本発明は、伸長した組換えポリペプチド（ＸＴＥＮ）に連結された因子ＤＣ凝固因子を含む組成物、該組成物をコードする単離された核酸、ならびにこれらを含むベクターおよび宿主細胞、ならびに凝固因子関連の疾患、障害、および容態の治療においてこのような組成物を作製および使用する方法に関する。本発明は、容態の治療または改良あるいは凝固第ＩＸ因子および／または凝固第ＶＩＩ因子の投与と関連したパラメータの亢進のための組成物ならびに方法に関する。特に、本発明は、１以上の伸長組換えポリペプチド（ＸＴＥＮ）を含む融合タンパク質の組成物を提供する。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
伸長した組換えポリペプチド（ＸＴＥＮ）を含む単離された第ＩＸ因子ポリペプチドであって、該ＸＴＥＮが少なくとも３６のアミノ酸残基を含み、この場合、該第ＩＸ因子ポリペプチドは、対象に投与される場合に約１２時間よりも長い終末半減期を呈する、該第ＩＸ因子ポリペプチド。
【請求項２】
前記第ＩＸ因子ポリペプチドが、最適に整列した場合に、表１から選択される配列と比較して少なくとも９０％の配列同一性を呈する、請求項１に記載の単離された第ＩＸ因子ポリペプチド。
【請求項３】
前記第ＶＩＩ因子が、そのＣ末端で前記ＸＴＥＮに連結される、請求項１または２に記載の単離された第ＩＸ因子ポリペプチド。
【請求項４】
第ＸＩａ因子、第ＸＩＩａ因子、カリクレイン、第ＶＩＩａ因子、第ＩＸａ因子、第Ｘａ因子、第ＩＩａ因子（トロンビン）、エラスターゼ‐２、ＭＭＰ‐１２、ＭＭＰ１３、ＭＭＰ‐１７、およびＭＭＰ‐２０からなる群から選択される哺乳類プロテアーゼによって開裂可能な開裂配列を介して前記ＸＴＥＮに連結される、請求項１に記載の単離された第ＩＸ因子ポリペプチド。
【請求項５】
前記哺乳類プロテアーゼによる前記開裂配列における開裂が、前記第ＩＸ因子ポリペプチドから前記ＸＴＥＮを放出する、請求項４に記載の単離された第ＩＸ因子ポリペプチド。
【請求項６】
前記ＸＴＥＮが以下を特徴とする、請求項１に記載の単離された第ＩＸ因子ポリペプチド：
（ａ）ＸＴＥＮアミノ酸残基の累積合計が、２００超〜約３０００アミノ酸残基であり：
（ｂ）アスパラギン残基およびグルタミン残基の合計が、該ＸＴＥＮの全アミノ酸配列の１０％未満であり；
（ｃ）メチオニン残基およびトリプトファン残基の合計が、該ＸＴＥＮの全アミノ酸配列の２％未満であり；
（ｄ）該ＸＴＥＮ配列が、１０未満のサブシーケンススコアを有し；
（ｅ）該ＸＴＥＮ配列が、ＧＯＲアルゴリズムによって決定される時、９０％超のランダムコイル形成を有し；かつ
（ｆ）該ＸＴＥＮ配列が、Ｃｈｏｕ‐Ｆａｓｍａｎアルゴリズムによって決定される時、２％未満のアルファヘリックスおよび２％のベータ‐シートを有する。
【請求項７】
少なくとも約４の見かけの分子量因子を呈する、請求項１に記載の単離された第ＩＸ因子ポリペプチド。
【請求項８】
前記ＸＴＥＮが、表４、表９、表１０、表１１、表１２、または表１３から選択されるアミノ酸配列の比較可能な長さと少なくとも９０％の配列同一性を呈する、請求項１に記載の単離された第ＩＸ因子ポリペプチド。
【請求項９】
式ＶＩＩに従って構成された、請求項１に記載の単離された第ＩＸ因子ポリペプチド：
（Ｇｌａ）−（ＸＴＥＮ）_ｕ−（ＥＧＦ１）−（ＸＴＥＮ）_ｖ−（ＥＧＦ２）−（ＡＰ１）−（ＸＴＥＮ）_ｗ−（ＡＰ２）−（ＸＴＥＮ）_ｘ−（Ｐｒｏ）−（Ｓ）_ｙ−（ＸＴＥＮ）_ｚ ＶＩＩ
この場合、各発生について独立して、
（ａ）Ｇｌａが、第ＩＸ因子のＧｌａドメインであり；
（ｂ）ＥＧＦ１が、第ＩＸ因子のＥＧＦ１ドメインであり；
（ｃ）ＥＧＦ２が、第ＩＸＩ因子のＥＧＦ２ドメインであり；
（ｄ）ＡＰ１が、第ＩＸ因子の活性化因子ペプチドドメインの一部であり；
（ｅ）ＡＰ２が、少なくとも第一の開裂配列を含む第ＩＸ因子の活性化因子ペプチドドメインの一部であり；
（ｆ）ＰＲＯが、第ＩＸ因子のプロテアーゼドメインであり；
（ｇ）Ｓが、開裂配列を任意に含むことのできる１〜約５０のアミノ酸残基を有するスペーサー配列であり；
（ｈ）ＸＴＥＮが、表４、表９、表１０、表１１、表１２、または表１３から選択されるアミノ酸の比較可能な長さと少なくとも９０％の配列同一性を呈する伸長した組換えポリペプチドであり、
（ｉ）ｕが、０または１のいずれかであり；
（ｊ）ｖが、０または１のいずれかであり；
（ｋ）ｘが、０または１のいずれかであり；
（ｌ）ｙが、０または１のいずれかであり；かつ
（ｍ）ｚが、０または１のいずれかであり、ただし、ｕ＋ｖ＋ｘ＋ｙ＋ｚ≧１という条件付きである。
【請求項１０】
ｙ＝１であり、かつ、ＳがＦＸＩａ、ＦＸＩＩａ、カリクレイン、ＦＶＩＩａ、ＦＩＸａ、ＦＸａ、ＦＩＩａ（トロンビン）、エラスターゼ‐２、ＭＭＰ‐１２、ＭＭＰ１３、ＭＭＰ‐１７、およびＭＭＰ‐２０からなる群から選択される哺乳類プロテアーゼによって開裂可能である開裂配列を含む、請求項９に記載の単離された第ＩＸ因子ポリペプチド。
【請求項１１】
２つ以上のＸＴＥＮを含む、請求項１に記載の単離された第ＩＸ因子ポリペプチド。
【請求項１２】
前記ＸＴＥＮが、前記ＩＸ因子に含まれる任意の２つの隣接したドメイン間に組み込まれ、この場合、該２つの隣接したドメインがＧｌａ、ＥＧＦ１、ＥＧＦ２、ＡＰ、およびペプチダーゼＳ１（Ｐｒｏ）からなる群から選択される、請求項１に記載の単離された第ＩＸ因子ポリペプチド。
【請求項１３】
（ｉ）比較可能なモル用量で哺乳類に投与される場合、前記ＸＴＥＮを欠失する相応する第ＩＸ因子と比較して、哺乳類に投与する場合により長い終末半減期を有し；
（ｉｉ）該ＩＸ因子ポリペプチドのより小さなモル量が、別の等価の用量処方計画の下で哺乳類に投与されるＸＴＥＮを欠失する相応する第ＩＸ因子との比較において哺乳類に投与される場合、該第ＩＸ因子ポリペプチドが、該ＸＴＥＮを欠失する相応の第ＩＸ因子として比較可能な曲線下面積（ＡＵＣ）を達成し；
（ｉｉｉ）該第ＩＸ因子ポリペプチドのより小さなモル量が、別の等価の用量処方計画の下で哺乳類に投与されるＸＴＥＮを欠失する相応の第ＩＸ因子との比較において哺乳類に投与される場合、該ＩＸ因子ポリペプチドが、該ＸＴＥＮを欠失する相応の第ＩＸ因子として比較可能な治療効果を達成し；
（ｉｖ）該第ＩＸ因子ポリペプチドが、別の等価のモル量を用いて哺乳類に投与されたＸＴＥＮを欠失する相応の第ＩＸ因子と比較してあまり頻繁に哺乳類に投与されない場合、第ＩＸ因子ポリペプチドが、該ＸＴＥＮを欠失する相応の第ＩＸ因子として比較可能な曲線下面積（ＡＵＣ）を達成し；
（ｖ）該第ＩＸ因子ポリペプチドが、別の等価のモル量を使用して哺乳類に投与されたＸＴＥＮを欠失する相応の第ＩＸ因子と比較してあまり頻繁に哺乳類に投与されない場合、第ＩＸ因子ポリペプチドが、該ＸＴＥＮを欠失する相応の第ＩＸ因子として比較可能な治療効果を達成し；
（ｖｉ）別の等価の投薬期間の下で哺乳類に投与されたＸＴＥＮを欠失する相応の第ＩＸ因子と比較して、累積的により小さなモル量の第ＩＸ因子ポリペプチドが、哺乳類に投与される場合、該第ＩＸ因子ポリペプチドが、該ＸＴＥＮを欠失する相応の第ＩＸ因子として比較可能な曲線下面積（ＡＵＣ）を達成し；又は
（ｖｉｉ）別の等価の投薬期間の下で哺乳類に投与されるＸＴＥＮを欠失する相応の第ＩＸ因子と比較して、累積的により小さなモル量の第ＩＸ因子ポリペプチドが、哺乳類に投与される場合、該第ＩＸ因子ポリペプチドが、該ＸＴＥＮを欠失する相応の第ＩＸ因子として比較可能な治療効果を達成することを特徴とする、請求項１に記載の単離された第ＩＸ因子ポリペプチド。
【請求項１４】
請求項１の一項に記載の治療有効量の第ＩＸ因子ポリペプチドを含む組成物を対象に投与することを含む、該対象における凝固障害を治療する方法。
【請求項１５】
前記凝固障害が血友病Ｂである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
請求項１に記載の治療有効量の第ＩＸ因子ポリペプチドを含む組成物を対象に投与することを含む、該対象における出血症状を治療する方法。
【請求項１７】
請求項１〜１３のいずれか一項に記載の治療有効量の第ＩＸ因子を含む組成物を、凝固タンパク質を欠損する対象に投与することを含む、該対象を治療する方法。
【請求項１８】
前記凝固タンパク質が、野生型の第ＶＩＩ因子、第ＩＸ因子、または第ＸＩ因子と置き換わる、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記ＸＴＥＮが、少なくとも１００のアミノ酸残基を含む、請求項１に記載の単離された第ＩＸ因子ポリペプチド。
【請求項２０】
伸長した組換えポリペプチド（ＸＴＥＮ）が、以下を特徴とする、該ＸＴＥＮを含む単離された第ＩＸ因子ポリペプチド：
（ａ）該ＸＴＥＮが、少なくとも３６のアミノ酸残基を含み；
（ｂ）前記ＵＲＰに含まれるグリシン（Ｇ）、アスパラギン酸（Ｄ）、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、グルタミン酸（Ｅ）、およびプロリン（Ｐ）の残基の合計が、該ＸＴＥＮの全アミノ酸の少なくとも８０％を構成し；
前記配列モチーフの各々において２倍超を生じず；
（ｄ）該ＸＴＥＮ配列が、ＴＥＰＩＴＯＰＥアルゴリズムによって分析される場合、推定Ｔ細胞エピトープを欠失し、この中で、該ＸＴＥＮ配列内のエピトープについての該ＴＥＰＩＴＯＰＥアルゴリズムの推定は、−９のスコアに基づいており；
（ｅ）該ＸＴＥＮ配列が、ＧＯＲアルゴリズムによって決定される時、９０％超のランダムコイル形成を有し；かつ
（ｆ）該ＸＴＥＮ配列が、Ｃｈｏｕ‐Ｆａｓｍａｎアルゴリズムによって決定される時、２％未満のアルファヘリックスおよび２％のベータ‐シートを有する。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１８】

【図１９】

【図２０】

【図２１】

【図２２】

【図２３】

【図２４】

【図２５】

【図２７】

【図２８】

【図２９】

【図３１】

【図３２】

【図３３】

【図３４】

【図３５】

【図３６】

【図１５】

【図１６】

【図１７】

【図２６】

【図３０】

【公表番号】特表２０１３−５０２４５９（Ｐ２０１３−５０２４５９Ａ）
【公表日】平成２５年１月２４日（２０１３．１．２４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５２６７０９（Ｐ２０１２−５２６７０９）
【出願日】平成２２年８月２日（２０１０．８．２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／００２１４８
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０２８２２９
【国際公開日】平成２３年３月１０日（２０１１．３．１０）
【出願人】（５１１１８８８１９）アムニクス　オペレーティング　インコーポレイテッド (6)
【Ｆターム（参考）】