反応性塩素化合物、その誘導体、アニオンおよび塩、その製造方法およびその使用
【課題】普通の技術的な医薬および殺菌剤用途分野と同様に、例えば組織再生のため、創傷の治癒のためおよび感染に対する防御のためまたは免疫反応を高めるための薬剤としての、例えば静脈内投与のような局所的および全身的な治療用薬剤として製剤する可能性をも提供する酸化剤を調製する。
【解決手段】二塩素酸などの反応性の塩素化合物、中間生成物ペルオキソ塩素酸およびペルオキソ亜塩素酸、ならびにそれらそれぞれの誘導体、アニオンおよび／または塩の調製を通じて果たし得る。
【解決手段】二塩素酸などの反応性の塩素化合物、中間生成物ペルオキソ塩素酸およびペルオキソ亜塩素酸、ならびにそれらそれぞれの誘導体、アニオンおよび／または塩の調製を通じて果たし得る。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、二塩素酸、中間生成物、ペルオキソ塩素酸およびペルオキソ亜塩素酸などの反応性塩素化合物ならびにそれらの個々の誘導体、アニオンおよび／または塩に関する。本発明はさらに、これらの化合物の製造方法ならびに医薬品分野、その中でも特に医療においては薬および殺菌剤としての、化粧品および薬効療法分野においては組織適合性脱臭剤としての、食料品の処理および技術分野では、特に食品および飲料の保存において漂白剤としておよび飲料水の殺菌のための、農業においては植物および果実の抗菌処理に、工業化学においておよび廃ガス浄化のための酸化剤としてのその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
酸化剤には、工業化学において、衛生および食品保存において、化粧品において、また製薬上の使用においても広い範囲の用途がある。
【０００３】
Ｐｏｌｌｙ Ｍａｔｚｉｎｇｅｒによれば（Ｐｏｌｌｙ Ｍａｔｚｉｎｇｅｒ：“Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ，Ｄａｎｇｅｒ，ａｎｄ ｔｈｅ Ｅｘｔｅｎｄｅｄ Ｆａｍｉｌｙ”ｉｎ Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９４，１２）、攻撃、即ち、大量の放射線の影響、毒性物質、寄生虫、細菌またはウイルス感染体、溶解、非アポトーシス効果などのために死にかけている細胞は、危険シグナルを放つという。生体の自己防衛機能は、実際の抗原シグナルと共に抗原提示細胞（例えば、マクロファージ）からの非特異性共刺激をも必要とし、自己防衛機能が最適の臨床的効果を持ちうるためには、これらのシグナルは持続しなければならない。
【０００４】
激しい非アポトーシス性細胞死の間は、食細胞（いわゆるミクロファージおよびマクロファージ）が細胞残がいの処分を受け持つ。この残がい処分の過程で酸化に有効な酸素代謝物が放出される。過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）は、これらの物質のうちで最もよく知られているものである。インビトロの試験は、Ｈ２Ｏ２がマイクロモル範囲で、転写因子ＨＦ−カッパーＢの活性化を介してリンパ球の免疫調節を導きうることを示している（Ｒ.Ｓｃｈｒｅｃｋ ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ ＥＭＢＯ Ｊｏｕｒｎａｌ １０(８)，２２４７−５８(１９９１)、Ｍ．Ｌｏｓ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５，１５９−６５（１９９５））。Ａｖｒａｈａｍ Ｎｏｖｏｇｒｏｄｓｋｙの作業グループは、ある種の酸化剤（Ｂｏｗｅｒｓ Ｗ.Ｅ.：“Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ｗｉｔｈ Ｐｅｒｉｏｄａｔｅ ｏｒ Ｎｅｕｒａｍｉｎｉｄａｓｅ ｐｌｕｓ Ｇａｌａｃｔｏｓｅ Ｏｘｉｄａｓｅ−ＮＡＧＯ”ｐ．１０５−１０９，Ｒｅｖｉｅｗ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ Ｐａｒｔ Ｋ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ Ｖｏｌ.１５０，１９８７）が、他の効果もある中で、リンパ球培地中にマクロファージが同時に存在する場合には、抗原刺激に起因するリンパ球増殖による共分裂促進によって体内そのもので形成されるＨ２Ｏ２を増加させもすることをインビトロで最初に実証した（Ｓｔｅｎｚｅｌ Ｋ.Ｈ.，Ｒｕｂｉｎ Ａ.Ｌ.，Ｎｏｖｏｇｒｏｄｓｋｙ Ａ．：“Ｍｉｔｏｇｅｎｉｃ ａｎｄ Ｃｏｍｉｔｏｇｅｎｉｃ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ Ｈｅｍｉｎ．”Ｊ.Ｉｍｍｕｎｏｌ.１２７,６：２４６９−２４７３ ｅｔ ｉｂｉｄ.ｃｉｔ.ｒｅｆ.）。酸化に有効な酸素代謝物が十分な量で体内にて形成されない場合には、免疫反応は不完全であるか、あるいはまったく起こらないことさえある。したがって寛容または病理学的アネルギーに至る。この代謝物が、過剰にまたは不釣合いに長い時間にわたって生成すると、慢性の炎症および組織の傷跡が形成される。
【０００５】
これらの知見を得た結果、特に身体の損傷が完全に治癒し、感染体が完全に除去される前に、内因性の形成が不十分であるかまたは低下するような臨床的状況では、酸化に有効な酸素化合物が治療効果を有するものと想定することができる。特に治療上の成功が期待できるのは、細胞が確かに感染の影響を受けてはいるが破壊はされておらず、したがって「危険シグナル」を発していないケースである。例としては、ハンセン病菌および結核菌の感染があり、同様にヘルペスウイルスおよびエイズ（ＨＩＶ）ウイルスによる感染もある。
【０００６】
早くも１９０６年には、膿漿慢性創傷の治療において重クロム酸カリウムの臨床的使用に成功したという報告が発表されている（Ｆｅｎｗｉｃｋ,Ｊ.：“Ｔｈｅ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ ｂｙ ｔｈｅ Ｕｓｅ ｏｆ Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ Ｂｉｃｈｒｏｍａｔｅ”，Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ，Ｍａｒｃｈ ６ｔｈ，１９０９，５８９−５９１）。
【０００７】
そうこうするうちに出された多くの刊行物が、体内で生理学的に形成された過酸化水素も−インビボではさらに短寿命のペルオキソ亜硝酸塩も同じく生理学的窒素酸化物と過酸化水素から形成されうるがこれと同様に−傷の治癒効果を明らかに示し、それによって積極的な免疫調節が根本的な役割を果たすことを示している。例えば、欧州出願第０３９０８２７は、ヒト成長因子による同質遺伝子的な皮内細胞増殖を、過酸化水素の注射を使用して増加させる方法を記載している。このようなインターロイキン２の成長因子効果の共分裂促進的な増加は、過ヨウ素酸塩についても１９８７年に記載されている（Ｗａｎｇ Ｊ．ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １９８７，８３：１０１６−１０２３）。
【０００８】
（共）分裂促進的酸化剤には許容できない副作用、例えば、重クロム酸塩については、現在では認識されているクロム酸化物の発ガン効果、過ヨウ素酸塩については、ヨウ素過敏性の毒性作用がある。したがって、それらの臨床的使用は「養子移入」のような苦労をして行わなければならない。即ち、養子移入は、先に引用したＪ．Ｗａｎｇらの研究で記載されているように、血液細胞を取り出し、インビトロで処理し、それからインビボに戻す。ＮＡＧＯについての副作用は、異種タンパク感作である。Ｈ２Ｏ２については、毒性の酸素ラジカルの形成である。ここでも、それらの薬剤としての使用に関する技術上の問題もあり、例えばＨ２Ｏ２については、希薄な水溶液では貯蔵寿命が短いこと、大量の酸素ガス放出に伴うカタラーゼの不安定性である。酸化されたユビキノン誘導体についての問題は、医薬品製造上の問題および限られた生物学的利用度である。
【０００９】
したがってこれまでは、（共）分裂促進的酸化剤の実験的に実証された免疫薬理学的作用を、臨床業務において組織の再生／創傷の治癒、感染耐性および免疫反応の強化に移し替えることはできなかった。臨床業務では、局所的な適用に加えて全身的な治療も、普通は静脈投与の形で、望ましい。
【００１０】
Ｔｈｅｏ Ｇｉｌｂｅｒｔ Ｈｉｎｚｅ（米国出願第２００３０１３３８７８号、“Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ ａｎｄ ａ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｓｕｃｈ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ”）（特許文献１）は、ＮａＣｌまたはＫＣｌ２（恐らくこの化学式の文字は印刷の誤りであろう）の水溶液をｐＨ６．５〜７．５における電気化学的酸化によって処理した。他のイオンと共に、Ｃｌ２Ｏ６２−イオンだけが存在し得たと推測されたが、当時このイオンは前記発明だけにしか記載されたことはなかった。このダイマーは、塩素原子を＋３および＋５の原子価状態で含む。
【００１１】
この特許文献は、他にもいくつかの塩素−酸素調製物の記載を含んでおり、工業技術で漂白剤および脱臭剤として酸化剤の役割を果たすなど、特に技術分野で使用されているが、それらはまた、準医薬用途では皮膚用およびヘアケア用化粧品などで、家庭の清掃用として、衛生分野では公衆衛生用ならびに／または表面（米国特許第３１２３５２１号）および／もしくは創傷（米国特許第２７０１７８１号、米国特許第４０８４７４７号、ＥＰ−Ａ−０７４４８９５）の殺菌剤として、保存剤としてチーズに（米国特許第３１４７１２４号）および飲料水や浴用水の調整用にも（米国特許第４２９６１０３号、ＤＥ−Ａ−４４０５８００、ＤＥ−Ａ−１９５１８４６４、ＷＯ９６／３３９３７、ＷＯ９７／０６０９８）推奨されている。米国特許第４２９６１０３号、ＥＰ−Ａ−０１３６３０９、米国特許第４５０７２８５号およびＥＰ−Ａ−０２５５１４５は、塩素―酸素調製物の医療用途を記載している。
【００１２】
ＷＯ００／４８９４０は、塩素が原子価５を有する式ＨＯＯＣｌＯ２のクロロヒドロペルオキシド調製物の記載を含んでいる。このヒドロペルオキシドは、水性環境でアニオンＯ２ＣｌＯＯ−を与える酸としての挙動をする。したがって、これはペルオキソ塩素酸と呼ばれ、そのアニオンはペルオキソ塩素酸塩と呼ばれる。２個のペルオキソ塩素酸イオンを合わせると、酸素分子１個を分離して、１個のペルオキソ基と原子価の異なる２個の塩素原子を有するペルオキソ塩素酸塩の誘導体をもたらすことができることが報告されている。このイオンには経験式（Ｃｌ２Ｏ６）２−があてがわれている。
【００１３】
安定なペルオキソ塩素酸およびその安定な塩またはアニオンを溶液中で作成することが可能であることが開示されている。例えば、これらの化合物は、操作をペルオキソ塩素酸（ＨＯＯＣｌＯ２）のｐＫｓ値に等しいかまたはそれを超えるｐＨ値で行えば、二酸化塩素と過酸化水素の反応によって水溶液中で得られる。ｐＨ値は６．５以上が好ましく、１０〜１２の範囲のｐＨが特に好ましい。
【００１４】
このように、ＷＯ００／４８９４０（特許文献２）は、ペルオキソ塩素酸またはその塩、水溶液中のペルオキソ塩素酸およびその塩またはアニオン、水溶液中の混合原子価の塩素原子を有するペルオキソ塩素酸塩のオリゴマー状誘導体およびその塩またはアニオン、また溶液中の酸、アニオンとしてまたは塩としての二酸化炭素付加物も開示している。
【００１５】
一方、ＷＯ００／４８９４０の明細書によれば、ペルオキソ塩素酸塩の結晶性の金属塩の単離は、首尾よくは行えないことが分かっている。
【００１６】
ＷＯ００／４８９４０の明細書に従って作成された調製物中のペルオキソ塩素酸塩の濃度が低いために、脱酸素ダイマーは限られた程度にしか調製できなかった。
【００１７】
ＳｖｅｎｓｓｏｎおよびＮｅｌａｎｄｅｒは、１７Ｋ（−２５６．１５℃）という低温でのＨＯＯＣｌＯ２の調製をＪ．Ｐｈｙｓ．Ｃｈｅｍ．Ａ １９９９，１０３，４４３２−４４３７に発表している。
【００１８】
したがって、すべての発表されている塩素−酸素調製物は、最新の薬剤承認の要求基準を満たさない。これらの基準には、調製の薬物動力学が、医薬品として標準化されるべきいわゆる活性物質として化学的に定義された化合物に対して割り付け可能でなければならないとはっきり記載されている。このことは、均質な薬剤の品質を保証するためにも必要である。
【００１９】
ＷＯ００／４８９４０の本質的に良い塩素−酸素化合物、および特にそこで定義されている脱酸素ダイマーは、これまでのところ、限られた程度にしか製造することができない。したがって、市販品を探索することは不可能であると思われる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２０】
【特許文献１】米国特許出願公開第２００３／０１３３８７８号明細書
【特許文献２】国際公開第００／４８９４０号パンフレット
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２１】
したがって、本発明の１つの目的は、前記の不都合無しに酸化剤を調製することである。このような酸化剤は、普通の技術的な医薬および殺菌剤用途分野と同様に、例えば組織再生のため、創傷の治癒のためおよび感染に対する防御のためまたは免疫反応を高めるための薬剤としての、例えば静脈内投与のような局所的および全身的な治療用薬剤として製剤する可能性をも提供するはずである。さらに、それは最新の薬剤承認手順の要件を満たすはずである。
【００２２】
したがって、特に、さらに改良された酸化剤およびそれを製造する改良された方法および用途を用意することが本発明の１つの目的である。
【課題を解決するための手段】
【００２３】
この目的は、具体的には挙げないが、最初に記載した技術の状況から明らかなその他の目的と同様に、特許請求の範囲で規定する本発明の実施形態によって達成される。
【００２４】
意外にも、この目的を、二塩素酸などの反応性の塩素化合物、中間生成物ペルオキソ塩素酸およびペルオキソ亜塩素酸、ならびにそれらそれぞれの誘導体、アニオンおよび／または塩の調製を通じて果たし得ることが明らかとなった。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】実施例３に示した細胞培養実験（線維芽細胞の増殖刺激）の結果を示す。
【図２】ペルオキソ酸イオンの濃度を判定するための、溶液中に存在するペルオキソ酸（二塩素酸、ペルオキソ亜塩素酸）のアニオンの滴定を示す。
【図３】図２から誘導した、正確な濃度決定をもたらす、滴定曲線を示す。
【図４】ＵＶスペクトルの例である。
【図５】ＵＶスペクトルの例である。
【図６】生成物溶液の質量スペクトルを示す。
【図７】イオンクロマトグラフィーの結果を示す。
【図８】３種の細菌株、大腸菌、黄色ブドウ球菌および緑膿菌についての崩壊速度動力学を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
本発明によるこの新規な二塩素酸を以下の表１に示す。これらの二塩素酸の中で、酸Ｎｏ．１からＮｏ．３は本発明の特に好ましい実施形態である。
【００２７】
【表１】
【００２８】
既に原子価ペアが先に＋３／＋５（ＷＯ００／４８９４０）および＋４／＋４（Ｂｏｇｄａｎｃｈｉｋｏｖら）と記載されたのと同様に、本発明のＮｏ．１からＮｏ．３による、塩素の原子価が＋６／＋４および＋５／＋５である二塩素酸が初めて本発明の方法によって製造された。酸Ｎｏ．４のアニオンはＷＯ００／４８９４０に記載されている。しかし、そこに記載されている製造方法は、機能しない。
【００２９】
ＷＯ００／４８９４０には、脱酸素ダイマーは２分子の反応性塩素−酸素種（ペルオキソ塩素酸塩）から次の反応を経て形成されるという仮定が置かれている。
【００３０】
２−ＯＯＣｌＯ２ → Ｃｌ２Ｏ６２−＋Ｏ２
ここで、塩素原子は酸化数＋３および＋５で存在している。しかし、薬事法の観点からは望ましいＷＯ００／４８９４０の実施例６による安定な化合物の製造は、首尾よくは行えない。
【００３１】
次式によるペルオキソ塩素酸塩２分子からダイマー型の誘導体の形成は、
２−ＯＯＣｌＯ２ → Ｃｌ２Ｏ６２−＋Ｏ２
即ち、非常に高濃度のペルオキソ塩素酸塩（およそ２〜３モル／Ｌ）の場合だけにしか期待できない。しかし、この化合物の不安定性のためにそのような高濃度は実際には不可能である。
【００３２】
しかし、本発明に導いた試験は、ペルオキソ塩素酸イオンＯ２ＣｌＯＯ−と亜塩素酸イオン（ＣｌＯ２−）の反応が、意外にも直接さまざまな「ダイマー型」Ｃｌ２Ｏ６２−種に導くことを示した。
【００３３】
Ｏ２ＣｌＯＯ−＋ＣｌＯ２− → Ｃｌ２Ｏ６２−−＞−＞および異性体
さらに意外にも、本発明による方法の助けを得て、以前には知られていなかったペルオキソ亜塩素酸イオンＯ＝ＣｌＯＯ−およびそれから誘導されるペルオキソ亜塩素酸Ｏ＝ＣｌＯＯＨの調製が、特に本発明による亜塩素酸塩を含む溶液中で成功した。
【００３４】
これらの塩素化合物は、以前には記載されたことがない。
【００３５】
特に中性点の周辺で、二塩素種Ｃｌ２Ｏ６２−の塩素酸イオンＣｌＯ３−とペルオキソ亜塩素酸イオンＯＣｌＯＯ−への解離は、明らかに、記載されている二塩素種の分子内レドックス反応で上表の化合物１〜４に至る反応に対して競争的な反応である。
【００３６】
本開示においてアニオンに言及する限りでは、必要な対イオンの存在も（特に溶液中では）同じく含まれている。「アニオン」という用語は特に、溶液中で、ジ塩素酸塩はプロトン化した酸と比較してより安定であることを強調するために使われている。しかし、「アニオン」という用語は、本発明によれば、また文脈によっては、酸の代わりに使うこともできる。「酸」という用語は同じく「アニオン」の代わりに使うことができる。
【００３７】
本発明は、二塩素酸、ならびにそれらの誘導体、アニオンおよび／もしくは塩、ならびに／または本発明によるペルオキソ亜塩素酸、ならびにその誘導体、アニオンおよび／もしくは塩を含む調製物の製造方法にも関する。
【００３８】
以下のステップを実行すれば驚くほど簡単に、本発明による二塩素酸およびペルオキソ亜塩素酸イオンを製造することができる。
【００３９】
（ａ）二酸化塩素を、過酸化水素または別のヒドロペルオキシドまたはペルオキシドの水溶液または水含有溶液と、ｐＨ値≧６、５で反応させ、
（ｂ）酸を加えてｐＨ値を下げ、
（ｃ）ガス状の遊離の反応性塩素化合物、好ましくはプロトン化したペルオキソ塩素化合物を、冷却したガスで排出し、アルカリ性溶液中に集め、
（ｄ）集めた遊離の反応性の塩素化合物、好ましくはペルオキソ塩素化合物を、ｐＨ６〜８、好ましくは約７で、〜１００倍過剰、好ましくは〜１０倍過剰の亜塩素酸塩と共にインキュベートする。
【００４０】
本発明の二塩素酸およびペルオキソ亜塩素酸、および生理学的なｐＨ値で存在する、したがって、本発明によるイオンもペルオキソ塩素酸塩および亜塩素酸塩と共に混合物として溶液中でも存在しうる。したがって、本発明による二塩素酸、ペルオキソ亜塩素酸、ペルオキソ塩素酸塩および亜塩素酸塩を含むこのような溶液は、本発明の特に好ましい実験的実施例の１つとなり、特許請求の範囲の請求項２によって保護される。
【００４１】
対照的に、ＷＯ００／４８９４０では、本発明による二塩素酸およびペルオキソ亜塩素酸は存在せず、塩素を含まない溶液が生成するか、または亜塩素酸塩は含むが、実際上亜塩素酸塩だけしか存在しないので、医薬品用途には適さない調製物が生成した。
【００４２】
大量の亜塩素酸塩は本発明の二塩素酸の医薬品分野での使用に対しては有害であるので、本発明の最終生成溶液は、溶液の全重量に関する重量％で２０倍を超える過剰、好ましくは５倍を超える過剰、さらに好ましくは３倍を超える過剰の亜塩素酸塩を含まなければ特に有利である。
【００４３】
特に、本発明による二塩素酸およびペルオキソ亜塩素酸は、使用したＣｌＯ２の重量％に関して約０．１〜２０重量％、好ましくは３〜５重量％の容積でこの溶液中に存在する。定性的な検出はラマン分光分析を使用して首尾よくできる。この種の分光分析は、当業者には自明のことである。得られるスペクトル図は、ＷＯ００／４８９４０に記載の方法で得たものとは明瞭に異なる。定量的な比率の決定は、滴定を使用して行うことができる。
【００４４】
さらなる定性的な検出がヘム鉄との反応を使用して可能である。本発明の二塩素酸の存在下では、ソレットバンド強度の一時的な変化のコースが、ＷＯ００／４８９４０に記載の方法で得られた溶液の結果とは明瞭に異なる。
【００４５】
本発明による方法は、二酸化塩素と過酸化水素の水溶液または水を含む過酸化水素（または他のヒドロペルオキシドまたは例えば、過炭酸塩、過ホウ酸塩、過酸化水素の尿素付加物などの当業者に知られているペルオキシド）の６．５以上のｐＨ値、好ましくはｐＨ１０〜１２における反応からなる。好ましくは、ｐＨ値は一定のレベルに保たなければならない。
【００４６】
さらに、意外にも、中間生成物として生じるペルオキソ塩素酸、ならびにそのアニオンおよび誘導体も、二酸化塩素とペルオキソ基を含む他の酸化剤の反応によって得られることが示された。
【００４７】
反応は水性環境または水を含む環境で行うことができる。例えば、水と同様に、メタノール、エタノールまたはこれらの混合物などのアルコールまたはアルカノールなどの水と混ざり合う溶剤も存在することができる。
【００４８】
代替的に、最初に他の塩素酸化物を使うこともできる。例えば、一酸化塩素も、好ましくはダイマー形態（Ｃｌ２Ｏ２）で、ヒドロペルオキシド（好ましくは過酸化水素）によって所望の生成物に転化することができる。反応は二酸化塩素について述べたとおり同じｐＨ範囲で首尾よく行える。
【００４９】
反応温度は、例えば約５０℃までは上げることができ、純粋に水系では最低温度は好ましくは約０℃でなければならない。しかし、二酸化塩素は＋１０℃未満で操作してはならない。二酸化塩素ガスは、これより低い温度では液化して爆燃が起こる恐れがあるからである。加えられた有機溶媒および／または高濃度の活性試薬が存在する場合は、より低い温度、即ち、水の凍結温度未満の温度が使用できる。好ましくは、室温で操作する。
【００５０】
反応に必要な二酸化塩素は、当業者には入手可能であり、通常の方法で製造することもできる。例えばこれは亜塩素酸塩と酸（例えば亜塩素酸ナトリウムと硫酸）の反応によってまたは塩素酸塩の、例えば亜硫酸を用いる、還元によって製造することができる。
【００５１】
こうして得られた二酸化塩素は、通常の方法で、必要とあれば痕跡の塩素を除去した後で、遊離させることができる（Ｇｒａｎｓｔｒｏｍ，Ｍａｒｖｉｎ Ｌ．：ａｎｄ Ｌｅｅ，Ｇ．Ｆｒｅｄ，Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｗａｔｅｒ Ｗｏｒｋｓ Ａｓｓｏｃ．５０，１４５３−１４６６（１９５８））。
【００５２】
ＣｌＯ２を作製するために使用した亜塩素酸塩がカーボネートで汚染している場合は、ＣｌＯ２はＣＯ２および／またはＷＯ００／４８９４０で記載されている炭酸付加物で汚染される。二酸化炭素を吸収するために、二酸化塩素と二酸化炭素を含むガス流は、苛性アルカリを満たした洗浄ボトルに通さなければならない。短い接触時間の間にＣＯ２は苛性アルカリによって吸収され、ＣｌＯ２は吸収されない。しかし、使用する亜塩素酸ナトリウムの分別晶析によってカーボネート汚染を除去することが好ましい。ペルオキソ塩素酸塩のカーボネートによる汚染は、ラマンスペクトルによって容易に認知することができる。１０５１ｃｍ−1の急峻なバンドに代わって、二重のバンド１０６９ｃｍ−1（広幅）と、本発明の範囲内の、重要なバンドが１０５１ｃｍ−1（急峻）に得られる。
【００５３】
二酸化塩素は、窒素などの不活性ガスまたはアルゴンなどの希ガスで運ぶことができるが、しかし、ペルオキソ化合物または過酸化水素もしくは過ホウ酸塩などのヒドロペルオキシドを用いる反応については空気または酸素も使用することができる。例えば、第１の反応器で二酸化塩素を作り、次にそれを上記のガスまたはそれらの混合物を用いて水溶液中または水を含む溶液中のペルオキソ化合物（ペルオキシドまたはヒドロペルオキシド）が入っている第２の反応器に導入することができる。
【００５４】
反応混合物のｐＨ値は、塩基を添加して６．５またはそれ以上に保つ。ｐＨ値は、一定に保つことが好ましい。これは、手動でもまたは「ｐＨ自動調節器」を使用してでも行うことができる。
【００５５】
普通の有機または無機の塩基、例えば苛性ソーダ溶液または苛性カリ溶液またはアルカリ土類水酸化物およびアンモニアなどの塩基、あるいは窒素含有塩基などの有機塩基などを使用することができる。さらに、第四級アンモニウム塩からの水酸化物、特にアルキル、トリアルキル、またはテトラアルキルアンモニウム水酸化物、あるいは水酸化亜鉛も使用することができる。
【００５６】
反応混合物中のヒドロペルオキシド含有量は、例えば塩酸などの酸を用いた電位差滴定を使用して測定することができる。
【００５７】
前記の手順によって得られた溶液は、作られた形態またはこれの変形の両方で使用することができる。例えば過剰の過酸化水素は、普通の方法例えば二酸化マンガンなどの重金属化合物を用いて除去することができる。他の酸化剤の余剰分は類似の手段で除去することができる。
【００５８】
二酸化塩素（ＣｌＯ２）の余剰分はＨ２Ｏ２を用いて除去することができる。これは可能な限りすぐに行うべきであり、そうしないと
２ＣｌＯ２＋２ＯＨ−−＞ＣｌＯ２−＋ＣｌＯ３−＋Ｈ２Ｏ
を経て、邪魔になる５価の塩素を有するＣｌＯ３−（塩素酸塩）が形成される。しかしながら、塩素酸塩を含有する生成物は好ましくない。
【００５９】
反応生成物の貯蔵寿命を改善するためには、高いｐＨ値、例えばｐＨ１０以上での貯蔵が適している。このｐＨ値の調節は、先に製造手順の中で記載したような、適当な塩基を用いて行うことができる。
【００６０】
二塩素酸および／またはこれらの酸の塩を含有する溶液の製造では、意外にも、遊離の酸ＨＯＯＣｌＯ、二塩素酸またはペルオキソ塩素酸を、亜塩素酸イオンを含有している混合物から、希ガス例えばアルゴンなどの不活性ガスを用いて、または窒素を用いて、または酸素ガスまたは空気を用いて、ｐＨを６未満例えばｐＨ５以下に下げながら、排出して集めることが可能である。意外にも、ガス流の距離を極めて短く保ち、かつ流れを冷却すると、収量を莫大に増加させうることが実証された。
【００６１】
前記製造手順のステップ（ａ）の開始後に形成される混合物は、始めは、非常に高濃度の亜塩素酸イオン（ＣｌＯ２−）を含有している。しかし、この亜塩素酸塩含有量は、ガス流で塩基性溶液中を「通過」することによって大幅に減少する。この方法では、すべての種類の塩素酸はプロトン化した（中性の）形態の揮発性化合物として排出される。しかし、これらは非常に不安定である。受け入れる容器内には塩基が存在し、容器を通過する塩素酸は脱プロトンされ、アニオンが形成される。溶液をｐＨ６〜８に調節した後で、かつ所定の容積の亜塩素酸塩が−例えば塩化ナトリウムの形態で−加えられた後で、二塩素酸のアニオンが形成される。
【００６２】
収集は、例えばアルカリ金属塩基、アルカリ土類金属塩基または亜鉛塩基またはアンモニアなどの窒素含有塩基または有機アミンなどの塩基中で行うことができる。ガス状の酸をコールドトラップ中で凍結析出（例えば−１００〜−１９０℃で）させることもできる。
【００６３】
対イオンは、あらゆる金属カチオンおよび窒素含有塩基、特に第四級アンモニウ塩からの有機カチオンでよい。最も適当なカチオンの選択は、個々の使用目的から決定することができる。医薬品用途には、アルカリ土類金属またはアルカリ金属、好ましくはＮａ＋またはＫ＋またはＺｎ２＋、が最も適当である。技術的な用途では、窒素含有塩基からのカチオン、特にトリアルキルアンモニウムカチオンなどのアルキルアンモニウムカチオンまたは特に第四級アンモニウムカチオンなどの有機カチオンが使用可能である。
【００６４】
本発明による酸および塩は、暗所で貯蔵し、かつそれらからｐＨ値の高い、例えば１０、１１、または１２以上のｐＨ値、特にｐＨ１０〜１３の範囲の水溶液を作製することが長い貯蔵寿命を確実にするために適切であり、かつ好ましい。必要に応じて、このような溶液から遊離の酸を先に記載した方法で再生し、必要とあれば所望のｐＨ値の溶液または塩に変えることができる。
【００６５】
本発明による二塩素酸、それらの誘導体またはアニオンおよびそれらの塩は、そのままでも使用できるが、特には水溶液または水を含む溶液中でも、酸化剤としてたいへんさまざまな医療、美容、技術および農業の目的に使用することができる。
【００６６】
可能性のある試験装置の例が、最初に挙げた刊行物および特許文献に挙げられており、これらをこの点において参照により本明細書に含める。
【００６７】
医薬製剤（薬剤）としての使用、またはあらゆる可能な方法で、特に局所的にもまた非経口的にも投与可能な薬剤製造用の使用に用途の可能性がある。この薬剤は、普通の方法で、薬剤として十分に耐容できる普通の賦形剤および希釈剤と共に製剤することができる。
【００６８】
本発明はそれぞれ本発明による二塩素酸またはペルオキソ亜塩素酸、それらのアニオン、誘導体または塩を活性物質として組み入れた医薬品であって、特に導入部で言及した病気を治療するために使用することができる医薬品にも関する。特に優先的なものは、鼻、口腔、直腸および特に経口投与（好ましくは胃酸を避ける、例えばカプセルまたは被覆製剤などの胃液耐性製剤）などの腸内投与のための製剤、ならびに特に局所または全身的治療のための製剤例えば恒温動物、特にヒトへの静脈内、筋肉内、または皮下投与のための製剤である。この製剤は、活性物質を単独で、または好ましくは１種または複数の薬剤として適用可能な賦形剤材料と共に含む。活性物質の投与量は、治療する病気および治療される種、年齢、体重および個体の状態、個体の薬物動力学的状況および適用の方法に依存する。
【００６９】
好ましくは、腸内または特に全身的投与量（例えば注入または注射による）（最も好ましくはヒトへの）は、０．０１〜１００ｐｍｏｌ／ｋｇ、特には０．１〜１００ｐｍｏｌの範囲にある。したがって、例えば体重７０ｋｇの人は１ｍｇ〜１ｇ／日、特に８．５ｍｇ〜８５０ｍｇ／日を１回または数回のより少ない投与量に分割して投与を受けなければならない。局所的な適用については、好ましい投与量の範囲は０．１〜１０、特には０．５〜５ｍＬ／１００ｃｍ２の０．１〜１０ｍＭ溶液である（表面積の大小、直接塗布するか、例えば含浸ガーゼで包帯するかに応じて多少がある）。
【００７０】
したがって、本発明は、本明細書で記載する病理的状態の予防処置および／または治療処置のための、特に組織再生の強化、免疫調節、予防注射反応または放射線感作の改善が示唆され成功している疾患の予防処置および／または治療処置のための、あるいは、特に温血動物の傷の治療におけるこれらの効果の１つまたは複数のための、本発明による二塩素酸またはペルオキソ亜塩素酸、それぞれのアニオン、誘導体または塩の、温血動物、例えばそのような処置を必要としているヒトの前記の疾患に対して有効な投与量での投与を組み入れる方法に関する。
【００７１】
本発明は、本明細書で記載する病理的状態の予防処置のための、および特に治療処置のための、好ましくは組織再生の強化、免疫調節、予防注射反応または放射線感作の改善が示唆され成功している疾患の予防処置および／または治療処置のための、あるいは、特に傷の治療、好ましくはそのような状態に罹患している温血動物の傷の治療におけるこれらの効果の１つまたは複数のための薬剤組成物であって、本発明による二塩素酸またはペルオキソ亜塩素酸、それぞれのアニオン、誘導体または塩の、前述の疾患に対して予防上または特に治療上有効な投与量および１種または複数の薬剤として適用可能な賦形剤を含む薬剤組成物にも関する。
【００７２】
本発明は、病理学的状態の処置のための、好ましくは、組織再生の強化、免疫調節、予防注射反応または放射線感作の改善が特に温血動物の創傷の処置において示唆され成功している、特に温血動物特にヒトの予防処置および／または治療処置のための−手順であって、本発明による二塩素酸またはペルオキソ亜塩素酸、それぞれのアニオン、誘導体または塩の、温血動物、例えばそのような処置を必要としているヒトの前記の疾患に対して有効な投与量での投与を組み入れる手順にも関する。
【００７３】
本発明は、本発明による二塩素酸および／またはペルオキソ亜塩素酸、それらの誘導体アニオン、または塩の、動物またはヒトの身体の処置のための手順における使用にも関する。
【００７４】
したがって、本発明は、本発明による二塩素酸および／またはペルオキソ亜塩素酸、それらのアニオン、誘導体または塩の、好ましくは、組織再生の強化、免疫調節、予防注射反応または放射線感作の改善が特に創傷の処置において示唆され成功している、特に温血動物特にヒトの疾患の予防処置および／または治療処置のための使用にも関する。
【００７５】
本発明は、本発明による二塩素酸および／またはペルオキソ亜塩素酸、それらの誘導体アニオン、または塩の、例えばある人がシミおよび吹き出物（にきび）ができやすいか吹き出物がある場合の、皮膚の（美容上の）手入れのための使用または使用の方法にも関する。
【００７６】
単位剤形は、例えばドラジェ（糖衣錠）、錠剤、アンプル、ガラスビン（バイアル）、座薬またはカプセルである。他の剤形、特に本発明による二塩素酸および／またはペルオキソ亜塩素酸、ならびにこれらの誘導体、アニオンまたは塩の溶液用の剤形は、例えば軟膏、クリーム、ペースト、ゲル（ジェル）、フォーム、マウスウォッシュ、ドロップ、スプレーおよび類似のもの。単位剤形、例えばアンプル、錠剤またはカプセルは、好ましくは約０．０５ｇ〜約１．０ｇ、特に８．５ｍｇ〜８５０ｍｇの本発明による二塩素酸の塩、アニオンまたは誘導体を、普通の薬剤用賦形剤材料と共に含む。
【００７７】
本発明の医薬製剤は、基本的には、既知の方法、例えば従来の混合、顆粒化、被覆、溶解または凍結乾燥を使用して製造される。
【００７８】
優先的な実験的手順は、二塩素酸塩またはペルオキソ亜塩素酸および／またはその誘導体の塩の０．０５〜１Ｍ溶液で二回蒸留水中にｐＨ１０以上、好ましくは１０〜１３、特に好ましくは１２．５で溶解する。投与の直前に、この溶液を共通塩、重炭酸ナトリウムまたはカリウムおよび二回蒸留水で濃度約１〜５ｍＭの等張に希釈し、生理的ｐＨに近づける。この溶液は、全身的、好ましくは静脈内投与に適当である。
【００７９】
局所的な使用のための薬剤の優先的な製剤を作製するのに好まれる方法は、本発明の二塩素酸および／またはペルオキソ亜塩素酸またはその誘導体を、塩として二回蒸留水に、低めのミリモルまたは高めのミリモル範囲の濃度、好ましくは０．５〜５ｍＭの濃度範囲で、ｐＨ１０以上、特に１０〜１３、最も好ましくは例えばｐＨ１１．５で溶解し、溶液をグリセリンまたは共通塩または他の適当な十分に耐容される好ましくは生理学的薬剤を用いて等張に調節する。適用する前に、ＨＣｌを用いて生理学的ｐＨを整える。他の添加物も可能である。特に、薬剤のプラスチック容器への充填に関しては、貯蔵中に壁中の遷移金属が溶解して活性物質の分解触媒として働く可能性があるので、遷移金属の痕跡を中和しうるような添加物が適当である。そのような添加物の例は、エチレングリコールなどのオリゴおよびポリアルコール、デスフェリオキサミンまたはＥＤＴＡ（例えばＥＤＴＡ二ナトリウム）である。上記の方法で得た溶液は、直接傷に塗布することも可能である。
【００８０】
本発明による二塩素酸またはペルオキソ亜塩素酸のアニオンは安定であり、酸そのものは比較的速やかに分解する。したがって、ｐＨを使用して活性物質の安定化を行うことができる。耐容性を改善するために、使用の直前に活性物質溶液を緩衝希釈によりほぼ生理学的ｐＨまで下げることができる。これは薬理学的作用を身体全体に行き渡らせるためには適切であるが、それはこの作用が、従来の薬剤のように受容体−配位子相互作用に依存しないで、先に述べたように、迅速で不可逆な酸化反応に関係しているからである。この薬理学的作用は、細胞および／またはその化学的に変えられた構造が存在する限り効果を持ち続ける、即ち、活性物質が受容体から拡散した後でも停止されない。
【００８１】
病理学的状態の処置のために予防上または特に治療上における組織再生の増進が成功すると示唆された分野の例は、身体的損傷後の再生（例えば外傷性の打撲傷または裂傷、短波長放射線、放射能放射）および化学的損傷後の再生（例えばＬｏｓｔ、化学療法剤などの組織毒による）である。この分野の他の適用領域は、傷の治癒の改善−特に頑固ないわゆる「自発性」創傷−これは原発病（例えば糖尿病、血管障害、免疫抑制または老齢の結果）の結果として生じるもので、治ることはない。これらの障害のきわだった例は床擦れおよび慢性静脈瘤性潰瘍である。本明細書では、処置とは、皮膚、粘膜および肝臓、心筋または骨髄などの他の組織の創傷の処置と理解するものとする。
【００８２】
本発明による二塩素酸またはペルオキソ亜塩素酸は、規定された化合物であり、新規の薬剤承認において関連する困難はない。
【００８３】
図１は、実施例３に示した細胞培養実験（線維芽細胞の増殖刺激）の結果を示す。これらの結果は、培養物中の活性物質濃度が、亜塩素酸塩は１００μＭおよび反応性塩素（ＲＣ＝すべての二塩素酸およびペルオキソ亜塩素酸のアニオンの合計）は５０μＭで得られたものである。
【００８４】
ここでは、本発明による二塩素酸と亜塩素酸塩とを両方含む試行溶液の増殖刺激効果２０〜２５％は、細胞培養物中で対象との比較において、顕著に高いことが明瞭に認識可能である。
【００８５】
ＲＣまたは亜塩素酸塩だけを含む溶液の適用は、線維芽細胞のいかなる成長挙動に対しても対照はいかに効果がないかを正確に示す。
【００８６】
図２は、ペルオキソ酸イオンの濃度を判定するための、溶液中に存在するペルオキソ酸（二塩素酸、ペルオキソ亜塩素酸）のアニオンの滴定を示す。図３には、図２から誘導した、正確な濃度決定をもたらす、滴定曲線を示す。
【００８７】
図４および図５は、ＵＶスペクトルの例である。このＵＶ吸収測定は、亜塩素酸塩濃度の決定を可能にし、存在するかもしれない溶解した遊離の二酸化塩素が少しでもあれば示す。
【００８８】
図６は、生成物溶液の質量スペクトルを示し、ペルオキソ亜塩素酸塩（質量８３．２）および二塩素酸の・BR>Aニオン（質量１８９）が確認された。
【００８９】
図７では、イオンクロマトグラフィーの結果を示す。参照物質の保持時間は、実施例４のパート５に提示する。二塩素酸は１９．７７分で検出され、図６の質量スペクトルにおける８２．３のピークの原因としての塩素酸塩を除く塩素酸塩（ＣｌＯ３−）は測定されなかった。
【００９０】
図８は、３種の細菌株、大腸菌、黄色ブドウ球菌および緑膿菌についての崩壊速度動力学を示す。生成物溶液を用いると、３菌株すべてでＤＩＮ５８９４０による殺菌作用が得られた。
【実施例】
【００９１】
以下の実施例は、本発明についてさらに詳細を提供するが、これらは決して制限的な意味に理解してはならない。
【００９２】
実施例１：二塩素酸の調製
無水亜塩素酸ナトリウム１００ｇの水２００ｍＬ中溶液に、撹拌しながら硫酸（９６％）を注意深く滴下する。形成される二酸化塩素を、強いガス流（Ａｒ、Ｎ２、またはＯ２またはＣＯ２を含まない空気）を使用して排出する。ガス流はＣｌＯ２含有量が５％を超えないほど強くなければならない（爆発の危険性）。元素状塩素を捕捉するために、ＣｌＯ２含有ガス流を互いに接続された３個の洗浄ボトルに導入し、それぞれのボトルは水３５ｍＬ中に３０％過酸化水素を入れてあらかじめ４Ｍ苛性ソーダ溶液を加えることによってｐＨ１２に調節した１５ｍＬの溶液中に、ｐＨ１１の２Ｍ ＮａＣｌＯ２溶液３０ｍＬを入れたもので満たしておく。過酸化水素の代わりに、過ホウ酸ナトリウムまたは過炭酸ナトリウムまたは例えば尿素のＨ２Ｏ２付加物などの他のペルオキソ化合物の溶液が使用可能である。ガスの導入中は、ガラス電極を用いてｐＨ値を制御する。反応中のｐＨ値は、４Ｍ ＮａＯＨを加えることによって１２に保つ。流入するガスの黄色の着色が続くようになれば、過酸化水素またはペルオキソ化合物は使い果たされている。１滴の酸化剤（例えばＨ２Ｏ２）溶液が続いて黄色い溶液を再び脱色する。
【００９３】
撹拌しながら、反応性塩素を含む溶液を、あらかじめ２Ｍ苛性ソーダ溶液でｐＨ４．５に調節した、クエン酸５００ｇの水３Ｌ中溶液中に滴下する。添加中は、形成する反応性塩素化合物を強いガス流（Ｎ２またはＯ２）で排出する。好ましくは、ガス流は冷却しなければならない。接続チューブは可能な限り短くなければならない。ガスは例えば一列に接続した３個の洗浄ボトル中に集め、それぞれのボトルは０．１Ｍ ＮａＯＨ５０ｍＬで満たしておく。
【００９４】
３個の洗浄ボトルの内容物を合わせてｐＨ＞１０に保つ。
【００９５】
本発明による二塩素酸を形成させるためにはｐＨを７に調節し−例えば塩酸で−、１０倍モルの過剰の塩化ナトリウムを加える。貯蔵のためには、好ましくはｐＨを、約１０を超え約１３までに調節する。
【００９６】
反応性塩素アニオンの全含有量は、０．１Ｍ ＨＣｌを用いる電位差滴定によって当業者には知られている普通の方法で測定する。
【００９７】
形成された二塩素酸は、所定量の亜塩素酸塩および他の反応性塩素化合物との混合物として溶液中に存在する。
【００９８】
二塩素酸の存在はラマン分光分析で検出される。
【００９９】
実施例２：ＭＲＣ−５線維芽細胞の培養
溶液：
ＭＲＣ５用培地
８９ｍＬ ＩＦ基礎培地
１０ｍＬ ＦＣＳ（ウシ胎児血清）
１ｍＬ Ｌ−グルタミン原液
ＩＦ基礎培地
ＩＦ基礎培地はＩＭＤＭ（Ｉｓｃｏｖｅ'ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｅｄｉｕｍ）およびＨａｍ'ｓ Ｆ１２倍地の１：１混合物である。
【０１００】
Ｌ−グルタミン原液
Ｌ−グルタミン２００ｍＭをＩＦ基礎培地に溶解し、濾過により殺菌する。
培養：
使用するＭＲＣ５細胞株を非ゼラチン被覆細胞培養皿に播種する。続く培養は、３７℃の培養器中で、ＣＯ2５容量％、水蒸気飽和雰囲気中で行う。２〜３日ごとに培地を交換し、集密に達したら細胞を分割比１：５〜１：１０で継代する。
【０１０１】
実施例３：活性物質の細胞生物学的試験
溶液：
ＭＲＣ５用培地
８９ｍＬ ＩＦ基礎培地
１０ｍＬ ＦＣＳ（ウシ胎児血清）
１ｍＬ Ｌ−グルタミン原液
ＭＲＣ−５用血清低減培地
９８ｍＬ ＩＦ基礎培地
１ｍＬ ＦＣＳ（ウシ胎児血清）
１ｍＬ Ｌ−グルタミン原液
ＰＢＳ（リン酸塩緩衝生理食塩水）
ＮａＣｌ １４０ｍＭ，ＫＣｌ ３ｍＭ、Ｎａ２ＨＰＯ４ ８ｍＭおよびＫＨ２ＰＯ４ １．５ｍＭとなる量を水に溶解し、ｐＨ値を７．２〜７．４に整える。こうして得られた溶液をオートクレーブで殺菌する。
【０１０２】
細胞溶解緩衝液
０．０４％ＳＤＳ（原液１０％ＳＤＳ）
２ｘＳＳＣ（原液２０ｘＳＳＣ）
調製済み細胞溶解緩衝液２５ｍＬを得るには、２０ｘＳＳＣ ５．０ｍＬおよび１０％ＳＤＳ １００μＬをＰＢＳで２５ｍＬまで満たす。
【０１０３】
ＤＡＰＩ溶液
２μＭ ＤＡＰＩ、ＰＢＳ中
培養：
ＭＲＣ５細胞を２４ウエル細胞培養プレートに４００細胞／ｃｍ２で播種する。続く培養は、３７℃の培養器中で、ＣＯ2５容量％、水蒸気飽和雰囲気中で行う。２４時間の予備培養後、培地を吸引除去し細胞をＰＢＳで洗浄する。次に培地を血清低減培地に変え、試験する活性物質（以下の表に概要を示す）を加える。２４、４８および７２時間後に、細胞ＤＮＡをＤＡＰＩ染色後の蛍光光度計（ＢＭＧ Ｌａｂｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社：Ｎｏｖｏｓｔａｒ）で定量化することによって細胞の増殖を測定する。このとき、サンプルの蛍光の増加が細胞の増殖に等しい。
【０１０４】
測定するプレートは、ウエル毎に１回ずつＰＢＳ ５００μＬで洗浄し、次に各ウエルにＰＢＳ ２５０μＬをいれる。溶解緩衝液を２５０μＬ加え、最低に設定したシェーカー中、室温で３０分間細胞を溶解する。続いて、ＤＡＰＩ溶液５００μＬを加え、プレートを室温でさらに１０分間放置する。
【０１０５】
プレートをＮｏｖｏｓｔａｒ中、３５５ｎｍ ｅｘ.および４６０ｎｍ ｅｍ.で測定する。通常、操作は利得調整１４００〜１６００で行う。
【０１０６】
多数の測定値は平均化し、誤差値を計算する。得られたデータはグラフで評価する。
【０１０７】
以下の原液を使用する。
【０１０８】
【表２】
【０１０９】
観察された線維芽細胞の増殖刺激
細胞培養で使用するためには、溶液をまず所与の培地で希釈する。図１に示した結果は、活性物質の濃度が、亜塩素酸塩１００μＭおよびＲＣ（＝本発明による二塩素酸およびペルオキソ亜塩素酸またはこれらのアニオンの混合物）５０μＭで得た。
【０１１０】
ここで、ＲＣおよび亜塩素酸塩の両方を含むサンプル溶液１の２０〜２５％の増殖刺激効果は、明瞭に認識することができ、対象との関係においても顕著に高い。
【０１１１】
実施例４：実施例１から得た溶液の分析測定
１）ｐＨ測定：
ｐＨ測定は、単一ガラス電極棒を用いて行う。生成物の含有量および平衡の位置はｐＨ値に依存する。
【０１１２】
２）０．１Ｍ ＨＣｌを用いる滴定
滴定は、例えば二塩素酸含有量の定量的測定、またはペルオキソ亜塩素酸含有量もしくはペルオキソ塩素酸塩含有量の定量的測定にも役立つ。
【０１１３】
生成物溶液それぞれ１ｍＬを、０．１Ｍ塩酸を用いて電位差測定によって滴定する。滴定曲線を記録する（ｐＨ対０．１Ｍ塩酸のｍＬ）。滴定曲線のｐＨ８．５と４．５の間の微分で測定された酸の消費量から、対応する酸からのアニオンの含有量が合計として決定される。
【０１１４】
通常の結果では、生成物溶液１ｍＬは、０．７２ｍＬ、０．１Ｍ ＨＣｌを消費し、したがって濃度は０．０７２Ｍとなる。
【０１１５】
図２は、記録された滴定曲線を示す。滴定曲線の微分と濃度の決定は図３に示す。
【０１１６】
３）ＵＶ−可視吸収スペクトル
ＵＶスペクトルの測定は、生成物溶液中の亜塩素酸塩含有量の定量化の役に立つ。比較のために図１と５は亜塩素酸塩を含有する生成物溶液と亜塩素酸塩を含まない生成物溶液のスペクトルを示す。亜塩素酸塩のシグナルは２６０ｎｍに見られ、この方法から生じた二酸化塩素は３６０ｎｍでシグナルを示す。
【０１１７】
吸収値は、１ｃｍの石英キュベット中で、２６０ｎｍおよび５００ｎｍにおいて測定する。ＣｌＯ２−イオン含有量は、Ａ２６０−Ａ５００の差から亜塩素酸塩に対する消滅係数ε２６０ｎｍ＝１４０Ｍ−1ｃｍ−１ａｔ２６０ｎｍの助けを借りて決定される。
【０１１８】
３６０ｎｍにおける吸収は、遊離の二酸化塩素（ε３６０ｎｍ＝１２６０Ｍ−１ｃｍ−１）を示唆する。
【０１１９】
４）質量分析
ＥＳＩ質量分析は、Ｂｒｕｋｅｒ−Ｅｓｑｕｉｒｅ−ＬＣ分光計を標準ＭＳモードで用いて行った。サンプルは、測定前にメタノールで希釈された生成物の水溶液であった。使用した走査範囲は３０ｍ／ｚ〜４００ｍ／ｚ、キャピラリー出口−６５Ｖ、スキム−１５Ｖであり、スペクトルは５０回の測定からの平均値を表した。
【０１２０】
図６において右側の矢印は、二塩素酸（総和式：Ｃｌ２Ｏ６２−）のシグナルを指しており、左側の矢印はこれまで知られていなかったペルオキソ亜塩素酸塩種（総和式：ＣｌＯ３−）を示している。
【０１２１】
５）イオンクロマトグラフィー
すべての分析は、Ｍｅｔｒｏｈｍ社のモジュール型イオンクロマトグラフィー装置を用いて行った
ポンプ： Ｍｅｔｒｏｈｍ ＩＣ ７０９ ポンプ
検出器： Ｍｅｔｒｏｈｍ ７３２ ＩＣ 検出器
サプレッサー：Ｍｅｔｒｏｈｍ ７５３ サプレッサーモジュール
カラム： Ｍｅｔｒｏｓｅｐ Ａ ２５０
流量： １ｍＬ／ｍｉｎ
注入容積： ２０μＬ
溶出剤： １ｍＭ ＮａＯＨ。
【０１２２】
各測定の直前に、既知濃度の参照物質を新たに調製した。次にこれらを上記の方法および溶出剤を用いて測定した
参照物質の保持時間：
物質 保持時間［分］
ＮａＣｌ １３．２１
ＮａＣｌＯ２ １２．３０
ＮａＣｌＯ３ １６．２６
ＮａＣｌＯ４ ４．３６
ＮａＯＨ １７．３２
Ｎａ２ＣＯ３ ２１．９８
Ｎａ２Ｃｌ２Ｏ６ １９．７７。
【０１２３】
図７：イオンクロマトグラフィーにおいて、二塩素酸は、保持時間１９．７７分で特有のピークを示す。知られている参照物質は何も検出できなかった。イオンクロマトグラフィーは、質量分析の知見を確認するものであった。塩素酸塩に特有のピークは（ＮａＣｌＯ３、保持時間１６．２６分）、実施例１によって調製された溶液中では検出することができなかった。したがって、質量分析（図６、質量８３．２）中の総和式ＣｌＯ３−のピークは新規なペルオキソ亜塩素酸またはそのアニオンだけでしかありえない。
【０１２４】
実施例５：実施例１から得た溶液の殺菌作用
ＤＩＮ５８９４０による崩壊動力学
実施例１による溶液を１：１０に希釈して使用した
試験微生物：大腸菌 ＡＴＣＣ ２５９２２、緑膿菌 ＡＴＣＣ ２７８５３、黄色ブドウ球菌 ＡＴＣＣ ２９２１３
培養液：カゼインペプトン−大豆ペプトン（欧州薬局方２．６．１２）
細菌培養時間：１８時間±１時間
結果を以下の表３および図８に示す。かくして、この溶液のＤＩＮ ５８９４０による殺菌作用が立証された。
【０１２５】
【表３】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、二塩素酸、中間生成物、ペルオキソ塩素酸およびペルオキソ亜塩素酸などの反応性塩素化合物ならびにそれらの個々の誘導体、アニオンおよび／または塩に関する。本発明はさらに、これらの化合物の製造方法ならびに医薬品分野、その中でも特に医療においては薬および殺菌剤としての、化粧品および薬効療法分野においては組織適合性脱臭剤としての、食料品の処理および技術分野では、特に食品および飲料の保存において漂白剤としておよび飲料水の殺菌のための、農業においては植物および果実の抗菌処理に、工業化学においておよび廃ガス浄化のための酸化剤としてのその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
酸化剤には、工業化学において、衛生および食品保存において、化粧品において、また製薬上の使用においても広い範囲の用途がある。
【０００３】
Ｐｏｌｌｙ Ｍａｔｚｉｎｇｅｒによれば（Ｐｏｌｌｙ Ｍａｔｚｉｎｇｅｒ：“Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ，Ｄａｎｇｅｒ，ａｎｄ ｔｈｅ Ｅｘｔｅｎｄｅｄ Ｆａｍｉｌｙ”ｉｎ Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９４，１２）、攻撃、即ち、大量の放射線の影響、毒性物質、寄生虫、細菌またはウイルス感染体、溶解、非アポトーシス効果などのために死にかけている細胞は、危険シグナルを放つという。生体の自己防衛機能は、実際の抗原シグナルと共に抗原提示細胞（例えば、マクロファージ）からの非特異性共刺激をも必要とし、自己防衛機能が最適の臨床的効果を持ちうるためには、これらのシグナルは持続しなければならない。
【０００４】
激しい非アポトーシス性細胞死の間は、食細胞（いわゆるミクロファージおよびマクロファージ）が細胞残がいの処分を受け持つ。この残がい処分の過程で酸化に有効な酸素代謝物が放出される。過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）は、これらの物質のうちで最もよく知られているものである。インビトロの試験は、Ｈ２Ｏ２がマイクロモル範囲で、転写因子ＨＦ−カッパーＢの活性化を介してリンパ球の免疫調節を導きうることを示している（Ｒ.Ｓｃｈｒｅｃｋ ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ ＥＭＢＯ Ｊｏｕｒｎａｌ １０(８)，２２４７−５８(１９９１)、Ｍ．Ｌｏｓ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５，１５９−６５（１９９５））。Ａｖｒａｈａｍ Ｎｏｖｏｇｒｏｄｓｋｙの作業グループは、ある種の酸化剤（Ｂｏｗｅｒｓ Ｗ.Ｅ.：“Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ｗｉｔｈ Ｐｅｒｉｏｄａｔｅ ｏｒ Ｎｅｕｒａｍｉｎｉｄａｓｅ ｐｌｕｓ Ｇａｌａｃｔｏｓｅ Ｏｘｉｄａｓｅ−ＮＡＧＯ”ｐ．１０５−１０９，Ｒｅｖｉｅｗ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ Ｐａｒｔ Ｋ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ Ｖｏｌ.１５０，１９８７）が、他の効果もある中で、リンパ球培地中にマクロファージが同時に存在する場合には、抗原刺激に起因するリンパ球増殖による共分裂促進によって体内そのもので形成されるＨ２Ｏ２を増加させもすることをインビトロで最初に実証した（Ｓｔｅｎｚｅｌ Ｋ.Ｈ.，Ｒｕｂｉｎ Ａ.Ｌ.，Ｎｏｖｏｇｒｏｄｓｋｙ Ａ．：“Ｍｉｔｏｇｅｎｉｃ ａｎｄ Ｃｏｍｉｔｏｇｅｎｉｃ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ Ｈｅｍｉｎ．”Ｊ.Ｉｍｍｕｎｏｌ.１２７,６：２４６９−２４７３ ｅｔ ｉｂｉｄ.ｃｉｔ.ｒｅｆ.）。酸化に有効な酸素代謝物が十分な量で体内にて形成されない場合には、免疫反応は不完全であるか、あるいはまったく起こらないことさえある。したがって寛容または病理学的アネルギーに至る。この代謝物が、過剰にまたは不釣合いに長い時間にわたって生成すると、慢性の炎症および組織の傷跡が形成される。
【０００５】
これらの知見を得た結果、特に身体の損傷が完全に治癒し、感染体が完全に除去される前に、内因性の形成が不十分であるかまたは低下するような臨床的状況では、酸化に有効な酸素化合物が治療効果を有するものと想定することができる。特に治療上の成功が期待できるのは、細胞が確かに感染の影響を受けてはいるが破壊はされておらず、したがって「危険シグナル」を発していないケースである。例としては、ハンセン病菌および結核菌の感染があり、同様にヘルペスウイルスおよびエイズ（ＨＩＶ）ウイルスによる感染もある。
【０００６】
早くも１９０６年には、膿漿慢性創傷の治療において重クロム酸カリウムの臨床的使用に成功したという報告が発表されている（Ｆｅｎｗｉｃｋ,Ｊ.：“Ｔｈｅ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ ｂｙ ｔｈｅ Ｕｓｅ ｏｆ Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ Ｂｉｃｈｒｏｍａｔｅ”，Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ，Ｍａｒｃｈ ６ｔｈ，１９０９，５８９−５９１）。
【０００７】
そうこうするうちに出された多くの刊行物が、体内で生理学的に形成された過酸化水素も−インビボではさらに短寿命のペルオキソ亜硝酸塩も同じく生理学的窒素酸化物と過酸化水素から形成されうるがこれと同様に−傷の治癒効果を明らかに示し、それによって積極的な免疫調節が根本的な役割を果たすことを示している。例えば、欧州出願第０３９０８２７は、ヒト成長因子による同質遺伝子的な皮内細胞増殖を、過酸化水素の注射を使用して増加させる方法を記載している。このようなインターロイキン２の成長因子効果の共分裂促進的な増加は、過ヨウ素酸塩についても１９８７年に記載されている（Ｗａｎｇ Ｊ．ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １９８７，８３：１０１６−１０２３）。
【０００８】
（共）分裂促進的酸化剤には許容できない副作用、例えば、重クロム酸塩については、現在では認識されているクロム酸化物の発ガン効果、過ヨウ素酸塩については、ヨウ素過敏性の毒性作用がある。したがって、それらの臨床的使用は「養子移入」のような苦労をして行わなければならない。即ち、養子移入は、先に引用したＪ．Ｗａｎｇらの研究で記載されているように、血液細胞を取り出し、インビトロで処理し、それからインビボに戻す。ＮＡＧＯについての副作用は、異種タンパク感作である。Ｈ２Ｏ２については、毒性の酸素ラジカルの形成である。ここでも、それらの薬剤としての使用に関する技術上の問題もあり、例えばＨ２Ｏ２については、希薄な水溶液では貯蔵寿命が短いこと、大量の酸素ガス放出に伴うカタラーゼの不安定性である。酸化されたユビキノン誘導体についての問題は、医薬品製造上の問題および限られた生物学的利用度である。
【０００９】
したがってこれまでは、（共）分裂促進的酸化剤の実験的に実証された免疫薬理学的作用を、臨床業務において組織の再生／創傷の治癒、感染耐性および免疫反応の強化に移し替えることはできなかった。臨床業務では、局所的な適用に加えて全身的な治療も、普通は静脈投与の形で、望ましい。
【００１０】
Ｔｈｅｏ Ｇｉｌｂｅｒｔ Ｈｉｎｚｅ（米国出願第２００３０１３３８７８号、“Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ ａｎｄ ａ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｓｕｃｈ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ”）（特許文献１）は、ＮａＣｌまたはＫＣｌ２（恐らくこの化学式の文字は印刷の誤りであろう）の水溶液をｐＨ６．５〜７．５における電気化学的酸化によって処理した。他のイオンと共に、Ｃｌ２Ｏ６２−イオンだけが存在し得たと推測されたが、当時このイオンは前記発明だけにしか記載されたことはなかった。このダイマーは、塩素原子を＋３および＋５の原子価状態で含む。
【００１１】
この特許文献は、他にもいくつかの塩素−酸素調製物の記載を含んでおり、工業技術で漂白剤および脱臭剤として酸化剤の役割を果たすなど、特に技術分野で使用されているが、それらはまた、準医薬用途では皮膚用およびヘアケア用化粧品などで、家庭の清掃用として、衛生分野では公衆衛生用ならびに／または表面（米国特許第３１２３５２１号）および／もしくは創傷（米国特許第２７０１７８１号、米国特許第４０８４７４７号、ＥＰ−Ａ−０７４４８９５）の殺菌剤として、保存剤としてチーズに（米国特許第３１４７１２４号）および飲料水や浴用水の調整用にも（米国特許第４２９６１０３号、ＤＥ−Ａ−４４０５８００、ＤＥ−Ａ−１９５１８４６４、ＷＯ９６／３３９３７、ＷＯ９７／０６０９８）推奨されている。米国特許第４２９６１０３号、ＥＰ−Ａ−０１３６３０９、米国特許第４５０７２８５号およびＥＰ−Ａ−０２５５１４５は、塩素―酸素調製物の医療用途を記載している。
【００１２】
ＷＯ００／４８９４０は、塩素が原子価５を有する式ＨＯＯＣｌＯ２のクロロヒドロペルオキシド調製物の記載を含んでいる。このヒドロペルオキシドは、水性環境でアニオンＯ２ＣｌＯＯ−を与える酸としての挙動をする。したがって、これはペルオキソ塩素酸と呼ばれ、そのアニオンはペルオキソ塩素酸塩と呼ばれる。２個のペルオキソ塩素酸イオンを合わせると、酸素分子１個を分離して、１個のペルオキソ基と原子価の異なる２個の塩素原子を有するペルオキソ塩素酸塩の誘導体をもたらすことができることが報告されている。このイオンには経験式（Ｃｌ２Ｏ６）２−があてがわれている。
【００１３】
安定なペルオキソ塩素酸およびその安定な塩またはアニオンを溶液中で作成することが可能であることが開示されている。例えば、これらの化合物は、操作をペルオキソ塩素酸（ＨＯＯＣｌＯ２）のｐＫｓ値に等しいかまたはそれを超えるｐＨ値で行えば、二酸化塩素と過酸化水素の反応によって水溶液中で得られる。ｐＨ値は６．５以上が好ましく、１０〜１２の範囲のｐＨが特に好ましい。
【００１４】
このように、ＷＯ００／４８９４０（特許文献２）は、ペルオキソ塩素酸またはその塩、水溶液中のペルオキソ塩素酸およびその塩またはアニオン、水溶液中の混合原子価の塩素原子を有するペルオキソ塩素酸塩のオリゴマー状誘導体およびその塩またはアニオン、また溶液中の酸、アニオンとしてまたは塩としての二酸化炭素付加物も開示している。
【００１５】
一方、ＷＯ００／４８９４０の明細書によれば、ペルオキソ塩素酸塩の結晶性の金属塩の単離は、首尾よくは行えないことが分かっている。
【００１６】
ＷＯ００／４８９４０の明細書に従って作成された調製物中のペルオキソ塩素酸塩の濃度が低いために、脱酸素ダイマーは限られた程度にしか調製できなかった。
【００１７】
ＳｖｅｎｓｓｏｎおよびＮｅｌａｎｄｅｒは、１７Ｋ（−２５６．１５℃）という低温でのＨＯＯＣｌＯ２の調製をＪ．Ｐｈｙｓ．Ｃｈｅｍ．Ａ １９９９，１０３，４４３２−４４３７に発表している。
【００１８】
したがって、すべての発表されている塩素−酸素調製物は、最新の薬剤承認の要求基準を満たさない。これらの基準には、調製の薬物動力学が、医薬品として標準化されるべきいわゆる活性物質として化学的に定義された化合物に対して割り付け可能でなければならないとはっきり記載されている。このことは、均質な薬剤の品質を保証するためにも必要である。
【００１９】
ＷＯ００／４８９４０の本質的に良い塩素−酸素化合物、および特にそこで定義されている脱酸素ダイマーは、これまでのところ、限られた程度にしか製造することができない。したがって、市販品を探索することは不可能であると思われる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２０】
【特許文献１】米国特許出願公開第２００３／０１３３８７８号明細書
【特許文献２】国際公開第００／４８９４０号パンフレット
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２１】
したがって、本発明の１つの目的は、前記の不都合無しに酸化剤を調製することである。このような酸化剤は、普通の技術的な医薬および殺菌剤用途分野と同様に、例えば組織再生のため、創傷の治癒のためおよび感染に対する防御のためまたは免疫反応を高めるための薬剤としての、例えば静脈内投与のような局所的および全身的な治療用薬剤として製剤する可能性をも提供するはずである。さらに、それは最新の薬剤承認手順の要件を満たすはずである。
【００２２】
したがって、特に、さらに改良された酸化剤およびそれを製造する改良された方法および用途を用意することが本発明の１つの目的である。
【課題を解決するための手段】
【００２３】
この目的は、具体的には挙げないが、最初に記載した技術の状況から明らかなその他の目的と同様に、特許請求の範囲で規定する本発明の実施形態によって達成される。
【００２４】
意外にも、この目的を、二塩素酸などの反応性の塩素化合物、中間生成物ペルオキソ塩素酸およびペルオキソ亜塩素酸、ならびにそれらそれぞれの誘導体、アニオンおよび／または塩の調製を通じて果たし得ることが明らかとなった。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】実施例３に示した細胞培養実験（線維芽細胞の増殖刺激）の結果を示す。
【図２】ペルオキソ酸イオンの濃度を判定するための、溶液中に存在するペルオキソ酸（二塩素酸、ペルオキソ亜塩素酸）のアニオンの滴定を示す。
【図３】図２から誘導した、正確な濃度決定をもたらす、滴定曲線を示す。
【図４】ＵＶスペクトルの例である。
【図５】ＵＶスペクトルの例である。
【図６】生成物溶液の質量スペクトルを示す。
【図７】イオンクロマトグラフィーの結果を示す。
【図８】３種の細菌株、大腸菌、黄色ブドウ球菌および緑膿菌についての崩壊速度動力学を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
本発明によるこの新規な二塩素酸を以下の表１に示す。これらの二塩素酸の中で、酸Ｎｏ．１からＮｏ．３は本発明の特に好ましい実施形態である。
【００２７】
【表１】
【００２８】
既に原子価ペアが先に＋３／＋５（ＷＯ００／４８９４０）および＋４／＋４（Ｂｏｇｄａｎｃｈｉｋｏｖら）と記載されたのと同様に、本発明のＮｏ．１からＮｏ．３による、塩素の原子価が＋６／＋４および＋５／＋５である二塩素酸が初めて本発明の方法によって製造された。酸Ｎｏ．４のアニオンはＷＯ００／４８９４０に記載されている。しかし、そこに記載されている製造方法は、機能しない。
【００２９】
ＷＯ００／４８９４０には、脱酸素ダイマーは２分子の反応性塩素−酸素種（ペルオキソ塩素酸塩）から次の反応を経て形成されるという仮定が置かれている。
【００３０】
２−ＯＯＣｌＯ２ → Ｃｌ２Ｏ６２−＋Ｏ２
ここで、塩素原子は酸化数＋３および＋５で存在している。しかし、薬事法の観点からは望ましいＷＯ００／４８９４０の実施例６による安定な化合物の製造は、首尾よくは行えない。
【００３１】
次式によるペルオキソ塩素酸塩２分子からダイマー型の誘導体の形成は、
２−ＯＯＣｌＯ２ → Ｃｌ２Ｏ６２−＋Ｏ２
即ち、非常に高濃度のペルオキソ塩素酸塩（およそ２〜３モル／Ｌ）の場合だけにしか期待できない。しかし、この化合物の不安定性のためにそのような高濃度は実際には不可能である。
【００３２】
しかし、本発明に導いた試験は、ペルオキソ塩素酸イオンＯ２ＣｌＯＯ−と亜塩素酸イオン（ＣｌＯ２−）の反応が、意外にも直接さまざまな「ダイマー型」Ｃｌ２Ｏ６２−種に導くことを示した。
【００３３】
Ｏ２ＣｌＯＯ−＋ＣｌＯ２− → Ｃｌ２Ｏ６２−−＞−＞および異性体
さらに意外にも、本発明による方法の助けを得て、以前には知られていなかったペルオキソ亜塩素酸イオンＯ＝ＣｌＯＯ−およびそれから誘導されるペルオキソ亜塩素酸Ｏ＝ＣｌＯＯＨの調製が、特に本発明による亜塩素酸塩を含む溶液中で成功した。
【００３４】
これらの塩素化合物は、以前には記載されたことがない。
【００３５】
特に中性点の周辺で、二塩素種Ｃｌ２Ｏ６２−の塩素酸イオンＣｌＯ３−とペルオキソ亜塩素酸イオンＯＣｌＯＯ−への解離は、明らかに、記載されている二塩素種の分子内レドックス反応で上表の化合物１〜４に至る反応に対して競争的な反応である。
【００３６】
本開示においてアニオンに言及する限りでは、必要な対イオンの存在も（特に溶液中では）同じく含まれている。「アニオン」という用語は特に、溶液中で、ジ塩素酸塩はプロトン化した酸と比較してより安定であることを強調するために使われている。しかし、「アニオン」という用語は、本発明によれば、また文脈によっては、酸の代わりに使うこともできる。「酸」という用語は同じく「アニオン」の代わりに使うことができる。
【００３７】
本発明は、二塩素酸、ならびにそれらの誘導体、アニオンおよび／もしくは塩、ならびに／または本発明によるペルオキソ亜塩素酸、ならびにその誘導体、アニオンおよび／もしくは塩を含む調製物の製造方法にも関する。
【００３８】
以下のステップを実行すれば驚くほど簡単に、本発明による二塩素酸およびペルオキソ亜塩素酸イオンを製造することができる。
【００３９】
（ａ）二酸化塩素を、過酸化水素または別のヒドロペルオキシドまたはペルオキシドの水溶液または水含有溶液と、ｐＨ値≧６、５で反応させ、
（ｂ）酸を加えてｐＨ値を下げ、
（ｃ）ガス状の遊離の反応性塩素化合物、好ましくはプロトン化したペルオキソ塩素化合物を、冷却したガスで排出し、アルカリ性溶液中に集め、
（ｄ）集めた遊離の反応性の塩素化合物、好ましくはペルオキソ塩素化合物を、ｐＨ６〜８、好ましくは約７で、〜１００倍過剰、好ましくは〜１０倍過剰の亜塩素酸塩と共にインキュベートする。
【００４０】
本発明の二塩素酸およびペルオキソ亜塩素酸、および生理学的なｐＨ値で存在する、したがって、本発明によるイオンもペルオキソ塩素酸塩および亜塩素酸塩と共に混合物として溶液中でも存在しうる。したがって、本発明による二塩素酸、ペルオキソ亜塩素酸、ペルオキソ塩素酸塩および亜塩素酸塩を含むこのような溶液は、本発明の特に好ましい実験的実施例の１つとなり、特許請求の範囲の請求項２によって保護される。
【００４１】
対照的に、ＷＯ００／４８９４０では、本発明による二塩素酸およびペルオキソ亜塩素酸は存在せず、塩素を含まない溶液が生成するか、または亜塩素酸塩は含むが、実際上亜塩素酸塩だけしか存在しないので、医薬品用途には適さない調製物が生成した。
【００４２】
大量の亜塩素酸塩は本発明の二塩素酸の医薬品分野での使用に対しては有害であるので、本発明の最終生成溶液は、溶液の全重量に関する重量％で２０倍を超える過剰、好ましくは５倍を超える過剰、さらに好ましくは３倍を超える過剰の亜塩素酸塩を含まなければ特に有利である。
【００４３】
特に、本発明による二塩素酸およびペルオキソ亜塩素酸は、使用したＣｌＯ２の重量％に関して約０．１〜２０重量％、好ましくは３〜５重量％の容積でこの溶液中に存在する。定性的な検出はラマン分光分析を使用して首尾よくできる。この種の分光分析は、当業者には自明のことである。得られるスペクトル図は、ＷＯ００／４８９４０に記載の方法で得たものとは明瞭に異なる。定量的な比率の決定は、滴定を使用して行うことができる。
【００４４】
さらなる定性的な検出がヘム鉄との反応を使用して可能である。本発明の二塩素酸の存在下では、ソレットバンド強度の一時的な変化のコースが、ＷＯ００／４８９４０に記載の方法で得られた溶液の結果とは明瞭に異なる。
【００４５】
本発明による方法は、二酸化塩素と過酸化水素の水溶液または水を含む過酸化水素（または他のヒドロペルオキシドまたは例えば、過炭酸塩、過ホウ酸塩、過酸化水素の尿素付加物などの当業者に知られているペルオキシド）の６．５以上のｐＨ値、好ましくはｐＨ１０〜１２における反応からなる。好ましくは、ｐＨ値は一定のレベルに保たなければならない。
【００４６】
さらに、意外にも、中間生成物として生じるペルオキソ塩素酸、ならびにそのアニオンおよび誘導体も、二酸化塩素とペルオキソ基を含む他の酸化剤の反応によって得られることが示された。
【００４７】
反応は水性環境または水を含む環境で行うことができる。例えば、水と同様に、メタノール、エタノールまたはこれらの混合物などのアルコールまたはアルカノールなどの水と混ざり合う溶剤も存在することができる。
【００４８】
代替的に、最初に他の塩素酸化物を使うこともできる。例えば、一酸化塩素も、好ましくはダイマー形態（Ｃｌ２Ｏ２）で、ヒドロペルオキシド（好ましくは過酸化水素）によって所望の生成物に転化することができる。反応は二酸化塩素について述べたとおり同じｐＨ範囲で首尾よく行える。
【００４９】
反応温度は、例えば約５０℃までは上げることができ、純粋に水系では最低温度は好ましくは約０℃でなければならない。しかし、二酸化塩素は＋１０℃未満で操作してはならない。二酸化塩素ガスは、これより低い温度では液化して爆燃が起こる恐れがあるからである。加えられた有機溶媒および／または高濃度の活性試薬が存在する場合は、より低い温度、即ち、水の凍結温度未満の温度が使用できる。好ましくは、室温で操作する。
【００５０】
反応に必要な二酸化塩素は、当業者には入手可能であり、通常の方法で製造することもできる。例えばこれは亜塩素酸塩と酸（例えば亜塩素酸ナトリウムと硫酸）の反応によってまたは塩素酸塩の、例えば亜硫酸を用いる、還元によって製造することができる。
【００５１】
こうして得られた二酸化塩素は、通常の方法で、必要とあれば痕跡の塩素を除去した後で、遊離させることができる（Ｇｒａｎｓｔｒｏｍ，Ｍａｒｖｉｎ Ｌ．：ａｎｄ Ｌｅｅ，Ｇ．Ｆｒｅｄ，Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｗａｔｅｒ Ｗｏｒｋｓ Ａｓｓｏｃ．５０，１４５３−１４６６（１９５８））。
【００５２】
ＣｌＯ２を作製するために使用した亜塩素酸塩がカーボネートで汚染している場合は、ＣｌＯ２はＣＯ２および／またはＷＯ００／４８９４０で記載されている炭酸付加物で汚染される。二酸化炭素を吸収するために、二酸化塩素と二酸化炭素を含むガス流は、苛性アルカリを満たした洗浄ボトルに通さなければならない。短い接触時間の間にＣＯ２は苛性アルカリによって吸収され、ＣｌＯ２は吸収されない。しかし、使用する亜塩素酸ナトリウムの分別晶析によってカーボネート汚染を除去することが好ましい。ペルオキソ塩素酸塩のカーボネートによる汚染は、ラマンスペクトルによって容易に認知することができる。１０５１ｃｍ−1の急峻なバンドに代わって、二重のバンド１０６９ｃｍ−1（広幅）と、本発明の範囲内の、重要なバンドが１０５１ｃｍ−1（急峻）に得られる。
【００５３】
二酸化塩素は、窒素などの不活性ガスまたはアルゴンなどの希ガスで運ぶことができるが、しかし、ペルオキソ化合物または過酸化水素もしくは過ホウ酸塩などのヒドロペルオキシドを用いる反応については空気または酸素も使用することができる。例えば、第１の反応器で二酸化塩素を作り、次にそれを上記のガスまたはそれらの混合物を用いて水溶液中または水を含む溶液中のペルオキソ化合物（ペルオキシドまたはヒドロペルオキシド）が入っている第２の反応器に導入することができる。
【００５４】
反応混合物のｐＨ値は、塩基を添加して６．５またはそれ以上に保つ。ｐＨ値は、一定に保つことが好ましい。これは、手動でもまたは「ｐＨ自動調節器」を使用してでも行うことができる。
【００５５】
普通の有機または無機の塩基、例えば苛性ソーダ溶液または苛性カリ溶液またはアルカリ土類水酸化物およびアンモニアなどの塩基、あるいは窒素含有塩基などの有機塩基などを使用することができる。さらに、第四級アンモニウム塩からの水酸化物、特にアルキル、トリアルキル、またはテトラアルキルアンモニウム水酸化物、あるいは水酸化亜鉛も使用することができる。
【００５６】
反応混合物中のヒドロペルオキシド含有量は、例えば塩酸などの酸を用いた電位差滴定を使用して測定することができる。
【００５７】
前記の手順によって得られた溶液は、作られた形態またはこれの変形の両方で使用することができる。例えば過剰の過酸化水素は、普通の方法例えば二酸化マンガンなどの重金属化合物を用いて除去することができる。他の酸化剤の余剰分は類似の手段で除去することができる。
【００５８】
二酸化塩素（ＣｌＯ２）の余剰分はＨ２Ｏ２を用いて除去することができる。これは可能な限りすぐに行うべきであり、そうしないと
２ＣｌＯ２＋２ＯＨ−−＞ＣｌＯ２−＋ＣｌＯ３−＋Ｈ２Ｏ
を経て、邪魔になる５価の塩素を有するＣｌＯ３−（塩素酸塩）が形成される。しかしながら、塩素酸塩を含有する生成物は好ましくない。
【００５９】
反応生成物の貯蔵寿命を改善するためには、高いｐＨ値、例えばｐＨ１０以上での貯蔵が適している。このｐＨ値の調節は、先に製造手順の中で記載したような、適当な塩基を用いて行うことができる。
【００６０】
二塩素酸および／またはこれらの酸の塩を含有する溶液の製造では、意外にも、遊離の酸ＨＯＯＣｌＯ、二塩素酸またはペルオキソ塩素酸を、亜塩素酸イオンを含有している混合物から、希ガス例えばアルゴンなどの不活性ガスを用いて、または窒素を用いて、または酸素ガスまたは空気を用いて、ｐＨを６未満例えばｐＨ５以下に下げながら、排出して集めることが可能である。意外にも、ガス流の距離を極めて短く保ち、かつ流れを冷却すると、収量を莫大に増加させうることが実証された。
【００６１】
前記製造手順のステップ（ａ）の開始後に形成される混合物は、始めは、非常に高濃度の亜塩素酸イオン（ＣｌＯ２−）を含有している。しかし、この亜塩素酸塩含有量は、ガス流で塩基性溶液中を「通過」することによって大幅に減少する。この方法では、すべての種類の塩素酸はプロトン化した（中性の）形態の揮発性化合物として排出される。しかし、これらは非常に不安定である。受け入れる容器内には塩基が存在し、容器を通過する塩素酸は脱プロトンされ、アニオンが形成される。溶液をｐＨ６〜８に調節した後で、かつ所定の容積の亜塩素酸塩が−例えば塩化ナトリウムの形態で−加えられた後で、二塩素酸のアニオンが形成される。
【００６２】
収集は、例えばアルカリ金属塩基、アルカリ土類金属塩基または亜鉛塩基またはアンモニアなどの窒素含有塩基または有機アミンなどの塩基中で行うことができる。ガス状の酸をコールドトラップ中で凍結析出（例えば−１００〜−１９０℃で）させることもできる。
【００６３】
対イオンは、あらゆる金属カチオンおよび窒素含有塩基、特に第四級アンモニウ塩からの有機カチオンでよい。最も適当なカチオンの選択は、個々の使用目的から決定することができる。医薬品用途には、アルカリ土類金属またはアルカリ金属、好ましくはＮａ＋またはＫ＋またはＺｎ２＋、が最も適当である。技術的な用途では、窒素含有塩基からのカチオン、特にトリアルキルアンモニウムカチオンなどのアルキルアンモニウムカチオンまたは特に第四級アンモニウムカチオンなどの有機カチオンが使用可能である。
【００６４】
本発明による酸および塩は、暗所で貯蔵し、かつそれらからｐＨ値の高い、例えば１０、１１、または１２以上のｐＨ値、特にｐＨ１０〜１３の範囲の水溶液を作製することが長い貯蔵寿命を確実にするために適切であり、かつ好ましい。必要に応じて、このような溶液から遊離の酸を先に記載した方法で再生し、必要とあれば所望のｐＨ値の溶液または塩に変えることができる。
【００６５】
本発明による二塩素酸、それらの誘導体またはアニオンおよびそれらの塩は、そのままでも使用できるが、特には水溶液または水を含む溶液中でも、酸化剤としてたいへんさまざまな医療、美容、技術および農業の目的に使用することができる。
【００６６】
可能性のある試験装置の例が、最初に挙げた刊行物および特許文献に挙げられており、これらをこの点において参照により本明細書に含める。
【００６７】
医薬製剤（薬剤）としての使用、またはあらゆる可能な方法で、特に局所的にもまた非経口的にも投与可能な薬剤製造用の使用に用途の可能性がある。この薬剤は、普通の方法で、薬剤として十分に耐容できる普通の賦形剤および希釈剤と共に製剤することができる。
【００６８】
本発明はそれぞれ本発明による二塩素酸またはペルオキソ亜塩素酸、それらのアニオン、誘導体または塩を活性物質として組み入れた医薬品であって、特に導入部で言及した病気を治療するために使用することができる医薬品にも関する。特に優先的なものは、鼻、口腔、直腸および特に経口投与（好ましくは胃酸を避ける、例えばカプセルまたは被覆製剤などの胃液耐性製剤）などの腸内投与のための製剤、ならびに特に局所または全身的治療のための製剤例えば恒温動物、特にヒトへの静脈内、筋肉内、または皮下投与のための製剤である。この製剤は、活性物質を単独で、または好ましくは１種または複数の薬剤として適用可能な賦形剤材料と共に含む。活性物質の投与量は、治療する病気および治療される種、年齢、体重および個体の状態、個体の薬物動力学的状況および適用の方法に依存する。
【００６９】
好ましくは、腸内または特に全身的投与量（例えば注入または注射による）（最も好ましくはヒトへの）は、０．０１〜１００ｐｍｏｌ／ｋｇ、特には０．１〜１００ｐｍｏｌの範囲にある。したがって、例えば体重７０ｋｇの人は１ｍｇ〜１ｇ／日、特に８．５ｍｇ〜８５０ｍｇ／日を１回または数回のより少ない投与量に分割して投与を受けなければならない。局所的な適用については、好ましい投与量の範囲は０．１〜１０、特には０．５〜５ｍＬ／１００ｃｍ２の０．１〜１０ｍＭ溶液である（表面積の大小、直接塗布するか、例えば含浸ガーゼで包帯するかに応じて多少がある）。
【００７０】
したがって、本発明は、本明細書で記載する病理的状態の予防処置および／または治療処置のための、特に組織再生の強化、免疫調節、予防注射反応または放射線感作の改善が示唆され成功している疾患の予防処置および／または治療処置のための、あるいは、特に温血動物の傷の治療におけるこれらの効果の１つまたは複数のための、本発明による二塩素酸またはペルオキソ亜塩素酸、それぞれのアニオン、誘導体または塩の、温血動物、例えばそのような処置を必要としているヒトの前記の疾患に対して有効な投与量での投与を組み入れる方法に関する。
【００７１】
本発明は、本明細書で記載する病理的状態の予防処置のための、および特に治療処置のための、好ましくは組織再生の強化、免疫調節、予防注射反応または放射線感作の改善が示唆され成功している疾患の予防処置および／または治療処置のための、あるいは、特に傷の治療、好ましくはそのような状態に罹患している温血動物の傷の治療におけるこれらの効果の１つまたは複数のための薬剤組成物であって、本発明による二塩素酸またはペルオキソ亜塩素酸、それぞれのアニオン、誘導体または塩の、前述の疾患に対して予防上または特に治療上有効な投与量および１種または複数の薬剤として適用可能な賦形剤を含む薬剤組成物にも関する。
【００７２】
本発明は、病理学的状態の処置のための、好ましくは、組織再生の強化、免疫調節、予防注射反応または放射線感作の改善が特に温血動物の創傷の処置において示唆され成功している、特に温血動物特にヒトの予防処置および／または治療処置のための−手順であって、本発明による二塩素酸またはペルオキソ亜塩素酸、それぞれのアニオン、誘導体または塩の、温血動物、例えばそのような処置を必要としているヒトの前記の疾患に対して有効な投与量での投与を組み入れる手順にも関する。
【００７３】
本発明は、本発明による二塩素酸および／またはペルオキソ亜塩素酸、それらの誘導体アニオン、または塩の、動物またはヒトの身体の処置のための手順における使用にも関する。
【００７４】
したがって、本発明は、本発明による二塩素酸および／またはペルオキソ亜塩素酸、それらのアニオン、誘導体または塩の、好ましくは、組織再生の強化、免疫調節、予防注射反応または放射線感作の改善が特に創傷の処置において示唆され成功している、特に温血動物特にヒトの疾患の予防処置および／または治療処置のための使用にも関する。
【００７５】
本発明は、本発明による二塩素酸および／またはペルオキソ亜塩素酸、それらの誘導体アニオン、または塩の、例えばある人がシミおよび吹き出物（にきび）ができやすいか吹き出物がある場合の、皮膚の（美容上の）手入れのための使用または使用の方法にも関する。
【００７６】
単位剤形は、例えばドラジェ（糖衣錠）、錠剤、アンプル、ガラスビン（バイアル）、座薬またはカプセルである。他の剤形、特に本発明による二塩素酸および／またはペルオキソ亜塩素酸、ならびにこれらの誘導体、アニオンまたは塩の溶液用の剤形は、例えば軟膏、クリーム、ペースト、ゲル（ジェル）、フォーム、マウスウォッシュ、ドロップ、スプレーおよび類似のもの。単位剤形、例えばアンプル、錠剤またはカプセルは、好ましくは約０．０５ｇ〜約１．０ｇ、特に８．５ｍｇ〜８５０ｍｇの本発明による二塩素酸の塩、アニオンまたは誘導体を、普通の薬剤用賦形剤材料と共に含む。
【００７７】
本発明の医薬製剤は、基本的には、既知の方法、例えば従来の混合、顆粒化、被覆、溶解または凍結乾燥を使用して製造される。
【００７８】
優先的な実験的手順は、二塩素酸塩またはペルオキソ亜塩素酸および／またはその誘導体の塩の０．０５〜１Ｍ溶液で二回蒸留水中にｐＨ１０以上、好ましくは１０〜１３、特に好ましくは１２．５で溶解する。投与の直前に、この溶液を共通塩、重炭酸ナトリウムまたはカリウムおよび二回蒸留水で濃度約１〜５ｍＭの等張に希釈し、生理的ｐＨに近づける。この溶液は、全身的、好ましくは静脈内投与に適当である。
【００７９】
局所的な使用のための薬剤の優先的な製剤を作製するのに好まれる方法は、本発明の二塩素酸および／またはペルオキソ亜塩素酸またはその誘導体を、塩として二回蒸留水に、低めのミリモルまたは高めのミリモル範囲の濃度、好ましくは０．５〜５ｍＭの濃度範囲で、ｐＨ１０以上、特に１０〜１３、最も好ましくは例えばｐＨ１１．５で溶解し、溶液をグリセリンまたは共通塩または他の適当な十分に耐容される好ましくは生理学的薬剤を用いて等張に調節する。適用する前に、ＨＣｌを用いて生理学的ｐＨを整える。他の添加物も可能である。特に、薬剤のプラスチック容器への充填に関しては、貯蔵中に壁中の遷移金属が溶解して活性物質の分解触媒として働く可能性があるので、遷移金属の痕跡を中和しうるような添加物が適当である。そのような添加物の例は、エチレングリコールなどのオリゴおよびポリアルコール、デスフェリオキサミンまたはＥＤＴＡ（例えばＥＤＴＡ二ナトリウム）である。上記の方法で得た溶液は、直接傷に塗布することも可能である。
【００８０】
本発明による二塩素酸またはペルオキソ亜塩素酸のアニオンは安定であり、酸そのものは比較的速やかに分解する。したがって、ｐＨを使用して活性物質の安定化を行うことができる。耐容性を改善するために、使用の直前に活性物質溶液を緩衝希釈によりほぼ生理学的ｐＨまで下げることができる。これは薬理学的作用を身体全体に行き渡らせるためには適切であるが、それはこの作用が、従来の薬剤のように受容体−配位子相互作用に依存しないで、先に述べたように、迅速で不可逆な酸化反応に関係しているからである。この薬理学的作用は、細胞および／またはその化学的に変えられた構造が存在する限り効果を持ち続ける、即ち、活性物質が受容体から拡散した後でも停止されない。
【００８１】
病理学的状態の処置のために予防上または特に治療上における組織再生の増進が成功すると示唆された分野の例は、身体的損傷後の再生（例えば外傷性の打撲傷または裂傷、短波長放射線、放射能放射）および化学的損傷後の再生（例えばＬｏｓｔ、化学療法剤などの組織毒による）である。この分野の他の適用領域は、傷の治癒の改善−特に頑固ないわゆる「自発性」創傷−これは原発病（例えば糖尿病、血管障害、免疫抑制または老齢の結果）の結果として生じるもので、治ることはない。これらの障害のきわだった例は床擦れおよび慢性静脈瘤性潰瘍である。本明細書では、処置とは、皮膚、粘膜および肝臓、心筋または骨髄などの他の組織の創傷の処置と理解するものとする。
【００８２】
本発明による二塩素酸またはペルオキソ亜塩素酸は、規定された化合物であり、新規の薬剤承認において関連する困難はない。
【００８３】
図１は、実施例３に示した細胞培養実験（線維芽細胞の増殖刺激）の結果を示す。これらの結果は、培養物中の活性物質濃度が、亜塩素酸塩は１００μＭおよび反応性塩素（ＲＣ＝すべての二塩素酸およびペルオキソ亜塩素酸のアニオンの合計）は５０μＭで得られたものである。
【００８４】
ここでは、本発明による二塩素酸と亜塩素酸塩とを両方含む試行溶液の増殖刺激効果２０〜２５％は、細胞培養物中で対象との比較において、顕著に高いことが明瞭に認識可能である。
【００８５】
ＲＣまたは亜塩素酸塩だけを含む溶液の適用は、線維芽細胞のいかなる成長挙動に対しても対照はいかに効果がないかを正確に示す。
【００８６】
図２は、ペルオキソ酸イオンの濃度を判定するための、溶液中に存在するペルオキソ酸（二塩素酸、ペルオキソ亜塩素酸）のアニオンの滴定を示す。図３には、図２から誘導した、正確な濃度決定をもたらす、滴定曲線を示す。
【００８７】
図４および図５は、ＵＶスペクトルの例である。このＵＶ吸収測定は、亜塩素酸塩濃度の決定を可能にし、存在するかもしれない溶解した遊離の二酸化塩素が少しでもあれば示す。
【００８８】
図６は、生成物溶液の質量スペクトルを示し、ペルオキソ亜塩素酸塩（質量８３．２）および二塩素酸の・BR>Aニオン（質量１８９）が確認された。
【００８９】
図７では、イオンクロマトグラフィーの結果を示す。参照物質の保持時間は、実施例４のパート５に提示する。二塩素酸は１９．７７分で検出され、図６の質量スペクトルにおける８２．３のピークの原因としての塩素酸塩を除く塩素酸塩（ＣｌＯ３−）は測定されなかった。
【００９０】
図８は、３種の細菌株、大腸菌、黄色ブドウ球菌および緑膿菌についての崩壊速度動力学を示す。生成物溶液を用いると、３菌株すべてでＤＩＮ５８９４０による殺菌作用が得られた。
【実施例】
【００９１】
以下の実施例は、本発明についてさらに詳細を提供するが、これらは決して制限的な意味に理解してはならない。
【００９２】
実施例１：二塩素酸の調製
無水亜塩素酸ナトリウム１００ｇの水２００ｍＬ中溶液に、撹拌しながら硫酸（９６％）を注意深く滴下する。形成される二酸化塩素を、強いガス流（Ａｒ、Ｎ２、またはＯ２またはＣＯ２を含まない空気）を使用して排出する。ガス流はＣｌＯ２含有量が５％を超えないほど強くなければならない（爆発の危険性）。元素状塩素を捕捉するために、ＣｌＯ２含有ガス流を互いに接続された３個の洗浄ボトルに導入し、それぞれのボトルは水３５ｍＬ中に３０％過酸化水素を入れてあらかじめ４Ｍ苛性ソーダ溶液を加えることによってｐＨ１２に調節した１５ｍＬの溶液中に、ｐＨ１１の２Ｍ ＮａＣｌＯ２溶液３０ｍＬを入れたもので満たしておく。過酸化水素の代わりに、過ホウ酸ナトリウムまたは過炭酸ナトリウムまたは例えば尿素のＨ２Ｏ２付加物などの他のペルオキソ化合物の溶液が使用可能である。ガスの導入中は、ガラス電極を用いてｐＨ値を制御する。反応中のｐＨ値は、４Ｍ ＮａＯＨを加えることによって１２に保つ。流入するガスの黄色の着色が続くようになれば、過酸化水素またはペルオキソ化合物は使い果たされている。１滴の酸化剤（例えばＨ２Ｏ２）溶液が続いて黄色い溶液を再び脱色する。
【００９３】
撹拌しながら、反応性塩素を含む溶液を、あらかじめ２Ｍ苛性ソーダ溶液でｐＨ４．５に調節した、クエン酸５００ｇの水３Ｌ中溶液中に滴下する。添加中は、形成する反応性塩素化合物を強いガス流（Ｎ２またはＯ２）で排出する。好ましくは、ガス流は冷却しなければならない。接続チューブは可能な限り短くなければならない。ガスは例えば一列に接続した３個の洗浄ボトル中に集め、それぞれのボトルは０．１Ｍ ＮａＯＨ５０ｍＬで満たしておく。
【００９４】
３個の洗浄ボトルの内容物を合わせてｐＨ＞１０に保つ。
【００９５】
本発明による二塩素酸を形成させるためにはｐＨを７に調節し−例えば塩酸で−、１０倍モルの過剰の塩化ナトリウムを加える。貯蔵のためには、好ましくはｐＨを、約１０を超え約１３までに調節する。
【００９６】
反応性塩素アニオンの全含有量は、０．１Ｍ ＨＣｌを用いる電位差滴定によって当業者には知られている普通の方法で測定する。
【００９７】
形成された二塩素酸は、所定量の亜塩素酸塩および他の反応性塩素化合物との混合物として溶液中に存在する。
【００９８】
二塩素酸の存在はラマン分光分析で検出される。
【００９９】
実施例２：ＭＲＣ−５線維芽細胞の培養
溶液：
ＭＲＣ５用培地
８９ｍＬ ＩＦ基礎培地
１０ｍＬ ＦＣＳ（ウシ胎児血清）
１ｍＬ Ｌ−グルタミン原液
ＩＦ基礎培地
ＩＦ基礎培地はＩＭＤＭ（Ｉｓｃｏｖｅ'ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｅｄｉｕｍ）およびＨａｍ'ｓ Ｆ１２倍地の１：１混合物である。
【０１００】
Ｌ−グルタミン原液
Ｌ−グルタミン２００ｍＭをＩＦ基礎培地に溶解し、濾過により殺菌する。
培養：
使用するＭＲＣ５細胞株を非ゼラチン被覆細胞培養皿に播種する。続く培養は、３７℃の培養器中で、ＣＯ2５容量％、水蒸気飽和雰囲気中で行う。２〜３日ごとに培地を交換し、集密に達したら細胞を分割比１：５〜１：１０で継代する。
【０１０１】
実施例３：活性物質の細胞生物学的試験
溶液：
ＭＲＣ５用培地
８９ｍＬ ＩＦ基礎培地
１０ｍＬ ＦＣＳ（ウシ胎児血清）
１ｍＬ Ｌ−グルタミン原液
ＭＲＣ−５用血清低減培地
９８ｍＬ ＩＦ基礎培地
１ｍＬ ＦＣＳ（ウシ胎児血清）
１ｍＬ Ｌ−グルタミン原液
ＰＢＳ（リン酸塩緩衝生理食塩水）
ＮａＣｌ １４０ｍＭ，ＫＣｌ ３ｍＭ、Ｎａ２ＨＰＯ４ ８ｍＭおよびＫＨ２ＰＯ４ １．５ｍＭとなる量を水に溶解し、ｐＨ値を７．２〜７．４に整える。こうして得られた溶液をオートクレーブで殺菌する。
【０１０２】
細胞溶解緩衝液
０．０４％ＳＤＳ（原液１０％ＳＤＳ）
２ｘＳＳＣ（原液２０ｘＳＳＣ）
調製済み細胞溶解緩衝液２５ｍＬを得るには、２０ｘＳＳＣ ５．０ｍＬおよび１０％ＳＤＳ １００μＬをＰＢＳで２５ｍＬまで満たす。
【０１０３】
ＤＡＰＩ溶液
２μＭ ＤＡＰＩ、ＰＢＳ中
培養：
ＭＲＣ５細胞を２４ウエル細胞培養プレートに４００細胞／ｃｍ２で播種する。続く培養は、３７℃の培養器中で、ＣＯ2５容量％、水蒸気飽和雰囲気中で行う。２４時間の予備培養後、培地を吸引除去し細胞をＰＢＳで洗浄する。次に培地を血清低減培地に変え、試験する活性物質（以下の表に概要を示す）を加える。２４、４８および７２時間後に、細胞ＤＮＡをＤＡＰＩ染色後の蛍光光度計（ＢＭＧ Ｌａｂｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社：Ｎｏｖｏｓｔａｒ）で定量化することによって細胞の増殖を測定する。このとき、サンプルの蛍光の増加が細胞の増殖に等しい。
【０１０４】
測定するプレートは、ウエル毎に１回ずつＰＢＳ ５００μＬで洗浄し、次に各ウエルにＰＢＳ ２５０μＬをいれる。溶解緩衝液を２５０μＬ加え、最低に設定したシェーカー中、室温で３０分間細胞を溶解する。続いて、ＤＡＰＩ溶液５００μＬを加え、プレートを室温でさらに１０分間放置する。
【０１０５】
プレートをＮｏｖｏｓｔａｒ中、３５５ｎｍ ｅｘ.および４６０ｎｍ ｅｍ.で測定する。通常、操作は利得調整１４００〜１６００で行う。
【０１０６】
多数の測定値は平均化し、誤差値を計算する。得られたデータはグラフで評価する。
【０１０７】
以下の原液を使用する。
【０１０８】
【表２】
【０１０９】
観察された線維芽細胞の増殖刺激
細胞培養で使用するためには、溶液をまず所与の培地で希釈する。図１に示した結果は、活性物質の濃度が、亜塩素酸塩１００μＭおよびＲＣ（＝本発明による二塩素酸およびペルオキソ亜塩素酸またはこれらのアニオンの混合物）５０μＭで得た。
【０１１０】
ここで、ＲＣおよび亜塩素酸塩の両方を含むサンプル溶液１の２０〜２５％の増殖刺激効果は、明瞭に認識することができ、対象との関係においても顕著に高い。
【０１１１】
実施例４：実施例１から得た溶液の分析測定
１）ｐＨ測定：
ｐＨ測定は、単一ガラス電極棒を用いて行う。生成物の含有量および平衡の位置はｐＨ値に依存する。
【０１１２】
２）０．１Ｍ ＨＣｌを用いる滴定
滴定は、例えば二塩素酸含有量の定量的測定、またはペルオキソ亜塩素酸含有量もしくはペルオキソ塩素酸塩含有量の定量的測定にも役立つ。
【０１１３】
生成物溶液それぞれ１ｍＬを、０．１Ｍ塩酸を用いて電位差測定によって滴定する。滴定曲線を記録する（ｐＨ対０．１Ｍ塩酸のｍＬ）。滴定曲線のｐＨ８．５と４．５の間の微分で測定された酸の消費量から、対応する酸からのアニオンの含有量が合計として決定される。
【０１１４】
通常の結果では、生成物溶液１ｍＬは、０．７２ｍＬ、０．１Ｍ ＨＣｌを消費し、したがって濃度は０．０７２Ｍとなる。
【０１１５】
図２は、記録された滴定曲線を示す。滴定曲線の微分と濃度の決定は図３に示す。
【０１１６】
３）ＵＶ−可視吸収スペクトル
ＵＶスペクトルの測定は、生成物溶液中の亜塩素酸塩含有量の定量化の役に立つ。比較のために図１と５は亜塩素酸塩を含有する生成物溶液と亜塩素酸塩を含まない生成物溶液のスペクトルを示す。亜塩素酸塩のシグナルは２６０ｎｍに見られ、この方法から生じた二酸化塩素は３６０ｎｍでシグナルを示す。
【０１１７】
吸収値は、１ｃｍの石英キュベット中で、２６０ｎｍおよび５００ｎｍにおいて測定する。ＣｌＯ２−イオン含有量は、Ａ２６０−Ａ５００の差から亜塩素酸塩に対する消滅係数ε２６０ｎｍ＝１４０Ｍ−1ｃｍ−１ａｔ２６０ｎｍの助けを借りて決定される。
【０１１８】
３６０ｎｍにおける吸収は、遊離の二酸化塩素（ε３６０ｎｍ＝１２６０Ｍ−１ｃｍ−１）を示唆する。
【０１１９】
４）質量分析
ＥＳＩ質量分析は、Ｂｒｕｋｅｒ−Ｅｓｑｕｉｒｅ−ＬＣ分光計を標準ＭＳモードで用いて行った。サンプルは、測定前にメタノールで希釈された生成物の水溶液であった。使用した走査範囲は３０ｍ／ｚ〜４００ｍ／ｚ、キャピラリー出口−６５Ｖ、スキム−１５Ｖであり、スペクトルは５０回の測定からの平均値を表した。
【０１２０】
図６において右側の矢印は、二塩素酸（総和式：Ｃｌ２Ｏ６２−）のシグナルを指しており、左側の矢印はこれまで知られていなかったペルオキソ亜塩素酸塩種（総和式：ＣｌＯ３−）を示している。
【０１２１】
５）イオンクロマトグラフィー
すべての分析は、Ｍｅｔｒｏｈｍ社のモジュール型イオンクロマトグラフィー装置を用いて行った
ポンプ： Ｍｅｔｒｏｈｍ ＩＣ ７０９ ポンプ
検出器： Ｍｅｔｒｏｈｍ ７３２ ＩＣ 検出器
サプレッサー：Ｍｅｔｒｏｈｍ ７５３ サプレッサーモジュール
カラム： Ｍｅｔｒｏｓｅｐ Ａ ２５０
流量： １ｍＬ／ｍｉｎ
注入容積： ２０μＬ
溶出剤： １ｍＭ ＮａＯＨ。
【０１２２】
各測定の直前に、既知濃度の参照物質を新たに調製した。次にこれらを上記の方法および溶出剤を用いて測定した
参照物質の保持時間：
物質 保持時間［分］
ＮａＣｌ １３．２１
ＮａＣｌＯ２ １２．３０
ＮａＣｌＯ３ １６．２６
ＮａＣｌＯ４ ４．３６
ＮａＯＨ １７．３２
Ｎａ２ＣＯ３ ２１．９８
Ｎａ２Ｃｌ２Ｏ６ １９．７７。
【０１２３】
図７：イオンクロマトグラフィーにおいて、二塩素酸は、保持時間１９．７７分で特有のピークを示す。知られている参照物質は何も検出できなかった。イオンクロマトグラフィーは、質量分析の知見を確認するものであった。塩素酸塩に特有のピークは（ＮａＣｌＯ３、保持時間１６．２６分）、実施例１によって調製された溶液中では検出することができなかった。したがって、質量分析（図６、質量８３．２）中の総和式ＣｌＯ３−のピークは新規なペルオキソ亜塩素酸またはそのアニオンだけでしかありえない。
【０１２４】
実施例５：実施例１から得た溶液の殺菌作用
ＤＩＮ５８９４０による崩壊動力学
実施例１による溶液を１：１０に希釈して使用した
試験微生物：大腸菌 ＡＴＣＣ ２５９２２、緑膿菌 ＡＴＣＣ ２７８５３、黄色ブドウ球菌 ＡＴＣＣ ２９２１３
培養液：カゼインペプトン−大豆ペプトン（欧州薬局方２．６．１２）
細菌培養時間：１８時間±１時間
結果を以下の表３および図８に示す。かくして、この溶液のＤＩＮ ５８９４０による殺菌作用が立証された。
【０１２５】
【表３】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）二酸化塩素を、過酸化水素または別のヒドロペルオキシドまたはペルオキシドの水溶液または水含有溶液と、ｐＨ値≧６．５で反応させること、
（ｂ）酸を加えてｐＨ値を３〜６に下げること、
（ｃ）ガス状の遊離した反応性塩素化合物を、冷却ガスを用いて排出し、ｐＨ値＞１０の塩基性溶液中に集めること、および
（ｄ）集めた反応性塩素化合物を、１００倍までの過剰の亜塩素酸塩を用いて６〜８のｐＨ値でインキュベートすること、
により得られる、反応性塩素化合物を含む水溶液。
【請求項２】
式Ｈ２Ｃｌ２Ｏ６の二塩素酸、またはその誘導体、アニオンまたは塩を含む、請求項１に記載の水溶液。
【請求項３】
【化１】
のアニオンの構造式を有する、式Ｈ２Ｃｌ２Ｏ６の二塩素酸、またはその誘導体、アニオンまたは塩を含む、請求項１または２に記載の水溶液。
【請求項４】
前記二塩素酸、またはその誘導体、アニオンまたは塩の濃度が、少なくとも０．０１Ｍである、請求項２または３に記載の水溶液。
【請求項５】
式Ｏ＝ＣｌＯＯＨのペルオキソ亜塩素酸、式Ｏ＝ＣｌＯＯ−のペルオキソ亜塩素酸のアニオン、またはそれらの誘導体または塩を含む、請求項１から４のいずれかに記載の水溶液。
【請求項６】
前記ペルオキソ亜塩素酸、またはその誘導体、アニオンまたは塩の濃度が、少なくとも０．０１Ｍである、請求項５に記載の水溶液。
【請求項７】
式Ｈ２Ｃｌ２Ｏ６の二塩素酸、またはその誘導体、アニオンまたは塩と、式Ｏ＝ＣｌＯＯＨのペルオキソ亜塩素酸、式Ｏ＝ＣｌＯＯ−のペルオキソ亜塩素酸のアニオン、またはそれらの誘導体または塩と、を含む、請求項１から６のいずれかに記載の水溶液。
【請求項８】
質量スペクトルにおいて質量約１８９のピークを有する化合物を含む、請求項１から７のいずれかに記載の水溶液。
【請求項９】
前記質量スペクトルにおける質量約１８９のピークが、質量約９９のピークよりも強い強度である、請求項８に記載の水溶液。
【請求項１０】
質量スペクトルにおいて質量約８３．２のピークを有する化合物を含む、請求項１から９のいずれかに記載の水溶液。
【請求項１１】
前記質量スペクトルにおける質量約８３．２のピークが、質量約９９のピークよりも強い強度である、請求項１０に記載の水溶液。
【請求項１２】
イオンクロマトグラフィーにおいて約１５分の保持時間に１つのピークを有する化合物を含む、請求項１から１１のいずれかに記載の水溶液。
【請求項１３】
イオンクロマトグラフィーにおいて約１５分の保持時間にピークを有さない化合物を含む、請求項１から１２のいずれかに記載の水溶液。
【請求項１４】
請求項１から１３のいずれかに記載の水溶液の、創傷の治療または組織再生の強化のための効果的な用量を含む医薬組成物。
【請求項１５】
非経口または局所投与用に製剤されている、請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
組織再生の強化、免疫調節、予防注射反応および／または放射線感作の改善が示唆されまたは成功している疾患における予防処置および／または治療処置のための薬剤を調製するための請求項１から１３のいずれかに記載の水溶液の使用。
【請求項１】
（ａ）二酸化塩素を、過酸化水素または別のヒドロペルオキシドまたはペルオキシドの水溶液または水含有溶液と、ｐＨ値≧６．５で反応させること、
（ｂ）酸を加えてｐＨ値を３〜６に下げること、
（ｃ）ガス状の遊離した反応性塩素化合物を、冷却ガスを用いて排出し、ｐＨ値＞１０の塩基性溶液中に集めること、および
（ｄ）集めた反応性塩素化合物を、１００倍までの過剰の亜塩素酸塩を用いて６〜８のｐＨ値でインキュベートすること、
により得られる、反応性塩素化合物を含む水溶液。
【請求項２】
式Ｈ２Ｃｌ２Ｏ６の二塩素酸、またはその誘導体、アニオンまたは塩を含む、請求項１に記載の水溶液。
【請求項３】
【化１】
のアニオンの構造式を有する、式Ｈ２Ｃｌ２Ｏ６の二塩素酸、またはその誘導体、アニオンまたは塩を含む、請求項１または２に記載の水溶液。
【請求項４】
前記二塩素酸、またはその誘導体、アニオンまたは塩の濃度が、少なくとも０．０１Ｍである、請求項２または３に記載の水溶液。
【請求項５】
式Ｏ＝ＣｌＯＯＨのペルオキソ亜塩素酸、式Ｏ＝ＣｌＯＯ−のペルオキソ亜塩素酸のアニオン、またはそれらの誘導体または塩を含む、請求項１から４のいずれかに記載の水溶液。
【請求項６】
前記ペルオキソ亜塩素酸、またはその誘導体、アニオンまたは塩の濃度が、少なくとも０．０１Ｍである、請求項５に記載の水溶液。
【請求項７】
式Ｈ２Ｃｌ２Ｏ６の二塩素酸、またはその誘導体、アニオンまたは塩と、式Ｏ＝ＣｌＯＯＨのペルオキソ亜塩素酸、式Ｏ＝ＣｌＯＯ−のペルオキソ亜塩素酸のアニオン、またはそれらの誘導体または塩と、を含む、請求項１から６のいずれかに記載の水溶液。
【請求項８】
質量スペクトルにおいて質量約１８９のピークを有する化合物を含む、請求項１から７のいずれかに記載の水溶液。
【請求項９】
前記質量スペクトルにおける質量約１８９のピークが、質量約９９のピークよりも強い強度である、請求項８に記載の水溶液。
【請求項１０】
質量スペクトルにおいて質量約８３．２のピークを有する化合物を含む、請求項１から９のいずれかに記載の水溶液。
【請求項１１】
前記質量スペクトルにおける質量約８３．２のピークが、質量約９９のピークよりも強い強度である、請求項１０に記載の水溶液。
【請求項１２】
イオンクロマトグラフィーにおいて約１５分の保持時間に１つのピークを有する化合物を含む、請求項１から１１のいずれかに記載の水溶液。
【請求項１３】
イオンクロマトグラフィーにおいて約１５分の保持時間にピークを有さない化合物を含む、請求項１から１２のいずれかに記載の水溶液。
【請求項１４】
請求項１から１３のいずれかに記載の水溶液の、創傷の治療または組織再生の強化のための効果的な用量を含む医薬組成物。
【請求項１５】
非経口または局所投与用に製剤されている、請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
組織再生の強化、免疫調節、予防注射反応および／または放射線感作の改善が示唆されまたは成功している疾患における予防処置および／または治療処置のための薬剤を調製するための請求項１から１３のいずれかに記載の水溶液の使用。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【公開番号】特開２０１１−１７３７９１（Ｐ２０１１−１７３７９１Ａ）
【公開日】平成２３年９月８日（２０１１．９．８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−９５２０１（Ｐ２０１１−９５２０１）
【出願日】平成２３年４月２１日（２０１１．４．２１）
【分割の表示】特願２００６−５４０３５４（Ｐ２００６−５４０３５４）の分割
【原出願日】平成１６年１１月２２日（２００４．１１．２２）
【出願人】（５０６１７０６１６）シトトゥールス アクチェンゲゼルシャフト (3)
【氏名又は名称原語表記】ＣＹＴＯＴＯＯＬＳ ＡＧ
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２３年９月８日（２０１１．９．８）
【国際特許分類】
【出願日】平成２３年４月２１日（２０１１．４．２１）
【分割の表示】特願２００６−５４０３５４（Ｐ２００６−５４０３５４）の分割
【原出願日】平成１６年１１月２２日（２００４．１１．２２）
【出願人】（５０６１７０６１６）シトトゥールス アクチェンゲゼルシャフト (3)
【氏名又は名称原語表記】ＣＹＴＯＴＯＯＬＳ ＡＧ
【Ｆターム（参考）】
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