共通キャリアタンパク質を有する混合型髄膜炎菌結合体
【課題】複数の髄膜炎菌血清群由来の結合体化莢膜糖を含有するが、キャリア誘導性エピトープ抑制の危険を回避するワクチンを提供する。
【解決手段】本発明は、髄膜炎菌によって引き起こされる疾患に対して患者を免疫するための組成物を提供し、この組成物は、以下のうちの少なくとも２つを含有する：（ａ）血清群Ａ髄膜炎菌の莢膜糖とキャリアタンパク質との結合体；（ｂ）血清群Ｃ髄膜炎菌の莢膜糖とキャリアタンパク質との結合体；（ｃ）血清群Ｗ１３５髄膜炎菌の莢膜糖とキャリアタンパク質との結合体；（ｄ）血清群Ｙ髄膜炎菌の莢膜糖とキャリアタンパク質との結合体。この組成物は、上記結合体（ａ）〜（ｄ）のうちの少なくとも２つが同じキャリアタンパク質（「共通キャリア」）を使用し、そしてこの組成物が、上記共通キャリアを非結合体化形態で含有し、非結合体化共通キャリアの濃度が１０μｇ未満である、という特徴を有する。
【解決手段】本発明は、髄膜炎菌によって引き起こされる疾患に対して患者を免疫するための組成物を提供し、この組成物は、以下のうちの少なくとも２つを含有する：（ａ）血清群Ａ髄膜炎菌の莢膜糖とキャリアタンパク質との結合体；（ｂ）血清群Ｃ髄膜炎菌の莢膜糖とキャリアタンパク質との結合体；（ｃ）血清群Ｗ１３５髄膜炎菌の莢膜糖とキャリアタンパク質との結合体；（ｄ）血清群Ｙ髄膜炎菌の莢膜糖とキャリアタンパク質との結合体。この組成物は、上記結合体（ａ）〜（ｄ）のうちの少なくとも２つが同じキャリアタンパク質（「共通キャリア」）を使用し、そしてこの組成物が、上記共通キャリアを非結合体化形態で含有し、非結合体化共通キャリアの濃度が１０μｇ未満である、という特徴を有する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本明細書において引用される全ての文献は、その全体が参考として援用される。
【０００２】
（技術分野）
本発明は、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓに対するワクチンに関する。詳細には、本発明は、複数の髄膜炎菌血清群に由来する結合体化莢膜糖に基づくワクチンに関する。
【背景技術】
【０００３】
生体の莢膜多糖に基づいて、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの１２種の血清群が同定されている（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、２９Ｅ、Ｗ１３５、Ｘ、Ｙおよび Ｚ）。血清群Ａは、サハラ以南のアフリカにおける伝染病に最も多く関連する病原である。血清群ＢおよびＣは、米国およびほとんどの先進国における大部分の症例の原因である。血清群Ｗ１３５およびＹは、米国および先進国の残りの症例の原因である。
【０００４】
血清群Ａ＋Ｃ由来の莢膜多糖の二価ワクチンは、Ｍｅｎｃｅｖａｘ ＡＣTM製品として利用可能である。血清群Ａ＋Ｃ＋Ｙ＋Ｗ１３５由来の糖の４価混合物は、Ｍｅｎｃｅｖａｘ ＡＣＷＹTMおよびＭｅｎｏｍｕｎｅTM製品として利用可能である（非特許文献１〜３）［参考文献１〜３］。これらのワクチンは、青年および成人に有効であるが、弱い免疫応答および短い防御持続時間しか誘導しない。なぜなら、非結合体化多糖は、追加免疫され得ない弱い免疫応答を誘導するＴ細胞非依存性抗原であるからである。
【０００５】
この莢膜糖の弱い免疫に対処するため、糖がキャリアタンパク質に結合された結合体化ワクチンが開発された。血清群Ｃに対する結合体化ワクチンは、ヒトへの使用が承認されており、そしてこのワクチンとしては、ＭｅｎｊｕｇａｔｅTM（非特許文献４）［参考文献４］、ＭｅｎｉｎｇｉｔｅｃTMおよびＮｅｉｓＶａｃ−ＣTMが挙げられる。血清群Ａ＋Ｃ由来の結合体の混合物がまた試験され（非特許文献５〜６）［参考文献５〜６］、そして血清群Ａ＋Ｃ＋Ｗ１３５＋Ｙ由来の結合体の混合物が報告されている（特許文献１〜２、非特許文献７〜８）［参考文献７〜１０］。
上記混合された結合体化ワクチンは、混合された糖ワクチンに類似しているが、いくつかの重要な違いが存在する。特に、結合体混合物中におけるキャリアタンパク質の含有は、特に、キャリア誘導性エピトープ抑制（または、一般的に知られているように、「キャリア抑制」）に関して、新たな危険性を提示する。キャリア誘導性エピトープ抑制とは、すなわち、キャリアタンパク質による動物の免疫が、その動物が、そのキャリアタンパク質上に提示される抗原エピトープに対する免疫応答を後に誘発することを防げる現象である（非特許文献９）［参考文献１１］。この問題は、同じキャリアタンパク質を有する複数の結合体が同時に投与される場合に特に懸念される（非特許文献１０）［参考文献１２］。
キャリア抑制は、一価髄膜炎菌結合体について調べられており（非特許文献１１）［参考文献１３］、混合型髄膜炎菌結合体に関するいくつかの研究が存在する。例えば、非特許文献１２［参考文献１４］は、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓの線毛（ｆｉｍｂｒｉａｅ）が多価結合体化ワクチンにおけるキャリア抑制を回避するためにキャリアとして使用されるべきであることを示唆し、そして特許文献３［参考文献１５］は、キャリア抑制がワクチンにおいて１つより多くの型のキャリアタンパク質（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅプロテインＤおよび／または破傷風トキソイド（Ｔｔ）が好ましい）を使用することによって対処されるはずであることを示唆する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】国際公開第０２／０５８７３７号パンフレット
【特許文献２】国際公開第０３／００７９８５号パンフレット
【特許文献３】国際公開第０２／００２４９号パンフレット
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｂａｋｌａｉｃら、「Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．」、１９８３年、第４２巻、ｐ．５９９−６０４
【非特許文献２】Ａｒｍａｎｄら、「Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｓｔａｎｄ．」、１９８２年、第１０巻、ｐ．３３５−３３９
【非特許文献３】Ｃａｄｏｚら、「Ｖａｃｃｉｎｅ」、１９８５年、第３巻、ｐ．３４０−３４２
【非特許文献４】Ｊｏｎｅｓ、「Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｉｎｖｅｓｔｉｇ Ｄｒｕｇｓ」、２００１年、第２巻、ｐ．４７−４９
【非特許文献５】Ｃｏｓｔａｎｔｉｎｏら、「Ｖａｃｃｉｎｅ」、１９９２年、第１０巻、ｐ．６９１−８
【非特許文献６】Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら、「ＪＡＭＡ」、１９９６年、第２７５巻、ｐ．１４９９−５０３
【非特許文献７】Ｒｅｎｎｅｌｓら、「Ｐｅｄｉａｔｒ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ Ｊ」、２００２年、第２１巻、ｐ．９７８−９７９
【非特許文献８】Ｃａｍｐｂｅｌｌら、「Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ」、２００２年、第１８６巻、ｐ．１８４８−１８５１
【非特許文献９】Ｈｅｒｚｅｎｂｅｒｇら、「Ｎａｔｕｒｅ」、１９８０年、第２８５巻、ｐ．６６４−６６７
【非特許文献１０】Ｄａｇａｎら、「Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ」、１９９８年、第６６巻、ｐ．２０９３−２０９８
【非特許文献１１】Ｂｕｒｒａｇｅら、「Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ」、２００２年、第７０巻、ｐ．４９４６−４９５４
【非特許文献１２】Ｒｅｄｄｉｎら、「ＦＥＭＳ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ」、２００１年、第３１巻、ｐ．１５３−１６２
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
複数の髄膜炎菌血清群由来の結合体化莢膜糖を含有するが、キャリア誘導性エピトープ抑制の危険を回避する、さらなるワクチンを提供することが、本発明の目的である。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
（発明の開示）
キャリア抑制を回避するための上記特許文献３において示唆されるアプローチ（すなわち、１つより多くの型の異なるキャリアタンパク質の使用）に対して、本発明は、複数の結合体に対して同じ型のキャリアタンパク質（「共通キャリア」）を使用する。このことは、商業的規模でのワクチンの製造を簡略化する。しかし、共通キャリアを選択することビよって、キャリア抑制の可能性は増加する。ワクチンは、一般的に、別個の濃縮されたバルクに調製された個々の結合体を混合することによって調製される。そして各バルクは、通常、結合体化反応からの残りの量の非結合体化キャリアタンパク質を含む。非結合体化キャリアは、キャリア抑制を生じ得、そして各濃縮されたバルクがχ量の非結合体化キャリアを含む場合、４価混合物は、４χ量の非結合体化キャリアを含む。キャリア抑制が、特定の閾値のキャリアが存在する場合のみ（例えば、非結合体化キャリアのレベルが、関連するＢ細胞および／もしくはＴ細胞を飽和するに十分高い場合のみ、または非結合体化キャリアのレベルが、関連するＴサプレッサ細胞を刺激するに十分高い場合のみ）に見られる場合、たとえ、各個別の結合体のレベルが閾値より低く、単独で投与された場合には抑制を引き起こし得ないとしても、４χ量レベルの抑制が生じ得る。
【００１０】
したがって、多価ワクチンのための共通キャリアの選択は、一価ワクチンと比較した場合、または異なるキャリアタンパク質を使用する結合体と比較した場合、キャリア抑制の危険性を顕著に増加させる。この危険性の増加を補償するため。本発明は、ワクチン中の非結合体化キャリアタンパク質の量を制御する。キャリア抑制の可能性は、髄膜炎菌の糖に対して使用されるキャリアタンパク質の性質に注目することによって、非特許文献１１〜１２および特許文献３において対処されるが、本発明は、代わりに、使用されるキャリアタンパク質の量、より詳細には、非結合体化形態で存在する量に注目する。ワクチン中の非結合体化キャリアタンパク質の量を最小限にすることによって、共通キャリアが使用される場合であっても、キャリア抑制は回避され得る。
【００１１】
結合体化ワクチン中に非結合体化キャリアタンパク質を含有することは、以前に考慮されている［１６］が、この以前の研究における非結合体化キャリアタンパク質（破傷風トキソイド）の濃度は、約１０Ｌｆ／用量であった。０．５ｍｌの用量では、換算係数１Ｌｆ＝３μｇを使用すると［１２］、これらのワクチンは、約６０μｇ／ｍｌの非結合体化キャリアタンパク質を含有した。引用文献１６は、キャリア抑制の回避に関心を払わなかった。
【００１２】
したがって、本発明は、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓによって引き起こされる疾患に対して患者を免疫するための組成物を提供する。この組成物は、以下のうちの少なくとも２つを含有する：（ａ）（ｉ）血清群ＡのＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの莢膜糖と（ｉｉ）キャリアタンパク質との結合体；（ｂ）（ｉ）血清群ＣのＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの莢膜糖と（ｉｉ）キャリアタンパク質との結合体；（ｃ）（ｉ）血清群Ｗ１３５のＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの莢膜糖と（ｉｉ）キャリアタンパク質との結合体；（ｄ）（ｉ）血清群ＹのＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの莢膜糖と（ｉｉ）キャリアタンパク質との結合体。この組成物は、（１）上記結合体（ａ）、（ｂ）、（ｃ）および（ｄ）のうちの少なくとも２つは、同じキャリアタンパク質（「共通キャリア」）を使用し、そして（２）この組成物は、上記共通キャリアを非結合体化形態で含有し、ここで、この非結合体化共通キャリアの濃度は、１０μｇ／ｍｌ未満である、という特徴を有する。
【００１３】
本発明はまた、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓによって引き起こされる疾患に対して患者を免疫するための組成物を調製するためのプロセスを提供する。このプロセスは、以下の工程を包含する：
（１）以下のうちの少なくとも２つ：（ａ）（ｉ）血清群ＡのＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの莢膜糖と（ｉｉ）キャリアタンパク質との結合体；（ｂ）（ｉ）血清群ＣのＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの莢膜糖と（ｉｉ）キャリアタンパク質との結合体；（ｃ）（ｉ）血清群Ｗ１３５のＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの莢膜糖と（ｉｉ）キャリアタンパク質との結合体；（ｄ）（ｉ）血清群ＹのＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの莢膜糖と（ｉｉ）キャリアタンパク質との結合体、を調製する工程であって、上記結合体（ａ）、（ｂ）、（ｃ）および（ｄ）のうちの少なくとも２つは、同じキャリアタンパク質（「共通キャリア」）を使用する、工程；ならびに
（２）（１）において調製された少なくとも２つの結合体を混合して、上記共通キャリアを非結合体化形態で含有する組成物を得る工程であって、ここで、この非結合体化共通キャリアの濃度が１０μｇ／ｍｌ未満である、工程。
【００１４】
このプロセスは、非結合体化共通キャリアの量を測定する１以上の工程を包含し得る。このような測定は、混合の前の個々の結合体において実施され得、そして／または混合後の混ぜ合わされた結合体において実施され得る。個々の結合体は、このような測定の結果に基づいて、混合に関して排除され得るか、または選択され得、そして最終組成物は、同様に、このような測定の結果に基づいて、医師への販売に関して排除され得るか、または選択され得る。
【００１５】
本発明はまた、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓによって引き起こされる疾患に対して患者を免疫するための組成物を調製するためのプロセスを提供する。このプロセスは、以下の工程を包含する：
（ａ）Ａ、Ｃ、Ｗ１３５およびＹからなる群より、ｎ種の異なる髄膜炎菌血清群を選択し（ここで、ｎの値は、２、３もしくは４である）；（ｂ）このｎ種の選択された血清群の各々に対して、以下：（ｉ）その血清群由来の莢膜糖と（ｉｉ）キャリアタンパク質との結合体を調製する工程であって、ここで、上記ｎ種の結合体の各々は、同じキャリアタンパク質（「共通キャリア」）を使用する、工程；ならびに（ｃ）工程（ｂ）において調製された上記ｎ種の結合体を混合して、非結合体化形態の上記共通キャリアを含む組成物を得る工程であって、ここで、この非結合体化された共通キャリアの濃度は、１０μｇ／ｍｌ未満である、工程。好ましくは、ｎの値は４であり、これによって本発明は、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓによって引き起こされる疾患に対して患者を免疫するための組成物を調製するためのプロセスを提供する。このプロセスは、以下の工程を包含する：（ａ）髄膜炎菌血清群Ａ、Ｃ、Ｗ１３５およびＹの各々について、（ｉ）これらの血清群由来の莢膜糖と（ｉｉ）キャリアタンパク質との結合体を調製する工程であって、上記４種の結合体の各々は、同じキャリアタンパク質を使用する、工程；ならびに（ｂ）これらの結合体を混合して、非結合体化形態の共通キャリアを含有する組成物を得る工程であって、この非結合体化共通キャリアの濃度は、１０μｇ／ｍｌ未満である、工程。
【００１６】
上記のように、このプロセスは、工程（ｂ）における混合の前および／または後に、非結合体化共通キャリアの量を測定する１以上の工程を包含し得る。
本発明は例えば、以下の項目を提供する：
（項目１）
Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓによって引き起こされる疾患に対して患者を免疫するための組成物であって、該組成物は、以下：
（ａ）（ｉ）血清群ＡのＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの莢膜糖と（ｉｉ）キャリアタンパク質との結合体；
（ｂ）（ｉ）血清群ＣのＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの莢膜糖と（ｉｉ）キャリアタンパク質との結合体；
（ｃ）（ｉ）血清群Ｗ１３５のＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの莢膜糖と（ｉｉ）キャリアタンパク質との結合体；
（ｄ）（ｉ）血清群ＹのＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの莢膜糖と（ｉｉ）キャリアタンパク質との結合体、
のうちの少なくとも２つを含有し、
以下：（１）該結合体（ａ）、（ｂ）、（ｃ）および（ｄ）のうちの少なくとも２つは、同じキャリアタンパク質（「共通キャリア」）を使用し、そして、（２）該組成物は、該共通キャリアを非結合体化形態で含有し、ここで、該非結合体化共通キャリアの濃度は、１０μｇ／ｍｌ未満である、
という特徴を有する、組成物。
（項目２）
血清群ＡおよびＣの両方に由来する結合体を含有する、項目１に記載の組成物。
（項目３）
血清群Ａ、Ｃ、Ｗ１３５およびＹの全てに由来する結合体を含有する、項目１または２に記載の組成物。
（項目４）
前記髄膜炎菌結合体の各々が、ジフテリアトキソイド；破傷風トキソイド；ＣＲＭ１９７；およびＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ由来のプロテインＤから選択される共通キャリアに結合体化されている、項目１〜３のいずれかに記載の組成物。
（項目５）
前記共通キャリアが、ジフテリアトキソイドである、項目４に記載の組成物。
（項目６）
前記共通キャリアが、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅのプロテインＤである、項目４に記載の組成物。
（項目７）
前記各血清群の糖の質量が、２μｇと１０μｇとの間である、項目１〜６のいずれかに記載の組成物。
（項目８）
前記各血清群の糖の質量が、互いの±１０％以内である、項目１〜７のいずれかに記載の組成物。
（項目９）
前記非結合体化共通キャリアの濃度が、２μｇ／ｍｌ未満である、項目１〜８のいずれかに記載の組成物。
（項目１０）
前記組成物中の共通キャリアの全体での濃度が、１００μｇ／ｍｌ未満である、項目１〜９のいずれかに記載の組成物。
（項目１１）
筋肉内注射のために処方されている、項目１〜１０のいずれかに記載の組成物。
（項目１２）
水酸化アルミニウムアジュバントおよび／またはリン酸アルミニウムアジュバントをさらに含有する、項目１〜１１のいずれかに記載の組成物。
（項目１３）
前記組成物が、水銀物質を全く含まない、項目１〜１２のいずれかに記載の組成物。
（項目１４）
項目１〜１３のいずれかに記載の組成物であって、以下のさらなる抗原：
（ｉ）Ｂ型Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ由来の結合体化された莢膜糖；
（ｉｉ）Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来の結合体化された莢膜糖；
（ｉｉｉ）Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ 血清群Ｂ由来のタンパク質抗原；
（ｉｖ）ジフテリア抗原；
（ｖ）破傷風抗原；
（ｖｉ）細胞性百日咳抗原もしくは全細胞百日咳抗原；
（ｖｉｉ）１種以上の無細胞百日咳抗原；
（ｖｉｉｉ）Ｂ型肝炎ウイルス由来の抗原；
（ｉｘ）１種以上のポリオウイルス抗原；
（ｘ）Ａ型肝炎ウイルス由来の抗原
のうちの１つ以上をさらに含有する、組成物。
（項目１５）
水性形態である、項目１〜１４のいずれかに記載の組成物。
（項目１６）
凍結乾燥形態である、項目１〜１５のいずれかに記載の組成物。
（項目１７）
糖アルコールまたはショ糖を含有する、項目１〜１６のいずれかに記載の組成物。
（項目１８）
項目１〜１７のいずれかに記載の組成物を含有する、バイアル。
（項目１９）
項目１〜１８のいずれかに記載の組成物を含有する、シリンジ。
（項目２０）
項目１〜１５のいずれか１項に記載の組成物を調製するためのキットであって、該キットは、少なくとも１種の凍結乾燥形態の髄膜炎菌結合体と少なくとも１種の水性形態の髄膜炎菌結合体とを備える、キット。
（項目２１）
項目１〜１５のいずれか１項に記載の組成物を調製するためのキットであって、該キットは、（ｉ）項目１５に記載の凍結乾燥組成物；および（ｉｉ）水性物質、を備え、該キットの構成要素（ｉｉ）は、水性組成物を提供するために、該構成要素（ｉ）を再構成するためのものである、キット。
（項目２２）
キットであって、以下：項目１〜１７のいずれか１項に記載の組成物；および（ｉｉ）項目１４に規定される抗原（ｉ）〜（ｘ）の１つ以上を含有する組成物、を備える、キット。
（項目２３）
Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓによって引き起こされる疾患に対して患者を免疫するための組成物を調製するためのプロセスであって、該プロセスは、以下の工程：
（１）以下のうちの少なくとも２つ：
（ａ）（ｉ）血清群ＡのＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの莢膜糖と（ｉｉ）キャリアタンパク質との結合体；
（ｂ）（ｉ）血清群ＣのＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの莢膜糖と（ｉｉ）キャリアタンパク質との結合体；
（ｃ）（ｉ）血清群Ｗ１３５のＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの莢膜糖と（ｉｉ）キャリアタンパク質との結合体；
（ｄ）（ｉ）血清群ＹのＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの莢膜糖と（ｉｉ）キャリアタンパク質との結合体、
を調製する工程であって、
該結合体（ａ）、（ｂ）、（ｃ）および（ｄ）のうちの少なくとも２つは、同じキャリアタンパク質（「共通キャリア」）を使用する、工程；ならびに
（２）（１）において調製された少なくとも２つの結合体を混合して、該共通キャリアを非結合体化形態で含有する組成物を得る工程であって、ここで、該非結合体化共通キャリアの濃度が１０μｇ／ｍｌ未満である、工程、
を包含する、プロセス。
（項目２４）
Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓによって引き起こされる疾患に対して患者を免疫するための組成物を調製するためのプロセスであって、該プロセスは、以下の工程：
（１）Ａ、Ｃ、Ｗ１３５およびＹからなる群より、ｎ種の異なる髄膜炎菌血清群を選択し、そして該ｎ種の選択された血清群の各々に対して、以下：（ｉ）該血清群由来の莢膜糖と（ｉｉ）キャリアタンパク質との結合体を調製する工程であって、ここで、ｎの値は、２、３もしくは４であり、該ｎ種の結合体の各々は、同じキャリアタンパク質（「共通キャリア」）を使用する、工程；ならびに
（２）工程（１）において調製された該ｎ種の結合体を混合して、非結合体化形態の該共通キャリアを含む組成物を得る工程であって、ここで、該非結合体化された共通キャリアの濃度は、１０μｇ／ｍｌ未満である、工程
を包含するプロセス。
（項目２５）
前記ｎの値が２または４である、項目２４に記載のプロセス。
（項目２６）
前記非結合体化共通キャリアの量を測定する１以上の工程をさらに包含する、項目２３〜２５のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目２７）
前記結合体を混合する工程の前に測定する工程を包含し、および／または該結合体を混合する工程の後に測定する工程を包含する、項目２６に記載のプロセス。
（項目２８）
ワクチン製造および／またはヒト投与のための組成物の適合性を評価するためのプロセスであって、以下：
項目２３〜２７のいずれか１項の（１）および（２）を実行する工程を包含し、そして
（３）該組成物中の非結合体化共通キャリアの濃度を測定する工程と、（４−ｉ）該非結合体化キャリアの濃度が＜１０μｇ／ｍｌである場合、該組成物をワクチン製造および／もしくはヒトへの投与について許容する工程；または（４−ｉｉ）該非結合体化キャリアの濃度が≧１０μｇ／ｍｌである場合、該組成物を排除する工程のいずれかとを、さらに包含する、プロセス。
【００１７】
（結合体）
結合体化は、糖の免疫原性を増強するために使用される。なぜなら、結合体化は、糖をＴ細胞非依存性抗原からＴ細胞依存性抗原へと変換して免疫学的記憶をプライミングさせるからである。結合体化は、小児用ワクチンにとって特に有用であり（例えば、参考文献１７）、そして公知の技術である（例えば、参考文献１８〜２７）。
【００１８】
本発明の組成物は、以下の髄膜炎菌結合体のうちの少なくとも２つ（すなわち、２、３、または４）を含む：（ａ）（ｉ）血清群ＡのＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの莢膜糖と（ｉｉ）キャリアタンパク質との結合体；（ｂ）（ｉ）血清群ＣのＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの莢膜糖と（ｉｉ）キャリアタンパク質との結合体；（ｃ）（ｉ）血清群Ｗ１３５のＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの莢膜糖と（ｉｉ）キャリアタンパク質との結合体；（ｄ）（ｉ）血清群ＹのＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの莢膜糖と（ｉｉ）キャリアタンパク質との結合体。
【００１９】
これらの結合体のうち、少なくとも２つ（すなわち、２、３、または４）が、共通のキャリアタンパク質を使用する。これは、単一の結合体分子が１つより多くの血清群由来の糖を含むことを意味しない（参考文献２８および２９を参照のこと）。むしろ、単一の結合体分子は、単一の血清群の糖を保有するが、同じ型のキャリアタンパク質が、各々の異なる血清群に対して使用される。単一の結合体分子内に１つより多くの型の糖（例えば、異なる長さのフラグメント）が存在し得るが、これらは、単一の血清群に由来する。共通キャリアを使用する例として、タンパク質のサンプルは、４つに分割され得、４分割の各々は、単一の血清群に由来する莢膜糖フラグメントを使用する結合体を調製するために使用され、そしてこれらの結合体は、混合されて、共通キャリアを含む４価結合体を生成し得る。
【００２０】
莢膜糖は、髄膜炎菌の血清群Ａ、Ｃ、Ｗ１３５およびＹから選択され、その結果、組成物はこれら４種の血清群のうちの２種、３種または４種全て由来の糖を含む。特定の組成物は、血清群ＡおよびＣ；血清群ＡおよびＷ１３５；血清群ＡおよびＹ；血清群ＣおよびＷ１３５；血清群ＣおよびＹ；血清群Ｗ１３５およびＹ；血清群ＡおよびＣおよびＷ１３５；血清群ＡおよびＣおよびＹ；血清群ＡおよびＷ１３５およびＹ；血清群ＣおよびＷ１３５およびＹ；血清群ＡおよびＣおよびＷ１３５およびＹ由来の糖を含む。少なくとも血清群Ｃを含む組成物（例えば、ＡおよびＣ）が好ましく、全４種の血清群由来の糖を含む組成物が最も好ましい。
【００２１】
これら４種の血清群の各々の莢膜糖は、良く特徴付けられている。血清群Ａ髄膜炎菌の莢膜糖は、Ｃ３位とＣ４位とに部分的なＯ−アセチル化を有する、（ａ１(R)６）連結型Ｎ−アセチル−Ｄ−マンノサミン−１−リン酸のホモポリマーである。このアセチル基は、加水分解を防止するブロック基（ｂｌｏｃｋｉｎｇ ｇｒｏｕｐ）により置換され得［３０］、そして、このような修飾糖は、依然として本発明の意味の範囲内の血清群Ａ糖である。血清群Ｃの莢膜糖は、（ａ２→９）連結型シアル酸（Ｎ−アセチルノイラミン酸または「ＮｅｕＮＡｃ」）のホモポリマーである。大半の血清群Ｃ株は、シアル酸残基のＣ−７および／またはＣ−８においてＯ−アセチル基を有するが、臨床単離物のうちの約１５％は、これらのＯ−アセチル基を欠いている［３１、３２］。糖の構造は、→９）−Ｎｅｕ ｐ ＮＡｃ ７／８ ＯＡｃ−（ａ２→のように記載される。血清群Ｗ１３５糖は、シアル酸−ガラクトース二糖単位のポリマーである。血清群Ｃ糖と同様に、これは種々のＯ−アセチル化を有するが、それはシアル酸の７位と９位におけるものである［３３］。この構造は、→４）−Ｄ−Ｎｅｕｐ５Ａｃ（７／９ＯＡｃ）−ａ−（２→６）−Ｄ−Ｇａｌ−ａ−（１→のように記載される。血清群Ｙ糖は、二糖の反復単位がガラクトースの代わりにグルコースを含むことを除いて、血清群Ｗ１３５糖に類似する。血清群Ｗ１３５と同様に、これは、シアル酸の７位と９位における種々のＯ−アセチル化を有する［３３］。血清群Ｙの構造は、→４）−Ｄ−Ｎｅｕｐ５Ａｃ（７／９ＯＡｃ）−ａ−（２→６）−Ｄ−Ｇｌｃ−ａ−（１→のように記載される。
【００２２】
本発明にしたがって使用される糖は、先に記載されるように（例えば、天然の莢膜糖に見られるのと同じＯ−アセチル化パターンにより）Ｏ−アセチル化され得るか、またはこれらは、糖の環の１つ以上の位置において、部分的にか、もしくは完全に脱Ｏ−アセチル化され得るか、またはこれらは、天然の莢膜糖と比較して、過剰にＯ−アセチル化され得る。
【００２３】
本発明にしたがって使用される糖は、好ましくは細菌において見られる天然の莢膜糖よりも短い。したがって、糖は、好ましくは、連結前ではなく精製後に生じる脱重合により、脱重合される。脱重合は、糖の鎖長を短くする。好ましい脱重合方法は、過酸化水素の使用を含む［７］。過酸化水素は、糖に添加され（例えば、１％の最終Ｈ２Ｏ２濃度を与える）、次に、この混合物が、所望の鎖長の短縮が達成されるまで、インキュベートされる（例えば、約５５℃で）。別の脱重合方法は、酸加水分解を含み［８］、本発明の結合体における、好ましく脱重合化された糖は、以下の範囲の平均重合度を有する：Ａ＝１０−２０；Ｃ＝１２−２２；Ｗ１３５＝１５−２５；Ｙ＝１５−２５。他の脱重合方法は、当業者にとって公知である。本発明にしたがう使用のための結合体を調製するのに使用される糖は、脱重合方法のいずれかにより入手可能であり得る。脱重合は、免疫抗原性のための至適鎖長を提供するために、および／または、糖の物理的管理可能性のために鎖長を短くするために、使用され得る。
【００２４】
結合体における使用のための代表的なキャリアタンパク質は、通常トキソイド形態（例えば、不活性化化学薬品（例えば、ホルマリンまたはホルムアルデヒド）による処理によって取得される）にある、細菌毒素（例えば、ジフテリア毒素［例えば、参考文献３４の第１３章；参考文献３５〜３８を参照のこと］（または、そのＣＲＭ１９７変異体［３９〜４２］）および破傷風毒素）である。他の適切なキャリアタンパク質としては、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ外膜タンパク質［４３］、合成ペプチド［４４、４５］、熱ショックタンパク質［４６、４７］、百日咳タンパク質［４８、４９］、サイトカイン［５０］、リンホカイン［５０］、ホルモン［５０］、増殖因子［５０］、種々の病原体由来の抗原からの複数のヒトＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープを含む人工タンパク質［５１］、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ由来のプロテインＤ［５２〜５４］、ニューモリシン（ｐｎｅｕｍｏｌｙｓｉｎ）［５５］、肺炎球菌表面タンパク質ＰｓｐＡ［５６］、鉄取り込みタンパク質（ｉｒｏｎ−ｕｐｔａｋｅ ｐｒｏｔｅｉｎ）［５７］、Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ由来の毒素Ａまたは毒素Ｂ［５８］などが挙げられる。
【００２５】
共通キャリアとしての使用のための、４種の特に好ましいキャリアタンパク質は、ジフテリアトキソイド（Ｄｔ）、破傷風トキソイド（Ｔｔ）、ＣＲＭ１９７およびＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ由来のプロテインＤである。これらのタンパク質は、小児ワクチンにおける使用において、現在主要なキャリアであり、例えば、他のワクチンより早い投与か、それと同時の投与か、またはそれより遅い投与から、最もキャリア抑制の危険にあるキャリアであるので、好ましい。ＤｔおよびプロテインＤは、現在の小児ワクチンにおいて、ＣＲＭ１９７およびＴｔよりも少ない頻度で使用される（例えば、ＧＳＫ由来のＨｉｂ結合体はキャリアとしてＴｔを使用する、ＨｉｂＴＩＴＥＲＴＭ製品はＣＲＭ１９７を使用する、ＰｒｅｖｅｎａｒＴＭにおける肺炎球菌結合体はＣＲＭ１９７を使用する、ＭｅｎｊｕｇａｔｅＴＭ製品およびＭｅｎｉｎｇｉｔｅｃＴＭ製品はＣＲＭ１９７を使用する、ならびにＮｅｉｓＶａｃ−ＣＴＭはＴｔを使用する）ので、これらのタンパク質は最も好ましい共通キャリアである。したがって、キャリア抑制の危険をさらに最小限にするために、ＤｔおよびＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅプロテインＤが、共通キャリアとして使用される。
【００２６】
結合体は、好ましくは、実質的に１：１：１：１の比率（糖の質量として測定される）を与えるように混合される（例えば、各々の血清群の糖の質量は、互いに±１０％の範囲内である）。組成物中の、血清群あたりの髄膜炎菌抗原の代表的な量は、１μｇと２０μｇとの間（例えば、血清群あたり２μｇと１０μｇとの間、または約４μｇ）である。１：１：１：１の比率に対する代替的な方法として、２倍の血清群Ａ用量が使用され得る（２：１：１：１）。
【００２７】
１：１５（すなわち、タンパク質過剰）と１５：１（すなわち、糖過剰）との間（好ましくは、１：５と５：１との間）の糖：タンパク質比（ｗ／ｗ）を有する結合体が好ましい。過剰のキャリアタンパク質が好ましい。特にキャリアがＤｔの場合、約１：１２または約１：３の糖：タンパク質比を有する結合体が好ましい。
【００２８】
任意の適切な結合体化反応が、必要に応じて任意の適切なリンカーを用いて、使用され得る。
【００２９】
糖は、代表的に、結合体化より先に活性化されるか、または官能化させる。活性化は、例えば、シアン化試薬［５９、６０など］を含み得る。他の適切な技術は、活性エステル、カルボジイミド、ヒドラジド、ノルボラン（ｎｏｒｂｏｒａｎｅ）、ｐ−ニトロ安息香酸、Ｎ−ヒドロキシスクシニミド、Ｓ−ＮＨＳ、ＥＤＣ、ＴＳＴＵ（参考文献２４の序論もまた参照のこと）を使用する。
【００３０】
リンカー基を介する連結は、任意の公知の手順（例えば、参考文献６１および参考文献６２に記載される手順）を使用して作製され得る。連結の１つの型は、多糖の還元的アミノ化を伴い、生じるアミノ基とアジピン酸リンカー基の一端とを連結し、次いで、アジピン酸リンカー基の他の末端にタンパク質を連結する［２２、６３、６４］。他のリンカーとしては、Ｂ−プロピオンアミド［６５］、ニトロフェニル−エチルアミン［６６］、ハロアシルハロゲン化物［６７］、グリコシド連結［６８］、６−アミノカプロン酸［６９］、ＡＤＨ［７０］、Ｃ４〜Ｃ１２部分［７１］などが挙げられる。リンカーを使用することに対する代替的な方法として、直接連結が使用され得る。タンパク質への直接連結は、例えば、参考文献７２および参考文献７３に記載されるように、タンパク質との還元的アミノ化の前に、多糖の酸化を含み得る。
【００３１】
好ましい結合体化プロセスは、以下を包含する：糖へのアミノ基の導入（例えば、−ＮＨ２による末端（＝Ｏ基）の置換によって）、それに続くアジピン酸ジエステル（例えば、アジピン酸Ｎ−ヒドロキシスクシニミドジエステル）による誘導体化およびキャリアタンパク質（例えば、ＣＲＭ１９７）との反応。この結合体化方法のさらなる詳細は、参考文献８に見出され得る。この方法によって入手可能な結合体は、本発明にしたがう使用のために好ましい結合体である。
【００３２】
別の好ましい結合体化プロセスにおいて、糖は、アジピン酸ジヒドラジドと反応させられる。血清群Ａに対して、カルボジイミド（ＥＤＡＣ）もまた、この段階において添加され得る。反応時間後、シアノホウ化水素ナトリウムが添加される。次いで、誘導体化された糖が、例えば、限外濾過によって調製され得る。それから、誘導体化された糖が、キャリアタンパク質（例えば、ジフテリアトキソイド）と混合され、そしてカルボジイミドが添加される。反応時間後、結合体が回収され得る。この結合方法のさらなる詳細は、参考文献８に見出され得る。この方法により入手可能な結合体は、本発明にしたがう使用のために好ましい結合体（例えば、ジフテリアトキソイドキャリアとアジピン酸リンカーとを含む結合体）である。
【００３３】
別の好ましい結合体化プロセスにおいて、糖は、シアン化試薬により誘導体化され［６０］、続いて、リンカーを使用する必要なく、タンパク質（直接か、またはキャリアへのチオール求核基またはヒドラジド求核基の導入後）に連結される。適切なシアン化試薬としては、テトラフルオロホウ酸１−シアノ−４−（ジメチルアミノ）−ピリジニウム（「ＣＤＡＰ」）、ｐ−ニトロフェニルシアン酸塩およびテトラフルオロホウ酸Ｎ−シアノトリエチルアンモニウム（「ＣＴＥＡ」）が挙げられる。特にＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅプロテインＤが共通キャリアである場合、ＣＤＡＰが好ましい。直接連結が好ましい。
【００３４】
結合体は、好ましくは、個別に調製され、それから混合される。混合後、混合結合体の濃度は、例えば、無菌かつ発熱物質を含まないリン酸緩衝化生理食塩水により調整され得る。
【００３５】
共通キャリアに加えて、他のキャリアタンパク質を含む結合体が、本発明の組成物中に存在し得る。しかしながら、一般的に、組成物中の全ての髄膜炎菌結合体が同一の共通キャリアを使用することが好ましい。
【００３６】
本発明の組成物において、各々の結合体に基づくキャリア（結合体化キャリア、および非結合体化キャリア）の量は、好ましくは、各々の結合体に基づいて、１００μｇ／ｍｌ以下（例えば、＜３０μｇ／ｍｌ）のキャリアタンパク質である。好ましい組成物は、５００μｇ／ｍｌ未満（例えば、４００μｇ／ｍｌ未満、３００μｇ／ｍｌ未満、２００μｇ／ｍｌ未満、１００μｇ／ｍｌ未満、５０μｇ／ｍｌ未満など）の共通キャリアの総濃度（組み合わせた髄膜炎菌結合体のみに対してか、または好ましくは組成物全体に対してのいずれか）を含む。
【００３７】
（非結合体化共通キャリアタンパク質）
本発明の組成物は、非結合体化形態での共通キャリアを含むが、非結合体化共通キャリアは１０μｇ／ｍｌ未満で存在する。
【００３８】
したがって、例えば、結合体化条件、結合体化後の精製、結合体化後の保存条件（温度、ｐＨ、湿度などのような要因の制御により、本発明にしたがって、非結合体化共通キャリアの量が、確実に１０μｇ／ｍｌ未満に保持され、そして代表的により低く（例えば、９μｇ／ｍｌ未満、８μｇ／ｍｌ未満、７ μｇ／ｍｌ未満、６μｇ／ｍｌ未満、５μｇ／ｍｌ未満、４μｇ／ｍｌ未満、３μｇ／ｍｌ未満、２μｇ／ｍｌ未満、１μｇ／ｍｌ未満、０．５μｇ／ｍｌ未満などに）保持され得ることを確実にすることが可能である。
【００３９】
しかしながら、実施上の理由のため、キャリア抑制の問題を引き起こすことなく、わずかなアジュバント効果を提供するために、低レベルの非結合体化共通キャリアを含むことが有利である。それゆえ、本発明の組成物中の非結合体化共通キャリアの濃度は、好ましくは、≧ａ μｇ／ｍｌであるが、＜ｂ μｇ／ｍｌである。ここでｂ＞ａであり、（ｉ）ａは、０．０１、０．０５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４および５からなる群から選択され、そして（ｉｉ）ｂは、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９および１０からなる群から選択される。
【００４０】
本発明の組成物中の非結合体化キャリアは、２つの起源を有する。第一に、これは、混合される個々の結合体に由来し得る。個々の結合体は、結合体化反応由来の未反応の残留キャリアを含み得、そして結合された物質の崩壊により放出されたキャリアを含み得る。第二に、これは、混合後（例えば、組成物の保存後）の結合体の崩壊に由来し得る。非結合体化キャリアは、通常、製造中の個別の工程としての意図的に添加されない。それゆえ、組成物中の非結合体化共通キャリアの濃度は、やがて増加し得る。好ましい組成物は、全ての髄膜炎菌結合体が混合されて６時間後に測定される場合に、＜１０μｇ／ｍｌの非結合体化共通キャリアを含むものである。他の好ましい組成物は、最初の結合体混合の時点から、少なくとも１ヶ月間（例えば、２ヶ月、３ヶ月、６ヶ月、またはそれより長く）にわたって、＜１０μｇ／ｍｌの非結合体化共通キャリアを有するものである。
【００４１】
本発明のプロセスにおいて、混合される結合体は非結合体化共通キャリアを含み得、そして混合後に存在する非結合体化キャリアは、構成要素の結合体からもたらされる。本発明の組成物が、平均で、総量でｘ μｇの髄膜炎菌結合体由来の非結合体化共通キャリアとｎ個の異なる髄膜炎菌結合体を含むとすると、各々の結合体は、ｘ／ｎ μｇの非結合体化共通キャリアを与える。本発明の好ましいプロセスにおいて、組成物が、髄膜炎菌結合体に由来する、総量でｘ μｇの非結合体化共通キャリアを含むとすると、ｎ個の個々の髄膜炎菌結合体の各々の量は、ｘ／ｎの±１５％（例えば、±１０％、±７．５％または±５％）以内の非結合体化共通キャリアの量を提供するように選択される。濃度条件において、個々の結合体の各々は、好ましくは２μｇ／ｍｌ未満の非結合体化キャリアを与える。
【００４２】
組成物中の非結合体化共通キャリアは溶液中に存在し得るか、沈殿物として存在し得るか、または存在し得る任意のアジュバントに吸収され得る。
【００４３】
非結合体化キャリアのレベルは、標準的かつ公知の方法（例えば、Ｈｉｂ結合体ワクチン中の非結合体化キャリアを評価するために、以前に使用された方法）を使用して測定され得る。
【００４４】
したがって、全キャリア（または結合体化キャリア）に対する非結合体化キャリアのレベルを比較するために、一般的に、それが個別にアッセイされ得るように、結合体化キャリアから非結合体化キャリアを分離する必要がある。結合体化キャリアは、非結合体化キャリアよりも大きいので、それゆえ、このことを達成する１つの方法は、大きさにより分離すること（例えば、サイズ排除クロマトグラフィー、電気泳動など）である。代表的なキャリア（単量体形態での）のおおよそのＭＷは、ＣＲＭ１９７＝５８ｋＤａ、Ｄｔ＝６３ｋＤａ、Ｔｔ＝１５０ｋＤａ、プロテインＤ＝４２ｋＤａである。
【００４５】
非結合体化キャリアのレベルを測定する１つの方法は、非結合体化キャリアのレベルが既知量のキャリアを含む１つ以上の標準と比較されることを伴う、電気泳動分離工程を包含する。タンパク質定量化（例えば、銀染色のような染色による）後、標準に対する量が決定され得る。第三の分析もまた、並行して実行され得、ここで非結合体化キャリアのサンプルが標準と混合され、この混合物もまた先の２つのバンドと比較される。
【００４６】
非結合体化キャリアタンパク質を測定するための他の方法は、特に共通キャリアがジフテリアトキソイドである場合、キャピラリー電気泳動［７４］（例えば、遊離溶液中の）またはミセル動電クロマトグラフィー（ｍｉｃｅｌｌａｒ ｅｌｅｃｔｒｏｋｉｎｅｔｉｃ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）［７５］を含み得る。結合体とキャリアとの分解能は、分析中のホウ酸塩濃度の増大により改善され得る。
【００４７】
非結合体化キャリアレベルを測定するためのアッセイは、本発明のプロセスの間の種々の段階において実行され得る。例えば、これらは、１つ以上の個々の結合体が混合されるより前に、その１つ以上の個々の結合体に対して実行され得る、および／またはこれらは、混合後に実行され得る。本発明は、上記のように、組成物が１０μｇ／ｍｌ未満の非結合体化共通髄膜炎菌キャリアを含むことを必要とし、そしてこのレベルは、混合後に、このアッセイを実行することにより確認され得る。しかしながら、混合後にアッセイすることに対する代替的な方法として、混合前に、このアッセイが、個々の結合体に対して実行され得、次に、個々の結果が、最終レベルを算出（任意の希釈を考慮して、など）するために使用される（ただし、非結合体化キャリアの増加を引き起こさないことが公知である条件が混合において使用される）。
【００４８】
測定アッセイおよび非結合体化キャリアタンパク質の最大許容量（例えば、上記のように１０μｇ／ｍｌ）により、当業者は、任意の特定の組成物が本発明の範囲内にあるか否かをチェックし得る。さらに、非結合体化キャリアタンパク質のレベルが最大許容量より上か、または下かに基づいて、当業者は、（ａ）混合前の個々の結合体および／または（ｂ）混合後の組み合わせた結合体を、許容し得るか、または拒絶し得る。したがって、本発明は、組成物を調製するためのプロセスを提供し、このプロセスは、上記に規定される混合工程を包含する。このプロセスはさらに以下の工程を包含する：組成物中の非結合体化共通キャリアの濃度を測定する工程；そして（ｉ）非結合体化キャリアの濃度が＜１０μｇ／ｍｌである場合、さらなるワクチン製造および／もしくはヒトへの投与のためにこの組成物を許容する工程、または（ｉｉ）非結合体化キャリアの濃度が≧１０μｇ／ｍｌである場合、この組成物を拒絶する工程のいずれかの工程。
【００４９】
少量のみの共通キャリアを含むことと同様に、本発明の好ましい組成物は、同様に、少量のみの非結合体化髄膜炎菌の莢膜糖を含む。したがって、組成物は、好ましくは、２μｇ／ｍｌ（糖として測定される）以下（例えば、＜１．５μｇ／ｍｌ、＜１μｇ／ｍｌ、＜０．５μｇ／ｍｌなど）の非結合体化糖を含む。
【００５０】
（組成物）
髄膜炎菌結合体と非結合体化キャリアタンパク質とを含むことと同様に、本発明の組成物は、代表的に薬学的に受容可能なキャリアを含む。このようなキャリアとしては、それ自体は、組成物を受容する個体に有害な抗体の産生を誘導しない、任意のキャリアが挙げられる。適切なキャリアは、代表的に、大型で、ゆっくり代謝される高分子（例えば、タンパク質、多糖、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、重合体のアミノ酸、アミノ酸コポリマー、ショ糖、トレハロース、ラクトースおよび脂質凝集物（例えば、油滴またはリポソーム））である。このようなキャリアは、当業者にとって周知である。ワクチンはまた、希釈剤（例えば、水、生理食塩水、グリセロールなど）も含み得る。さらに、補助的な物質（例えば、湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝化物質など）が存在し得る。無菌かつ発熱物質を含まないリン酸緩衝化生理食塩水は、代表的なキャリアである。薬学的に受容可能なキャリアおよび賦形剤の徹底的な議論は、参考文献７６において得られる。
【００５１】
本発明にしたがって使用される組成物は、特に複数用量様式で包装される場合に、抗菌剤を含み得る。
【００５２】
本発明にしたがって使用される組成物は、界面活性剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ８０のようなＴｗｅｅｎ（ポリソルベート））を含み得る。界面活性剤は、一般的に低いレベル（例えば、＜０．０１％）で存在する。
【００５３】
本発明にしたがって使用される組成物は、張度を与えるために、ナトリウム塩（例えば、塩化ナトリウム）を含み得る。１０±２ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌの濃度が代表的である。
【００５４】
本発明にしたがって使用される組成物は、一般的に緩衝剤（例えば、リン酸緩衝剤）を含む。
【００５５】
細菌感染は身体の種々の領域に罹患し得るので、組成物は種々の形態で調製され得る。例えば、組成物は、液体の溶液または懸濁物のいずれかとして、注射可能物質として調製され得る。注射前の、液体ビヒクル中の溶液または懸濁物のために適切な固体形態もまた、調製され得る（例えば、凍結乾燥組成物）。組成物は、局所投与のために（例えば、軟膏、クリームまたは粉末として）調製され得る。組成物は、経口投与のために（例えば、錠剤もしくはカプセル、またはシロップ（必要に応じて、風味をつけられる）として）調製される。組成物は、肺投与のために（例えば、微細な粉末またはスプレーを使用する吸入器として）調製され得る。組成物は、坐剤またはペッサリーとして調製され得る。組成物は、鼻腔内投与、耳投与または眼投与のために（例えば、スプレー、ドロップ、ゲルまたは粉末として）調製され得る［例えば、参考文献７７および参考文献７８］。しかしながら、一般的に、髄膜炎菌結合体は、筋内注射のために処方される。
【００５６】
本発明にしたがって使用される組成物は、ワクチンアジュバントを含んでも、含まなくてもよい。本発明の組成物中に使用され得るアジュバントとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない。
【００５７】
（Ａ．無機質含有組成物）
本発明におけるアジュバントとしての使用のために適切な無機質含有組成物としては、無機塩（例えば、アルミニウム塩およびカルシウム塩）が挙げられる。本発明は、無機塩（例えば、水酸化物（例えば、オキシヒドロキシド）、ホスフェート（例えば、ヒドロキシホスフェート、オルトホスフェート）、スルフェートなど）［例えば、参考文献７９の第８章および第９章を参照のこと］、または異なる無機化合物の混合物を含み、上記組成物は、任意の適切な形態（例えば、ゲル、結晶、非晶質など）をとる。上記無機質含有組成物はまた、金属塩の粒子として処方され得る［８０］。
【００５８】
リン酸アルミニウムが特に好ましく、代表的なアジュバントは、１ｍｌあたり約０．６ｍｇのＡｌ３＋を含む、０．８４と０．９２との間のＰＯ４／Ａｌモル比を有する非晶質アルミニウムヒドロキシホスフェートである。低用量のリン酸アルミニウムにより吸着（例えば、１用量あたり１結合体につき５０μｇと１００μｇとの間のＡｌ３＋）が、使用され得る。
【００５９】
結合体は、存在する任意のアルミニウム塩に吸着されてもよいし、吸着されなくてもよい（または部分的に吸着されてもよい）。組成物が複数の細菌種由来の結合体を含む場合、全ての結合体が吸着される必要はない。
【００６０】
（Ｂ．油エマルジョン）
本発明におけるアジュバントとしての使用のために適切な油エマルジョン組成物としては、スクアレン−水エマルジョン（例えば、ＭＦ５９）が挙げられる［参考文献７９の第１０章；参考文献８１もまた参照のこと］（５％スクアレン、０．５％Ｔｗｅｅｎ ８０および０．５％Ｓｐａｎ ８５、マイクロフルイダイザー（ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ）を用いて、サブミクロン粒子に処方される）。完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）および不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）もまた、使用され得る。
【００６１】
（Ｃ．サポニン処方物［参考文献７９の第２２章］）
サポニン処方物もまた、本発明におけるアジュバントとして使用される。サポニンは、広範な植物種の樹皮、葉、茎、根および花においてさえ見られる、ステロールグリコシドおよびトリテルペノイドグリコシドの異種の群である。Ｑｕｉｌｌａｉａ ｓａｐｏｎａｒｉａ（モリナの木（Ｍｏｌｉｎａ ｔｒｅｅ））の樹皮由来のサポニンは、アジュバントとして広範に研究されている。サポニンはまた、Ｓｍｉｌａｘ ｏｒｎａｔａ（サルサパリラ（ｓａｒｓａｐｒｉｌｌａ））、Ｇｙｐｓｏｐｈｉｌｌａ ｐａｎｉｃｕｌａｔａ（ブライドベール（ｂｒｉｄｅｓ ｖｅｉｌ））およびＳａｐｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉａｎａｌｉｓ（サボンソウ根（ｓｏａｐ ｒｏｏｔ））から商業的に得られ得る。サポニンアジュバント処方物としては、精製された処方物（例えば、ＱＳ２１）および液体処方物（例えば、ＩＳＣＯＭ）が挙げられる。ＱＳ２１は、ＳｔｉｍｕｌｏｎＴＭとして市販される。
【００６２】
サポニン組成物は、ＨＰＬＣおよびＲＰ−ＨＰＬＣを用いて精製されている。これらの技術を用いて、特定の精製画分が同定され、これらの画分としては、ＱＳ７、ＱＳ１７、ＱＳ１８、ＱＳ２１、ＱＨ−Ａ、ＱＨ−ＢおよびＱＨ−Ｃが挙げられる。好ましくは、上記サポニンは、ＱＳ２１である。ＱＳ２１の生成方法は、参考文献８２に開示されている。サポニン処方物はまた、ステロール（例えば、コレステロール）を含み得る［８３］。
【００６３】
サポニンとコレステロールとの組み合わせが、使用され得、免疫刺激複合体（ｉｍｍｕｎｏｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｃｏｍｐｌｅｘ）（ＩＳＣＯＭ）と呼ばれる独特な粒子を形成し得る［参考文献７９の第２３章］。ＩＳＣＯＭとしてはまた、代表的に、リン脂質（例えば、ホスファチジルエタノールアミンまたはホスファチジルコリン）が挙げられる。任意の公知のサポニンが、ＩＳＣＯＭにおいて使用され得る。好ましくは、上記ＩＳＣＯＭは、ＱｕｉｌＡ、ＱＨＡおよびＱＨＣのうちの１つ以上を含む。ＩＳＣＯＭは、参考文献８３〜８５にさらに記載されている。必要に応じて、上記ＩＳＣＯＭは、さらなる洗剤を含まなくてもよい［８６］。
【００６４】
サポニンベースのアジュバントの開発の概説は、参考文献８７および８８に見られ得る。
【００６５】
（Ｄ．ビロソームおよびウイルス様粒子）
ビロソームおよびウイルス様粒子（ＶＬＰ）はまた、本発明においてアジュバントとして使用され得る。これらの構造は、一般的に、必要に応じてリン脂質と組み合わされるかまたはリン脂質とともに処方されたウイルス由来の１つ以上のタンパク質を含む。それらは、一般的に、非病原性、非複製性であり、そして、一般的に、あらゆる天然ウイルスゲノムを含まない。上記ウイルスタンパク質は、ウイルス全体から、組換え的に生成さ得るかまたは単離され得る。ビロソームまたはＶＬＰにおける使用のために適切なこれらのウイルスタンパク質としては、インフルエンザウイルス由来のタンパク質（例えば、ＨＡまたはＮＡ）、Ｂ型肝炎ウイルス由来のタンパク質（例えば、コアタンパク質またはカプシドタンパク質）、Ｅ型肝炎ウイルス由来のタンパク質、麻疹ウイルス由来のタンパク質、シンドビスウイルス由来のタンパク質、ロタウイルス由来のタンパク質、口蹄疫ウイルス由来のタンパク質、レトロウイルス由来のタンパク質、ノーウォークウイルス由来のタンパク質、ヒトパピローマウイルス由来のタンパク質、ＨＩＶ由来のタンパク質、ＲＮＡファージ由来のタンパク質、Ｑβファージ由来のタンパク質（例えば、コートタンパク質）、ＧＡファージ由来のタンパク質、ｆｒファージ由来のタンパク質、ＡＰ２０５ファージ由来のタンパク質およびＴｙ由来のタンパク質（例えば、レトロトランスポゾンＴｙタンパク質ｐ１）が挙げられる。ＶＬＰは、参考文献８９〜９４においてさらに議論されている。ビロソームは、例えば、参考文献９５においてさらに議論されている。
【００６６】
（Ｅ．細菌誘導体または微生物誘導体）
本発明における使用のために適切なアジュバントは、細菌誘導体または微生物誘導体（例えば、腸内細菌リポ多糖類（ＬＰＳ）の無毒性誘導体、リピドＡ誘導体、免疫刺激オリゴヌクレオチドならびにＡＤＰリボシル化トキシンおよびそれらの無毒性誘導体）を含む。
【００６７】
ＬＰＳの無毒性誘導体としては、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）および３−Ｏ−脱アシル化ＭＰＬ（３ｄＭＰＬ）が挙げられる。３ｄＭＰＬは、３脱Ｏ−アシル化モノホスホリルリピドＡと、４つ、５つまたは６つのアシル化鎖との混合物である。３脱Ｏ−アシル化モノホスホリルリピドＡの好ましい「小粒子」形態は、参考文献９６に開示されている。このような３ｄＭＰＬの「小粒子」は、０．２２μｍメンブレンを通って滅菌濾過されるのに十分小さい［９６］。他の無毒性ＬＰＳ誘導体としては、モノホスホリルリピドＡ模倣物（例えば、アミノアルキルグルコサミニドホスフェート誘導体（例えば、ＲＣ−５２９））が挙げられる［９７、９８］。
【００６８】
リピドＡ誘導体としては、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ由来のリピドＡ誘導体（例えば、ＯＭ−１７４）が挙げられる。ＯＭ−１７４は、例えば、参考文献９９および１００に記載されている。
【００６９】
本発明におけるアジュバントとしての使用のために適切な免疫刺激オリゴヌクレオチドとしては、ＣｐＧモチーフ（グアノシンへのホスフェート結合により連結された非メチル化シトシンを含むジヌクレオチド配列）を含むヌクレオチド配列が挙げられる。パリンドローム配列またはポリ（ｄＧ）配列を含む二本鎖ＲＮＡおよびオリゴヌクレオチドもまた、免疫刺激性であることが示されている。
【００７０】
ＣｐＧは、ヌクレオチド改変体／アナログ（例えば、ホスホロチオエート改変体）を含み得、そして、二本鎖または一本鎖であり得る。参考文献１０１、１０２および１０３は、可能なアナログ置換（例えば、グアノシンの２’−デオキシ−７−デアザグアノシンによる置換）を開示している。ＣｐＧオリゴヌクレオチドのアジュバント効果は、参考文献１０４〜１０９において、さらに議論されている。
【００７１】
上記ＣｐＧ配列（例えば、ＧＴＣＧＴＴモチーフまたはＴＴＣＧＴＴモチーフ）は、ＴＬＲ９に関与し得る［１１０］。上記ＣｐＧ配列（例えば、ＣｐＧ−Ａ ＯＤＮ）は、Ｔｈ１免疫応答誘導に対して特異的であり得るか、または、上記ＣｐＧ配列（例えば、ＣｐＧ−Ｂ ＯＤＮ）は、Ｂ細胞応答誘導に対して、より特異的であり得る。ＣｐＧ−Ａ ＯＤＮおよびＣｐＧ−Ｂ ＯＤＮは、参考文献１１１〜１１３において議論されている。好ましくは、上記ＣｐＧは、ＣｐＧ−Ａ ＯＤＮである。
【００７２】
好ましくは、上記ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、５’末端がレセプター認識のために利用可能であるように構築される。必要に応じて、２つのＣｐＧオリゴヌクレオチド配列が、それらの３’末端に結合され、「イムノマー（ｉｍｍｕｎｏｍｅｒ）」を形成し得る。例えば、参考文献１１０および１１４〜１１６を参照のこと。
【００７３】
細菌ＡＤＰ−リボシル化トキシンおよびその無毒性誘導体が、本発明におけるアジュバントとして使用され得る。好ましくは、上記タンパク質は、Ｅ．ｃｏｌｉ由来（Ｅ．ｃｏｌｉ熱不安定性エンテロトキシン「ＬＴ」）、コレラ由来（「ＣＴ」）または百日咳由来（「ＰＴ」）である。粘膜アジュバントとしての無毒化ＡＤＰ−リボシル化トキシンの使用は、参考文献１１７に記載されており、そして、非経口的アジュバントとしての無毒化ＡＤＰ−リボシル化トキシンの使用は、参考文献１１８に記載されている。上記トキシンまたはトキソイドは、好ましくは、ＡサブユニットおよびＢサブユニットの両方を含むホロトキシン（ｈｏｌｏｔｏｘｉｎ）の形態である。好ましくは、上記Ａサブユニットは、無毒化変異を含み；好ましくは、上記Ｂサブユニットは、変異していない。好ましくは、上記アジュバントは、無毒化ＬＴ変異体（例えば、ＬＴ−Ｋ６３、ＬＴ−Ｒ７２およびＬＴ−Ｇ１９２）である。アジュバントとしてのＡＤＰ−リボシル化トキシンおよびその無毒性誘導体（特に、ＬＴ−Ｋ６３およびＬＴ−Ｒ７２）の使用は、参考文献１１９〜１２６において見られ得る。アミノ酸置換についての多くの参考文献は、好ましくは、参考文献１２７に記載のＡＤＰ−リボシル化トキシンのＡサブユニットおよびＢサブユニットのアラインメントに基づき、特に、本明細書中で、その全体が参考として援用される。
【００７４】
（Ｆ．ヒト免疫調節因子）
本発明におけるアジュバントとしての使用のために適切なヒト免疫刺激因子としては、サイトカイン（例えば、インターロイキン（例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１２［１２８］など）［１２９］、インターフェロン（例えば、インターフェロン−γ）、マクロファージコロニー刺激因子および腫瘍壊死因子）が挙げられる。
【００７５】
（Ｇ．生体接着因子および粘膜接着因子）
生体接着因子および粘膜接着因子はまた、本発明におけるアジュバントとして使用され得る。適切な生体接着因子としては、エステル化ヒアルロン酸マイクロスフェア［１３０］または粘膜接着因子（例えば、ポリ（アクリル酸）、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリサッカリドおよびカルボキシメチルセルロースの架橋誘導体）が挙げられる。キトサンおよびその誘導体はまた、本発明におけるアジュバントとして使用され得る［１３１］。
【００７６】
（Ｈ．微粒子）
微粒子はまた、本発明におけるアジュバントとして使用され得る。生分解性かつ無毒性の物質（例えば、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリ無水物、ポリカプロラクトンなど）と、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）とから形成される微粒子（すなわち、直径約１００ｎｍ〜約１５０μｍ、より好ましくは、直径約２００ｎｍ〜約３０μｍ、そして、最も好ましくは、直径約５００ｎｍ〜約１０μｍの粒子）が、好ましく、必要に応じて、処理されて、（例えば、ＳＤＳにより）負に荷電した表面または（例えば、カチオン性界面活性剤（例えば、ＣＴＡＢ）により）正に荷電した表面を有する。
【００７７】
（Ｉ．リポソーム（参考文献７９の第１３章および第１４章））
アジュバントとしての使用のために適切なリポソーム処方物の例は、参考文献１３２〜１３４に記載されている。
【００７８】
（Ｊ．ポリオキシエチレンエーテル処方物およびポリオキシエチレンエステル処方物）
本発明における使用のために適切なアジュバントとしては、ポリオキシエチレンエーテルおよびポリオキシエチレンエステルが挙げられる［１３５］。このような処方物としては、オクトキシノールと組み合わせたポリオキシエチレンソルビタンエステル界面活性剤［１３６］および少なくとも１つのさらなる非イオン性界面活性剤（例えば、オクトキシノール）と組み合わせたポリオキシエチレンアルキルエーテル界面活性剤またはポリオキシエチレンアルキルエステル界面活性剤［１３７］が、さらに挙げられる。好ましいポリオキシエチレンエーテルは、以下の群より選択される：ポリオキシエチレン−９−ラウリルエーテル（ｌａｕｒｅｔｈ ９）、ポリオキシエチレン−９−ステオリルエーテル、ポリオキシエチレン−８−ステオリルエーテル、ポリオキシエチレン−４−ラウリルエーテル、ポリオキシエチレン−３５−ラウリルエーテルおよびポリオキシエチレン−２３−ラウリルエーテル。
【００７９】
（Ｋ．ポリホスファゼン（ＰＣＰＰ））
ＰＣＰＰ処方物は、例えば、参考文献１３８および１３９に記載されている。
【００８０】
（Ｌ．ムラミルペプチド）
本発明におけるアジュバントとしての使用のために適切なムラミルペプチドの例としては、Ｎ−アセチル−ムラミル−Ｌ−トレオニル−Ｄ−イソグルタミン（ｔｈｒ−ＭＤＰ）Ｎ−アセチル−ノルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン（ｎｏｒ−ＭＤＰ）およびＮ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル−Ｌ−アラニン−２−（１’，２’−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホリルオキシ）−エチルアミン（ＭＴＰ−ＰＥ）が挙げられる。
【００８１】
（Ｍ．イミダゾキノロン化合物）
本発明におけるアジュバントとしての使用のために適切なイミダゾキノロン化合物の例としては、参考文献１４０および１４１にさらに記載される、Ｉｍｉｑｕａｍｏｄおよびその相同体（例えば、「Ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ ３Ｍ」）が挙げられる。
【００８２】
本発明はまた、上に定義される１つ以上のアジュバントの局面の組み合わせを含み得る。例えば、以下のアジュバント組成物が、本発明において使用され得る：（１）サポニンおよび水中油エマルジョン［１４２］；（２）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋無毒性ＬＰＳ誘導体（例えば、３ｄＭＰＬ）［１４３］；（３）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋無毒性ＬＰＳ誘導体（例えば、３ｄＭＰＬ）＋コレステロール；（４）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋３ｄＭＰＬ＋ＩＬ−１２（必要に応じて、＋ステロール）［１４４］；（５）３ｄＭＰＬと、例えば、ＱＳ２１および／または水中油エマルジョンとの組み合わせ［１４５］；（６）マイクロフルイダイズされてサブミクロンエマルジョンにされるか、またはボルテックスされてより大きい粒子サイズのエマルジョンを生じるかのいずれかの、１０％ スクアレン、０．４％ Ｔｗｅｅｎ ８０ＴＭ、５％ プルロニックブロック（ｐｌｕｒｏｎｉｃ−ｂｌｏｃｋ）ポリマーＬ１２１およびｔｈｒ−ＭＤＰを含有するＳＡＦ；（７）２％ スクアレン、０．２％ Ｔｗｅｅｎ ８０、ならびにモノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）、トレハロースジミコレート（ＴＤＭ）および細胞壁骨格（ＣＷＳ）からなる群由来の１つ以上の細菌細胞壁構成要素を含むＲｉｂｉＴＭアジュバント系（ＲＡＳ）（Ｒｉｂｉ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍ）（好ましくは、ＭＰＬ＋ＣＷＳ（ＤｅｔｏｘＴＭ））；ならびに（８）１つ以上の無機塩（例えば、アルミニウム塩）＋ＬＰＳの無毒性誘導体（例えば、３ｄＭＰＬ）。
【００８３】
免疫刺激因子として作用する他の物質は、参考文献７９の第７章に開示されている。
【００８４】
吸着を有するか、または有さない水酸化アルミニウムアジュバントまたはリン酸アルミニウムアジュバントの使用が、特に好ましい［例えば、参考文献７の実施例７および８；参考文献８の実施例Ｊ］。アルミニウム塩アジュバントを含まない組成物もまた、使用され得る［参考文献１５］。リン酸カルシウムは、別の好ましいアジュバントである。結合体は、別々にアジュバントと（必要に応じて、アジュバントに吸着されて）混合され得、次いで、この結合体は一緒に混合され得るか、またはこの結合体は一緒に混合され得、次いでアジュバントと混合される。
【００８５】
本発明に従って使用される組成物のｐＨは、好ましくは６と８との間であり、好ましくは約７である。安定なｐＨは、緩衝液の使用によって維持され得る。組成物が、水酸化アルミニウム塩を含む場合、ヒスチジン緩衝液を使用することが好ましい［１４６］。組成物は、滅菌されてもよく、そして／または発熱物質を含まなくてもよい。組成物は、ヒトに対して等張であってもよい。
【００８６】
組成物は、防腐剤（例えば、チオメルサール、２−フェノキシエタノール）を含んでもよいか、または防腐剤を含まなくてもよい。本発明の好ましい組成物は、あらゆる水銀物質を含まない（例えば、それらはチオメルサールを含まない）。
【００８７】
組成物は、バイアル中に存在してもよいか、またはそれらは、あらかじめ充填されたシリンジ中に存在してもよい。このシリンジは、針を備えて供給されても、または針を備えずに供給されてもよい。シリンジは、上記組成物の単回用量を含むが、バイアルは、単回用量または複数回用量を含んでもよい。注射用組成物は、通常、溶液または懸濁液である。あるいは、それらは、注射前に、液体ビヒクルにおける溶液または懸濁液のために、（例えば、凍結乾燥された）固形で存在し得る。
【００８８】
組成物は、単位用量形態または複数回用量形態でパッケージされ得る。複数回用量形態について、バイアルは、あらかじめ充填されたシリンジであることが好ましい。有効な投薬量体積は、慣習的に確立され得るが、注射用の組成物の代表的なヒトの用量は、０．５ｍｌの体積である。
【００８９】
組成物は、免疫学的に有効な量の髄膜炎菌性結合体、および必要な場合、任意の他の組成物を含む。「免疫学的に有効な量」によってとは、単回用量または一連の一部としてのいずれかにおける個体への投与の量が、患者における防御用の抗髄膜炎菌性免疫応答を誘発することを意味する。この量は、処置されるべき個体の健康状態および身体的状態、年齢、処置されるべき個体の分類学群（例えば、非ヒト霊長類、霊長類など）、個体の免疫系が抗体を合成する能力、所望される防御の程度、ワクチンの処方、処置する医師による医学的状態の評価、および他の関連因子に依存して変化する。この量は、慣例的な試行を通して決定され得る比較的広範な範囲にわたり、そして、用量あたりの各々の髄膜炎菌抗原の代表的な量は、血清群あたり１μｇと２０μｇとの間（例えば、血清群あたり２μｇと１０μｇとの間、または血清群あたり３μｇと８μｇとの間）である（糖について測定される）。血清群あたり約４μｇの用量（すなわち、四価の混合物において１６μｇの総量）、または血清群あたり約５μｇの用量（すなわち、四価の混合物において２０μｇの総量）が、好ましい。
【００９０】
（凍結乾燥）
ワクチンは、代表的に、注射、特に筋肉内注射によって投与される。本発明の組成物は、一般に、水溶液または懸濁液として使用時に提示される。本発明のいくつかの実施形態において、上記組成物は、パッケージング段階から投与段階まで水溶性の形態（「完全な液体」ワクチン）である。しかしながら、他の実施形態において、上記組成物の１つ以上の成分は、凍結乾燥された形態でパッケージされ得、そして実際の投与のためのワクチンは、必要な場合、再構成され得る。従って、本発明の組成物は、パッケージ段階で調製されてもよいか、または使用前に即時に調製されてもよい。髄膜炎菌性結合体の凍結乾燥は、当該分野において公知である（例えば、ＭｅｎｊｕｇａｔｅＴＭ製品は、凍結乾燥された形態で存在するが、ＮｅｉｓＶａｃ−ＣＴＭおよびＭｅｎｉｎｇｉｔｅｃＴＭは、完全な液体ワクチンである）。
【００９１】
従って、いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、凍結乾燥された形態である。個々の髄膜炎菌性結合体は、混合する前に凍結乾燥され得るか、または水溶性形態で混合され、次いで凍結乾燥され得る。
【００９２】
本発明はまた、本発明の組成物を調製するためのキットを提供し、このキットは、凍結乾燥された形態で少なくとも１つの髄膜炎菌性結合体および水溶性形態で少なくとも１つの髄膜炎菌性結合体を含む。このキットは、２つのバイアル（水溶性物質を含むものと凍結乾燥された物質を含むもの）を含み得るか、またはこのキットは、１つのあらかじめ充填されたシリンジおよび１つのバイアル（例えば、シリンジの内容物は、注射前にバイアルの内容物を再形成するために使用される）を含み得る。次いで、血清群Ａ結合体を含む組成物に関して、血清群Ａサッカリドは、凍結乾燥され得るが、他の血清群由来の結合体は、液体形態で存在し得る。
【００９３】
本発明はまた、本発明の水溶性組成物を調製するためのキットを提供し、このキットは、（ｉ）凍結乾燥された本発明の組成物、および（ｉｉ）水溶性物質を含み、ここで、成分（ｉｉ）は、上記水溶性組成物を提供するために、成分（ｉ）を再形成するためである。成分（ｉｉ）は、好ましくは、上記のように、滅菌され、非発熱性などである。
【００９４】
従って、本発明は、完全に凍結乾燥された形態、完全に水溶性の形態、および水溶性処方物を与えるための、再形成のために準備された形態の組成物を包含する。
【００９５】
凍結乾燥の間、結合体を安定させるために、上記組成物中に、例えば、１ｍｇ／ｍｌと３０ｍｇ／ｍｌとの間（例えば、約２５ｍｇ／ｍｌ）で、糖アルコール（例えば、マンニトール）または二糖類（例えば、スクロースまたはトレハロース）を含むことが好ましい。スクロースの存在下での凍結乾燥が好ましい。従って、本発明の組成物は、糖アルコールまたは二糖類を含み、特にそれらは、凍結乾燥された形態または凍結乾燥された物質から再形成された形態のいずれかである。
【００９６】
組成物が、凍結乾燥形態である（または凍結乾燥された成分を含む）場合、凍結乾燥された物質の用量は、好ましくは、アルミニウムアジュバントを含まない。アルミニウムアジュバントを含む最終的な水溶性組成物が所望される場合、代わりに、このアジュバントは、凍結乾燥された物質（ＭｅｎｊｕｇａｔｅＴＭを参照のこと）を再形成するために使用される物質中に存在するべきである。
【００９７】
（患者）
本発明の組成物は、髄膜炎菌性疾患に対して（例えば、髄膜炎、より好ましくは細菌性髄膜炎、および最も好ましくは髄膜炎菌性髄膜炎に対して）患者を予防するためのものである。
【００９８】
免疫化される患者は、代表的に、ヒトである。ヒトは、一般的に、少なくとも１ヶ月齢、例えば、少なくとも２ヶ月齢、少なくとも４ヶ月齢、少なくとも６ヶ月齢、少なくとも２歳、少なくとも５歳、少なくとも１１歳、少なくとも１７歳、少なくとも４０歳、少なくとも５５歳などである。患者の好ましい集合は、２歳〜５５歳の年齢群であり、そして患者の別の好ましい集合は、１１歳〜５５歳の年齢群である。患者のさらに好ましい集合は、１１歳未満、例えば、２歳〜１１歳である。患者のさらに好ましい集合は、２歳未満、例えば、１歳未満である。本発明の組成物は、特に、すでに以前の免疫化において共通キャリアタンパク質を受容した免疫化している患者に有用である。
【００９９】
本発明の組成物を受容する前、または受容すると同時に、患者は、１つ以上のさらなるワクチンで免疫化され得る。投与されていてもよいか、または投与され得る他のワクチンとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：ジフテリア抗原（例えば、ジフテリアトキソイド）；破傷風抗原（例えば、破傷風トキソイド）；百日咳抗原（例えば、全細胞／細胞性の百日咳ワクチン（「Ｐｗ」）、または好ましくは、無細胞性の百日咳ワクチン（「Ｐａ」））；Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅＢ型莢膜糖（代表的には結合体化されている）；Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）；ポリオウイルス（例えば、不活性化ポリオウイルスワクチン（ＩＰＶ）または経口ポリオウイルスワクチン（ＯＰＶ））；Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ莢膜糖（代表的には多価および結合体化されている）；インフルエンザウイルス；ＢＣＧ；Ａ型肝炎ウイルス抗原；麻疹ウイルス；流行性耳下腺炎ウイルス；風疹ウイルス；水痘ウイルス；など。これらのさらなるワクチンのいくつかのさらなる詳細は、以下に示される。
【０１００】
本発明の組成物を投与した結果、好ましくは、各々の投与された血清群に関して、患者は、血清殺菌性抗体（ＳＢＡ）応答を惹起させ、（上記組成物を受容する前にあらかじめ免疫化された患者と比較して）ＳＢＡ力価の増加が、少なくとも４倍、および好ましくは少なくとも８倍になる。このＳＢＡ試験は、髄膜炎菌防御に対して標準的な相関関係がある。髄膜炎菌ワクチンについての血清学的な相関関係のさらなる詳細は、参考文献１４７で得られる。
【０１０１】
（本発明に従って使用される組成物のさらなる抗原性成分）
本発明の組成物は、髄膜炎菌性疾患に対して免疫化している患者のために使用され得、他のワクチン接種成分とは別に使用され得る。しかしながら、さらに本発明の組成物は、他のワクチン成分との結合において使用され得る。これらの他の成分は、本発明の組成物とは別に投与され得るが実質的に同時に投与され得るか、または本発明の組成物は、組み合わせたワクチンの一部としてこれらのさらなる成分を含み得る。
【０１０２】
従って、髄膜炎菌性結合体抗原に加えて、本発明の組成物は、必要に応じて、１つ以上の以下のさらなる抗原を含み得る：
１．Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅＢ型（「Ｈｉｂ」）由来の結合体化莢膜糖［例えば、参考文献３４の第１４章］。この結合体についてのキャリアタンパク質は、ＣＲＭ１９７、ジフテリアトキソイド、破傷風トキソイドまたはＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの外膜複合体であり得る。この結合体の糖部分は、多糖（例えば、完全長のリン酸ポリリボシルリビトール（ＰＲＰ））であり得るが、莢膜多糖を脱重合して、オリゴ糖（例えば、分子量約１〜約５ｋＤａ）を形成することが好ましい。好ましいＨｉｂ結合体は、アジピン酸リンカーによってＣＲＭ１９７に共有結合されたオリゴ糖を含む［１４８、１４９］。患者へのＨｉｂ抗原の投与は好ましくは０．１５μｇ／ｍｌより大きい、より好ましくは、１μｇ／ｍｌより大きい濃度の抗ＰＲＰ抗体を生じる。組成物が、Ｈｉｂ糖抗原を含む場合、好ましくは、用量はまた、水酸化アルミニウムアジュバントを含まない。上記組成物が、リン酸アルミニウムアジュバントを含む場合、Ｈｉｂ抗原は、このアジュバントに吸着されてもよい［１５０］か、または吸着されなくてもよい［１５］。吸着の防止は、抗原／アジュバントを混合している間の正確なｐＨ、ゼロ電荷の適切な点を有するアジュバント、および組成物中の種々の異なる抗原を混合する適切な順序を選択することによって達成され得る［１５１］。
【０１０３】
２．Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来の結合体化莢膜糖［例えば、参考文献３４の第２３章；参考文献１５２〜１５４］。Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅの２種以上の血清群由来の糖を含むことが好ましい。例えば、２３種の異なる血清群由来の多糖類の混合物が、５種と１１種との間の異なる血清群由来の多糖類との結合体化ワクチンとして、広範に使用される［１５５］。例えば、ＰｒｅｖＮａｒＴＭ［１５６］は、還元的アミノ化によってＣＲＭ１９７に個々に結合体化される各々の糖類を有し、０．５ｍｌ用量あたり２μｇの各々の糖（４μｇの血清群６Ｂ）を有し、そしてリン酸アルミニウムアジュバントに吸着される結合体を有する７種の血清群（４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、および２３Ｆ）由来の抗原を含む。肺炎球菌結合体が、本発明で使用するための組成物中に含まれる場合、この組成物は、好ましくは、少なくとも血清群６Ｂ、１４、１９Ｆおよび２３Ｆを含む。
【０１０４】
３．Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｂ由来のタンパク質抗原［例えば、参考文献１５７］。
【０１０５】
４．ジフテリア抗原（例えば、ジフテリアトキソイド）［例えば、参考文献３４の第１３章］。
【０１０６】
５．破傷風抗原（例えば、破傷風トキソイド）［例えば、参考文献３４の第２７章］。
【０１０７】
６．細胞性百日咳抗原または全細胞百日咳（「Ｐｗ」）抗原［例えば、参考文献３４の第２１章］。
【０１０８】
７．１つ以上の無細胞百日咳（「Ｐａ」）抗原［例えば、参考文献３４の第２１章］。Ｐａ成分は、一般に、１種、２種または３種の以下の十分に特徴付けられたＢ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ抗原を含む：（１）百日咳トキソイド（「ＰＴ」）（化学的手段または部位特異的突然変異誘発のいずれかによって無毒化される（例えば、「９Ｋ／１２９Ｇ」変異体）［１５８］；（２）線維状赤血球凝集素（「ＦＨＡ」）；（３）ペルタクチン（別名「６９キロダルトン外膜タンパク質」）。Ｐａ成分はまた、凝集原２および／または凝集原３を含み得る。
【０１０９】
８．Ｂ型肝炎ウイルス由来の抗原（例えば、表面抗原（「ＨＢｓＡＧ」）および／またはコア抗原（表面抗原は、好ましくは、リン酸アルミニウム上に吸着される［１６０］））［例えば、参考文献１５９および１６４；参考文献３４の第１６章］。
【０１１０】
９．１種以上のポリオウイルス抗原（例えば、ＩＰＶ．Ｍａｈｏｎｅｙ株、ＭＥＦ−１株およびＳａｕｋｅｔｔ株の封入体が、一般的である）［例えば、１６１、１６２；参考文献３４の第２４章］。
【０１１１】
１０．Ａ型肝炎ウイルス由来の抗原（例えば、不活性化ウイルス）［例えば、１６３、１６４；参考文献３４の第１５章］。
【０１１２】
上記組成物は、１種以上（すなわち、１種、２種、３種、４種、５種、６種、７種、８種、９種、または１０種）のこれらのさらなる抗原を含み得る。
【０１１３】
他の実施形態において、上記組成物は、１種以上のこれらのさらなる抗原を、特に含まなくてもよい。
【０１１４】
存在する場合、これらのさらなる抗原は、アルミニウム塩に吸着されても、吸着されなくてもよい。
【０１１５】
ジフテリア抗原が混合物中に含まれる場合、破傷風抗原および百日咳抗原を含むこともまた、好ましい。同様に、破傷風抗原が含まれる場合、ジフテリア抗原および百日咳抗原を含むこともまた、好ましい。同様に、百日咳抗原が含まれる場合、ジフテリア抗原および破傷風抗原を含むこともまた、好ましい。
【０１１６】
混合物中の抗原は、代表的に、各々少なくとも１μｇ／ｍｌの濃度で存在する。一般に、任意の所定の抗原の濃度は、その抗原に対する免疫応答を誘発するのに十分である。個々の糖抗原の防御効果は、それらを組み合わせることによって、取り除かれないことが好ましいが、実際の免疫原性（例えば、ＥＬＩＳＡ力価）は、減少され得る。
【０１１７】
髄膜炎菌性結合体が、一連の用量において投与される場合、その用量のどれも、これらの余分の抗原を含まなくてもよいか、その用量のうちのいくつかまたは全ては、これらの余分の抗原を含んでもよい。
【０１１８】
これらの１０種のさらなる成分の１つ以上を含む組成物の代替として、本発明は、以下を含むキットを提供する：（ｉ）水性形態または凍結乾燥された形態のいずれかの本発明の組成物；および（ｉｉ）１つ以上のこれらの１０種のさらなる成分を含む組成物。
【０１１９】
成分（ｉ）が凍結乾燥される場合、成分（ｉｉ）は、好ましくは、水性形態であり、（ｉ）を再構成するために使用され得る。
【０１２０】
従って、本発明の組成物は、それら自身の使用のために販売され得るか、他のワクチン物質と併せて使用するために販売され得るか、またはワクチン接種キットの一部として販売され得る。
【０１２１】
（医療処置）
本発明は、患者を処置するための方法を提供し、この方法は、免疫学的に有効な量の本発明の組成物を患者に投与する工程を包含する。この患者は、その患者自身、疾患の危険性があってもよいか、または妊婦（「先天性免疫」）であってもよいかのいずれかである。
【０１２２】
本発明はまた、医薬として（例えば、免疫原性組成物またはワクチンとして）使用するための本発明の組成物を提供する。
【０１２３】
本発明はまた、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓによって引き起こされる疾患に対して患者を免疫するための医薬の製造において、以下：（ａ）（ｉ）血清群ＡのＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの莢膜糖と（ｉｉ）キャリアタンパク質との結合体；（ｂ）（ｉ）血清群ＣのＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの莢膜糖と（ｉｉ）キャリアタンパク質との結合体；（ｃ）（ｉ）血清群Ｗ１３５のＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの莢膜糖と（ｉｉ）キャリアタンパク質との結合体；（ｄ）（ｉ）血清群ＹのＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの莢膜糖と（ｉｉ）キャリアタンパク質との結合体、のうちの少なくとも２つの使用を提供し、（１）上記結合体（ａ）、（ｂ）、（ｃ）および（ｄ）のうちの少なくとも２つは、同じキャリアタンパク質（「共通キャリア」）を使用し、そして（２）上記医薬は、１０μｇ／ｍｌ未満の濃度で非結合体化の共通キャリアを含むことを特徴とする。
【０１２４】
ワクチンが、予防的な使用のためである場合、上記患者は、好ましくは、小児（例えば、幼児または乳児）であり；ワクチンが、治療上の使用のためである場合、上記患者は、好ましくは、成人である。小児のために意図されるワクチンはまた、成人に投与され得る（例えば、安全性、投薬量、免疫原性などを評価するため）。
【０１２５】
治療上の処置の効果を試験する１つの方法は、本発明の組成物の投与後に髄膜炎菌感染症をモニタリングする工程を包含する。予防的な処置の効果を試験する１つの方法は、投与後に投与されたポリペプチドに対する免疫応答をモニタリングする工程を包含する。本発明の組成物の免疫原性は、被験体にそれらを投与することによって決定され得、そして髄膜炎菌性ワクチンについての血清学的な相関関係は、参考文献１４７で得られる。
【０１２６】
組成物は、一般に、患者に直接投与される。直接送達は、非経口注射（例えば、皮下、腹腔内、静脈内、筋肉内、または組織の間隙空間）、または直腸投与、経口投与、膣投与、局所投与、経皮投与、鼻腔内投与、眼投与、耳投与、肺投与、あるいは他の粘膜投与によって達成され得る。筋肉内（例えば、大腿部または上腕への）投与が、好ましい。注射は、針を介してもよい（例えば、皮下注射）が、針を有さない注射が代替として使用され得る。代表的な筋肉内用量は、０．５ｍｌである。
【０１２７】
複数の血清群由来の髄膜炎菌性結合体が、単一の組成物内の混合物において投与される。この組成物は、単回用量として投与され得るか、または複数回用量スケジュールにおいて２回以上投与され得る。複数回用量は、初回免疫スケジュールおよび／または追加免疫スケジュールにおいて使用され得る。初回投与スケジュールの後に、髄膜炎菌性結合体の追加投与スケジュールが続き得る。初回投与の間の適切なタイミング（例えば、４〜１６週の間）、および初回投与と追加投与との間の適切なタイミングは、慣習的に決定され得る。
【０１２８】
本発明は、全身性免疫および／または粘膜免疫を誘発するために使用され得る。
【０１２９】
（本発明の特定の組成物）
本発明の好ましい実施形態は、以下を包含する：
１．各々についてＣＲＭ１９７キャリアを有する血清群Ｃ、Ｗ１３５およびＹ由来の髄膜炎菌結合体を含む水性組成物。糖は、アジピン酸リンカーを用いてこのキャリアに結合される。非結合体化ＣＲＭ１９７の濃度は、５μｇ／ｍｌより小さい。各結合体の濃度（糖として測定される）は、約１０μｇ／ｍｌである。上記組成物は、リン酸アルミニウムアジュバントを含み、調製の間、このアジュバントと吸着する段階はない。上記組成物は、塩化ナトリウム、リン酸ナトリウム（緩衝作用のために一塩基および二塩基）および少量のポリソルベート８０を含む。上記組成物は、筋肉内注射のためであるか、または凍結乾燥された血清群Ａ結合体を再構成するために使用され得る。
【０１３０】
２．上記実施形態１の組成物を有する凍結乾燥された血清群Ａ結合体の再構成から生じる水性組成物。血清群Ａ結合体はまた、ＣＲＭ１９７キャリアを有する。再構成の後、血清群Ａ結合体は、（希釈因子に依存して）約１０μｇ／ｍｌまたは約２０μｇ／ｍｌで存在し得る。再構成の後、非結合体化ＣＲＭ１９７の濃度は、５μｇ／ｍｌより小さいままである。
【０１３１】
３．両方がＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅプロテインＤキャリアを有し、ＣＤＡＰ化学を用いてこのキャリアに結合される糖を有する血清群ＡおよびＣ由来の髄膜炎菌結合体を含む水性組成物。非結合体化プロテインＤの濃度は、１０μｇ／ｍｌより小さい。上記組成物はまた、破傷風トキソイドキャリアタンパク質に結合体化Ｈｉｂ糖を有するＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ ｂ型結合体を含む（例えば、参考文献 の実施例１を参照のこと）。３つの結合体の各々の濃度（糖として測定される）は、約１０μｇ／ｍｌである。上記組成物は、アルミニウム塩アジュバントを含まない。上記組成物は、スクロースを含む。上記組成物のｐＨは、６と６．５との間（例えば、約６．１）である。上記組成物は、凍結乾燥のためである。
【０１３２】
４．両方についてＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅプロテインＤキャリアを有し、ＣＤＡＰ化学を用いてこのキャリアに結合される糖を有する血清群ＡおよびＣ由来の髄膜炎菌結合体を含む凍結乾燥された組成物。結合されていないプロテインＤの濃度は、１０μｇ／ｍｌより小さい。上記組成物はまた、破傷風トキソイドキャリアタンパク質に結合体化されているＨｉｂ糖を有するＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ ｂ型結合体を含む。上記組成物は、アルミニウム塩アジュバントを含まない。上記組成物は、スクロースを含む。上記組成物は、他のワクチン成分、特に非髄膜炎菌ワクチン成分とともに再構成した。
【０１３３】
５．ジフテリア抗原、破傷風抗原および百日咳抗原を含むワクチン組成物を含み、必要に応じてＨＢｓＡｇをさらに含む、上記実施形態４の組成物の再構成から生じる水性組成物。上記再構成したワクチンは、水酸化アルミニウムアジュバントおよび／またはリン酸アルミニウムアジュバントを含む。
【０１３４】
６．各々についてジフテリアトキソイドキャリアを有する血清群Ａ、Ｃ、Ｗ１３５およびＹ由来の髄膜炎菌結合体を含む水性組成物。糖は、アジピン酸リンカーを用いてこのキャリアに結合され得る。非結合体化Ｄｔの濃度は、５μｇ／ｍｌより小さい。各結合体の濃度（糖として測定される）は、約８μｇ／ｍｌである。上記組成物は、アルミニウム塩を含まない。上記組成物は、筋肉内注射のためである。
【０１３５】
（一般論）
用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」とは、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」および「なる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」を包含する（例えば、Ｘを「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」組成物は、Ｘのみからなり得るか、またはさらなる何かを含み（ｉｎｃｌｕｄｅ）得る（例えば、Ｘ＋Ｙ））。
【０１３６】
数値ｘに関する用語「約（ａｂｏｕｔ）」とは、例えば、ｘ±１０％を意味する。
【０１３７】
単語「実質的に（ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｌｙ）」は、「完全に（ｃｏｍｐｌｅｔｅｌｙ）」を除外しない（例えば、Ｙを「実質的に含まない」組成物は、完全にＹを含まないものであり得る）。必要な場合、単語「実質的に」は、本発明の定義から除外され得る。
【０１３８】
共通キャリアの濃度は、「μｇ／ｍｌ」（１ミリリットルあたりのマイクログラム）の単位で上記に与えられるが、代替および対応する定義の設定において、これらのμｇ／ｍｌ濃度は、単位「Ｌｆ／ｍｌ」（凝集単位または「凝集の限界」［１６５］）で測定される濃度と置き換えられ得、これは、破傷風トキソイドおよびジフテリアトキソイドを定量化するための機能単位である。この代替の定義の設定において、数値は、３で割られ（すなわち、３μｇ／ｍｌが１Ｌｆ／ｍｌになる）、必要な場合、最も近い整数に切り上げられる（すなわち、１０μｇ／ｍｌは、４Ｌｆ／ｍｌになる）。ここで、この代替は、純粋に便宜上の目的のために与えられ、キャリア濃度が、μｇ／ｍｌで与えられる場合、本発明に対して何らかの影響が及ぼされるべきではない。
【０１３９】
（本発明を実施するための様式）
（非結合体化キャリアタンパク質の存在下での抗血清群Ｃ応答の低下）
ＮｅｉｓＶａｃ−ＣＴＭは、水酸化アルミニウムアジュバントを有し、そしてタンパク質：糖が約２：１の重量比を有する破傷風トキソイドキャリアに結合体化される血清群Ｃ（ＯＡｃ−）莢膜糖を含む。参考文献１３に記載されるように、このワクチンを、単独または（非結合体化）破傷風トキソイドと（非結合体化）ジフテリアトキソイドとの同時投与のいずれかで、３歳〜６歳または１３歳〜１８歳の子供に投与した。特定のＩｇＧ ＧＭＣを、ＯＡｃ＋ＥＬＩＳＡ、ＯＡｃ−ＥＬＩＳＡ、および高アビディティＥＬＩＳＡによって測定し、ｒＳＢＡ ＧＭＴもまた、測定した（Ｃ１１株に対して）［１３］。患者の２つの群の結果は、以下の通りであり、Ｔｔ／Ｄｔワクチンを同じ時期に受容しなかった患者の結果と比較した：
【表Ａ】
【０１４０】
免疫応答に対する非結合体化Ｔｔの効果は、これらの結果から明らかである。次いで、２つ以上の髄膜炎菌結合体を含むワクチンにおいてこの効果を回避するために、本発明に従って、非結合体化キャリアのレベルを閾値レベル未満に維持する。
【０１４１】
（組み合わされた髄膜炎菌結合体）
血清型Ａ＋Ｃ、Ｃ＋Ｗ＋Ｙ、またはＡ＋Ｃ＋Ｗ＋Ｙについての髄膜炎菌結合体の混合物は、参考文献７、８および１５に記載されるように調製され得る。これらのワクチンは、糖に共有結合されるキャリアタンパク質としてＣＲＭ１９７、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅプロテインＤまたはジフテリアトキソイド（Ｄｔ）のいずれかを有する。本質的に、参考文献８の方法を用いて製造された結合体に関して、以下を実施した。
【０１４２】
血清群Ａについて、精製された乾燥多糖を加水分解して、１０〜１１の平均重合度（ａｖＤＰ）を得た。長い多糖を取り除くために、３０ｋＤａ限外濾過を使用した。次いで、Ｑセファロースクロマトグラフィーを、短い糖フラグメントを取り除くために使用した。糖を還元的アミノ化に供し、続いて、３ｋＤａ限外濾過により、低い分子量の不純物を取り除いた。アミノ化された糖を濃縮し、次いで、アジピン酸のビスＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルを用いて活性化させた。この物質は、結合体調製のために適切である。この活性化されたエステルを、０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．２）中に４５ｍｇ／ｍｌにてキャリアを有する、１３：１の過剰な糖のモル濃度において、精製されたＣＲＭ１９７キャリアとともに混合する。結合体化は、電磁攪拌機を用いて、８時間と２４時間との間、室温で行われる。この反応を、ＮＨ４Ｃｌ（０．１Ｍの最終濃度）を添加することによって停止させ、次いで、この溶液を、１０ｍＭのリン酸ナトリウム（ｐＨ７．２）を用いて希釈する。これらの条件は、効果的な結合体化を確実にし、残った未反応のキャリアタンパク質のレベルを最小にする。本発明に従って、あらゆる残っている未反応の物質は、念入りに取り除かれ、上記の希釈の２時間以内にさらなる工程が実施される。１０ｍＭのリン酸ナトリウム（ｐＨ７．２）を用いて、４時間まで、３０ｋＤａカセットを用いる限外濾過が実施される。
【０１４３】
血清群Ｃについて、以下を除いて本質的に同じプロセスを使用した：最初の（ｎｉｔｉａｌ）加水分解を行って、７と１６との間のａｖＤＰを得；結合体反応を、室温で１４〜２２時間、行い；疎水性相互作用クロマトグラフィー（Ｐｈｅｎｙｌ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ高速フローカラム；１Ｍの硫酸アンモニウム、１０ｍＭのリン酸緩衝液（ｐＨ７．２）；硫酸アンモニウムを含まない緩衝液を添加することによる溶出）を使用して、結合体を精製するさらなる工程を、結合と限外濾過の工程との間に挿入し；そして限外濾過は１０ｋＤａのカットオフを使用した。
【０１４４】
血清群Ｗ１３５およびＹについて、以下を除いて本質的に血清群Ａについてと同様のプロセスを使用した：最初の加水分解により２０のａｖＤＰを得た；１２：１の過剰なモル濃度の糖。
【０１４５】
これらのプロセスによって、１μｇ未満の非結合体化キャリアレベル（５０μｇの総ＣＲＭ１９７含有量に対して測定される）が、各々の結合体について慣習的に達成され得る。
【０１４６】
４種のバルク結合体が、本発明の組成物を得るために組み合わされ得る。
【０１４７】
臨床的試験Ｖ５９Ｐ２において、１２〜１６ヶ月齢の６２０人の被験体によって、５種のこれらの混合された結合体の処方物の試験が、フィンランドおよびドイツで実施された。各血清群の糖についての用量を、０．５ｍｌの用量あたりの糖の質量（μｇ）として表し、混合および希釈後は以下の通りであった：
【表Ｂ】
【０１４８】
上記ワクチンは、リン酸アルミニウムアジュバントを含んだ［８］。非結合体化ＣＲＭ１９７は、上記ワクチンにおいて２μｇ／ｍｌ未満で存在した。
【０１４９】
被験体はゼロ時に注射を受け、次いで、被験体の２５％は、４週間後、ワクチンの第２回目の投与を受けた。
【０１５０】
患者の血清を、ワクチン投与の１ヶ月後、回収し、ヒト補体を用いて各血清群由来のＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓに対するＳＢＡアッセイにおいて試験した。ゼロ時の血清と比較して、ＳＢＡ力価の増加が評価された（基準は、１：４より大きい、および１：８より大きい）。抗カプセル力価（ＧＭＴ）もまた、各血清群について測定した。結果を、以下の表１に示す。
【０１５１】
このように、三価および四価のワクチンは両方、幼児において免疫原性であった。上記結合体は、結合体あたり２．５μｇ程度の低い糖の用量で免疫原性である。この免疫応答は、追加免疫可能であり、第２回目の投与の後に大きくＳＢＡ力価が増加する。キャリア抑制の証拠は、この試験において見られなかった。
【０１５２】
本発明は、例示の目的のみで上記に記載されており、本発明の範囲および精神内にとどまりつつ、改変がなされ得ることが、理解されるべきである。
【０１５３】
【表１】
（参考文献（これらの内容は、本明細書中に参考として援用される））
【０１５４】
【数１】
【０１５５】
【数２】
【０１５６】
【数３】
【０１５７】
【数４】
【技術分野】
【０００１】
本明細書において引用される全ての文献は、その全体が参考として援用される。
【０００２】
（技術分野）
本発明は、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓに対するワクチンに関する。詳細には、本発明は、複数の髄膜炎菌血清群に由来する結合体化莢膜糖に基づくワクチンに関する。
【背景技術】
【０００３】
生体の莢膜多糖に基づいて、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの１２種の血清群が同定されている（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、２９Ｅ、Ｗ１３５、Ｘ、Ｙおよび Ｚ）。血清群Ａは、サハラ以南のアフリカにおける伝染病に最も多く関連する病原である。血清群ＢおよびＣは、米国およびほとんどの先進国における大部分の症例の原因である。血清群Ｗ１３５およびＹは、米国および先進国の残りの症例の原因である。
【０００４】
血清群Ａ＋Ｃ由来の莢膜多糖の二価ワクチンは、Ｍｅｎｃｅｖａｘ ＡＣTM製品として利用可能である。血清群Ａ＋Ｃ＋Ｙ＋Ｗ１３５由来の糖の４価混合物は、Ｍｅｎｃｅｖａｘ ＡＣＷＹTMおよびＭｅｎｏｍｕｎｅTM製品として利用可能である（非特許文献１〜３）［参考文献１〜３］。これらのワクチンは、青年および成人に有効であるが、弱い免疫応答および短い防御持続時間しか誘導しない。なぜなら、非結合体化多糖は、追加免疫され得ない弱い免疫応答を誘導するＴ細胞非依存性抗原であるからである。
【０００５】
この莢膜糖の弱い免疫に対処するため、糖がキャリアタンパク質に結合された結合体化ワクチンが開発された。血清群Ｃに対する結合体化ワクチンは、ヒトへの使用が承認されており、そしてこのワクチンとしては、ＭｅｎｊｕｇａｔｅTM（非特許文献４）［参考文献４］、ＭｅｎｉｎｇｉｔｅｃTMおよびＮｅｉｓＶａｃ−ＣTMが挙げられる。血清群Ａ＋Ｃ由来の結合体の混合物がまた試験され（非特許文献５〜６）［参考文献５〜６］、そして血清群Ａ＋Ｃ＋Ｗ１３５＋Ｙ由来の結合体の混合物が報告されている（特許文献１〜２、非特許文献７〜８）［参考文献７〜１０］。
上記混合された結合体化ワクチンは、混合された糖ワクチンに類似しているが、いくつかの重要な違いが存在する。特に、結合体混合物中におけるキャリアタンパク質の含有は、特に、キャリア誘導性エピトープ抑制（または、一般的に知られているように、「キャリア抑制」）に関して、新たな危険性を提示する。キャリア誘導性エピトープ抑制とは、すなわち、キャリアタンパク質による動物の免疫が、その動物が、そのキャリアタンパク質上に提示される抗原エピトープに対する免疫応答を後に誘発することを防げる現象である（非特許文献９）［参考文献１１］。この問題は、同じキャリアタンパク質を有する複数の結合体が同時に投与される場合に特に懸念される（非特許文献１０）［参考文献１２］。
キャリア抑制は、一価髄膜炎菌結合体について調べられており（非特許文献１１）［参考文献１３］、混合型髄膜炎菌結合体に関するいくつかの研究が存在する。例えば、非特許文献１２［参考文献１４］は、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓの線毛（ｆｉｍｂｒｉａｅ）が多価結合体化ワクチンにおけるキャリア抑制を回避するためにキャリアとして使用されるべきであることを示唆し、そして特許文献３［参考文献１５］は、キャリア抑制がワクチンにおいて１つより多くの型のキャリアタンパク質（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅプロテインＤおよび／または破傷風トキソイド（Ｔｔ）が好ましい）を使用することによって対処されるはずであることを示唆する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】国際公開第０２／０５８７３７号パンフレット
【特許文献２】国際公開第０３／００７９８５号パンフレット
【特許文献３】国際公開第０２／００２４９号パンフレット
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｂａｋｌａｉｃら、「Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．」、１９８３年、第４２巻、ｐ．５９９−６０４
【非特許文献２】Ａｒｍａｎｄら、「Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｓｔａｎｄ．」、１９８２年、第１０巻、ｐ．３３５−３３９
【非特許文献３】Ｃａｄｏｚら、「Ｖａｃｃｉｎｅ」、１９８５年、第３巻、ｐ．３４０−３４２
【非特許文献４】Ｊｏｎｅｓ、「Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｉｎｖｅｓｔｉｇ Ｄｒｕｇｓ」、２００１年、第２巻、ｐ．４７−４９
【非特許文献５】Ｃｏｓｔａｎｔｉｎｏら、「Ｖａｃｃｉｎｅ」、１９９２年、第１０巻、ｐ．６９１−８
【非特許文献６】Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら、「ＪＡＭＡ」、１９９６年、第２７５巻、ｐ．１４９９−５０３
【非特許文献７】Ｒｅｎｎｅｌｓら、「Ｐｅｄｉａｔｒ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ Ｊ」、２００２年、第２１巻、ｐ．９７８−９７９
【非特許文献８】Ｃａｍｐｂｅｌｌら、「Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ」、２００２年、第１８６巻、ｐ．１８４８−１８５１
【非特許文献９】Ｈｅｒｚｅｎｂｅｒｇら、「Ｎａｔｕｒｅ」、１９８０年、第２８５巻、ｐ．６６４−６６７
【非特許文献１０】Ｄａｇａｎら、「Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ」、１９９８年、第６６巻、ｐ．２０９３−２０９８
【非特許文献１１】Ｂｕｒｒａｇｅら、「Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ」、２００２年、第７０巻、ｐ．４９４６−４９５４
【非特許文献１２】Ｒｅｄｄｉｎら、「ＦＥＭＳ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ」、２００１年、第３１巻、ｐ．１５３−１６２
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
複数の髄膜炎菌血清群由来の結合体化莢膜糖を含有するが、キャリア誘導性エピトープ抑制の危険を回避する、さらなるワクチンを提供することが、本発明の目的である。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
（発明の開示）
キャリア抑制を回避するための上記特許文献３において示唆されるアプローチ（すなわち、１つより多くの型の異なるキャリアタンパク質の使用）に対して、本発明は、複数の結合体に対して同じ型のキャリアタンパク質（「共通キャリア」）を使用する。このことは、商業的規模でのワクチンの製造を簡略化する。しかし、共通キャリアを選択することビよって、キャリア抑制の可能性は増加する。ワクチンは、一般的に、別個の濃縮されたバルクに調製された個々の結合体を混合することによって調製される。そして各バルクは、通常、結合体化反応からの残りの量の非結合体化キャリアタンパク質を含む。非結合体化キャリアは、キャリア抑制を生じ得、そして各濃縮されたバルクがχ量の非結合体化キャリアを含む場合、４価混合物は、４χ量の非結合体化キャリアを含む。キャリア抑制が、特定の閾値のキャリアが存在する場合のみ（例えば、非結合体化キャリアのレベルが、関連するＢ細胞および／もしくはＴ細胞を飽和するに十分高い場合のみ、または非結合体化キャリアのレベルが、関連するＴサプレッサ細胞を刺激するに十分高い場合のみ）に見られる場合、たとえ、各個別の結合体のレベルが閾値より低く、単独で投与された場合には抑制を引き起こし得ないとしても、４χ量レベルの抑制が生じ得る。
【００１０】
したがって、多価ワクチンのための共通キャリアの選択は、一価ワクチンと比較した場合、または異なるキャリアタンパク質を使用する結合体と比較した場合、キャリア抑制の危険性を顕著に増加させる。この危険性の増加を補償するため。本発明は、ワクチン中の非結合体化キャリアタンパク質の量を制御する。キャリア抑制の可能性は、髄膜炎菌の糖に対して使用されるキャリアタンパク質の性質に注目することによって、非特許文献１１〜１２および特許文献３において対処されるが、本発明は、代わりに、使用されるキャリアタンパク質の量、より詳細には、非結合体化形態で存在する量に注目する。ワクチン中の非結合体化キャリアタンパク質の量を最小限にすることによって、共通キャリアが使用される場合であっても、キャリア抑制は回避され得る。
【００１１】
結合体化ワクチン中に非結合体化キャリアタンパク質を含有することは、以前に考慮されている［１６］が、この以前の研究における非結合体化キャリアタンパク質（破傷風トキソイド）の濃度は、約１０Ｌｆ／用量であった。０．５ｍｌの用量では、換算係数１Ｌｆ＝３μｇを使用すると［１２］、これらのワクチンは、約６０μｇ／ｍｌの非結合体化キャリアタンパク質を含有した。引用文献１６は、キャリア抑制の回避に関心を払わなかった。
【００１２】
したがって、本発明は、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓによって引き起こされる疾患に対して患者を免疫するための組成物を提供する。この組成物は、以下のうちの少なくとも２つを含有する：（ａ）（ｉ）血清群ＡのＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの莢膜糖と（ｉｉ）キャリアタンパク質との結合体；（ｂ）（ｉ）血清群ＣのＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの莢膜糖と（ｉｉ）キャリアタンパク質との結合体；（ｃ）（ｉ）血清群Ｗ１３５のＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの莢膜糖と（ｉｉ）キャリアタンパク質との結合体；（ｄ）（ｉ）血清群ＹのＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの莢膜糖と（ｉｉ）キャリアタンパク質との結合体。この組成物は、（１）上記結合体（ａ）、（ｂ）、（ｃ）および（ｄ）のうちの少なくとも２つは、同じキャリアタンパク質（「共通キャリア」）を使用し、そして（２）この組成物は、上記共通キャリアを非結合体化形態で含有し、ここで、この非結合体化共通キャリアの濃度は、１０μｇ／ｍｌ未満である、という特徴を有する。
【００１３】
本発明はまた、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓによって引き起こされる疾患に対して患者を免疫するための組成物を調製するためのプロセスを提供する。このプロセスは、以下の工程を包含する：
（１）以下のうちの少なくとも２つ：（ａ）（ｉ）血清群ＡのＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの莢膜糖と（ｉｉ）キャリアタンパク質との結合体；（ｂ）（ｉ）血清群ＣのＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの莢膜糖と（ｉｉ）キャリアタンパク質との結合体；（ｃ）（ｉ）血清群Ｗ１３５のＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの莢膜糖と（ｉｉ）キャリアタンパク質との結合体；（ｄ）（ｉ）血清群ＹのＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの莢膜糖と（ｉｉ）キャリアタンパク質との結合体、を調製する工程であって、上記結合体（ａ）、（ｂ）、（ｃ）および（ｄ）のうちの少なくとも２つは、同じキャリアタンパク質（「共通キャリア」）を使用する、工程；ならびに
（２）（１）において調製された少なくとも２つの結合体を混合して、上記共通キャリアを非結合体化形態で含有する組成物を得る工程であって、ここで、この非結合体化共通キャリアの濃度が１０μｇ／ｍｌ未満である、工程。
【００１４】
このプロセスは、非結合体化共通キャリアの量を測定する１以上の工程を包含し得る。このような測定は、混合の前の個々の結合体において実施され得、そして／または混合後の混ぜ合わされた結合体において実施され得る。個々の結合体は、このような測定の結果に基づいて、混合に関して排除され得るか、または選択され得、そして最終組成物は、同様に、このような測定の結果に基づいて、医師への販売に関して排除され得るか、または選択され得る。
【００１５】
本発明はまた、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓによって引き起こされる疾患に対して患者を免疫するための組成物を調製するためのプロセスを提供する。このプロセスは、以下の工程を包含する：
（ａ）Ａ、Ｃ、Ｗ１３５およびＹからなる群より、ｎ種の異なる髄膜炎菌血清群を選択し（ここで、ｎの値は、２、３もしくは４である）；（ｂ）このｎ種の選択された血清群の各々に対して、以下：（ｉ）その血清群由来の莢膜糖と（ｉｉ）キャリアタンパク質との結合体を調製する工程であって、ここで、上記ｎ種の結合体の各々は、同じキャリアタンパク質（「共通キャリア」）を使用する、工程；ならびに（ｃ）工程（ｂ）において調製された上記ｎ種の結合体を混合して、非結合体化形態の上記共通キャリアを含む組成物を得る工程であって、ここで、この非結合体化された共通キャリアの濃度は、１０μｇ／ｍｌ未満である、工程。好ましくは、ｎの値は４であり、これによって本発明は、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓによって引き起こされる疾患に対して患者を免疫するための組成物を調製するためのプロセスを提供する。このプロセスは、以下の工程を包含する：（ａ）髄膜炎菌血清群Ａ、Ｃ、Ｗ１３５およびＹの各々について、（ｉ）これらの血清群由来の莢膜糖と（ｉｉ）キャリアタンパク質との結合体を調製する工程であって、上記４種の結合体の各々は、同じキャリアタンパク質を使用する、工程；ならびに（ｂ）これらの結合体を混合して、非結合体化形態の共通キャリアを含有する組成物を得る工程であって、この非結合体化共通キャリアの濃度は、１０μｇ／ｍｌ未満である、工程。
【００１６】
上記のように、このプロセスは、工程（ｂ）における混合の前および／または後に、非結合体化共通キャリアの量を測定する１以上の工程を包含し得る。
本発明は例えば、以下の項目を提供する：
（項目１）
Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓによって引き起こされる疾患に対して患者を免疫するための組成物であって、該組成物は、以下：
（ａ）（ｉ）血清群ＡのＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの莢膜糖と（ｉｉ）キャリアタンパク質との結合体；
（ｂ）（ｉ）血清群ＣのＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの莢膜糖と（ｉｉ）キャリアタンパク質との結合体；
（ｃ）（ｉ）血清群Ｗ１３５のＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの莢膜糖と（ｉｉ）キャリアタンパク質との結合体；
（ｄ）（ｉ）血清群ＹのＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの莢膜糖と（ｉｉ）キャリアタンパク質との結合体、
のうちの少なくとも２つを含有し、
以下：（１）該結合体（ａ）、（ｂ）、（ｃ）および（ｄ）のうちの少なくとも２つは、同じキャリアタンパク質（「共通キャリア」）を使用し、そして、（２）該組成物は、該共通キャリアを非結合体化形態で含有し、ここで、該非結合体化共通キャリアの濃度は、１０μｇ／ｍｌ未満である、
という特徴を有する、組成物。
（項目２）
血清群ＡおよびＣの両方に由来する結合体を含有する、項目１に記載の組成物。
（項目３）
血清群Ａ、Ｃ、Ｗ１３５およびＹの全てに由来する結合体を含有する、項目１または２に記載の組成物。
（項目４）
前記髄膜炎菌結合体の各々が、ジフテリアトキソイド；破傷風トキソイド；ＣＲＭ１９７；およびＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ由来のプロテインＤから選択される共通キャリアに結合体化されている、項目１〜３のいずれかに記載の組成物。
（項目５）
前記共通キャリアが、ジフテリアトキソイドである、項目４に記載の組成物。
（項目６）
前記共通キャリアが、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅのプロテインＤである、項目４に記載の組成物。
（項目７）
前記各血清群の糖の質量が、２μｇと１０μｇとの間である、項目１〜６のいずれかに記載の組成物。
（項目８）
前記各血清群の糖の質量が、互いの±１０％以内である、項目１〜７のいずれかに記載の組成物。
（項目９）
前記非結合体化共通キャリアの濃度が、２μｇ／ｍｌ未満である、項目１〜８のいずれかに記載の組成物。
（項目１０）
前記組成物中の共通キャリアの全体での濃度が、１００μｇ／ｍｌ未満である、項目１〜９のいずれかに記載の組成物。
（項目１１）
筋肉内注射のために処方されている、項目１〜１０のいずれかに記載の組成物。
（項目１２）
水酸化アルミニウムアジュバントおよび／またはリン酸アルミニウムアジュバントをさらに含有する、項目１〜１１のいずれかに記載の組成物。
（項目１３）
前記組成物が、水銀物質を全く含まない、項目１〜１２のいずれかに記載の組成物。
（項目１４）
項目１〜１３のいずれかに記載の組成物であって、以下のさらなる抗原：
（ｉ）Ｂ型Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ由来の結合体化された莢膜糖；
（ｉｉ）Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来の結合体化された莢膜糖；
（ｉｉｉ）Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ 血清群Ｂ由来のタンパク質抗原；
（ｉｖ）ジフテリア抗原；
（ｖ）破傷風抗原；
（ｖｉ）細胞性百日咳抗原もしくは全細胞百日咳抗原；
（ｖｉｉ）１種以上の無細胞百日咳抗原；
（ｖｉｉｉ）Ｂ型肝炎ウイルス由来の抗原；
（ｉｘ）１種以上のポリオウイルス抗原；
（ｘ）Ａ型肝炎ウイルス由来の抗原
のうちの１つ以上をさらに含有する、組成物。
（項目１５）
水性形態である、項目１〜１４のいずれかに記載の組成物。
（項目１６）
凍結乾燥形態である、項目１〜１５のいずれかに記載の組成物。
（項目１７）
糖アルコールまたはショ糖を含有する、項目１〜１６のいずれかに記載の組成物。
（項目１８）
項目１〜１７のいずれかに記載の組成物を含有する、バイアル。
（項目１９）
項目１〜１８のいずれかに記載の組成物を含有する、シリンジ。
（項目２０）
項目１〜１５のいずれか１項に記載の組成物を調製するためのキットであって、該キットは、少なくとも１種の凍結乾燥形態の髄膜炎菌結合体と少なくとも１種の水性形態の髄膜炎菌結合体とを備える、キット。
（項目２１）
項目１〜１５のいずれか１項に記載の組成物を調製するためのキットであって、該キットは、（ｉ）項目１５に記載の凍結乾燥組成物；および（ｉｉ）水性物質、を備え、該キットの構成要素（ｉｉ）は、水性組成物を提供するために、該構成要素（ｉ）を再構成するためのものである、キット。
（項目２２）
キットであって、以下：項目１〜１７のいずれか１項に記載の組成物；および（ｉｉ）項目１４に規定される抗原（ｉ）〜（ｘ）の１つ以上を含有する組成物、を備える、キット。
（項目２３）
Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓによって引き起こされる疾患に対して患者を免疫するための組成物を調製するためのプロセスであって、該プロセスは、以下の工程：
（１）以下のうちの少なくとも２つ：
（ａ）（ｉ）血清群ＡのＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの莢膜糖と（ｉｉ）キャリアタンパク質との結合体；
（ｂ）（ｉ）血清群ＣのＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの莢膜糖と（ｉｉ）キャリアタンパク質との結合体；
（ｃ）（ｉ）血清群Ｗ１３５のＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの莢膜糖と（ｉｉ）キャリアタンパク質との結合体；
（ｄ）（ｉ）血清群ＹのＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの莢膜糖と（ｉｉ）キャリアタンパク質との結合体、
を調製する工程であって、
該結合体（ａ）、（ｂ）、（ｃ）および（ｄ）のうちの少なくとも２つは、同じキャリアタンパク質（「共通キャリア」）を使用する、工程；ならびに
（２）（１）において調製された少なくとも２つの結合体を混合して、該共通キャリアを非結合体化形態で含有する組成物を得る工程であって、ここで、該非結合体化共通キャリアの濃度が１０μｇ／ｍｌ未満である、工程、
を包含する、プロセス。
（項目２４）
Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓによって引き起こされる疾患に対して患者を免疫するための組成物を調製するためのプロセスであって、該プロセスは、以下の工程：
（１）Ａ、Ｃ、Ｗ１３５およびＹからなる群より、ｎ種の異なる髄膜炎菌血清群を選択し、そして該ｎ種の選択された血清群の各々に対して、以下：（ｉ）該血清群由来の莢膜糖と（ｉｉ）キャリアタンパク質との結合体を調製する工程であって、ここで、ｎの値は、２、３もしくは４であり、該ｎ種の結合体の各々は、同じキャリアタンパク質（「共通キャリア」）を使用する、工程；ならびに
（２）工程（１）において調製された該ｎ種の結合体を混合して、非結合体化形態の該共通キャリアを含む組成物を得る工程であって、ここで、該非結合体化された共通キャリアの濃度は、１０μｇ／ｍｌ未満である、工程
を包含するプロセス。
（項目２５）
前記ｎの値が２または４である、項目２４に記載のプロセス。
（項目２６）
前記非結合体化共通キャリアの量を測定する１以上の工程をさらに包含する、項目２３〜２５のいずれか１項に記載のプロセス。
（項目２７）
前記結合体を混合する工程の前に測定する工程を包含し、および／または該結合体を混合する工程の後に測定する工程を包含する、項目２６に記載のプロセス。
（項目２８）
ワクチン製造および／またはヒト投与のための組成物の適合性を評価するためのプロセスであって、以下：
項目２３〜２７のいずれか１項の（１）および（２）を実行する工程を包含し、そして
（３）該組成物中の非結合体化共通キャリアの濃度を測定する工程と、（４−ｉ）該非結合体化キャリアの濃度が＜１０μｇ／ｍｌである場合、該組成物をワクチン製造および／もしくはヒトへの投与について許容する工程；または（４−ｉｉ）該非結合体化キャリアの濃度が≧１０μｇ／ｍｌである場合、該組成物を排除する工程のいずれかとを、さらに包含する、プロセス。
【００１７】
（結合体）
結合体化は、糖の免疫原性を増強するために使用される。なぜなら、結合体化は、糖をＴ細胞非依存性抗原からＴ細胞依存性抗原へと変換して免疫学的記憶をプライミングさせるからである。結合体化は、小児用ワクチンにとって特に有用であり（例えば、参考文献１７）、そして公知の技術である（例えば、参考文献１８〜２７）。
【００１８】
本発明の組成物は、以下の髄膜炎菌結合体のうちの少なくとも２つ（すなわち、２、３、または４）を含む：（ａ）（ｉ）血清群ＡのＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの莢膜糖と（ｉｉ）キャリアタンパク質との結合体；（ｂ）（ｉ）血清群ＣのＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの莢膜糖と（ｉｉ）キャリアタンパク質との結合体；（ｃ）（ｉ）血清群Ｗ１３５のＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの莢膜糖と（ｉｉ）キャリアタンパク質との結合体；（ｄ）（ｉ）血清群ＹのＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの莢膜糖と（ｉｉ）キャリアタンパク質との結合体。
【００１９】
これらの結合体のうち、少なくとも２つ（すなわち、２、３、または４）が、共通のキャリアタンパク質を使用する。これは、単一の結合体分子が１つより多くの血清群由来の糖を含むことを意味しない（参考文献２８および２９を参照のこと）。むしろ、単一の結合体分子は、単一の血清群の糖を保有するが、同じ型のキャリアタンパク質が、各々の異なる血清群に対して使用される。単一の結合体分子内に１つより多くの型の糖（例えば、異なる長さのフラグメント）が存在し得るが、これらは、単一の血清群に由来する。共通キャリアを使用する例として、タンパク質のサンプルは、４つに分割され得、４分割の各々は、単一の血清群に由来する莢膜糖フラグメントを使用する結合体を調製するために使用され、そしてこれらの結合体は、混合されて、共通キャリアを含む４価結合体を生成し得る。
【００２０】
莢膜糖は、髄膜炎菌の血清群Ａ、Ｃ、Ｗ１３５およびＹから選択され、その結果、組成物はこれら４種の血清群のうちの２種、３種または４種全て由来の糖を含む。特定の組成物は、血清群ＡおよびＣ；血清群ＡおよびＷ１３５；血清群ＡおよびＹ；血清群ＣおよびＷ１３５；血清群ＣおよびＹ；血清群Ｗ１３５およびＹ；血清群ＡおよびＣおよびＷ１３５；血清群ＡおよびＣおよびＹ；血清群ＡおよびＷ１３５およびＹ；血清群ＣおよびＷ１３５およびＹ；血清群ＡおよびＣおよびＷ１３５およびＹ由来の糖を含む。少なくとも血清群Ｃを含む組成物（例えば、ＡおよびＣ）が好ましく、全４種の血清群由来の糖を含む組成物が最も好ましい。
【００２１】
これら４種の血清群の各々の莢膜糖は、良く特徴付けられている。血清群Ａ髄膜炎菌の莢膜糖は、Ｃ３位とＣ４位とに部分的なＯ−アセチル化を有する、（ａ１(R)６）連結型Ｎ−アセチル−Ｄ−マンノサミン−１−リン酸のホモポリマーである。このアセチル基は、加水分解を防止するブロック基（ｂｌｏｃｋｉｎｇ ｇｒｏｕｐ）により置換され得［３０］、そして、このような修飾糖は、依然として本発明の意味の範囲内の血清群Ａ糖である。血清群Ｃの莢膜糖は、（ａ２→９）連結型シアル酸（Ｎ−アセチルノイラミン酸または「ＮｅｕＮＡｃ」）のホモポリマーである。大半の血清群Ｃ株は、シアル酸残基のＣ−７および／またはＣ−８においてＯ−アセチル基を有するが、臨床単離物のうちの約１５％は、これらのＯ−アセチル基を欠いている［３１、３２］。糖の構造は、→９）−Ｎｅｕ ｐ ＮＡｃ ７／８ ＯＡｃ−（ａ２→のように記載される。血清群Ｗ１３５糖は、シアル酸−ガラクトース二糖単位のポリマーである。血清群Ｃ糖と同様に、これは種々のＯ−アセチル化を有するが、それはシアル酸の７位と９位におけるものである［３３］。この構造は、→４）−Ｄ−Ｎｅｕｐ５Ａｃ（７／９ＯＡｃ）−ａ−（２→６）−Ｄ−Ｇａｌ−ａ−（１→のように記載される。血清群Ｙ糖は、二糖の反復単位がガラクトースの代わりにグルコースを含むことを除いて、血清群Ｗ１３５糖に類似する。血清群Ｗ１３５と同様に、これは、シアル酸の７位と９位における種々のＯ−アセチル化を有する［３３］。血清群Ｙの構造は、→４）−Ｄ−Ｎｅｕｐ５Ａｃ（７／９ＯＡｃ）−ａ−（２→６）−Ｄ−Ｇｌｃ−ａ−（１→のように記載される。
【００２２】
本発明にしたがって使用される糖は、先に記載されるように（例えば、天然の莢膜糖に見られるのと同じＯ−アセチル化パターンにより）Ｏ−アセチル化され得るか、またはこれらは、糖の環の１つ以上の位置において、部分的にか、もしくは完全に脱Ｏ−アセチル化され得るか、またはこれらは、天然の莢膜糖と比較して、過剰にＯ−アセチル化され得る。
【００２３】
本発明にしたがって使用される糖は、好ましくは細菌において見られる天然の莢膜糖よりも短い。したがって、糖は、好ましくは、連結前ではなく精製後に生じる脱重合により、脱重合される。脱重合は、糖の鎖長を短くする。好ましい脱重合方法は、過酸化水素の使用を含む［７］。過酸化水素は、糖に添加され（例えば、１％の最終Ｈ２Ｏ２濃度を与える）、次に、この混合物が、所望の鎖長の短縮が達成されるまで、インキュベートされる（例えば、約５５℃で）。別の脱重合方法は、酸加水分解を含み［８］、本発明の結合体における、好ましく脱重合化された糖は、以下の範囲の平均重合度を有する：Ａ＝１０−２０；Ｃ＝１２−２２；Ｗ１３５＝１５−２５；Ｙ＝１５−２５。他の脱重合方法は、当業者にとって公知である。本発明にしたがう使用のための結合体を調製するのに使用される糖は、脱重合方法のいずれかにより入手可能であり得る。脱重合は、免疫抗原性のための至適鎖長を提供するために、および／または、糖の物理的管理可能性のために鎖長を短くするために、使用され得る。
【００２４】
結合体における使用のための代表的なキャリアタンパク質は、通常トキソイド形態（例えば、不活性化化学薬品（例えば、ホルマリンまたはホルムアルデヒド）による処理によって取得される）にある、細菌毒素（例えば、ジフテリア毒素［例えば、参考文献３４の第１３章；参考文献３５〜３８を参照のこと］（または、そのＣＲＭ１９７変異体［３９〜４２］）および破傷風毒素）である。他の適切なキャリアタンパク質としては、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ外膜タンパク質［４３］、合成ペプチド［４４、４５］、熱ショックタンパク質［４６、４７］、百日咳タンパク質［４８、４９］、サイトカイン［５０］、リンホカイン［５０］、ホルモン［５０］、増殖因子［５０］、種々の病原体由来の抗原からの複数のヒトＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープを含む人工タンパク質［５１］、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ由来のプロテインＤ［５２〜５４］、ニューモリシン（ｐｎｅｕｍｏｌｙｓｉｎ）［５５］、肺炎球菌表面タンパク質ＰｓｐＡ［５６］、鉄取り込みタンパク質（ｉｒｏｎ−ｕｐｔａｋｅ ｐｒｏｔｅｉｎ）［５７］、Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ由来の毒素Ａまたは毒素Ｂ［５８］などが挙げられる。
【００２５】
共通キャリアとしての使用のための、４種の特に好ましいキャリアタンパク質は、ジフテリアトキソイド（Ｄｔ）、破傷風トキソイド（Ｔｔ）、ＣＲＭ１９７およびＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ由来のプロテインＤである。これらのタンパク質は、小児ワクチンにおける使用において、現在主要なキャリアであり、例えば、他のワクチンより早い投与か、それと同時の投与か、またはそれより遅い投与から、最もキャリア抑制の危険にあるキャリアであるので、好ましい。ＤｔおよびプロテインＤは、現在の小児ワクチンにおいて、ＣＲＭ１９７およびＴｔよりも少ない頻度で使用される（例えば、ＧＳＫ由来のＨｉｂ結合体はキャリアとしてＴｔを使用する、ＨｉｂＴＩＴＥＲＴＭ製品はＣＲＭ１９７を使用する、ＰｒｅｖｅｎａｒＴＭにおける肺炎球菌結合体はＣＲＭ１９７を使用する、ＭｅｎｊｕｇａｔｅＴＭ製品およびＭｅｎｉｎｇｉｔｅｃＴＭ製品はＣＲＭ１９７を使用する、ならびにＮｅｉｓＶａｃ−ＣＴＭはＴｔを使用する）ので、これらのタンパク質は最も好ましい共通キャリアである。したがって、キャリア抑制の危険をさらに最小限にするために、ＤｔおよびＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅプロテインＤが、共通キャリアとして使用される。
【００２６】
結合体は、好ましくは、実質的に１：１：１：１の比率（糖の質量として測定される）を与えるように混合される（例えば、各々の血清群の糖の質量は、互いに±１０％の範囲内である）。組成物中の、血清群あたりの髄膜炎菌抗原の代表的な量は、１μｇと２０μｇとの間（例えば、血清群あたり２μｇと１０μｇとの間、または約４μｇ）である。１：１：１：１の比率に対する代替的な方法として、２倍の血清群Ａ用量が使用され得る（２：１：１：１）。
【００２７】
１：１５（すなわち、タンパク質過剰）と１５：１（すなわち、糖過剰）との間（好ましくは、１：５と５：１との間）の糖：タンパク質比（ｗ／ｗ）を有する結合体が好ましい。過剰のキャリアタンパク質が好ましい。特にキャリアがＤｔの場合、約１：１２または約１：３の糖：タンパク質比を有する結合体が好ましい。
【００２８】
任意の適切な結合体化反応が、必要に応じて任意の適切なリンカーを用いて、使用され得る。
【００２９】
糖は、代表的に、結合体化より先に活性化されるか、または官能化させる。活性化は、例えば、シアン化試薬［５９、６０など］を含み得る。他の適切な技術は、活性エステル、カルボジイミド、ヒドラジド、ノルボラン（ｎｏｒｂｏｒａｎｅ）、ｐ−ニトロ安息香酸、Ｎ−ヒドロキシスクシニミド、Ｓ−ＮＨＳ、ＥＤＣ、ＴＳＴＵ（参考文献２４の序論もまた参照のこと）を使用する。
【００３０】
リンカー基を介する連結は、任意の公知の手順（例えば、参考文献６１および参考文献６２に記載される手順）を使用して作製され得る。連結の１つの型は、多糖の還元的アミノ化を伴い、生じるアミノ基とアジピン酸リンカー基の一端とを連結し、次いで、アジピン酸リンカー基の他の末端にタンパク質を連結する［２２、６３、６４］。他のリンカーとしては、Ｂ−プロピオンアミド［６５］、ニトロフェニル−エチルアミン［６６］、ハロアシルハロゲン化物［６７］、グリコシド連結［６８］、６−アミノカプロン酸［６９］、ＡＤＨ［７０］、Ｃ４〜Ｃ１２部分［７１］などが挙げられる。リンカーを使用することに対する代替的な方法として、直接連結が使用され得る。タンパク質への直接連結は、例えば、参考文献７２および参考文献７３に記載されるように、タンパク質との還元的アミノ化の前に、多糖の酸化を含み得る。
【００３１】
好ましい結合体化プロセスは、以下を包含する：糖へのアミノ基の導入（例えば、−ＮＨ２による末端（＝Ｏ基）の置換によって）、それに続くアジピン酸ジエステル（例えば、アジピン酸Ｎ−ヒドロキシスクシニミドジエステル）による誘導体化およびキャリアタンパク質（例えば、ＣＲＭ１９７）との反応。この結合体化方法のさらなる詳細は、参考文献８に見出され得る。この方法によって入手可能な結合体は、本発明にしたがう使用のために好ましい結合体である。
【００３２】
別の好ましい結合体化プロセスにおいて、糖は、アジピン酸ジヒドラジドと反応させられる。血清群Ａに対して、カルボジイミド（ＥＤＡＣ）もまた、この段階において添加され得る。反応時間後、シアノホウ化水素ナトリウムが添加される。次いで、誘導体化された糖が、例えば、限外濾過によって調製され得る。それから、誘導体化された糖が、キャリアタンパク質（例えば、ジフテリアトキソイド）と混合され、そしてカルボジイミドが添加される。反応時間後、結合体が回収され得る。この結合方法のさらなる詳細は、参考文献８に見出され得る。この方法により入手可能な結合体は、本発明にしたがう使用のために好ましい結合体（例えば、ジフテリアトキソイドキャリアとアジピン酸リンカーとを含む結合体）である。
【００３３】
別の好ましい結合体化プロセスにおいて、糖は、シアン化試薬により誘導体化され［６０］、続いて、リンカーを使用する必要なく、タンパク質（直接か、またはキャリアへのチオール求核基またはヒドラジド求核基の導入後）に連結される。適切なシアン化試薬としては、テトラフルオロホウ酸１−シアノ−４−（ジメチルアミノ）−ピリジニウム（「ＣＤＡＰ」）、ｐ−ニトロフェニルシアン酸塩およびテトラフルオロホウ酸Ｎ−シアノトリエチルアンモニウム（「ＣＴＥＡ」）が挙げられる。特にＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅプロテインＤが共通キャリアである場合、ＣＤＡＰが好ましい。直接連結が好ましい。
【００３４】
結合体は、好ましくは、個別に調製され、それから混合される。混合後、混合結合体の濃度は、例えば、無菌かつ発熱物質を含まないリン酸緩衝化生理食塩水により調整され得る。
【００３５】
共通キャリアに加えて、他のキャリアタンパク質を含む結合体が、本発明の組成物中に存在し得る。しかしながら、一般的に、組成物中の全ての髄膜炎菌結合体が同一の共通キャリアを使用することが好ましい。
【００３６】
本発明の組成物において、各々の結合体に基づくキャリア（結合体化キャリア、および非結合体化キャリア）の量は、好ましくは、各々の結合体に基づいて、１００μｇ／ｍｌ以下（例えば、＜３０μｇ／ｍｌ）のキャリアタンパク質である。好ましい組成物は、５００μｇ／ｍｌ未満（例えば、４００μｇ／ｍｌ未満、３００μｇ／ｍｌ未満、２００μｇ／ｍｌ未満、１００μｇ／ｍｌ未満、５０μｇ／ｍｌ未満など）の共通キャリアの総濃度（組み合わせた髄膜炎菌結合体のみに対してか、または好ましくは組成物全体に対してのいずれか）を含む。
【００３７】
（非結合体化共通キャリアタンパク質）
本発明の組成物は、非結合体化形態での共通キャリアを含むが、非結合体化共通キャリアは１０μｇ／ｍｌ未満で存在する。
【００３８】
したがって、例えば、結合体化条件、結合体化後の精製、結合体化後の保存条件（温度、ｐＨ、湿度などのような要因の制御により、本発明にしたがって、非結合体化共通キャリアの量が、確実に１０μｇ／ｍｌ未満に保持され、そして代表的により低く（例えば、９μｇ／ｍｌ未満、８μｇ／ｍｌ未満、７ μｇ／ｍｌ未満、６μｇ／ｍｌ未満、５μｇ／ｍｌ未満、４μｇ／ｍｌ未満、３μｇ／ｍｌ未満、２μｇ／ｍｌ未満、１μｇ／ｍｌ未満、０．５μｇ／ｍｌ未満などに）保持され得ることを確実にすることが可能である。
【００３９】
しかしながら、実施上の理由のため、キャリア抑制の問題を引き起こすことなく、わずかなアジュバント効果を提供するために、低レベルの非結合体化共通キャリアを含むことが有利である。それゆえ、本発明の組成物中の非結合体化共通キャリアの濃度は、好ましくは、≧ａ μｇ／ｍｌであるが、＜ｂ μｇ／ｍｌである。ここでｂ＞ａであり、（ｉ）ａは、０．０１、０．０５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４および５からなる群から選択され、そして（ｉｉ）ｂは、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９および１０からなる群から選択される。
【００４０】
本発明の組成物中の非結合体化キャリアは、２つの起源を有する。第一に、これは、混合される個々の結合体に由来し得る。個々の結合体は、結合体化反応由来の未反応の残留キャリアを含み得、そして結合された物質の崩壊により放出されたキャリアを含み得る。第二に、これは、混合後（例えば、組成物の保存後）の結合体の崩壊に由来し得る。非結合体化キャリアは、通常、製造中の個別の工程としての意図的に添加されない。それゆえ、組成物中の非結合体化共通キャリアの濃度は、やがて増加し得る。好ましい組成物は、全ての髄膜炎菌結合体が混合されて６時間後に測定される場合に、＜１０μｇ／ｍｌの非結合体化共通キャリアを含むものである。他の好ましい組成物は、最初の結合体混合の時点から、少なくとも１ヶ月間（例えば、２ヶ月、３ヶ月、６ヶ月、またはそれより長く）にわたって、＜１０μｇ／ｍｌの非結合体化共通キャリアを有するものである。
【００４１】
本発明のプロセスにおいて、混合される結合体は非結合体化共通キャリアを含み得、そして混合後に存在する非結合体化キャリアは、構成要素の結合体からもたらされる。本発明の組成物が、平均で、総量でｘ μｇの髄膜炎菌結合体由来の非結合体化共通キャリアとｎ個の異なる髄膜炎菌結合体を含むとすると、各々の結合体は、ｘ／ｎ μｇの非結合体化共通キャリアを与える。本発明の好ましいプロセスにおいて、組成物が、髄膜炎菌結合体に由来する、総量でｘ μｇの非結合体化共通キャリアを含むとすると、ｎ個の個々の髄膜炎菌結合体の各々の量は、ｘ／ｎの±１５％（例えば、±１０％、±７．５％または±５％）以内の非結合体化共通キャリアの量を提供するように選択される。濃度条件において、個々の結合体の各々は、好ましくは２μｇ／ｍｌ未満の非結合体化キャリアを与える。
【００４２】
組成物中の非結合体化共通キャリアは溶液中に存在し得るか、沈殿物として存在し得るか、または存在し得る任意のアジュバントに吸収され得る。
【００４３】
非結合体化キャリアのレベルは、標準的かつ公知の方法（例えば、Ｈｉｂ結合体ワクチン中の非結合体化キャリアを評価するために、以前に使用された方法）を使用して測定され得る。
【００４４】
したがって、全キャリア（または結合体化キャリア）に対する非結合体化キャリアのレベルを比較するために、一般的に、それが個別にアッセイされ得るように、結合体化キャリアから非結合体化キャリアを分離する必要がある。結合体化キャリアは、非結合体化キャリアよりも大きいので、それゆえ、このことを達成する１つの方法は、大きさにより分離すること（例えば、サイズ排除クロマトグラフィー、電気泳動など）である。代表的なキャリア（単量体形態での）のおおよそのＭＷは、ＣＲＭ１９７＝５８ｋＤａ、Ｄｔ＝６３ｋＤａ、Ｔｔ＝１５０ｋＤａ、プロテインＤ＝４２ｋＤａである。
【００４５】
非結合体化キャリアのレベルを測定する１つの方法は、非結合体化キャリアのレベルが既知量のキャリアを含む１つ以上の標準と比較されることを伴う、電気泳動分離工程を包含する。タンパク質定量化（例えば、銀染色のような染色による）後、標準に対する量が決定され得る。第三の分析もまた、並行して実行され得、ここで非結合体化キャリアのサンプルが標準と混合され、この混合物もまた先の２つのバンドと比較される。
【００４６】
非結合体化キャリアタンパク質を測定するための他の方法は、特に共通キャリアがジフテリアトキソイドである場合、キャピラリー電気泳動［７４］（例えば、遊離溶液中の）またはミセル動電クロマトグラフィー（ｍｉｃｅｌｌａｒ ｅｌｅｃｔｒｏｋｉｎｅｔｉｃ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）［７５］を含み得る。結合体とキャリアとの分解能は、分析中のホウ酸塩濃度の増大により改善され得る。
【００４７】
非結合体化キャリアレベルを測定するためのアッセイは、本発明のプロセスの間の種々の段階において実行され得る。例えば、これらは、１つ以上の個々の結合体が混合されるより前に、その１つ以上の個々の結合体に対して実行され得る、および／またはこれらは、混合後に実行され得る。本発明は、上記のように、組成物が１０μｇ／ｍｌ未満の非結合体化共通髄膜炎菌キャリアを含むことを必要とし、そしてこのレベルは、混合後に、このアッセイを実行することにより確認され得る。しかしながら、混合後にアッセイすることに対する代替的な方法として、混合前に、このアッセイが、個々の結合体に対して実行され得、次に、個々の結果が、最終レベルを算出（任意の希釈を考慮して、など）するために使用される（ただし、非結合体化キャリアの増加を引き起こさないことが公知である条件が混合において使用される）。
【００４８】
測定アッセイおよび非結合体化キャリアタンパク質の最大許容量（例えば、上記のように１０μｇ／ｍｌ）により、当業者は、任意の特定の組成物が本発明の範囲内にあるか否かをチェックし得る。さらに、非結合体化キャリアタンパク質のレベルが最大許容量より上か、または下かに基づいて、当業者は、（ａ）混合前の個々の結合体および／または（ｂ）混合後の組み合わせた結合体を、許容し得るか、または拒絶し得る。したがって、本発明は、組成物を調製するためのプロセスを提供し、このプロセスは、上記に規定される混合工程を包含する。このプロセスはさらに以下の工程を包含する：組成物中の非結合体化共通キャリアの濃度を測定する工程；そして（ｉ）非結合体化キャリアの濃度が＜１０μｇ／ｍｌである場合、さらなるワクチン製造および／もしくはヒトへの投与のためにこの組成物を許容する工程、または（ｉｉ）非結合体化キャリアの濃度が≧１０μｇ／ｍｌである場合、この組成物を拒絶する工程のいずれかの工程。
【００４９】
少量のみの共通キャリアを含むことと同様に、本発明の好ましい組成物は、同様に、少量のみの非結合体化髄膜炎菌の莢膜糖を含む。したがって、組成物は、好ましくは、２μｇ／ｍｌ（糖として測定される）以下（例えば、＜１．５μｇ／ｍｌ、＜１μｇ／ｍｌ、＜０．５μｇ／ｍｌなど）の非結合体化糖を含む。
【００５０】
（組成物）
髄膜炎菌結合体と非結合体化キャリアタンパク質とを含むことと同様に、本発明の組成物は、代表的に薬学的に受容可能なキャリアを含む。このようなキャリアとしては、それ自体は、組成物を受容する個体に有害な抗体の産生を誘導しない、任意のキャリアが挙げられる。適切なキャリアは、代表的に、大型で、ゆっくり代謝される高分子（例えば、タンパク質、多糖、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、重合体のアミノ酸、アミノ酸コポリマー、ショ糖、トレハロース、ラクトースおよび脂質凝集物（例えば、油滴またはリポソーム））である。このようなキャリアは、当業者にとって周知である。ワクチンはまた、希釈剤（例えば、水、生理食塩水、グリセロールなど）も含み得る。さらに、補助的な物質（例えば、湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝化物質など）が存在し得る。無菌かつ発熱物質を含まないリン酸緩衝化生理食塩水は、代表的なキャリアである。薬学的に受容可能なキャリアおよび賦形剤の徹底的な議論は、参考文献７６において得られる。
【００５１】
本発明にしたがって使用される組成物は、特に複数用量様式で包装される場合に、抗菌剤を含み得る。
【００５２】
本発明にしたがって使用される組成物は、界面活性剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ８０のようなＴｗｅｅｎ（ポリソルベート））を含み得る。界面活性剤は、一般的に低いレベル（例えば、＜０．０１％）で存在する。
【００５３】
本発明にしたがって使用される組成物は、張度を与えるために、ナトリウム塩（例えば、塩化ナトリウム）を含み得る。１０±２ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌの濃度が代表的である。
【００５４】
本発明にしたがって使用される組成物は、一般的に緩衝剤（例えば、リン酸緩衝剤）を含む。
【００５５】
細菌感染は身体の種々の領域に罹患し得るので、組成物は種々の形態で調製され得る。例えば、組成物は、液体の溶液または懸濁物のいずれかとして、注射可能物質として調製され得る。注射前の、液体ビヒクル中の溶液または懸濁物のために適切な固体形態もまた、調製され得る（例えば、凍結乾燥組成物）。組成物は、局所投与のために（例えば、軟膏、クリームまたは粉末として）調製され得る。組成物は、経口投与のために（例えば、錠剤もしくはカプセル、またはシロップ（必要に応じて、風味をつけられる）として）調製される。組成物は、肺投与のために（例えば、微細な粉末またはスプレーを使用する吸入器として）調製され得る。組成物は、坐剤またはペッサリーとして調製され得る。組成物は、鼻腔内投与、耳投与または眼投与のために（例えば、スプレー、ドロップ、ゲルまたは粉末として）調製され得る［例えば、参考文献７７および参考文献７８］。しかしながら、一般的に、髄膜炎菌結合体は、筋内注射のために処方される。
【００５６】
本発明にしたがって使用される組成物は、ワクチンアジュバントを含んでも、含まなくてもよい。本発明の組成物中に使用され得るアジュバントとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない。
【００５７】
（Ａ．無機質含有組成物）
本発明におけるアジュバントとしての使用のために適切な無機質含有組成物としては、無機塩（例えば、アルミニウム塩およびカルシウム塩）が挙げられる。本発明は、無機塩（例えば、水酸化物（例えば、オキシヒドロキシド）、ホスフェート（例えば、ヒドロキシホスフェート、オルトホスフェート）、スルフェートなど）［例えば、参考文献７９の第８章および第９章を参照のこと］、または異なる無機化合物の混合物を含み、上記組成物は、任意の適切な形態（例えば、ゲル、結晶、非晶質など）をとる。上記無機質含有組成物はまた、金属塩の粒子として処方され得る［８０］。
【００５８】
リン酸アルミニウムが特に好ましく、代表的なアジュバントは、１ｍｌあたり約０．６ｍｇのＡｌ３＋を含む、０．８４と０．９２との間のＰＯ４／Ａｌモル比を有する非晶質アルミニウムヒドロキシホスフェートである。低用量のリン酸アルミニウムにより吸着（例えば、１用量あたり１結合体につき５０μｇと１００μｇとの間のＡｌ３＋）が、使用され得る。
【００５９】
結合体は、存在する任意のアルミニウム塩に吸着されてもよいし、吸着されなくてもよい（または部分的に吸着されてもよい）。組成物が複数の細菌種由来の結合体を含む場合、全ての結合体が吸着される必要はない。
【００６０】
（Ｂ．油エマルジョン）
本発明におけるアジュバントとしての使用のために適切な油エマルジョン組成物としては、スクアレン−水エマルジョン（例えば、ＭＦ５９）が挙げられる［参考文献７９の第１０章；参考文献８１もまた参照のこと］（５％スクアレン、０．５％Ｔｗｅｅｎ ８０および０．５％Ｓｐａｎ ８５、マイクロフルイダイザー（ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ）を用いて、サブミクロン粒子に処方される）。完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）および不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）もまた、使用され得る。
【００６１】
（Ｃ．サポニン処方物［参考文献７９の第２２章］）
サポニン処方物もまた、本発明におけるアジュバントとして使用される。サポニンは、広範な植物種の樹皮、葉、茎、根および花においてさえ見られる、ステロールグリコシドおよびトリテルペノイドグリコシドの異種の群である。Ｑｕｉｌｌａｉａ ｓａｐｏｎａｒｉａ（モリナの木（Ｍｏｌｉｎａ ｔｒｅｅ））の樹皮由来のサポニンは、アジュバントとして広範に研究されている。サポニンはまた、Ｓｍｉｌａｘ ｏｒｎａｔａ（サルサパリラ（ｓａｒｓａｐｒｉｌｌａ））、Ｇｙｐｓｏｐｈｉｌｌａ ｐａｎｉｃｕｌａｔａ（ブライドベール（ｂｒｉｄｅｓ ｖｅｉｌ））およびＳａｐｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉａｎａｌｉｓ（サボンソウ根（ｓｏａｐ ｒｏｏｔ））から商業的に得られ得る。サポニンアジュバント処方物としては、精製された処方物（例えば、ＱＳ２１）および液体処方物（例えば、ＩＳＣＯＭ）が挙げられる。ＱＳ２１は、ＳｔｉｍｕｌｏｎＴＭとして市販される。
【００６２】
サポニン組成物は、ＨＰＬＣおよびＲＰ−ＨＰＬＣを用いて精製されている。これらの技術を用いて、特定の精製画分が同定され、これらの画分としては、ＱＳ７、ＱＳ１７、ＱＳ１８、ＱＳ２１、ＱＨ−Ａ、ＱＨ−ＢおよびＱＨ−Ｃが挙げられる。好ましくは、上記サポニンは、ＱＳ２１である。ＱＳ２１の生成方法は、参考文献８２に開示されている。サポニン処方物はまた、ステロール（例えば、コレステロール）を含み得る［８３］。
【００６３】
サポニンとコレステロールとの組み合わせが、使用され得、免疫刺激複合体（ｉｍｍｕｎｏｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｃｏｍｐｌｅｘ）（ＩＳＣＯＭ）と呼ばれる独特な粒子を形成し得る［参考文献７９の第２３章］。ＩＳＣＯＭとしてはまた、代表的に、リン脂質（例えば、ホスファチジルエタノールアミンまたはホスファチジルコリン）が挙げられる。任意の公知のサポニンが、ＩＳＣＯＭにおいて使用され得る。好ましくは、上記ＩＳＣＯＭは、ＱｕｉｌＡ、ＱＨＡおよびＱＨＣのうちの１つ以上を含む。ＩＳＣＯＭは、参考文献８３〜８５にさらに記載されている。必要に応じて、上記ＩＳＣＯＭは、さらなる洗剤を含まなくてもよい［８６］。
【００６４】
サポニンベースのアジュバントの開発の概説は、参考文献８７および８８に見られ得る。
【００６５】
（Ｄ．ビロソームおよびウイルス様粒子）
ビロソームおよびウイルス様粒子（ＶＬＰ）はまた、本発明においてアジュバントとして使用され得る。これらの構造は、一般的に、必要に応じてリン脂質と組み合わされるかまたはリン脂質とともに処方されたウイルス由来の１つ以上のタンパク質を含む。それらは、一般的に、非病原性、非複製性であり、そして、一般的に、あらゆる天然ウイルスゲノムを含まない。上記ウイルスタンパク質は、ウイルス全体から、組換え的に生成さ得るかまたは単離され得る。ビロソームまたはＶＬＰにおける使用のために適切なこれらのウイルスタンパク質としては、インフルエンザウイルス由来のタンパク質（例えば、ＨＡまたはＮＡ）、Ｂ型肝炎ウイルス由来のタンパク質（例えば、コアタンパク質またはカプシドタンパク質）、Ｅ型肝炎ウイルス由来のタンパク質、麻疹ウイルス由来のタンパク質、シンドビスウイルス由来のタンパク質、ロタウイルス由来のタンパク質、口蹄疫ウイルス由来のタンパク質、レトロウイルス由来のタンパク質、ノーウォークウイルス由来のタンパク質、ヒトパピローマウイルス由来のタンパク質、ＨＩＶ由来のタンパク質、ＲＮＡファージ由来のタンパク質、Ｑβファージ由来のタンパク質（例えば、コートタンパク質）、ＧＡファージ由来のタンパク質、ｆｒファージ由来のタンパク質、ＡＰ２０５ファージ由来のタンパク質およびＴｙ由来のタンパク質（例えば、レトロトランスポゾンＴｙタンパク質ｐ１）が挙げられる。ＶＬＰは、参考文献８９〜９４においてさらに議論されている。ビロソームは、例えば、参考文献９５においてさらに議論されている。
【００６６】
（Ｅ．細菌誘導体または微生物誘導体）
本発明における使用のために適切なアジュバントは、細菌誘導体または微生物誘導体（例えば、腸内細菌リポ多糖類（ＬＰＳ）の無毒性誘導体、リピドＡ誘導体、免疫刺激オリゴヌクレオチドならびにＡＤＰリボシル化トキシンおよびそれらの無毒性誘導体）を含む。
【００６７】
ＬＰＳの無毒性誘導体としては、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）および３−Ｏ−脱アシル化ＭＰＬ（３ｄＭＰＬ）が挙げられる。３ｄＭＰＬは、３脱Ｏ−アシル化モノホスホリルリピドＡと、４つ、５つまたは６つのアシル化鎖との混合物である。３脱Ｏ−アシル化モノホスホリルリピドＡの好ましい「小粒子」形態は、参考文献９６に開示されている。このような３ｄＭＰＬの「小粒子」は、０．２２μｍメンブレンを通って滅菌濾過されるのに十分小さい［９６］。他の無毒性ＬＰＳ誘導体としては、モノホスホリルリピドＡ模倣物（例えば、アミノアルキルグルコサミニドホスフェート誘導体（例えば、ＲＣ−５２９））が挙げられる［９７、９８］。
【００６８】
リピドＡ誘導体としては、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ由来のリピドＡ誘導体（例えば、ＯＭ−１７４）が挙げられる。ＯＭ−１７４は、例えば、参考文献９９および１００に記載されている。
【００６９】
本発明におけるアジュバントとしての使用のために適切な免疫刺激オリゴヌクレオチドとしては、ＣｐＧモチーフ（グアノシンへのホスフェート結合により連結された非メチル化シトシンを含むジヌクレオチド配列）を含むヌクレオチド配列が挙げられる。パリンドローム配列またはポリ（ｄＧ）配列を含む二本鎖ＲＮＡおよびオリゴヌクレオチドもまた、免疫刺激性であることが示されている。
【００７０】
ＣｐＧは、ヌクレオチド改変体／アナログ（例えば、ホスホロチオエート改変体）を含み得、そして、二本鎖または一本鎖であり得る。参考文献１０１、１０２および１０３は、可能なアナログ置換（例えば、グアノシンの２’−デオキシ−７−デアザグアノシンによる置換）を開示している。ＣｐＧオリゴヌクレオチドのアジュバント効果は、参考文献１０４〜１０９において、さらに議論されている。
【００７１】
上記ＣｐＧ配列（例えば、ＧＴＣＧＴＴモチーフまたはＴＴＣＧＴＴモチーフ）は、ＴＬＲ９に関与し得る［１１０］。上記ＣｐＧ配列（例えば、ＣｐＧ−Ａ ＯＤＮ）は、Ｔｈ１免疫応答誘導に対して特異的であり得るか、または、上記ＣｐＧ配列（例えば、ＣｐＧ−Ｂ ＯＤＮ）は、Ｂ細胞応答誘導に対して、より特異的であり得る。ＣｐＧ−Ａ ＯＤＮおよびＣｐＧ−Ｂ ＯＤＮは、参考文献１１１〜１１３において議論されている。好ましくは、上記ＣｐＧは、ＣｐＧ−Ａ ＯＤＮである。
【００７２】
好ましくは、上記ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、５’末端がレセプター認識のために利用可能であるように構築される。必要に応じて、２つのＣｐＧオリゴヌクレオチド配列が、それらの３’末端に結合され、「イムノマー（ｉｍｍｕｎｏｍｅｒ）」を形成し得る。例えば、参考文献１１０および１１４〜１１６を参照のこと。
【００７３】
細菌ＡＤＰ−リボシル化トキシンおよびその無毒性誘導体が、本発明におけるアジュバントとして使用され得る。好ましくは、上記タンパク質は、Ｅ．ｃｏｌｉ由来（Ｅ．ｃｏｌｉ熱不安定性エンテロトキシン「ＬＴ」）、コレラ由来（「ＣＴ」）または百日咳由来（「ＰＴ」）である。粘膜アジュバントとしての無毒化ＡＤＰ−リボシル化トキシンの使用は、参考文献１１７に記載されており、そして、非経口的アジュバントとしての無毒化ＡＤＰ−リボシル化トキシンの使用は、参考文献１１８に記載されている。上記トキシンまたはトキソイドは、好ましくは、ＡサブユニットおよびＢサブユニットの両方を含むホロトキシン（ｈｏｌｏｔｏｘｉｎ）の形態である。好ましくは、上記Ａサブユニットは、無毒化変異を含み；好ましくは、上記Ｂサブユニットは、変異していない。好ましくは、上記アジュバントは、無毒化ＬＴ変異体（例えば、ＬＴ−Ｋ６３、ＬＴ−Ｒ７２およびＬＴ−Ｇ１９２）である。アジュバントとしてのＡＤＰ−リボシル化トキシンおよびその無毒性誘導体（特に、ＬＴ−Ｋ６３およびＬＴ−Ｒ７２）の使用は、参考文献１１９〜１２６において見られ得る。アミノ酸置換についての多くの参考文献は、好ましくは、参考文献１２７に記載のＡＤＰ−リボシル化トキシンのＡサブユニットおよびＢサブユニットのアラインメントに基づき、特に、本明細書中で、その全体が参考として援用される。
【００７４】
（Ｆ．ヒト免疫調節因子）
本発明におけるアジュバントとしての使用のために適切なヒト免疫刺激因子としては、サイトカイン（例えば、インターロイキン（例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１２［１２８］など）［１２９］、インターフェロン（例えば、インターフェロン−γ）、マクロファージコロニー刺激因子および腫瘍壊死因子）が挙げられる。
【００７５】
（Ｇ．生体接着因子および粘膜接着因子）
生体接着因子および粘膜接着因子はまた、本発明におけるアジュバントとして使用され得る。適切な生体接着因子としては、エステル化ヒアルロン酸マイクロスフェア［１３０］または粘膜接着因子（例えば、ポリ（アクリル酸）、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリサッカリドおよびカルボキシメチルセルロースの架橋誘導体）が挙げられる。キトサンおよびその誘導体はまた、本発明におけるアジュバントとして使用され得る［１３１］。
【００７６】
（Ｈ．微粒子）
微粒子はまた、本発明におけるアジュバントとして使用され得る。生分解性かつ無毒性の物質（例えば、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリ無水物、ポリカプロラクトンなど）と、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）とから形成される微粒子（すなわち、直径約１００ｎｍ〜約１５０μｍ、より好ましくは、直径約２００ｎｍ〜約３０μｍ、そして、最も好ましくは、直径約５００ｎｍ〜約１０μｍの粒子）が、好ましく、必要に応じて、処理されて、（例えば、ＳＤＳにより）負に荷電した表面または（例えば、カチオン性界面活性剤（例えば、ＣＴＡＢ）により）正に荷電した表面を有する。
【００７７】
（Ｉ．リポソーム（参考文献７９の第１３章および第１４章））
アジュバントとしての使用のために適切なリポソーム処方物の例は、参考文献１３２〜１３４に記載されている。
【００７８】
（Ｊ．ポリオキシエチレンエーテル処方物およびポリオキシエチレンエステル処方物）
本発明における使用のために適切なアジュバントとしては、ポリオキシエチレンエーテルおよびポリオキシエチレンエステルが挙げられる［１３５］。このような処方物としては、オクトキシノールと組み合わせたポリオキシエチレンソルビタンエステル界面活性剤［１３６］および少なくとも１つのさらなる非イオン性界面活性剤（例えば、オクトキシノール）と組み合わせたポリオキシエチレンアルキルエーテル界面活性剤またはポリオキシエチレンアルキルエステル界面活性剤［１３７］が、さらに挙げられる。好ましいポリオキシエチレンエーテルは、以下の群より選択される：ポリオキシエチレン−９−ラウリルエーテル（ｌａｕｒｅｔｈ ９）、ポリオキシエチレン−９−ステオリルエーテル、ポリオキシエチレン−８−ステオリルエーテル、ポリオキシエチレン−４−ラウリルエーテル、ポリオキシエチレン−３５−ラウリルエーテルおよびポリオキシエチレン−２３−ラウリルエーテル。
【００７９】
（Ｋ．ポリホスファゼン（ＰＣＰＰ））
ＰＣＰＰ処方物は、例えば、参考文献１３８および１３９に記載されている。
【００８０】
（Ｌ．ムラミルペプチド）
本発明におけるアジュバントとしての使用のために適切なムラミルペプチドの例としては、Ｎ−アセチル−ムラミル−Ｌ−トレオニル−Ｄ−イソグルタミン（ｔｈｒ−ＭＤＰ）Ｎ−アセチル−ノルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン（ｎｏｒ−ＭＤＰ）およびＮ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル−Ｌ−アラニン−２−（１’，２’−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホリルオキシ）−エチルアミン（ＭＴＰ−ＰＥ）が挙げられる。
【００８１】
（Ｍ．イミダゾキノロン化合物）
本発明におけるアジュバントとしての使用のために適切なイミダゾキノロン化合物の例としては、参考文献１４０および１４１にさらに記載される、Ｉｍｉｑｕａｍｏｄおよびその相同体（例えば、「Ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ ３Ｍ」）が挙げられる。
【００８２】
本発明はまた、上に定義される１つ以上のアジュバントの局面の組み合わせを含み得る。例えば、以下のアジュバント組成物が、本発明において使用され得る：（１）サポニンおよび水中油エマルジョン［１４２］；（２）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋無毒性ＬＰＳ誘導体（例えば、３ｄＭＰＬ）［１４３］；（３）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋無毒性ＬＰＳ誘導体（例えば、３ｄＭＰＬ）＋コレステロール；（４）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋３ｄＭＰＬ＋ＩＬ−１２（必要に応じて、＋ステロール）［１４４］；（５）３ｄＭＰＬと、例えば、ＱＳ２１および／または水中油エマルジョンとの組み合わせ［１４５］；（６）マイクロフルイダイズされてサブミクロンエマルジョンにされるか、またはボルテックスされてより大きい粒子サイズのエマルジョンを生じるかのいずれかの、１０％ スクアレン、０．４％ Ｔｗｅｅｎ ８０ＴＭ、５％ プルロニックブロック（ｐｌｕｒｏｎｉｃ−ｂｌｏｃｋ）ポリマーＬ１２１およびｔｈｒ−ＭＤＰを含有するＳＡＦ；（７）２％ スクアレン、０．２％ Ｔｗｅｅｎ ８０、ならびにモノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）、トレハロースジミコレート（ＴＤＭ）および細胞壁骨格（ＣＷＳ）からなる群由来の１つ以上の細菌細胞壁構成要素を含むＲｉｂｉＴＭアジュバント系（ＲＡＳ）（Ｒｉｂｉ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍ）（好ましくは、ＭＰＬ＋ＣＷＳ（ＤｅｔｏｘＴＭ））；ならびに（８）１つ以上の無機塩（例えば、アルミニウム塩）＋ＬＰＳの無毒性誘導体（例えば、３ｄＭＰＬ）。
【００８３】
免疫刺激因子として作用する他の物質は、参考文献７９の第７章に開示されている。
【００８４】
吸着を有するか、または有さない水酸化アルミニウムアジュバントまたはリン酸アルミニウムアジュバントの使用が、特に好ましい［例えば、参考文献７の実施例７および８；参考文献８の実施例Ｊ］。アルミニウム塩アジュバントを含まない組成物もまた、使用され得る［参考文献１５］。リン酸カルシウムは、別の好ましいアジュバントである。結合体は、別々にアジュバントと（必要に応じて、アジュバントに吸着されて）混合され得、次いで、この結合体は一緒に混合され得るか、またはこの結合体は一緒に混合され得、次いでアジュバントと混合される。
【００８５】
本発明に従って使用される組成物のｐＨは、好ましくは６と８との間であり、好ましくは約７である。安定なｐＨは、緩衝液の使用によって維持され得る。組成物が、水酸化アルミニウム塩を含む場合、ヒスチジン緩衝液を使用することが好ましい［１４６］。組成物は、滅菌されてもよく、そして／または発熱物質を含まなくてもよい。組成物は、ヒトに対して等張であってもよい。
【００８６】
組成物は、防腐剤（例えば、チオメルサール、２−フェノキシエタノール）を含んでもよいか、または防腐剤を含まなくてもよい。本発明の好ましい組成物は、あらゆる水銀物質を含まない（例えば、それらはチオメルサールを含まない）。
【００８７】
組成物は、バイアル中に存在してもよいか、またはそれらは、あらかじめ充填されたシリンジ中に存在してもよい。このシリンジは、針を備えて供給されても、または針を備えずに供給されてもよい。シリンジは、上記組成物の単回用量を含むが、バイアルは、単回用量または複数回用量を含んでもよい。注射用組成物は、通常、溶液または懸濁液である。あるいは、それらは、注射前に、液体ビヒクルにおける溶液または懸濁液のために、（例えば、凍結乾燥された）固形で存在し得る。
【００８８】
組成物は、単位用量形態または複数回用量形態でパッケージされ得る。複数回用量形態について、バイアルは、あらかじめ充填されたシリンジであることが好ましい。有効な投薬量体積は、慣習的に確立され得るが、注射用の組成物の代表的なヒトの用量は、０．５ｍｌの体積である。
【００８９】
組成物は、免疫学的に有効な量の髄膜炎菌性結合体、および必要な場合、任意の他の組成物を含む。「免疫学的に有効な量」によってとは、単回用量または一連の一部としてのいずれかにおける個体への投与の量が、患者における防御用の抗髄膜炎菌性免疫応答を誘発することを意味する。この量は、処置されるべき個体の健康状態および身体的状態、年齢、処置されるべき個体の分類学群（例えば、非ヒト霊長類、霊長類など）、個体の免疫系が抗体を合成する能力、所望される防御の程度、ワクチンの処方、処置する医師による医学的状態の評価、および他の関連因子に依存して変化する。この量は、慣例的な試行を通して決定され得る比較的広範な範囲にわたり、そして、用量あたりの各々の髄膜炎菌抗原の代表的な量は、血清群あたり１μｇと２０μｇとの間（例えば、血清群あたり２μｇと１０μｇとの間、または血清群あたり３μｇと８μｇとの間）である（糖について測定される）。血清群あたり約４μｇの用量（すなわち、四価の混合物において１６μｇの総量）、または血清群あたり約５μｇの用量（すなわち、四価の混合物において２０μｇの総量）が、好ましい。
【００９０】
（凍結乾燥）
ワクチンは、代表的に、注射、特に筋肉内注射によって投与される。本発明の組成物は、一般に、水溶液または懸濁液として使用時に提示される。本発明のいくつかの実施形態において、上記組成物は、パッケージング段階から投与段階まで水溶性の形態（「完全な液体」ワクチン）である。しかしながら、他の実施形態において、上記組成物の１つ以上の成分は、凍結乾燥された形態でパッケージされ得、そして実際の投与のためのワクチンは、必要な場合、再構成され得る。従って、本発明の組成物は、パッケージ段階で調製されてもよいか、または使用前に即時に調製されてもよい。髄膜炎菌性結合体の凍結乾燥は、当該分野において公知である（例えば、ＭｅｎｊｕｇａｔｅＴＭ製品は、凍結乾燥された形態で存在するが、ＮｅｉｓＶａｃ−ＣＴＭおよびＭｅｎｉｎｇｉｔｅｃＴＭは、完全な液体ワクチンである）。
【００９１】
従って、いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、凍結乾燥された形態である。個々の髄膜炎菌性結合体は、混合する前に凍結乾燥され得るか、または水溶性形態で混合され、次いで凍結乾燥され得る。
【００９２】
本発明はまた、本発明の組成物を調製するためのキットを提供し、このキットは、凍結乾燥された形態で少なくとも１つの髄膜炎菌性結合体および水溶性形態で少なくとも１つの髄膜炎菌性結合体を含む。このキットは、２つのバイアル（水溶性物質を含むものと凍結乾燥された物質を含むもの）を含み得るか、またはこのキットは、１つのあらかじめ充填されたシリンジおよび１つのバイアル（例えば、シリンジの内容物は、注射前にバイアルの内容物を再形成するために使用される）を含み得る。次いで、血清群Ａ結合体を含む組成物に関して、血清群Ａサッカリドは、凍結乾燥され得るが、他の血清群由来の結合体は、液体形態で存在し得る。
【００９３】
本発明はまた、本発明の水溶性組成物を調製するためのキットを提供し、このキットは、（ｉ）凍結乾燥された本発明の組成物、および（ｉｉ）水溶性物質を含み、ここで、成分（ｉｉ）は、上記水溶性組成物を提供するために、成分（ｉ）を再形成するためである。成分（ｉｉ）は、好ましくは、上記のように、滅菌され、非発熱性などである。
【００９４】
従って、本発明は、完全に凍結乾燥された形態、完全に水溶性の形態、および水溶性処方物を与えるための、再形成のために準備された形態の組成物を包含する。
【００９５】
凍結乾燥の間、結合体を安定させるために、上記組成物中に、例えば、１ｍｇ／ｍｌと３０ｍｇ／ｍｌとの間（例えば、約２５ｍｇ／ｍｌ）で、糖アルコール（例えば、マンニトール）または二糖類（例えば、スクロースまたはトレハロース）を含むことが好ましい。スクロースの存在下での凍結乾燥が好ましい。従って、本発明の組成物は、糖アルコールまたは二糖類を含み、特にそれらは、凍結乾燥された形態または凍結乾燥された物質から再形成された形態のいずれかである。
【００９６】
組成物が、凍結乾燥形態である（または凍結乾燥された成分を含む）場合、凍結乾燥された物質の用量は、好ましくは、アルミニウムアジュバントを含まない。アルミニウムアジュバントを含む最終的な水溶性組成物が所望される場合、代わりに、このアジュバントは、凍結乾燥された物質（ＭｅｎｊｕｇａｔｅＴＭを参照のこと）を再形成するために使用される物質中に存在するべきである。
【００９７】
（患者）
本発明の組成物は、髄膜炎菌性疾患に対して（例えば、髄膜炎、より好ましくは細菌性髄膜炎、および最も好ましくは髄膜炎菌性髄膜炎に対して）患者を予防するためのものである。
【００９８】
免疫化される患者は、代表的に、ヒトである。ヒトは、一般的に、少なくとも１ヶ月齢、例えば、少なくとも２ヶ月齢、少なくとも４ヶ月齢、少なくとも６ヶ月齢、少なくとも２歳、少なくとも５歳、少なくとも１１歳、少なくとも１７歳、少なくとも４０歳、少なくとも５５歳などである。患者の好ましい集合は、２歳〜５５歳の年齢群であり、そして患者の別の好ましい集合は、１１歳〜５５歳の年齢群である。患者のさらに好ましい集合は、１１歳未満、例えば、２歳〜１１歳である。患者のさらに好ましい集合は、２歳未満、例えば、１歳未満である。本発明の組成物は、特に、すでに以前の免疫化において共通キャリアタンパク質を受容した免疫化している患者に有用である。
【００９９】
本発明の組成物を受容する前、または受容すると同時に、患者は、１つ以上のさらなるワクチンで免疫化され得る。投与されていてもよいか、または投与され得る他のワクチンとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：ジフテリア抗原（例えば、ジフテリアトキソイド）；破傷風抗原（例えば、破傷風トキソイド）；百日咳抗原（例えば、全細胞／細胞性の百日咳ワクチン（「Ｐｗ」）、または好ましくは、無細胞性の百日咳ワクチン（「Ｐａ」））；Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅＢ型莢膜糖（代表的には結合体化されている）；Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）；ポリオウイルス（例えば、不活性化ポリオウイルスワクチン（ＩＰＶ）または経口ポリオウイルスワクチン（ＯＰＶ））；Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ莢膜糖（代表的には多価および結合体化されている）；インフルエンザウイルス；ＢＣＧ；Ａ型肝炎ウイルス抗原；麻疹ウイルス；流行性耳下腺炎ウイルス；風疹ウイルス；水痘ウイルス；など。これらのさらなるワクチンのいくつかのさらなる詳細は、以下に示される。
【０１００】
本発明の組成物を投与した結果、好ましくは、各々の投与された血清群に関して、患者は、血清殺菌性抗体（ＳＢＡ）応答を惹起させ、（上記組成物を受容する前にあらかじめ免疫化された患者と比較して）ＳＢＡ力価の増加が、少なくとも４倍、および好ましくは少なくとも８倍になる。このＳＢＡ試験は、髄膜炎菌防御に対して標準的な相関関係がある。髄膜炎菌ワクチンについての血清学的な相関関係のさらなる詳細は、参考文献１４７で得られる。
【０１０１】
（本発明に従って使用される組成物のさらなる抗原性成分）
本発明の組成物は、髄膜炎菌性疾患に対して免疫化している患者のために使用され得、他のワクチン接種成分とは別に使用され得る。しかしながら、さらに本発明の組成物は、他のワクチン成分との結合において使用され得る。これらの他の成分は、本発明の組成物とは別に投与され得るが実質的に同時に投与され得るか、または本発明の組成物は、組み合わせたワクチンの一部としてこれらのさらなる成分を含み得る。
【０１０２】
従って、髄膜炎菌性結合体抗原に加えて、本発明の組成物は、必要に応じて、１つ以上の以下のさらなる抗原を含み得る：
１．Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅＢ型（「Ｈｉｂ」）由来の結合体化莢膜糖［例えば、参考文献３４の第１４章］。この結合体についてのキャリアタンパク質は、ＣＲＭ１９７、ジフテリアトキソイド、破傷風トキソイドまたはＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの外膜複合体であり得る。この結合体の糖部分は、多糖（例えば、完全長のリン酸ポリリボシルリビトール（ＰＲＰ））であり得るが、莢膜多糖を脱重合して、オリゴ糖（例えば、分子量約１〜約５ｋＤａ）を形成することが好ましい。好ましいＨｉｂ結合体は、アジピン酸リンカーによってＣＲＭ１９７に共有結合されたオリゴ糖を含む［１４８、１４９］。患者へのＨｉｂ抗原の投与は好ましくは０．１５μｇ／ｍｌより大きい、より好ましくは、１μｇ／ｍｌより大きい濃度の抗ＰＲＰ抗体を生じる。組成物が、Ｈｉｂ糖抗原を含む場合、好ましくは、用量はまた、水酸化アルミニウムアジュバントを含まない。上記組成物が、リン酸アルミニウムアジュバントを含む場合、Ｈｉｂ抗原は、このアジュバントに吸着されてもよい［１５０］か、または吸着されなくてもよい［１５］。吸着の防止は、抗原／アジュバントを混合している間の正確なｐＨ、ゼロ電荷の適切な点を有するアジュバント、および組成物中の種々の異なる抗原を混合する適切な順序を選択することによって達成され得る［１５１］。
【０１０３】
２．Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来の結合体化莢膜糖［例えば、参考文献３４の第２３章；参考文献１５２〜１５４］。Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅの２種以上の血清群由来の糖を含むことが好ましい。例えば、２３種の異なる血清群由来の多糖類の混合物が、５種と１１種との間の異なる血清群由来の多糖類との結合体化ワクチンとして、広範に使用される［１５５］。例えば、ＰｒｅｖＮａｒＴＭ［１５６］は、還元的アミノ化によってＣＲＭ１９７に個々に結合体化される各々の糖類を有し、０．５ｍｌ用量あたり２μｇの各々の糖（４μｇの血清群６Ｂ）を有し、そしてリン酸アルミニウムアジュバントに吸着される結合体を有する７種の血清群（４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、および２３Ｆ）由来の抗原を含む。肺炎球菌結合体が、本発明で使用するための組成物中に含まれる場合、この組成物は、好ましくは、少なくとも血清群６Ｂ、１４、１９Ｆおよび２３Ｆを含む。
【０１０４】
３．Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｂ由来のタンパク質抗原［例えば、参考文献１５７］。
【０１０５】
４．ジフテリア抗原（例えば、ジフテリアトキソイド）［例えば、参考文献３４の第１３章］。
【０１０６】
５．破傷風抗原（例えば、破傷風トキソイド）［例えば、参考文献３４の第２７章］。
【０１０７】
６．細胞性百日咳抗原または全細胞百日咳（「Ｐｗ」）抗原［例えば、参考文献３４の第２１章］。
【０１０８】
７．１つ以上の無細胞百日咳（「Ｐａ」）抗原［例えば、参考文献３４の第２１章］。Ｐａ成分は、一般に、１種、２種または３種の以下の十分に特徴付けられたＢ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ抗原を含む：（１）百日咳トキソイド（「ＰＴ」）（化学的手段または部位特異的突然変異誘発のいずれかによって無毒化される（例えば、「９Ｋ／１２９Ｇ」変異体）［１５８］；（２）線維状赤血球凝集素（「ＦＨＡ」）；（３）ペルタクチン（別名「６９キロダルトン外膜タンパク質」）。Ｐａ成分はまた、凝集原２および／または凝集原３を含み得る。
【０１０９】
８．Ｂ型肝炎ウイルス由来の抗原（例えば、表面抗原（「ＨＢｓＡＧ」）および／またはコア抗原（表面抗原は、好ましくは、リン酸アルミニウム上に吸着される［１６０］））［例えば、参考文献１５９および１６４；参考文献３４の第１６章］。
【０１１０】
９．１種以上のポリオウイルス抗原（例えば、ＩＰＶ．Ｍａｈｏｎｅｙ株、ＭＥＦ−１株およびＳａｕｋｅｔｔ株の封入体が、一般的である）［例えば、１６１、１６２；参考文献３４の第２４章］。
【０１１１】
１０．Ａ型肝炎ウイルス由来の抗原（例えば、不活性化ウイルス）［例えば、１６３、１６４；参考文献３４の第１５章］。
【０１１２】
上記組成物は、１種以上（すなわち、１種、２種、３種、４種、５種、６種、７種、８種、９種、または１０種）のこれらのさらなる抗原を含み得る。
【０１１３】
他の実施形態において、上記組成物は、１種以上のこれらのさらなる抗原を、特に含まなくてもよい。
【０１１４】
存在する場合、これらのさらなる抗原は、アルミニウム塩に吸着されても、吸着されなくてもよい。
【０１１５】
ジフテリア抗原が混合物中に含まれる場合、破傷風抗原および百日咳抗原を含むこともまた、好ましい。同様に、破傷風抗原が含まれる場合、ジフテリア抗原および百日咳抗原を含むこともまた、好ましい。同様に、百日咳抗原が含まれる場合、ジフテリア抗原および破傷風抗原を含むこともまた、好ましい。
【０１１６】
混合物中の抗原は、代表的に、各々少なくとも１μｇ／ｍｌの濃度で存在する。一般に、任意の所定の抗原の濃度は、その抗原に対する免疫応答を誘発するのに十分である。個々の糖抗原の防御効果は、それらを組み合わせることによって、取り除かれないことが好ましいが、実際の免疫原性（例えば、ＥＬＩＳＡ力価）は、減少され得る。
【０１１７】
髄膜炎菌性結合体が、一連の用量において投与される場合、その用量のどれも、これらの余分の抗原を含まなくてもよいか、その用量のうちのいくつかまたは全ては、これらの余分の抗原を含んでもよい。
【０１１８】
これらの１０種のさらなる成分の１つ以上を含む組成物の代替として、本発明は、以下を含むキットを提供する：（ｉ）水性形態または凍結乾燥された形態のいずれかの本発明の組成物；および（ｉｉ）１つ以上のこれらの１０種のさらなる成分を含む組成物。
【０１１９】
成分（ｉ）が凍結乾燥される場合、成分（ｉｉ）は、好ましくは、水性形態であり、（ｉ）を再構成するために使用され得る。
【０１２０】
従って、本発明の組成物は、それら自身の使用のために販売され得るか、他のワクチン物質と併せて使用するために販売され得るか、またはワクチン接種キットの一部として販売され得る。
【０１２１】
（医療処置）
本発明は、患者を処置するための方法を提供し、この方法は、免疫学的に有効な量の本発明の組成物を患者に投与する工程を包含する。この患者は、その患者自身、疾患の危険性があってもよいか、または妊婦（「先天性免疫」）であってもよいかのいずれかである。
【０１２２】
本発明はまた、医薬として（例えば、免疫原性組成物またはワクチンとして）使用するための本発明の組成物を提供する。
【０１２３】
本発明はまた、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓによって引き起こされる疾患に対して患者を免疫するための医薬の製造において、以下：（ａ）（ｉ）血清群ＡのＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの莢膜糖と（ｉｉ）キャリアタンパク質との結合体；（ｂ）（ｉ）血清群ＣのＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの莢膜糖と（ｉｉ）キャリアタンパク質との結合体；（ｃ）（ｉ）血清群Ｗ１３５のＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの莢膜糖と（ｉｉ）キャリアタンパク質との結合体；（ｄ）（ｉ）血清群ＹのＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの莢膜糖と（ｉｉ）キャリアタンパク質との結合体、のうちの少なくとも２つの使用を提供し、（１）上記結合体（ａ）、（ｂ）、（ｃ）および（ｄ）のうちの少なくとも２つは、同じキャリアタンパク質（「共通キャリア」）を使用し、そして（２）上記医薬は、１０μｇ／ｍｌ未満の濃度で非結合体化の共通キャリアを含むことを特徴とする。
【０１２４】
ワクチンが、予防的な使用のためである場合、上記患者は、好ましくは、小児（例えば、幼児または乳児）であり；ワクチンが、治療上の使用のためである場合、上記患者は、好ましくは、成人である。小児のために意図されるワクチンはまた、成人に投与され得る（例えば、安全性、投薬量、免疫原性などを評価するため）。
【０１２５】
治療上の処置の効果を試験する１つの方法は、本発明の組成物の投与後に髄膜炎菌感染症をモニタリングする工程を包含する。予防的な処置の効果を試験する１つの方法は、投与後に投与されたポリペプチドに対する免疫応答をモニタリングする工程を包含する。本発明の組成物の免疫原性は、被験体にそれらを投与することによって決定され得、そして髄膜炎菌性ワクチンについての血清学的な相関関係は、参考文献１４７で得られる。
【０１２６】
組成物は、一般に、患者に直接投与される。直接送達は、非経口注射（例えば、皮下、腹腔内、静脈内、筋肉内、または組織の間隙空間）、または直腸投与、経口投与、膣投与、局所投与、経皮投与、鼻腔内投与、眼投与、耳投与、肺投与、あるいは他の粘膜投与によって達成され得る。筋肉内（例えば、大腿部または上腕への）投与が、好ましい。注射は、針を介してもよい（例えば、皮下注射）が、針を有さない注射が代替として使用され得る。代表的な筋肉内用量は、０．５ｍｌである。
【０１２７】
複数の血清群由来の髄膜炎菌性結合体が、単一の組成物内の混合物において投与される。この組成物は、単回用量として投与され得るか、または複数回用量スケジュールにおいて２回以上投与され得る。複数回用量は、初回免疫スケジュールおよび／または追加免疫スケジュールにおいて使用され得る。初回投与スケジュールの後に、髄膜炎菌性結合体の追加投与スケジュールが続き得る。初回投与の間の適切なタイミング（例えば、４〜１６週の間）、および初回投与と追加投与との間の適切なタイミングは、慣習的に決定され得る。
【０１２８】
本発明は、全身性免疫および／または粘膜免疫を誘発するために使用され得る。
【０１２９】
（本発明の特定の組成物）
本発明の好ましい実施形態は、以下を包含する：
１．各々についてＣＲＭ１９７キャリアを有する血清群Ｃ、Ｗ１３５およびＹ由来の髄膜炎菌結合体を含む水性組成物。糖は、アジピン酸リンカーを用いてこのキャリアに結合される。非結合体化ＣＲＭ１９７の濃度は、５μｇ／ｍｌより小さい。各結合体の濃度（糖として測定される）は、約１０μｇ／ｍｌである。上記組成物は、リン酸アルミニウムアジュバントを含み、調製の間、このアジュバントと吸着する段階はない。上記組成物は、塩化ナトリウム、リン酸ナトリウム（緩衝作用のために一塩基および二塩基）および少量のポリソルベート８０を含む。上記組成物は、筋肉内注射のためであるか、または凍結乾燥された血清群Ａ結合体を再構成するために使用され得る。
【０１３０】
２．上記実施形態１の組成物を有する凍結乾燥された血清群Ａ結合体の再構成から生じる水性組成物。血清群Ａ結合体はまた、ＣＲＭ１９７キャリアを有する。再構成の後、血清群Ａ結合体は、（希釈因子に依存して）約１０μｇ／ｍｌまたは約２０μｇ／ｍｌで存在し得る。再構成の後、非結合体化ＣＲＭ１９７の濃度は、５μｇ／ｍｌより小さいままである。
【０１３１】
３．両方がＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅプロテインＤキャリアを有し、ＣＤＡＰ化学を用いてこのキャリアに結合される糖を有する血清群ＡおよびＣ由来の髄膜炎菌結合体を含む水性組成物。非結合体化プロテインＤの濃度は、１０μｇ／ｍｌより小さい。上記組成物はまた、破傷風トキソイドキャリアタンパク質に結合体化Ｈｉｂ糖を有するＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ ｂ型結合体を含む（例えば、参考文献 の実施例１を参照のこと）。３つの結合体の各々の濃度（糖として測定される）は、約１０μｇ／ｍｌである。上記組成物は、アルミニウム塩アジュバントを含まない。上記組成物は、スクロースを含む。上記組成物のｐＨは、６と６．５との間（例えば、約６．１）である。上記組成物は、凍結乾燥のためである。
【０１３２】
４．両方についてＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅプロテインＤキャリアを有し、ＣＤＡＰ化学を用いてこのキャリアに結合される糖を有する血清群ＡおよびＣ由来の髄膜炎菌結合体を含む凍結乾燥された組成物。結合されていないプロテインＤの濃度は、１０μｇ／ｍｌより小さい。上記組成物はまた、破傷風トキソイドキャリアタンパク質に結合体化されているＨｉｂ糖を有するＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ ｂ型結合体を含む。上記組成物は、アルミニウム塩アジュバントを含まない。上記組成物は、スクロースを含む。上記組成物は、他のワクチン成分、特に非髄膜炎菌ワクチン成分とともに再構成した。
【０１３３】
５．ジフテリア抗原、破傷風抗原および百日咳抗原を含むワクチン組成物を含み、必要に応じてＨＢｓＡｇをさらに含む、上記実施形態４の組成物の再構成から生じる水性組成物。上記再構成したワクチンは、水酸化アルミニウムアジュバントおよび／またはリン酸アルミニウムアジュバントを含む。
【０１３４】
６．各々についてジフテリアトキソイドキャリアを有する血清群Ａ、Ｃ、Ｗ１３５およびＹ由来の髄膜炎菌結合体を含む水性組成物。糖は、アジピン酸リンカーを用いてこのキャリアに結合され得る。非結合体化Ｄｔの濃度は、５μｇ／ｍｌより小さい。各結合体の濃度（糖として測定される）は、約８μｇ／ｍｌである。上記組成物は、アルミニウム塩を含まない。上記組成物は、筋肉内注射のためである。
【０１３５】
（一般論）
用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」とは、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」および「なる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」を包含する（例えば、Ｘを「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」組成物は、Ｘのみからなり得るか、またはさらなる何かを含み（ｉｎｃｌｕｄｅ）得る（例えば、Ｘ＋Ｙ））。
【０１３６】
数値ｘに関する用語「約（ａｂｏｕｔ）」とは、例えば、ｘ±１０％を意味する。
【０１３７】
単語「実質的に（ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｌｙ）」は、「完全に（ｃｏｍｐｌｅｔｅｌｙ）」を除外しない（例えば、Ｙを「実質的に含まない」組成物は、完全にＹを含まないものであり得る）。必要な場合、単語「実質的に」は、本発明の定義から除外され得る。
【０１３８】
共通キャリアの濃度は、「μｇ／ｍｌ」（１ミリリットルあたりのマイクログラム）の単位で上記に与えられるが、代替および対応する定義の設定において、これらのμｇ／ｍｌ濃度は、単位「Ｌｆ／ｍｌ」（凝集単位または「凝集の限界」［１６５］）で測定される濃度と置き換えられ得、これは、破傷風トキソイドおよびジフテリアトキソイドを定量化するための機能単位である。この代替の定義の設定において、数値は、３で割られ（すなわち、３μｇ／ｍｌが１Ｌｆ／ｍｌになる）、必要な場合、最も近い整数に切り上げられる（すなわち、１０μｇ／ｍｌは、４Ｌｆ／ｍｌになる）。ここで、この代替は、純粋に便宜上の目的のために与えられ、キャリア濃度が、μｇ／ｍｌで与えられる場合、本発明に対して何らかの影響が及ぼされるべきではない。
【０１３９】
（本発明を実施するための様式）
（非結合体化キャリアタンパク質の存在下での抗血清群Ｃ応答の低下）
ＮｅｉｓＶａｃ−ＣＴＭは、水酸化アルミニウムアジュバントを有し、そしてタンパク質：糖が約２：１の重量比を有する破傷風トキソイドキャリアに結合体化される血清群Ｃ（ＯＡｃ−）莢膜糖を含む。参考文献１３に記載されるように、このワクチンを、単独または（非結合体化）破傷風トキソイドと（非結合体化）ジフテリアトキソイドとの同時投与のいずれかで、３歳〜６歳または１３歳〜１８歳の子供に投与した。特定のＩｇＧ ＧＭＣを、ＯＡｃ＋ＥＬＩＳＡ、ＯＡｃ−ＥＬＩＳＡ、および高アビディティＥＬＩＳＡによって測定し、ｒＳＢＡ ＧＭＴもまた、測定した（Ｃ１１株に対して）［１３］。患者の２つの群の結果は、以下の通りであり、Ｔｔ／Ｄｔワクチンを同じ時期に受容しなかった患者の結果と比較した：
【表Ａ】
【０１４０】
免疫応答に対する非結合体化Ｔｔの効果は、これらの結果から明らかである。次いで、２つ以上の髄膜炎菌結合体を含むワクチンにおいてこの効果を回避するために、本発明に従って、非結合体化キャリアのレベルを閾値レベル未満に維持する。
【０１４１】
（組み合わされた髄膜炎菌結合体）
血清型Ａ＋Ｃ、Ｃ＋Ｗ＋Ｙ、またはＡ＋Ｃ＋Ｗ＋Ｙについての髄膜炎菌結合体の混合物は、参考文献７、８および１５に記載されるように調製され得る。これらのワクチンは、糖に共有結合されるキャリアタンパク質としてＣＲＭ１９７、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅプロテインＤまたはジフテリアトキソイド（Ｄｔ）のいずれかを有する。本質的に、参考文献８の方法を用いて製造された結合体に関して、以下を実施した。
【０１４２】
血清群Ａについて、精製された乾燥多糖を加水分解して、１０〜１１の平均重合度（ａｖＤＰ）を得た。長い多糖を取り除くために、３０ｋＤａ限外濾過を使用した。次いで、Ｑセファロースクロマトグラフィーを、短い糖フラグメントを取り除くために使用した。糖を還元的アミノ化に供し、続いて、３ｋＤａ限外濾過により、低い分子量の不純物を取り除いた。アミノ化された糖を濃縮し、次いで、アジピン酸のビスＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルを用いて活性化させた。この物質は、結合体調製のために適切である。この活性化されたエステルを、０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．２）中に４５ｍｇ／ｍｌにてキャリアを有する、１３：１の過剰な糖のモル濃度において、精製されたＣＲＭ１９７キャリアとともに混合する。結合体化は、電磁攪拌機を用いて、８時間と２４時間との間、室温で行われる。この反応を、ＮＨ４Ｃｌ（０．１Ｍの最終濃度）を添加することによって停止させ、次いで、この溶液を、１０ｍＭのリン酸ナトリウム（ｐＨ７．２）を用いて希釈する。これらの条件は、効果的な結合体化を確実にし、残った未反応のキャリアタンパク質のレベルを最小にする。本発明に従って、あらゆる残っている未反応の物質は、念入りに取り除かれ、上記の希釈の２時間以内にさらなる工程が実施される。１０ｍＭのリン酸ナトリウム（ｐＨ７．２）を用いて、４時間まで、３０ｋＤａカセットを用いる限外濾過が実施される。
【０１４３】
血清群Ｃについて、以下を除いて本質的に同じプロセスを使用した：最初の（ｎｉｔｉａｌ）加水分解を行って、７と１６との間のａｖＤＰを得；結合体反応を、室温で１４〜２２時間、行い；疎水性相互作用クロマトグラフィー（Ｐｈｅｎｙｌ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ高速フローカラム；１Ｍの硫酸アンモニウム、１０ｍＭのリン酸緩衝液（ｐＨ７．２）；硫酸アンモニウムを含まない緩衝液を添加することによる溶出）を使用して、結合体を精製するさらなる工程を、結合と限外濾過の工程との間に挿入し；そして限外濾過は１０ｋＤａのカットオフを使用した。
【０１４４】
血清群Ｗ１３５およびＹについて、以下を除いて本質的に血清群Ａについてと同様のプロセスを使用した：最初の加水分解により２０のａｖＤＰを得た；１２：１の過剰なモル濃度の糖。
【０１４５】
これらのプロセスによって、１μｇ未満の非結合体化キャリアレベル（５０μｇの総ＣＲＭ１９７含有量に対して測定される）が、各々の結合体について慣習的に達成され得る。
【０１４６】
４種のバルク結合体が、本発明の組成物を得るために組み合わされ得る。
【０１４７】
臨床的試験Ｖ５９Ｐ２において、１２〜１６ヶ月齢の６２０人の被験体によって、５種のこれらの混合された結合体の処方物の試験が、フィンランドおよびドイツで実施された。各血清群の糖についての用量を、０．５ｍｌの用量あたりの糖の質量（μｇ）として表し、混合および希釈後は以下の通りであった：
【表Ｂ】
【０１４８】
上記ワクチンは、リン酸アルミニウムアジュバントを含んだ［８］。非結合体化ＣＲＭ１９７は、上記ワクチンにおいて２μｇ／ｍｌ未満で存在した。
【０１４９】
被験体はゼロ時に注射を受け、次いで、被験体の２５％は、４週間後、ワクチンの第２回目の投与を受けた。
【０１５０】
患者の血清を、ワクチン投与の１ヶ月後、回収し、ヒト補体を用いて各血清群由来のＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓに対するＳＢＡアッセイにおいて試験した。ゼロ時の血清と比較して、ＳＢＡ力価の増加が評価された（基準は、１：４より大きい、および１：８より大きい）。抗カプセル力価（ＧＭＴ）もまた、各血清群について測定した。結果を、以下の表１に示す。
【０１５１】
このように、三価および四価のワクチンは両方、幼児において免疫原性であった。上記結合体は、結合体あたり２．５μｇ程度の低い糖の用量で免疫原性である。この免疫応答は、追加免疫可能であり、第２回目の投与の後に大きくＳＢＡ力価が増加する。キャリア抑制の証拠は、この試験において見られなかった。
【０１５２】
本発明は、例示の目的のみで上記に記載されており、本発明の範囲および精神内にとどまりつつ、改変がなされ得ることが、理解されるべきである。
【０１５３】
【表１】
（参考文献（これらの内容は、本明細書中に参考として援用される））
【０１５４】
【数１】
【０１５５】
【数２】
【０１５６】
【数３】
【０１５７】
【数４】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
明細書中に記載の発明。
【請求項１】
明細書中に記載の発明。
【公開番号】特開２０１２−２１４４９８（Ｐ２０１２−２１４４９８Ａ）
【公開日】平成２４年１１月８日（２０１２．１１．８）
【国際特許分類】
【外国語出願】
【出願番号】特願２０１２−１７１１２２（Ｐ２０１２−１７１１２２）
【出願日】平成２４年８月１日（２０１２．８．１）
【分割の表示】特願２００７−５１０１５９（Ｐ２００７−５１０１５９）の分割
【原出願日】平成１７年４月２９日（２００５．４．２９）
【出願人】（５９２２４３７９３）ノバルティス ヴァクシンズ アンド ダイアグノスティクス エスアールエル (107)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２４年１１月８日（２０１２．１１．８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−１７１１２２（Ｐ２０１２−１７１１２２）
【出願日】平成２４年８月１日（２０１２．８．１）
【分割の表示】特願２００７−５１０１５９（Ｐ２００７−５１０１５９）の分割
【原出願日】平成１７年４月２９日（２００５．４．２９）
【出願人】（５９２２４３７９３）ノバルティス ヴァクシンズ アンド ダイアグノスティクス エスアールエル (107)
【Ｆターム（参考）】
[ Back to top ]