全りんの定量方法
【課題】検査水の全りんを安全に短時間で定量する。
【解決手段】検査水中のりん化合物をりん酸イオンへ変換した後にりん酸イオンを定量することで検査水の全りんを定量する方法は、検査水に対してペルオキソ二硫酸のアルカリ金属塩を含みかつアルカリ性に調整された第１水溶液と硫酸とを添加し、６５℃〜沸騰温度で加熱する工程１と、工程１を経た検査水へ炭素数５のアルドース、炭素数６のアルドース若しくは炭素数６のケトース又はこのような単糖を分解により生成可能なオリゴ糖を含む第２水溶液を添加して引き続き加熱する工程２と、工程２を経た検査水へ七モリブデン酸六アンモニウム又はモリブデン酸のアルカリ金属塩およびアンチモンの価数が３であるアンチモン化合物を含む第３水溶液を添加し、６５℃以上に維持する工程３と、工程３を経た検査水について、６００〜９５０ｎｍの範囲における任意の波長の吸光度を測定する工程４とを含んでいる。
【解決手段】検査水中のりん化合物をりん酸イオンへ変換した後にりん酸イオンを定量することで検査水の全りんを定量する方法は、検査水に対してペルオキソ二硫酸のアルカリ金属塩を含みかつアルカリ性に調整された第１水溶液と硫酸とを添加し、６５℃〜沸騰温度で加熱する工程１と、工程１を経た検査水へ炭素数５のアルドース、炭素数６のアルドース若しくは炭素数６のケトース又はこのような単糖を分解により生成可能なオリゴ糖を含む第２水溶液を添加して引き続き加熱する工程２と、工程２を経た検査水へ七モリブデン酸六アンモニウム又はモリブデン酸のアルカリ金属塩およびアンチモンの価数が３であるアンチモン化合物を含む第３水溶液を添加し、６５℃以上に維持する工程３と、工程３を経た検査水について、６００〜９５０ｎｍの範囲における任意の波長の吸光度を測定する工程４とを含んでいる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、全りんの定量方法、特に、検査水に含まれるりん化合物を分解してりん酸イオンへ変換した後、検査水のりん酸イオンを定量することで検査水の全りんを定量する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
りんは海洋水、湖沼水、河川水および地下水等の富栄養化に関わる原因物質の一つであることから、工場排水等での排出規制が設けられており、工場排水等は、環境への排出前にりん酸イオンの定量が求められる。ここで、工場排水等は、りん酸イオンとしてりんを含むだけではなく、各種のりん化合物としてりん元素を含む場合もあり、りん化合物は環境への排出後に自然分解されることでりんの発生源となる。このため、工場排水等は、りん酸イオンだけではなく、りん化合物から生成し得るりん酸イオンを含めたりん酸イオンの総量、いわゆる全りんの定量が求められることがある。
【０００３】
水中に含まれる全りんの公的な定量方法として、非特許文献１に記載のモリブデン青（アスコルビン酸還元）吸光光度法が知られている。この定量方法は、水中に含まれるりん酸イオンが七モリブデン酸六アンモニウムおよび酒石酸アンチモニルカリウム（ビス［（＋）−タルトラト］二アンチモン（ＩＩＩ）酸二カリウム）と反応して生成するヘテロポリ化合物をＬ（＋）−アスコルビン酸で還元し、それにより生成するモリブデン青により発色した検査水の吸光度を測定することでりん酸イオンを定量するものである。
【０００４】
モリブデン青（アスコルビン酸還元）吸光光度法による全りんの定量では、先ず、所定量の検査水を採取し、この検査水に含まれるりん化合物を分解してりん酸イオンへ変換する前処理をする。この前処理では、検査水に対してりん化合物の酸化剤であるペルオキソ二硫酸カリウム溶液を添加した後、検査水を１２０℃に設定した高圧蒸気滅菌器中で３０分間処理し、りん化合物を酸化分解してりん酸イオンへ変換する。次に、前処理された検査水に対して所定量のモリブデン酸アンモニウム−アスコルビン酸混合溶液を加えて振り混ぜた後、２０〜４０℃で約１５分間放置する。そして、この溶液について波長８８０ｎｍ付近の吸光度を測定し、この測定値から予め作成しておいた検量線に基づいて検査水のりん酸イオン濃度（ｍｇＰＯ４３−／Ｌ）を算出する。
【０００５】
このような全りんの定量方法における検査水の前処理は、高圧蒸気滅菌器、すなわち耐圧容器を用いる必要があるため、操作が複雑になり、特別な安全性も求められる。また、酸化剤として用いるペルオキソ二硫酸カリウムは、１２０℃の温度環境下ではりん化合物を酸化分解するのと同時に自己分解も進行することから、過剰量を用いる必要がある。
【０００６】
そこで、この前処理方法に替わる前処理方法として、非特許文献２には、検査水にペルオキソ二硫酸カリウムを添加した後、１００℃で６０分間処理する方法が提案されている。しかし、この方法では、ペルオキソ二硫酸カリウムの一部が検査水に残留し、それがＬ（＋）−アスコルビン酸によるヘテロポリ化合物の還元を阻害する可能性があるため、モリブデン酸アンモニウム−アスコルビン酸混合溶液を加える前に検査水を２０〜４０℃まで放冷することでペルオキソ二硫酸カリウムの酸化作用を抑制するか、或いは、アルカリ性の状態の検査水へ還元剤である亜硫酸ナトリウムを添加してペルオキソ二硫酸カリウムを消滅させる必要がある。
【０００７】
ところが、検査水を放冷することでペルオキソ二硫酸カリウムの酸化作用を抑制する場合、検査水の冷却に長時間を要し、一連の定量操作を短時間で終了するのが困難になる。また、亜硫酸ナトリウムを添加してペルオキソ二硫酸カリウムを消滅させる場合、有害な二酸化硫黄ガスが発生するため、それについての安全対策が求められる。
【０００８】
また、上記全りんの定量方法は、非特許文献１に記載のように、定量範囲が１．２５〜２５μｇという微量範囲であるため、検査水が比較的多量のりん酸イオンやりん化合物を含む場合に適用できないという不具合もある。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】日本工業規格 ＪＩＳ Ｋ ０１０２、工場排水試験方法（２００８） ４６．１．１および４６．３
【００１０】
【非特許文献２】平成１４年度環境省請負業務結果報告書、水質分析方法検討調査、５頁および１３頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明の目的は、検査水の全りんを安全に短時間で定量できるようにすることにある。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明は、検査水に含まれるりん化合物を分解してりん酸イオンへ変換した後、検査水のりん酸イオンを定量することで検査水の全りんを定量する方法に関するものであり、この定量方法は、検査水に対し、ペルオキソ二硫酸のアルカリ金属塩またはペルオキソ二硫酸アンモニウムを含みかつアルカリ性に調整された第１水溶液と硫酸とを添加し、６５℃から検査水の沸騰温度までの温度で加熱する工程１と、工程１を経た検査水へ炭素数５のアルドース、炭素数６のアルドース、炭素数６のケトースおよび分解により炭素数５のアルドース、炭素数６のアルドースまたは炭素数６のケトースを生成可能な単糖生成化合物からなる糖類化合物群から選ばれた糖類化合物を含む第２水溶液を添加し、引き続き加熱する工程２と、工程２を経た検査水へ七モリブデン酸六アンモニウムまたはモリブデン酸のアルカリ金属塩若しくはアルカリ土類金属塩並びにアンチモンの価数が３であるアンチモン化合物を含む第３水溶液を添加し、６５℃以上に維持する工程３と、工程３を経た検査水について、６００から９５０ｎｍの範囲における任意の波長の吸光度を測定する工程４とを含んでいる。
【００１３】
他の観点に係る本発明は、検査水に含まれる全りんを定量するための、検査水の前処理方法に関するものであり、この前処理方法は、検査水に対し、ペルオキソ二硫酸のアルカリ金属塩またはペルオキソ二硫酸アンモニウムを含みかつアルカリ性に調整された第１水溶液と硫酸とを添加し、６５℃から検査水の沸騰温度までの温度で加熱する工程１と、工程１を経た検査水へ炭素数５のアルドース、炭素数６のアルドース、炭素数６のケトースおよび分解により炭素数５のアルドース、炭素数６のアルドースまたは炭素数６のケトースを生成可能な単糖生成化合物からなる糖類化合物群から選ばれた糖類化合物を含む第２水溶液を添加し、引き続き加熱する工程２とを含んでいる。
【００１４】
本発明の定量方法および前処理方法において用いられる第１水溶液は、通常、アルカリ金属水酸化物の添加によりアルカリ性に調整されており、アルカリ金属水酸化物の濃度が０．２Ｍ以下である。また、単糖生成化合物は、通常、スクロース、マルトース、ラクトース、ラフィノース、ケストース、スタキオース、イソマルツロース、マルツロースまたはラクツロースである。
【００１５】
さらに他の観点に係る本発明は、検査水に含まれる全りんを定量するために、検査水に含まれるりん化合物を分解することでりん化合物のりん元素をりん酸イオンへ変換するための前処理剤に関するものであり、この前処理剤は、ペルオキソ二硫酸のアルカリ金属塩またはペルオキソ二硫酸アンモニウムを含む水溶液からなり、アルカリ性に調整されている。
【００１６】
この前処理剤は、通常、アルカリ金属水酸化物の添加によりアルカリ性に調整されており、アルカリ金属水酸化物の濃度が０．２Ｍ以下である。
【発明の効果】
【００１７】
本発明に係る全りんの定量方法は、上述の工程１から４を含むものであるため、検査水の全りんを安全に短時間で定量することができる。
【００１８】
本発明に係る全りん定量のための検査水の前処理方法は、上述の工程１および２を含むものであるため、検査水に含まれるりん化合物を安全にりん酸イオンへ変換することができ、また、処理後の検査水を速やかにりん酸イオンの定量工程へ適用することができる。
【００１９】
本発明に係る全りん定量のための検査水の前処理剤は、アルカリ性に調整されていることから、ペルオキソ二硫酸のアルカリ金属塩またはペルオキソ二硫酸アンモニウムの分解を抑えて安定に保存することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】比較例で作成した検量線を示す図。
【図２】実施例で作成した検量線を示す図。
【図３】参考例１で作成した検量線を示す図。
【図４】参考例２で作成した検量線を示す図。
【図５】参考例３で作成した検量線を示す図。
【図６】参考例４で作成した検量線を示す図。
【図７】参考例５で作成した検量線を示す図。
【図８】参考例６で作成した検量線を示す図。
【図９】参考例７で作成した検量線を示す図。
【図１０】参考例８で作成した検量線を示す図。
【図１１】参考例９で作成した検量線を示す図。
【図１２】参考例１０で作成した検量線を示す図。
【図１３】参考例１１で作成した検量線を示す図。
【図１４】参考例１２で作成した検量線を示す図。
【図１５】実験例１の結果を示す図。
【図１６】実験例２の結果を示す図。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
本発明の方法により全りんを定量可能な検査水は、特に限定されるものではないが、通常は工場排水や生活排水等のりんの排出規制が設けられている排水の他、海洋水、湖沼水、河川水および地下水等の天然水である。
【００２２】
検査水の全りんを定量する際には、所定量の検査水を採取し、この検査水に含まれるりん化合物のりん元素をりん酸イオンへ変換するための前処理をする。この前処理では、先ず、検査水へ前処理剤と硫酸とを添加し、常圧下、６５℃から検査水の沸騰温度までの温度、好ましくは７５℃から検査水の沸騰温度までの温度で加熱する（工程１）。これにより、検査水に含まれる有機および無機のりん化合物、特に、有機りん化合物は、前処理剤により酸化分解され、りん元素がりん酸イオンに変換される。
【００２３】
ここで用いられる前処理剤は、通常、精製水、例えば、純水、蒸留水またはイオン交換水等にペルオキソ二硫酸化合物を溶解することで調製された水溶液（第１水溶液）であり、アルカリ性に調整されたものである。ペルオキソ二硫酸化合物としては、ペルオキソ二硫酸のアルカリ金属塩またはペルオキソ二硫酸アンモニウムが用いられる。ここで用いられるペルオキソ二硫酸のアルカリ金属塩は、通常、ペルオキソ二硫酸カリウムまたはペルオキソ二硫酸ナトリウムである。前処理剤におけるペルオキソ二硫酸化合物の濃度は、通常、０．４〜５０ｇ／Ｌに設定するのが好ましく、３．０〜４０ｇ／Ｌに設定するのがより好ましい。
【００２４】
前処理剤は、ｐＨが７．０を超えるアルカリ性になれば、アルカリ性への調整方法が限定されるものではないが、通常はアルカリ金属水酸化物の添加によりアルカリ性に調整されるのが好ましい。ここで用いられるアルカリ金属水酸化物は、水酸化ナトリウムまたは水酸化カリウムが好ましい。ペルオキソ二硫酸化合物は、水に溶解した場合に室温で徐々に分解が進行し、不安定になる。特に、ペルオキソ二硫酸のアルカリ金属塩は、水に溶解したときに分解して強酸性の硫酸水素アルカリ金属（例えば、硫酸水素カリウム）を生成し、これがペルオキソ二硫酸のアルカリ金属塩の分解を加速する。このため、ペルオキソ二硫酸化合物の水溶液は、調製後に長期間保存するのが困難であり、やむなく保存する場合は冷蔵が求められる。
【００２５】
これに対し、前処理剤は、アルカリ性に調整されているためペルオキソ二硫酸化合物の分解が抑制され、２〜３ヶ月程度の長期間に亘り５０℃程度の高温環境下においても安定に保存することができることから、全りんの定量を後記するように自動化する場合に有効である。
【００２６】
アルカリ金属水酸化物の添加により前処理剤がアルカリ性に調整される場合、前処理剤におけるアルカリ金属水酸化物の濃度は、通常、水溶液がアルカリ性に維持される状態で０．２Ｍ以下に設定するのが好ましい。この濃度が０．２Ｍを超える場合は、この工程で添加する硫酸の量を多く設定する必要があることから不経済であり、また、検査水においてアルカリ金属水酸化物と硫酸との反応により塩が生成し、この塩によって検査水が濁ることから、後記する工程４での吸光度の測定が不正確になる可能性がある。
【００２７】
検査水への前処理剤の添加量は、検査水におけるペルオキソ二硫酸化合物の濃度が検査水に含まれるりん化合物を十分に酸化分解可能なように設定するのが好ましいが、あまり過剰に添加するとペルオキソ二硫酸化合物が検査水に残留してしまい、後記する工程３において誤発色を引き起こす可能性がある。このため、検査水におけるペルオキソ二硫酸化合物の濃度は、検査水へ前処理剤と硫酸とを添加したときにおける濃度が、通常、０．５〜９ｇ／Ｌになるよう設定するのが好ましく、１〜６ｇ／Ｌになるよう設定するのがより好ましい。
【００２８】
一方、検査水に対する硫酸の添加量は、検査水へ前処理剤と硫酸とを添加したときにおける硫酸の濃度が０．１Ｍ以上になるよう設定するのが好ましい。但し、あまり過剰に添加すると、後記する工程２以降でモリブデン青の生成（りん酸イオンの発色）という目的に対して過剰となる硫酸の中和処理が必要となる可能性があるため、通常、０．１〜０．３Ｍになるよう設定するのが好ましい。
【００２９】
この工程における検査水の加熱時間は、加熱温度により異なるが、通常、２０〜４０分に設定するのが好ましい。
【００３０】
次に、工程１を経た検査水へ所定の糖類を含む水溶液（第２水溶液）を添加し、引き続き加熱する（工程２）。この工程は、工程１を経た検査水を放冷等により冷却せずに、工程１が完了後の高温状態または加熱継続状態の検査水に対して適用することができる。
【００３１】
第２水溶液は、所定の糖類、すなわち、炭素数５のアルドース、炭素数６のアルドース、炭素数６のケトースおよび分解により炭素数５のアルドース、炭素数６のアルドースまたは炭素数６のケトースを生成可能な単糖生成化合物からなる糖類化合物群から選ばれた糖類化合物を精製水に溶解したものである。炭素数５のアルドースの例としては、リボース、アラビノース、キシロースおよびリキソースを挙げることができる。炭素数６のアルドースの例としては、アロース、アルトロース、グルコース、マンノースおよびガラクトースを挙げることができる。炭素数６のケトースの例としては、プシコース、フルクトース、ソルボースおよびタガトースを挙げることができる。
【００３２】
また、分解により炭素数５のアルドース、炭素数６のアルドースまたは炭素数６のケトースを生成可能な単糖生成化合物としては、分解により炭素数５のアルドース、炭素数６のアルドースまたは炭素数６のケトースを生成可能なオリゴ糖または配糖体が用いられる。オリゴ糖としては、例えば、二糖類のスクロース、マルトース、ラクトース、イソマルツロース、マルツロース、ラクツロース、ガラクトスクロース、プリメベロースおよびビシアノース、三糖類のラフィノース、ケストース、ゲンチアノース、プランテオースおよびウンベリフェロース、四糖類のスタキオース並びに五糖類のベルバスコースを挙げることができる。これらの例示のオリゴ糖は、分解により、キシロース（炭素数５のアルドース）、グルコース（炭素数６のアルドース）、ガラクトース（炭素数６のアルドース）またはフルクトース（炭素数６のケトース）を生成することができる。また、配糖体としては、例えば、アルブチンおよびサリシンを挙げることができる。これらの例示の配糖体は、分解によりグルコースを生成することができる。
【００３３】
なお、単糖生成化合物としては、通常、安価に入手可能なスクロース、マルトース、ラクトース、ラフィノース、ケストース、スタキオース、イソマルツロース、マルツロースまたはラクツロースを用いるのが好ましい。
【００３４】
第２水溶液における糖類化合物の濃度は、通常、３０〜６００ｇ／Ｌに設定するのが好ましい。また、検査水に対する第２水溶液の添加量は、検査水における糖類化合物の濃度（単糖生成化合物を用いる場合は、分解により生成する炭素数５のアルドース、炭素数６のアルドースまたは炭素数６のケトースの濃度）が検査水に残留するペルオキソ二硫酸化合物を消滅させるために必要な量よりも十分に過剰になるよう設定する。これは、この工程で検査水へ添加する糖類化合物またはそれから生成する単糖を、後記する工程３において生成するヘテロポリ化合物の還元剤としても利用する必要があるためである。このため、検査水に対する第２水溶液の添加量は、通常、検査水における糖類化合物の濃度が２〜６０ｇ／Ｌになるよう設定するのが好ましく、５〜４０ｇ／Ｌになるよう設定するのがより好ましい。
【００３５】
この工程における検査水の加熱温度は、通常、工程１での加熱と同じ温度範囲に設定することができるが、通常は工程１での加熱温度と同一に設定するのが好ましい。また、この工程における検査水の加熱時間は、加熱温度により異なるが、通常、１〜３０分に設定するのが好ましい。
【００３６】
この工程では、添加された第２水溶液に含まれる炭素数５のアルドース、炭素数６のアルドースまたは炭素数６のケトースにより、りん化合物の酸化分解のために消費されずに検査水に残留しているペルオキソ二硫酸化合物が分解されて消滅する。また、第２水溶液において、糖類化合物として分解により炭素数５のアルドース、炭素数６のアルドースまたは炭素数６のケトースを生成可能な単糖生成化合物を用いた場合は、この工程での加熱により当該単糖生成化合物が加水分解することで生成する炭素数５のアルドース、炭素数６のアルドースまたは炭素数６のケトースにより、或いは、単糖生成化合物がオリゴ糖の場合は当該オリゴ糖自体により、残留しているペルオキソ二硫酸化合物が分解されて消滅する。
【００３７】
以上の工程１および工程２を含む検査水の前処理は、常圧下で操作することができ、また、有害ガスの発生がないため、安全に実施することができる。また、工程１から工程２へ移行するときに検査水を放冷等により冷却する必要がないことから、工程１が完了後の検査水を円滑かつ速やかに工程２へ移行させることができるため、短時間で終了することができる。
【００３８】
次に、前処理が終了した検査水、すなわち、工程２を経た検査水へモリブデン化合物およびアンチン化合物を含む第３水溶液を添加し、６５℃以上に維持する（工程３）。
【００３９】
ここで用いられるモリブデン化合物は、七モリブデン酸六アンモニウムまたはモリブデン酸のアルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩若しくは重金属塩である。このうち、七モリブデン酸六アンモニウムまたはモリブデン酸のアルカリ金属塩若しくはアルカリ土類金属塩を用いるのが好ましい。モリブデン酸のアルカリ金属塩の例としては、モリブデン酸ナトリウム、モリブデン酸カリウムおよびモリブデン酸リチウムを挙げることができる。モリブデン酸のアルカリ土類金属塩の例としては、モリブデン酸カルシウムおよびモリブデン酸マグネシウムを挙げることができる。モリブデン酸の重金属塩の例としては、モリブデン酸亜鉛およびモリブデン酸アルミニウムを挙げることができる。
【００４０】
また、ここで用いられるアンチモン化合物は、アンチモンの価数が３であるアンチモン化合物である。アンチモンの価数が３であるアンチモン化合物の例としては、酒石酸アンチモニルカリウム、三酸化アンチモン（すなわち、酸化アンチモン（ＩＩＩ））およびアンチモンのハロゲン化物塩などを挙げることができる。アンチモンのハロゲン化物塩としては、加水分解により有害な物質を生成しにくい三塩化アンチモン（すなわち、塩化アンチモン（ＩＩＩ））などを用いるのが好ましい。
【００４１】
なお、アンチモン化合物としては、アンチモンの価数が５のアンチモン化合物を用いることもできる。このアンチモン化合物は、水溶液中において自然にアンチモンの価数が３のアンチモン化合物に変換されるため、アンチモンの価数が３のアンチモン化合物の供給源として用いることができる。ここで利用可能なアンチモンの価数が５のアンチモン化合物の例としては、五酸化アンチモン（すなわち、酸化アンチモン（Ｖ））および価数が５のアンチモンのハロゲン化物塩などを挙げることができる。価数が５のアンチモンのハロゲン化物塩としては、加水分解により有害な物質を生成しにくい五塩化アンチモン（すなわち、塩化アンチモン（Ｖ））などを用いるのが好ましい。
【００４２】
第３水溶液は、精製水にモリブデン化合物およびアンチモン化合物を溶解することで調製することができる。ここで、モリブデン化合物としてモリブデン酸のアルカリ土類金属塩を用いる場合は、モリブデン酸のアルカリ土類金属塩の溶解を促進させるために、適量の硫酸または塩酸を添加することができる。また、アンチモン化合物として三酸化アンチモンを用いる場合は、三酸化アンチモンの溶解を促進させるために、適量の塩酸を添加することができる。
【００４３】
第３水溶液におけるモリブデン化合物の濃度（モリブデン化合物の水和物を用いる場合は水和水を除いて換算した濃度）は、通常、１〜３０ｇ／Ｌになるよう設定するのが好ましく、２〜２５ｇ／Ｌになるよう設定するのがより好ましい。一方、第３水溶液におけるアンチモン化合物の濃度（アンチモン化合物の水和物を用いる場合は水和水を除いて換算した濃度）は、通常、０．０４〜１．２ｇ／Ｌになるよう設定するのが好ましく、０．０８〜１．０ｇ／Ｌになるよう設定するのがより好ましい。但し、第３水溶液において、アンチモン化合物（Ａ）とモリブデン化合物（Ｂ）との濃度比（Ａ：Ｂ）は、１：８〜１００になるよう設定するのが好ましく、１：１０〜５０になるよう設定するのがより好ましい。
【００４４】
検査水に対する第３水溶液の添加量は、通常、検査水におけるモリブデン化合物の濃度が０．３〜３．０ｇ／Ｌになり、かつ、アンチモン化合物の濃度が０．０１〜０．２４ｇ／Ｌになるよう設定するのが好ましい。特に、検査水におけるモリブデン化合物の濃度が０．５〜２．０ｇ／Ｌになり、かつ、アンチモン化合物の濃度が０．０２〜０．１３ｇ／Ｌになるよう設定するのが好ましい。
【００４５】
この工程では、工程２での加熱を継続しながら検査水に対して第３水溶液を添加することができる。これにより、第３水溶液が添加された検査水は、６５℃以上に維持される。検査水を同温度以上に維持する時間は、通常、３〜６０分に設定する。工程２における検査水の加熱温度を６５℃よりも十分に高い温度に設定している場合、工程２から工程３への移行時または工程３への移行後の適時に加熱を停止し、検査水を自然冷却しながら本工程において検査水の温度を６５℃以上に所定時間維持することもできる。
【００４６】
この工程において、検査水中に当初から含まれていたりん酸イオンおよび工程１においてりん化合物の酸化分解により生成したりん酸イオンは、第３水溶液のモリブデン化合物およびアンチモン化合物と反応してヘテロポリ化合物を生成する。そして、生成したヘテロポリ化合物は、工程１において添加した硫酸による酸性環境下において、工程２で添加した第２水溶液の炭素数５のアルドース、炭素数６のアルドース若しくは炭素数６のケトースまたは単糖生成化合物の分解により生成した炭素数５のアルドース、炭素数６のアルドース若しくは炭素数６のケトースであって、ペルオキソ二硫酸化合物の分解のために消費されずに残留しているものにより還元される。また、第２水溶液の単糖生成化合物がオリゴ糖であり、しかも当該オリゴ糖が還元性のもの、例えば、マルトース、ラクトース、イソマルツロース、マルツロース、ラクツロース、プリメべロースおよびビシアノースなどの場合は、当該還元性のオリゴ糖自体によっても生成したヘテロポリ化合物は還元され得る。このようなヘテロポリ化合物の還元によりモリブデン青が生成し（りん酸イオンの発色）、このモリブデン青により検査水が変色する。
【００４７】
次に、モリブデン青により変色した検査水について、６００から９５０ｎｍの範囲における任意の波長の吸光度を測定する（工程４）。そして、当該吸光度とりん酸イオン濃度との関係を予め調べて作成しておいた検量線に基づいて、吸光度の測定値から検査水のりん酸イオン量、すなわち全りんの量を判定する。
【００４８】
本発明に係る全りんの定量方法は、取り扱いに注意が必要な耐圧容器等の特殊な反応装置を用いずに安全に実施することができ、また、工程間において検査水を冷却する必要がないため、一連の工程を途切れなく円滑に進めることができ、短時間で終了することができる。また、工程１において用いる前処理剤は、常温で長期間保存しても変性しにくいことから、保存しながら用いることができる。これらのため、この定量方法は、自動化への適用が容易である。
【００４９】
また、本発明に係る全りんの定量方法においては、検量線を作成したときに、りん酸イオン濃度と６００から９５０ｎｍの範囲における任意の波長の吸光度との間の直線関係が比較的高濃度のりん酸イオン濃度の範囲まで良好に成立することから、検査水中に含まれるりん酸イオンの定量上限が４ｍｇ［Ｐ］／Ｌ若しくはそれ以上の範囲まで拡大する。このため、この定量方法は、りん酸イオンやりん化合物の含有量が多い検査水についても適用可能である。
【００５０】
なお、本発明に係る全りんの定量方法において用いる前処理剤は、非特許文献１に記載のモリブデン青（アスコルビン酸還元）吸光光度法による全りんの定量において用いることもできる。
【実施例】
【００５１】
単位
ｍｇ［Ｐ］／Ｌの単位は、１Ｌの水に含まれるりんのｍｇ数を示したものである。
試薬および分光光度計
以下の実施例等で用いた試薬および分光光度計は次のものである。
りん標準液（水質試験用）：和光純薬工業株式会社 コード１６０−１９２４１
１Ｍ硫酸（容量分析用）：和光純薬工業株式会社 コード１９８−０９５９５
塩酸（試薬特級）：和光純薬工業株式会社 コード０８０−０１０６６
水酸化ナトリウム（試薬特級）：和光純薬工業株式会社 コード１９８−１３７６５
硫酸ナトリウム（試薬特級）：和光純薬工業株式会社 コード１９７−０３３４５
ペルオキソ二硫酸カリウム（窒素・りん測定用）：和光純薬工業株式会社 コード１６９−１１８９
ペルオキソ二硫酸アンモニウム（試薬特級）：和光純薬工業株式会社 コード０１２−０３２８５
七モリブデン酸六アンモニウム四水和物(試薬特級)：和光純薬工業株式会社 コード０１８−０６９０１
モリブデン酸リチウム：和光純薬工業株式会社の和光一級 コード１２５−０３５０１
モリブデン酸カリウム：和光純薬工業株式会社 コード１６５−０４００２
モリブデン（ＶＩ）酸二ナトリウム二水和物（試薬特級）：和光純薬工業株式会社 コード１９０−０２４７５
モリブデン酸カルシウム：和光純薬工業株式会社 コード０３４−００６８２
酒石酸アンチモニルカリウム三水和物(試薬特級)：和光純薬工業株式会社 コード０２０−１２８３２
酸化アンチモン（ＩＩＩ）（化学用）：和光純薬工業株式会社 コード０１８−０４４０２
塩化アンチモン（ＩＩＩ）（試薬特級）：和光純薬工業株式会社 コード０１１−０４４９２
Ｄ−フルクトース：和光純薬工業株式会社の和光特級 コード１２７−０２７６５
Ｄ−アラビノース：和光純薬工業株式会社の和光特級 コード０１３−０４５７２
Ｄ−グルコース(試薬特級)：和光純薬工業株式会社 コード０４７−００５９２
スクロース（試薬特級）：和光純薬工業株式会社 コード１９６−０００１５
Ｄ−ラフィノース五水和物（試薬特級）：和光純薬工業株式会社 コード１８０−０００１２
Ｄ−マルトース一水和物：和光純薬工業株式会社の和光特級 コード１３０−００６１５
ラクトース一水和物（試薬特級）：和光純薬工業株式会社 コード１２８−０００９５
Ｄ−ガラクトース(試薬特級)：和光純薬工業株式会社 コード０７１−０００３２
１−ケストース（生化学用）：和光純薬工業株式会社 コード１１２−００４３３
スタキオースｎ水和物：和光純薬工業株式会社 コード１９６−１２７６４
イソマルツロース：和光純薬工業株式会社のパラチノース一水和物（生化学用） コード１６９−１２９９１
マルツロース一水和物：東京化成工業株式会社 コードＭ１１３８
ラクツロース（生化学用）：和光純薬工業株式会社 コード１２６−０３７３２
アデノシン−５’−三りん酸二ナトリウム三水和物（生化学用）：和光純薬工業株式会社 コード０１８−１６９１１
りん酸フェニル二ナトリウム二水和物 ：和光純薬工業株式会社の和光特級 コード０４４−０４２６２
二りん酸ナトリウム十水和物（試薬特級）：和光純薬工業株式会社 コード１９５−０３０２５
アスコルビン酸（試薬特級）：和光純薬工業株式会社 コード０１４−０４８０１
分光光度計：株式会社島津製作所の商品名「ＵＶ−１６００ＰＣ」
【００５２】
りん酸イオン溶液
以下の実施例等で用いたりん酸イオン溶液は次のものである。
りん酸イオン濃度が０、１．０、２．０、３．０および４．０ｍｇ［Ｐ］／Ｌの五種類のりん酸イオン溶液を用意した。りん酸イオン濃度が０ｍｇ［Ｐ］／Ｌのりん酸イオン溶液は蒸留水をそのまま用い、また、他のりん酸イオン溶液はりん標準液を蒸留水で希釈することでりん酸イオン濃度を調整した。
【００５３】
比較例
（検量線の作成）
りん酸イオン濃度が０、１．０、２．０、３．０および４．０ｍｇ［Ｐ］／Ｌの五種類のりん酸イオン溶液のそれぞれ５ｍＬに対し、１Ｍ硫酸１．４ｍＬ、濃度が３０ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸カリウム水溶液１ｍＬおよび１Ｍ硫酸ナトリウム水溶液０．１ｍＬを添加し、ブロックヒータを用いて９５℃で３０分間加熱した。ここで用いたペルオキソ二硫酸カリウム水溶液は、蒸留水にペルオキソ二硫酸カリウムを溶解することで調製した直後のものである。また、硫酸ナトリウム水溶液は、後記する実施例におけるりん酸イオン溶液とナトリウムイオン濃度および硫酸イオン濃度をそろえるために添加したものである。
【００５４】
加熱終了後、９５℃に加熱した状態を維持し、濃度が２００ｇ／ＬのＤ−ラフィノース五水和物０．５ｍＬを添加して３分間放置した。さらに、９５℃に加熱した状態を維持し、発色剤０．５ｍＬを添加して２０分間放置した。ここで用いた発色剤は、モリブデン酸ナトリウム二水和物および酒石酸アンチモニルカリウム三水和物を、それぞれの濃度が２０ｇ／Ｌおよび０．８ｇ／Ｌになるよう蒸留水に溶解したものである。
【００５５】
上述の処理をした各りん酸イオン溶液について、８３０ｎｍの吸光度を測定し、吸光度からりん酸イオン濃度を判定するための検量線を作成した。結果を図１に示す。図１によると、この検量線は、少なくともりん酸イオン濃度が０〜４ｍｇ［Ｐ］／Ｌの範囲で高い直線性を示している。
【００５６】
（試験水の全りん定量）
アデノシン−５’−三りん酸二ナトリウム三水和物濃度が９７．５ｍｇ／Ｌ（１．５ｍｇ［Ｐ］／Ｌ）、りん酸フェニル二ナトリウム二水和物濃度が１２３ｍｇ／Ｌ（１．５ｍｇ［Ｐ］／Ｌ）、Ｄ−グルコース（きょう雑物としての有機物を想定したもの）濃度が５０ｍｇ／Ｌになるよう蒸留水にアデノシン−５’−三りん酸二ナトリウム三水和物、りん酸フェニル二ナトリウム二水和物およびＤ−グルコースを溶解し、試験水を調製した。この試験水は、全りんの濃度が３．０ｍｇ［Ｐ］／Ｌである。
【００５７】
この試験水５ｍＬに対し、１Ｍ硫酸１．４ｍＬ、濃度が３０ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸カリウム水溶液１ｍＬおよび１Ｍ硫酸ナトリウム水溶液０．１ｍＬを添加し、ブロックヒータを用いて９５℃で３０分間加熱した。ここで用いたペルオキソ二硫酸カリウム水溶液は、検量線の作成時に用いたものと同様にして調製したものであるが、調製直後に褐色瓶に入れて蓋をし、５０℃のインキュベーター内で３０日間保存したものである。
【００５８】
加熱終了後、９５℃に加熱した状態を維持し、濃度が２００ｇ／ＬのＤ−ラフィノース五水和物０．５ｍＬを添加して３分間放置した。さらに、９５℃に加熱した状態を維持し、発色剤０．５ｍＬを添加して２０分間放置した。ここで用いた発色剤は、検量線の作成時に用いたものと同じものである。
【００５９】
上述の処理をした試験水について、８３０ｎｍの吸光度を測定し、この吸光度から先に作成した検量線に基づいてりん酸イオン濃度（全りん濃度）を求めたところ、１．６５ｍｇ［Ｐ］／Ｌであった。この結果より、ペルオキソ二硫酸カリウム水溶液は、調製後に保存してから用いると、変性のために試験水に含まれるりん化合物の一部を酸化分解することができず、全りんの定量精度を損なうことがわかる。
【００６０】
実施例
（検量線の作成）
りん酸イオン濃度が０、１．０、２．０、３．０および４．０ｍｇ［Ｐ］／Ｌの五種類のりん酸イオン溶液のそれぞれ５ｍＬに対し、１Ｍ硫酸１．５ｍＬおよび前処理剤１ｍＬを添加し、ブロックヒータを用いて９５℃で３０分間加熱した。ここで用いた前処理剤は、蒸留水にペルオキソ二硫酸カリウムおよび水酸化ナトリウムをそれぞれ濃度が３０ｇ／Ｌおよび０．２Ｍになるよう溶解することで調製したアルカリ性のものであり、調製直後のものである。
【００６１】
加熱終了後、９５℃に加熱した状態を維持し、濃度が２００ｇ／ＬのＤ−ラフィノース五水和物水溶液０．５ｍＬを添加して３分間放置した。さらに、９５℃に加熱した状態を維持し、発色剤０．５ｍＬを添加して２０分間放置した。ここで用いた発色剤は、比較例で用いたものと同じものである。
【００６２】
上述の処理をした各りん酸イオン溶液について、８３０ｎｍの吸光度を測定し、吸光度からりん酸イオン濃度を判定するための検量線を作成した。結果を図２に示す。図２によると、この検量線は、少なくともりん酸イオン濃度が０〜４ｍｇ［Ｐ］／Ｌの範囲で高い直線性を示しており、比較例で作成したものと実質的に同じである。
【００６３】
（試験水の全りん定量）
比較例で調製したものと同じ試験水（全りんの濃度３．０ｍｇ［Ｐ］／Ｌ）５ｍＬに対し、１Ｍ硫酸１．５ｍＬおよび前処理剤１ｍＬを添加し、ブロックヒータを用いて９５℃で３０分間加熱した。ここで用いた前処理剤は、検量線の作成時に用いたものと同様にして調製したものであるが、調製直後に褐色瓶に入れて蓋をし、５０℃のインキュベーター内で３０日間保存したものである。
【００６４】
加熱終了後、９５℃に加熱した状態を維持し、濃度が２００ｇ／ＬのＤ−ラフィノース五水和物０．５ｍＬを添加して３分間放置した。さらに、９５℃に加熱した状態を維持し、発色剤０．５ｍＬを添加して２０分間放置した。ここで用いた発色剤は、検量線の作成時に用いたものと同じものである。
【００６５】
上述の処理をした試験水について、８３０ｎｍの吸光度を測定し、この吸光度から先に作成した検量線に基づいてりん酸イオン濃度（全りん濃度）を求めたところ、２．９１ｍｇ［Ｐ］／Ｌであった。
【００６６】
参考例１
（検量線の作成）
りん酸イオン濃度が０、１．０、２．０、３．０および４．０ｍｇ［Ｐ］／Ｌの五種類のりん酸イオン溶液のそれぞれ２．５ｍＬに対し、１Ｍ硫酸０．６ｍＬと濃度が３０ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸カリウム０．４ｍＬとを添加し、ブロックヒータを用いて９５℃で４０分間加熱した。続けて、９５℃に加熱した状態を維持し、濃度が４００ｇ／ＬのＤ−フルクトース０．２ｍＬを添加して３分間放置した。さらに、９５℃に加熱した状態を維持し、発色剤０．２ｍＬを添加して７分間放置した。ここで用いた発色剤は、蒸留水に七モリブデン酸六アンモニウム四水和物および酒石酸アンチモニルカリウム三水和物を溶解したものであり、七モリブデン酸六アンモニウム四水和物の濃度を２０ｇ／Ｌに、また、酒石酸アンチモニルカリウム三水和物の濃度を０．８ｇ／Ｌに調整したものである。
【００６７】
上述の処理をした各りん酸イオン溶液について、８４０ｎｍの吸光度を測定し、吸光度からりん酸イオン濃度を判定するための検量線を作成した。結果を図３に示す。図３によると、この検量線は、少なくともりん酸イオン濃度が０〜４ｍｇ［Ｐ］／Ｌの範囲で高い直線性を示している。
【００６８】
（試験水の全りん定量）
アデノシン−５’−三りん酸二ナトリウム三水和物濃度が６５ｍｇ／Ｌ（１ｍｇ［Ｐ］／Ｌ）、りん酸フェニル二ナトリウム二水和物濃度が８２ｍｇ／Ｌ（１ｍｇ［Ｐ］／Ｌ）、Ｄ−グルコース（きょう雑物としての有機物を想定したもの）濃度が５０ｍｇ／Ｌになるよう蒸留水にアデノシン−５’−三りん酸二ナトリウム三水和物、りん酸フェニル二ナトリウム二水和物およびＤ−グルコースを溶解し、試験水を調製した。この試験水は、全りんの濃度が２ｍｇ［Ｐ］／Ｌである。
【００６９】
試験水に１Ｍ硫酸０．６ｍＬと濃度が３０ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸カリウム０．４ｍＬとを添加し、ブロックヒータを用いて９５℃で４０分間加熱した。続いて、試験水を９５℃に加熱した状態で濃度が４００ｇ／ＬのＤ−フルクトースを０．２ｍＬ添加し、３分間放置した。さらに、試験水を９５℃に加熱した状態で発色剤（検量線の作成時に用いたものと同様のもの）を０．２ｍＬ添加し、同温度での加熱を７分間継続した。
【００７０】
加熱終了後の試験水について、８４０ｎｍの吸光度を測定し、その測定値から作成した検量線に基づいて試験水の全りん濃度を判定したところ、１．９４ｍｇ［Ｐ］／Ｌであった。
【００７１】
参考例２
（検量線の作成）
りん酸イオン濃度が０、１．０、２．０、３．０および４．０ｍｇ［Ｐ］／Ｌの五種類のりん酸イオン溶液のそれぞれ２．５ｍＬに対し、１Ｍ硫酸０．６ｍＬと濃度が３０ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸カリウム０．４ｍＬとを添加し、ブロックヒータを用いて９５℃で４０分間加熱した。続けて、９５℃に加熱した状態を維持し、濃度が４００ｇ／ＬのＤ−アラビノース０．２ｍＬを添加して３分間放置した。さらに、９５℃に加熱した状態を維持し、発色剤０．２ｍＬを添加して７分間放置した。ここで用いた発色剤は、参考例１で用いたものと同様のものである。
【００７２】
上述の処理をした各りん酸イオン溶液について、８４０ｎｍの吸光度を測定し、吸光度からりん酸イオン濃度を判定するための検量線を作成した。結果を図４に示す。図４によると、この検量線は、少なくともりん酸イオン濃度が０〜４ｍｇ［Ｐ］／Ｌの範囲で高い直線性を示している。
【００７３】
（試験水の全りん定量）
参考例１で用いたものと同じ試験水（全りんの濃度が２ｍｇ［Ｐ］／Ｌ）を調製した。この試験水に１Ｍ硫酸０．６ｍＬと濃度が３０ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸カリウム０．４ｍＬとを添加し、ブロックヒータを用いて９５℃で４０分間加熱した。続いて、試験水を９５℃に加熱した状態で濃度が４００ｇ／ＬのＤ−アラビノースを０．２ｍＬ添加し、３分間放置した。さらに、試験水を９５℃に加熱した状態で発色剤（検量線の作成時に用いたものと同様のもの）を０．２ｍＬ添加し、同温度での加熱を７分間継続した。
【００７４】
加熱終了後の試験水について、８４０ｎｍの吸光度を測定し、その測定値から作成した検量線に基づいて試験水の全りん濃度を判定したところ、１．９８ｍｇ［Ｐ］／Ｌであった。
【００７５】
参考例３
（検量線の作成）
りん酸イオン濃度が０、１．０、２．０、３．０および４．０ｍｇ［Ｐ］／Ｌの五種類のりん酸イオン溶液のそれぞれ２．５ｍＬに対し、１Ｍ硫酸０．６ｍＬと濃度が３０ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸カリウム０．４ｍＬとを添加し、ブロックヒータを用いて９５℃で４０分間加熱した。続けて、９５℃に加熱した状態を維持し、濃度が４００ｇ／ＬのＤ−グルコース０．２ｍＬを添加して３分間放置した。さらに、９５℃に加熱した状態を維持し、発色剤０．２ｍＬを添加して１０分間放置した。ここで用いた発色剤は、参考例１で用いたものと同様のものである。
【００７６】
上述の処理をした各りん酸イオン溶液について、８４０ｎｍの吸光度を測定し、吸光度からりん酸イオン濃度を判定するための検量線を作成した。結果を図５に示す。図５によると、この検量線は、少なくともりん酸イオン濃度が０〜４ｍｇ［Ｐ］／Ｌの範囲で高い直線性を示している。
【００７７】
（試験水の全りん定量）
参考例１で用いたものと同じ試験水（全りんの濃度が２ｍｇ［Ｐ］／Ｌ）を調製した。この試験水に１Ｍ硫酸０．６ｍＬと濃度が３０ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸カリウム０．４ｍＬとを添加し、ブロックヒータを用いて９５℃で４０分間加熱した。続いて、試験水を９５℃に加熱した状態で濃度が４００ｇ／ＬのＤ−グルコースを０．２ｍＬ添加し、３分間放置した。さらに、試験水を９５℃に加熱した状態で発色剤（検量線の作成時に用いたものと同様のもの）を０．２ｍＬ添加し、同温度での加熱を７分間継続した。
【００７８】
加熱終了後の試験水について、８４０ｎｍの吸光度を測定し、その測定値から作成した検量線に基づいて試験水の全りん濃度を判定したところ、２．０２ｍｇ［Ｐ］／Ｌであった。
【００７９】
参考例４
（検量線の作成）
りん酸イオン濃度が０、１．０、２．０、３．０および４．０ｍｇ［Ｐ］／Ｌの五種類のりん酸イオン溶液のそれぞれ２．５ｍＬに対し、１Ｍ硫酸０．６ｍＬと濃度が３０ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸カリウム０．４ｍＬとを添加し、ブロックヒータを用いて９５℃で４０分間加熱した。続けて、９５℃に加熱した状態を維持し、濃度が２００ｇ／Ｌのスクロース０．２ｍＬを添加して３分間放置した。さらに、９５℃に加熱した状態を維持し、発色剤０．２ｍＬを添加して７分間放置した。ここで用いた発色剤は、参考例１で用いたものと同様のものである。
【００８０】
上述の処理をした各りん酸イオン溶液について、８４０ｎｍの吸光度を測定し、吸光度からりん酸イオン濃度を判定するための検量線を作成した。結果を図６に示す。図６によると、この検量線は、少なくともりん酸イオン濃度が０〜４ｍｇ［Ｐ］／Ｌの範囲で高い直線性を示している。
【００８１】
（試験水の全りん定量）
実施例１で用いたものと同じ試験水（全りんの濃度が２ｍｇ［Ｐ］／Ｌ）を調製した。この試験水に１Ｍ硫酸０．６ｍＬと濃度が３０ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸カリウム０．４ｍＬとを添加し、ブロックヒータを用いて９５℃で４０分間加熱した。続いて、試験水を９５℃に加熱した状態で濃度が２００ｇ／Ｌのスクロースを０．２ｍＬ添加し、３分間放置した。さらに、試験水を９５℃に加熱した状態で発色剤（検量線の作成時に用いたものと同様のもの）を０．２ｍＬ添加し、同温度での加熱を７分間継続した。
【００８２】
加熱終了後の試験水について、８４０ｎｍの吸光度を測定し、その測定値から作成した検量線に基づいて試験水の全りん濃度を判定したところ、１．９５ｍｇ［Ｐ］／Ｌであった。
【００８３】
参考例５
（検量線の作成）
りん酸イオン濃度が０、１．０、２．０、３．０および４．０ｍｇ［Ｐ］／Ｌの五種類のりん酸イオン溶液のそれぞれ２．５ｍＬに対し、１Ｍ硫酸０．６ｍＬと濃度が３０ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸アンモニウム０．４ｍＬとを添加し、ブロックヒータを用いて９５℃で４０分間加熱した。続けて、９５℃に加熱した状態を維持し、濃度が４００ｇ／ＬのＤ−マルトース一水和物０．２ｍＬを添加して３分間放置した。さらに、９５℃に加熱した状態を維持し、発色剤０．２ｍＬを添加して７分間放置した。ここで用いた発色剤は、蒸留水にモリブデン酸リチウムおよび酸化アンチモン（ＩＩＩ）を溶解したものであり、モリブデン酸リチウムの濃度を２０ｇ／Ｌに、また、酸化アンチモン（ＩＩＩ）の濃度を０．５ｇ／Ｌに調整したものである。なお、発色剤の調製時に用いた酸化アンチモン（ＩＩＩ）は、蒸留水で希釈して濃度を５重量％に調整した適量の塩酸に予め溶解したものである。
【００８４】
上述の処理をした各りん酸イオン溶液について、６５０ｎｍの吸光度を測定し、吸光度からりん酸イオン濃度を判定するための検量線を作成した。結果を図７に示す。図７によると、この検量線は、少なくともりん酸イオン濃度が０〜４ｍｇ［Ｐ］／Ｌの範囲で高い直線性を示している。
【００８５】
（試験水の全りん定量）
参考例１で用いたものと同じ試験水（全りんの濃度が２ｍｇ［Ｐ］／Ｌ）を調製した。この試験水に１Ｍ硫酸０．６ｍＬと濃度が３０ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸アンモニウム０．４ｍＬとを添加し、ブロックヒータを用いて９５℃で４０分間加熱した。続いて、試験水を９５℃に加熱した状態で濃度が４００ｇ／ＬのＤ−マルトース一水和物を０．２ｍＬ添加し、３分間放置した。さらに、試験水を９５℃に加熱した状態で発色剤（検量線の作成時に用いたものと同様のもの）を０．２ｍＬ添加し、同温度での加熱を７分間継続した。
【００８６】
加熱終了後の試験水について、６５０ｎｍの吸光度を測定し、その測定値から作成した検量線に基づいて試験水の全りん濃度を判定したところ、１．８８ｍｇ［Ｐ］／Ｌであった。
【００８７】
参考例６
（検量線の作成）
りん酸イオン濃度が０、１．０、２．０、３．０および４．０ｍｇ［Ｐ］／Ｌの五種類のりん酸イオン溶液のそれぞれ２．５ｍＬに対し、１Ｍ硫酸０．６ｍＬと濃度が３０ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸アンモニウム０．４ｍＬとを添加し、ブロックヒータを用いて９５℃で４０分間加熱した。続けて、９５℃に加熱した状態を維持し、濃度が４００ｇ／Ｌのラクトース一水和物０．２ｍＬを添加して３分間放置した。さらに、９５℃に加熱した状態を維持し、発色剤０．２ｍＬを添加して７分間放置した。ここで用いた発色剤は、蒸留水にモリブデン酸カルシウムおよび塩化アンチモン（ＩＩＩ）を溶解したものであり、モリブデン酸カルシウムの濃度を２０ｇ／Ｌに、また、塩化アンチモン（ＩＩＩ）の濃度を０．８ｇ／Ｌに調整したものである。発色剤の調製時に用いたモリブデン酸カルシウムは、蒸留水で希釈して濃度を５重量％に調整した適量の塩酸に予め溶解したものである。
【００８８】
上述の処理をした各りん酸イオン溶液について、７００ｎｍの吸光度を測定し、吸光度からりん酸イオン濃度を判定するための検量線を作成した。結果を図８に示す。図８によると、この検量線は、少なくともりん酸イオン濃度が０〜４ｍｇ［Ｐ］／Ｌの範囲で高い直線性を示している。
【００８９】
（試験水の全りん定量）
参考例１で用いたものと同じ試験水（全りんの濃度が２ｍｇ［Ｐ］／Ｌ）を調製した。この試験水に１Ｍ硫酸０．６ｍＬと濃度が３０ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸アンモニウム０．４ｍＬとを添加し、ブロックヒータを用いて９５℃で４０分間加熱した。続いて、試験水を９５℃に加熱した状態で濃度が４００ｇ／Ｌのラクトース一水和物を０．２ｍＬ添加し、３分間放置した。さらに、試験水を９５℃に加熱した状態で発色剤（検量線の作成時に用いたものと同様のもの）を０．２ｍＬ添加し、同温度での加熱を７分間継続した。
【００９０】
加熱終了後の試験水について、７００ｎｍの吸光度を測定し、その測定値から作成した検量線に基づいて試験水の全りん濃度を判定したところ、２．１６ｍｇ［Ｐ］／Ｌであった。
【００９１】
参考例７
（検量線の作成）
りん酸イオン濃度が０、１．０、２．０、３．０および４．０ｍｇ［Ｐ］／Ｌの五種類のりん酸イオン溶液のそれぞれ２．５ｍＬに対し、１Ｍ硫酸０．６ｍＬと濃度が３０ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸アンモニウム０．４ｍＬとを添加し、ブロックヒータを用いて９５℃で４０分間加熱した。続けて、９５℃に加熱した状態を維持し、濃度が４００ｇ／ＬのＤ−ガラクトース０．２ｍＬを添加して３分間放置した。さらに、９５℃に加熱した状態を維持し、発色剤０．２ｍＬを添加して７分間放置した。ここで用いた発色剤は、蒸留水にモリブデン酸カリウムおよび酸化アンチモン（ＩＩＩ）を溶解したものであり、モリブデン酸カリウムの濃度を２０ｇ／Ｌに、また、酸化アンチモン（ＩＩＩ）の濃度を０．５ｇ／Ｌに調整したものである。なお、発色剤の調製時に用いた酸化アンチモン（ＩＩＩ）は、蒸留水で希釈して濃度を５重量％に調整した適量の塩酸に予め溶解したものである。
【００９２】
上述の処理をした各りん酸イオン溶液について、７５０ｎｍの吸光度を測定し、吸光度からりん酸イオン濃度を判定するための検量線を作成した。結果を図９に示す。図９によると、この検量線は、少なくともりん酸イオン濃度が０〜４ｍｇ［Ｐ］／Ｌの範囲で高い直線性を示している。
【００９３】
（試験水の全りん定量）
参考例１で用いたものと同じ試験水（全りんの濃度が２ｍｇ［Ｐ］／Ｌ）を調製した。この試験水に１Ｍ硫酸０．６ｍＬと濃度が３０ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸アンモニウム０．４ｍＬとを添加し、ブロックヒータを用いて９５℃で４０分間加熱した。続いて、試験水を９５℃に加熱した状態で濃度が４００ｇ／ＬのＤ−ガラクトースを０．２ｍＬ添加し、３分間放置した。さらに、試験水を９５℃に加熱した状態で発色剤（検量線の作成時に用いたものと同様のもの）を０．２ｍＬ添加し、同温度での加熱を７分間継続した。
【００９４】
加熱終了後の試験水について、７５０ｎｍの吸光度を測定し、その測定値から作成した検量線に基づいて試験水の全りん濃度を判定したところ、１．９９ｍｇ［Ｐ］／Ｌであった。
【００９５】
参考例８
（検量線の作成）
りん酸イオン濃度が０、１．０、２．０、３．０および４．０ｍｇ［Ｐ］／Ｌの五種類のりん酸イオン溶液のそれぞれ２．５ｍＬに対し、１Ｍ硫酸０．６ｍＬと濃度が３０ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸カリウム０．４ｍＬとを添加し、ブロックヒータを用いて９５℃で４０分間加熱した。続けて、９５℃に加熱した状態を維持し、濃度が４００ｇ／Ｌの１−ケストース０．２ｍＬを添加して３分間放置した。さらに、９５℃に加熱した状態を維持し、発色剤０．２ｍＬを添加して７分間放置した。ここで用いた発色剤は、蒸留水にモリブデン（ＶＩ）酸二ナトリウム二水和物および酒石酸アンチモニルカリウム三水和物を溶解したものであり、モリブデン（ＶＩ）酸二ナトリウム二水和物の濃度を２０ｇ／Ｌに、また、酒石酸アンチモニルカリウム三水和物の濃度を０．８ｇ／Ｌに調整したものである。
【００９６】
上述の処理をした各りん酸イオン溶液について、８００ｎｍの吸光度を測定し、吸光度からりん酸イオン濃度を判定するための検量線を作成した。結果を図１０に示す。図１０によると、この検量線は、少なくともりん酸イオン濃度が０〜４ｍｇ［Ｐ］／Ｌの範囲で高い直線性を示している。
【００９７】
（試験水の全りん定量）
参考例１で用いたものと同じ試験水（全りんの濃度が２ｍｇ［Ｐ］／Ｌ）を調製した。この試験水に１Ｍ硫酸０．６ｍＬと濃度が３０ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸カリウム０．４ｍＬとを添加し、ブロックヒータを用いて９５℃で４０分間加熱した。続いて、試験水を９５℃に加熱した状態で濃度が４００ｇ／Ｌの１−ケストースを０．２ｍＬ添加し、３分間放置した。さらに、試験水を９５℃に加熱した状態で発色剤（検量線の作成時に用いたものと同様のもの）を０．２ｍＬ添加し、同温度での加熱を７分間継続した。
【００９８】
加熱終了後の試験水について、８００ｎｍの吸光度を測定し、その測定値から作成した検量線に基づいて試験水の全りん濃度を判定したところ、１．８８ｍｇ［Ｐ］／Ｌであった。
【００９９】
参考例９
（検量線の作成）
りん酸イオン濃度が０、１．０、２．０、３．０および４．０ｍｇ［Ｐ］／Ｌの五種類のりん酸イオン溶液のそれぞれ２．５ｍＬに対し、１Ｍ硫酸０．６ｍＬと濃度が３０ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸カリウム０．４ｍＬとを添加し、ブロックヒータを用いて９５℃で４０分間加熱した。続けて、９５℃に加熱した状態を維持し、濃度が４００ｇ／Ｌのスタキオースｎ水和物０．２ｍＬを添加して３分間放置した。さらに、９５℃に加熱した状態を維持し、発色剤０．２ｍＬを添加して７分間放置した。ここで用いた発色剤は、蒸留水にモリブデン酸リチウムおよび酒石酸アンチモニルカリウム三水和物を溶解したものであり、モリブデン酸リチウムの濃度を２０ｇ／Ｌに、また、酒石酸アンチモニルカリウム三水和物の濃度を０．８ｇ／Ｌに調整したものである。
【０１００】
上述の処理をした各りん酸イオン溶液について、８３０ｎｍの吸光度を測定し、吸光度からりん酸イオン濃度を判定するための検量線を作成した。結果を図１１に示す。図１１によると、この検量線は、少なくともりん酸イオン濃度が０〜４ｍｇ［Ｐ］／Ｌの範囲で高い直線性を示している。
【０１０１】
（試験水の全りん定量）
参考例１で用いたものと同じ試験水（全りんの濃度が２ｍｇ［Ｐ］／Ｌ）を調製した。この試験水に１Ｍ硫酸０．６ｍＬと濃度が３０ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸カリウム０．４ｍＬとを添加し、ブロックヒータを用いて９５℃で４０分間加熱した。続いて、試験水を９５℃に加熱した状態で濃度が４００ｇ／Ｌのスタキオースｎ水和物を０．２ｍＬ添加し、３分間放置した。さらに、試験水を９５℃に加熱した状態で発色剤（検量線の作成時に用いたものと同様のもの）を０．２ｍＬ添加し、同温度での加熱を７分間継続した。
【０１０２】
加熱終了後の試験水について、８３０ｎｍの吸光度を測定し、その測定値から作成した検量線に基づいて試験水の全りん濃度を判定したところ、１．９２ｍｇ［Ｐ］／Ｌであった。
【０１０３】
参考例１０
（検量線の作成）
りん酸イオン濃度が０、１．０、２．０、３．０および４．０ｍｇ［Ｐ］／Ｌの五種類のりん酸イオン溶液のそれぞれ２．５ｍＬに対し、１Ｍ硫酸０．６ｍＬと濃度が３０ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸カリウム０．４ｍＬとを添加し、ブロックヒータを用いて９５℃で４０分間加熱した。続けて、９５℃に加熱した状態を維持し、濃度が４００ｇ／Ｌのイソマルツロース０．２ｍＬを添加して３分間放置した。さらに、９５℃に加熱した状態を維持し、発色剤０．２ｍＬを添加して７分間放置した。ここで用いた発色剤は、蒸留水にモリブデン酸カルシウムおよび酸化アンチモン（ＩＩＩ）を溶解したものであり、モリブデン酸カルシウムの濃度を２０ｇ／Ｌに、また、酸化アンチモン（ＩＩＩ）の濃度を０．５ｇ／Ｌに調整したものである。なお、発色剤の調製時に用いたモリブデン酸カルシウムは、蒸留水で希釈して濃度を５重量％に調整した適量の塩酸に予め溶解したものであり、また、同剤の調製時に用いた酸化アンチモン（ＩＩＩ）は、同じく、蒸留水で希釈して濃度を５重量％に調整した適量の塩酸に予め溶解したものである。
【０１０４】
上述の処理をした各りん酸イオン溶液について、８５０ｎｍの吸光度を測定し、吸光度からりん酸イオン濃度を判定するための検量線を作成した。結果を図１２に示す。図１２によると、この検量線は、少なくともりん酸イオン濃度が０〜４ｍｇ［Ｐ］／Ｌの範囲で高い直線性を示している。
【０１０５】
（試験水の全りん定量）
参考例１で用いたものと同じ試験水（全りんの濃度が２ｍｇ［Ｐ］／Ｌ）を調製した。この試験水に１Ｍ硫酸０．６ｍＬと濃度が３０ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸カリウム０．４ｍＬとを添加し、ブロックヒータを用いて９５℃で４０分間加熱した。続いて、試験水を９５℃に加熱した状態で濃度が４００ｇ／Ｌのイソマルツロースを０．２ｍＬ添加し、３分間放置した。さらに、試験水を９５℃に加熱した状態で発色剤（検量線の作成時に用いたものと同様のもの）を０．２ｍＬ添加し、同温度での加熱を７分間継続した。
【０１０６】
加熱終了後の試験水について、８５０ｎｍの吸光度を測定し、その測定値から作成した検量線に基づいて試験水の全りん濃度を判定したところ、２．１４ｍｇ［Ｐ］／Ｌであった。
【０１０７】
参考例１１
（検量線の作成）
りん酸イオン濃度が０、１．０、２．０、３．０および４．０ｍｇ［Ｐ］／Ｌの五種類のりん酸イオン溶液のそれぞれ２．５ｍＬに対し、１Ｍ硫酸０．６ｍＬと濃度が３０ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸カリウム０．４ｍＬとを添加し、ブロックヒータを用いて９５℃で４０分間加熱した。続けて、９５℃に加熱した状態を維持し、濃度が４００ｇ／Ｌのマルツロース一水和物０．２ｍＬを添加して３分間放置した。さらに、９５℃に加熱した状態を維持し、発色剤０．２ｍＬを添加して７分間放置した。ここで用いた発色剤は、蒸留水にモリブデン酸カリウムおよび塩化アンチモン（ＩＩＩ）を溶解したものであり、モリブデン酸カリウムの濃度を２０ｇ／Ｌに、また、塩化アンチモン（ＩＩＩ）の濃度を０．８ｇ／Ｌに調整したものである。
【０１０８】
上述の処理をした各りん酸イオン溶液について、８８０ｎｍの吸光度を測定し、吸光度からりん酸イオン濃度を判定するための検量線を作成した。結果を図１３に示す。図１３によると、この検量線は、少なくともりん酸イオン濃度が０〜４ｍｇ［Ｐ］／Ｌの範囲で高い直線性を示している。
【０１０９】
（試験水の全りん定量）
参考例１で用いたものと同じ試験水（全りんの濃度が２ｍｇ［Ｐ］／Ｌ）を調製した。この試験水に１Ｍ硫酸０．６ｍＬと濃度が３０ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸カリウム０．４ｍＬとを添加し、ブロックヒータを用いて９５℃で４０分間加熱した。続いて、試験水を９５℃に加熱した状態で濃度が４００ｇ／Ｌのマルツロース一水和物を０．２ｍＬ添加し、３分間放置した。さらに、試験水を９５℃に加熱した状態で発色剤（検量線の作成時に用いたものと同様のもの）を０．２ｍＬ添加し、同温度での加熱を７分間継続した。
【０１１０】
加熱終了後の試験水について、８８０ｎｍの吸光度を測定し、その測定値から作成した検量線に基づいて試験水の全りん濃度を判定したところ、１．９３ｍｇ［Ｐ］／Ｌであった。
【０１１１】
参考例１２
（検量線の作成）
りん酸イオン濃度が０、１．０、２．０、３．０および４．０ｍｇ［Ｐ］／Ｌの五種類のりん酸イオン溶液のそれぞれ２．５ｍＬに対し、１Ｍ硫酸０．６ｍＬと濃度が３０ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸カリウム０．４ｍＬとを添加し、ブロックヒータを用いて９５℃で４０分間加熱した。続けて、９５℃に加熱した状態を維持し、濃度が４００ｇ／Ｌのラクツロース０．２ｍＬを添加して３分間放置した。さらに、９５℃に加熱した状態を維持し、発色剤０．２ｍＬを添加して７分間放置した。ここで用いた発色剤は、蒸留水にモリブデン（ＶＩ）酸二ナトリウム二水和物および塩化アンチモン（ＩＩＩ）を溶解したものであり、モリブデン（ＶＩ）酸二ナトリウム二水和物の濃度を２０ｇ／Ｌに、また、塩化アンチモン（ＩＩＩ）の濃度を０．８ｇ／Ｌに調整したものである。
【０１１２】
上述の処理をした各りん酸イオン溶液について、９００ｎｍの吸光度を測定し、吸光度からりん酸イオン濃度を判定するための検量線を作成した。結果を図１４に示す。図１４によると、この検量線は、少なくともりん酸イオン濃度が０〜４ｍｇ［Ｐ］／Ｌの範囲で高い直線性を示している。
【０１１３】
（試験水の全りん定量）
実施例１で用いたものと同じ試験水（全りんの濃度が２ｍｇ［Ｐ］／Ｌ）を調製した。この試験水に１Ｍ硫酸０．６ｍＬと濃度が３０ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸カリウム０．４ｍＬとを添加し、ブロックヒータを用いて９５℃で４０分間加熱した。続いて、試験水を９５℃に加熱した状態で濃度が４００ｇ／Ｌのラクツロースを０．２ｍＬ添加し、３分間放置した。さらに、試験水を９５℃に加熱した状態で発色剤（検量線の作成時に用いたものと同様のもの）を０．２ｍＬ添加し、同温度での加熱を７分間継続した。
【０１１４】
加熱終了後の試験水について、９００ｎｍの吸光度を測定し、その測定値から作成した検量線に基づいて試験水の全りん濃度を判定したところ、１．９１ｍｇ［Ｐ］／Ｌであった。
【０１１５】
実験例１
次の３種類の水溶液からなる前処理剤を調製し、各水溶液を５０℃のインキュベーター内で０〜７７日間保存した。
Ａ：蒸留水にペルオキソ二硫酸カリウムを溶解し、その濃度を３０ｇ／Ｌに調整した水溶液。
Ｂ：蒸留水にペルオキソ二硫酸カリウムと水酸化ナトリウムとを溶解し、ペルオキソ二硫酸カリウムの濃度を３０ｇ／Ｌに、また、水酸化ナトリウムの濃度を０．１Ｍに調整した水溶液。
Ｃ：蒸留水にペルオキソ二硫酸カリウムと水酸化ナトリウムとを溶解し、ペルオキソ二硫酸カリウムの濃度を３０ｇ／Ｌに、また、水酸化ナトリウムの濃度を０．２Ｍに調整した水溶液。
【０１１６】
アデノシン−５’−三りん酸二ナトリウム三水和物濃度が１３０ｍｇ／Ｌ（２．０ｍｇ［Ｐ］／Ｌ）、りん酸フェニル二ナトリウム二水和物濃度が１６４ｍｇ／Ｌ（２．０ｍｇ［Ｐ］／Ｌ）、Ｄ−グルコース（きょう雑物としての有機物を想定したもの）濃度が５０ｍｇ／Ｌになるよう蒸留水にアデノシン−５’−三りん酸二ナトリウム三水和物、りん酸フェニル二ナトリウム二水和物およびＤ−グルコースを溶解し、試験水を調製した。この試験水は、全りんの濃度が４．０ｍｇ［Ｐ］／Ｌである。
【０１１７】
（実験例１−１）
試験水５ｍＬに前処理剤Ｃ１ｍＬおよび１Ｍ硫酸１．５ｍＬを添加し、この試験水を９５℃に設定したブロックヒータを用いて３０分間加熱した。加熱後の試験水を蒸留水で４倍に希釈し、その２．５ｍＬに七モリブデン酸六アンモニウム四水和物濃度１０ｇ／Ｌ、酒石酸アンチモニルカリウム三水和物濃度０．４ｇ／Ｌ、アスコルビン酸濃度１．２ｇ／Ｌおよび硫酸濃度１．８Ｍに調整された水溶液０．２ｍＬを添加して２０分間室温で反応させた後、８９０ｎｍの吸光度を測定した。保存期間の異なる前処理剤Ｃ毎にこの吸光度を測定した結果を図１５に示す。
【０１１８】
（実験例１−２）
試験水５ｍＬに前処理剤Ａ１ｍＬ、１Ｍ硫酸１．４ｍＬおよび１Ｍ硫酸ナトリウム水溶液０．１ｍＬを添加し、実験例１−１と同様に処理した後に８９０ｎｍの吸光度を測定した。保存期間の異なる前処理剤Ａ毎にこの吸光度を測定した結果を図１５に示す。
【０１１９】
（実験例１−３）
試験水５ｍＬに前処理剤Ｂ１ｍＬ、１Ｍ硫酸１．４５ｍＬおよび１Ｍ硫酸ナトリウム水溶液０．０５ｍＬを添加し、実験例１−１と同様に処理した後に８９０ｎｍの吸光度を測定した。保存期間の異なる前処理剤Ｂ毎にこの吸光度を測定した結果を図１５に示す。
【０１２０】
実験例１−２および１−３において、試験水に１Ｍ硫酸ナトリウム水溶液を添加したのは、試験水量と、試験水におけるナトリウムイオン濃度および硫酸イオン濃度を実験例１−１にそろえるためである。
【０１２１】
図１５によると、水酸化ナトリウムを含まない前処理剤Ａは、保存期間が３週間程度を過ぎたものを用いた場合に吸光度が大きく低下することから３週間程度しか保存することができないのに対し、水酸化ナトリウムを含む前処理剤ＢおよびＣは、それぞれ８週間程度および１１週間程度の長期の保存が可能である。
【０１２２】
実験例２
（実験例２−１）
実験例１で用いた試験水５ｍＬに実験例１で調製した前処理剤Ｃ１ｍＬおよび１Ｍ硫酸１．５ｍＬを添加し、この試験水を９５℃に設定したブロックヒータを用いて３０分間加熱した。加熱後の試験水へ濃度が２００ｇ／ＬのＤ−ラフィノース五水和物水溶液０．５ｍＬを添加して３分間放置した後に発色剤０．５ｍＬを添加して２０分間反応させ、８３０ｎｍの吸光度を測定した。ここで用いた発色剤は、蒸留水にのモリブデン（ＶＩ）酸二ナトリウム二水和物および酒石酸アンチモニルカリウム三水和物をそれぞれ濃度が２０ｇ／Ｌおよび０．８ｇ／Ｌになるよう溶解した水溶液である。保存期間の異なる前処理剤Ｃ毎にこの吸光度を測定した結果を図１６に示す。
【０１２３】
（実験例２−２）
実験例１で用いた試験水５ｍＬに前処理剤Ａ１ｍＬ、１Ｍ硫酸１．４ｍＬおよび１Ｍ硫酸ナトリウム水溶液０．１ｍＬを添加し、実験例２−１と同様に処理した後に８９０ｎｍの吸光度を測定した。保存期間の異なる前処理剤Ａ毎にこの吸光度を測定した結果を図１６に示す。
【０１２４】
（実験例２−３）
実験例１で用いた試験水５ｍＬに前処理剤Ｂ１ｍＬ、１Ｍ硫酸１．４５ｍＬおよび１Ｍ硫酸ナトリウム水溶液０．０５ｍＬを添加し、実験例２−１と同様に処理した後に８９０ｎｍの吸光度を測定した。保存期間の異なる前処理剤Ｂ毎にこの吸光度を測定した結果を図１６に示す。
【０１２５】
実験例２−２および２−３において、試験水に１Ｍ硫酸ナトリウム水溶液を添加したのは、試験水量と、試験水におけるナトリウムイオン濃度および硫酸イオン濃度を実験例２−１にそろえるためである。
【０１２６】
図１６によっても、水酸化ナトリウムを含まない前処理剤Ａは３週間程度しか保存することができないのに対し、水酸化ナトリウムを含む前処理剤ＢおよびＣは、それぞれ８週間程度および１１週間程度の長期の保存が可能なことがわかる。
【０１２７】
実験例３
次の試料水と酸化剤水溶液とを調製した。試料水２，３および４の調製に用いたＤ−グルコースは、きょう雑物としての有機物を想定したものである。
＜試料水＞
試料水１：
りん酸イオン濃度が５ｍｇ［Ｐ］／Ｌのりん酸イオン溶液。
試料水２：
二りん酸ナトリウム十水和物とＤ−グルコースとを蒸留水に溶解して得られた水溶液（二りん酸ナトリウム換算濃度が５ｍｇ［Ｐ］／Ｌ、Ｄ−グルコース濃度が４０ｍｇ／Ｌ）。
試料水３：
アデノシン−５’−三りん酸二ナトリウム三水和物とＤ−グルコースとを蒸留水に溶解して得られた水溶液（アデノシン−５’−三りん酸二ナトリウム換算濃度が５ｍｇ［Ｐ］／Ｌ、Ｄ−グルコース濃度が４０ｍｇ／Ｌ）。
試料水４：
りん酸フェニル二ナトリウム二水和物とＤ−グルコースとを蒸留水に溶解して得られた水溶液（りん酸フェニル二ナトリウム換算濃度が５ｍｇ［Ｐ］／Ｌ、Ｄ−グルコース濃度が４０ｍｇ／Ｌ）。
【０１２８】
＜酸化剤水溶液＞
酸化剤水溶液１：
濃度が４０ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸カリウム水溶液（ＪＩＳ Ｋ ０１０２の４６．１．１に記載された濃度（以下、「ＪＩＳ法濃度」という）のペルオキソ二硫酸カリウム水溶液）。
酸化剤水溶液２：
濃度が２０ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸カリウム水溶液（ＪＩＳ法濃度の５０％濃度のペルオキソ二硫酸カリウム水溶液）。
酸化剤水溶液３：
濃度が８ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸カリウム水溶液（ＪＩＳ法濃度の２０％濃度のペルオキソ二硫酸カリウム水溶液）。
酸化剤水溶液４：
濃度が４ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸カリウム水溶液（ＪＩＳ法濃度の１０％濃度のペルオキソ二硫酸カリウム水溶液）。
酸化剤水溶液５：
濃度が２ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸カリウム水溶液（ＪＩＳ法濃度の５％濃度のペルオキソ二硫酸カリウム水溶液）。
酸化剤水溶液６：
濃度が０．４ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸カリウム水溶液（ＪＩＳ法濃度の１％濃度のペルオキソ二硫酸カリウム水溶液）。
【０１２９】
試料水１〜４のそれぞれ５ｍＬに対し、酸化剤水溶液１〜６の一つを１ｍＬ添加し、さらに１Ｍ硫酸を１ｍＬ添加した後、各試料水をブロックヒータを用いて９５℃で４０分間加熱した。そして、各試料水を蒸留水で５倍に希釈し、ＪＩＳ Ｋ ０１０２の４６．１．１に記載されたモリブデン青（アスコルビン酸還元）吸光光度法に従って各試料水を発色させ、８９０ｎｍの吸光度を測定した。すなわち、同法において規定されたモリブデン酸アンモニウム溶液とアスコルビン酸溶液との５：１の混合溶液０．２ｍＬを希釈した試料水へ添加し、２５℃で約１５分間放置した後、８９０ｎｍの吸光度を測定した。結果を表１に示す。
【０１３０】
【表１】
【０１３１】
表１において、試料水２〜４の酸化分解率は、試料水１について測定された吸光度に対する吸光度の割合であり、試料水に含まれているりん化合物のうち酸化分解によりりん酸イオンに変換されたものの割合を示している。表１の酸化分解率によると、試料水に含まれるりん化合物は、ペルオキソ二硫酸カリウムの濃度が４ｇ／Ｌ以上の水溶液（酸化剤水溶液４）を用いた場合において９０％以上が、また、同濃度が８ｇ／Ｌ以上の水溶液（酸化剤水溶液３）を用いた場合において９５％以上が分解されてりん酸イオンに変換される。このことから、酸化剤水溶液におけるペルオキソ二硫酸カリウムは、ＪＩＳ法濃度の大凡１／５以下の濃度に設定した場合であっても、試料水に含まれるりん化合物を効果的に酸化分解可能である。
【０１３２】
実験例４
次の試料水を調製した。試料水５，６の調製に用いたＤ−グルコースは、きょう雑物としての有機物を想定したものである。
試料水５：
アデノシン−５’−三りん酸二ナトリウム三水和物、りん酸フェニル二ナトリウム二水和物およびＤ−グルコースを蒸留水に溶解することにより、アデノシン−５’−三りん酸二ナトリウム濃度を１ｍｇ［Ｐ］／Ｌ、りん酸フェニル二ナトリウム濃度を１ｍｇ［Ｐ］／Ｌ、Ｄ−グルコース濃度を５０ｍｇ／Ｌに調整した水溶液。
試料水６：
二りん酸ナトリウム十水和物およびＤ−グルコースを蒸留水に溶解することにより、二りん酸ナトリウム濃度を２ｍｇ［Ｐ］／Ｌ、Ｄ−グルコース濃度を５０ｍｇ／Ｌに調整した水溶液。
【０１３３】
各試料水５ｍＬに対し、濃度が３０ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸カリウム水溶液０．８ｍＬと１Ｍ硫酸１．２ｍＬとを添加した。そして、各試料水をブロックヒータを用いて９５℃で４０分間加熱した後、速やかに水で冷却した。冷却後の各試料水に蒸留水を加えて２倍に希釈し、実験例１の場合と同様にＪＩＳ Ｋ ０１０２の４６．１．１に記載されたモリブデン青（アスコルビン酸還元）吸光光度法に従って各試料水を発色させ、８９０ｎｍの吸光度を測定した。また、ブロックヒータによる各試料水の加熱時間を短縮した場合について、同様に試料水を発色させて８９０ｎｍの吸光度を測定した。結果を表２に示す。
【０１３４】
【表２】
【０１３５】
表２において、相対分解率は、加熱時間が４０分のときに各試料水に含まれるりん化合物の分解率が１００％とした場合における、各加熱時間でのりん化合物の分解率を意味し、加熱時間が４０分の場合の吸光度に対する吸光度の割合に基づいて算出したものである。表２によると、試料水中のりん化合物は、加熱時間が２５分で９０％以上、３０分で９８％以上が分解することがわかる。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、全りんの定量方法、特に、検査水に含まれるりん化合物を分解してりん酸イオンへ変換した後、検査水のりん酸イオンを定量することで検査水の全りんを定量する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
りんは海洋水、湖沼水、河川水および地下水等の富栄養化に関わる原因物質の一つであることから、工場排水等での排出規制が設けられており、工場排水等は、環境への排出前にりん酸イオンの定量が求められる。ここで、工場排水等は、りん酸イオンとしてりんを含むだけではなく、各種のりん化合物としてりん元素を含む場合もあり、りん化合物は環境への排出後に自然分解されることでりんの発生源となる。このため、工場排水等は、りん酸イオンだけではなく、りん化合物から生成し得るりん酸イオンを含めたりん酸イオンの総量、いわゆる全りんの定量が求められることがある。
【０００３】
水中に含まれる全りんの公的な定量方法として、非特許文献１に記載のモリブデン青（アスコルビン酸還元）吸光光度法が知られている。この定量方法は、水中に含まれるりん酸イオンが七モリブデン酸六アンモニウムおよび酒石酸アンチモニルカリウム（ビス［（＋）−タルトラト］二アンチモン（ＩＩＩ）酸二カリウム）と反応して生成するヘテロポリ化合物をＬ（＋）−アスコルビン酸で還元し、それにより生成するモリブデン青により発色した検査水の吸光度を測定することでりん酸イオンを定量するものである。
【０００４】
モリブデン青（アスコルビン酸還元）吸光光度法による全りんの定量では、先ず、所定量の検査水を採取し、この検査水に含まれるりん化合物を分解してりん酸イオンへ変換する前処理をする。この前処理では、検査水に対してりん化合物の酸化剤であるペルオキソ二硫酸カリウム溶液を添加した後、検査水を１２０℃に設定した高圧蒸気滅菌器中で３０分間処理し、りん化合物を酸化分解してりん酸イオンへ変換する。次に、前処理された検査水に対して所定量のモリブデン酸アンモニウム−アスコルビン酸混合溶液を加えて振り混ぜた後、２０〜４０℃で約１５分間放置する。そして、この溶液について波長８８０ｎｍ付近の吸光度を測定し、この測定値から予め作成しておいた検量線に基づいて検査水のりん酸イオン濃度（ｍｇＰＯ４３−／Ｌ）を算出する。
【０００５】
このような全りんの定量方法における検査水の前処理は、高圧蒸気滅菌器、すなわち耐圧容器を用いる必要があるため、操作が複雑になり、特別な安全性も求められる。また、酸化剤として用いるペルオキソ二硫酸カリウムは、１２０℃の温度環境下ではりん化合物を酸化分解するのと同時に自己分解も進行することから、過剰量を用いる必要がある。
【０００６】
そこで、この前処理方法に替わる前処理方法として、非特許文献２には、検査水にペルオキソ二硫酸カリウムを添加した後、１００℃で６０分間処理する方法が提案されている。しかし、この方法では、ペルオキソ二硫酸カリウムの一部が検査水に残留し、それがＬ（＋）−アスコルビン酸によるヘテロポリ化合物の還元を阻害する可能性があるため、モリブデン酸アンモニウム−アスコルビン酸混合溶液を加える前に検査水を２０〜４０℃まで放冷することでペルオキソ二硫酸カリウムの酸化作用を抑制するか、或いは、アルカリ性の状態の検査水へ還元剤である亜硫酸ナトリウムを添加してペルオキソ二硫酸カリウムを消滅させる必要がある。
【０００７】
ところが、検査水を放冷することでペルオキソ二硫酸カリウムの酸化作用を抑制する場合、検査水の冷却に長時間を要し、一連の定量操作を短時間で終了するのが困難になる。また、亜硫酸ナトリウムを添加してペルオキソ二硫酸カリウムを消滅させる場合、有害な二酸化硫黄ガスが発生するため、それについての安全対策が求められる。
【０００８】
また、上記全りんの定量方法は、非特許文献１に記載のように、定量範囲が１．２５〜２５μｇという微量範囲であるため、検査水が比較的多量のりん酸イオンやりん化合物を含む場合に適用できないという不具合もある。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】日本工業規格 ＪＩＳ Ｋ ０１０２、工場排水試験方法（２００８） ４６．１．１および４６．３
【００１０】
【非特許文献２】平成１４年度環境省請負業務結果報告書、水質分析方法検討調査、５頁および１３頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明の目的は、検査水の全りんを安全に短時間で定量できるようにすることにある。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明は、検査水に含まれるりん化合物を分解してりん酸イオンへ変換した後、検査水のりん酸イオンを定量することで検査水の全りんを定量する方法に関するものであり、この定量方法は、検査水に対し、ペルオキソ二硫酸のアルカリ金属塩またはペルオキソ二硫酸アンモニウムを含みかつアルカリ性に調整された第１水溶液と硫酸とを添加し、６５℃から検査水の沸騰温度までの温度で加熱する工程１と、工程１を経た検査水へ炭素数５のアルドース、炭素数６のアルドース、炭素数６のケトースおよび分解により炭素数５のアルドース、炭素数６のアルドースまたは炭素数６のケトースを生成可能な単糖生成化合物からなる糖類化合物群から選ばれた糖類化合物を含む第２水溶液を添加し、引き続き加熱する工程２と、工程２を経た検査水へ七モリブデン酸六アンモニウムまたはモリブデン酸のアルカリ金属塩若しくはアルカリ土類金属塩並びにアンチモンの価数が３であるアンチモン化合物を含む第３水溶液を添加し、６５℃以上に維持する工程３と、工程３を経た検査水について、６００から９５０ｎｍの範囲における任意の波長の吸光度を測定する工程４とを含んでいる。
【００１３】
他の観点に係る本発明は、検査水に含まれる全りんを定量するための、検査水の前処理方法に関するものであり、この前処理方法は、検査水に対し、ペルオキソ二硫酸のアルカリ金属塩またはペルオキソ二硫酸アンモニウムを含みかつアルカリ性に調整された第１水溶液と硫酸とを添加し、６５℃から検査水の沸騰温度までの温度で加熱する工程１と、工程１を経た検査水へ炭素数５のアルドース、炭素数６のアルドース、炭素数６のケトースおよび分解により炭素数５のアルドース、炭素数６のアルドースまたは炭素数６のケトースを生成可能な単糖生成化合物からなる糖類化合物群から選ばれた糖類化合物を含む第２水溶液を添加し、引き続き加熱する工程２とを含んでいる。
【００１４】
本発明の定量方法および前処理方法において用いられる第１水溶液は、通常、アルカリ金属水酸化物の添加によりアルカリ性に調整されており、アルカリ金属水酸化物の濃度が０．２Ｍ以下である。また、単糖生成化合物は、通常、スクロース、マルトース、ラクトース、ラフィノース、ケストース、スタキオース、イソマルツロース、マルツロースまたはラクツロースである。
【００１５】
さらに他の観点に係る本発明は、検査水に含まれる全りんを定量するために、検査水に含まれるりん化合物を分解することでりん化合物のりん元素をりん酸イオンへ変換するための前処理剤に関するものであり、この前処理剤は、ペルオキソ二硫酸のアルカリ金属塩またはペルオキソ二硫酸アンモニウムを含む水溶液からなり、アルカリ性に調整されている。
【００１６】
この前処理剤は、通常、アルカリ金属水酸化物の添加によりアルカリ性に調整されており、アルカリ金属水酸化物の濃度が０．２Ｍ以下である。
【発明の効果】
【００１７】
本発明に係る全りんの定量方法は、上述の工程１から４を含むものであるため、検査水の全りんを安全に短時間で定量することができる。
【００１８】
本発明に係る全りん定量のための検査水の前処理方法は、上述の工程１および２を含むものであるため、検査水に含まれるりん化合物を安全にりん酸イオンへ変換することができ、また、処理後の検査水を速やかにりん酸イオンの定量工程へ適用することができる。
【００１９】
本発明に係る全りん定量のための検査水の前処理剤は、アルカリ性に調整されていることから、ペルオキソ二硫酸のアルカリ金属塩またはペルオキソ二硫酸アンモニウムの分解を抑えて安定に保存することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】比較例で作成した検量線を示す図。
【図２】実施例で作成した検量線を示す図。
【図３】参考例１で作成した検量線を示す図。
【図４】参考例２で作成した検量線を示す図。
【図５】参考例３で作成した検量線を示す図。
【図６】参考例４で作成した検量線を示す図。
【図７】参考例５で作成した検量線を示す図。
【図８】参考例６で作成した検量線を示す図。
【図９】参考例７で作成した検量線を示す図。
【図１０】参考例８で作成した検量線を示す図。
【図１１】参考例９で作成した検量線を示す図。
【図１２】参考例１０で作成した検量線を示す図。
【図１３】参考例１１で作成した検量線を示す図。
【図１４】参考例１２で作成した検量線を示す図。
【図１５】実験例１の結果を示す図。
【図１６】実験例２の結果を示す図。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
本発明の方法により全りんを定量可能な検査水は、特に限定されるものではないが、通常は工場排水や生活排水等のりんの排出規制が設けられている排水の他、海洋水、湖沼水、河川水および地下水等の天然水である。
【００２２】
検査水の全りんを定量する際には、所定量の検査水を採取し、この検査水に含まれるりん化合物のりん元素をりん酸イオンへ変換するための前処理をする。この前処理では、先ず、検査水へ前処理剤と硫酸とを添加し、常圧下、６５℃から検査水の沸騰温度までの温度、好ましくは７５℃から検査水の沸騰温度までの温度で加熱する（工程１）。これにより、検査水に含まれる有機および無機のりん化合物、特に、有機りん化合物は、前処理剤により酸化分解され、りん元素がりん酸イオンに変換される。
【００２３】
ここで用いられる前処理剤は、通常、精製水、例えば、純水、蒸留水またはイオン交換水等にペルオキソ二硫酸化合物を溶解することで調製された水溶液（第１水溶液）であり、アルカリ性に調整されたものである。ペルオキソ二硫酸化合物としては、ペルオキソ二硫酸のアルカリ金属塩またはペルオキソ二硫酸アンモニウムが用いられる。ここで用いられるペルオキソ二硫酸のアルカリ金属塩は、通常、ペルオキソ二硫酸カリウムまたはペルオキソ二硫酸ナトリウムである。前処理剤におけるペルオキソ二硫酸化合物の濃度は、通常、０．４〜５０ｇ／Ｌに設定するのが好ましく、３．０〜４０ｇ／Ｌに設定するのがより好ましい。
【００２４】
前処理剤は、ｐＨが７．０を超えるアルカリ性になれば、アルカリ性への調整方法が限定されるものではないが、通常はアルカリ金属水酸化物の添加によりアルカリ性に調整されるのが好ましい。ここで用いられるアルカリ金属水酸化物は、水酸化ナトリウムまたは水酸化カリウムが好ましい。ペルオキソ二硫酸化合物は、水に溶解した場合に室温で徐々に分解が進行し、不安定になる。特に、ペルオキソ二硫酸のアルカリ金属塩は、水に溶解したときに分解して強酸性の硫酸水素アルカリ金属（例えば、硫酸水素カリウム）を生成し、これがペルオキソ二硫酸のアルカリ金属塩の分解を加速する。このため、ペルオキソ二硫酸化合物の水溶液は、調製後に長期間保存するのが困難であり、やむなく保存する場合は冷蔵が求められる。
【００２５】
これに対し、前処理剤は、アルカリ性に調整されているためペルオキソ二硫酸化合物の分解が抑制され、２〜３ヶ月程度の長期間に亘り５０℃程度の高温環境下においても安定に保存することができることから、全りんの定量を後記するように自動化する場合に有効である。
【００２６】
アルカリ金属水酸化物の添加により前処理剤がアルカリ性に調整される場合、前処理剤におけるアルカリ金属水酸化物の濃度は、通常、水溶液がアルカリ性に維持される状態で０．２Ｍ以下に設定するのが好ましい。この濃度が０．２Ｍを超える場合は、この工程で添加する硫酸の量を多く設定する必要があることから不経済であり、また、検査水においてアルカリ金属水酸化物と硫酸との反応により塩が生成し、この塩によって検査水が濁ることから、後記する工程４での吸光度の測定が不正確になる可能性がある。
【００２７】
検査水への前処理剤の添加量は、検査水におけるペルオキソ二硫酸化合物の濃度が検査水に含まれるりん化合物を十分に酸化分解可能なように設定するのが好ましいが、あまり過剰に添加するとペルオキソ二硫酸化合物が検査水に残留してしまい、後記する工程３において誤発色を引き起こす可能性がある。このため、検査水におけるペルオキソ二硫酸化合物の濃度は、検査水へ前処理剤と硫酸とを添加したときにおける濃度が、通常、０．５〜９ｇ／Ｌになるよう設定するのが好ましく、１〜６ｇ／Ｌになるよう設定するのがより好ましい。
【００２８】
一方、検査水に対する硫酸の添加量は、検査水へ前処理剤と硫酸とを添加したときにおける硫酸の濃度が０．１Ｍ以上になるよう設定するのが好ましい。但し、あまり過剰に添加すると、後記する工程２以降でモリブデン青の生成（りん酸イオンの発色）という目的に対して過剰となる硫酸の中和処理が必要となる可能性があるため、通常、０．１〜０．３Ｍになるよう設定するのが好ましい。
【００２９】
この工程における検査水の加熱時間は、加熱温度により異なるが、通常、２０〜４０分に設定するのが好ましい。
【００３０】
次に、工程１を経た検査水へ所定の糖類を含む水溶液（第２水溶液）を添加し、引き続き加熱する（工程２）。この工程は、工程１を経た検査水を放冷等により冷却せずに、工程１が完了後の高温状態または加熱継続状態の検査水に対して適用することができる。
【００３１】
第２水溶液は、所定の糖類、すなわち、炭素数５のアルドース、炭素数６のアルドース、炭素数６のケトースおよび分解により炭素数５のアルドース、炭素数６のアルドースまたは炭素数６のケトースを生成可能な単糖生成化合物からなる糖類化合物群から選ばれた糖類化合物を精製水に溶解したものである。炭素数５のアルドースの例としては、リボース、アラビノース、キシロースおよびリキソースを挙げることができる。炭素数６のアルドースの例としては、アロース、アルトロース、グルコース、マンノースおよびガラクトースを挙げることができる。炭素数６のケトースの例としては、プシコース、フルクトース、ソルボースおよびタガトースを挙げることができる。
【００３２】
また、分解により炭素数５のアルドース、炭素数６のアルドースまたは炭素数６のケトースを生成可能な単糖生成化合物としては、分解により炭素数５のアルドース、炭素数６のアルドースまたは炭素数６のケトースを生成可能なオリゴ糖または配糖体が用いられる。オリゴ糖としては、例えば、二糖類のスクロース、マルトース、ラクトース、イソマルツロース、マルツロース、ラクツロース、ガラクトスクロース、プリメベロースおよびビシアノース、三糖類のラフィノース、ケストース、ゲンチアノース、プランテオースおよびウンベリフェロース、四糖類のスタキオース並びに五糖類のベルバスコースを挙げることができる。これらの例示のオリゴ糖は、分解により、キシロース（炭素数５のアルドース）、グルコース（炭素数６のアルドース）、ガラクトース（炭素数６のアルドース）またはフルクトース（炭素数６のケトース）を生成することができる。また、配糖体としては、例えば、アルブチンおよびサリシンを挙げることができる。これらの例示の配糖体は、分解によりグルコースを生成することができる。
【００３３】
なお、単糖生成化合物としては、通常、安価に入手可能なスクロース、マルトース、ラクトース、ラフィノース、ケストース、スタキオース、イソマルツロース、マルツロースまたはラクツロースを用いるのが好ましい。
【００３４】
第２水溶液における糖類化合物の濃度は、通常、３０〜６００ｇ／Ｌに設定するのが好ましい。また、検査水に対する第２水溶液の添加量は、検査水における糖類化合物の濃度（単糖生成化合物を用いる場合は、分解により生成する炭素数５のアルドース、炭素数６のアルドースまたは炭素数６のケトースの濃度）が検査水に残留するペルオキソ二硫酸化合物を消滅させるために必要な量よりも十分に過剰になるよう設定する。これは、この工程で検査水へ添加する糖類化合物またはそれから生成する単糖を、後記する工程３において生成するヘテロポリ化合物の還元剤としても利用する必要があるためである。このため、検査水に対する第２水溶液の添加量は、通常、検査水における糖類化合物の濃度が２〜６０ｇ／Ｌになるよう設定するのが好ましく、５〜４０ｇ／Ｌになるよう設定するのがより好ましい。
【００３５】
この工程における検査水の加熱温度は、通常、工程１での加熱と同じ温度範囲に設定することができるが、通常は工程１での加熱温度と同一に設定するのが好ましい。また、この工程における検査水の加熱時間は、加熱温度により異なるが、通常、１〜３０分に設定するのが好ましい。
【００３６】
この工程では、添加された第２水溶液に含まれる炭素数５のアルドース、炭素数６のアルドースまたは炭素数６のケトースにより、りん化合物の酸化分解のために消費されずに検査水に残留しているペルオキソ二硫酸化合物が分解されて消滅する。また、第２水溶液において、糖類化合物として分解により炭素数５のアルドース、炭素数６のアルドースまたは炭素数６のケトースを生成可能な単糖生成化合物を用いた場合は、この工程での加熱により当該単糖生成化合物が加水分解することで生成する炭素数５のアルドース、炭素数６のアルドースまたは炭素数６のケトースにより、或いは、単糖生成化合物がオリゴ糖の場合は当該オリゴ糖自体により、残留しているペルオキソ二硫酸化合物が分解されて消滅する。
【００３７】
以上の工程１および工程２を含む検査水の前処理は、常圧下で操作することができ、また、有害ガスの発生がないため、安全に実施することができる。また、工程１から工程２へ移行するときに検査水を放冷等により冷却する必要がないことから、工程１が完了後の検査水を円滑かつ速やかに工程２へ移行させることができるため、短時間で終了することができる。
【００３８】
次に、前処理が終了した検査水、すなわち、工程２を経た検査水へモリブデン化合物およびアンチン化合物を含む第３水溶液を添加し、６５℃以上に維持する（工程３）。
【００３９】
ここで用いられるモリブデン化合物は、七モリブデン酸六アンモニウムまたはモリブデン酸のアルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩若しくは重金属塩である。このうち、七モリブデン酸六アンモニウムまたはモリブデン酸のアルカリ金属塩若しくはアルカリ土類金属塩を用いるのが好ましい。モリブデン酸のアルカリ金属塩の例としては、モリブデン酸ナトリウム、モリブデン酸カリウムおよびモリブデン酸リチウムを挙げることができる。モリブデン酸のアルカリ土類金属塩の例としては、モリブデン酸カルシウムおよびモリブデン酸マグネシウムを挙げることができる。モリブデン酸の重金属塩の例としては、モリブデン酸亜鉛およびモリブデン酸アルミニウムを挙げることができる。
【００４０】
また、ここで用いられるアンチモン化合物は、アンチモンの価数が３であるアンチモン化合物である。アンチモンの価数が３であるアンチモン化合物の例としては、酒石酸アンチモニルカリウム、三酸化アンチモン（すなわち、酸化アンチモン（ＩＩＩ））およびアンチモンのハロゲン化物塩などを挙げることができる。アンチモンのハロゲン化物塩としては、加水分解により有害な物質を生成しにくい三塩化アンチモン（すなわち、塩化アンチモン（ＩＩＩ））などを用いるのが好ましい。
【００４１】
なお、アンチモン化合物としては、アンチモンの価数が５のアンチモン化合物を用いることもできる。このアンチモン化合物は、水溶液中において自然にアンチモンの価数が３のアンチモン化合物に変換されるため、アンチモンの価数が３のアンチモン化合物の供給源として用いることができる。ここで利用可能なアンチモンの価数が５のアンチモン化合物の例としては、五酸化アンチモン（すなわち、酸化アンチモン（Ｖ））および価数が５のアンチモンのハロゲン化物塩などを挙げることができる。価数が５のアンチモンのハロゲン化物塩としては、加水分解により有害な物質を生成しにくい五塩化アンチモン（すなわち、塩化アンチモン（Ｖ））などを用いるのが好ましい。
【００４２】
第３水溶液は、精製水にモリブデン化合物およびアンチモン化合物を溶解することで調製することができる。ここで、モリブデン化合物としてモリブデン酸のアルカリ土類金属塩を用いる場合は、モリブデン酸のアルカリ土類金属塩の溶解を促進させるために、適量の硫酸または塩酸を添加することができる。また、アンチモン化合物として三酸化アンチモンを用いる場合は、三酸化アンチモンの溶解を促進させるために、適量の塩酸を添加することができる。
【００４３】
第３水溶液におけるモリブデン化合物の濃度（モリブデン化合物の水和物を用いる場合は水和水を除いて換算した濃度）は、通常、１〜３０ｇ／Ｌになるよう設定するのが好ましく、２〜２５ｇ／Ｌになるよう設定するのがより好ましい。一方、第３水溶液におけるアンチモン化合物の濃度（アンチモン化合物の水和物を用いる場合は水和水を除いて換算した濃度）は、通常、０．０４〜１．２ｇ／Ｌになるよう設定するのが好ましく、０．０８〜１．０ｇ／Ｌになるよう設定するのがより好ましい。但し、第３水溶液において、アンチモン化合物（Ａ）とモリブデン化合物（Ｂ）との濃度比（Ａ：Ｂ）は、１：８〜１００になるよう設定するのが好ましく、１：１０〜５０になるよう設定するのがより好ましい。
【００４４】
検査水に対する第３水溶液の添加量は、通常、検査水におけるモリブデン化合物の濃度が０．３〜３．０ｇ／Ｌになり、かつ、アンチモン化合物の濃度が０．０１〜０．２４ｇ／Ｌになるよう設定するのが好ましい。特に、検査水におけるモリブデン化合物の濃度が０．５〜２．０ｇ／Ｌになり、かつ、アンチモン化合物の濃度が０．０２〜０．１３ｇ／Ｌになるよう設定するのが好ましい。
【００４５】
この工程では、工程２での加熱を継続しながら検査水に対して第３水溶液を添加することができる。これにより、第３水溶液が添加された検査水は、６５℃以上に維持される。検査水を同温度以上に維持する時間は、通常、３〜６０分に設定する。工程２における検査水の加熱温度を６５℃よりも十分に高い温度に設定している場合、工程２から工程３への移行時または工程３への移行後の適時に加熱を停止し、検査水を自然冷却しながら本工程において検査水の温度を６５℃以上に所定時間維持することもできる。
【００４６】
この工程において、検査水中に当初から含まれていたりん酸イオンおよび工程１においてりん化合物の酸化分解により生成したりん酸イオンは、第３水溶液のモリブデン化合物およびアンチモン化合物と反応してヘテロポリ化合物を生成する。そして、生成したヘテロポリ化合物は、工程１において添加した硫酸による酸性環境下において、工程２で添加した第２水溶液の炭素数５のアルドース、炭素数６のアルドース若しくは炭素数６のケトースまたは単糖生成化合物の分解により生成した炭素数５のアルドース、炭素数６のアルドース若しくは炭素数６のケトースであって、ペルオキソ二硫酸化合物の分解のために消費されずに残留しているものにより還元される。また、第２水溶液の単糖生成化合物がオリゴ糖であり、しかも当該オリゴ糖が還元性のもの、例えば、マルトース、ラクトース、イソマルツロース、マルツロース、ラクツロース、プリメべロースおよびビシアノースなどの場合は、当該還元性のオリゴ糖自体によっても生成したヘテロポリ化合物は還元され得る。このようなヘテロポリ化合物の還元によりモリブデン青が生成し（りん酸イオンの発色）、このモリブデン青により検査水が変色する。
【００４７】
次に、モリブデン青により変色した検査水について、６００から９５０ｎｍの範囲における任意の波長の吸光度を測定する（工程４）。そして、当該吸光度とりん酸イオン濃度との関係を予め調べて作成しておいた検量線に基づいて、吸光度の測定値から検査水のりん酸イオン量、すなわち全りんの量を判定する。
【００４８】
本発明に係る全りんの定量方法は、取り扱いに注意が必要な耐圧容器等の特殊な反応装置を用いずに安全に実施することができ、また、工程間において検査水を冷却する必要がないため、一連の工程を途切れなく円滑に進めることができ、短時間で終了することができる。また、工程１において用いる前処理剤は、常温で長期間保存しても変性しにくいことから、保存しながら用いることができる。これらのため、この定量方法は、自動化への適用が容易である。
【００４９】
また、本発明に係る全りんの定量方法においては、検量線を作成したときに、りん酸イオン濃度と６００から９５０ｎｍの範囲における任意の波長の吸光度との間の直線関係が比較的高濃度のりん酸イオン濃度の範囲まで良好に成立することから、検査水中に含まれるりん酸イオンの定量上限が４ｍｇ［Ｐ］／Ｌ若しくはそれ以上の範囲まで拡大する。このため、この定量方法は、りん酸イオンやりん化合物の含有量が多い検査水についても適用可能である。
【００５０】
なお、本発明に係る全りんの定量方法において用いる前処理剤は、非特許文献１に記載のモリブデン青（アスコルビン酸還元）吸光光度法による全りんの定量において用いることもできる。
【実施例】
【００５１】
単位
ｍｇ［Ｐ］／Ｌの単位は、１Ｌの水に含まれるりんのｍｇ数を示したものである。
試薬および分光光度計
以下の実施例等で用いた試薬および分光光度計は次のものである。
りん標準液（水質試験用）：和光純薬工業株式会社 コード１６０−１９２４１
１Ｍ硫酸（容量分析用）：和光純薬工業株式会社 コード１９８−０９５９５
塩酸（試薬特級）：和光純薬工業株式会社 コード０８０−０１０６６
水酸化ナトリウム（試薬特級）：和光純薬工業株式会社 コード１９８−１３７６５
硫酸ナトリウム（試薬特級）：和光純薬工業株式会社 コード１９７−０３３４５
ペルオキソ二硫酸カリウム（窒素・りん測定用）：和光純薬工業株式会社 コード１６９−１１８９
ペルオキソ二硫酸アンモニウム（試薬特級）：和光純薬工業株式会社 コード０１２−０３２８５
七モリブデン酸六アンモニウム四水和物(試薬特級)：和光純薬工業株式会社 コード０１８−０６９０１
モリブデン酸リチウム：和光純薬工業株式会社の和光一級 コード１２５−０３５０１
モリブデン酸カリウム：和光純薬工業株式会社 コード１６５−０４００２
モリブデン（ＶＩ）酸二ナトリウム二水和物（試薬特級）：和光純薬工業株式会社 コード１９０−０２４７５
モリブデン酸カルシウム：和光純薬工業株式会社 コード０３４−００６８２
酒石酸アンチモニルカリウム三水和物(試薬特級)：和光純薬工業株式会社 コード０２０−１２８３２
酸化アンチモン（ＩＩＩ）（化学用）：和光純薬工業株式会社 コード０１８−０４４０２
塩化アンチモン（ＩＩＩ）（試薬特級）：和光純薬工業株式会社 コード０１１−０４４９２
Ｄ−フルクトース：和光純薬工業株式会社の和光特級 コード１２７−０２７６５
Ｄ−アラビノース：和光純薬工業株式会社の和光特級 コード０１３−０４５７２
Ｄ−グルコース(試薬特級)：和光純薬工業株式会社 コード０４７−００５９２
スクロース（試薬特級）：和光純薬工業株式会社 コード１９６−０００１５
Ｄ−ラフィノース五水和物（試薬特級）：和光純薬工業株式会社 コード１８０−０００１２
Ｄ−マルトース一水和物：和光純薬工業株式会社の和光特級 コード１３０−００６１５
ラクトース一水和物（試薬特級）：和光純薬工業株式会社 コード１２８−０００９５
Ｄ−ガラクトース(試薬特級)：和光純薬工業株式会社 コード０７１−０００３２
１−ケストース（生化学用）：和光純薬工業株式会社 コード１１２−００４３３
スタキオースｎ水和物：和光純薬工業株式会社 コード１９６−１２７６４
イソマルツロース：和光純薬工業株式会社のパラチノース一水和物（生化学用） コード１６９−１２９９１
マルツロース一水和物：東京化成工業株式会社 コードＭ１１３８
ラクツロース（生化学用）：和光純薬工業株式会社 コード１２６−０３７３２
アデノシン−５’−三りん酸二ナトリウム三水和物（生化学用）：和光純薬工業株式会社 コード０１８−１６９１１
りん酸フェニル二ナトリウム二水和物 ：和光純薬工業株式会社の和光特級 コード０４４−０４２６２
二りん酸ナトリウム十水和物（試薬特級）：和光純薬工業株式会社 コード１９５−０３０２５
アスコルビン酸（試薬特級）：和光純薬工業株式会社 コード０１４−０４８０１
分光光度計：株式会社島津製作所の商品名「ＵＶ−１６００ＰＣ」
【００５２】
りん酸イオン溶液
以下の実施例等で用いたりん酸イオン溶液は次のものである。
りん酸イオン濃度が０、１．０、２．０、３．０および４．０ｍｇ［Ｐ］／Ｌの五種類のりん酸イオン溶液を用意した。りん酸イオン濃度が０ｍｇ［Ｐ］／Ｌのりん酸イオン溶液は蒸留水をそのまま用い、また、他のりん酸イオン溶液はりん標準液を蒸留水で希釈することでりん酸イオン濃度を調整した。
【００５３】
比較例
（検量線の作成）
りん酸イオン濃度が０、１．０、２．０、３．０および４．０ｍｇ［Ｐ］／Ｌの五種類のりん酸イオン溶液のそれぞれ５ｍＬに対し、１Ｍ硫酸１．４ｍＬ、濃度が３０ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸カリウム水溶液１ｍＬおよび１Ｍ硫酸ナトリウム水溶液０．１ｍＬを添加し、ブロックヒータを用いて９５℃で３０分間加熱した。ここで用いたペルオキソ二硫酸カリウム水溶液は、蒸留水にペルオキソ二硫酸カリウムを溶解することで調製した直後のものである。また、硫酸ナトリウム水溶液は、後記する実施例におけるりん酸イオン溶液とナトリウムイオン濃度および硫酸イオン濃度をそろえるために添加したものである。
【００５４】
加熱終了後、９５℃に加熱した状態を維持し、濃度が２００ｇ／ＬのＤ−ラフィノース五水和物０．５ｍＬを添加して３分間放置した。さらに、９５℃に加熱した状態を維持し、発色剤０．５ｍＬを添加して２０分間放置した。ここで用いた発色剤は、モリブデン酸ナトリウム二水和物および酒石酸アンチモニルカリウム三水和物を、それぞれの濃度が２０ｇ／Ｌおよび０．８ｇ／Ｌになるよう蒸留水に溶解したものである。
【００５５】
上述の処理をした各りん酸イオン溶液について、８３０ｎｍの吸光度を測定し、吸光度からりん酸イオン濃度を判定するための検量線を作成した。結果を図１に示す。図１によると、この検量線は、少なくともりん酸イオン濃度が０〜４ｍｇ［Ｐ］／Ｌの範囲で高い直線性を示している。
【００５６】
（試験水の全りん定量）
アデノシン−５’−三りん酸二ナトリウム三水和物濃度が９７．５ｍｇ／Ｌ（１．５ｍｇ［Ｐ］／Ｌ）、りん酸フェニル二ナトリウム二水和物濃度が１２３ｍｇ／Ｌ（１．５ｍｇ［Ｐ］／Ｌ）、Ｄ−グルコース（きょう雑物としての有機物を想定したもの）濃度が５０ｍｇ／Ｌになるよう蒸留水にアデノシン−５’−三りん酸二ナトリウム三水和物、りん酸フェニル二ナトリウム二水和物およびＤ−グルコースを溶解し、試験水を調製した。この試験水は、全りんの濃度が３．０ｍｇ［Ｐ］／Ｌである。
【００５７】
この試験水５ｍＬに対し、１Ｍ硫酸１．４ｍＬ、濃度が３０ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸カリウム水溶液１ｍＬおよび１Ｍ硫酸ナトリウム水溶液０．１ｍＬを添加し、ブロックヒータを用いて９５℃で３０分間加熱した。ここで用いたペルオキソ二硫酸カリウム水溶液は、検量線の作成時に用いたものと同様にして調製したものであるが、調製直後に褐色瓶に入れて蓋をし、５０℃のインキュベーター内で３０日間保存したものである。
【００５８】
加熱終了後、９５℃に加熱した状態を維持し、濃度が２００ｇ／ＬのＤ−ラフィノース五水和物０．５ｍＬを添加して３分間放置した。さらに、９５℃に加熱した状態を維持し、発色剤０．５ｍＬを添加して２０分間放置した。ここで用いた発色剤は、検量線の作成時に用いたものと同じものである。
【００５９】
上述の処理をした試験水について、８３０ｎｍの吸光度を測定し、この吸光度から先に作成した検量線に基づいてりん酸イオン濃度（全りん濃度）を求めたところ、１．６５ｍｇ［Ｐ］／Ｌであった。この結果より、ペルオキソ二硫酸カリウム水溶液は、調製後に保存してから用いると、変性のために試験水に含まれるりん化合物の一部を酸化分解することができず、全りんの定量精度を損なうことがわかる。
【００６０】
実施例
（検量線の作成）
りん酸イオン濃度が０、１．０、２．０、３．０および４．０ｍｇ［Ｐ］／Ｌの五種類のりん酸イオン溶液のそれぞれ５ｍＬに対し、１Ｍ硫酸１．５ｍＬおよび前処理剤１ｍＬを添加し、ブロックヒータを用いて９５℃で３０分間加熱した。ここで用いた前処理剤は、蒸留水にペルオキソ二硫酸カリウムおよび水酸化ナトリウムをそれぞれ濃度が３０ｇ／Ｌおよび０．２Ｍになるよう溶解することで調製したアルカリ性のものであり、調製直後のものである。
【００６１】
加熱終了後、９５℃に加熱した状態を維持し、濃度が２００ｇ／ＬのＤ−ラフィノース五水和物水溶液０．５ｍＬを添加して３分間放置した。さらに、９５℃に加熱した状態を維持し、発色剤０．５ｍＬを添加して２０分間放置した。ここで用いた発色剤は、比較例で用いたものと同じものである。
【００６２】
上述の処理をした各りん酸イオン溶液について、８３０ｎｍの吸光度を測定し、吸光度からりん酸イオン濃度を判定するための検量線を作成した。結果を図２に示す。図２によると、この検量線は、少なくともりん酸イオン濃度が０〜４ｍｇ［Ｐ］／Ｌの範囲で高い直線性を示しており、比較例で作成したものと実質的に同じである。
【００６３】
（試験水の全りん定量）
比較例で調製したものと同じ試験水（全りんの濃度３．０ｍｇ［Ｐ］／Ｌ）５ｍＬに対し、１Ｍ硫酸１．５ｍＬおよび前処理剤１ｍＬを添加し、ブロックヒータを用いて９５℃で３０分間加熱した。ここで用いた前処理剤は、検量線の作成時に用いたものと同様にして調製したものであるが、調製直後に褐色瓶に入れて蓋をし、５０℃のインキュベーター内で３０日間保存したものである。
【００６４】
加熱終了後、９５℃に加熱した状態を維持し、濃度が２００ｇ／ＬのＤ−ラフィノース五水和物０．５ｍＬを添加して３分間放置した。さらに、９５℃に加熱した状態を維持し、発色剤０．５ｍＬを添加して２０分間放置した。ここで用いた発色剤は、検量線の作成時に用いたものと同じものである。
【００６５】
上述の処理をした試験水について、８３０ｎｍの吸光度を測定し、この吸光度から先に作成した検量線に基づいてりん酸イオン濃度（全りん濃度）を求めたところ、２．９１ｍｇ［Ｐ］／Ｌであった。
【００６６】
参考例１
（検量線の作成）
りん酸イオン濃度が０、１．０、２．０、３．０および４．０ｍｇ［Ｐ］／Ｌの五種類のりん酸イオン溶液のそれぞれ２．５ｍＬに対し、１Ｍ硫酸０．６ｍＬと濃度が３０ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸カリウム０．４ｍＬとを添加し、ブロックヒータを用いて９５℃で４０分間加熱した。続けて、９５℃に加熱した状態を維持し、濃度が４００ｇ／ＬのＤ−フルクトース０．２ｍＬを添加して３分間放置した。さらに、９５℃に加熱した状態を維持し、発色剤０．２ｍＬを添加して７分間放置した。ここで用いた発色剤は、蒸留水に七モリブデン酸六アンモニウム四水和物および酒石酸アンチモニルカリウム三水和物を溶解したものであり、七モリブデン酸六アンモニウム四水和物の濃度を２０ｇ／Ｌに、また、酒石酸アンチモニルカリウム三水和物の濃度を０．８ｇ／Ｌに調整したものである。
【００６７】
上述の処理をした各りん酸イオン溶液について、８４０ｎｍの吸光度を測定し、吸光度からりん酸イオン濃度を判定するための検量線を作成した。結果を図３に示す。図３によると、この検量線は、少なくともりん酸イオン濃度が０〜４ｍｇ［Ｐ］／Ｌの範囲で高い直線性を示している。
【００６８】
（試験水の全りん定量）
アデノシン−５’−三りん酸二ナトリウム三水和物濃度が６５ｍｇ／Ｌ（１ｍｇ［Ｐ］／Ｌ）、りん酸フェニル二ナトリウム二水和物濃度が８２ｍｇ／Ｌ（１ｍｇ［Ｐ］／Ｌ）、Ｄ−グルコース（きょう雑物としての有機物を想定したもの）濃度が５０ｍｇ／Ｌになるよう蒸留水にアデノシン−５’−三りん酸二ナトリウム三水和物、りん酸フェニル二ナトリウム二水和物およびＤ−グルコースを溶解し、試験水を調製した。この試験水は、全りんの濃度が２ｍｇ［Ｐ］／Ｌである。
【００６９】
試験水に１Ｍ硫酸０．６ｍＬと濃度が３０ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸カリウム０．４ｍＬとを添加し、ブロックヒータを用いて９５℃で４０分間加熱した。続いて、試験水を９５℃に加熱した状態で濃度が４００ｇ／ＬのＤ−フルクトースを０．２ｍＬ添加し、３分間放置した。さらに、試験水を９５℃に加熱した状態で発色剤（検量線の作成時に用いたものと同様のもの）を０．２ｍＬ添加し、同温度での加熱を７分間継続した。
【００７０】
加熱終了後の試験水について、８４０ｎｍの吸光度を測定し、その測定値から作成した検量線に基づいて試験水の全りん濃度を判定したところ、１．９４ｍｇ［Ｐ］／Ｌであった。
【００７１】
参考例２
（検量線の作成）
りん酸イオン濃度が０、１．０、２．０、３．０および４．０ｍｇ［Ｐ］／Ｌの五種類のりん酸イオン溶液のそれぞれ２．５ｍＬに対し、１Ｍ硫酸０．６ｍＬと濃度が３０ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸カリウム０．４ｍＬとを添加し、ブロックヒータを用いて９５℃で４０分間加熱した。続けて、９５℃に加熱した状態を維持し、濃度が４００ｇ／ＬのＤ−アラビノース０．２ｍＬを添加して３分間放置した。さらに、９５℃に加熱した状態を維持し、発色剤０．２ｍＬを添加して７分間放置した。ここで用いた発色剤は、参考例１で用いたものと同様のものである。
【００７２】
上述の処理をした各りん酸イオン溶液について、８４０ｎｍの吸光度を測定し、吸光度からりん酸イオン濃度を判定するための検量線を作成した。結果を図４に示す。図４によると、この検量線は、少なくともりん酸イオン濃度が０〜４ｍｇ［Ｐ］／Ｌの範囲で高い直線性を示している。
【００７３】
（試験水の全りん定量）
参考例１で用いたものと同じ試験水（全りんの濃度が２ｍｇ［Ｐ］／Ｌ）を調製した。この試験水に１Ｍ硫酸０．６ｍＬと濃度が３０ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸カリウム０．４ｍＬとを添加し、ブロックヒータを用いて９５℃で４０分間加熱した。続いて、試験水を９５℃に加熱した状態で濃度が４００ｇ／ＬのＤ−アラビノースを０．２ｍＬ添加し、３分間放置した。さらに、試験水を９５℃に加熱した状態で発色剤（検量線の作成時に用いたものと同様のもの）を０．２ｍＬ添加し、同温度での加熱を７分間継続した。
【００７４】
加熱終了後の試験水について、８４０ｎｍの吸光度を測定し、その測定値から作成した検量線に基づいて試験水の全りん濃度を判定したところ、１．９８ｍｇ［Ｐ］／Ｌであった。
【００７５】
参考例３
（検量線の作成）
りん酸イオン濃度が０、１．０、２．０、３．０および４．０ｍｇ［Ｐ］／Ｌの五種類のりん酸イオン溶液のそれぞれ２．５ｍＬに対し、１Ｍ硫酸０．６ｍＬと濃度が３０ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸カリウム０．４ｍＬとを添加し、ブロックヒータを用いて９５℃で４０分間加熱した。続けて、９５℃に加熱した状態を維持し、濃度が４００ｇ／ＬのＤ−グルコース０．２ｍＬを添加して３分間放置した。さらに、９５℃に加熱した状態を維持し、発色剤０．２ｍＬを添加して１０分間放置した。ここで用いた発色剤は、参考例１で用いたものと同様のものである。
【００７６】
上述の処理をした各りん酸イオン溶液について、８４０ｎｍの吸光度を測定し、吸光度からりん酸イオン濃度を判定するための検量線を作成した。結果を図５に示す。図５によると、この検量線は、少なくともりん酸イオン濃度が０〜４ｍｇ［Ｐ］／Ｌの範囲で高い直線性を示している。
【００７７】
（試験水の全りん定量）
参考例１で用いたものと同じ試験水（全りんの濃度が２ｍｇ［Ｐ］／Ｌ）を調製した。この試験水に１Ｍ硫酸０．６ｍＬと濃度が３０ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸カリウム０．４ｍＬとを添加し、ブロックヒータを用いて９５℃で４０分間加熱した。続いて、試験水を９５℃に加熱した状態で濃度が４００ｇ／ＬのＤ−グルコースを０．２ｍＬ添加し、３分間放置した。さらに、試験水を９５℃に加熱した状態で発色剤（検量線の作成時に用いたものと同様のもの）を０．２ｍＬ添加し、同温度での加熱を７分間継続した。
【００７８】
加熱終了後の試験水について、８４０ｎｍの吸光度を測定し、その測定値から作成した検量線に基づいて試験水の全りん濃度を判定したところ、２．０２ｍｇ［Ｐ］／Ｌであった。
【００７９】
参考例４
（検量線の作成）
りん酸イオン濃度が０、１．０、２．０、３．０および４．０ｍｇ［Ｐ］／Ｌの五種類のりん酸イオン溶液のそれぞれ２．５ｍＬに対し、１Ｍ硫酸０．６ｍＬと濃度が３０ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸カリウム０．４ｍＬとを添加し、ブロックヒータを用いて９５℃で４０分間加熱した。続けて、９５℃に加熱した状態を維持し、濃度が２００ｇ／Ｌのスクロース０．２ｍＬを添加して３分間放置した。さらに、９５℃に加熱した状態を維持し、発色剤０．２ｍＬを添加して７分間放置した。ここで用いた発色剤は、参考例１で用いたものと同様のものである。
【００８０】
上述の処理をした各りん酸イオン溶液について、８４０ｎｍの吸光度を測定し、吸光度からりん酸イオン濃度を判定するための検量線を作成した。結果を図６に示す。図６によると、この検量線は、少なくともりん酸イオン濃度が０〜４ｍｇ［Ｐ］／Ｌの範囲で高い直線性を示している。
【００８１】
（試験水の全りん定量）
実施例１で用いたものと同じ試験水（全りんの濃度が２ｍｇ［Ｐ］／Ｌ）を調製した。この試験水に１Ｍ硫酸０．６ｍＬと濃度が３０ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸カリウム０．４ｍＬとを添加し、ブロックヒータを用いて９５℃で４０分間加熱した。続いて、試験水を９５℃に加熱した状態で濃度が２００ｇ／Ｌのスクロースを０．２ｍＬ添加し、３分間放置した。さらに、試験水を９５℃に加熱した状態で発色剤（検量線の作成時に用いたものと同様のもの）を０．２ｍＬ添加し、同温度での加熱を７分間継続した。
【００８２】
加熱終了後の試験水について、８４０ｎｍの吸光度を測定し、その測定値から作成した検量線に基づいて試験水の全りん濃度を判定したところ、１．９５ｍｇ［Ｐ］／Ｌであった。
【００８３】
参考例５
（検量線の作成）
りん酸イオン濃度が０、１．０、２．０、３．０および４．０ｍｇ［Ｐ］／Ｌの五種類のりん酸イオン溶液のそれぞれ２．５ｍＬに対し、１Ｍ硫酸０．６ｍＬと濃度が３０ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸アンモニウム０．４ｍＬとを添加し、ブロックヒータを用いて９５℃で４０分間加熱した。続けて、９５℃に加熱した状態を維持し、濃度が４００ｇ／ＬのＤ−マルトース一水和物０．２ｍＬを添加して３分間放置した。さらに、９５℃に加熱した状態を維持し、発色剤０．２ｍＬを添加して７分間放置した。ここで用いた発色剤は、蒸留水にモリブデン酸リチウムおよび酸化アンチモン（ＩＩＩ）を溶解したものであり、モリブデン酸リチウムの濃度を２０ｇ／Ｌに、また、酸化アンチモン（ＩＩＩ）の濃度を０．５ｇ／Ｌに調整したものである。なお、発色剤の調製時に用いた酸化アンチモン（ＩＩＩ）は、蒸留水で希釈して濃度を５重量％に調整した適量の塩酸に予め溶解したものである。
【００８４】
上述の処理をした各りん酸イオン溶液について、６５０ｎｍの吸光度を測定し、吸光度からりん酸イオン濃度を判定するための検量線を作成した。結果を図７に示す。図７によると、この検量線は、少なくともりん酸イオン濃度が０〜４ｍｇ［Ｐ］／Ｌの範囲で高い直線性を示している。
【００８５】
（試験水の全りん定量）
参考例１で用いたものと同じ試験水（全りんの濃度が２ｍｇ［Ｐ］／Ｌ）を調製した。この試験水に１Ｍ硫酸０．６ｍＬと濃度が３０ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸アンモニウム０．４ｍＬとを添加し、ブロックヒータを用いて９５℃で４０分間加熱した。続いて、試験水を９５℃に加熱した状態で濃度が４００ｇ／ＬのＤ−マルトース一水和物を０．２ｍＬ添加し、３分間放置した。さらに、試験水を９５℃に加熱した状態で発色剤（検量線の作成時に用いたものと同様のもの）を０．２ｍＬ添加し、同温度での加熱を７分間継続した。
【００８６】
加熱終了後の試験水について、６５０ｎｍの吸光度を測定し、その測定値から作成した検量線に基づいて試験水の全りん濃度を判定したところ、１．８８ｍｇ［Ｐ］／Ｌであった。
【００８７】
参考例６
（検量線の作成）
りん酸イオン濃度が０、１．０、２．０、３．０および４．０ｍｇ［Ｐ］／Ｌの五種類のりん酸イオン溶液のそれぞれ２．５ｍＬに対し、１Ｍ硫酸０．６ｍＬと濃度が３０ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸アンモニウム０．４ｍＬとを添加し、ブロックヒータを用いて９５℃で４０分間加熱した。続けて、９５℃に加熱した状態を維持し、濃度が４００ｇ／Ｌのラクトース一水和物０．２ｍＬを添加して３分間放置した。さらに、９５℃に加熱した状態を維持し、発色剤０．２ｍＬを添加して７分間放置した。ここで用いた発色剤は、蒸留水にモリブデン酸カルシウムおよび塩化アンチモン（ＩＩＩ）を溶解したものであり、モリブデン酸カルシウムの濃度を２０ｇ／Ｌに、また、塩化アンチモン（ＩＩＩ）の濃度を０．８ｇ／Ｌに調整したものである。発色剤の調製時に用いたモリブデン酸カルシウムは、蒸留水で希釈して濃度を５重量％に調整した適量の塩酸に予め溶解したものである。
【００８８】
上述の処理をした各りん酸イオン溶液について、７００ｎｍの吸光度を測定し、吸光度からりん酸イオン濃度を判定するための検量線を作成した。結果を図８に示す。図８によると、この検量線は、少なくともりん酸イオン濃度が０〜４ｍｇ［Ｐ］／Ｌの範囲で高い直線性を示している。
【００８９】
（試験水の全りん定量）
参考例１で用いたものと同じ試験水（全りんの濃度が２ｍｇ［Ｐ］／Ｌ）を調製した。この試験水に１Ｍ硫酸０．６ｍＬと濃度が３０ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸アンモニウム０．４ｍＬとを添加し、ブロックヒータを用いて９５℃で４０分間加熱した。続いて、試験水を９５℃に加熱した状態で濃度が４００ｇ／Ｌのラクトース一水和物を０．２ｍＬ添加し、３分間放置した。さらに、試験水を９５℃に加熱した状態で発色剤（検量線の作成時に用いたものと同様のもの）を０．２ｍＬ添加し、同温度での加熱を７分間継続した。
【００９０】
加熱終了後の試験水について、７００ｎｍの吸光度を測定し、その測定値から作成した検量線に基づいて試験水の全りん濃度を判定したところ、２．１６ｍｇ［Ｐ］／Ｌであった。
【００９１】
参考例７
（検量線の作成）
りん酸イオン濃度が０、１．０、２．０、３．０および４．０ｍｇ［Ｐ］／Ｌの五種類のりん酸イオン溶液のそれぞれ２．５ｍＬに対し、１Ｍ硫酸０．６ｍＬと濃度が３０ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸アンモニウム０．４ｍＬとを添加し、ブロックヒータを用いて９５℃で４０分間加熱した。続けて、９５℃に加熱した状態を維持し、濃度が４００ｇ／ＬのＤ−ガラクトース０．２ｍＬを添加して３分間放置した。さらに、９５℃に加熱した状態を維持し、発色剤０．２ｍＬを添加して７分間放置した。ここで用いた発色剤は、蒸留水にモリブデン酸カリウムおよび酸化アンチモン（ＩＩＩ）を溶解したものであり、モリブデン酸カリウムの濃度を２０ｇ／Ｌに、また、酸化アンチモン（ＩＩＩ）の濃度を０．５ｇ／Ｌに調整したものである。なお、発色剤の調製時に用いた酸化アンチモン（ＩＩＩ）は、蒸留水で希釈して濃度を５重量％に調整した適量の塩酸に予め溶解したものである。
【００９２】
上述の処理をした各りん酸イオン溶液について、７５０ｎｍの吸光度を測定し、吸光度からりん酸イオン濃度を判定するための検量線を作成した。結果を図９に示す。図９によると、この検量線は、少なくともりん酸イオン濃度が０〜４ｍｇ［Ｐ］／Ｌの範囲で高い直線性を示している。
【００９３】
（試験水の全りん定量）
参考例１で用いたものと同じ試験水（全りんの濃度が２ｍｇ［Ｐ］／Ｌ）を調製した。この試験水に１Ｍ硫酸０．６ｍＬと濃度が３０ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸アンモニウム０．４ｍＬとを添加し、ブロックヒータを用いて９５℃で４０分間加熱した。続いて、試験水を９５℃に加熱した状態で濃度が４００ｇ／ＬのＤ−ガラクトースを０．２ｍＬ添加し、３分間放置した。さらに、試験水を９５℃に加熱した状態で発色剤（検量線の作成時に用いたものと同様のもの）を０．２ｍＬ添加し、同温度での加熱を７分間継続した。
【００９４】
加熱終了後の試験水について、７５０ｎｍの吸光度を測定し、その測定値から作成した検量線に基づいて試験水の全りん濃度を判定したところ、１．９９ｍｇ［Ｐ］／Ｌであった。
【００９５】
参考例８
（検量線の作成）
りん酸イオン濃度が０、１．０、２．０、３．０および４．０ｍｇ［Ｐ］／Ｌの五種類のりん酸イオン溶液のそれぞれ２．５ｍＬに対し、１Ｍ硫酸０．６ｍＬと濃度が３０ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸カリウム０．４ｍＬとを添加し、ブロックヒータを用いて９５℃で４０分間加熱した。続けて、９５℃に加熱した状態を維持し、濃度が４００ｇ／Ｌの１−ケストース０．２ｍＬを添加して３分間放置した。さらに、９５℃に加熱した状態を維持し、発色剤０．２ｍＬを添加して７分間放置した。ここで用いた発色剤は、蒸留水にモリブデン（ＶＩ）酸二ナトリウム二水和物および酒石酸アンチモニルカリウム三水和物を溶解したものであり、モリブデン（ＶＩ）酸二ナトリウム二水和物の濃度を２０ｇ／Ｌに、また、酒石酸アンチモニルカリウム三水和物の濃度を０．８ｇ／Ｌに調整したものである。
【００９６】
上述の処理をした各りん酸イオン溶液について、８００ｎｍの吸光度を測定し、吸光度からりん酸イオン濃度を判定するための検量線を作成した。結果を図１０に示す。図１０によると、この検量線は、少なくともりん酸イオン濃度が０〜４ｍｇ［Ｐ］／Ｌの範囲で高い直線性を示している。
【００９７】
（試験水の全りん定量）
参考例１で用いたものと同じ試験水（全りんの濃度が２ｍｇ［Ｐ］／Ｌ）を調製した。この試験水に１Ｍ硫酸０．６ｍＬと濃度が３０ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸カリウム０．４ｍＬとを添加し、ブロックヒータを用いて９５℃で４０分間加熱した。続いて、試験水を９５℃に加熱した状態で濃度が４００ｇ／Ｌの１−ケストースを０．２ｍＬ添加し、３分間放置した。さらに、試験水を９５℃に加熱した状態で発色剤（検量線の作成時に用いたものと同様のもの）を０．２ｍＬ添加し、同温度での加熱を７分間継続した。
【００９８】
加熱終了後の試験水について、８００ｎｍの吸光度を測定し、その測定値から作成した検量線に基づいて試験水の全りん濃度を判定したところ、１．８８ｍｇ［Ｐ］／Ｌであった。
【００９９】
参考例９
（検量線の作成）
りん酸イオン濃度が０、１．０、２．０、３．０および４．０ｍｇ［Ｐ］／Ｌの五種類のりん酸イオン溶液のそれぞれ２．５ｍＬに対し、１Ｍ硫酸０．６ｍＬと濃度が３０ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸カリウム０．４ｍＬとを添加し、ブロックヒータを用いて９５℃で４０分間加熱した。続けて、９５℃に加熱した状態を維持し、濃度が４００ｇ／Ｌのスタキオースｎ水和物０．２ｍＬを添加して３分間放置した。さらに、９５℃に加熱した状態を維持し、発色剤０．２ｍＬを添加して７分間放置した。ここで用いた発色剤は、蒸留水にモリブデン酸リチウムおよび酒石酸アンチモニルカリウム三水和物を溶解したものであり、モリブデン酸リチウムの濃度を２０ｇ／Ｌに、また、酒石酸アンチモニルカリウム三水和物の濃度を０．８ｇ／Ｌに調整したものである。
【０１００】
上述の処理をした各りん酸イオン溶液について、８３０ｎｍの吸光度を測定し、吸光度からりん酸イオン濃度を判定するための検量線を作成した。結果を図１１に示す。図１１によると、この検量線は、少なくともりん酸イオン濃度が０〜４ｍｇ［Ｐ］／Ｌの範囲で高い直線性を示している。
【０１０１】
（試験水の全りん定量）
参考例１で用いたものと同じ試験水（全りんの濃度が２ｍｇ［Ｐ］／Ｌ）を調製した。この試験水に１Ｍ硫酸０．６ｍＬと濃度が３０ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸カリウム０．４ｍＬとを添加し、ブロックヒータを用いて９５℃で４０分間加熱した。続いて、試験水を９５℃に加熱した状態で濃度が４００ｇ／Ｌのスタキオースｎ水和物を０．２ｍＬ添加し、３分間放置した。さらに、試験水を９５℃に加熱した状態で発色剤（検量線の作成時に用いたものと同様のもの）を０．２ｍＬ添加し、同温度での加熱を７分間継続した。
【０１０２】
加熱終了後の試験水について、８３０ｎｍの吸光度を測定し、その測定値から作成した検量線に基づいて試験水の全りん濃度を判定したところ、１．９２ｍｇ［Ｐ］／Ｌであった。
【０１０３】
参考例１０
（検量線の作成）
りん酸イオン濃度が０、１．０、２．０、３．０および４．０ｍｇ［Ｐ］／Ｌの五種類のりん酸イオン溶液のそれぞれ２．５ｍＬに対し、１Ｍ硫酸０．６ｍＬと濃度が３０ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸カリウム０．４ｍＬとを添加し、ブロックヒータを用いて９５℃で４０分間加熱した。続けて、９５℃に加熱した状態を維持し、濃度が４００ｇ／Ｌのイソマルツロース０．２ｍＬを添加して３分間放置した。さらに、９５℃に加熱した状態を維持し、発色剤０．２ｍＬを添加して７分間放置した。ここで用いた発色剤は、蒸留水にモリブデン酸カルシウムおよび酸化アンチモン（ＩＩＩ）を溶解したものであり、モリブデン酸カルシウムの濃度を２０ｇ／Ｌに、また、酸化アンチモン（ＩＩＩ）の濃度を０．５ｇ／Ｌに調整したものである。なお、発色剤の調製時に用いたモリブデン酸カルシウムは、蒸留水で希釈して濃度を５重量％に調整した適量の塩酸に予め溶解したものであり、また、同剤の調製時に用いた酸化アンチモン（ＩＩＩ）は、同じく、蒸留水で希釈して濃度を５重量％に調整した適量の塩酸に予め溶解したものである。
【０１０４】
上述の処理をした各りん酸イオン溶液について、８５０ｎｍの吸光度を測定し、吸光度からりん酸イオン濃度を判定するための検量線を作成した。結果を図１２に示す。図１２によると、この検量線は、少なくともりん酸イオン濃度が０〜４ｍｇ［Ｐ］／Ｌの範囲で高い直線性を示している。
【０１０５】
（試験水の全りん定量）
参考例１で用いたものと同じ試験水（全りんの濃度が２ｍｇ［Ｐ］／Ｌ）を調製した。この試験水に１Ｍ硫酸０．６ｍＬと濃度が３０ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸カリウム０．４ｍＬとを添加し、ブロックヒータを用いて９５℃で４０分間加熱した。続いて、試験水を９５℃に加熱した状態で濃度が４００ｇ／Ｌのイソマルツロースを０．２ｍＬ添加し、３分間放置した。さらに、試験水を９５℃に加熱した状態で発色剤（検量線の作成時に用いたものと同様のもの）を０．２ｍＬ添加し、同温度での加熱を７分間継続した。
【０１０６】
加熱終了後の試験水について、８５０ｎｍの吸光度を測定し、その測定値から作成した検量線に基づいて試験水の全りん濃度を判定したところ、２．１４ｍｇ［Ｐ］／Ｌであった。
【０１０７】
参考例１１
（検量線の作成）
りん酸イオン濃度が０、１．０、２．０、３．０および４．０ｍｇ［Ｐ］／Ｌの五種類のりん酸イオン溶液のそれぞれ２．５ｍＬに対し、１Ｍ硫酸０．６ｍＬと濃度が３０ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸カリウム０．４ｍＬとを添加し、ブロックヒータを用いて９５℃で４０分間加熱した。続けて、９５℃に加熱した状態を維持し、濃度が４００ｇ／Ｌのマルツロース一水和物０．２ｍＬを添加して３分間放置した。さらに、９５℃に加熱した状態を維持し、発色剤０．２ｍＬを添加して７分間放置した。ここで用いた発色剤は、蒸留水にモリブデン酸カリウムおよび塩化アンチモン（ＩＩＩ）を溶解したものであり、モリブデン酸カリウムの濃度を２０ｇ／Ｌに、また、塩化アンチモン（ＩＩＩ）の濃度を０．８ｇ／Ｌに調整したものである。
【０１０８】
上述の処理をした各りん酸イオン溶液について、８８０ｎｍの吸光度を測定し、吸光度からりん酸イオン濃度を判定するための検量線を作成した。結果を図１３に示す。図１３によると、この検量線は、少なくともりん酸イオン濃度が０〜４ｍｇ［Ｐ］／Ｌの範囲で高い直線性を示している。
【０１０９】
（試験水の全りん定量）
参考例１で用いたものと同じ試験水（全りんの濃度が２ｍｇ［Ｐ］／Ｌ）を調製した。この試験水に１Ｍ硫酸０．６ｍＬと濃度が３０ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸カリウム０．４ｍＬとを添加し、ブロックヒータを用いて９５℃で４０分間加熱した。続いて、試験水を９５℃に加熱した状態で濃度が４００ｇ／Ｌのマルツロース一水和物を０．２ｍＬ添加し、３分間放置した。さらに、試験水を９５℃に加熱した状態で発色剤（検量線の作成時に用いたものと同様のもの）を０．２ｍＬ添加し、同温度での加熱を７分間継続した。
【０１１０】
加熱終了後の試験水について、８８０ｎｍの吸光度を測定し、その測定値から作成した検量線に基づいて試験水の全りん濃度を判定したところ、１．９３ｍｇ［Ｐ］／Ｌであった。
【０１１１】
参考例１２
（検量線の作成）
りん酸イオン濃度が０、１．０、２．０、３．０および４．０ｍｇ［Ｐ］／Ｌの五種類のりん酸イオン溶液のそれぞれ２．５ｍＬに対し、１Ｍ硫酸０．６ｍＬと濃度が３０ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸カリウム０．４ｍＬとを添加し、ブロックヒータを用いて９５℃で４０分間加熱した。続けて、９５℃に加熱した状態を維持し、濃度が４００ｇ／Ｌのラクツロース０．２ｍＬを添加して３分間放置した。さらに、９５℃に加熱した状態を維持し、発色剤０．２ｍＬを添加して７分間放置した。ここで用いた発色剤は、蒸留水にモリブデン（ＶＩ）酸二ナトリウム二水和物および塩化アンチモン（ＩＩＩ）を溶解したものであり、モリブデン（ＶＩ）酸二ナトリウム二水和物の濃度を２０ｇ／Ｌに、また、塩化アンチモン（ＩＩＩ）の濃度を０．８ｇ／Ｌに調整したものである。
【０１１２】
上述の処理をした各りん酸イオン溶液について、９００ｎｍの吸光度を測定し、吸光度からりん酸イオン濃度を判定するための検量線を作成した。結果を図１４に示す。図１４によると、この検量線は、少なくともりん酸イオン濃度が０〜４ｍｇ［Ｐ］／Ｌの範囲で高い直線性を示している。
【０１１３】
（試験水の全りん定量）
実施例１で用いたものと同じ試験水（全りんの濃度が２ｍｇ［Ｐ］／Ｌ）を調製した。この試験水に１Ｍ硫酸０．６ｍＬと濃度が３０ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸カリウム０．４ｍＬとを添加し、ブロックヒータを用いて９５℃で４０分間加熱した。続いて、試験水を９５℃に加熱した状態で濃度が４００ｇ／Ｌのラクツロースを０．２ｍＬ添加し、３分間放置した。さらに、試験水を９５℃に加熱した状態で発色剤（検量線の作成時に用いたものと同様のもの）を０．２ｍＬ添加し、同温度での加熱を７分間継続した。
【０１１４】
加熱終了後の試験水について、９００ｎｍの吸光度を測定し、その測定値から作成した検量線に基づいて試験水の全りん濃度を判定したところ、１．９１ｍｇ［Ｐ］／Ｌであった。
【０１１５】
実験例１
次の３種類の水溶液からなる前処理剤を調製し、各水溶液を５０℃のインキュベーター内で０〜７７日間保存した。
Ａ：蒸留水にペルオキソ二硫酸カリウムを溶解し、その濃度を３０ｇ／Ｌに調整した水溶液。
Ｂ：蒸留水にペルオキソ二硫酸カリウムと水酸化ナトリウムとを溶解し、ペルオキソ二硫酸カリウムの濃度を３０ｇ／Ｌに、また、水酸化ナトリウムの濃度を０．１Ｍに調整した水溶液。
Ｃ：蒸留水にペルオキソ二硫酸カリウムと水酸化ナトリウムとを溶解し、ペルオキソ二硫酸カリウムの濃度を３０ｇ／Ｌに、また、水酸化ナトリウムの濃度を０．２Ｍに調整した水溶液。
【０１１６】
アデノシン−５’−三りん酸二ナトリウム三水和物濃度が１３０ｍｇ／Ｌ（２．０ｍｇ［Ｐ］／Ｌ）、りん酸フェニル二ナトリウム二水和物濃度が１６４ｍｇ／Ｌ（２．０ｍｇ［Ｐ］／Ｌ）、Ｄ−グルコース（きょう雑物としての有機物を想定したもの）濃度が５０ｍｇ／Ｌになるよう蒸留水にアデノシン−５’−三りん酸二ナトリウム三水和物、りん酸フェニル二ナトリウム二水和物およびＤ−グルコースを溶解し、試験水を調製した。この試験水は、全りんの濃度が４．０ｍｇ［Ｐ］／Ｌである。
【０１１７】
（実験例１−１）
試験水５ｍＬに前処理剤Ｃ１ｍＬおよび１Ｍ硫酸１．５ｍＬを添加し、この試験水を９５℃に設定したブロックヒータを用いて３０分間加熱した。加熱後の試験水を蒸留水で４倍に希釈し、その２．５ｍＬに七モリブデン酸六アンモニウム四水和物濃度１０ｇ／Ｌ、酒石酸アンチモニルカリウム三水和物濃度０．４ｇ／Ｌ、アスコルビン酸濃度１．２ｇ／Ｌおよび硫酸濃度１．８Ｍに調整された水溶液０．２ｍＬを添加して２０分間室温で反応させた後、８９０ｎｍの吸光度を測定した。保存期間の異なる前処理剤Ｃ毎にこの吸光度を測定した結果を図１５に示す。
【０１１８】
（実験例１−２）
試験水５ｍＬに前処理剤Ａ１ｍＬ、１Ｍ硫酸１．４ｍＬおよび１Ｍ硫酸ナトリウム水溶液０．１ｍＬを添加し、実験例１−１と同様に処理した後に８９０ｎｍの吸光度を測定した。保存期間の異なる前処理剤Ａ毎にこの吸光度を測定した結果を図１５に示す。
【０１１９】
（実験例１−３）
試験水５ｍＬに前処理剤Ｂ１ｍＬ、１Ｍ硫酸１．４５ｍＬおよび１Ｍ硫酸ナトリウム水溶液０．０５ｍＬを添加し、実験例１−１と同様に処理した後に８９０ｎｍの吸光度を測定した。保存期間の異なる前処理剤Ｂ毎にこの吸光度を測定した結果を図１５に示す。
【０１２０】
実験例１−２および１−３において、試験水に１Ｍ硫酸ナトリウム水溶液を添加したのは、試験水量と、試験水におけるナトリウムイオン濃度および硫酸イオン濃度を実験例１−１にそろえるためである。
【０１２１】
図１５によると、水酸化ナトリウムを含まない前処理剤Ａは、保存期間が３週間程度を過ぎたものを用いた場合に吸光度が大きく低下することから３週間程度しか保存することができないのに対し、水酸化ナトリウムを含む前処理剤ＢおよびＣは、それぞれ８週間程度および１１週間程度の長期の保存が可能である。
【０１２２】
実験例２
（実験例２−１）
実験例１で用いた試験水５ｍＬに実験例１で調製した前処理剤Ｃ１ｍＬおよび１Ｍ硫酸１．５ｍＬを添加し、この試験水を９５℃に設定したブロックヒータを用いて３０分間加熱した。加熱後の試験水へ濃度が２００ｇ／ＬのＤ−ラフィノース五水和物水溶液０．５ｍＬを添加して３分間放置した後に発色剤０．５ｍＬを添加して２０分間反応させ、８３０ｎｍの吸光度を測定した。ここで用いた発色剤は、蒸留水にのモリブデン（ＶＩ）酸二ナトリウム二水和物および酒石酸アンチモニルカリウム三水和物をそれぞれ濃度が２０ｇ／Ｌおよび０．８ｇ／Ｌになるよう溶解した水溶液である。保存期間の異なる前処理剤Ｃ毎にこの吸光度を測定した結果を図１６に示す。
【０１２３】
（実験例２−２）
実験例１で用いた試験水５ｍＬに前処理剤Ａ１ｍＬ、１Ｍ硫酸１．４ｍＬおよび１Ｍ硫酸ナトリウム水溶液０．１ｍＬを添加し、実験例２−１と同様に処理した後に８９０ｎｍの吸光度を測定した。保存期間の異なる前処理剤Ａ毎にこの吸光度を測定した結果を図１６に示す。
【０１２４】
（実験例２−３）
実験例１で用いた試験水５ｍＬに前処理剤Ｂ１ｍＬ、１Ｍ硫酸１．４５ｍＬおよび１Ｍ硫酸ナトリウム水溶液０．０５ｍＬを添加し、実験例２−１と同様に処理した後に８９０ｎｍの吸光度を測定した。保存期間の異なる前処理剤Ｂ毎にこの吸光度を測定した結果を図１６に示す。
【０１２５】
実験例２−２および２−３において、試験水に１Ｍ硫酸ナトリウム水溶液を添加したのは、試験水量と、試験水におけるナトリウムイオン濃度および硫酸イオン濃度を実験例２−１にそろえるためである。
【０１２６】
図１６によっても、水酸化ナトリウムを含まない前処理剤Ａは３週間程度しか保存することができないのに対し、水酸化ナトリウムを含む前処理剤ＢおよびＣは、それぞれ８週間程度および１１週間程度の長期の保存が可能なことがわかる。
【０１２７】
実験例３
次の試料水と酸化剤水溶液とを調製した。試料水２，３および４の調製に用いたＤ−グルコースは、きょう雑物としての有機物を想定したものである。
＜試料水＞
試料水１：
りん酸イオン濃度が５ｍｇ［Ｐ］／Ｌのりん酸イオン溶液。
試料水２：
二りん酸ナトリウム十水和物とＤ−グルコースとを蒸留水に溶解して得られた水溶液（二りん酸ナトリウム換算濃度が５ｍｇ［Ｐ］／Ｌ、Ｄ−グルコース濃度が４０ｍｇ／Ｌ）。
試料水３：
アデノシン−５’−三りん酸二ナトリウム三水和物とＤ−グルコースとを蒸留水に溶解して得られた水溶液（アデノシン−５’−三りん酸二ナトリウム換算濃度が５ｍｇ［Ｐ］／Ｌ、Ｄ−グルコース濃度が４０ｍｇ／Ｌ）。
試料水４：
りん酸フェニル二ナトリウム二水和物とＤ−グルコースとを蒸留水に溶解して得られた水溶液（りん酸フェニル二ナトリウム換算濃度が５ｍｇ［Ｐ］／Ｌ、Ｄ−グルコース濃度が４０ｍｇ／Ｌ）。
【０１２８】
＜酸化剤水溶液＞
酸化剤水溶液１：
濃度が４０ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸カリウム水溶液（ＪＩＳ Ｋ ０１０２の４６．１．１に記載された濃度（以下、「ＪＩＳ法濃度」という）のペルオキソ二硫酸カリウム水溶液）。
酸化剤水溶液２：
濃度が２０ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸カリウム水溶液（ＪＩＳ法濃度の５０％濃度のペルオキソ二硫酸カリウム水溶液）。
酸化剤水溶液３：
濃度が８ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸カリウム水溶液（ＪＩＳ法濃度の２０％濃度のペルオキソ二硫酸カリウム水溶液）。
酸化剤水溶液４：
濃度が４ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸カリウム水溶液（ＪＩＳ法濃度の１０％濃度のペルオキソ二硫酸カリウム水溶液）。
酸化剤水溶液５：
濃度が２ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸カリウム水溶液（ＪＩＳ法濃度の５％濃度のペルオキソ二硫酸カリウム水溶液）。
酸化剤水溶液６：
濃度が０．４ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸カリウム水溶液（ＪＩＳ法濃度の１％濃度のペルオキソ二硫酸カリウム水溶液）。
【０１２９】
試料水１〜４のそれぞれ５ｍＬに対し、酸化剤水溶液１〜６の一つを１ｍＬ添加し、さらに１Ｍ硫酸を１ｍＬ添加した後、各試料水をブロックヒータを用いて９５℃で４０分間加熱した。そして、各試料水を蒸留水で５倍に希釈し、ＪＩＳ Ｋ ０１０２の４６．１．１に記載されたモリブデン青（アスコルビン酸還元）吸光光度法に従って各試料水を発色させ、８９０ｎｍの吸光度を測定した。すなわち、同法において規定されたモリブデン酸アンモニウム溶液とアスコルビン酸溶液との５：１の混合溶液０．２ｍＬを希釈した試料水へ添加し、２５℃で約１５分間放置した後、８９０ｎｍの吸光度を測定した。結果を表１に示す。
【０１３０】
【表１】
【０１３１】
表１において、試料水２〜４の酸化分解率は、試料水１について測定された吸光度に対する吸光度の割合であり、試料水に含まれているりん化合物のうち酸化分解によりりん酸イオンに変換されたものの割合を示している。表１の酸化分解率によると、試料水に含まれるりん化合物は、ペルオキソ二硫酸カリウムの濃度が４ｇ／Ｌ以上の水溶液（酸化剤水溶液４）を用いた場合において９０％以上が、また、同濃度が８ｇ／Ｌ以上の水溶液（酸化剤水溶液３）を用いた場合において９５％以上が分解されてりん酸イオンに変換される。このことから、酸化剤水溶液におけるペルオキソ二硫酸カリウムは、ＪＩＳ法濃度の大凡１／５以下の濃度に設定した場合であっても、試料水に含まれるりん化合物を効果的に酸化分解可能である。
【０１３２】
実験例４
次の試料水を調製した。試料水５，６の調製に用いたＤ−グルコースは、きょう雑物としての有機物を想定したものである。
試料水５：
アデノシン−５’−三りん酸二ナトリウム三水和物、りん酸フェニル二ナトリウム二水和物およびＤ−グルコースを蒸留水に溶解することにより、アデノシン−５’−三りん酸二ナトリウム濃度を１ｍｇ［Ｐ］／Ｌ、りん酸フェニル二ナトリウム濃度を１ｍｇ［Ｐ］／Ｌ、Ｄ−グルコース濃度を５０ｍｇ／Ｌに調整した水溶液。
試料水６：
二りん酸ナトリウム十水和物およびＤ−グルコースを蒸留水に溶解することにより、二りん酸ナトリウム濃度を２ｍｇ［Ｐ］／Ｌ、Ｄ−グルコース濃度を５０ｍｇ／Ｌに調整した水溶液。
【０１３３】
各試料水５ｍＬに対し、濃度が３０ｇ／Ｌのペルオキソ二硫酸カリウム水溶液０．８ｍＬと１Ｍ硫酸１．２ｍＬとを添加した。そして、各試料水をブロックヒータを用いて９５℃で４０分間加熱した後、速やかに水で冷却した。冷却後の各試料水に蒸留水を加えて２倍に希釈し、実験例１の場合と同様にＪＩＳ Ｋ ０１０２の４６．１．１に記載されたモリブデン青（アスコルビン酸還元）吸光光度法に従って各試料水を発色させ、８９０ｎｍの吸光度を測定した。また、ブロックヒータによる各試料水の加熱時間を短縮した場合について、同様に試料水を発色させて８９０ｎｍの吸光度を測定した。結果を表２に示す。
【０１３４】
【表２】
【０１３５】
表２において、相対分解率は、加熱時間が４０分のときに各試料水に含まれるりん化合物の分解率が１００％とした場合における、各加熱時間でのりん化合物の分解率を意味し、加熱時間が４０分の場合の吸光度に対する吸光度の割合に基づいて算出したものである。表２によると、試料水中のりん化合物は、加熱時間が２５分で９０％以上、３０分で９８％以上が分解することがわかる。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
検査水の全りんを定量するための方法であって、
前記検査水に対し、ペルオキソ二硫酸のアルカリ金属塩またはペルオキソ二硫酸アンモニウムを含みかつアルカリ性に調整された第１水溶液と硫酸とを添加し、６５℃から前記検査水の沸騰温度までの温度で加熱する工程１と、
工程１を経た前記検査水へ炭素数５のアルドース、炭素数６のアルドース、炭素数６のケトースおよび分解により炭素数５のアルドース、炭素数６のアルドースまたは炭素数６のケトースを生成可能な単糖生成化合物からなる糖類化合物群から選ばれた糖類化合物を含む第２水溶液を添加し、引き続き加熱する工程２と、
工程２を経た前記検査水へ七モリブデン酸六アンモニウムまたはモリブデン酸のアルカリ金属塩若しくはアルカリ土類金属塩およびアンチモンの価数が３であるアンチモン化合物を含む第３水溶液を添加し、６５℃以上に維持する工程３と、
工程３を経た前記検査水について、６００から９５０ｎｍの範囲における任意の波長の吸光度を測定する工程４と、
を含む全りんの定量方法。
【請求項２】
前記第１水溶液は、アルカリ金属水酸化物の添加によりアルカリ性に調整されており、前記アルカリ金属水酸化物の濃度が０．２Ｍ以下である、請求項１に記載の全りんの定量方法。
【請求項３】
前記単糖生成化合物がスクロース、マルトース、ラクトース、ラフィノース、ケストース、スタキオース、イソマルツロース、マルツロースまたはラクツロースである、請求項１または２に記載の全りんの定量方法。
【請求項４】
検査水に含まれる全りんを定量するための、前記検査水の前処理方法であって、
前記検査水に対し、ペルオキソ二硫酸のアルカリ金属塩またはペルオキソ二硫酸アンモニウムを含みかつアルカリ性に調整された第１水溶液と硫酸とを添加し、６５℃から前記検査水の沸騰温度までの温度で加熱する工程１と、
工程１を経た前記検査水へ炭素数５のアルドース、炭素数６のアルドース、炭素数６のケトースおよび分解により炭素数５のアルドース、炭素数６のアルドースまたは炭素数６のケトースを生成可能な単糖生成化合物からなる糖類化合物群から選ばれた糖類化合物を含む第２水溶液を添加し、引き続き加熱する工程２と、
を含む全りん定量のための検査水の前処理方法。
【請求項５】
前記第１水溶液は、アルカリ金属水酸化物の添加によりアルカリ性に調整されており、前記アルカリ金属水酸化物の濃度が０．２Ｍ以下である、請求項４に記載の全りん定量のための検査水の前処理方法。
【請求項６】
前記単糖生成化合物がスクロース、マルトース、ラクトース、ラフィノース、ケストース、スタキオース、イソマルツロース、マルツロースまたはラクツロースである、請求項４または５に記載の全りん定量のための検査水の前処理方法。
【請求項７】
検査水に含まれる全りんを定量するために、前記検査水に含まれるりん化合物を分解することで前記りん化合物のりん元素をりん酸イオンへ変換するための前処理剤であって、
ペルオキソ二硫酸のアルカリ金属塩またはペルオキソ二硫酸アンモニウムを含む水溶液からなり、アルカリ性に調整されている、
全りん定量のための検査水の前処理剤。
【請求項８】
アルカリ金属水酸化物の添加によりアルカリ性に調整されており、前記アルカリ金属水酸化物の濃度が０．２Ｍ以下である、請求項７に記載の全りん定量のための検査水の前処理剤。
【請求項１】
検査水の全りんを定量するための方法であって、
前記検査水に対し、ペルオキソ二硫酸のアルカリ金属塩またはペルオキソ二硫酸アンモニウムを含みかつアルカリ性に調整された第１水溶液と硫酸とを添加し、６５℃から前記検査水の沸騰温度までの温度で加熱する工程１と、
工程１を経た前記検査水へ炭素数５のアルドース、炭素数６のアルドース、炭素数６のケトースおよび分解により炭素数５のアルドース、炭素数６のアルドースまたは炭素数６のケトースを生成可能な単糖生成化合物からなる糖類化合物群から選ばれた糖類化合物を含む第２水溶液を添加し、引き続き加熱する工程２と、
工程２を経た前記検査水へ七モリブデン酸六アンモニウムまたはモリブデン酸のアルカリ金属塩若しくはアルカリ土類金属塩およびアンチモンの価数が３であるアンチモン化合物を含む第３水溶液を添加し、６５℃以上に維持する工程３と、
工程３を経た前記検査水について、６００から９５０ｎｍの範囲における任意の波長の吸光度を測定する工程４と、
を含む全りんの定量方法。
【請求項２】
前記第１水溶液は、アルカリ金属水酸化物の添加によりアルカリ性に調整されており、前記アルカリ金属水酸化物の濃度が０．２Ｍ以下である、請求項１に記載の全りんの定量方法。
【請求項３】
前記単糖生成化合物がスクロース、マルトース、ラクトース、ラフィノース、ケストース、スタキオース、イソマルツロース、マルツロースまたはラクツロースである、請求項１または２に記載の全りんの定量方法。
【請求項４】
検査水に含まれる全りんを定量するための、前記検査水の前処理方法であって、
前記検査水に対し、ペルオキソ二硫酸のアルカリ金属塩またはペルオキソ二硫酸アンモニウムを含みかつアルカリ性に調整された第１水溶液と硫酸とを添加し、６５℃から前記検査水の沸騰温度までの温度で加熱する工程１と、
工程１を経た前記検査水へ炭素数５のアルドース、炭素数６のアルドース、炭素数６のケトースおよび分解により炭素数５のアルドース、炭素数６のアルドースまたは炭素数６のケトースを生成可能な単糖生成化合物からなる糖類化合物群から選ばれた糖類化合物を含む第２水溶液を添加し、引き続き加熱する工程２と、
を含む全りん定量のための検査水の前処理方法。
【請求項５】
前記第１水溶液は、アルカリ金属水酸化物の添加によりアルカリ性に調整されており、前記アルカリ金属水酸化物の濃度が０．２Ｍ以下である、請求項４に記載の全りん定量のための検査水の前処理方法。
【請求項６】
前記単糖生成化合物がスクロース、マルトース、ラクトース、ラフィノース、ケストース、スタキオース、イソマルツロース、マルツロースまたはラクツロースである、請求項４または５に記載の全りん定量のための検査水の前処理方法。
【請求項７】
検査水に含まれる全りんを定量するために、前記検査水に含まれるりん化合物を分解することで前記りん化合物のりん元素をりん酸イオンへ変換するための前処理剤であって、
ペルオキソ二硫酸のアルカリ金属塩またはペルオキソ二硫酸アンモニウムを含む水溶液からなり、アルカリ性に調整されている、
全りん定量のための検査水の前処理剤。
【請求項８】
アルカリ金属水酸化物の添加によりアルカリ性に調整されており、前記アルカリ金属水酸化物の濃度が０．２Ｍ以下である、請求項７に記載の全りん定量のための検査水の前処理剤。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【公開番号】特開２０１２−６３３１６（Ｐ２０１２−６３３１６Ａ）
【公開日】平成２４年３月２９日（２０１２．３．２９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−２０９５５７（Ｐ２０１０−２０９５５７）
【出願日】平成２２年９月１７日（２０１０．９．１７）
【出願人】（０００１７５２７２）三浦工業株式会社 (1,055)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２４年３月２９日（２０１２．３．２９）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年９月１７日（２０１０．９．１７）
【出願人】（０００１７５２７２）三浦工業株式会社 (1,055)
【Ｆターム（参考）】
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