存物質のモデル検体、（ｂ）は乳び血漿、（ｃ）はＨｂ血漿の、受光部（フォトダイオード）の電圧と、反応容器のｚ方向へのスキャンタイミングとの関係を示す図である。
【００９３】
【表２１】
【００９４】
【表２２】
【００９５】
上記で求めた表１８の、沈殿物０（ＮＨＳ）と１個の場合の間の２００００をしきい値とすると、表２１のうち、Ｈｂ・Ｈ以外は全て、不溶物でないと判断される。尚、Ｈｂ・Ｈは、本来は共存物質であるが、上記と同様に、ＬＥＤ（赤）を用いても、Ｈｂ・Ｌ、Ｈｂ・Ｈは、しきい値で、共存物質であるか否かを判定できない。そこで、測光部６３の第１のＰＤ８５（可視光用）に加えて、同様の第２のＰＤに赤色のみを透過するフィルタを付けることで赤色であることを検出し（或いは目視により検出し）、２つの第１及び第２のＰＤの測定結果から、第１のＰＤでしきい値以下であるが、第２のＰＤで赤色であることを検出すると、これを、Ｈｂ・Ｌ、Ｈｂ・Ｈの共存物質と判定するようにしても良い。
【００９６】
また、図２０は、免疫測定装置を用いた共存物質のモデル検体として血漿／血清の実検体を用いた場合の測光結果を示す図であり、赤色ＬＥＤを用い、（ａ）共存物質のモデル検体、（ｂ）は乳び血漿、（ｃ）はＨｂ血漿の、受光部（フォトダイオード）の吸光度と、反応容器のｚ方向へのスキャンタイミングとの関係を示す図である。
【００９７】
【表２３】
【００９８】
【表２４】
【００９９】
この場合には、表２４に示す４０００００のしきい値（表２０に対応）を利用して、全ての血清・血漿、等の共存物質を、ノズル詰まりのない物質として判定することができる。
【０１００】
[実施例７]
次に、実際の装置を用いて検体を測定するための処理の流れについて、いくつかの例について、より具体的に説明する。
【０１０１】
図２１は、１ステップ法による免疫測定法の流れを示すフローチャート図である。
この１ステップ法では、酵素標識物、サンプル（検体）、磁性粒子を分注し（ステップＳ１）、攪拌／インキュベーション（３７℃）を行い（ステップＳ２）、次いで、不溶物測光（ＬＥＤ）：する・しないの選択を行い（ステップＳ３）、不溶物測光をする場合で測光結果が不溶物無しであれば、Ｂ／Ｆ分離洗浄操作（集磁、反応液吸引／洗浄液分注、攪拌）を行う（ステップＳ４）。次いで、発光試薬１を入れて攪拌を行い（ステップＳ５）、発光試薬２（基質）を入れ（ステップＳ６）、発光量の測定を行う（ステップＳ７）。これにより、Ｂ／Ｆ分離処理前にノズル詰まりの可能性を判定し、ノズル詰まりを未然に防ぐことが出来る。
【０１０２】
[実施例８]
図２２は、ディレイド１ステップ法による免疫測定法の流れを示すフローチャート図である。すなわち、免疫反応溶液、サンプル（検体）、磁性粒子を分注する（ステップＳ１１）。次いで、攪拌／インキュベーション（３７℃）を行い（ステップＳ１２）、酵素標識物を添加し（ステップＳ１３）、攪拌／インキュベーション（３７℃）を行う（ステップＳ１４）。次いで、不溶物の測光処理（ＬＥＤ）をする・しないの選択を行い（ステップＳ１５）、不溶物測光をする場合で測光結果が不溶物無しであれば、Ｂ／Ｆ分離洗浄操作（集磁、反応液吸引／洗浄液分注、攪拌）を行う（ステップＳ１６）。さらに、発光試薬１を添加して攪拌し（ステップＳ１７）、発光試薬２（基質）を入れて（ステップＳ１８）、発光量の測定を行う（ステップＳ１９）。これにより、Ｂ／Ｆ分離処理前にノズル詰まりの可能性を判定し、ノズル詰まりを未然に防ぐことが出来る。
【０１０３】
[実施例９]
図２３は、２ステップ法（１）による免疫測定法の流れを示すフローチャート図である。免疫反応溶液、サンプル（検体）、磁性粒子を分注し（ステップＳ２１）、攪拌／インキュベーション（３７℃）を行う（ステップＳ２２）。次いで、不溶物の測光処理（ＬＥＤ）をする・しないの選択を行い（ステップＳ２３）、不溶物測光をする場合で測光結果が不溶物無しであれば、Ｂ／Ｆ分離洗浄操作（集磁、反応液吸引／洗浄液分注、攪拌）を行う（ステップＳ２４）。酵素標識希釈液と酵素標識物を添加する（ステップＳ２５）。さらに、攪拌／インキュベーション（３７℃）を行い（ステップＳ２６）、Ｂ／Ｆ分離洗浄操作（集磁、反応液吸引／洗浄液分注、攪拌）を行う（ステップＳ２７）。次いで、発光試薬１を入れ攪拌し（ステップＳ２８）、発光試薬２（基質）を用いて（ステップＳ２９）、発光量の測定を行う（ステップＳ３０）。これにより、Ｂ／Ｆ分離処理前にノズル詰まりの可能性を判定し、ノズル詰まりを未然に防ぐことが出来る。
【０１０４】
[実施例１０]
図２４は、２ステップ法（２）による免疫測定法の流れを示すフローチャート図である。まず、免疫反応溶液１、免疫反応溶液２を分注し（ステップＳ３１）、攪拌した後、サンプル（検体）、磁性粒子を混ぜる（ステップＳ３２）。次いで、攪拌／インキュベーション（３７℃）を行う（ステップＳ３３）。次いで、不溶物の測光処理（ＬＥＤ）をする・しないの選択を行い（ステップＳ３４）、不溶物測光をする場合で測光結果が不溶物無しであれば、Ｂ／Ｆ分離洗浄操作（集磁、反応液吸引／洗浄液分注、攪拌）を行う（ステップＳ３５）。次いで酵素標識希釈液、酵素標識物を混ぜて（ステップＳ３６）、攪拌／インキュベーション（３７℃）を行う（ステップＳ３７）。次いで、Ｂ／Ｆ分離洗浄操作（集磁、反応液吸引／洗浄液分注、攪拌）を行い（ステップＳ３８）、発光試薬１を加えて攪拌する（ステップＳ３９）。そして、発光試薬２（基質）を用いて（ステップＳ４０）、発光量の測定を行う（ステップＳ４１）。これにより、Ｂ／Ｆ分離処理前にノズル詰まりの可能性を判定し、ノズル詰まりを未然に防ぐことが出来る。
【０１０５】
[実施例１１]
図２５は、前処理付き２ステップ法による免疫測定法の流れを示すフローチャート図である。この方法は、前処理の自動化を含む２ステップ法である。
【０１０６】
まず、前処理液と、サンプル（検体）とを用い（ステップＳ５１）攪拌／インキュベーション（３７℃）を行う（ステップＳ５２）。次いで、免疫反応溶液を混ぜて（ステップＳ５３）、攪拌し、磁性粒子を混ぜて（ステップＳ５４）、攪拌／インキュベーション（３７℃）を行う（ステップＳ５５）。次いで、不溶物の測光処理（ＬＥＤ）をする・しないの選択を行い（ステップＳ５６）、不溶物測光をする場合で測光結果が不溶物無しであれば、Ｂ／Ｆ分離洗浄操作（集磁、反応液吸引／洗浄液分注、攪拌）を行う（ステップＳ５７）。次いで、酵素標識希釈液、酵素標識物を用い（ステップＳ５８）、攪拌／インキュベーション（３７℃）を行う（ステップＳ５９）。次いで、Ｂ／Ｆ分離洗浄操作（集磁、反応液吸引／洗浄液分注、攪拌）を行う（ステップＳ６０）。さらに、発光試薬１を混ぜて（ステップＳ６１）攪拌し、発光試薬２（基質）を用いて（ステップＳ６２）、発光量の測定を行う（ステップＳ６３）。これにより、Ｂ／Ｆ分離処理前にノズル詰まりの可能性を判定し、ノズル詰まりを未然に防ぐことが出来る。
【０１０７】
[実施例１２]
図２６は、前希釈付き２ステップ法による免疫測定法の流れを示すフローチャート図である。
【０１０８】
まず、検体希釈液とサンプル（検体）を分注し（ステップＳ７１）、攪拌した後、免疫反応液、希釈済み検体を混ぜて（ステップＳ７２）攪拌する。次いで、磁性粒子を加え（ステップＳ７３）、攪拌／インキュベーション（３７℃）を行う（ステップＳ７４）。次いで、不溶物の測光処理（ＬＥＤ）をする・しないの選択を行い（ステップＳ７５）、不溶物測光をする場合で測光結果が不溶物無しであれば、Ｂ／Ｆ分離洗浄操作（集磁、反応液吸引／洗浄液分注、攪拌）を行う（ステップＳ７６）。次いで、酵素標識希釈液、酵素標識物を混ぜ（ステップＳ７７）、攪拌／インキュベーション（３７℃）を行う（ステップＳ７８）。さらに、Ｂ／Ｆ分離洗浄操作（集磁、反応液吸引／洗浄液分注、攪拌）を行い（ステップＳ７９）、発光試薬１を混ぜて攪拌する（ステップＳ８０）。発光試薬２（基質）を用いて（ステップＳ８１）、発光量の測定を行う（ステップＳ８２）。これにより、Ｂ／Ｆ分離処理前にノズル詰まりの可能性を判定し、ノズル詰まりを未然に防ぐことが出来る。
【０１０９】
以上に説明したように、本実施の形態による免疫測定装置によれば、前処理の有無、項目試薬数、などに依存せずに、種々の方法において、非破壊的に、不溶物の検出を行った後に、Ｂ／Ｆ処理を行うため、Ｂ／Ｆ分離を含む免疫測定装置において、Ｂ／Ｆ分離処理における不溶物に起因するノズル詰まりを防止し、また、不溶物に起因するＢ／Ｆ分離処理が不完全になることを抑制して、対象物質の濃度などの測定結果が偽陽性になったり、偽陰性になったりすることによる、医療過誤の要因を少なくすることができる。
【０１１０】
上記の実施の形態において、添付図面に図示されている構成等については、これらに限定されるものではなく、本発明の効果を発揮する範囲内で適宜変更することが可能である。その他、本発明の目的の範囲を逸脱しない限りにおいて適宜変更して実施することが可能である。
【産業上の利用可能性】
【０１１１】
本発明は、免疫測定技術に用いることができる。
【符号の説明】
【０１１２】
１…反応容器、３…反応液、５…磁石、７…吸引ノズル、１１…吐出部、２１…項目試薬保冷庫、２３…サンプル分注機構、２５…検体搬送部、２７…アルカリ・Ｂ／Ｆ洗浄液、
３１…基質保冷庫、３３…廃棄容器、３５…メイン扉、３７…オートセルフィーダー、３９…インキュベーションテーブル、４１…Ｂ／Ｆ分離機構、４５…検出ユニット、５７…反応容器搬送部、６１…試薬ノズル洗浄槽、６３…不溶物検出部（測光部）、６３ａ…空洞、６４…廃棄部、６５…Ｂ／Ｆ分離部、８１…ＬＥＤ、８５…ＰＤ、９１…前処理部、９５…不溶物判定部、９６…しきい値記憶部、９７…検出部、９８…しきい値入力部。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
反応液内の抗体結合担体又は抗原結合担体に反応した抗原又は抗体と未反応な遊離抗原又は遊離抗体を洗浄し前記未反応な遊離抗原又は遊離抗体を吸引部（ノズル）により吸引することで分離するＢ／Ｆ分離部を備えた免疫測定装置であって、
前記Ｂ／Ｆ分離部の前段に、前記反応容器に光照射を行う発光部と、反応容器の透過光を測定する受光部と、を備えた測光部と、
前記受光部における受光強度に基づいて、前記吸引部の詰まりの原因となる不溶物の有無を判定する不溶物判定部と、
を有することを特徴とする免疫測定装置。
【請求項２】
さらに、不溶物の有無を判定するしきい値を格納するしきい値格納部を設け、
前記不溶物判定部は、前記受光部の受光強度と、前記しきい値との大小関係に基づいて、不溶物の有無を判定することを特徴とする請求項１に記載の免疫測定装置。
【請求項３】
前記担体は、磁性粒子であることを特徴とする請求項１又は２に記載の免疫測定装置。
【請求項４】
前記発光部の光源として、ＬＥＤを用いることを特徴とする請求項１から３までのいずれか１項に記載の免疫測定装置。
【請求項５】
前記ＬＥＤとして、赤色ＬＥＤを用いることを特徴とする請求項４に記載の免疫測定装置。
【請求項６】
前記受光部は、赤色を検出波長帯に含む第１の受光素子と、赤色を検出波長帯に含む第２の受光素子であって、赤色以外をフィルタリングするフィルタ部を受光面側に設け第２の受光素子との受光強度の差異に基づいて、前記不溶物判定部が不溶物の判定を行うことを特徴とする請求項５に記載の免疫測定装置。
【請求項７】
前記しきい値は、モデル検体として、前記吸引部の開口径に近似した沈殿物を有するモデル検体を入れた反応容器における第１の受光強度と、モデル検体を入れていない反応容器における第２の受光強度との間の値として決められることを特徴とする請求項１から６までのいずれか１項に記載の免疫測定装置。
【請求項８】
前記吸引部の詰まりの原因となる不溶物の有無を判定する不溶物判定部は、前記受光部における受光強度に依存するパラメータの積算値に基づいて、不溶物の有無を判定することを特徴とする請求項１から７までのいずれか１項に記載の免疫測定装置。
【請求項９】
前記測光部は、前記発光部と前記受光部とが対向する位置に配置され、前記反応容器を鉛直方向にスキャンさせる操作部を有していることを特徴とする請求項１から８までのいずれか１項に記載の免疫測定装置。
【請求項１０】
前記測光部の近傍に、前記不溶物判定部が不溶部有りと判定した前記反応容器を排出または廃棄する廃棄部を備えることを特徴とする請求項９に記載の免疫測定装置。
【請求項１１】
反応容器内の抗体又は抗原結合担体に反応した抗原又は抗体と未反応な遊離抗原又は抗体を洗浄し吸引部（ノズル）により吸引することで分離するＢ／Ｆ分離処理を含む免疫測定法であって、
前記Ｂ／Ｆ分離ステップの前ステップとして、前記反応容器に光照射を行う発光部と、反応容器の透過光を測定する受光部と、を備えた測光ステップと、
前記受光部における受光強度に基づいて、前記吸引部の詰まりの原因となる不溶物の有無を判定する不溶物判定ステップと、
を有することを特徴とする免疫測定法。
【請求項１２】
請求項１１に記載の免疫測定法をコンピュータに実行させるためのプログラム。
【請求項１】
反応液内の抗体結合担体又は抗原結合担体に反応した抗原又は抗体と未反応な遊離抗原又は遊離抗体を洗浄し前記未反応な遊離抗原又は遊離抗体を吸引部（ノズル）により吸引することで分離するＢ／Ｆ分離部を備えた免疫測定装置であって、
前記Ｂ／Ｆ分離部の前段に、前記反応容器に光照射を行う発光部と、反応容器の透過光を測定する受光部と、を備えた測光部と、
前記受光部における受光強度に基づいて、前記吸引部の詰まりの原因となる不溶物の有無を判定する不溶物判定部と、
を有することを特徴とする免疫測定装置。
【請求項２】
さらに、不溶物の有無を判定するしきい値を格納するしきい値格納部を設け、
前記不溶物判定部は、前記受光部の受光強度と、前記しきい値との大小関係に基づいて、不溶物の有無を判定することを特徴とする請求項１に記載の免疫測定装置。
【請求項３】
前記担体は、磁性粒子であることを特徴とする請求項１又は２に記載の免疫測定装置。
【請求項４】
前記発光部の光源として、ＬＥＤを用いることを特徴とする請求項１から３までのいずれか１項に記載の免疫測定装置。
【請求項５】
前記ＬＥＤとして、赤色ＬＥＤを用いることを特徴とする請求項４に記載の免疫測定装置。
【請求項６】
前記受光部は、赤色を検出波長帯に含む第１の受光素子と、赤色を検出波長帯に含む第２の受光素子であって、赤色以外をフィルタリングするフィルタ部を受光面側に設け第２の受光素子との受光強度の差異に基づいて、前記不溶物判定部が不溶物の判定を行うことを特徴とする請求項５に記載の免疫測定装置。
【請求項７】
前記しきい値は、モデル検体として、前記吸引部の開口径に近似した沈殿物を有するモデル検体を入れた反応容器における第１の受光強度と、モデル検体を入れていない反応容器における第２の受光強度との間の値として決められることを特徴とする請求項１から６までのいずれか１項に記載の免疫測定装置。
【請求項８】
前記吸引部の詰まりの原因となる不溶物の有無を判定する不溶物判定部は、前記受光部における受光強度に依存するパラメータの積算値に基づいて、不溶物の有無を判定することを特徴とする請求項１から７までのいずれか１項に記載の免疫測定装置。
【請求項９】
前記測光部は、前記発光部と前記受光部とが対向する位置に配置され、前記反応容器を鉛直方向にスキャンさせる操作部を有していることを特徴とする請求項１から８までのいずれか１項に記載の免疫測定装置。
【請求項１０】
前記測光部の近傍に、前記不溶物判定部が不溶部有りと判定した前記反応容器を排出または廃棄する廃棄部を備えることを特徴とする請求項９に記載の免疫測定装置。
【請求項１１】
反応容器内の抗体又は抗原結合担体に反応した抗原又は抗体と未反応な遊離抗原又は抗体を洗浄し吸引部（ノズル）により吸引することで分離するＢ／Ｆ分離処理を含む免疫測定法であって、
前記Ｂ／Ｆ分離ステップの前ステップとして、前記反応容器に光照射を行う発光部と、反応容器の透過光を測定する受光部と、を備えた測光ステップと、
前記受光部における受光強度に基づいて、前記吸引部の詰まりの原因となる不溶物の有無を判定する不溶物判定ステップと、
を有することを特徴とする免疫測定法。
【請求項１２】
請求項１１に記載の免疫測定法をコンピュータに実行させるためのプログラム。
【図１】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図２５】
【図２６】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図２５】
【図２６】
【公開番号】特開２０１３−３２９９２（Ｐ２０１３−３２９９２Ａ）
【公開日】平成２５年２月１４日（２０１３．２．１４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−１６９５８９（Ｐ２０１１−１６９５８９）
【出願日】平成２３年８月２日（２０１１．８．２）
【出願人】（０００１２０４５６）栄研化学株式会社 (67)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２５年２月１４日（２０１３．２．１４）
【国際特許分類】
【出願日】平成２３年８月２日（２０１１．８．２）
【出願人】（０００１２０４５６）栄研化学株式会社 (67)
【Ｆターム（参考）】
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