本発明は、正常な器官と比較してＰＫＩＢ又はＮＡＡＬＡＤＬ２の過剰発現を検出することにより、前立腺癌、特にホルモン不応性前立腺癌（ＨＲＰＣ）又は去勢抵抗性前立腺癌（ＣＲＰＣ）を検出する方法を特徴とする。前立腺癌におけるＰＫＩＢ若しくはＮＡＡＬＡＤＬ２の過剰発現、ＰＫＩＢ若しくはＮＡＡＬＡＤＬ２の細胞増殖機能、ＰＫＩＢ若しくはＮＡＡＬＡＤＬ２の細胞内局在、又はＰＫＩＢ及びＰＫＡ−Ｃの間の相互作用に基づき、ＨＲＰＣを含む前立腺癌を治療及び防止するための化合物を同定する方法も開示される。また、ＰＫＩＢ遺伝子又はＮＡＡＬＡＤＬ２遺伝子に対する二本鎖分子を投与することにより前立腺癌を治療する方法が提供される。本発明はまた、提供される方法において有用な、二本鎖分子とそれらをコードするベクターとを含む生成物と、その分子又はベクターを含む組成物とを提供する。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞に導入した場合にＰＫＩＢ又はＮＡＡＬＡＤＬ２のｉｎ ｖｉｖｏ発現、及び細胞増殖を阻害する単離二本鎖分子であって、互いにハイブリダイズすることで該二本鎖分子を形成するセンス鎖及びそれに相補的なアンチセンス鎖を含む、二本鎖分子。
【請求項２】
前記センス鎖が、配列番号１６、配列番号１７及び配列番号１９から成る群から選択される標的配列に対応する配列を含む、請求項１に記載の二本鎖分子。
【請求項３】
ヌクレオチド数約１９〜約２５の長さを有する、請求項２に記載の二本鎖分子。
【請求項４】
介在一本鎖によって連結したセンス鎖及びアンチセンス鎖の両方を含む単一のポリヌクレオチドから成る、請求項２に記載の二本鎖分子。
【請求項５】
下記一般式を有する、請求項４に記載の二本鎖分子：
５’−［Ａ］−［Ｂ］−［Ａ’］−３’
式中、［Ａ］は配列番号１６、配列番号１７及び配列番号１９から成る群から選択される配列を含むセンス鎖であり、［Ｂ］は３個〜２３個のヌクレオチドから成る介在一本鎖であり、かつ［Ａ’］は［Ａ］に相補的な配列を含むアンチセンス鎖である。
【請求項６】
請求項１に記載の二本鎖分子を発現するベクター。
【請求項７】
前記二本鎖分子が下記一般式を有する、請求項６に記載のベクター：
５’−［Ａ］−［Ｂ］−［Ａ’］−３’
式中、［Ａ］は配列番号１６、配列番号１７及び配列番号１９から成る群から選択される配列を含むセンス鎖であり、［Ｂ］は３個〜２３個のヌクレオチドから成る介在一本鎖であり、かつ［Ａ’］は［Ａ］に相補的な配列を含むアンチセンス鎖である。
【請求項８】
ＰＫＩＢ遺伝子又はＮＡＡＬＡＤＬ２遺伝子を過剰発現する細胞において該遺伝子の発現を阻害する少なくとも１つの単離二本鎖分子を投与する工程を含む、癌を治療する方法であって、該二本鎖分子が、互いにハイブリダイズすることで該二本鎖分子を形成するセンス鎖及びそれに相補的なアンチセンス鎖を含む、方法。
【請求項９】
前記センス鎖が配列番号１６、配列番号１７及び配列番号１９から成る群から選択される標的配列に対応する配列を含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記二本鎖分子が、ヌクレオチド数約１９〜約２５の長さを有する、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記二本鎖分子が、介在一本鎖によって連結したセンス鎖及びアンチセンス鎖の両方を含む単一のポリヌクレオチドから成る、請求項８に記載の方法。
【請求項１２】
前記二本鎖分子が下記一般式を有する、請求項１１に記載の方法：
５’−［Ａ］−［Ｂ］−［Ａ’］−３’
式中、［Ａ］は配列番号１６、配列番号１７及び配列番号１９から成る群から選択される配列を含むセンス鎖であり、［Ｂ］は３個〜２３個のヌクレオチドから成る介在一本鎖であり、かつ［Ａ’］は［Ａ］に相補的な配列を含むアンチセンス鎖である。
【請求項１３】
前記二本鎖分子がベクターによりコードされる、請求項８に記載の方法。
【請求項１４】
前記ベクターによりコードされる前記二本鎖分子が下記一般式を有する、請求項１３に記載の方法：
５’−［Ａ］−［Ｂ］−［Ａ’］−３’
式中、［Ａ］は配列番号１６、配列番号１７及び配列番号１９から成る群から選択される配列を含むセンス鎖であり、［Ｂ］は３個〜２３個のヌクレオチドから成る介在一本鎖であり、かつ［Ａ’］は［Ａ］に相補的な配列を含むアンチセンス鎖である。
【請求項１５】
治療すべき前記癌が前立腺癌又はホルモン不応性前立腺癌又は去勢抵抗性前立腺癌である、請求項８に記載の方法。
【請求項１６】
ＰＫＩＢ又はＮＡＡＬＡＤＬ２の発現を阻害する少なくとも１つの単離二本鎖分子を含む、癌を治療するための組成物であって、該二本鎖分子が、互いにハイブリダイズすることで該二本鎖分子を形成するセンス鎖及びそれに相補的なアンチセンス鎖を含む、組成物。
【請求項１７】
前記センス鎖が配列番号１６、配列番号１７及び配列番号１９から成る群から選択される標的配列に対応する配列を含む、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
前記二本鎖分子が、約１９ヌクレオチド〜約２５ヌクレオチドの長さを有する、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
前記二本鎖分子が、介在一本鎖によって連結したセンス鎖及びアンチセンス鎖を含む単一のポリヌクレオチドから成る、請求項１６に記載の組成物。
【請求項２０】
前記二本鎖分子が下記一般式を有する、請求項１９に記載の組成物：
５’−［Ａ］−［Ｂ］−［Ａ’］−３’
式中、［Ａ］は配列番号１６、配列番号１７及び配列番号１９から成る群から選択される配列を含むセンス鎖配列であり、［Ｂ］は３個〜２３個のヌクレオチドから成る介在一本鎖であり、かつ［Ａ’］は［Ａ］に相補的な配列を含むアンチセンス鎖である。
【請求項２１】
前記二本鎖分子が、ベクターによりコードされ、かつ前記組成物中に含有される、請求項１６に記載の組成物。
【請求項２２】
前記二本鎖分子が下記一般式を有する、請求項２１に記載の組成物：
５’−［Ａ］−［Ｂ］−［Ａ’］−３’
式中、［Ａ］は配列番号１６、配列番号１７及び配列番号１９から成る群から選択される配列を含むセンス鎖であり、［Ｂ］は３個〜２３個のヌクレオチドから成る介在一本鎖であり、かつ［Ａ’］は［Ａ］に相補的な配列を含むアンチセンス鎖である。
【請求項２３】
治療すべき前記癌が前立腺癌又はホルモン不応性前立腺癌又は去勢抵抗性前立腺癌である、請求項１６に記載の組成物。
【請求項２４】
（ａ）以下：
（ｉ）配列番号１、配列番号３又は配列番号５に対応する配列を含むｍＲＮＡを検出すること、
（ｉｉ）配列番号２又は配列番号４のアミノ酸配列を含むタンパク質を検出すること、及び
（ｉｉｉ）配列番号２又は配列番号４のアミノ酸配列を含むタンパク質の生物活性を検出すること、
から成る群から選択される方法のいずれか１つにより被験体由来の生体試料中における遺伝子の発現レベルを決定する工程と、
（ｂ）該遺伝子の正常対照レベルと比較した前記発現レベルの増大を、前立腺癌と関連づける工程と、
を含む、前立腺癌を診断する方法。
【請求項２５】
前記前立腺癌がホルモン不応性前立腺癌又は去勢抗性前立腺癌である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記発現レベルが前記正常対照レベルより少なくとも１０％大きい、請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
前記発現レベルが、前記被験体由来の生体試料の遺伝子転写産物へのプローブのハイブリダイゼーションを検出することにより決定される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２８】
前記ハイブリダイゼーション工程がＤＮＡアレイ上で実施される、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記発現レベルが、前記配列番号２又は配列番号４のアミノ酸配列を含むタンパク質に対する抗体の結合を検出することにより決定される、請求項２４に記載の方法。
【請求項３０】
前記抗体が、配列番号３２、配列番号３３又は配列番号３４から成るポリペプチドと結合する、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記被験体由来の生体試料が、生検材料、痰、血液又は尿を含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項３２】
配列番号３３又は配列番号３４のアミノ酸配列を含むタンパク質と結合する抗体。
【請求項３３】
配列番号２又は配列番号４のアミノ酸配列を含むタンパク質と結合する抗体を含む、前立腺癌を検出するための組成物。
【請求項３４】
前記抗体が配列番号３２、配列番号３３又は配列番号３４と結合する、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３５】
ａ）試験化合物を、ＰＫＩＢ又はＮＡＡＬＡＤＬ２のポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドと接触させる工程と、
ｂ）前記ポリペプチドと前記試験化合物との間の結合活性を検出する工程と、
ｃ）前記ポリペプチドと結合する前記試験化合物を選択する工程と、
を含む、前立腺癌を治療又は防止するための化合物をスクリーニングする方法。
【請求項３６】
ａ）試験化合物を、ＰＫＩＢ又はＮＡＡＬＡＤＬ２のポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドと接触させる工程と、
ｂ）工程（ａ）の該ポリペプチドの生物活性を検出する工程と、
ｃ）該試験化合物の非存在下で検出される該ポリペプチドの該生物活性と比較して、該ＰＫＩＢ又はＮＡＡＬＡＤＬ２のポリヌクレオチドによりコードされる該ポリペプチドの該生物活性を抑制する該試験化合物を選択する工程と、
を含む、前立腺癌を治療又は防止するための化合物をスクリーニングする方法。
【請求項３７】
前記生物活性が細胞増殖の促進又はＰＫＡ−Ｃ核内蓄積活性である、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
ａ）候補化合物を、ＰＫＩＢ又はＮＡＡＬＡＤＬ２を発現する細胞と接触させる工程と、
ｂ）前記試験化合物の非存在下で検出される前記発現レベルと比較して、ＰＫＩＢ又はＮＡＡＬＡＤＬ２の発現レベルを低減する前記候補化合物を選択する工程と、
を含む、前立腺癌を治療又は防止するための化合物をスクリーニングする方法。
【請求項３９】
ａ）候補化合物を、ベクターが導入されている細胞と接触させる工程であって、該ベクターが、ＰＫＩＢ又はＮＡＡＬＡＤＬ２の転写調節領域と該転写調節領域の制御下で発現するレポーター遺伝子とを含む、接触させる工程と、
ｂ）前記レポーター遺伝子の発現又は活性を測定する工程と、
ｃ）対照と比較して、前記レポーター遺伝子の発現レベル又は活性レベルを低減する候補化合物を選択する工程と、
を含む、前立腺癌を治療又は防止するための化合物をスクリーニングする方法。
【請求項４０】
ａ）試験化合物の存在下で、ＰＫＩＢポリペプチド又はその機能的等価物を、ＰＫＡ−Ｃポリペプチド又はその機能的等価物と接触させる工程と、
ｂ）前記ポリペプチド間の結合を検出する工程と、
ｃ）前記ポリペプチド間の結合を阻害する前記試験化合物を選択する工程と、
を含む、前立腺癌を治療又は防止するための化合物をスクリーニングする方法。
【請求項４１】
前記ＰＫＩＢポリペプチドの機能的等価物が、配列番号３１から成るポリペプチドを含む、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記ＰＫＡ−Ｃポリペプチドの機能的等価物が、ＰＫＩＢ結合ドメインのアミノ酸配列を含む、請求項４０に記載の方法。
【請求項４３】
（ａ）試験化合物の存在下で、ＰＫＩＢポリペプチド又はその機能的等価物と、ＰＫＡ−Ｃポリペプチド又はその機能的等価物と、Ａｋｔとを、該ＰＫＩＢポリペプチドによるＡｋｔのリン酸化に適した条件下で、インキュベートする工程と、
（ｂ）前記Ａｋｔのリン酸化レベルを検出する工程と、
（ｃ）工程（ｂ）で測定される該Ａｋｔの該リン酸化レベルを対照レベルと比較する工程と、
（ｄ）該対照レベルと比較して該Ａｋｔの該リン酸化レベルを減少させる化合物を選択する工程と、
を含む、前立腺癌を治療又は防止するための化合物をスクリーニングする方法。
【請求項４４】
前記Ａｋｔのリン酸化レベルが、配列番号３５のアミノ酸配列の４７３位のセリン残基において検出される、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記ＰＫＩＢポリペプチド又はその機能的等価物と、前記ＰＫＡ−Ｃポリペプチド又はその機能的等価物と、Ａｋｔとが、細胞において発現され、該細胞又はその可溶化物を試験化合物と接触させることにより試験化合物の存在下でインキュベートされる、請求項４３に記載の方法。
【請求項４６】
前記前立腺癌がホルモン不応性前立腺癌又は去勢抵抗性前立腺癌である、請求項３５、３６、３８、３９、４０及び４３のいずれか一項に記載の方法。

【図１Ａ】

【図１Ｂ】

【図１Ｃ】

【図１Ｄ】

【図１Ｅ】

【図１Ｆ】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【公表番号】特表２０１０−５３６３６５（Ｐ２０１０−５３６３６５Ａ）
【公表日】平成２２年１２月２日（２０１０．１２．２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５２１５７９（Ｐ２０１０−５２１５７９）
【出願日】平成２０年８月２０日（２００８．８．２０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＪＰ２００８／０６５２３４
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０２８５２１
【国際公開日】平成２１年３月５日（２００９．３．５）
【出願人】（５０２２４０１１３）オンコセラピー・サイエンス株式会社 (142)
【Ｆターム（参考）】