医薬化合物
【課題】 エラスターゼ阻害活性を有する特定化合物の結晶を得ることを目的とする。
【解決手段】 Ｎ−［（１Ｓ）−２−（（２Ｓ）−２−｛Ｎ−［（１Ｓ）−３，３，３−トリフルオロ−２，２−ジヒドロキシ−１−（メチルエチル）プロピル］カルバモイル｝ピロリジニル）−１−（メチルエチル）−２−オキソエチル］−（１−ｔｅｒｔ−ブチル−５−メチルピラゾル−４−イル）カルボキサミドの結晶、その製造方法および該結晶を有効成分として含む医薬。
【解決手段】 Ｎ−［（１Ｓ）−２−（（２Ｓ）−２−｛Ｎ−［（１Ｓ）−３，３，３−トリフルオロ−２，２−ジヒドロキシ−１−（メチルエチル）プロピル］カルバモイル｝ピロリジニル）−１−（メチルエチル）−２−オキソエチル］−（１−ｔｅｒｔ−ブチル−５−メチルピラゾル−４−イル）カルボキサミドの結晶、その製造方法および該結晶を有効成分として含む医薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は医薬、特にエラスターゼ阻害作用を有する複素環式化合物の結晶多形、その製造方法およびそれを有効成分とする医薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
次式で示される構造を有する、Ｎ−［（１Ｓ）−２−（（２Ｓ）−２−｛Ｎ−［（１Ｓ）−３，３，３−トリフルオロ−１−（メチルエチル）−２−オキソプロピル］カルバモイル｝ピロリジニル）−１−（メチルエチル）−２−オキソエチル］−（１−ｔｅｒｔ−ブチル−５−メチルピラゾル−４−イル）カルボキサミド（以下、「化合物Ｂ」または「ケトン体」ということもある）は、エラスターゼ阻害剤として有用な化合物であり、特許文献１の実施例３２に記載されている。
【０００３】
【化１】
【０００４】
通常、医薬品の有効成分となる化合物は、強い薬理作用を有し、且つ低毒性であるとともに品質が一定であることが条件となる。そのためには結晶状態の化合物を原薬として用いることが求められている。しかしながら、特許文献１には上記化合物Ｂのみならずそこに記載の他の化合物群がすべて結晶ではなく非晶質であり、さらに結晶を得るための製造方法も記載されていない。
【特許文献１】国際公開第０３／０６６６７１号パンフレット
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、エラスターゼ阻害活性を有する化合物の結晶を得ることを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、上記化合物Ｂ、即ち、ケトン体の結晶を得る為に、鋭意検討を試みた。しかし、通常使用される種々の有機溶媒をもってしてもこの化合物を結晶化させることができなかった。ところが、化合物Ｂを特定の有機溶媒に溶解し、容器を開口状態にして放置したところ結晶化させることに成功した。しかし、分析の結果、得られた結晶は、大気中の水を吸って、水分子１個分の重量が増えていることが判明した。そこで、さらに検討を進めた結果、得られた結晶は、ケトン体のトリフルオロメチルケトン部位に１分子の水が附加したジオール体の結晶であること、およびこの結晶のエラスターゼ阻害活性は、ケトン体のそれがそのまま維持されているとの知見をえて、本発明を完成した。
【０００７】
本発明は、
項１：Ｎ−［（１Ｓ）−２−（（２Ｓ）−２−｛Ｎ−［（１Ｓ）−３，３，３−トリフルオロ−２，２−ジヒドロキシ−１−（メチルエチル）プロピル］カルバモイル｝ピロリジニル）−１−（メチルエチル）−２−オキソエチル］−（１−ｔｅｒｔ−ブチル−５−メチルピラゾル−４−イル）カルボキサミド（以下「化合物Ａ」または「ジオール体」ということもある）、即ち、下記構造の結晶を提供するものである。
【０００８】
【化２】
【０００９】
具体的には以下の発明を提供する。
【００１０】
項２： 回折角２θ（ＣｕＫα１線）で表したとき、約７．５°〜９．０°の位置にピークを有するＸ線粉末回折パターンを示す項１に記載の結晶。
【００１１】
項３： 回折角２θ（ＣｕＫα１線）で表したとき、約７．５°〜９．０°の位置に２本のピークを有するＸ線粉末回折パターンを示す項２に記載の結晶。
【００１２】
項４： 回折角２θ（ＣｕＫα１線）で表したとき、約１３．０°〜１４．０°の位置にピークを有するＸ線粉末回折パターンを示す項２または３に記載の結晶。
【００１３】
項５： 回折角２θ（ＣｕＫα１線）で表したとき、ほぼ８．０°、８．６°、９．２°、１０．６°、１１．９°、１３．６°、１４．５°および２０．４°の位置にピークを有するＸ線粉末回折パターンを示す項１〜４のいずれかに記載の化合物Ａの１型結晶。
【００１４】
項６： 昇温速度が１０℃／分の示差走査熱量測定において、約１６１℃に脱水吸熱ピークを有する項５に記載の化合物Ａの１型結晶。
【００１５】
項７： 回折角２θ（ＣｕＫα１線）で表したとき、ほぼ５．０°、７．６°、８．１°、８．７°、９．６°、１０．２°、１０．６°、１３．５°、１４．９°および１９．９°の位置にピークを有するＸ線粉末回折パターンを示す項１〜４のいずれかに記載の化合物Ａの２型結晶。
【００１６】
項８： 昇温速度が１０℃／分の示差走査熱量測定において、約１２６℃に脱水吸熱ピークを有する項７に記載の化合物Ａの２型結晶。
【００１７】
項９： 回折角２θ（ＣｕＫα１線）で表したとき、ほぼ４．８°、７．３°、８．１°、８．４°、９．４°、１２．５°、１４．３°、１６．４°および１９．１°の位置にピークを有するＸ線粉末回折パターンを示す項１〜３のいずれかに記載の化合物Ａの３型結晶。
【００１８】
項１０： 昇温速度が１０℃／分の示差走査熱量測定において、約１１４℃に脱水吸熱ピークを有する項９に記載の化合物Ａの３型結晶。
【００１９】
項１１： 項１〜１０のいずれかに記載の結晶を有効成分として含む医薬。
【００２０】
項１２： 項１〜１０のいずれかに記載の結晶を含む医薬組成物。
【００２１】
項１３： 化合物Ａの１型結晶の製造方法であって、以下のいずれかの有機溶媒：
（１）ギ酸エチル、酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸ｎ−プロピル、酢酸イソプロピル、酢酸イソブチル、酢酸ｎ−ブチルおよび酢酸イソアミルからなる群から選択されるエステル類、
（２）メチルイソブチルケトン、ジイソプロピルケトンおよび２−ヘキサノンからなる群から選択されるケトン類、
（３）ジエチルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、シクロペンチルメチルエーテルおよびジフェニルエーテルからなる群から選択されるエーテル類、および
（４）アセトニトリル
からなる群から選ばれる単一溶媒；
酢酸ｎ−プロピル、酢酸イソプロピル、酢酸イソブチル、酢酸イソアミル、メチルイソブチルケトン、ジイソプロピルケトン、シクロペンチルメチルエーテルおよび２−ヘキサノンからなる群から選ばれる１種の有機溶媒と、ジエチルエーテルまたはシクロヘキサンとの混合溶媒；
酢酸イソプロピル、酢酸イソブチル、酢酸イソアミル、メチルイソブチルケトン、ジイソプロピルケトン、シクロペンチルメチルエーテルおよび２−ヘキサノンからなる群から選ばれる１種の有機溶媒と、ｎ−ヘキサン、ジメトキシエタンおよびメチルシクロヘキサンからなる群から選ばれる１種の有機溶媒との混合溶媒；または
酢酸エチルとシクロヘキサンとの混合溶媒に
（ａ）化合物Ｂを溶解させ、これに水を添加した溶液から化合物Ａの１型結晶を晶析させるか、または
（ｂ）化合物Ａの２型結晶または３型結晶を上記溶媒に溶解させ、該溶液から化合物Ａの１型結晶を晶析させる
ことを特徴とする製造方法。
【００２２】
項１４： 化合物Ａの２型結晶の製造方法であって、以下のいずれかの有機溶媒：
ジクロロメタン、クロロホルム、クロロベンゼン、トルエン、キシレン、アニソール、ｎ−ヘキサン、メチルシクロヘキサンおよびｎ−ヘプタンからなる群から選ばれる単一溶媒；
トルエン、キシレンおよびアニソールからなる群から選ばれる１種の有機溶媒とジエチルエーテル、シクロヘキサン、ｎ−ヘキサンおよびメチルシクロヘキサンからなる群から選ばれる１種の有機溶媒との混合溶媒；または
トルエンとジメトキシエタンとの混合溶媒に
（ａ）化合物Ｂを溶解させ、これに水を添加した溶液から化合物Ａの２型結晶を晶析させるか、又は
（ｂ）化合物Ａの１型結晶または３型結晶を上記溶媒に溶解させ、該溶液から化合物Ａの２型結晶を晶析させる
ことを特徴とする製造方法。
【００２３】
項１５ 化合物Ａの３型結晶の製造方法であって、化合物Ｂを、酢酸ｎ−プロピルとメチルシクロヘキサンとの混合溶媒に溶解させ、これに水を添加した溶液から化合物Ａの３型結晶を晶析させるか、または化合物Ａの１型結晶または２型結晶を該混合溶媒に溶解させ、該溶液から化合物Ａの３型結晶を晶析させることを特徴とする製造方法。
【発明の効果】
【００２４】
本発明によれば、品質が安定している化合物の結晶を医薬品の原薬として供給することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２５】
本発明の化合物Ａの結晶は．化合物Ｂ，即ち、ケトン体を出発物質として製造することができる。このケトン体は、特許文献１に記載の方法によって製造することができる。
【００２６】
本発明者らの研究によって、化合物Ａの結晶として、少なくとも３種類の異なる結晶形が存在することが判明した。この３種類の結晶形を、以下、１型、２型および３型という。
【００２７】
化合物Ａの結晶は、Ｘ線粉末回折パターンにおいて、特徴的なピークを示す。即ち、該結晶は、回折角２θ（ＣｕＫα１線）で表したとき、約７．５°〜９．０°の位置にピーク、具体的には、２本のピークを有するＸ線粉末回折パターンを示す。また、１型結晶及び２型結晶は回折角２θ（ＣｕＫα１線）で表したとき、約１３．０°〜１４．０°の位置にピークも有する。
【００２８】
スペクトリス（Ｓｐｅｃｔｒｉｓ）社製 Ｘ’Ｐｅｒｔ Ａｌｐｈａ １の装置を用いて実施例で示す条件下で測定したときの１型〜３型各結晶の特徴的な主ピークの回折角（２θ（ＣｕＫα１線））は以下のとおりである。
【００２９】
【表１】
【００３０】
化合物Ａの結晶は、回折角２θ（１０ＫｅＶ）で表したときには、約６．０４°〜７．２４°の位置にピーク、具体的には、２本のピークを有するＸ線粉末回折パターンを示す。また、１型結晶及び２型結晶は回折角２θ（１０ＫｅＶ）で表して、約１０．４６°〜１１．２６°の位置にピークも有する。
【００３１】
高輝度放射光施設ＳＰｒｉｎｇ−８ ＢＬ２４ＸＵ Ｈｕｔｃｈ Ｂの装置を用いて実施例で示す条件下で測定したときの１型〜３型各結晶の特徴的な主ピークの回折角（２θ（１０ＫｅＶ））は以下のとおりである。
【００３２】
【表２】
【００３３】
１型〜３型の各結晶の昇温速度が１０℃／分の示差走査熱量測定（ＤＳＣ）における特徴および熱重量分析（ＴＧ）における特徴は以下のとおりである。
【００３４】
【表３】
【００３５】
本発明の化合物Ａの各結晶と化合物Ｂについてラマン分光分析を行うと、各結晶は３５００〜３１７０ｃｍ−１の範囲においてピークを有するが、化合物Ｂでは該範囲においてピークを持たないことから、本発明の結晶と化合物Ｂとは区別される。また、１〜３型結晶は、各々３５００〜３１７０ｃｍ−１の範囲、３０５０〜２８５０ｃｍ−１の範囲、１７５０〜１３８０ｃｍ−１の範囲においてピークパターンが異なり、各結晶間で区別できる。
【００３６】
本発明の化合物Ａの１型結晶、２型結晶及び３型結晶は、本明細書に記載の物理化学的性質によって特定されるものであるが、上記データは、測定方法や測定器具によって多少変わるものであるから、厳密に解されるべきではない。また、１型結晶、２型結晶及び３型結晶は、純粋な結晶に限られず、他の結晶が混在していてもよい。
【００３７】
１型結晶
化合物Ａの１型結晶は、実施例または以下に記載した方法によって製造することができる。即ち、１型結晶は、化合物Ｂを特定溶媒に溶解し、水を添加したのち放置することにより製造できる。「放置」は、通常、ゆっくりと攪拌しながらまたは静置させて数時間ないし数日間、通常、室温において行われる。
【００３８】
ここにおける、特定溶媒としては、例えば、次の（１）〜（４）に示される単一溶媒が挙げられる。
（１）ギ酸エチル、酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸ｎ−プロピル、酢酸イソプロピル、酢酸イソブチル、酢酸ｎ−ブチルおよび酢酸イソアミルからなる群から選択されるエステル類
（２）メチルイソブチルケトン、ジイソプロピルケトンおよび２−ヘキサノンからなる群から選択されるケトン類
（３）ジエチルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、シクロペンチルメチルエーテルおよびジフェニルエーテルからなる群から選択されるエーテル類
（４）アセトニトリル。
【００３９】
または、以下の組み合わせの混合溶媒であってもよい。
【００４０】
【表４】
【００４１】
【表５】
【００４２】
上記混合溶媒の他に、下記実施例に示す酢酸エチルとシクロヘキサンとの混合溶媒も例示できる。
【００４３】
これらの溶媒の使用量は、化合物Ｂを溶解するに必要な最小量が好ましい。また、水の添加量は、ジオール体を形成するに必要な量であり、収率を上げるために化合物Ｂと当モルないしはやや過剰量の範囲から選択するのが好ましい。なお、水の添加は、人為的に行わず、大気中の水分を吸収させることによって行える場合もある。混合溶媒を用いる場合には、例えば、混合溶媒に化合物Ｂを溶解させて放置してもよいし、一方の有機溶媒に化合物Ｂを溶解させて放置し、これに他の有機溶媒を添加して放置してもよい。かくして析出した結晶は、通常、濾取後、適当な溶媒で洗浄し、乾燥される。
【００４４】
また、１型結晶は下記で得られる２型結晶または３型結晶を上記特定溶媒に溶解させ、晶析させることによって得ることもできる。
【００４５】
２型結晶
化合物Ａの２型結晶は、実施例または以下に記載した方法によって製造することができる。即ち、特定溶媒として次の単一溶媒または混合溶媒を用いるほかは、前記の１型結晶の場合と同様にして製造することができる。
【００４６】
単一溶媒としては、以下のものが例示できる。
・ジクロロメタン、クロロホルム、クロロベンゼン、トルエン、キシレン、アニソール、ｎ−ヘキサン、メチルシクロヘキサン、ｎ−ヘプタン。
【００４７】
混合溶媒としては以下の組み合わせが例示できる。
【００４８】
【表６】
【００４９】
上記例のほかに、トルエンとジメトキシエタンとの混合溶媒も例示できる。
【００５０】
また、２型結晶は、上記で得られる１型結晶または下記で得られる３型結晶を上記特定溶媒に溶解させ、晶析させることによって得ることもできる。
【００５１】
３型結晶
化合物Ａの３型結晶は、実施例または以下に記載した方法によって製造することができる。即ち、特定溶媒として酢酸ｎ−プロピルとメチルシクロヘキサンとの混合溶媒を用いて、前記の１型結晶の場合と同様にして製造することができる。
また、３型結晶は、上記で得られる１型結晶または２型結晶を上記の混合溶媒に溶解させ、晶析させることによって得ることもできる。
【００５２】
上記製法によって得られる本発明の結晶は、出発物質のトリフルオロメチルケトン部分のケトン部分がジオールに変換されている。このことは、後記に示す単結晶のＸ線結晶回折及び１３Ｃ固体核磁気共鳴スペクトルによって確認されている。
【００５３】
本発明の結晶化された化合物は、エラスターゼ阻害活性を有し、好中球エラスターゼが病態発症に関与していると考えられている疾患、例えば、慢性閉塞性肺疾患（肺気腫および慢性気管支炎を含む）、慢性および急性間質性肺炎、特発性間質性肺炎(IIP)、びまん性汎細気管支炎、嚢胞性肺線維症、急性肺傷害(ALI)／急性呼吸促迫症候群(ARDS)、気管支拡張症、喘息、膵炎、腎炎、肝炎（肝不全）、慢性関節リウマチ、関節硬化症、変形性関節炎、乾癬、歯周病、アテローム性動脈硬化症、臓器移植における拒絶反応、虚血・再灌流時の組織傷害、ショック、敗血症、播種性血管内凝固症(DIC)や深部静脈血栓症等を含む血液凝固異常、結膜炎、角膜炎、角膜潰瘍、クローン病、全身性エリテマトーデスの治療／または予防剤として有用であると考えられる。
【００５４】
本発明の化合物Ａの結晶は、好ましくは経口投与される。その投与量は、患者の症状、体重および年齢などにより大いに変動し得る。例えば、経口投与の場合、化合物Ａの用量は、通常１日につき体重60 kg当たり約 0.5 〜約 5000 mgの範囲内であり、好ましくは 1日につき体重60 kg当たり約5 〜 約 2000 mgの範囲内であり、最も好ましくは1日につき体重60 kg当たり15 〜 300 mgの範囲内にある。
【００５５】
本発明の化合物Ａの結晶は、通常の製剤の形で投与される。かかる通常の製剤としては、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、水性もしくは油性の液剤などが挙げられる。これらの製剤は、化合物Ａを０．０１重量％以上、好ましくは０．１〜７０重量％の割合で含有することができる。これらの製剤はまた、治療上有効な他の成分を含有していてもよい。
【００５６】
これらの薬学上の製剤は、通常の薬学的に許容しうる製剤化成分を用い、通常の手法にて調合、製剤され得る。製剤化成分としては、製剤分野において常用され、かつ有効成分と反応しない物質が用いられる。
【実施例】
【００５７】
以下、参考例および実施例を挙げて本発明の新規な結晶形について説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
【００５８】
参考例１ Ｎ−［（１Ｓ）−２−（（２Ｓ）−２−｛Ｎ−［（１Ｓ）−３，３，３−トリフルオロ−１−（メチルエチル）−２−オキソプロピル］カルバモイル｝ピロリジニル）−１−（メチルエチル）−２−オキソエチル］−（１−ｔｅｒｔ−ブチル−５−メチルピラゾル−４−イル）カルボキサミド（化合物Ｂ）の製造
【００５９】
【化３】
【００６０】
工程１: Ｎ−[(１Ｓ)−２−((２Ｓ)−２−｛Ｎ−[(１Ｓ,２Ｓ)−３,３,３−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−１−(メチルエチル)プロピル]カルバモイル｝ピロリジニル)−１−(メチルエチル)−２−オキソエチル]−（１−ｔｅｒｔ−ブチル−５−メチルピラゾル−４−イル）カルボキサミド（化合物２）の製造：
工程１の出発物質である[(２Ｓ)−１−((２Ｓ)−２−アミノ−３−メチルブタノイル)ピロリジン−２−イル]−N−[(１Ｓ,２Ｓ)−３,３,３−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−１−(メチルエチル)プロピル]カルボキサミドトシル酸塩（化合物１）は、国際公開公報ＷＯ00/52032に記載の方法に準じて製造した。
【００６１】
得られた化合物１を２２．８ｇ(４２．３mmol)および１−ｔｅｒｔ−ブチル−５−メチルピラゾール−４−カルボン酸を７．０ｇ(３８．４mmol)含むピリジン溶液(１５０ｍｌ)に、１−エチル−３−(３−ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩を８．８ｇ(４６．１mmol)加え、室温にて１４時間攪拌したのち反応液を減圧濃縮した。
【００６２】
残渣に酢酸エチルを加え、１０％クエン酸水溶液で２回、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、次いで飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧留去し、標題化合物（化合物２）１８．８ｇ(９２％)を得た。
ＡＰＣＩ−ＭＳ：５３２（ＭＨ＋）。
【００６３】
工程２：Ｎ−［（１Ｓ）−２−（（２Ｓ）−２−｛Ｎ−［（１Ｓ）−３，３，３−トリフルオロ−１−（メチルエチル）−２−オキソプロピル］カルバモイル｝ピロリジニル）−１−（メチルエチル）−２−オキソエチル］−（１−ｔｅｒｔ−ブチル−５−メチルピラゾル−４−イル）カルボキサミド（化合物Ｂ）の製造：
１８．７ｇ(３５．２mmol)の工程１で得た化合物２を塩化メチレン(１４０ｍｌ)とジメチルスルホキシド(３５ｍｌ)の混合溶媒に溶解し、１−エチル−３−(３−ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩を２７．０ｇ(１４０．１mmol)加え、氷冷下で懸濁したところにジクロロ酢酸を２．９ｍｌ(３５．２mmol)滴下し、氷冷下で１５分間攪拌した。反応完了後、反応液に氷水を加え酢酸エチルで抽出し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、氷水、次いで飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(溶出液：酢酸エチル−ｎ−ヘキサン)で精製した。目的物を含む画分を減圧濃縮乾固し、非晶質である標題化合物（化合物Ｂ）１６．４ｇ(８８％)を得た。
ＡＰＣＩ−ＭＳ：５３０（ＭＨ＋）
元素分析： Ｃ２５Ｈ３８Ｆ３Ｎ５Ｏ４・０．７５Ｈ２Ｏとして
計算値 Ｃ ５５．２９ Ｈ ７．３３ Ｆ １０．４９ Ｎ １２．８９
実験値 Ｃ ５５．４１ Ｈ ７．３１ Ｆ １０．２８ Ｎ １２．８０。
【００６４】
実施例１ １型結晶の製造
酢酸エチル４１ｍｌに化合物Ｂ １０．４ｇ(１９．６mmol)を加えて室温で溶解し、蒸留水０．３６ｍｌ(１９．６mmol)を加え室温で一晩緩やかに攪拌した。結晶が析出したが、シクロヘキサン１０ｍｌを追加し、さらに一晩攪拌した。析出した結晶を濾取し、結晶を少量の酢酸エチル：シクロヘキサン＝４：１で洗浄した後、５０℃で一晩送風乾燥して１型結晶を得た。収量６．５５ｇ（収率６１％）
元素分析：Ｃ２５Ｈ４０Ｆ３Ｎ５Ｏ５として
計算値 Ｃ ５４．８３、Ｈ ７．３６、Ｆ １０．４１、Ｎ １２．７９
測定値 Ｃ ５４．７９、Ｈ ７．３６、Ｆ １０．２６、Ｎ １２．８２。
【００６５】
実施例２ ２型結晶の製造
トルエン２０ｍｌに化合物Ｂ １２．１ｇ(２２．８mmol)を加えて室温で溶解し、攪拌しながらジエチルエーテル２０ｍｌを加えた。容器口を開口したまま室温で２晩攪拌し、析出した結晶を濾取した。得られた結晶を少量のジエチルエーテルで洗浄した後、５０℃で一晩送風乾燥して、２型結晶を得た。収量１０．６ｇ（収率８４％）
元素分析：Ｃ２５Ｈ４０Ｆ３Ｎ５Ｏ５として
計算値 Ｃ ５４．８３、Ｈ ７．３６、Ｆ １０．４１、Ｎ １２．７９
測定値 Ｃ ５４．６５、Ｈ ７．３３、Ｆ １０．２９、Ｎ １２．８１。
【００６６】
実施例３ ２型結晶の製造
トルエン５０ｍｌに化合物Ｂ １３．０ｇ(２４．５mmol)を加えて室温で溶解し、蒸留水０．４４ｇ(２４．５mmol)を加え室温で一晩攪拌した。析出した結晶を濾取し、得られた結晶をジエチルエーテル２０ｍｌで洗浄した後、４５℃で４日間送風乾燥して、２型結晶を得た。収量１０．０ｇ（収率７７％）
元素分析：Ｃ２５Ｈ４０Ｆ３Ｎ５Ｏ５として
計算値 Ｃ ５４．８３、Ｈ ７．３６、Ｆ １０．４１、Ｎ １２．７９
測定値 Ｃ ５４．６５、Ｈ ７．３０、Ｆ １０．３３、Ｎ １２．７５。
【００６７】
実施例４ １型結晶の製造
酢酸エチル３３．６ｍｌに実施例３で得られた２型結晶５．６０ｇ(１０．２mmol)を加えて１２０℃のホットプレート上で溶解し、徐々に室温に戻しながら一晩攪拌した。析出した結晶を濾取し、室温で一晩送風乾燥して１型結晶を得た。収量３．３４ｇ（収率６０％）。
【００６８】
実施例５ ３型結晶の製造
酢酸ｎ−プロピル４ｍｌに上記実施例で得られた１型結晶１ｇ（１．８２mmol）を加えて１３０℃のホットプレート上で溶解し、メチルシクロヘキサン６ｍｌを加え、４℃で１日攪拌することなく放置した。析出した結晶を濾取し、得られた結晶をメチルシクロヘキサン６ｍｌで洗浄した後、減圧下、４０℃で乾燥して、結晶を得た。収量０．６３ｇ（収率６３％）
元素分析：Ｃ２５Ｈ４０Ｆ３Ｎ５Ｏ５として
計算値 Ｃ ５４．８３、Ｈ ７．３６、Ｆ １０．４１、Ｎ １２．７９
測定値 Ｃ ５４．９５、Ｈ ７．２１、Ｆ １０．３６、Ｎ １２．７１。
【００６９】
実施例６ 単結晶（１型結晶）の製造およびその単結晶Ｘ線回折
実施例１で得た１型結晶５ｍｇを２００μｌの２−ヘキサノンに溶解させ、室温下ヘキサン蒸気中に一日間静置して保存することによって単結晶（single crystal(０．４×０．２×０．２ｍｍ)）を得た。得られた単結晶を用いて、単結晶Ｘ線結晶回折をおこなった。条件は以下のとおりである。
装置：ブルカー エイエックスエス（Bruker AXS）社製 単結晶Ｘ線回折装置SMART APEX CCD
ターゲット：モリブデン（波長 0.71073 Å）
電圧：50 kV
電流：90 mA
測定温度：−173℃
結晶学的データは表７に示す。また、原子座標と等方性温度因子データ及び結合距離と結合角データを表８及び表９に示す。併せて、特定の原子間の距離を表１０に示す。そのデータに基づいて得られた単結晶構造データおよび単結晶パッキングデータを各々図１及び図２に示す。尚、表８〜１０に記載の原子の番号は、図１に記載の番号である。
【００７０】
【表７】
【００７１】
【表８】
【００７２】
【表９】
【００７３】
【表１０】
【００７４】
これらデータから、トリフルオロメチルケトン部分に2個の酸素原子（Ｏ1及びＯ2）が存在し、これら酸素原子が結合している炭素原子（Ｃ2）との距離はそれぞれ1.397 Åと等しいこと、2個の酸素原子の温度因子の値は個々に正常値を示しており、1個の酸素原子が振動して2個に観測されるといったゆらぎではなかったこと、及びこれら基が分子内で水素結合を形成し、結晶構造の安定化に寄与していることが判明した。この結果、当該ケトンは２本の水酸基、即ち、ジオールに変換されていることが確認できた。
【００７５】
１３Ｃ固体核磁気共鳴スペクトル
１型結晶、２型結晶及び３型結晶を用いて１３Ｃ ＮＭＲ測定を行った。
【００７６】
測定条件は以下のとおりである。
装置：バリアン（Varian）社製 マーキュリープラス（mercury plus）
磁場：４００ＭＨｚ
図３〜図５に各々１型〜３型結晶の固体状態の１３Ｃ核磁気共鳴スペクトルを示す。
【００７７】
この結果、１型〜３型の結晶のいずれも、トリフルオロメチルケトンのカルボニル炭素に由来するピーク（通常190ppm付近）は見られず、ジオールの４級炭素に由来するピーク（94.8ppm（１型）、95.4ppm（２型）、95.1ppm（３型））が検出され、
トリフルオロメチルケトンのカルボニル部分が２本の水酸基、即ち、ジオールに変換されていることが確認できた。
【００７８】
粉末Ｘ線結晶回折、熱分析およびラマン分光分析
実施例で得た１型結晶、２型結晶及び３型結晶について、以下の条件により、粉末Ｘ線回折測定（２種類）、示差走査熱量計（ＤＳＣ）および熱重量分析計（ＴＧ）による熱分析、ならびにラマン分光分析を行った。それぞれの結果を１型結晶については図６〜図９に、２型結晶については図１０〜図１３、３型結晶については図１４〜図１７に示す。
【００７９】
尚、ラマン分光分析は、化合物Ｂについても行い、図１８に、ラマンスペクトルのチャートを、図１９〜図２１にラマンスペクトルのチャートを拡大したもの（３５５０〜３０５０ｃｍ−１、３０５０〜２８５０ｃｍ−１、１７５０〜１３８０ｃｍ−１）を示す。尚、図１８と図１９は各結晶と化合物IIのデータを重ねて示し、図２０と図２１は各結晶のデータを重ねて示す。
【００８０】
（１）粉末Ｘ線回折
装置：スペクトリス（Ｓｐｅｃｔｒｉｓ）社製 Ｘ’Ｐｅｒｔ Ａｌｐｈａ １
線源：ＣｕＫα１線
管電圧： ４５ ｋＶ
管電流： ４０ ｍＡ
検出器：Ｘ’Ｃｅｌｅｒａｔｏｒ
ステップ：０．０１６７°
各ステップにおける積算時間：１００秒／ステップ
ソーラースリット：０．０１°。
【００８１】
（２）高輝度放射光施設ＳＰｒｉｎｇ−８ ＢＬ２４ＸＵ Ｈｕｔｃｈ Ｂを用いた粉末Ｘ線回折：
装置：ＢＬ２４ＸＵ Ｈｕｔｃｈ Ｂに設置された小型回折計
測定エネルギー：１０ＫｅＶ（1.2142Å）
測定試料：１ｍｍφガラスキャピラリーに封入
第１スリット：０．２ｍｍ
第２スリット：０．１ｍｍ
測定間隔：０．００４°（２θ）
測定範囲：３．２〜２４．１°（２θ）
スキャン速度：２〜４秒
（３）示差走査熱量計（ＤＳＣ）による熱分析
装置：パーキンエルマー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）社製 Ｐｙｒｉｓ １
試料量： ３〜４ ｍｇ、
試料セル： アルミニウムセル
窒素ガス流量： ２０ ml/分
昇温速度： １０℃／分。
【００８２】
（４）熱重量分析計（ＴＧ）による熱分析
装置：パーキンエルマー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）社製 ＴＧＡ ７
試料量： ５〜１０ ｍｇ、
試料セル： プラチナパン
窒素ガス流量： ７０ ml/分
昇温速度： １０℃／分。
【００８３】
（５）ラマン分光分析
装置：日本分光社製レーザーラマン分光光度計 NRS-2100
Ａｒ＋レーザー：５１４．５ｎｍ，１００ｍW
試料照射系：後方散乱照射
マクロ対物レンズ
アパーチャー：２００μｍ
入出射スリットS1：１００μｍ
中間スリットS3：２００μｍ
中間スリットS5：２００μｍ
測定範囲４００ｃｍ−１〜４０００ｃｍ−１
測定時間；9００秒
積算回数：3〜6回。
【００８４】
試験例１ ヒト好中球エラスターゼ(HNE)誘発肺出血に対する抑制活性
ハムスターにヒト好中球エラスターゼを気管支内投与すると肺において出血が誘発される。このため、エラスターゼ投与の一定時間後に経気道的に肺を洗浄して得られる気管支肺胞洗浄液中にはヘモグロビンが検出される。本実験は、このヘモグロビン濃度を測定することにより、本発明の結晶によってこの出血がどの程度抑制するか試験した。
【００８５】
ハムスタ−（Syrian系、7−10週齢の雄性）を一群あたり７〜１８匹に分け、各群について以下の処理を行った。
【００８６】
（Ａ）結晶の非投与群（病態対照群）：
25 単位のヒト好中球エラスターゼ(エラスチンプロダクト社（Elastin Product Co., Inc.）)を溶解した生理食塩水0.2 mlをハムスターの気管支内に投与して肺出血を誘発せしめた。エラスターゼ投与の１時間後、ハムスターを脱血により屠殺し、生理食塩液2.5 mlで経気道的に肺胞を２回洗浄し、その肺胞洗浄液５ml中のヘモグロビン濃度（414 nmの吸光度（Ａ４１４））を測定した。
【００８７】
（Ｂ）結晶投与群：
所定量の本発明の２型結晶又は３型結晶に、0.5% トラガント溶液を加えて懸濁し、これをハムスターに経口投与した（投与量：１０ mg/kg）。９０分後、前記（Ａ）と同様の方法によりヒト好中球エラスターゼを投与した。そして、その１時間後に（Ａ）と同様にして肺胞洗浄液中のヘモグロビン濃度を測定した。
【００８８】
出血抑制率（％）は、｛１−（(Ｂ)でのＡ４１４値／(Ａ)でのＡ４１４値）｝×１００により算出した。その結果、本発明の結晶は、７２％（２型結晶）又は７５％（３型結晶）の出血抑制率を有していた。
【００８９】
試験例２ 平衡吸湿性試験
無機塩の飽和水溶液で調湿したデシケーター（２５℃，０〜９３％ＲＨ；ＲＨは相対湿度を意味する）に化合物Ｂ、本発明の１型結晶及び２型結晶 各約５０ｍｇを入れ、１ヶ月間経時的に重量変化を測定した。試験結果を図２２に示す。図２２から明らかなように、化合物Ｂは高湿度になるほど重量増加が認められたが、化合物Ａの１型結晶も２型結晶もほとんど重量変化が認められなかった。
【００９０】
試験例３ 溶解度試験
（１）水に対する溶解度
本発明の１型結晶及び２型結晶 各々の適量と蒸留水をミクロテストチューブ（エッペンドルフ社製）にいれ、タイテック社製ミクロインキュベータM-36を用いて、３７℃、２０００ストローク／分で約５時間振騰し飽和させた。振騰後、フィルター（アドバンテックDISMIC-13HP:0.2μm）で濾過し、水溶液中濃度をＨＰＬＣで定量した。その結果、１型結晶の溶解度は290μg/ml、２型結晶のそれは4970μg/mlと両者とも水に対して良く溶解した。
【００９１】
（２）各ｐＨの緩衝液に対する溶解度
本発明の１型結晶及び２型結晶 各々の適量と各ｐＨの０．１mol/ｌリン酸緩衝液蒸留水をミクロテストチューブ（エッペンドルフ社製）にいれ、タイテック社製ミクロインキュベータM-36を用いて、３７℃、２０００ストローク／分で約５時間振騰し飽和させた。振騰後、フィルター（アドバンテックDISMIC-13HP:0.2μm）で濾過し、溶液中濃度をＨＰＬＣで定量した。試験結果を図２３に示す。１型結晶も２型結晶もｐＨ３〜８の間でほぼ一定に溶解することが判明した。
【００９２】
試験例４ 固体安定性試験（化学的安定性）
化合物Ｂ、本発明の１型結晶および２型結晶、各約１ｍｇを精密に１０ｍＬアンプルまたはバイアルに量り込み、種々の温度下で保存し、一定期間経過後の残存量及び分解物量をＨＰＬＣを用いて定量した。各測定時点における標準品は、同様に秤量して別途４℃で保存した、化合物Ｂ、１型結晶および２型結晶を用いた。その結果、４０℃で３箇月保存すると、化合物Ｂには分解物が見られたが、１型結晶及び２型結晶は６箇月経過後であっても安定であった。また、５０℃で１箇月保存すると、本発明の２型結晶には分解物が見られたが、１型結晶は安定であった。
【００９３】
試験例５ 固体安定性試験（物理的安定性）
本発明の１型結晶約５０ｍｇをサンプル瓶に量り込み、４０℃、６０℃、６０℃，７５％ＲＨ及び８０℃で１５日間保存し、性状および結晶について確認した。なお、結晶については、上記スペクトリス（Ｓｐｅｃｔｒｉｓ）社製 Ｘ’Ｐｅｒｔ Ａｌｐｈａ １を用い粉末X線回折を測定して結晶が変化したかどうか確認した。その結果、１型結晶はどの条件であっても、性状は白色・粉末であって、結晶も変化していないことが確認できた。
【産業上の利用可能性】
【００９４】
本発明の結晶化された化合物は、エラスターゼ阻害活性を有することにより好中球エラスターゼが病態発症に関与していると考えられている疾患の治療／または予防剤の原薬として有用である。
【図面の簡単な説明】
【００９５】
【図１】本発明の１型結晶の単結晶構造データである。
【図２】本発明の１型結晶の単結晶構造パッキングデータである
【図３】本発明の１型結晶の１３Ｃ固体ＮＭＲスペクトルチャートである。
【図４】本発明の２型結晶の１３Ｃ固体ＮＭＲスペクトルチャートである。
【図５】本発明の３型結晶の１３Ｃ固体ＮＭＲスペクトルチャートである。
【図６】スペクトリス（Ｓｐｅｃｔｒｉｓ）社製 Ｘ’Ｐｅｒｔ Ａｌｐｈａ １を用いて得られた本発明の１型結晶の粉末Ｘ線回折スペクトルチャートである。
【図７】高輝度放射光施設ＳＰｒｉｎｇ−８ ＢＬ２４ＸＵ Ｈｕｔｃｈ Ｂを用いて得られた本発明の１型結晶の粉末Ｘ線回折スペクトルチャートである。
【図８】本発明の１型結晶の示差走査熱量測定（ＤＳＣ）チャートである。
【図９】本発明の１型結晶の熱重量分析測定（ＴＧ）チャートである。
【図１０】スペクトリス（Ｓｐｅｃｔｒｉｓ）社製 Ｘ’Ｐｅｒｔ Ａｌｐｈａ １を用いて得られた本発明の２型結晶の粉末Ｘ線回折スペクトルチャートである。
【図１１】高輝度放射光施設ＳＰｒｉｎｇ−８ ＢＬ２４ＸＵ Ｈｕｔｃｈ Ｂを用いて得られた本発明の２型結晶の粉末Ｘ線回折スペクトルチャートである。
【図１２】本発明の２型結晶の示差走査熱量測定（ＤＳＣ）チャートである。
【図１３】本発明の２型結晶の熱重量分析測定（ＴＧ）チャートである。
【図１４】スペクトリス（Ｓｐｅｃｔｒｉｓ）社製 Ｘ’Ｐｅｒｔ Ａｌｐｈａ １を用いて得られた本発明の３型結晶の粉末Ｘ線回折スペクトルチャートである。
【図１５】高輝度放射光施設ＳＰｒｉｎｇ−８ ＢＬ２４ＸＵ Ｈｕｔｃｈ Ｂを用いて得られた本発明の３型結晶の粉末Ｘ線回折スペクトルチャートである。
【図１６】本発明の３型結晶の示差走査熱量測定（ＤＳＣ）チャートである。
【図１７】本発明の３型結晶の熱重量分析測定（ＴＧ）チャートである。
【図１８】本発明の１型〜３型結晶及び化合物Ｂのラマンスペクトルチャートである。
【図１９】本発明の１型〜３型結晶及び化合物Ｂのラマンスペクトルチャート（３５５０〜３０５０ｃｍ−１）である。
【図２０】本発明の１型〜３型結晶のラマンスペクトルチャート（３０５０〜２８５０ｃｍ−１）である。
【図２１】本発明の１型〜３型結晶のラマンスペクトルチャート（１７５０〜１３８０ｃｍ−１）である。
【図２２】本発明の１型結晶、２型結晶および化合物Ｂの吸湿性を示すグラフである。
【図２３】本発明の１型結晶および２型結晶の各ｐＨにおける溶解度を示すグラフである。
【技術分野】
【０００１】
本発明は医薬、特にエラスターゼ阻害作用を有する複素環式化合物の結晶多形、その製造方法およびそれを有効成分とする医薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
次式で示される構造を有する、Ｎ−［（１Ｓ）−２−（（２Ｓ）−２−｛Ｎ−［（１Ｓ）−３，３，３−トリフルオロ−１−（メチルエチル）−２−オキソプロピル］カルバモイル｝ピロリジニル）−１−（メチルエチル）−２−オキソエチル］−（１−ｔｅｒｔ−ブチル−５−メチルピラゾル−４−イル）カルボキサミド（以下、「化合物Ｂ」または「ケトン体」ということもある）は、エラスターゼ阻害剤として有用な化合物であり、特許文献１の実施例３２に記載されている。
【０００３】
【化１】
【０００４】
通常、医薬品の有効成分となる化合物は、強い薬理作用を有し、且つ低毒性であるとともに品質が一定であることが条件となる。そのためには結晶状態の化合物を原薬として用いることが求められている。しかしながら、特許文献１には上記化合物Ｂのみならずそこに記載の他の化合物群がすべて結晶ではなく非晶質であり、さらに結晶を得るための製造方法も記載されていない。
【特許文献１】国際公開第０３／０６６６７１号パンフレット
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、エラスターゼ阻害活性を有する化合物の結晶を得ることを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、上記化合物Ｂ、即ち、ケトン体の結晶を得る為に、鋭意検討を試みた。しかし、通常使用される種々の有機溶媒をもってしてもこの化合物を結晶化させることができなかった。ところが、化合物Ｂを特定の有機溶媒に溶解し、容器を開口状態にして放置したところ結晶化させることに成功した。しかし、分析の結果、得られた結晶は、大気中の水を吸って、水分子１個分の重量が増えていることが判明した。そこで、さらに検討を進めた結果、得られた結晶は、ケトン体のトリフルオロメチルケトン部位に１分子の水が附加したジオール体の結晶であること、およびこの結晶のエラスターゼ阻害活性は、ケトン体のそれがそのまま維持されているとの知見をえて、本発明を完成した。
【０００７】
本発明は、
項１：Ｎ−［（１Ｓ）−２−（（２Ｓ）−２−｛Ｎ−［（１Ｓ）−３，３，３−トリフルオロ−２，２−ジヒドロキシ−１−（メチルエチル）プロピル］カルバモイル｝ピロリジニル）−１−（メチルエチル）−２−オキソエチル］−（１−ｔｅｒｔ−ブチル−５−メチルピラゾル−４−イル）カルボキサミド（以下「化合物Ａ」または「ジオール体」ということもある）、即ち、下記構造の結晶を提供するものである。
【０００８】
【化２】
【０００９】
具体的には以下の発明を提供する。
【００１０】
項２： 回折角２θ（ＣｕＫα１線）で表したとき、約７．５°〜９．０°の位置にピークを有するＸ線粉末回折パターンを示す項１に記載の結晶。
【００１１】
項３： 回折角２θ（ＣｕＫα１線）で表したとき、約７．５°〜９．０°の位置に２本のピークを有するＸ線粉末回折パターンを示す項２に記載の結晶。
【００１２】
項４： 回折角２θ（ＣｕＫα１線）で表したとき、約１３．０°〜１４．０°の位置にピークを有するＸ線粉末回折パターンを示す項２または３に記載の結晶。
【００１３】
項５： 回折角２θ（ＣｕＫα１線）で表したとき、ほぼ８．０°、８．６°、９．２°、１０．６°、１１．９°、１３．６°、１４．５°および２０．４°の位置にピークを有するＸ線粉末回折パターンを示す項１〜４のいずれかに記載の化合物Ａの１型結晶。
【００１４】
項６： 昇温速度が１０℃／分の示差走査熱量測定において、約１６１℃に脱水吸熱ピークを有する項５に記載の化合物Ａの１型結晶。
【００１５】
項７： 回折角２θ（ＣｕＫα１線）で表したとき、ほぼ５．０°、７．６°、８．１°、８．７°、９．６°、１０．２°、１０．６°、１３．５°、１４．９°および１９．９°の位置にピークを有するＸ線粉末回折パターンを示す項１〜４のいずれかに記載の化合物Ａの２型結晶。
【００１６】
項８： 昇温速度が１０℃／分の示差走査熱量測定において、約１２６℃に脱水吸熱ピークを有する項７に記載の化合物Ａの２型結晶。
【００１７】
項９： 回折角２θ（ＣｕＫα１線）で表したとき、ほぼ４．８°、７．３°、８．１°、８．４°、９．４°、１２．５°、１４．３°、１６．４°および１９．１°の位置にピークを有するＸ線粉末回折パターンを示す項１〜３のいずれかに記載の化合物Ａの３型結晶。
【００１８】
項１０： 昇温速度が１０℃／分の示差走査熱量測定において、約１１４℃に脱水吸熱ピークを有する項９に記載の化合物Ａの３型結晶。
【００１９】
項１１： 項１〜１０のいずれかに記載の結晶を有効成分として含む医薬。
【００２０】
項１２： 項１〜１０のいずれかに記載の結晶を含む医薬組成物。
【００２１】
項１３： 化合物Ａの１型結晶の製造方法であって、以下のいずれかの有機溶媒：
（１）ギ酸エチル、酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸ｎ−プロピル、酢酸イソプロピル、酢酸イソブチル、酢酸ｎ−ブチルおよび酢酸イソアミルからなる群から選択されるエステル類、
（２）メチルイソブチルケトン、ジイソプロピルケトンおよび２−ヘキサノンからなる群から選択されるケトン類、
（３）ジエチルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、シクロペンチルメチルエーテルおよびジフェニルエーテルからなる群から選択されるエーテル類、および
（４）アセトニトリル
からなる群から選ばれる単一溶媒；
酢酸ｎ−プロピル、酢酸イソプロピル、酢酸イソブチル、酢酸イソアミル、メチルイソブチルケトン、ジイソプロピルケトン、シクロペンチルメチルエーテルおよび２−ヘキサノンからなる群から選ばれる１種の有機溶媒と、ジエチルエーテルまたはシクロヘキサンとの混合溶媒；
酢酸イソプロピル、酢酸イソブチル、酢酸イソアミル、メチルイソブチルケトン、ジイソプロピルケトン、シクロペンチルメチルエーテルおよび２−ヘキサノンからなる群から選ばれる１種の有機溶媒と、ｎ−ヘキサン、ジメトキシエタンおよびメチルシクロヘキサンからなる群から選ばれる１種の有機溶媒との混合溶媒；または
酢酸エチルとシクロヘキサンとの混合溶媒に
（ａ）化合物Ｂを溶解させ、これに水を添加した溶液から化合物Ａの１型結晶を晶析させるか、または
（ｂ）化合物Ａの２型結晶または３型結晶を上記溶媒に溶解させ、該溶液から化合物Ａの１型結晶を晶析させる
ことを特徴とする製造方法。
【００２２】
項１４： 化合物Ａの２型結晶の製造方法であって、以下のいずれかの有機溶媒：
ジクロロメタン、クロロホルム、クロロベンゼン、トルエン、キシレン、アニソール、ｎ−ヘキサン、メチルシクロヘキサンおよびｎ−ヘプタンからなる群から選ばれる単一溶媒；
トルエン、キシレンおよびアニソールからなる群から選ばれる１種の有機溶媒とジエチルエーテル、シクロヘキサン、ｎ−ヘキサンおよびメチルシクロヘキサンからなる群から選ばれる１種の有機溶媒との混合溶媒；または
トルエンとジメトキシエタンとの混合溶媒に
（ａ）化合物Ｂを溶解させ、これに水を添加した溶液から化合物Ａの２型結晶を晶析させるか、又は
（ｂ）化合物Ａの１型結晶または３型結晶を上記溶媒に溶解させ、該溶液から化合物Ａの２型結晶を晶析させる
ことを特徴とする製造方法。
【００２３】
項１５ 化合物Ａの３型結晶の製造方法であって、化合物Ｂを、酢酸ｎ−プロピルとメチルシクロヘキサンとの混合溶媒に溶解させ、これに水を添加した溶液から化合物Ａの３型結晶を晶析させるか、または化合物Ａの１型結晶または２型結晶を該混合溶媒に溶解させ、該溶液から化合物Ａの３型結晶を晶析させることを特徴とする製造方法。
【発明の効果】
【００２４】
本発明によれば、品質が安定している化合物の結晶を医薬品の原薬として供給することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２５】
本発明の化合物Ａの結晶は．化合物Ｂ，即ち、ケトン体を出発物質として製造することができる。このケトン体は、特許文献１に記載の方法によって製造することができる。
【００２６】
本発明者らの研究によって、化合物Ａの結晶として、少なくとも３種類の異なる結晶形が存在することが判明した。この３種類の結晶形を、以下、１型、２型および３型という。
【００２７】
化合物Ａの結晶は、Ｘ線粉末回折パターンにおいて、特徴的なピークを示す。即ち、該結晶は、回折角２θ（ＣｕＫα１線）で表したとき、約７．５°〜９．０°の位置にピーク、具体的には、２本のピークを有するＸ線粉末回折パターンを示す。また、１型結晶及び２型結晶は回折角２θ（ＣｕＫα１線）で表したとき、約１３．０°〜１４．０°の位置にピークも有する。
【００２８】
スペクトリス（Ｓｐｅｃｔｒｉｓ）社製 Ｘ’Ｐｅｒｔ Ａｌｐｈａ １の装置を用いて実施例で示す条件下で測定したときの１型〜３型各結晶の特徴的な主ピークの回折角（２θ（ＣｕＫα１線））は以下のとおりである。
【００２９】
【表１】
【００３０】
化合物Ａの結晶は、回折角２θ（１０ＫｅＶ）で表したときには、約６．０４°〜７．２４°の位置にピーク、具体的には、２本のピークを有するＸ線粉末回折パターンを示す。また、１型結晶及び２型結晶は回折角２θ（１０ＫｅＶ）で表して、約１０．４６°〜１１．２６°の位置にピークも有する。
【００３１】
高輝度放射光施設ＳＰｒｉｎｇ−８ ＢＬ２４ＸＵ Ｈｕｔｃｈ Ｂの装置を用いて実施例で示す条件下で測定したときの１型〜３型各結晶の特徴的な主ピークの回折角（２θ（１０ＫｅＶ））は以下のとおりである。
【００３２】
【表２】
【００３３】
１型〜３型の各結晶の昇温速度が１０℃／分の示差走査熱量測定（ＤＳＣ）における特徴および熱重量分析（ＴＧ）における特徴は以下のとおりである。
【００３４】
【表３】
【００３５】
本発明の化合物Ａの各結晶と化合物Ｂについてラマン分光分析を行うと、各結晶は３５００〜３１７０ｃｍ−１の範囲においてピークを有するが、化合物Ｂでは該範囲においてピークを持たないことから、本発明の結晶と化合物Ｂとは区別される。また、１〜３型結晶は、各々３５００〜３１７０ｃｍ−１の範囲、３０５０〜２８５０ｃｍ−１の範囲、１７５０〜１３８０ｃｍ−１の範囲においてピークパターンが異なり、各結晶間で区別できる。
【００３６】
本発明の化合物Ａの１型結晶、２型結晶及び３型結晶は、本明細書に記載の物理化学的性質によって特定されるものであるが、上記データは、測定方法や測定器具によって多少変わるものであるから、厳密に解されるべきではない。また、１型結晶、２型結晶及び３型結晶は、純粋な結晶に限られず、他の結晶が混在していてもよい。
【００３７】
１型結晶
化合物Ａの１型結晶は、実施例または以下に記載した方法によって製造することができる。即ち、１型結晶は、化合物Ｂを特定溶媒に溶解し、水を添加したのち放置することにより製造できる。「放置」は、通常、ゆっくりと攪拌しながらまたは静置させて数時間ないし数日間、通常、室温において行われる。
【００３８】
ここにおける、特定溶媒としては、例えば、次の（１）〜（４）に示される単一溶媒が挙げられる。
（１）ギ酸エチル、酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸ｎ−プロピル、酢酸イソプロピル、酢酸イソブチル、酢酸ｎ−ブチルおよび酢酸イソアミルからなる群から選択されるエステル類
（２）メチルイソブチルケトン、ジイソプロピルケトンおよび２−ヘキサノンからなる群から選択されるケトン類
（３）ジエチルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、シクロペンチルメチルエーテルおよびジフェニルエーテルからなる群から選択されるエーテル類
（４）アセトニトリル。
【００３９】
または、以下の組み合わせの混合溶媒であってもよい。
【００４０】
【表４】
【００４１】
【表５】
【００４２】
上記混合溶媒の他に、下記実施例に示す酢酸エチルとシクロヘキサンとの混合溶媒も例示できる。
【００４３】
これらの溶媒の使用量は、化合物Ｂを溶解するに必要な最小量が好ましい。また、水の添加量は、ジオール体を形成するに必要な量であり、収率を上げるために化合物Ｂと当モルないしはやや過剰量の範囲から選択するのが好ましい。なお、水の添加は、人為的に行わず、大気中の水分を吸収させることによって行える場合もある。混合溶媒を用いる場合には、例えば、混合溶媒に化合物Ｂを溶解させて放置してもよいし、一方の有機溶媒に化合物Ｂを溶解させて放置し、これに他の有機溶媒を添加して放置してもよい。かくして析出した結晶は、通常、濾取後、適当な溶媒で洗浄し、乾燥される。
【００４４】
また、１型結晶は下記で得られる２型結晶または３型結晶を上記特定溶媒に溶解させ、晶析させることによって得ることもできる。
【００４５】
２型結晶
化合物Ａの２型結晶は、実施例または以下に記載した方法によって製造することができる。即ち、特定溶媒として次の単一溶媒または混合溶媒を用いるほかは、前記の１型結晶の場合と同様にして製造することができる。
【００４６】
単一溶媒としては、以下のものが例示できる。
・ジクロロメタン、クロロホルム、クロロベンゼン、トルエン、キシレン、アニソール、ｎ−ヘキサン、メチルシクロヘキサン、ｎ−ヘプタン。
【００４７】
混合溶媒としては以下の組み合わせが例示できる。
【００４８】
【表６】
【００４９】
上記例のほかに、トルエンとジメトキシエタンとの混合溶媒も例示できる。
【００５０】
また、２型結晶は、上記で得られる１型結晶または下記で得られる３型結晶を上記特定溶媒に溶解させ、晶析させることによって得ることもできる。
【００５１】
３型結晶
化合物Ａの３型結晶は、実施例または以下に記載した方法によって製造することができる。即ち、特定溶媒として酢酸ｎ−プロピルとメチルシクロヘキサンとの混合溶媒を用いて、前記の１型結晶の場合と同様にして製造することができる。
また、３型結晶は、上記で得られる１型結晶または２型結晶を上記の混合溶媒に溶解させ、晶析させることによって得ることもできる。
【００５２】
上記製法によって得られる本発明の結晶は、出発物質のトリフルオロメチルケトン部分のケトン部分がジオールに変換されている。このことは、後記に示す単結晶のＸ線結晶回折及び１３Ｃ固体核磁気共鳴スペクトルによって確認されている。
【００５３】
本発明の結晶化された化合物は、エラスターゼ阻害活性を有し、好中球エラスターゼが病態発症に関与していると考えられている疾患、例えば、慢性閉塞性肺疾患（肺気腫および慢性気管支炎を含む）、慢性および急性間質性肺炎、特発性間質性肺炎(IIP)、びまん性汎細気管支炎、嚢胞性肺線維症、急性肺傷害(ALI)／急性呼吸促迫症候群(ARDS)、気管支拡張症、喘息、膵炎、腎炎、肝炎（肝不全）、慢性関節リウマチ、関節硬化症、変形性関節炎、乾癬、歯周病、アテローム性動脈硬化症、臓器移植における拒絶反応、虚血・再灌流時の組織傷害、ショック、敗血症、播種性血管内凝固症(DIC)や深部静脈血栓症等を含む血液凝固異常、結膜炎、角膜炎、角膜潰瘍、クローン病、全身性エリテマトーデスの治療／または予防剤として有用であると考えられる。
【００５４】
本発明の化合物Ａの結晶は、好ましくは経口投与される。その投与量は、患者の症状、体重および年齢などにより大いに変動し得る。例えば、経口投与の場合、化合物Ａの用量は、通常１日につき体重60 kg当たり約 0.5 〜約 5000 mgの範囲内であり、好ましくは 1日につき体重60 kg当たり約5 〜 約 2000 mgの範囲内であり、最も好ましくは1日につき体重60 kg当たり15 〜 300 mgの範囲内にある。
【００５５】
本発明の化合物Ａの結晶は、通常の製剤の形で投与される。かかる通常の製剤としては、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、水性もしくは油性の液剤などが挙げられる。これらの製剤は、化合物Ａを０．０１重量％以上、好ましくは０．１〜７０重量％の割合で含有することができる。これらの製剤はまた、治療上有効な他の成分を含有していてもよい。
【００５６】
これらの薬学上の製剤は、通常の薬学的に許容しうる製剤化成分を用い、通常の手法にて調合、製剤され得る。製剤化成分としては、製剤分野において常用され、かつ有効成分と反応しない物質が用いられる。
【実施例】
【００５７】
以下、参考例および実施例を挙げて本発明の新規な結晶形について説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
【００５８】
参考例１ Ｎ−［（１Ｓ）−２−（（２Ｓ）−２−｛Ｎ−［（１Ｓ）−３，３，３−トリフルオロ−１−（メチルエチル）−２−オキソプロピル］カルバモイル｝ピロリジニル）−１−（メチルエチル）−２−オキソエチル］−（１−ｔｅｒｔ−ブチル−５−メチルピラゾル−４−イル）カルボキサミド（化合物Ｂ）の製造
【００５９】
【化３】
【００６０】
工程１: Ｎ−[(１Ｓ)−２−((２Ｓ)−２−｛Ｎ−[(１Ｓ,２Ｓ)−３,３,３−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−１−(メチルエチル)プロピル]カルバモイル｝ピロリジニル)−１−(メチルエチル)−２−オキソエチル]−（１−ｔｅｒｔ−ブチル−５−メチルピラゾル−４−イル）カルボキサミド（化合物２）の製造：
工程１の出発物質である[(２Ｓ)−１−((２Ｓ)−２−アミノ−３−メチルブタノイル)ピロリジン−２−イル]−N−[(１Ｓ,２Ｓ)−３,３,３−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−１−(メチルエチル)プロピル]カルボキサミドトシル酸塩（化合物１）は、国際公開公報ＷＯ00/52032に記載の方法に準じて製造した。
【００６１】
得られた化合物１を２２．８ｇ(４２．３mmol)および１−ｔｅｒｔ−ブチル−５−メチルピラゾール−４−カルボン酸を７．０ｇ(３８．４mmol)含むピリジン溶液(１５０ｍｌ)に、１−エチル−３−(３−ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩を８．８ｇ(４６．１mmol)加え、室温にて１４時間攪拌したのち反応液を減圧濃縮した。
【００６２】
残渣に酢酸エチルを加え、１０％クエン酸水溶液で２回、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、次いで飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧留去し、標題化合物（化合物２）１８．８ｇ(９２％)を得た。
ＡＰＣＩ−ＭＳ：５３２（ＭＨ＋）。
【００６３】
工程２：Ｎ−［（１Ｓ）−２−（（２Ｓ）−２−｛Ｎ−［（１Ｓ）−３，３，３−トリフルオロ−１−（メチルエチル）−２−オキソプロピル］カルバモイル｝ピロリジニル）−１−（メチルエチル）−２−オキソエチル］−（１−ｔｅｒｔ−ブチル−５−メチルピラゾル−４−イル）カルボキサミド（化合物Ｂ）の製造：
１８．７ｇ(３５．２mmol)の工程１で得た化合物２を塩化メチレン(１４０ｍｌ)とジメチルスルホキシド(３５ｍｌ)の混合溶媒に溶解し、１−エチル−３−(３−ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩を２７．０ｇ(１４０．１mmol)加え、氷冷下で懸濁したところにジクロロ酢酸を２．９ｍｌ(３５．２mmol)滴下し、氷冷下で１５分間攪拌した。反応完了後、反応液に氷水を加え酢酸エチルで抽出し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、氷水、次いで飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(溶出液：酢酸エチル−ｎ−ヘキサン)で精製した。目的物を含む画分を減圧濃縮乾固し、非晶質である標題化合物（化合物Ｂ）１６．４ｇ(８８％)を得た。
ＡＰＣＩ−ＭＳ：５３０（ＭＨ＋）
元素分析： Ｃ２５Ｈ３８Ｆ３Ｎ５Ｏ４・０．７５Ｈ２Ｏとして
計算値 Ｃ ５５．２９ Ｈ ７．３３ Ｆ １０．４９ Ｎ １２．８９
実験値 Ｃ ５５．４１ Ｈ ７．３１ Ｆ １０．２８ Ｎ １２．８０。
【００６４】
実施例１ １型結晶の製造
酢酸エチル４１ｍｌに化合物Ｂ １０．４ｇ(１９．６mmol)を加えて室温で溶解し、蒸留水０．３６ｍｌ(１９．６mmol)を加え室温で一晩緩やかに攪拌した。結晶が析出したが、シクロヘキサン１０ｍｌを追加し、さらに一晩攪拌した。析出した結晶を濾取し、結晶を少量の酢酸エチル：シクロヘキサン＝４：１で洗浄した後、５０℃で一晩送風乾燥して１型結晶を得た。収量６．５５ｇ（収率６１％）
元素分析：Ｃ２５Ｈ４０Ｆ３Ｎ５Ｏ５として
計算値 Ｃ ５４．８３、Ｈ ７．３６、Ｆ １０．４１、Ｎ １２．７９
測定値 Ｃ ５４．７９、Ｈ ７．３６、Ｆ １０．２６、Ｎ １２．８２。
【００６５】
実施例２ ２型結晶の製造
トルエン２０ｍｌに化合物Ｂ １２．１ｇ(２２．８mmol)を加えて室温で溶解し、攪拌しながらジエチルエーテル２０ｍｌを加えた。容器口を開口したまま室温で２晩攪拌し、析出した結晶を濾取した。得られた結晶を少量のジエチルエーテルで洗浄した後、５０℃で一晩送風乾燥して、２型結晶を得た。収量１０．６ｇ（収率８４％）
元素分析：Ｃ２５Ｈ４０Ｆ３Ｎ５Ｏ５として
計算値 Ｃ ５４．８３、Ｈ ７．３６、Ｆ １０．４１、Ｎ １２．７９
測定値 Ｃ ５４．６５、Ｈ ７．３３、Ｆ １０．２９、Ｎ １２．８１。
【００６６】
実施例３ ２型結晶の製造
トルエン５０ｍｌに化合物Ｂ １３．０ｇ(２４．５mmol)を加えて室温で溶解し、蒸留水０．４４ｇ(２４．５mmol)を加え室温で一晩攪拌した。析出した結晶を濾取し、得られた結晶をジエチルエーテル２０ｍｌで洗浄した後、４５℃で４日間送風乾燥して、２型結晶を得た。収量１０．０ｇ（収率７７％）
元素分析：Ｃ２５Ｈ４０Ｆ３Ｎ５Ｏ５として
計算値 Ｃ ５４．８３、Ｈ ７．３６、Ｆ １０．４１、Ｎ １２．７９
測定値 Ｃ ５４．６５、Ｈ ７．３０、Ｆ １０．３３、Ｎ １２．７５。
【００６７】
実施例４ １型結晶の製造
酢酸エチル３３．６ｍｌに実施例３で得られた２型結晶５．６０ｇ(１０．２mmol)を加えて１２０℃のホットプレート上で溶解し、徐々に室温に戻しながら一晩攪拌した。析出した結晶を濾取し、室温で一晩送風乾燥して１型結晶を得た。収量３．３４ｇ（収率６０％）。
【００６８】
実施例５ ３型結晶の製造
酢酸ｎ−プロピル４ｍｌに上記実施例で得られた１型結晶１ｇ（１．８２mmol）を加えて１３０℃のホットプレート上で溶解し、メチルシクロヘキサン６ｍｌを加え、４℃で１日攪拌することなく放置した。析出した結晶を濾取し、得られた結晶をメチルシクロヘキサン６ｍｌで洗浄した後、減圧下、４０℃で乾燥して、結晶を得た。収量０．６３ｇ（収率６３％）
元素分析：Ｃ２５Ｈ４０Ｆ３Ｎ５Ｏ５として
計算値 Ｃ ５４．８３、Ｈ ７．３６、Ｆ １０．４１、Ｎ １２．７９
測定値 Ｃ ５４．９５、Ｈ ７．２１、Ｆ １０．３６、Ｎ １２．７１。
【００６９】
実施例６ 単結晶（１型結晶）の製造およびその単結晶Ｘ線回折
実施例１で得た１型結晶５ｍｇを２００μｌの２−ヘキサノンに溶解させ、室温下ヘキサン蒸気中に一日間静置して保存することによって単結晶（single crystal(０．４×０．２×０．２ｍｍ)）を得た。得られた単結晶を用いて、単結晶Ｘ線結晶回折をおこなった。条件は以下のとおりである。
装置：ブルカー エイエックスエス（Bruker AXS）社製 単結晶Ｘ線回折装置SMART APEX CCD
ターゲット：モリブデン（波長 0.71073 Å）
電圧：50 kV
電流：90 mA
測定温度：−173℃
結晶学的データは表７に示す。また、原子座標と等方性温度因子データ及び結合距離と結合角データを表８及び表９に示す。併せて、特定の原子間の距離を表１０に示す。そのデータに基づいて得られた単結晶構造データおよび単結晶パッキングデータを各々図１及び図２に示す。尚、表８〜１０に記載の原子の番号は、図１に記載の番号である。
【００７０】
【表７】
【００７１】
【表８】
【００７２】
【表９】
【００７３】
【表１０】
【００７４】
これらデータから、トリフルオロメチルケトン部分に2個の酸素原子（Ｏ1及びＯ2）が存在し、これら酸素原子が結合している炭素原子（Ｃ2）との距離はそれぞれ1.397 Åと等しいこと、2個の酸素原子の温度因子の値は個々に正常値を示しており、1個の酸素原子が振動して2個に観測されるといったゆらぎではなかったこと、及びこれら基が分子内で水素結合を形成し、結晶構造の安定化に寄与していることが判明した。この結果、当該ケトンは２本の水酸基、即ち、ジオールに変換されていることが確認できた。
【００７５】
１３Ｃ固体核磁気共鳴スペクトル
１型結晶、２型結晶及び３型結晶を用いて１３Ｃ ＮＭＲ測定を行った。
【００７６】
測定条件は以下のとおりである。
装置：バリアン（Varian）社製 マーキュリープラス（mercury plus）
磁場：４００ＭＨｚ
図３〜図５に各々１型〜３型結晶の固体状態の１３Ｃ核磁気共鳴スペクトルを示す。
【００７７】
この結果、１型〜３型の結晶のいずれも、トリフルオロメチルケトンのカルボニル炭素に由来するピーク（通常190ppm付近）は見られず、ジオールの４級炭素に由来するピーク（94.8ppm（１型）、95.4ppm（２型）、95.1ppm（３型））が検出され、
トリフルオロメチルケトンのカルボニル部分が２本の水酸基、即ち、ジオールに変換されていることが確認できた。
【００７８】
粉末Ｘ線結晶回折、熱分析およびラマン分光分析
実施例で得た１型結晶、２型結晶及び３型結晶について、以下の条件により、粉末Ｘ線回折測定（２種類）、示差走査熱量計（ＤＳＣ）および熱重量分析計（ＴＧ）による熱分析、ならびにラマン分光分析を行った。それぞれの結果を１型結晶については図６〜図９に、２型結晶については図１０〜図１３、３型結晶については図１４〜図１７に示す。
【００７９】
尚、ラマン分光分析は、化合物Ｂについても行い、図１８に、ラマンスペクトルのチャートを、図１９〜図２１にラマンスペクトルのチャートを拡大したもの（３５５０〜３０５０ｃｍ−１、３０５０〜２８５０ｃｍ−１、１７５０〜１３８０ｃｍ−１）を示す。尚、図１８と図１９は各結晶と化合物IIのデータを重ねて示し、図２０と図２１は各結晶のデータを重ねて示す。
【００８０】
（１）粉末Ｘ線回折
装置：スペクトリス（Ｓｐｅｃｔｒｉｓ）社製 Ｘ’Ｐｅｒｔ Ａｌｐｈａ １
線源：ＣｕＫα１線
管電圧： ４５ ｋＶ
管電流： ４０ ｍＡ
検出器：Ｘ’Ｃｅｌｅｒａｔｏｒ
ステップ：０．０１６７°
各ステップにおける積算時間：１００秒／ステップ
ソーラースリット：０．０１°。
【００８１】
（２）高輝度放射光施設ＳＰｒｉｎｇ−８ ＢＬ２４ＸＵ Ｈｕｔｃｈ Ｂを用いた粉末Ｘ線回折：
装置：ＢＬ２４ＸＵ Ｈｕｔｃｈ Ｂに設置された小型回折計
測定エネルギー：１０ＫｅＶ（1.2142Å）
測定試料：１ｍｍφガラスキャピラリーに封入
第１スリット：０．２ｍｍ
第２スリット：０．１ｍｍ
測定間隔：０．００４°（２θ）
測定範囲：３．２〜２４．１°（２θ）
スキャン速度：２〜４秒
（３）示差走査熱量計（ＤＳＣ）による熱分析
装置：パーキンエルマー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）社製 Ｐｙｒｉｓ １
試料量： ３〜４ ｍｇ、
試料セル： アルミニウムセル
窒素ガス流量： ２０ ml/分
昇温速度： １０℃／分。
【００８２】
（４）熱重量分析計（ＴＧ）による熱分析
装置：パーキンエルマー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）社製 ＴＧＡ ７
試料量： ５〜１０ ｍｇ、
試料セル： プラチナパン
窒素ガス流量： ７０ ml/分
昇温速度： １０℃／分。
【００８３】
（５）ラマン分光分析
装置：日本分光社製レーザーラマン分光光度計 NRS-2100
Ａｒ＋レーザー：５１４．５ｎｍ，１００ｍW
試料照射系：後方散乱照射
マクロ対物レンズ
アパーチャー：２００μｍ
入出射スリットS1：１００μｍ
中間スリットS3：２００μｍ
中間スリットS5：２００μｍ
測定範囲４００ｃｍ−１〜４０００ｃｍ−１
測定時間；9００秒
積算回数：3〜6回。
【００８４】
試験例１ ヒト好中球エラスターゼ(HNE)誘発肺出血に対する抑制活性
ハムスターにヒト好中球エラスターゼを気管支内投与すると肺において出血が誘発される。このため、エラスターゼ投与の一定時間後に経気道的に肺を洗浄して得られる気管支肺胞洗浄液中にはヘモグロビンが検出される。本実験は、このヘモグロビン濃度を測定することにより、本発明の結晶によってこの出血がどの程度抑制するか試験した。
【００８５】
ハムスタ−（Syrian系、7−10週齢の雄性）を一群あたり７〜１８匹に分け、各群について以下の処理を行った。
【００８６】
（Ａ）結晶の非投与群（病態対照群）：
25 単位のヒト好中球エラスターゼ(エラスチンプロダクト社（Elastin Product Co., Inc.）)を溶解した生理食塩水0.2 mlをハムスターの気管支内に投与して肺出血を誘発せしめた。エラスターゼ投与の１時間後、ハムスターを脱血により屠殺し、生理食塩液2.5 mlで経気道的に肺胞を２回洗浄し、その肺胞洗浄液５ml中のヘモグロビン濃度（414 nmの吸光度（Ａ４１４））を測定した。
【００８７】
（Ｂ）結晶投与群：
所定量の本発明の２型結晶又は３型結晶に、0.5% トラガント溶液を加えて懸濁し、これをハムスターに経口投与した（投与量：１０ mg/kg）。９０分後、前記（Ａ）と同様の方法によりヒト好中球エラスターゼを投与した。そして、その１時間後に（Ａ）と同様にして肺胞洗浄液中のヘモグロビン濃度を測定した。
【００８８】
出血抑制率（％）は、｛１−（(Ｂ)でのＡ４１４値／(Ａ)でのＡ４１４値）｝×１００により算出した。その結果、本発明の結晶は、７２％（２型結晶）又は７５％（３型結晶）の出血抑制率を有していた。
【００８９】
試験例２ 平衡吸湿性試験
無機塩の飽和水溶液で調湿したデシケーター（２５℃，０〜９３％ＲＨ；ＲＨは相対湿度を意味する）に化合物Ｂ、本発明の１型結晶及び２型結晶 各約５０ｍｇを入れ、１ヶ月間経時的に重量変化を測定した。試験結果を図２２に示す。図２２から明らかなように、化合物Ｂは高湿度になるほど重量増加が認められたが、化合物Ａの１型結晶も２型結晶もほとんど重量変化が認められなかった。
【００９０】
試験例３ 溶解度試験
（１）水に対する溶解度
本発明の１型結晶及び２型結晶 各々の適量と蒸留水をミクロテストチューブ（エッペンドルフ社製）にいれ、タイテック社製ミクロインキュベータM-36を用いて、３７℃、２０００ストローク／分で約５時間振騰し飽和させた。振騰後、フィルター（アドバンテックDISMIC-13HP:0.2μm）で濾過し、水溶液中濃度をＨＰＬＣで定量した。その結果、１型結晶の溶解度は290μg/ml、２型結晶のそれは4970μg/mlと両者とも水に対して良く溶解した。
【００９１】
（２）各ｐＨの緩衝液に対する溶解度
本発明の１型結晶及び２型結晶 各々の適量と各ｐＨの０．１mol/ｌリン酸緩衝液蒸留水をミクロテストチューブ（エッペンドルフ社製）にいれ、タイテック社製ミクロインキュベータM-36を用いて、３７℃、２０００ストローク／分で約５時間振騰し飽和させた。振騰後、フィルター（アドバンテックDISMIC-13HP:0.2μm）で濾過し、溶液中濃度をＨＰＬＣで定量した。試験結果を図２３に示す。１型結晶も２型結晶もｐＨ３〜８の間でほぼ一定に溶解することが判明した。
【００９２】
試験例４ 固体安定性試験（化学的安定性）
化合物Ｂ、本発明の１型結晶および２型結晶、各約１ｍｇを精密に１０ｍＬアンプルまたはバイアルに量り込み、種々の温度下で保存し、一定期間経過後の残存量及び分解物量をＨＰＬＣを用いて定量した。各測定時点における標準品は、同様に秤量して別途４℃で保存した、化合物Ｂ、１型結晶および２型結晶を用いた。その結果、４０℃で３箇月保存すると、化合物Ｂには分解物が見られたが、１型結晶及び２型結晶は６箇月経過後であっても安定であった。また、５０℃で１箇月保存すると、本発明の２型結晶には分解物が見られたが、１型結晶は安定であった。
【００９３】
試験例５ 固体安定性試験（物理的安定性）
本発明の１型結晶約５０ｍｇをサンプル瓶に量り込み、４０℃、６０℃、６０℃，７５％ＲＨ及び８０℃で１５日間保存し、性状および結晶について確認した。なお、結晶については、上記スペクトリス（Ｓｐｅｃｔｒｉｓ）社製 Ｘ’Ｐｅｒｔ Ａｌｐｈａ １を用い粉末X線回折を測定して結晶が変化したかどうか確認した。その結果、１型結晶はどの条件であっても、性状は白色・粉末であって、結晶も変化していないことが確認できた。
【産業上の利用可能性】
【００９４】
本発明の結晶化された化合物は、エラスターゼ阻害活性を有することにより好中球エラスターゼが病態発症に関与していると考えられている疾患の治療／または予防剤の原薬として有用である。
【図面の簡単な説明】
【００９５】
【図１】本発明の１型結晶の単結晶構造データである。
【図２】本発明の１型結晶の単結晶構造パッキングデータである
【図３】本発明の１型結晶の１３Ｃ固体ＮＭＲスペクトルチャートである。
【図４】本発明の２型結晶の１３Ｃ固体ＮＭＲスペクトルチャートである。
【図５】本発明の３型結晶の１３Ｃ固体ＮＭＲスペクトルチャートである。
【図６】スペクトリス（Ｓｐｅｃｔｒｉｓ）社製 Ｘ’Ｐｅｒｔ Ａｌｐｈａ １を用いて得られた本発明の１型結晶の粉末Ｘ線回折スペクトルチャートである。
【図７】高輝度放射光施設ＳＰｒｉｎｇ−８ ＢＬ２４ＸＵ Ｈｕｔｃｈ Ｂを用いて得られた本発明の１型結晶の粉末Ｘ線回折スペクトルチャートである。
【図８】本発明の１型結晶の示差走査熱量測定（ＤＳＣ）チャートである。
【図９】本発明の１型結晶の熱重量分析測定（ＴＧ）チャートである。
【図１０】スペクトリス（Ｓｐｅｃｔｒｉｓ）社製 Ｘ’Ｐｅｒｔ Ａｌｐｈａ １を用いて得られた本発明の２型結晶の粉末Ｘ線回折スペクトルチャートである。
【図１１】高輝度放射光施設ＳＰｒｉｎｇ−８ ＢＬ２４ＸＵ Ｈｕｔｃｈ Ｂを用いて得られた本発明の２型結晶の粉末Ｘ線回折スペクトルチャートである。
【図１２】本発明の２型結晶の示差走査熱量測定（ＤＳＣ）チャートである。
【図１３】本発明の２型結晶の熱重量分析測定（ＴＧ）チャートである。
【図１４】スペクトリス（Ｓｐｅｃｔｒｉｓ）社製 Ｘ’Ｐｅｒｔ Ａｌｐｈａ １を用いて得られた本発明の３型結晶の粉末Ｘ線回折スペクトルチャートである。
【図１５】高輝度放射光施設ＳＰｒｉｎｇ−８ ＢＬ２４ＸＵ Ｈｕｔｃｈ Ｂを用いて得られた本発明の３型結晶の粉末Ｘ線回折スペクトルチャートである。
【図１６】本発明の３型結晶の示差走査熱量測定（ＤＳＣ）チャートである。
【図１７】本発明の３型結晶の熱重量分析測定（ＴＧ）チャートである。
【図１８】本発明の１型〜３型結晶及び化合物Ｂのラマンスペクトルチャートである。
【図１９】本発明の１型〜３型結晶及び化合物Ｂのラマンスペクトルチャート（３５５０〜３０５０ｃｍ−１）である。
【図２０】本発明の１型〜３型結晶のラマンスペクトルチャート（３０５０〜２８５０ｃｍ−１）である。
【図２１】本発明の１型〜３型結晶のラマンスペクトルチャート（１７５０〜１３８０ｃｍ−１）である。
【図２２】本発明の１型結晶、２型結晶および化合物Ｂの吸湿性を示すグラフである。
【図２３】本発明の１型結晶および２型結晶の各ｐＨにおける溶解度を示すグラフである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｎ−［（１Ｓ）−２−（（２Ｓ）−２−｛Ｎ−［（１Ｓ）−３，３，３−トリフルオロ−２，２−ジヒドロキシ−１−（メチルエチル）プロピル］カルバモイル｝ピロリジニル）−１−（メチルエチル）−２−オキソエチル］−（１−ｔｅｒｔ−ブチル−５−メチルピラゾル−４−イル）カルボキサミド（以下「化合物Ａ」という。）の結晶。
【請求項２】
回折角２θ（ＣｕＫα１線）で表したとき、約７．５°〜９．０°の位置にピークを有するＸ線粉末回折パターンを示す請求項１に記載の結晶。
【請求項３】
回折角２θ（ＣｕＫα１線）で表したとき、約７．５°〜９．０°の位置に２本のピークを有するＸ線粉末回折パターンを示す請求項２に記載の結晶。
【請求項４】
回折角２θ（ＣｕＫα１線）で表したとき、約１３．０°〜１４．０°の位置にピークを有するＸ線粉末回折パターンを示す請求項２または３に記載の結晶。
【請求項５】
回折角２θ（ＣｕＫα１線）で表したとき、ほぼ８．０°、８．６°、９．２°、１０．６°、１１．９°、１３．６°、１４．５°および２０．４°の位置にピークを有するＸ線粉末回折パターンを示す請求項１〜４のいずれかに記載の化合物Ａの１型結晶。
【請求項６】
昇温速度が１０℃／分の示差走査熱量測定において、約１６１℃に脱水吸熱ピークを有する請求項５に記載の化合物Ａの１型結晶。
【請求項７】
回折角２θ（ＣｕＫα１線）で表したとき、ほぼ５．０°、７．６°、８．１°、８．７°、９．６°、１０．２°、１０．６°、１３．５°、１４．９°および１９．９°の位置にピークを有するＸ線粉末回折パターンを示す請求項１〜４のいずれかに記載の化合物Ａの２型結晶。
【請求項８】
昇温速度が１０℃／分の示差走査熱量測定において、約１２６℃に脱水吸熱ピークを有する請求項７に記載の化合物Ａの２型結晶。
【請求項９】
回折角２θ（ＣｕＫα１線）で表したとき、ほぼ４．８°、７．３°、８．１°、８．４°、９．４°、１２．５°、１４．３°、１６．４°および１９．１°の位置にピークを有するＸ線粉末回折パターンを示す請求項１〜３のいずれかに記載の化合物Ａの３型結晶。
【請求項１０】
昇温速度が１０℃／分の示差走査熱量測定において、約１１４℃に脱水吸熱ピークを有する請求項９に記載の化合物Ａの３型結晶。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれかに記載の結晶を有効成分として含む医薬。
【請求項１２】
請求項１〜１０のいずれかに記載の結晶を含む医薬組成物。
【請求項１３】
化合物Ａの１型結晶の製造方法であって、以下のいずれかの有機溶媒：
（１）ギ酸エチル、酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸ｎ−プロピル、酢酸イソプロピル、酢酸イソブチル、酢酸ｎ−ブチルおよび酢酸イソアミルからなる群から選択されるエステル類、
（２）メチルイソブチルケトン、ジイソプロピルケトンおよび２−ヘキサノンからなる群から選択されるケトン類、
（３）ジエチルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、シクロペンチルメチルエーテルおよびジフェニルエーテルからなる群から選択されるエーテル類、および
（４）アセトニトリル
からなる群から選ばれる単一溶媒；
酢酸ｎ−プロピル、酢酸イソプロピル、酢酸イソブチル、酢酸イソアミル、メチルイソブチルケトン、ジイソプロピルケトン、シクロペンチルメチルエーテルおよび２−ヘキサノンからなる群から選ばれる１種の有機溶媒と、ジエチルエーテルまたはシクロヘキサンとの混合溶媒；
酢酸イソプロピル、酢酸イソブチル、酢酸イソアミル、メチルイソブチルケトン、ジイソプロピルケトン、シクロペンチルメチルエーテルおよび２−ヘキサノンからなる群から選ばれる１種の有機溶媒と、ｎ−ヘキサン、ジメトキシエタンおよびメチルシクロヘキサンからなる群から選ばれる１種の有機溶媒との混合溶媒；または
酢酸エチルとシクロヘキサンとの混合溶媒に
（ａ）Ｎ−［（１Ｓ）−２−（（２Ｓ）−２−｛Ｎ−［（１Ｓ）−３，３，３−トリフルオロ−１−（メチルエチル）−２−オキソプロピル］カルバモイル｝ピロリジニル）−１−（メチルエチル）−２−オキソエチル］−（１−ｔｅｒｔ−ブチル−５−メチルピラゾル−４−イル）カルボキサミド（以下、「化合物Ｂ」という。）を溶解させ、これに水を添加した溶液から化合物Ａの１型結晶を晶析させるか、または
（ｂ）化合物Ａの２型結晶または３型結晶を上記溶媒に溶解させ、該溶液から化合物Ａの１型結晶を晶析させる
ことを特徴とする製造方法。
【請求項１４】
化合物Ａの２型結晶の製造方法であって、以下のいずれかの有機溶媒：
ジクロロメタン、クロロホルム、クロロベンゼン、トルエン、キシレン、アニソール、ｎ−ヘキサン、メチルシクロヘキサンおよびｎ−ヘプタンからなる群から選ばれる単一溶媒；
トルエン、キシレンおよびアニソールからなる群から選ばれる１種の有機溶媒とジエチルエーテル、シクロヘキサン、ｎ−ヘキサンおよびメチルシクロヘキサンからなる群から選ばれる１種の有機溶媒との混合溶媒；または
トルエンとジメトキシエタンとの混合溶媒に
（ａ）化合物Ｂを溶解させ、これに水を添加した溶液から化合物Ａの２型結晶を晶析させるか、又は
（ｂ）化合物Ａの１型結晶または３型結晶を上記溶媒に溶解させ、該溶液から化合物Ａの２型結晶を晶析させる
ことを特徴とする製造方法。
【請求項１５】
化合物Ａの３型結晶の製造方法であって、化合物Ｂを、酢酸ｎ−プロピルとメチルシクロヘキサンとの混合溶媒に溶解させ、これに水を添加した溶液から化合物Ａの３型結晶を晶析させるか、または化合物Ａの１型結晶または２型結晶を該混合溶媒に溶解させ、該溶液から化合物Ａの３型結晶を晶析させることを特徴とする製造方法。
【請求項１】
Ｎ−［（１Ｓ）−２−（（２Ｓ）−２−｛Ｎ−［（１Ｓ）−３，３，３−トリフルオロ−２，２−ジヒドロキシ−１−（メチルエチル）プロピル］カルバモイル｝ピロリジニル）−１−（メチルエチル）−２−オキソエチル］−（１−ｔｅｒｔ−ブチル−５−メチルピラゾル−４−イル）カルボキサミド（以下「化合物Ａ」という。）の結晶。
【請求項２】
回折角２θ（ＣｕＫα１線）で表したとき、約７．５°〜９．０°の位置にピークを有するＸ線粉末回折パターンを示す請求項１に記載の結晶。
【請求項３】
回折角２θ（ＣｕＫα１線）で表したとき、約７．５°〜９．０°の位置に２本のピークを有するＸ線粉末回折パターンを示す請求項２に記載の結晶。
【請求項４】
回折角２θ（ＣｕＫα１線）で表したとき、約１３．０°〜１４．０°の位置にピークを有するＸ線粉末回折パターンを示す請求項２または３に記載の結晶。
【請求項５】
回折角２θ（ＣｕＫα１線）で表したとき、ほぼ８．０°、８．６°、９．２°、１０．６°、１１．９°、１３．６°、１４．５°および２０．４°の位置にピークを有するＸ線粉末回折パターンを示す請求項１〜４のいずれかに記載の化合物Ａの１型結晶。
【請求項６】
昇温速度が１０℃／分の示差走査熱量測定において、約１６１℃に脱水吸熱ピークを有する請求項５に記載の化合物Ａの１型結晶。
【請求項７】
回折角２θ（ＣｕＫα１線）で表したとき、ほぼ５．０°、７．６°、８．１°、８．７°、９．６°、１０．２°、１０．６°、１３．５°、１４．９°および１９．９°の位置にピークを有するＸ線粉末回折パターンを示す請求項１〜４のいずれかに記載の化合物Ａの２型結晶。
【請求項８】
昇温速度が１０℃／分の示差走査熱量測定において、約１２６℃に脱水吸熱ピークを有する請求項７に記載の化合物Ａの２型結晶。
【請求項９】
回折角２θ（ＣｕＫα１線）で表したとき、ほぼ４．８°、７．３°、８．１°、８．４°、９．４°、１２．５°、１４．３°、１６．４°および１９．１°の位置にピークを有するＸ線粉末回折パターンを示す請求項１〜３のいずれかに記載の化合物Ａの３型結晶。
【請求項１０】
昇温速度が１０℃／分の示差走査熱量測定において、約１１４℃に脱水吸熱ピークを有する請求項９に記載の化合物Ａの３型結晶。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれかに記載の結晶を有効成分として含む医薬。
【請求項１２】
請求項１〜１０のいずれかに記載の結晶を含む医薬組成物。
【請求項１３】
化合物Ａの１型結晶の製造方法であって、以下のいずれかの有機溶媒：
（１）ギ酸エチル、酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸ｎ−プロピル、酢酸イソプロピル、酢酸イソブチル、酢酸ｎ−ブチルおよび酢酸イソアミルからなる群から選択されるエステル類、
（２）メチルイソブチルケトン、ジイソプロピルケトンおよび２−ヘキサノンからなる群から選択されるケトン類、
（３）ジエチルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、シクロペンチルメチルエーテルおよびジフェニルエーテルからなる群から選択されるエーテル類、および
（４）アセトニトリル
からなる群から選ばれる単一溶媒；
酢酸ｎ−プロピル、酢酸イソプロピル、酢酸イソブチル、酢酸イソアミル、メチルイソブチルケトン、ジイソプロピルケトン、シクロペンチルメチルエーテルおよび２−ヘキサノンからなる群から選ばれる１種の有機溶媒と、ジエチルエーテルまたはシクロヘキサンとの混合溶媒；
酢酸イソプロピル、酢酸イソブチル、酢酸イソアミル、メチルイソブチルケトン、ジイソプロピルケトン、シクロペンチルメチルエーテルおよび２−ヘキサノンからなる群から選ばれる１種の有機溶媒と、ｎ−ヘキサン、ジメトキシエタンおよびメチルシクロヘキサンからなる群から選ばれる１種の有機溶媒との混合溶媒；または
酢酸エチルとシクロヘキサンとの混合溶媒に
（ａ）Ｎ−［（１Ｓ）−２−（（２Ｓ）−２−｛Ｎ−［（１Ｓ）−３，３，３−トリフルオロ−１−（メチルエチル）−２−オキソプロピル］カルバモイル｝ピロリジニル）−１−（メチルエチル）−２−オキソエチル］−（１−ｔｅｒｔ−ブチル−５−メチルピラゾル−４−イル）カルボキサミド（以下、「化合物Ｂ」という。）を溶解させ、これに水を添加した溶液から化合物Ａの１型結晶を晶析させるか、または
（ｂ）化合物Ａの２型結晶または３型結晶を上記溶媒に溶解させ、該溶液から化合物Ａの１型結晶を晶析させる
ことを特徴とする製造方法。
【請求項１４】
化合物Ａの２型結晶の製造方法であって、以下のいずれかの有機溶媒：
ジクロロメタン、クロロホルム、クロロベンゼン、トルエン、キシレン、アニソール、ｎ−ヘキサン、メチルシクロヘキサンおよびｎ−ヘプタンからなる群から選ばれる単一溶媒；
トルエン、キシレンおよびアニソールからなる群から選ばれる１種の有機溶媒とジエチルエーテル、シクロヘキサン、ｎ−ヘキサンおよびメチルシクロヘキサンからなる群から選ばれる１種の有機溶媒との混合溶媒；または
トルエンとジメトキシエタンとの混合溶媒に
（ａ）化合物Ｂを溶解させ、これに水を添加した溶液から化合物Ａの２型結晶を晶析させるか、又は
（ｂ）化合物Ａの１型結晶または３型結晶を上記溶媒に溶解させ、該溶液から化合物Ａの２型結晶を晶析させる
ことを特徴とする製造方法。
【請求項１５】
化合物Ａの３型結晶の製造方法であって、化合物Ｂを、酢酸ｎ−プロピルとメチルシクロヘキサンとの混合溶媒に溶解させ、これに水を添加した溶液から化合物Ａの３型結晶を晶析させるか、または化合物Ａの１型結晶または２型結晶を該混合溶媒に溶解させ、該溶液から化合物Ａの３型結晶を晶析させることを特徴とする製造方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【公開番号】特開２００７−３０２５６０（Ｐ２００７−３０２５６０Ａ）
【公開日】平成１９年１１月２２日（２００７．１１．２２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００５−１３０００８（Ｐ２００５−１３０００８）
【出願日】平成１７年４月２７日（２００５．４．２７）
【出願人】（０００００２９１２）大日本住友製薬株式会社 (332)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１９年１１月２２日（２００７．１１．２２）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年４月２７日（２００５．４．２７）
【出願人】（０００００２９１２）大日本住友製薬株式会社 (332)
【Ｆターム（参考）】
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