本発明は、伸長した組換えポリペプチド（ＸＴＥＮ）に連結された第ＶＩＩ因子凝固因子を含む組成物、該組成物をコードする単離された核酸、ならびにこれらを含むベクターおよび宿主細胞、ならびに凝固因子関連の疾患、障害、および容態の治療においてこのような組成物を作製および使用する方法に関する。本発明は、容態の治療または改良あるいは凝固第ＩＸ因子および／または凝固第ＶＩＩ因子の投与と関連したパラメータの亢進のための組成物ならびに方法に関する。特に、本発明は、１以上の伸長組換えポリペプチド（ＸＴＥＮ）を含む融合タンパク質の組成物を提供する。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
伸長した組換えポリペプチド（ＸＴＥＮ）を含む単離された第ＶＩＩ因子ポリペプチドであって、該ＸＴＥＮが少なくとも３６のアミノ酸残基を含み、この場合、該第ＶＩＩ因子ポリペプチドは、対象に投与される場合に約１２時間よりも長い終末半減期を呈する、該第ＶＩＩ因子ポリペプチド。
【請求項２】
前記第ＶＩＩ因子ポリペプチドが、最適に整列した場合に、表１から選択される配列と比較して少なくとも９０％の配列同一性を呈する、請求項１に記載の単離された第ＶＩＩ因子ポリペプチド。
【請求項３】
前記第ＶＩＩ因子が、そのＣ末端で前記ＸＴＥＮに連結される、請求項１または２に記載の単離された第ＶＩＩ因子ポリペプチド。
【請求項４】
第ＸＩａ因子、第ＸＩＩａ因子、カリクレイン、第ＶＩＩａ因子、第ＩＸａ因子、第Ｘａ因子、第ＩＩａ因子（トロンビン）、エラスターゼ‐２、ＭＭＰ‐１２、ＭＭＰ１３、ＭＭＰ‐１７、およびＭＭＰ‐２０からなる群から選択される哺乳類プロテアーゼによって開裂可能な開裂配列を介して前記ＸＴＥＮに連結される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の単離された第ＶＩＩ因子ポリペプチド。
【請求項５】
前記哺乳類プロテアーゼによる前記開裂配列における開裂が、前記第ＶＩＩ因子ポリペプチドから前記ＸＴＥＮを放出する、請求項４に記載の単離された第ＶＩＩ因子ポリペプチド。
【請求項６】
前記ＸＴＥＮが、前記第ＶＩＩ因子において含まれる任意の２つの隣接したドメイン間に組み込まれ、この場合、該２つの隣接したドメインが、Ｇｌａ、ＥＧＦ１、ＥＧＦ２、活性化型ペプチド（ＡＰ）、およびペプチダーゼＳ１（Ｐｒｏ）からなる群から選択される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の単離された第ＶＩＩ因子ポリペプチド。
【請求項７】
前記ＸＴＥＮが以下を特徴とする、請求項１〜６のいずれか一項に記載の単離された第ＶＩＩ因子ポリペプチド：
（ａ）ＸＴＥＮアミノ酸残基の累積合計が、２００超〜約３０００アミノ酸残基であり：
（ｂ）アスパラギン残基およびグルタミン残基の合計が、該ＸＴＥＮの全アミノ酸配列の１０％未満であり；
（ｃ）メチオニン残基およびトリプトファン残基の合計が、該ＸＴＥＮの全アミノ酸配列の２％未満であり；
（ｄ）該ＸＴＥＮ配列が、１０未満のサブシーケンススコアを有し；
（ｅ）該ＸＴＥＮ配列が、ＧＯＲアルゴリズムによって決定される時、９０％超のランダムコイル形成を有し；かつ
（ｆ）該ＸＴＥＮ配列が、Ｃｈｏｕ‐Ｆａｓｍａｎアルゴリズムによって決定される時、２％未満のアルファヘリックスおよび２％のベータ‐シートを有する。
【請求項８】
少なくとも約４の見かけの分子量因子を呈する、請求項１〜７のいずれか一項に記載の単離された第ＶＩＩ因子ポリペプチド。
【請求項９】
前記ＸＴＥＮが、表４、表９、表１０、表１１、表１２、または表１３から選択されるアミノ酸配列の比較可能な長さと少なくとも９０％の配列同一性を呈する、請求項１〜８のいずれか一項に記載の単離された第ＶＩＩ因子ポリペプチド。
【請求項１０】
式ＶＩＩに従って構成された、請求項１〜９のいずれか一項に記載の単離された第ＶＩＩ因子ポリペプチド：
（Ｇｌａ）−（ＸＴＥＮ）_ｕ−（ＥＧＦ１）−（ＸＴＥＮ）_ｖ−（ＥＧＦ２）−（ＡＰ１）−（ＸＴＥＮ）_ｗ−（ＡＰ２）−（ＸＴＥＮ）_ｘ−（Ｐｒｏ）−（Ｓ）_ｙ−（ＸＴＥＮ）_ｚ ＶＩＩ
この場合、各発生について独立して、
（ａ）Ｇｌａが、第ＶＩＩ因子のＧｌａドメインであり；
（ｂ）ＥＧＦ１が、第ＶＩＩ因子のＥＧＦ１ドメインであり；
（ｃ）ＥＧＦ２が、第ＶＩＩ因子のＥＧＦ２ドメインであり；
（ｄ）ＡＰ１が、第ＶＩＩ因子の活性化因子ペプチドドメインの一部であり；
（ｅ）ＡＰ２が、少なくとも第一の開裂配列を含む第ＩＸ因子の活性化因子ペプチドドメインの一部であり；
（ｆ）ＰＲＯが、第ＶＩＩ因子のプロテアーゼドメインであり；
（ｇ）Ｓが、開裂配列を任意に含むことのできる１〜約５０のアミノ酸残基を有するスペーサー配列であり；
（ｈ）ＸＴＥＮが、表４、表９、表１０、表１１、表１２、または表１３から選択されるアミノ酸配列の比較可能な長さと少なくとも９０％の配列同一性を呈する伸長した組換えポリペプチドであり、
（ｉ）ｕが、０または１のいずれかであり；
（ｊ）ｖが、０または１のいずれかであり；
（ｋ）ｘが、０または１のいずれかであり；
（ｌ）ｙが、０または１のいずれかであり；かつ
（ｍ）ｚが、０または１のいずれかであり、ただし、ｕ＋ｖ＋ｘ＋ｙ＋ｚ≧１という条件付きである。
【請求項１１】
２つ以上のＸＴＥＮを含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の単離された第ＶＩＩ因子ポリペプチド。
【請求項１２】
異種性配列の開裂の際に活性化される、野生型第ＶＩＩ因子を活性化しない凝固前駆体プロテアーゼによって開裂可能な少なくとも１つの異種性配列を含む、単離された第ＶＩＩ因子ポリペプチド。
【請求項１３】
組織因子の不在下で活性化可能な、請求項１２に記載の単離された第ＶＩＩ因子ポリペプチド。
【請求項１４】
前記異種性配列が、活性化型第ＸＩ因子によって開裂可能である、請求項１２または１３に記載の単離された第ＶＩＩ因子ポリペプチド。
【請求項１５】
少なくとも２つの異種性配列を含み、該異種性配列の各々が同じかまたは異なる凝固前駆体プロテアーゼによって開裂可能である、請求項１２〜１４のいずれか一項に記載の単離された第ＶＩＩ因子ポリペプチド。
【請求項１６】
伸長した組換えポリペプチド（ＸＴＥＮ）を含む、請求項１２〜１５のいずれか一項に記載の単離された第ＶＩＩ因子ポリペプチド。
【請求項１７】
前記少なくとも１つの異種性配列の開裂の際に、前記ＸＴＥＮも開裂される、請求項１２〜１６のいずれか一項に記載の単離された第ＶＩＩ因子ポリペプチド。
【請求項１８】
前記異種性配列が、配列ＫＬＴＲＡＥＴＶＦＰＤＶＤＹＶＮＳＴＥＡＥＴＩＬＤＮＩＴＱＳＴＱＳＦＮＤＦＴＲＶと少なくとも９０％の配列同一性を呈する、請求項１２〜１７のいずれか一項に記載の単離された第ＶＩＩ因子ポリペプチド。
【請求項１９】
前記異種性配列が、最適に整列した場合にＴＳＫＬＴＲＡＥＴＶＦＰおよびＦＮＤＦＴＲＶから選択される配列と少なくとも９０％の配列同一性を呈する、請求項１２〜１８のいずれか一項に記載の単離された第ＶＩＩ因子ポリペプチド。
【請求項２０】
前記第ＶＩＩ因子ポリペプチドが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、アルブミン、抗体、および抗体断片からなる群から選択される成分を含まない、請求項１２〜１９のいずれか一項に記載の単離された第ＶＩＩ因子ポリペプチド。
【請求項２１】
少なくとも約４の見かけの分子量因子を呈する、請求項１２〜１０のいずれか一項に記載の単離された第ＶＩＩ因子ポリペプチド。
【請求項２２】
治療有効量の請求項１〜２１のいずれか一項に記載の第ＶＩＩ因子を含む組成物を対象に投与することを含む、該対象における凝固障害を治療する方法。
【請求項２３】
前記凝固障害が、血友病Ａまたは血友病Ｂである、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記治療有効量の第ＶＩＩ因子は、外来的に投与された第ＶＩＩＩ因子および／または第ＩＸ因子が、比較可能な治療効果を生じる必要性を回避するのに十分である、請求項２２または２３に記載の方法。
【請求項２５】
治療有効量の請求項１〜２１のいずれか一項に記載の第ＶＩＩ因子を含む組成物を対象に投与することを含む、該対象における出血症状を治療する方法。
【請求項２６】
治療有効量の請求項１〜２１のいずれか一項に記載の第ＶＩＩ因子を含む組成物を、凝固タンパク質の欠乏した対象に投与することを含む、該対象を治療する方法。
【請求項２７】
前記凝固タンパク質が、野生型の第ＶＩＩ因子、第ＩＸ因子、または第ＸＩ因子に置き換わる、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記ＸＴＥＮが、少なくとも１００のアミノ酸残基を含む、請求項１に記載の単離された第ＶＩＩ因子ポリペプチド。
【請求項２９】
ＸＴＥＮが以下を特徴とする、伸長した組換えポリペプチド（ＸＴＥＮ）を含む単離された第ＶＩＩ因子ポリペプチド：
（ａ）該ＸＴＥＮが、少なくとも３６のアミノ酸残基を含み；
（ｂ）前記ＵＲＰにおいて含まれるグリシン（Ｇ）、アスパラギン酸（Ｄ）、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、グルタミン酸（Ｅ）、およびプロリン（Ｐ）の残基の合計が、該ＸＴＥＮの全アミノ酸の少なくとも８０％を構成し；
（ｃ）（ｉ）該ＸＴＥＮの配列が、３つの連続したアミノ酸がセリンでない限り、同一である該アミノ酸を含まないように、または（ｉｉ）該ＸＴＥＮ配列の少なくとも約８０％が、非重複配列モチーフからなり、該配列モチーフの各々が約９〜約１４のアミノ酸残基を含み、この場合、任意の２つの連続したアミノ酸残基が、該配列モチーフの各々の２倍以下しか生じないように、該ＸＴＥＮ配列が実質的に非反復性であり；
（ｄ）該ＸＴＥＮ配列が、ＴＥＰＩＴＯＰＥアルゴリズムによって分析される場合、推定Ｔ細胞エピトープを欠失し、この場合、該ＸＴＥＮ配列内のエピトープについての該ＴＥＰＩＴＯＰＥアルゴリズム推定が、−９のスコアに基づいており；
（ｅ）該ＸＴＥＮ配列が、ＧＯＲアルゴリズムによって決定される時、９０％超のランダムコイル形成を有し；かつ
（ｆ）該ＸＴＥＮ配列が、Ｃｈｏｕ‐Ｆａｓｍａｎアルゴリズムによって決定される時、２％未満のアルファヘリックスおよび２％のベータ‐シートを有する。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１８】

【図１９】

【図２０】

【図２１】

【図２２】

【図２３】

【図２４】

【図２５】

【図２７】

【図２８】

【図２９】

【図３１】

【図３２】

【図３３】

【図３４】

【図３５】

【図３６】

【図１５】

【図１６】

【図１７】

【図２６】

【図３０】

【公表番号】特表２０１３−５０２４５８（Ｐ２０１３−５０２４５８Ａ）
【公表日】平成２５年１月２４日（２０１３．１．２４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５２６７０８（Ｐ２０１２−５２６７０８）
【出願日】平成２２年８月２日（２０１０．８．２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／００２１４７
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０２８２２８
【国際公開日】平成２３年３月１０日（２０１１．３．１０）
【出願人】（５１１１８８８１９）アムニクス　オペレーティング　インコーポレイテッド (6)
【Ｆターム（参考）】