化粧料及び飲食品
【課題】安全性の高い天然抽出物を有効成分とする抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、育毛剤、抗男性ホルモン剤、抗肥満剤及びサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害剤、並びに当該天然抽出物を配合した皮膚化粧料、頭髪化粧料及び飲食品を提供する。
【解決手段】本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、育毛剤、抗男性ホルモン剤、抗肥満剤又はサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害剤に、東紫蘇からの抽出物を含有せしめる。また、本発明の皮膚化粧料、頭髪化粧料又は飲食品に、東紫蘇からの抽出物を配合する。
【解決手段】本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、育毛剤、抗男性ホルモン剤、抗肥満剤又はサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害剤に、東紫蘇からの抽出物を含有せしめる。また、本発明の皮膚化粧料、頭髪化粧料又は飲食品に、東紫蘇からの抽出物を配合する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、育毛剤、抗男性ホルモン剤、抗肥満剤及びサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害剤、並びに皮膚化粧料、頭髪化粧料及び飲食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、特に生体成分を酸化させる要因として、活性酸素が注目されており、その生体への悪影響が問題となっている。活性酸素は、生体細胞内のエネルギー代謝過程で生じるものであり、活性酸素としては、スーパーオキサイド（すなわち酸素分子の一電子還元で生じるスーパーオキシドアニオン：・Ｏ２−）、過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）、ヒドロキシラジカル（・ＯＨ）及び一重項酸素（１Ｏ２）等が挙げられる。これらの活性酸素は、食細胞の殺菌機構にとって必須であり、ウィルスや癌細胞の除去に重要な働きを果たしている。
【０００３】
しかしながら、活性酸素の過剰な生成は、生体内の膜や組織を構成する生体内分子を攻撃し、各種疾患を誘発する。通常、生体内で生産され、他の活性酸素の出発物質ともなっているスーパーオキサイドは、細胞内に含まれているスーパーオキサイドジスムターゼ（ＳＯＤ）の触媒作用により逐次消去されているが、スーパーオキサイドの産生が過剰である場合、又はＳＯＤの作用が低下している場合には、スーパーオキサイドの消去が不十分となり、スーパーオキサイド濃度が高くなり、これが関節リウマチやベーチェット病等の組織障害、心筋梗塞、脳卒中、白内障、しわ、糖尿病、動脈硬化、肩凝り、冷え性等を引き起こす。
【０００４】
特に、皮膚は、紫外線等の環境因子の刺激を直接受けることから、スーパーオキサイドが生成しやすい器官であるため、スーパーオキサイド濃度の上昇により、例えば、コラーゲン等の生体組織を分解し、変性し又は架橋したり、油脂類を酸化して細胞に障害を与える過酸化脂質を生成したりすると考えられており、活性酸素によって引き起こされる障害が、皮膚のしわ形成や皮膚の弾力低下等の老化の原因になるものと考えられている（非特許文献１参照）。したがって、活性酸素や生体内ラジカルの生成を阻害・抑制することにより、しわ形成や弾力低下等の皮膚の老化や、関節リウマチやベーチェット病等の組織障害、心筋梗塞、脳卒中、白内障、糖尿病、動脈硬化、肩凝り、冷え性等の活性酸素が関与する各種障害を予防、治療又は改善できるものと考えられる。
【０００５】
そこで、活性酸素消去物質、ラジカル消去物質を安全性の点で有利な天然物から得る試みがなされており、このような作用を有するものとして、アブラナ科ブラシカ属植物からの抽出物（特許文献１参照）、ベンケイソウ科リュウキュウベンケイ属植物からの抽出物（特許文献２参照）、タマコチョウからの抽出物（特許文献３参照）、スイオウからの抽出物（特許文献４参照）等が知られている。
【０００６】
一酸化窒素（ＮＯ）は、大気汚染、酸性雨等の要因となる窒素酸化物であるが、近年、この一酸化窒素が、血管内皮由来弛緩因子（ＥＤＲＦ）、神経伝達物質、生体防御における微生物・腫瘍細胞の障害因子等、生体内で多彩な機能を示す生理活性物質であることが見出されている。生体防御においては、特にマクロファージから産生される一酸化窒素が、細菌やウィルスの感染を防御している。
【０００７】
しかし、一酸化窒素が大量に生合成されると、生体にとって無毒ではなく、自己組織の破壊を引き起こし、炎症の悪化、リューマチ、糖尿病等の病態の原因となっている。また、大量に生合成された一酸化窒素が血管平滑筋の弛緩と過剰な透過性の増大をもたらし、著しい血圧の低下によってエンドトキシン・ショックを引き起こすことも知られている。
【０００８】
したがって、炎症性疾患においては、一酸化窒素の過剰な産生を抑制することが重要となる。一酸化窒素の産生抑制作用を有するものとして、例えば、ローズマリー抽出液、カルノソール、カルノシン酸、コーヒー豆の抽出液、サクラダソウ抽出液、オウレン抽出液、オウバク抽出液、カンゾウ抽出液、イヌノイバラ抽出液、センキュウ抽出液、トウニン抽出液、シャクヤク抽出液、ヨクイニン抽出液、アカブドウ抽出液（特許文献５参照）；唐独活、タラ根皮、和続断、車前子、遠子、茜草根、半枝連、槐花、花椒（非特許文献２参照）等が知られている。
【０００９】
炎症性の疾患、例えば、接触性皮膚炎（かぶれ）、乾癬、尋常性天疱瘡、その他肌荒れを伴う各種皮膚疾患等の原因や発症機構は多種多様であるが、その原因の一つとして、ヒアルロニダーゼの活性化、ヒスタミン遊離、血小板凝集等が知られている。ヒアルロニダーゼの活性化によって、マストセルからのヒスタミンの脱顆粒が促進され、その結果炎症が引き起こされる。したがって、ヒアルロニダーゼの活性化を阻害することにより、炎症性疾患の予防、治療又は改善が期待できる。ヒアルロニダーゼ阻害活性を有する植物抽出物としては、イロハモミジからの抽出物（特許文献６参照）等が知られている。
【００１０】
また、ヒスタミンが遊離されると同時に、ヘキソサミニダーゼも遊離されることから、ヘキソサミニダーゼの遊離を指標にヒスタミン遊離抑制作用を評価することができる。したがって、ヘキソサミニダーゼの遊離を抑制することにより、同時にヒスタミンの遊離も抑制でき、これにより炎症性疾患等の予防、治療又は改善に効果があるものと考えられる。ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用を有する植物抽出物としては、藤茶からの抽出物（特許文献７参照）等が知られている。
【００１１】
血小板は、凝集して活性化することにより、生理的には止血、病理的には血栓形成を生じる他、血小板の凝集は、動脈硬化の進展、がん転移、炎症等に関与していると考えられている。したがって、血小板の凝集を抑制することにより、上記疾患の予防、治療又は改善が期待できる。血小板凝集抑制作用を有する植物抽出物としては、地衣類雪茶からの抽出物（特許文献８参照）等が知られている。
【００１２】
皮膚の真皮・表皮は、表皮細胞、線維芽細胞及びこれらの細胞の外にあって皮膚構造を支持するエラスチン、コラーゲン等の真皮細胞外マトリックスによって構成されており、若い皮膚においてはこれらの皮膚組織が恒常性を維持することにより水分保持、柔軟性、弾力性等が確保され、肌は外見的にも張りや艶があってみずみずしい状態に維持される。ところが、紫外線の照射、空気の著しい乾燥、過度の皮膚洗浄等、ある種の外的因子の影響があったり、加齢が進んだりすることによって、真皮細胞外マトリックスの主要構成成分であるエラスチン、コラーゲン等の産生量が減少するとともに、変性や分解を引き起こす。その結果、角質は異常剥離を始め、肌は張りや艶を失い、肌荒れやシワ等の老化症状を呈するようになる。このように、皮膚の老化に伴う変化、すなわち、シワの形成、張りの消失、弾力性の低下等には、エラスチン、コラーゲン等の真皮細胞外マトリックス成分の減少、変性が関与している。
【００１３】
エラスチンは、皮膚組織に弾力性を与える線維であり、加齢等に伴ってエラスチンが分解されると皮膚の張りが失われるとともに、弾力性が低下する。エラスチンを分解する酵素であるエラスターゼは、紫外線の照射により活性化され、これによりエラスチンの分解が加速し、皮膚の張りが失われるとともに、弾力性が低下する。そのため、エラスターゼの活性を阻害することによりエラスチンの分解が抑制され、張りの消失、弾力性の低下等の皮膚の老化症状を予防・改善できると考えられる。従来、エラスターゼ阻害作用を有する生薬として、スターフルーツ果実抽出物が知られている（特許文献９参照）。
【００１４】
近年、皮膚の老化に伴う変化を誘導する因子として、マトリックス系プロテアーゼの関与が指摘されている。マトリックス系プロテアーゼの中でも、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）は、皮膚の真皮細胞外マトリックスの主要構成成分であるコラーゲンを分解する酵素として知られているが、その発現は紫外線の照射により大きく増加し、コラーゲンの減少・変性の一因となり、皮膚のシワの形成、弾力性の低下等の大きな要因となると考えられている。したがって、ＭＭＰ−１活性を阻害することは、皮膚の老化症状を予防・改善する上で重要である。従来、ＭＭＰ−１阻害作用を有する生薬として、マツ科マツ属二葉松類の樹皮の抽出物が知られている（特許文献１０参照）。
【００１５】
皮膚の表皮及び真皮は、表皮細胞、線維芽細胞、及びこれらの細胞の外にあって皮膚構造を支持するコラーゲン等の細胞外マトリックスにより構成されている。若い皮膚においては線維芽細胞の増殖は活発であり、線維芽細胞、コラーゲン等の皮膚組織の相互作用により皮膚に水分が保持されるとともに、皮膚の柔軟性、弾力性等が確保され、皮膚は外見的にも張りや艶があってみずみずしい状態に維持される。
【００１６】
ところが、紫外線、空気の著しい乾燥、過度の皮膚洗浄等、ある種の外的因子の影響があったり、加齢が進んだりすると線維芽細胞の増殖が遅くなり皮膚の保湿機能や弾力性が低下する。そして、皮膚は張りや艶を失い、荒れ、シワ等の老化症状を呈するようになる。そのため、線維芽細胞の増殖を促進することにより皮膚の老化を予防又は改善することができると考えられる。このような考えに基づき、線維芽細胞増殖促進作用を有するものとして、クスノハガシワ抽出物（特許文献１１参照）等が提案されている。
【００１７】
多くのステロイドホルモンは産生臓器から分泌された分子型で受容体と結合してその作用を発現するが、アンドロゲンと総称される男性ホルモンの場合、例えば、テストステロンは標的臓器の細胞内に入ってテストステロン５α−レダクターゼにより５α−ジヒドロテストステロン（５α−ＤＨＴ）に還元されてから受容体と結合し、アンドロゲンとしての作用を発現する。
【００１８】
アンドロゲンは重要なホルモンであるが、それが過度に作用すると、男性型脱毛症、多毛症、脂漏症、座瘡（ニキビなど）、前立腺肥大症、前立腺腫瘍、男児性早熟等、さまざまな好ましくない症状を誘発する。そこで、従来から、これらの各種症状を改善するために過剰のアンドロゲンの作用を抑制する方法、具体的には、テストステロンを活性型５α−ＤＨＴに還元するテストステロン５α−レダクターゼの作用を阻害することにより、活性な５α−ＤＨＴが生じるのを抑制する方法や、テストステロンから生じた５α−ＤＨＴが受容体と結合するのを阻害することによりアンドロゲン活性を発現させない方法などが知られている。
【００１９】
テストステロン５α−レダクターゼ阻害作用を有するものとしては、例えば、コエロスポンディアス（Choerospondias）属に属する植物からの抽出物（特許文献１２参照）、マジト及び／又はカチュアからの抽出物（特許文献１３参照）、五斂子からの抽出物（特許文献１４参照）、紅豆杉、鳥欖、幌傘楓及び穿心蓮からなる群より選ばれた１種又は２種以上の植物からの抽出物（特許文献１５参照）等が知られている。
【００２０】
また、アンドロゲン受容体結合阻害作用を有するものとしては、例えば、黄皮の葉の抽出物（特許文献１６参照）、マジト及び／又はカチュアの抽出物（特許文献１３参照）、五斂子からの抽出物（特許文献１４参照）、藤茶の枝葉からの抽出物（特許文献１７参照）等が知られている。
【００２１】
近年、飽食や運動不足等の生活習慣が原因となって体脂肪が増加し、肥満が増えている。このような肥満の増加は、人間ばかりでなく、ペットや家畜においても見られる。肥満は、高脂血症や動脈硬化等の成人病の原因になるため、美容の面で問題となるばかりでなく、健康の面でも大きな問題となる。
【００２２】
生体内の脂肪を分解するためには、サイクリックＡＭＰの役割が重要となる。サイクリックＡＭＰは生体内に存在するリパーゼを活性化し、活性化されたリパーゼによって脂肪が脂肪酸とグリセロールとに分解される。しかし、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼが活性化されるとサイクリックＡＭＰの分解が誘発され、リパーゼの活性化が阻害される。そのため、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼの活性を阻害することにより細胞内におけるサイクリックＡＭＰが増量し、脂肪の分解を促進することができるものと考えられる。このようなサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害作用を有するものとして、ピーナッツ渋皮抽出物（特許文献１８参照）等が知られている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２３】
【特許文献１】特開２００３−８１８４８号公報
【特許文献２】特開２００５−２９４８３号公報
【特許文献３】特開２００６−３２１７３０号公報
【特許文献４】特開２００７−８９０２号公報
【特許文献５】特開２００２−８７９７５号公報
【特許文献６】特開２００３−１１３０６８号公報
【特許文献７】特開２００３−１２５３２号公報
【特許文献８】特開２００５−８２５３２号公報
【特許文献９】特開２００３−３００８９３号公報
【特許文献１０】特開２００３−２７７２２３号公報
【特許文献１１】特開２００３−１４６８３７号公報
【特許文献１２】特開２００３−５５１６２号公報
【特許文献１３】特開２００２−２４１２９７号公報
【特許文献１４】特開２００２−２４１２９６号公報
【特許文献１５】特開２００２−８７９７６号公報
【特許文献１６】特開２００１−２２６２７８号公報
【特許文献１７】特開２００２−３０８７９０号公報
【特許文献１８】特開２００４−２６７１９号公報
【非特許文献】
【００２４】
【非特許文献１】「フレグランスジャーナル臨時増刊」，1995年，No.14，p.156
【非特許文献２】「和漢医薬学雑誌」，1998年，Vol.15，p.302-303
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２５】
本発明は、安全性の高い天然抽出物及び／又は天然抽出物由来成分を有効成分とする抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、育毛剤、抗男性ホルモン剤、抗肥満剤及びサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害剤、並びに当該天然抽出物及び／又は当該天然抽出物由来成分を配合した皮膚化粧料、頭髪化粧料及び飲食品を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００２６】
上記目的を達成するために、本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、育毛剤、抗男性ホルモン剤、抗肥満剤又はサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害剤は、東紫蘇からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする。
また、本発明の皮膚化粧料、頭髪化粧料又は飲食品は、東紫蘇からの抽出物を配合したことを特徴とする。
【００２７】
本発明の抗酸化剤においては、前記東紫蘇からの抽出物が、活性酸素消去作用及び／又はラジカル消去作用を有するのが好ましく、本発明の抗炎症剤においては、前記東紫蘇からの抽出物が、一酸化窒素産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用及び血小板凝集抑制作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用を有するのが好ましく、本発明の抗老化剤においては、前記東紫蘇からの抽出物が、エラスターゼ活性阻害作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害作用及び皮膚線維芽細胞増殖促進作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用を有するのが好ましく、本発明の育毛剤又は抗男性ホルモン剤においては、前記東紫蘇からの抽出物が、テストステロン５α−レダクターゼ活性阻害作用及び／又はアンドロゲン受容体結合阻害作用を有するのが好ましい。
【００２８】
ここで、本発明において「アンドロゲン受容体結合阻害」とは、５α−ＤＨＴとアンドロゲン受容体との結合の阻害を意味し、その阻害様式は特に限定されるものではなく、例えば、競合的拮抗薬、非競合的拮抗薬といったアンタゴニストとしての阻害が考えられる。
【発明の効果】
【００２９】
本発明によれば、天然物である東紫蘇からの抽出物及び／又は当該抽出物由来成分を有効成分として含有し、安全性の高い抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、育毛剤、抗男性ホルモン剤、抗肥満剤、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害剤、皮膚化粧料、頭髪化粧料及び飲食品を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【００３０】
以下、本発明について説明する。
〔抗酸化剤，抗炎症剤，抗老化剤，育毛剤，抗男性ホルモン剤，抗肥満剤，サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害剤〕
本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、育毛剤、抗男性ホルモン剤、抗肥満剤又はサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害剤は、東紫蘇からの抽出物を有効成分として含有する。
【００３１】
ここで、本発明において「抽出物」には、東紫蘇（学名：Elsholtzia bodinieri）を抽出原料として得られる抽出液、当該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、当該抽出液を乾燥して得られる乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物のいずれもが含まれる。
【００３２】
東紫蘇（Elsholtzia bodinieri）は、シソ科に属する植物であって、中国西南地方、華南地方等に広く分布しており、これらの地域から容易に入手することができる。抽出原料として使用する東紫蘇の構成部位は特に限定されるものではなく、例えば、花部、葉部、枝部、全草、根部等が挙げられ、これらのうち、特に全草を使用するのが好ましい。東紫蘇の全草は、鳳尾茶（ホウビチャ，別名：野山茶・小山茶・雲松茶・小香茶・小松毛茶・銹山茶・牙刷草）と称される生薬として知られており、従来、頭痛、咽頭痛、肝炎、目痛、消化不良等の治療に用いられている。
【００３３】
東紫蘇からの抽出物は、抽出原料を乾燥した後、そのまま又は粗砕機を用いて粉砕し、抽出溶媒による抽出に供することにより得ることができる。この際、抽出原料の乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機により行ってもよい。また、ヘキサン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、抽出原料の極性溶媒による抽出処理を効率よく行うことができる。
【００３４】
抽出溶媒としては、極性溶媒を使用するのが好ましく、例えば、水、親水性有機溶媒等が挙げられ、これらを単独で又は２種以上を組み合わせて、室温又は溶媒の沸点以下の温度で使用することが好ましい。
【００３５】
抽出溶媒として使用し得る水としては、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等のほか、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、濾過、イオン交換、浸透圧調整、緩衝化等が含まれる。したがって、本発明において抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
【００３６】
抽出溶媒として使用し得る親水性有機溶媒としては、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級脂肪族アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコール等が挙げられる。
【００３７】
２種以上の極性溶媒の混合液を抽出溶媒として使用する場合、その混合比は適宜調整することができる。例えば、水と低級脂肪族アルコールとの混合液を使用する場合には、水１０容量部に対して低級脂肪族アルコール１〜９０容量部を混合することが好ましく、水と低級脂肪族ケトンとの混合液を使用する場合には、水１０容量部に対して低級脂肪族ケトン１〜４０容量部を混合することが好ましく、水と多価アルコールとの混合液を使用する場合には、水１０容量部に対して多価アルコール１０〜９０容量部を混合することが好ましい。
【００３８】
抽出処理は、抽出原料に含まれる可溶性成分を抽出溶媒に溶出させ得る限り特に限定はされず、常法に従って行うことができる。例えば、抽出原料の５〜１５倍量（質量比）の抽出溶媒に、抽出原料を浸漬し、常温又は還流加熱下で可溶性成分を抽出させた後、濾過して抽出残渣を除去することにより抽出液を得ることができる。得られた抽出液は、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物を得るために、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。
【００３９】
精製は、例えば、活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等により行うことができる。得られた抽出液はそのままでも抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、育毛剤、抗男性ホルモン剤、抗肥満剤又はサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害剤の有効成分として使用することができるが、濃縮液又は乾燥物としたものの方が使用しやすい。
【００４０】
東紫蘇からの抽出物は、特有の匂いを有しているため、その生理活性の低下を招かない範囲で脱色、脱臭等を目的とする精製を行うことも可能であるが、皮膚化粧料、頭髪化粧料又は飲食品に配合する場合には大量に使用するものではないから、未精製のままでも実用上支障はない。
【００４１】
上記のようにして得られる東紫蘇からの抽出物は、抗酸化作用、抗炎症作用、抗老化作用、育毛作用、抗男性ホルモン作用、抗肥満作用又はサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害作用を有しているため、それぞれの作用を利用して抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、育毛剤、抗男性ホルモン剤、抗肥満剤又はサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤の有効成分として用いることができる。
【００４２】
東紫蘇からの抽出物が有する抗酸化作用は、例えば、活性酸素消去作用及び／又はラジカル消去作用に基づいて発揮される。ただし、東紫蘇からの抽出物が有する抗酸化作用は、これらの作用に基づいて発揮される抗酸化作用に限定されるものではない。
【００４３】
東紫蘇からの抽出物が有する抗炎症作用は、例えば、一酸化窒素産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用及び血小板凝集抑制作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用に基づいて発揮される。ただし、東紫蘇抽出物が有する抗炎症作用は、これらの作用に基づいて発揮される抗炎症作用に限定されるものではない。
【００４４】
東紫蘇からの抽出物が有する抗老化作用は、例えば、エラスターゼ活性阻害作用、ＭＭＰ−１活性阻害作用及び線維芽細胞増殖促進作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用に基づいて発揮される。ただし、東紫蘇抽出物が有する抗老化作用は、これらの作用に基づいて発揮される抗老化作用に限定されるものではない。
【００４５】
東紫蘇からの抽出物が有する育毛作用又は抗男性ホルモン作用は、例えば、テストステロン５α−レダクターゼ阻害作用及び／又はアンドロゲン受容体結合阻害作用に基づいて発揮される。ただし、東紫蘇からの抽出物が有する育毛作用又は抗男性ホルモン作用は、これらの作用に基づいて発揮される育毛作用又は抗男性ホルモン作用に限定されるものではない。
【００４６】
なお、東紫蘇からの抽出物は、活性酸素消去作用、ラジカル消去作用、一酸化窒素産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、エラスターゼ活性阻害作用、ＭＭＰ−１活性阻害作用、線維芽細胞増殖促進作用、テストステロン５α−レダクターゼ阻害作用又はアンドロゲン受容体結合阻害作用を有するため、それらの作用を利用して、活性酸素消去剤、ラジカル消去剤、一酸化窒素産生抑制剤、ヒアルロニダーゼ活性阻害剤、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制剤、エラスターゼ活性阻害剤、ＭＭＰ−１活性阻害剤、線維芽細胞増殖促進剤、テストステロン５α−レダクターゼ阻害剤又はアンドロゲン受容体結合阻害剤の有効成分として使用してもよい。
【００４７】
本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、育毛剤、抗男性ホルモン剤、抗肥満剤又はサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤は、東紫蘇からの抽出物のみからなるものであってもよいし、東紫蘇からの抽出物を製剤化したものであってもよい。
【００４８】
東紫蘇からの抽出物は、デキストリン、シクロデキストリン等の薬学的に許容し得るキャリアーその他任意の助剤を用いて、常法に従い、粉末状、顆粒状、錠剤状、液状等の任意の剤形に製剤化することができる。この際、助剤としては、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯臭剤等を用いることができる。また、東紫蘇からの抽出物は、他の組成物（例えば、皮膚化粧料、頭髪化粧料、飲食品等）に配合して使用することができる。
【００４９】
なお、本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、育毛剤、抗男性ホルモン剤、抗肥満剤又はサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害剤は、必要に応じて、抗酸化作用、抗炎症作用、抗老化作用、育毛作用、抗男性ホルモン作用、抗肥満作用又はサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害作用を有する他の天然抽出物等を配合して有効成分として用いることができる。
【００５０】
本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、育毛剤、抗男性ホルモン剤、抗肥満剤又はサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害剤の投与方法としては、一般に経皮投与、経口投与等が挙げられるが、疾患の種類に応じて、その予防・治療等に好適な方法を適宜選択すればよい。
【００５１】
また、本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、育毛剤、抗男性ホルモン剤、抗肥満剤又はサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害剤の投与量も、疾患の種類、重症度、患者の個人差、投与方法、投与期間等によって適宜増減すればよい。
【００５２】
本発明の抗酸化剤は、東紫蘇からの抽出物が有する活性酸素消去作用及び／又はラジカル消去作用を通じて、しわ形成や弾力低下等の皮膚の老化や、関節リウマチやベーチェット病等の組織障害、心筋梗塞、脳卒中、白内障、糖尿病、動脈硬化、肩凝り、冷え性等の活性酸素が関与する各種障害を予防・改善することができる。ただし、本発明の抗酸化剤は、これらの用途以外にも活性酸素消去作用及び／又はラジカル消去作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００５３】
本発明の抗炎症剤は、東紫蘇からの抽出物が有する一酸化窒素産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用及び血小板凝集抑制作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用を通じて、接触性皮膚炎（かぶれ）、乾癬、尋常性天疱瘡、その他肌荒れを伴う各種炎症性皮膚疾患等を予防・改善することができる。ただし、本発明の抗炎症剤は、これらの用途以外にも一酸化窒素産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用及び血小板凝集抑制作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００５４】
本発明の抗老化剤は、東紫蘇からの抽出物が有するエラスターゼ活性阻害作用、ＭＭＰ−１活性阻害作用及び線維芽細胞増殖促進作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用を通じて、皮膚の老化症状等を予防・改善することができる。ただし、本発明の抗老化剤は、これらの用途以外にもエラスターゼ活性阻害作用、ＭＭＰ−１活性阻害作用及び線維芽細胞増殖促進作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００５５】
本発明の育毛剤は、東紫蘇からの抽出物が有するテストステロン５α−レダクターゼ活性阻害作用及び／又はアンドロゲン受容体結合阻害作用を通じて、男性型脱毛症、多毛症、脂漏症、座瘡（ニキビなど）、前立腺肥大症、前立腺腫瘍、男児性早熟等を予防、治療又は改善することができ、特に男性型脱毛症の予防、治療又は改善に好適である。ただし、本発明の育毛剤は、これらの用途以外にもテストステロン５α−レダクターゼ活性阻害作用及び／又はアンドロゲン受容体結合阻害作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００５６】
本発明の抗男性ホルモン剤は、東紫蘇からの抽出物が有するテストステロン５α−レダクターゼ活性阻害作用及び／又はアンドロゲン受容体結合阻害作用を通じて、男性ホルモンが関与する疾患、例えば、男性型脱毛症、多毛症、脂漏症、座瘡（ニキビなど）、前立腺肥大症、前立腺腫瘍、男児性早熟等を予防、治療又は改善することができる。ただし、本発明の抗男性ホルモン剤は、これらの用途以外にもテストステロン５α−レダクターゼ活性阻害作用及び／又はアンドロゲン受容体結合阻害作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００５７】
本発明の抗肥満剤は、東紫蘇からの抽出物が有するサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害作用を通じて、サイクリックＡＭＰの産生を促進し、脂肪細胞の分解をすることができ、この結果、肥満症、それに伴う動脈硬化、糖尿病、メタボリック症候群等の様々な疾病を予防・改善することができる。ただし、本発明の抗肥満剤は、これらの用途以外にもサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００５８】
本発明のサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤は、東紫蘇からの抽出物が有するサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害作用を通じて、サイクリックＡＭＰの産生を促進し、脂肪細胞の分解を促進することができ、この結果、肥満症、それに伴う動脈硬化、糖尿病、メタボリック症候群等の様々な疾病を予防・改善することができる。ただし、本発明のサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤は、これらの用途以外にもサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００５９】
〔皮膚化粧料，頭髪化粧料〕
東紫蘇からの抽出物は、抗酸化作用、抗炎症作用、抗老化作用、育毛作用、抗男性ホルモン作用、抗肥満作用又はサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害作用を有しており、皮膚又は頭髪（頭皮）に適用した場合の使用感又は安全性に優れているため、皮膚化粧料又は頭髪化粧料に配合するのに好適である。
【００６０】
この場合において、皮膚化粧料又は頭髪化粧料には、東紫蘇からの抽出物をそのまま配合してもよいし、東紫蘇からの抽出物から製剤化した抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、育毛剤、抗男性ホルモン剤、抗肥満剤又はサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害剤を配合してもよい。
【００６１】
東紫蘇からの抽出物、又は東紫蘇からの抽出物から製剤化した抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、育毛剤、抗男性ホルモン剤、抗肥満剤若しくはサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害剤を配合することにより、皮膚化粧料又は頭髪化粧料に抗酸化作用、抗炎症作用、抗老化作用、育毛作用、抗男性ホルモン作用、抗肥満作用又はサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害作用を付与することができる。
【００６２】
東紫蘇からの抽出物を配合し得る皮膚化粧料又は頭髪化粧料の種類は特に限定されるものではなく、皮膚化粧料としては、例えば、軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、ファンデーション等が挙げられ、また、頭髪化粧料としては、例えば、ヘアトニック、ヘアクリーム、ヘアリキッド、シャンプー、ポマード、リンス等が挙げられる。
【００６３】
東紫蘇からの抽出物を皮膚化粧料又は頭髪化粧料に配合する場合、その配合量は、皮膚化粧料又は頭髪化粧料の種類に応じて適宜調整することができるが、好適な配合率は、標準的な抽出物に換算して約０．０００１〜１０質量％であり、特に好適な配合率は、標準的な抽出物に換算して約０．００１〜１質量％である。
【００６４】
本発明の皮膚化粧料又は頭髪化粧料は、東紫蘇からの抽出物が有する抗酸化作用、抗炎症作用、抗老化作用、育毛作用、抗男性ホルモン作用、抗肥満作用又はサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害作用を妨げない限り、通常の皮膚化粧料又は頭髪化粧料の製造に用いられる主剤、助剤又はその他の成分、例えば、収斂剤、殺菌・抗菌剤、紫外線吸収剤、保湿剤、細胞賦活剤、消炎・抗アレルギー剤、抗酸化・活性酸素除去剤、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、香料等を併用することができる。このように併用することで、より一般性のある製品となり、また、併用された上記成分との間の相乗作用が通常期待される以上の優れた使用効果をもたらすことがある。
【００６５】
本発明の皮膚化粧料は、高い安全性を有しており、かつ抗酸化作用、抗炎症作用、抗老化作用、抗男性ホルモン作用、抗肥満作用及びサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用を通じて、しわ形成や弾力低下等の皮膚の老化や、関節リウマチやベーチェット病等の組織障害、心筋梗塞、脳卒中、白内障、糖尿病、動脈硬化、肩凝り、冷え性等の活性酸素が関与する各種障害；接触性皮膚炎（かぶれ）、乾癬、尋常性天疱瘡、その他肌荒れを伴う各種炎症性皮膚疾患；皮膚の老化症状；脂漏症、座瘡（ニキビ等）、皮膚の老化症状、脂漏症、座瘡（ニキビなど）、前立腺肥大症、前立腺腫瘍、男児性早熟；肥満症、肥満症に伴う動脈硬化、糖尿病、メタボリック症候群等を予防、治療又は改善することができる。また、本発明の頭髪化粧料は、高い安全性を有しており、かつ育毛作用及び／又は抗男性ホルモン作用を通じて、男性型脱毛症等を予防、治療又は改善することができる。
【００６６】
〔飲食品〕
東紫蘇からの抽出物は、抗酸化作用、抗炎症作用、抗老化作用、育毛作用、抗男性ホルモン作用、抗肥満作用又はサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害作用を有しており、消化管で消化されるようなものではないことが確認されており、安全性にも優れているため、飲食品に配合するのに好適である。
【００６７】
この場合に、東紫蘇からの抽出物をそのまま飲食品に配合してもよいし、東紫蘇からの抽出物から製剤化した抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、育毛剤、抗男性ホルモン剤、抗肥満剤若しくはサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害剤を飲食品に配合してもよい。
【００６８】
東紫蘇からの抽出物又はそれらから製剤化した抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、育毛剤、抗男性ホルモン剤、抗肥満剤若しくはサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害剤を飲食品に配合する場合、それらにおける有効成分の配合量は、使用目的、症状、性別等を考慮して適宜変更することができるが、添加対象飲食品の一般的な摂取量を考慮して、成人１日あたりの抽出物摂取量が約１〜１０００ｍｇになるようにするのが好ましい。
【００６９】
本発明の飲食品は、東紫蘇からの抽出物をその活性を妨げないような任意の飲食品に配合したものであってもよいし、東紫蘇からの抽出物を主成分とする栄養補助食品であってもよい。
【００７０】
本発明の飲食品を製造する際には、例えば、デキストリン、デンプン等の糖類；ゼラチン、大豆タンパク、トウモロコシタンパク等のタンパク質；アラニン、グルタミン、イソロイシン等のアミノ酸類；セルロース、アラビアゴム等の多糖類；大豆油、中鎖脂肪酸トリグリセリド等の油脂類などの任意の助剤を添加して任意の形状の飲食品にすることができる。
【００７１】
東紫蘇からの抽出物を配合し得る飲食品は特に限定されないが、その具体例としては、清涼飲料、炭酸飲料、栄養飲料、果実飲料、乳酸飲料等の飲料（これらの飲料の濃縮原液及び調整用粉末を含む）；アイスクリーム、アイスシャーベット、かき氷等の冷菓；そば、うどん、はるさめ、ぎょうざの皮、しゅうまいの皮、中華麺、即席麺等の麺類；飴、チューインガム、キャンディー、ガム、チョコレート、錠菓、スナック菓子、ビスケット、ゼリー、ジャム、クリーム、焼き菓子等の菓子類；かまぼこ、ハム、ソーセージ等の水産・畜産加工食品；加工乳、発酵乳等の乳製品；サラダ油、てんぷら油、マーガリン、マヨネーズ、ショートニング、ホイップクリーム、ドレッシング等の油脂及び油脂加工食品；ソース、たれ等の調味料；スープ、シチュー、サラダ、惣菜、漬物；その他種々の形態の健康・栄養補助食品；錠剤、カプセル剤、ドリンク剤などが挙げられ、これらの飲食品に東紫蘇からの抽出物を配合するときに、通常用いられる補助的な原料や添加物を併用することができる。
【００７２】
なお、本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、育毛剤、抗男性ホルモン剤、抗肥満剤、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害剤、皮膚化粧料、頭髪化粧料又は飲食品は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。
【実施例】
【００７３】
以下、製造例、試験例及び配合例を示し、本発明を具体的に説明するが、本発明は下記の各例に何ら制限されるものではない。
【００７４】
〔製造例１〕東紫蘇抽出物の製造
細切りにした東紫蘇の全草の乾燥物４２．７ｇに５０容量％エタノール（水とエタノールとの容量比＝１：１）４００ｍＬを加え、還流抽出器で８０℃にて２時間加熱抽出し、熱時濾過した。残渣についてさらに同様の抽出処理をした。得られた抽出液を合わせて減圧下で濃縮し、さらに乾燥して東紫蘇抽出物１２．６ｇを得た（試料１）。
【００７５】
〔試験例１〕スーパーオキサイド消去作用試験（ＮＢＴ法）
製造例１により得られた東紫蘇抽出物（試料１）について、以下のようにしてスーパーオキサイド消去作用を試験した。
【００７６】
試験管に、０．０５ＭのＮａ２ＣＯ３緩衝液（ｐＨ１０．２）を２．４ｍＬ、並びに３ｍＭのキサンチン、３ｍＭのＥＤＴＡ、ウシ血清アルブミン溶液及び０．７５ｍＭのＮＢＴ（nitroblue tetrazolium）を０．１ｍＬずつ加え、これに試料溶液（試料１，試料濃度は下記表１を参照）０．１ｍＬを添加し、２５℃で１０分間放置した。放置後、酵素溶液としてのキサンチンオキシダーゼ溶液を加えて素早く攪拌し、２５℃で２０分間静置した。その後、６ｍＭの塩化銅０．１ｍＬを加えて反応を停止させて、波長５６０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【００７７】
酵素溶液を添加しない場合についても、同様の操作と吸光度の測定を行い、さらに、試料溶液を添加せずに蒸留水を添加した場合についても同様の測定を行った。得られた結果から、下記式によりスーパーオキサイド消去率（％）を算出するとともに、スーパーオキサイド消去率が５０％になる試料濃度ＩＣ５０（μｇ／ｍＬ）を算出した。
【００７８】
スーパーオキサイド消去率(％)＝{１−(Ａ−Ｂ)／(Ｃ−Ｄ)}×１００
式中、Ａは「酵素溶液添加・試料溶液添加時の吸光度」を表し、Ｂは「酵素溶液無添加・試料溶液添加時の吸光度」を表し、Ｃは「酵素溶液添加・試料溶液無添加時の吸光度」を表し、Ｄは「酵素溶液無添加・試料溶液無添加時の吸光度」を表す。
結果を表１に示す。
【００７９】
【表１】
【００８０】
表１に示すように、東紫蘇抽出物（試料１）は優れた活性酸素消去作用を有することが確認された。また、活性酸素消去作用の程度は、東紫蘇抽出物の濃度によって調節できることが確認された。
【００８１】
〔試験例２〕ラジカル消去作用試験
製造例１により得られた東紫蘇抽出物（試料１）について、以下のようにしてラジカル消去作用を試験した。
【００８２】
１．５×１０−４ＭのＤＰＰＨ（diphenyl-p-picrylhydrazyl）エタノール溶液３ｍＬに試料溶液（試料１，試料濃度は下記表２を参照）３ｍＬを加え密栓した後、振り混ぜて３０分間放置した。放置後、波長５２０ｎｍにおける吸光度を測定した。コントロールとして、試料溶液の代わりに試料を溶解した溶媒のみを用いて同様の操作をして、波長５２０ｎｍの吸光度を測定した。また、ブランクとして、エタノールに試料溶液３ｍＬを加えた後、直ちに波長５２０ｎｍの吸光度を測定した。得られた結果から、下記式によりラジカル消去率（％）を算出するとともに、ラジカル消去率が５０％になる試料濃度ＩＣ５０（μｇ／ｍＬ）を算出した。
【００８３】
ラジカル消去率(％)＝{１−(Ｂ−Ｃ)／Ａ}×１００
式中、Ａは「コントロールの吸光度」を表し、Ｂは「試料溶液添加時の吸光度」を表し、Ｃは「ブランクの吸光度」を表す。
結果を表２に示す。
【００８４】
【表２】
【００８５】
表２に示すように、東紫蘇抽出物（試料１）は、優れたラジカル消去作用を有することが確認された。また、ラジカル消去作用の程度は、東紫蘇抽出物の濃度によって調節できることが確認された。
【００８６】
〔試験例３〕一酸化窒素産生抑制作用試験
製造例１により得られた東紫蘇抽出物（試料１）について、以下のようにして一酸化窒素産生抑制作用を試験した。
【００８７】
マウスマクロファージ細胞（ＲＡＷ２６４．７細胞，大日本製薬社製）を、１０％ＦＢＳを添加したＤＭＥＭ培地（日水製薬社製）にて前培養後、セルスクレーパーにより細胞を回収した。回収した細胞を３．０×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞密度になるように１０％ＦＢＳを含有しフェノールレッドを含有しないＤ−ＭＥＭで希釈した後、９６ウェルプレートに１ウェルあたり１００μＬずつ播種し、４時間培養した。
【００８８】
培養終了後、培地を抜き、終濃度２％のＤＭＳＯを含む１０％ＦＢＳを含有しフェノールレッドを含有しないＤ−ＭＥＭで溶解した試料溶液（試料１，試料濃度：２００μｇ／ｍＬ）を各ウェルに１００μＬ添加し、１０％ＦＢＳを含有しフェノールレッドを含有しないＤ−ＭＥＭに溶解したリポポリサッカライド（ＬＰＳ，終濃度１μｇ／ｍＬ，E.coli0111:B4，DIFCO社製）を１００μＬ加え、４８時間培養した。
【００８９】
一酸化窒素（ＮＯ）産生量は、亜硝酸イオン（ＮＯ２−）量を指標に測定した。培養終了後、各ウェルの培養液に、培養上清と同量のグリス試薬（１質量％のスルファニルアミド，０．１％N-1-naphthyl ethylendiamine dihydrochlpride in ５％リン酸溶液）を添加し、１０分間室温にて反応させた。反応後、波長５４０ｎｍにおける吸光度を測定した。一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制率（％）は、試料無添加時（コントロール）の一酸化窒素（ＮＯ）産生量を基に、下記式により算出した。
【００９０】
ＮＯ産生抑制率(％)＝{１−(Ｃ−Ｄ)／(Ａ−Ｂ)}×１００
式中、Ａは「試料無添加時の吸光度」を表し、Ｂは「試料無添加時のブランクの吸光度」を表し、Ｃは「試料添加時の吸光度」を表し、Ｄは「試料添加時のブランクの吸光度」を表す。
【００９１】
上記のようにして算出した結果、東紫蘇抽出物（試料１）の一酸化窒素抑制率は、１５．３％であった。このことから、東紫蘇抽出物は、優れた一酸化窒素産生抑制作用を有することが確認された。
【００９２】
〔試験例４〕ヒアルロニダーゼ活性阻害作用試験
製造例１により得られた東紫蘇抽出物（試料１）について、以下のようにしてヒアルロニダーゼ活性阻害作用を試験した。
【００９３】
試料を溶解した０．１ｍｏｌ／Ｌの酢酸緩衝液（ｐＨ３．５）０．２ｍＬ（試料１，試料濃度は下記表３を参照）にヒアルロニダーゼ溶液（Type IV-S(from bovine testis)，SIGMA社製，４００ＮＦ ｕｎｉｔｓ／ｍＬ）０．１ｍＬを加え、３７℃で２０分間反応させた。さらに、活性化剤として２．５ｍｍｏｌ／Ｌの塩化カルシウム０．２ｍＬを加え、３７℃で２０分間反応させた。これに０．４ｍｇ／ｍＬのヒアルロン酸ナトリウム溶液（from Rooster Comb）０．５ｍＬを加え、３７℃で４０分間反応させた。
【００９４】
その後、０．４ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウムを０．２ｍＬ加えて反応を停止し、冷却した後、各反応溶液にホウ酸溶液０．２ｍＬを加え、３分間煮沸した。氷冷後、ｐ−ＤＡＢＡ試薬６ｍＬを加え、３７℃で２０分間反応させた。その後、波長５８５ｎｍにおける吸光度を測定した。同様の方法で空試験を行い補正した。得られた測定結果から、下記式によりヒアルロニダーゼ活性阻害率（％）を算出した。
【００９５】
阻害率(％)＝{１−(Ｓｔ−Ｓｂ)／(Ｃｔ−Ｃｂ)}×１００
式中、Ｓｔは「試料溶液の波長５８５ｎｍにおける吸光度」を表し、Ｓｂは「試料溶液ブランクの波長５８５ｎｍにおける吸光度」を表し、Ｃｔは「コントロール溶液の波長５８５ｎｍにおける吸光度」を表し、Ｃｂは「コントロール溶液ブランクの波長５８５ｎｍにおける吸光度」を表す。
結果を表３に示す。
【００９６】
【表３】
【００９７】
表３に示すように、東紫蘇抽出物（試料１）は、優れたヒアルロニダーゼ活性阻害作用を有することが確認された。また、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用の程度は、東紫蘇抽出物の濃度によって調節できることが確認された。
【００９８】
〔試験例５〕ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用試験
製造例１により得られた東紫蘇抽出物（試料１）について、以下のようにしてヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用を試験した。
【００９９】
ラット好塩基球白血病細胞（ＲＢＬ−２Ｈ３）を１５％ＦＢＳ添加Ｓ−ＭＥＭ培地を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を４．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞密度に希釈し、終濃度０．５μｇ／ｍＬとなるようにDNP-specific IgEを添加した後、９６ウェルプレートに１ウェルあたり１００μＬずつ播種し、一晩培養した。
【０１００】
培養終了後、培地を抜き、シリガリアン緩衝液１００μＬにて洗浄を２回行った。次に、同緩衝液３０μＬ及び同緩衝液にて調製した試料溶液１０μＬ（試料１，試料濃度は下記表４を参照）を加え、３７℃にて１０分間静置した。その後、１００ｎｇ／ｍＬのＤＮＰ−ＢＳＡ溶液１０μＬを加え、３７℃にて１５分間静置し、ヘキソサミニダーゼを遊離させた。
【０１０１】
その後、９６ウェルプレートを氷上に静置することにより遊離を停止した。各ウェルの細胞上清１０μＬ及び１ｍｍｏｌ／Ｌのｐ−ＮＡＧ（ｐ−ニトロフェニル−Ｎ−アセチル−β−Ｄ−グルコサイド）溶液１０μＬを、新たな９６ウェルプレートに添加し、３７℃で１時間反応させた。
【０１０２】
反応終了後、各ウェルに０．１ｍｏｌ／ＬのＮａ２ＣＯ３／ＮａＨＣＯ３２５０μＬを加え、波長４１５ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定し補正した。また、空試験として、細胞上清１０μＬと、０．１ｍｏｌ／ＬのＮａ２ＣＯ３／ＮａＨＣＯ３２５０μＬとの混合液の波長４１５ｎｍにおける吸光度を同様に測定した。得られた測定結果から、下記式によりヘキソサミニダーゼ遊離抑制率（％）を算出した。
【０１０３】
ヘキソサミニダーゼ遊離抑制率(％)＝{１−(Ｂ−Ｃ)／Ａ}×１００
式中、Ａは「試料無添加での吸光度」を表し、Ｂは「試料添加での吸光度」を表し、Ｃは「試料添加・ｐ−ＮＡＧ無添加での吸光度」を表す。
結果を表４に示す。
【０１０４】
【表４】
【０１０５】
表４に示すように、東紫蘇抽出物（試料１）は、優れたヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用を有することが確認された。
【０１０６】
〔試験例６〕血小板凝集抑制作用試験
製造例１により得られた東紫蘇抽出物（試料１）について、以下のようにして血小板凝集抑制作用を試験した。
【０１０７】
採血したウサギの血液に日本薬局方ヘパリンナトリウム注射液を１／１０量加えて遠心分離（１８０×ｇ、１０分、室温）し、血小板浮遊液（Platelet Rich Plasma；Ｐ．Ｒ．Ｐ．）を得た。
【０１０８】
次に、血小板浮遊液（Ｐ．Ｒ．Ｐ．）２２３μＬに２００ｍｍｏｌ／Ｌの塩化カルシウム溶液１μＬを加え、３７℃で１分間反応した。これに試料溶液（試料１，試料濃度は下記表５を参照）１μＬを加え、さらに２分間反応し、撹拌子を入れて１分間撹拌した後、コラーゲン溶液を２５μＬ添加して３７℃で１０分間の血小板凝集率を測定した。別に、コントロールとして、披験試料溶液の代わりに披験試料溶液の溶媒を添加した以外は、上記と同様に操作して血小板凝集率を測定した。得られた測定結果から、下記式により血小板凝集抑制率（％）を算出した。
【０１０９】
血小板凝集抑制率(％)＝{(Ａ−Ｂ)／Ａ}×１００
式中、Ａは「コントロールの血小板凝集率」を表し、Ｂは「試料溶液添加時の血小板凝集率」を表す。
結果を表５に示す。
【０１１０】
【表５】
【０１１１】
表５に示す結果から、東紫蘇抽出物（試料１）は、優れた血小板凝集抑制作用を有することが確認された。
【０１１２】
〔試験例７〕エラスターゼ活性阻害作用試験
製造例１により得られた東紫蘇抽出物（試料１）について、以下のようにしてエラスターゼ活性阻害作用を試験した。
【０１１３】
９６ウェルプレートにて、０．２ｍｏｌ／Ｌのトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）で調製した試料溶液（試料１，試料濃度：４００μｇ／ｍＬ）５０μＬ及び２０μｇ／ｍＬのエラスターゼ・タイプIII溶液５０μＬを混合した。その後、上記緩衝液で調製した０．４５１４ｍｇ／ｍＬのN-succinyl-Ala-Ala-Ala-p-nitroanilide１００μＬを添加して、２５℃で１５分反応させた。
【０１１４】
反応終了後、波長４１５ｎｍにおける吸光度を測定した。同様の方法で空試験を行い補正した。得られた結果から、下記式によりエラスターゼ活性阻害率（％）を算出した。
【０１１５】
エラスターゼ活性阻害率(％)＝{１−(Ｃ−Ｄ)／(Ａ−Ｂ)}×１００
式中、Ａは「試料無添加・酵素添加時の波長４１５ｎｍにおける吸光度」を表し、Ｂは「試料無添加・酵素無添加時の波長４１５ｎｍにおける吸光度」を表し、Ｃは「試料添加・酵素添加時の波長４１５ｎｍにおける吸光度」を表し、Ｄは「試料添加・酵素無添加時の波長４１５ｎｍにおける吸光度」を表す。
【０１１６】
上記のようにして算出した結果、東紫蘇抽出物（試料１）のエラスターゼ活性阻害率は、１５．５％であった。このことから、東紫蘇抽出物は、優れたエラスターゼ活性阻害作用を有することが確認された。
【０１１７】
〔試験例８〕ＭＭＰ−１活性阻害作用試験
製造例１により得られた東紫蘇抽出物（試料１）について、以下のようにしてＭＭＰ−１活性阻害作用を試験した。
【０１１８】
蓋付試験管にて、２０ｍｍｏｌ／Ｌの塩化カルシウムを含有する０．１ｍｏｌ／Ｌのトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７．１）で調製した試料溶液（試料１，試料濃度は下記表６を参照）５０μＬ、０．１ｍｇ／ｍＬのマトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１，COLLAGENASE Type IV from Clostridium histolyticum，SIGMA社製）溶液５０μＬ、及び０．５ｍｏｌ／ＬのＰｚ−ペプチド（Pz-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg-OH，BACHEM Feinchemikalien AG社製）溶液４００μＬを混合し、３７℃にて３０分間反応させた後、２５ｍｍｏｌ／Ｌのクエン酸溶液１ｍＬを加え、反応を停止した。
【０１１９】
その後、酢酸エチル５ｍＬをさらに加えて、激しく振とうした。これを遠心分離し（１６００×ｇ，１０分間）、酢酸エチル層の波長３２０ｎｍにおける吸光度を測定した。また、同様の方法により空試験を行った。得られた結果から、下記式によりＭＭＰ−１活性阻害率（％）を算出するとともに、ＭＭＰ−１の活性を５０％阻害する試料濃度ＩＣ５０（μｇ／ｍＬ）を算出した。
【０１２０】
ＭＭＰ−１活性阻害率(％)＝{１−(Ｃ−Ｄ)／(Ａ−Ｂ)}×１００
式中、Ａは「試料無添加・酵素添加時の吸光度」を表し、Ｂは「試料無添加・酵素無添加時の吸光度」を表し、Ｃは「試料添加・酵素添加時の吸光度」を表し、Ｄは「試料添加・酵素無添加時の吸光度」を表す。
結果を表６に示す。
【０１２１】
【表６】
【０１２２】
表６に示すように、東紫蘇抽出物（試料１）は、優れたＭＭＰ−１活性阻害作用を有することが確認された。また、ＭＭＰ−１活性阻害作用の程度は、東紫蘇抽出物の濃度によって調節できることが確認された。
【０１２３】
〔試験例９〕皮膚線維芽細胞増殖促進作用試験
製造例１により得られた東紫蘇抽出物（試料１）について、以下のようにして皮膚線維芽細胞増殖促進作用を試験した。
【０１２４】
ヒト正常皮膚線維芽細胞（ＮＢ１ＲＧＢ）を１０％ＦＢＳ含有α−ＭＥＭを用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を７．０×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞密度になるように５％ＦＢＳ含有α−ＭＥＭで希釈した後、９６ウェルプレートに１ウェルあたり１００μＬずつ播種し、一晩培養した。
【０１２５】
培養終了後、５％ＦＢＳ含有α−ＭＥＭで溶解した試料溶液（試料１，試料濃度は下記表７を参照）を各ウェルに１００μＬずつ添加し、３日間培養した。線維芽細胞増殖作用は、ＭＴＴアッセイ法を用いて測定した。
【０１２６】
培養終了後、各ウェルから１００μＬずつ培地を抜き、終濃度５ｍｇ／ｍＬでＰＢＳ（−）に溶解したＭＴＴを各ウェルに２０μＬずつ添加した。４．５時間培養した後に、１０％ＳＤＳを溶解した０．０１ｍｏｌ／Ｌの塩酸溶液を各ウェルに１００μＬずつ添加し、一晩培養した後、波長５７０ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。また、同様の方法で空試験を行い補正した。得られた結果から、下記式により線維芽細胞増殖促進率（％）を算出した。
【０１２７】
線維芽細胞増殖促進率(％)＝(Ｓｔ−Ｓｂ)／(Ｃｔ−Ｃｂ)×１００
式中、Ｓｔは「試料を添加した細胞での吸光度」を表し、Ｓｂは「試料を添加した空試験の吸光度」を表し、Ｃｔは「試料を添加しない細胞での吸光度」を表し、Ｃｂは「試料を添加しない空試験の吸光度」を表す。
結果を表７に示す。
【０１２８】
【表７】
【０１２９】
表７に示すように、東紫蘇抽出物（試料１）は、優れた線維芽細胞増殖促進作用を有することが確認された。
【０１３０】
〔試験例１０〕テストステロン５α−レダクターゼ阻害作用試験
製造例１により得られた東紫蘇抽出物（試料１）について、以下のようにしてテストステロン５α−レダクターゼ阻害作用を試験した。
【０１３１】
蓋付Ｖ底試験管にて、テストステロン（和光純薬工業社製）４．２ｍｇをプロピレングリコール１ｍＬに溶解したもの２０μＬと、１ｍｇ／ｍＬのＮＡＤＰＨを含有する５ｍｍｏｌ／Ｌのトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．１３）８２５μＬとを混合した。
【０１３２】
さらに、各試料のエタノール水溶液（試料１，試料濃度は下記表８を参照）８０μＬ及びＳ−９（ラット肝臓ホモジネート，オリエンタル酵母工業社製）７５μＬを加えて混合し、３７℃にて３０分間インキュベートした。その後、塩化メチレン１ｍＬを加えて反応を停止させた。これを遠心分離し（１６００×ｇ，１０分間）、塩化メチレン層を分取して、分取した塩化メチレン層について、下記の条件にてガスクロマトグラフィー分析をし、３α−アンドロスタンジオール、５α−ジヒドロテストステロン（５α−ＤＨＴ）及びテストステロンの濃度（μｇ／ｍＬ）を定量した。コントロールとして、試料溶液の代わりに試料溶媒を同量（８０μＬ）用いて同様に処理し、ガスクロマトグラフィー分析をした。
【０１３３】
［ガスクロマトグラフィー条件］
使用装置：Shimadzu GC-7A（島津製作所社製）
カラム：ＤＢ−１７０１（内径：０．５３ｍｍ，長さ：３０ｍ，膜厚：１．０μｍ，J&W Scientific社製）
カラム温度：２４０℃
注入口温度：３００℃
検出器：ＦＩＤ
試料注入量：１μＬ
スプリット比：１：２
キャリアガス：窒素ガス
キャリアガス流速：３ｍＬ／ｍｉｎ
【０１３４】
３α−アンドロスタンジオール、５α−ＤＨＴ及びテストステロンの濃度の定量は、下記の方法により行った。
３α−アンドロスタンジオール、５α−ＤＨＴ及びテストステロンの標準品を塩化メチレンに溶解し、当該溶液についてガスクロマトグラフィー分析をし、これらの化合物の濃度（μｇ／ｍＬ）及びピーク面積から、ピーク面積と化合物の濃度との対応関係を予め求めておいた。そして、テストステロンとＳ−９との反応後の３α−アンドロスタンジオール、５α−ＤＨＴ及びテストステロンのそれぞれのピーク面積あたりの濃度を、予め求めておいた対応関係を利用して、下記式（１）に基づいて求めた。
【０１３５】
Ａ＝Ｂ×Ｃ／Ｄ・・・（１）
式中、Ａは「３α−アンドロスタンジオール、５α−ＤＨＴ又はテストステロンの濃度（μｇ／ｍＬ）」を表し、Ｂは「３α−アンドロスタンジオール、５α−ＤＨＴ又はテストステロンのピーク面積」を表し、Ｃは「標準品の濃度（μｇ／ｍＬ）」を表し、Ｄは「標準品のピーク面積」を表す。
【０１３６】
式（１）に基づいて算出された化合物濃度を用いて、下記式（２）に基づき、変換率（テストステロン５α−レダクターゼによりテストステロンが還元されて生成した３α−アンドロスタンジオール及び５α−ＤＨＴの濃度と、テストステロンの初期濃度との濃度比）を算出した。
【０１３７】
変換率＝(Ｅ＋Ｆ)／(Ｅ＋Ｆ＋Ｇ)・・・（２）
式中、Ｅは「３α−アンドロスタンジオールの濃度（μｇ／ｍＬ）」を表し、Ｆは「５α−ＤＨＴの濃度（μｇ／ｍＬ）」を表し、Ｇは「テストステロンの濃度（μｇ／ｍＬ）」を表す。
【０１３８】
式（２）に基づいて算出された変換率を用いて、下記式（３）に基づき、テストステロン５α−レダクターゼ阻害率（％）を算出するとともに、テストステロン５α−レダクターゼ阻害率が５０％になる試料濃度ＩＣ５０（μｇ／ｍＬ）を算出した。
阻害率(％)＝(１−Ｈ／Ｉ)×１００・・・（３）
式中、Ｈは「試料添加時の変換率」を表し、Ｉは「コントロールの変換率」を表す。
結果を表８に示す。
【０１３９】
【表８】
【０１４０】
表８に示すように、東紫蘇抽出物（試料１）は、優れたテストステロン５α−レダクターゼ阻害作用を有することが確認された。また、テストステロン５α−レダクターゼ阻害作用の程度は、東紫蘇抽出物の濃度によって調節できることが確認された。
【０１４１】
〔試験例１１〕アンドロゲン受容体結合阻害作用試験
製造例１により得られた東紫蘇抽出物（試料１）について、以下のようにしてアンドロゲン受容体結合阻害作用を試験した。
【０１４２】
マウス自然発生乳癌（シオノギ癌；ＳＣ１１５）よりクローニングされたアンドロゲン依存性マウス乳癌細胞（ＳＣ−３細胞）を、２％ＤＣＣ−ＦＢＳ及び１０−８ｍｏｌ／Ｌのテストステロンを含有するＭＥＭ培地（以下、ＭＥＭ−２という。）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１．０×１０５ｃｅｌｌｓ／μＬの細胞密度になるようにＭＥＭ−２培地で希釈し、９６ウェルプレートに１ウェルあたり１００μＬずつ播種し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で培養した。
【０１４３】
２４時間後、試料（試料１，試料濃度は下記表９を参照）及び１．０×１０−９ｍｏｌ／ＬのＤＨＴを添加した０．５％ＢＳＡ含有ＨａｍＦ１２＋ＭＥＭ培地（以下、ＨＭＢ培地という。）に培地を交換して４８時間培養した。
【０１４４】
その後、培地を０．９７ｍｍｏｌ／ＬのＭＴＴを含むＭＥＭ−２培地に交換し、２時間培養後、培地をイソプロパノールに交換して細胞内に生成したブルーホルマザンを抽出した。溶出したブルーホルマザンを含有するイソプロパノールについて、ブルーホルマザンの吸収極大点がある５７０ｎｍの吸光度を測定した。
【０１４５】
なお、付着細胞の影響を補正するため、同時に６５０ｎｍの吸光度も測定し、両吸光度の差をもってブルーホルマザンの生成量に比例する値とした（下記結合阻害率の計算式における吸光度はこの補正済み吸光度である）。上記と並行して、試料単独でＳＣ−３細胞に及ぼす影響をみるため、ＨＭＢ培地にＤＨＴを添加せず試料のみを添加して、同様の培養と測定とを行った。
【０１４６】
さらに、コントロールとして、試料及びＤＨＴを添加しないＨＭＢ培地で培養した場合、並びに試料を添加せずＤＨＴのみを添加したＨＭＢ培地で培養した場合についても同様の測定を行った。測定結果から、下記式によりアンドロゲン受容体結合阻害率（％）を算出するとともに、アンドロゲンの受容体への結合を５０％阻害する試料濃度ＩＣ５０（μｇ／ｍＬ）算出した。
【０１４７】
アンドロゲン受容体結合阻害率(％)＝{１−(Ａ−Ｂ)／(Ｃ−Ｄ)}×１００
式中、Ａは「ＤＨＴ添加・試料添加の場合の吸光度」を表し、Ｂは「ＤＨＴ無添加・試料添加の場合の吸光度」を表し、Ｃは「ＤＨＴ添加・試料無添加の場合の吸光度」を表し、Ｄは「ＤＨＴ無添加・試料無添加の場合の吸光度」を表す。
結果を表９に示す。
【０１４８】
【表９】
【０１４９】
表９に示すように、東紫蘇抽出物（試料１）は、優れたアンドロゲン受容体結合阻害作用を有することが確認された。また、アンドロゲン受容体結合阻害作用の程度は、東紫蘇抽出物の濃度によって調節できることが確認された。
【０１５０】
〔試験例１２〕サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害作用試験
製造例１により得られた東紫蘇抽出物（試料１）について、以下のようにしてサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害作用を試験した。
【０１５１】
５ｍＭの塩化マグネシウムを含有する５０ｍＭのトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．５）０．２ｍＬに、２．５ｍｇ／ｍＬのウシ血清アルブミン溶液０．１ｍＬ、０．１ｍｇ／ｍＬのサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ溶液０．１ｍＬ及び５０％ＤＭＳＯに溶解した試料溶液（試料１，試料濃度は下記表１０を参照）０．０５ｍＬを加え、３７℃の温度条件下で５分間インキュベーションした。
【０１５２】
この反応溶液に、０．５ｍｇ／ｍＬのサイクリックＡＭＰ溶液０．０５ｍＬを加え、３７℃の温度条件下で６０分間インキュベーションした。３分間沸騰水浴上で煮沸することにより反応を停止させ、これを遠心（２２６０×ｇ，１０分間，４℃）し、上清中の反応基質であるサイクリックＡＭＰを、下記の条件で高速液体クロマトグラフィーを用いて分析した。また、試料溶液を添加せずに同様の方法で空試験を行った。
【０１５３】
＜高速液体クロマトグラフィー条件＞
製品名：Chromatocorder 12（SYSTEM INSTRUMENTS社製）
固定相：Wakosil 5C18（和光純薬工業社製）
カラム径：４．６ｍｍ
カラム長：２５０ｍｍ
移動相：1mM TBAP in 25mM KH2PO4:CH3CN＝90:10
移動相流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
検出：ＵＶ，２６０ｎｍ
【０１５４】
次に、サイクリックＡＭＰ標準品のピーク面積（Ａ）、試料無添加時におけるサイクリックＡＭＰ標準品とサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼとの反応溶液の上清のピーク面積（Ｂ１）及び試料添加時におけるサイクリックＡＭＰ標準品とサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼとの反応溶液の上清のピーク面積（Ｂ２）を求めた。得られた結果から、下記式により試料無添加時のサイクリックＡＭＰ標準品の分解率（Ｃ）及び試料添加時のサイクリックＡＭＰ標準品の分解率（Ｄ）を算出した。
【０１５５】
試料無添加時の標準品分解率(Ｃ，％)＝(１−Ｂ１／Ａ)×１００
試料添加時の標準品の分解率(Ｄ，％)＝(１−Ｂ２／Ａ)×１００
【０１５６】
その後、上記式により算出した各分解率（Ｃ，Ｄ）に基づいて、下記式によりサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害率（％）を算出するとともに、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害率が５０％になる試料濃度ＩＣ５０（μｇ／ｍＬ）を算出した。
阻害率(％)＝(１−Ｄ／Ｃ)×１００
結果を表１０に示す。
【０１５７】
【表１０】
【０１５８】
表１０に示すように、東紫蘇抽出物（試料１）は、優れたサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害作用を有することが確認された。また、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害作用の程度は、東紫蘇抽出物の濃度によって調節できることが確認された。
【０１５９】
〔配合例１〕
下記組成の乳液を常法により製造した。
東紫蘇抽出物（製造例１） ０．１ｇ
ホホバオイル ４．０ｇ
オリーブオイル ２．０ｇ
スクワラン ２．０ｇ
セタノール ２．０ｇ
モノステアリン酸グリセリル ２．０ｇ
ポリオキシエチレンセチルエーテル（20E.O.） ２．５ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（20E.O.） ２．０ｇ
黄杞エキス ０．１ｇ
グリチルリチン酸ジカリウム ０．１ｇ
イチョウ葉エキス ０．１ｇ
コンキオリン ０．１ｇ
オウバクエキス ０．１ｇ
カミツレエキス ０．１ｇ
１，３−ブチレングリコール ３．０ｇ
パラオキシ安息香酸メチル ０．１５ｇ
香料 ０．０５ｇ
精製水 残部（全量を１００ｇとする）
【０１６０】
〔配合例２〕
下記組成の化粧水を常法により製造した。
東紫蘇抽出物（製造例１） ０．１ｇ
グリセリン ３．０ｇ
１，３−ブチレングリコール ３．０ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（20E.O.） ０．５ｇ
パラオキシ安息香酸メチル ０．１５ｇ
クエン酸 ０．１ｇ
クエン酸ソーダ ０．１ｇ
油溶性甘草エキス ０．１ｇ
海藻エキス ０．１ｇ
キシロビオースミクスチャー ０．５ｇ
クジンエキス ０．１ｇ
香料 ０．０５ｇ
精製水 残部（全量を１００ｇとする）
【０１６１】
〔配合例３〕
下記組成のクリームを常法により製造した。
東紫蘇抽出物（製造例１） ０．１ｇ
流動パラフィン ５．０ｇ
サラシミツロウ ４．０ｇ
セタノール ３．０ｇ
スクワラン １０．０ｇ
ラノリン ２．０ｇ
ステアリン酸 １．０ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（20E.O.） １．５ｇ
モノステアリン酸グリセリル ３．０ｇ
１，３−ブチレングリコール ６．０ｇ
酵母抽出液 ０．１ｇ
シソ抽出液 ０．１ｇ
シナノキ抽出液 ０．１ｇ
ジユ抽出液 ０．１ｇ
パラオキシ安息香酸メチル １．５ｇ
香料 ０．１ｇ
精製水 残部（全量を１００ｇとする）
【０１６２】
〔配合例４〕
下記組成の養毛ヘアトニックを常法により製造した。
東紫蘇抽出物（製造例１） ０．２ｇ
塩酸ピリドキシン ０．１ｇ
レゾルシン ０．０１ｇ
Ｄ−パントテニルアルコール ０．１ｇ
グリチルリチン酸ジカリウム ０．１ｇ
Ｌ−メントール ０．０５ｇ
１，３−ブチレングリコール ４．０ｇ
ニンジンエキス ０．５ｇ
エタノール ２５．０ｇ
香料 ０．０１ｇ
精製水 残部（全量を１００ｇとする）
【０１６３】
〔配合例５〕
下記組成のシャンプー（クリームシャンプー）を常法により製造した。
東紫蘇抽出物（製造例１） ０．２ｇ
ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸ナトリウム ３０．０ｇ
ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸アンモニウム ２０．０ｇ
ヤシ油脂肪酸アミドプロピルベタイン ６．０ｇ
ヤシ油脂肪酸モジエタノールアミド ４．０ｇ
ジステアリン酸エチレングリコール ２．０ｇ
防腐剤（パラオキシ安息香酸メチル） ０．１５ｇ
ムクロジエキス ０．２ｇ
黄杞エキス ０．５ｇ
オウバクエキス ０．３ｇ
ローズマリーエキス ０．５ｇ
１，３−ブチレングリコール ３．０ｇ
香料 ０．０１ｇ
精製水 残部（全量を１００ｇとする）
【０１６４】
〔配合例６〕
下記組成のリンスを常法により製造した。
東紫蘇抽出物（製造例１） ０．２ｇ
塩化ステアリルトリメチルアンモニウム １．５ｇ
ポリオキシエチレンセチルエーテル １．０ｇ
セチルアルコール ２．０ｇ
オクチルドデカノール １．０ｇ
カチオン化セルロース ０．５ｇ
プロピレングリコール ５．０ｇ
ムクロジエキス ０．２ｇ
黄杞エキス ０．５ｇ
オウバクエキス ０．３ｇ
ローズマリーエキス ０．５ｇ
香料 ３．０ｇ
精製水 残部（全量を１００ｇとする）
【０１６５】
〔配合例７〕
下記の混合物を打錠して、錠剤状の栄養補助食品を製造した。
東紫蘇抽出物（製造例１） ５０質量部
粉糖（ショ糖） １８８質量部
グリセリン脂肪酸エステル １２質量部
【０１６６】
〔配合例８〕
下記の混合物を顆粒状にして、栄養補助食品を製造した。
東紫蘇抽出物（製造例１） ５０質量部
ビートオリゴ糖 １０００質量部
ビタミンＣ １６７質量部
ステビア抽出物 １０質量部
【産業上の利用可能性】
【０１６７】
本発明の抗酸化剤は、活性酸素種に起因する各種障害の予防・改善に、本発明の抗炎症剤は、各種炎症性疾患の予防・改善に、本発明の抗老化剤は、皮膚の老化の予防・改善に、本発明の育毛剤又は抗男性ホルモン剤は、男性型脱毛症、多毛症、脂漏症、座瘡（ニキビなど）、前立腺肥大症、前立腺腫瘍、男児性早熟等の予防・改善、本発明の抗肥満剤又はサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害剤は、肥満症の予防・改善に大きく貢献することができる。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、育毛剤、抗男性ホルモン剤、抗肥満剤及びサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害剤、並びに皮膚化粧料、頭髪化粧料及び飲食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、特に生体成分を酸化させる要因として、活性酸素が注目されており、その生体への悪影響が問題となっている。活性酸素は、生体細胞内のエネルギー代謝過程で生じるものであり、活性酸素としては、スーパーオキサイド（すなわち酸素分子の一電子還元で生じるスーパーオキシドアニオン：・Ｏ２−）、過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）、ヒドロキシラジカル（・ＯＨ）及び一重項酸素（１Ｏ２）等が挙げられる。これらの活性酸素は、食細胞の殺菌機構にとって必須であり、ウィルスや癌細胞の除去に重要な働きを果たしている。
【０００３】
しかしながら、活性酸素の過剰な生成は、生体内の膜や組織を構成する生体内分子を攻撃し、各種疾患を誘発する。通常、生体内で生産され、他の活性酸素の出発物質ともなっているスーパーオキサイドは、細胞内に含まれているスーパーオキサイドジスムターゼ（ＳＯＤ）の触媒作用により逐次消去されているが、スーパーオキサイドの産生が過剰である場合、又はＳＯＤの作用が低下している場合には、スーパーオキサイドの消去が不十分となり、スーパーオキサイド濃度が高くなり、これが関節リウマチやベーチェット病等の組織障害、心筋梗塞、脳卒中、白内障、しわ、糖尿病、動脈硬化、肩凝り、冷え性等を引き起こす。
【０００４】
特に、皮膚は、紫外線等の環境因子の刺激を直接受けることから、スーパーオキサイドが生成しやすい器官であるため、スーパーオキサイド濃度の上昇により、例えば、コラーゲン等の生体組織を分解し、変性し又は架橋したり、油脂類を酸化して細胞に障害を与える過酸化脂質を生成したりすると考えられており、活性酸素によって引き起こされる障害が、皮膚のしわ形成や皮膚の弾力低下等の老化の原因になるものと考えられている（非特許文献１参照）。したがって、活性酸素や生体内ラジカルの生成を阻害・抑制することにより、しわ形成や弾力低下等の皮膚の老化や、関節リウマチやベーチェット病等の組織障害、心筋梗塞、脳卒中、白内障、糖尿病、動脈硬化、肩凝り、冷え性等の活性酸素が関与する各種障害を予防、治療又は改善できるものと考えられる。
【０００５】
そこで、活性酸素消去物質、ラジカル消去物質を安全性の点で有利な天然物から得る試みがなされており、このような作用を有するものとして、アブラナ科ブラシカ属植物からの抽出物（特許文献１参照）、ベンケイソウ科リュウキュウベンケイ属植物からの抽出物（特許文献２参照）、タマコチョウからの抽出物（特許文献３参照）、スイオウからの抽出物（特許文献４参照）等が知られている。
【０００６】
一酸化窒素（ＮＯ）は、大気汚染、酸性雨等の要因となる窒素酸化物であるが、近年、この一酸化窒素が、血管内皮由来弛緩因子（ＥＤＲＦ）、神経伝達物質、生体防御における微生物・腫瘍細胞の障害因子等、生体内で多彩な機能を示す生理活性物質であることが見出されている。生体防御においては、特にマクロファージから産生される一酸化窒素が、細菌やウィルスの感染を防御している。
【０００７】
しかし、一酸化窒素が大量に生合成されると、生体にとって無毒ではなく、自己組織の破壊を引き起こし、炎症の悪化、リューマチ、糖尿病等の病態の原因となっている。また、大量に生合成された一酸化窒素が血管平滑筋の弛緩と過剰な透過性の増大をもたらし、著しい血圧の低下によってエンドトキシン・ショックを引き起こすことも知られている。
【０００８】
したがって、炎症性疾患においては、一酸化窒素の過剰な産生を抑制することが重要となる。一酸化窒素の産生抑制作用を有するものとして、例えば、ローズマリー抽出液、カルノソール、カルノシン酸、コーヒー豆の抽出液、サクラダソウ抽出液、オウレン抽出液、オウバク抽出液、カンゾウ抽出液、イヌノイバラ抽出液、センキュウ抽出液、トウニン抽出液、シャクヤク抽出液、ヨクイニン抽出液、アカブドウ抽出液（特許文献５参照）；唐独活、タラ根皮、和続断、車前子、遠子、茜草根、半枝連、槐花、花椒（非特許文献２参照）等が知られている。
【０００９】
炎症性の疾患、例えば、接触性皮膚炎（かぶれ）、乾癬、尋常性天疱瘡、その他肌荒れを伴う各種皮膚疾患等の原因や発症機構は多種多様であるが、その原因の一つとして、ヒアルロニダーゼの活性化、ヒスタミン遊離、血小板凝集等が知られている。ヒアルロニダーゼの活性化によって、マストセルからのヒスタミンの脱顆粒が促進され、その結果炎症が引き起こされる。したがって、ヒアルロニダーゼの活性化を阻害することにより、炎症性疾患の予防、治療又は改善が期待できる。ヒアルロニダーゼ阻害活性を有する植物抽出物としては、イロハモミジからの抽出物（特許文献６参照）等が知られている。
【００１０】
また、ヒスタミンが遊離されると同時に、ヘキソサミニダーゼも遊離されることから、ヘキソサミニダーゼの遊離を指標にヒスタミン遊離抑制作用を評価することができる。したがって、ヘキソサミニダーゼの遊離を抑制することにより、同時にヒスタミンの遊離も抑制でき、これにより炎症性疾患等の予防、治療又は改善に効果があるものと考えられる。ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用を有する植物抽出物としては、藤茶からの抽出物（特許文献７参照）等が知られている。
【００１１】
血小板は、凝集して活性化することにより、生理的には止血、病理的には血栓形成を生じる他、血小板の凝集は、動脈硬化の進展、がん転移、炎症等に関与していると考えられている。したがって、血小板の凝集を抑制することにより、上記疾患の予防、治療又は改善が期待できる。血小板凝集抑制作用を有する植物抽出物としては、地衣類雪茶からの抽出物（特許文献８参照）等が知られている。
【００１２】
皮膚の真皮・表皮は、表皮細胞、線維芽細胞及びこれらの細胞の外にあって皮膚構造を支持するエラスチン、コラーゲン等の真皮細胞外マトリックスによって構成されており、若い皮膚においてはこれらの皮膚組織が恒常性を維持することにより水分保持、柔軟性、弾力性等が確保され、肌は外見的にも張りや艶があってみずみずしい状態に維持される。ところが、紫外線の照射、空気の著しい乾燥、過度の皮膚洗浄等、ある種の外的因子の影響があったり、加齢が進んだりすることによって、真皮細胞外マトリックスの主要構成成分であるエラスチン、コラーゲン等の産生量が減少するとともに、変性や分解を引き起こす。その結果、角質は異常剥離を始め、肌は張りや艶を失い、肌荒れやシワ等の老化症状を呈するようになる。このように、皮膚の老化に伴う変化、すなわち、シワの形成、張りの消失、弾力性の低下等には、エラスチン、コラーゲン等の真皮細胞外マトリックス成分の減少、変性が関与している。
【００１３】
エラスチンは、皮膚組織に弾力性を与える線維であり、加齢等に伴ってエラスチンが分解されると皮膚の張りが失われるとともに、弾力性が低下する。エラスチンを分解する酵素であるエラスターゼは、紫外線の照射により活性化され、これによりエラスチンの分解が加速し、皮膚の張りが失われるとともに、弾力性が低下する。そのため、エラスターゼの活性を阻害することによりエラスチンの分解が抑制され、張りの消失、弾力性の低下等の皮膚の老化症状を予防・改善できると考えられる。従来、エラスターゼ阻害作用を有する生薬として、スターフルーツ果実抽出物が知られている（特許文献９参照）。
【００１４】
近年、皮膚の老化に伴う変化を誘導する因子として、マトリックス系プロテアーゼの関与が指摘されている。マトリックス系プロテアーゼの中でも、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）は、皮膚の真皮細胞外マトリックスの主要構成成分であるコラーゲンを分解する酵素として知られているが、その発現は紫外線の照射により大きく増加し、コラーゲンの減少・変性の一因となり、皮膚のシワの形成、弾力性の低下等の大きな要因となると考えられている。したがって、ＭＭＰ−１活性を阻害することは、皮膚の老化症状を予防・改善する上で重要である。従来、ＭＭＰ−１阻害作用を有する生薬として、マツ科マツ属二葉松類の樹皮の抽出物が知られている（特許文献１０参照）。
【００１５】
皮膚の表皮及び真皮は、表皮細胞、線維芽細胞、及びこれらの細胞の外にあって皮膚構造を支持するコラーゲン等の細胞外マトリックスにより構成されている。若い皮膚においては線維芽細胞の増殖は活発であり、線維芽細胞、コラーゲン等の皮膚組織の相互作用により皮膚に水分が保持されるとともに、皮膚の柔軟性、弾力性等が確保され、皮膚は外見的にも張りや艶があってみずみずしい状態に維持される。
【００１６】
ところが、紫外線、空気の著しい乾燥、過度の皮膚洗浄等、ある種の外的因子の影響があったり、加齢が進んだりすると線維芽細胞の増殖が遅くなり皮膚の保湿機能や弾力性が低下する。そして、皮膚は張りや艶を失い、荒れ、シワ等の老化症状を呈するようになる。そのため、線維芽細胞の増殖を促進することにより皮膚の老化を予防又は改善することができると考えられる。このような考えに基づき、線維芽細胞増殖促進作用を有するものとして、クスノハガシワ抽出物（特許文献１１参照）等が提案されている。
【００１７】
多くのステロイドホルモンは産生臓器から分泌された分子型で受容体と結合してその作用を発現するが、アンドロゲンと総称される男性ホルモンの場合、例えば、テストステロンは標的臓器の細胞内に入ってテストステロン５α−レダクターゼにより５α−ジヒドロテストステロン（５α−ＤＨＴ）に還元されてから受容体と結合し、アンドロゲンとしての作用を発現する。
【００１８】
アンドロゲンは重要なホルモンであるが、それが過度に作用すると、男性型脱毛症、多毛症、脂漏症、座瘡（ニキビなど）、前立腺肥大症、前立腺腫瘍、男児性早熟等、さまざまな好ましくない症状を誘発する。そこで、従来から、これらの各種症状を改善するために過剰のアンドロゲンの作用を抑制する方法、具体的には、テストステロンを活性型５α−ＤＨＴに還元するテストステロン５α−レダクターゼの作用を阻害することにより、活性な５α−ＤＨＴが生じるのを抑制する方法や、テストステロンから生じた５α−ＤＨＴが受容体と結合するのを阻害することによりアンドロゲン活性を発現させない方法などが知られている。
【００１９】
テストステロン５α−レダクターゼ阻害作用を有するものとしては、例えば、コエロスポンディアス（Choerospondias）属に属する植物からの抽出物（特許文献１２参照）、マジト及び／又はカチュアからの抽出物（特許文献１３参照）、五斂子からの抽出物（特許文献１４参照）、紅豆杉、鳥欖、幌傘楓及び穿心蓮からなる群より選ばれた１種又は２種以上の植物からの抽出物（特許文献１５参照）等が知られている。
【００２０】
また、アンドロゲン受容体結合阻害作用を有するものとしては、例えば、黄皮の葉の抽出物（特許文献１６参照）、マジト及び／又はカチュアの抽出物（特許文献１３参照）、五斂子からの抽出物（特許文献１４参照）、藤茶の枝葉からの抽出物（特許文献１７参照）等が知られている。
【００２１】
近年、飽食や運動不足等の生活習慣が原因となって体脂肪が増加し、肥満が増えている。このような肥満の増加は、人間ばかりでなく、ペットや家畜においても見られる。肥満は、高脂血症や動脈硬化等の成人病の原因になるため、美容の面で問題となるばかりでなく、健康の面でも大きな問題となる。
【００２２】
生体内の脂肪を分解するためには、サイクリックＡＭＰの役割が重要となる。サイクリックＡＭＰは生体内に存在するリパーゼを活性化し、活性化されたリパーゼによって脂肪が脂肪酸とグリセロールとに分解される。しかし、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼが活性化されるとサイクリックＡＭＰの分解が誘発され、リパーゼの活性化が阻害される。そのため、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼの活性を阻害することにより細胞内におけるサイクリックＡＭＰが増量し、脂肪の分解を促進することができるものと考えられる。このようなサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害作用を有するものとして、ピーナッツ渋皮抽出物（特許文献１８参照）等が知られている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２３】
【特許文献１】特開２００３−８１８４８号公報
【特許文献２】特開２００５−２９４８３号公報
【特許文献３】特開２００６−３２１７３０号公報
【特許文献４】特開２００７−８９０２号公報
【特許文献５】特開２００２−８７９７５号公報
【特許文献６】特開２００３−１１３０６８号公報
【特許文献７】特開２００３−１２５３２号公報
【特許文献８】特開２００５−８２５３２号公報
【特許文献９】特開２００３−３００８９３号公報
【特許文献１０】特開２００３−２７７２２３号公報
【特許文献１１】特開２００３−１４６８３７号公報
【特許文献１２】特開２００３−５５１６２号公報
【特許文献１３】特開２００２−２４１２９７号公報
【特許文献１４】特開２００２−２４１２９６号公報
【特許文献１５】特開２００２−８７９７６号公報
【特許文献１６】特開２００１−２２６２７８号公報
【特許文献１７】特開２００２−３０８７９０号公報
【特許文献１８】特開２００４−２６７１９号公報
【非特許文献】
【００２４】
【非特許文献１】「フレグランスジャーナル臨時増刊」，1995年，No.14，p.156
【非特許文献２】「和漢医薬学雑誌」，1998年，Vol.15，p.302-303
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２５】
本発明は、安全性の高い天然抽出物及び／又は天然抽出物由来成分を有効成分とする抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、育毛剤、抗男性ホルモン剤、抗肥満剤及びサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害剤、並びに当該天然抽出物及び／又は当該天然抽出物由来成分を配合した皮膚化粧料、頭髪化粧料及び飲食品を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００２６】
上記目的を達成するために、本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、育毛剤、抗男性ホルモン剤、抗肥満剤又はサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害剤は、東紫蘇からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする。
また、本発明の皮膚化粧料、頭髪化粧料又は飲食品は、東紫蘇からの抽出物を配合したことを特徴とする。
【００２７】
本発明の抗酸化剤においては、前記東紫蘇からの抽出物が、活性酸素消去作用及び／又はラジカル消去作用を有するのが好ましく、本発明の抗炎症剤においては、前記東紫蘇からの抽出物が、一酸化窒素産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用及び血小板凝集抑制作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用を有するのが好ましく、本発明の抗老化剤においては、前記東紫蘇からの抽出物が、エラスターゼ活性阻害作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害作用及び皮膚線維芽細胞増殖促進作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用を有するのが好ましく、本発明の育毛剤又は抗男性ホルモン剤においては、前記東紫蘇からの抽出物が、テストステロン５α−レダクターゼ活性阻害作用及び／又はアンドロゲン受容体結合阻害作用を有するのが好ましい。
【００２８】
ここで、本発明において「アンドロゲン受容体結合阻害」とは、５α−ＤＨＴとアンドロゲン受容体との結合の阻害を意味し、その阻害様式は特に限定されるものではなく、例えば、競合的拮抗薬、非競合的拮抗薬といったアンタゴニストとしての阻害が考えられる。
【発明の効果】
【００２９】
本発明によれば、天然物である東紫蘇からの抽出物及び／又は当該抽出物由来成分を有効成分として含有し、安全性の高い抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、育毛剤、抗男性ホルモン剤、抗肥満剤、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害剤、皮膚化粧料、頭髪化粧料及び飲食品を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【００３０】
以下、本発明について説明する。
〔抗酸化剤，抗炎症剤，抗老化剤，育毛剤，抗男性ホルモン剤，抗肥満剤，サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害剤〕
本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、育毛剤、抗男性ホルモン剤、抗肥満剤又はサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害剤は、東紫蘇からの抽出物を有効成分として含有する。
【００３１】
ここで、本発明において「抽出物」には、東紫蘇（学名：Elsholtzia bodinieri）を抽出原料として得られる抽出液、当該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、当該抽出液を乾燥して得られる乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物のいずれもが含まれる。
【００３２】
東紫蘇（Elsholtzia bodinieri）は、シソ科に属する植物であって、中国西南地方、華南地方等に広く分布しており、これらの地域から容易に入手することができる。抽出原料として使用する東紫蘇の構成部位は特に限定されるものではなく、例えば、花部、葉部、枝部、全草、根部等が挙げられ、これらのうち、特に全草を使用するのが好ましい。東紫蘇の全草は、鳳尾茶（ホウビチャ，別名：野山茶・小山茶・雲松茶・小香茶・小松毛茶・銹山茶・牙刷草）と称される生薬として知られており、従来、頭痛、咽頭痛、肝炎、目痛、消化不良等の治療に用いられている。
【００３３】
東紫蘇からの抽出物は、抽出原料を乾燥した後、そのまま又は粗砕機を用いて粉砕し、抽出溶媒による抽出に供することにより得ることができる。この際、抽出原料の乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機により行ってもよい。また、ヘキサン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、抽出原料の極性溶媒による抽出処理を効率よく行うことができる。
【００３４】
抽出溶媒としては、極性溶媒を使用するのが好ましく、例えば、水、親水性有機溶媒等が挙げられ、これらを単独で又は２種以上を組み合わせて、室温又は溶媒の沸点以下の温度で使用することが好ましい。
【００３５】
抽出溶媒として使用し得る水としては、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等のほか、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、濾過、イオン交換、浸透圧調整、緩衝化等が含まれる。したがって、本発明において抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
【００３６】
抽出溶媒として使用し得る親水性有機溶媒としては、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級脂肪族アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコール等が挙げられる。
【００３７】
２種以上の極性溶媒の混合液を抽出溶媒として使用する場合、その混合比は適宜調整することができる。例えば、水と低級脂肪族アルコールとの混合液を使用する場合には、水１０容量部に対して低級脂肪族アルコール１〜９０容量部を混合することが好ましく、水と低級脂肪族ケトンとの混合液を使用する場合には、水１０容量部に対して低級脂肪族ケトン１〜４０容量部を混合することが好ましく、水と多価アルコールとの混合液を使用する場合には、水１０容量部に対して多価アルコール１０〜９０容量部を混合することが好ましい。
【００３８】
抽出処理は、抽出原料に含まれる可溶性成分を抽出溶媒に溶出させ得る限り特に限定はされず、常法に従って行うことができる。例えば、抽出原料の５〜１５倍量（質量比）の抽出溶媒に、抽出原料を浸漬し、常温又は還流加熱下で可溶性成分を抽出させた後、濾過して抽出残渣を除去することにより抽出液を得ることができる。得られた抽出液は、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物を得るために、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。
【００３９】
精製は、例えば、活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等により行うことができる。得られた抽出液はそのままでも抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、育毛剤、抗男性ホルモン剤、抗肥満剤又はサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害剤の有効成分として使用することができるが、濃縮液又は乾燥物としたものの方が使用しやすい。
【００４０】
東紫蘇からの抽出物は、特有の匂いを有しているため、その生理活性の低下を招かない範囲で脱色、脱臭等を目的とする精製を行うことも可能であるが、皮膚化粧料、頭髪化粧料又は飲食品に配合する場合には大量に使用するものではないから、未精製のままでも実用上支障はない。
【００４１】
上記のようにして得られる東紫蘇からの抽出物は、抗酸化作用、抗炎症作用、抗老化作用、育毛作用、抗男性ホルモン作用、抗肥満作用又はサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害作用を有しているため、それぞれの作用を利用して抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、育毛剤、抗男性ホルモン剤、抗肥満剤又はサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤の有効成分として用いることができる。
【００４２】
東紫蘇からの抽出物が有する抗酸化作用は、例えば、活性酸素消去作用及び／又はラジカル消去作用に基づいて発揮される。ただし、東紫蘇からの抽出物が有する抗酸化作用は、これらの作用に基づいて発揮される抗酸化作用に限定されるものではない。
【００４３】
東紫蘇からの抽出物が有する抗炎症作用は、例えば、一酸化窒素産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用及び血小板凝集抑制作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用に基づいて発揮される。ただし、東紫蘇抽出物が有する抗炎症作用は、これらの作用に基づいて発揮される抗炎症作用に限定されるものではない。
【００４４】
東紫蘇からの抽出物が有する抗老化作用は、例えば、エラスターゼ活性阻害作用、ＭＭＰ−１活性阻害作用及び線維芽細胞増殖促進作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用に基づいて発揮される。ただし、東紫蘇抽出物が有する抗老化作用は、これらの作用に基づいて発揮される抗老化作用に限定されるものではない。
【００４５】
東紫蘇からの抽出物が有する育毛作用又は抗男性ホルモン作用は、例えば、テストステロン５α−レダクターゼ阻害作用及び／又はアンドロゲン受容体結合阻害作用に基づいて発揮される。ただし、東紫蘇からの抽出物が有する育毛作用又は抗男性ホルモン作用は、これらの作用に基づいて発揮される育毛作用又は抗男性ホルモン作用に限定されるものではない。
【００４６】
なお、東紫蘇からの抽出物は、活性酸素消去作用、ラジカル消去作用、一酸化窒素産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、エラスターゼ活性阻害作用、ＭＭＰ−１活性阻害作用、線維芽細胞増殖促進作用、テストステロン５α−レダクターゼ阻害作用又はアンドロゲン受容体結合阻害作用を有するため、それらの作用を利用して、活性酸素消去剤、ラジカル消去剤、一酸化窒素産生抑制剤、ヒアルロニダーゼ活性阻害剤、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制剤、エラスターゼ活性阻害剤、ＭＭＰ−１活性阻害剤、線維芽細胞増殖促進剤、テストステロン５α−レダクターゼ阻害剤又はアンドロゲン受容体結合阻害剤の有効成分として使用してもよい。
【００４７】
本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、育毛剤、抗男性ホルモン剤、抗肥満剤又はサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤は、東紫蘇からの抽出物のみからなるものであってもよいし、東紫蘇からの抽出物を製剤化したものであってもよい。
【００４８】
東紫蘇からの抽出物は、デキストリン、シクロデキストリン等の薬学的に許容し得るキャリアーその他任意の助剤を用いて、常法に従い、粉末状、顆粒状、錠剤状、液状等の任意の剤形に製剤化することができる。この際、助剤としては、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯臭剤等を用いることができる。また、東紫蘇からの抽出物は、他の組成物（例えば、皮膚化粧料、頭髪化粧料、飲食品等）に配合して使用することができる。
【００４９】
なお、本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、育毛剤、抗男性ホルモン剤、抗肥満剤又はサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害剤は、必要に応じて、抗酸化作用、抗炎症作用、抗老化作用、育毛作用、抗男性ホルモン作用、抗肥満作用又はサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害作用を有する他の天然抽出物等を配合して有効成分として用いることができる。
【００５０】
本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、育毛剤、抗男性ホルモン剤、抗肥満剤又はサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害剤の投与方法としては、一般に経皮投与、経口投与等が挙げられるが、疾患の種類に応じて、その予防・治療等に好適な方法を適宜選択すればよい。
【００５１】
また、本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、育毛剤、抗男性ホルモン剤、抗肥満剤又はサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害剤の投与量も、疾患の種類、重症度、患者の個人差、投与方法、投与期間等によって適宜増減すればよい。
【００５２】
本発明の抗酸化剤は、東紫蘇からの抽出物が有する活性酸素消去作用及び／又はラジカル消去作用を通じて、しわ形成や弾力低下等の皮膚の老化や、関節リウマチやベーチェット病等の組織障害、心筋梗塞、脳卒中、白内障、糖尿病、動脈硬化、肩凝り、冷え性等の活性酸素が関与する各種障害を予防・改善することができる。ただし、本発明の抗酸化剤は、これらの用途以外にも活性酸素消去作用及び／又はラジカル消去作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００５３】
本発明の抗炎症剤は、東紫蘇からの抽出物が有する一酸化窒素産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用及び血小板凝集抑制作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用を通じて、接触性皮膚炎（かぶれ）、乾癬、尋常性天疱瘡、その他肌荒れを伴う各種炎症性皮膚疾患等を予防・改善することができる。ただし、本発明の抗炎症剤は、これらの用途以外にも一酸化窒素産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用及び血小板凝集抑制作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００５４】
本発明の抗老化剤は、東紫蘇からの抽出物が有するエラスターゼ活性阻害作用、ＭＭＰ−１活性阻害作用及び線維芽細胞増殖促進作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用を通じて、皮膚の老化症状等を予防・改善することができる。ただし、本発明の抗老化剤は、これらの用途以外にもエラスターゼ活性阻害作用、ＭＭＰ−１活性阻害作用及び線維芽細胞増殖促進作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００５５】
本発明の育毛剤は、東紫蘇からの抽出物が有するテストステロン５α−レダクターゼ活性阻害作用及び／又はアンドロゲン受容体結合阻害作用を通じて、男性型脱毛症、多毛症、脂漏症、座瘡（ニキビなど）、前立腺肥大症、前立腺腫瘍、男児性早熟等を予防、治療又は改善することができ、特に男性型脱毛症の予防、治療又は改善に好適である。ただし、本発明の育毛剤は、これらの用途以外にもテストステロン５α−レダクターゼ活性阻害作用及び／又はアンドロゲン受容体結合阻害作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００５６】
本発明の抗男性ホルモン剤は、東紫蘇からの抽出物が有するテストステロン５α−レダクターゼ活性阻害作用及び／又はアンドロゲン受容体結合阻害作用を通じて、男性ホルモンが関与する疾患、例えば、男性型脱毛症、多毛症、脂漏症、座瘡（ニキビなど）、前立腺肥大症、前立腺腫瘍、男児性早熟等を予防、治療又は改善することができる。ただし、本発明の抗男性ホルモン剤は、これらの用途以外にもテストステロン５α−レダクターゼ活性阻害作用及び／又はアンドロゲン受容体結合阻害作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００５７】
本発明の抗肥満剤は、東紫蘇からの抽出物が有するサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害作用を通じて、サイクリックＡＭＰの産生を促進し、脂肪細胞の分解をすることができ、この結果、肥満症、それに伴う動脈硬化、糖尿病、メタボリック症候群等の様々な疾病を予防・改善することができる。ただし、本発明の抗肥満剤は、これらの用途以外にもサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００５８】
本発明のサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤は、東紫蘇からの抽出物が有するサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害作用を通じて、サイクリックＡＭＰの産生を促進し、脂肪細胞の分解を促進することができ、この結果、肥満症、それに伴う動脈硬化、糖尿病、メタボリック症候群等の様々な疾病を予防・改善することができる。ただし、本発明のサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤は、これらの用途以外にもサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００５９】
〔皮膚化粧料，頭髪化粧料〕
東紫蘇からの抽出物は、抗酸化作用、抗炎症作用、抗老化作用、育毛作用、抗男性ホルモン作用、抗肥満作用又はサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害作用を有しており、皮膚又は頭髪（頭皮）に適用した場合の使用感又は安全性に優れているため、皮膚化粧料又は頭髪化粧料に配合するのに好適である。
【００６０】
この場合において、皮膚化粧料又は頭髪化粧料には、東紫蘇からの抽出物をそのまま配合してもよいし、東紫蘇からの抽出物から製剤化した抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、育毛剤、抗男性ホルモン剤、抗肥満剤又はサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害剤を配合してもよい。
【００６１】
東紫蘇からの抽出物、又は東紫蘇からの抽出物から製剤化した抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、育毛剤、抗男性ホルモン剤、抗肥満剤若しくはサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害剤を配合することにより、皮膚化粧料又は頭髪化粧料に抗酸化作用、抗炎症作用、抗老化作用、育毛作用、抗男性ホルモン作用、抗肥満作用又はサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害作用を付与することができる。
【００６２】
東紫蘇からの抽出物を配合し得る皮膚化粧料又は頭髪化粧料の種類は特に限定されるものではなく、皮膚化粧料としては、例えば、軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、ファンデーション等が挙げられ、また、頭髪化粧料としては、例えば、ヘアトニック、ヘアクリーム、ヘアリキッド、シャンプー、ポマード、リンス等が挙げられる。
【００６３】
東紫蘇からの抽出物を皮膚化粧料又は頭髪化粧料に配合する場合、その配合量は、皮膚化粧料又は頭髪化粧料の種類に応じて適宜調整することができるが、好適な配合率は、標準的な抽出物に換算して約０．０００１〜１０質量％であり、特に好適な配合率は、標準的な抽出物に換算して約０．００１〜１質量％である。
【００６４】
本発明の皮膚化粧料又は頭髪化粧料は、東紫蘇からの抽出物が有する抗酸化作用、抗炎症作用、抗老化作用、育毛作用、抗男性ホルモン作用、抗肥満作用又はサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害作用を妨げない限り、通常の皮膚化粧料又は頭髪化粧料の製造に用いられる主剤、助剤又はその他の成分、例えば、収斂剤、殺菌・抗菌剤、紫外線吸収剤、保湿剤、細胞賦活剤、消炎・抗アレルギー剤、抗酸化・活性酸素除去剤、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、香料等を併用することができる。このように併用することで、より一般性のある製品となり、また、併用された上記成分との間の相乗作用が通常期待される以上の優れた使用効果をもたらすことがある。
【００６５】
本発明の皮膚化粧料は、高い安全性を有しており、かつ抗酸化作用、抗炎症作用、抗老化作用、抗男性ホルモン作用、抗肥満作用及びサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用を通じて、しわ形成や弾力低下等の皮膚の老化や、関節リウマチやベーチェット病等の組織障害、心筋梗塞、脳卒中、白内障、糖尿病、動脈硬化、肩凝り、冷え性等の活性酸素が関与する各種障害；接触性皮膚炎（かぶれ）、乾癬、尋常性天疱瘡、その他肌荒れを伴う各種炎症性皮膚疾患；皮膚の老化症状；脂漏症、座瘡（ニキビ等）、皮膚の老化症状、脂漏症、座瘡（ニキビなど）、前立腺肥大症、前立腺腫瘍、男児性早熟；肥満症、肥満症に伴う動脈硬化、糖尿病、メタボリック症候群等を予防、治療又は改善することができる。また、本発明の頭髪化粧料は、高い安全性を有しており、かつ育毛作用及び／又は抗男性ホルモン作用を通じて、男性型脱毛症等を予防、治療又は改善することができる。
【００６６】
〔飲食品〕
東紫蘇からの抽出物は、抗酸化作用、抗炎症作用、抗老化作用、育毛作用、抗男性ホルモン作用、抗肥満作用又はサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害作用を有しており、消化管で消化されるようなものではないことが確認されており、安全性にも優れているため、飲食品に配合するのに好適である。
【００６７】
この場合に、東紫蘇からの抽出物をそのまま飲食品に配合してもよいし、東紫蘇からの抽出物から製剤化した抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、育毛剤、抗男性ホルモン剤、抗肥満剤若しくはサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害剤を飲食品に配合してもよい。
【００６８】
東紫蘇からの抽出物又はそれらから製剤化した抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、育毛剤、抗男性ホルモン剤、抗肥満剤若しくはサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害剤を飲食品に配合する場合、それらにおける有効成分の配合量は、使用目的、症状、性別等を考慮して適宜変更することができるが、添加対象飲食品の一般的な摂取量を考慮して、成人１日あたりの抽出物摂取量が約１〜１０００ｍｇになるようにするのが好ましい。
【００６９】
本発明の飲食品は、東紫蘇からの抽出物をその活性を妨げないような任意の飲食品に配合したものであってもよいし、東紫蘇からの抽出物を主成分とする栄養補助食品であってもよい。
【００７０】
本発明の飲食品を製造する際には、例えば、デキストリン、デンプン等の糖類；ゼラチン、大豆タンパク、トウモロコシタンパク等のタンパク質；アラニン、グルタミン、イソロイシン等のアミノ酸類；セルロース、アラビアゴム等の多糖類；大豆油、中鎖脂肪酸トリグリセリド等の油脂類などの任意の助剤を添加して任意の形状の飲食品にすることができる。
【００７１】
東紫蘇からの抽出物を配合し得る飲食品は特に限定されないが、その具体例としては、清涼飲料、炭酸飲料、栄養飲料、果実飲料、乳酸飲料等の飲料（これらの飲料の濃縮原液及び調整用粉末を含む）；アイスクリーム、アイスシャーベット、かき氷等の冷菓；そば、うどん、はるさめ、ぎょうざの皮、しゅうまいの皮、中華麺、即席麺等の麺類；飴、チューインガム、キャンディー、ガム、チョコレート、錠菓、スナック菓子、ビスケット、ゼリー、ジャム、クリーム、焼き菓子等の菓子類；かまぼこ、ハム、ソーセージ等の水産・畜産加工食品；加工乳、発酵乳等の乳製品；サラダ油、てんぷら油、マーガリン、マヨネーズ、ショートニング、ホイップクリーム、ドレッシング等の油脂及び油脂加工食品；ソース、たれ等の調味料；スープ、シチュー、サラダ、惣菜、漬物；その他種々の形態の健康・栄養補助食品；錠剤、カプセル剤、ドリンク剤などが挙げられ、これらの飲食品に東紫蘇からの抽出物を配合するときに、通常用いられる補助的な原料や添加物を併用することができる。
【００７２】
なお、本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、育毛剤、抗男性ホルモン剤、抗肥満剤、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害剤、皮膚化粧料、頭髪化粧料又は飲食品は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。
【実施例】
【００７３】
以下、製造例、試験例及び配合例を示し、本発明を具体的に説明するが、本発明は下記の各例に何ら制限されるものではない。
【００７４】
〔製造例１〕東紫蘇抽出物の製造
細切りにした東紫蘇の全草の乾燥物４２．７ｇに５０容量％エタノール（水とエタノールとの容量比＝１：１）４００ｍＬを加え、還流抽出器で８０℃にて２時間加熱抽出し、熱時濾過した。残渣についてさらに同様の抽出処理をした。得られた抽出液を合わせて減圧下で濃縮し、さらに乾燥して東紫蘇抽出物１２．６ｇを得た（試料１）。
【００７５】
〔試験例１〕スーパーオキサイド消去作用試験（ＮＢＴ法）
製造例１により得られた東紫蘇抽出物（試料１）について、以下のようにしてスーパーオキサイド消去作用を試験した。
【００７６】
試験管に、０．０５ＭのＮａ２ＣＯ３緩衝液（ｐＨ１０．２）を２．４ｍＬ、並びに３ｍＭのキサンチン、３ｍＭのＥＤＴＡ、ウシ血清アルブミン溶液及び０．７５ｍＭのＮＢＴ（nitroblue tetrazolium）を０．１ｍＬずつ加え、これに試料溶液（試料１，試料濃度は下記表１を参照）０．１ｍＬを添加し、２５℃で１０分間放置した。放置後、酵素溶液としてのキサンチンオキシダーゼ溶液を加えて素早く攪拌し、２５℃で２０分間静置した。その後、６ｍＭの塩化銅０．１ｍＬを加えて反応を停止させて、波長５６０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【００７７】
酵素溶液を添加しない場合についても、同様の操作と吸光度の測定を行い、さらに、試料溶液を添加せずに蒸留水を添加した場合についても同様の測定を行った。得られた結果から、下記式によりスーパーオキサイド消去率（％）を算出するとともに、スーパーオキサイド消去率が５０％になる試料濃度ＩＣ５０（μｇ／ｍＬ）を算出した。
【００７８】
スーパーオキサイド消去率(％)＝{１−(Ａ−Ｂ)／(Ｃ−Ｄ)}×１００
式中、Ａは「酵素溶液添加・試料溶液添加時の吸光度」を表し、Ｂは「酵素溶液無添加・試料溶液添加時の吸光度」を表し、Ｃは「酵素溶液添加・試料溶液無添加時の吸光度」を表し、Ｄは「酵素溶液無添加・試料溶液無添加時の吸光度」を表す。
結果を表１に示す。
【００７９】
【表１】
【００８０】
表１に示すように、東紫蘇抽出物（試料１）は優れた活性酸素消去作用を有することが確認された。また、活性酸素消去作用の程度は、東紫蘇抽出物の濃度によって調節できることが確認された。
【００８１】
〔試験例２〕ラジカル消去作用試験
製造例１により得られた東紫蘇抽出物（試料１）について、以下のようにしてラジカル消去作用を試験した。
【００８２】
１．５×１０−４ＭのＤＰＰＨ（diphenyl-p-picrylhydrazyl）エタノール溶液３ｍＬに試料溶液（試料１，試料濃度は下記表２を参照）３ｍＬを加え密栓した後、振り混ぜて３０分間放置した。放置後、波長５２０ｎｍにおける吸光度を測定した。コントロールとして、試料溶液の代わりに試料を溶解した溶媒のみを用いて同様の操作をして、波長５２０ｎｍの吸光度を測定した。また、ブランクとして、エタノールに試料溶液３ｍＬを加えた後、直ちに波長５２０ｎｍの吸光度を測定した。得られた結果から、下記式によりラジカル消去率（％）を算出するとともに、ラジカル消去率が５０％になる試料濃度ＩＣ５０（μｇ／ｍＬ）を算出した。
【００８３】
ラジカル消去率(％)＝{１−(Ｂ−Ｃ)／Ａ}×１００
式中、Ａは「コントロールの吸光度」を表し、Ｂは「試料溶液添加時の吸光度」を表し、Ｃは「ブランクの吸光度」を表す。
結果を表２に示す。
【００８４】
【表２】
【００８５】
表２に示すように、東紫蘇抽出物（試料１）は、優れたラジカル消去作用を有することが確認された。また、ラジカル消去作用の程度は、東紫蘇抽出物の濃度によって調節できることが確認された。
【００８６】
〔試験例３〕一酸化窒素産生抑制作用試験
製造例１により得られた東紫蘇抽出物（試料１）について、以下のようにして一酸化窒素産生抑制作用を試験した。
【００８７】
マウスマクロファージ細胞（ＲＡＷ２６４．７細胞，大日本製薬社製）を、１０％ＦＢＳを添加したＤＭＥＭ培地（日水製薬社製）にて前培養後、セルスクレーパーにより細胞を回収した。回収した細胞を３．０×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞密度になるように１０％ＦＢＳを含有しフェノールレッドを含有しないＤ−ＭＥＭで希釈した後、９６ウェルプレートに１ウェルあたり１００μＬずつ播種し、４時間培養した。
【００８８】
培養終了後、培地を抜き、終濃度２％のＤＭＳＯを含む１０％ＦＢＳを含有しフェノールレッドを含有しないＤ−ＭＥＭで溶解した試料溶液（試料１，試料濃度：２００μｇ／ｍＬ）を各ウェルに１００μＬ添加し、１０％ＦＢＳを含有しフェノールレッドを含有しないＤ−ＭＥＭに溶解したリポポリサッカライド（ＬＰＳ，終濃度１μｇ／ｍＬ，E.coli0111:B4，DIFCO社製）を１００μＬ加え、４８時間培養した。
【００８９】
一酸化窒素（ＮＯ）産生量は、亜硝酸イオン（ＮＯ２−）量を指標に測定した。培養終了後、各ウェルの培養液に、培養上清と同量のグリス試薬（１質量％のスルファニルアミド，０．１％N-1-naphthyl ethylendiamine dihydrochlpride in ５％リン酸溶液）を添加し、１０分間室温にて反応させた。反応後、波長５４０ｎｍにおける吸光度を測定した。一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制率（％）は、試料無添加時（コントロール）の一酸化窒素（ＮＯ）産生量を基に、下記式により算出した。
【００９０】
ＮＯ産生抑制率(％)＝{１−(Ｃ−Ｄ)／(Ａ−Ｂ)}×１００
式中、Ａは「試料無添加時の吸光度」を表し、Ｂは「試料無添加時のブランクの吸光度」を表し、Ｃは「試料添加時の吸光度」を表し、Ｄは「試料添加時のブランクの吸光度」を表す。
【００９１】
上記のようにして算出した結果、東紫蘇抽出物（試料１）の一酸化窒素抑制率は、１５．３％であった。このことから、東紫蘇抽出物は、優れた一酸化窒素産生抑制作用を有することが確認された。
【００９２】
〔試験例４〕ヒアルロニダーゼ活性阻害作用試験
製造例１により得られた東紫蘇抽出物（試料１）について、以下のようにしてヒアルロニダーゼ活性阻害作用を試験した。
【００９３】
試料を溶解した０．１ｍｏｌ／Ｌの酢酸緩衝液（ｐＨ３．５）０．２ｍＬ（試料１，試料濃度は下記表３を参照）にヒアルロニダーゼ溶液（Type IV-S(from bovine testis)，SIGMA社製，４００ＮＦ ｕｎｉｔｓ／ｍＬ）０．１ｍＬを加え、３７℃で２０分間反応させた。さらに、活性化剤として２．５ｍｍｏｌ／Ｌの塩化カルシウム０．２ｍＬを加え、３７℃で２０分間反応させた。これに０．４ｍｇ／ｍＬのヒアルロン酸ナトリウム溶液（from Rooster Comb）０．５ｍＬを加え、３７℃で４０分間反応させた。
【００９４】
その後、０．４ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウムを０．２ｍＬ加えて反応を停止し、冷却した後、各反応溶液にホウ酸溶液０．２ｍＬを加え、３分間煮沸した。氷冷後、ｐ−ＤＡＢＡ試薬６ｍＬを加え、３７℃で２０分間反応させた。その後、波長５８５ｎｍにおける吸光度を測定した。同様の方法で空試験を行い補正した。得られた測定結果から、下記式によりヒアルロニダーゼ活性阻害率（％）を算出した。
【００９５】
阻害率(％)＝{１−(Ｓｔ−Ｓｂ)／(Ｃｔ−Ｃｂ)}×１００
式中、Ｓｔは「試料溶液の波長５８５ｎｍにおける吸光度」を表し、Ｓｂは「試料溶液ブランクの波長５８５ｎｍにおける吸光度」を表し、Ｃｔは「コントロール溶液の波長５８５ｎｍにおける吸光度」を表し、Ｃｂは「コントロール溶液ブランクの波長５８５ｎｍにおける吸光度」を表す。
結果を表３に示す。
【００９６】
【表３】
【００９７】
表３に示すように、東紫蘇抽出物（試料１）は、優れたヒアルロニダーゼ活性阻害作用を有することが確認された。また、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用の程度は、東紫蘇抽出物の濃度によって調節できることが確認された。
【００９８】
〔試験例５〕ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用試験
製造例１により得られた東紫蘇抽出物（試料１）について、以下のようにしてヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用を試験した。
【００９９】
ラット好塩基球白血病細胞（ＲＢＬ−２Ｈ３）を１５％ＦＢＳ添加Ｓ−ＭＥＭ培地を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を４．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞密度に希釈し、終濃度０．５μｇ／ｍＬとなるようにDNP-specific IgEを添加した後、９６ウェルプレートに１ウェルあたり１００μＬずつ播種し、一晩培養した。
【０１００】
培養終了後、培地を抜き、シリガリアン緩衝液１００μＬにて洗浄を２回行った。次に、同緩衝液３０μＬ及び同緩衝液にて調製した試料溶液１０μＬ（試料１，試料濃度は下記表４を参照）を加え、３７℃にて１０分間静置した。その後、１００ｎｇ／ｍＬのＤＮＰ−ＢＳＡ溶液１０μＬを加え、３７℃にて１５分間静置し、ヘキソサミニダーゼを遊離させた。
【０１０１】
その後、９６ウェルプレートを氷上に静置することにより遊離を停止した。各ウェルの細胞上清１０μＬ及び１ｍｍｏｌ／Ｌのｐ−ＮＡＧ（ｐ−ニトロフェニル−Ｎ−アセチル−β−Ｄ−グルコサイド）溶液１０μＬを、新たな９６ウェルプレートに添加し、３７℃で１時間反応させた。
【０１０２】
反応終了後、各ウェルに０．１ｍｏｌ／ＬのＮａ２ＣＯ３／ＮａＨＣＯ３２５０μＬを加え、波長４１５ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定し補正した。また、空試験として、細胞上清１０μＬと、０．１ｍｏｌ／ＬのＮａ２ＣＯ３／ＮａＨＣＯ３２５０μＬとの混合液の波長４１５ｎｍにおける吸光度を同様に測定した。得られた測定結果から、下記式によりヘキソサミニダーゼ遊離抑制率（％）を算出した。
【０１０３】
ヘキソサミニダーゼ遊離抑制率(％)＝{１−(Ｂ−Ｃ)／Ａ}×１００
式中、Ａは「試料無添加での吸光度」を表し、Ｂは「試料添加での吸光度」を表し、Ｃは「試料添加・ｐ−ＮＡＧ無添加での吸光度」を表す。
結果を表４に示す。
【０１０４】
【表４】
【０１０５】
表４に示すように、東紫蘇抽出物（試料１）は、優れたヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用を有することが確認された。
【０１０６】
〔試験例６〕血小板凝集抑制作用試験
製造例１により得られた東紫蘇抽出物（試料１）について、以下のようにして血小板凝集抑制作用を試験した。
【０１０７】
採血したウサギの血液に日本薬局方ヘパリンナトリウム注射液を１／１０量加えて遠心分離（１８０×ｇ、１０分、室温）し、血小板浮遊液（Platelet Rich Plasma；Ｐ．Ｒ．Ｐ．）を得た。
【０１０８】
次に、血小板浮遊液（Ｐ．Ｒ．Ｐ．）２２３μＬに２００ｍｍｏｌ／Ｌの塩化カルシウム溶液１μＬを加え、３７℃で１分間反応した。これに試料溶液（試料１，試料濃度は下記表５を参照）１μＬを加え、さらに２分間反応し、撹拌子を入れて１分間撹拌した後、コラーゲン溶液を２５μＬ添加して３７℃で１０分間の血小板凝集率を測定した。別に、コントロールとして、披験試料溶液の代わりに披験試料溶液の溶媒を添加した以外は、上記と同様に操作して血小板凝集率を測定した。得られた測定結果から、下記式により血小板凝集抑制率（％）を算出した。
【０１０９】
血小板凝集抑制率(％)＝{(Ａ−Ｂ)／Ａ}×１００
式中、Ａは「コントロールの血小板凝集率」を表し、Ｂは「試料溶液添加時の血小板凝集率」を表す。
結果を表５に示す。
【０１１０】
【表５】
【０１１１】
表５に示す結果から、東紫蘇抽出物（試料１）は、優れた血小板凝集抑制作用を有することが確認された。
【０１１２】
〔試験例７〕エラスターゼ活性阻害作用試験
製造例１により得られた東紫蘇抽出物（試料１）について、以下のようにしてエラスターゼ活性阻害作用を試験した。
【０１１３】
９６ウェルプレートにて、０．２ｍｏｌ／Ｌのトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）で調製した試料溶液（試料１，試料濃度：４００μｇ／ｍＬ）５０μＬ及び２０μｇ／ｍＬのエラスターゼ・タイプIII溶液５０μＬを混合した。その後、上記緩衝液で調製した０．４５１４ｍｇ／ｍＬのN-succinyl-Ala-Ala-Ala-p-nitroanilide１００μＬを添加して、２５℃で１５分反応させた。
【０１１４】
反応終了後、波長４１５ｎｍにおける吸光度を測定した。同様の方法で空試験を行い補正した。得られた結果から、下記式によりエラスターゼ活性阻害率（％）を算出した。
【０１１５】
エラスターゼ活性阻害率(％)＝{１−(Ｃ−Ｄ)／(Ａ−Ｂ)}×１００
式中、Ａは「試料無添加・酵素添加時の波長４１５ｎｍにおける吸光度」を表し、Ｂは「試料無添加・酵素無添加時の波長４１５ｎｍにおける吸光度」を表し、Ｃは「試料添加・酵素添加時の波長４１５ｎｍにおける吸光度」を表し、Ｄは「試料添加・酵素無添加時の波長４１５ｎｍにおける吸光度」を表す。
【０１１６】
上記のようにして算出した結果、東紫蘇抽出物（試料１）のエラスターゼ活性阻害率は、１５．５％であった。このことから、東紫蘇抽出物は、優れたエラスターゼ活性阻害作用を有することが確認された。
【０１１７】
〔試験例８〕ＭＭＰ−１活性阻害作用試験
製造例１により得られた東紫蘇抽出物（試料１）について、以下のようにしてＭＭＰ−１活性阻害作用を試験した。
【０１１８】
蓋付試験管にて、２０ｍｍｏｌ／Ｌの塩化カルシウムを含有する０．１ｍｏｌ／Ｌのトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７．１）で調製した試料溶液（試料１，試料濃度は下記表６を参照）５０μＬ、０．１ｍｇ／ｍＬのマトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１，COLLAGENASE Type IV from Clostridium histolyticum，SIGMA社製）溶液５０μＬ、及び０．５ｍｏｌ／ＬのＰｚ−ペプチド（Pz-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg-OH，BACHEM Feinchemikalien AG社製）溶液４００μＬを混合し、３７℃にて３０分間反応させた後、２５ｍｍｏｌ／Ｌのクエン酸溶液１ｍＬを加え、反応を停止した。
【０１１９】
その後、酢酸エチル５ｍＬをさらに加えて、激しく振とうした。これを遠心分離し（１６００×ｇ，１０分間）、酢酸エチル層の波長３２０ｎｍにおける吸光度を測定した。また、同様の方法により空試験を行った。得られた結果から、下記式によりＭＭＰ−１活性阻害率（％）を算出するとともに、ＭＭＰ−１の活性を５０％阻害する試料濃度ＩＣ５０（μｇ／ｍＬ）を算出した。
【０１２０】
ＭＭＰ−１活性阻害率(％)＝{１−(Ｃ−Ｄ)／(Ａ−Ｂ)}×１００
式中、Ａは「試料無添加・酵素添加時の吸光度」を表し、Ｂは「試料無添加・酵素無添加時の吸光度」を表し、Ｃは「試料添加・酵素添加時の吸光度」を表し、Ｄは「試料添加・酵素無添加時の吸光度」を表す。
結果を表６に示す。
【０１２１】
【表６】
【０１２２】
表６に示すように、東紫蘇抽出物（試料１）は、優れたＭＭＰ−１活性阻害作用を有することが確認された。また、ＭＭＰ−１活性阻害作用の程度は、東紫蘇抽出物の濃度によって調節できることが確認された。
【０１２３】
〔試験例９〕皮膚線維芽細胞増殖促進作用試験
製造例１により得られた東紫蘇抽出物（試料１）について、以下のようにして皮膚線維芽細胞増殖促進作用を試験した。
【０１２４】
ヒト正常皮膚線維芽細胞（ＮＢ１ＲＧＢ）を１０％ＦＢＳ含有α−ＭＥＭを用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を７．０×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞密度になるように５％ＦＢＳ含有α−ＭＥＭで希釈した後、９６ウェルプレートに１ウェルあたり１００μＬずつ播種し、一晩培養した。
【０１２５】
培養終了後、５％ＦＢＳ含有α−ＭＥＭで溶解した試料溶液（試料１，試料濃度は下記表７を参照）を各ウェルに１００μＬずつ添加し、３日間培養した。線維芽細胞増殖作用は、ＭＴＴアッセイ法を用いて測定した。
【０１２６】
培養終了後、各ウェルから１００μＬずつ培地を抜き、終濃度５ｍｇ／ｍＬでＰＢＳ（−）に溶解したＭＴＴを各ウェルに２０μＬずつ添加した。４．５時間培養した後に、１０％ＳＤＳを溶解した０．０１ｍｏｌ／Ｌの塩酸溶液を各ウェルに１００μＬずつ添加し、一晩培養した後、波長５７０ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。また、同様の方法で空試験を行い補正した。得られた結果から、下記式により線維芽細胞増殖促進率（％）を算出した。
【０１２７】
線維芽細胞増殖促進率(％)＝(Ｓｔ−Ｓｂ)／(Ｃｔ−Ｃｂ)×１００
式中、Ｓｔは「試料を添加した細胞での吸光度」を表し、Ｓｂは「試料を添加した空試験の吸光度」を表し、Ｃｔは「試料を添加しない細胞での吸光度」を表し、Ｃｂは「試料を添加しない空試験の吸光度」を表す。
結果を表７に示す。
【０１２８】
【表７】
【０１２９】
表７に示すように、東紫蘇抽出物（試料１）は、優れた線維芽細胞増殖促進作用を有することが確認された。
【０１３０】
〔試験例１０〕テストステロン５α−レダクターゼ阻害作用試験
製造例１により得られた東紫蘇抽出物（試料１）について、以下のようにしてテストステロン５α−レダクターゼ阻害作用を試験した。
【０１３１】
蓋付Ｖ底試験管にて、テストステロン（和光純薬工業社製）４．２ｍｇをプロピレングリコール１ｍＬに溶解したもの２０μＬと、１ｍｇ／ｍＬのＮＡＤＰＨを含有する５ｍｍｏｌ／Ｌのトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．１３）８２５μＬとを混合した。
【０１３２】
さらに、各試料のエタノール水溶液（試料１，試料濃度は下記表８を参照）８０μＬ及びＳ−９（ラット肝臓ホモジネート，オリエンタル酵母工業社製）７５μＬを加えて混合し、３７℃にて３０分間インキュベートした。その後、塩化メチレン１ｍＬを加えて反応を停止させた。これを遠心分離し（１６００×ｇ，１０分間）、塩化メチレン層を分取して、分取した塩化メチレン層について、下記の条件にてガスクロマトグラフィー分析をし、３α−アンドロスタンジオール、５α−ジヒドロテストステロン（５α−ＤＨＴ）及びテストステロンの濃度（μｇ／ｍＬ）を定量した。コントロールとして、試料溶液の代わりに試料溶媒を同量（８０μＬ）用いて同様に処理し、ガスクロマトグラフィー分析をした。
【０１３３】
［ガスクロマトグラフィー条件］
使用装置：Shimadzu GC-7A（島津製作所社製）
カラム：ＤＢ−１７０１（内径：０．５３ｍｍ，長さ：３０ｍ，膜厚：１．０μｍ，J&W Scientific社製）
カラム温度：２４０℃
注入口温度：３００℃
検出器：ＦＩＤ
試料注入量：１μＬ
スプリット比：１：２
キャリアガス：窒素ガス
キャリアガス流速：３ｍＬ／ｍｉｎ
【０１３４】
３α−アンドロスタンジオール、５α−ＤＨＴ及びテストステロンの濃度の定量は、下記の方法により行った。
３α−アンドロスタンジオール、５α−ＤＨＴ及びテストステロンの標準品を塩化メチレンに溶解し、当該溶液についてガスクロマトグラフィー分析をし、これらの化合物の濃度（μｇ／ｍＬ）及びピーク面積から、ピーク面積と化合物の濃度との対応関係を予め求めておいた。そして、テストステロンとＳ−９との反応後の３α−アンドロスタンジオール、５α−ＤＨＴ及びテストステロンのそれぞれのピーク面積あたりの濃度を、予め求めておいた対応関係を利用して、下記式（１）に基づいて求めた。
【０１３５】
Ａ＝Ｂ×Ｃ／Ｄ・・・（１）
式中、Ａは「３α−アンドロスタンジオール、５α−ＤＨＴ又はテストステロンの濃度（μｇ／ｍＬ）」を表し、Ｂは「３α−アンドロスタンジオール、５α−ＤＨＴ又はテストステロンのピーク面積」を表し、Ｃは「標準品の濃度（μｇ／ｍＬ）」を表し、Ｄは「標準品のピーク面積」を表す。
【０１３６】
式（１）に基づいて算出された化合物濃度を用いて、下記式（２）に基づき、変換率（テストステロン５α−レダクターゼによりテストステロンが還元されて生成した３α−アンドロスタンジオール及び５α−ＤＨＴの濃度と、テストステロンの初期濃度との濃度比）を算出した。
【０１３７】
変換率＝(Ｅ＋Ｆ)／(Ｅ＋Ｆ＋Ｇ)・・・（２）
式中、Ｅは「３α−アンドロスタンジオールの濃度（μｇ／ｍＬ）」を表し、Ｆは「５α−ＤＨＴの濃度（μｇ／ｍＬ）」を表し、Ｇは「テストステロンの濃度（μｇ／ｍＬ）」を表す。
【０１３８】
式（２）に基づいて算出された変換率を用いて、下記式（３）に基づき、テストステロン５α−レダクターゼ阻害率（％）を算出するとともに、テストステロン５α−レダクターゼ阻害率が５０％になる試料濃度ＩＣ５０（μｇ／ｍＬ）を算出した。
阻害率(％)＝(１−Ｈ／Ｉ)×１００・・・（３）
式中、Ｈは「試料添加時の変換率」を表し、Ｉは「コントロールの変換率」を表す。
結果を表８に示す。
【０１３９】
【表８】
【０１４０】
表８に示すように、東紫蘇抽出物（試料１）は、優れたテストステロン５α−レダクターゼ阻害作用を有することが確認された。また、テストステロン５α−レダクターゼ阻害作用の程度は、東紫蘇抽出物の濃度によって調節できることが確認された。
【０１４１】
〔試験例１１〕アンドロゲン受容体結合阻害作用試験
製造例１により得られた東紫蘇抽出物（試料１）について、以下のようにしてアンドロゲン受容体結合阻害作用を試験した。
【０１４２】
マウス自然発生乳癌（シオノギ癌；ＳＣ１１５）よりクローニングされたアンドロゲン依存性マウス乳癌細胞（ＳＣ−３細胞）を、２％ＤＣＣ−ＦＢＳ及び１０−８ｍｏｌ／Ｌのテストステロンを含有するＭＥＭ培地（以下、ＭＥＭ−２という。）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１．０×１０５ｃｅｌｌｓ／μＬの細胞密度になるようにＭＥＭ−２培地で希釈し、９６ウェルプレートに１ウェルあたり１００μＬずつ播種し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で培養した。
【０１４３】
２４時間後、試料（試料１，試料濃度は下記表９を参照）及び１．０×１０−９ｍｏｌ／ＬのＤＨＴを添加した０．５％ＢＳＡ含有ＨａｍＦ１２＋ＭＥＭ培地（以下、ＨＭＢ培地という。）に培地を交換して４８時間培養した。
【０１４４】
その後、培地を０．９７ｍｍｏｌ／ＬのＭＴＴを含むＭＥＭ−２培地に交換し、２時間培養後、培地をイソプロパノールに交換して細胞内に生成したブルーホルマザンを抽出した。溶出したブルーホルマザンを含有するイソプロパノールについて、ブルーホルマザンの吸収極大点がある５７０ｎｍの吸光度を測定した。
【０１４５】
なお、付着細胞の影響を補正するため、同時に６５０ｎｍの吸光度も測定し、両吸光度の差をもってブルーホルマザンの生成量に比例する値とした（下記結合阻害率の計算式における吸光度はこの補正済み吸光度である）。上記と並行して、試料単独でＳＣ−３細胞に及ぼす影響をみるため、ＨＭＢ培地にＤＨＴを添加せず試料のみを添加して、同様の培養と測定とを行った。
【０１４６】
さらに、コントロールとして、試料及びＤＨＴを添加しないＨＭＢ培地で培養した場合、並びに試料を添加せずＤＨＴのみを添加したＨＭＢ培地で培養した場合についても同様の測定を行った。測定結果から、下記式によりアンドロゲン受容体結合阻害率（％）を算出するとともに、アンドロゲンの受容体への結合を５０％阻害する試料濃度ＩＣ５０（μｇ／ｍＬ）算出した。
【０１４７】
アンドロゲン受容体結合阻害率(％)＝{１−(Ａ−Ｂ)／(Ｃ−Ｄ)}×１００
式中、Ａは「ＤＨＴ添加・試料添加の場合の吸光度」を表し、Ｂは「ＤＨＴ無添加・試料添加の場合の吸光度」を表し、Ｃは「ＤＨＴ添加・試料無添加の場合の吸光度」を表し、Ｄは「ＤＨＴ無添加・試料無添加の場合の吸光度」を表す。
結果を表９に示す。
【０１４８】
【表９】
【０１４９】
表９に示すように、東紫蘇抽出物（試料１）は、優れたアンドロゲン受容体結合阻害作用を有することが確認された。また、アンドロゲン受容体結合阻害作用の程度は、東紫蘇抽出物の濃度によって調節できることが確認された。
【０１５０】
〔試験例１２〕サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害作用試験
製造例１により得られた東紫蘇抽出物（試料１）について、以下のようにしてサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害作用を試験した。
【０１５１】
５ｍＭの塩化マグネシウムを含有する５０ｍＭのトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．５）０．２ｍＬに、２．５ｍｇ／ｍＬのウシ血清アルブミン溶液０．１ｍＬ、０．１ｍｇ／ｍＬのサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ溶液０．１ｍＬ及び５０％ＤＭＳＯに溶解した試料溶液（試料１，試料濃度は下記表１０を参照）０．０５ｍＬを加え、３７℃の温度条件下で５分間インキュベーションした。
【０１５２】
この反応溶液に、０．５ｍｇ／ｍＬのサイクリックＡＭＰ溶液０．０５ｍＬを加え、３７℃の温度条件下で６０分間インキュベーションした。３分間沸騰水浴上で煮沸することにより反応を停止させ、これを遠心（２２６０×ｇ，１０分間，４℃）し、上清中の反応基質であるサイクリックＡＭＰを、下記の条件で高速液体クロマトグラフィーを用いて分析した。また、試料溶液を添加せずに同様の方法で空試験を行った。
【０１５３】
＜高速液体クロマトグラフィー条件＞
製品名：Chromatocorder 12（SYSTEM INSTRUMENTS社製）
固定相：Wakosil 5C18（和光純薬工業社製）
カラム径：４．６ｍｍ
カラム長：２５０ｍｍ
移動相：1mM TBAP in 25mM KH2PO4:CH3CN＝90:10
移動相流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
検出：ＵＶ，２６０ｎｍ
【０１５４】
次に、サイクリックＡＭＰ標準品のピーク面積（Ａ）、試料無添加時におけるサイクリックＡＭＰ標準品とサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼとの反応溶液の上清のピーク面積（Ｂ１）及び試料添加時におけるサイクリックＡＭＰ標準品とサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼとの反応溶液の上清のピーク面積（Ｂ２）を求めた。得られた結果から、下記式により試料無添加時のサイクリックＡＭＰ標準品の分解率（Ｃ）及び試料添加時のサイクリックＡＭＰ標準品の分解率（Ｄ）を算出した。
【０１５５】
試料無添加時の標準品分解率(Ｃ，％)＝(１−Ｂ１／Ａ)×１００
試料添加時の標準品の分解率(Ｄ，％)＝(１−Ｂ２／Ａ)×１００
【０１５６】
その後、上記式により算出した各分解率（Ｃ，Ｄ）に基づいて、下記式によりサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害率（％）を算出するとともに、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害率が５０％になる試料濃度ＩＣ５０（μｇ／ｍＬ）を算出した。
阻害率(％)＝(１−Ｄ／Ｃ)×１００
結果を表１０に示す。
【０１５７】
【表１０】
【０１５８】
表１０に示すように、東紫蘇抽出物（試料１）は、優れたサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害作用を有することが確認された。また、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害作用の程度は、東紫蘇抽出物の濃度によって調節できることが確認された。
【０１５９】
〔配合例１〕
下記組成の乳液を常法により製造した。
東紫蘇抽出物（製造例１） ０．１ｇ
ホホバオイル ４．０ｇ
オリーブオイル ２．０ｇ
スクワラン ２．０ｇ
セタノール ２．０ｇ
モノステアリン酸グリセリル ２．０ｇ
ポリオキシエチレンセチルエーテル（20E.O.） ２．５ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（20E.O.） ２．０ｇ
黄杞エキス ０．１ｇ
グリチルリチン酸ジカリウム ０．１ｇ
イチョウ葉エキス ０．１ｇ
コンキオリン ０．１ｇ
オウバクエキス ０．１ｇ
カミツレエキス ０．１ｇ
１，３−ブチレングリコール ３．０ｇ
パラオキシ安息香酸メチル ０．１５ｇ
香料 ０．０５ｇ
精製水 残部（全量を１００ｇとする）
【０１６０】
〔配合例２〕
下記組成の化粧水を常法により製造した。
東紫蘇抽出物（製造例１） ０．１ｇ
グリセリン ３．０ｇ
１，３−ブチレングリコール ３．０ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（20E.O.） ０．５ｇ
パラオキシ安息香酸メチル ０．１５ｇ
クエン酸 ０．１ｇ
クエン酸ソーダ ０．１ｇ
油溶性甘草エキス ０．１ｇ
海藻エキス ０．１ｇ
キシロビオースミクスチャー ０．５ｇ
クジンエキス ０．１ｇ
香料 ０．０５ｇ
精製水 残部（全量を１００ｇとする）
【０１６１】
〔配合例３〕
下記組成のクリームを常法により製造した。
東紫蘇抽出物（製造例１） ０．１ｇ
流動パラフィン ５．０ｇ
サラシミツロウ ４．０ｇ
セタノール ３．０ｇ
スクワラン １０．０ｇ
ラノリン ２．０ｇ
ステアリン酸 １．０ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（20E.O.） １．５ｇ
モノステアリン酸グリセリル ３．０ｇ
１，３−ブチレングリコール ６．０ｇ
酵母抽出液 ０．１ｇ
シソ抽出液 ０．１ｇ
シナノキ抽出液 ０．１ｇ
ジユ抽出液 ０．１ｇ
パラオキシ安息香酸メチル １．５ｇ
香料 ０．１ｇ
精製水 残部（全量を１００ｇとする）
【０１６２】
〔配合例４〕
下記組成の養毛ヘアトニックを常法により製造した。
東紫蘇抽出物（製造例１） ０．２ｇ
塩酸ピリドキシン ０．１ｇ
レゾルシン ０．０１ｇ
Ｄ−パントテニルアルコール ０．１ｇ
グリチルリチン酸ジカリウム ０．１ｇ
Ｌ−メントール ０．０５ｇ
１，３−ブチレングリコール ４．０ｇ
ニンジンエキス ０．５ｇ
エタノール ２５．０ｇ
香料 ０．０１ｇ
精製水 残部（全量を１００ｇとする）
【０１６３】
〔配合例５〕
下記組成のシャンプー（クリームシャンプー）を常法により製造した。
東紫蘇抽出物（製造例１） ０．２ｇ
ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸ナトリウム ３０．０ｇ
ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸アンモニウム ２０．０ｇ
ヤシ油脂肪酸アミドプロピルベタイン ６．０ｇ
ヤシ油脂肪酸モジエタノールアミド ４．０ｇ
ジステアリン酸エチレングリコール ２．０ｇ
防腐剤（パラオキシ安息香酸メチル） ０．１５ｇ
ムクロジエキス ０．２ｇ
黄杞エキス ０．５ｇ
オウバクエキス ０．３ｇ
ローズマリーエキス ０．５ｇ
１，３−ブチレングリコール ３．０ｇ
香料 ０．０１ｇ
精製水 残部（全量を１００ｇとする）
【０１６４】
〔配合例６〕
下記組成のリンスを常法により製造した。
東紫蘇抽出物（製造例１） ０．２ｇ
塩化ステアリルトリメチルアンモニウム １．５ｇ
ポリオキシエチレンセチルエーテル １．０ｇ
セチルアルコール ２．０ｇ
オクチルドデカノール １．０ｇ
カチオン化セルロース ０．５ｇ
プロピレングリコール ５．０ｇ
ムクロジエキス ０．２ｇ
黄杞エキス ０．５ｇ
オウバクエキス ０．３ｇ
ローズマリーエキス ０．５ｇ
香料 ３．０ｇ
精製水 残部（全量を１００ｇとする）
【０１６５】
〔配合例７〕
下記の混合物を打錠して、錠剤状の栄養補助食品を製造した。
東紫蘇抽出物（製造例１） ５０質量部
粉糖（ショ糖） １８８質量部
グリセリン脂肪酸エステル １２質量部
【０１６６】
〔配合例８〕
下記の混合物を顆粒状にして、栄養補助食品を製造した。
東紫蘇抽出物（製造例１） ５０質量部
ビートオリゴ糖 １０００質量部
ビタミンＣ １６７質量部
ステビア抽出物 １０質量部
【産業上の利用可能性】
【０１６７】
本発明の抗酸化剤は、活性酸素種に起因する各種障害の予防・改善に、本発明の抗炎症剤は、各種炎症性疾患の予防・改善に、本発明の抗老化剤は、皮膚の老化の予防・改善に、本発明の育毛剤又は抗男性ホルモン剤は、男性型脱毛症、多毛症、脂漏症、座瘡（ニキビなど）、前立腺肥大症、前立腺腫瘍、男児性早熟等の予防・改善、本発明の抗肥満剤又はサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害剤は、肥満症の予防・改善に大きく貢献することができる。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
東紫蘇からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする抗酸化剤。
【請求項２】
前記東紫蘇からの抽出物が、活性酸素消去作用及び／又はラジカル消去作用を有することを特徴とする請求項１に記載の抗酸化剤。
【請求項３】
東紫蘇からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする抗炎症剤。
【請求項４】
前記東紫蘇からの抽出物が、一酸化窒素産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用及び血小板凝集抑制作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用を有することを特徴とする請求項３に記載の抗炎症剤。
【請求項５】
東紫蘇からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする抗老化剤。
【請求項６】
前記東紫蘇からの抽出物が、エラスターゼ活性阻害作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害作用及び皮膚線維芽細胞増殖促進作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用を有することを特徴とする請求項５に記載の抗老化剤。
【請求項７】
東紫蘇からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする育毛剤。
【請求項８】
前記東紫蘇からの抽出物が、テストステロン５α−レダクターゼ活性阻害作用及び／又はアンドロゲン受容体結合阻害作用を有することを特徴とする請求項７に記載の育毛剤。
【請求項９】
東紫蘇からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする抗男性ホルモン剤。
【請求項１０】
前記東紫蘇からの抽出物が、テストステロン５α−レダクターゼ活性阻害作用及び／又はアンドロゲン受容体結合阻害作用を有することを特徴とする請求項９に記載の抗男性ホルモン剤。
【請求項１１】
東紫蘇からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする抗肥満剤。
【請求項１２】
東紫蘇からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とするサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害剤。
【請求項１３】
東紫蘇からの抽出物を配合したことを特徴とする皮膚化粧料。
【請求項１４】
東紫蘇からの抽出物を配合したことを特徴とする頭髪化粧料。
【請求項１５】
東紫蘇からの抽出物を配合したことを特徴とする飲食品。
【請求項１】
東紫蘇からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする抗酸化剤。
【請求項２】
前記東紫蘇からの抽出物が、活性酸素消去作用及び／又はラジカル消去作用を有することを特徴とする請求項１に記載の抗酸化剤。
【請求項３】
東紫蘇からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする抗炎症剤。
【請求項４】
前記東紫蘇からの抽出物が、一酸化窒素産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用及び血小板凝集抑制作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用を有することを特徴とする請求項３に記載の抗炎症剤。
【請求項５】
東紫蘇からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする抗老化剤。
【請求項６】
前記東紫蘇からの抽出物が、エラスターゼ活性阻害作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害作用及び皮膚線維芽細胞増殖促進作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用を有することを特徴とする請求項５に記載の抗老化剤。
【請求項７】
東紫蘇からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする育毛剤。
【請求項８】
前記東紫蘇からの抽出物が、テストステロン５α−レダクターゼ活性阻害作用及び／又はアンドロゲン受容体結合阻害作用を有することを特徴とする請求項７に記載の育毛剤。
【請求項９】
東紫蘇からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする抗男性ホルモン剤。
【請求項１０】
前記東紫蘇からの抽出物が、テストステロン５α−レダクターゼ活性阻害作用及び／又はアンドロゲン受容体結合阻害作用を有することを特徴とする請求項９に記載の抗男性ホルモン剤。
【請求項１１】
東紫蘇からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする抗肥満剤。
【請求項１２】
東紫蘇からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とするサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害剤。
【請求項１３】
東紫蘇からの抽出物を配合したことを特徴とする皮膚化粧料。
【請求項１４】
東紫蘇からの抽出物を配合したことを特徴とする頭髪化粧料。
【請求項１５】
東紫蘇からの抽出物を配合したことを特徴とする飲食品。
【公開番号】特開２０１０−１８４９１５（Ｐ２０１０−１８４９１５Ａ）
【公開日】平成２２年８月２６日（２０１０．８．２６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−３１７７３（Ｐ２００９−３１７７３）
【出願日】平成２１年２月１３日（２００９．２．１３）
【出願人】（５９１０８２４２１）丸善製薬株式会社 (239)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２２年８月２６日（２０１０．８．２６）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年２月１３日（２００９．２．１３）
【出願人】（５９１０８２４２１）丸善製薬株式会社 (239)
【Ｆターム（参考）】
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