本発明は、（Ｓ）２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−エタノールを含む組成物であって、（Ｒ）２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−エタノールを実質的に含まないか、または（Ｓ）エナンチオマーが大半を占める（Ｓ）および（Ｒ）エナンチオマーの混合物を含む組成物を提供する。また（Ｓ）２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−エタノールの調製方法、新規な製造中間体、および当該製造中間体の製造方法も提供される。

【発明の詳細な説明】
【発明の背景】
【０００１】
技術分野
本発明は、プロテインキナーゼＢ（ＰＫＢ）、プロテインキナーゼＡ（ＰＫＡ）、ＲＯＣＫキナーゼまたはｐ７０Ｓ６Ｋの活性を阻害または修飾するピラゾール含有アリール−アルキルアミン化合物、これらキナーゼが仲介する病態もしくは症状の治療または予防における当該化合物の使用、ならびに当該化合物を含有する医薬組成物に関する。より具体的には、本発明は２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−エタノールの一方のエナンチオマー、それを含む医薬組成物、その治療上の使用、その調製方法、および新規な製造中間体に関する。
【０００２】
背景技術
プロテインキナーゼは、細胞内における様々なシグナル伝達過程の制御に関与する構造的に関連する酵素の大きなファミリーを形成している（ハーディー（Hardie, G.）およびハンクス（Hanks, S.）、１９９５年、「ザ・プロテインキナーゼ・ファクトブックＩ・アンド・ＩＩ（The Protein Kinase Facts Book, I and II）」アカデミックプレス（Academic Press）、サンディエゴ、カリフォルニア）。上記キナーゼはそれらがリン酸化する基質により各ファミリーに分類され得る（例えば、タンパク質‐チロシン、タンパク質−セリン／スレオニン、脂質など）。これらキナーゼファミリーのそれぞれに通常対応する配列モチーフが特定されてきた（例えば、ハンクス（Hanks, S.K.）、ハンター（Hunter, T.）、「米国実験生物学協会誌（FASEB J.）」、９：５７６−５９６、１９９５年；ナイトン（Knighton）ら、「サイエンス（Science）」、２５３：４０７−４１４、１９９１年；ハイルズ（Hiles）ら、「セル（Cell）」、７０：４１９−４２９、１９９２年；クンツ（Kunz）ら、「セル（Cell）」、７３：５８５−５９６、１９９３年；ガルシア−ブストス（Garcia-Bustos）ら、「欧州分子生物学機構誌（EMBO J.）」、１３：２３５２−２３６１、１９９４年）。
【０００３】
プロテインキナーゼはそれらの調節メカニズムにより特徴付けられ得る。これらのメカニズムには、例えば、自己リン酸化、他のキナーゼによるリン酸基転移、タンパク質−タンパク質相互作用、タンパク質−脂質相互作用、およびタンパク質−ポリヌクレオチド相互作用がある。個々のプロテインキナーゼは２つ以上のメカニズムにより調節されることもある。
【０００４】
キナーゼは、リン酸基を標的タンパク質へ付加することにより、多くの異なる細胞過程を調節しており、これらの過程としては増殖、分化、アポトーシス、運動、転写、翻訳および他のシグナル伝達作用があるが、これらに限定されない。これらのリン酸化現象は、標的タンパク質の生物学的機能を修飾または調節しうる分子オン／オフスイッチとして作用する。標的タンパク質のリン酸化は、様々な細胞外シグナル（ホルモン、神経伝達物質、増殖、および分化因子など）、細胞周期現象、環境ストレスまたは栄養ストレスなどに反応して生じる。適切なプロテインキナーゼは、例えば、代謝酵素、調節タンパク質、受容体、細胞骨格タンパク質、イオンチャンネルもしくはイオンポンプ、または転写因子を活性化または不活性化（直接的または間接的に）するために、シグナル伝達経路において機能する。タンパク質リン酸化の制御の欠陥に起因する制御されないシグナルは、例えば、炎症、癌、アレルギー／喘息、免疫系の疾患および症状、中枢神経系の疾患および症状、および血管新生を含む、多くの疾患に関与している。
【０００５】
アポトーシスすなわちプログラム細胞死は、生物にもはや必要とされない細胞を除去する重要な生理的過程である。この過程は初期胚の成長および発生において重要であり、細胞成分の制御された非壊死的な破壊、除去および回復を可能にする。アポトーシスによる細胞の除去は、増殖細胞集団の染色体およびゲノムの全体性の維持においてもまた重要である。ＤＮＡ損傷およびゲノムの全体性が注意深くモニタリングされる細胞増殖サイクルにはいくつかの公知のチェックポイントがある。かかるチェックポイントでの異常の検出に対する反応は、かかる細胞の増殖を停止し修復過程を開始することである。損傷または異常を修復できないならば、欠陥およびエラーの伝播を防止するために、損傷を受けた細胞によりアポトーシスが開始される。癌細胞は、染色体ＤＮＡ中に多数の変異、エラーまたはリアレンジメントを一貫して含んでいる。このようなことが起きる原因の１つは、大多数の腫瘍はアポトーシス過程の開始に関与する過程の１つまたは複数において欠陥を有するということであると広く考えられている。通常の制御機構は癌細胞を殺すことができず、染色体エラーまたはＤＮＡのコードするエラーが伝播され続ける。結果として、これらのプロアポトーシスシグナルを回復させるかまたは無秩序な生存シグナルを抑制することが、癌を治療する好ましい手段である。
【０００６】
ＰＫＢ
酵素のホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）、ＰＤＫ１およびＰＫＢをとりわけ含んでいるシグナル伝達経路は、多くの細胞におけるアポトーシスに対する耐性の増加または生存のための反応を仲介することが長く知られている。この経路がアポトーシスを抑制する多くの増殖因子によって使用される重要な生存経路であることを示す多大な量のデータが存在する。ＰＩ３Ｋファミリーの酵素は、増殖因子および生存因子の範囲（例えばＥＧＦ、ＰＤＧＦ）によっておよびポリホスファチジルイノシトールの生成を介して活性化され、キナーゼＰＤＫ１、およびａｋｔとしてもまた公知であるプロテインキナーゼＢ（ＰＫＢ）の活性を含む下流のシグナル伝達事象の活性化を開始する。このことは腫瘍だけでなく、宿主組織（例えば、血管内皮細胞）においてもまた当てはまる。ＰＫＢは、キナーゼドメインとＮ端末ＰＨドメインとＣ端末調節ドメインとを含むプロテインｓｅｒ／ｔｈｒキナーゼである。酵素ＰＫＢ_アルファ（ａｋｔ１）自身はＰＤＫ１によってＴｈｒ３０８上でリン酸化され、ラパマイシン標的（ＴＯＲ）キナーゼおよびその関連するタンパク質ｒｉｃｔｏｒで構成されると現在考えられている「ＰＤＫ２」によってＳｅｒ４７３上でリン酸化される。ＰＩＰ３とＰＨドメインとの間での結合が、基質への最適な接近を提供する脂質膜の細胞質表面への酵素のアンカリングのために必要とされるが、完全活性化には両方の部位でのリン酸化が必要とされる。
【０００７】
マイトジェン活性化タンパク質（ＭＡＰ）キナーゼ活性化プロテインキナーゼ−２（ＭＫ２）、インテグリン結合キナーゼ（ＩＬＫ）、ｐ３８ ＭＡＰキナーゼ、プロテインキナーゼＣ_アルファ（ＰＫＣ_アルファ）、ＰＫＣ_ベータ、ＮＩＭＡ関連キナーゼ−６（ＮＥＫ６）、哺乳類のラパマイシン標的タンパク質（ｍＴＯＲ）、二本鎖ＤＮＡ依存性プロテインキナーゼ（ＤＮＫ−ＰＫ）および血管拡張性失調症変異（ＡＴＭ）遺伝子産物を含む少なくとも１０種類のキナーゼがＳｅｒ４７３キナーゼとして機能することが示唆されている。入手可能なデータは、ＰＫＢの活性化を調節するために細胞における複数のシステムが使用されている可能性があることを示唆している。ＰＩＰ３とＰＨドメインとの間での結合が、基質への最適な接近を提供する脂質膜の細胞質表面への酵素のアンカリングのために必要とされるが、ＰＫＢの完全活性化には両方の部位でのリン酸化が必要とされる。ＰＨドメイン変異は最近報告されている。この著者は、構造的、生化学的および生物学的な研究により、ヒト癌におけるＡＫＴ１の関与に関する直接的な証拠を提供し、かつＡｋｔ１のＥ１７Ｋ変異の腫瘍形成の可能性を示している。この変異は、乳癌６１例中の５例（８％）、結腸直腸５１例中の３例（６％）、および卵巣癌５０例中の１例（２％）で同定された。（ネイチャー（Nature）４４８、４３９〜４４４（２００７年７月２６日）、ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎａｔｕｒｅ０５９３３；２００７年３月８日受領；２００７年５月１１日承認；２００７年７月４日オンラインで発表「癌におけるＡＫＴ１のプレクストリン相同ドメインでの腫瘍化変異（A transforming mutation in the pleckstrin homology domain of AKT1 in cancer））
ＰＩ３Ｋ触媒サブユニットであるＰＩＫ３ＣＡ内の体細胞変異は、結直腸癌、胃癌、乳癌、卵巣癌、および重度の脳腫瘍において一般的に起こる（２５〜４０％）ことが近年報告されている。ＰＩＫ３ＣＡ変異は、膀胱癌の初期段階で一般的に起こり得る事象である。浸潤性乳癌の場合、ＰＩＫ３ＣＡ変異は、主に小葉腫瘍および乳管腫瘍において見られる。子宮内膜癌の場合、ＰＩ３Ｋ経路が盛んに活性化され、ＰＩＫ３ＣＡ／ＰＴＥＮ変異のその組合せはこれらの腫瘍の発生に重要な役割を果たしている可能性がある。ＰＩ３キナーゼの変異およびＰＴＥＮの損失によって活性化される腫瘍はＰＫＢの活性化を維持することになり、その結果ＰＫＡ／ＰＫＢ阻害剤による阻害に対して不均衡な感受性を有することになる。
【０００８】
活性化されたＰＫＢは、今度は、全般的な生存のための反応に寄与する様々な基質をリン酸化する。ＰＫＢ依存性の生存応答の仲介に関与する因子がすべて理解されているとは確信できないが、いくつかの重要な作用は、プロアポトーシス因子のＢＡＤおよびカスパーゼ９のリン酸化および不活性化、フォークヘッド転写因子（例えば、ＦＫＨＲ）の核からの排除をもたらすそれらの転写因子のリン酸化、およびカスケードの上流のキナーゼのリン酸化によるＮｆ_カッパＢ経路の活性化であると考えられる。
【０００９】
ＰＫＢ経路の抗アポトーシス作用および生存支持作用に加えて、上記酵素は細胞増殖の促進においてもまた重要な役割を果たす。この作用もやはりいくつかの作用によって仲介されるようであり、そのいくつかは、ｐ２１^{Ｃｉｐ１／ＷＡＦ１}のサイクリン依存性キナーゼ阻害剤のリン酸化および不活性化、ならびにｍＴＯＲ（細胞サイズ、増殖およびタンパク質翻訳のいくつかの態様を制御するキナーゼ）のリン酸化および活性化であると考えられる。
【００１０】
ポリホスファチジルイノシトールを脱リン酸化し不活性化するホスファターゼＰＴＥＮは、ＰＩ３Ｋ／ＰＫＢ生存経路を調節するように通常は作用する重要な腫瘍抑制タンパク質である。腫瘍形成におけるＰＩ３Ｋ／ＰＫＢ経路の重要性は、ＰＴＥＮがヒト腫瘍における変異の最も一般的な標的の１つであるという観測から判断することができ、このホスファターゼにおける変異は、黒色腫（グルベル（Guldberg）ら、１９９７年、「キャンサーリサーチ（Cancer Research）」５７、３６６０〜３６６３）および進行性前立腺癌（ケアンズ（Cairns）ら、１９９７年、「キャンサーリサーチ（Cancer Research）」５７、４９９７）の〜５０％またはそれ以上において見出されている。これらの観測などから、広範囲の腫瘍タイプが増殖および生存のために増強されたＰＫＢ活性に依存しており、ＰＫＢの適切な阻害剤に治療上反応するだろうことが示唆される。
【００１１】
アルファ、ベータおよびガンマ（ＡＫＴ１、２、および３）と呼ばれるＰＫＢの３つの密接に関連したアイソフォームがあり、遺伝学的研究から、それらは異なるがオーバーラップする機能を有することが示唆されている。それらがすべて癌において独立して役割を果すことができることを示唆する証拠がある。例えば、ＰＫＢ_ベータは卵巣および膵臓癌の１０〜４０％において過剰発現または活性化されていることが見出され（ベラコサ（Bellacosa）ら、１９９５年、「インターナショナルジャーナルオブキャンサー（Int. J. Cancer）」６４、２８０〜２８５；チェン（Cheng）ら、１９９６年、「米国科学アカデミー紀要（ＰＮＡＳ）」９３、３６３６〜３６４１；ユアン（Yuan）ら、２０００年、「オンコジーン（Oncogene）」１９、２３２４〜２３３０）、ＰＫＢ_アルファはヒト胃癌、前立腺癌および乳癌において増幅され（スタール（Staal）、１９８７年、「米国科学アカデミー紀要（PNAS）」８４、５０３４〜５０３７；ソン（Sun）ら、２００１年、「米国病理学会誌（Am. J. Pathol.）」１５９、４３１−４３７）、ＰＫＢ_ガンマ活性の増加はステロイド非依存性乳腺細胞株および前立腺細胞株において観察された（ナカタニ（Nakatani）ら、１９９９年、「ジャーナル・オブ・バイオロジカルケミストリー（J. Biol. Chem.）」２７４、２１５２８〜２１５３２）。
【００１２】
ＰＫＢ経路はまた、正常組織の増殖および生存においても機能し、細胞および組織の機能を制御するために通常の生理機能の間に調節される可能性がある。したがって、正常な細胞および組織の不適当な増殖および生存に関連した疾患もまた、ＰＫＢ阻害剤による治療から治療上の利益を得る可能性がある。そのような疾患の例は持続的またはアップレギュレートされた免疫反応をもたらす細胞集団の持続的増加および生存に関連した免疫細胞の疾患である。例えば、同種抗原またはインターフェロンガンマのような増殖因子に対するＴリンパ球およびＢリンパ球の反応は、ＰＩ３Ｋ／ＰＫＢ経路を活性化し、免疫反応の間の抗原特異的リンパ球クローンの生存の維持に関与する。リンパ球および他の免疫細胞が不適当な自己抗原または異種抗原に対して反応している条件下または他の異常が持続的活性化をもたらす条件下では、活性化された細胞集団のアポトーシスによって免疫反応が終結される正常なメカニズムを妨害する重要な生存シグナルにＰＫＢ経路は寄与する。多発性硬化症および関節炎のような自己免疫の疾患の自己抗原に対して反応するリンパ球集団の増加を実証する、かなりの量の証拠が存在する。異種抗原に対して不適切に反応するリンパ球集団の増加は、アレルギー反応および喘息のような他の症状群の特徴である。要約すると、ＰＫＢの阻害により、免疫疾患に有用な治療を提供することができる可能性がある。
【００１３】
ＰＫＢが役割を果たすであろう正常細胞の不適当な増加、成長、増殖、増生および生存の他の例としては、アテローム性動脈硬化、心筋症および糸球体腎炎が挙げられるがこれらに限定されるものではない。
【００１４】
細胞の増殖および生存における役割に加えて、ＰＫＢ経路はインスリンによるグルコース代謝の制御において機能する。ＰＫＢアルファアイソフォームおよびＰＫＢベータアイソフォームを欠損するマウスから得ることができる証拠は、この作用は主としてベータアイソフォームによって仲介されることを示唆している。結果として、ＰＫＢ活性のモジュレーターはまた、糖尿病、代謝疾患および肥満のような、グルコース代謝およびエネルギー貯蔵に機能障害のある疾患において有用である可能性がある。
【００１５】
ＰＫＡ
サイクリックＡＭＰ依存性プロテインキナーゼ（ＰＫＡ）は、広範囲の基質をリン酸化し、細胞増殖、細胞分化、イオンチャネル伝導度、遺伝子転写および神経伝達物質のシナプス放出を含む多くの細胞過程の調節に関与するセリン／トレオニンプロテインキナーゼである。ＰＫＡホロ酵素は、不活性型においては２つの調節サブユニットおよび２つの触媒サブユニットを含む四量体である。
【００１６】
ＰＫＡは、Ｇタンパク質に仲介されるシグナル伝達事象、およびそれらが調節する細胞過程との間でリンクとして働く。グルカゴンのようなホルモンリガンドの膜貫通受容体への結合は、受容体共役Ｇタンパク質（ＧＴＰを結合し加水分解するタンパク質）を活性化する。活性化に際して、Ｇタンパク質のアルファサブユニットは解離し、アデニル酸シクラーゼに結合しそれを活性化し、それは次にＡＴＰをサイクリックＡＭＰ（ｃＡＭＰ）に変換する。このように産生されたｃＡＭＰは次にＰＫＡの調節サブユニットに結合し、結合された触媒サブユニットの解離をもたらす。ＰＫＡの触媒サブユニット（調節サブユニットを結合させた場合には不活性である）は、解離に際して活性化され、他の調節タンパク質のリン酸化に関与する。
【００１７】
例えば、ＰＫＡの触媒サブユニットは、ホスホリラーゼ（グルコースを放出するためのグリコーゲンの破壊に関与する酵素）のリン酸化に関わるキナーゼであるホスホリラーゼキナーゼをリン酸化する。ＰＫＡはまた、グリコーゲン合成酵素のリン酸化および非活性化による血糖値の調節にも関わる。したがって、ＰＫＡ活性のモジュレーター（ＰＫＡ活性を増加または減少させ得る）は、糖尿病、代謝疾患および肥満のような、グルコース代謝およびエネルギー貯蔵に関する機能疾患が存在する疾患の治療または管理に有用である可能性がある。
【００１８】
ＰＫＡは、Ｔ細胞活性化の急性阻害剤としてもまた確立されている。アンダール（Anndahl）らは、ＨＩＶ感染患者からのＴ細胞ではｃＡＭＰのレベルが増加しており、正常なＴ細胞よりもｃＡＭＰアナログによる阻害に対してより敏感であるということに基づいて、ＨＩＶ誘導性Ｔ細胞機能疾患におけるＰＫＡタイプＩの奏し得る役割を調べた。彼らの研究から、ＰＫＡタイプＩの活性化の増加がＨＩＶ感染における進行性Ｔ細胞機能疾患の一因となり、したがってＰＫＡタイプＩが免疫賦活療法に関して可能性のある標的になり得ることが結論づけられた。アンダール（Aandahl, E.M.）、アウクルスト（Aukrust, P.）、スカルへグ（Skalhegg, B.S.）、ミュラー（Muller, F.）、フロランド（Froland, S.S.）、ハンション（Hansson, V.）、タスケン（Tasken, K.）、「プロテインキナーゼＡタイプＩアンタゴニストは、ＨＩＶ感染患者からのＴ細胞の免疫反応を回復させる（Protein kinase A type I antagonist restores immune responses of T cells from HIV-infected patients）」、米国実験生物学協会誌（FASEB J.）１２、８５５〜８６２（１９９８年））。
ＰＫＡの調節サブユニットにおける変異が、内分泌組織における過活性化をもたらし得ることもまた認識されている。
【００１９】
細胞調節におけるメッセンジャーとしてのＰＫＡの多様性および重要性のために、ｃＡＭＰの異常反応は、正常ではない細胞成長および増殖のような、これに由来する様々なヒト疾患をもたらし得る（ストラタキス（Stratakis, C.A.）、チョ−チョン（Cho-Chung, Y.S.）；プロテインキナーゼＡおよびヒト疾患（Protein Kinase A and human diseases）、「トレンズ・イン・エンドクリノロジー・アンド・メタボリズム（Trends Endrocri. Metab.）」、２００２年、１３、５０〜５２）。ＰＫＡの過剰発現は、卵巣癌、乳癌および結腸癌患者からの細胞を含む様々なヒト癌細胞において観察されている。したがって、ＰＫＡの阻害は癌治療に対するアプローチとなるだろう（リ（Li, Q.）、シュー（Zhu, G-D.）、「カレントトピックス・イン・メディシナルケミストリー（Current Topics in Medicinal Chemistry）」、２００２年、２、９３９〜９７１）。
【００２０】
ヒト疾患におけるＰＫＡの役割の総説については、例えば、「プロテインキナーゼＡおよびヒト疾患―ニューヨーク科学アカデミー年報（Protein Kinase A and Human Disease, Annals of the New York Academy of Sciences）」、コンスタンチンストラタキス（Constantine A. Stratakis）編、第９６８巻、２００２年、ＩＳＢＮ１−５７３３１−４１２−９を参照されたい。
【００２１】
ＲＯＣＫキナーゼ
ＲＯＣＫキナーゼファミリーは、ＲＯＣＫ１およびＲＯＣＫ２という２つの公知のメンバーを含む。
【００２２】
ＲＯＣＫ１．同義語：Ｒｈｏ関連プロテインキナーゼ１；ｐ１６０ＲＯＣＫ；Ｐ１６０ＲＯＫ；ｐ１６０ＲＯＣＫ−１、Ｒｈｏ関連、コイルドコイル構造含有プロテインキナーゼ１；Ｒｈｏキナーゼ１；ＲＯＫベータ。
【００２３】
ＲＯＣＫ２．同義語：Ｒｈｏ関連プロテインキナーゼ２；ｐ１６４ＲＯＣＫ；ｐ１６４ＲＯＫ；ｐ１６４ＲＯＣＫ−２；Ｒｈｏ関連、コイルドコイル構造含有プロテインキナーゼ２、Ｒｈｏキナーゼ２；ＲＯＫアルファ。
【００２４】
転移の過程では、細胞−細胞および細胞−マトリクス接着に加え細胞骨格の再編成を伴い、これにより細胞の腫瘤からの離脱、局部組織への進入、そして最終的に体全体への広がりを可能にする。細胞形態および接着に対するこれら効果は、ＲｈｏＧＴＰアーゼファミリーのメンバーにより調節される。
【００２５】
活性化されたＲｈｏＡは、ＲＯＣＫキナーゼＲＯＣＫ１およびＲＯＣＫ２を含むいくつかのエフェクタータンパク質と相互作用することができる。ＲＯＣＫ１およびＲＯＣＫ２は、物理的結合を介してＲｈｏＡ−ＧＴＰコンプレックスにより活性化され得る。活性化されたＲＯＣＫは、多くの基質をリン酸化し、極めて重要な細胞機能に大切な役割を果たす。ＲＯＣＫの基質としては、ミオシン軽鎖ホスファターゼ（ＭＢＳ、ＭＹＰＴ１とも呼ばれる）のミオシン結合サブユニット、アデュシン、モエシン、ミオシン軽鎖（ＭＬＣ）、ＬＩＭキナーゼおよび転写因子ＦＨＬが挙げられる。これら基質のリン酸化は、上記タンパク質の生物活動を修飾し、外部刺激に対する細胞の反応を変更させる手段を提供する。
【００２６】
Ｒｈｏエフェクタータンパク質ＲＯＣＫ１およびＲＯＣＫ２に加え、ＲｈｏＡおよびＲｈｏＣの高度発現も、精巣性胚細胞腫瘍の進行、転移能を有する小乳癌、膀胱癌の浸潤および転移、卵巣癌における腫瘍発達を含むヒト癌において一般的に観察される。
【００２７】
侵襲性および転移性形態への腫瘍の進行には、腫瘍細胞が劇的な形態学的変化（ＲｈｏＧＴＰアーゼにより調節される過程）を経ることが必要である。アクトミオシン収縮性は、細胞が環境に対して移動する力を及ぼすメカニズムである。低分子量ＧＴＰアーゼＲｈｏ下流でのシグナル伝達は、ミオシンＩＩ軽鎖（ＭＬＣ２）リン酸化のＲＯＣＫが仲介する調節による収縮性を増加させる。
【００２８】
ＲＯＣＫキナーゼは、接着斑とストレスファイバーの誘発に関与し、ミオシン調節軽鎖のリン酸化の増強により平滑筋収縮のカルシウム増感を仲介すると考えられる。
【００２９】
生体内研究はまた、ＲＯＣＫ阻害がいくつかの腫瘍細胞株の侵襲性を減少することを示している。Ｙ−２７６３２またはＷＦ−５３６などのＲＯＣＫ阻害剤は、これらの特性を実証するためいくつかの研究において使用されている。
【００３０】
ＲＯＣＫ阻害剤は、様々な疾病の治療での使用が示唆されている。疾患としては、高血圧、慢性および鬱血性心不全、心臓肥大、再狭窄、慢性腎不全ならびにアテローム性動脈硬化症などの心疾患が挙げられる。また、阻害剤はその筋肉弛緩特性により、喘息、男性勃起障害、女性性機能障害および過活動膀胱Ｉ症候群に適し得る。
【００３１】
ＲＯＣＫ阻害剤は抗炎症特性を有することが示されている。したがって上記阻害剤は、卒中、多発性硬化症、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症および炎症性疼痛などの神経炎症性疾患ならびに関節リウマチ、過敏性腸症候群および炎症性腸疾患など他の炎症性疾患の治療として使用することができる。上記阻害剤の神経突起伸長誘発効果に基づき、ＲＯＣＫ阻害剤は、ＣＮＳ内の病変における新規の軸索成長および軸索再構成を誘発する神経再生に対して有用な薬剤と成り得る。したがってＲＯＣＫ阻害剤は、脊髄損傷、急性神経細胞損傷(卒中、外傷性脳損傷)、パーキンソン病、アルツハイマー病および他の神経変性障害などのＣＮＳ疾患の再生治療に有用であり得る。ＲＯＣＫ阻害剤が細胞増殖および細胞移動を減少させるので、ＲＯＣＫ阻害剤は癌および腫瘍転移の治療に有用であり得る。最後に、ＲＯＣＫ阻害剤がウイルス侵入による細胞骨格再構成を抑制すると示唆する証拠があり、したがってＲＯＣＫ阻害剤はまた、抗ウイルスおよび抗バクテリア用途で潜在的な治療的価値を有している。ＲＯＣＫ阻害剤はまた、インシュリン抵抗性および糖尿病の治療に有用である。
【００３２】
ＲＯＣＫ阻害剤Ｙ−２７６３２
宿主細胞層への腫瘍細胞の接着およびその後の細胞間移動は、癌浸潤および転移の極めて重要なステップである。低分子ＧＴＰアーゼＲｈｏは、アクチン細胞骨格の再編成およびアクトミオシン収縮性の調節により細胞の接着および運動性を制御する。培養ラットＭＭ１ヘパトーマ細胞は、生体外で中皮細胞単層を通って血清依存的およびＲｈｏ仲介的に移動する。Ｒｈｏの推定上の標的分子として単離されたいくつかのタンパク質のうち、ＲＯＣＫキナーゼは、培養細胞における接着斑およびストレスファイバーの誘発に関与し、ミオシン調節軽鎖のリン酸化の増強により平滑筋収縮のカルシウム増感を仲介すると考えられる。ＲＯＣＫのドミナントアクティブ変異体をコードするｃＤＮＡを有するＭＭ１細胞のトランスフェクションは、血清およびＲｈｏとは無関係に侵入活性をもたらした。対照的に、ドミナントネガティブなキナーゼ欠損ＲＯＣＫ変異体の発現は実質的に侵襲性表現型を減少させた。
【００３３】
特異的ＲＯＣＫ阻害剤（Ｙ−２７６３２）は、アクトミオシンのＲｈｏ仲介的活性化およびこれらの細胞の侵入活性の両方を阻止した。さらに、浸透圧ポンプを用いてこの阻害剤を連続的に供給することにより、同系ラットの腹膜腔へ移植されるＭＭ１細胞の広まりを大幅に減少した。これらの結果は、ＲＯＣＫが腫瘍細胞浸潤において主要な役割を果たすことを示すとともに、癌浸潤と転移の予防のための治療標的としてのＲＯＣＫの潜在能力を実証している。
【００３４】
ＶＥＧＦは、ＲｈｏＡ活性化を誘発し、ヒトＥＣの細胞膜へＲｈｏＡを動員した。ＲｈｏＡ活性のこの増加は、ドミナントネガティブＲｈｏＡのアデノウイルストランスフェクションにより示されるように、ＶＥＧＦに誘発されるＦ−アクチン細胞骨格再編成に必要である。Ｒｈｏキナーゼの特異的阻害剤であるＹ−２７６３２の使用により示されたように、Ｒｈｏキナーゼは、ＲｈｏＡのこの効果を仲介した。Ｒｈｏキナーゼの阻害は、機械的損傷に応答した、ＶＥＧＦに増強されたＥＣ移動を防いだが、定常的なＥＣ移動には影響を与えなかった。さらに、血管新生の生体外モデルにおいて、ＲｈｏＡまたはＲｈｏキナーゼのいずれかの阻害は、３次元フィブリンマトリックス中のＶＥＧＦが仲介するＥＣ内部成長を減少させた。結論：ＶＥＧＦに誘発されるＥＣの細胞骨格の変化にはＲｈｏＡおよびＲｈｏキナーゼが必要であり、ＲｈｏＡ／Ｒｈｏキナーゼシグナル伝達の活性化は、ＶＥＧＦに誘発される生体外ＥＣ移動および血管新生に関与する。
【００３５】
Ｙ−２７６３２は平滑筋を弛緩させ、血管血流を高めることができる。Ｙ−２７６３２は、細胞に進入することができる小分子であり、ラットにおける１０日間３０ｍｇ／ｋｇの経口投与では毒性を示さない。この化合物の使用有効量は約３０ｕＭである。これは高血圧ラットでの血圧を下げるが、正常なラットでの血圧には影響しない。これは、高血圧治療におけるＲｈｏシグナル伝達アンタゴニストの同定に結びついた（ソムリオ（Somlyo）、１９９７年、「ネイチャー（Nature）」３８９：９０８；ウエハタ（Uehata）ら、１９９７年、「ネイチャー（Nature）」３８９：９９０）。
【００３６】
ＲＯＣＫの特異的阻害剤であるＹ−２７６３２（ウエハタら、「ネイチャー（Nature）」３８９、９９０ ９９４、１９９７年；デービース（Davies）ら、「バイオケミカルジャーナル（Biochemical Journal）」、３５１、９５〜１０５、２０００年；およびイシザキ（Ishizaki）ら、「モレキュラーファーマコロジー（Molecular Pharmacology）」、５７、９７６〜９８３、２０００年）の使用は、血管（ウエハタ（Uehata）ら、「ネイチャー（Nature）」、３８９、９９０〜９９４、１９９７年）、気道(イリクカ（Ilikuka）ら、「ヨーロピアンジャーナル・オブ・ファーマコロジー（European Journal of Pharmacology）」、４０６、２７３〜２７９、２０００年）および生殖器(チタレー（Chitaley）ら、「ネイチャーメディシン（Nature Medicine）」、７（１）、１１９〜１２２、２００１年)の平滑筋を含む多くの組織におけるＣａ^２＋に無関係な収縮の調節におけるこの酵素の役割を示した。さらに、ジャジア（Jezior）ら、「ブリティッシュジャーナル・オブ・ファーマコロジー（British Journal of Pharmacology）」、１３４、７８〜８７、２００１年は、Ｙ−２７６３２が単離されたウサギ泌尿器３５膀胱平滑筋においてベタネコールで誘発された収縮を減少させることを示した。
【００３７】
Ｒｈｏキナーゼ阻害剤Ｙ−２７６３２は、次の疾患用途に関して試験されている。
【００３８】
・高血圧(ウエハタ（Uehata）ら、１９９７年、同上；チタレー（Chitaley）ら、２００１ａ、同上；クリスソボリス（Chrissobolis）および１５ソビー（Sobey）、２００１ Ｃ．「サーキュレーションリサーチ（Circ. Res）」８８：７７４)
・喘息（イイヅカ（Iizuka）ら、２０００年「ヨーロピアンジャーナル・オブ・ファーマコロジー（Eur. J. Pharmacol）」４０６：２７３；ナカハラ（Nakahara）ら、「ヨーロピアンジャーナル・オブ・ファーマコロジー（Eur. J. Pharmacol）」３８９：１０３、２０００年）
・肺血管収縮（タカムラ（Takamura）、２００１年「へパトロジー（Hepatology）」３３、５７７）
・血管疾患（ミヤタ（Miyata）ら、２０００年「トロンボシス・アンド・バスキュラーバイオロジー（Thromb Vasc Biol）」２０、２３５１；ロバートソン（Robertson）ら、２０００年「ブリティッシュジャーナル・オブ・ファーマコロジー（Br. J. Pharmacol）」１３１：５）
・陰茎勃起障害（チタレー（Chitaley）ら、２００１ｂ、「ネイチャーメディシン（Nature Medicine）」７：１１９；ミルズ（Mills）ら、２００１年「ジャーナル・オブ・アプライドフィジオロジー（J. Appl. Physiol.）」９１：１２６９；リーズ（Rees）ら、「ブリティッシュジャーナル・オブ・ファーマコロジー（Br. J. Pharmacol）」１３３：４５５、２００１年）
・緑内障（ホンジョウ（Honjo）ら、２００１年「メソッズ・イン・エンザイモロジー（Methods Enzymol）」４２：１３７；ラオ（Rao）ら、２００１年「インベスティガティブオフサルモロジー・アンド・ビジュアルサイエンス（Invest. Opthalmol. Urs. Sci.）４２：１０２９）
・細胞形質転換（サハイ（Sahai）ら、１９９９年「カレントバイオロジー（Curr. Biol.）」９：１３６〜５）
・前立腺癌転移(ソムリオ（Somlyo）ら、２０００年「ＢＢＲＣ」２６９：６５２)
・肝細胞癌および転移（イマムラ（Imamura）ら、２０００年；タカムラ（Takamura）ら、２００１）
・肝臓線維症（タダ（Tada）ら、２００１年「ジャーナル・オブ・へパトロジー（J. Hepatol）３４：５２９」；ワン（Wang）ら、２００１年「アメリカンジャーナル・オブ・レスピラトリーセル・アンド・モレキュラーバイオロジー（Am. J. Respir. Cell Mol Biol.）」２５：６２８）
・腎臓線維症（オールシ（Ohlci）ら、「ジャーナル・オブ・ハートラングトランスプランテーション（J. Heart Lung Transplant）」２０：９５６、２００１年）
・心保護および同種移植生着（オールシ（Ohlci）ら、２００１年、同上）
・脳血管痙攣（サトウ（Sato）ら、２０００年「サーキュレーションリサーチ（Circ. Res）」８７：１９５）
ＲＯＣＫキナーゼと心疾患
低分子グアノシン三リン酸結合タンパク質Ｒｈｏのすぐ下流の標的であるＲＯＣＫが心疾患の一因である可能性があるという証拠が増えている。ＲＯＣＫは、平滑筋収縮、ストレスファイバー形成ならびに細胞移動および増殖などの種々の細胞機能に中心的な役割を果たす。ＲＯＣＫの過剰活性は、脳虚血、冠攣縮性狭心症、高血圧、血管炎症、動脈硬化症およびアテローム性動脈硬化症において観察される。ＲＯＣＫはしたがって、心疾患において重要かつなお比較的未調査の治療標的であり得る。Ｙ−２７６３２およびファスジルなどのＲＯＣＫ阻害剤を用いる最近の実験および臨床研究は、胚発生、炎症および腫瘍形成におけるＲＯＣＫの重大な役割を示した。この総説は、細胞機能におけるＲＯＣＫの潜能的役割に注目し、心疾患の新たな治療法としてのＲＯＣＫ阻害剤の可能性について検討することとなる。
【００３９】
異常な平滑筋収縮性は高血圧などの病状の主要な要因である可能性があり、このプロセスを修飾する平滑筋弛緩物質は治療上有用であろう。平滑筋収縮は、細胞質のＣａ^２＋濃縮および筋フィラメントのＣａ^２＋感受性により調節され、前者はミオシン軽鎖キナーゼを活性化し、後者はミオシンホスファターゼの阻害により部分的に達成される。
【００４０】
血管平滑筋細胞におけるＲｈｏシグナル伝達経路は、再狭窄傷害およびアテローム性動脈硬化症を含む様々な血管疾患に関連する症状である高血圧において高度に活性化されている。
【００４１】
高血圧は、増加した末梢血管抵抗および／または血管構造再構築に特徴付けられる心臓血管疾患である。低分子量ＧＴＰアーゼＲｈｏおよびその下流のエフェクターであるＲｈｏキナーゼが高血圧の病因に重要な役割を果たすことを示唆する、高血圧の動物モデルからの証拠が近年急速に増加している。Ｒｈｏ／Ｒｈｏキナーゼ経路の活性化は、高血圧における平滑筋収縮性にとって不可欠である。より多いＲｈｏＡ発現および増強したＲｈｏＡ活性が、遺伝的自然発症高血圧ラットおよびＮ（オメガ）−ニトロ−Ｌ−アルギニンメチルエステル誘発性高血圧などの高血圧ラットの大動脈で観察されている。
【００４２】
ＲＯＣＫキナーゼと神経疾患
Ｒｈｏ／ＲＯＣＫ経路の異常活性化は中枢神経系の様々な疾患で観察されている。成人脊椎動物の脳および脊髄の損傷はＲＯＣＫを活性化し、これにより神経突起成長および発芽が阻害される。ＲＯＣＫの阻害は、哺乳類の脊髄損傷後の再生を早め、機能回復を増強し、Ｒｈｏ／ＲＯＣＫ経路の阻害はまた、卒中、炎症性および脱髄性疾患、アルツハイマー病および神経障害性疼痛の動物モデルにおいて有効であることが証明された。ＲＯＣＫ阻害剤はしたがって、様々な神経疾患における神経変性を防ぎ、神経再生を刺激する潜在的な能力を有する。
【００４３】
神経細胞の発達は、発生した場所からの移動そして突起伸長に始まる一連の工程を必要とし、最終的に、分化、および神経細胞が適切な標的と連絡することを可能にする結合部の形成をもたらす。過去数年にわたり、ＧＴＰアーゼのＲｈｏファミリーおよび関連する分子が、神経突起伸長および分化、軸索経路探索、ならびに樹状突起棘形成および維持を含む神経発達の様々な側面で重要な役割を果たすことが明らかになった。
【００４４】
神経突起伸長阻害および神経突起反卒中用の両方に関する共通要素の１つとしては、成長円錐内のアクチン再構成が挙げられる。神経細胞および非神経細胞の両方におけるアクチン細胞骨格の調節の中心となるのは、低分子ＧＴＰアーゼのＲｈｏファミリーである。Ｒｈｏファミリーのメンバーは、不活性なＧＤＰ結合形態と活性のあるＧＴＰ結合形態を繰り返す。一連のいくつかの証拠は、ＲｈｏＧＴＰアーゼの活性状態の操作が成長円錐崩壊および神経突起伸長阻害を修飾し得ることを示唆している。
【００４５】
より最近では、行動学的には、Ｒｈｏ経路の不活性化は、移動力の迅速な回復および前肢後肢調和の漸進的な回復をもたらすことができる。これらの所見は、Ｒｈｏシグナル伝達経路が脊髄損傷後の治療的介入の潜在的な標的であるという証拠を提供する。
【００４６】
ｐ７０Ｓ６Ｋキナーゼ
７０ｋＤａリボソームプロテインキナーゼｐ７０Ｓ６Ｋ（ＳＫ６、ｐ７０／ｐ８５Ｓ６キナーゼ、ｐ７０／ｐ８５リボソームＳ６キナーゼおよびｐｐ７０ｓ６ｋとしても知られる）はプロテインキナーゼのＡＧＣサブファミリーのメンバーである。ｐ７０Ｓ６Ｋはセリンスレオニンキナーゼであり、ホスファチジルイノシトール３キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）／ＡＫＴ経路の構成要素である。ｐ７０Ｓ６ＫはＰＩ３Ｋの下流にあり、多数のマイトジェン、ホルモンおよび増殖因子に応答して多くの部位でリン酸化によって活性化が起こる。ラパマイシンはｐ７０Ｓ６Ｋ活性を阻害する作用があり、タンパク質合成を阻止する（特に、リボソームタンパク質をコードするこれらのｍＲＮＡの翻訳のダウンレギュレーションの結果として）ので、この応答はｍＴＯＲに制御されている可能性がある。ｐ７０Ｓ６ＫはまたＰＩ３Ｋおよびその下流標的であるＡＫＴにより調節される。ウォルトマンニンおよびラパマイシンは、ＰＩ３Ｋ経路に依存する部位でｐ７０Ｓ６Ｋリン酸化の低下を引き起こす。変異ｐ７０Ｓ６Ｋは、ラパマイシンではなくウォルトマンニンにより阻害され、これはＰＩ３Ｋ経路がｍＴＯＲ活性の調節と無関係にｐ７０Ｓ６Ｋに対して効果を呈し得ることを示唆している。
【００４７】
酵素ｐ７０Ｓ６Ｋは、Ｓ６リボソームタンパク質のリン酸化によりタンパク質合成を修飾する。Ｓ６のリン酸化は、リボソームタンパク質および翻訳伸長因子（その発現増加が細胞成長および増殖にとって不可欠である）を含む翻訳装置の構成要素をコードするｍＲＮＡの増加した翻訳と相関する。これらｍＲＮＡは、翻訳レベルでこれらｍＲＮＡの調節にとって不可欠なことが示されている５’転写開始（５’ＴＯＰと呼ばれる）においてオリゴピリミジン経路を含んでいる。
【００４８】
翻訳への関与に加え、ｐ７０Ｓ６Ｋ活性化はまた、細胞周期制御、神経細胞分化、細胞運動の調節、ならびに腫瘍転移、免疫反応および組織修復において重要である細胞応答に関与すると考えられている。ｐ７０Ｓ６Ｋに対する抗体は、細胞分裂誘起反応により引き起こされるラット繊維芽細胞のＳ期への進入を阻止し、これは、ｐ７０Ｓ６Ｋ機能が細胞周期におけるＧ１期からＳ期への進行にとって不可欠であることを示している。さらに、ラパマイシンによる細胞周期のＧ１期からＳ期での細胞周期増殖の阻害は、高リン酸化活性型ｐ７０Ｓ６Ｋの産生の阻害の結果であると確認されている。
【００４９】
腫瘍抑制因子ＬＫＢ１は、ｍＴＯＲ／ｐ７０Ｓ６Ｋ経路のＴＳＣ１／２コンプレックスをリン酸化するＡＭＰＫを活性化し、したがってＰＫＢに依存しない経路を通ってｐ７０Ｓ６Ｋに入る。ＬＫＢ１における変異は、ポイツイエーガー症候群（ＰＪＳ）を引き起し、ＰＪＳの患者は、一般集団より癌になる可能性が１５倍高い。加えて、肺腺癌の１／３では不活性化ＬＫＢ１変異を有する。
【００５０】
腫瘍細胞増殖および細胞死からの細胞の保護におけるｐ７０Ｓ６Ｋの役割は、腫瘍組織における増殖因子受容体シグナル伝達、過剰発現および活性化へのｐ７０Ｓ６Ｋの関与に基づいて認識される。例えば、ノーザンおよびウェスタン分析は、ＰＳ６Ｋ遺伝子の増幅は対応するｍＲＮＡおよびタンパク質発現の増加を伴うことをそれぞれ示した（「キャンサーリサーチ（Cancer Res.）」（１９９９年）５９：１４０８〜１１−染色体領域１７ｑ２３に対するＰＳ６Ｋの局在および乳癌におけるその増幅の測定（Localization of PS6K to Chromosomal Region 17q23 and Determination of Its Amplification in Breast Cancer））。
【００５１】
膵臓癌、膀胱癌および神経芽細胞腫などの他の癌型に加え、原発性乳房腫瘍の２０％まで、ＢＲＣＡ２変異を含む乳房腫瘍の８７％で、そしてＢＲＣＡ１変異を含む腫瘍の５０％で染色体１７ｑ２３が増幅される（バールルンド（M Barlund）、モンニ（O Monni）、コノネン（J Kononen）、コーネリソン（R Cornelison）、トーホースト（J Torhorst）、サウター（G Sauter）、カリオニエミ（O-P Kallioniemi）およびカリオニエミ（Kallioniemi A）、「キャンサーリサーチ（Cancer Res.）」、２０００年、６０：５３４０〜５３４６参照)。乳癌における１７ｑ２３の増幅はＰＡＴ１、ＲＡＤ５１Ｃ、ＰＳ６ＫおよびＳＩＧＭＡ１Ｂ遺伝子と関連することが示されている「キャンサーリサーチ（Cancer Res.）」、２０００年、６０：５３７１〜５３７５ページ）。
【００５２】
ｐ７０Ｓ６Ｋ遺伝子は、この領域における増幅および過剰発現の標的として認識されており、増幅と予後不良の間に統計的に有意な関連性が観察されている。
【００５３】
ｐ７０Ｓ６Ｋ活性化の臨床上の阻害は、上流キナーゼｍＴＯＲの阻害剤であるＣＣＩ−７７９（ラパマイシンエステル）で治療された腎癌患者において観察された。疾患進行とｐ７０Ｓ６Ｋ活性の阻害との間で著しい線形関連が報告された。
【００５４】
ｐ７０Ｓ６Ｋは、代謝病および代謝疾患に関与しているとみなされている。ｐ７０Ｓ６の欠如は、インスリン感受性を増強する一方、加齢性および食餌性肥満に対して効果があることが報告された。肥満、糖尿病、メタボリック症候群、インシュリン抵抗性、高血糖、高アミノ酸血症および高脂血症などの代謝病および疾患におけるｐ７０Ｓ６Ｋの役割は、当該知見に基づいて認識されている。
【００５５】
ＰＫＢおよびＰＫＡ阻害活性を有するピラゾール化合物
いくつかの類（classes）の化合物がＰＫＡおよびＰＫＢ阻害活性を有するとして開示されている。例えば、ＷＯ２００５／０６１４６３（アステックス社（Astex））は、ＰＫＢおよびＰＫＡ阻害活性を有するピラゾール化合物を開示しており、例示された１種の特定の化合物は２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−エタノールである。この化合物（構造を下記に示す）は、アスタリスクで印をつけた炭素原子にキラル中心を有する。
【化１】

【００５６】
ＷＯ２００５／０６１４６３の実施例８４に記載の化合物は、考えられる２種のエナンチオマーのラセミ混合物である。実施例１０６および１０７によると、実施例８４の化合物は、生体外のＰＫＡおよびＰＫＢアッセイにおいてそれぞれの場合１マイクロモル未満のＩＣ_５０値を有している。
【００５７】
ＷＯ２００５／０６１４６３はまた、以下のように多くの個別のエナンチオマーを開示および例示している。
【化２】

【００５８】
異性体Ａおよび異性体Ｂは１組のエナンチオマーをなし、異性体Ｃおよび異性体Ｄは別の組のエナンチオマーをなす。
【００５９】
本出願人が行なった試験では、異性体Ａは結合アッセイにおいてＰＫＢに対しての活性がその鏡像異体性Ｂよりも１０倍あることが実証された。同様に、異体性Ｃは結合アッセイにおいてその鏡像異体性Ｄよりも活性が約１０倍ある。しかしながら、メカニスティック（mechanistic）な細胞ＥＬＩＳＡアッセイでは異体性ＣおよびＤは本質的には効力が等しい。
【発明の概要】
【００６０】
上記の異体性Ａ、Ｂ、ＣおよびＤの活性に基づくと、ＷＯ２００５／０６１４６３の実施例８４の化合物の個々のエナンチオマーの活性の差も比較的小さいことが示されることが予想され得る。
【００６１】
しかしながら今や２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−エタノールのＳエナンチオマーは、ＰＫＢに対して、対応するＲエナンチオマーよりも１００倍活性がある（放射測定（radiometric）結合アッセイにより測定）ことが最も予想外にも見出された。さらに、上記異体性ＣおよびＤはメカニスティックな細胞アッセイにおいては本質的には効力が等しく、２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−エタノールのＳエナンチオマーはこのアッセイにおいて優れた活性を有するが、Ｒエナンチオマーは測定可能な活性を有さない。上記公知の個々のエナンチオマーＡ、Ｂ、ＣおよびＤの特性と比較した場合、２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−エタノールのＳエナンチオマーとＲエナンチオマーとの活性の差は非常に驚くべきものであり予測することができなかった。
【００６２】
上記のことから判断すると２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−エタノールのＳエナンチオマーは、その鏡像異性体であるＲ異体性よりもはるかに利点を有する。
【００６３】
したがって第１の態様では、本発明は（Ｓ）２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−エタノールを含む組成物を提供し、ここでこの組成物は（Ｒ）２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−エタノールを実質的に含まないか、またはこの組成物は（Ｓ）エナンチオマーが大半を占める（Ｓ）および（Ｒ）エナンチオマーの混合物を含むかのいずれかである。
【００６４】
本発明はまた、少なくとも７５％がＳエナンチオマー形態の２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−エタノールまたはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシドを含む組成物を提供する。
【００６５】
「組成物」なる語は、本明細書では組成物（composition of matter）を指し、２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−エタノールのみから成る組成物と追加成分を含む組成物とを包含する。本発明によれば、組成物中に存在する全ての２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−エタノールの少なくとも７５％がＳエナンチオマー形態でなければならない。この組成物は、本明細書では便宜上「本発明の組成物」または「本明細書で定義される組成物」または「上記組成物」と言及される場合がある。
【００６６】
所与の組成物中に存在する両方のエナンチオマー形態の２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−エタノールの合計量に対するこの組成物中に存在する（Ｓ）−２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−エタノールの量は「鏡像異性体純度」として表現される場合がある。例えば、組成物中に存在する２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−エタノール全体の７５％がＳエナンチオマー形態であれば、鏡像異性体純度は７５％である。
【００６７】
好ましくは、（Ｓ）−２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−エタノールは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、または少なくとも９０％、または少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または９９．５％の鏡像異性体純度を有する。
【００６８】
好ましい実施形態では２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−エタノールの９８％より多くがＳエナンチオマーの形態である。
【００６９】
別の実施形態では２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−エタノールの少なくとも９９．９％がＳエナンチオマーの形態である。
【００７０】
好ましくは（Ｒ）−２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−エタノールは実質的に組成物中に存在しない。本願で用いられる「（Ｒ）−２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−エタノールは実質的に組成物中に存在しない」なる語は、Ｒエナンチオマーが本明細書に記載の分析方法を使用しても検出することができないことを意味する。
【００７１】
一実施形態では、上記組成物は（Ｓ）−２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−エタノールまたはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシドと、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物である。
【００７２】
別の実施形態では、上記組成物は実質的に純粋な形態（すなわち不純物は０．５％未満、より好ましくは０．１％未満、最も好ましくは０．０１％未満で含まれる）の（Ｓ）−２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−エタノールまたはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシドを含む。
【００７３】
好ましい実施形態では、上記組成物中には０．２重量％を超える量に対応する量の不純物は１種も存在せず、好ましくは０．１重量％以下である。
【００７４】
別の実施形態では、不純物が特定されている場合、この不純物は０．５％を超える、または０．４％を超える、または０．３％を超える、または０．２％を超える、または０．１％を超える、または０．０５％を超える、または０．０１％を超える量では組成物中に存在しないことが好ましい。
【００７５】
（Ｓ）−２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−エタノールは下記式（Ｉ）により表わされ、本明細書では「式（Ｉ）の化合物」または「Ｓエナンチオマー」と呼ばれ得る。
【化３】

【００７６】
（Ｒ）−２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−エタノールは、便宜上本明細書では「Ｒエナンチオマー」と呼ばれ得る。
【００７７】
本明細書では「Ｒ」および「Ｓ」なる語は、カーン（Cahn）、インゴールド（Ingold）およびプレログ（Prelog）により開発された「ＲおよびＳ」命名法を指す。「アドバンスドオーガニックケミストリー（Advanced Organic Chemistry）」、ジェリーマーチ（Jerry March）、第４版、ジョンワイリー＆サンズ、ニューヨーク、１９９２年、１０９〜１１４ページ、およびカーン、インゴールド＆プレログ（Cahn、 Ingold & Prelog）、「アンゲヴァンテケミーインターナショナルエディション・イン・イングリッシュ（Angew. Chem. Int. Ed. Engl.）」、１９６６年、５、３８５〜４１５を参照されたい。
【００７８】
本発明の組成物は、例えば下記のキラルクロマトグラフィーを用いて２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−エタノールの（Ｓ）および（Ｒ）エナンチオマーの混合物を部分的にまたは完全に分割することにより調製することができる。
【００７９】
（Ｓ）−２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−エタノール（すなわち、式（Ｉ）の化合物）は、プロテインキナーゼＢ（ＰＫＢ）および／またはプロテインキナーゼＡ（ＰＫＡ）の阻害または修飾活性を有し、したがってＰＫＢおよび／またはＰＫＡにより仲介される病態または症状の予防あるいは治療において有用である。
【００８０】
別の態様では、本発明は、式（Ｉ）の化合物（すなわち（Ｓ）−２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−エタノール）またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシドを実質的に純粋な形態（すなわち、不純物を０．５％未満、好ましくは０．１％未満、最も好ましくは０．０１％未満含む）で提供する。
【００８１】
一実施形態では、上記化合物はＮ−オキシド以外であり、遊離塩基またはその塩、溶媒和物もしくは互変異性体から選ばれる。
【００８２】
別の実施形態では、式（Ｉ）の化合物またはその互変異性体は遊離塩基の形態である。
【００８３】
さらなる実施形態では、式（Ｉ）の化合物またはその互変異性体は塩の形態である。本発明によって調製される一種の特定の塩は、塩酸で形成される塩である。
【００８４】
さらなる態様では、発明は以下のものを提供する。
【００８５】
・プロテインキナーゼＢにより仲介される病態もしくは症状の予防または治療で用いるための、本明細書で定義される組成物あるいは式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシド。
【００８６】
・プロテインキナーゼＢにより仲介される病態もしくは症状の予防または治療用薬剤の製造のための、本明細書で定義される組成物あるいは式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシドの使用。
【００８７】
・プロテインキナーゼＢにより仲介される病態もしくは症状の予防または治療方法であって、その必要のある被験体に本明細書で定義される組成物あるいは式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシドを投与することを含む方法。
【００８８】
・哺乳類における異常な細胞増殖もしくは細胞死の異常な停止からなる、またはそれから生じる疾病あるいは症状の治療に用いる、本明細書で定義される組成物あるいは式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシド。
【００８９】
・哺乳類における異常な細胞増殖もしくは細胞死の異常な停止からなる、またはそれから生じる疾病あるいは症状の治療用薬剤の製造のための、本明細書で定義される組成物あるいは式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシドの使用。
【００９０】
・哺乳類における異常な細胞増殖からなる、またはそれから生じる疾病あるいは症状の治療方法であって、本明細書で定義される組成物あるいは式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシドを、異常な細胞増殖または細胞死の異常な停止を阻害するのに有効な量で上記哺乳類に投与することを含む方法。
【００９１】
・哺乳類における異常な細胞増殖もしくは細胞死の異常な停止からなる、またはそれから生じる疾病または症状の罹患率の緩和あるいは減少方法であって、本明細書で定義される組成物あるいは式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシドを、異常な細胞増殖を阻害するのに有効な量で上記哺乳類に投与することを含む方法。
【００９２】
・哺乳類における異常な細胞増殖もしくは細胞死の異常な停止からなる、またはそれから生じる疾病あるいは症状の治療方法であって、本明細書で定義される組成物あるいは式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシドを、プロテインキナーゼＢの活性を阻害するのに有効な量で上記哺乳類に投与することを含む方法。
【００９３】
・プロテインキナーゼＢの阻害に用いるための、本明細書で定義される組成物あるいは式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシド。
【００９４】
・プロテインキナーゼＢの阻害方法であって、当該キナーゼを本明細書で定義されるキナーゼ阻害性の組成物あるいは式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシドに接触させることを含む方法。
【００９５】
・プロテインキナーゼＢおよび／またはプロテインキナーゼＡの活性を阻害することによる細胞過程（例えば、細胞分裂）の修飾に用いるための、本明細書で定義される組成物あるいは式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシド。
【００９６】
・プロテインキナーゼＢおよび／またはプロテインキナーゼＡの活性を阻害することによる細胞過程（例えば、細胞分裂）の修飾用薬剤の製造のための、本明細書で定義される組成物あるいは式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシドの使用。
【００９７】
・本明細書で定義される組成物あるいは式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシドを用いてプロテインキナーゼＢおよび／またはプロテインキナーゼＡの活性を阻害することによる細胞過程（例えば、細胞分裂）の修飾方法。
【００９８】
・プロテインキナーゼＡにより仲介される病態もしくは症状の予防または治療で用いるための、本明細書で定義される組成物あるいは式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシド。
【００９９】
・プロテインキナーゼＡにより仲介される病態もしくは症状の予防または治療用薬剤の製造のための、本明細書で定義される組成物あるいは式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシドの使用。
【０１００】
・プロテインキナーゼＡにより仲介される病態もしくは症状の予防または治療方法であって、その必要のある被験体に本明細書で定義される組成物あるいは式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシドを投与することを含む方法。
【０１０１】
・哺乳類における異常な細胞増殖もしくは細胞死の異常な停止からなる、またはそれから生じる疾病あるいは症状の治療方法であって、本明細書で定義される組成物あるいは式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシドを、プロテインキナーゼＡの活性を阻害するのに有効な量で上記哺乳類に投与することを含む方法。
【０１０２】
・プロテインキナーゼＡの阻害のための、本明細書で定義される組成物あるいは式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシド。
【０１０３】
・プロテインキナーゼＡの阻害方法であって、当該キナーゼを本明細書で定義されるキナーゼ阻害性の組成物あるいは式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシドに接触させることを含む方法。
【０１０４】
・本明細書で定義される組成物あるいは式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシドを用いてプロテインキナーゼＡの活性を阻害することによる細胞過程（例えば、細胞分裂）の修飾方法。
【０１０５】
・異常な細胞増殖もしくは細胞死の異常な停止からなる、またはそれから生じる病態または症状の予防あるいは治療用薬剤の製造のための、本明細書で定義される組成物あるいは式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシドの使用。
【０１０６】
・本明細書で定義される組成物あるいは式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシドと薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
【０１０７】
・医薬に用いるための、本明細書で定義される組成物あるいは式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシド。
【０１０８】
・本明細書で開示される病態もしくは症状のいずれか１種の予防または治療用薬剤の製造のための、本明細書で定義される組成物あるいは式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシドの使用。
【０１０９】
・本明細書で開示される病態もしくは症状のいずれか１種の治療または予防方法であって、患者（例えば、その必要のある患者）に本明細書で定義される組成物あるいは式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシドを（例えば、治療上有効な量で）投与することを含む方法。
【０１１０】
・本明細書に開示される病態または症状の罹患率の緩和あるいは減少方法であって、患者（例えば、その必要のある患者）に本明細書で定義される組成物あるいは式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシドを（例えば、治療上有効な量で）投与することを含む方法。
【０１１１】
・（ｉ）患者が罹患している、もしくは罹患している可能性のある疾病または症状がプロテインキナーゼＢ対して活性を有する化合物による治療に感受性があるものかどうかを判定すべく患者をスクリーニングすること、および（ｉｉ）患者の疾病または症状がそのような感受性を有することが示された場合に、その後、本明細書で定義される組成物あるいは式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシドを上記患者に投与することを含む、プロテインキナーゼＢにより仲介される病態または症状の診断あるいは治療方法。
【０１１２】
・スクリーニングされ、プロテインキナーゼＢに対して活性を有する化合物による治療に感受性のある疾病もしくは症状に罹患している、または罹患する危険性があると判定された患者における病態または症状の治療あるいは予防用薬剤の製造のための、本明細書で定義される組成物あるいは式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシドの使用。
【０１１３】
・スクリーニングされ、プロテインキナーゼＢに対して活性を有する化合物による治療に感受性のある疾病もしくは症状に罹患している、または罹患する危険性があると判定された患者における病態または症状の治療あるいは予防で用いるための、本明細書で定義される組成物あるいは式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシド。
【０１１４】
・（ｉ）患者が罹患している、もしくは罹患している可能性のある疾病または症状がプロテインキナーゼＡ対して活性を有する化合物による治療に感受性があるものかどうかを判定すべく患者をスクリーニングすること、および（ｉｉ）患者の疾病または症状がそのような感受性を有することが示された場合に、その後、本明細書で定義される組成物あるいは式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシドを上記患者に投与することを含む、プロテインキナーゼＡにより仲介される病態または症状の診断あるいは治療方法。
【０１１５】
・スクリーニングされ、プロテインキナーゼＡに対して活性を有する化合物による治療に感受性のある疾病もしくは症状に罹患している、または罹患する危険性があると判定された患者における病態または症状の治療あるいは予防で用いるための、本明細書で定義される組成物あるいは式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシド。
【０１１６】
・スクリーニングされ、プロテインキナーゼＡに対して活性を有する化合物による治療に感受性のある疾病もしくは症状に罹患している、または罹患する危険性があると判定された患者における病態または症状の治療あるいは予防用薬剤の製造のための、本明細書で定義される組成物あるいは式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシドの使用。
【０１１７】
・プロテインキナーゼＢおよび／またはプロテインキナーゼＡのモジュレーター（例えば、阻害剤）として用いるための、本明細書で定義される組成物あるいは式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシド。
【０１１８】
・プロテインキナーゼＢおよび／またはプロテインキナーゼＡの修飾（例えば、阻害）用薬剤の製造のための、本明細書で定義される組成物あるいは式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシドの使用。
【０１１９】
・プロテインキナーゼＢおよび／またはプロテインキナーゼＡの修飾（例えば、阻害）方法であって、当該プロテインキナーゼＢおよび／またはプロテインキナーゼＡを（例えば、細胞環境で、例えば、インビボで）本明細書で定義される組成物あるいは式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシドに接触させることを含む方法。
【０１２０】
・（ａ）ＲＯＣＫキナーゼの修飾（例えば、阻害）が示される疾病または症状の治療または予防；ならびに／あるいは（ｂ）ＲＯＣＫキナーゼの修飾（例えば、阻害）が示される被験者または患者集団の治療に用いる、本明細書で定義される組成物あるいは式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシド。
【０１２１】
・（ａ）ＲＯＣＫキナーゼの修飾（例えば、阻害）が示される疾病または症状の治療または予防；ならびに／あるいは（ｂ）ＲＯＣＫキナーゼの修飾（例えば、阻害）が示される被験者または患者集団の治療用薬剤の製造のための、本明細書で定義される組成物あるいは式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシドの使用。
【０１２２】
・ＲＯＣＫキナーゼにより仲介される病態もしくは症状の予防または治療方法であって、その必要のある被験体に本明細書で定義される組成物あるいは式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシドを投与することを含む方法。
【０１２３】
・哺乳類における異常な細胞増殖もしくは細胞死の異常な停止からなる、またはそれから生じる疾病あるいは症状の治療方法であって、本明細書で定義される組成物あるいは式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシドを、ＲＯＣＫキナーゼの活性を阻害するのに有効な量で上記哺乳類に投与することを含む方法。
【０１２４】
・ＲＯＣＫキナーゼに本明細書で定義されるキナーゼ阻害性の組成物または化合物を接触させることを含む、ＲＯＣＫキナーゼの阻害方法。
【０１２５】
・本明細書で定義される組成物あるいは式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシドを用いてＲＯＣＫキナーゼの活性を阻害することによる細胞過程（例えば、細胞分裂）の修飾方法。
【０１２６】
・ＲＯＣＫキナーゼにより仲介される病態もしくは症状の予防または治療で用いるための、本明細書で定義される組成物あるいは式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシド。
【０１２７】
・ＲＯＣＫキナーゼにより仲介される病態もしくは症状の予防または治療用薬剤の製造のための、本明細書で定義される組成物あるいは式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシドの使用。
【０１２８】
・ＲＯＣＫキナーゼにより仲介される異常な細胞増殖もしくは細胞死の異常な停止からなる、またはそれから生じる病態または症状の予防あるいは治療用薬剤の製造のための、本明細書で定義される組成物あるいは式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシドの使用。
【０１２９】
・ＲＯＣＫキナーゼにより仲介される哺乳類における異常な細胞増殖もしくは細胞死の異常な停止からなる、またはそれから生じる疾病または症状の罹患率の緩和あるいは減少方法であって、本明細書で定義される組成物あるいは式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシドを、異常な細胞増殖を阻害するのに有効な量で上記哺乳類に投与することを含む方法。
【０１３０】
・本明細書で開示される病態もしくは症状のいずれか１種の予防または治療用薬剤の製造のための、本明細書で定義される組成物あるいは式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシドの使用。
【０１３１】
・本明細書で開示される病態もしくは症状のいずれか１種の治療または予防方法であって、患者（例えば、その必要のある患者）に本明細書で定義される組成物または式（Ｉ）の化合物を（例えば、治療上有効な量で）投与することを含む方法。
【０１３２】
・本明細書で開示される病態もしくは症状の罹患率の緩和または低減方法であって、患者（例えば、その必要のある患者）に本明細書で定義される組成物または式（Ｉ）の化合物を（例えば、治療上有効な量で）投与することを含む方法。
【０１３３】
・（ｉ）患者が罹患している、もしくは罹患している可能性のある疾病または症状がＲＯＣＫキナーゼ対して活性を有する化合物による治療に感受性があるものかどうかを判定すべく患者をスクリーニングすること、および（ｉｉ）患者の疾病または症状がそのような感受性を有することが示された場合に、その後、本明細書で定義される組成物あるいは式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシドを上記患者に投与することを含む、ＲＯＣＫキナーゼにより仲介される病態または症状の診断あるいは治療方法。
【０１３４】
・スクリーニングされ、ＲＯＣＫキナーゼに対して活性を有する化合物による治療に感受性のある疾病もしくは症状に罹患している、または罹患する危険性があると判定された患者における病態または症状の治療あるいは予防用薬剤の製造のための、本明細書で定義される組成物あるいは式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシドの使用。
【０１３５】
・（ａ）プロテインキナーゼｐ７０Ｓ６Ｋの修飾（例えば、阻害）が示される疾病または症状の治療または予防；ならびに／あるいは（ｂ）プロテインキナーゼｐ７０Ｓ６Ｋの修飾（例えば、阻害）が示される被験者または患者集団の治療に用いる、本明細書で定義される組成物あるいは式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシド。
【０１３６】
・（ａ）プロテインキナーゼｐ７０Ｓ６Ｋの修飾（例えば、阻害）が示される疾病または症状の治療または予防；ならびに／あるいは（ｂ）プロテインキナーゼｐ７０Ｓ６Ｋの修飾（例えば、阻害）が示される被験者または患者集団の治療用薬剤の製造のための、本明細書で定義される組成物あるいは式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシドの使用。
【０１３７】
・プロテインキナーゼｐ７０Ｓ６Ｋにより仲介される病態もしくは症状の予防または治療方法であって、その必要のある被験体に本明細書で定義される組成物あるいは式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシドを投与することを含む方法。
【０１３８】
・哺乳類における異常な細胞増殖もしくは細胞死の異常な停止からなる、またはそれから生じる疾病あるいは症状の治療方法であって、本明細書で定義される組成物あるいは式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシドを、プロテインキナーゼｐ７０Ｓ６Ｋの活性を阻害するのに有効な量で上記哺乳類に投与することを含む方法。
【０１３９】
・プロテインキナーゼｐ７０Ｓ６Ｋの阻害方法であって、当該キナーゼを本明細書で定義されるキナーゼ阻害性の組成物あるいは式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシドに接触させることを含む方法。
【０１４０】
・本明細書で定義される組成物あるいは式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシドを用いてプロテインキナーゼｐ７０Ｓ６Ｋの活性を阻害することによる細胞過程（例えば、細胞分裂）の修飾方法。
【０１４１】
・プロテインキナーゼｐ７０Ｓ６Ｋにより仲介される病態もしくは症状の予防または治療で用いるための、本明細書で定義される組成物あるいは式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシド。
【０１４２】
・プロテインキナーゼｐ７０Ｓ６Ｋにより仲介される病態もしくは症状の予防または治療用薬剤の製造のための、本明細書で定義される組成物あるいは式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシドの使用。
【０１４３】
・プロテインキナーゼｐ７０Ｓ６Ｋにより仲介される異常な細胞増殖もしくは細胞死の異常な停止からなる、またはそれから生じる病態または症状の予防あるいは治療用薬剤の製造のための、本明細書で定義される組成物あるいは式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシドの使用。
【０１４４】
・プロテインキナーゼｐ７０Ｓ６Ｋにより仲介される哺乳類における異常な細胞増殖もしくは細胞死の異常な停止からなる、またはそれから生じる疾病または症状の罹患率の緩和あるいは減少方法であって、本明細書で定義される組成物あるいは式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシドを、異常な細胞増殖もしくは細胞死の異常な停止を阻害するのに有効な量で上記哺乳類に投与することを含む方法。
【０１４５】
・本明細書で開示される病態もしくは症状のいずれか１種の予防または治療用薬剤の製造のための、本明細書で定義される組成物あるいは式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシドの使用。
【０１４６】
・本明細書で開示される病態または症状のいずれか１種の治療または予防方法であって、患者（例えば、その必要のある患者）に本明細書で定義される組成物または式（Ｉ）の化合物を（例えば、治療上有効な量で）投与することを含む方法。
【０１４７】
・本明細書で開示される病態もしくは症状の罹患率の緩和または低減方法であって、患者（例えば、その必要のある患者）に本明細書で定義される組成物または式（Ｉ）の化合物を（例えば、治療上有効な量で）投与することを含む方法。
【０１４８】
・（ｉ）患者が罹患している、もしくは罹患している可能性のある疾病または症状がプロテインキナーゼｐ７０Ｓ６Ｋ対して活性を有する化合物による治療に感受性があるものかどうかを判定すべく患者をスクリーニングすること、および（ｉｉ）患者の疾病または症状がそのような感受性を有することが示された場合に、その後、本明細書で定義される組成物あるいは式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシドを上記患者に投与することを含む、プロテインキナーゼｐ７０Ｓ６Ｋにより仲介される病態または症状の診断あるいは治療方法。
【０１４９】
・スクリーニングされ、プロテインキナーゼｐ７０Ｓ６Ｋに対して活性を有する化合物による治療に感受性のある疾病もしくは症状に罹患している、または罹患する危険性があると判定された患者における病態または症状の治療あるいは予防用薬剤の製造のための、本明細書で定義される組成物あるいは式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシドの使用。
【０１５０】
本発明はまた、下記請求項に開示されるさらなる組合せ、使用、方法、化合物、および工程を提供する。
【発明の具体的説明】
【０１５１】
本明細書では、「修飾」なる語は、キナーゼの活性に対して適用される場合、プロテインキナーゼの生物学的活性のレベルの変化を明確にすることを意図している。したがって、修飾は、関連するプロテインキナーゼ活性の増加または減少をもたらす生理学的変化を包含する。後者の場合では、修飾は「阻害」として記載されてもよい。修飾は、直接的または間接的に生じてもよく、任意のメカニズムによりならびに任意の生理的なレベルで仲介されてもよい。例えば、遺伝子発現のレベル（例えば、転写、翻訳および／または翻訳後修飾を含む）、キナーゼ活性のレベルに直接的または間接的に作用する調節要素をコードする遺伝子発現のレベルが挙げられる。したがって、修飾は、転写効果による遺伝子増幅（すなわち複数の遺伝子コピー）および／または増加した発現もしくは減少した発現を含むキナーゼの増加した発現／抑制された発現または過剰発現もしくは低発現に加えて、変異による（（脱）活性化を含む）プロテインキナーゼの過剰活性（または低活性）および（脱）活性化を意味し得る。「修飾された」、「修飾している」および「修飾する」なる語は適宜解釈されるべきである。
【０１５２】
本明細書では、例えば、本明細書で記載される（および、例えば、様々な生理的な過程、疾病、状態、症状、処置、治療あるいは介入に対して適用される）ような、キナーゼと共に使用される、「仲介される」なる語は、この用語が適用される様々な過程、疾病、状態、症状、治療および介入はキナーゼが生物学的役割を果たすものであるように、制限的に働くことを意図するものである。この用語が、疾病、状態または症状に対して適用される場合において、キナーゼにより果たされる生物学的役割は、直接的または間接的であってもよく、疾病、状態または症状の病徴の発現（またはその病因または進行）のために、必要および／または十分であってもよい。したがって、キナーゼ活性（特に異常なレベルのキナーゼ活性、例えば、キナーゼ過剰発現）は、必ずしも疾病、状態または症状の近因である必要がなく、むしろ上記キナーゼに仲介される疾病、状態または症状は、問題となるキナーゼが部分的にのみ関わる、多元的な病因および複雑な進行を有するものを含んでいると理解される。この用語が、治療、予防または介入に対して適用される場合において、上記キナーゼにより果たされる役割は直接的または間接的であってもよく、あるいは、治療、予防または介入の転帰の操作のために必要および／または十分であってもよい。したがって、キナーゼが仲介する病態または症状は、ある特定の抗癌剤あるいは治療に対する耐性の発生を含む。
【０１５３】
本明細書では、「ＲＯＣＫキナーゼ」および「ＲＯＣＫ」なる語は、ＲＯＣＫキナーゼファミリーの全メンバーを包含する同意語的な総称であり、したがって属内の種としてＲＯＣＫ１およびＲＯＣＫ２の両方を含む。とりわけ、ＲＯＣＫキナーゼ阻害剤、ＲＯＣＫキナーゼ調節およびＲＯＣＫキナーゼ活性への言及はしたがって適宜解釈されるべきである。
【０１５４】
「Ｒｈｏタンパク質」なる語は、ＲｈｏＡとＲｈｏＣを含む、アクチン構築の調節に関与するＧＴＰ結合タンパク質の大きなファミリーの定義に使用される専門用語である。
【０１５５】
本明細書では、「Ｒｈｏシグナル伝達経路」なる語は、Ｒｈｏタンパク質の１種以上のメンバーが関与するあらゆる細胞シグナル経路を規定する。本発明に特に関連するのは、ＲＯＣＫキナーゼ（例えば、ＲＯＣＫ１および／またはＲＯＣＫ２）が１種以上のＲｈｏタンパク質に対して近接のエフェクター（例えば、結合パートナー）であるＲｈｏシグナル経路であり、そのようなＲｈｏシグナル経路は、とりわけＲｈｏシグナル経路を引用して規定された本発明の実施形態において好ましい。
【０１５６】
本明細書では、「修飾」なる語は、本明細書に記載されるＲＯＣＫに対して適用される場合、ＲＯＣＫの生物学的活性のレベルの変化を明確にすることを意図している。したがって、修飾はＲＯＣＫ活性の増加または減少をもたらす生理学的変化を包含する。後者の場合では、修飾は「阻害」として記載されてもよい。修飾は、直接的または間接的に生じてもよく、任意のメカニズムによりならびに任意の生理的なレベルで仲介されてもよい。例えば、遺伝子発現のレベル（例えば、転写、翻訳および／または翻訳後修飾を含む）、ＲＯＣＫ活性のレベルに直接的または間接的に作用する調節要素をコードする遺伝子発現のレベル、酵素（例えば、ＲＯＣＫ)活性（例えば、アロステリック機構、競争阻害、活性部位不活性化、フィードバック抑制経路の摂動など）のレベルが挙げられる。したがって、修飾は、転写効果による遺伝子増幅（すなわち複数の遺伝子コピー）および／または増加した発現もしくは減少した発現を含むＲＯＣＫの増加した発現／抑制された発現または過剰発現もしくは低発現に加えて、変異による（（脱）活性化を含む）ＲＯＣＫの過剰活性（または低活性）および（脱）活性化を意味し得る。「修飾された」および「修飾する」なる語は適宜解釈されるべきである。
【０１５７】
本明細書では、本明細書で記載される（および、例えば、様々な生理的な過程、疾病、状態、症状、処置、治療あるいは介入に対して適用される）ような、ＲＯＣＫと共に使用される、「仲介される」なる語は、この用語が適用される様々な過程、疾病、状態、症状、治療および介入はＲＯＣＫが生物学的役割を果たすものであるように、制限的に働くことを意図するものである。この用語が、疾病、状態または症状に対して適用される場合において、ＲＯＣＫにより果たされる役割は、直接的または間接的であってもよく、疾病、状態または症状の病徴の発現（またはその病因または進行）に、必要および／または十分であってもよい。したがって、ＲＯＣＫ活性（特に異常なレベルのＲＯＣＫ活性、例えば、ＲＯＣＫ過剰発現）は、必ずしも疾病、状態または症状の近因である必要がなく、むしろキナーゼに仲介される疾病、状態または症状は、ＲＯＣＫが部分的にのみ関わる、多元的な病因および複雑な進行を有するものを含んでいると理解される。この用語が、治療、予防または介入（例えば、本発明の「ＲＯＣＫが仲介する治療」および「ＲＯＣＫが仲介する予防」において)に対して適用される場合において、ＲＯＣＫにより果たされる役割は直接的または間接的であってもよく、あるいは、治療、予防または介入の転帰の操作に必要および／または十分であってもよい。本発明のＲＯＣＫが仲介する多くの生理的プロセス、疾病、状態、症状、治癒、治療または介入には、（本明細書に定義される）Ｒｈｏシグナル経路が関与しており、したがって、拡大解釈すれば「Ｒｈｏが仲介する」生理的プロセス、疾病、状態、症状、治癒、治療または介入と呼ばれ得る。
【０１５８】
「示された」なる語は、疾病、症状、被験者または患者集団に関して本明細書で使用される専門用語であり、その疾病、症状、被験者または患者集団に関して特定の介入の臨床的な望ましさまたは必要性を意味する。したがって、本明細書での「ＲＯＣＫキナーゼの修飾（例えば、阻害）が示される」疾病、症状、被験者または患者集団に対する言及は、ＲＯＣＫキナーゼの修飾が臨床的に望ましいかまたは必要である疾病などを明確にすることを意図している。これは、例えば、ＲＯＣＫキナーゼの修飾が、緩和的、予防的、または（少なくとも部分的に）治療的である場合である可能性がある。
【０１５９】
本明細書では、「修飾」なる語は、本明細書に記載されるプロテインキナーゼＰ７０Ｓ６Ｋに対して適用される場合、Ｐ７０Ｓ６Ｋの生物学的活性のレベルの変化を明確にすることを意図している。したがって、修飾は、Ｐ７０Ｓ６Ｋ活性の増加または減少をもたらす生理学的変化を包含する。後者の場合では、修飾は「阻害」として記載されてもよい。修飾は、直接的または間接的に生じてもよく、任意のメカニズムによりならびに任意の生理的なレベルで仲介されてもよい。例えば、遺伝子発現のレベル（例えば、転写、翻訳および／または翻訳後修飾を含む）、Ｐ７０Ｓ６Ｋ活性のレベルに直接的または間接的に作用する調節要素をコードする遺伝子発現のレベル、酵素（例えば、Ｐ７０Ｓ６Ｋ)活性（例えば、アロステリック機構、競争阻害、活性部位不活性化、フィードバック抑制経路の摂動など）のレベルが挙げられる。したがって、修飾は、転写効果による遺伝子増幅（すなわち複数の遺伝子コピー）および／または増加した発現もしくは減少した発現を含むＰ７０Ｓ６Ｋの増加した発現／抑制された発現または過剰発現もしくは低発現に加えて、変異による（（脱）活性化を含む）Ｐ７０Ｓ６Ｋの過剰活性（または低活性）および（脱）活性化を意味し得る。「修飾された」および「修飾する」なる語は適宜解釈されるべきである。
【０１６０】
本明細書では、本明細書に記載される（および、例えば、様々な生理的な過程、疾病、状態、症状、処置、治療あるいは介入に対して適用される）ような、Ｐ７０Ｓ６Ｋと共に使用される、「仲介される」なる語は、この用語が適用される様々な過程、疾病、状態、症状、治療および介入はＰ７０Ｓ６Ｋが生物学的役割を果たすものであるように、制限的に働くことを意図するものである。この用語が、疾病、状態または症状に対して適用される場合において、Ｐ７０Ｓ６Ｋにより果たされる役割は、直接的または間接的であってもよく、疾病、状態または症状の病徴の発現（またはその病因または進行）に、必要および／または十分であってもよい。したがって、Ｐ７０Ｓ６Ｋ活性（特に異常なレベルのＰ７０Ｓ６Ｋ活性、例えば、Ｐ７０Ｓ６Ｋ過剰発現）は、必ずしも疾病、状態または症状の近因である必要がなく、むしろキナーゼに仲介される疾病、状態または症状は、Ｐ７０Ｓ６Ｋが部分的にのみ関わる、多元的な病因および複雑な進行を有するものを含んでいると理解される。この用語が、治療、予防または介入（例えば、本発明の「Ｐ７０Ｓ６Ｋが仲介する治療」および「Ｐ７０Ｓ６Ｋが仲介する予防」において)に対して適用される場合において、Ｐ７０Ｓ６Ｋにより果たされる役割は直接的または間接的であってもよく、あるいは、治療、予防または介入の転帰の操作のために必要および／または十分であってもよい。
【０１６１】
「介入」なる語は、任意のレベルで生理学的変化をもたらす任意の作用を規定するために本明細書において使用される専門用語である。したがって介入は、任意の生理的な過程、事象、生化学的経路または細胞の事象／生化学的事象の誘導または抑制を含み得る。本発明の介入は、典型的には、疾病または症状の療法、治療または予防をもたらす（またはそれらに寄与する）。
【０１６２】
文脈上他の意味に解す場合を除き、本明細書における（Ｓ）−２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−エタノール、または式（Ｉ）の化合物またはＳエナンチオマーに対する言及は、例えば下記に検討されているような、その遊離塩基に加え、イオン、塩、溶媒和物、Ｎ−オキシド、互変体異性体および保護形態を包含する。
【０１６３】
上記化合物はＮ−オキシド以外であってもよい。例えば、一実施形態では、式（Ｉ）の化合物はＮ−オキシド以外であり、かつ遊離塩基の形態である。
【０１６４】
別の実施形態では、式（Ｉ）の化合物はＮ−オキシド以外であり、かつ塩の形態である。
【０１６５】
塩の形態は、「医薬用塩：特性、選択および使用（Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use）」、ハインリヒスタール（P. Heinrich Stahl）（編者）、カミールワーマス（Camille G. Wermuth）（編者）、ＩＳＢＮ：３−９０６３９−０２６−８、ハードカバー、３８８ページ、２００２年８月に記載の方法に従って選択および製造されてもよい。例えば、所与の塩形態が不溶性または難溶性である有機溶媒に遊離塩基を溶解し、次いで必要な酸を適切な溶媒に添加して溶液から塩を析出させることで、酸付加塩を調製してもよい。
【０１６６】
酸付加塩は、無機および有機双方の様々な酸と形成されてもよい。酸付加塩の例としては、酢酸、２，２−ジクロロ酢酸、アジピン酸、アルギン酸、アスコルビン酸（例えば、Ｌ−アスコルビン酸）、Ｌ−アスパラギン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、４−アセトアミド安息香酸、ブタン酸、（＋）ショウノウ酸、ショウノウ−スルホン酸、（＋）−（１Ｓ）−ショウノウ−１０−スルホン酸、カプリン酸、カプロン酸、カプリル酸、ケイ皮酸、クエン酸、シクラミン酸、ドデシル硫酸、エタン−１，２−ジスルホン酸、エタンスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、ギ酸、フマル酸、ガラクタル酸、ゲンチシン酸、グルコヘプトン酸、Ｄ−グルコン酸、グルクロン酸（例えば、Ｄ−グルクロン酸）、グルタミン酸（例えば、Ｌ−グルタミン酸）、α−オキソグルタル酸、グリコール酸、馬尿酸、臭化水素酸、塩酸、ヨウ化水素酸、イセチオン酸、乳酸（例えば、（＋）−Ｌ−乳酸および（±）−ＤＬ−乳酸）、ラクトビオン酸、マレイン酸、リンゴ酸、（−）−Ｌ−リンゴ酸、マロン酸、（±）−ＤＬ−マンデル酸、メタンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸（例えば、ナフタレン−２−スルホン酸）、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸、１−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸、ニコチン酸、硝酸、オレイン酸、オロチン酸、シュウ酸、パルミチン酸、パモ酸、リン酸、プロピオン酸、Ｌ−ピログルタミン酸、サリチル酸、４−アミノ−サリチル酸、セバシン酸、ステアリン酸、コハク酸、硫酸、タンニン酸、（＋）−Ｌ−酒石酸、チオシアン酸、トルエンスルホン酸（例えば、ｐ−トルエンスルホン酸）、ウンデシレン酸、および吉草酸からなる群から選ばれる酸で形成された塩、ならびにアシル化アミノ酸および陽イオン交換樹脂で形成された塩が挙げられる。
【０１６７】
酸付加塩の具体的な１グループは、塩酸、ヨウ化水素酸、リン酸、硝酸、硫酸、クエン酸、乳酸、コハク酸、マレイン酸、リンゴ酸、イセチオン酸、フマル酸、ベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸、吉草酸、酢酸、プロパン酸、ブタン酸、マロン酸、グルクロン酸、およびラクトビオン酸で形成された塩を含む。このグループの塩の範囲内では、塩のサブセットは、塩酸または酢酸で形成された塩を含む。
【０１６８】
酸付加塩の別のグループは、酢酸、アジピン酸、アスコルビン酸、アスパラギン酸、クエン酸、ＤＬ−乳酸、フマル酸、グルコン酸、グルクロン酸、馬尿酸、塩酸、グルタミン酸、ＤＬ−リンゴ酸、メタンスルホン酸、セバシン酸、ステアリン酸、コハク酸、および酒石酸から形成された塩を含む。
【０１６９】
式（Ｉ）の化合物は、塩が形成される酸のｐＫａに応じてモノ塩またはジ塩として存在し得る。より強い酸において、アミノ基中の窒素原子だけでなく塩基性であるピラゾールの窒素も塩生成に関与してもよい。例えば、酸のｐＫａが約３未満である場合（例えば、塩酸、硫酸、またはトリフルオロ酢酸などの酸の場合）、式（Ｉ）の化合物は、典型的には２モル当量の酸と塩を形成する。
【０１７０】
式（Ｉ）の化合物の塩形態は、典型的には薬学上許容される塩であり、薬学上許容される塩の例は、ベルジュ（Berge）ら、１９７７年、「薬学的許容塩（Pharmaceutically Acceptable Salts）」、ジャーナル・オブ・ファーマシューティカルサイエンス（J. Pharm. Sci.）、第６６巻、１〜１９ページで検討されている。しかしながら、薬学上許容されない塩も中間体として調製してから、薬学上許容される塩へ変換してもよい。このような薬学上許容されない塩形態も、例えば、式（Ｉ）の化合物の精製または分離に際して有用なことがあり、本発明の一部分を形成する。
【０１７１】
式（Ｉ）の化合物はまたＮ−オキシドを形成してもよく、このようなＮ−オキシドは式（Ｉ）の化合物の定義の範囲内である。
【０１７２】
ある一般的な実施形態では、式（Ｉ）の化合物はＮ−オキシドではない。
【０１７３】
Ｎ−オキシドは過酸化水素または過酸（例えば、ペルオキシカルボン酸）などの酸化剤で親アミンを処理することにより形成できる、例えば、「アドバンスドオーガニックケミストリー（Advanced Organic Chemistry）」、ジェリーマーチ（Jerry March）、第４版、ワイリーインターサイエンス（Wiley Interscience）、ページを参照されたい。より具体的にはＮ−オキシドは、デディー（L.W. Deady）（「シンセティックコミュニケーションズ（Syn. Comm.）」、１９７７年、７、５０９〜５１４）の方法により調製することができ、この方法ではアミン化合物を、例えば、ジクロロメタンなどの不活性溶媒中でｍ−クロロペルオキシ安息香酸（ＭＣＰＢＡ）と反応させる。
【０１７４】
式（Ｉ）の化合物は、キラルクロマトグラフィー（キラル担体上のクロマトグラフィー）などの適切な分離技術を用いてＳエナンチオマーおよびＲエナンチオマーのラセミ混合物から調製することができる。このような技術は当業者に周知である。
【０１７５】
キラルクロマトグラフィーの代わりに、（＋）−酒石酸、（−）−ピログルタミン酸、（−）−ジ−トルオイル−Ｌ−酒石酸、（＋）−マンデル酸、（−）−リンゴ酸、および（−）−ショウノウスルホン酸などのキラル酸でジアステレオアイソマー塩を形成し、優先的結晶化によりジアステレオアイソマーを分離し、次いで塩を解離させて、遊離塩基の個々のエナンチオマーを得ることによって、上記エナンチオマーを分離することができる。
【０１７６】
式（Ｉ）の化合物は、１個以上の同位体置換を有するバリアント（variants）を包含し、特定の元素に対する言及はその範囲内にその元素の全ての同位体を含む。例えば、水素に対する言及はその範囲内に^１Ｈ、^２Ｈ（Ｄ）および^３Ｈ（Ｔ）を含む。同様に、炭素および酸素に対する言及はそれらの範囲内にそれぞれ^１２Ｃ、^１３Ｃおよび^１４Ｃならびに^１６Ｏおよび^１８Ｏを含む。
【０１７７】
これらの同位体は放射性であっても非放射性であってもよい。本発明の一実施態様では上記化合物は放射性同位体を含まない。このような化合物は治療用として好ましい。しかしながら、別の実施態様では、化合物は１個以上の放射性同位体を含んでもよい。このような放射性同位体を含む化合物は診断の場合に有用であり得る。
【０１７８】
また、式（Ｉ）には、化合物の任意の多形相、溶媒和物（例えば、水和物）、化合物の錯体（例えば、シクロデキストリンなどの化合物との包接錯体または包接化合物、あるいは金属との錯体）、および化合物のプロドラッグが含まれる。「プロドラッグ」とは、例えば、生物活性を有する本明細書で定義される組成物に生体内で変換される任意の化合物を意味する。
【０１７９】
例えば、いくつかのプロドラッグは、活性化合物のエステル（例えば、生理学的に許容される代謝上不安定なエステル）である。代謝の際、エステル基（−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ）は開裂して活性薬物となる。このようなエステルは、例えば、親化合物におけるいずれかの水酸基（−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ）のエステル化により形成でき、適宜、親化合物中に存在する他のいずれの反応基を予め保護し、その後、必要に応じて脱保護する。
【０１８０】
このような代謝上不安定なエステルの例としては、式−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲのものが挙げられ、ここで、Ｒは：
Ｃ_１−７アルキル
（例えば、−Ｍｅ、−Ｅｔ、−ｎＰｒ、−ｉＰｒ、−ｎＢｕ、−ｓＢｕ、−ｉＢｕ、−ｔＢｕ）；
Ｃ_１−７アミノアルキル
（例えば、アミノエチル、２−（Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ）エチル、２−（４−モルホリノ）エチル）；および
アシルオキシ−Ｃ_１−７アルキル
（例えば、アシルオキシメチル；
アシルオキシエチル；
ピバロイルオキシメチル；
アセトキシメチル；
１−アセトキシエチル；
１−（１−メトキシ−１−メチル）エチル−カルボニルオキシエチル；
１−（ベンゾイルオキシ）エチル；イソプロポキシ−カルボニルオキシメチル；
１−イソプロポキシ−カルボニルオキシエチル；シクロヘキシル−カルボニルオキシメチル；
１−シクロヘキシル−カルボニルオキシエチル；
シクロヘキシルオキシ−カルボニルオキシメチル；
１−シクロヘキシルオキシ−カルボニルオキシエチル；
（４−テトラヒドロピラニルオキシ）カルボニルオキシメチル；
１−（４−テトラヒドロピラニルオキシ）カルボニルオキシエチル；
（４−テトラヒドロピラニル）カルボニルオキシメチル；および
１−（４−テトラヒドロピラニル）カルボニルオキシエチル）である。
【０１８１】
また、一部のプロドラッグは酵素的に活性化されて活性化合物を生じ、またある化合物はさらなる化学反応により活性化合物を生じる（例えば、抗体指向性酵素プロドラッグ療法（ＡＤＥＰＴ）、遺伝子指向性酵素プロドラッグ療法（ＧＤＥＰＴ）、ポリマー指向性酵素プロドラッグ療法（ＰＤＥＰＴ）、リガンド指向性酵素プロドラッグ療法（ＬＩＤＥＰＴ）などの場合）。例えば、プロドラッグは糖誘導体または他のグリコシド複合体でもよく、またはアミノ酸エステル誘導体でもよい。
【０１８２】
合成方法
式（Ｉ）の化合物およびそのＲエナンチオマーおよびその混合物は、スキーム１に示される方法により調製することができる。
【０１８３】
スキーム１では、置換ベンゾフェノン（１０）は、ジメチルスルホキシド中で塩基（例えば、水素化ナトリウムなどの水素化物塩基）の存在下でヨウ化トリメチルスルホニウムとの反応によりエポキシド（１１）に変換される。次いでこのエポキシド（１１）をメタノールなどのアルコール溶媒中でアンモニアと反応させて（典型的には加熱して）、ＲエナンチオマーおよびＳエナンチオマーのラセミ混合物としてアミン（１２）が得られる。このアミン（１２）をパラジウム触媒（例えば、テトラキストリフェニルホスフィンパラジウム（０））の存在下でスズキカップリング条件下でボロン酸ピラゾール（例えば、４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール）と直接反応させて、ラセミ化合物（１５）を得ることができる。しかしながら、保護されていないアミンをスズキカップリング条件下で反応させると生成物の収率が比較的低く、またこの生成物はその低溶解性のため精製が比較的難しいことがわかっている。この問題は、まずアミノ基を（例えば、Ｂｏｃ基で、したがってＰＧ＝Ｂｏｃ）保護し、保護中間体（１３）を得、次いで中間体（１３）をスズキカップリングに供して、保護化合物（１４）を得ることで克服される。次いでこの保護化合物（１４）を周知の方法（例えば、ＰＧ＝Ｂｏｃの場合エーテル／メタノール中でＨＣｌを用いて）により脱保護し、ラセミ混合物として生成物（１５）が得られる。
【化４】

スキーム１
【０１８４】
このラセミ混合物（１５）は、当業者に周知の方法（例えば、キラルクロマトグラフィー法および本明細書に記載の他の方法を用いて）により分割することができる。
【０１８５】
別の態様では、本発明は式（１５）の化合物の調製方法を提供し、この方法は化合物（１４）の化合物から保護基ＰＧを除去すること、その後必要に応じて化合物（１５）の光学異性体を分離することおよびそのＳエナンチオマーを単離することを含む。本発明はまた、上記の方法により調製可能な化合物と、この方法により調製される式（１５）の化合物とを提供する。
【０１８６】
さらなる態様では、本発明は式（１５）の化合物の調製方法を提供し、この方法は（ｉ）式（１３）の化合物をパラジウム触媒（例えば、テトラキストリフェニルホスフィンパラジウム（０））の存在下でスズキカップリング条件下で式（１６）のピラゾール誘導体と反応させ：
【化５】

（式中、ＸはＢ（ＯＨ）_２またはボロン酸エステル基（例えば、４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル基である。）式（１４）の化合物を得ること；（ｉｉ）化合物（１４）の化合物から保護基ＰＧを除去すること；ならびに（ｉｉｉ）その後必要に応じて化合物（１５）の光学異性体を分離することおよびそのＳエナンチオマーを単離することを含む。
【０１８７】
式（１３）の中間体（特に、式中ＰＧがＢｏｃ基である）は本発明のさらなる態様を成す。
【０１８８】
ＰＧが２−カルボキシ−ベンゾイル基以外である式（１４）の新規な中間体もまた本発明のさらなる態様を形成する。好ましい中間体（１４）はＰＧがＢｏｃ基である化合物である。
【０１８９】
上述されそしてスキーム１に示された方法に代えて、式（Ｉ）の化合物は、ＷＯ２００５／０６１４６３（アステックス社）の実施例８４に記載の方法に従い、次いで上記および本明細書の他の個所に記載の分離方法を用いてＳエナンチオマーを単離することにより調製することができる。
【０１９０】
中間体化合物（１２）を調製するための改良された方法をスキーム２に示す。
【化６】

スキーム２
【０１９１】
スキーム２では、置換ベンゾフェノン（１０）は、水素化ナトリウム塩基をカリウムｔｅｒｔ−ブトキシドに代えた以外は上記スキーム１に記載のようにジメチルスルホキシド中で塩基の存在下でヨウ化トリメチルスルホニウムとの反応によりエポキシド（１１）に変換される。カリウムｔｅｒｔ−ブトキシドは、急速に撹拌されたベンゾフェノン（１０）とヨウ化トリメチルスルホニウムとの混合物に典型的には室温で加えられる。水素化ナトリウムではなくカリウムｔｅｒｔ−ブトキシドを塩基として使用することには著しい利点がある。第１に、塩基として水素化ナトリウムが用いられる場合のように、ＤＭＳＯとの塩基の反応によりｄｉｍｓｙｌアニオンを形成しその後にその他の反応物を加えるのではなく、ｔｅｒｔ−ブトキシドをベンゾフェノン（１０）とヨウ化トリメチルスルホニウムとジメチルスルホキシドとの前もって形成された混合物に加えることができる。これは、ｄｉｍｓｙｌアニオンは形成された後に非常に迅速に消費され、よって任意の時点において反応混合物中にはｄｉｍｓｙｌアニオンは小量しか存在しないことを意味する。したがってカリウムｔｅｒｔ−ブトキシドの使用は、比較的粘性でやや有害な高濃度のｄｉｍｓｙｌナトリウムの形成を回避する。方法の安全性を改善することに加え、高濃度の粘性のｄｉｍｓｙｌナトリウムが存在しないということは、反応混合物を撹拌するのがはるかに容易であり、これは反応物のより効率的な混合を可能にし、未反応または反応が不完全な物質による局所領域（localised pockets）を回避することができることを意味し、これは反応時に形成されるｔｅｒｔ−ブタノールが反応物および生成物に対する良溶媒であるという事実により裏付けられた利点である。これらの利点は反応を大規模（例えば、５０グラム以上の量のエポキシド（１１）を調製すること）で行なった場合は特に顕著であり、その場合カリウムｔｅｒｔ−ブトキシドの使用がエポキシド（１１）の収率および純度を実質的にに向上させることが分かっている（塩基として水素化ナトリウムを用いた反応と比較して）。
【０１９２】
スキーム１に示される一連の反応では、エポキシド（１１）をメタノールなどのアルコール溶媒中で加熱しながらアンモニアと反応させてアミン（１２）を得る。この種の反応はマイクロ波反応器中で典型的には加圧下で行なわれてもよく、比較的小規模反応時にの高収率および高純度になる。
【０１９３】
しかしながら、より大規模反応（例えば、５０グラム以上の量のアミン（１２）を製造するための）に関しては、エポキシド（１１）をアジ化ナトリウムと反応させ、その後アジド中間体（１７）をアミン（１２）に還元させるとより高収率およびより高純度になることが分かった。アジ化ナトリウムとのエポキシド（１１）の反応は、典型的には極性溶媒（例えば、水とアセトンなどの水混和性溶媒とを含む水性溶媒）中で行なわれる。この反応は通常、例えば、溶剤系の還流温度まで加熱して行なわれる。
【０１９４】
アジドアルコール（１７）のアミノアルコール（１２）への変換は、トリフェニルホスフィンとの反応に続き、酸性水溶液および特に置換スルホン酸、好ましくは、アルキルスルホン酸またはアリールスルホン酸（例えば、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン酸、またはカンフルスルホン酸）の水溶液で処理することにより達成されてもよい。４−トルエンスルホン酸の使用が特に好ましい。いずれの理論にも拘束されることを望まないが、この反応は、まずアジリジンへ環化し、続いて上記酸の存在下で開環して進行し、アミノアルコールが得られると考えられる。酸（特に４−トルエンスルホン酸）の使用によりアミノアルコールは安定した扱いやすい塩として単離でき容易に精製できる。カンフルスルホン酸（例えば、ｄ−カンフルスルホン酸）の光学活性形態が使用される場合、塩の分別結晶化を行ない、アミノアルコール（１２）の２種類のエナンチオマーの個々の塩を分離することができる。次いで塩基で塩を処理してアミノアルコール（１２）の個々のエナンチオマーが得られる。
【０１９５】
アジド化合物（１７）、アミノアルコール（１２）およびその個々のエナンチオマー、ならびにアミノアルコール（１２）の酸付加塩およびそのエナンチオマーは、新規なものと考えられ、よって本発明のさらなる態様を成す。
【０１９６】
したがって一実施形態では、本発明は本明細書で定義される２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−ヨード−フェニル］−エタノールおよびその酸付加塩を提供する。
【０１９７】
別の実施形態では、本発明は本明細書で定義される（Ｒ）２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−ヨード−フェニル］−エタノールおよびその酸付加塩を提供する。
【０１９８】
さらなる実施形態では、本発明は本明細書で定義される（Ｓ）２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−ヨード−フェニル］−エタノールおよびその酸付加塩を提供する。
【０１９９】
上記３つの実施形態のそれぞれにおいて、好ましい酸付加塩は、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン酸、またはカンフルスルホン酸（例えば、ｄ−カンフルスルホン酸）で形成された塩である。特に好ましい塩は４−トルエンスルホン酸で形成された塩である。
【０２００】
合成中間体として有用であることに加え、式（１２）の化合物およびその酸付加塩はキナーゼＰＫＢに対する活性を有し、よって治療および特に式（Ｉ）の化合物に関して本明細書で記載された使用（例えば、癌に対する使用）に有用であるはずである。本明細書で定義される式（１２）の化合物またはその酸付加塩と薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物、ならびに式（１２）の化合物またはその酸付加塩の治療上の使用は、本発明のさらなる態様を成す。
【０２０１】
別の態様では、本発明は、式（１２）の化合物の光学活性形態の調製方法を提供し、この方法は式（１２）の化合物の酸付加塩を分別結晶化することを含み、ここでこの塩は光学活性酸（例えばｄ−カンフルスルホン酸）に由来する。
【０２０２】
別の態様では、本発明は、本明細書で定義される式（１２）の化合物の調製方法を提供し、この方法は式（１７）の化合物をテトラヒドロフランなどの極性非プロトン性溶媒中で室温より高い温度（例えば、溶媒の還流温度）でトリフェニルホスフィンなどの第三級ホスフィンと反応させ、続いて酸性水溶液（例えば、４−トルエンスルホン酸などの置換スルホン酸）で処理することを含む。
【０２０３】
トリフェニルホスフィンに代わるものとして他の第三級ホスフィンが使用されてもよく、これにはトリトリルホスフィンなどの他のトリアリールホスフィン、トリブチルホスフィンなどのトリアルキルホスフィン、トリシクロヘキシルホスフィンなどのトリシクロアルキルホスフィン、ならびにアリールおよび／またはアルキルおよび／またはシクロアルキル基の混合物を含む第三級ホスフィンが挙げられる。しかしながら、トリフェニルホスフィンが好ましい。
【０２０４】
４−トルエンスルホン酸に代わるものとして他の置換スルホン酸が使用されてもよい。例えば、上記のメタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸およびカンフルスルホン酸などのアルキルおよびアリールスルホン酸が挙げられる。
【０２０５】
別の態様では、本発明は式（１７）の化合物の調製方法を提供し、この方法は式（１１）のエポキシド化合物を、極性溶媒（例えば、アセトン水溶液などの水性有機溶媒）中で、好ましくは加熱して（例えば、溶媒の還流温度まで）アルカリ金属アジ化物（例えば、アジ化ナトリウム）またはアジ化トリメチルシリル（ＴＭＳ−アジド）と反応させることを含む。
【０２０６】
さらなる態様では、本発明は式（１２）の化合物の調製方法を提供し、この方法は次の工程を含む。
（ａ）本明細書で定義される式（１１）の化合物をアルカリ金属アジ化物（例えば、アジ化ナトリウム）またはアジ化トリメチルシリルと反応させて、式（１７）の化合物を形成する工程、および
（ｂ）式（１７）の化合物を（ｉ）トリフェニルホスフィンなどの第三級ホスフィンと反応させ、続いて（ｉｉ）置換スルホン酸、好ましくはアルキルまたはアリールスルホン酸（例えば、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸またはトルエンスルホン酸、そして最も好ましくは４−トルエンスルホン酸）などの酸と反応させる工程。
【０２０７】
アジ化物の使用を伴う上記各方法において、アルカリ金属アジ化物（例えば、アジ化リチウム、アジ化カリウムおよびアジ化ナトリウム）が好ましく、アジ化ナトリウムが最も好ましい。
【０２０８】
別の態様では、本発明は式（１５）の化合物、すなわち２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−エタノールの調製方法を提供し、この方法は以下を含む。
（１）本明細書で規定される方法により式（１２）の化合物を調製すること、
（２）本明細書で規定される方法により式（１２）の化合物のアミノ基を保護して式（１３）の化合物を得ること、
（３）式（１３）の化合物をパラジウム触媒（例えば、テトラキストリフェニルホスフィンパラジウム（０））の存在下でスズキカップリング条件下で本明細書で定義される式（１６）のピラゾール誘導体と反応させて式（１４）の化合物を得ること、
（４）式（１４）の化合物から保護基ＰＧを除去すること、およびその後必要に応じて
（５）化合物（１５）の光学異性体を分離しそのＳエナンチオマーを単離すること。
【０２０９】
医薬製剤
式（Ｉ）の化合物は単独で投与することもできるが、本発明の組成物は、式（Ｉ）の化合物と、１種以上の薬学上許容される担体、アジュバント、賦形剤、希釈剤、フィラー、緩衝剤、安定剤、保存剤、滑沢剤、または当業者に周知の他の物質と、場合により他の治療剤または予防剤とを含有する医薬組成物（例えば、製剤）であるのが好ましい。
【０２１０】
したがって本発明はさらに、上記で定義される医薬組成物ならびに、本明細書で定義される１種以上の薬学的に許容される担体、賦形剤、緩衝剤、アジュバント、安定剤、または他の物質と共に式（Ｉ）の化合物を混合することを含む医薬組成物の製造方法を提供する。
【０２１１】
本明細書において「薬学上許容される」なる語は、適切な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症なく、被験体（例えば、ヒト）の組織との接触に用いるのに好適であり、妥当な利益／リスク比で釣り合いがとれた化合物、物質、組成物および／または投与形態を意味する。担体、賦形剤などの各々はまた、その製剤の他の成分と適合するという点で「許容される」ものでなければならない。
【０２１２】
本明細書で定義する組成物を含有する医薬組成物は、公知の技術にしたがって処方することができる。例えば、「レミントンの薬学（Remington's Pharmaceutical Sciences）」、マック（Mack）出版社、イーストン、ペンシルベニア州、米国を参照されたい。
【０２１３】
したがってさらなる態様では、本発明は本明細書で定義される組成物を医薬組成物の形態で提供する。
【０２１４】
上記医薬組成物は、経口投与、非経口投与、局所投与、鼻腔内投与、点眼投与、点耳投与、直腸投与、膣内投与または経皮投与に好適ないずれの形態であってもよい。上記組成物が非経口投与を意図したものである場合、静脈内投与、筋肉内投与、腹腔内投与、皮下投与用に処方することもできるし、あるいは注射、点滴または他の送達手段により標的臓器または組織に直接送達するために処方することもできる。送達はボーラス注射、短時間点滴または長時間点滴によるものとすることもでき、また、受動的送達であっても、または好適な点滴ポンプの利用を介したものでもよい。
【０２１５】
非経口投与に適した医薬製剤としては、酸化防止剤、緩衝剤、静菌剤、共溶媒、有機溶媒混合物、シクロデキストリン複合体形成剤、乳化剤（エマルジョン製剤を形成および安定化するため）、リポソーム形成のためのリポソーム成分、高分子ゲルを形成するためのゲル化可能なポリマー、凍結乾燥保護剤、ならびにとりわけ有効成分を可溶形態で安定化させるためおよび製剤を意図するレシピエントの血液と等張にするための薬剤の組合せを含有していてもよい水性および非水性無菌注射液が挙げられる。非経口投与用医薬製剤はまた、懸濁化剤および増粘剤を含み得る水性および非水性無菌懸濁剤の形態をとってもよい（ストライクリー（R.G. Strickly）、「経口および注射製剤における賦形剤の溶解（Solubilizing Excipients in oral and injectable formulations）」、ファーマシューティカルリサーチ（Pharmaceutical Research）、第２１巻２号、２００４年、２０１〜２３０ページ）。
【０２１６】
リポソームは外側の脂質二重膜および内側の水性核からなる、閉じられた球状小胞であり、全体の直径が１００μｍ未満である。疎水性の程度に応じて、中程度の疎水性薬剤であれば薬剤をリポソーム内に封入またはインターカレーションした場合にリポソームにより可溶化させることができる。疎水性薬剤はまた薬剤分子を脂質二重膜の一体部分とした場合にもリポソームにより可溶化させることができ、この場合、この疎水性薬剤は脂質二重膜の脂質部分に溶解される。
【０２１７】
上記製剤は単回用量容器または複数用量容器、例えば、密閉アンプルおよびバイアルで提供することもできるし、使用直前に無菌液体担体、例えば、注射水を加えるだけのフリーズドライ（凍結乾燥）状態で保存することもできる。
【０２１８】
上記医薬製剤は式（Ｉ）の化合物を凍結乾燥させることにより製造することができる。凍結乾燥とは、組成物をフリーズドライする手順をさす。よって、本明細書においてフリーズドライと凍結乾燥は同義語として用いられる。
【０２１９】
即時調合注射溶液および懸濁液は無菌粉末、顆粒および錠剤から調製することができる。
【０２２０】
非経口注射剤用の本発明の医薬組成物はまた、薬学的に許容される無菌の水性または非水性溶液、分散液、懸濁液または乳液、加えて使用直前に無菌注射溶液または分散液へ再構成される無菌粉末を含む。適切な水性および非水性の担体、希釈剤、溶媒あるいは賦形剤の例としては、水、エタノール、多価アルコール（グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）、カルボキシメチルセルロースおよびそれらの適当な混合物、植物油（オリーブオイルなど）、ならびにオレイン酸エチルなどの注射可能な有機エステルが挙げられる。適切な流動性は、例えば、レシチンなどの被覆剤の使用、分散液の場合は必要とされる粒径の維持、および界面活性剤の使用により維持することができる。
【０２２１】
本発明の組成物はまた、防腐剤、湿潤剤、乳化剤および分散剤などのアジュバントを含んでいてもよい。微生物の作用の防止は、様々な抗菌剤および抗黴剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸などを含有することにより確保されてもよい。糖、塩化ナトリウムなどの等張剤を含有することも望ましい可能性がある。注射可能な剤型での持続的吸収は、吸収を遅らせる薬剤（モノステアリン酸アルミニウムやゼラチンなどの）の含有によりもたらされてもよい。
【０２２２】
本発明の好ましい一実施形態では上記医薬組成物は、例えば、注射または点滴による静注投与に適切な形態である。静脈内投与には、上記溶液はそのまま投与でき、また投与前に（０．９％生理食塩水または５％デキストロースのような薬学的に許容される賦形剤を含む）輸液バッグに注入することもできる。
【０２２３】
別の好ましい実施形態では、上記医薬組成物は皮下（ｓ．ｃ．）投与に好適な形態である。
【０２２４】
経口投与に好適な医薬投与形としては、錠剤、カプセル剤、カプレット剤、丸剤、トローチ剤、シロップ剤、液剤、散剤、顆粒剤、エリキシル剤および懸濁剤、舌下錠、ウエハー剤またはパッチ剤ならびにバッカルパッチ剤が挙げられる。
【０２２５】
したがって、錠剤組成物は、単位用量の活性化合物を、不活性希釈剤または担体、例えば、糖または糖アルコール（ラクトース、スクロース、ソルビトールまたはマンニトールなど）、および／または非糖由来希釈剤（炭酸ナトリウム、リン酸カルシウム、炭酸カルシウムまたはセルロースもしくはその誘導体、例えば、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、およびデンプン（コーンスターチなど）など）とともに含有することができる。錠剤はまた、標準的な成分、例えば、結合剤および造粒剤、例えば、ポリビニルピロリドン、崩壊剤（例えば、架橋カルボキシメチルセルロースなどの膨潤性架橋ポリマー）、滑沢剤（例えば、ステアリン酸塩）、保存剤（例えば、パラベン）、酸化防止剤（例えば、ＢＨＴ）、緩衝剤（例えば、リン酸緩衝液またはクエン酸緩衝液）、および発泡剤（例えば、クエン酸塩／重炭酸塩混合物）を含有してもよい。このような賦形剤は公知であり、ここでは詳細に記載する必要はない。
【０２２６】
カプセル製剤は、硬質ゼラチン種であっても軟質ゼラチン種であってもよく、固体、半固体または液体状の有効成分を含有することができる。ゼラチンカプセルは、動物ゼラチンまたはその合成もしくは植物由来の均等物から形成することができる。
【０２２７】
固形投与形態（例えば、錠剤、カプセル剤など）はコーティングを施しても施さなくともよいが、典型的には、例えば、保護フィルムコーティング（例えば、ワックスまたはワニス）または放出制御コーティングを有する。当該コーティング（例えば、オイドラギット（Eudragit）（登録商標）型ポリマー）は、胃腸管内の所望の位置で有効成分が放出されるように設計することができる。したがって、コーティングは胃腸管内の特定のｐＨ条件下で分解するように選択することができ、これにより選択的に胃または回腸もしくは十二指腸で化合物を放出する。
【０２２８】
コーティングの代わりにまたはコーティングに加えて、放出制御剤、例えば、胃腸管において酸性度またはアルカリ性度が変化する条件下で化合物を選択的に放出するようにすることができる放出遅延剤を含んでなる固体マトリックス中に薬剤を提供してもよい。あるいは、マトリックス材料または放出遅延コーティングは、投与形態が胃腸管を通過するにつれて実質的に連続的に崩壊する崩壊性ポリマー（例えば、無水マレイン酸ポリマー）の形態をとることができる。さらなる別法としては、活性化合物を、化合物の放出の浸透圧制御をもたらす送達系に処方することもできる。浸透圧放出性および他の遅延放出性または徐放性製剤は当業者に周知の方法にしたがって製造することができる。
【０２２９】
上記医薬組成物は、活性成分を約１％から約９５％まで、好ましくは約２０％から約９０％含む。本発明による医薬組成物は、例えば、アンプル、バイアル、坐剤、糖衣錠、錠剤またはカプセル形態などの単位用量形態であってもよい。
【０２３０】
経口投与用医薬組成物は、有効成分と固体担体とを組み合わせ、所望であれば得られた混合物を粒状にし、所望または必要であれば適当な賦形剤の添加後、混合物を錠剤、糖衣錠コアまたはカプセルへ加工することにより得られる。また、当該経口投与用医薬組成物を、一定量の有効成分を拡散させたり放出させたりする可塑性の担体に組み入れることも可能である。
【０２３１】
本発明の組成物は固形分散物としてもまた製剤化することができる。固形分散物は２種以上の固形物の均質な非常に細かい分散相である。固体分散体の１種である固溶体（分子的分散システム）は製剤工学における使用のために周知であり（チオウ（Chiou）およびリーゲルマン（Riegelman）、「ジャーナル・オブ・ファーマシューティカルサイエンス（J. Pharm. Sci.）」、６０、１２８１〜１３００（１９７１年）を参照）、溶解速度の増加および低水溶性薬剤の生体利用率の増加において有用である。
【０２３２】
本発明は、上記の固溶体を含む固形投薬形態もまた提供する。固形投薬形態は、錠剤、カプセル剤およびチュアブルタイプの錠剤を包含する。公知の賦形剤は、所望される投薬形態を提供するために固溶体に混ぜ合わせることができる。例えば、カプセル剤は、（ａ）崩壊剤および潤滑剤、または（ｂ）崩壊剤、潤滑剤および界面活性剤に混合された固溶体を含有することができる。錠剤は、少なくとも１つの崩壊剤、潤滑剤、界面活性剤および流動促進剤に混合された固溶体を含有することができる。チュアブルタイプの錠剤は、充填剤、潤滑剤、および所望であれば追加の甘味剤（人工甘味剤のような）、ならびに適切な香料と混合された固溶体を含有することができる。
【０２３３】
上記医薬製剤は単一のパッケージ、通常はブリスターパック中に全治療過程用の薬剤を含んだ「患者パック」として患者に提供することができる。患者パックは、調剤師がバルク供給から患者分の医薬を分配する従来の処方箋調剤に優る利点があり、患者は患者パックに入っている、通常患者の処方箋調剤には見ることがない添付文書をいつでも見ることができる。添付文書を包含しておけば、患者が医師の指示をよりよく遵守することが分かっている。
【０２３４】
局所使用のための組成物としては、軟膏、クリーム、スプレー、パッチ、ゲル、液滴および挿入物（例えば、眼内挿入物）が挙げられる。このような組成物は、公知の方法に従って処方することができる。
【０２３５】
直腸投与または膣内投与用の製剤の例としては、ペッサリーおよび坐剤が挙げられ、これらは、例えば、活性化合物を含有する付形成形材またはワックス材から形成することができる。
【０２３６】
吸入投与用組成物は、吸入可能な粉末組成物または液状もしくは粉末スプレーの形態をとってもよく、粉末吸入装置またはエアゾールディスペンシング装置を用いた標準的な形態で投与することができる。このような装置は公知のものである。吸入投与用の粉末製剤は、典型的には活性化合物をラクトースなどの不活性固体粉末希釈剤とともに含む。
【０２３７】
上記組成物は一般的には単位投与形態で提供され、それ自体、所望の生物学的活性レベルを付与するのに十分な化合物を典型的に含んでいる。例えば、製剤は１ナノグラム〜２グラムの活性成分、例えば、１ナノグラム〜２ミリグラムの活性成分を含んでいてもよい。この範囲内での化合物の特定の部分範囲としては、０．１ミリグラム〜２グラムの活性成分（より通常は、１０ミリグラム〜１グラム、例えば、５０ミリグラム〜５００ミリグラム）、または１マイクログラム〜２０ミリグラム（例えば、１マイクログラム〜１０ミリグラム、例えば、０．１ミリグラム〜２ミリグラムの活性成分）である。
【０２３８】
経口投与に関しては、単位投与形態は１ミリグラム〜２グラム、より典型的には１０ミリグラム〜１グラム、例えば、５０ミリグラム〜１グラム、例えば、１００ミリグラム〜１グラムの活性化合物を含んでいてもよい。
【０２３９】
活性化合物は、投与を必要とする患者（例えば、ヒトまたは動物患者）に、所望の治療効果を達成するのに十分な量で投与されることとなる。
【０２４０】
プロテインキナーゼ阻害活性
プロテインキナーゼＡおよびプロテインキナーゼＢの阻害剤としての式（Ｉ）の化合物の活性は、下記実施例において説明されるアッセイを使用して測定することができ、ある化合物によって示される活性レベルはＩＣ_５０値によって規定することができる。
【０２４１】
治療上の使用
増殖障害の予防または治療
式（Ｉ）の化合物は、プロテインキナーゼＡおよびプロテインキナーゼＢの阻害剤である。よって上記化合物は新生物の増殖を防ぐまたは新生物に細胞死を招く手段の提供において有用となる。したがって上記化合物は、癌などの増殖性疾患の治療または阻害において有用であることがわかるであろう。特に、ＰＴＥＮにおける欠失もしくは不活性化変異、またはＰＴＥＮ発現の喪失、または（Ｔ細胞リンパ球）ＴＣＬ−１遺伝子中のリアレンジメントをともなう腫瘍は、ＰＫＢ阻害剤に対して特に感受性がある可能性がある。アップレギュレートされたＰＫＢ経路のシグナルをもたらす他の異常を有する腫瘍もまた、ＰＫＢの阻害剤に対して特に感受性がある可能性がある。このような異常の具体例としては、１種以上のＰＩ３Ｋサブユニットの過剰発現、１種以上のＰＫＢアイソフォームの過剰発現、または問題になっている酵素の基礎活性の増加をもたらすＰＩ３Ｋ、ＰＤＫ１もしくはＰＫＢにおける変異、あるいは表皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）、線維芽細胞増殖因子受容体（ＦＧＦＲ）、血小板由来増殖因子受容体（ＰＤＧＦＲ）、インスリン様増殖因子１受容体（ＩＧＦ−１Ｒ）および血管内皮細胞増殖因子受容体（ＶＥＧＦＲ）ファミリーから選ばれる増殖因子などの増殖因子受容体のアップレギュレーションまたは過剰発現または変異による活性化が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０２４２】
本発明の化合物はまた、例えば、ウイルス感染などの増殖または生存における異常に起因する他の症状ならびに神経変性疾患の治療においてもまた有用となる。ＰＫＢは、免疫反応の間の免疫細胞の生存の維持において重要な役割を果たし、したがってＰＫＢ阻害剤は自己免疫の症状を含む免疫疾患において特に有用でありえる。
【０２４３】
したがってＰＫＢ阻害剤は、増殖、細胞死または分化に障害がある疾病の治療において有用でありえる。
【０２４４】
ＰＫＢ阻害剤はまた、インシュリン抵抗性および非感受性に起因する疾病、ならびに代謝疾患および肥満のようなグルコース、エネルギーおよび脂肪貯蔵の混乱に起因する疾病において有用である可能性がある。
【０２４５】
阻害される可能性のある癌の例としては、癌腫、例えば、膀胱癌、乳癌、結腸癌（例えば、結腸腺癌および結腸腺腫などの結腸直腸癌）、腎癌、表皮癌、肝癌、肺癌、例えば、腺癌、小細胞肺癌および非小細胞肺癌、食道癌、胆嚢癌、卵巣癌、膵臓癌、例えば、膵外分泌癌、胃癌、子宮頚癌、子宮内膜癌、甲状腺癌、前立腺癌、または皮膚癌、例えば、扁平上皮癌；リンパ系の造血系腫瘍、例えば、白血病、急性リンパ性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、多発性骨髄腫、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、毛様細胞性リンパ腫またはバーケットリンパ腫；骨髄系の造血系腫瘍、例えば、急性および慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群または前骨髄球性白血病；脊髄増殖性症候群；甲状腺瀘胞癌；間葉由来の腫瘍、例えば、線維肉腫または横紋筋肉腫；中枢神経系または末梢神経系の腫瘍、例えば、星状細胞腫、神経芽細胞腫、グリオーマまたは神経鞘腫；メラノーマ；精上皮腫；奇形腫；骨肉腫；色素性乾皮症、角化棘細胞腫、甲状腺瀘胞癌；またはカポジ肉腫が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０２４６】
したがって異常な細胞増殖を含む疾病または症状の治療のための本発明の医薬組成物、使用または方法において、一実施形態における異常な細胞増殖を含む疾病または症状は癌である。
【０２４７】
癌の特定のサブセットは、乳癌、卵巣癌、結腸癌、前立腺癌、食道癌、扁平上皮癌および非小細胞肺癌を含む。
【０２４８】
癌のさらなるサブセットは、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、子宮内膜癌およびグリオーマを含む。
【０２４９】
本発明の組成物はまた他の抗癌剤と併用可能である。このような組み合わせの具体例は以下に記載される。
【０２５０】
免疫障害
本発明の組成物が有益である可能性のある免疫障害としては、自己免疫症状および慢性炎症性疾患、例えば、全身性紅斑性狼瘡、自己免疫性糸球体腎炎、関節リウマチ、乾癬、炎症性腸疾患、自己免疫性糖尿病、湿疹過敏性反応、喘息、ＣＯＰＤ、鼻炎および上気道疾患が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０２５１】
他の治療上の使用
ＰＫＢは細胞死、増殖、分化において役割を果たし、したがって式（Ｉ）の化合物は、癌以外の下記の疾病および免疫機能不全に関連するものの治療にも有用になり得る；ウイルス感染、例えば、ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、エプスタイン−バーウイルス、シンドビスウイルス、アデノウイルス、ＨＩＶ、ＨＰＶ、ＨＣＶおよびＨＣＭＶ；ＨＩＶに感染した個体におけるＡＩＤＳ発症の予防；心疾患、例えば、心臓肥大、再狭窄、アテローム性動脈硬化；神経変性障害、例えば、アルツハイマー病、エイズ関連認知症、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、色素性網膜炎、脊髄性筋萎縮症、小脳変性症；糸球体腎炎；骨髄異形成症候群、虚血性障害に関連する心筋梗塞、卒中および再潅流障害、筋骨格系の変成疾患、例えば、骨粗鬆症および関節炎、アスピリン感受性副鼻腔炎、嚢胞性繊維症、多発性硬化症、腎臓病。
【０２５２】
ＲＯＣＫキナーゼ阻害活性に関連するかまたは起因する使用
式（Ｉ）の化合物はＲＯＣＫキナーゼの活性を修飾（例えば、阻害）する。したがって当該化合物は下記のものに適用される。（ａ）ＲＯＣＫキナーゼの修飾（例えば、阻害）が示される疾病または症状の治療または予防、および／または（ｂ）ＲＯＣＫキナーゼの修飾（例えば、阻害）が示される被験者または患者集団の治療、および／または（ｃ）Ｒｈｏシグナル伝達経路の修飾（例えば、阻害）が示される疾病または症状の治療または予防、および／または（ｄ）Ｒｈｏシグナル伝達経路の修飾（例えば、阻害）が示される被験者または患者集団の治療。
【０２５３】
したがって本発明は下記のものから選ばれる疾病および症状に関して適用される。（ａ）腫瘍転移、（ｂ）腫瘍浸潤、（ｃ）腫瘍進展、（ｄ）腫瘍接着（例えば、腫瘍細胞接着）、（ｅ）アクチノマイシン収縮依存性腫瘍転移、浸潤または進展、（ｆ）細胞形質転換、（ｇ）ＲＯＣＫが仲介する腫瘍転移、浸潤、進展または接着、（ｈ）ＲＯＣＫが仲介するアクチノマイシン収縮依存性腫瘍転移、浸潤または進展、（ｉ）ＲＯＣＫが仲介する細胞形質転換。
【０２５４】
本発明はまた、特に癌（例えば、ＲＯＣＫが仲介する癌である）が（ａ）精巣性胚細胞腫瘍、（ｂ）転移能を有する小乳癌、（ｃ）膀胱癌、（ｄ）卵巣癌、（ｅ）前立腺癌および（ｆ）肝細胞癌から選ばれる癌に関して適用される。
【０２５５】
他の適用症および症状としては、本明細書に定義されるいずれの癌の浸潤、転移および腫瘍進展が挙げられる。
【０２５６】
本発明はまた、心疾患または心血管病態、特に（ａ）高血圧、（ｂ）心臓機能障害（例えば、慢性および鬱血性心不全）、（ｃ）心臓肥大、（ｄ）再狭窄、（ｅ）腎機能障害（例えば、慢性腎不全）、（ｆ）アテローム性動脈硬化症（動脈硬化症）、（ｇ）心保護、（ｈ）同種移植片生着、（ｉ）脳虚血、（ｊ）冠攣縮性狭心症、および（ｋ）血管炎症から選ばれるものに関して適用される。
【０２５７】
他の適用症および症状としては、例えば、（ａ）喘息、（ｂ）陰茎勃起障害、（ｃ）女性性機能障害、（ｄ）過活動膀胱Ｉ症候群、および（ｅ）異常平滑筋（例えば、高血圧と関連する）から選ばれる筋肉（例えば、平滑筋）機能障害が挙げられる。
【０２５８】
他の適用症および症状としては、例えば、炎症が（ａ）関節リウマチ、（ｂ）過敏性腸症候群、（ｃ）炎症性腸疾患、（ｄ）血管炎症、および（ｅ）神経炎症性疾病または症状を含むかその兆候を示す炎症が挙げられる。
【０２５９】
神経炎症性疾患または症状に関連する実施形態において、これらは（ａ）脳卒中、（ｂ）多発性硬化症、（ｃ）アルツハイマー病、（ｄ）パーキンソン病、（ｅ）筋萎縮性側索硬化症、および（ｆ）炎症性疼痛から選択されてもよい。
【０２６０】
他の適用症および症状としては、（ａ）脊髄損傷または傷害、（ｂ）脳外傷または傷害、（ｃ）急性ニューロン損傷（例えば、卒中または外傷性脳損傷）、（ｄ）パーキンソン病、（ｅ）アルツハイマー病、（ｆ）神経組織変成状態または神経組織変成病、（ｇ）卒中（例えば、高血圧に関連する）、（ｈ）脳血管痙攣、（ｉ）神経突起成長および発芽の阻害、（ｊ）軸索再生阻害、（ｋ）傷害後の機能回復不全、（ｌ）脱髄症または異常、（ｍ）炎症性ＣＮＳ疾患または障害、（ｎ）神経障害性疼痛、および（ｏ）神経変性から選ばれるものを含むＣＮＳ疾患または症状が挙げられる。
【０２６１】
他の適用されるＣＮＳ疾患または症状としては、ダウン症候群及びβアミロイド血管症、例えば、これらに限定されないが、脳アミロイド血管症、遺伝性脳出血、認知機能不全に関連する障害、例えば、これらに限定されないが、ＭＣＩ（「軽度認知機能不全」）、アルツハイマー病、記憶喪失、アルツハイマー病に関連する注意欠陥症状、アルツハイマー病もしくは血管性と変性性起源の混合型の痴呆、初老期痴呆、老年痴呆及びパーキンソン病関連痴呆を含む痴呆のような疾患に関連する神経変性、進行性核上麻痺または皮質基底核変性、パーキンソン病、前頭側頭型痴呆パーキンソン型、グアムパーキンソン痴呆複合症、ＨＩＶ痴呆、神経原線維変化病理を伴う疾患、ボクサー痴呆、筋萎縮性側索硬化症、大脳皮質基底核変性症、ダウン症候群、ハンチントン病、脳炎後パーキンソニズム、進行性核上麻痺、ピック病、ニーマン−ピック病、卒中、頭部外傷及び他の慢性神経変性疾患、双極性障害、情動障害、うつ病、不安、統合失調症、認知障害、脱毛症、避妊薬服用、前痴呆状態、加齢関連記憶障害、加齢関連認知低下、痴呆ではない認知機能不全、軽度認知低下、軽度神経認知低下、老年期健忘症、記憶障害および認知機能不全、血管性痴呆、レヴィー小体型痴呆、前頭側頭型痴呆ならびに男性型脱毛症から選ばれるものがあげられる。
【０２６２】
さらに他の適用症および症状としては、（ａ）インシュリン抵抗性、（ｂ）グラフト保護（例えば、心臓血管または炎症性グラフト保護）、（ｃ）糖尿病、（ｄ）喘息、（ｅ）肺血管収縮、（ｆ）緑内障、および（ｇ）繊維症（例えば、肝臓線維症および腎臓線維症）が挙げられる。
【０２６３】
他の適用症および症状としては、後生動物、原生動物、菌類、プリオン、ウイルスまたはバクテリア性の侵入、疾病あるいは感染を含む感染症または症状が挙げられる。
【０２６４】
そのような実施形態において、感染症または感染状態は病原体が仲介する細胞骨格再構成を含んでもよい。
【０２６５】
増殖性疾患（癌を含む）：本発明はまた、新生物の増殖を防ぐまたは新生物に細胞死を招く手段として適用される。したがって、本発明は、癌など増殖性疾患の治療または予防に有用であることがわかるであろうことが予想される。そのような異常の例としては、これらに限定されるものではないが、１種以上のＲｈｏシグナル伝達経路メンバーの過剰発現、またはＲＯＣＫキナーゼまたはＲｈｏシグナル伝達経路の定常活性の増加をもたらす当該メンバーにおける変異（これは、例えば、表皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）、線維芽細胞増殖因子受容体（ＦＧＦＲ）、血小板由来増殖因子受容体（ＰＤＧＦＲ）、インスリン様増殖因子１受容体（ＩＧＦ−１Ｒ）および血管内皮増殖因子受容体（ＶＥＧＦＲ）ファミリーから選ばれる増殖因子などの増殖因子受容体のアップレギュレーション、過剰発現または変異性活性化に関連する可能性がある）が挙げられる。
【０２６６】
本発明は、例えば、ウイルス感染などの増殖または生存における異常に起因する他の症状ならびに神経変性疾患の治療において有用となることが予想される。
【０２６７】
本発明はしたがって、増殖、細胞死または分化に障害がある疾病の治療に広く適用される。
【０２６８】
阻害される可能性のある癌の例としては、これら限定されるものではないが、癌腫、例えば、膀胱癌、乳癌、結腸癌（例えば、結腸腺癌および結腸腺腫のような結腸直腸癌）、腎癌、表皮癌、肝癌、肺癌、例えば、腺癌、小細胞肺癌および非小細胞肺癌、食道癌、胆嚢癌、卵巣癌、膵臓癌、例えば、膵外分泌癌、胃癌、子宮頚癌、子宮内膜癌、甲状腺癌、前立腺癌、または皮膚癌、例えば、扁平上皮癌；リンパ系の造血系腫瘍、例えば、白血病、急性リンパ性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、毛様細胞性リンパ腫またはバーケットリンパ腫；骨髄系の造血系腫瘍、例えば、急性および慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群または前骨髄球性白血病；甲状腺瀘胞癌；間葉由来の腫瘍、例えば、線維肉腫または横紋筋肉種；中枢または末梢神経系の腫瘍、例えば、星状細胞腫、神経芽細胞腫、グリオーマまたは神経鞘腫；メラノーマ；精上皮腫；奇形腫；骨肉腫；色素性乾皮症；角化棘細胞腫；甲状腺瀘胞癌；またはカポジ肉腫が挙げられる。
【０２６９】
リンパ球系列の造血系腫瘍のさらなる例としては多発性骨髄腫がある。
【０２７０】
癌の具体的なサブセットとしては、乳癌、卵巣癌、結腸癌、前立腺癌、食道癌、扁平上皮癌、および非小細胞肺癌腫が挙げられる。癌の別のサブセットとしては、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、子宮内膜癌、および神経膠腫がある。
【０２７１】
増殖性疾患の別の例としては脊髄増殖性症候群がある。
【０２７２】
免疫障害：本発明が有益となり可能性のある免疫障害としては、これらに限定されるものではないが、自己免疫症状および慢性炎症疾患、例えば、全身性エリテマトーデス、自己免疫性糸球体腎炎、リウマチ様関節炎、乾癬、炎症性腸疾患および自己免疫性真性糖尿病、湿疹過敏性反応、喘息、ＣＯＰＤ、鼻炎、および上部気道疾患が挙げられる。
【０２７３】
他の治療用途：ＲＯＣＫが仲介する生理的プロセスは、アポトーシス、増殖、分化において役割を果たし、したがって本発明は癌以外の下記の疾病および免疫機能不全に関連するものの治療にも有用になり得る；ウイルス感染、例えば、ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、エプスタイン−バールウイルス、シンドビスウイルス、アデノウイルス、ＨＩＶ、ＨＰＶ、ＨＣＶ、およびＨＣＭＶ；ＨＩＶ感染個体におけるエイズ発症の予防；心疾患、例えば、心肥大、再狭窄、アテローム性動脈硬化症；神経変性障害、例えば、アルツハイマー病、エイズ関連痴呆、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、色素性網膜炎、棘筋萎縮および小脳変性；糸球体腎炎；骨髄異形成症候群、虚血性損傷関連心筋梗塞、卒中および再灌流損傷、筋骨格系の変性疾患、例えば、骨粗鬆症および関節炎、アスピリン感受性副鼻腔炎、嚢胞性線維症、多発性硬化症、腎臓疾患。
【０２７４】
本発明はまた、インシュリン抵抗性および不感受性、ならびにグルコース、エネルギーおよび脂肪蓄積の崩壊（代謝病および肥満など）に由来する疾病に有用である可能性がある。
【０２７５】
本発明はＲＯＣＫが仲介するいかなる種類の介入、治療または予防も包含する。本発明はしたがって、（ａ）ＲＯＣＫキナーゼの修飾（例えば、阻害）、または（ｂ）ＲＯＣＫキナーゼの活性レベルでの介入、または（ｃ）Ｒｈｏシグナル伝達経路レベルでの（例えば、ＲｈｏＡおよび／またはＲｈｏＣレベルでの）介入を含む治療または予防に関連して適用される。
【０２７６】
他の適用可能な方法としては、（ａ）筋肉(例えば、平滑筋)弛緩、（ｂ）血管筋弛緩（例えば、血管の血流を高めるため）、（ｃ）神経細胞調節、（ｄ）細胞増殖の減少、（ｅ）細胞移動の減少、（ｆ）病原浸潤または感染時の細胞骨格再構成の抑制、（ｇ）組織再生の加速、および（ｈ）傷害後の機能回復の増強をもたらす介入が挙げられる。
【０２７７】
このような実施形態において、神経細胞修飾は、（ａ）神経再生、（ｂ）新規軸索成長誘導、（ｃ）ＣＮＳ内の病変にわたる軸索の再構成、（ｄ）神経突起伸長、（ｅ）神経突起分化、（ｆ）軸索経路探索、（ｇ）樹状突起棘形成、（ｈ）樹状突起棘維持、（ｉ）神経突起成長円錐崩壊の修飾、および（ｊ）神経突起伸長阻害の修飾を含む可能性がある。
【０２７８】
他の適用可能な治療としては、移植療法（例えば、グラフト保護を含む)が挙げられる。
【０２７９】
さらに他の適用可能な方法としては、病態または症状の診断および治療方法が挙げられ、この方法は、（ｉ）患者が罹患している、または罹患している可能性のある疾病または症状がＲＯＣＫキナーゼに対して活性を有する化合物による治療に感受性があるものかどうかを判定すべく患者をスクリーニングすること、および（ｉｉ）患者の疾病または症状が感受性を有することが示された場合に、その後、患者に本発明の化合物を投与することを含む。
【０２８０】
被験者または患者集団は、（ａ）ＲＯＣＫキナーゼが機能不全（例えば、過活性）のもの、および（ｂ）ＲＯＣＫ機能不全（例えば、ＲＯＣＫ活性亢進）の診断テストの対象になったもの、（ｃ）Ｒｈｏシグナル伝達経路が機能不全のもの、および（ｄ）Ｒｈｏシグナル伝達経路機能不全の診断テストの対象になったものから選ばれてもよい。
【０２８１】
ｐ７０Ｓ６Ｋキナーゼ阻害活性に関連するかまたは起因する使用
式（Ｉ）の化合物は、プロテインキナーゼｐ７０Ｓ６Ｋの活性を修飾（例えば、阻害）する。当該化合物はしたがって（ａ）プロテインキナーゼｐ７０Ｓ６Ｋの修飾（例えば、阻害）が示される疾病または症状の治療または予防、ならびに／あるいは（ｂ）プロテインキナーゼｐ７０Ｓ６Ｋの修飾（例えば、阻害）が示される被験者または患者集団の治療に適用される。
【０２８２】
本発明はしたがって、（ａ）癌（例えば、ｐ７０Ｓ６Ｋが仲介する癌）、（ｂ）腫瘍転移、（ｃ）免疫機能不全、（ｄ）組織損傷（例えば、炎症から生じる）、（ｅ）染色体１７ｑ２３増幅（またはこれから生じるかまたはこれに関連する症状）、（ｆ）ポイツイエーガー症候群（またはこれから生じるかまたはこれに関連する症状）、（ｇ）ＬＫＢ１変異（またはこれから生じるかまたはこれに関連する症状）、（ｈ）ＢＲＣＡ１変異（またはこれから生じるかまたはこれに関連する症状）、（ｉ）ＢＲＣＡ２変異（またはこれから生じるかまたはこれに関連する症状）、（ｊ）機能不全性アポトーシス性プログラム、（ｋ）腫瘍組織における増殖因子受容体のシグナル伝達、過剰発現および活性化、（ｌ）代謝病または代謝異常、（ｍ）異常細胞増殖および／または代謝に関連したもの、ならびに（ｎ）神経細胞疾患から選ばれる症状に関連して適用される。
【０２８３】
このような実施形態において、染色体１７ｑ２３増幅から生じるかまたはこれに関連する疾病または症状は、（ａ）原発性乳房腫瘍、（ｂ）ＢＲＣＡ２変異を含む腫瘍（例えば、乳房腫瘍)、（ｃ）ＢＲＣＡ１変異を含む腫瘍（例えば、乳房腫瘍）、（ｄ）膵臓腫瘍、（ｅ）膀胱腫瘍、および（ｆ）神経芽細胞腫から選ばれてもよい。
【０２８４】
ＬＫＢ１変異から生じるかまたはこれに関連する疾病または症状は、ＬＫＢ１変異（例えば、不活性化ＬＫＢ１変異）を含む肺腺癌であり得る。
【０２８５】
ＢＲＣＡ１／２変異からから生じるかまたはこれに関連する疾病または症状は乳癌であり得る。
【０２８６】
代謝病または代謝異常は、（ａ）肥満（例えば、加齢性肥満または食餌性肥満）、(ｂ)糖尿病、（ｃ）メタボリック症候群、（ｄ）インシュリン抵抗性、（ｅ）高血糖、（ｆ）高アミノ酸血症、および（ｇ）高脂血症から選ばれ得る。
【０２８７】
増殖性疾患（癌を含む）：本発明はまた、新生物の増殖を防ぐまたは新生物に細胞死を招く手段として適用される。したがって、本発明は、癌など増殖性疾患の治療または予防に有用であることが証明されることが予想される。このような異常の例としては、これらに限定されるものではないが、ｐ７０Ｓ６Ｋの過剰発現（または、本明細書に記載の他の症候群）。
【０２８８】
本発明は、例えば、ウイルス感染などの増殖または生存における異常に起因する他の症状ならびに神経変性疾患の治療においてもまた有用となることも予想される。
【０２８９】
本発明はしたがって、増殖、細胞死または分化の異常がある疾病の治療に広く適用される。
【０２９０】
阻害される可能性のある癌の例としては、これらに限定されるものではないが、癌腫、例えば、膀胱癌、乳癌、結腸癌（例えば、結腸腺癌および結腸腺腫などの結腸直腸癌）、腎癌、表皮癌、肝癌、肺癌、例えば、腺癌、小細胞肺癌および非小細胞肺癌、食道癌、胆嚢癌、卵巣癌、膵臓癌、例えば、膵外分泌癌、胃癌、子宮頚癌、子宮内膜癌、甲状腺癌、前立腺癌、または皮膚癌、例えば、扁平上皮癌；リンパ系の造血系腫瘍、例えば、白血病、急性リンパ性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、毛様細胞性リンパ腫またはバーケットリンパ腫；骨髄系の造血系腫瘍、例えば、急性および慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群または前骨髄球性白血病；甲状腺瀘胞癌；間充織起源の腫瘍、例えば、繊維肉腫または横紋筋肉腫；中枢神経系または末梢神経系の腫瘍、例えば、星状細胞腫、神経芽細胞腫、神経膠腫または神経鞘腫；メラノーマ；精上皮腫；奇形腫；骨肉腫；色素性乾皮症；角化棘細胞腫；甲状腺瀘胞癌；またはカポジ肉腫が挙げられる。
【０２９１】
リンパ球系列の造血系腫瘍のさらなる例としては多発性骨髄腫がある。
【０２９２】
癌の具体的なサブセットとしては、乳癌、卵巣癌、結腸癌、前立腺癌、食道癌、扁平上皮癌、および非小細胞肺癌腫が挙げられる。癌の別のサブセットとしては、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、子宮内膜癌、および神経膠腫がある。
【０２９３】
増殖性疾患の別の例としては脊髄増殖性症候群がある。
【０２９４】
免疫障害：本発明が有益である可能性のある免疫障害としては、これらに限定されるものではないが、自己免疫症状および慢性炎症疾患、例えば、全身性エリテマトーデス、自己免疫性糸球体腎炎、リウマチ様関節炎、乾癬、炎症性腸疾患および自己免疫性真性糖尿病、湿疹過敏性反応、喘息、ＣＯＰＤ、鼻炎、および上部気道疾患が挙げられる。
【０２９５】
他の治療用途：ｐ７０Ｓ６Ｋが仲介する生理的プロセスは、アポトーシス、増殖、分化において役割を果たし、したがって本発明は癌以外の下記の疾病および免疫機能不全に関連するものの治療にも有用になり得る。ウイルス感染、例えば、ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、エプスタイン−バールウイルス、シンドビスウイルス、アデノウイルス、ＨＩＶ、ＨＰＶ、ＨＣＶ、およびＨＣＭＶの治療；ＨＩＶ感染個体におけるエイズ発症の予防；心疾患、例えば、心肥大、再狭窄、アテローム性動脈硬化症；神経変性障害、例えば、アルツハイマー病、エイズ関連痴呆、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、色素性網膜炎、棘筋萎縮および小脳変性；糸球体腎炎；骨髄異形成症候群、虚血性損傷関連心筋梗塞、卒中および再灌流損傷、筋骨格系の変性疾患、例えば、骨粗鬆症および関節炎、アスピリン感受性副鼻腔炎、嚢胞性線維症、多発性硬化症、腎臓疾患。
【０２９６】
本発明はまた、インシュリン耐性および不感受性、ならびにグルコース、エネルギーおよび脂肪蓄積の崩壊（代謝病および肥満など）に由来する疾病に有用であり得る。
【０２９７】
本発明はｐ７０Ｓ６Ｋが仲介するいかなるの種類の介入、治療または予防も包含する。本発明はしたがって（ａ）プロテインキナーゼｐ７０Ｓ６Ｋの修飾（例えば、阻害）、（ｂ）プロテインキナーゼｐ７０Ｓ６Ｋの活性レベルでの介入、（ｂ）生体内での細胞周期におけるＧ１期からＳ期への進行の阻害、（ｃ）細胞周期のＧ１期からＳ期での細胞周期増殖の阻害、（ｄ）ラパマイシン代用薬としての式(Ｉ)の化合物の使用、（ｅ）ウォルトマンニン代用薬としての式(Ｉ)の化合物の使用、（ｆ）適切なアポトーシス性プログラムの再構築、（ｇ）腫瘍組織中での増殖因子受容体シグナル伝達、過剰発現および活性化の阻害、（ｈ）神経細胞分化の修飾、（ｉ）細胞運動の修飾、（ｊ）細胞応答の修飾、および（ｋ）インスリン感受性の増強を含む治療または予防に関して適用される。
【０２９８】
上記治療および予防はまた、病態または症状の診断および治療方法を含んでもよく、この方法は、（ｉ）患者が罹患している、または罹患している可能性のある疾患または症状がプロテインキナーゼｐ７０Ｓ６Ｋに対して活性を有する化合物による治療に感受性があるものかどうかを判定すべく患者をスクリーニングすること、および（ｉｉ）患者の疾患または症状が感受性を有することが示された場合に、その後、患者に本発明の化合物を投与することを含む。
【０２９９】
被験者または患者集団は、（ａ）プロテインキナーゼｐ７０Ｓ６Ｋが機能不全（例えば、過活性）のもの、（ｂ）ｐ７０Ｓ６Ｋ機能不全（例えば、ｐ７０Ｓ６Ｋ活性亢進）の診断テストの対象になったもの、（ｃ）染色体１７ｑ２３が増幅されているもの、そして（ｄ）染色体１７ｑ２３の増幅の診断テストの対象になったもの、（ｅ）ＢＲＣＡ１変異を有するもの、（ｆ）ＢＲＣＡ１変異の診断テストの対象になったもの、（ｇ）ＢＲＣＡ２変異を有するもの、（ｈ）ＢＲＣＡ２変異の診断テストの対象になったもの、（ｉ）ＬＫＢ１変異を有するもの、（ｊ）ＬＫＢ１変異の診断テストの対象になったもの、および（ｋ）本明細書で規定されるようにスクリーニングされたものから選ばれ得る。
【０３００】
発明の組成物の利点
本発明の組成物は経口投与に適した生理化学的特性を有する可能性がある。
【０３０１】
本明細書で定義される組成物は、従来の化合物と比較して向上した経口の生物学的利用能を示すはずである。経口の生物学的利用能は、静脈内（ｉ．ｖ．）経路で投与される場合の化合物の血漿暴露に対する、経口経路で投与される場合の化合物の血漿暴露の比（Ｆ）をパーセントで示したものとして規定することができる。
【０３０２】
経口での生物学的利用能（Ｆ値）が３０％より大きい、より好ましくは４０％より大きい組成物は非経口投与よりもむしろ（または非経口投与に加えて）経口投与されてもよいという点において特に有利である。
【０３０３】
さらに、式（Ｉ）の化合物は、様々なキナーゼに対する活性において、より優れた効力およびより広い選択性の両方を備え、特にＰＫＢに対して増強された選択性および効力を示す。
【０３０４】
式（Ｉ）の化合物は、生体外および細胞内におけるＰＫＢ阻害ではそのＲエナンチオマーよりも著しく強力である。生体外の放射測定アッセイにおける単離されたＰＫＢ酵素に対する式（Ｉ）の化合物のＩＣ_５０は０．０１μＭであり、これに比べてＲエナンチオマーは０．９６μＭである。この１００倍近い効力の差もまたＧＳＫ３β（ＰＫＢの直接の下流の基質）のリン酸化を測定する細胞に基づく（cell-based）メカニスティックアッセイ（mechanistic assay）中で観察される。式（Ｉ）の化合物は１．１μＭのＩＣ_５０を示し、これに比べてＲエナンチオマーの値は＞５０μＭである。
【０３０５】
上記２種のエナンチオマー間でのさらなる違いは、密接に関連するキナーゼＰＫＡに対するこれらの有効性にあり、ここで式（Ｉ）の化合物は０．０３μＭで単離された酵素を４４％阻害するのに比べてＲエナンチオマーは０．２５μＭでＰＫＡを阻害する。
【０３０６】
式（Ｉ）の化合物は、Ｐ４５０酵素に対して異なる感受性を有すること、ならびに薬物代謝および薬物速度論的特性に関して向上した点を示すことにおいて従来の化合物に対して有利である。例えば、式（Ｉ）の化合物は、シトクロムＰ４５０酵素１Ａ２、２Ｃ９、２Ｃ１９、３Ａ４および２Ｄ６のそれぞれに対して１０μＭではＩＣ_５０値より大きい値を有する。
【０３０７】
さらに、式（Ｉ）の化合物では必要となる投与量が低減されるはずである。
【０３０８】
式（Ｉ）の化合物は従来の化合物よりも毒性が低い。
【０３０９】
ｈＥＲＧ
１９９０年代末頃米国ＦＤＡによって認可された多くの医薬品が心機能不全による死亡に関係していることが見つかったため米国市場からの撤退を余儀なくされた。後に、これらの医薬品の副作用は、心臓細胞におけるｈＥＲＧチャネルの遮断による不整脈の発生であることが分かった。ｈＥＲＧチャネルは、カリウムイオンチャネルファミリーの１つであり、その最初のメンバーは、１９８０年代末頃に、ショウジョウバエの一種であるキイロショウジョウバエ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ）の変異体で同定された（ジャン（Jan，L．Y．）およびジャン（Jan，Y．N．）（１９９０年）「イオンチャネルのスーパーファミリー（A Superfamily of Ion Channels）」、ネイチャー（Nature）、３４５（６２７７）：６７２を参照されたい）。ｈＥＲＧカリウムイオンチャネルの生物物理特性は、サンギネッチ（Sanguinetti，M．C．）、ジャン（Jiang、C．）、クラン（Curran，M．E．）およびキーティング（Keating，M．T．）（１９９５年）「遺伝性心不整脈と後天性心不整脈との機構的関連：ＨＥＲＧはＩｋｒカリウムチャネルをコードする（A Mechanistic Link Between an Inherited and an Acquired Cardiac Arrhythmia：HERG encodes the Ikr potassium channel）」、セル（Cell）、８１：２９９〜３０７、ならびにトルードー（Trudeau，M．C．）、ウォームク（Warmke，J．W．）、ゲネツキー（Ganetzky，B．）、およびロバートソン（Robertson，G．A．）（１９９５年）「ＨＥＲＧ、電位依存性カリウムチャネルファミリーにおけるヒトの内向き整流（HERG，a Human Inward Rectifier in the Voltage-Gated Potassium Channel Family）」、サイエンス（Science）、２６９：９２〜９５に記載されている。
【０３１０】
ｈＥＲＧ遮断活性の除去は依然としてあらゆる新規な医薬品の開発における重要な懸案事項である。
【０３１１】
式（Ｉ）の化合物は無視できる程度のｈＥＲＧイオンチャネル遮断活性を有する。
【０３１２】
治療方法
本明細書で定義される組成物は、プロテインキナーゼＡおよび／もしくはプロテインキナーゼＢおよび／もしくはＲＯＣＫキナーゼおよび／もしくはｐ７０Ｓ６Ｋキナーゼにより仲介される様々な病態または症状の予防あるいは治療において有用となる。このような病態および症状の例は上記の通りである。
【０３１３】
上記組成物は、一般的にそのような投与を必要とする被験者（例えば、ヒトまたは動物の患者、好ましくはヒト）に対して投与される。
【０３１４】
上記組成物は、治療上または予防上有用であり一般的に毒性のない量で典型的に投与されることになる。しかしながら、特定の状況において（例えば、生命を脅かす疾病の場合には）、本明細書で定義される組成物を投与する利点は、いかなる毒性効果または副作用の不利益に勝ることがあり、この場合には化合物を毒性を伴う量で投与することが望ましいと考えられる可能性がある。
【０３１５】
上記組成物は、有用な治療上の効果を維持するために長期間にわたって投与されてもよいし、または短期間のみ投与されてもよい。あるいは上記化合物はパルス的または連続的方法で投与されてもよい。
【０３１６】
典型的な式（Ｉ）の化合物の１日量は、体重１キログラムあたり１００ピコグラム〜１００ミリグラム、より典型的には体重１キログラムあたり５ナノグラム〜２５ミリグラム、そしてより通常には体重１キログラムあたり１０ナノグラム〜１５ミリグラム（例えば、１０ナノグラム〜１０ミリグラム、およびより典型的には１キログラムあたり１マイクログラム〜１キログラムあたり２０ミリグラム、例えば、１キログラムあたり１マイクログラム〜１０ミリグラム）の範囲であり得るが、必要であればより高用量またはより低用量で投与されてもよい。本明細書で定義される組成物は、毎日、または、例えば、２日もしくは３日もしくは４日もしくは５日もしくは６日もしくは７日もしくは１０日もしくは１４日もしくは２１日もしくは２８日ごとに繰り返し投与することができる。
【０３１７】
式（Ｉ）の化合物は、広範囲にわたる用量（例えば、１〜１５００ｍｇ、２〜８００ｍｇ、または５〜５００ｍｇ、例えば、２〜２００ｍｇ、または１０〜１０００ｍｇ、用量の具体例としては１０、２０、５０および８０ｍｇが挙げられる）で経口投与されてもよい。化合物は、毎日１回または１回以上投与されてもよい。化合物は、連続的に投与することができる（すなわち、治療レジメンの期間中、途切れずに毎日服用する）。あるいは、化合物は間欠的に投与することができる（すなわち治療レジメンの期間中、ある期間（例えば、１週間）連続的に服用し、次いである期間（例えば、１週間）中止し、次いで別の期間（例えば、１週間）連続的に服用するなど）。間欠投与を含む治療レジメンの例としては、１週間投与、１週間中止；または２週間投与、１週間中止；または３週間投与、１週間中止；または２週間投与、２週間中止；または４週間投与、２週間中止；または１週間投与、３週間中止のサイクルで、１回または複数回のサイクル（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９または１０以上のサイクル）で投与が行われるレジメンが挙げられる。
【０３１８】
ある具体的な投薬スケジュールでは、患者は毎日１時間１０日間までの期間（特に１週間で５日まで）で本明細書で定義される組成物を点滴されることになり、この治療は２〜４週間のような所望の間隔（特に３週間毎）で繰り返される。
【０３１９】
より具体的には、患者は毎日１時間５日間の期間で本明細書で定義される組成物を点滴されてもよく、この治療は３週間毎に繰り返される。
【０３２０】
別の具体的な投薬スケジュールでは、患者は３０分〜１時間にわたって点滴され、可変的な期間（例えば、１〜５時間、例えば、３時間）の維持点滴が後続する。
【０３２１】
さらなる具体的な投薬スケジュールでは、患者は１２時間〜５日の期間の継続的な点滴、特に２４時間〜７２時間の継続的な点滴が行なわれる。
【０３２２】
しかしながら最終的には、投与される化合物の量および使用される組成物のタイプは、その疾病の性質または治療されている生理的な症状に相応し、医師の裁量によることとなる。
【０３２３】
式（Ｉ）の化合物は、単一の治療剤として投与可能であるし、特定の病態（例えば、上記で定義された癌などの新生物疾患）の治療のための１種以上の他の化合物との併用療法において投与可能である。式（Ｉ）の化合物とともに用いられてもよい（同時にまたは異なる時間間隔であるかどうかにかかわらず）、他の治療剤または治療の例としては、限定されるものではないが、以下のものが挙げられる。
・トポイソメラーゼＩ阻害剤
・代謝拮抗剤
・チューブリン標的化薬剤
・ＤＮＡ結合剤およびトポイソメラーゼＩＩ阻害剤
・アルキル化剤
・モノクローナル抗体
・抗ホルモン
・シグナル伝達阻害剤
・プロテアソーム阻害剤
・ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ
・サイトカインおよびレチノイド
・クロマチン標的化療法
・放射線療法、および、
・他の治療剤または予防薬、例えば、化学療法に伴う副作用のいくつかを減少または緩和する薬剤。そのような薬剤の具体的な例としては、制吐剤、および化学療法に伴う好中球減少の持続性を防止または減少させる薬剤、および赤血球レベルまたは白血球レベルの減少から生じる合併症を予防する薬剤、例えば、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）および顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）が挙げられる。また、ビスホスホネート剤（例えば、ゾレドネート、パミドロネートおよびイバンドロネート）などの骨吸収を阻害する薬剤、炎症反応を抑制する薬剤（デキサメタゾン、プレドニゾンおよびプレドニゾロンなど）、および天然ホルモンのソマトスタチンの薬理学的特性を模倣する薬理学的特性を備えた長時間作用性のオクタペプチドである酢酸オクトレオチドを含む、脳ホルモンソマトスタチンの合成型のような、先端肥大症患者において成長ホルモンおよびＩＧＦ−Ｉの血中濃度を減少させるために使用される薬剤が挙げられる。さらには、ロイコボリン（葉酸レベルを減少させる薬剤に対する解毒剤として使用される）またはフォリン酸それ自体などの薬剤、および浮腫および血栓塞栓症発作を含む副作用の治療のために使用することができる酢酸メゲストロールのような薬剤が挙げられる。
【０３２４】
本発明の組合せ中に存在する化合物の各々は、個別に違った用量スケジュールで、かつ異なる経路を通じて投与されてもよい。
【０３２５】
式（Ｉ）の化合物が、１、２、３、４種またはそれ以上の他の治療剤（好ましくは１または２種、より好ましくは１種）との併用療法で投与される場合は、化合物は同時にまたは順次投与できる。順次投与される場合、それらは短い間隔で（例えば、５〜１０分の期間にわたって）、またはより長い間隔（例えば、１、２、３、４時間またはそれ以上離れて、または必要とされる場合にはさらにより長い期間離れて）で投与することができるが、正確な投与レジメンは治療剤の特性に対応する。
【０３２６】
式（Ｉ）の化合物はまた、放射線療法、光力学療法、遺伝子療法などの非化学療法的治療；手術および栄養制限食と併用して投与されてもよい。
【０３２７】
別の化学療法剤との併用療法における使用に関して、本明細書で定義される組成物と１、２、３、４種またはそれ以上の他の治療剤とは、例えば、２、３、４種またはそれ以上の治療剤を含む投薬形態にまとめて製剤化することができる。あるいは個々の治療剤は個別に製剤化されキットの形態でまとめて提供されてもよく、任意でそれらの使用説明書が添付される。
【０３２８】
当業者は、通常の知識により、用いる投与レジメンおよび併用療法が分かるであろう。
【０３２９】
診断方法
本明細書で定義される組成物の投与前に、患者が罹患している、もしくは罹患している可能性のある疾病または症状が、特定の標的キナーゼ（例えば、プロテインキナーゼＡおよび／もしくはプロテインキナーゼＢおよび／もしくはＲＯＣＫキナーゼおよび／もしくはＰ７０Ｓ６Ｋキナーゼ）に対する活性を有する化合物による治療に対して感受性のある疾病または症状であるかどうかを決定するために患者をスクリーニングしてもよい。
【０３３０】
例えば、患者から採取した生体サンプルを分析し、その患者が罹患している、もしくは罹患している可能性のある癌などの症状または疾病がＰＫＡおよび／またはＰＫＢアップレギュレーションまたは正常なＰＫＡおよび／またはＰＫＢ活性への経路の感作、あるいはＰＫＢの場合では、Ｐ１３Ｋ、ＧＦ受容体、ＰＤＫ１およびＰＤＫ２などのＰＫＡおよび／またはＰＫＢの上流のシグナル伝達構成要素のアップレギュレーションをもたらす遺伝的異常または異常なタンパク質発現を特徴とするものかどうかを決定するために分析されてもよい。
【０３３１】
あるいは、患者から採取された生体サンプルは、ＰＴＥＮなどのＰＫＢ経路の負の調節因子またはサプレッサーの欠損に関して分析されてもよい。本文脈において、「欠損」なる語は、調節因子またはサプレッサーをコードする遺伝子の欠失、遺伝子の切断（例えば、変異による）、遺伝子の転写産物の切断、または転写産物の不活性化（例えば、点変異による）もしくは別の遺伝子産物による隔離を包含する。
【０３３２】
あるいは、またはそれに加えて、患者はＲＯＣＫ活性の機能不全（例えば、上昇したまたはアップレギュレートされたＲＯＣＫ発現、ＲＯＣＫ遺伝子における変異、またはＲＯＣＫ遺伝子調節要素）またはＲｈｏシグナル伝達の機能不全に関してスクリーニングされてもよい。
【０３３３】
アップレギュレーションなる語には、遺伝子増幅（すなわち複数の遺伝子コピー）および転写効果による発現増加を含む高発現または過剰発現、ならびに変異による活性化を含む過活性および活性化が包含される。したがって、キナーゼ（例えば、ＰＫＡおよび／またはＰＫＢおよび／またはＲＯＣＫキナーゼおよび／またはＰ７０Ｓ６Ｋキナーゼ）のアップレギュレーションに特有のマーカーを検出するために、患者を診断検査に供してもよい。診断なる語はスクリーニングを含む。本発明者らはマーカーに、例えば、キナーゼ（例えば、ＰＫＡおよび／またはＰＫＢおよび／またはＲＯＣＫキナーゼおよび／またはＰ７０Ｓ６Ｋキナーゼ）の変異を同定するためのＤＮＡ組成の指標をはじめとする遺伝マーカーも含める。マーカーなる語はまた、前述のタンパク質の酵素活性、酵素量、酵素状態（例えば、リン酸化の有無）およびｍＲＮＡレベルを含む、キナーゼ（例えば、ＰＫＡおよび／またはＰＫＢおよび／またはＲＯＣＫキナーゼおよび／またはＰ７０Ｓ６Ｋキナーゼ）のアップレギュレーションならびに／あるいは関連経路のアップレギュレーションに繋がる他の因子に特徴的なマーカーを含む。
【０３３４】
上記の診断試験およびスクリーニングは、典型的には、腫瘍生検標本、血液サンプル（脱落した腫瘍細胞の単離および濃縮）、便生検、喀痰、染色体分析、胸水、腹水、骨髄または尿から選ばれる生体サンプルに対して行なわれる。
【０３３５】
ＰＫＡおよび／またはＰＫＢに変異、ＴＣＬ−１のリアレンジメント、またはＰＴＥＮ発現の欠損を有する個体の同定は、この患者がＰＫＡおよび／またはＰＫＢ阻害剤による治療に特に適することを意味する可能性がある。腫瘍は治療の前にＰＫＡおよび／またはＰＫＢの変異の存在に関して優先的にスクリーニングされてもよい。このスクリーニング方法は典型的には、直接配列決定、オリゴヌクレオチドマイクロアレイ分析、または変異体特異的抗体を含む。
【０３３６】
タンパク質の変異およびアップレギュレーションの同定および分析方法は、当業者に公知である。スクリーニング方法としては、限定されるものではないが、逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）またはｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーションなどの標準的な方法が挙げられる。
【０３３７】
ＲＴ−ＰＣＲによるスクリーニングでは、腫瘍におけるｍＲＮＡのレベルは、このｍＲＮＡのｃＤＮＡコピーを作成した後、このｃＤＮＡをＰＣＲにより増幅することにより評価する。ＰＣＲ増幅の方法、プライマーの選択、および増幅条件は当業者に公知である。核酸の操作およびＰＣＲは、例えば、オースベル（Ausubel, F. M.）ら（編者）、「分子生物学における現在のプロトコル（Current Protocols in Molecular Biology）」、２００４年、ジョンワイリー＆サンズ、またはイニス（Innis, M. A.）ら（編者）、「ＰＣＲプロトコル：方法および応用の手引き（PCR Protocols:a guide to methods and applications）」、１９９０年、アカデミックプレス（Academic Press）、サンディエゴ、に記載のような標準的な方法により行う。核酸技術に関する反応および操作はまた、サムブルック（Sambrook）ら、２００１年、第３版、モレキュラークローニング：レボラトリーマニュアル（Molecular Cloning: A Laboratory Manual）、コールドスプリングハーバーラボラトリー出版（Cold Spring Harbor Laboratory Press）に記載されている。あるいは、ＲＴ−ＰＣＲ用の市販キット（例えば、ロシュモレキュラーバイオケミカルズ社（Roche Molecular Biochemicals））、または米国特許第４，６６６，８２８号；第４，６８３，２０２号；第４，８０１，５３１号；第５，１９２，６５９号；第５，２７２，０５７号；第５，８８２，８６４号および第６，２１８，５２９号に開示の方法が使用でき、これらは参照により本書に援用される。
【０３３８】
ｍＲＮＡの発現を評価するためのｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション技術の例として、蛍光ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）がある（アンゲラー（Angerer）、１９８７年、「メソッズ・イン・エンザイモロジー（Meth. Enzymol）」、１５２：６４９参照）。
【０３３９】
一般に、ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーションは以下の主要な工程を含む：（１）分析する組織の固定；（２）標的核酸の接近性を高めるためそして非特異的結合を軽減するためのサンプルのプレハイブリダイゼーション処理；（３）核酸混合物と生物学的構造または組織中の核酸とのハイブリダイゼーション；（４）ハイブリダイゼーションにおいて結合しなかった核酸断片を除去するためのハイブリダイゼーション後の洗浄；および（５）ハイブリダイズした核酸断片の検出。このような用途に用いるプローブは典型的には、例えば、放射性同位体または蛍光リポーターで標識される。好ましいプローブは、ストリンジェントな条件下で標的核酸との特異的ハイブリダイゼーションを可能とするのに十分な長さ、例えば、約５０、１００または２００ヌクレオチド〜約１０００以上のヌクレオチドである。ＦＩＳＨを行うための標準的な方法は、オースベル（Ausubel, F. M.）ら（編者）、「カレントプロトコルズ・イン・モレキュラーバイオロジー（Current Protocols in Molecular Biology）」、２００４年、ジョンワイリー＆サンズ、ならびにバートレット（John M. S. Bartlett）による「フルオレセンスｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション：テクニカルオーバービュー（Fluorescence In Situ Hybridization: Technical Overview）」、モレキュラーダイアグノシス・オブ・キャンサー、メソッズおよびプロトコルズ（Molecular Diagnosis of Cancer，Methods and Protocols）、第２版；ＩＳＢＮ：１−５９２５９−７６０−２；２００４年３月、０７７〜０８８ページ；分子医学における手法シリーズ（Series: Methods in Molecular Medicine）に記載されている。
【０３４０】
あるいは、ｍＲＮＡから発現されたタンパク質産物を、腫瘍サンプルの免疫組織化学、マイクロタイタープレートを用いる固相イムノアッセイ、ウエスタンブロット、二次元ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動、ＥＬＩＳＡ、フローサイトメトリーおよび特定のタンパク質を検出するための当技術分野で公知の他の方法により分析してもよい。検出方法は部位特異的抗体の使用を含むこととなる。当業者ならば、キナーゼ（例えば、ＰＫＡおよび／もしくはＰＫＢおよび／もしくはＲＯＣＫキナーゼおよび／もしくはＰ７０Ｓ６Ｋキナーゼ）のアップレギュレーションの検出またはキナーゼの変異体の検出のためにこのような周知の技術は全て本件に適用可能であることを認識しているであろう。
【０３４１】
したがって、これらの技術はいずれも、ＰＫＢおよび／またはＰＫＡおよび／またはＲＯＣＫキナーゼおよび／またはＰ７０Ｓ６Ｋキナーゼ阻害剤による治療に特に適した腫瘍を同定するために使用することができる。
【０３４２】
例えば、上述のように、ＰＫＢベータは、卵巣および膵臓癌の１０〜４０％においてアップレギュレートされることが分かっている（ベラコサ（Bellacosa）ら、１９９５年、「インターナショナルジャーナル・オブ・キャンサー（Int. J. Cancer）」６４、２８０〜２８５；チェン（Cheng）ら、１９９６年、「米国科学アカデミー紀要（PNAS）」９３、３６３６〜３６４１；ユアン（Yuan）ら、２０００年、「オンコジーン（Oncogene）」１９、２３２４〜２３３０）。したがってＰＫＢ阻害剤、および特に、ＰＫＢベータの阻害剤は、卵巣および膵臓癌を治療するために使用され得ることが予想される。
【０３４３】
ＰＫＢアルファはヒト胃癌、前立腺癌および乳癌において増幅される（スタール（Staal）１９８７年、「米国科学アカデミー紀要（PNAS）」８４、５０３４〜５０３７；ソン（Sun）ら、２００１年、「米国病理学会誌（Am. J. Pathol.）」１５９、４３１〜４３７）。したがってＰＫＢ阻害剤、および特にＰＫＢアルファの阻害剤は、ヒト胃癌、前立腺癌および乳癌を治療するために使用され得ることが予想される。
【０３４４】
ＰＫＢガンマ活性の増加は、ステロイド非依存性の乳腺細胞株および前立腺細胞株において観察されている（ナカタニ（Nakatani）ら、１９９９年、「ジャーナル・オブ・バイオロジカルケミストリー（J. Biol. Chem.）」２７４、２１５２８〜２１５３２）。したがってＰＫＢ阻害剤、および特に、ＰＫＢガンマの阻害剤はステロイド非依存性の乳癌および前立腺癌を治療するために使用され得ることが予想される。
【０３４５】
ＲＯＣＫの検出はｍＲＮＡレベルまたはタンパク質レベルのいずれかで行なわれてもよい。臨床サンプルにおいてＲｈｏおよびＲＯＣＫのレベルが測定された方法の具体例としては次のものが挙げられる。
【０３４６】
・「米国病理学会誌（American Journal of Pathology）」、２００２年、１６０：５７９〜５８４。この文献は、ヒト乳房組織におけるＲｈｏＣ発現を明らかにするためにホルマリンで固定された組織に対して行なわれた免疫組織化学的手法を記載している。
【０３４７】
・「クリニカルキャンサーリサーチ（Clinical Cancer Research）」第９巻、２６３２〜２６４１、２００３年７月。この文献は、連続的に１０７人の日本人膀胱癌患者から得られたペアになった腫瘍および非腫瘍外科試料中のＲｈｏおよびＲＯＣＫタンパク質発現を定量するためのウエスタンブロットの使用を記載している。
【０３４８】
・「パンクリアス（Pancreas）」２４（３）：２５１〜２５７、２００２年４月。この文献は、免疫ブロット法と免疫組織化学的手法によりヒト膵臓組織におけるＲＯＣＫ−１の発現を記載している。
【０３４９】
・「ワールドジャーナル・オブ・ガストロエンテロロジー（World J．Gastroenterol）」２００３年９月、９（９）:１９５０〜１９５３。この文献は、肝細胞癌（ＨＣＣ）における逆転写ポリメラーゼ連鎖反応法（ＲＴ−ＰＣＲ）によるＲｈｏＣ遺伝子のｍＲＮＡ発現レベルの試験を記載している。
【０３５０】
前述の出版物に含まれるＲｈｏおよび／またはＲＯＣＫ活性または発現レベルの定量に関する方法の開示は参照により本書に援用される。
【０３５１】
ｐ７０Ｓ６Ｋの検出はｍＲＮＡレベルまたはタンパク質レベルのいずれかで行なわれてもよい。例示となる方法は、「ジャーナル・オブ・ザ・ナショナルキャンサーインスティテュート（J Naltl Cancer Inst）」（２０００年）：９２、１２５２〜９ページに記載されている（これは、相補ＤＮＡおよび組織マイクロアレイ分析によるリボソーム蛋白質Ｓ６キナーゼの活性化の検出は比較ゲノムハイブリダイゼーション（ＣＧＨ）を使用し、ｃＤＮＡおよび組織マイクロアレイ分析で増幅および過剰発現遺伝子を同定することを記載している）。
【０３５２】
過剰発現ｐ７０Ｓ６Ｋの検出は「インターナショナルジャーナル・オブ・オンコロジー（Int J Oncol）」（２００４年）：２４（４）、８９３〜９００ページに記載されている。この論文は、腫瘍感受性と高いｐ７０Ｓ６ＫおよびＡＫＴの発現とを比較するために免疫組織化学的手法を使用して、一般的なヒト腫瘍におけるＰＩ３Ｋ／ＰＴＥＮ−Ａｋｔ−ｍＴＯＲ経路の薬理ゲノム学的プロファイリングを記載している。
【実施例】
【０３５３】
本発明を、以下の手法および実施例に記載の具体的実施形態を参照して説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【０３５４】
下記の各手法の出発物質は特に断りのない限り市販のものである。
【０３５５】
プロトン磁気共鳴（^１Ｈ ＮＭＲ）スペクトルは特に断らない限り、４００．１３ＭＨｚで、Ｍｅ−ｄ_３−ＯＤ中、２７℃で作動するＢｒｕｋｅｒ ＡＶ４００機器に記録され、次のように報告される：化学シフトδ／ｐｐｍ（陽子数、多重度：ｓ＝シングレット、ｄ＝ダブレット、ｔ＝トリプレット、ｑ＝カルテット、ｍ＝マルチプレット、ｂｒ＝ブロード）。残存するプロトン性溶媒ＭｅＯＨ（δ_Ｈ＝３．３１ｐｐｍ）を内部標準として使用した。
【０３５６】
実施例において、調製した化合物を下記のシステムと動作条件を用いて液体クロマトグラフィーおよび質量分光法で特性解析した。塩素が存在する場合、化合物に対する質量は^３５Ｃｌに関するものである。用いた動作条件を下記に記載する。
【０３５７】
プラットフォームシステム
ＨＰＬＣシステム：Ｗａｔｅｒｓ２７９５
質量分析検出器：Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ Ｐｌａｔｆｏｒｍ ＬＣ
ＰＤＡ検出器：Ｗａｔｅｒｓ２９９６ ＰＤＡ
酸性分析条件２
溶離剤Ａ：Ｈ_２Ｏ（０．１％ギ酸）
溶離剤Ｂ：ＣＨ_３ＣＮ（０．１％ギ酸）
勾配：３．５分で溶離剤Ｂを５〜９５％
流速：０．８ｍｌ／分
カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｓｙｎｅｒｇｉ ４μ Ｍａｘ−ＲＰ８０Ａ、５０×２．０ｍｍ
塩基性分析条件５
溶離剤Ａ：Ｈ_２Ｏ（１０ｍＭ ＮＨ_４ＨＣＯ_３緩衝液、ＮＨ_４ＯＨでｐＨ９．２に調整）
溶離剤Ｂ：ＣＨ_３ＣＮ
勾配：３．５分で溶離剤Ｂを０５〜９５％
流速：０．８ｍｌ／分
カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ ５μ ２．０×５０ｍｍ
ＭＳ条件
キャピラリー電圧：３．５ｋＶまたは３．６ｋＶ
コーン電圧：３０Ｖ
ソース温度：１２０℃
走査範囲：１６５〜７００ａｍｕ
イオン化モード：エレクトロスプレーネガティブ、ポジティブ、またはポジティブ＆ネガティブ
【０３５８】
下記の実施例において、用いたＬＣＭＳ条件を識別するため次のキーが用いられている。
ＰＳ−Ａ２ プラットフォームシステム−酸性分析条件２
ＰＳ−Ｂ５ プラットフォームシステム−塩基性分析条件５
【０３５９】
実施例１
（Ｓ）−２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−エタノールの調製
１Ａ．２−（４−クロロ−フェニル）−２−（４−ヨード−フェニル）−オキシラン
【化７】

水素化ナトリウム（油状物中の６０％分散液、１２８ｍｇ、３．２ｍｍｏｌ）をＮ_２下で配置し、次いでＤＭＳＯ（５ｍｌ）を加えた。１５分後にヨウ化トリメチルスルホニウム（０．６６ｇ、３．２ｍｍｏｌ）を固形物として加え、続いてさらに３０分後に（４−クロロ−フェニル）−（４−ヨード−フェニル）−メタノン（１ｇ、２．９ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を室温で２４時間撹拌し次いで酢酸エチルで希釈し、１：２水／塩水、水、および塩水で洗浄した（×２）。有機相を乾燥（ＭｇＳＯ_４）、ろ過、および濃縮して、標題化合物（１．０１ｇ、９７％）を得、これをさらなる精製を行わないで使用した。ＬＣＭＳ（ＰＳ−Ａ２）、Ｒ_ｔ４．０７分、［Ｍ−Ｈ］⁻３５５．
【０３６０】
１Ｂ．２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−ヨード−フェニル］−エタノール（エポキシド開環反応）
【化８】

２−（４−クロロ−フェニル）−２−（４−ヨード−フェニル）−オキシラン（５００ｍｇ、１．４０ｍｍｏｌ）をメタノール（５ｍｌ、１０．０ｍｍｏｌ）中の２Ｍ ＮＨ_３に溶解し、この溶液を１３０℃で６０分間マイクロ波反応器中で加熱した。冷却し、溶媒を減圧下で除去して所望の生成物を得た。同様の反応を３度行い１．５５ｇ（９８％）の２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−ヨード−フェニル］−エタノール生成物を得た。この粗生成物は純粋であり、精製を行わないで次の工程で使用した。
【０３６１】
１Ｃ．［２−（４−クロロ−フェニル）−２−ヒドロキシ−２−（４−ヨード−フェニル）−エチル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（ＢＯＣ保護）
【化９】

工程１Ｂのアミノアルコール生成物（９．５５ｇ、２５．５６ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（２２０ｍｌ）に懸濁し２Ｍ ＮａＯＨを加えた（１６．６ｍｌ、３３．２４ｍｍｏｌ）。均質になるまでこの混合物を激しく撹拌した。重炭酸ジｔｅｒｔ−ブチル（６．１４ｇ、２８．１１ｍｍｏｌ）を加え、この反応混合物を４５℃で２０時間撹拌した。冷却し、反応混合物を濃縮し、ＥｔＯＡｃ（１５０ｍｌ）および水（１５０ｍｌ）に分液した。有機層を分離し、塩水（１５０ｍｌ）で洗浄し乾燥させ（ＭｇＳＯ_４）、濃縮して黄色の油状物（１４．０８ｇ）を得た。この粗生成物をバイオタージＳＰ４（６５ｉカラム）を用いて、酢酸エチル−石油（５％〜４０％のＥｔＯＡｃ勾配）で溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を白色固形物として得た（１０．０ｇ、８３％）。Ｒ_ｔ３．７３分、［Ｍ＋Ｈ］４７３．９６
【０３６２】
１Ｄ．［２−（４−クロロ−フェニル）−２−ヒドロキシ−２−［４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−エチル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（スズキカップリング反応）
【化１０】

［２−（４−クロロ−フェニル）−２−ヒドロキシ−２−（４−ヨード−フェニル）−エチル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（５ｇ、１０．６ｍｍｏｌ）を丸底フラスコ中で４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール（４．１ｇ、２１．１１ｍｍｏｌ）およびリン酸カリウム（三塩基性、７．８８ｇ、３７．１０ｍｍｏｌ）と混合した。次いでこの固形物をエタノールとメタノールとトルエンと水との１：１：１：１溶剤混合物（各溶媒３３ｍｌ）に溶解した。この溶液を窒素で脱気し、テトラキストリフェニルホスフィンパラジウム（０）（０．６１２ｇ、０．５３ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を窒素で脱気し、次いで８５℃および窒素下で２時間加熱した。次いでこの反応混合物を室温まで冷ました。次いでさらなる試薬：リン酸カリウム（７．８８ｇ、３７．１０ｍｍｏｌ）およびボロン酸ピラゾール（４．１ｇ、２１．１１ｍｍｏｌ）のバッチを加えた。この反応混合物を窒素で脱気し、さらなるテトラキストリフェニルホスフィンパラジウム（０）（０．１０１ｇ、０．０８７ｍｍｏｌ）のバッチを加えた。この混合物を脱気し、次いで８５℃および窒素下で１７時間加熱した。追加の試薬のバッチを再び加え（上記の量を参照）、８５℃および窒素下でさらに６．５時間加熱を続けた。この反応混合物を次いで室温まで冷却し、減圧下で蒸発させて有機溶媒を除去した。残存する水層を２Ｎ ＮａＯＨ水溶液（１５０ｍｌ）で希釈し、次いで酢酸エチル（１５０ｍｌ）で抽出した。有機層を分離し、２Ｎ ＮａＯＨ水溶液（１５０ｍｌ）続いて塩水（１５０ｍｌ）で洗浄した。この有機層を分離し、乾燥（Ｍｇ_２ＳＯ_４）させ、減圧下で濃縮した。残渣をジエチルエーテルでトリチュレーション（triturated）した。固形物を減圧下でろ過し次いで乾燥させて、標題化合物を白色固形物として得た（２．５５ｇ、５８％）。ＬＣ／ＭＳ：（ＰＳ−Ｂ５）Ｒ_ｔ３．０５［Ｍ＋Ｈ］^＋４１４．１８。^１Ｈ ＮＭＲ（Ｍｅ−ｄ_３−ＯＤ）７．９５（２Ｈ、ｂｒ ｓ）、７．５５（２Ｈ、ｄ）、７．４８−７．４１（４Ｈ、ｍ）、７．３１（２Ｈ、ｄ）、３．８７（２Ｈ、ｑ）、１．３５（９Ｈ、ｓ）．
【０３６３】
１Ｅ．２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−エタノール（ＢＯＣ脱保護工程）
【化１１】

飽和ＨＣｌ（Ｅｔ_２Ｏ中、５０ｍｌ）およびメタノール（５０ｍｌ）中のＢＯＣアミン（２．５５ｇ、６．１６ｍｍｏｌ）の懸濁液を室温で２０時間撹拌した。この反応混合物を減圧下で濃縮し、２Ｍ ＮａＯＨ（１５０ｍｌ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２００ｍｌ）で抽出した（注：固形物を完全に溶解するため長時間の振とうが必要であった）。有機層を１Ｎ ＨＣｌ（１００ｍｌ）で洗浄した。次いで水層を分離し、２Ｍ ＮａＯＨでｐＨ１２まで塩基性化した。溶液からの所望の生成物が析出し、次いで真空ろ過により採取され、数日間乾燥される（１．８９ｇ、９８％）。^１Ｈ ＮＭＲ（Ｍｅ−ｄ_３−ＯＤ）δ３．２９−３．３８（２Ｈ、ｍ）、７．３２（２Ｈ、ｄ）、７．４１−７．４６（４Ｈ、ｍ）、７．５５（２Ｈ、ｄ）、７．９４（２Ｈ、ｓ）．
【０３６４】
１Ｆ．個々のエナンチオマーのキラル分離
下記のキラルＬＣ法を用いて、化合物（Ｓ）−２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−エタノールをＲエナンチオマーから分離した。
【０３６５】
キラル分析条件
溶離剤：室温でＭｅＯＨ＋０．１％ＤＥＡ
流速：０．７ｍｌ／分
合計時間：２５分
注入量：５ｕＬ
試料濃度：１ｍｇ／ｍｌ（移動相中）
カラム：ダイセルキラルパックＡＤ−Ｈ、２５０×４．６ｍｍ
波長：２３０または２５７ｎｍ
キラル分取条件
溶離剤：室温でＭｅＯＨ＋０．１％ＤＥＡ
流速：１３ｍｌ／分
合計時間：２９分
注入量：２５０ｕＬ
試料濃度：１００ｍｇ／ｍｌ（移動相中）
カラム： ダイセルキラルパックＡＤ−Ｈ、２５０×２０ｍｍ
波長：２３０または２５７ｎｍ
得られた（Ｓ）−２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−エタノールは、旋光分析、キラルクロマトグラフィー、および結晶学的方法により特性解析された。
【０３６６】
旋光分析
ＳエナンチオマーおよびＲエナンチオマーの光学活性はいずれもＡＡ−１０自動旋光計（オプティカルアクティビティーリミテッド社（Optical Activity Limited））を用いて測定した。
【０３６７】
Ｓ−エナンチオマー
２２．４２ｍｇの化合物を２ｍｌのＭｅＯＨに溶解した。細胞長：２０ｃｍ、測定値：＋０．３１、［α］^２０_Ｄ：＋１３．８°
Ｒ−エナンチオマー
２０．１４ｍｇを１０ｍｌのＭｅＯＨに溶解した（旋光計セル中の気泡問題のためより多量の希釈物）。測定値：−０．０３、細胞長：１０ｃｍ、［α］^２０_Ｄ：−１４．８°
キラルクロマトグラフィー
上記のキラル分析条件および５μｌの注入量を用いると、Ｓエナンチオマーの保持時間は１５．２８３分であった。
【０３６８】
結晶学的方法
ｂＰＫＡ−ＰＫＢにおけるＳエナンチオマーの結晶学的解析は、デービース（Thomas G. Davies）ら、「ＰＫＢ、ＰＫＡおよびＰＫＡ−ＰＫＢキメラに対する阻害剤結合の構造比較（A Structural Comparison of Inhibitor Binding to PKB, PKA and PKA-PKB Chimera）」、ジャーナル・オブ・モレキュラーバイオロジー（J. Mol. Biol.）、２００７年１月９日：１７２７５８３７に記載の方法を用いて行なわれた。この分析はタンパク質に結合したＳエナンチオマーの存在を示した。
【０３６９】
実施例２
２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−ヨード−フェニル］−エタノールの代替合成法
この実施例では、実施例１における中間体化合物１Ｂである２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−ヨード−フェニル］−エタノールの調製を記載する。
【化１２】

【０３７０】
２Ａ．（ＲＳ）−２−（４−クロロフェニル）−２−（４−ヨードフェニル）オキシラン
カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（１８．４８ｇ、１６５．０ｍｍｏｌ）を、ジメチルスルホキシド（２００ｍｌ）中の４−クロロ−４’−ヨードベンゾフェノン（５１．３８ｇ、１５０．０ｍｍｏｌ）とヨウ化トリメチルスルホニウム（３３．６６ｇ、１６５．０ｍｍｏｌ）との急速に撹拌された懸濁液に加え、得られた混合物を室温で３時間撹拌した。この混合物を酢酸エチル（５００ｍｌ）で希釈し、水（３×５００ｍｌ）次いで塩水（５００ｍｌ）で洗浄した。有機層を分離し溶媒を減圧下で除去して、（ＲＳ）−２−（４−クロロフェニル）−２−（４−ヨードフェニル）オキシラン（５３．４８ｇ、１００％）を淡黄色の油状物として得、これは放置すると凝固してオフホワイト色の固形物になった。^１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６）７．７６（２Ｈ、ｄ）、７．４５（２Ｈ、ｄ）、７．３４（２Ｈ、ｄ）、７．１２（２Ｈ、ｄ）、３．３２（２Ｈ、ｍ）．ＭＳ：［Ｍ−Ｈ］⁻３５５．
【０３７１】
２Ｂ．（ＲＳ）−２−アジド−１−（４−クロロフェニル）−１−（４−ヨードフェニル）エタノール
アジ化ナトリウム（１３．８６ｇ、２１３．２ｍｍｏｌ）を、アセトン（４００ｍｌ）および水（４０ｍｌ）中の（ＲＳ）−２−（４−クロロフェニル）−２−（４−ヨードフェニル）オキシラン（５０．６６ｇ、１４２．１ｍｍｏｌ）の混合物に加え、この混合物を撹拌し還流状態で４日間保持した。室温まで冷却し、アセトンを減圧下で除去し、残渣を酢酸エチル（５００ｍｌ）に溶解し、水（２５０ｍｌ）次いで塩水（２５０ｍｌ）で洗浄し、有機層を分離し、溶媒を減圧下で除去して（ＲＳ）−２−アジド−１−（４−クロロフェニル）−１−（４−ヨードフェニル）エタノール（５６．７７ｇ、１００％）を淡黄色の油状物として得、これは放置するとゆっくりと凝固してオフホワイト色の固形物になった。^１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６）７．６８（２Ｈ、ｄ）、７．４４（２Ｈ、ｄ）、７．３８（２Ｈ、ｄ）、７．２４（２Ｈ、ｄ）、６．３８（１Ｈ、ｂｒ ｓ）、３．９９（２Ｈ、ｓ）．ＭＳ：［Ｍ−Ｈ］⁻３９８．
【０３７２】
２Ｃ．トルエン−４−スルホン酸（ＲＳ）−２−アンモニオ−１−（４−クロロフェニル）−１−（４−ヨードフェニル）エタノール
トリフェニルホスフィン（３１．４４ｇ、１２０．０ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン（４００ｍｌ）中の（ＲＳ）−２−アジド−１−（４−クロロフェニル）−１−（４−ヨードフェニル）エタノール（４７．９４ｇ、１２０．０ｍｍｏｌ）の溶液に加え、この混合物を撹拌し還流状態で５時間保持し、ここでトルエン−４−スルホン酸一水和物（２２．８ｇ、１２０．０ｍｍｏｌ）および水（４０ｍｌ）を加え、この混合物を撹拌し還流状態でさらに１６時間保持した。室温まで冷却しこの混合物を減圧下で蒸発乾固した。酢酸エチル（６００ｍｌ）を加え、この混合物を室温で３０分間急速に撹拌して固形分を再懸濁させた。この固形物を吸引ろ過により採取し、酢酸エチル（３×２５０ｍｌ）ですすぎ、減圧下で吸引乾燥させ、真空オーブン中の５０℃で一晩乾燥させて、トルエン−４−スルホン酸（ＲＳ）−２−アンモニオ−１−（４−クロロフェニル）−１−（４−ヨードフェニル）エタノール（５１．３７ｇ、７８％）を無色の固形物として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６）７．７３（２Ｈ、ｄ）、７．６８（３Ｈ、ｂｒ ｓ）、７．４７（４Ｈ、ｍ）、７．４３（２Ｈ、ｄ）、７．２８（２Ｈ、ｄ）、７．１２（２Ｈ、ｄ）、６．６０（１Ｈ、ｂｒ ｓ）、３．６７（２Ｈ、ｓ）、２．３０（３Ｈ、ｓ）．ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］^＋３７４．
【０３７３】
実施例２Ｃの生成物は、実施例１Ｃの方法によりＮ−Ｂｏｃ誘導体に変換することができ（ただしトルエンスルホン酸塩を考慮して追加の当量の水酸化ナトリウムを用いる）、次いで実施例１Ｄおよび１Ｅに記載のようにスズキカップリング反応に供し続いてＢｏｃ保護基を除去し、得られたエナンチオマーの混合物は実施例１Ｆの方法により分割されて、（Ｓ）−２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−エタノールが得られる。
【０３７４】
生物学的活性
式（Ｉ）の化合物の生物学的活性は以下の実施例に記載されている。さらに、式（Ｉ）の化合物の生物学的特性はライオンズ（John F. Lyons）らによるポスター（３５１２ｓページ、ポスターセッションＢ、アブストラクトＢ２５１、ＡＡＣＲ−ＮＣＩ−ＥＯＲＴＣインターナショナルカンファレンス：「分子標的および癌治療法（Molecular Targets and Cancer Therapeutics）」、２００７年１０月２２〜２６日、サンフランシスコ、カリフォルニア州（アステックスセラピューティクス社（Astex Therapeutics）のウェブサイトからコピーが入手可能：www.astex-therapeutics.comまたはwww.astex-therapeutics.com/investorsandmedia/publications））に記載されている。
【０３７５】
実施例３
ＰＫＡキナーゼ阻害活性（ＩＣ_５０）の測定
式（Ｉ）の化合物のＰＫ阻害活性は、アップステートバイオテクノロジー社（Upstate Biotechnology）製のＰＫＡ触媒ドメイン（＃１４−４４０）および基質としてアップステートバイオテクノロジー社製の９残基ＰＫＡ特異的ペプチド（ＧＲＴＧＲＲＮＳＩ）（＃１２−２５７）を用いて試験可能である。最終濃度が１ｎＭの酵素を、２０ｍＭ ＭＯＰＳ（ｐＨ７．２）、４０μＭ ＡＴＰ／γ^３３Ｐ−ＡＴＰおよび５０ｍＭの基質を含む緩衝液中で用いる。最終メチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）濃度が２．５％になるまで化合物をＤＭＳＯ溶液に加える。反応を２０分間進行させた後、過剰量のオルトリン酸を加えて活性を停止させる。次いで未反応のγ^３３Ｐ−ＡＴＰをミリポアＭＡＰＨフィルタープレート上でリン酸化タンパク質から分離する。このプレートを洗浄し、シンチラントを加え、パッカードトップカウント（Packard Topcount）上でプレートのカウントを行なう。
【０３７６】
ＰＫＡ活性の阻害率（％）を算出し、プロットすることで、ＰＫＡ活性を５０％阻害するのに必要な試験化合物の濃度（ＩＣ_５０）を求める。
【０３７７】
上記のプロトコルに従って、（Ｓ）−２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−エタノールは０．０３μＭの濃度でＰＫＡを４４％阻害し、一方で（Ｒ）−２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−エタノールのＩＣ_５０値は０．２５μＭであることがわかった。この結果はＳエナンチオマーがＰＫＡアッセイにおいてＲエナンチオマーよりも著しく強力であることを示す。
【０３７８】
実施例４
ＰＫＢキナーゼ阻害活性（ＩＣ_５０）の測定
化合物によるプロテインキナーゼＢ（ＰＫＢ）活性の阻害は、基本的にはアンジェルコビッチ（Andjelkovic）ら（「モレキュラー・アンド・セルラーバイオロジー（Mol. Cell. Biol.）」１９、５０６１〜５０７２、１９９９年）の記載のようにそしてＰＫＢ−ＰＩＦとして記載されヤン（Yang）ら（「ネイチャー・ストラクチュアルバイオロジー（Nature Structural Biology）」９、９４０〜９４４、２００２年）により詳細に記載された融合タンパク質を用いて求めることができる。ヤンらにより記載されるようにタンパク質は精製されＰＤＫ１で活性化される。カルビオケム（Calbiochem）社から入手のペプチドＡＫＴｉｄｅ−２Ｔ（Ｈ−Ａ−Ｒ−Ｋ−Ｒ−Ｅ−Ｒ−Ｔ−Ｙ−Ｓ−Ｆ−Ｇ−Ｈ−Ｈ−Ａ−ＯＨ）（＃１２３９００）を基質として用いる。最終濃度が０．６ｎＭの酵素を、２０ｍＭ ＭＯＰＳ（ｐＨ７．２）、３０μＭ ＡＴＰ／γ^３３Ｐ−ＡＴＰおよび２５μＭの基質を含む緩衝剤中で用いる。最終ＤＭＳＯ濃度が２．５％になるまで化合物をＤＭＳＯ溶液に加える。反応を２０分間進行させた後、過剰量のオルトリン酸を加えて活性を停止させる。反応混合物をリン酸セルロースフィルタープレートに移す。このプレート上でペプチドが結合し、用いられなかったＡＴＰは洗浄されて除去される。洗浄後、シンチラントを加え、取り込まれている活性をシンチレーションカウントにより測定する。
【０３７９】
ＰＫＢ活性の阻害率（％）を算出し、プロットすることで、ＰＫＢ活性を５０％阻害するのに必要な試験化合物の濃度（ＩＣ_５０）を求める。
【０３８０】
上記のプロトコルに従って、（Ｓ）−２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−エタノールのＩＣ_５０値は０．０１μＭである一方で、（Ｒ）−２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−エタノールのＩＣ_５０値は０．９６μＭであることが分かった。この結果はＳエナンチオマーがＰＫＢアッセイにおいてＲエナンチオマーよりもほぼ１００倍強力であることを示す。
【０３８１】
実施例５
ｈＥＲＧ活性
ｈＥＲＧ Ｋ^＋イオンチャネルに対する式（Ｉ）の化合物の活性は、ブリッジランド・テーラー（M.H. Bridgland-Taylor）らによる論文「ジャーナル・オブ・ファーマコロジカル・アンド・トキシコロジカルメソッズ（Journal of Pharmcaological and Toxicological Methods）」、５４（２００６年）、１８９〜１９９に記載のアッセイを用いて測定できる。
【０３８２】
実施例６
シトクロムＰ４５０に対する有効性の測定
シトクロムＰ４５０（ＣＹＰ４５０）酵素１Ａ２、２Ｃ９、２Ｃｌ９、３Ａ４および２Ｄ６に対する実施例１の化合物の有効性は、インビトロゲン社（Invitrogen）（ペイズリー、英国）から入手可能なＰａｎ Ｖｅｒａ Ｖｉｖｉｄ Ｃｙｐ４５０スクリーニングキットを使用して測定した。このＣＹＰ４５０は、ＣＹＰ４５０およびＮＡＤＰＨレダクターゼを含むバキュロソーム（baculosome）の形態で供給され、用いた基質は蛍光Ｖｉｖｉｄ基質であった。最終反応混合液は以下のとおりであった。
【０３８３】
１Ａ２
１００ｍＭリン酸カリウム、ｐＨ８、１％アセトニトリル、２μＭ １Ａ２ Ｂｌｕｅ ｖｉｖｉｄ基質、１００μＭ ＮＡＤＰ^＋、４ｎＭ ＣＹＰ４５０ １Ａ２、２．６６ｍＭグルコース−６−リン酸、０．３２Ｕ／ｍｌグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ。
【０３８４】
２Ｃ９
５０ｍＭリン酸カリウム、ｐＨ８、１％アセトニトリル、２μＭ Ｇｒｅｅｎ ｖｉｖｉｄ基質、１００μＭ ＮＡＤＰ^＋、８ｎＭ ＣＹＰ４５０ ２Ｃ９、２．６６ｍＭグルコース−６−リン酸、０．３２Ｕ／ｍｌグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ。
【０３８５】
２Ｃ１９
５０ｍＭリン酸カリウム、ｐＨ８、１％アセトニトリル、８μＭ Ｂｌｕｅ ｖｉｖｉｄ基質、１００μＭ ＮＡＤＰ^＋、４ｎＭ ＣＹＰ４５０ ２Ｃ１９、２．６６ｍＭグルコース−６−リン酸、０．３２Ｕ／ｍｌグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ。
【０３８６】
３Ａ４
１００ｍＭリン酸カリウム、ｐＨ８、１％アセトニトリル、１０μＭ ３Ａ４ Ｂｌｕｅ ｖｉｖｉｄ基質、１００μＭ ＮＡＤＰ^＋、２．５ｎＭ ＣＹＰ４５０ ３Ａ４、２．６６ｍＭグルコース−６−リン酸、０．３２Ｕ／ｍｌグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ。
【０３８７】
２Ｄ６
１００ｍＭリン酸カリウム、ｐＨ８、１％アセトニトリル、５μＭ ２Ｄ６ Ｂｌｕｅ ｖｉｖｉｄ基質、１００μＭ ＮＡＤＰ^＋、１６ｎＭ ＣＹＰ４５０ ２Ｄ６、２．６６ｍＭグルコース−６−リン酸、０．３２Ｕ／ｍｌグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ。
【０３８８】
蛍光をフルオロスキャン（Fluoroskan）蛍光プレートリーダー上で３０秒間隔で２０分間モニタリングした。励起波長および発光波長は、１Ａ２、２Ｃ１９および３Ａ４の場合３９０ｎｍおよび４６０ｎｍ、２Ｄ６の場合３９０ｎｍおよび４８５ｎｍ、２Ｃ９の場合４８５ｎｍおよび５３０ｎｍであった。初速度をプログレス曲線から求めた。
【０３８９】
試験化合物にアセトニトリルを加え、１０μＭの濃度でＣＹＰ４５０に対して試験した。
【０３９０】
１Ａ２、２Ｃ９、２Ｃ１９、３Ａ４および２Ｄ６に対して１０μＭでは実施例１の化合物はＩＣ_５０よりも大きかった。
【０３９１】
実施例７
ｐＳｅｒ９ ＧＳＫ３βに対する細胞に基づくホスホ−Ｓｅｒ９ Ｇｓｋ３βＥＬＩＳＡアッセイ
Ｕ８７ＭＧ細胞におけるＰＫＢ阻害効果は、セリン９上の直接の下流の基質ＧＳＫ３βのリン酸化を阻害する化合物の能力により判定される。細胞を９６のウェルプレート中で平板培養し一晩回復させた後、阻害化合物を１時間加える。１時間後、細胞をＴＢＳ−Ｔで３％パラホルムアルデヒド、０．２５％グルテルアルデヒド、０．２５％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ１００および５％マーヴェルで固定およびブロックする。これに続いて、細胞をＧＳＫ３βのリン酸化体に対する一次抗体（セルシグナリング社（Cell Signaling））と４℃で一晩培養する。洗浄後、細胞をＤＥＬＦＩＡ試薬（Ｅｕ−Ｎ１抗ウサギＩｇＧ抗体）を用いた二次抗体で１時間培養し、続いて増強プレート（enhancement plates）を３４０ｎｍの励起および６４０ｎｍの発光で時間分解蛍光リーダー上で読み取る。細胞は全てＥＣＡＣＣ（ヨーロピアンコレクション・オブ・セルカルチャーズ（European Collection of Cell Cultures））から入手する。
【０３９２】
プロトコル
１．９６ウェルプレート中１６０ｕｌ媒体／ウェルおよび細胞１２５００個／ウェルでＵ８７ＭＧ細胞を平板培養する
２．３７℃で２４時間培養する
３．阻害剤およびＤＭＳＯコントロールで細胞を処理する
４．３７℃で１時間培養する
５．媒体をプレートからはたいて紙の上にブロッティングする
６．各ウェルに１００μｌ固定液を加える（３％パラホルムアルデヒド、０．２５％グルテルアルデヒド、０．２５％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ１００）
７．３７℃で３０分間培養する
８．水／０．１％Ｔｗｅｅｎ２０で一回洗浄する
９．１００μｌの５％ミルク／ＴＢＳ−Ｔでブロッキングする
１０．３７℃で３０分間培養する
１１．５％ミルク／ＴＢＳ−Ｔ中で希釈された１００μｌの一次抗体を各ウェルに加える（ＣＳＴ＃９３３６ホスホ−Ｓｅｒ９ ＧＳＫ３β抗体を１：２５０で使用）
・一次抗体を含まない５％ミルク／ＴＢＳ−Ｔのみのカラムコントロールを含む
・必要であればまた５％ミルク／ＴＢＳ−Ｔ中でホスホ−Ｓｅｒ９ ＧＳＫ３βと同様の濃度まで希釈されたザイムド（Zymed）社のウサギＩｇＧ（０２−６１０２、５ｍｇ／ｍｌ）のカラムを含んでもよい
１２．４℃で一晩培養する
１３．水／０．１％Ｔｗｅｅｎ２０で３回洗浄する
１４．Ｄｅｌｆｉａアッセイ緩衝液で希釈された１００μｌの二次抗体を各ウェルに加える（Ｄｅｌｆｉａ Ｅｕ−Ｎ１抗ウサギＩｇＧ抗体を０．３０μｇ／ｍｌの最終濃度で使用）
１５．３７℃で１時間培養
１６．水／０．１％Ｔｗｅｅｎ２０で３回洗浄する
１７．各ウェルに１００μｌの増強液（Delfia Enhancement Solution）を加える
１８．１５分間プレートシェーカー上で振とうする
１９．Ｄｅｌｆｉａプログラム上で読み取る（励起３４０ｎｍ、発光６４０ｎｍ）：ユーロピウム量
２０．水／０．１％Ｔｗｅｅｎ２０で一回洗浄する
２１．１ウェル当たり２００μｌのＢＣＡ溶液を加える（１：５０硫酸銅（ＩＩ）を含むＢＣＡ）
２２．３７℃で３０分間培養する
２３．５６２ｎｍの吸光度で読み取る：タンパク質濃度
化合物（Ｓ）−２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−エタノールは、上記のメカニスティックアッセイ（mechanistic assay）において１．１μＭのＩＣ_５０を有する一方で、（Ｒ）−２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−エタノールのＩＣ_５０値は５０μＭより大きく、つまりＲエナンチオマーは本質的には不活性であることがわかった。
【０３９３】
実施例８
ＲＯＣＫ−ＩＩ（ｈ）アッセイプロトコル
化合物（Ｓ）−２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−エタノールは下記に示すＲＯＣＫ−ＩＩアッセイで試験された。
【０３９４】
２５μｌの最終反応体積で、ＲＯＣＫ−ＩＩ（ｈ）（５〜１０ｍＵ）を、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．５、０．１ｍＭ ＥＧＴＡ、３０μＭ ＫＥＡＫＥＫＲＱＥＱＩＡＫＲＲＲＬＳＳＬＲＡＳＴＳＫＳＧＧＳＱＫ、１０ｍＭ酢酸マグネシウムおよび［γ−^３３Ｐ−ＡＴＰ］（比活性：約５００ｃｐｍ／ｐｍｏｌ、必要に応じて濃縮）で培養する。反応をＭｇＡＴＰミックスの添加により開始する。室温で４０分間培養した後、反応を５μｌの３％リン酸溶液を加えて停止する。次いで１０μｌの反応物でＰ３０フィルターマット上に斑点を付け、７５ｍＭのリン酸中で５分間３回そしてメタノール中で１回洗浄した後、乾燥およびシンチレーションカウントを行う。
【０３９５】
このアッセイにおいて、（Ｓ）−２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−エタノールのＩＣ_５０は上記アッセイにおいて１０ｎＭ未満（すなわちアッセイの限界以下）であることが分かった。
【０３９６】
実施例９
Ｐ７０Ｓ６放射測定アッセイ
化合物（Ｓ）−２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−エタノールは下記のｐ７０Ｓ６Ｋ放射測定アッセイ中で試験された。
【０３９７】
概説
Ｐ７０Ｓ６酵素をアップステート社（Upstate）から購入し、アッセイ中２ｎＭで使用する。
【０３９８】
基質Ｓ６カクテル（ＡＫＲＲＲＬＳＳＬＲＡ）を２５μＭ（Ｋｍは測定されていない）で使用する。ホスホリル転移反応において、ＡＴＰからの^３３Ｐ−γリン酸塩はセリン残基に転移する。反応混合物をホスホセルロースフィルタープレートに転移し、このプレート上ではペプチドが結合し用いられなかったＡＴＰが洗い流される。洗浄後、シンチラントを加え、組み込まれている活性をシンチレーションカウントにより測定する。
【０３９９】
試薬
アップステート社からのＰ７０Ｓ６キナーゼ（Ｔ４１２Ｅ）、活性、（＃１４−４８６）
アップステート社からのＳ６キナーゼ基質カクテル（＃２０−１２２）
アッセイ緩衝液
１０ｍＭ ＭＯＰＳ ｐＨ７．０
０．１ｍｇ／ｍｌ ＢＳＡ
０．００１％ Ｂｒｉｊ−３５
０．５％ グリセロール
０．２ｍＭ ＥＤＴＡ
１０ｍＭ ＭｇＣｌ_２
０．０１％ β−メルカプトエタノール（１０倍原液として作成、２ｍｌアリコート中２０℃で保存）
１５μＭ ＡＴＰ（ＡＴＰ（１０ｍＭ原液）を濃縮原液から新たに添加する。ＡＴＰは時間とともに分解するのでできるだけ氷上で維持し原液が新しいことを確実にするため小さなアリコートを使用する。）
γ^３３Ｐ−ＡＴＰ ＡＰバイオテック社（APBiotech）（ＢＦ−１０００）
１２．５％オルトリン酸
０．５％オルトリン酸
マイクロシント２０（パッカード社)
アッセイ調製
酵素ミックス（１ｍｌ毎−１００アッセイポイント)：
７４３．７５μｌ Ｈ２０
２５０μｌ １０倍アッセイ緩衝液
３．７５μｌ １０ｍＭ ＡＴＰ
２．５μｌ酵素
基質ミックス（１ｍｌ毎−１００アッセイポイント)：
２５０μｌ Ｓ６カクテル基質
７５０μｌ Ｈ２０
３．５μｌ ^３３Ｐ−ＡＴＰ（ＡＰバイオテック社からのＢＦ１０００）
添加した^３３Ｐ−ＡＴＰの量を参照日とする。正確な量は経時的に調整する必要がある。
【０４００】
化合物−４０倍の最終アッセイ濃度までのポリプロピレン９６ウェルプレート中のＤＭＳＯにおける希釈曲線を作成する（最終ＤＭＳＯ２．５％）。
【０４０１】
水中で１：８に希釈する（水３５μｌに対して化合物５μｌの添加で十分）。
【０４０２】
アッセイの構成
ポリプロピレン９６ウェルプレートに次の順番で加える。
５μｌ化合物
１０μｌ基質ミックス
１０μｌ酵素ミックス
最終ＡＴＰ濃度は約１５μＭである。ＡＴＰのＫＭは放射測定により４７ｕＭであると計算される。コントロールは「化合物なし」（ＤＭＳＯのみ）および「酵素なし」（酵素添加前に酵素ミックスを１０μｌ使用）。プレートシール（トップシールＡ、パッカード)またはプラスチック蓋でフィルタープレートからカバー（適度な放射障壁）する。軽く振とうして混合する。室温で５０分間培養する。２０μｌの２％オルトリン酸を加えて反応を停止する。
【０４０３】
ろ過工程
５０μｌの０．５％オルトリン酸洗浄緩衝液でミリポアＭＡＰＨ ＮＯＢプレートのウェルをあらかじめ湿らせる。ミリポア真空ろ過ユニットに液体を通しろ過する。停止した反応物を全てウェルに移す。ろ過する。２００μｌの０．５％オルトリン酸洗浄緩衝液で２度洗浄する。ほぼ乾固するまで脱気する。プレート支持体を取り除き、ティッシュペーパー上でさらにフィルターを乾燥する。パッカードトップカウント用アダプターへプレートを折り入れる。２０μｌのマイクロシント２０シンチラントを加え、トップシールＡで封をし、トップカウント上で３０秒間カウントする。
【０４０４】
このアッセイにおいて、（Ｓ）−２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−エタノールは１２ｎＭのＩＣ_５０を有することが分かった。
【０４０５】
医薬製剤
実施例１０
（ｉ）錠剤製剤
本明細書で定義される組成物を含有する錠剤組成物は、上記の化合物５０ｍｇと、希釈剤としてのラクトース（ＢＰ）１９７ｍｇと、滑沢剤としてのステアリン酸マグネシウム３ｍｇとを混合し、公知の方法で打錠することにより製造される。
【０４０６】
（ｉｉ）カプセル製剤
カプセル製剤は、本明細書で定義される組成物１００ｍｇとラクトース１００ｍｇとを混合し、得られた混合物を標準的な不透明硬ゼラチンカプセルに充填することにより製造される。
【０４０７】
（ｉｉｉ）注射用製剤Ｉ
注射投与用の非経口組成物は、本明細書で定義される組成物（例えば、塩形態で）を、１０％プロピレングリコールを含有する水に溶解し、活性化合物濃度１．５重量％とすることにより製造することができる。次いでこの溶液をろ過除菌し、アンプルに充填し密閉する。
【０４０８】
（ｉｖ）注射用製剤ＩＩ
注射用の非経口組成物は、本明細書で定義される組成物（例えば、塩形態で）（２ｍｇ／ｍｌ）およびマンニトール（５０ｍｇ／ｍｌ）を水に溶解し、溶液をろ過滅菌し、密封可能な１ｍｌバイアルまたはアンプルへ充填することにより製造される。
【０４０９】
（ｖ）注射用製剤ＩＩＩ
注射または点滴によるｉｖ送達用の製剤は、水に式（Ｉ）の化合物（例えば、塩形態で）を２０ｍｇ／ｍｌで溶解することにより製造できる。次いで、バイアルを密封し、オートクレーブ処理により滅菌する。
【０４１０】
（ｖｉ）注射用製剤ＩＶ
注射または点滴によるｉｖ送達用の製剤は、緩衝剤（例えば、０．２Ｍ酢酸、ｐＨ４．６）を含有する水に式（Ｉ）の化合物（例えば、塩形態で）を２０ｍｇ／ｍｌで溶解することにより製造できる。次いで、バイアルを密封し、オートクレーブ処理により滅菌する。
【０４１１】
（ｖｉｉ）皮下注射用製剤
皮下投与用組成物は、本明細書で定義される組成物と医薬用コーン油とを混合し濃度を５ｍｇ／ｍｌとすることによりを調製される。この組成物を殺菌し適切な容器に充填する。
【０４１２】
（ｖｉｉｉ）凍結乾燥製剤
製剤化された式（Ｉ）の化合物のアリコートを５０ｍｌバイアルへ入れ凍結乾燥する。凍結乾燥の間、−４５℃でワンステップ凍結プロトコルを用いて組成物を凍結する。温度をアニーリングのために−１０℃に上げ、次いで低下させて−４５℃で凍結し、次いで約３４００分かけて＋２５℃で一次乾燥させ、徐々に５０℃まで昇温して二次乾燥を行う。一次乾燥および二次乾燥中の圧力は８０ミリトルに設定する。
【０４１３】
均等
上記の実施例は、本発明を説明する目的で記載したものであり、本発明の範囲を何ら限定するものではない。上記に記載し、また、実施例で示す本発明の特定の実施形態に対して、本発明の原理から逸脱することなく、多くの改変および変更をなし得ることは容易に明らかである。このような改変および変更は総て本願に含まれるものとする。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
（Ｓ）２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−エタノールを含む組成物であって、（Ｒ）２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−エタノールを実質的に含まないか、または（Ｓ）エナンチオマーが大半を占める（Ｓ）および（Ｒ）エナンチオマーの混合物を含む組成物。
【請求項２】
少なくとも７５％がＳエナンチオマー形態である２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−エタノールまたはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシドを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記（Ｓ）−２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−エタノールが少なくとも８０％の鏡像異性体純度を有する、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記（Ｓ）−２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−エタノールが少なくとも８５％、または少なくとも９０％、または少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または９９．５％の鏡像異性体純度を有する、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記（Ｓ）−２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−エタノールが９８％より高い鏡像異性体純度を有する、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
前記２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−エタノールの少なくとも９９．９％がＳエナンチオマーの形態である、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
（Ｒ）−２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−エタノールが実質的に組成物中に存在しない、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
前記（Ｓ）−２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−エタノールと薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物である、先行する請求項のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項９】
実質的に純粋な形態（すなわち０．５％未満、より好ましくは０．１％未満、最も好ましくは０．０１％未満の不純物を含む）の（Ｓ）−２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−エタノールからなる、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
０．２％を超える、より好ましくは０．１％を超える量の不純物が１種も存在しない、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
不純物が分かっている場合、０．５％を超える、または０．４％を超える、または０．３％を超える、または０．２％を超える、または０．１％を超える、または０．０５％を超える、または０．０１％を超える量の不純物は１種も存在しない、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記（Ｓ）−２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−エタノールが遊離塩基の形態である、先行する請求項のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１３】
前記（Ｓ）−２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−エタノールが酸付加塩の形態である、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１４】
実質的に純粋な形態の式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、互変異性体もしくはＮ−オキシド。
【化１】

【請求項１５】
遊離塩基の形態である請求項１４に記載の式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物もしくは互変異性体。
【請求項１６】
医薬に用いるための、先行する請求項のいずれか１項に記載の組成物または化合物。
【請求項１７】
プロテインキナーゼＢにより仲介される病態もしくは症状の予防または治療で用いる請求項１〜１５のいずれか１項に記載の組成物あるいは化合物。
【請求項１８】
プロテインキナーゼＢにより仲介される病態もしくは症状の予防または治療用薬剤の製造のための請求項１〜１５のいずれか１項に記載の組成物あるいは化合物の使用。
【請求項１９】
プロテインキナーゼＢにより仲介される病態もしくは症状の予防または治療方法であって、その必要のある被験体に請求項１〜１５のいずれか１項に記載の組成物または化合物を投与することを含む方法。
【請求項２０】
哺乳類における異常な細胞増殖もしくは細胞死の異常な停止からなる、またはそれから生じる疾病あるいは症状の治療に用いる、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の組成物あるいは化合物。
【請求項２１】
哺乳類における異常な細胞増殖もしくは細胞死の異常な停止からなる、またはそれから生じる疾病あるいは症状の治療用薬剤の製造のための、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の組成物あるいは化合物の使用。
【請求項２２】
哺乳類における異常な細胞増殖からなる、またはそれから生じる疾病あるいは症状の治療方法であって、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の組成物または化合物を、異常な細胞増殖または細胞死の異常な停止を阻害するのに有効な量で前記哺乳類に投与することを含む方法。
【請求項２３】
哺乳類における異常な細胞増殖もしくは細胞死の異常な停止からなる、またはそれから生じる疾病または症状の罹患率の緩和あるいは低減方法であって、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の組成物あるいは化合物を、異常な細胞増殖を阻害するのに有効な量で前記哺乳類に投与することを含む方法。
【請求項２４】
哺乳類における異常な細胞増殖もしくは細胞死の異常な停止からなる、またはそれから生じる疾病あるいは症状の治療方法であって、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の組成物あるいは化合物を、プロテインキナーゼＢの活性を阻害するのに有効な量で前記哺乳類に投与することを含む方法。
【請求項２５】
プロテインキナーゼＢの阻害に用いるための、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２６】
プロテインキナーゼＢに請求項１〜１５のいずれか１項に記載のキナーゼ阻害性組成物または化合物を接触させることを含む、プロテインキナーゼＢの阻害方法。
【請求項２７】
プロテインキナーゼＢおよび／またはプロテインキナーゼＡの活性を阻害することによる細胞過程（例えば、細胞分裂）の修飾に用いるための、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の組成物あるいは化合物。
【請求項２８】
プロテインキナーゼＢおよび／またはプロテインキナーゼＡの活性を阻害することによる細胞過程（例えば、細胞分裂）の修飾用薬剤の製造のための、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の組成物あるいは化合物の使用。
【請求項２９】
請求項１〜１５のいずれか１項に記載の組成物または化合物を用いてプロテインキナーゼＢおよび／またはプロテインキナーゼＡの活性を阻害することによる細胞過程（例えば、細胞分裂）の修飾方法。
【請求項３０】
プロテインキナーゼＡにより仲介される病態もしくは症状の予防または治療で用いる請求項１〜１５のいずれか１項に記載の組成物あるいは化合物。
【請求項３１】
プロテインキナーゼＡにより仲介される病態もしくは症状の予防または治療用薬剤の製造のための請求項１〜１５のいずれか１項に記載の組成物あるいは化合物の使用。
【請求項３２】
プロテインキナーゼＡにより仲介される病態または症状の予防または治療方法であって、その必要のある被験体に請求項１〜１５のいずれか１項に記載の組成物あるいは化合物を投与することを含む方法。
【請求項３３】
哺乳類における異常な細胞増殖もしくは細胞死の異常な停止からなる、またはそれから生じる疾病あるいは症状の治療方法であって、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の組成物あるいは化合物を、プロテインキナーゼＡの活性を阻害するのに有効な量で前記哺乳類に投与することを含む方法。
【請求項３４】
プロテインキナーゼＡを阻害するための、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の組成物または化合物。
【請求項３５】
プロテインキナーゼＡに請求項１〜１５のいずれか１項に記載のキナーゼ阻害性の組成物または化合物を接触させることを含む、プロテインキナーゼＡの阻害方法。
【請求項３６】
請求項１〜１５のいずれか１項に記載の組成物または化合物を用いてプロテインキナーゼＡの活性を阻害することによる細胞過程（例えば、細胞分裂）の修飾方法。
【請求項３７】
異常な細胞増殖もしくは細胞死の異常な停止からなる、またはそれから生じる病態または症状の予防あるいは治療用薬剤の製造のための、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の組成物あるいは化合物の使用。
【請求項３８】
請求項１〜１５のいずれか１項に記載の組成物と薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
【請求項３９】
医薬に用いるための、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の組成物または化合物。
【請求項４０】
請求項１〜１５のいずれか１項に記載の病態もしくは症状のいずれか１種の予防または治療用薬剤の製造のための、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の組成物あるいは化合物の使用。
【請求項４１】
請求項１〜１５のいずれか１項に記載の病態もしくは症状のいずれか１種の治療または予防方法であって、患者（例えば、その必要のある患者）に請求項１〜１５のいずれか１項に記載の組成物または化合物を（例えば、治療上有効な量で）投与することを含む方法。
【請求項４２】
請求項１〜１５のいずれか１項に記載の病態もしくは症状の罹患率の緩和または低減方法であって、患者（例えば、その必要のある患者）に請求項１〜１５のいずれか１項に記載の組成物または化合物を（例えば、治療上有効な量で）投与することを含む方法。
【請求項４３】
（ｉ）患者が罹患している、もしくは罹患している可能性のある疾病または症状がプロテインキナーゼＢ対して活性を有する化合物による治療に感受性があるものかどうかを判定すべく患者をスクリーニングすること、および（ｉｉ）患者の疾病または症状がそのような感受性を有することが示された場合に、その後、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の組成物または化合物を前記患者に投与することを含む、プロテインキナーゼＢにより仲介される病態または症状の診断あるいは治療方法。
【請求項４４】
スクリーニングされ、プロテインキナーゼＢに対して活性を有する化合物による治療に感受性のある疾病もしくは症状に罹患している、または罹患する危険性があると判定された患者における病態または症状の治療あるいは予防用薬剤の製造のための、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の組成物あるいは化合物の使用。
【請求項４５】
スクリーニングされ、プロテインキナーゼＢに対して活性を有する化合物による治療に感受性のある疾病もしくは症状に罹患している、または罹患する危険性があると判定された患者における病態または症状の治療あるいは予防で用いるための、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の組成物あるいは化合物。
【請求項４６】
（ｉ）患者が罹患している、もしくは罹患している可能性のある疾病または症状がプロテインキナーゼＡ対して活性を有する化合物による治療に感受性があるものかどうかを判定すべく患者をスクリーニングすること、および（ｉｉ）患者の疾病または症状がそのような感受性を有することが示された場合に、その後、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の組成物または化合物を前記患者に投与することを含む、プロテインキナーゼＡにより仲介される病態または症状の診断あるいは治療方法。
【請求項４７】
スクリーニングされ、プロテインキナーゼＡに対して活性を有する化合物による治療に感受性のある疾病もしくは症状に罹患している、または罹患する危険性があると判定された患者における病態または症状の治療あるいは予防で用いるための、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の組成物あるいは化合物。
【請求項４８】
スクリーニングされ、プロテインキナーゼＡに対して活性を有する化合物による治療に感受性のある疾病もしくは症状に罹患している、または罹患する危険性があると判定された患者における病態または症状の治療あるいは予防用薬剤の製造のための、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の組成物あるいは化合物の使用。
【請求項４９】
プロテインキナーゼＢおよび／またはプロテインキナーゼＡのモジュレーター（例えば、阻害剤）として用いるための、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の組成物または化合物。
【請求項５０】
プロテインキナーゼＢおよび／またはプロテインキナーゼＡの修飾（例えば、阻害）用薬剤の製造のための、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の組成物または化合物の使用。
【請求項５１】
プロテインキナーゼＢおよび／またはプロテインキナーゼＡの修飾（例えば、阻害）方法であって、前記プロテインキナーゼＢおよび／またはプロテインキナーゼＡを（例えば、細胞環境で、例えば、インビボで）請求項１〜１５のいずれか１項に記載の組成物または化合物に接触させることを含む方法。
【請求項５２】
２−アミノ−１−（４−クロロ−フェニル）−１−［４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−エタノールの（Ｓ）および（Ｒ）エナンチオマーの混合物を部分的にまたは完全に分割することを含む、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の組成物または化合物の調製方法。
【請求項５３】
前記（Ｓ）および（Ｒ）エナンチオマーがキラルクロマトグラフィーを用いて分割される、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
式（１２）の化合物またはその酸付加塩。
【化２】

【請求項５５】
４−トルエンスルホン酸塩である、請求項５４に記載の酸付加塩。
【請求項５６】
式（１７）の化合物。
【化３】

【請求項５７】
請求項５４に記載の式（１２）の化合物の調製方法であって、請求項５６に記載の式（１７）の化合物を極性非プロトン性溶媒中でトリフェニルホスフィンなどの第三級ホスフィンと反応させること、続いて酸性水溶液で処理することを含む方法。
【請求項５８】
前記酸性水溶液がメタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン酸およびカンフルスルホン酸から選ばれるアルキルスルホン酸またはアリールスルホン酸（最も好ましくは４−トルエンスルホン酸）を含む、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
請求項５６に記載の式（１７）の化合物の調製方法であって、式（１１）のエポキシド化合物を極性溶媒中で、好ましくは加熱して、アルカリ金属アジ化物およびアジ化トリメチルシリルから選ばれるアジ化物と反応させることを含む方法。
【化４】

【請求項６０】
前記アジ化物がアルカリ金属アジ化物である、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
前記アルカリ金属アジ化物がアジ化ナトリウムである請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
請求項５４に記載の式（１２）の化合物の調製方法であって、請求項５９〜６１のいずれか１項の方法を行うこと、続いて請求項５７または５８の方法を行うこと含む方法。

【公表番号】特表２０１０−５２１４４６（Ｐ２０１０−５２１４４６Ａ）
【公表日】平成２２年６月２４日（２０１０．６．２４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５５３２２２（Ｐ２００９−５５３２２２）
【出願日】平成２０年３月１４日（２００８．３．１４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＧＢ２００８／０５０１８０
【国際公開番号】ＷＯ２００８／１１０８４６
【国際公開日】平成２０年９月１８日（２００８．９．１８）
【出願人】（５０４１６２１１０）アステックス、セラピューティックス、リミテッド (45)
【氏名又は名称原語表記】ＡＳＴＥＸ　ＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣＳ　ＬＩＭＩＴＥＤ
【出願人】（５０４１３２０２１）ジ・インスティチュート・オブ・キャンサー・リサーチ：ロイヤル・キャンサー・ホスピタル (16)
【出願人】（５９８１７６５６９）キャンサー・リサーチ・テクノロジー・リミテッド (57)
【氏名又は名称原語表記】ＣＡＮＣＥＲ　ＲＥＳＥＡＲＣＨ　ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ　ＬＩＭＩＴＥＤ
【Ｆターム（参考）】