再燃性前立腺癌の検出方法
【課題】再燃性前立腺癌を特異的に検出する方法を提供する。
【解決手段】
前立腺癌細胞で発現しうる特定の遺伝子の発現量を測定することを含む、再燃性前立腺癌の検出方法。
【解決手段】
前立腺癌細胞で発現しうる特定の遺伝子の発現量を測定することを含む、再燃性前立腺癌の検出方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、再燃性前立腺癌の検出方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
前立腺癌は、男性ホルモンであるアンドロゲンに依存して増殖するため、アンドロゲンの分泌や働きを抑制するホルモン療法が有効な治療法として用いられている。しかし、このホルモン療法によっても少なからず癌細胞が生き残る。生き残った癌細胞は、その後増殖を繰返し、ホルモン療法に耐性をもったホルモン抵抗性前立腺癌を引き起こす。ホルモン抵抗性前立腺癌は、ホルモン療法により一度抑制された前立腺癌の増殖が再び活発化したものであり、再燃性前立腺癌とも呼ばれる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明者らは、再燃性前立腺癌特異的なマーカーを開発することができれば、当該マーカーを検出することにより再燃性前立腺癌を特異的に検出することができ、これにより再燃性前立腺癌に適した治療、すなわち非ホルモン療法をスムーズに実施できるため、患者の負担軽減及び医療経済の観点から有益であると考えた。
本発明は、再燃性前立腺癌に特異的なマーカーを見い出し、このマーカーを用いて再燃性前立腺癌を特異的に検出する方法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明者らは、これまで発現量が少ないが故に発現量の検出が困難であった特定の糖鎖関連遺伝子に着目し、これらを含む遺伝子群の中から、再燃性前立腺癌細胞においてより高い又はより低い発現量を示す遺伝子を特定することに成功した。本発明はこの知見に基づき完成するに至ったものである。
【０００５】
本発明の課題は下記の手段により達成された。
＜１＞下記（ａ）〜（ｄ）のいずれかのＤＮＡからなる少なくとも１種の遺伝子の発現量を測定することを含む、再燃性前立腺癌の検出方法：
（ａ）配列番号１の塩基配列、配列番号３の塩基配列、配列番号５の塩基配列、配列番号７の塩基配列、配列番号９の塩基配列、配列番号１１の塩基配列、配列番号１５の塩基配列、配列番号１７の塩基配列、配列番号１９の塩基配列、配列番号２１の塩基配列、配列番号２３の塩基配列、配列番号２５の塩基配列、配列番号２７の塩基配列、配列番号３１の塩基配列、配列番号３３の塩基配列、配列番号３５の塩基配列、配列番号３７の塩基配列、配列番号３９の塩基配列、配列番号４１の塩基配列、配列番号４３の塩基配列、配列番号４５の塩基配列、配列番号４７の塩基配列、配列番号５１の塩基配列、配列番号５３の塩基配列、配列番号５５の塩基配列、配列番号５７の塩基配列、配列番号５９の塩基配列及び配列番号６１の塩基配列からなる群から選ばれる塩基配列からなるＤＮＡ、
（ｂ）上記（ａ）のＤＮＡの塩基配列と８０％以上の同一性を有する塩基配列からなるＤＮＡであって、前立腺癌細胞のゲノム中に存在するＤＮＡ、
（ｃ）上記（ａ）のＤＮＡの塩基配列において、１又は数個の塩基が欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列からなるＤＮＡであって、前立腺癌細胞のゲノム中に存在するＤＮＡ、
（ｄ）上記（ａ）のＤＮＡの塩基配列と相補的な塩基配列からなるＤＮＡにストリンジェントな条件下でハイブリダイズするＤＮＡであって、前立腺癌細胞のゲノム中に存在するＤＮＡ。
＜２＞遺伝子の発現量の測定が、該遺伝子の転写産物の量の測定である、＜１＞に記載の検出方法。
＜３＞下記（Ａａ）〜（Ｂｂ）からなる群から選ばれる少なくとも１種のプライマーセットを用いて少なくとも１種の遺伝子の発現量を測定する、＜２＞に記載の検出方法：
（Ａａ）配列番号６３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号６４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｂ）配列番号６５の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号６６の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｃ）配列番号６７の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号６８の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｄ）配列番号６９の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号７０の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｅ）配列番号７１の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号７２の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｆ）配列番号７３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号７４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｇ）配列番号７７の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号７８の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｈ）配列番号７９の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号８０の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｉ）配列番号８１の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号８２の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｊ）配列番号８３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号８４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｋ）配列番号８５の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号８６の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｌ）配列番号８７の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号８８の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｍ）配列番号８９の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号９０の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｎ）配列番号９３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号９４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット、
（Ａｏ）配列番号９５の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号９６の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット、
（Ａｐ）配列番号９７の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号９８の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット、
（Ａｑ）配列番号９９の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１００の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット、
（Ａｒ）配列番号１０１の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１０２の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット、
（Ａｓ）配列番号１０３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１０４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット、
（Ａｔ）配列番号１０５の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１０６の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット、
（Ａｕ）配列番号１０７の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１０８の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット、
（Ａｖ）配列番号１０９の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１１０の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット、及び
（Ａｗ）配列番号１１３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１１４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット。
（Ａｘ）配列番号１１５の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１１６の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット。
（Ａｙ）配列番号１１７の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１１８の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット。
（Ａｚ）配列番号１１９の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１２０の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット。
（Ｂａ）配列番号１２１の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１２２の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット。
（Ｂｂ）配列番号１２３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１２４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット。
＜４＞遺伝子の発現量の測定が、該遺伝子の発現産物であるタンパク質の量の測定である、＜１＞に記載の検出方法。
＜５＞測定されるタンパク質の量が、下記（ｅ）〜（ｇ）のいずれかのアミノ酸配列からなる少なくとも１種のタンパク質の量である、＜４＞に記載の検出方法：
（ｅ）配列番号２のアミノ酸配列、配列番号４のアミノ酸配列、配列番号６のアミノ酸配列、配列番号８のアミノ酸配列、配列番号１０のアミノ酸配列、配列番号１２のアミノ酸配列、配列番号１６のアミノ酸配列、配列番号１８のアミノ酸配列、配列番号２０のアミノ酸配列、配列番号２２のアミノ酸配列、配列番号２４のアミノ酸配列、配列番号２６のアミノ酸配列、配列番号２８のアミノ酸配列、配列番号３２のアミノ酸配列、配列番号３４のアミノ酸配列、配列番号３６のアミノ酸配列、配列番号３８のアミノ酸配列、配列番号４０のアミノ酸配列、配列番号４２のアミノ酸配列、配列番号４４のアミノ酸配列、配列番号４６のアミノ酸配列、配列番号４８のアミノ酸配列、配列番号５２のアミノ酸配列、配列番号５４のアミノ酸配列、配列番号５６のアミノ酸配列、配列番号５８のアミノ酸配列、配列番号６０のアミノ酸配列及び配列番号６２のアミノ酸配列からなる群から選ばれるアミノ酸配列、
（ｆ）上記（ｅ）のアミノ酸配列と８０％以上の同一性を有し、かつ前立腺癌細胞のゲノム中に存在するＤＮＡにコードされるアミノ酸配列、
（ｇ）上記（ｅ）のアミノ酸配列において、１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列であって、前立腺癌細胞のゲノム中に存在するＤＮＡにコードされるアミノ酸配列。
＜６＞単離した前立腺癌細胞中における遺伝子の発現量を測定する、＜１＞〜＜５＞のいずれかに記載の検出方法。
【発明の効果】
【０００６】
本発明によれば、再燃性前立腺癌を、ホルモン感受性前立腺癌と区別して特異的に検出することができる。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１】実施例１に記載のＲＴ−ＰＣＲの結果を示す電気泳動の写真である。レーン１はＰｒＥ細胞の結果を、レーン２はＬＮＣａＰ細胞の結果を、レーン３はＤｕ１４５細胞の結果を、レーン４はＰＣ−３細胞の結果を示す。
【図２】実施例２に記載のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲの結果を示すグラフである。
【図３】実施例２に記載のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲの結果を示すグラフである。
【図４】実施例２に記載のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲの結果を示すグラフである。
【図５】実施例２に記載のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲの結果を示すグラフである。
【図６】実施例２に記載のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲの結果を示すグラフである。
【図７】実施例２に記載のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲの結果を示すグラフである。
【図８】実施例２に記載のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲの結果を示すグラフである。
【図９】実施例２に記載のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲの結果を示すグラフである。
【図１０】実施例２に記載のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲの結果を示すグラフである。
【図１１】実施例２に記載のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲの結果を示すグラフである。
【図１２】実施例２に記載のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲの結果を示すグラフである。
【図１３】実施例２に記載のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲの結果を示すグラフである。
【図１４】実施例２に記載のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲの結果を示すグラフである。
【図１５】実施例２に記載のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲの結果を示すグラフである。
【図１６】実施例２に記載のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲの結果を示すグラフである。
【図１７】実施例２に記載のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲの結果を示すグラフである。
【図１８】実施例２に記載のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲの結果を示すグラフである。
【図１９】実施例２に記載のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲの結果を示すグラフである。
【図２０】実施例２に記載のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲの結果を示すグラフである。
【図２１】実施例２に記載のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲの結果を示すグラフである。
【図２２】実施例２に記載のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲの結果を示すグラフである。
【図２３】実施例２に記載のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲの結果を示すグラフである。
【図２４】実施例２に記載のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲの結果を示すグラフである。
【図２５】実施例２に記載のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲの結果を示すグラフである。
【図２６】実施例２に記載のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲの結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
以下、本発明について、その好ましい実施態様に基づき詳細に説明する。
【０００９】
本発明の再燃性前立腺癌の検出方法（以下、単に本発明の検出方法と呼ぶ。）は、特定の遺伝子の発現量を測定し、当該測定結果に基づき再燃性前立腺癌を特異的に検出する方法である。
本発明において「再燃性前立腺癌」とは、「ホルモン低感受性前立腺癌」、「ホルモン抵抗性前立腺癌」及び「ホルモン非依存性前立腺癌」と同義であり、アンドロゲン等のホルモンを遮断するホルモン療法により増殖が抑制されていた癌細胞が再び増殖を開始したホルモン抵抗性の前立腺癌のみならず、癌発生当初からホルモン療法に対する抵抗性を有するホルモン抵抗性の前立腺癌細胞をも含む意味で用いられる。
【００１０】
本発明の検出方法により発現量が測定される遺伝子は、配列番号１の塩基配列、配列番号３の塩基配列、配列番号５の塩基配列、配列番号７の塩基配列、配列番号９の塩基配列、配列番号１１の塩基配列、配列番号１５の塩基配列、配列番号１７の塩基配列、配列番号１９の塩基配列、配列番号２１の塩基配列、配列番号２３の塩基配列、配列番号２５の塩基配列、配列番号２７の塩基配列、配列番号３１の塩基配列、配列番号３３の塩基配列、配列番号３５の塩基配列、配列番号３７の塩基配列、配列番号３９の塩基配列、配列番号４１の塩基配列、配列番号４３の塩基配列、配列番号４５の塩基配列、配列番号４７の塩基配列、配列番号５１の塩基配列、配列番号５３の塩基配列、配列番号５５の塩基配列、配列番号５７の塩基配列、配列番号５９の塩基配列及び配列番号６１の塩基配列からなる群から選ばれる塩基配列からなるＤＮＡ、又は当該塩基酸配列と７０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上、特に好ましくは９７％以上の同一性（ｉｄｅｎｔｉｔｙ）を有するＤＮＡからなることが好ましい。
本明細書において「塩基配列の同一性（％）」とは、比較する２つの塩基配列を必要に応じて間隙を導入して整列（アラインメント）させ、得られる最大の塩基配列の同一性（％）をいう。塩基配列の同一性を決定する目的のためのアラインメントは、通常の方法を用いて行うことができ、例えばＢＬＡＳＴのような公に入手可能なコンピュータソフトウエアや、ＤＮＡＳＩＳ Ｐｒｏ（日立ソフトウェアエンジニアリング社製）並びにＧＥＮＥＴＹＸ（ゼネティックス社製）等の市販のソフトウェアを使用することもできる。
【００１１】
また、本発明の検出方法により発現量が測定される遺伝子は、配列番号１の塩基配列、配列番号３の塩基配列、配列番号５の塩基配列、配列番号７の塩基配列、配列番号９の塩基配列、配列番号１１の塩基配列、配列番号１５の塩基配列、配列番号１７の塩基配列、配列番号１９の塩基配列、配列番号２１の塩基配列、配列番号２３の塩基配列、配列番号２５の塩基配列、配列番号２７の塩基配列、配列番号３１の塩基配列、配列番号３３の塩基配列、配列番号３５の塩基配列、配列番号３７の塩基配列、配列番号３９の塩基配列、配列番号４１の塩基配列、配列番号４３の塩基配列、配列番号４５の塩基配列、配列番号４７の塩基配列、配列番号５１の塩基配列、配列番号５３の塩基配列、配列番号５５の塩基配列、配列番号５７の塩基配列、配列番号５９の塩基配列及び配列番号６１の塩基配列からなる群から選ばれる塩基配列において１又は数個の塩基が置換、欠失、挿入又は付加された塩基配列からなるＤＮＡからなるものであってもよい。
本明細書において「１又は（もしくは）数個」とは、１〜５０の整数であることが好ましく、１〜３０の整数であることがより好ましく、１〜２０の整数であることがさらに好ましく、１〜１５の整数であることが特に好ましく、１〜１０の整数であることが殊更好ましい。
【００１２】
また、本発明の検出方法により発現量が測定される遺伝子は、配列番号１の塩基配列、配列番号３の塩基配列、配列番号５の塩基配列、配列番号７の塩基配列、配列番号９の塩基配列、配列番号１１の塩基配列、配列番号１５の塩基配列、配列番号１７の塩基配列、配列番号１９の塩基配列、配列番号２１の塩基配列、配列番号２３の塩基配列、配列番号２５の塩基配列、配列番号２７の塩基配列、配列番号３１の塩基配列、配列番号３３の塩基配列、配列番号３５の塩基配列、配列番号３７の塩基配列、配列番号３９の塩基配列、配列番号４１の塩基配列、配列番号４３の塩基配列、配列番号４５の塩基配列、配列番号４７の塩基配列、配列番号５１の塩基配列、配列番号５３の塩基配列、配列番号５５の塩基配列、配列番号５７の塩基配列、配列番号５９の塩基配列及び配列番号６１の塩基配列からなる群から選ばれる塩基配列と相補的な塩基配列からなるＤＮＡにストリンジェントな条件下でハイブリダイズするＤＮＡからなるものでもよい。
本明細書において「ストリンジェントな条件」とは、塩基配列の同一性が高いＤＮＡ同士、例えば７０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上、特に好ましくは９７％以上の同一性を有するＤＮＡ同士がハイブリダイズし、それより同一性が低いＤＮＡ同士がハイブリダイズしない条件、あるいは通常のサザンハイブリダイゼーションの洗浄条件である６０℃、１×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、好ましくは、６０℃、０．１×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、より好ましくは、６５℃、０．１×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、さらに好ましくは６８℃、０．１×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳに相当する温度及び塩濃度で、１回、より好ましくは２〜３回洗浄する条件が挙げられる。上記ハイブリダイゼーションは、Ｊ． Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ． Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ， Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，２ｎｄ Ｅｄ．， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（１９８９）に記載されている方法等、通常の方法で行うことができる。
【００１３】
本発明の検出方法により発現量が測定される上記遺伝子は、少なくともヒト前立腺癌細胞のゲノム中に存在するＤＮＡからなる遺伝子であって、ホルモン感受性前立腺癌と再燃性前立腺癌との間で発現量に差がある遺伝子である。配列番号１、３、５、７、９、１１、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、５１、５３、５５、５７、５９及び６１の塩基配列からなる各遺伝子の半数以上は、発現量が少ないが故に、これまでＤＮＡマイクロアレイ等の網羅的解析手段によっては発現量の解析が困難であった糖鎖関連遺伝子である。ここで、糖鎖関連遺伝子とは、糖鎖の合成、代謝、修飾等に関与しうる遺伝子を意味する。
【００１４】
本明細書に記載される塩基配列の配列番号と当該塩基配列にコードされる遺伝子名との対応を下記表１に示す。
【００１５】
【表１】
【００１６】
本発明の検出方法により発現量が測定される遺伝子は、配列番号１の塩基配列、配列番号３の塩基配列、配列番号５の塩基配列、配列番号７の塩基配列、配列番号９の塩基配列、配列番号１１の塩基配列及び配列番号２７の塩基配列からなる群から選ばれる塩基配列からなるＤＮＡ、又は、
配列番号１の塩基配列、配列番号３の塩基配列、配列番号５の塩基配列、配列番号７の塩基配列、配列番号９の塩基配列、配列番号１１の塩基配列及び配列番号２７の塩基配列からなる群から選ばれる塩基配列と７０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上、特に好ましくは９７％以上の同一性（ｉｄｅｎｔｉｔｙ）を有するＤＮＡ、又は、
配列番号１の塩基配列、配列番号３の塩基配列、配列番号５の塩基配列、配列番号７の塩基配列、配列番号９の塩基配列、配列番号１１の塩基配列及び配列番号２７の塩基配列からなる群から選ばれる塩基配列において１もしくは数個の塩基が置換、欠失、挿入もしくは付加された塩基配列からなるＤＮＡ、又は、
配列番号１の塩基配列、配列番号３の塩基配列、配列番号５の塩基配列、配列番号７の塩基配列、配列番号９の塩基配列、配列番号１１の塩基配列及び配列番号２７の塩基配列からなる群から選ばれる塩基配列と相補的な塩基配列からなるＤＮＡにストリンジェントな条件下でハイブリダイズするＤＮＡからなることが好ましい。
【００１７】
本発明の検出方法においては、上記表１に示す遺伝子（又はそのバリアント）の少なくとも１種の発現量を測定する（但し、ＰＳＡ、ＡＣＴＢ、ＡＲを除く。）。すなわち、本発明の検出方法では、上記表１に示す遺伝子（又はそのバリアント）のうち１種の発現量を測定して再燃性前立腺癌の検出を行ってもよいし、上記遺伝子のうち２種以上の発現量を測定して再燃性前立腺癌の検出を行ってもよい。本発明において「測定」には、定量及び定性の両概念が含まれる。
【００１８】
本発明の検出方法において、発現量が測定される遺伝子が２種以上である場合において、その好ましい遺伝子の組み合わせの例として、下記（ｈ）〜（ｍ）の組合わせが挙げられるが、本発明はこれに限定されるものではない。
（ｈ）配列番号１の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子と、
配列番号３の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子、配列番号５の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子、配列番号７の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子、配列番号９の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子、配列番号１１の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子及び配列番号２７の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子からなる群から選ばれる１種又は２種以上の遺伝子
との組み合わせ、
（ｉ）配列番号３の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子と、
配列番号５の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子、配列番号７の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子、配列番号９の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子、配列番号１１の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子及び配列番号２７の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子からなる群から選ばれる１種又は２種以上の遺伝子
との組み合わせ、
（ｊ）配列番号５の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子と、
配列番号７の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子、配列番号９の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子、配列番号１１の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子及び配列番号２７の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子からなる群から選ばれる１種又は２種以上の遺伝子
との組み合わせ、
（ｋ）配列番号７の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子と、
配列番号９の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子、配列番号１１の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子及び配列番号２７の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子からなる群から選ばれる１種又は２種以上の遺伝子
との組み合わせ、
（ｌ）配列番号９の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子と、
配列番号１１の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又は配列番号２７の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子
との組み合わせ、
（ｍ）配列番号１１の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子と、
配列番号２７の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子
との組み合わせ。
【００１９】
本発明において、遺伝子の発現量の測定は、当該遺伝子の転写産物の量、すなわちｍＲＮＡの発現量を測定することで行うことができる。ｍＲＮＡの発現量は、ＲＴ−ＰＣＲ、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ等の通常の方法で行うことができるが、迅速な測定の観点からリアルタイムＲＴ−ＰＣＲにより測定することが好ましい。リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法は、例えば、後述する実施例に記載の方法のような通常の方法で行うことができる。
【００２０】
上記ｍＲＮＡの発現量の測定に用いる遺伝子増幅用プライマーに特に制限はなく、目的とする遺伝子の塩基配列に基づき通常の方法で設計することができる。例えば、下記（Ａa）〜（Ｂｂ）から選ばれる１種又は２種以上のプライマーセットを用いることで、上記ｍＲＮＡから合成したｃＤＮＡを鋳型として核酸増幅反応を行うことができ、これにより上記ｍＲＮＡの発現量を測定することができる。
（Ａａ）配列番号６３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号６４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｂ）配列番号６５の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号６６の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｃ）配列番号６７の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号６８の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｄ）配列番号６９の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号７０の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｅ）配列番号７１の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号７２の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｆ）配列番号７３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号７４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｇ）配列番号７７の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号７８の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｈ）配列番号７９の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号８０の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｉ）配列番号８１の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号８２の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｊ）配列番号８３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号８４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｋ）配列番号８５の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号８６の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｌ）配列番号８７の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号８８の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｍ）配列番号８９の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号９０の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｎ）配列番号９３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号９４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット、
（Ａｏ）配列番号９５の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号９６の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット、
（Ａｐ）配列番号９７の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号９８の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット、
（Ａｑ）配列番号９９の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１００の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット、
（Ａｒ）配列番号１０１の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１０２の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット、
（Ａｓ）配列番号１０３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１０４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット、
（Ａｔ）配列番号１０５の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１０６の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット、
（Ａｕ）配列番号１０７の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１０８の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット、
（Ａｖ）配列番号１０９の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１１０の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット、及び
（Ａｗ）配列番号１１３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１１４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット。
（Ａｘ）配列番号１１５の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１１６の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット。
（Ａｙ）配列番号１１７の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１１８の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット。
（Ａｚ）配列番号１１９の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１２０の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット。
（Ｂａ）配列番号１２１の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１２２の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット。
（Ｂｂ）配列番号１２３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１２４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット。
【００２１】
上記（Ａａ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号１の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
上記（Ａｂ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号３の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
上記（Ａｃ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号５の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
上記（Ａｄ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号７の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
上記（Ａｅ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号９の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
上記（Ａｆ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号１１の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
上記（Ａｇ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号１５の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
上記（Ａｈ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号１７の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
上記（Ａｉ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号１９の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
上記（Ａｊ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号２１の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
上記（Ａｋ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号２３の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
上記（Ａｌ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号２５の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
上記（Ａｍ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号２７の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
上記（Ａｎ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号３１の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
上記（Ａｏ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号３３の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
上記（Ａｐ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号３５の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
上記（Ａｑ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号３７の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
上記（Ａｒ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号３９の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
上記（Ａｓ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号４１の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
上記（Ａｔ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号４３の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
上記（Ａｕ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号４５の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
上記（Ａｖ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号４７の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
上記（Ａｗ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号５１の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
上記（Ａｘ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号５３の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
上記（Ａｙ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号５５の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
上記（Ａｚ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号５７の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
上記（Ｂａ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号５９の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
上記（Ｂｂ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号６１の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
【００２２】
本発明において、遺伝子の発現量の測定は、当該遺伝子の発現産物であるタンパク質の量を測定することで行うこともできる。
【００２３】
本発明において量が測定されるタンパク質は、配列番号２のアミノ酸配列、配列番号４のアミノ酸配列、配列番号６のアミノ酸配列、配列番号８のアミノ酸配列、配列番号１０のアミノ酸配列、配列番号１２のアミノ酸配列、配列番号１６のアミノ酸配列、配列番号１８のアミノ酸配列、配列番号２０のアミノ酸配列、配列番号２２のアミノ酸配列、配列番号２４のアミノ酸配列、配列番号２６のアミノ酸配列、配列番号２８のアミノ酸配列、配列番号３２のアミノ酸配列、配列番号３４のアミノ酸配列、配列番号３６のアミノ酸配列、配列番号３８のアミノ酸配列、配列番号４０のアミノ酸配列、配列番号４２のアミノ酸配列、配列番号４４のアミノ酸配列、配列番号４６のアミノ酸配列、配列番号４８のアミノ酸配列、配列番号５２のアミノ酸配列、配列番号５４のアミノ酸配列、配列番号５６のアミノ酸配列、配列番号５８のアミノ酸配列、配列番号６０のアミノ酸配列及び配列番号６２のアミノ酸配列からなる群から選ばれるアミノ酸配列、又は
配列番号２のアミノ酸配列、配列番号４のアミノ酸配列、配列番号６のアミノ酸配列、配列番号８のアミノ酸配列、配列番号１０のアミノ酸配列、配列番号１２のアミノ酸配列、配列番号１６のアミノ酸配列、配列番号１８のアミノ酸配列、配列番号２０のアミノ酸配列、配列番号２２のアミノ酸配列、配列番号２４のアミノ酸配列、配列番号２６のアミノ酸配列、配列番号２８のアミノ酸配列、配列番号３２のアミノ酸配列、配列番号３４のアミノ酸配列、配列番号３６のアミノ酸配列、配列番号３８のアミノ酸配列、配列番号４０のアミノ酸配列、配列番号４２のアミノ酸配列、配列番号４４のアミノ酸配列、配列番号４６のアミノ酸配列、配列番号４８のアミノ酸配列、配列番号５２のアミノ酸配列、配列番号５４のアミノ酸配列、配列番号５６のアミノ酸配列、配列番号５８のアミノ酸配列、配列番号６０のアミノ酸配列及び配列番号６２のアミノ酸配列からなる群から選ばれるアミノ酸配列と７０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上、特に好ましくは９７％以上の同一性（ｉｄｅｎｔｉｔｙ）を有するアミノ酸配列、又は
配列番号２のアミノ酸配列、配列番号４のアミノ酸配列、配列番号６のアミノ酸配列、配列番号８のアミノ酸配列、配列番号１０のアミノ酸配列、配列番号１２のアミノ酸配列、配列番号１６のアミノ酸配列、配列番号１８のアミノ酸配列、配列番号２０のアミノ酸配列、配列番号２２のアミノ酸配列、配列番号２４のアミノ酸配列、配列番号２６のアミノ酸配列、配列番号２８のアミノ酸配列、配列番号３２のアミノ酸配列、配列番号３４のアミノ酸配列、配列番号３６のアミノ酸配列、配列番号３８のアミノ酸配列、配列番号４０のアミノ酸配列、配列番号４２のアミノ酸配列、配列番号４４のアミノ酸配列、配列番号４６のアミノ酸配列、配列番号４８のアミノ酸配列、配列番号５２のアミノ酸配列、配列番号５４のアミノ酸配列、配列番号５６のアミノ酸配列、配列番号５８のアミノ酸配列、配列番号６０のアミノ酸配列及び配列番号６２のアミノ酸配列からなる群から選ばれるアミノ酸配列において、１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列
からなることが好ましい。
【００２４】
本発明において「アミノ酸配列の同一性（％）」とは、比較する２つのアミノ酸配列を必要に応じて間隙を導入して整列（アラインメント）させ、得られる最大のアミノ酸配列の同一性（％）をいう。アミノ酸配列の同一性を決定する目的のためのアラインメントは、通常の方法を用いて行うことができ、例えばＢＬＡＳＴのような公に入手可能なコンピュータソフトウエアや、ＤＮＡＳＩＳ Ｐｒｏ（日立ソフトウェアエンジニアリング社製）並びにＧＥＮＥＴＹＸ（ゼネティックス社製）等の市販のソフトウェアを使用することもできる。
また、上記「１又は数個」とは上述したとおりである。
【００２５】
上記タンパク質は、少なくともヒト前立腺癌細胞のゲノム中に存在するＤＮＡにコードされるアミノ酸配列からなるタンパク質であって、ホルモン感受性前立腺癌と再燃性前立腺癌との間で存在量に差がある遺伝子である。
【００２６】
本発明の検出方法において、遺伝子の発現量として測定されるタンパク質は、上記タンパク質の少なくとも１種である。すなわち、２種以上のタンパク質の量を測定してもよい。２種以上のタンパク質の量を測定する際の、測定されるタンパク質の好ましい組み合わせの例として、下記（ｎ）〜（ｓ）の組合わせが挙げられるが、本発明はこれに限定されるものではない。
【００２７】
（ｎ）配列番号２のアミノ酸配列からなるタンパク質と、
配列番号４のアミノ酸配列からなるタンパク質、配列番号６のアミノ酸配列からなるタンパク質、配列番号８のアミノ酸配列からなるタンパク質、配列番号１０のアミノ酸配列からなるタンパク質、配列番号１２のアミノ酸配列からなるタンパク質及び配列番号２８のアミノ酸配列からなるタンパク質からなる群から選ばれる１種又は２種以上のタンパク質
との組み合わせ、
（ｏ）配列番号４のアミノ酸配列からなるタンパク質と、
配列番号６のアミノ酸配列からなるタンパク質、配列番号８のアミノ酸配列からなるタンパク質、配列番号１０のアミノ酸配列からなるタンパク質、配列番号１２のアミノ酸配列からなるタンパク質及び配列番号２８のアミノ酸配列からなるタンパク質からなる群から選ばれる１種又は２種以上のタンパク質
との組み合わせ、
（ｐ）配列番号６のアミノ酸配列からなるタンパク質と、
配列番号８のアミノ酸配列からなるタンパク質、配列番号１０のアミノ酸配列からなるタンパク質、配列番号１２のアミノ酸配列からなるタンパク質及び配列番号２８のアミノ酸配列からなるタンパク質からなる群から選ばれる１種又は２種以上のタンパク質
との組み合わせ、
（ｑ）配列番号８のアミノ酸配列からなるタンパク質と、
配列番号１０のアミノ酸配列からなるタンパク質、配列番号１２のアミノ酸配列からなるタンパク質及び配列番号２８のアミノ酸配列からなるタンパク質からなる群から選ばれる１種又は２種以上のタンパク質
との組み合わせ、
（ｒ）配列番号１０のアミノ酸配列からなるタンパク質と、
配列番号１２のアミノ酸配列からなるタンパク質又は配列番号２８のアミノ酸配列からなるタンパク質
との組み合わせ、
（ｓ）配列番号１２のアミノ酸配列からなるタンパク質と、
配列番号２８のアミノ酸配列からなるタンパク質
との組み合わせ。
【００２８】
上記タンパク質の量の測定は、上記タンパク質に特異的に結合する分子を用いて行うことが好ましい。本発明のタンパク質に特異的に結合する分子としては、本発明のタンパク質に対する抗体やアプタマー等が挙げられるが、本発明のタンパク質に対する抗体を用いることが好ましい。上記抗体やアプタマーは、目的に応じて、放射性物質、酵素、蛍光物質、発光物質等で標識して用いることができる。
抗体を用いた測定は、イムノアッセイの分野において通常用いられる手段を採用することができ、例えば、イムノブロット法、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ法）、イムノクロマト法などにより検出することができる。
【００２９】
上記タンパク質の検出に用いる抗体は、通常の方法で取得することができる。例えば、上記タンパク質を免疫原として用い、動物に免疫して、該動物から上記タンパク質に選択的に反応する抗体を取得することができる。また、上記タンパク質のアミノ酸配列から上記タンパク質に特徴的なアミノ酸配列を選択し、該アミノ酸配列からなるペプチドを化学的に合成して、これを動物に免疫して、該動物から上記タンパク質に選択的に反応する抗体を取得することができる。
【００３０】
上記タンパク質の測定は、上記タンパク質におけるエピトープの異なる２種類の抗体を用いて、サンドイッチイムノアッセイの原理により行うことが好ましい。この場合において、一方の抗体は捕捉抗体として固相に固定化され、もう一方の抗体は、標識され、検出用抗体として機能する。
【００３１】
サンドイッチＥＬＩＳＡ法では、上記タンパク質に対する抗体が固定化されたウェルを用意し、非特異的な吸着を防ぐために、ＢＳＡやカゼイン等により当該ウェルをブロッキングしておく。ここに前立腺癌細胞等から調製したタンパク質溶液を入れ、抗体が失活しにくい温度（例えば４〜４０℃）で数分〜数日インキュベートする。続いてタンパク質溶液を捨て、リン酸緩衝液等でウェルを洗浄後、固定化抗体が結合するエピトープとは異なるエピトープに結合する標識された抗体を加え、再び数分〜数日インキュベートし、ウェルを洗浄後、ウェル内に存在する標識を検出する。上記タンパク質溶液中に目的のタンパク質が存在する場合には、標識のシグナルが高くなるため、これにより、再燃性前立腺癌の検出を行うことができる。
【００３２】
また、イムノクロマト法においては、上記サンドイッチＥＬＩＳＡにおける固定化抗体をメンブレンのテストライン上に固定化しておき、上記サンドイッチＥＬＩＳＡにおける標識抗体をコンジュゲートパッドに保持した状態のテストストリップを調製する。前立腺癌細胞等から調製したタンパク質溶液をコンジュゲートパッドに直接又は間接的に添加すると、毛細管現象により、当該溶液が標識抗体と液相中で反応しながらコンジュゲートパッドからメンブレンへと進んでいく。タンパク質溶液中に目的のタンパク質が存在する場合には、メンブレンのテストライン上に標識抗体と目的のタンパク質とからなる複合体がトラップされる。したがって、テストライン上に存在する標識を検出することにより、再燃性前立腺癌の検出を行うことができる。
【００３３】
本発明において、遺伝子の発現量の測定が行われる試料に特に制限はなく、例えば、血液、血漿、血清、リンパ液、尿、唾液等の体液、前立腺癌組織、前立腺癌細胞等が挙げられるが、前立腺癌組織や前立腺癌細胞を使用することが好ましい。本発明において「単離した前立腺癌細胞」には、生体（前立腺癌患者）から摘出した前立腺癌組織、当該組織をレーザーダイゼクション等により切り出したサンプル等が含まれる。
【００３４】
上記試料の由来に特に制限はないが、ヒト由来であることが好ましい。すなわち、本発明の検出方法は、ヒトの再燃性前立腺癌の検出に好適に用いられる。
【００３５】
本発明の検出方法を用いることで、前立腺癌のホルモン感受性を、簡便に、しかも精度よく判定することができ、これにより再燃性前立腺癌を特異的に検出することができる。したがって、本発明の検出方法は、再燃性前立腺癌の診断に有用である。
【００３６】
以下、本発明を実施例に基づきさらに詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
【実施例】
【００３７】
下記のヒト前立腺癌細胞株を用いて、下記のＤＮＡマイクロアレイ解析及び定量的ＰＣＲアレイ解析を中心に解析を行い、ホルモン感受性前立腺癌とホルモン抵抗性前立腺癌とを区別しうるマーカー候補遺伝子の選抜を行った。
【００３８】
［ヒト前立腺癌細胞株の培養］
前立腺癌細胞株ＬＮＣａＰ（ホルモン感受性（依存性））とＤｕ１４５（ホルモン抵抗性（非依存性））は独立行政法人理化学研究所バイオリソース研究センター理研セルバンクより入手した。ＰＣ−３（ホルモン非依存性）は財団法人ヒューマンサイエンス振興財団JCRB細胞バンクより入手した。正常ヒト前立腺上皮細胞株ＰｒＥは、ＤＳファーマバイオメディカル社より購入した。前立腺癌細胞株はすべて、ＲＰＭＩ １６４０培地(ＧＩＢＣＯ社製)に１０％ ＦＢＳ(Ｈｙｃｌｏｎｅ社製)、１％ ペニシリン／ストレプトマイシン(ＧＩＢＣＯ社製)を添加したものを用いて培養した。正常ヒト前立腺上皮細胞株は、ＣＳ−Ｃ培地キットＲ（ＤＳファーマバイオメディカル社製)を用い培養した。すべての細胞は、ＲＮＡおよびタンパク質を抽出する１日前にＲＰＭＩ１６４０に１０％ ＦＢＳを加えた培地に置換して培養した。
【００３９】
［ＤＮＡマイクロアレイ解析］
糖鎖関連遺伝子網羅解析のＤＮＡマイクロアレイは、独立行政法人理化学研究所 疾患糖鎖研究チームが開発したツールを用いた。本ツールの詳細は文献(Molecular And Cellular Biology, Apr.2007, p.3008-3022)に記載されている。簡潔に言えば、まず対数増殖期の細胞のｍＲＮＡをｍＴＲＡＰ ｍｉｄｉ ｋｉｔ(アクティブモチーフ社製)を用いて調製し、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製のバイオアナライザー２１００でクオリティーチェック後、ＣｙＳｃｒｉｂｅ Ｐｏｓｔ−Ｌａｂｅｌｌｉｎｇ Ｋｉｔ(ＧＥヘルスケアバイオサイエンス社製)で蛍光標識した。蛍光標識したサンプルを約１２００の糖鎖関連遺伝子を搭載したマイクロアレイにハイブリダイズし、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ ４２８ Ａｒｒａｙ Ｓｃａｎｎｅｒでスキャニングした。各スポットのシグナル強度を定量(ＩｍａＧｅｎｅ; ＢｉｏＤｉｓｃｏｖｅｒｙ社製)し、補正後にクラスタリング作成ソフトＭｕｌｔｉＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔ Ｖｉｅｗｅｒ （ＭｅＶ）（Opensource software tool, http://www.tm4.org/）で解析した。
【００４０】
［定量的ＰＣＲアレイ解析］
糖鎖合成酵素に特化した遺伝子網羅解析のツールであるｑＰＣＲアレイは、独立行政法人産業技術総合研究所 糖鎖医工学センターが開発したツールを用いた。本ツールの詳細は文献(Jornal of Proteome Reserch. Vol.8, No.3, 2009, p.1358-1367)に記載されている。簡潔に言えば、まず対数増殖期の細胞のｔｏｔａｌ ＲＮＡを、ＲＮｅａｓｙ ｐｌｕｓ ｍｉｎｉ ｋｉｔ (ＱＩＡＧＥＮ社製)を用いて調製し、ＱｕａｎｔｉＴｅｃｔ Ｒｅｖ． Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｋｉｔ(ＱＩＡＧＥＮ社)を用いてＦｉｒｓｔ ｓｔｒａｎｄ ｃＤＮＡを合成した。ＰＣＲプライマーは、ＰｒｏｂｅＦｉｎｄｅｒ(https://www.roche-applied-science.com/)を用いて選択し、インビトロジェン社にて作成、購入した。加水分解プローブは、Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ＰｒｏｂｅＬｉｂｒａｒｙ(ロシュ社)より選択した。全１８９遺伝子のアッセイをｄｕｐｌｉｃａｔｅで３８４プレートにフォーマットし、ｑＰＣＲ Ｑｕｉｃｋ ＧｏｌｄＳｔａｒ Ｍａｓｔｅｒｍｉｘ Ｐｌｕｓ (Ｅｕｒｏｇｅｎｔｅｃ社製)を用いて、ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ ４８０(ロシュ社製)にて増幅、測定した。各コピー数を算出後、補正後にクラスタリング作成ソフトＭｕｌｔｉＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔ Viewer （ＭｅＶ）（Opensource software tool, http://www.tm4.org/）で解析した。
【００４１】
実施例１ ＲＴ−ＰＣＲによる再燃性前立腺癌の検出
正常ヒト前立腺上皮細胞株ＰｒＥ並びに前立腺癌細胞株ＬＮＣａＰ（ホルモン感受性株）、Ｄｕ１４５（ホルモン抵抗性株）及びＰＣ−３（ホルモン抵抗性株）の各細胞株を用いて、ＲＴ−ＰＣＲにより、前記表１に示す３１種類の遺伝子の転写産物の量を測定した。
具体的には、ＰｒＥ、ＬＮＣａＰ、Ｄｕ１４５及びＰＣ−３の各前立腺癌細胞から上記と同様に合成したｃＤＮＡを鋳型とし、ＤＮＡポリメラーゼ（商品名：ＧｏＴａｑ（登録商標） Ｈｏｔ Ｓｔａｒｔ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ、プロメガ社)と、上述した（Ａａ）〜（Ｂｂ）で表されるプライマーセット、配列番号７５及び７６の塩基配列を有する各オリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、配列番号９１及び９２の塩基配列を有する各オリゴヌクレオチドからなるプライマーセット並びに配列番号１１１及び１１２の塩基配列を有する各オリゴヌクレオチドからなるプライマーセットとを用い、サーマルサイクラー（商品名：ＧｅｎｅＡｍｐ（登録商標） ＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍ ９７００(アプライドバイオシステムズ社製)により各ＤＮＡの増幅反応を行った。２％ アガロースゲルにて電気泳動をおこなった後、エチジウムブロミド染色してＵＶトランスイルミネーターで発光させ、写真を撮った(ポラロイド社製)。なお、上記プライマーセットを構成するプライマーは、ＰｒｏｂｅＦｉｎｄｅｒ (https://www.roche-applied-science.com/)を用いて選択し、インビトロジェン社にて作成、購入したものである。
結果を図１に示す。なお、図１におけるＰＳＡ、ＡＣＴＢ、ＡＲ及びＧＡＰＤＨの測定結果は参考として載せたものであり、本発明の効果を示すものではない。
【００４２】
図１の結果から、ホルモン抵抗性前立腺癌細胞株であるＤｕ１４５及びＰＣ−３では、ホルモン感受性前立腺細胞株であるＬＮＣａＰに比べて、ＧＡＬＮＡＣ４Ｓ-６ＳＴ（配列番号１）、Ｂ３ＧＮＴ５（配列番号３）、ＬＧＡＬＳ１（配列番号５）、ＣＡＶ１（配列番号７）、ＣＤ１８／ＩＴＧＢ２（配列番号９）、ＩＴＧＡ３（配列番号１１）、ＣＨＳＴ１１（配列番号１５）、ＣＨＳＴ１０（配列番号１７）、ＦＵＴ８（配列番号２１）、ＨＡＳ３（配列番号２５）、ＬＣＮ２（配列番号３１）、ＣＨＳＴ７（配列番号３３）、ＵＳＴ（配列番号３５）、ＥＸＴ１（配列番号３７）、ＧＡＬＮＴ４（配列番号３９）、ＨＸＢ／ＴＮＣ（配列番号４１、ＢＡＣＥ２（配列番号４３）、ＣＤ４４（配列番号４５）、ＮＰＲ３（配列番号４７）、ＢＭＰ１５（配列番号５１）、ＴＥＣＫ／ＣＣＬ２５（配列番号５３）、ＧＡＬＮＴ１４（配列番号５５）及びＳＴ８ＳＩＡ５（配列番号５７）のｍＲＮＡ発現量が明らかに増加していることがわかる。したがって、前立腺癌患者から採取した試料におけるこれらの遺伝子の少なくとも１つの発現量を測定し、その発現量が所定のレベルより高い場合には、ホルモン抵抗性の前立腺癌細胞が存在すると判定することができ、これによりホルモン抵抗性前立腺癌（再燃性前立腺癌）を検出することができる。
【００４３】
また、図１の結果から、ホルモン抵抗性前立腺癌細胞株であるＤｕ１４５及びＰＣ−３では、ホルモン感受性前立腺細胞株であるＬＮＣａＰに比べて、ＳＴ６ＧＡＬＮＡＣ１（配列番号２７）、ＧＡＬ３ＳＴ２（配列番号５９）及びＬＡＲＧＥ（配列番号６１）のｍＲＮＡの発現量が明らかに抑えられていることがわかる。したがって、前立腺癌患者から採取した試料におけるこれらの遺伝子の少なくとも１つの発現量を測定し、その発現量が所定のレベルより低い場合には、ホルモン抵抗性の前立腺癌細胞が存在すると判定することができ、これによりホルモン抵抗性前立腺癌（再燃性前立腺癌）を検出することができる。
【００４４】
実施例２ リアルタイムＲＴ−ＰＣＲによる再燃性前立腺癌の検出
下記のヒト前立腺癌の組織サンプルを用いて、下記のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲにより、前記表１に示す遺伝子のうち２５種類の遺伝子の転写産物の量を測定した。
【００４５】
［ヒト前立腺癌組織サンプル］
前立腺癌臨床組織サンプルは、愛知県がんセンターより供与された。総てのサンプルは、インフォームドコンセントが取れた患者より供与されたものである。ホルモン療法を処置していない前立腺癌患者より摘出した前立腺組織を８例と、前立腺摘出手術を受ける前に３ヶ月以上のホルモン療法（ネオアジュバント療法：Leuteining hormone-releasing hormone analogue(LH-RHa)と非ステロイド性抗アンドロゲン剤のBicalutamideの併用）を受けた前立腺癌患者であって、当該治療に対して低感受性（治療効果が薄い）患者より摘出した組織８例を本実施例にて用いた。
【００４６】
一般に前立腺癌では、癌細胞はアンドロゲン等の雄性ホルモンに依存して増殖し、ホルモンの働きを抑えることにより癌細胞の増殖は効果的に抑制されることが多い。一方、ホルモン抵抗性の前立腺癌は、ホルモン療法を受けたのち、一度増殖が抑制されたにもかかわらず、生き残った癌細胞が再び増殖してきたものであることが多く、ホルモン療法を受けていない前立腺癌患者における発症率は比較的低い。そこで、ホルモン療法を受けていない前立腺癌患者をホルモン感受性前立腺癌患者であるものと仮定し、下記の試験を行った。ホルモン療法を受けていない前立腺癌患者から採取した癌細胞と、ホルモン療法に対する低感受性の前立腺癌患者から採取した癌細胞との間でもなお、発現量に有意な差が認められる遺伝子は、再燃性前立腺癌マーカーとしても非常に有用であると判断できると考えられる。
【００４７】
［リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ解析］
インフォームドコンセントが取れている前立腺癌患者より摘出した前立腺臨床組織サンプルの薄切より、癌部をレーザーマイクロダイセクション(ＬＭＤ６０００;ライカ社製)により切り出し、ＲＮＡ抽出キット（商品名：ＲｅｃｏｖｅｒＡｌｌ（商標） Ｔｏｔａｌ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔ、Ａｍｂｉｏｎ社製)にてＲＮＡを抽出した。Ｈｉｇｈ Ｃａｐａｃｉｔｙ ｃＤＮＡ Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｋｉｔ(アプライドバイオシステムズ社製)を用いてｃＤＮＡを調製後、ＴａｑＭａｎ（登録商標） ＰｒｅＡｍｐ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ Ｋｉｔ(アプライドバイオシステムズ社製)で前増幅し、ｑＰＣＲ Ｑｕｉｃｋ ＧｏｌｄＳｔａｒ Ｍａｓｔｅｒｍｉｘ Ｐｌｕｓ (Ｅｕｒｏｇｅｎｔｅｃ社製)を用いて、ＡＢＩ ＰＲＩＳＭ（登録商標） ７７００ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍで増幅、測定した。なお、使用したプライマーセットは実施例１と同様である。各コピー数を算出後、コントロールとして用いたｇｌｙｃｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ−３−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ（ＧＡＰＤＨ）ｍＲＮＡの発現量で標準化した。統計解析はヒューリンクス社の「ＫａｌｅｉｄａＧｒａｐｈ」を用い、ｔ−検定をおこなった。
結果をグラフ化したものを図２〜２６に示す。また、ｔ−検定の結果（Ｐ値）を下記表２に示す。なお、図８のＰＳＡ、図１６のＡＣＴＢ及び図２６のＡＲの結果は参考として載せたものであり、本発明の効果を示すものではない。
【００４８】
【表２】
【００４９】
図２及び表２の結果から、ＧＡＬＮＡＣ４Ｓ−６ＳＴ（配列番号１）、Ｂ３ＧＮＴ５（配列番号３）、ＬＧＡＬＳ１（配列番号５）、ＣＡＶ１（配列番号７）、ＩＴＧＢ２（配列番号９）、ＩＴＧＡ３（配列番号１１）及びＳＴ６ＧＡＬＮＡＣ１（配列番号２７）において、ホルモン療法を受けていない前立腺癌患者８名から採取した癌細胞と、ホルモン療法に対する低感受性の前立腺癌患者８名から採取した癌細胞との間で、ｍＲＮＡの発現量に明らかな有意差（Ｐ＜０．０５）が認められた（表２中、８ｖｓ８の欄参照）。なお既存マーカーであるＰＳＡの発現量は、ホルモン療法に対する低感受性の前立腺癌患者８名から採取した癌細胞において有意に低下しているが、これは、アンドロゲンが遮断された結果引き起こされたものであり、ホルモン抵抗性との直接の関連性は低い。
また、ホルモン療法を受けていない未治療群の中にも、ホルモン療法に低感受性の患者が存在する可能性がある。したがって、参考のために、ホルモン療法を受けていない前立腺癌患者８名から採取した検体のうち、ｍＲＮＡの発現量が高い患者検体２つを除き、ホルモン療法を受けていない前立腺癌患者６名から採取した癌細胞と、ホルモン療法に対する低感受性の前立腺癌患者８名から採取した癌細胞との間の有意差を調べた。その結果、ＨＡＳ３（配列番号２５）、ＵＳＴ（配列番号３５）及びＥＸＴ１（配列番号３７）でも有意差（Ｐ＜０．０５）を認めた（表２中、６ｖｓ８の欄参照）。
【００５０】
なお、上記で有意差が認められなかった遺伝子に関しても、実施例１で示すように前立腺癌のセルラインを用いた試験では、ホルモン感受性前立腺癌細胞とホルモン抵抗性の前立腺癌細胞とを区別しうることが示されている。したがって、現状では困難であるが、ホルモン感受性患者として特定された患者検体を用いることができれば、ホルモン療法に対する低感受性の前立腺癌患者検体との間で発現量の有意差が認められうるものと考えられる。
【００５１】
以上の結果、本発明の検出方法は、再燃性前立腺癌を特異的に検出できる方法であることが示された。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、再燃性前立腺癌の検出方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
前立腺癌は、男性ホルモンであるアンドロゲンに依存して増殖するため、アンドロゲンの分泌や働きを抑制するホルモン療法が有効な治療法として用いられている。しかし、このホルモン療法によっても少なからず癌細胞が生き残る。生き残った癌細胞は、その後増殖を繰返し、ホルモン療法に耐性をもったホルモン抵抗性前立腺癌を引き起こす。ホルモン抵抗性前立腺癌は、ホルモン療法により一度抑制された前立腺癌の増殖が再び活発化したものであり、再燃性前立腺癌とも呼ばれる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明者らは、再燃性前立腺癌特異的なマーカーを開発することができれば、当該マーカーを検出することにより再燃性前立腺癌を特異的に検出することができ、これにより再燃性前立腺癌に適した治療、すなわち非ホルモン療法をスムーズに実施できるため、患者の負担軽減及び医療経済の観点から有益であると考えた。
本発明は、再燃性前立腺癌に特異的なマーカーを見い出し、このマーカーを用いて再燃性前立腺癌を特異的に検出する方法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明者らは、これまで発現量が少ないが故に発現量の検出が困難であった特定の糖鎖関連遺伝子に着目し、これらを含む遺伝子群の中から、再燃性前立腺癌細胞においてより高い又はより低い発現量を示す遺伝子を特定することに成功した。本発明はこの知見に基づき完成するに至ったものである。
【０００５】
本発明の課題は下記の手段により達成された。
＜１＞下記（ａ）〜（ｄ）のいずれかのＤＮＡからなる少なくとも１種の遺伝子の発現量を測定することを含む、再燃性前立腺癌の検出方法：
（ａ）配列番号１の塩基配列、配列番号３の塩基配列、配列番号５の塩基配列、配列番号７の塩基配列、配列番号９の塩基配列、配列番号１１の塩基配列、配列番号１５の塩基配列、配列番号１７の塩基配列、配列番号１９の塩基配列、配列番号２１の塩基配列、配列番号２３の塩基配列、配列番号２５の塩基配列、配列番号２７の塩基配列、配列番号３１の塩基配列、配列番号３３の塩基配列、配列番号３５の塩基配列、配列番号３７の塩基配列、配列番号３９の塩基配列、配列番号４１の塩基配列、配列番号４３の塩基配列、配列番号４５の塩基配列、配列番号４７の塩基配列、配列番号５１の塩基配列、配列番号５３の塩基配列、配列番号５５の塩基配列、配列番号５７の塩基配列、配列番号５９の塩基配列及び配列番号６１の塩基配列からなる群から選ばれる塩基配列からなるＤＮＡ、
（ｂ）上記（ａ）のＤＮＡの塩基配列と８０％以上の同一性を有する塩基配列からなるＤＮＡであって、前立腺癌細胞のゲノム中に存在するＤＮＡ、
（ｃ）上記（ａ）のＤＮＡの塩基配列において、１又は数個の塩基が欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列からなるＤＮＡであって、前立腺癌細胞のゲノム中に存在するＤＮＡ、
（ｄ）上記（ａ）のＤＮＡの塩基配列と相補的な塩基配列からなるＤＮＡにストリンジェントな条件下でハイブリダイズするＤＮＡであって、前立腺癌細胞のゲノム中に存在するＤＮＡ。
＜２＞遺伝子の発現量の測定が、該遺伝子の転写産物の量の測定である、＜１＞に記載の検出方法。
＜３＞下記（Ａａ）〜（Ｂｂ）からなる群から選ばれる少なくとも１種のプライマーセットを用いて少なくとも１種の遺伝子の発現量を測定する、＜２＞に記載の検出方法：
（Ａａ）配列番号６３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号６４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｂ）配列番号６５の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号６６の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｃ）配列番号６７の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号６８の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｄ）配列番号６９の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号７０の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｅ）配列番号７１の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号７２の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｆ）配列番号７３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号７４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｇ）配列番号７７の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号７８の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｈ）配列番号７９の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号８０の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｉ）配列番号８１の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号８２の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｊ）配列番号８３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号８４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｋ）配列番号８５の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号８６の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｌ）配列番号８７の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号８８の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｍ）配列番号８９の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号９０の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｎ）配列番号９３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号９４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット、
（Ａｏ）配列番号９５の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号９６の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット、
（Ａｐ）配列番号９７の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号９８の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット、
（Ａｑ）配列番号９９の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１００の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット、
（Ａｒ）配列番号１０１の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１０２の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット、
（Ａｓ）配列番号１０３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１０４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット、
（Ａｔ）配列番号１０５の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１０６の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット、
（Ａｕ）配列番号１０７の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１０８の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット、
（Ａｖ）配列番号１０９の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１１０の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット、及び
（Ａｗ）配列番号１１３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１１４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット。
（Ａｘ）配列番号１１５の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１１６の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット。
（Ａｙ）配列番号１１７の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１１８の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット。
（Ａｚ）配列番号１１９の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１２０の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット。
（Ｂａ）配列番号１２１の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１２２の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット。
（Ｂｂ）配列番号１２３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１２４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット。
＜４＞遺伝子の発現量の測定が、該遺伝子の発現産物であるタンパク質の量の測定である、＜１＞に記載の検出方法。
＜５＞測定されるタンパク質の量が、下記（ｅ）〜（ｇ）のいずれかのアミノ酸配列からなる少なくとも１種のタンパク質の量である、＜４＞に記載の検出方法：
（ｅ）配列番号２のアミノ酸配列、配列番号４のアミノ酸配列、配列番号６のアミノ酸配列、配列番号８のアミノ酸配列、配列番号１０のアミノ酸配列、配列番号１２のアミノ酸配列、配列番号１６のアミノ酸配列、配列番号１８のアミノ酸配列、配列番号２０のアミノ酸配列、配列番号２２のアミノ酸配列、配列番号２４のアミノ酸配列、配列番号２６のアミノ酸配列、配列番号２８のアミノ酸配列、配列番号３２のアミノ酸配列、配列番号３４のアミノ酸配列、配列番号３６のアミノ酸配列、配列番号３８のアミノ酸配列、配列番号４０のアミノ酸配列、配列番号４２のアミノ酸配列、配列番号４４のアミノ酸配列、配列番号４６のアミノ酸配列、配列番号４８のアミノ酸配列、配列番号５２のアミノ酸配列、配列番号５４のアミノ酸配列、配列番号５６のアミノ酸配列、配列番号５８のアミノ酸配列、配列番号６０のアミノ酸配列及び配列番号６２のアミノ酸配列からなる群から選ばれるアミノ酸配列、
（ｆ）上記（ｅ）のアミノ酸配列と８０％以上の同一性を有し、かつ前立腺癌細胞のゲノム中に存在するＤＮＡにコードされるアミノ酸配列、
（ｇ）上記（ｅ）のアミノ酸配列において、１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列であって、前立腺癌細胞のゲノム中に存在するＤＮＡにコードされるアミノ酸配列。
＜６＞単離した前立腺癌細胞中における遺伝子の発現量を測定する、＜１＞〜＜５＞のいずれかに記載の検出方法。
【発明の効果】
【０００６】
本発明によれば、再燃性前立腺癌を、ホルモン感受性前立腺癌と区別して特異的に検出することができる。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１】実施例１に記載のＲＴ−ＰＣＲの結果を示す電気泳動の写真である。レーン１はＰｒＥ細胞の結果を、レーン２はＬＮＣａＰ細胞の結果を、レーン３はＤｕ１４５細胞の結果を、レーン４はＰＣ−３細胞の結果を示す。
【図２】実施例２に記載のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲの結果を示すグラフである。
【図３】実施例２に記載のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲの結果を示すグラフである。
【図４】実施例２に記載のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲの結果を示すグラフである。
【図５】実施例２に記載のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲの結果を示すグラフである。
【図６】実施例２に記載のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲの結果を示すグラフである。
【図７】実施例２に記載のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲの結果を示すグラフである。
【図８】実施例２に記載のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲの結果を示すグラフである。
【図９】実施例２に記載のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲの結果を示すグラフである。
【図１０】実施例２に記載のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲの結果を示すグラフである。
【図１１】実施例２に記載のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲの結果を示すグラフである。
【図１２】実施例２に記載のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲの結果を示すグラフである。
【図１３】実施例２に記載のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲの結果を示すグラフである。
【図１４】実施例２に記載のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲの結果を示すグラフである。
【図１５】実施例２に記載のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲの結果を示すグラフである。
【図１６】実施例２に記載のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲの結果を示すグラフである。
【図１７】実施例２に記載のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲの結果を示すグラフである。
【図１８】実施例２に記載のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲの結果を示すグラフである。
【図１９】実施例２に記載のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲの結果を示すグラフである。
【図２０】実施例２に記載のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲの結果を示すグラフである。
【図２１】実施例２に記載のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲの結果を示すグラフである。
【図２２】実施例２に記載のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲの結果を示すグラフである。
【図２３】実施例２に記載のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲの結果を示すグラフである。
【図２４】実施例２に記載のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲの結果を示すグラフである。
【図２５】実施例２に記載のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲの結果を示すグラフである。
【図２６】実施例２に記載のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲの結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
以下、本発明について、その好ましい実施態様に基づき詳細に説明する。
【０００９】
本発明の再燃性前立腺癌の検出方法（以下、単に本発明の検出方法と呼ぶ。）は、特定の遺伝子の発現量を測定し、当該測定結果に基づき再燃性前立腺癌を特異的に検出する方法である。
本発明において「再燃性前立腺癌」とは、「ホルモン低感受性前立腺癌」、「ホルモン抵抗性前立腺癌」及び「ホルモン非依存性前立腺癌」と同義であり、アンドロゲン等のホルモンを遮断するホルモン療法により増殖が抑制されていた癌細胞が再び増殖を開始したホルモン抵抗性の前立腺癌のみならず、癌発生当初からホルモン療法に対する抵抗性を有するホルモン抵抗性の前立腺癌細胞をも含む意味で用いられる。
【００１０】
本発明の検出方法により発現量が測定される遺伝子は、配列番号１の塩基配列、配列番号３の塩基配列、配列番号５の塩基配列、配列番号７の塩基配列、配列番号９の塩基配列、配列番号１１の塩基配列、配列番号１５の塩基配列、配列番号１７の塩基配列、配列番号１９の塩基配列、配列番号２１の塩基配列、配列番号２３の塩基配列、配列番号２５の塩基配列、配列番号２７の塩基配列、配列番号３１の塩基配列、配列番号３３の塩基配列、配列番号３５の塩基配列、配列番号３７の塩基配列、配列番号３９の塩基配列、配列番号４１の塩基配列、配列番号４３の塩基配列、配列番号４５の塩基配列、配列番号４７の塩基配列、配列番号５１の塩基配列、配列番号５３の塩基配列、配列番号５５の塩基配列、配列番号５７の塩基配列、配列番号５９の塩基配列及び配列番号６１の塩基配列からなる群から選ばれる塩基配列からなるＤＮＡ、又は当該塩基酸配列と７０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上、特に好ましくは９７％以上の同一性（ｉｄｅｎｔｉｔｙ）を有するＤＮＡからなることが好ましい。
本明細書において「塩基配列の同一性（％）」とは、比較する２つの塩基配列を必要に応じて間隙を導入して整列（アラインメント）させ、得られる最大の塩基配列の同一性（％）をいう。塩基配列の同一性を決定する目的のためのアラインメントは、通常の方法を用いて行うことができ、例えばＢＬＡＳＴのような公に入手可能なコンピュータソフトウエアや、ＤＮＡＳＩＳ Ｐｒｏ（日立ソフトウェアエンジニアリング社製）並びにＧＥＮＥＴＹＸ（ゼネティックス社製）等の市販のソフトウェアを使用することもできる。
【００１１】
また、本発明の検出方法により発現量が測定される遺伝子は、配列番号１の塩基配列、配列番号３の塩基配列、配列番号５の塩基配列、配列番号７の塩基配列、配列番号９の塩基配列、配列番号１１の塩基配列、配列番号１５の塩基配列、配列番号１７の塩基配列、配列番号１９の塩基配列、配列番号２１の塩基配列、配列番号２３の塩基配列、配列番号２５の塩基配列、配列番号２７の塩基配列、配列番号３１の塩基配列、配列番号３３の塩基配列、配列番号３５の塩基配列、配列番号３７の塩基配列、配列番号３９の塩基配列、配列番号４１の塩基配列、配列番号４３の塩基配列、配列番号４５の塩基配列、配列番号４７の塩基配列、配列番号５１の塩基配列、配列番号５３の塩基配列、配列番号５５の塩基配列、配列番号５７の塩基配列、配列番号５９の塩基配列及び配列番号６１の塩基配列からなる群から選ばれる塩基配列において１又は数個の塩基が置換、欠失、挿入又は付加された塩基配列からなるＤＮＡからなるものであってもよい。
本明細書において「１又は（もしくは）数個」とは、１〜５０の整数であることが好ましく、１〜３０の整数であることがより好ましく、１〜２０の整数であることがさらに好ましく、１〜１５の整数であることが特に好ましく、１〜１０の整数であることが殊更好ましい。
【００１２】
また、本発明の検出方法により発現量が測定される遺伝子は、配列番号１の塩基配列、配列番号３の塩基配列、配列番号５の塩基配列、配列番号７の塩基配列、配列番号９の塩基配列、配列番号１１の塩基配列、配列番号１５の塩基配列、配列番号１７の塩基配列、配列番号１９の塩基配列、配列番号２１の塩基配列、配列番号２３の塩基配列、配列番号２５の塩基配列、配列番号２７の塩基配列、配列番号３１の塩基配列、配列番号３３の塩基配列、配列番号３５の塩基配列、配列番号３７の塩基配列、配列番号３９の塩基配列、配列番号４１の塩基配列、配列番号４３の塩基配列、配列番号４５の塩基配列、配列番号４７の塩基配列、配列番号５１の塩基配列、配列番号５３の塩基配列、配列番号５５の塩基配列、配列番号５７の塩基配列、配列番号５９の塩基配列及び配列番号６１の塩基配列からなる群から選ばれる塩基配列と相補的な塩基配列からなるＤＮＡにストリンジェントな条件下でハイブリダイズするＤＮＡからなるものでもよい。
本明細書において「ストリンジェントな条件」とは、塩基配列の同一性が高いＤＮＡ同士、例えば７０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上、特に好ましくは９７％以上の同一性を有するＤＮＡ同士がハイブリダイズし、それより同一性が低いＤＮＡ同士がハイブリダイズしない条件、あるいは通常のサザンハイブリダイゼーションの洗浄条件である６０℃、１×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、好ましくは、６０℃、０．１×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、より好ましくは、６５℃、０．１×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、さらに好ましくは６８℃、０．１×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳに相当する温度及び塩濃度で、１回、より好ましくは２〜３回洗浄する条件が挙げられる。上記ハイブリダイゼーションは、Ｊ． Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ． Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ， Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，２ｎｄ Ｅｄ．， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（１９８９）に記載されている方法等、通常の方法で行うことができる。
【００１３】
本発明の検出方法により発現量が測定される上記遺伝子は、少なくともヒト前立腺癌細胞のゲノム中に存在するＤＮＡからなる遺伝子であって、ホルモン感受性前立腺癌と再燃性前立腺癌との間で発現量に差がある遺伝子である。配列番号１、３、５、７、９、１１、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、５１、５３、５５、５７、５９及び６１の塩基配列からなる各遺伝子の半数以上は、発現量が少ないが故に、これまでＤＮＡマイクロアレイ等の網羅的解析手段によっては発現量の解析が困難であった糖鎖関連遺伝子である。ここで、糖鎖関連遺伝子とは、糖鎖の合成、代謝、修飾等に関与しうる遺伝子を意味する。
【００１４】
本明細書に記載される塩基配列の配列番号と当該塩基配列にコードされる遺伝子名との対応を下記表１に示す。
【００１５】
【表１】
【００１６】
本発明の検出方法により発現量が測定される遺伝子は、配列番号１の塩基配列、配列番号３の塩基配列、配列番号５の塩基配列、配列番号７の塩基配列、配列番号９の塩基配列、配列番号１１の塩基配列及び配列番号２７の塩基配列からなる群から選ばれる塩基配列からなるＤＮＡ、又は、
配列番号１の塩基配列、配列番号３の塩基配列、配列番号５の塩基配列、配列番号７の塩基配列、配列番号９の塩基配列、配列番号１１の塩基配列及び配列番号２７の塩基配列からなる群から選ばれる塩基配列と７０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上、特に好ましくは９７％以上の同一性（ｉｄｅｎｔｉｔｙ）を有するＤＮＡ、又は、
配列番号１の塩基配列、配列番号３の塩基配列、配列番号５の塩基配列、配列番号７の塩基配列、配列番号９の塩基配列、配列番号１１の塩基配列及び配列番号２７の塩基配列からなる群から選ばれる塩基配列において１もしくは数個の塩基が置換、欠失、挿入もしくは付加された塩基配列からなるＤＮＡ、又は、
配列番号１の塩基配列、配列番号３の塩基配列、配列番号５の塩基配列、配列番号７の塩基配列、配列番号９の塩基配列、配列番号１１の塩基配列及び配列番号２７の塩基配列からなる群から選ばれる塩基配列と相補的な塩基配列からなるＤＮＡにストリンジェントな条件下でハイブリダイズするＤＮＡからなることが好ましい。
【００１７】
本発明の検出方法においては、上記表１に示す遺伝子（又はそのバリアント）の少なくとも１種の発現量を測定する（但し、ＰＳＡ、ＡＣＴＢ、ＡＲを除く。）。すなわち、本発明の検出方法では、上記表１に示す遺伝子（又はそのバリアント）のうち１種の発現量を測定して再燃性前立腺癌の検出を行ってもよいし、上記遺伝子のうち２種以上の発現量を測定して再燃性前立腺癌の検出を行ってもよい。本発明において「測定」には、定量及び定性の両概念が含まれる。
【００１８】
本発明の検出方法において、発現量が測定される遺伝子が２種以上である場合において、その好ましい遺伝子の組み合わせの例として、下記（ｈ）〜（ｍ）の組合わせが挙げられるが、本発明はこれに限定されるものではない。
（ｈ）配列番号１の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子と、
配列番号３の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子、配列番号５の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子、配列番号７の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子、配列番号９の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子、配列番号１１の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子及び配列番号２７の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子からなる群から選ばれる１種又は２種以上の遺伝子
との組み合わせ、
（ｉ）配列番号３の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子と、
配列番号５の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子、配列番号７の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子、配列番号９の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子、配列番号１１の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子及び配列番号２７の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子からなる群から選ばれる１種又は２種以上の遺伝子
との組み合わせ、
（ｊ）配列番号５の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子と、
配列番号７の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子、配列番号９の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子、配列番号１１の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子及び配列番号２７の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子からなる群から選ばれる１種又は２種以上の遺伝子
との組み合わせ、
（ｋ）配列番号７の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子と、
配列番号９の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子、配列番号１１の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子及び配列番号２７の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子からなる群から選ばれる１種又は２種以上の遺伝子
との組み合わせ、
（ｌ）配列番号９の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子と、
配列番号１１の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又は配列番号２７の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子
との組み合わせ、
（ｍ）配列番号１１の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子と、
配列番号２７の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子
との組み合わせ。
【００１９】
本発明において、遺伝子の発現量の測定は、当該遺伝子の転写産物の量、すなわちｍＲＮＡの発現量を測定することで行うことができる。ｍＲＮＡの発現量は、ＲＴ−ＰＣＲ、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ等の通常の方法で行うことができるが、迅速な測定の観点からリアルタイムＲＴ−ＰＣＲにより測定することが好ましい。リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法は、例えば、後述する実施例に記載の方法のような通常の方法で行うことができる。
【００２０】
上記ｍＲＮＡの発現量の測定に用いる遺伝子増幅用プライマーに特に制限はなく、目的とする遺伝子の塩基配列に基づき通常の方法で設計することができる。例えば、下記（Ａa）〜（Ｂｂ）から選ばれる１種又は２種以上のプライマーセットを用いることで、上記ｍＲＮＡから合成したｃＤＮＡを鋳型として核酸増幅反応を行うことができ、これにより上記ｍＲＮＡの発現量を測定することができる。
（Ａａ）配列番号６３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号６４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｂ）配列番号６５の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号６６の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｃ）配列番号６７の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号６８の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｄ）配列番号６９の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号７０の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｅ）配列番号７１の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号７２の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｆ）配列番号７３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号７４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｇ）配列番号７７の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号７８の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｈ）配列番号７９の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号８０の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｉ）配列番号８１の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号８２の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｊ）配列番号８３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号８４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｋ）配列番号８５の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号８６の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｌ）配列番号８７の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号８８の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｍ）配列番号８９の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号９０の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｎ）配列番号９３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号９４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット、
（Ａｏ）配列番号９５の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号９６の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット、
（Ａｐ）配列番号９７の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号９８の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット、
（Ａｑ）配列番号９９の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１００の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット、
（Ａｒ）配列番号１０１の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１０２の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット、
（Ａｓ）配列番号１０３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１０４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット、
（Ａｔ）配列番号１０５の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１０６の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット、
（Ａｕ）配列番号１０７の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１０８の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット、
（Ａｖ）配列番号１０９の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１１０の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット、及び
（Ａｗ）配列番号１１３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１１４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット。
（Ａｘ）配列番号１１５の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１１６の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット。
（Ａｙ）配列番号１１７の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１１８の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット。
（Ａｚ）配列番号１１９の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１２０の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット。
（Ｂａ）配列番号１２１の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１２２の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット。
（Ｂｂ）配列番号１２３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１２４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット。
【００２１】
上記（Ａａ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号１の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
上記（Ａｂ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号３の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
上記（Ａｃ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号５の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
上記（Ａｄ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号７の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
上記（Ａｅ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号９の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
上記（Ａｆ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号１１の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
上記（Ａｇ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号１５の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
上記（Ａｈ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号１７の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
上記（Ａｉ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号１９の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
上記（Ａｊ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号２１の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
上記（Ａｋ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号２３の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
上記（Ａｌ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号２５の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
上記（Ａｍ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号２７の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
上記（Ａｎ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号３１の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
上記（Ａｏ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号３３の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
上記（Ａｐ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号３５の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
上記（Ａｑ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号３７の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
上記（Ａｒ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号３９の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
上記（Ａｓ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号４１の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
上記（Ａｔ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号４３の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
上記（Ａｕ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号４５の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
上記（Ａｖ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号４７の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
上記（Ａｗ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号５１の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
上記（Ａｘ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号５３の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
上記（Ａｙ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号５５の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
上記（Ａｚ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号５７の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
上記（Ｂａ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号５９の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
上記（Ｂｂ）のプライマーセットを用いることにより、配列番号６１の塩基配列からなるＤＮＡを有する遺伝子又はそのバリアントの発現量を測定することができる。
【００２２】
本発明において、遺伝子の発現量の測定は、当該遺伝子の発現産物であるタンパク質の量を測定することで行うこともできる。
【００２３】
本発明において量が測定されるタンパク質は、配列番号２のアミノ酸配列、配列番号４のアミノ酸配列、配列番号６のアミノ酸配列、配列番号８のアミノ酸配列、配列番号１０のアミノ酸配列、配列番号１２のアミノ酸配列、配列番号１６のアミノ酸配列、配列番号１８のアミノ酸配列、配列番号２０のアミノ酸配列、配列番号２２のアミノ酸配列、配列番号２４のアミノ酸配列、配列番号２６のアミノ酸配列、配列番号２８のアミノ酸配列、配列番号３２のアミノ酸配列、配列番号３４のアミノ酸配列、配列番号３６のアミノ酸配列、配列番号３８のアミノ酸配列、配列番号４０のアミノ酸配列、配列番号４２のアミノ酸配列、配列番号４４のアミノ酸配列、配列番号４６のアミノ酸配列、配列番号４８のアミノ酸配列、配列番号５２のアミノ酸配列、配列番号５４のアミノ酸配列、配列番号５６のアミノ酸配列、配列番号５８のアミノ酸配列、配列番号６０のアミノ酸配列及び配列番号６２のアミノ酸配列からなる群から選ばれるアミノ酸配列、又は
配列番号２のアミノ酸配列、配列番号４のアミノ酸配列、配列番号６のアミノ酸配列、配列番号８のアミノ酸配列、配列番号１０のアミノ酸配列、配列番号１２のアミノ酸配列、配列番号１６のアミノ酸配列、配列番号１８のアミノ酸配列、配列番号２０のアミノ酸配列、配列番号２２のアミノ酸配列、配列番号２４のアミノ酸配列、配列番号２６のアミノ酸配列、配列番号２８のアミノ酸配列、配列番号３２のアミノ酸配列、配列番号３４のアミノ酸配列、配列番号３６のアミノ酸配列、配列番号３８のアミノ酸配列、配列番号４０のアミノ酸配列、配列番号４２のアミノ酸配列、配列番号４４のアミノ酸配列、配列番号４６のアミノ酸配列、配列番号４８のアミノ酸配列、配列番号５２のアミノ酸配列、配列番号５４のアミノ酸配列、配列番号５６のアミノ酸配列、配列番号５８のアミノ酸配列、配列番号６０のアミノ酸配列及び配列番号６２のアミノ酸配列からなる群から選ばれるアミノ酸配列と７０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上、特に好ましくは９７％以上の同一性（ｉｄｅｎｔｉｔｙ）を有するアミノ酸配列、又は
配列番号２のアミノ酸配列、配列番号４のアミノ酸配列、配列番号６のアミノ酸配列、配列番号８のアミノ酸配列、配列番号１０のアミノ酸配列、配列番号１２のアミノ酸配列、配列番号１６のアミノ酸配列、配列番号１８のアミノ酸配列、配列番号２０のアミノ酸配列、配列番号２２のアミノ酸配列、配列番号２４のアミノ酸配列、配列番号２６のアミノ酸配列、配列番号２８のアミノ酸配列、配列番号３２のアミノ酸配列、配列番号３４のアミノ酸配列、配列番号３６のアミノ酸配列、配列番号３８のアミノ酸配列、配列番号４０のアミノ酸配列、配列番号４２のアミノ酸配列、配列番号４４のアミノ酸配列、配列番号４６のアミノ酸配列、配列番号４８のアミノ酸配列、配列番号５２のアミノ酸配列、配列番号５４のアミノ酸配列、配列番号５６のアミノ酸配列、配列番号５８のアミノ酸配列、配列番号６０のアミノ酸配列及び配列番号６２のアミノ酸配列からなる群から選ばれるアミノ酸配列において、１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列
からなることが好ましい。
【００２４】
本発明において「アミノ酸配列の同一性（％）」とは、比較する２つのアミノ酸配列を必要に応じて間隙を導入して整列（アラインメント）させ、得られる最大のアミノ酸配列の同一性（％）をいう。アミノ酸配列の同一性を決定する目的のためのアラインメントは、通常の方法を用いて行うことができ、例えばＢＬＡＳＴのような公に入手可能なコンピュータソフトウエアや、ＤＮＡＳＩＳ Ｐｒｏ（日立ソフトウェアエンジニアリング社製）並びにＧＥＮＥＴＹＸ（ゼネティックス社製）等の市販のソフトウェアを使用することもできる。
また、上記「１又は数個」とは上述したとおりである。
【００２５】
上記タンパク質は、少なくともヒト前立腺癌細胞のゲノム中に存在するＤＮＡにコードされるアミノ酸配列からなるタンパク質であって、ホルモン感受性前立腺癌と再燃性前立腺癌との間で存在量に差がある遺伝子である。
【００２６】
本発明の検出方法において、遺伝子の発現量として測定されるタンパク質は、上記タンパク質の少なくとも１種である。すなわち、２種以上のタンパク質の量を測定してもよい。２種以上のタンパク質の量を測定する際の、測定されるタンパク質の好ましい組み合わせの例として、下記（ｎ）〜（ｓ）の組合わせが挙げられるが、本発明はこれに限定されるものではない。
【００２７】
（ｎ）配列番号２のアミノ酸配列からなるタンパク質と、
配列番号４のアミノ酸配列からなるタンパク質、配列番号６のアミノ酸配列からなるタンパク質、配列番号８のアミノ酸配列からなるタンパク質、配列番号１０のアミノ酸配列からなるタンパク質、配列番号１２のアミノ酸配列からなるタンパク質及び配列番号２８のアミノ酸配列からなるタンパク質からなる群から選ばれる１種又は２種以上のタンパク質
との組み合わせ、
（ｏ）配列番号４のアミノ酸配列からなるタンパク質と、
配列番号６のアミノ酸配列からなるタンパク質、配列番号８のアミノ酸配列からなるタンパク質、配列番号１０のアミノ酸配列からなるタンパク質、配列番号１２のアミノ酸配列からなるタンパク質及び配列番号２８のアミノ酸配列からなるタンパク質からなる群から選ばれる１種又は２種以上のタンパク質
との組み合わせ、
（ｐ）配列番号６のアミノ酸配列からなるタンパク質と、
配列番号８のアミノ酸配列からなるタンパク質、配列番号１０のアミノ酸配列からなるタンパク質、配列番号１２のアミノ酸配列からなるタンパク質及び配列番号２８のアミノ酸配列からなるタンパク質からなる群から選ばれる１種又は２種以上のタンパク質
との組み合わせ、
（ｑ）配列番号８のアミノ酸配列からなるタンパク質と、
配列番号１０のアミノ酸配列からなるタンパク質、配列番号１２のアミノ酸配列からなるタンパク質及び配列番号２８のアミノ酸配列からなるタンパク質からなる群から選ばれる１種又は２種以上のタンパク質
との組み合わせ、
（ｒ）配列番号１０のアミノ酸配列からなるタンパク質と、
配列番号１２のアミノ酸配列からなるタンパク質又は配列番号２８のアミノ酸配列からなるタンパク質
との組み合わせ、
（ｓ）配列番号１２のアミノ酸配列からなるタンパク質と、
配列番号２８のアミノ酸配列からなるタンパク質
との組み合わせ。
【００２８】
上記タンパク質の量の測定は、上記タンパク質に特異的に結合する分子を用いて行うことが好ましい。本発明のタンパク質に特異的に結合する分子としては、本発明のタンパク質に対する抗体やアプタマー等が挙げられるが、本発明のタンパク質に対する抗体を用いることが好ましい。上記抗体やアプタマーは、目的に応じて、放射性物質、酵素、蛍光物質、発光物質等で標識して用いることができる。
抗体を用いた測定は、イムノアッセイの分野において通常用いられる手段を採用することができ、例えば、イムノブロット法、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ法）、イムノクロマト法などにより検出することができる。
【００２９】
上記タンパク質の検出に用いる抗体は、通常の方法で取得することができる。例えば、上記タンパク質を免疫原として用い、動物に免疫して、該動物から上記タンパク質に選択的に反応する抗体を取得することができる。また、上記タンパク質のアミノ酸配列から上記タンパク質に特徴的なアミノ酸配列を選択し、該アミノ酸配列からなるペプチドを化学的に合成して、これを動物に免疫して、該動物から上記タンパク質に選択的に反応する抗体を取得することができる。
【００３０】
上記タンパク質の測定は、上記タンパク質におけるエピトープの異なる２種類の抗体を用いて、サンドイッチイムノアッセイの原理により行うことが好ましい。この場合において、一方の抗体は捕捉抗体として固相に固定化され、もう一方の抗体は、標識され、検出用抗体として機能する。
【００３１】
サンドイッチＥＬＩＳＡ法では、上記タンパク質に対する抗体が固定化されたウェルを用意し、非特異的な吸着を防ぐために、ＢＳＡやカゼイン等により当該ウェルをブロッキングしておく。ここに前立腺癌細胞等から調製したタンパク質溶液を入れ、抗体が失活しにくい温度（例えば４〜４０℃）で数分〜数日インキュベートする。続いてタンパク質溶液を捨て、リン酸緩衝液等でウェルを洗浄後、固定化抗体が結合するエピトープとは異なるエピトープに結合する標識された抗体を加え、再び数分〜数日インキュベートし、ウェルを洗浄後、ウェル内に存在する標識を検出する。上記タンパク質溶液中に目的のタンパク質が存在する場合には、標識のシグナルが高くなるため、これにより、再燃性前立腺癌の検出を行うことができる。
【００３２】
また、イムノクロマト法においては、上記サンドイッチＥＬＩＳＡにおける固定化抗体をメンブレンのテストライン上に固定化しておき、上記サンドイッチＥＬＩＳＡにおける標識抗体をコンジュゲートパッドに保持した状態のテストストリップを調製する。前立腺癌細胞等から調製したタンパク質溶液をコンジュゲートパッドに直接又は間接的に添加すると、毛細管現象により、当該溶液が標識抗体と液相中で反応しながらコンジュゲートパッドからメンブレンへと進んでいく。タンパク質溶液中に目的のタンパク質が存在する場合には、メンブレンのテストライン上に標識抗体と目的のタンパク質とからなる複合体がトラップされる。したがって、テストライン上に存在する標識を検出することにより、再燃性前立腺癌の検出を行うことができる。
【００３３】
本発明において、遺伝子の発現量の測定が行われる試料に特に制限はなく、例えば、血液、血漿、血清、リンパ液、尿、唾液等の体液、前立腺癌組織、前立腺癌細胞等が挙げられるが、前立腺癌組織や前立腺癌細胞を使用することが好ましい。本発明において「単離した前立腺癌細胞」には、生体（前立腺癌患者）から摘出した前立腺癌組織、当該組織をレーザーダイゼクション等により切り出したサンプル等が含まれる。
【００３４】
上記試料の由来に特に制限はないが、ヒト由来であることが好ましい。すなわち、本発明の検出方法は、ヒトの再燃性前立腺癌の検出に好適に用いられる。
【００３５】
本発明の検出方法を用いることで、前立腺癌のホルモン感受性を、簡便に、しかも精度よく判定することができ、これにより再燃性前立腺癌を特異的に検出することができる。したがって、本発明の検出方法は、再燃性前立腺癌の診断に有用である。
【００３６】
以下、本発明を実施例に基づきさらに詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
【実施例】
【００３７】
下記のヒト前立腺癌細胞株を用いて、下記のＤＮＡマイクロアレイ解析及び定量的ＰＣＲアレイ解析を中心に解析を行い、ホルモン感受性前立腺癌とホルモン抵抗性前立腺癌とを区別しうるマーカー候補遺伝子の選抜を行った。
【００３８】
［ヒト前立腺癌細胞株の培養］
前立腺癌細胞株ＬＮＣａＰ（ホルモン感受性（依存性））とＤｕ１４５（ホルモン抵抗性（非依存性））は独立行政法人理化学研究所バイオリソース研究センター理研セルバンクより入手した。ＰＣ−３（ホルモン非依存性）は財団法人ヒューマンサイエンス振興財団JCRB細胞バンクより入手した。正常ヒト前立腺上皮細胞株ＰｒＥは、ＤＳファーマバイオメディカル社より購入した。前立腺癌細胞株はすべて、ＲＰＭＩ １６４０培地(ＧＩＢＣＯ社製)に１０％ ＦＢＳ(Ｈｙｃｌｏｎｅ社製)、１％ ペニシリン／ストレプトマイシン(ＧＩＢＣＯ社製)を添加したものを用いて培養した。正常ヒト前立腺上皮細胞株は、ＣＳ−Ｃ培地キットＲ（ＤＳファーマバイオメディカル社製)を用い培養した。すべての細胞は、ＲＮＡおよびタンパク質を抽出する１日前にＲＰＭＩ１６４０に１０％ ＦＢＳを加えた培地に置換して培養した。
【００３９】
［ＤＮＡマイクロアレイ解析］
糖鎖関連遺伝子網羅解析のＤＮＡマイクロアレイは、独立行政法人理化学研究所 疾患糖鎖研究チームが開発したツールを用いた。本ツールの詳細は文献(Molecular And Cellular Biology, Apr.2007, p.3008-3022)に記載されている。簡潔に言えば、まず対数増殖期の細胞のｍＲＮＡをｍＴＲＡＰ ｍｉｄｉ ｋｉｔ(アクティブモチーフ社製)を用いて調製し、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製のバイオアナライザー２１００でクオリティーチェック後、ＣｙＳｃｒｉｂｅ Ｐｏｓｔ−Ｌａｂｅｌｌｉｎｇ Ｋｉｔ(ＧＥヘルスケアバイオサイエンス社製)で蛍光標識した。蛍光標識したサンプルを約１２００の糖鎖関連遺伝子を搭載したマイクロアレイにハイブリダイズし、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ ４２８ Ａｒｒａｙ Ｓｃａｎｎｅｒでスキャニングした。各スポットのシグナル強度を定量(ＩｍａＧｅｎｅ; ＢｉｏＤｉｓｃｏｖｅｒｙ社製)し、補正後にクラスタリング作成ソフトＭｕｌｔｉＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔ Ｖｉｅｗｅｒ （ＭｅＶ）（Opensource software tool, http://www.tm4.org/）で解析した。
【００４０】
［定量的ＰＣＲアレイ解析］
糖鎖合成酵素に特化した遺伝子網羅解析のツールであるｑＰＣＲアレイは、独立行政法人産業技術総合研究所 糖鎖医工学センターが開発したツールを用いた。本ツールの詳細は文献(Jornal of Proteome Reserch. Vol.8, No.3, 2009, p.1358-1367)に記載されている。簡潔に言えば、まず対数増殖期の細胞のｔｏｔａｌ ＲＮＡを、ＲＮｅａｓｙ ｐｌｕｓ ｍｉｎｉ ｋｉｔ (ＱＩＡＧＥＮ社製)を用いて調製し、ＱｕａｎｔｉＴｅｃｔ Ｒｅｖ． Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｋｉｔ(ＱＩＡＧＥＮ社)を用いてＦｉｒｓｔ ｓｔｒａｎｄ ｃＤＮＡを合成した。ＰＣＲプライマーは、ＰｒｏｂｅＦｉｎｄｅｒ(https://www.roche-applied-science.com/)を用いて選択し、インビトロジェン社にて作成、購入した。加水分解プローブは、Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ＰｒｏｂｅＬｉｂｒａｒｙ(ロシュ社)より選択した。全１８９遺伝子のアッセイをｄｕｐｌｉｃａｔｅで３８４プレートにフォーマットし、ｑＰＣＲ Ｑｕｉｃｋ ＧｏｌｄＳｔａｒ Ｍａｓｔｅｒｍｉｘ Ｐｌｕｓ (Ｅｕｒｏｇｅｎｔｅｃ社製)を用いて、ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ ４８０(ロシュ社製)にて増幅、測定した。各コピー数を算出後、補正後にクラスタリング作成ソフトＭｕｌｔｉＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔ Viewer （ＭｅＶ）（Opensource software tool, http://www.tm4.org/）で解析した。
【００４１】
実施例１ ＲＴ−ＰＣＲによる再燃性前立腺癌の検出
正常ヒト前立腺上皮細胞株ＰｒＥ並びに前立腺癌細胞株ＬＮＣａＰ（ホルモン感受性株）、Ｄｕ１４５（ホルモン抵抗性株）及びＰＣ−３（ホルモン抵抗性株）の各細胞株を用いて、ＲＴ−ＰＣＲにより、前記表１に示す３１種類の遺伝子の転写産物の量を測定した。
具体的には、ＰｒＥ、ＬＮＣａＰ、Ｄｕ１４５及びＰＣ−３の各前立腺癌細胞から上記と同様に合成したｃＤＮＡを鋳型とし、ＤＮＡポリメラーゼ（商品名：ＧｏＴａｑ（登録商標） Ｈｏｔ Ｓｔａｒｔ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ、プロメガ社)と、上述した（Ａａ）〜（Ｂｂ）で表されるプライマーセット、配列番号７５及び７６の塩基配列を有する各オリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、配列番号９１及び９２の塩基配列を有する各オリゴヌクレオチドからなるプライマーセット並びに配列番号１１１及び１１２の塩基配列を有する各オリゴヌクレオチドからなるプライマーセットとを用い、サーマルサイクラー（商品名：ＧｅｎｅＡｍｐ（登録商標） ＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍ ９７００(アプライドバイオシステムズ社製)により各ＤＮＡの増幅反応を行った。２％ アガロースゲルにて電気泳動をおこなった後、エチジウムブロミド染色してＵＶトランスイルミネーターで発光させ、写真を撮った(ポラロイド社製)。なお、上記プライマーセットを構成するプライマーは、ＰｒｏｂｅＦｉｎｄｅｒ (https://www.roche-applied-science.com/)を用いて選択し、インビトロジェン社にて作成、購入したものである。
結果を図１に示す。なお、図１におけるＰＳＡ、ＡＣＴＢ、ＡＲ及びＧＡＰＤＨの測定結果は参考として載せたものであり、本発明の効果を示すものではない。
【００４２】
図１の結果から、ホルモン抵抗性前立腺癌細胞株であるＤｕ１４５及びＰＣ−３では、ホルモン感受性前立腺細胞株であるＬＮＣａＰに比べて、ＧＡＬＮＡＣ４Ｓ-６ＳＴ（配列番号１）、Ｂ３ＧＮＴ５（配列番号３）、ＬＧＡＬＳ１（配列番号５）、ＣＡＶ１（配列番号７）、ＣＤ１８／ＩＴＧＢ２（配列番号９）、ＩＴＧＡ３（配列番号１１）、ＣＨＳＴ１１（配列番号１５）、ＣＨＳＴ１０（配列番号１７）、ＦＵＴ８（配列番号２１）、ＨＡＳ３（配列番号２５）、ＬＣＮ２（配列番号３１）、ＣＨＳＴ７（配列番号３３）、ＵＳＴ（配列番号３５）、ＥＸＴ１（配列番号３７）、ＧＡＬＮＴ４（配列番号３９）、ＨＸＢ／ＴＮＣ（配列番号４１、ＢＡＣＥ２（配列番号４３）、ＣＤ４４（配列番号４５）、ＮＰＲ３（配列番号４７）、ＢＭＰ１５（配列番号５１）、ＴＥＣＫ／ＣＣＬ２５（配列番号５３）、ＧＡＬＮＴ１４（配列番号５５）及びＳＴ８ＳＩＡ５（配列番号５７）のｍＲＮＡ発現量が明らかに増加していることがわかる。したがって、前立腺癌患者から採取した試料におけるこれらの遺伝子の少なくとも１つの発現量を測定し、その発現量が所定のレベルより高い場合には、ホルモン抵抗性の前立腺癌細胞が存在すると判定することができ、これによりホルモン抵抗性前立腺癌（再燃性前立腺癌）を検出することができる。
【００４３】
また、図１の結果から、ホルモン抵抗性前立腺癌細胞株であるＤｕ１４５及びＰＣ−３では、ホルモン感受性前立腺細胞株であるＬＮＣａＰに比べて、ＳＴ６ＧＡＬＮＡＣ１（配列番号２７）、ＧＡＬ３ＳＴ２（配列番号５９）及びＬＡＲＧＥ（配列番号６１）のｍＲＮＡの発現量が明らかに抑えられていることがわかる。したがって、前立腺癌患者から採取した試料におけるこれらの遺伝子の少なくとも１つの発現量を測定し、その発現量が所定のレベルより低い場合には、ホルモン抵抗性の前立腺癌細胞が存在すると判定することができ、これによりホルモン抵抗性前立腺癌（再燃性前立腺癌）を検出することができる。
【００４４】
実施例２ リアルタイムＲＴ−ＰＣＲによる再燃性前立腺癌の検出
下記のヒト前立腺癌の組織サンプルを用いて、下記のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲにより、前記表１に示す遺伝子のうち２５種類の遺伝子の転写産物の量を測定した。
【００４５】
［ヒト前立腺癌組織サンプル］
前立腺癌臨床組織サンプルは、愛知県がんセンターより供与された。総てのサンプルは、インフォームドコンセントが取れた患者より供与されたものである。ホルモン療法を処置していない前立腺癌患者より摘出した前立腺組織を８例と、前立腺摘出手術を受ける前に３ヶ月以上のホルモン療法（ネオアジュバント療法：Leuteining hormone-releasing hormone analogue(LH-RHa)と非ステロイド性抗アンドロゲン剤のBicalutamideの併用）を受けた前立腺癌患者であって、当該治療に対して低感受性（治療効果が薄い）患者より摘出した組織８例を本実施例にて用いた。
【００４６】
一般に前立腺癌では、癌細胞はアンドロゲン等の雄性ホルモンに依存して増殖し、ホルモンの働きを抑えることにより癌細胞の増殖は効果的に抑制されることが多い。一方、ホルモン抵抗性の前立腺癌は、ホルモン療法を受けたのち、一度増殖が抑制されたにもかかわらず、生き残った癌細胞が再び増殖してきたものであることが多く、ホルモン療法を受けていない前立腺癌患者における発症率は比較的低い。そこで、ホルモン療法を受けていない前立腺癌患者をホルモン感受性前立腺癌患者であるものと仮定し、下記の試験を行った。ホルモン療法を受けていない前立腺癌患者から採取した癌細胞と、ホルモン療法に対する低感受性の前立腺癌患者から採取した癌細胞との間でもなお、発現量に有意な差が認められる遺伝子は、再燃性前立腺癌マーカーとしても非常に有用であると判断できると考えられる。
【００４７】
［リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ解析］
インフォームドコンセントが取れている前立腺癌患者より摘出した前立腺臨床組織サンプルの薄切より、癌部をレーザーマイクロダイセクション(ＬＭＤ６０００;ライカ社製)により切り出し、ＲＮＡ抽出キット（商品名：ＲｅｃｏｖｅｒＡｌｌ（商標） Ｔｏｔａｌ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔ、Ａｍｂｉｏｎ社製)にてＲＮＡを抽出した。Ｈｉｇｈ Ｃａｐａｃｉｔｙ ｃＤＮＡ Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｋｉｔ(アプライドバイオシステムズ社製)を用いてｃＤＮＡを調製後、ＴａｑＭａｎ（登録商標） ＰｒｅＡｍｐ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ Ｋｉｔ(アプライドバイオシステムズ社製)で前増幅し、ｑＰＣＲ Ｑｕｉｃｋ ＧｏｌｄＳｔａｒ Ｍａｓｔｅｒｍｉｘ Ｐｌｕｓ (Ｅｕｒｏｇｅｎｔｅｃ社製)を用いて、ＡＢＩ ＰＲＩＳＭ（登録商標） ７７００ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍで増幅、測定した。なお、使用したプライマーセットは実施例１と同様である。各コピー数を算出後、コントロールとして用いたｇｌｙｃｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ−３−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ（ＧＡＰＤＨ）ｍＲＮＡの発現量で標準化した。統計解析はヒューリンクス社の「ＫａｌｅｉｄａＧｒａｐｈ」を用い、ｔ−検定をおこなった。
結果をグラフ化したものを図２〜２６に示す。また、ｔ−検定の結果（Ｐ値）を下記表２に示す。なお、図８のＰＳＡ、図１６のＡＣＴＢ及び図２６のＡＲの結果は参考として載せたものであり、本発明の効果を示すものではない。
【００４８】
【表２】
【００４９】
図２及び表２の結果から、ＧＡＬＮＡＣ４Ｓ−６ＳＴ（配列番号１）、Ｂ３ＧＮＴ５（配列番号３）、ＬＧＡＬＳ１（配列番号５）、ＣＡＶ１（配列番号７）、ＩＴＧＢ２（配列番号９）、ＩＴＧＡ３（配列番号１１）及びＳＴ６ＧＡＬＮＡＣ１（配列番号２７）において、ホルモン療法を受けていない前立腺癌患者８名から採取した癌細胞と、ホルモン療法に対する低感受性の前立腺癌患者８名から採取した癌細胞との間で、ｍＲＮＡの発現量に明らかな有意差（Ｐ＜０．０５）が認められた（表２中、８ｖｓ８の欄参照）。なお既存マーカーであるＰＳＡの発現量は、ホルモン療法に対する低感受性の前立腺癌患者８名から採取した癌細胞において有意に低下しているが、これは、アンドロゲンが遮断された結果引き起こされたものであり、ホルモン抵抗性との直接の関連性は低い。
また、ホルモン療法を受けていない未治療群の中にも、ホルモン療法に低感受性の患者が存在する可能性がある。したがって、参考のために、ホルモン療法を受けていない前立腺癌患者８名から採取した検体のうち、ｍＲＮＡの発現量が高い患者検体２つを除き、ホルモン療法を受けていない前立腺癌患者６名から採取した癌細胞と、ホルモン療法に対する低感受性の前立腺癌患者８名から採取した癌細胞との間の有意差を調べた。その結果、ＨＡＳ３（配列番号２５）、ＵＳＴ（配列番号３５）及びＥＸＴ１（配列番号３７）でも有意差（Ｐ＜０．０５）を認めた（表２中、６ｖｓ８の欄参照）。
【００５０】
なお、上記で有意差が認められなかった遺伝子に関しても、実施例１で示すように前立腺癌のセルラインを用いた試験では、ホルモン感受性前立腺癌細胞とホルモン抵抗性の前立腺癌細胞とを区別しうることが示されている。したがって、現状では困難であるが、ホルモン感受性患者として特定された患者検体を用いることができれば、ホルモン療法に対する低感受性の前立腺癌患者検体との間で発現量の有意差が認められうるものと考えられる。
【００５１】
以上の結果、本発明の検出方法は、再燃性前立腺癌を特異的に検出できる方法であることが示された。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記（ａ）〜（ｄ）のいずれかのＤＮＡからなる少なくとも１種の遺伝子の発現量を測定することを含む、再燃性前立腺癌の検出方法：
（ａ）配列番号１の塩基配列、配列番号３の塩基配列、配列番号５の塩基配列、配列番号７の塩基配列、配列番号９の塩基配列、配列番号１１の塩基配列、配列番号１５の塩基配列、配列番号１７の塩基配列、配列番号１９の塩基配列、配列番号２１の塩基配列、配列番号２３の塩基配列、配列番号２５の塩基配列、配列番号２７の塩基配列、配列番号３１の塩基配列、配列番号３３の塩基配列、配列番号３５の塩基配列、配列番号３７の塩基配列、配列番号３９の塩基配列、配列番号４１の塩基配列、配列番号４３の塩基配列、配列番号４５の塩基配列、配列番号４７の塩基配列、配列番号５１の塩基配列、配列番号５３の塩基配列、配列番号５５の塩基配列、配列番号５７の塩基配列、配列番号５９の塩基配列及び配列番号６１の塩基配列からなる群から選ばれる塩基配列からなるＤＮＡ、
（ｂ）上記（ａ）のＤＮＡの塩基配列と８０％以上の同一性を有する塩基配列からなるＤＮＡであって、前立腺癌細胞のゲノム中に存在するＤＮＡ、
（ｃ）上記（ａ）のＤＮＡの塩基配列において、１又は数個の塩基が欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列からなるＤＮＡであって、前立腺癌細胞のゲノム中に存在するＤＮＡ、
（ｄ）上記（ａ）のＤＮＡの塩基配列と相補的な塩基配列からなるＤＮＡにストリンジェントな条件下でハイブリダイズするＤＮＡであって、前立腺癌細胞のゲノム中に存在するＤＮＡ。
【請求項２】
遺伝子の発現量の測定が、該遺伝子の転写産物の量の測定である、請求項１に記載の検出方法。
【請求項３】
下記（Ａａ）〜（Ｂｂ）からなる群から選ばれる少なくとも１種のプライマーセットを用いて少なくとも１種の遺伝子の発現量を測定する、請求項２に記載の検出方法：
（Ａａ）配列番号６３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号６４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｂ）配列番号６５の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号６６の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｃ）配列番号６７の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号６８の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｄ）配列番号６９の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号７０の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｅ）配列番号７１の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号７２の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｆ）配列番号７３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号７４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｇ）配列番号７７の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号７８の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｈ）配列番号７９の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号８０の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｉ）配列番号８１の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号８２の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｊ）配列番号８３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号８４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｋ）配列番号８５の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号８６の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｌ）配列番号８７の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号８８の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｍ）配列番号８９の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号９０の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｎ）配列番号９３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号９４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット、
（Ａｏ）配列番号９５の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号９６の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット、
（Ａｐ）配列番号９７の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号９８の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット、
（Ａｑ）配列番号９９の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１００の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット、
（Ａｒ）配列番号１０１の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１０２の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット、
（Ａｓ）配列番号１０３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１０４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット、
（Ａｔ）配列番号１０５の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１０６の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット、
（Ａｕ）配列番号１０７の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１０８の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット、
（Ａｖ）配列番号１０９の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１１０の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット、及び
（Ａｗ）配列番号１１３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１１４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット。
（Ａｘ）配列番号１１５の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１１６の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット。
（Ａｙ）配列番号１１７の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１１８の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット。
（Ａｚ）配列番号１１９の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１２０の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット。
（Ｂａ）配列番号１２１の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１２２の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット。
（Ｂｂ）配列番号１２３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１２４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット。
【請求項４】
遺伝子の発現量の測定が、該遺伝子の発現産物であるタンパク質の量の測定である、請求項１に記載の検出方法。
【請求項５】
測定されるタンパク質の量が、下記（ｅ）〜（ｇ）のいずれかのアミノ酸配列からなる少なくとも１種のタンパク質の量である、請求項４に記載の検出方法：
（ｅ）配列番号２のアミノ酸配列、配列番号４のアミノ酸配列、配列番号６のアミノ酸配列、配列番号８のアミノ酸配列、配列番号１０のアミノ酸配列、配列番号１２のアミノ酸配列、配列番号１６のアミノ酸配列、配列番号１８のアミノ酸配列、配列番号２０のアミノ酸配列、配列番号２２のアミノ酸配列、配列番号２４のアミノ酸配列、配列番号２６のアミノ酸配列、配列番号２８のアミノ酸配列、配列番号３２のアミノ酸配列、配列番号３４のアミノ酸配列、配列番号３６のアミノ酸配列、配列番号３８のアミノ酸配列、配列番号４０のアミノ酸配列、配列番号４２のアミノ酸配列、配列番号４４のアミノ酸配列、配列番号４６のアミノ酸配列、配列番号４８のアミノ酸配列、配列番号５２のアミノ酸配列、配列番号５４のアミノ酸配列、配列番号５６のアミノ酸配列、配列番号５８のアミノ酸配列、配列番号６０のアミノ酸配列及び配列番号６２のアミノ酸配列からなる群から選ばれるアミノ酸配列、
（ｆ）上記（ｅ）のアミノ酸配列と８０％以上の同一性を有し、かつ前立腺癌細胞のゲノム中に存在するＤＮＡにコードされるアミノ酸配列、
（ｇ）上記（ｅ）のアミノ酸配列において、１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列であって、前立腺癌細胞のゲノム中に存在するＤＮＡにコードされるアミノ酸配列。
【請求項６】
単離した前立腺癌細胞中における遺伝子の発現量を測定する、請求項１〜５のいずれか１項に記載の検出方法。
【請求項１】
下記（ａ）〜（ｄ）のいずれかのＤＮＡからなる少なくとも１種の遺伝子の発現量を測定することを含む、再燃性前立腺癌の検出方法：
（ａ）配列番号１の塩基配列、配列番号３の塩基配列、配列番号５の塩基配列、配列番号７の塩基配列、配列番号９の塩基配列、配列番号１１の塩基配列、配列番号１５の塩基配列、配列番号１７の塩基配列、配列番号１９の塩基配列、配列番号２１の塩基配列、配列番号２３の塩基配列、配列番号２５の塩基配列、配列番号２７の塩基配列、配列番号３１の塩基配列、配列番号３３の塩基配列、配列番号３５の塩基配列、配列番号３７の塩基配列、配列番号３９の塩基配列、配列番号４１の塩基配列、配列番号４３の塩基配列、配列番号４５の塩基配列、配列番号４７の塩基配列、配列番号５１の塩基配列、配列番号５３の塩基配列、配列番号５５の塩基配列、配列番号５７の塩基配列、配列番号５９の塩基配列及び配列番号６１の塩基配列からなる群から選ばれる塩基配列からなるＤＮＡ、
（ｂ）上記（ａ）のＤＮＡの塩基配列と８０％以上の同一性を有する塩基配列からなるＤＮＡであって、前立腺癌細胞のゲノム中に存在するＤＮＡ、
（ｃ）上記（ａ）のＤＮＡの塩基配列において、１又は数個の塩基が欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列からなるＤＮＡであって、前立腺癌細胞のゲノム中に存在するＤＮＡ、
（ｄ）上記（ａ）のＤＮＡの塩基配列と相補的な塩基配列からなるＤＮＡにストリンジェントな条件下でハイブリダイズするＤＮＡであって、前立腺癌細胞のゲノム中に存在するＤＮＡ。
【請求項２】
遺伝子の発現量の測定が、該遺伝子の転写産物の量の測定である、請求項１に記載の検出方法。
【請求項３】
下記（Ａａ）〜（Ｂｂ）からなる群から選ばれる少なくとも１種のプライマーセットを用いて少なくとも１種の遺伝子の発現量を測定する、請求項２に記載の検出方法：
（Ａａ）配列番号６３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号６４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｂ）配列番号６５の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号６６の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｃ）配列番号６７の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号６８の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｄ）配列番号６９の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号７０の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｅ）配列番号７１の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号７２の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｆ）配列番号７３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号７４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｇ）配列番号７７の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号７８の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｈ）配列番号７９の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号８０の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｉ）配列番号８１の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号８２の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｊ）配列番号８３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号８４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｋ）配列番号８５の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号８６の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｌ）配列番号８７の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号８８の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｍ）配列番号８９の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号９０の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセット、
（Ａｎ）配列番号９３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号９４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット、
（Ａｏ）配列番号９５の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号９６の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット、
（Ａｐ）配列番号９７の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号９８の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット、
（Ａｑ）配列番号９９の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１００の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット、
（Ａｒ）配列番号１０１の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１０２の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット、
（Ａｓ）配列番号１０３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１０４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット、
（Ａｔ）配列番号１０５の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１０６の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット、
（Ａｕ）配列番号１０７の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１０８の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット、
（Ａｖ）配列番号１０９の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１１０の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット、及び
（Ａｗ）配列番号１１３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１１４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット。
（Ａｘ）配列番号１１５の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１１６の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット。
（Ａｙ）配列番号１１７の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１１８の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット。
（Ａｚ）配列番号１１９の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１２０の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット。
（Ｂａ）配列番号１２１の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１２２の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット。
（Ｂｂ）配列番号１２３の塩基配列からなるオリゴヌクレオチド及び配列番号１２４の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドからなるからなるプライマーセット。
【請求項４】
遺伝子の発現量の測定が、該遺伝子の発現産物であるタンパク質の量の測定である、請求項１に記載の検出方法。
【請求項５】
測定されるタンパク質の量が、下記（ｅ）〜（ｇ）のいずれかのアミノ酸配列からなる少なくとも１種のタンパク質の量である、請求項４に記載の検出方法：
（ｅ）配列番号２のアミノ酸配列、配列番号４のアミノ酸配列、配列番号６のアミノ酸配列、配列番号８のアミノ酸配列、配列番号１０のアミノ酸配列、配列番号１２のアミノ酸配列、配列番号１６のアミノ酸配列、配列番号１８のアミノ酸配列、配列番号２０のアミノ酸配列、配列番号２２のアミノ酸配列、配列番号２４のアミノ酸配列、配列番号２６のアミノ酸配列、配列番号２８のアミノ酸配列、配列番号３２のアミノ酸配列、配列番号３４のアミノ酸配列、配列番号３６のアミノ酸配列、配列番号３８のアミノ酸配列、配列番号４０のアミノ酸配列、配列番号４２のアミノ酸配列、配列番号４４のアミノ酸配列、配列番号４６のアミノ酸配列、配列番号４８のアミノ酸配列、配列番号５２のアミノ酸配列、配列番号５４のアミノ酸配列、配列番号５６のアミノ酸配列、配列番号５８のアミノ酸配列、配列番号６０のアミノ酸配列及び配列番号６２のアミノ酸配列からなる群から選ばれるアミノ酸配列、
（ｆ）上記（ｅ）のアミノ酸配列と８０％以上の同一性を有し、かつ前立腺癌細胞のゲノム中に存在するＤＮＡにコードされるアミノ酸配列、
（ｇ）上記（ｅ）のアミノ酸配列において、１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列であって、前立腺癌細胞のゲノム中に存在するＤＮＡにコードされるアミノ酸配列。
【請求項６】
単離した前立腺癌細胞中における遺伝子の発現量を測定する、請求項１〜５のいずれか１項に記載の検出方法。
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図２５】
【図２６】
【図１】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図２５】
【図２６】
【図１】
【公開番号】特開２０１２−１７８９９０（Ｐ２０１２−１７８９９０Ａ）
【公開日】平成２４年９月２０日（２０１２．９．２０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−４２９６７（Ｐ２０１１−４２９６７）
【出願日】平成２３年２月２８日（２０１１．２．２８）
【国等の委託研究の成果に係る記載事項】（出願人による申告）平成１８〜２２年度、独立行政法人新エネルギー・産業技術総合開発機構、糖鎖機能活用技術開発プロジェクト委託研究、産業技術力強化法第１９条の適用を受ける特許出願
【出願人】（５９８１２３１３８）学校法人 創価大学 (49)
【出願人】（３０１０２１５３３）独立行政法人産業技術総合研究所 (6,529)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２４年９月２０日（２０１２．９．２０）
【国際特許分類】
【出願日】平成２３年２月２８日（２０１１．２．２８）
【国等の委託研究の成果に係る記載事項】（出願人による申告）平成１８〜２２年度、独立行政法人新エネルギー・産業技術総合開発機構、糖鎖機能活用技術開発プロジェクト委託研究、産業技術力強化法第１９条の適用を受ける特許出願
【出願人】（５９８１２３１３８）学校法人 創価大学 (49)
【出願人】（３０１０２１５３３）独立行政法人産業技術総合研究所 (6,529)
【Ｆターム（参考）】
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